FI90421B

FI90421B - Glyseroliasetaalin farmakologisesti käyttökelpoisten aminoasylaattien valmistusmenetelmä

Info

Publication number: FI90421B
Application number: FI882705A
Authority: FI
Inventors: Pierre Braquet; Colette Broquet
Original assignee: Scras
Priority date: 1987-06-12
Filing date: 1988-06-08
Publication date: 1993-10-29
Also published as: FI90421C; DK319188D0; GR880100363A; MA21298A1; NL192521B; CA1337297C; GB8713745D0; FI882705A0; LU87235A1; US4921865A; FI882705L; FR2616432A1; ATA152988A; JPH0615540B2; GR1000889B; AR245121A1; IN172782B; DZ1215A1; IT8820940A0; NL192521C

Description

Glyseroliasetaalin farmakologisesti käyttökelpoisten aminoasy- laattien valmistusmenetelmä - Förfarande för framställning av farmakologiskt användbara aminoacylater av glycerolacetal 1 90421

Keksinnön kohteena on glyseroliasetaalin uusien aminoasylaat-tien valmistusmenetelmä. Esillä olevan keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut yhdisteet ovat yleiskaavan I mukaisia glyseroliasetaalin aminoasylaatteja I 2 \ / 1

I C

CH — O'' ^2 I

I Θ ch2o co(ch2)p-n J x jossa on substituoitu fenyyliryhmä tai kaavan Cn^2m + 1 mukainen ryhmä, jolloin m on kokonaisluku 9-25, R2 on vetyatomi, fenyyliryhmä tai kaavan CnH2n + χ mukainen ryhmä, jolloin n on kokonaisluku 1-10, p on kokonaisluku 3-10, -N ) on pyndxum, 3-tiatsclinium, kinolinium ja isokinolinium, ja Xö tarkoittaa halogeeni-ioneja, kuten klooria, bromia tai jodia.

2 90421

Keksinnön mukaisesti saadut yhdisteet ovat mielenkiintoisia PAF:in vastaisina aineina (PAF, Platelets Activating Factor), jolloin niillä on vastaava aktiivisuus anti-anafylaktisina, antitromboottisina, verihiutaleiden kasautumista estävinä, keuhkoputken supistumista estävänä, normo-tensiivisinä ja anti-iskeemisinä aineina, immunodepressoreina. Lisäksi ne ovat aktiivisia esimerkiksi munuaisten immuunimuutoksia vastaan, erilaisia shokkeja vastaan, ihoallergioita vastaan ja endotok-siinin indusoimia suolistohaavaumia vastaan.

Keksinnön mukaisessa menetelmässä saatetaan reagoimaan pieni stökiömetrinen ylimäärä kaavan R^COR2 mukaista aldehydiä tai ketonia, joissa R^ ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, glyserolin kanssa polaarittomassa liuottimessa p-tolueenisul-fonihapon läsnäollessa ja ref 1uksointiolosuhteissa, saatu 4-hydroksimetyy1i-1,3-dioksolaanijohdos saatetaan reagoimaan huoneen lämpötilassa kaavan ClCO(CH2)pX mukaisen »-halogeenisi kanoyyl iki or idin kanssa, jossa p ja X tarkoittavat samaa kuin edellä, orgaanisen emäksen, kuten trietyyliamiinin läsnäollessa ja saatu yhdiste, jonka kaava on E O R, X 1 o R2

OCO(CH2)p-X

saatetaan reagoimaan typpikierron alla 50 - 80°C:ssa kaavan ”0 mukaisen typpipitoisen heterosyklisen yhdisteen kanssa.

_* . Tätä menetelmää on havainnollistettu seuraavan reaktiokaavion avul1 a.

3 90421

Vaiheet E o R, x 1 O R- a w 2 O R.

N Et f X

+ Cl CO(CH_) X -La LO R. b 2 P CHClT7 f 2

J LoCO(CH2)p X

3 r—O R.

X e N' * 2 φ Θ

L-OCO (CH2) p “ X I

• · * · ·

Keksinnön mukaista menetelmää on havainnollistettu seuraa-vien esimerkkien avulla. Esimerkki 1 on esitetty kokonai-- suudessaan; seuraavissa esimerkeissä on annettu vain substi- *'·· tuenttien ja saatujen yhdisteiden tunnusmerkit (ellei toisin ole mainittu, TLC on suoritettu silikageelilevyillä).

4 90421 ESIMERKKI 1 2-heptadekyyli 2-metwli 4-/4 1 -(N-pyridinium)butvrvvlioksime-twli/-l. 3-dioksolaanikloridi © .

R1 “ C17H35 ' R2 * CHo ' “N\)a Pyridinyyli, X " C1' p " 3*

Vaihe a: 2-heptadekyyli 2-metwli- 4-hvdroksimetwli-l.3-_ dioksolaanin valmistaminen, a

Sopivaan reaktoriin kaadetiin 11,1 g (40 millimoolia) 2-nonadekanonia, 6 g - mikä on enemmän kuin stökiömetrinen määrä - kahdesti tislattua glyserolia ja 0,6 g p-tolueeni-sulfonihappoa liuotettuna 120 ml:aan kuivaa tolueenia. Reaktioseosta refluksoitiin sekoittaen 12 tuntia ja saatu vesi poistettiin Dean'in ja Stark'in laitteen avulla. Jäähdyttämisen jälkeen pestiin orgaaninen faasi 30 ml:11a kaliumhydroksidin 5-painoprosenttista vesiliuosta ja sen jälkeen kolme kertaa minimimäärällä vettä. Vedettömällä natriumsulfaatilla kuivaamisen jälkeen poistettiin liuotin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin tämän jälkeen kromato-graafisesti silikageelipylväässä. Peräkkäin eluoituivat reagoimattoman ketonin jae (petrolieetteri:dietyylieetteri, 95:5 tilavuudesta laskettuna) ja sen jälkeen dioksolaani a (petrolieetteri/dietyylieeteri 85:15 til.). Dioksolaani on viskoosinen tuote, joka osittain on kiteytynyt.

Saanto: 11 g (78 %) RF: 0,18 (petrolieetteri/dietyylieetteri 70:30 til.) IR: 3500 cm-1 (OH) 1100 - 1060 cm'1 (C-0-).

