MXPA98001165A - Metodo y composicion para el tratamiento del asma - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere:Un método para tratar a un paciente que sufre de asma inducida por un antígeno, quien se ha excitado con este antígeno, o suministrar un tratamiento crónico a un paciente de asma para reducir la hiper-sensibilidad de las vías respiratorias, este método comprende la administración intra-bronquial al paciente de una composición farmacéutica que contiene en cada dosis aproximadamente 0.05 a 1.0 mg de heparinas de peso molecular ultra-bajo (ULMWH), que tienen un peso molecular promedio pondreal de 3,000 daltons o menos, por kilogramo del peso corpóreo del paciente. Las composiciones farmacéuticas para la inhalación, usadas en el novedoso método de tratamiento, también son provistas.

Description

MÉTODO Y COMPOSICIÓN PARA EL TRATAMIENTO DEL ASMA Esta solicitud incorpora el material incluido en el Documento de Divulgación No. 377066, presentado en la Oficina de Patentes y Marcas el 23 de junio de 1995. La invención se refiere a métodos y composiciones para impedir y eliminar los síntomas y manifestaciones del asma. El asma crónico se puede considerar como una enfermedad predominantemente inflamatoria con broncoespasmos asociados. El grado de reactividad y estrechamiento de los bronquios en respuesta a estímulos es mayor en individuos asmáticos que en individuos normales. La inflamación persistente es responsable de la hiperreactividad bronquial o la hipersensibilidad de las vías respiratorias. El edema mucosal y obstrucción por moco y la hipersecreción pueden estar presentes; es normal la parénquima pulmonar. El estrechamiento de las vías respiratorias puede invertirse espontáneamente o por medio de la terapia. Las respuestas inmunes de Tipo I (inmediatas) pueden jugar un papel importante en el desarrollo del asma en niños y muchos adultos; sin embargo, cuando ocurre el inicio de la enfermedad en la edad adulta, los factores alérgicos pueden ser difíciles de identificar. La exposición al aire seco y frío, el ejercicio y otros factores agravantes pueden también provocar el asma.

Los síntomas más comunes del asma son la falta de aliento y estrechamiento del pecho; el jadeo, la disnea y la tos pueden también ser prominentes. La función pulmonar reducida típica de la enfermedad de las vías respiratorias obstructiva más bien que restrictiva se observa usualmente. Períodos asintomáticos a menudo alternan con paroxismos. De los provocadores conocidos del asma, los alérgenos y el ejercicio han recibido la mayor atención. Ambos son estímulos potentes que ocurren naturalmente, el ejercicio es un factor potencial en la vida diaria de cada asmático, en tanto los alérgenos sólo afectan a algunas personas con asma. No obstante, se conoce más acerca de los efectos del antígeno. Las metas generales de la terapia de drogas para el asma son la prevención de broncoespasmos y el control por períodos prolongados de la hiperreactividad bronquial. Debido a que usualmente no es posible que cualquier paciente o médico pronostiquen cuando puede ocurrir un broncoespasmo, los pacientes con casi la mayoría de ataques episódicos y/o todos los ataques en la estación climática, pueden requerir la terapia continua. Los agonistas beta son útiles como agentes broncodilatadores; ellos estimulan los receptores beta2-adrenérgicos, aumentan la cAMP intracelular y pueden inhibir la liberación de los mediadores de las células mastoides. Otras drogas útiles incluyen la teofilina y la xantina relacionada, que producen broncodilatación a través de mecanismos desconocidos; la biscro ona, cromolinn, que impiden la liberación de substancias mediadoras y bloquea los reflejos neuronales respiratorios, y los corticosteroides, que disminuyen primariamente la inflamación y edema. Las drogas anticolinérgicas pueden aliviar el broncoespasmo bloqueando los impulsos colinérgicos parasimpáticos en el nivel del receptor. Las antihistaminas impiden ocasionalmente o anulan los episodios asmáticos alérgicos, particularmente en niños, pero ellos no sólo serán parcialmente eficaces en el asma, debido a que la histamina es solamente uno de los muchos mediadores. Las modalidades de las drogas actuales usadas para el tratamiento del asma inducida por la alergia, poseen un número de inconvenientes. En general, los agentes convencionales tienen una duración relativamente corta de acción y pueden ser, parcial o totalmente, inefectivos cuando se administran después que ocurre la excitación del antígeno. Asimismo, debido a los serios efectos adversos asociados con el uso de agentes, tal como los agonistas beta2~adrenérgicos y los corticosteroides, el margen terapéutico de seguridad con tales agentes es relativamente estrecho y los pacientes que los usan deben ser vigilados cuidadosamente. La hiperreactividad bronquial (o hipersensibilidad de las vías respiratorias) es un sello distintivo del asma y se relaciona estrechamente a la inflamación fundamental de las vías respiratorias. Lo peor del asma y la inflamación de las vías respiratorias se asocia con el aumento en le hiperreactividad bronquial, que se puede inducir por estímulos tanto antigénicos como no antigénicos. Los agonistas beta2-adrenérgicos son agentes potentes para el tratamiento de broncoespasmos, pero no tienen efecto en la inflamación de las vías respiratorias o la hiperreactividad bronquial. De hecho, el uso crónico de los agentes beta2 -adrenérgicos solos, causando la regulación disminuida de los beta2-receptores, puede empeorar la hiperreactividad bronquial. En el presente, los corticosteroides son los únicos agentes efectivos disponibles, los cuales disminuyen la hiperreactividad bronquial. Aunque los corticosteroides inhalados son relativamente seguros en pacientes adultos con asma, estos agentes tienen una tremenda toxicidad en niños, que incluyen la supresión adrenal y la reducida densidad y crecimiento de los huesos. Así, continúa la investigación para agentes seguros y eficaces, que disminuyan la hiperreactividad bronquial.

