FI77692B - Medel foer paovisning av esterolytiska och/eller proteolytiska enzymer och anvaendningen av detta. - Google Patents
Medel foer paovisning av esterolytiska och/eller proteolytiska enzymer och anvaendningen av detta. Download PDFInfo
- Publication number
- FI77692B FI77692B FI811418A FI811418A FI77692B FI 77692 B FI77692 B FI 77692B FI 811418 A FI811418 A FI 811418A FI 811418 A FI811418 A FI 811418A FI 77692 B FI77692 B FI 77692B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- group
- hydrogen
- lower alkyl
- residue
- morpholino
- Prior art date
Links
- 239000012954 diazonium Substances 0.000 claims description 30
- -1 lyophilisate Substances 0.000 claims description 30
- 150000001989 diazonium salts Chemical class 0.000 claims description 29
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 28
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 25
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 24
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 22
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 22
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 22
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 15
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 15
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 13
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 claims description 13
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 13
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 11
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 claims description 10
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 9
- 230000000058 esterolytic effect Effects 0.000 claims description 8
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 7
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 6
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 6
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 claims description 5
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 4
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 4
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 4
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000005740 oxycarbonyl group Chemical group [*:1]OC([*:2])=O 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 claims description 3
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 125000001980 alanyl group Chemical group 0.000 claims 4
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 claims 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims 2
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 49
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 32
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- AWDBHOZBRXWRKS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(6+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+6].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] AWDBHOZBRXWRKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 11
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N decan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCO MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- WXMQHPKQCPCDQO-UHFFFAOYSA-N 4-dimorpholin-4-ylphosphorylmorpholine Chemical compound C1COCCN1P(N1CCOCC1)(=O)N1CCOCC1 WXMQHPKQCPCDQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 7
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 7
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ABEUJUYEUCCZQF-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-2-methoxy-1-nitrobenzene Chemical compound COC1=CC(Cl)=CC=C1[N+]([O-])=O ABEUJUYEUCCZQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZYECOAILUNWEAL-NUDFZHEQSA-N (4z)-4-[[2-methoxy-5-(phenylcarbamoyl)phenyl]hydrazinylidene]-n-(3-nitrophenyl)-3-oxonaphthalene-2-carboxamide Chemical compound COC1=CC=C(C(=O)NC=2C=CC=CC=2)C=C1N\N=C(C1=CC=CC=C1C=1)/C(=O)C=1C(=O)NC1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 ZYECOAILUNWEAL-NUDFZHEQSA-N 0.000 description 4
- 239000005968 1-Decanol Substances 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 4
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 4
- OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N urobilinogen Chemical compound CCC1=C(C)C(=O)NC1CC1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(CC3C(=C(CC)C(=O)N3)C)N2)CCC(O)=O)N1 OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 3
- LQXKHFZRJYXXFA-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 LQXKHFZRJYXXFA-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- WKFYEWXSRFQOKX-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane;toluene Chemical compound C1COCCO1.CC1=CC=CC=C1 WKFYEWXSRFQOKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQMUGNMMFTYOHK-UHFFFAOYSA-N 1-methoxynaphthalene Chemical compound C1=CC=C2C(OC)=CC=CC2=C1 NQMUGNMMFTYOHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XQDNFAMOIPNVES-UHFFFAOYSA-N 3,5-Dimethoxyphenol Chemical compound COC1=CC(O)=CC(OC)=C1 XQDNFAMOIPNVES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RNMOZCXLJVXTKP-UHFFFAOYSA-N 4-(5-methoxy-2-nitrophenyl)morpholine Chemical compound COC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(N2CCOCC2)=C1 RNMOZCXLJVXTKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWEHZHRUCQRSJP-UHFFFAOYSA-N 5h-indeno[1,2-b]pyridine Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3C2=N1 FWEHZHRUCQRSJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N Diazomethane Chemical compound C=[N+]=[N-] YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- BVMWIXWOIGJRGE-UHFFFAOYSA-N NP(O)=O Chemical class NP(O)=O BVMWIXWOIGJRGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N Naphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC=CC=C21 UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N Quinine Chemical compound C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@@H]2[C@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229960003116 amyl nitrite Drugs 0.000 description 2
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N benzene Substances C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- OAMZXMDZZWGPMH-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;toluene Chemical compound CCOC(C)=O.CC1=CC=CC=C1 OAMZXMDZZWGPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N ethyl formate Chemical compound CCOC=O WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 108010000849 leukocyte esterase Proteins 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- CSDTZUBPSYWZDX-UHFFFAOYSA-N n-pentyl nitrite Chemical compound CCCCCON=O CSDTZUBPSYWZDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N tetradecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCO HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWPIDFUJEMBDLS-UHFFFAOYSA-L tin(II) chloride dihydrate Chemical compound O.O.Cl[Sn]Cl FWPIDFUJEMBDLS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- SWGJCIMEBVHMTA-UHFFFAOYSA-K trisodium;6-oxido-4-sulfo-5-[(4-sulfonatonaphthalen-1-yl)diazenyl]naphthalene-2-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].C1=CC=C2C(N=NC3=C4C(=CC(=CC4=CC=C3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=CC=C(S([O-])(=O)=O)C2=C1 SWGJCIMEBVHMTA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- TXUICONDJPYNPY-UHFFFAOYSA-N (1,10,13-trimethyl-3-oxo-4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl) heptanoate Chemical compound C1CC2CC(=O)C=C(C)C2(C)C2C1C1CCC(OC(=O)CCCCCC)C1(C)CC2 TXUICONDJPYNPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVOAHINGSUIXLS-UHFFFAOYSA-N 1-Methylpiperazine Chemical compound CN1CCNCC1 PVOAHINGSUIXLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-methylpropane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(C)CO UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTIDRIQSPAELJC-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-4-methoxy-1-nitrobenzene Chemical compound COC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(Cl)=C1 QTIDRIQSPAELJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGFJDEHFNMWYBD-UHFFFAOYSA-N 4-(2-pyridin-4-ylethenyl)pyridine Chemical group C=1C=NC=CC=1C=CC1=CC=NC=C1 MGFJDEHFNMWYBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VDTQUOCFQOYZJL-UHFFFAOYSA-N 4-methoxy-2-morpholin-4-ylaniline;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.COC1=CC=C(N)C(N2CCOCC2)=C1 VDTQUOCFQOYZJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AIQYLTPLFWTBNY-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-6-methoxy-5-nitrocyclohexa-1,3-diene Chemical compound ClC1(C(C=CC=C1)OC)[N+](=O)[O-] AIQYLTPLFWTBNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 235000001258 Cinchona calisaya Nutrition 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 1
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 1
- JLTDJTHDQAWBAV-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylaniline Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=C1 JLTDJTHDQAWBAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BUBFQACYCITHFX-UHFFFAOYSA-N OC(C1=CC=C[ClH][ClH][ClH][ClH]1)=O Chemical compound OC(C1=CC=C[ClH][ClH][ClH][ClH]1)=O BUBFQACYCITHFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCKPVGOLPKLUHR-UHFFFAOYSA-N OH-Indolxyl Natural products C1=CC=C2C(O)=CNC2=C1 PCKPVGOLPKLUHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910021626 Tin(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMVKYSCWHDVMGO-UHFFFAOYSA-N [3-[(2-methylphenyl)carbamoyl]naphthalen-2-yl] 2-chloroacetate Chemical compound CC1=CC=CC=C1NC(=O)C1=CC2=CC=CC=C2C=C1OC(=O)CCl FMVKYSCWHDVMGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000007933 aliphatic carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- YEESUBCSWGVPCE-UHFFFAOYSA-N azanylidyneoxidanium iron(2+) pentacyanide Chemical compound [Fe++].[C-]#N.[C-]#N.[C-]#N.[C-]#N.[C-]#N.N#[O+] YEESUBCSWGVPCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000987 azo dye Chemical class 0.000 description 1
- 229940125717 barbiturate Drugs 0.000 description 1
- HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N barbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=O)N1 HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WZJYKHNJTSNBHV-UHFFFAOYSA-N benzo[h]quinoline Chemical compound C1=CN=C2C3=CC=CC=C3C=CC2=C1 WZJYKHNJTSNBHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N cinchonine Natural products C1C(C(C2)C=C)CCN2C1C(O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 125000000596 cyclohexenyl group Chemical group C1(=CCCCC1)* 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000004426 flaxseed Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004120 green S Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000004780 naphthols Chemical class 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002828 nitro derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960002460 nitroprusside Drugs 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N phosphoramidic acid Chemical compound NP(O)(O)=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N phosphoryl Chemical group [P]=O LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920001290 polyvinyl ester Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 229960000948 quinine Drugs 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000001119 stannous chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011150 stannous chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000004646 sulfenyl group Chemical group S(*)* 0.000 description 1
- 125000002813 thiocarbonyl group Chemical group *C(*)=S 0.000 description 1
- BRNULMACUQOKMR-UHFFFAOYSA-N thiomorpholine Chemical compound C1CSCCN1 BRNULMACUQOKMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/30—Naphthol derivatives, e.g. alpha-naphthyl-esters, i.e. alpha-NE, beta-naphthyl-esters, i.e. beta-NE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/50—Indoles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/70—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases the product, e.g. phenol, naphthol being diazotised in situ, e.g. with Fast Red
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Description
77692 Väline esterolyyttisten ja/tai proteolyytlisten entsyymien osoittamiseksi ja sen käyttö
Munuaisten ja virtsatiehyeiden sairauksien diagnostiikassa on leukosyyttien osoittamisella virtsassa suuri merkitys. Tähän asti on tämä osoittaminen suoritettu mikroskoopin avulla, jolloin se leukosyyttimäärä, joka esiintyy määrätyssä virtsatilavuudessa, lasketaan mikroskoopin avulla. Tämä menetelmä on kuitenkin erittäin paljon aikaa vaativa, vaivalloinen ja vaatii lisäksi koulutetun henkilöstön käyttöä.
