ES2228173T3 - Procedimiento y composiciones para la prevencion de la tolerancia a broncodilatadores. - Google Patents

Abstract

Utilización de cantidades terapéuticamente eficaces de un broncodilatador y de un polisacárido sulfatado, en el que el polisacárido sulfatado es una heparina de bajo peso molecular (LMWH) o una heparina de peso molecular ultrabajo (ULMWH) para la preparación de una composición farmacéutica para impedir la tolerancia a un broncodilatador en un mamífero.

Description

Procedimientos y composiciones para la prevención de la tolerancia a broncodilatadores.

Antecedentes de la invención Campo de la invención

La presente invención se refiere a la utilización de un broncodilatador y de un polisacárido sulfatado para la preparación de una composición farmacéutica para la prevención de la tolerancia a medicaciones tales como los agentes farmacéuticos. En particular, la presente invención comprende la utilización de un broncodilatador y de un polisacárido sulfatado para la preparación de una composición farmacéutica para la prevención de la tolerancia a medicaciones utilizadas en el tratamiento del asma y patologías referidas.

Sumario de la técnica relacionada

Más de quince millones de personas en los Estados Unidos padecen asma y trastornos pulmonares inflamatorios relacionados. El número de personas con asma es creciente tanto en los Estados Unidos como en el resto del mundo. La morbilidad asociada al asma le convierte en un trastorno médico principal. El asma es el trastorno crónico más corriente de la infancia y la causa principal del absentismo escolar. El asma en el ser humano produce visitas a pacientes estimadas en 27 millones de pacientes, 6 millones de pérdidas de días de trabajo y 90,5 millones días de actividad reducida al año. Además de su morbilidad, la proporción de mortalidad por asma está creciendo en todo el mundo. Además, las reacciones asmáticas son un problema creciente en animales. En particular, la industria de caballos de raza está afectada por los caballos que padecen reacciones asmáticas (para un estudio general del asma véase Sheffer et al., The Nacional Asthma Education Program: Expert panel report guidelines for the diagnosis and management of asthma, Med. Care 31: MS20 (1993)).

Clínicamente, el asma es un trastorno pulmonar obstructivo crónico caracterizado por una obstrucción de las vías respiratorias normalmente reversible, una inflamación de las vías respiratorias y un aumento de la sensibilidad a estímulos no específicos (véase Standards for the Diagnosis and Care of Patients with Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) Am. Rev. Respir. Dis 136:225-244 (1987)). La obstrucción de las vías respiratorias durante el ataque de asma es debida a la combinación del espasmo bronquial (contracción de los músculos lisos de las vías respiratorias), aumento de la secreción mucosa, edema de la mucosa de las vías respiratorias debido al aumento de la permeabilidad vascular, infiltración celular de las paredes de las vías respiratorias y lesión en el epitelio de las vías respiratorias. Hargreave et al., J. Allergy Clinical Immunol. 83:1013-1026 (1986) da a conocer que el asma puede ser desencadenado por varias causas tales como las reacciones alérgicas, una respuesta secundaria a las infecciones, a las exposiciones industriales o laborales, a la ingestión de determinados productos químicos o fármacos, al ejercicio y a la vasculitis. Harrison's Principles of Internal Medicine (14ª edición Fauci et al., eds., McGraw-Hill, Nueva York (1998), páginas 1419-1426) da a conocer que en muchos casos, existen dos fases en un ataque de asma alérgico, una fase inicial y una fase última que sigue 4 a 6 horas después del estímulo bronquial. La fase inicial incluye la respuesta inflamatoria inmediata incluyendo las reacciones producidas por la liberación de mediadores celulares procedentes de los mastocitos. Las reacciones de la fase última se desarrollan durante un periodo de horas y se caracterizan histológicamente por una afluencia inicial de leucocitos polimorfonucleares y deposición de fibrina seguido después por la infiltración de eosinófilos. Las reacciones de la fase última y la inflamación de las vías respiratorias conducen a la hiperreactividad prolongada de las vías respiratorias y a reagravamientos asmáticos que pueden durar entre días y meses en algunos pacientes. Barnes et al., Am. Rev. Respir. Dis. 141:S70-S76 (1990) da a conocer que la hipersensibilidad de las vías respiratorias a estímulos no específicos es una marca característica de este trastorno. Por consiguiente, en el momento actual, los objetivos generales de la farmacoterapia para el asma son la prevención del espasmo bronquial y el control de la hiperreactividad o de la hipersensibilidad de las vías respiratorias, indicación de la inflamación de las vías respiratorias.

Se ha afirmado que los tratamientos convencionales en la estricta evitación de todos los alergenos, lo cual es intrínsecamente difícil de conseguir, y en los regímenes terapéuticos basados en agentes farmacológicos tienen efectos secundarios funestos y propiedades farmacocinéticas subóptimas. Por consiguiente, la teofilina (metilxantina) por ejemplo, se caracteriza por la variabilidad sustancial en la absorbancia y en la eliminación de la teofilina. Woolock et al., Am. Respir. Crit. Care Med. 153:1481-1488 (1996) da a conocer que los corticoesteroides se utilizan para tratar la última fase y las reacciones de hiperreactividad de las vías respiratorias. Volcheck et al., Postgrad Med. 104(3): 127-136 (1998) describe la utilización de cromolina para impedir tanto la fase inicial como final de las reacciones inflamatorias del asma. La cromolina, sin embargo, sólo es eficaz para prevenir el comienzo de una reacción asmática si se administra antes del ataque asmático.

Los planteamientos de tratamientos alternativos extendidos se basan en la administración de agonistas adrenérgicos que simulan los efectos fisiológicos de las hormonas medulares adrenales y de los neurotransmisores del sistema nervioso simpático. Los agonistas \beta_{2}-adrenérgicos representan importantes agentes terapéuticos en el tratamiento del asma. Palmer et al., New Engl. J. Med. 331:1314-1319 (1994) da a conocer que el salmeterol es un agonista \beta_{2}-adrenérgico de acción prolongada que ha sido introducido como un auxiliar en la terapia antiinflamatoria en el tratamiento del asma. Debido a su lento comienzo pero con una duración de acción prolongada, la recomendación es prescribir salmeterol para utilización regular, junto con salbutamol para el alivio breve de los síntomas de la recaída. La administración de agonistas \beta_{2}-adrenérgicos, tal como salmeterol, se ha observado en los receptores \beta_{2}-adrenérgicos regulados por disminución. Bhagat et al. Chest 108:1235-1238 (1995) da a conocer que la utilización regular o prolongada de los agonistas \beta_{2}-adrenérgicos está relacionada con el escaso control del asma, con el aumento de la hipersensibilidad de las vías respiratorias al alergeno y con la protección reducida frente a la broncoconstricción producida por el ejercicio, la histamina, la metacolina y la prueba de provocación con alérgenos. Además, recientes informes sugieren que la utilización regular de \beta_{2}-agonistas puede producir también tolerancia leve a la respuesta del broncodilatador.