5 90421

Vaihe b: 2-heptadekyyli-2-metwli-4- ( 4 1 -klooributvrvvlioksi-metyyli) 1,3-dioksolaani. b

Seos, joka sisälsi 6,4 g (18 millimoolia) edellä vaiheessa (a) kuvatulla tavalla valmistettua 2-heptadekyyli 2-metyyli- 4-hydroksimetyyli-l,3-dioksolaania ja 6 ml (45 millimoolia) trietyyliamiinia 15 mltssa kuivaa kloroformia, lisättiin tipottain 0°C:ssa liiCkseen, joka sisälsi 6,25 g (22 millimoolia) 4-klooributyryylikloridia 10 ml:ssa kuivaa kloroformia. Seosta sekoitettiin 12 tuntia huoneen lämpötilassa. Seokseeni isättiin 20 ml kloroformia, minkäjälkeen seos pestiin natriumhydroksidin IN vesiliuoksella ja sen jälkeen vedellä, kunnes pH oli 7. Poistamalla liuotin saatiin jäännös, joka kromatografoitiin silikageelipylväässä käyttämällä eluointlaineena petrolieetteri:dietyylieetteri-* seosta, aluksi 95:5, sen jälkeen 90:10 ja lopuksi 80:20 : til. Näin saatiin 7,6 g (saanto 82 %) öljymäistä tuotetta, joka kiteytyi; sulamispiste 39-40°C. Tämä tuote on kahden :\· cis- ja trans-isomeerin seos (näiden erottamienn on vaikeaa), .y. RF: 0,45 ja 0,37 (petrolieetetri/dietyylieetteri 80:20 til.) IR: 1740 cm'1 (C=0) 1180 - 1160 cm'1 (C-O-C .eetteri ja esteri) NMR 60 mHz, CDCl-j, (TMS.) δ: 0,9 (tripletti, 3H, ketjun CH3) 1,3 (mult. , 35.H, 32H + CH3) 2.1 (mult. , 2H, CO-CH2-CH2) 2.5 (tripletti, 2H CO-CH2) 3.6 (mult. , 4H, CH2-0 ja CH2Cl) 4.2 (mult. , 3H, CH2OCO ja CH-0) .

:.*'i Vaihe c: 2-heptadekyyli 2-metvvli 4-/41-(N-pyridinium)- butvrwlioksiemtwli/-l. 3-dioksolaanikloridi. I.

5 g edellisessä vaiheessa (b) saatua yhdistettä, joka oli liuotettu 30 ml:aan pyridiiniä, sekoitettiin 24 tuntia typen alla 80°C:ssa. Tämän jälkeen ylimääräinen pyridiini 6 90421 positettiin alipaineessa ja jäännös puhdistettiin kromato-graafisesti silikageelillä. Eluoiraalla kloroformilla (jotta saataisiin talteen reagoimaton lähtöaine) ja sen jälkeen kloroformi/metanolilla, ensin 90:10, sen jälkeen 80:20 til. saatiin 3,80 g otsikkoyhdistettä. Tämä tuote on kahden cis- ja trans-isomeerin seos (näiden erottaminen on vaikeaa), kokonaissaanto 40 % (tässä vaiheessa 65 %).

Sulamispiste: 84-85°C

Rf: 0,28 (CHCl3/MeOH 70:30, til.) IR (Nujol) 1740 cm-1 1630 cm 1 (pyridiini) 1200, 1180 cm"1 (C-O-C) NMR, 250 MHZ, CDC13 δ: 0,9 (tripletti, 3H, CHj) 1,2 (sing, suuri 30H) : 1,55 (mult., 2H, 2,35 (mult., 2H, CO CH2-CH2) : 2,6 (tripletti, 2H, CO CH2) 3.9 (mult., 1H, CH-O) 4 (mult., 2H, CH20 CO) 4,2-3,6 (2 mult., 2H, CH20) (kahden diastereoisomeerin)

5.10 (mult., 2H, CH2N

8 (mult., 2H, H„) ) P ) 8,4 (mult., 1H, Ηγ) j pyridinium 9,6 (dub., 2H ) a

Massaspektri: M - Cl m/z : 504 <ö) —(CH2)3—C02H : 166 7 90421 ESIMERKKI 2 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/41 (N-kinolinium)butyryylioksi-metyyli-1, 3-dioksolaanikloridi

Vaihe c: 5 g esimerkissä 1 (vaihe b) saatua yhdistettä liuotettiin seokseen, jossa oli 20 ml kinoliinia ja 20 ml dimetyylisulfoksidia, kuumennettiin 4 päivää typen alla 80°C:ssa. Kinoliini ja DMSO tislattiin pois alipaineessa ja jäännös kromatografoitiin silikageelipylväässä (eluoitiin peräkkäin kloroformilla ja sen jälkeen CHCl^/MeOH 95:5-seoksella). Haluttua tuotetta saatiin 2,5 g kahden diaste-reomeerin seoksena.

Rf: 0,58 (CHCWMeOH, 70:30) J _i IRv kinoliini 1650, 1630 ja 1600 cm Massaspektri: !:** m - ci m/2 . 554 — (CH2)3 — COgH : 216.

NMR kinolinium pyridiniumin asemesta.

δ ppm: 7,90 - 8,10 (4H, 8,70 (1H), 8,90 (1H), 10,90 (1HJ.

:A: ESIMERKKI 3 2-heptadekwli 2-metyyli 4-/4 1-(N-tiatsolinium)butyryyli-.*·. oksimetyyli/-!, 3-dioksolaanikloridi

Vaihe c: 850 mg esimerkissä (vaihe b) saatua tuotetta kuumennettiin 24 tuntia 80°C:ssa tiatsolin (4 ml) ja di-metyylisulfoksidin (6 ml) seoksessa. Seos haihdutettiin tyhjössä ja jäännös kromatografoitiin silikageelipylväässä, eluointiaineena CHCl^/MeOH 50:50, jolloin saatiin viskoosinen tuote.

8 90421

RfT 0,34 (CHCl3/MeOH 70:30) NMR tiatsoliniumin asemesta pyridinium δ ppm: 8,19 (d : 1H), 8,4 (d : 1H), 10,90 (sing. 1H)

Massaspektri: M - Cl; 510 m/z.

ESIMERKKI 4 2-heptadekyyli 4-/41 -(N-pyridiniuro) butyryylioksimetwli- 1.3- dioksolaanikloridi 0 R1 = ci7H35' R2 = H' = pyridinyyli, X = Cl, p = 3._ 2b Rf: 0,17 (petrolieetteri/dietyylieetteri 30:70 til.) 2b Rf; o,37 (petrolieetteri/dietyylieeetteri 70:30 til.) 1^ Rf: 0,16 (kloroformi/metanoli 70:30 til.) NMR CH^.-n asemesta kohdassa 1,4

_ -O

2 multiplettia, joiden keskus 4,9 ppm ^

Massaspektri: M - Cl: 490 m/z.

ESIMERKKI 5 2-heptadekyyli 4-/41 -(N-kinolinium)butvrwlioksimetyyli/- 1.3- dioksolaani-kloridi Θ R1 * c17H35 / *2 - H, . . , . .

Γ ) = kinolmium, χ » ci , p - 3.