Jonkin aikaa on tämän johdosta yritetty käyttää leukosyyttien toteamisperiaatteena erilaisissa kehon nesteissä entsymaattisia reaktioita, koska leukosyyteillä on laaja-alainen entsyymispektri.
Sellaiset välineet leukosyyttien osoittamiseksi kehon nesteissä, joissa käytetään hyväksi analyyttiseen tarkoitukseen leukosyyteissä olevaa esterolyyttistä ja/tai proteolyyttistä aktiivisuutta, ovat tunnettuja saksa-·:- laisista hakemus julkaisuista 28 26 965 ja 28 36 644.
Sulfoniftaaliestereitä ja atso-väriaine-estereitä käytetään tällöin substraatteina leukosyyttiesteraaseja ja/tai proteaaseja varten. Entsymaattisessa reaktiossa vapautuneita väriaineita käytetään hyväksi yleisesti tunnettujen menetelmien mukaisesti. Näissä julkaisuissa kuvatut aineet ovat vielä liian epäherkkiä. Niillä . . on liian pitkät reaktioajat alemmalla määräysrajalla niin, että käytännössä esiintyy vielä määrättyjä hait-toja, ennen kaikkea liian pitkät odotusajat koetta V suoritettaessa.
2 77692
Erilaiset menetelmät proteaasien ja esteraasien osoittamiseksi ovat myös tunnettuja histo- ja Sytokemial-lisesta entsymologiasta (vert. esim. A.G.E. Pearse, Histochemistry, Theoretical and Applied, 3 painos, Churchill Livingstone, Edinburgh-London-New York 1968). Periaatteessa lisätään tällöin myös värittömiä tai heikosti värjääntyneitä estereitä, jotka hajoavat entsymaattisen lohkeamisen johdosta tavallisesti värittömäksi hapoksi ja myös värittömiksi alkoholi-(fenoli)-komponenteiksi. Viimemainitut muuttuvat sitten entsymaattista saippuoitumista seuraavan reaktion avulla värilliseksi tuotteeksi, esimerkiksi kytkeytymisen avulla diatsoniumsuolojen kanssa tai hapettavan reaktion avulla.
F. Schmalzl ja H. Braunsteiner kuvaavat esimerkiksi aikakausjulkaisussa Klin. Wschr. 4jj, 642 (1968) spesifistä sytokemiallista leukosyyttiesteraasiosoitusta, naftoli-AS-D-klooriasetaatin ollessa substraattina, diatsoniumsuolan kanssa värillisen atso-yhdisteen muodostamiseksi .
Välineeksi leukosyyttien nopeaksi ja yksinkertaiseksi osoittamiseksi kehon nesteissä, esimerkiksi virtsassa, eivät tämäntapaiset kaksikomponenttijärjestelmät ole osoittautuneet soveliaiksi. Ne reagoivat aivan liian epäherkästi. Esimerkiksi näytteissä, joissa on 5000 leukosyyttiä/^,ul, ei esiinny minkäänlaista reaktiota.
Sen lisäksi reagoivat tunnetusti useat virtsassa olevat yhdisteet, kuten urobilinogeenit, sterkobilinogee-nit, bilirubiini yms, diatsoniumsuolojen kanssa. Tämän osoittavat parhaiten kaupan olevat patentoidut kokeet urobilinogeenin tai bilirubiinin osoittamiseksi virtsassa, joissa käytetään osoitusreaktiossa diatsoniumsuoloja. Kirjallisuudessa esteraasin osoit-
II
3 77692 tamiseksi lisätyt diatsoniunsuolat aikaansaavat kuvattuja sivureaktioita muiden virtsan aineosien kanssa eivätkä ole käyttökelpoisia esimerkiksi oman värinsä johdosta leukosyyttikokeissa.
Esillä olevan keksinnön kohteena on ollut aikaansaada väline esterolyyttisten ja/tai proteolyyttisten entsyymien osoittamiseksi käyttäen estereiden ja diatsonium-suolojen yhdistelmää näiden entsyymien toisena reaktio-osapuolena, jonka avulla ne voidaan osoittaa yksinkertaisella ja helposti toteutettavalla tavalla sekä nopeasti ja ilman, että tapahtuu haittaavia sivureaktioita tutkitun näytteen muiden aineosien kanssa.
Tämä tehtävä on ratkaistu siten, että käytetään sopivien estereiden ja määrätyllä tavalla substituoitujen diatsoniumsuolojen yhdistelmää, jolloin käytetyt diatso-niumsuolat eivät yllättäen aikaansaa sivureaktioita muiden virtsan aineosien, kuten esimerkiksi bilirubiinin ja urobilinogeenin kanssa, vaan spesifisesti ja nopeasti lisätyn esterin lohjetessa syntyvät fenolikomponen-tit kiinnittyvät siten, että muodostuu värillinen yhdiste .
Näiden sopivien estereiden tulee olla esterolyyttisten ja/tai proteolyyttisten entsyymien suhteen riittävän reaktiivisia niin, että ne lohkeavat mahdollisimman nopeasti happo- ja alkoholikomponenteiksi (joilla ymmärretään myös fenoleja). Esterit on valittava myös siten, että vapautuneet alkoholikomponentit kytkeytyvät hyvin ja täydellisesti lisättyjen diatsoniumsuolojen kanssa. Diatsoniumsuolojen reaktiokyky on, valitsemalla sopivasti substituentit, määrättävä siten, että tapahtuu tosin riittävän nopea kytkeytyminen keksinnön mukaisesti käytetyistä estereistä vapautuneiden alkoholi-komponenttien kanssa, mutta reaktiota ei tapahdu koe- 4 77692 liuoksen muiden aineosien kanssa.
Esillä olevan keksinnön kohteena ovat tämän johdosta välineet esterolyyttisten ja/tai proteolyyttisten entsyymien osoittamiseksi virtsassa, jonka välineen muodostavat imukykyinen kantaja, kalvokerros, jauheseos, lyofilisaatti, liuos tai reagenssitabletti, joka käsittää sopivan esteraasi- vast, pro-teaasi-osoitusperiaatteen, puskurin sekä sopivassa tapauksessa muita tavanomaisesti käytettyjä lisäaineita, joille on tunnusomaista se, että esteraasi- vast, proteaasi-osoituspervaatteena käytetään määrätyllä tavalla substituoidun diatsonium-suolan ja sopivan esterin yhdistelmää, jonka reaktiokyky valitsemalla sopivasti substituentit määrätään toisiinsa nähden siten, että tapahtuu tosin riittävän nopea kytkeytyminen esteristä vapautuneiden alkoholikomponenttien kanssa, mutta ei kuitenkaan reaktiota muiden koeliuoksen aineosien kanssa.
Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa patenttivaatimuksissa.
Sopivia substituoituja diatsoniumsuoloja keksinnön mielessä ovat esimerkiksi yhdisteet, joilla on yleinen kaava I
R R
_/^K <+>' (_) = N X (I)
R' R
4 5 jossa kaavassa R^ on alempi alkyyli-, alempi alkoksi-, N-morfolinoryhmä, halogeeni tai vety, R^ on alempi alkoksi-, aryylioksi-, alempi alkyylimerkapto-, alkyyliamino-, dialkyyliamino-, hydroksi-, N-morfolino-, N-tio-morfolino-, N-pyrrolidino-, sopivassa tapauksessa N'-al-
II
5 77692 kyloitu N-piperatsino-, N-piperidino-, fenyyliamino-, sopivassa tapauksessa alemmalla alkyylijäännöksellä substituoitu fenyyliryhmä, halogeeni tai vety, R , R , R , jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, 2 4 5 ovat joko alempi alkoksiryhmä tai vety, ja X on stabilisoiva anioni.
Sopivia keksinnön mukaisesti käyttökelpoisia estereitä voidaan valita esimerkiksi sellaisesta yhdisteryhmästä, jolla on yleinen kaava II
R '
v Vv-r°'A'B
3 R ' 4 jossa kaavassa R ', R ', R ', R jotka voivat olla samanlaisia tai eri-12 3 4 laisia, ovat vety- tai halogeeniatomi, alempi alkyyli- tai alempi alkoksiryhmä, X' on sopivassa tapauksessa alemmalla alkyyli-, bentsyyli- tai bentsoyylitähteellä N-substituoitu iminoryhmä, A on luonnollinen alfa-aminohappojäännös tai alanyylijäännös, ja
B on peptidikemiassa tavanomainen tai siitä johdettu typpi-suojaryhmä, edullisesti sulfonyyli- tai oksikarbonyyliryhmä, tai valittu yhdisteistä, jolla on yleinen kaava III
O - A - B
V (III) r " " 2 14 6 77692 jossa kaavassa R ", R ", R ", ja R ", jotka voivat olla samanlaisia tai 12 3 4 erilaisia, ovat vety, alempi alkyyli-, alempi alkoksi- tai dialkyyliaminoryhmä, jolloin kaksi viereistä substituenttia voivat myös muodostaa konjugoidun bentseenirenkaan, ja A ja B tarkoittavat samaa kuin edellä.
Yleisten kaavojen II ja III mukaiset esterit saippuoituvat nopeasti ja täydellisesti esteraasien ja/tai proteaasien vaikutuksesta, esimerkiksi neutrofiilisissä granulosyyteissa esiintyvien esteraasien ja proteaasien vaikutuksesta. Vapautuneet fenolikomponentit reagoivat hyvin, nopeasti ja selektiivisesti yleisen kaavan I mukaisten vähän elektrofiilisten diatsoniumsuolojen kanssa. Tämän johdosta voidaan keksinnön mukaisesti valmistaa stabiileja ja nopeasti reagoivia välineitä leukosyyttien osoittamiseksi kehon nesteistä. Lisäksi on osoittautunut, että keksinnön mukaiset välineet soveltuvat myös erinomaisesti proteolyyttisten entsyymien yleiseen osoittamiseen, esimerkiksi elastaasin, kymotrypsiinin tai trypsiinin vesipitoisissa liuoksissa tai kehon nesteistä, kuten esimerkiksi kokoverestä, seerumista ja lapsivedestä, hai-maeritteestä tai ulosteen vesiuutteista.