Asimismo existen efectos secundarios que proceden del tratamiento con agonistas adrenérgicos porque los agonistas adrenérgicos no son en general selectivos solo para los \beta_{2}-receptores, sino que también afectan a los \beta_{1}-receptores causando la estimulación cardíaca. Se pueden utilizar agonistas \beta_{2}-adrenérgicos para el tratamiento del espasmo bronquial, pero no tienen efecto sobre la inflamación de las vías respiratorias o sobre la hiperactividad bronquial. De hecho, el uso prolongado de los agentes \beta_{2}-adrenérgicos solos, mediante regulación por disminución de los \beta_{2}-receptores, puede empeorar la hiperactividad bronquial.

El desarrollo de la tolerancia está ejemplificada por el tratamiento con el \beta_{2}-agonista de acción prolongada, salmeterol. El salmeterol es un \beta_{2}-agonista de acción prolongada utilizado en el tratamiento del asma leve a moderado. Varios estudios han demostrado que el tratamiento regular con salmeterol produce la pérdida de la protección bronquial frente a diferentes estímulos, tales como el ejercicio, la metacolina y la histamina. Un estudio reciente describe que la tolerancia al efecto broncoprotector del salmeterol puede tener lugar justo después de la tercera dosis de salmeterol (véase Bhagat et al., Chest 108:1235-39 (1995)). Además, Lipworth, et al., Lancet 346:201-206 (1995) demostró que la utilización prolongada de salmeterol produce la reducción de la respuesta del broncodilatador al salbutamol.

Estudios recientes han intentado hallar planteamientos a la contra tolerancia. Un planteamiento ha consistido en combinar broncodilatadores relacionados con la reducción rápida en el efecto broncoprotector, tales como salmeterol o formoterol, con corticoesteroides (véase Woolock, Eur. Respir. Rev. 5:(27)142-145 (1995) y las patentes U.S. nº 5.049.389, nº 5.192.548, nº 5.674.860, nº 5.709.884, nº 5.736.124, nº 5.817.293 y nº 5.874.063). A pesar del entusiasmo en este área, evidenciado por los muchos informes disponibles en la bibliografía, dichos planteamientos han fracasado en gran medida. Se ha demostrado que los corticoesteroides inhalados no impiden el desarrollo de la tolerancia al efecto broncoprotector del salmeterol (véase Kalra et al. Chest 109:953-56 (1996). En cambio, la dosis elevada generalizada de glucocorticoesteroides puede impedir la tolerancia al efecto broncodilatador del \beta_{2}-agonista.

En un intento de contra tolerancia, los investigadores han intentado aclarar el mecanismo subyacente de dicho fenómeno. Se han propuesto varios mecanismos para la regulación por disminución de los receptores \beta_{2}-adrenérgicos. Hausdorff et al., FASEB J. 4:2881-2889 (1990) da a conocer que la tolerancia procede de los mecanismos moleculares de la desensibilización rápida subyacente del receptor beta adrenérgico (en lo sucesivo, "\betaAR") que se deben a su vez a una alteración en el funcionamiento del \betaAR que desacopla los receptores de las G de la proteína G estimulante. Este fenómeno de desacoplamiento implica la fosforilación de \betaAR mediante por menos dos cinasas, proteína cinasa A (en lo sucesivo, "PKA") y la \betaAR cinasa (en lo sucesivo, "\betaARK"), que se activan en diferentes condiciones de desensibilización. Se ha demostrado también que la fosforilación del receptor por las dos cinasas conduce a la desensibilización de la respuesta del receptor por distintos mecanismos bioquímicos (véase también, Liggett et al., J. Biol. Chem. 267:4740-4746 (1992); Schlericher et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:1420-1424 (1993) y Turki et al., Am Physiol. 269(13) :L709-L714 (1995)).

Desde un punto de vista práctico, la regulación por disminución de los receptores \beta_{2}-adrenérgicos y por consiguiente, la tolerancia, produce con frecuencia la administración de mayores dosis de agonista \beta_{2}-adrenérgico que exponen al paciente asmático a mayores efectos secundarios. En algunos pacientes, la tolerancia puede alcanzar incluso la etapa en la que el paciente es completamente insensible obligando al médico de familia a adoptar incluso enfoques menos deseables.

Informes recientes han identificado regímenes de tratamiento para asma inducido por antígenos basados en la heparina. Ahmed et al., Am. Rev. Respir. Dis. 145:566-570 (1992) por ejemplo da a conocer que la utilización de glucosaminoglucano heparina impide las respuestas del broncoconstrictor provocadas por estímulos que producen la desgranulación inmunológica de mastocitos en ovejas, sin atenuar la broncoconstricción provocada por el agonista. Igualmente, Lucio et al., Amer. Physiol. Soc. 73(3):1093-1101 (1992) da a conocer que la heparina atenúa las respuestas inmunológicas mediadas por mastocitos y la liberación de histamina. Otros trabajos en esta área han demostrado asimismo la prevención del asma producida por el ejercicio con heparina inhalada (véase por ejemplo, Ahmed et al., N. Eng. J. Med. 329:90-95 (1993) y Ahmed, Respiratory Drug Delivery IV, 55-63).

Se ha utilizado la heparina con varios fines. Lane et al., Chemical and Biological Properties, Clinical Applications, Edward Arnold Ed. London (1989) da a conocer que la heparina es un glucosaminoglucano no ramificado, muy sulfatado utilizado en la práctica clínica como agente anticoagulante. Esta actividad procede de la capacidad de la heparina para unirse a algunos de los residuos de la antitrombina III (AT-III), acelerando la neutralización por AT-III de los factores de coagulación activados e impidiendo la transformación de protrombina en trombina. Mayores cantidades de heparina pueden inactivar la trombina y los factores de coagulación primarios, impidiendo la transformación de fibrinógeno en fibrina. La heparina se sintetiza en los mastocitos como un proteoglucano y es particularmente abundante en los pulmones de varios animales. La heparina no es un compuesto específico de peso molecular fijo, sino que en realidad es una mezcla heterogénea de cadenas de polisacárido sulfatadas de forma variable compuestas de unidades repetidas de D-glucosamina y de L-ácido idurónico. A pesar de la amplia bibliografía sobre heparina para las aplicaciones en asma seleccionados, hasta la fecha la utilización de heparina para estudiar la tolerancia provocada por el broncodilatador no ha sido investigada.