Rf: 0,48 (kloroformi/metanoli 70:30 til.) ESIMERKKI 6 2-heptadekyyli 2-(n-propvvli) 4-/4 * -(N-pyridinium)butvrwli-oksimetwli/-!. 3-dioksolaanikloridi 0

Ri = C17H35' R2 = η'ΡΣ'οΡΥΥ11» “N= pyridinyyli, C = Cl, p = 3.

9 90421 2 c Rf: 0,23 (petrolieetteri/dietyylieetteri 70:30 til.) 2c Rf: 0,38 (petrolieetteri/dietyylieetteri 80:20 til.) I Rf: 0,20 (kloroformi/raetanoli 70:30 til.) v 1 NMR CH,:n asemesta kohdassa 1,4 c 3 -0 CH_ - y 2 1,55 (mult. 4H ) 1,2 (32H) 0,9 (tripletti, 6H, 2CH^)

Massaspektri: M - Cl: 532 m/z.

ESIMERKKI 7 2-heptadekwli 2-metwli 4-/51 -(N-pyridinium)pentanoyyli-oksimetyyli-1,3-dioksolaanikloridi ® R1 e c17h35 / r2 " ch3 · “ pyridinyyli, X - Cl, p - 4.

Rf: 0,23 (kloroformi/metanoli 70:30).

ESIMERKKI 8 2-(3,4,5-trimetoksifenyyli) 2-metwli 4-/4 * -(N-pyridinium)-butyryvlioksimetwli/-!, 3-dioksolaanikloridi 0CH3 Θ R1 = -ζ q ^-och3 t r2 » ch3 , “N\y " pyridinyyli, x * Cl, p-3, -^OCH3 2 d Rf: 0,32 (kloroformi/metanoli 98:2 til.) 2d Rf: 0,61 (kloroformi/metanoli 98:2 til.)

Id Rf: 0,34 (kloroformi/metanoli 60:4 til.) 10 90421 IR 1735 (C=0) 1610 (pyridiini) 1590 (bentseeni) 2740 (OCH3) NMR ketjun asemesta -0 1,5 ppm 3H' ”° ch3) R2: lie 3.7 (sing. , 9H, OCH-j) 6.8 (2H.arom.)

Massaspektri: M - Cl: 432 m/z.

ESIMERKKI 9 2-heptadekyyli 2-metwli 4-/61 -(N-pyridinium)heksanoyvlioksi-metyyli-1,3-dioksolaanibromidi

Rl - C17H35 , r3 CH3, pytidinyyli, x * Br' ** " vaihe b: 2-heptadekwli 2-metwli 4-(61 bromiheksanowli-oksimetyyli)-1,3-dioksolaanibromidi

Noudattamalla esimerkissä 1 kuvattua menettelyä ja käyttämmällä 6-bromi-heksanoyylikloridia saatiin haluttu tuote viskoosi-sena tuotteena (saanto 82 %).

Rf: 0,57 (petrolieetteri/eetteri 80:20).

vaihe c: Noudattamalla esimerkissä 1 kuvattua menettelyä saatiin haluttu tuote viskoosisena tuotteena (saanto 70 %).

RF: 0,36 (CHCL,/MEOH 70: 30) -1 3 IR 3450 CM (vesjääma) vCO 1740, vC-O-C 1180, pyridiini 1640 cm"1 NMR 500 MHZ CDC13, 6 (TMS) 0,85 (tripletti, 3H, CH3); 1,25 (sing, suuri 30H); 11 90421 -°y 1,35 (d 3H, -0ACh3 Z + E); 1,45 (mult., 2H, CH^); 2,1 (mult., 2H, COCH2CH2)=; 2,35 (mult., 2H, COCH2); 3,70 ja 4,35 (mult., 2H, CH20, Z + E); 4 (mult. 3H, CH2OCO ja H-C-0); Θ 5,05 (tnpletti, 2H, CH2N).

pyridinium 8,1 (tripletti, 2H, Ηβ); 8,6 (tripletti, 1H, Ηγ); 9,5 (d: 2H, Ha).

U.V. (etanoli) loge 3,65 λ 258,8 nm.

Massaspektri: M - Br τα/z . 532 <2* — (CH2)3 — C02H : 194.

ESIMERKKI 10 2-heptadekwli 2-metwli 4-/6 1-(N-kinolinium)heksanowli-oksimetwli) -1,3-dioksolaanibromidi

Rf.i 0,60 _.(CHCl^/MeOH 70:30) IR kinolinium 1650, 1630, 1600 cm-1 U.V. (etanoli) logc 4,53 λ 235,4 nm 2,18 λ 316,5 nm NMR kinolinium pyridiniumin asemesta.

Θ δ : 5,5 (2H, CH2N), 7,90 - 8,40 (5H), 9,10 (1H), 10,70 (1H, Ha).

12 90421

Massaspektri: M - Br m/z : 582 (CH2)3— C02H : 244; ESIMERKKI 11 2-heptadekyyli 2-metwli 4-/61 - (N-isokinolinium)heksanowli-oksimetvvll)-1,3-dioksolaanibromidi vaihe c: Kinoliinin asemesta käytetään isokinoliinia.

Rf: 0,55 (CHCl3/MeOH 73:30) IR isokinoliini 1650, 1610, 1590 cm NMR isokinolinium kinoliniumin asemesta.

e δ : 5,15 (tripletti, 2H, CH2N); 7,95 - 8,40 (4H); 8,80 (2H); 11,05 (1H).

Massaspektri: M - Br : 582 m/z.

ESIMERKKI 12 2-heptadekyyli 2-metwli 4-/11(N-pyridiniumundekanoyyli-oksimetyyli)-1,3-dioksolaanibromidi »1 = C17H35/ R2 - CH3, pyridinyyli, X - Br, p - 10.

vaihe b: 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-(111-bromiunde- kyylioksimetyyli)-1,3-dioksolaani

Haluttu tuote saatiin käyttämällä 1-bromiundekanoyyli-kloridia ja noudattamalla esimerkissä 1 kuvattua menettelyä. Sulamispiste: 52°C (saanto 60 %) 13 90421

Rf: 0,26 (petrolieetteri/eetteri 85:15). vaihe c

Sulamispiste: 92°C

Rf: 0,45 (CHCl3/MeOH 70:30)

Massaspektri: M - Br: 602 m/z.

ESIMERKKI 13 2-heptadekwli 2-(n-propwli) 4-/5' - (N-pvridinium)heksanowli-metwli-1,3-dioksolaanibromidi R1 = C!7H35' R2 = n-propyyli, = ΡΥ^^ΥΥ11» ; X = Br, p = 5.

O Rf: 0,44 (CHCl3/MeOH 70:30)

: Sulamispiste: 7 6°C

Massaspektri: M - Br : 560 m/z.