Yleisen kaavan I mukaiset diatsoniumsuolat ovat osittain tunnettuja yhdisteitä. Sellaiset johdannaiset, joissa substituentti R on N-tio-morfolino-, N-pyrrolidino-, 3 , .
sopivassa tapauksessa N -alkyloitu N-piperatsino- tai : N-piperidinoryhmä, ovat uusia yhdis-
II
7 77692 teitä. Niitä voidaan kuitenkin valmistaa samalla tavoin kuin tunnettuja yhdisteitä sinänsä tunnetuilla menetelmillä.
Yleisen kaavan II mukaisia yhdisteitä on kuvattu saksalaisessa patenttihakemuksessa P 28 54 987.3.
Yleisen kaavan III mukaiset esterit ovat uusia yhdisteitä. Niitä voidaan valmistaa saattamalla yhdisteet, joilla on yleinen kaava IV
OH
RivS
R 11 R3 jossa kaavassa R. ", R ", R0", R." tarkoittavat samaa kuin edellä, 12 3 4 reagoimaan yleisen kaavan V mukaisten aminohappojen ja peptidien kanssa HO - A - B (V) jossa kaavassa A ja B tarkoittavat samaa kuin edellä, vast, niiden sopivien reaktiokykyisten johdannaisten kanssa, peptidikemiassa tavanomaisia menetelmiä käyttäen .
Reaktiokykyisenä johdannaisena lisätään esimerkiksi happokloridia, sopivassa tapauksessa peptidisynteesissä tavanomaisella tavalla käytettyjä seosanhydridejä, esimerkiksi muurahaishappoetyyliesterin kanssa, tai aktiivisia estereitä.
Esillä olevan hakemuksen lisäkohteina ovat tämän johdosta uudet yleisen kaavan III mukaiset esterit sekä niiden käyttö välineiden valmistamiseksi esterolyyttis-ten ja/tai proteolyyttisten entsyymien osoittamiseksi.
8 77692
Halogeenilla ymmärretään ryhmiä R^, , R^, R^ ja R^ sekä R ', R ', R ' ja R määriteltäessä fluoria, klooria, bro-1 2 3 4 mia ja jodia, edullisesti klooria ja bromia.
Alemmat alkyyli-, alkoksi-, alkyylimerkapto-, alkyyli- ja dialkyyliaminoryhmät, määriteltäessä ryhmiä R^-R^_, R^/-R^# sekä R R ", sisältävät 1-5, edullisesti 1-3, hiiliato-1 4 mia, jolloin vastaavat metyylijäännökset ovat erittäin edulliset.
Stabiloivana anionina X käytetään edullisesti tetrafluoribo-raattia, tetrakloorisinkaattia vast, perkloraattia.
Aralkoksiryhmällä määriteltäessä ryhmiä R ', R ', R ' ja R ', 1 $ 3 4 sekä aralkyyliryhmällä määriteltäessä ryhmää X , ymmärretään esimerkiksi oksi-alempi alkyyliä, vast, alemmalla alkyyli-jäännöksellä substituoituja fenyyli- ja naftyyliryhmiä, jolloin alkyylijäännös sisältää 1-5, edullisesti 1-3, hiiliatomia. Erittäin edullisia ovat bentsyylioksi- ja bentsyylijäännös .
Ryhmien R R^', R ' ja R^' alempina asyyliaminoryhminä tulevat kysymykseen sellaisten alempien alifaattisten karbok-syylihappojen amidiryhmittymät, joissa on 1-5, edullisesti 1-3, hiiliatomia. Erittäin edullinen on asetyyliaminojäännös.
Aryyli- vast, aralkyylijäännöksellä, määriteltäessä ryhmiä R ', R ', R ' ja R ' ja X', ymmärretään edullisesti fenyyli-1 2 3 4 tai naftyyliryhmiä vast, bentsyylijäännöstä.
Aminojäännöksenä määriteltäessä ryhmää A tulevat kysymykseen edullisesti sellaisten luonnollisten alfa-aminohappojen jäännökset, jotka ovat L- tai D-muodossa, tai myös raseemisessa muodossa. Erittäin edullisia ovat glysiini-, alaniini-, väli 9 77692 liini-, leusiini-, isoleusiini-, fenyylialaniini-, ja tyro-siinijäännökset, jolloin L-muoto on erittäin edullinen. Mahdollisesti läsnäolevat vapaat hydroksiryhmät voivat olla asy-loituja, edullisesti asetyloituja.
Peptidikemiassa tavanomaisilla typpisuojaryhmillä ryhmää B määriteltäessä ymmärretään esimerkiksi asyyli-, oksikarbonyy-li-, tiokarbonyyli-, sulfonyyli-, sulfenyyli-, vinyyli-, sykloheksenyyli-, fosforyyli- ja karbamoyyliryhmiä.
Keksinnön mukaisesti käytettäviä diatsoniumsuoloja, joilla on yleinen kaava I ja yleisen kaavan II ^a III mukaisia esterei- tä, lisätään väkevyyksissä 10 - 10 moolia/1, edulli- “3 -2 sesti 10 - 10 moolia/1, kyllästysliuos-päällystys- massaan tai tutkittavaan nesteeseen.
Eräs toinen keksinnön mukaisen välineen aineosa proteolyyttis-ten entsyymien osoittamiseksi, ja erikoisesti leukosyyttipro-teaasien osoittamiseksi, on sopiva puskurijärjestelmä. Tällöin tulevat kysymykseen esimerkiksi fosfaatti-, boraatti-, barbituraatti-, tris-(hydroksimetyyli)-aminometaani- (=tris), 2-amino-2-metyyli-propaanidioli-l,3- (=amediol) tai aminohappo-puskurit, jolloin pH-arvo ja kapasiteetti on valittava siten, että mittausliuoksessa, vastaavasti koeliuskassa, pH on sää- 10 77692 detty alueelle 6-10, edullisesti 7-9.
Toinen keksinnön mukaisen välineen aineosa proteolyyt-tisten entsyymien osoittamiseksi voi olla kostutusaine, koska tällöin voidaan aikaansaada homogeenisempi värin jakautuminen ja esimerkiksi kirkkaampia värejä. Tällöin voidaan käyttää kationiaktiivisia sekä amfoteeri-siä ja ei-ionogeenisiä kostutusaineita väkevyyksissä 0,05-2 % (p/t), edullisesti väkevyydessä 0,1-1 % (p/t).
Keksinnön mukaisen välineen lisäaineosana voidaan käyttää stabilisaattorina fosfori- vast, fosfonihappoami-dia, jolla on yleinen kaava VI
*6 R7 - p = 0 (VI) R8 jossa kaavassa R6 on dialkyyliamino-, alkoksi-, aryylioksi-, alkyyli-tai aryyliryhmä tai N-morfoliinijäännös, ja ja Rg ovat dialkyyliaminoryhmiä tai N-morfoliinijäännös .
Alkoksi- vast, alkyyliryhmänä määriteltäessä ryhmää R^ tulevat kysymykseen hiilivetyjäännökset, joissa on aina 10 hiiliatomia.
Aryyli- vast, aryylioksiryhmänä ryhmää R, määriteltäessä
O
tulevat sopivassa tapauksessa kysymykseen halogeenillä, alempi alkyyli- tai alkoksiryhmillä substituoidut fenyy-li- tai naftyylijäännökset.
Yleisen kaavan VI mukaisten yhdisteiden avulla voidaan seos stabiloida erittäin hyvin.
Il 11 77692
Yleisen kaavan VI mukaiset fosfori- ja fosfonihappo-amidit ovat tunnettuja yhdisteitä ja niitä käytetään esimerkiksi saksalaisessa kuulutusjulkaisussa 22 35 127 koeliuskojen stabiloimisaineina, jotka toimivat peroksi-daasin osoitusperiaatteella.
Yleisen kaavan VI mukaisia fosfori- ja fosfonihappoamidi-tyyppisiä stabilisaattoreita lisätään vesipitoiseen tai edullisesti orgaaniseen kyllästysliuokseen väkevyydessä 1-20, edullisesti 5-15 % (p/t).
Yllättäen on todettu, että sellaisten keksinnön mukaisten diagnostisten aineiden, joita käytetään proteolyyt-tisten entsyymien, erikoisesti proteolyyttisten leuko-syyttientsyymien, osoittamiseen, reaktioaikoja voidaan lyhentää huomattavasti kun diatsoniumsuolojen, esterei-den ja tähän asti käytettyjen apuaineiden lisäksi lisätään vielä yhtä tai useampaa aktivaattoria. Keksinnön mukaisessa välineessä soveltuviksi aktivaattoreiksi ovat osoittautuneet saksalaisessa patenttihakemuksessa P 29 05 531.0 kuvatut ja esitetyt yhdisteet.
Aktivaattorit lisätään kyllästysliuokseen väkevyydessä 0,5-10 %, edullisesti 1-5 % (p/t).