Así pues, hace tiempo que existe una gran necesidad de procedimientos y composiciones para el tratamiento del asma y de las patologías referidas. Dichos procedimientos deberían estudiar las deficiencias de los planteamientos terapéuticos tradicionales. Más específicamente, existe una necesidad de nuevas modalidades y composiciones capaces de impedir la tolerancia que se desarrolla mediante la utilización de los broncodilatadores tradicionales. Dichos planteamientos nuevos deberían impedir la regulación por disminución de los receptores \beta_{2}-adrenérgicos en respuesta a la utilización de los agonistas \beta_{2}-adrenérgicos. Existe, además, una necesidad de procedimientos y composiciones capaces de impedir la tolerancia desarrollada en respuesta a la utilización de agonistas
\beta_{2}-adrenérgicos para el tratamiento del asma que se administren fácilmente y que minimicen los efectos secundarios en comparación con los protocolos actuales. Teóricamente, dichas composiciones se deberían administrar fácilmente (p. ej., la inhalación auto-administrada).

Sumario de la presente invención

El presente inventor ha diseñado nuevas composiciones y procedimientos eficaces para prevenir el desarrollo de la tolerancia a los agentes farmacológicos. De forma sorprendente, se ha observado que estos planteamientos resultan particularmente eficaces para prevenir el desarrollo de la tolerancia en la utilización de los agonistas \beta_{2}-adrenérgicos, así como que se administran fácilmente. Dichos procedimientos y composiciones representan por lo tanto, planteamientos esperados hace tiempo para el tratamiento del asma y de las patologías referidas, que estudian las deficiencias de los regímenes tradicionales.

La presente invención se refiere a la utilización de una cantidad terapéuticamente eficaz de un broncodilatador y de un polisacárido sulfatado, en la que el polisacárido sulfatado es una heparina de bajo peso molecular (LMWH) o una heparina de peso molecular ultrabajo (ULMWH) para la preparación de una composición farmacéutica para impedir la tolerancia a un broncodilatador en un mamífero.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es una representación gráfica que presenta la capacidad de un broncodilatador (salmeterol) representativo, no limitativo, utilizado junto con un efector (heparina) representativo, no limitativo, según la invención para impedir la tolerancia a los broncodilatadores. Los datos se muestran como dosis provocadora acumulada de metacolina en unidades respiratorias, que producen una disminución del 20% en FEV_{1} (PD_{20}). PD_{20} se determinó para el día de referencia (BSL) y después de la 1ª, 3ª, 5ª y 7ª dosis de salmeterol (42 \mug de BID), después del pretratamiento con heparina inhalada (80.000 unidades de BID) o placebo. La primera dosis de salmeterol produjo un aumento notable en PD_{20} de metacolina el 1^{er} día, presentando broncoprotección. Se observó menor broncoprotección después de las dosis 3ª a 7ª de salmeterol (2º a 4º día), indicando desarrollo de la tolerancia. Tal como se muestra, la heparina inhalada impidió la tolerancia. Obsérvese que el símbolo (+) se utiliza para indicar valores significativamente diferentes del 1^{er} día (P<0,05) y (*) se utiliza para indicar valores significativamente diferentes del placebo (P<0,05).

La Figura 2 es una representación gráfica que presenta la capacidad de un broncodilatador (salmeterol) representativo, no limitativo, utilizado junto con efectores (preparaciones de heparina de bajo peso molecular) representativos, no limitativos, según la invención para impedir la tolerancia a los broncodilatadores. Los datos se muestran como dosis provocadora acumulada de metacolina en unidades respiratorias, que producen una disminución del 20% en FEV_{1} (PD_{20}). PD_{20} se determinó para el día de referencia (BSL) y después de la 1ª, 3ª, 5ª y 7ª dosis de salmeterol (42 \mug de BID), después del pretratamiento con heparina inhalada (80.000 unidades de BID), 30 mg de heparina enoxaprina de bajo peso molecular o 90 mg de placebo. La primera dosis de salmeterol produjo un aumento notable en PD_{20} de metacolina el 1^{er} día, presentando broncoprotección. Se observó menor broncoprotección después de las dosis 3ª a 7ª de salmeterol (2º a 4º día), indicando desarrollo de la tolerancia. Tal como se muestra, la heparina de bajo peso molecular inhalada impidió la tolerancia.

Descripción detallada de las formas de realización preferidas

La presente invención se refiere a la identificación de los grupos y procedimientos para utilizar los mismos para prevenir la tolerancia a los broncodilatadores. De forma más específica, la presente invención se refiere a la identificación de las composiciones y los procedimientos que son capaces de prevenir la tolerancia a los agonistas \beta_{2}-adrenérgicos. Los procedimientos y composiciones según la invención resultan también útiles como herramientas analíticas para los estudios funcionales y como herramientas terapéuticas. De forma sorprendente, se ha observado que estos planteamientos resultan particularmente eficaces para prevenir la tolerancia en la utilización de los agonistas \beta_{2}-adrenérgicos así como que son particularmente fáciles de administrar. Las composiciones y modalidades descritas en esta memoria también proporcionan planteamientos terapéuticos buscados hace tiempo para el tratamiento del asma y de las patologías referidas en mamíferos.

De forma más específica, la presente invención comprende composiciones que previenen la pérdida o disminución del efecto broncoprotector por agonistas \beta_{2}-adrenérgicos. La invención también indica planteamientos de nuevas combinaciones que facilitan nuevas y mejoradas propiedades farmacológicas para el tratamiento del asma y de las patologías referidas en un mamífero. Las patentes y la bibliografía científica referida en esta memoria crean el conocimiento de los expertos en la materia y están incorporadas en esta memoria como referencia en su totalidad.

La presente invención se refiere a la utilización de una cantidad terapéuticamente eficaz de un broncodilatador y de un polisacárido sulfatado, en la que el polisacárido sulfatado es una heparina de peso molecular bajo (LMWH) o una heparina de peso molecular ultrabajo (ULMWH) para la preparación de una composición farmacéutica para prevenir la tolerancia a un broncodilatador en un mamífero.

Por lo tanto, la invención indica un procedimiento para prevenir la tolerancia en un mamífero a las medicaciones, tales como los broncodilatadores utilizados en el tratamiento del asma y de las patologías referidas, incluyendo la etapa de administrar cantidades terapéuticamente eficaces de un broncodilatador y de heparina de peso molecular bajo (LMWH) o una heparina de peso molecular ultrabajo (ULMWH) durante un periodo de tiempo terapéuticamente eficaz.

A menos que se defina lo contrario, los términos técnicos y científicos utilizados en esta memoria tienen el significado entendido habitualmente por un experto en la materia con el que se relaciona la presente invención. En esta memoria se hace referencia a varias metodologías y materiales conocidos por los expertos en la materia. Los trabajos estándar de referencia que indican los principios generales de la farmacología incluyen Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9ª ed., McGraw Hill Companies Inc., Nueva York (1996).