ESIMERKKI 14 2-nonyyli 2-metyYli 4-/61 -(N-pyridinium)heksanoyylioksimetvy-li)-1,3-dioksolaanibromidi *l - C9Kl9' "2 CH3' \) pyridlnyyli, X = Br, P = 5.

’. vaihe b

Rf: 0,50 (petrolieetteri/eetteri 80:20) vaihe c

Rf: 0,30 (CHCl3/MeOH 70:30)

Massaspektri: M - Br : 420 m/z.

i4 90 421

TOKSILOGIA

Keksinnön mukaisia yhdisteitä on akuutin LD^-arvon määrittämiseksi annettu hiirille. Kaikille keksinnön mukaisille yhdisteille LD50 oli yli 300 mg/kg (IP tai SC) ja 600 mg/kg (PO) .

FARMAKOLOGIA

Keksinnön mukaisten yhdisteiden farmaseuttinen mielenkiintoisuus on osoitettu seuraavilla farmaseuttisilla kokeilla: 1°) - Verihiutaleiden kasautumisen estyminen New Zealand-kaniineilla

Koe suoritettiin New Zealand-kaniinien plasman verihiutaleilla. Verinäytteet otettiin korvavaltimosta ja laitettiin sitraat-tipuskuriin (3,8 %; pH 7,4); verta sentrifugoitiin edelleen 15 minuuttia nopeudella 1200 kierr./min. Testattava näyte valmistettiin dimetyylisulfoksidiin ja kaadettiin sen jälkeen minuutiksi runsasverihiutaleisen plasman päälle, minkä jälkeen lisättiin 2,5 nM PAF. Määritys suoritettiin Cronolog Coultronics-laitteella, joka määrittää transmissioprosentin, joka vastaa piikin suurinta korkeutta ennen kasautumien hajautumista. Transmissioprosentin suhteen lasketaan inhibii-tion prosentuaalinen vaihtelu (kontrolli: puhdas DMS09.

Tämä menetelmä on kuvattu yksityiskohtaisesti julkaisussa: LABORATORY INVESTIGATIONS, Voi. 41, No. 3, s. 275, 1979, JEAN-PIERRE CAZENAVE, Dr.MED., JACQUES BENVENISTE, Dr. MED., AND J. FRASER MUSTARD, M.D., "Aggregation of rabbits Platelets by Platelet-Activating Factor Is Independent of the Release Reaction and the Arachidonate Pathway and Inhibited by Membrane-Active Drugs".

Tulokset osoittavat, että nämä yhdisteet inhiboivat kasau-tmista, joka on indusoitu lisäämällä 2,5 nM PAF. Eri yhdisteiden IC^Q-arvot voitiin laskea lineaarisen regressioanalyy- is 90421 sin avulla käyttämällä viittä testiä, joissa oli viisi kaniinia.

PAF:n indusoiman verihiutaleiden kasautumisen inhibiitio kaniinien runsashiutaleisessa plasmassa.

Esimerkki n:o IC50 (M)

No. 1.................. 2,2 . 10”6

No. 2.................. 1,2 . 10"6

No. 3.................. 2,15 . 10"5

No. 4.................. 7 . 10"6

No. 5.................. 3,1 . 10”6

No. 6.................. 3,04 . 10-6

No. 7.................. 5 . 10"6

No. 8.................. 1,13 . 10“5 : No. 9.................. 4,04 . 10"7

No. 10.................. 3,03 . 10"7

No. 12.................. 3,12 . 10“5 • No. 13.................. 1,73 . 10"6

No. 14.................. 1.46 . 10"6 • - i ie 90421

2 - SITOUTUMINEN MATERIAALIT JA MENETELMÄT

3 Käytetty synteettinen tritioitu / H/-PAF oli etanoliliuok-sena, jonka spesifinen aktiivisuus oli 59,5 ci/mmols. Leimaamaton PAF ja lyso-PAF liuennettiin etanoliliuokseen ja liuoksia säilytettiin -80°C:ssa. Yhdisteet liuennettiin dimetyylisulfoksidiin.

Verihiutaleiden membraanipreparaatit

Kaniinin kokoverta (6 tilavuusosaa) otettiin keskimmäisestä korvavaltimosta yhteen tilavuusosaan ACD-liuosta (sitruuna-happo 1,4 g, natriumsitraatti 2,5 g, dekstroosi 2 g per 100 ml vettä) ja sentrifugoitiin 15 minuuttia 150 g voimalla. Runsashiutaleinen plasma (PRP) poistettiin varovasti ja sitä sentrifugoitiin 15 minuuttia 1000 g voimalla. Sen jälkeen hiutalepelletti pestiin kolme kertaa: kaksi kertaa Tris-HCl-puskurissa, 10 mM, pH 7,4, jossa NaCl 150 mM,

MgCl2 5 mM, EDTA 2 mM, ja lopuksi samassa, mutta natriumia sisältämättömässä puskurissa.

Hiutalepelletti suspendoitiin uudelleen tähän jälkimmäiseen puskuriin, pakastettiin nopeasti nestemäisessä typessä ja sulatettiin hitaasti huoneen lämpötilassa vähintään kolme kertaa T. Y. Shen'in et ai. kuvaamalla tavalla. Lyysat-tuja verihiutaleita sentrifugoitiin 30 minuuttia 100000 g voimalla BECKAN model L8.55 ultrasentrifuugissa (roottori 50.2 Ti). Verihiutaleiden membraanihomogenaattia säilytettiin -80°C:ssa ja käytettiin kahden viikon sisällä ilman, että PAF-aseteetteri-sitouturaisessa tapahtuu huomattavia muutoksia.

Proteiinipitoisuus määritettiin Lowry-menetelmällä käyttämällä standardina naudanseerumialbumiinia.

i7 90421

Sitoutumismääritys 60 - 100 jig membraaniproteiineja lisättiin 1 ml lopputila-, vuuteen muoviputkiin, jotka sisälsivät 1 nM /^H/-PAF Tris- HCl 10 mM pH 7 puskurissa, joka sisälsi 0,025 % naudan-seerumialbumiinia, ja inkuboitiin yhdessä leimaamattoman PAF:n tai PAF-antagonistien kanssa tai ilman näitä. Inkuboin- ti tapahtui 1,5 tunnin aikana 0°C:ssa. Sitoutunut 3 3 / H/-PAF erotettiin vapaasta / H/-PAF:sta suodattamalla välittömästi Whatman GF/C lasikuitusuodattimien läpi tyhjössä (Brandel'in systeemi). Reaktioseos ja suodattimet pestiin kolme kertaa 5 ml:11a jääkylmää puskuria. Sen jälkeen suodattimet laitettiin polyetyleeniputkiin, jotka oli täytetty 10 ml:11a nesteskintillaationestettä, ja radioaktiivisuus mitattiin LKB β-laskimen alla 45 % tehokkuudella.