Se ha descubierto en varios años pasados que la heparina, administrada intrabronquialmente, puede ser un inhibidor efectivo de los broncoespasmos y la bronco-constricción y, consecuentemente, es de valor en la profilaxis del asma (véase, por ejemplo, Ahmed et al., New Eng. J. Med., 329:90-95, 1993; Ahmed, Resp. Drucr Deliv IV: 55-63, 1994). Se ha descubierto además que las heparinas de bajo peso molecular, por ejemplo heparinas con un peso molecular promedio de 4,000 a 5,000 daltons, impiden eficazmente la broncoconstricción inducida por antígeno; estas heparinas de bajo peso molecular también exhiben una actividad anticoagulante considerablemente menor que la heparina comercial, una propiedad conveniente cuando se usan estos agentes en el tratamiento del asma (véase Ashkin y colaboradores, Am. Rev. Resp. Dis. , 1993 Intl Conf. Abstracts, p. A660. Mientras varias heparinas se han encontrado útiles como agentes profilácticos cuando se administran antes de la excitación con el antígeno, sin embargo, ellas se han descrito en la técnica anterior como no efectivas, cuando se administran después de la excitación con el antígeno, en modificar la respuesta broncoconstrictora y la hipersensibilidad de las vías respiratorias (Ahmed y colaboradores, J. Appl. Physiol., 76:893-901. 1994).

Es un objeto de la presente invención suministrar un método y composiciones para el tratamiento del asma inducida por antígeno y la hiperreactividad bronquial, los cuales no posean los inconvenientes de la técnica anterior. Es un objeto más de la presente invención suministrar un método y composiciones para el tratamiento del asma, los cuales sean efectivos en prevenir y eliminar las manifestaciones de un episodio asmático. Aún otro objeto de la presente invención es suministrar un método y composiciones, como se describieron antes, que sean altamente efectivas en disminuir la hiperreactividad bronquial específica y no específica, y aún cuando se administren después de la excitación del antígeno al paciente. Al cumplir con estos objetos y otros, que llegarán a ser evidentes más adelante, la invención reside en un método de tratar a un paciente que sufre de asma inducido por antígeno, a través de la administración intrabronquial al paciente de una composición farmacéutica que comprende aproximadamente de 0.05 a 1.0 mg de heparinas de peso molecular ultra-bajo por kilogramo del cuerpo corpóreo del paciente en cada dosis. La administración de estas heparinas puede ser en una base aguda en seguida de la excitación del antígeno o en una base crónica para suprimir la hiperreactividad bronquial. Las heparinas de peso molecular ultra-bajo, usadas en la presente invención, tienen pesos moleculares promedio menores de 3,000 daltons y pueden exhibir un nivel bajo de actividad anticoagulante o substancialmente ninguna actividad anticoagulante del todo. También se suministran novedosas composiciones inhalantes en la forma de un nebulizador líquido o en polvo o composiciones de aerosol que contienen concentraciones adecuadas de heparinas de peso molecular ultra-bajo. La Figura 1 es una gráfica de barras que ilustra el efecto del tratamiento previo con heparina (CY222) , de peso molecular ultra-bajo, inhalada, en varios niveles de dosis en la broncoconstricción aguda inducida con antígeno en una oveja alérgica. Los datos se muestran como el promedio inducido con antígeno ± cambio en SE% en la SRjj, sin y después del tratamiento previo con la CY222. SRL = resistencia específica del pulmón + = diferente significantemente del control del antígeno (P < .05). La Figura 2 es una gráfica de barras que ilustra el efecto del tratamiento previo con la heparina (CY216) , de peso molecular bajo, inhalada, en la broncoconstricción aguda inducida con antígeno en una oveja alérgica. Los datos se muestran como el promedio inducido con antígeno ± cambio en SE% en la SRL, sin y después del tratamiento previo con CY216. La Figura 3 es una gráfica de barras que ilustra el efecto del tratamiento previo con la heparina (Fragmin) , de peso molecular medio, inhalada en la broncoconstricción inducida con antígeno en una oveja alérgica. Los datos se muestran como el promedio inducido con antígeno ± cambio del SE% en la SRL, sin y después del tratamiento con Fragmin. La Figura 4 es una gráfica de barras que ilustra el efecto del tratamiento previo con la heparina (CY222) , de peso molecular ultra-bajo, inhalada en la hipersensibilidad