Keksinnön mukaisten välineiden valmistamiseksi kyllästetään esimerkiksi imukykyisiä kantajia, edullisesti suodatinpaperia, selluloosaa tai tekoainerainoja, tarpeellisten tavanomaisella koeliuskojen valmistukseen käytettävien reagenssien (subsraattipuskuri, sopivassa tapauksessa kostutusaine) liuoksilla helposti haihtuvassa liuottimessa, esimerkiksi vedessä, metano-lissa, etanolissa tai asetonissa. Tämä tapahtuu tarkoituksenmukaisesti kahdessa eri vaiheessa: ensin kyllästetään vesiliuoksella, joka sisältää puskuria ja muita I* Π 692 vesiliukoisia lisäaineita. Tämän jälkeen kyllästetään yleisen kaavan II vast. Ill mukaisten proteaasi-subs-traattien yleisen kaavan I mukaisten diatsoniumsuolo-jen ja aktivaattorien liuoksella. Kyllästäminen voi tapahtua kuitenkin myös toisessa järjestyksessä tai käyttäen jotain muuta molempien kyllästysliuosten koostumusta.
Valmiita koepapereita voidaan käyttää sellaisinaan tai niihin voidaan liimata tunnetulla tavalla tartunta-laitteita, tai ne voidaan edullisesti sulkea tekoaineen ja hienosilmäisen verkkorakenteen väliin siten kuin saksalaisessa patenttijulkaisussa 21 18 455 on esitetty.
Kalvon muodostavien koeliuskojen valmistamiseksi lisätään kaikki reagenssit kalvon muodostavan aineen, kuten esimerkiksi polyvinyyliesterin tai polyamidin, liuokseen tai dispersioon ja sekoitetaan homogeenisesti keskenään. Tämä seos levitetään ohueksi kerrokseksi tekoainekantajalle ja kuivataan. Keksinnön mukaiset kalvolla varustetut koeliuskat leikataan kuivaamisen jälkeen ja niitä voidaan käyttää sellaisinaan, tai niihin voidaan kiinnittää sinänsä tunnetulla tavalla tar-tuntalaitteet, tai ne voidaan sulkea tekoaineen ja hienosilmäisen verkon väliin siten, kuin saksalaisessa patenttijulkaisussa 21 18 455 on esitetty.
Keksinnön mukaisia diagnostisia välineitä proteolyyttis-ten entsyymien, varsinkin leukosyyttiproteaasien, osoittamiseksi voidaan valmistaa jauhemaisessa muodossa tai reagenssitabletteina lisäämällä kokeessa tarvittaviin edellä mainittuihin aineosiin tavanomaisia galeeni--sia lisäaineita ja rakeistamalla. Tällaisia lisäaineita ovat esimerkiksi hiilihydraatit, kuten esimerkiksi mono-, oligo- tai polysakkaridit, tai sokerialkoholit,
II
13 77692 kuten esimerkiksi mannitoli, sorbitoli tai ksylitoli, tai muut liukoiset inertit yhdisteet, kuten polyety-leeniglykoli tai polyvinyylipyrrolidoni. Jauheseosten tai reagenssitablettien loppupaino on tavallisesti noin 50-200 mg, edullisesti 50-80 mg.
Sellaisten lyofilisaattien valmistamiseksi, joiden kokonaispaino on noin 5-20 mg, edullisesti noin 10 mg, kylmäkuivataan liuos, joka sisältää kaikkien kokeessa tarvittavien reagenssien lisäksi tavanomaisia rakennetta vahvistavia aineita, kuten esimerkiksi polyvinyy-lipyrrolidonia, ja mahdollisesti myös muita täyteaineita, kuten esimerkiksi mannitolia, sorbitolia tai ksy-li tolia.
Keksinnön mukainen liuoksen muodossa oleva diagnostinen aine sisältää edullisesti kaikki kokeeseen tarvittavat reagenssit. Liuottimena tulevat kysymykseen vesi tai veden seokset vesiliukoisen orgaanisen liuottimen, kuten esimerkiksi metanolin, etanolin, asetonin tai dime-tyyliformamidin kanssa. Kestävyyssyistä voi olla edullista jakaa kokeessa tarvittavat reagenssit kahdeksi tai useammaksi liuokseksi, jotka yhdistetään toisiinsa vasta varsinaisen kokeen aikana.
Täten valmistetut diagnostiset välineet mahdollistavat sen jälkeen, kun ne on kastettu tutkittavaan kehon nesteeseen tai kun niihin on lisätty tällaista kehon nestettä, proteolyyttisten entsyymien, erikoisesti leuko-syytti-proteaasien, läsnäolon nopean ja yksinkertaisen toteamisen värinmuodostusreaktion avulla, joka voidaan arvostella silmämääräisesti tai fotometrisesti, esimerkiksi remissio-fotometrisesti tai lasimaljassa.
Koska leukosyytti-proteaasien aktiivisuus solua koh-: den voidaan pitää suhteellisen vakiona suureena, voi- daan värinmuodostuksen voimakkuudesta todeta tutkitun kehon nesteen leukosyyttiväkevyys. Keksinnön mukai- 14 77692 sella diagnostisella välineellä voidaan tällöin määrätä sekä hajoamattomat että myös hajonneet leukosyytit, koska leukosyytti-proteaasien aktiivisuus säilyy täysin myös leukosyyttien hajoamisen jälkeen. Mitään analyysivirhettä ei tämän johdosta tapahdu.
Esimerkki 1
Suodatinpaperi (esim. Schleicher & Schiill 23 SL) kyllästetään peräkkäin seuraavilla liuoksilla ja kuivataan sitten lämpötilassa 60°C:
Liuos 1 0,2 molaarinen Borax-suolahappopuskuri, pH 8 10 %:nen fosforihappotrimorfolidi
Liuos 2 2 x 10 ^ mooli/1 substraattia -2 10 mooli/1 diatsoniumsuolaa liuotettuna asetoni/l-dekanoliin 98:2
Substraatti: 51 : 3-/N-(tolueeni^4 '-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-indoli 52 : 3-/N- (tolueeni-4 ' -sulfonyyli) -L-alanyylioksi/-l- : metoksi-naftaieeni 53 : 1-/N-(tolueeni-4 1-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-4- metoksi-naftaieeni 54 : 1-/N- (tolueeni-4 '-sulfonyyli) -L-alanyylioksiy-4- isopropoksi-naftaleeni 55 : 1-/N-(tolueeni-4'-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-4- pentoksi-naftaleeni 56 : 1-/N-(tolueeni-4'-sulfonyyli)-L-alanyylioksi7~3- dimetyyliamino-bentseeni 57 : 1-/N-(tolueeni-4 '-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-3- dietyyliamino-bentseeni 58 : l-/N-(tolueeni-4'-sulfonyyli)-L-alanyylioksi7-3,5- dimetoksi-bentseeni
II
15 77692 S9 : l-/N-(tolueeni-4,-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-3- metyyli-5-metoksi-bentseeni
Diatsoniumsuolat
Dl : 2,4-dimetoksi-bentseenidiatsonium-tetrafluori- boraatti D2 : 4-metoksi-naftaleeni-l-diatsonium-tetrafluori- boraatti D3 : 2,5-dimetoksi-4-dimetyyliamino-bentseenidiatsonium- tetrafluoriboraatti D4 : 4-dimetyyliamino-bentseenjdiatsonium-tetrafluori boraatti
Saadaan paperi, joka kastettaessa leukosyyttipitoiseen virtsaan osoittaa 100 leukosyyttiä/^ul noin 3 minuutin kuluessa seuraavassa taulukossa esitettyjen värien perusteella. Arvostelu voidaan suorittaa myös remissio-fotometrisesti.
Substraatti Diatsoniumsuola Väri SI Dl punaisen-ruskea : : SI D 2 punaisen-ruskea SI D 3 sinisen-vihreä SI D 4 vihreä -·: S 2 Dl punainen -·[ S 2 D 2 helakanpunainen S 2 D 3 violetti S 2 D 4 lila S3 Dl punaisen-violetti S3 D 2 violetti S3 D 3 sinisen-vihreä S 4 Dl lila S 5 Dl lila S 6 Dl helakanpunainen \ S 7 Dl helakanpunainen : S 8 Dl punaisen-violetti \: S 9 Dl punaisenruskea ie 77692
Esimerkki 2
Suodatinpaperi kyllästetään peräkkäin seuraavilla liuoksilla ja kuivataan lämpötilassa 60°C.
Liuos 0,1 molaarinen boraatti-puskuri, pH 8 Liuos 2 2 x 10 3 moolia/1 2-metoksi-4-(N-morfolino)-bentseenidi-atsoniumtetrakloorisinkaattia -3 w 2 x 10 moolia/1 substraattia 10 %:nen fosforihappotrimorfolidi etanoli/l-dekanolissa 98:2.
χ
Substraatti A: 3-(N-bentsyylioksikarbonyyli-L-alanyylioksi)-indoli B: 3-(N-bentsyylioksikarbonyyli-L-alanyylioksi)-5-metyy- li-indoli C: 3-(N-bentsyylioksikarbonyyli-L-alanyylioksi)-7-metyy- li-indoli D: 3-(N-bentsyylioksikarbonyyli-L-alanyylioksi)-4-kloori- indoli E: 3-(N-bentsyylioksikarbonyyli-L-alanyylioksi)-5-bromi- indoli F: 3-/N-(tolueeni-4 '-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-indoli ; G: 3-/N-(tolueeni-4'-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-5-metok- si-indoli H: 3-/N-(4'-asetamidobentseenisulfonyyli)-L-alanyylioksi/- indoli I: 3-/N-(4'-metoksitoäyyli)-L-alanyylioksi/-indoli K: /N- (tolueeni-4 ' -sulfonyyli) -L-alanyylioksi/-bentseeni L: 1-/N- (tolueeni-4 ' -sulfonyyli) -L-alanyylioksi/-naftaleeni M: l-/N-(toluoeni-4'-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-3- metoksi-bentseeni
II
17 77692 Täten saaduilla reagenssipapereilla voidaan leukosyyt-tipitoisessa virtsassa osoittaa 100 leukosyyttiä/^ul.