Se puede utilizar cualquier material y/o procedimiento adecuado conocido por los expertos para poner en práctica la presente invención. Sin embargo, se describen materiales y procedimientos preferidos. Se pueden obtener materiales, reactivos y similares a los que se hace referencia en la siguiente descripción y ejemplos de proveedores comerciales, a menos que se indique de otra manera.

La presente invención está destinada a su utilización en cualquier mamífero que pueda experimentar los beneficios de la invención. El principal de entre dichos mamíferos es el hombre, aunque la invención no pretende estar tan limitada y es aplicable a usos veterinarios.

El término "prevenir" y cualquier variación de éste se utilizan para incluir la inhibición parcial así como completa. Prácticamente, la "prevención" según la invención puede detectarse como un cambio positivo en la eficacia de un broncodilatador administrado junto con un efector de la invención comparado con la utilización del broncodilatador sin efector. El término "broncodilatador" tal como se utiliza en esta memoria, indica un grupo activo capaz de producir un aumento en el calibre de un bronquio o de un conducto bronquial. La utilización de broncodilatadores en el tratamiento del asma y de las patologías referidas es bien conocida en la técnica, y se incluyen aquellos compuestos conocidos dentro del alcance de la presente invención (véase por ejemplo Harrison's supra, en las páginas 1167-1176).

Los ejemplos de broncodilatadores preferidos de la presente invención incluyen por consiguiente, sin limitación, los agonistas \beta-adrenérgicos específicos, los agentes anticolinérgicos y la teofilina (para una exposición general de broncodilatadores véase, Goodman y Gilman's supra en las páginas 664-665).

En una forma de realización preferida de la invención, los agonistas \beta-adrenérgicos son agonistas \beta_{2}-adrenérgicos. Ejemplos representativos no limitativos de agonistas \beta_{2}-adrenérgicos incluyen, salmeterol, formoterol, bambuterol, albuterol, terbutalina, pirbuterol, bitolterol, metaproterenol, isoetarina e isoproterenol (véase, Goodman y Gilman's supra en las páginas 213-217).

En algunas formas de realización preferidas de la invención, el agente anticolinérgico es bromuro de ipratropio (en lo sucesivo "ipratropio"), bromuro de tiotropio o bromuro de oxitropio. En otras formas de realización preferidas de la invención, el broncodilatador es teofilina y el fármaco relacionado aminofilina (véase, Goodman y Gilman's supra, capítulo 7).

Para los objetivos de la invención el término "efector" se utiliza para referirse a un grupo que cuando se administra junto con el/los broncodilatador(es) según la invención es capaz de prevenir la tolerancia a uno o más de los broncodilatadores administrados con éste. Ejemplos representativos no limitativos de efectores según la invención incluyen polianiones, tales como por ejemplo los polisacáridos. Los polisacáridos que se pueden utilizar como efectores en las formas de realización preferidas según la invención incluyen, sin limitación, polisacáridos tales como dextrano, heparina, sulfato de heparán, sulfato de dermatán, sulfato de condroitina, y/o otros glucosaminoglucanos y mucopolisacáridos. En una forma de realización particularmente preferida de la invención, el efector es un polisacárido sulfatado (p. ej. N-Sulfation). En una forma de realización más preferida, el efector es un oligómero que comprende entre 1 y aproximadamente 10 restos de azúcar. En una forma de realización más preferida el efector es un tetrasacárido sulfatado.

En una forma de realización particularmente preferida, el efector es la heparina. El término "heparina" tal como se utiliza en esta memoria incluye fracciones seleccionadas de heparina o mezclas que comprenden más de una fracción de heparina que son eficaces en los procedimientos y composiciones de la presente invención.

Se pueden preparar fracciones de heparina mediante procesos químicos, enzimáticos o de síntesis bien conocidos en la técnica. La despolimerización química ha sido realizada de muchas maneras diferentes (véase por ejemplo, Fisher y Tiemann, Ber. Dtsch. Chem. Ges. 27:138-147(1984) y Foster, Chem. Ind. 627 (1955) y Shively y Conrad, Biochemistry 15:3932-3942 (1976). Dichos procedimientos incluyen la despolimerización por nitritos a bajo pH por \beta-eliminación alcalina después de la esterificación de los ácidos urónicos o por procedimientos oxidativos utilizando peróxidos o peryodato. Tras la despolimerización con nitritos, la anhidromanosa en el extremo reductor de la heparina y los fragmentos de oligosacárido se reducen normalmente a anhidromanitol o a ácido anhidromanónico oxidado. La \beta-eliminación alcalina produce la insaturación en 4,5 en el extremo no reducido de los fragmentos de heparina y en los oligosacáridos producidos. Estos grupos se pueden reducir utilizando hidrogenación catalítica o se puede eliminar todo el monosacárido insaturado en 4,5 con tratamiento ácido suave o con reactivos que contienen metales tales como las sales de mercurio. Estos tratamientos proporcionan fragmentos de heparina y oligosacáridos que presentan un número desigual de unidades de sacárido. Como alternativa se puede conseguir la despolimerización de la heparina utilizando procesos enzimáticos que utilizan heparinasas conocidas normalmente, especialmente las heparinasas bacterianas. Por consiguiente, la patente U.S. nº 5.714.376 da a conocer la producción y utilización de las preparaciones de heparinasa aisladas de Flavobacterium Heparinum, (véase también Linker et al., Methods of Enzymology, Ginsburg Ed., Academic Press, Nueva Cork, (1972), págs. 902-911). En general, la enzima escinde la cadena de heparina entre el carbón anómero de un resto de N-sulfato-glucosamina y la unidad de ácido urónico anterior que sigue. La escisión de la heparina utilizando procesos enzimáticos puede producir una mezcla de oligosacáridos, incluyendo di-, tetra-, hexa- y octasacáridos. Los oligosacáridos producidos de este modo presentan un grado doble de polimerización y terminan en un extremo no reductor en un ácido urónico insaturado. Esos grupos terminales se pueden reducir como se describió anteriormente para la \beta-eliminación alcalina.

En una forma de realización preferida de la invención, el material de partida inicial es heparina de la mucosa intestinal o del pulmón porcino o bovino. La presente invención contempla la utilización de cualquier material, incluyendo las fuentes porcinas, bovinas o de otros animales, como material de procedencia de la heparina.