de las vías respiratorias inducida con antígeno, en una oveja alérgica. Los datos se muestran como el promedio después del antígeno ± SE% de PD4, como un porcentaje de la línea base, sin y después del tratamiento previo con la CY222. PD4 = dosis de provocación acumulada del carbacol, que aumenta la SRL a 400% arriba de la línea básica + = diferente significantemente del antígeno solo (P < .05) . La Figura 5 es una gráfica de barras que ilustra el efecto del tratamiento previo con la heparina, (CY216) de peso molecular bajo, inhalada, en la hipersensibilidad de las vías respiratorias inducida con antígeno en una oveja alérgica. Los datos se muestran como el promedio después del antígeno ± SE de PD4, como el porcentaje de la línea base, sin y después del tratamiento previo con la CY216. La Figura 6 es una gráfica de barras que ilustra el efecto del tratamiento previo con la heparina (Fragmin) , de peso molecular medio, inhalada, en la hipersensibilidad de las vías respiratorias inducida por antígeno en una oveja alérgica. Los datos se muestran como el promedio después del antígeno ± SE de PD4, como el porcentaje de la línea base, sin y después del tratamiento previo con Fragmin. La Figura 7 es una gráfica que ilustra los efectos protectores comparativos de las CY222, CY216 y Fragmin inhaladas, en la respuesta broncoconstrictora aguda (ABR) , inducida con antígeno, en una oveja alérgica. Los datos se muestran como el promedio después del antígeno ±SE% de protección de la ABR inducida con antígeno. Las barras horizontales gruesas representan la ID50 += diferente significantemente del Fragmin (P <.05) *= diferente significantemente de la CY216 (P <.05) La Figura 8 es una gráfica que ilustra los efectosprotectores comparativos de la CY222, CY216 y Fragmin inhaladas, en la hipersensibilidad de las vías respiratorias (AHR) inducida con antígeno, en una oveja alérgica. Los datos se muestran como el promedio después del antigeno ± SE% de protección de los cambios inducidos con antígeno en la PD4. La Figura 9 es una gráfica de barras que ilustra el efecto de la CY222 en la hipersensibilidad de las vías respiratorias inducida con antígeno, con la CY222 siendo administrada como un aerosol, inmediatamente después de la excitación con el antígeno. + = diferente significantemente de la línea básica (P < .05) La Figura 10 es una gráfica de barras que ilustra el efecto de la heparina comercial en la hipersensibilidad de las vías respiratorias inducidas con antígeno, con la heparina comercial siendo administrada como un aerosol inmediatamente después de la excitación con el antígeno. La Figura 11 es una gráfica de barras que ilustra el efesto del Fragmin en la hipersensibilidad de las vías respiratorias inducida con antígeno con el Fragmin siendo administrado como un aerosol inmediatamente después de la excitación con el antígeno. La heparina, un ucopolisacárido sulfonado, se sintetizó en células mastoides como un proteoglicano y es abundante particularmente en los pulmones de varios animales. La heparina no es un compuesto específico de un peso molecular fijo, sino es realmente una mezcla heterogénea de cadenas de polisacáridos sulfonadas, compuestas de unidades repetidas de la D-glucosamina y cualquiera de los ácidos L-idurónico o D-glucurónico. El peso molecular promedio de la heparina aislada de los tejidos de animales varía de aproximadamente 6,000 a 30,000 daltons. Farmacológicamente, la heparina es primariamente conocida como un anticoagulante. Esta actividad resulta de la habilidad de la heparina a unirse a algunos residuos de la antitrombina III (AT-III) , que acelera la neutralización por la AT-III de los factores de coagulación activados e impide la conversión de la protro bina a la trombina. Cantidades mayores de la heparina pueden inactivar la trombina y los factores tempranos de coagulación, impidiendo la conversión del fibrinógeno a la fibrina. La actividad anticoagulante de la heparina se relaciona con el peso molecular de sus fragmentos de polisacáridos; los componentes del peso molecular bajo o fragmentos (por ejemplo, fragmentos que tienen un peso molecular menor de 6,000 daltons) han moderado a los efectos bajos de la antitrombina y hemorrágicos. Similarmente, las heparinas de peso molecular bajo, aisladas del tejido animal, han reducido las propiedades anticoagulantes, debido a que ellas consisten primariamente de fragmentos o fracciones de peso molecular menores.