Epäspesifinen sitoutuminen määritettiin, kun mukana oli 10-6 leimaamatonta PAF. Spesifinen sitoutuminen laskettiin vähentämällä epäspesifinen sitoutuminen kokonaissitoutumi- 3 sesta. Spesifiseen / H/-PAF:n sitoutumiseen kohdistuva yhdisteiden inhibiitiovaikutus määritettiin seuraavan kaavan avulla inhibiitioprosenttina: 3 2 ( H-PAF, sitoutunut yhdis-) ( H-PAF. sitoutunut, (telden läsnäollessa >

Inhibiitio-% yht«"e,lsä)_ x 100 3 - H-PAF, spesifisesti sitoutunut

Esimerkki n:o IC50

No· 1................. 4,5 . 10”7

No· 9................. 3,5 . 10“e

No· 10................. 3,5 . 10”8

No. 14................. 6rl . 10“7 is 90421

3 - PAF:N INDUSOIMA BRONKOKONSTRIKTIO, LEUKOPENIA JA TROMBOSYTOPENIA MARSULLA

MATERIAALIT JA MENETELMÄT

Urosmarsut (400 - 500 g) anestetisoitiin uretaanilla (1,5 g/kg: IP) ennen henkitorven avaamista ja ventiloitiin hengi-tyspumpun avulla (UGO BASILE) (70 - 80 henkäystä minuutissa, 1 ml ilmaa/100 g/henkäys) spontaanin ilmarinnan estämiseksi. Laajenemisvastus mitattiin painemuuntimella (UGO BASILE) Konzett'n ja Rossler'in mukaisesti 10 cm H20 alkupainetta vastaan. Eläimet jaettiin ryhmiin ja käsiteltiin keksinnön mukaisilla yhdisteillä tai käsittelyä ei suoritettu (0,05, 0,1, 0,5, 1 ja 5 mg/kg). Tuotteet annettiin i.v. 1 tunti ennen PAF:lla haastamista.

Eläimet haastettiin intravenöösisti annetuilla eri PAF-annoksilla (30 - 100 n/kg) ja laajenemisvastuksen muutokset rekisteröitiin.

Verinäytteet otettiin ennen PAF:lla haastamista ja 1,5 ja 10 minuuttia sen jälkeen. 40 pl verta laimennettiin 10 ml:aan isotonia (Coultronics, Ranska); erytrosyytit lyysattiin Zapoglobin-tuotteella (Ranska), ennenkuin leukosyytit laskettiin coulter -laskimessa. Verihiutaleiden lukumäärän määrittämistä varten laimennettiin 40 ^ul verta 2 ml:aan isotonia ja sentrifugoitiin 30 minuuttia nopeudella 100 kierr./min., otettiin 100 pl supernatanttia ja laimennettiin edelleen 10 ml:aan isotonia ennen laskemista coul-ter-laskimessa.

i9 90421

Taulukko n:o 1; 2-heptadekyyli 2-metyyli-4-/6'-(N- pyridinium)heksanoyylioksimetyyli/-l,3-dioksolaani-bromidin vaikutus PAF:n indusoimaan bronkokonstriktioon.

Annos Prosentuaalinen Prosentuaa- ’ mg/kg IV n bronkokonstriktio linen vaihtelu _ ^^ * „ . ,,. - 8 79,8 +/“ 3/22

Kontrolli f ' ' 5 3 3.5 +/“ 1,53 - 95,6 ***

Esimerkin 1 4 19,1 +/- 10,51 - 76,1 *** 0,5 6 23,6 +/” 7.15 - 70,4 *** n:o 9 0,1 6 43,8 +/- 14,77 - 45,1 **

yhdiste o, 05 3 79^.0 +/~ 9,27 - 1^0 NS

Kaikkien taulukoiden selitykset: NS : ei merkitsevä * : P < 0,05 ** ·’ P < 0,01 *** : p < 0,001

Taulukko n:o 2: 2-heptadekyyli 2-metyyli-4-/61 -(N-pyridinium)- heksanoyylioksimetyyli/-l, 3-dioksolaanibroniidin vaikutukset PAF:n indusoimaan leukopeniaan.

20 90 421 :Leukosyy-ttien Prosentuaa-Annos n Aika. määrän prosenr. linen mg/kg IV *(mnj tuaalinen lasku vaihtelu 8 1 4 0^ 8 +/” 7,18 -

Kontrolli ’ 5 29,2 ♦/- 10,89 8 10 33,5 +/- 5,04 3 1 16f5 +/- 2,42 - 59,6 *

5 3 5 15,9 +/” 0,99 - 45,5 NS

3 10 18,7 +/“ 5,08 - 44,2 NS

4 1 3,5 +/“ 12,60 - 91,4 **

Esimerkin 1 4 5 2,9 +/- 10,51 -90,1* 4 10 1,0 V- 22,62 - 97,0 **

6 1 34,6 +/- 6,35 - 15,2 NS

n:o 9 ----------

0,5 6 5 19,0 +/- 6,42 - 34,9 NS

6 10 14,6 +/- 5,36 - 56,4 NS

6 1 41,8 +/- 6,50 + 2,5 NS

yhdiste --------

0,1 6 5 31,9 +/- 4,88 - 9,2 NS

6 10 33,5 +/“ 4,65 0,0 NS

3 1 45,3 +/" 5,70 + 11,0 NS

0,05 3 5 21,6 +/- 3,42 - 26,0 NS

3 10 14,2 +/“ 17,30 - 57,6 NS

Taulukko n:o 3: 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)- heksanoyylioksimetyyli/-l,3-dioksolaanibro- midin PAF; n indusoimaan trombosytopeniaan 21 90 421

Leukosyyttien Prosentuaali Annos Aika määrän pro- · -J

mg/Kg IV n (mn) sentuaalinen nen vaihte£u lasku 8 1 68,6 +/“ 6,79

Kontrolli _ 8 5 42 , 4 +/** 2,71 8 10 4 2,5 +/“ 3 , 14 3 1 4,2 +/“ 2,35 - 93,9 ***

Esimerkin 5 35 5,6 +/” 1,84 - 86,8 *** 3 10 1,1 +/- 1,15 - 97,4 *** 4 1 11,5 +/“ 6,21 - 83,2 *** 145 22,5 +/” 3,27 - 46,9 * n:° 9 4 10 21,0 +/- 3,87 - 50,6 * ' 6 1 19,3 +/” 10,19 - 71,9 *** t .mm m— - - 0.5 6 5 9,6 +/- 12,15 - 77,4 *** 6 10 10,9 +/- 9,94 - 74,4 *** yhdiste _J__1 30,1V- 13,72 -56,1**

0.1 6 5 34,7 +/” 3,60 - 18,2 NS

6 10 42,3 V- 4,79 - 0,5 NS

3 1 45,2 +/- 1,20 - 34,1 NS

0.05 3 5 43,0 +/" 4,80 + 1,4 NS

3 10 36,1 +/- 2,41 - 15,.1 NS

22 90 421

Taulukko nro 4: 2-heptadekyyli 2-metyyli-4-/6’—(N— kinolinium)heksnaoyylioksimetyyli/-l, 3-dioksolaanibromidin vaikutukset PAF:n indusoimaan konstriktioon

Annos Prosentuaalinen Prosentuaa- mg/kg IV n bronkokongtrik- linen tio vaihtelu 6 90,8 +/- 0,95

Kontrolli 1 5 8,1 +/- 2,91 - 91,1 ***

Esimerkin __ 0.5 5 25,1 +/- 6,53 - 72,4 *** n:o 10 _

0.1 5 80,4 +/" 13,78 - 11,.5 NS

yhdiste ___________

Taulukko n:o 5 2-heptadekwli 2-metyyli-4-/6 ' ~ (N-kinolinium) - heksanoyylioksimetyyli/-l,3-dioksolaanibromidin vaikutukset PAF:n indusoimaan leukopeniaan 23 90421

Anno ' Leukosyyttien- p^psentuaa,--

Annos Aika määrän-prosed .

m<?/kg IV n (nm) tuaaliriSh lSSku linen _ _ _v· ·'''**__vaihtelu 6 1 ; 41,4 +/~ 8*0 . ^

Kontrolli 6 5 28,7 +/- 6»9 > ** ' * __ 6 10 26;9 +/- 10»!

5 1 24,1 +/" 6/β " 41,0 NS

. . Esimerkin l 5 5 9^3 +/- 9^4 - 67,6 ** 5 10 8,9 +/“ 1312 - 66,9 ** n:o 10 51 17,0 +/- 12,9 - 58,9 * 015 5 5 9,0 +/- 11/8 - 68,6 **

yhdiste —__J__10 - 7,6 V- 17,5 4» 128,3 NS

5 1 38,8 +/“ 6,3 + 6,3 NS

M 5 5 38,9 +/- 5,7 + 35,5 NS

___ 5 10 41,2 +/- 6,5 + 53,2 NS

24 90 421

Taulukko n:o 6: 2-heptadekyyli 2-metyyli-4-/6'-(N-kinolinium)-heksanoyylioksimetyyli/-l,3-dioksolaani-bromidin vaikutukset PAF:n indusoimaan trombosytopeniaan ... Leukosyyttien Prosen-

Annos. „ l a. m^ärän prosen- tuaalinen"' n (mn; tuaalinen lasku vaihtelu"1' 6 1 65,3 +/“ 8,5

Kontroll: --- 6 5 49,1 +/" 4,8 6 10 48,5 +/“ 0,5 5 1 19,3 +/“ 1,4 - 58,3 ***

Esimerkin 1 5 5 22,1 +/— 2,5 - 55,0 ** 5 10 19,4 +/“ 3,6 - 60,0 ** 5 1 26,2 +/” 8,3 - 59,9 ** n:o 1Θ -- 0,5 5 5 29|8 +/“ 1,7 - 39,3 * 5 10 32,1 +/” 5,8 - 33,8 *

yhdiste 5 1 51,1 +/" 12,1 - 21f7 NS

0,1 5 5 49,1 +/“ 8,8 0 NS

5 10 45,0 +/- 9,7 - 7,2 NS

25 90 421

TULOKSET

2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyyli- oksimetyyli/-l,3-dioksolaanibromidi (0,5, 1 ja 5 mg/kg i.v.) ja 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/61(N-kinolinium)heksanoyy- lioksimetyyli/-l,3-dioksolaanibromidi (0,5 ja I mg/kg i.v.) estävät PAF:n indusoiman bronkokonstriktion ja PAF:n indusoiman trombosytopenian marsussa.

4 - ANTIGEENIN INDUSOIMA BRONKOKONSTRIKTIO, LEUKOPENIA JA TROMBOSYTOPENIA HETEROLOGISELLA SEERUMILLA PASSIIVISESTI HERKSITETYISSÄ MARSUISSA

Ovalbumiinin intravenöösi injisointi marsuihin, jotka on passiivisesti herkistetty kaniinin anti-ovalbumiini-: antiseerumilla, aiheuttaa bronkokonstriktion, johon .···. liittyy leukopeniaa ja trombosytopeniaa. Tämä anafylaktinen reaktio näyttää johtuvan histamiinin vapautumisesta \ . ja arakidonihappo-metaboliittien (prostaglandiinit, ; tromoboksaani A2 ja leukotrienit) muodostumisesta.

Näiden autakoidien vapautuminen marsussa välittyy pääasial-'·'* lisesti IgG-luokan immunoglobuliinien kautta.

MENETELMÄ :V: - Eläimet:

Hartley-urosmarsut, Charles River (450 - 550 g) - Immunisointimenetelmä: 18 tuntia ennen antigeenillä haastamista injisoidaan intravenöösisti 0,5 ml/kg kaniinin anti-kovalbumiini-antiseerumin 1/2-laimennusta.

26 90421 - Reaktio saadaan seuraavilla:

Ovalbumiini, 0,75 mg/kg,

Antigeenin intravenöösi injisointi 1 ml/kg lopputilavuudessa, Välittäjäaine, 0,15 M NaCl.

- Yhdisteet annetaan oraalisesti 2,5 ml/kg 1 tunti ennen antigeenillä haastamista. Anestesia saadaan injisoi-malla intraperitoneaalisesti etyylikarbamaattia (1,5 g/kg) 10 ml/kg. Seuratut parametrit ja tulosten ilmoittaminen: a - Bronkokonstriktio

Antigeenin indusoima bronkokonstriktio mm:nä (A), Maksimaalinen bronkokonstriktio mm:nä (B)

Prosentuaalinen bronkokosntriktio lasketaan seuraavasti:

A x 100 B

Neutrofiilit ja verihiutaleet laskettiin 1 minuutti ennen haastamista ja sen jälkeen 1,5 ja 10 minuutin kuluttua. Muutokset ilmoitettiin prosentteina arvoista, jotka saatiin 1 minuutti ennen haastamista.

Käytetty laitteisto: - Ugo Basile, Comerio, Italia,

Jyrsijäiden ventilaattori ref. 7025 Bronkokospami-muunnin ref. 7020

Kaksikanava-piirturi "GEMINI" ref. 7070 27 90 421

- Coultronics, FRANCE Coulters Counter Z B I

Taulukko n:o 7; 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N— ....... pyridinium)heksanoyylioksimetyyli/- 1,J-dioksolaanibromidin vaikutukset antigeenin indusoimaan bronkokonstriktioon • Λ ‘ Prosentuaalinen Prosentuaa-

Annos „ .........

mg/kg IV n bronkokonstrik- lirien tio vaihtelu r 6 71,9 +/- H,2

Kon-troll:. _ -- _ — s=s=s=sass>sssBss=ss3SSSS8aB i li il a i i I..I .ts : Esimerkin

yhdiste 5 8 51,3 +/~ 14,2 « 28,7 NS

28 90 421

Taulukko n:o 8: 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6 * -(N- pyridinium) heksanoyylioksimetyyli/ - 1,3-dioksolaanibromidin vaikutukset antigeenin indusoimaan leukopeniaan

Annos Aika Leukosyyttien Pfosentuaa- - määrän prosen- linen ' mg/kg IV n (mn) tuaalinen lasku irthibiitio * 6 1 - 11,8 +/- 5,1 > **· ' ^

Kontrolli--- 6 5 39,6 +/- 9 f 5 6 10- 53,9 +/- 7.1 - - , ---- ·- ,:aa»aaasas i ji naa ί m uiiLAi ·ΒΒΒη·ΟΒΒ

Esimerkir 8 1 - 15,6 +/- 6.6 + 32.,0 NS

nro 9----— . . -------------- yhdiste 5 8 5 - 8,7 +/- 10,7 - 78,0 * 8 10 12,3 +/“ 14,1 - 77(.2 * 29 90421

Taulukko n:o 9; 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6-(N-pyridiniura)- heksanoyylioksimetyyli/-l,3-dioksolaanibro-midin vaikutukset antigeenin indusoimaan trombosytopeniaan ... Leukosyyttien Prosentuaali-

Annos ai a_ määrän prosen- nen inhibiitio rog/kg IV n (mn) tuaalinön lasku ·' 6 1-6,8 +/- 2,7

Kontrolli --- „ - 6 5 39,7 +/- 12,5 6 10 - 26,1 +/- 8,1

Esimerkin 8 1 +0,3 +/- 7.9 - 104,4 NS

n: o 9 “ yhdiste 5 8 5 - 3,5 +/— 3,1 — 91,2

8 10 15,7 +/- 6,2 - 39,.8 NS

: TULOKSET

J · 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyylioksi- metyyli/-l,3-dioksolaanibromidi (5 mg/kg i.v.) vaikuttaa antigeenin indusoiman leukopenian ja trombosytopenian vastaisesti alentamatta merkittävästi antigeenin indusoimaa bronkokonstriktiota.

5 - VAIKUTUS PAF:N AIHEUTTAMAAN HYPOTENSIOON ANESTETI SOI DULLA .·!·! ROTALLA

MATERIAALIT JA MENETELMÄ:

Sprague Dawlev-urosrotat (Charles River Breeding station) (250 - 300 g) anestetisoitiin etyylikarbamaatilla annoksella 1,2 g/kg i.p.

PAF:n intravenöösi injisointi aiheuttaa annoksesta so 90 421 riippuvan hypotension. Hoitotoimenpiteinä selvitettiin 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyyli-oksimetyyli/-l,3-dioksalaanibromidin ja 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-kinoliniumheksanoyylioksimetyyli/- 1,3-dioksalaanibromidin vaikutukset PAF:n indusoimaa hypotensiota vastaan. Hypotensio aiheutettiin injisoimalla intravenöösisti suoraan penislaskimoon yksi ainoa annos PAF (1 jug/kg) tilavuuden ollessa 0,1 ml/100 g. Lääkkeet annettiin hypotension ollessa maksimaalinen, so. 3 minuuttia PAF:n injisoinnin jälkeen.

- Mitatut parametrit ja tulosten ilmoittaminen:

Mitattiin systolinen ja diastolinen valtimopaine (mmHg). Arvot on ilmoitettu keskiarvona +/- SEM seuraavissa käyrissä.

- Mittauslaite:

Gould PgQ-muunnin valtimopaineen mittaamiseksi,

Braun-perfuusiolaite,

Gould 8000 S polygraafinen piirturi 3i 90421 h™ Hg PAP:n anto 120- ...........................^^

110- | ? X

:j : z' /' kontrolli 1' i s' '30- '1 :/ / systolinen valtimo-

;l Ί s PAINE/AIKA

1 \ Ί S 80- \ ';/

70- Y

Yhdisteiden anto I I I l I l n l i i—i—i—i—i—;—|—|—|—|—|—i1— ;—r 0 1 3 4 5 6 10 15 20 30 mm nun Hg PAF : n anto 80- t i Exio*'' ..........1 —,t~— 70- l \ : kontrolli

50- \ ; X

\ ) DIASTOLINEN

L / / VALTIMOPAINE/LAITE

Yhdisteiden anto 30- -1 1 1—I 1 1 1 1 I I 1 I I I 1 I I I I i i i

013456 10 15 10 M

mm 32 90421

6 - PAF:N INDUSOIMAN LIUSKATUMAISTEN LEUKOSYYTTIEN KASAUTUMISEN VASTAVAIKUTUS

Liuskatumaiset leukosyytit (PMN, polymorphonuclear leukocytes) saatiin A. W. Ford-Hutchinson'in et ai. kuvaamalla tavalla (Br - J. Pharmacol. 76, 367 - 371, 1982). Solususpensiot (< 90 % PMN-leukosyyttejä) valmistettiin peritoneaalisista tulehdusnesteistä sen jälkeen, kun 300 g painaviin Wistar-urosrottiin oli ruiskutettu i.p. 5 ml 12-prosenttista (paino/tilavuus) natriumkaseinaat- tia.

Sentrifugoinnin jälkeen solut pestiin Hanks'in liuoksella ja suspendoitiin uudelleen MEM/Hepes 30 mM alustaan 7 (PM = 7,4) konsentraatiossa 10 solua/ml. PMN-leukosyyttien kasautumisen vahvistamiseksi lisättiin sytokalasiini B (5 pg/ml) 10 minuuttia ennen kasautumisen laukaisemista.

Valon transmittanssi solususpension (400 ^il) läpi mitattiin kaksoissäde-kasautumismittarilla (Chronolog Corp. Coultronics).

Kontrollikyvetti on solususpensio, joka on laimennettu MEM-alustalla 20 % solumäärästä. Ero vastaa 100 % transmit-tanssia. PAF lisättäessä tapahtuva transmittanssin muutos rekisteröitiin jatkuvasti.

2 minuuttia ennen PAF:n lisäämistä lisättiin PMN-suspensioon lääkeaineet, jotka oli liuennettu MEM/Hepes-puskuriin (4 μΐ).

TULOKSET - 8 10 M PAF indusoi tämän PMN-suspension 55-70-prosenttisen kasautumisien.