Vastaavanlaisen reaktiivisuuden omaavia reagenssipape-reita voidaan saada myös siten, että edellä mainitun diatsoniumsuolan sijasta käytetään seuraavia: 2-metoksi-4-(N-pyrrolidino)-bentseenidiatsonium-tetrafluo-riboraattia 2-metoksi-4-(N-piperidino)-bentseenidiatsonium-tetraf luo-riboraattia 2,6-di-metoksi-4(N-morfolino)-bentseenidiatsonium-tetra-fluoriboraattia 4-metoksi-2-(N-morfolino)-bentseenidiatsonium-tetrafluori-boraattia 2-metoksi-4-/N(N'-metyyli)-piperatsino/-bentseenidiatso-nium-tetrafluoriboraattia 2-metoksi-4- (N-tiomorfolino) -bentseenidiatsonium-tetra-fluoriboraattia
Esimerkki 3
Valmistetaan seuraavat perusliuokset:
Liuos 1 2 x 10 moolia/1 1-/N-(tolueeni-4 '-sulfonyyli)-L-alanyyli- .: oks_i7“ 4- i sopropok si-naftaleenia _2 10 moolia/1 2,4-dimetoksi-bentseenidiatsonium-tetra-fluoriboraattia asetoni/l-dekanolissa 98:2
Liuos 2 0,2 molaarista Borax-suolahappo-puskuria 10 % fosforihappotrimorfolidia
Sen jälkeen kun liuokseen 1 tai liuokseen 2 oli lisätty jäljempänä esitetyt aktivaattorit esitetyissä väkevyyk- is 77692 sissä, kyllästettiin suodatinpaperit liuoksilla 1 ja 2 ja kuivattiin lämpötilassa 60°C.
Kokeiltaessa sellaisessa isotonisessa ruokasuolaliuok-sessa, jossa oli 300 leukosyyttiä/^,ul, reagoivat koepaperit esitettyjen aikojen kuluessa.
Aktivaattori mg aktivaattorilisäys Reaktioaika 20 mg:aan (sek) _Liuosta 1_Liuosta 2_
Ei mitään - 54 4-atsafluoreeni 33 - 17
Bentso-(h)-kinoliini 36 8
Kiniini 33 - 32 1,2-bis-4-pyridyyli- etyleeni 37 - 34 1-dekanoli 400 - 5 1-tetradekanoli 400 - 4
Nitroprussidi- natrium - 31 38
Kaliumheksasyano- ferraatti-(II) - 40 30
Esimerkki 4
Suodatinpaperi kyllästetään seuraavalla liuoksella ja kuivataan tämän jälkeen lämpötilassa 60°C.
Liuos 1 2 x 10 ^ moolia/1 3- (N-tolueeni-4' -sulfonyyli-L-alanyyli-oksi)-indolia _ 3 2 x 10 moolia/1 2-metoksi-4-morfolino-bentseenidiatso- niumtetrakloorisinkaattia asetoni/l-dekanolissa 98:2 ·’ Liuos 2 0,2 molaarista Borax-suolahappopuskuria, pH 8 10 %:sta fosforihappotrimorfolidia
II
19 77692
Toisessa kokeessa jätettiin liuoksesta 2 pois fosfori-happotrimorfolidi.
Ne näytteet, joissa käytettiin fosforihappotrimorfoli-dia, pysyivat lämpötilassa 60°C 2 vuorokautta värjään- tymättöminä ja aikaansaivat leukosyyttipitoisissa liuoksissa hyvän reaktion. Näytteissä, joissa ei käytetty fosforihappotrimorfolidia, esiintyi harmaa värjäänty-minen.
Esimerkki 5
Reagenssitabletti valmistettiin tunnetulla tavalla käyttäen seuraavia aineosia: 2 mg 3-(N-toluaeni-4'-sulfonyyli-L-alanyylioksi)-indolia 2 mg 2-metoksi-4-(N-morfolinohbentseeni-diatsonium-tetra-kloorisinkaattia 1,5 mg kaliumdivetyfosfaattia 30 mg dinatrium-vetyfosfaatti-dihydraattia 20 mg mannitolia Nämä tabletit liuotettiin 2 ml:aan leukosyyttipitoista virtsaa ja ravistettiin hyvin. Leukosyyttien läsnäol-**· lessa muodostui punaisenvioletti väri.
100 leukosyyttiä voitiin osoittaa täten 2 minuutin kuluessa.
Jos virtsa lämmitettiin ennen tabletin lisäämistä reaktion aikana lämpötilaan 37°C, voitiin samassa ajassa osoittaa 20 leukosyyttiä.
Esimerkki 6 : . 1-/N-(tolueeni-4 '-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-3,5-di- metoksi-bentseeni
Reaktion suorittamiseksi aktiiviesteri-menetelmällä liuotetaan 14,6 g (0,06 moolia) N-(tolueeni-4-sulfonyyli)-L- 20 776 92 alaniiniä ja 12,2 g (0,09 moolia) N-hydroksi-bentso-triatsolia 300 ml:aan abs. etikkaesteriä, jäähdytetään lämpötilaan 0°C ja lisätään 12,4 g (0,06 moolia) di-sykloheksyylikarbodi-imidiä. Aktiiviesterin muodostamiseksi sekoitetaan 2 tuntia lämpötilassa 0°C ja sitten vielä 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Kun on lisätty 6,2 g (0,04 moolia) 3,5-dimetoksifenolia ja 5,5 ml (0,04 moolia) trietyyliamiinia sekoitetaan seosta 15 tuntia huoneen lämpötilassa. Muodostunut N,N'-disyklo-heksyylivirtsa-aine erotetaan imusuodattamalla. Suodos haihdutetaan tyhjössä kylvyn lämpötilan ollessa korkeintaan 50°C. Jäännös liuotetaan 200 ml:aan etikkaesteriä ja pestään peräkkäin kulloinkin kolmasti 100 ml:11a 5 %:sta sitruunahappoa ja sitten vastaavasti kulloinkin 100 ml :11a 5 %:sta natriumbikarbonaattiliuosta. Orgaaninen faasi haihdutetaan tyhjössä sen jälkeen, kun se on kuivattu natriumsulfaatilla. öljymäinen raakatuote puhdistetaan patsaskromatograafisesti piigeelipatsaassa tolueeni-etikkaesteri-seoksella (4:1). Vastaavien koottujen fraktioiden haihduttamisen jälkeen liuotetaan jäännös pieneen määrään metyleenikloridia ja saostetaan lisäämällä eetteriä. Saadaan 5,8 g (38 %) 1-/N-(tolueeni-4'-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-3,5-dimetoksi-bentseeniä värittöminä kiteinä, sp. 110°C α^°: -52,5° (c=l % asetonissa).
Analogisella tavalla saadaan N-(tolueeni-4-sulfonyyli)-L-alaniinin reagoidessa vastaavien substituoitujen fenolien tai naftolien kanssa seuraavat yhdisteet:
6.1. /N-(tolueeni-4 '-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-bentseeni värittömiä kiteitä, sp. 113°C
α^°: -63,8° (c=l % asetonissa) 6.2. 1-/N-(tolueeni-4'-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-3-dimetyyliamino-bentseeni väritön amorfinen jauhe
II
20 2i 776 92 cxD : -36,6° (c=l % metanolissa) DC: Valmiita piigeelilevyjä (elutoimisaine: tolueeni-dioksaani 2:1, todettu: UV, Rp-arvo: 0,68).
6.3. 1-/N- (tolueeni-4 · -sulfonyyli) -L-alanyylioks_i/-3- metoksi-bentseeni
värittömiä kiteitä, sp. 60-61°C
α^°: -62,9° (c=l % metanolissa) 6.4 . 1-/N- (tolueeni-4 1 -sulfonyyli) -L-alanyylioksiy- naftaleeni väritön, viskoosi öljy α^°: -27,3° (c=l % metanolissa) DC: Valmiita piigeelilevyjä (elutoimisaine: tolueeni- dioksaani 4:1, todettu: UV, Rp-arvo: 0,53) 6.5. 1-/N-(tolueeni-4 '-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-4-metoksi-naftaleeni värittömiä kiteitä, sp. 136°C a^°: -42,6° (c=l % asetonissa) 6.6. 1-/N- (tolueeni-4 ' -sulfonyyli) -L-alanyylioksi/-4-isopropoksi-naftaleeni värittömiä kiteitä, sp. 93-96°C ··; aD°: “38,0° (c=l % asetonissa) 6.7. 1-/N-(tolueeni-4 '-sulfonyyli)-L-alanyylioks_i/-4-pentoksi-naftaleeni värittömiä kiteitä, sp. 87°C a^°: -36,9° (c=l % asetonissa) 6.8. 1-/N- (tolueeni-^ ' -sulfonyyli) -L-alanyylioksi/-3-dietyyliamino-bents eeni värittömiä kiteitä, sp. 83-84°C : -59,4° (c=l % metanolissa) DC: Valmiita piigeelilevyjä (elutoimisaine: xyloli- metyylietyyliketöni 1:1, Rp-arvo: 0,68) 6.9. 1-/N-(tolueeni-4'-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-3-metyyli-5-metoksi-bentseeni
värittömiä kiteitä, sp. 79-81°C
22 77692 α^? 62,2° (c=l % metanolissa) DC: Valmiita piigeelilevyjä (elutoimisaine: kloroformi- metanoli 20:1, Rp-arvo: 0,79).
Esimerkki 7 2-/N-(tolueeni-4'-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-4-metoksi-naf tal eaii
Liuos 1
Happokloridin valmistamiseksi yksivaihemenetelmällä liuotetaan 19,44 g (0,08 moolia) N-(tolueeni-4-sulfonyyli)-L-alaniinia 100 ml:aan abs. dimetyyliformamidia ja jäähdytetään lämpötilaan -20°C. Tämän jälkeen lisätään pipetillä samalla sekoittaen ja jäähdyttäen 5,81 ml (0,08 moolia) tionyylikloridia ja reaktioseoksen annetaan olla 30 minuuttia jäähdytyskylvyssä lämpötilassa -20°C.