Debe entenderse que el término heparina incluye todas las fracciones de todos los pesos moleculares de heparina, incluyendo la heparina de ultra-bajo peso molecular (ULMWH), la heparina de peso molecular bajo (LMWH) y las fracciones de heparina con pesos moleculares que oscilan aproximadamente entre 1.000 Daltons y aproximadamente más de 40.000 Daltons. El término "heparina" abarca también los fragmentos del polisacárido heparina incluyendo, pero sin limitarse a cualquier forma oligomérica. En las formas de realización preferidas de la invención los oligómeros de heparina son dímeros, trímeros, tetrámeros, pentámeros, hexámeros, heptámeros, octámeros, nonámeros o decámeros. En la mayoría de las formas de realización preferidas, los oligómeros de heparina son tetrámeros.

Un experto en la materia valorará que en algunas formas de realización de la invención en las que el efector es ULMWH, no presentan sustancialmente ninguna actividad anticoagulante. Igualmente, en otras formas de realización, en las que el efector es LMWH, no presentan sustancialmente ninguna actividad anticoagulante.

El efector de la invención puede estar totalmente N-sulfatado, parcialmente N-sulfatado, O-sulfatado, parcialmente O-sulfatado o hipersulfatado. En una forma de realización preferida entre aproximadamente 5% y aproximadamente el 100% de los residuos están N-sulfatados. En una forma de realización más preferida entre aproximadamente el 30% y aproximadamente el 75% de los residuos están N-sulfatados. En una forma de realización entre aproximadamente el 5% y aproximadamente el 100% de los residuos están O-sulfatados. En una forma de realización más preferida entre aproximadamente el 30% y aproximadamente el 75% de los residuos están O-sulfatados. El término "hipersulfatado" significa la sulfatación de un residuo de efector que no está sulfatado de forma natural produciendo un aumento de la densidad de carga. La preparación de la heparina sulfatada y de las fracciones de heparina sulfatadas es bien conocida en la técnica.

Aunque no se desea estar ligado a ninguna teoría en particular, se propone que la regulación por disminución de los receptores \beta_{2}-adrenérgicos tenga lugar por la siguiente trayectoria. Fosforilación de los receptores \beta_{2}-adrenérgicos por la cinasa \beta_{2}-adrenérgica (\betaARK) y la proteína cinasa A (PKA) produce desacoplamiento de estos receptores. Los estudios in vitro han demostrado que la heparina bloquea la acción de la \betaARK, mientras que los glucocorticoesteroides son ineficaces. La presente invención descubre de forma sorprendente que la heparina inhalada, inhibiendo teóricamente \betaARK, impide la regulación por disminución inducida por salmeterol de los \beta_{2}-receptores in vivo.

En una forma de realización preferida de la invención se administra más de un efector. En algunas formas de realización, se administran más de un tipo de polisacárido (tal como por ejemplo una fracción de heparina y dextrano). Igualmente, en una forma de realización preferida se administra más de un broncodilatador. Por lo tanto, por ejemplo en una forma de realización más preferida, se administran un
\beta_{2}-agonista y un anticolinérgico. En la forma de realización más preferida de la invención, se administra una formulación de combinación que contiene una mezcla de ipratropio y albuterol, junto con un efector según la invención.

Los broncodilatadores y efectores según la invención se pueden formular opcionalmente con cualquiera de los vehículos farmacéuticamente aceptables bien conocidos incluyendo los diluyentes y excipientes (véase Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª ed., Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA (1990) y Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams & Wilkins (1995)). Las formulaciones según la invención por lo tanto pueden contener uno o más broncodilatador(es), uno o más efector(es) adicional(es), así como cualquier otro ingrediente farmacológicamente activo.

La denominación "asma y patologías referidas" se utiliza para referirse a un trastorno principalmente de naturaleza inflamatoria con espasmo bronquial asociado. Por consiguiente, el asma y los trastornos relacionados se caracterizan por un estrechamiento de las vías respiratorias, variable en periodos cortos de tiempo ya sea de forma espontánea o como resultado del tratamiento, debido a grados variables de contracción (espasmo) del músculo liso, edema de la mucosa y mucus en el lumen de los bronquios y en los bronquiolos. En general, estos cambios (y por lo tanto los síntomas del asma) están desencadenados por la liberación local de espasmógenos y de sustancias vasoactivas (p. ej., histamina o determinados leucotrienos o prostaglandinas) en el curso de un proceso alérgico. Ejemplos representativos no limitativos de "patologías referidas" incluyen los trastornos no asmáticos caracterizados por la hipersensibilidad de las vías respiratorias (p. ej., bronquitis crónica, enfisema y fibrosis quística).

El efector según este aspecto de la invención, se puede administrar antes, a la vez o después de la administración del broncodilatador. Un experto en la materia valorará que el orden específico de la administración del broncodilatador y del efector de la invención variarán dependiendo de cada broncodilatador y efector seleccionado. Además, el programa de administración del broncodilatador y del efector puede variar de un mamífero a otro dependiendo de las exigencias clínicas concretas de cada mamífero individual. Un médico de familia experto puede optimizar la administración mediante control cuidadoso del paciente a la vez que altera el ritmo y/o el orden de administración del broncodilatador y del efector de la invención. Los cambios clínicos importantes para evaluar el efecto terapéutico de los tratamientos según la invención incluyen la reducción de los síntomas característicos y señales del asma y patologías referidas (p. ej., disnea, estertor, tos, hipersensibilidad bronquial) y mejora de las pruebas de funcionamiento pulmonar. Éstos están basados en los síntomas y observaciones del médico en el paciente.

En determinadas formas de realización preferidas, el broncodilatador y el efector se mezclan antes de la administración a un mamífero. De este modo, en una forma de realización particularmente preferida, la utilización según la invención incluye la administración de una formulación que incluye un \beta_{2}-agonista y de un polisacárido N-sulfatado, preferentemente heparina. En algunas formas de realización preferidas, la formulación comprende una mezcla de fragmentos de heparina y uno o más \beta_{2}-agonistas. Otra forma de realización preferida comprende la administración de una mezcla de una determinada fracción de heparina y uno o más \beta_{2}-agonistas. En otras formas de realización preferidas, el broncodilatador y el efector se administran por separado.

Las dosis dependerán del trastorno que se trate, del compuesto determinado y de otros factores clínicos tales como el peso y el trastorno del mamífero y de la vía de administración.

Los términos "cantidad terapéuticamente eficaz" y "periodo de tiempo terapéuticamente eficaz" se utilizan para indicar los tratamientos y dosis para periodos de tiempo eficaces para conseguir el resultado terapéutico buscado. Además, un experto valorará que se puede reducir o aumentar la cantidad terapéuticamente eficaz de broncodilatador o de efector mediante buena sintonización y alterando la cantidad del otro componente. La invención proporciona por lo tanto un procedimiento para adaptar la administración/tratamiento a las exigencias particulares específicas en un mamífero dado. Como se ilustra en los ejemplos siguientes, se pueden determinar fácilmente intervalos terapéuticamente eficaces por ejemplo experimentalmente comenzando con cantidades relativamente bajas y por incrementos paso a paso con la evaluación correspondiente de la inhibición.

En las formas de realización de la invención en las que el efector es heparina no fraccionada, una cantidad terapéuticamente eficaz de efector está comprendida aproximadamente entre 1 y aproximadamente 10 mg por kg de peso corporal por administración. En una forma de realización preferida, la cantidad terapéuticamente eficaz de heparina no fraccionada está comprendida aproximadamente entre 4 y aproximadamente 8 mg por kg de peso corporal por administración. En una forma de realización más preferida, la dosis de heparina no fraccionada oscilará entre aproximadamente 5 y aproximadamente 7,5 mg por kilo de peso corporal por administración.

En las formas de realización de la invención en las que el efector es LMWH, una cantidad terapéuticamente eficaz del efector está comprendida entre 10 y aproximadamente 1000 \mug por kg de peso corporal por administración. En una forma de realización preferida de la invención, la cantidad terapéuticamente eficaz de LMWH está comprendida aproximadamente entre 100 y aproximadamente 750 \mug por kg de peso corporal por administración. En una forma de realización más preferida, la dosis de LMWH oscilará entre aproximadamente 200 y aproximadamente 500 \mug por kg de peso corporal por administración.

En las formas de realización de la invención en las que el efector es ULMWH, una cantidad terapéuticamente eficaz del efector está comprendida entre 1 y aproximadamente 500 \mug por kg de peso corporal por administración. En una forma de realización preferida de la invención, la cantidad terapéuticamente eficaz de ULMWH está comprendida aproximadamente entre 10 y aproximadamente 250 \mug por kg de peso corporal por administración. En una forma de realización más preferida, la dosis de ULMWH oscilará entre aproximadamente 20 y aproximadamente 100 \mug por kg de peso corporal por administración.

Los expertos en la materia valorarán que el número de administraciones de broncodilatadores y/o efectores según la invención varíe de un paciente a otro basándose en el estado médico particular de este paciente en cualquier momento dado. Sin desear limitar la invención en un número determinado de administraciones al día, se prevén de dos a cuatro administraciones al día.

La dosis total de broncodilatadores según la invención son las descritas en la bibliografía científica y médica (véase por ejemplo, Goodman y Gilman's supra en las páginas 664-665).

En estas formas de realización en las que el efector es heparina, una dosis preferida para la terapia habitual está comprendida en un intervalo entre aproximadamente 200 unidades por kg de peso corporal al día y aproximadamente 5.000 unidades por kg de peso corporal al día. En otra forma de realización, la dosis preferida está comprendida entre aproximadamente 500 unidades por kg de peso corporal al día y aproximadamente 2.000 unidades por kg de peso corporal al día. En la forma de realización más preferida, la dosis es aproximadamente de 1.000 unidades por kg de peso corporal al día (80.000 unidades). Un experto en la materia valorará que se pueden administrar dosis mayores o más frecuentes dependiendo del estado clínico así como de la respuesta del mamífero en particular que se está tratando.

Los efectores de la presente invención, de los que una forma de realización más preferida es la heparina N-sulfatada, se pueden proporcionar como formulaciones farmacéuticamente aceptables utilizando procedimientos de formulación conocidos por los expertos en la materia. Estas formulaciones se pueden administrar por las vías habituales, aunque preferentemente la administración es por las vías de inhalación. Las formulaciones incluyen las adecuadas para administración oral, inhalación, rectal, oftálmica, (incluyendo dentro del vítreo o en el interior de la cámara), nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica e intratraqueal). Además, las combinaciones se pueden formular con polímeros que permitan la liberación lenta del compuesto.

Para las formulaciones por inhalación, los compuestos de la presente invención se pueden administrar por cualquiera de los procedimientos de inhalación conocidos por los expertos en la materia. Dichos procedimientos y dispositivos de inhalación incluyen, pero no se limitan a, inhaladores de dosis medidas con propelentes tales como CFC o HFA o propelentes que sean fisiológica y ambientalmente aceptables. Otros dispositivos incluidos son los inhaladores operados por el pulmón, los inhaladores en polvo seco de dosis múltiples y los nebulizadores de aerosol.

En una forma de realización preferida de la invención, la administración se efectúa por medio de una bomba o nebulizador actuado a presión. En las formas de realización más preferidas de la invención, la administración se efectúa por medio de un inhalador de dosis medidas o de un dosificador en aerosol.

Las formulaciones de la presente invención adecuadas para la administración oral se pueden presentar como unidades discretas tales como cápsulas, comprimidos oblongos, cápsulas de gelatina, sellos, píldoras o comprimidos conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del ingrediente activo en forma de polvo o gránulos; como solución o suspensión en un líquido acuoso o un líquido no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión de agua en aceite y como inyección intravenosa en embolada, etc. En una forma de realización más preferida, la administración se efectúa mediante soluciones, suspensiones o elixires líquidos, polvos, pastillas, partículas micronizadas y sistemas de administración osmótica.

Se puede preparar un comprimido por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos por compresión se pueden preparar comprimiendo, en una máquina adecuada, el ingrediente activo en forma suelta como por ejemplo en polvo o gránulos, mezclado opcionalmente con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, conservante, tensioactivo o agente dispersante. Se pueden preparar comprimidos moldeados por moldeo, en una máquina adecuada, de una mezcla de compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte. Los comprimidos se pueden recubrir o ranurar opcionalmente y se pueden formular de modo que proporcionen una liberación lenta o controlada del ingrediente activo en el interior.

Las formulaciones de las composiciones se pueden presentar de manera apropiada en una forma de dosificación unitaria y se pueden preparar mediante técnicas farmacéuticas convencionales como las expuestas anteriormente. Dichas técnicas incluyen la etapa de introducir junto con el ingrediente activo, preferentemente el efector y/o el broncodilatador y el/los vehículo(s) o excipiente(s) farmacéutico(s). En general, las formulaciones se preparan introduciendo uniforme e íntimamente junto con el ingrediente activo vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y a continuación, si es necesario, dar forma al producto.

Las formulaciones adecuadas para administración por inhalación incluyen formulaciones del ingrediente activo, el broncodilatador y/o el efector en una forma que se pueda administrar mediante dichos dispositivos de inhalación conocidos en la técnica. Dichas formulaciones pueden incluir vehículos tales como polvos y aerosoles. Las composiciones de inhalador utilizadas en la presente invención pueden comprender composiciones líquidas o en polvo que contienen el ingrediente activo y que son adecuadas para la nebulización y la utilización intrabronquial, o composiciones en aerosol administradas mediante una unidad de aerosol que dosifica las dosis medidas.