2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyyli-oksimetyyli/-l,3-diosolaanibromidia 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-kinolinium)heksanoyylioksimetyyli/-l, 3- 33 9D421 dioksolaanibromidi inhiboivat tämän kasautumisen annoksesta riippuvalla tavalla, jolloin vastaavat IC^-arvot ovat:

2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyyli-oksimetyyli/-1,3-dioksolaanibromidi: 5 x 10~7 M

2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-kinolinium)heksanoyyli-oksimetyyli)-l,3-dioksolaanibromidi: 10~^ M

7 - INHIBIITIOVAIKUTUS PAF:N INDUSOIMAAN VAPAAN KALSIUMIN INTRASYTOSOLISEEN MOBILISAATIOON PESTYISSÄ KANIININ VERIHIUTALEISSA

Kaniinin korvavaltimosta otettua verta laitettiin sitruuna-happo/natriumsitraatti/dekstroosiin ja antikoagulanttiin ja pestyt verihiutaleet valmistettiin . Ardlie'n et ai. mukaisesti, Brit. J. Pharmacology, 19, 7-17, 1970. Tromboksaanin indusoiman kasautumisen välttämiseksi r " niitä inkuboitiin asetyylisalisyylisuolan (100 μΜ, 30 minuuttia) kanssa. Sen jälkeen ne kuormitettiin fluoresoivan kalsiumindikaattorivärin quin 2 kanssa inkuboimalla quin 2 aseto-metyyliesterin kanssa (15 jiM dimetyylisulfoksidissa, 20 minuuttia huoneen lämpötilassa), joka tunkeutuu solumembraanin läpi ja joka hydrolyysin jälkeen jää verihiutaleeseen. Lääkkeitä esi-inkuboitiin verihiutaleiden kanssa 15 minuuttia samanaikaisesti CP/CPK-seoksen kanssa, joka tuhoaa erittyneen ADP:n.

Fluoresenssi mitattiin sen jälkeen, kun verihiutaleiden • suspensioon oli lisätty PAF (viritys λ = 339 nm, emissio λ = 492 nm). Fluoresenssin intensiteetti on 2+ verrannollinen solun vapaan kalsiumin määrään /Ca /i, joka voidaan kvantitatisoida Tsien'in et ai. kuvaamalla tavalla;, J. Cell Biol., 94, 325 - 334, 1982.

34 9 0 4 21

TULOKSET

-9 2 x 10 M indusoima verihiutaleiden stimulaatio nosti 2+ /ca /i-pitoisuuden lepotilan arvosta noin 150 nM arvoon 400 - 600 nM.

2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridinium)heksanoyylioksi-metyyli/-l,3-dioksolaanibromidi ja 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-kinolinium)heksanoyylioksimetyyli/- 1.3- dioksolaanibromidi estävät konsentraatiossa -7 2+ 5 x 10 - M täydellisesti PAF:n indusoiman /Ca /i:n “ 8 mobilisaation. Konsentraatiossa 5 x 10 M on PAF:n vaikutuksen inhibiitio vastaavasti 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-pyridniumheksanoyylioksimetyyli/- 1.3- dioksolaanibromidilla 44 % ja 2-heptadekyyli 2-metyyli 4-/6'-(N-kinolinium)heksanoyylioksimetyyli/- 1.3- dioksolaanibromidilla 75 %.

POSOLOGIA

Ihmisterapiassa ja oraalisesti annettaessa ovat päiväannokset 0,1 - 0,5 mg tableteissa tai kapseleissa, joissa on enteerinen päällyste; i.v.-tavassa vastaavat päiväannokset ovat 0,01 - 0,05 mg. Hoito kestää yleensä 2-6 viikkoa.

Claims

35 90421 Patenttivaatimus Menetelmä valmistaa farmakologisesti käyttökelpoisia yleiskaavan I mukaisia glyseroliasetaalin aminoasylaatteja CH___0 R, 2 / N , CH — O R2 ± | Θ CH O CO(CH_) — N' ) X * p jossa R^ on substituoitu fenyyliryhmä tai kaavan C^jm + 1 mukainen ryhmä, jolloin m on kokonaisluku 9-25, R2 on vetyatomi, fenyyliryhmä tai kaavan CnH2n + χ mukainen ryhmä, jolloin n on kokonaisluku 1-10, p on kokonaisluku 3-10, ®-ss=r\ -N___) on pyridium, 3- tiatsolinium, kinolinium ja isokinolinium, ja xO tarkoittaa haiogeeni-ioneja, kuten klooria, bromia tai - jodia, tunnettu siitä, että kaavan RxCOR2, jossa R^ ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, mukaista aldehydiä tai ketonia saatetaan reagoimaan pieni stökiömetrinen ylimäärä glyserolin kanssa polaarittomassa liuottimessa p-tolueenisul--;· fonihapon läsnäollessa ja refluksointiolosuhteissa, saatu 4- hydroksimetyyli-l,3-dioksolaanijohdos saatetaan reagoimaan huoneen lämpötilassa kaavan ClCO(CH2)pX, jossa p ja X tarkoittavat samaa kuin edellä mukaisen »-halogeenialkanoyylikloridin kanssa orgaanisen emäksen, kuten trietyleeniamiinin läsnäollessa ja saatu yhdiste, jonka kaava on 36 90421 _° R. X 1 _o r2 _OCO(CH2)p-X saatetaan reagoimaan typpikierron alla 50 - 80°C:ssa kaavan "O mukaisen typpipitoisen heterosyklisen yhdisteen kanssa. 37 90 421 Förfarande for framställning av farmakologiskt användbara glycerolacetals aminoacylater med formeln I CH_— 0 R. I / \ CH _ 0 R_ I I θ CH20 CO(CH )_N^ ) x P där R^ är en substituerad fenylgrupp eller en grupp med formeln CmH2m + varvid m är heltalet 9 - 25, R2 är en väteatom, fenylgrupp eller en grupp med formeln CnH2n + 1/ varvid n är heltalet 1 - 10, p är heltalet 3 - 10, · -N___) ar pyndium, 3-tiazolinium, kinolinium och isokinolnium, och X0 avser hai ogen joner, säsom klor, brom eller jod, k ä n -netecknat därav, att en aldehyd eller keton med formeln R1COR2, där R^ och R2 avser det samma som ovan, omsätts med ett litet stökiömetriskt överskott glycerol i ett opolärt 1ösningsmedel i närvaro av p-toluensulfonsyra och under refluxförhäl1anden, det erhällna 4-hydroximetyl-1,3-dioxolanderivatet omsätts vid rumstemperatur med en «-halo-.. . genalkanoylkloridi med formeln ClCO(CH2)pX, där p och X avser det samma som ovan, i närvaro av en organisk bas, säsom tri-etylenamin och den erhällna föreningen med formel 38 90 421 — O R, X 1 -O R2 _OCO(CH2)p-X omsätts under kvävecirkulation vid en temperatur under 50 - 80°C med en kvävehaltig heterocykl isk förening med forme 1 n N0