Liuos 2
Liuokseen, jossa on 6,96 g (0,04 moolia) 4-metoksi-nafto-li-2 50 ml:ssa abs. dimetyyliformamidia, lisätään 11,0 ml (0,08 moolia) trietyyliamiinia. Seos jäähdytetään lämpötilaan -20°C.
Reaktio
Liuos 1 kaadetaan liuokseen 2 ja sitten sekoitetaan vedeltä suojaten noin 4 tuntia lämpötilassa -20°C, ja tämän jälkeen seoksen annetaan olla jäähdytyskaapissa oli yön.
Edelleenkäsittelyn suorittamiseksi haihdutetaan reaktio-liuos tyhjössä korkeintaan lämpötilassa 50°C. Jäännös liuotetaan noin 150 ml:aan etikkaesteriä ja tämän jälkeen pestään kolmasti kulloinkin 100 ml :11a 5 %:sta sitruunahappoa ja sitten kulloinkin 100 ml :11a 5 %:sta : natriumbikarbonaattiliuosta. Kuivaamisen jälkeen nat- riumsulfaatilla haihdutetaan orgaaninen faasi tyhjössä.
|[ 23 77692
Raakatuote puhdistetaan patsaskromatograafisesti pii-geelipatsaassa toluolietikkaesteri-seoksella (4:1). Vastaavien koottujen fraktioiden haihduttamisen jälkeen tyhjössä liuotetaan jäännös pieneen määrään mety-leenikloridia ja saostetaan sitten eetteri-ligroiini-seoksella (1:2). Saadaan 2,8 g (18 %) 2-/N-(tolueeni-4 ' -sulfonyyli) -L-alanyylioksi/-4-metoksi-naftaliinia värittöminä kiteinä, sp. 119°C a^°: -57,9° (c=l % asetonissa).
Esimerkki 8 2-metoksi-4-(N-morfolino)-bentseenidiatsonium-tetrakloori-sinkaatti 5-kloori-2-nitroanisoli saatetaan reagoimaan 1,5-kertai-sen molaarisen ylimäärän kanssa morfoliiniä tolueenin ollessa liuottimena kuumentamalla useamman tunnin ajan (10-14 tuntia) palautusjäähdyttäen. Reaktio voidaan myös suorittaa tarkoituksenmukaisesti morfoliinin ollessa liuottimena. Tähän lisätään 5-kloori-2-nitroanisoli käyttäen 5-10 kertaista tilavuusmäärää morfoliiniin verrattuna. Mahdollinen entmetyloitu tuote erotetaan ravistelemalla natronlipeän kanssa tai jälkimetyloidaan reaktion avulla diatsometaanin kanssa.
Saatu nitroyhdiste pelkistetään tavanomaisella tavalla palladium-hiilen avulla metanolissa tai tina-(II)-kloridin avulla suolahapossa amidiksi ja tämä diatsotoi-daan. Diatsoniumyhdiste muutetaan tunnetulla tavalla suolahappoliuoksessa lisäämällä väkevää sinkkikloridi-liuosta tetrakloorisinkaatiksi tai lisäämällä tetra-fluoriboorihappoa tetrafluoriboraatiksi ja erotetaan sellaisenaan.
Sp. 170-172°C (tetrakloorisinkaatti) 166-168°C (tetrafluoriboraatti) 24 7 7 6 9 2
Esimerkki 9 4-metoksi-2-(N-morfolino)bentsolidiatsonium-tetrafluori-boraatti 18,76 g (0,1 moolia) 3-kloori-4-nitroanisolia, sp.
52°C, kuumennetaan 87,1 g:n (1 mooli) kanssa morfoliinia 4 tuntia palautusjäähdyttäen. Tämän jälkeen jäähdytetään huoneen lämpötilaan, reaktioliuokseen lisätään 100 ml jäävettä, erottunut keltainen reaktiotuote erotetaan imusuodattamalla, pestään jään avulla jäähdytetyllä 10 %:sella etikkahapolla ja saatu materiaali kuivataan lämpötilassa 60°C tyhjössä. Saadaan 19,5 g seosta, jossa on N(3-metoksi-6-nitrofenyyli)-morfoliiniä. Tämä tuote liuotetaan metyleenikloridiin ja lisätään diatsometaanin eetteriliuosta. Kahden vuorokauden pituisen seisomisen jälkeen huoneen lämpötilassa hajotetaan ylimääräinen di-atsometaani lisäämällä tipottain 2N etikkahappoa, orgaaninen faasi ravistetaan useamman kerran 2N natronlipeän kanssa ja liuotin haihdutetaan tyhjössä. Saadaan 19,1 g (= 80,2 %) N-(3-metoksi-6-nitrofenyyli)morfoliiniä, sp. 84-86°C. Tämä yhdiste suspendoidaan tämän jälkeen 250 ml:aan metanolia ja kun on lisätty 1,9 g palladium-hiiltä (10 %:sta), hydrataan lämpötilassa 20-30°C. Katalysaattorin poistamisen jälkeen imusuodattamalla haihdutetaan ja vapautunut emäs muutetaan lisäämällä eetteri-pitoista suolahappoa hydrokloridiksi. Tällöin kiteytyy 20,6 g (= 73,1 % teor.) N(3-metoksi-6-amino-fenyyli)-morfoliini-dihydrokloridia, sp. 237-240°C.
Tämä materiaali suspendoidaan lämpötilassa -5°C 96 ml:aan 6N suolahappoa ja lisätään tipottain 30 minuutin kuluessa liuos, jossa on 6 g natriumnitriittiä 12 ml:ssa vettä. Muodostunut ruskeanpunainen diatsoniumsuola-liuos lisätään lämpötilassa 0°C samalla sekoittaen 120 ml:aan 35 %:sta tetrafluoriboorihappoa. Useamman tunnin pituisen seisomisen jälkeen saadaan 19,5 g (=63,5 teor.) 4-metoksi-2-(N-morfolino)-bentseenidi-atsoniumtetrafluoriboraattia keltaisina kiteinä, sp.
Il 25 7 7 6 9 2 115-116°C (hajoaa).
Analogisella tavalla saadaan a) 5-kloori-2-nitroanisolista ja tiomorfoliinista 2-metoksi-4-(N-tiomorfolino)-bent^enidiatsonium-tetrafluoriboraatti, sp. 106-108°C (hajoaa).
Välituote, 2-amino-5(N-tiomorfolino)-anisoli-dihydroklo-ridi, valmistetaan seuraavalla tavalla: 1 litran suuruiseen kolmikaulapulloon, joka on varustettu sekoittajalla, lisätään 100 g tina-II-klorididihyd-raattia 400 ml:ssa 6N suolahappoa, ja sitten lisätään 25,4 g (1 mooli) 2-nitro-5-(N-tiomorfolino)anisolia annoksittain huoneen lämpötilassa samalla sekoittaen.
Tämän jälkeen lämmitetään 30 minuuttia lämpötilassa 75°C, jäähdytetään huoneen lämpötilaan ja reaktioliuos lisätään tipottain samalla jään avulla jäähdyttäen 750 ml:aan 30 %:sta natronlipeää. Vapautunut emäs uutetaan useamman kerran eetterillä ja tämä muutetaan, kuivaamisen ja liuottimen osittaisen poishaihduttamisen jälkeen, lisäämällä eetteripitoista suolahappoa hydrokloridiksi.
Saadaan 24,9 g (= 83,8 % teor.) 2-amino-5-(N-tiomorfolino)-anisolidihydrokloridia. Sp. 218-220°C.
b) 5-kloori-2-nitroanisolista ja piperidiinistä saadaan 2-metoksi-4-(N-piperidino)-bentseenidiatsonium-tetra- fluoriboraatti, sp. 123-125°C (hajoaa).
c) 5-kloori-2-nitroanisolista ja pyrrolidiinistä saadaan 2-metoksi-4-(N-pyrrolidino)-bentseenidiatsonium-tetrafluoriboraatti, sp. 137-139°C (hajoaa).
d) 5-kloori-2-nitroanisolista ja N-metyyli-piperatsii-nistä saadaan 2-metoksi-4-/N(N'-metyyli)-piperatsino/-bent9eenidiatsoniumtetrafluoriboraatti-dihydro-tetrafluoriboraatti , sp. 163°C (hajoaa).
26 7 7 6 9 2 Tätä yhdistettä valmistettaessa suoritetaan diatsotoi-minen amyylinitriitillä metanolissa. Tätä varten liuotetaan 39,6 g (0,1 moolia) 2-amino-5-(N-metyyli-piperat-sino)anisoli-dihydrotetrafluoriboraattia 175 ml:aan me-tanolia, lisätään 11,6 g (0,1 moolia) amyylinitriittiä 25 ml:ssa metanolia ja tämä lisätään hitaasti tipottain samalla sekoittaen lämpötilassa 0°C 60 ml:aan 35 %:sta tetrafluoriboorihappoa. Seoksen seistessä kiteytyy 24,8 g (= 51,7 % teor.) 2-metoksi-4-/N-(N'-metyyli)-piperatsino/-bentseenidiatsonium-tetrafluoriboraatti-dihydro-tetrafluoriboraatin ruskehtavia kiteitä, sp. 163°C (hajoaa)· e) 5-kloori-2-nitroanisolista ja morfoliinista saadaan 2-metoksi-4-(N-morfolino)-bentseenidiatsonium-tetrafluo-riboraatti, sp. 166-168°C (hajoaa).
Il 27 77692
Esimerkki 10 Indikaattoriseos 71,7 mg N-tosyyli-L-alaniini-indoksyyliesteriä, 7,5 g fosfo-rihappotrimorfolidia ja 80 mg taulukossa 1 esitettyjä diatso-niumsuoloja liuotettiin pulveriseoksena 100 ml saan seosta, jossa oli 98 osaa etanolia ja 2 osaa dekanolia.