Las composiciones líquidas adecuadas comprenden el ingrediente activo en un disolvente inhalador farmacéuticamente aceptable, p. ej., solución salina isotónica o agua bacteriostática. Las soluciones se administran por medio de una bomba o dosificador en atomizador nebulizado actuado a presión, o mediante cualquier otro medio convencional para producir o permitir la cantidad de dosis requerida de la composición líquida que se ha de inhalar dentro de los pulmones del paciente.

Las composiciones en polvo adecuadas incluyen, a título ilustrativo, preparaciones en polvo de ingrediente activo entremezcladas a fondo con lactosa u otros polvos inertes aceptables para la administración intrabronquial. Las composiciones en polvo se pueden administrar mediante un dosificador, incluyendo, pero sin limitarse a un dosificador en aerosol o adaptadas a una cápsula destruible que se puede insertar en el paciente en un dispositivo que perfora la cápsula e insufla el polvo en una corriente estacionaria adecuada para su inhalación.

Las formulaciones en aerosol para su utilización en el procedimiento del asunto incluirían de forma típica propelentes, tensioactivos y codisolventes y se pueden rellenar en recipientes de aerosol convencionales que se cierran mediante una válvula dosificadora adecuada.

Las formulaciones adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen las pastillas, que comprenden los ingredientes en una base con sabor, normalmente sacarosa y goma de acacia o de tragacanto; las pastillas que comprenden el ingrediente en una base inerte tal como gelatina y glicerina o sacarosa y goma de acacia y los enjuagues que comprenden el ingrediente que se ha de administrar en un vehículo líquido adecuado.

Las formulaciones adecuadas para administración tópica en la piel se pueden presentar en forma de pomadas, cremas, geles, lociones y pastas comprendiendo el ingrediente que se ha de administrar en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Un sistema preferido de administración tópica es un parche transdérmico que contiene el ingrediente que se ha de administrar.

Las formulaciones para administración rectal se pueden preparar como supositorios con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao.

Las formulaciones adecuadas para administración nasal, en las que el vehículo es un sólido, incluyen un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo comprendido en el intervalo de 20 a 500 micras que se administra de la manera en la que se administra una inhalación, es decir, por inhalación rápida a través del paso nasal de un recipiente del polvo mantenido cerca de la nariz. Las formulaciones adecuadas, en las que el vehículo es un líquido, para la administración, por ejemplo mediante un atomizador nasal, aerosol o en forma de gotas nasales, incluyen las soluciones acuosas o aceitosas del ingrediente activo.

Las formulaciones adecuadas para la administración vaginal se pueden presentar en forma de óvulos vaginales, supositorios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones para atomización que contienen además del ingrediente activo vehículos tales como los que se conocen en la técnica que son apropiados.

Las formulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen las soluciones inyectables esterilizadas acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, estabilizantes, tampones, bacteriostáticos y solutos que hacen la formulación isotónica con la sangre del receptor deseado; y suspensiones esterilizadas acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones se pueden presentar en recipientes de una sola dosis o de dosis múltiples, por ejemplo, ampollas selladas y viales, y se pueden almacenar en condiciones de secado por congelación (liofilizadas) que requieren únicamente la adición del vehículo líquido esterilizado, por ejemplo, agua para inyectables, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones inyectables improvisadas se pueden preparar a partir de polvos, gránulos y comprimidos esterilizados del tipo descrito anteriormente.

Un aspecto de la invención proporciona herramientas analíticas para la aclaración de la activación e inhibición de la actividad del receptor \beta-adrenérgico. La invención proporciona nuevas herramientas para evaluar el papel desempeñado por los polianiones y su interacción con los broncodilatadores en la modulación de la actividad de \betaARK. Más específicamente, la invención indica las composiciones y procedimientos útiles para evaluar la capacidad de los mucopolisacáridos, tal como la heparina, para inhibir la fosforilación del receptor \beta-adrenérgico por \betaARK. Dichas herramientas se pueden utilizar como "sondas" de la función fisiológica de \betaARK y de la interacción con la desensibilización específica del agonista del sistema de adenilciclasa acoplada al receptor.

Ejemplo 1 Tratamiento de pacientes asmáticos

Para ilustrar la capacidad de las composiciones y procedimientos de la invención para prevenir la tolerancia, se inscribieron pacientes asmáticos con antecedentes de asma estable en el/los siguiente(s) experimento(s). Todos los individuos eran no fumadores y no tenían antecedentes recientes de infección en las vías respiratorias superiores. Ninguno de los pacientes tomaba de forma regular medicación para el asma (corticoesteroides, cromolina) excepto un \beta_{2}-agonista de corta actuación a medida que se necesitaba. Los pacientes que toman salmeterol (p. ej., la formulación suministrada bajo la marca Serevent® de Glaxo Wellcome Inc.) se les pidió por lo menos dos semanas antes de la inscripción en el estudio que interrumpieran la utilización de salmeterol y cambiasen a albuterol (p. ej., formulaciones suministradas bajo la marca Proventil®de Schering Corporation, o bajo la marca Ventolin® de Glaxo Wellcome Inc.). Para obtener una curva de dosis-respuesta de metacolina, se realizaron mediciones del volumen expiratorio forzado en un segundo (FEV_{1}) antes y después de la administración de metacolina. Con este objeto, se prepararon soluciones de metacolina a diario disolviendo metacolina en solución salina isotónica tamponada con fosfato y se administraron con nebulizador (De Vilbiss nº 644, Somerset, PA); el diámetro aerodinámico medio de la masa de las gotitas era 3,9 \mum (SD geométrico, 2,4). Para la provocación bronquial, se conectó el nebulizador a un dosímetro, que consta de una válvula solenoide activada por la respiración y una fuente de aire comprimido (20 psi). Cuando se activó por el esfuerzo inspiratorio del paciente, la válvula solenoide se situó para permanecer abierta durante 0,6 segundos durante la inhalación para dejar que el aire comprimido fluyera a través del nebulizador, dispersando un promedio de 0,023 ml de solución en cada respiración. El material aerosolizado se administró desde la posición expiratoria final durante el transcurso de un esfuerzo inspiratorio submáximo. Después de la medida de la referencia de FEV, los pacientes inhalaron cinco respiraciones de diluyente salino y se repitieron las mediciones después de un intervalo de dos minutos. Se creó a continuación una curva de dosis-respuesta de metacolina: los pacientes hicieron cinco inhalaciones de cada una de las diluciones de la solución de metacolina a intervalos de cinco minutos; la concentración de la primera dilución fue 0,075 mg por mililitro y la concentración de las diluciones siguientes se aumentó sucesivamente al doble. La provocación bronquial se interrumpió cuando se consiguió un descenso del 20% en FEV_{1}. Se representó a continuación el FEV_{1} frente a la dosis acumulada de metacolina expresada en unidades respiratorias; una unidad respiratoria ("BU") se define como la inhalación de una preparación que contiene 1 mg de metacolina por mililitro. Los resultados se expresan como la dosis de provocación acumulada de metacolina que disminuye el FEV_{1} en el 20% (PD_{20}).

El estudio se realizó según un diseño cruzado al azar, por duplicado a ciegas, controlado por placebo. El estudio constaba de dos periodos de 5 días de tratamiento; cada periodo de tratamiento estuvo separado por dos semanas sin fármacos. El 1^{er} día, tras las pruebas de función pulmonar de referencia se realizó la prueba de provocación a la metacolina para determinar la PD_{20} de referencia. En el 2º al 5º día del experimento, empezando a las 08:00, se obtuvieron mediciones de referencia de FEV_{1}. Después de esto, los pacientes inhalaron 4 ml de un placebo (agua inyectable bacteriostática) o de solución de heparina (80.000 unidades). Se obtuvo el FEV_{1} 45 minutos después de la inhalación de la medicación a ciegas (heparina o placebo) y a continuación se administraron 2 atomizaciones de salmeterol (50 \mug). Cuarenta y cinco minutos después de la dosificación de salmeterol, se repitieron las mediciones de FEV_{1}, después de la metacolina para determinar la PD_{20} después del salmeterol. En los días de experimento 2º y 4º, todos los pacientes volvieron al laboratorio a la noche (20:00 horas) para recibir la medicación a ciegas (placebo o heparina) y cuarenta y cinco minutos a una hora más tarde, se administraron 2 atomizaciones de salmeterol. Se comparó la PD_{20} de referencia con la PD_{20} después del salmeterol para la demostración de la broncoprotección. Del 2º al 5º día se utilizó la PD_{20} después del salmeterol para demostrar la tolerancia a su acción broncoprotectora y su prevención por la heparina inhalada.

Como se muestra en la Figura 1, los valores de referencia de PD_{20} de metacolina eran comparables en dos periodos de tratamiento (5,8 \pm 1,7 BU frente a 4,0 \pm 1,4 BU). Durante el tratamiento con placebo la primera dosis de salmeterol produjo un aumento marcado en la PD_{20} de metacolina de 60 \pm 18 BU
(P < 0,05) que disminuyó en el 53% a 29 \pm 10 BU después de la séptima dosis (P < 0,05) indicando la pérdida de broncoprotección. En la fase de heparina inhalada, el PD_{20} de metacolina aumentó en 78 \pm 22 BU después de la primera dosis de salmeterol (P < 0,05), pero disminuyó solamente en 36% a 49 \pm 14 BU después de la séptima dosis (P = NS). Los valores de la PD_{20} de metacolina después del salmeterol fueron mayores los días con heparina frente a placebo (P < 0,05). Estos datos indican que la administración de un efector representativo de la invención (p. ej., heparina) impide el desarrollo de la tolerancia a los efectos broncoprotectores de un broncodilatador representativo de la invención (p. ej., salmeterol).

Además, se identificó un paciente insensible al tratamiento de heparina según la invención (véase Figura 2, que presentaba desarrollo de la tolerancia a los efectos broncoprotectores de un broncodilatador representativo de la invención (p. ej., salmeterol) junto con los tratamientos con heparina (identificado como \Delta-\Delta) así como con placebo (identificado como \bullet-\bullet)). Como se muestra en la Figura 2, el tratamiento de este paciente con preparaciones de heparina de bajo peso molecular (30 mg de enoxaparina, identificado como \sqbullet-\sqbullet) y (90 mg de enoxaparina, identificado como
\lozenge-\lozenge) dio como resultado la prevención de la tolerancia y un aumento notable de los efectos broncoprotectores de un broncodilatador representativo de la invención (p. ej., salmeterol).

Debe entenderse, desde luego, que lo anterior se refiere únicamente a las formas de realización preferidas de la presente invención y que se pueden realizar numerosas modificaciones en éstas sin apartarse del espíritu y del alcance de la invención indicados en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (17)

1. Utilización de cantidades terapéuticamente eficaces de un broncodilatador y de un polisacárido sulfatado, en el que el polisacárido sulfatado es una heparina de bajo peso molecular (LMWH) o una heparina de peso molecular ultrabajo (ULMWH) para la preparación de una composición farmacéutica para impedir la tolerancia a un broncodilatador en un mamífero.

2. Utilización según la reivindicación 1, en la que el broncodilatador y el polisacárido sulfatado se mezclan antes de la administración al mamífero.

3. Utilización según la reivindicación 2, en la que el broncodilatador y/o el polisacárido sulfatado se mezclan con un vehículo farmacéuticamente aceptable antes de la administración.

4. Utilización según la reivindicación 1, en la que el broncodilatador es un agonista \beta_{2}-adrenérgico.

5. Utilización según la reivindicación 4, en la que el agonista \beta_{2}-adrenérgico se selecciona de entre el grupo constituido por salmeterol, formoterol, bambuterol, albuterol, terbutalina, pirbuterol, bitolterol, metaproterenol, isoetarina e isoproterenol.

6. Utilización según la reivindicación 1, en la que se administra un broncodilatador.

7. Utilización según la reivindicación 1, en la que la ULMWH comprende por lo menos una fracción de heparina seleccionada de entre el grupo constituido por tetrasacáridos, pentasacáridos, hexasacáridos, heptasacáridos, octasacáridos, nonasacáridos, y decasacáridos.

8. Utilización según la reivindicación 1, en la que se administra más de un polisacárido sulfatado.

9. Utilización según la reivindicación 1, en la que la ULMWH no presenta sustancialmente actividad anticoagulante.

10. Utilización según la reivindicación 1, en la que la LMWH no presenta sustancialmente actividad anticoagulante.

11. Utilización según la reivindicación 1, en la que la administración es por inhalación, oral, sublingual, transdérmica, parenteral, tópica, intrarrectal, intrabronquial, intranasal o intraocular.

12. Utilización según la reivindicación 11, en la que la administración por inhalación se realiza utilizando un inhalador dosificador.

13. Utilización según la reivindicación 11, en la que la administración por inhalación se realiza utilizando un inhalador que funciona con la respiración.

14. Utilización según la reivindicación 11, en la que la administración por inhalación se realiza utilizando un inhalador de polvo seco en dosis múltiples.

15. Utilización según la reivindicación 11, en la que la administración por inhalación se realiza utilizando un nebulizador de aerosol.

16. Utilización según la reivindicación 11, en la que la administración parenteral es intravenosa o intramuscular.

17. Utilización según la reivindicación 1, en la que el broncodilatador y el polisacárido sulfatado están en forma de polvo.