La heparina comercial, la cual se deriva generalmente del pulmón de la res o la mucosa intestinal del cerdo, tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 15,000 a 17,500 daltons. La heparina se ha mostrado actúa como un bloqueador específico de los receptores IP3 , e inhibe los IP3 mediados por la liberación del calcio. Hemos sugerido previamente que la heparina puede bloquear los receptores IP3 en células mastoides y, por lo tanto, interfieren con la transducción de señal y pueden modular la desgranulación de las células mastoides y la liberación del mediador. Los estudios in vivo e in vitro apoyan este concepto y han demostrado que la heparina inhalada puede atenuar la broncoconstricción alérgica en ovejas, impiden el asma inducido por el ejerci-ció, al igual que inhiben la liberación de la histamina de células mastoides inducidas por la IgE. La heparina inhalada en dosis hasta de 1,000 unidades/kg, se ha encontrado no tiene efecto en el tiempo parcial de la tromboplastina (PTT) , sugiriendo así un efecto "no anticoagulante". Se ha informado que las heparinas de peso molecular bajo (peso molecular promedio de aproximadamente 4,500 daltons) , que tiene una actividad APTT reducida, es efectiva en estudios de animales en impedir la repuesta bronco-constrictora aguda (ABR) , inducida con antígeo, y la hiperreactividad bronquial, también denominada como hipersensibilidad broncoconstrictora (AHR) . Sin embargo, como se discute e ilustra más detalladamente abajo, ni la heparina comercial ni las heparinas de peso molecular medio o bajo, aún aquéllas con actividad anticoagulante muy baja, son efectivas en mejorar la AHR subsecuente a la excitación del antígeno en los sujetos de prueba. Estas heparinas aparentemente suministran sólo un efecto preventivo, profiláctico, pero no de valor en tratar un episodio asmático provocado por el antígeno. Se ha descubierto ahora, sorprendentemente, que las fracciones de la heparina de peso molecular ultra-bajo (ULMWH) no son solamente inhibidores efectivos de la anafilaxis de las vías respiratorias, sino también son altamente efectivas en reducir la SHR, aún cuando se administren después de la excitación del antígeno. El uso regular crónico de la ULMWH debe también reducir la AHR y, por lo tanto, la ULMWH puede ser usada para la terapia crónica del asma, cuando es causada por factores específicos (es decir antigénicos) o no específicos. Por consiguiente, la presente invención constituye un método para tratar a un paciente que sufre de asma inducida con antígeno, quién ha sido excitado con un antígeno que provoca el asma, el cual comprende la administración intrabronquial al paciente de una composición farmacéutica que contiene aproximadamente de 0.05 a 1.0 mg de una o más fracciones de la ULMWH por kilogramo de peso corpóreo del paciente, en cada dosis de la composición, y preferiblemente de alrededor de 0.075 a 0.75 mg/kg por dosis. Para fines de esta solicitud, la ULMWH puede ser definida como fracciones de heparina que tienen un peso molecular promedio de 3,000 daltons o menos. La ULMWH que tiene un peso molecular promedio de 2,500 daltons o menos puede ser aún más efectiva cuando se usa en el método de la invención. Cada fracción de la ULMWH puede comprender disacáridos, trisacáridos, tetrasacáridos y/o pentaacáridos, al igual que moléculas de longitud de cadena mayor. De acuerdo con la invención, un paciente que sufre de asma inducida con antígeno, quien ha inhalado, ingerido o se puso en contacto de otra manera con un antígeno (es decir, ha sido "excitado" con un antígeno) de un tipo conocido provoca episodios asmáticos en ese paciente, cuando o no el paciente ya exhibió síntomas de la ABR y/o la AHR, se administró prontamente por medio de la inhalación con una dosis de una composición farmacéutica que contiene una o más fracciones de la ULMWH, presente acumulativamente en los intervalos de concentración antes descritos. Dosis adicionales pueden ser en seguida administradas, según sea necesario, hasta que el paciente regresa o mantiene los niveles de resistencia normales del flujo del aire. La invención también comprende la administración crónica de la ULMWH a pacientes con asma, para reducir y suprimir la AHR. "Administración crónica", según se usa aquí, se refiere a la administración de las composiciones que contienen la ULMWH, al menos una vez al día, durante cuando menos diez días consecutivos. La administración crónica de una composición que contiene aproximadamente 0.05 a 1.0 mg/kg por dosis y preferiblemente alrededor de 0.075 a 0.75 mg/kg por dosis, puede continuarse indefinidamente para suministrar una terapia que suprime la AHR, cuando menos comparable con los corticosteroides, pero substancialmente sin efectos secundarios. A pesar de la actividad conocida de las heparinas N-desulfatadas en otros sistemas biológicos, por ejemplo como inhibidoras del crecimiento de las células, se ha encontrado que las fracciones de la ULMWH que son activas y se pueden usar en la presente invención para el tratamiento de pacientes asmáticos, son todas N-sulfatadas; las fracciones N-desulfatadas no son efectivas. Las composiciones inhalantes de la ULMWH usadas en la presente invención, pueden comprender composiciones líquidas o en polvo que contienen la ULMWH y son adecuadas para la nebulización y el uso intrabronquial, o composiciones de aerosol administradas por medio de dosis determinadas distribuidas en una unidad de aerosol. Las composiciones líquidas adecuadas comprenden la ULMWH en un solvente acuoso inhalante, aceptable farmacéuticamente, por ejemplo una solución salina isotónica o agua bacteriostática. Las soluciones se administran por medio de una bomba o un distribuidor de rocío nebulizado, accionado al apretarlo, o por cualquier otro medio convencional, para causar o habilitar que la cantidad de dosis requerida de la composición líquida sea inhalada en los pulmones del paciente. Composiciones en polvo adecuadas incluyen, en forma de ilustración, las preparaciones en polvo de la heparina intermezclada completamente con lactosa u otros polvos inertes aceptables para la administración intrabronquial. Las composiciones en polvo pueden ser administradas por medio de un distribuidor de aerosol o encerradas en una cápsula que se puede romper, la cual puede ser insertada por el paciente en un dispositivo que perfora la cápsula y sopla el polvo en una corriente estable adecuada para la inhalación. Las formulaciones de aerosol para su uso en el presente método típicamente incluirán propulsores de alcanos fluorados, agentes tensoactivos y co-solventes, y se pueden llenar en recipientes de aluminio u otros recipientes convencionales de aerosol, los cuales son luego cerrados por una válvula dosificadora adecuada y presurizados con el propulsor. La concentración total de las fracciones de la ULMWH en cualquier vehículo adecuado para su uso de acuerdo con la presente invención, debe ser suficientemente alta para suministrar la dosis requerida de aproximadamente 0.05 a 1.0 mg de la ULMWH/kg. Así, por ejemplo, si un nebulizador administra 4 ml de solución por dosis, la concentración de la ULMWH en la solución, en el caso de un paciente que pesa 75 kg, debe ser de aproximadamente 1.0 a 20.0 mg/ml. Como apreciarán los expertos en la técnica farmacéutica, muchos métodos y aparatos convencionales están disponibles para administrar dosis dosificadas con precisión de los medicamentos intrabronquiales y para regular la cantidad de dosis deseada, de acuerdo con el peso del paciente y la severidad de la condición del paciente. Asimismo, hay muchos vehículos, reconocidos en la técnica, líquidos, en polvo y aerosol, adecuados para las composiciones intrabronquiales de la ULMWH de la presente invención. La invención no se limita a cualquier vehículo inerte, solvente, portador o excipiente particular y no se restringe a cualquier método o aparato particular o administración intrabronquial . Las composiciones de la ULMWH aquí descritas suministran un tratamiento altamente efectivo para el asma inducida por antígeno, aún después que ha ocurrido la excitación con el antigeno. Para demostrar la superioridad, inesperada, de las fracciones de la ULMWH, en comparación con las heparinas de peso molecular mayor en tratar el asma inducida por antigeno, después de la excitación del antígeno, se condujeron experimentos que comparan los efectos de diferentes tipos de heparinas en ovejas alérgicas, tanto antes como después de la excitación del antígeno. Descripciones detalladas de estos experimentos y los resultados obtenidos se señalan en los siguientes ejemplos, al igual que en las figuras mostradas en los dibujos. Los siguientes ejemplos, mientras ilustran el método de la invención y que demuestran la eficacia del mismo, no intentan indicar materiales, procedimientos o regímenes de dosis específicos, que deben ser utilizados exclusivamente con el fin de practicar la invención.

EJEMPLO I Administración de la Heparina Antes de la Excitación del Antíqeno Métodos Resistencia al Flujo de Aire Pulmonar Diez y seis ovejas alérgicas, con respuesta broncoconstrictora aguda solamente, documentada previamente, al antígeno Asear is suum, ee usaron para todos loe estudios. Las ovejas se intubaron con un tubo nasotraqueal de tipo puño y se midió la resistencia (Rj) al flujo de aire pulmonar por la técnica de catéter de balón esofageal, mientras el volumen de gas torácico ^e midió por la pletismografía del cuerpo. Los datos se expresan como la específica (SRL definida como RL por el volumen del gas torácico (V^g) . Sensibilidad de las Vías Respiratorias Para evaluar la sensibilidad de las vías respiratorias, se realizaron curvas acumulativas de dosis-respuesta al cabacol inhalado, midiendo la SRL antes y después de la inhalación de la solución salina regulada y después de cada administración de 10 respiraciones con concentraciones aumentadas del carbacol (0.25, 0.5, 1.0, 2.0 y 4.0% peso/volumen de solución) . La sensibilidad de las vías respiratorias se midió determinando la dosis de provocación acumulativa (PD4) de carbacol (en unidades de respiración) que aumentó la SR a 400% arriba de la línea básica. Una unidad de respiración se define como una respiración de una solución de carbacol al 1%. Fracciones de Heparina: En el experimento que compara la efectividad de varios materiales de heparina administrados a la oveja alérgica antes de la excitación del antígeno, una ULMWH (CY222, Sanofi, París, Francia), una heparina de peso molecular bajo (CY216, Sanofi) y una heparina de peso molecular medio (Fragmin, Kabivitrum Estocolmo, Suecia) se usaron. El peso molecular y las otras características de estas fracciones de heparina se señalan en la Tabla I. TABLA 1 PESO MOLECULAR Y CARACTERÍSTICAS DE LAS FRACCIONES DE HEPARINA CY222 CY216 FRAGMIN (ULMWH, (LMWH) (MMWH) Peso Molecular 2355 d 4270 d 6400 d Actividad Anti-Xa 70 U.I./mg 112 U.I./mg 158 U.I./mg Actividad Anti-IIa 12 U:I/mg 29 U:I:/mg APTT 28 U.I./mg 45 U.I./mg 58 U.I./mg Relación Anti-Xa/APTT 2.5 2.5 2.72 % de Contenido de GAG 70% 60% 65% % de cadenas ULMW 88% 27% 11% (peso mol. < 2500 d) Como se indica en la tabla, la ULMWH utilizada en este experimento no sólo tiene un peso molecular bien debajo de 3,000, sino además alrededor del 88% de las cadenas de heparina incluidas en esta fracción tienen pesos moleculares debajo de 2,500.

Protocolo Experimental Estudios de las Vias Respiratorias Se determinó cada sensibilidad de las vías respiratorias (PD4) de la línea básica del animal, y luego en diferentes días experimentales las ovejas se sometieron a la excitación de las vías respiratorias con el antígeno Ascaris suum . L SR se midió, antes e inmediatamente después de la excitación y luego cada hora hasta 2 horas en que la SRL regresó a la línea base. Después de la excitación, se midió la PD4. El protocolo se repitió al menos 14 días más adelante, después del tratamiento previo con la CY222, CY216 y Fragmin aerolizados, a dosis de 0.31, 0.62, 1.25, 2.5 y 5.0 mg/kg. Análisis de Datos: Los datos se expresan como (a) promedio ± SE% de cambio de SRL; (b) PD como % de la línea base; (c) % de protección de la respuesta aguda del broncoconstrictor (ABR) y (d) % de protección de la hipersensibilidad de las vías respiratorias (AHR) .

SR|_ después de excitación - SR?_ de línea base x 100 (a) SR|_ (% de cambio) = SR|_ línea base PD4 después de excitación x 100 (b) PD4 (% de línea base) = PD4 de línea base Control ?SRL% - LMWHF ?SRL% x 100 (c) ABR % de protección = Control ?SRL% LMWHF PD4 - ANTÍGENO DE CONTROL PD4 X 100 (D) AHR % de protección = PD4 línea base - PD4 antígeno de control Los efectos comparativos del tratamiento previo con los materiales de prueba en las ABR y AHR se señalan en las Tablas 2-6 y se ilustran gráficamente en las Figuras 1 a 8. Los datos muestran que el tratamiento previo con la CY222, CY216 y Fragmin aerolizados, atenuados con la respuesta broncoconstrictora aguda, inducida por antígeno en una manera dependiente de la dosis; las dosis para los efectos mínimos fueron de 0.62 mg/kg, 1.25 mg/kg y 2.5 mg/kg, respectivamente. El tratamiento previo con CY222, CY216 y Fragmin aerolizados, atenuaron la AHR inducida con el antígeno en una manera dependiente de la dosis, las dosis efectivas mínimas fueron de 0.62 mg/kg, 1.25 mg/kg y 5.0 mg/kg, respectivamente. El análisis de la comparación entre drogas reveló que los efectos protectores estaban relacionados inversamente al peso molecular de las fracciones de la heparina. La fracción d ULMW, CY222, fue el agente más potente, como se muestra por la inhibición significante de la broncoconstricción inducida por el antígeno y la AHR a una dosis de 0.6 mg/kg, mientras CY216 y Fragmin no fueron efectivos en esta dosis. Los valores promedio del grupo de la DI50 de CY222, CY216 y Fragmin contra la broncoconstricción alérgica fueron de 0.5, 1.3 y 1.8 mg/kg, respestivamente. Los valores promedio de grupo de la DI50 de CY222, CY216 y Fragmin contra la AHR fueron de 0.51, 2.5 y 4.7 mg/kg.

TABLA 2 EFECTO DEL TRATAMIENTO PREVIO CON LA CY222 EN LA BRONCOCONSTRICCIÓN INDUCIDA POR ANTÍGENO CONTROL DEL ANTÍGENO CY222 Dosis Línea Post- Línea Post- Post- (mq/kg) Base Excitación Base CY222 Excitación 0.31 1.15 3.27* 1.17 1.08 2.66* (n=7) (0.04) (0.33) (0.05) (0.06) (0.35) 0.62 1.15 3.27* 1.15 1.21 1.65+ (n=7) (0.04) (0.33) (0.05) (0.06) (0.06) 1.25 1.16 3.43* 1.08 1.17 1.71+ (n=6) (0.04) (0.32) (0.06) (0.05) (0.19) 2.5 1.13 3.31* 1.04 1.06 1.33+ (n=6) (0.04) (0.39) (0.05) (0.10) (0.09) .0 1.13 3.31* 1.16 1.12 1.56+ (n=6) (0.04 (0.39) (0.05) (0.02) (0.12) Los datos se muestran somo promedio ± SE SRL (resistensia espesífisa del pulmón) , sin y después del tratamiento previo con dosis cresientes de la CY222 inhalada * Diferentemente significante de la línea base (P < 0.05) + Diferentemente significante del control del antígeno (P < 0.05) TABLA 3 EFECTO DEL TRATAMIENTO PREVIO CON LA CY216 EN LA BRONCOCONSTRICCIÓN INDUCIDA POR ANTÍGENO CONTROL DEL ANTÍGENO CY216 Dosis Línea Post- Línea Post- Post- (mg/kg) Base Excitación Base CY216 Excitación 0.31 0.92 2.64* 1.12 1.08 3.21* (n=7) (0.04) (0.23) (0.07) (0.04) (0.09) 0.62 0.92 2.64* 1.04 1.07 2.54* (n=7) (0.04) (0.23) (0.06) (0.03) (0.31) 1.25 1.12 3.24* 1.04 1.20 2.03 + (n=8) (0.04) (0.29) (0.07) (0.13) (0.36) 2.5 1.14 3.36* 1.05 1.04 1.76+ (n=5) (0.05) (0.48) (0.07) (0.11) (0.32) .0 1.09 3.35* 1.09 1.18 1.75+ (n=6) (0.04) (0.14) (0.03) (0.08) (0.20) Los datos se muestran somo promedio ± SE SRL (resistensia espesífisa del pulmón) , sin y después del tratamiento previo son dosis sresientes de la CY216 inhalada * Diferentemente significante de la línea base (P < 0.05) + Diferentemente significante del control del antígeno (P < 0.05) TABLA 4 EFECTO DEL TRATAMIENTO CON FRAGMIN EN LA BRONCOCONSTRICCIÓN INDUCIDA POR ANTÍGENO CONTROL DEL ANTÍGENO FRAGMIN Dosis Línea Post- Línea Post- Post- (mq/kg) Base Excitación Base FRAGMIN Excitación 1.25 1.04 3.37* 1.11 1.07 2.71* (n=7) (0.06) (0.32) (0.05) (0.08) (0.42) 2.5 0.96 3.19* 1.07 1.16 1.56+ (n=6) (0.04) (0.30) (0.08) (0.12) (0.25) .0 1.00 3.39* 0.98 0.98 1.47+ (n=7) (0.01= (0.39) (0.03) (0.03) (0.21) Los datos se muestran somo promedio ± SE SRL (resistensia espesífisa del pulmón) , sin y después del tratamiento previo son dosis sresientes de la Fragmin inhalada * Diferentemente significante de la línea base (P < 0.05) + Diferentemente significante del control del antígeno (P < 0.05) TABLA 5 EFECTO DEL TRATAMIENTO PREVIO CON LA CY222. CY216 Y FRAGMIN INHALADOS. EN LA HIPERSENSIBILIDAD DE LAS VÍAS RESPIRATORIAS INDUCIDAS CON ANTÍGENO Se muestran los datos como el promedio ± SE de PD4 de carbacol en unidades de respiración, para la línea base y después del antígeno, sin (control) y después del tratamiento previo (droga) con varias fracciones de heparina. PD4 = dosis acumulativa de provocación del carbacol la cual aumentó la SR|_ al 400% arriba de la línea base. Una unidad de respiración es equivalente a una respiración de 1 mg/ml de carbacol. * Diferente significantemente de la línea base (P < 0.05) + Diferente significantemente del control del antígeno (P < 0.05) TABLA 6 COMPARACIÓN DE LOS EFECTOS PROTECTORES DE LA CY222 INHALADA (PESO MOLECULAR ULTRA- BAJO) ; LA CY 216 (PESO MOLECULAR BAJO) Y EL FRAGMIN (PESO MOLECULAR MEDIO) EN LA BRONOCONSTRICCIÓN INDUCIDA CON ANTÍGENO Y LA HIPERSENSIBILIDAD DE LAS VÍAS RESPIRATORIAS Los datos de muestran como el promedio ± SE% de protección en cada dosis, La DI50 promedio del grupo calculada (dosis de inhibición que causa el 50% de protección) también se muestra para cada grupo. / Protección significante (P<0.05) + Diferente significantemente del Fragmin (P<0.05) * Diferente significantemente de la CY216 (P<0.05) EJEMPLO II Administración de Heparinas en Seguida de la Exsitasión por Antiaeno Se siguió el mismo protocolo experimental como en el Ejemplo 1, exsepto que: (a) los tres materiales de heparina administrados a los animales de prueba fueron la CY222, una heparina somersial (peso molecular de aproximadamente 15,000 daltons) y el Fragmin y (b) las heparinas se administraron a los animales como un aerosol, inmediatamente después de la excitasión por el antígeno. Los datos se prueba se señalan en la Tabla 7 y se ilustran gráfisa ente en las Figuras 9 a 11.

TABLA 7 EFECTOS COMPARATIVOS DE LA HEPARINA COMERCIAL INHALADA (8 mg/kg) , LA FRACCIÓN DE HEPARINA DE PESO MOLECULAR MEDIO (FRAGMIN, 5 mg/kg) Y LA FRACCIÓN DE LA HEPARINA DE PESO MOLECULAR ULTRA-BAJO (CY222, 0.6 mg/kg) EN LA HIPERSENSIBILIDAD DE LAS VÍAS RESPIRATORIAS, INDUCIDA POR ANTÍGENO Línea base Post- Post- Antígeno Antíqeno (Control) (Heparina) Heparina 18.9 ±2.1 10.5 ±0.2* 8.9 ±2.2* Fragmin 22.7 ±3.2 13.3 ±2.0* 9.5 ±2.6* CY222 20.4 ±1.7 11.7 ±2.1* 25.1 ±1.1* Los datos se muestran somo el promedio ± SE PD400 de sarbasol en unidades de respirasión (una unidad de respirasión es equivalente a una respirasión de 1 mg/ml de sarbasol) . Todos los agentes se nebulizaron inmediatamente "después" de la exsitasión son el antígeno. * Diferente significantemente de la línea base (p < 0.05) + Diferente significantemente del control del antígeno (p < 0.05). Sólo la CY222 ofreció una protección significante.

Como se indisa por la Tabla 7 y las Figuras 9-11, la CY222 inhalada, administrada después de la exsitasión por el antígeno, modifisó substansialmente la AHR después del antígeno. Este efesto no se observó son la heparina somersial o el Fragmin, en que no hubo mejora en la AHR de la adminis-trasión después de la exsitasión de estas heparinas. Se han suministrado así métodos y somposisiones que logran los varios objetos de la invensión y que se adaptan bien para sumplir las sondisiones de uso prástiso. Como son posibles varias modalidades de la invensión anterior y somo varios sambios pueden haserse en estas modalidaades, antes señaladas, se somprenderá que toda la materia, aquí dessrita, será interpretada somo ilustrativa y no en un sentido limitativo. Lo que se reslama somo novedoso y se desea proteger por una patente se expone en las siguientes reivindisasiones.

Claims (34)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para tratar un pasiente que sufre de asma inducida por antígeno, el cual se ha excitado son un antígeno que induse el asma, este método somprende la administrasión intrabronquial al pasiente de una somposisión farmaséutisa que sontiene aproximadamente 0.05 a 1.0 mg de heparinas de peso molesular ultra-bajo (ULMWH) por kilogramo de peso sorpóreo del pasiente en sada dosis, estas ULMWH tienen un peso molesular promedio de 3,000 daltons o menos.
2. 2. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 1, en que las ULMWH tienen un peso molesular promedio de 2,500 daltons o menos.
3. 3. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 1, en que la somposisión sontiene aproximadamente 0.075 a 0.75 mg de las ULMWH por kilogramo por dosis.
4. 4. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 1, en que la somposisión contiene aproximadamente 1.0 a 20.0 mg de las ULMWH por ml de la somposisión.
5. 5. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 1, en que las ULMWH substansialmente no tienen actividad anticoagulante.
6. 6. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 1, en que las ULMWH somprenden disasáridos, trisasáridos, tetrasasáridos o pentasasáridos.
7. 7. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 1, en que la somposisión somprende una solusión de las ULMWH en un vehísulo inhalante asuoso, aseptable farmaséutisamente.
8. 8. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 7, en que el vehísulo es una solusión salina isotónisa o agua basteriostátisa.
9. 9. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 7, en que la somposisión se administra por medio de una bomba o un nebulizador que se astiva al apretarse.
10. 10. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 7, en que la somposisión además insluye un propulsor de aerosol y se administra por medio de un inhalador son una dosis de aerosol determinada.
11. 11. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 1, en que la somposisión somprende una preparasión en polvo de las ULMWH intermezslas son un polvo inerte, aseptable para la administrasión intrabronquial.
12. 12. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 11, en que el polvo inerte es la lastosa.
13. 13. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 11, en que la somposición se administra por medio de un distribuidor de aerosol.
14. 14. Un método, de acuerdo con la reivindisasión 11, en que la somposisión se administra desde una sápsula que se puede romper.
15. 15. Un método para tratar un pasiente que sufre de asma, por la redussión y supresión de la hipersensibilidad de las vías respiratorias, este método somprende la adminístrasión intrabronquial, en una base srónisa, a un pasiente, de una somposisión farmaséutica que contiene aproximadamente 0.05 a 1.0 mg de heparinas de peso molecular ultra-bajo (ULMWH) por kilogramo de peso corpóreo del pasiente en sada dosis, estas ULMWH tienen un peso molesular promedio de 3,000 daltons o menos.
16. 16. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 15, en que las ULMWH tienen un peso molesular promedio de 2,500 daltons o menos.
17. 17. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 15, en que la somposición contiene aproximadamente 0.075 a 0.75 mg de las ULMWH por kilogramo por dosis.
18. 18. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 15, en que la somposisión sontiene aproximadamente 1.0 a 20.0 mg de las ULMWH por ml de la somposición.
19. 19. Un método, de acuerdo con la reivindicasión 15, en que las ULMWH substansialmente no tienen astividad antisoagulante.
20. 20. Un método, de asuerdo son la reivindisasión 15, en que las ULMWH somprenden disasáridos, trisasáridos, tetrasasáridos o pentasasáridos.
21. 21. Una somposisión farmaséutisa para el tratamiento de un pasiente que sufre de asma indusido por antígeno, esta somposisión somprende aproximadamente 0.05 a 1.0 mg de las ULMWH por kilogramo de peso sorpóreo del pasiente en sada dosis, en un vehísulo inhalante aceptable farmacéutisamente, estas ULMWH tienen un peso molesular promedio de 3,000 daltons o menos.
22. 22. Una somposisión, de asuerdo son la reivindisasión 21, en que las ULMWH tienen un peso molecular promedio de 2,500 daltons o menos.
23. 23. Una composisión, de asuerdo son la reivindisasión 21, la sual somprende aproximadamente 0.075 a 0.75 mg de las ULMWH por kilogramo por dosis.
24. 24. Una somposisión, de asuerdo son la reivindisasión 21, la sual contiene aproximadamente 1.0 a 20.0 mg de las ULMWH por ml de la composisión.
25. 25. Una composisión, de asuerdo son la reivindica-ción 21, donde las ULMWH substansialmente no tienen astividad antisoagulante.
26. 26. Una somposisión, de asuerdo son la reivindisasión 21, en que sada ULMWH somprende disasáridos, tri-sacáridos, tetrasacáridos o pentasasáridos.
27. 27. Una somposisión, de asuerdo son la reivindisasión 21, la sual somprende una solusión de las ULMWH en un vehísulo inhalante asuoso, aseptable farmaséutisamente.
28. 28. Una somposisión, de asuerdo son la reivindisasión 27, en que el vehísulo es una solusión salina isotónisa o agua basteriostátisa.
29. 29. Una somposisión, de asuerdo son la reivindisasión 27, la suales adesüada para la administrasión por medio de una bomba o un nebulizador que se assiona al apretarse.
30. 30. Una somposisión, de asuerdo son la reivindisa-sión 27, que además insluye un propulsor de aerosol y es adesuado para la administrasión por medio de un inhalador de dosis determinada de aerosol.
31. 31. Una somposisión, de asuerdo son la reivindisasión 27, la sual somprende una preparasión en polvo de las ULMWH intermezsladas son un polvo inerte, aseptable para la administrasión intrabronquial.
32. 32. Una somposisión, de asuerdo son la reivindisasión 3^, en que el polvo inerte es la lastosa.
33. 33. Una somposisión, de asuerdo son la reivindisasión 31, la sual se administra por medio de un distribuidor de aerosol.
34. 34. Una composisión, de asuerdo son la reivindisasión 31, la sual se administra desde una sápsula que se puede romper.