Kaksi tippaa näin saatua liuosta yhdistettiin kahden tipan kanssa vesipitoista liuosta, jossa oli tuhat leukosyyttiä / mikrolitra kokoverta ja 0,2 molaarista borax/suolahappopusku-ria, pH 8, mikrotiitterilevyllä ja reaktio määritettiin yhden minuutin jälkeen. Seuraavassa taulukossa on esitetty yhteenveto näistä vertailukokeista:
Taulukko 1
Diatsoniumsuola Leukosyytit Reaktion 1000/ ui väri H CO /Vn+ BF + vihreä 3 \_7 2 4 + vihreä
N
2 H C ,-- 3 \ /=\ + N“\v //“N BF + vihreä / \_ Jf 2 4 h3c ^-(
Cl H3C0 '^7=Λ + H CO-/ /)—N BF + vihreä 3 \_y 2 4 jf~\ +~] 2- C1 —( y—N ZnCl + vihreä ch23 L —1 2 28 7 76 9 2
Taulukko jatkuu
Diatsoniumsuola Leukosyytit Reaktion 1000/^ul väri H^CS ^>-N ® BF4^ + violetti /=\ /=\ © © (. Λ N BF ( + ) punertavan \ \y 2 4 violetti W.0-/~ /V-N ® BF ® + punaruskea \J/ 2 4 / HS°4^ (+) punavioletti
H CO OCH
3v_ 3 \—C N® (BF®) ( + ) punavioletti 2\_y\_y 2 4 2 /=\ /=\ © 0 H C _/ V/ \_N BF + punainen 5 2 v> y\ y 2 4 Η5°Χ /=\ Θ Θ N —/)— N BF + punainen / \ 2 4
H N
/=\ /=\ © 0 .
/ W. Λ-N BF + punavioletti V_yV_/ 24
II
Claims (3)
1. Väline esterolyyttisten ja/tai proteolyyttisten ent syymien osoittamiseksi virtsassa, jonka välineen muodostavat imukykyinen kantaja, kalvokerros, jauheseos, lyofilisaatti, liuos tai reagenssitabletti, joka käsittää sopivan esteraasi-ja/tai proteaasi-osoitusperiaatteen, puskurin sekä mahdollisesti muita tavanomaisesti käytettyjä lisäaineita, tunnettu siitä, että esteraasi- ja/tai proteaasiosoitusperiaatteena käytetään diatsoniumsuolan ja esterin yhdistelmää, jolloin diatsoniumsuolana lisätään yhdiste, jolla on yleinen kaava I R R wv- R3~\ />- N = N X (I) R R 4 5 jossa kaavassa R on alempi alkyyli-, alempi alkoksi-, N-morfolinoryhmä, halogeeni tai vety, on alempi alkoksi-, aryylioksi-, alempi alkyylimerkapto-, alkyyli anti no-, dialkyyliamino-, hydroksi-, N-morfolino-, N-tio-morfolino-, N-pyrrolidino-, mahdollisesti N'-alkyloitu N-piperatsino-, N-piperidino-, fenyyliamino-, mahdollisesti alemmalla alkyylitähteellä substituoitu fenyyliryhmä, halogeeni tai vety, R , R , R , jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, 2 4 5 ovat joko alempi alkoksiryhmä tai vety, ja X on stabilisoiva anioni ryhmästä tetrafluoroboraatti, tet-rakloorisinkaatti ja vetysulfaatti, ja esterinä käytetään yhdistettä, jolla on yleinen kaava II R ' , 1 JL .0 - A - B R3 V^x R ' 4 (II> 30 77692 jossa kaavassa R', R ' , R ' , R ', jotka voivat olla samanlaisia tai eri-12 3 4 laisia, ovat vety- tai halogeeniatomi, alempi alkyyli- tai alempi alkoksiryhmä, X' on mahdollisesti alemmalla alkyyli-, bentsyyli- tai bent-soyylitähteellä N-substituoitu iminoryhmä, A on luonnollinen alfa-aminohappojäännös, edullisesti alanyy-lijäännös, ja B on peptidikemiassa tavanomainen typpisuojaryhmä, edullisesti sulfonyyli- tai oksikarbonyyliryhmä, tai yhdistettä, jolla on yleinen kaava III O - A - B Υ-γΛ. (III) R " R " 3 jossa kaavassa R ", R ", R ", ja R ", jotka voivat olla samanlaisia tai 12 3 4 erilaisia, ovat vety, alempi alkyyli-, alempi alkoksi- tai alempi dialkyyliaminoryhmä, jolloin kaksi viereistä substi-tuenttia voivat myös muodostaa konjugoidun bentseenirenkaan, ja A on L-alanyyliryhmä ja B on alanyyliryhmän typpiatomiin sitoutunut tosyyliryhmä.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen väline, tunnettu siitä, että lisäapuaineina käytetään muita tavanomaisia apuaineita.
3. Välineen, jonka muodostavat imukykyinen kantaja, kal-vokerros, jauheseos, lyofilisaatti, liuos tai reagenssitab-letti, joka käsittää sopivan esteraasi- ja/tai proteaasi-osoi-tusperiaatteen, puskurin sekä mahdollisesti muita tavanomaisesti käytettyjä lisäaineita, käyttö esterolyyttisten ja/tai II 31 77692 proteolyyttisten entsyymien osoittamiseksi virtsassa, jolloin väline lisätään tutkittavaan virtsaan ja syntynyt värinmuo-dostus arvioidaan visuaalisesti tai fotometrisesti, tunnettu siitä, että esteraasi- ja/tai proteaasi-osoitusperiaatteena käytetään diatsoniumsuolan ja esterin yhdistelmää, jolloin diatsoniumsuolana lisätään yhdiste, jolla on yleinen kaava I R R W\«-- = N X (I) R / R 4 5 jossa kaavassa R^ on alempi alkyyli-, alempi alkoksi-, N-morfolinoryhmä, halogeeni tai vety, R^ on alempi alkoksi-, aryylioksi-, alempi alkyylimerkap-to, alkyyliamino-, dialkyyliamino-, hydroksi-, N-morfolino-, N-tio-morfolino-, N-pyrrolidino-, mahdollisesti N'-alkyloitu N-piperatsino-, N-piperidino-, fenyyliamino-, mahdollisesti alemmalla alkyylitähteellä substituoitu fenyyliryhmä, halogeeni tai vety, R , R , R , jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, 2 4 5 ovat joko alempi alkoksiryhmä tai vety, ja X on stabilisoiva anioni ryhmästä tetrafluoriboraatti, tet-rakloorisinkaatti ja vetysulfaatti, ja esterinä käytetään yhdistettä, jolla on yleinen kaava II R ' R ' 1 O - A - B ,’Χϋ
3 I· 4 jossa kaavassa 32 77692 R R ', R ', R ', jotka voivat olla samanlaisia tai eri-12 3 4 laisia, ovat vety- tai halogeeniatomi, alempi alkyyli- tai alempi alkoksiryhmä, X' on mahdollisesti alemmalla alkyyli-, bentsyyli- tai bent-soyylitähteellä N-substituoitu iminoryhmä, A on luonnollinen alfa-aminohappojäännös, edullisesti alanyy-lijäännös, ja B on peptidikemiassa tavanomainen typpisuojaryhmä, edullisesti sulfonyyli- tai oksikarbonyyliryhmä, tai yhdistettä, jolla on yleinen kaava III
0. A - B (III) R " R " 2 14 R " 3 jossa kaavassa R ", R ", R ", ja R ", jotka voivat olla samanlaisia tai 12 3 4 erilaisia, ovat vety, alempi alkyyli-, alempi alkoksi- tai alempi dialkyyliaminoryhmä, jolloin kaksi viereistä substi-tuenttia voivat myös muodostaa konjugoidun bentseenirenkaan, ja A on L-alanyyliryhmä ja B on alanyyliryhmän typpiatomiin sitoutunut tosyyliryhmä.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3017721 | 1980-05-09 | ||
| DE19803017721 DE3017721A1 (de) | 1980-05-09 | 1980-05-09 | Mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme und dafuer geeignete substrate |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI811418L FI811418L (fi) | 1981-11-10 |
| FI77692B true FI77692B (fi) | 1988-12-30 |
| FI77692C FI77692C (fi) | 1989-04-10 |
Family
ID=6101946
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI811418A FI77692C (fi) | 1980-05-09 | 1981-05-08 | Medel foer paovisning av esterolytiska och/eller proteolytiska enzymer och anvaendningen av detta. |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4551428A (fi) |
| EP (1) | EP0039880B2 (fi) |
| JP (2) | JPS578798A (fi) |
| AR (1) | AR228452A1 (fi) |
| AT (1) | ATE3993T1 (fi) |
| AU (1) | AU523744B2 (fi) |
| BR (1) | BR8102876A (fi) |
| CA (1) | CA1186201A (fi) |
| CS (1) | CS223999B2 (fi) |
| DD (1) | DD158559A5 (fi) |
| DE (2) | DE3017721A1 (fi) |
| DK (1) | DK169974B1 (fi) |
| ES (1) | ES8202792A1 (fi) |
| FI (1) | FI77692C (fi) |
| HK (1) | HK82586A (fi) |
| HU (1) | HU187334B (fi) |
| MY (1) | MY8600605A (fi) |
| PL (1) | PL131123B1 (fi) |
| PT (1) | PT73005B (fi) |
| SG (1) | SG38786G (fi) |
| SU (1) | SU1466663A3 (fi) |
| UA (1) | UA6035A1 (fi) |
| YU (2) | YU117781A (fi) |
| ZA (1) | ZA812961B (fi) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3017721A1 (de) * | 1980-05-09 | 1981-11-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme und dafuer geeignete substrate |
| US4499185A (en) * | 1982-05-17 | 1985-02-12 | Miles Laboratories, Inc. | Test for esterase activity in a liquid sample |
| DE3309544A1 (de) * | 1983-03-17 | 1984-09-20 | Macherey-Nagel & Co Chemikalienhandel, 5160 Düren | Teststreifen zum nachweis von leukozyten im harn |
| DE3329394A1 (de) * | 1983-08-13 | 1985-02-28 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Chromogene und fluorogene carbonsaeureester, verfahren zu deren herstellung sowie verfahren und mittel zum nachweis und zur bestimmung von hydrolasen |
| EP0146348B1 (en) * | 1983-12-14 | 1991-07-31 | The Upjohn Company | Substituted naphthalenes, indoles, benzofurans and benzothiophenes as lipoxygenase inhibitors |
| DE3413118A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-24 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| DE3413119A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-24 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| DE3413077A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-17 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Chromogene aminosaeure- und peptidester, verfahren zu deren herstellung, verwendung dieser verbindungen in analysenverfahren sowie mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| US4657855A (en) * | 1984-04-06 | 1987-04-14 | Miles Laboratories, Inc. | Composition and test device for determining the presence of leukocytes, esterase and protease in a test sample |
| US4637979A (en) * | 1984-04-06 | 1987-01-20 | Miles Laboratories, Inc. | Composition and test device for determining the presence of leukocytes containing a zwitterion coupling agent |
| DE3413078A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-24 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Chromogene aminosaeure- und peptidester, verfahren zu deren herstellung, verwendung dieser verbindungen in analysenverfahren sowie mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| DE3413120A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-24 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| DE3446714A1 (de) * | 1984-12-21 | 1986-06-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens |
| US4777267A (en) * | 1986-02-07 | 1988-10-11 | Kanebo Ltd. | 1,3-dioxol-2-one derivatives |
| US4677075A (en) * | 1986-05-05 | 1987-06-30 | Louderback Allan Lee | Urobilinogen control |
| DE3813503A1 (de) * | 1988-04-22 | 1989-11-02 | Boehringer Mannheim Gmbh | Traegergebundenes mehrkomponentiges nachweissystem zur kolorimetrischen bestimmung esterolytisch oder/und proteolytisch aktiver inhaltsstoffe von koerperfluessigkeiten |
| US5084324A (en) * | 1989-08-25 | 1992-01-28 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Micro-bubble laminate with perforated substrate |
| US4950354A (en) * | 1989-08-25 | 1990-08-21 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Method of making a micro-bubble laminate |
| JPH0465584U (fi) * | 1990-10-12 | 1992-06-08 | ||
| EP0661280A1 (en) * | 1993-12-29 | 1995-07-05 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Novel amino acid ester and reagent composition for detecting leucocytes or elastase in body liquid |
| CA2161574A1 (en) | 1994-11-15 | 1996-05-16 | James Noffsinger | Methodology for colorimetrically determining the concentration of white blood cells in a biological fluid |
| US6348324B1 (en) | 1999-01-21 | 2002-02-19 | Hypoguard America Limited | Composition and device for detecting leukocytes in urine |
| US6528652B1 (en) * | 1999-01-21 | 2003-03-04 | Chronimed | Composition and device for detecting leukocytes in urine |
| US6203496B1 (en) * | 1999-08-12 | 2001-03-20 | Michael R. Gael | Apparatus with reagents for detection of medical conditions |
| IL140993A0 (en) | 2000-05-15 | 2002-02-10 | Bayer Ag | Trypsin substrate and diagnostic device, and method of using same |
| US6955921B2 (en) | 2001-04-30 | 2005-10-18 | Bayer Corporation | Trypsin substrate and diagnostic device, and method of using same |
| US6709868B2 (en) * | 2002-05-20 | 2004-03-23 | Portascience Inc. | Method and apparatus for measuring white blood cell count |
| US7727206B2 (en) * | 2005-12-27 | 2010-06-01 | Gorres Geoffrey H | Device for monitoring a patient for a urinary tract infection |
| US11104933B1 (en) * | 2016-03-22 | 2021-08-31 | Cleu Diagnostics, Llc | Compositions and methods for determining the presence of active leukocyte cells using an electrochemical assay |
| EP3848708A1 (en) * | 2020-01-13 | 2021-07-14 | Roche Diagnostics GmbH | Reagent formulation for leukocyte test strip |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1128371A (en) * | 1965-10-04 | 1968-09-25 | Miles Lab | Diagnostic composition |
| US3585001A (en) * | 1969-02-17 | 1971-06-15 | Miles Lab | Stabilized test device and process for detecting couplable compounds |
| US3715325A (en) * | 1970-10-02 | 1973-02-06 | Miles Lab | Insoluble polymeric diazonium salt chromogen |
| US3905872A (en) * | 1973-12-14 | 1975-09-16 | American Cyanamid Co | Alkaline phosphatase test material |
| DE2531539A1 (de) * | 1975-07-15 | 1977-01-20 | Riedel De Haen Ag | Indikatorsubstanz zum nachweis von kuppelnden fluessigkeits-inhaltsstoffen, diese enthaltende diagnostische mittel und verfahren zu deren herstellung |
| DE2836644A1 (de) * | 1978-08-22 | 1980-03-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten und dafuer geeignete chromogene |
| DE2854987A1 (de) * | 1978-12-20 | 1980-06-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Diagnostische mittel zum nachweis proteolytischer enzyme und dafuer geeignete chromogene |
| DE2905531A1 (de) * | 1979-02-14 | 1981-01-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten |
| DE2936543A1 (de) * | 1979-09-10 | 1981-04-09 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen |
| DE3017721A1 (de) * | 1980-05-09 | 1981-11-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme und dafuer geeignete substrate |
-
1980
- 1980-05-09 DE DE19803017721 patent/DE3017721A1/de not_active Withdrawn
-
1981
- 1981-05-04 CS CS813290A patent/CS223999B2/cs unknown
- 1981-05-04 AR AR285192A patent/AR228452A1/es active
- 1981-05-05 AT AT81103385T patent/ATE3993T1/de not_active IP Right Cessation
- 1981-05-05 DE DE8181103385T patent/DE3160522D1/de not_active Expired
- 1981-05-05 ZA ZA00812961A patent/ZA812961B/xx unknown
- 1981-05-05 US US06/260,616 patent/US4551428A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-05-05 CA CA000376871A patent/CA1186201A/en not_active Expired
- 1981-05-05 EP EP81103385A patent/EP0039880B2/de not_active Expired
- 1981-05-06 PL PL1981231002A patent/PL131123B1/pl unknown
- 1981-05-07 AU AU70239/81A patent/AU523744B2/en not_active Expired
- 1981-05-08 SU SU813278845A patent/SU1466663A3/ru active
- 1981-05-08 PT PT73005A patent/PT73005B/pt unknown
- 1981-05-08 FI FI811418A patent/FI77692C/fi not_active IP Right Cessation
- 1981-05-08 DD DD81229847A patent/DD158559A5/de not_active IP Right Cessation
- 1981-05-08 ES ES502034A patent/ES8202792A1/es not_active Expired
- 1981-05-08 DK DK204881A patent/DK169974B1/da not_active IP Right Cessation
- 1981-05-08 YU YU01177/81A patent/YU117781A/xx unknown
- 1981-05-08 JP JP6927981A patent/JPS578798A/ja active Granted
- 1981-05-08 BR BR8102876A patent/BR8102876A/pt unknown
- 1981-05-08 UA UA3278845A patent/UA6035A1/uk unknown
- 1981-05-08 HU HU811244A patent/HU187334B/hu unknown
-
1983
- 1983-05-19 YU YU112483A patent/YU45887B/sh unknown
-
1984
- 1984-05-04 US US06/606,984 patent/US4749648A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-10-11 JP JP60225022A patent/JPS61199800A/ja active Granted
-
1986
- 1986-04-30 SG SG387/86A patent/SG38786G/en unknown
- 1986-10-30 HK HK825/86A patent/HK82586A/xx not_active IP Right Cessation
- 1986-12-30 MY MY605/86A patent/MY8600605A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI77692B (fi) | Medel foer paovisning av esterolytiska och/eller proteolytiska enzymer och anvaendningen av detta. | |
| US4278763A (en) | Diagnostic agents for the detection of proteolytic enzymes | |
| US4657855A (en) | Composition and test device for determining the presence of leukocytes, esterase and protease in a test sample | |
| US4637979A (en) | Composition and test device for determining the presence of leukocytes containing a zwitterion coupling agent | |
| US4723020A (en) | Chromogenic amino acid esters and peptide esters | |
| JP3558348B2 (ja) | 微生物代謝産物の検出 | |
| US4814271A (en) | Method for detecting esterolytic and proteolytic enzymes | |
| US4331760A (en) | Diagnostic agent for the detection of leukocytes and chromogens useful therein | |
| US4296202A (en) | Diagnostic composition for the detection of leukocytes and chromogens useful therein | |
| US4469789A (en) | Amino acid and peptide esters of leuko-indoaniline compounds and compositions for the detection of proteolytic enzymes | |
| EP0158225A2 (de) | Analysenverfahren und Mittel zum Nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer Enzyme | |
| JPH04305593A (ja) | Ｎ−およびｏ−置換アミノフェノール誘導体、その製造用中間体およびその使用 | |
| US4755462A (en) | Analytical process and agents for the detection of esterolytic and/or proteolytic enzymes | |
| CA1248697A (en) | Phenoxyamino acid esters and peptide esters | |
| US5220029A (en) | Synthetic proteolytic substrate | |
| SI8311124A8 (sl) | Sredstvo in postopek za dokaz ekterolitskih in/ali proteolitskih encimov | |
| JPH0550276B2 (fi) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |