[go: up one dir, main page]

EE201800005A - Probiootilist mikroorganismi tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 sisaldav kompositsioon kasutamiseks Clostrdium difficile põhjustatud kõhulahtisuse (CDAD) riski vähendamiseks - Google Patents

Probiootilist mikroorganismi tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 sisaldav kompositsioon kasutamiseks Clostrdium difficile põhjustatud kõhulahtisuse (CDAD) riski vähendamiseks

Info

Publication number
EE201800005A
EE201800005A EEP201800005A EEP201800005A EE201800005A EE 201800005 A EE201800005 A EE 201800005A EE P201800005 A EEP201800005 A EE P201800005A EE P201800005 A EEP201800005 A EE P201800005A EE 201800005 A EE201800005 A EE 201800005A
Authority
EE
Estonia
Prior art keywords
difficile
plantarum inducia
xylitol
clostridium difficile
inducia dsm
Prior art date
Application number
EEP201800005A
Other languages
English (en)
Inventor
Marika Mikelsaar
Epp Songisepp
Merle RÄTSEP
Pirje HÜTT
Imbi Smidt
Kai Truusalu
Epp Sepp
Raik-Hiio Mikelsaar
Kalle Kilk
Jelena Stsepetova
Siiri Kõljalg
Mirjam Vallas
Original Assignee
Biocc Oü
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biocc Oü filed Critical Biocc Oü
Priority claimed from EEP201400038A external-priority patent/EE05799B1/et
Publication of EE201800005A publication Critical patent/EE201800005A/et
Publication of EE05809B1 publication Critical patent/EE05809B1/et

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
    • A23C19/061—Addition of, or treatment with, microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
    • A23C19/061—Addition of, or treatment with, microorganisms
    • A23C19/062—Addition of, or treatment with, microorganisms using only lactic acid bacteria, e.g. pediococcus, leconostoc or bifidus sp., or propionic acid bacteria; Treatment with non-specified acidifying bacterial cultures
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/02—Making cheese curd
    • A23C19/05—Treating milk before coagulation; Separating whey from curd
    • A23C19/054—Treating milk before coagulation; Separating whey from curd using additives other than acidifying agents, NaCl, CaCl2, dairy products, proteins, fats, enzymes or microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/169—Plantarum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
    • A61K2035/115—Probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/047—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates having two or more hydroxy groups, e.g. sorbitol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/25—Lactobacillus plantarum

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Leiutis käsitleb probiootilist mikroorganismi tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379, mida saab kasutada antimikroobse agendina endogeenset ja/või eksogeenset päritolu Clostridium difficile põhjustatud kõhulahtisuse (CDAD) riski vähendamiseks C. difficile eoste germinatsiooni takistamise ja C. difficile vegetatiivsete rakkude paljunemise allasurumise teel. L. plantarum Inducia sobib kasutamiseks samaaegselt antibiootikumiraviga. Tüve L. plantarum Inducia sisaldavad C. difficile vastased kompositsioonid võivad lisaks sisaldada ka ksülitooli.

Description

TEHNIKAVALDKOND
Käesolev leiutis kuulub mikrobioloogia ja toitumise valdkonda ning käsitleb tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM21379, millel on mitmeid biotehnoloogilisi rakendusi.
TEHNIKA TASE
Probiootikum
Probiootikum on elus mikrobiaalne toidu komponent, millel on piisavates doosides manustatuna kasulikud omadused inimese tervisele (Joint FAO/WHO Working Group on Drafting Guidelines for the Evaluation of Probiotics in Food ftp://ftp.fao.org/docrep/fao/009/a0512e/a0512e00.pdfRetrieved 14.03.2014).
Probiootilise tootena mõistetakse kindlat tüve sisaldavat preparaati, mis toimib peremeesorganismi mitmetele funktsioonidele (antiinfektsioossed, morfoloogilised, immunoloogilised, metaboolsed) eesmärgiga soodsalt mõjutada tervist kas füsioloogilise aktiivsuse toetamise või haiguste riski vähendamise kaudu. On üldtunnustatud, et sama liigi piires võivad erinevatel tüvedel olla erinevad probiootilised omadused (Ouwehand, A. C., Salminen, S., Isolauri, E., Probiotics: an overview of beneficial effects. Antonie Van Leeuwenhoek. 2002: 82, 279-289; Ljungh, A., Wadström, T., Lactic acid bacteria as probiotics. Curr Issues Intest Microbiol.2006: 7, 73-89).
Levinumad probiootilised mikroobid kuuluvad perekondadesse Bifidobacteria ja Lactobacillus. Probiootilisi mikroobe manustatakse tavapäraselt fermenteeritud piimatoodetega, nagu jogurt, keefir, juust, või toidulisanditena. Käärsoole mikrofloora on tasakaalustatud ja soole limaskesta mikrofloora ei muutu kergesti. Siiski, piisavates doosides (päevane doos vähemalt 109 PMÜ) manustamine võimaldab demonstreerida probiootikumi toimet.
Probiootikumide terapeutiline eesmärk on vähendada või elimineerida potentsiaalseid patogeene ja toksiine, sünteesida toitaineid, antioksüdante, kasvufaktoreid, stimuleerida soole motoorikat ja moduleerida kaasasündinud ja adaptiivset immuunsust.
Lactobacillus plantarum on looduses laialt levinud, leidudes fermenteeritud taimsel materjalil, piima- ja lihatoodetes ja samuti inimese soolestikus (Hammes, W. P., Weiss, N. and Hertel, K. The genera Lactobacillus and Camobacterium. Prokaryotes. 2006: 4:320-403).
Liigi L. plantrum tüved on saadaval probiootilise toidulisandina (L. plantarum 299v, DSM 9843, Probi AB, Sweden) ja kuuluvad samuti eri tüvesid sisaldava toidulisandi VSL#3 koostisesse (L. plantarum 299v, DSM 9843, Probi AB, Sweden).
Tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 on kirjeldatud kui antimikroobset peptiidi plantariitsini tootva, tsütokiin IL-6 indutseeriva, putressiini tootva ja soole lümfikudet, loomuliku rakulist immuunsust ja soole limaskesta kaitsebarjääri parandava probiootikumina (Mikelsaar et al, EP2288360B1, 2009, Tervisliku Piima Biotehnoloogiate Arenduskeskus OÜ).
Soolestiku häiritud mikrobiaalökoloogia
Seedetrakti mikrofloorat võivad tugevasti tasakaalust välja viia laia toimespektriga antibiootikumide kasutamine infektsioonide raviks ja põletiku komplikatsioonid.
Clostridium difficile infektsioon
Clostridium difficile tuvastati 1970-ndatel aastatel kui antibiootikumi-seoselise kõhulahtisuse tekitaja. Eoseid moodustav, anaeroobne soolestiku patogeen Clostridium difficile on levinud haiglates ja vanadekodudes (Britton, R. A., Young, V. B., Interaction between the intestinal microbiota and host in Clostridium difficile colonization resistance. Trends Microbiol.2012: 20, 313-319). Eksogeenset päritolu C. difficile infektsiooni põhjuseks on nakatumine C. difficile eostega. Haiguse põhjustavad mitte eosed, vaid vegetatiivsete rakkude toodetud toksiinid. Endospooride moodustamine on oluline mikroobi põhjustatud haiguse levikul. Haiguse esile kutsumiseks on vajalik spooride germinatsioon ja vegetatiivsete rakkude kasv (Bums D. A, Heap J. T. Minton N. P. Clostridium difficile spore germination: an update. Res Microbiol. 2010;161(9):730-4).
C. difficile infektsiooniga patsientidest veerandil (25 protsendil) kujuneb välja pseudomembranoosne koliit (PMK). Clostridium difficile põhjustatud kõhulahtisus (CDAD, Clostridium difficile associated diarrhea) suurendab suremust, voodipäevade arvu ja suurendab oluliselt kulutusi üldistele tervishoiuteenustele. Tänaseni rõhutavad
ravijuhised vankomütsiini kasutust mõõduka ja raske pseudomembranoosse koliidi puhul (http://www.uptodate.com/contents/clostridium-difficile-in-adults-treatment, alla laaditud 14.03.2014).
Clostridium difficile infektsioon kordub umbes 20 protsendil patsientidest ja tõuseb 40 kuni 60 protsendini järgnevate retsidiivide korral (Kelly, C. P., LaMont, J. T., Clostridium difficile - more difficult than ever. N Engl J Med.2008: 359, 1932-1940). Antibiootikumravi rikub kompleksse ja tasakaalustatud mikroorganismide mitmekesisuse, mis on peamine faktor haiguse patogeneesis, Clostridium difficile kolonisatsioonis ja endogeenset päritolu haigestumisel. Korduvate C. difficile infektsioonidega CDI (Clostridium difficile infection) patsientide soolefloora mitmekesisus on oluliselt vähenenud võrreldes kontrollgrupiga (Chang, J. Y., Antonopoulos, D. A., Kalra, A., Tonelli, A., Khalife, W. T., Schmidt, T. M., Young, V. B. Decreased diversity of the fecal Microbiome in recurrent C. difficile-associated diarrhea. J Infect Dis. 2008: 197, 435-438). Mikroobide mitmekesisuse säilitamine ja taastamine võimaldaks luua uusi strateegiaid. Otsustava tähtsusega selle haiguse ennetamises ja ravis on leida võimalus antibiootikumravi käigus ja foonil teisenenud mikrofloora taastamiseks eri raviskeemide abil, sh probiootikumide manustamisega. Enamik probiootikume koloniseerivad soolestiku ajutiselt, toodavad bakteritsiidseid happeid ja peptiide ning edendavad mikroobide omavahelist võitlust, võideldes toitainete ja epiteelile kinnitumise eest. Need mõjutused tunduvad vähendavat keskkonna sobilikkust C. difficile jaoks. Eelnevad uuringud soovitavad CDI ennetamiseks kasutada probiootikumide kombinatsioone, mis sisaldavad liike L acidophilus ja L. casei, S. boulardii või L. rhamnosus. Doosid, mis on suuremad kui 109 PMÜ/päevas, on efektiivsemad kui madalamad doosid.
Probiootikumide antimikroobset aktiivsust on pakutud üheks mehhanismiks C. difficilega võitlemisel. Piimhappebakterid toodavad lühikese ahelaga rasvhappeid, mis alandavad soolestiku pH-d ja takistavad C. difficile kinnitumist (McFarland, L. V., Beneda, H. W., Clarridge, J. E., Raugi, G. J. Implications of the changing face of C. difficile disease for health care practitioners. Am J Infect Control.2007: 35, 237-253). Probiootikumide teine võimalus kaitsta soolestiku baijäärifunktsiooni võib olla C. difficile A ja B toksiinide seondumise takistamine ja seeläbi soole epiteelile pseudomembraanide tekke takistamine.
Samas ei oma kõik probiootikumid eelpoolmainitud mehhanisme.
Laktobatsillide tüvespetsiifilisus on oluline faktor, mida tuleb arvestada C. difficile infektsiooni profülaktikaks ja raviks uute potentsiaalsete probiootikumide otsimisel (Tejero-Sarinena S., Barlow J., Costabile A, Gibson G. R., Rowland I. Antipathogenic activity of probiotics against Salmonella Typhimurium and Clostridium difficile in anaerobic batch culture systems: Is it due to synergies in probiotic mixtures or the specificity of single strains? Anaerobe.2013: 24; 60-65).
Veelgi enam, mõned kliinilised uuringud pole suutnud anda statistiliselt piisavaid tõendeid tõestamaks teatud probiootikumide efektiivsust CDAD ennetamiseks. Suures randomiseeritud kliinilises katses, mis hõlmas 2941 antibiootikumravi saavat eakat, ei leidnud katse läbiviijad CDI riski vähenemist probiootikumi (Lactobacillus acidophilus ja Bifidobacterium bifidum segu) saavate eakate hulgas võrreldes kontrollgrupiga (RR 0.71; 95% CI 0.34-1.47; p =0.35) (Allen, S. J., Wareham, K., Wang, D., Bradley, C., Hutchings, H., Harris, W., Dhar, A., Brown, H., Foden, A., Gravenor, M. B., Mack, D. Lactobacilli and bifidobacteria in the prevention of antibiotic-associated diarrhoea and Clostridium difficile diarrhoea in older inpatients (PLACIDE): a randomised, doubleblind, placebo-controlled, multicentre trial. Lancet. 2013: 382, 1249-1257). Pärast aastaid kestnud kliinilistes uuringutes erinevate probiootikumide toime uurimist CDI ravis on endiselt arutluse all probiootikumi tüve, doosi ja toime kasutamine raviskeemis (Naaber, P., Mikelsaar, M., Interactions between Lactobacilli and antibiotic-associated diarrhea. Adv Appl Microbiol.2004: 54231-260).
Ksülitooli kasutamine
Ksülitool on 5-C suhkrualkohol, pentitool ja seda leidub taimedes, seentes ja algloomades. Ksülitool on oluline imetajate süsivesikute metabolismi vaheprodukt, näiteks inimveri sisaldab kuni 8x10-5 M ksülitooli.
Manustatud ksülitool ei absorbeeru täielikult ja imendumata osa saab kasutada kiudainena bakteriaalsel fermentatsioonil muutes ksülitooli lühikese ahelaga rasvhapeteks, mida kasutatakse energeetilistes radades. Ksülitool mõjutab mõnede mikrofloora liikide kasvu jämesooles, soodustades indigeense mikrofloora kasvu ja aktiivsust. Üks gramm ksülitooli sisaldab 2,4 kcal, võrreldes glükoosiga, mis sisaldab 3,87 kcal ühes grammis. Ksülitooli reklaamitakse kui "ohutut" diabeetikutele ja hüperglükeemiat põdevatele isikutele (Talbot J. M., Fisher K. P., The Need for Special
Foods and Sugar Substitutes by Individuals with Diabetes Mellitus. Diabetes Care 1978: 1; 231-240).
Varasemates uuringutes oleme leidnud, et 1 protsendi ksülitooli lisamine kasvukeskkonda takistas Clostridium difficile VPI 10463 vegetatiivsete rakkude kinnitumist CACO-2 rakkudele, tõenäoliselt blokeerides rakul olevad retseptorid. Hamstri mudelisse kohaldatuna (Naaber, P., Lehto, E., Salminen, S., Mikelsaar, M., Inhibition of adhesion of Clostridium difficile to Caco-2 cells. FEMS Immunol Med Microbiol. 1996: 14, 205-209) kaitses 1 ml 20 protsendilise ksülitooli ja Lactobacillus rhamnosus GG lahuse manustamine loomi raske enterokoliidi tekkimise vastu (Naaber, P., Lehto, E., Salminen, S., Mikelsaar, M., Inhibition of adhesion of Clostridium difficile to Caco-2 cells. FEMS Immunol Med Microbiol. 1996: 14, 205-209). Nendes katsetes, kus kasutati ksülitooli ja probiootikumi Lactobacillus rhamnosus GG kombinatsiooni, nakatati rakukultuuri ja hamstreid eelnevalt anaeroobsetes tingimustes kultiveeritud Clostridium difficile vegetatiivsete rakkudega.
Kliinilises praktikas (meditsiiniasutustes) või vanadekodudes aga areneb haigus nakatumisel aeroobsetele tingimustele ülimalt vastupidavate C. difficile eostega. Eoste germinatsioon toimub peremeesorganismis.
Mõned autorid on väitnud, et loommudelites võivad mõningad suhkrud samaselt glükoosile blokeerida C. difficile A ja B toksiinide ekspressiooni (Karlsson, S., Burman, L. G., Akerlund, T. Induction of toxins in Clostridium difficile is associated with dramatic changes of its metabolism. Microbiology.2008: 154, 3430-3436).
Seega on endiselt vajadus leida probiootilisi tüvesid, mis efektiivselt vähendavad Clostridium difficile nakatumise riski.
LEIUTISE OLEMUS
Leiutise eesmärk on pakkuda tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 sisaldav kompositsioon kasutamiseks antimikroobse agendina endogeenset ja/või eksogeenset päritolu Clostridium difficile põhjustatud kõhulahtisuse (CDAD) riski vähendamiseks Clostridium difficile eoste germinatsiooni takistamise ja Clostridium difficile vegetatiivsete rakkude paljunemise allasurumise teel. L. plantarum Inducia on kasutatav samaaegselt antibiootikumraviga.
Clostridium difficile vastased kompositsioonid võivad lisaks sisaldada ka ksülitooli.
L. plantarum Inducia sisaldavaid kompositsioone saab kasutada toiduainete, toidulisandite, farmaatsia- või veterinaartoodete tootmiseks. Toiduained võivad olla piima- või lihatooted, maiustused jne. Piimatooted võivad olla hapendatud piimatooted, juust, jogurt jne.
Toidulisandit võib kasutada pulbrina (kapslid, pastillid, tabletid, pulbrikotikesed jne) või vedelal (ampullid) kujul. Tüve võib kasutada ka külmkuivatatuna.
Tüve L. plantarum Inducia DSM 21379 efektiivne doos on vahemikus 1x109 PMÜ kuni 1x1010PMÜ, soovitavalt 5x109 PMÜ päevas.
JOONISTE LOETELU
Fig 1 keskkonna pH väärtused tüve L. plantarum Inducia sisaldavas ksülitooli lisandiga ja modifitseeritud MRS kontrollsöötmes mikroaeroobses ja anaeroobses keskkonnas. Fig 2 toksiinide A ja B geenide olemasolu tüvel C. difficile VPI 10643 määratuna pöördtranskriptsiooni (RT) ja reaalaja PCR amplifikatsiooniga (qPCR).
Fig 3 toksiin B geeni esinemine ampitsilliini ja C. difficile mõjutatud hamstri peensooles ja maksas määratuna pöördtranskriptsiooni (RT) ja reaalaja PCR amplifikatsiooni (qPCR) meetodiga.
Fig 4a jämesoole normaalne limaskest pärast probiootikumi manustamist.
Fig 4b jämesoole C. difficile infektsiooniga limaskest.
Fig 5a eksperimentaalse CDAD infektsiooni morfoloogilised muutused. Mõõdukas hüpereemia peensooles.
Fig 5b eksperimentaalse CDAD infektsiooni morfoloogilised muutused. Mõõdukas hüpereemia jämesooles ja intensiivne punetus.
Fig 5c eksperimentaalse CDAD infektsiooni morfoloogilised muutused. Mõõdukas hüpereemia kõhunäärmes.
Fig 5d eksperimentaalse CDAD infektsiooni morfoloogilised muutused. Mõõdukas hüpereemia põrnas.
Fig 5e eksperimentaalse CDAD infektsiooni morfoloogilised muutused Pseudomembraanid peensooles.
Fig 5f eksperimentaalse CDAD infektsiooni morfoloogilised muutused. PMN infiltratsioon pseudomembraanidega jämesooles.
LEIUTISE TEOSTAMISE NÄITED
Leiutist illustreerivad järgnevad näited, mis ei piira leiutise ulatust.
Tüve L. plantarum Inducia DSM 21379 kasutamine antimikroobse agendina, C. difficile spooride germinatsiooni ja vegetatiivsete rakkude proliferatsiooni takistajana
Näide 1. L. plantarum Inducia DSM 21379 antagonistlik aktiivsus C. difficile vegetatiivsete rakkude vastu anaeroobses keskkonnas in vitro
Uuringu eesmärk oli hinnata L. plantarum Inducia DSM 21379 antagonistlikku aktiivsust C. difficile tüvede vastu anaeroobses keskkonnas.
Meetodid. Testitud tüved: L. plantarum Inducia DSM 21379 ja C. difficile VPI 10463 (ATCC 43255), hüpervirulentne tüvi M 13042.
Mikroobitüved külvati tahkele söötmele ning inkubeeriti anaeroobses keskkonnas. Füsioloogilises lahuses tehti mikroobide suspensiooni vastavalt MacFarlandi standardile 3 (108 PMÜ/ml). 200 ml BHI söödet inokuleeriti nimetatud suspensiooniga (0,2 ml) saavutamaks lõpp-kontsentratsiooni 105 PMÜ/ml.
Eri ajahetkedel tehti bakterioloogilised väljakülvid (0,1 ml) MRS ja LAB160 söötmetele. Väljakülve inkubeeriti paralleelselt anaeroobses ja mikroaeroobses keskkonnas. Kasvu hinnati 2-5 päeva pärast ja tulemused väljendati log10 PMÜ/ml.
Tabel 1. C. difficile referentstüvede vegetatiivsete rakkude proliferatsiooni pidurdus kooskultiveerimisel tüvega L. plantarum Inducia DSM 21379 0, 24, pärast 48 tundi
C. difficile vegetatiivsete rakkude täielik inhibeerimine BHI söötmes L. plantarum Inducia DSM 21379 poolt ilmnes pärast 48-tunnist inkubatsiooni mikroobide elulemuse kontrollväljakülvide selektiivsetele söötmetele MRS ja LAB160. Suurim L. plantarum Inducia DSM 21379 tihedus BHI söötmes oli pärast 24-tunnist inkubatsiooni. L. plantrum Inducia DSM 21379 hulk pärast 48-tunnist inkubatsiooni mõnevõrra langes nii monoklutuuris (6.3 log PMÜ/g) kui kombinatsioonis C. difficile ga (7.3 ja 6.0 log PMÜ/g) (tabel 1).
Näide 2. Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 supematandi mõju Clostridium difficile referents- ja kliiniliste tüvede vegetatiivsetele rakkudele
Antud in vitro katse eesmärk oli hinnata L. plantarum Inducia DSM 21379 antimikroobset toimet C. difficile referents- ja kliinilisest mateijalist isoleeritud tüvede (kliiniliste tüvede) vegetatiivsetele rakkudele. Naturaalse (happelise) ja neutraliseeritud (antimikroobsed ained, nt peptiidid) supematandi toime eristamine võimaldab hinnata L. plantarum Inducia DSM 21379 antagonistliku aktiivsuse erinevaid mehhanisme - kas toimivad pigem orgaanilised happed või bakteriotsiinid.
Materjal (tüved) (tabel 2)
L. plantarum Inducia DSM 21379
Clostridium difficile referentstüved VPI 10463 ja M 13042
Clostridium difficile kliinilised isolaadid (11 tüve)
Meetodid. L. plantarum Inducia DSM 21379 supematandi antimikroobset toimet testiti C. difficile referents- ja kliiniliste tüvede suhtes mikrotiiterplaatidel (MTP).
L. plantarum Inducia DSM 21379 säilitati -80 °C klaaskuulikestega mikrokatsutites ja aktiveerimiseks kultiveeriti 3x0,15 protsendilise agari lisandiga MRS puljongis ning inkubeeriti mikroaeroobses keskkonnas (10-protsendiline CO2) temperatuuril 37 °C 24 tundi. BHI puljongi inokuleerimiseks kasutati üleöö kasvanud L. plantarum Inducia DSM 21379, mida lisati BHI puljongile 1 protsent v/v ja suspensiooni inkubeeriti mikroaeroobsetes tingimustes 24 tundi. Supernatandi antimikroobse aktiivsuse hindamiseks tsentrifuugid 24 tunni vanust suspensiooni ning eraldati supernatant. Mõõdeti supernatandi pH ja supernatant jagati kaheks osaks. Üks osa supernatandist jäeti naturaalselt happeliseks ja teine osa neutraliseeriti 6N NaOH-ga kuni pH
väärtuseni 6,0 ning mõlemad supematandid filtersteriliseeriti.
C. difficile tüvesid säilitati -80 °C klaaskuulikestega mikrokatsutites ja aktiveerimiseks külvati 3x hobusevere lisandiga Fastidious Anaerobe Agar (FAA) söötmele ja inkubeeriti anaeroobses keskkonnas (anaeroobne käsiboks, gaasisegu 90% N:5% CO2:5% H2) 24 tundi. Üleöö kasvanud C. difficile kultuuri kasutati suspensiooni tegemiseks, mis vastas tihedusele Mac Farland 3,0. L. plantarum Inducia DSM 21379 antimikroobse aktiivsuse hindamiseks tehti järgmised katsesegud: 20 μl C. difficile rakususpensioonile lisati 180 μl: (1) steriilne BHI puljong (kontroll), (2) rakuvaba BHI supernatant, (3) rakuvaba neutraliseeritud supernatant, (4) lahjendatud rakuvaba supernatant (1:1 steriilses BHI puljongis) ja (5) lahjendatud neutraliseeritud rakuvaba supernatant (1:1 steriilses BHI puljongis).
C. difficile kasvu (optilise tiheduse väärtuse muutus) hinnati pärast 48 tunni inkubatsiooni, optiline tihedus mõõdeti MTP lugejaga OD620nm juures ning seejärel arvutati kasvumuutus.
L. plantarum Inducia DSM 2137 inhibeerivat toimet hinnati Kruskal-Wallise testiga, kus C. difficile kasvutihedust (OD620nm) kontrollsöötmes võrreldi C. difficile kasvu tihedusega loodusliku ja neutraliseeritud supernatandis. Statistiliste andmete analüüsiks kasutati PAST Statistics veebipõhist programmi.
Tabel .2. L. plantarum Inducia DSM 21379 naturaalse ja neutraliseeritud supematandi ja lahjendatud supematandi antimikroobne aktiivsus C. difficile referents- ja kliiniliste tüvede suhtes 48-tunnise inkubatsiooni järel
Kliinilisest materjalist isoleeritud tüved: C. difficile CDE, CDP 1-9; referentstüved: C. difficile VPI 10463 (ATCC 43255) ja C. difficile M13042 (Kanadas isoleeritud ribotüübi O27 pandeemiline tüvi).
Seega, L. plantarum Inducia DSM 21379 antimikroobne aktiivsus on tingitud nii happe
produktsioonist naturaalses tootes (pH alandamine) ja väiksemas hulgas antimikroobsete peptiidsete ühendite tootmisest, mis on aktiivsed ka peale supernatandi neutraliseerimist (tabel 2).
Näide 3. L. plantarum Inducia DSM 21379 kasvu ja pH väärtuste testimine ksülitooliga söötmes kultiveerimisel
Katse eesmärk oli hinnata, kas ksülitool mõjutab L. plantarum Inducia DSM 21379 antagonistlikku aktiivsust C. difficile vastu.
L. plantarum Inducia (105 CFU/ml) inkubeeriti MRS söötmes, milles glükoos oli asendatud 5 protsendilise ksülitooliga või ei kasutatud suhkrut üldse, mikroaeroobses või anaeroobses keskkonnas. Laktobatsillide hulk loendati ja avaldati PMÜ/ml söötme kohta. L. plantarum Inducia DSM 21379 ksülitooli kasutamist kontrolliti 2-, 6-, 24- ja 48-tunnise inkubatsiooni järel.
L. plantarum Inducia DSM 21379 kasvas 24 tunni jooksul võrdselt nii 5-protsendilise ksülitooli lisandiga kui ilma ksülitoolita söötmes. 5-protsendilise ksülitooli lisandiga söötmes oli L plantarum Inducia DSM 21379 kasv tihedam mikroaeroobses keskkonnas võrreldes anaeroobse keskkonnaga, milles oli kasv 2 log madalam (tabel 3).
Tabel 3. L. plantarum Inducia DSM 21379 hulk (log PMÜ/ml) protsendilise ksülitooli või glükoosi lisandiga MRS söötmes, kultiveerimisel mikroaeroobses või anaeroobses keskkonnas
See katse tõestas, et L. plantarum Inducia DSM 21379 ei kasuta MRS söötmesse lisatud ksülitooli efektiivselt. L. plantarum Inducia DSM 21379 kasvatamisel modifitseeritud MRS söötmes mõõdeti pH langust. Glükoosiga kontrollsöötmes oli orgaaniliste hapete tootmisest tingitud pH madalam anaeroobses keskkonnas. pH langes ksülitooli sisaldavas söötmes väärtuselt 6,2 väärtuseni 5,0 nii mikroaeroobses kui anaaeroobses
keskkonnas, kuid jäi tunduvalt madalamaks võrreldes glükoosi sisaldava kontrollsöötmega, milles pH langes väärtuselt 7,5 väärtuseni 3,2 (joonis fig 1).
Ksülitooli metaboliseerimine L. plantarum Inducia DSM 21379 poolt.
Uuringu eesmärk oli mõõta ksülitooli kasutamist L. plantarum Inducia DSM 21379 mikroaeroobses ja anaeroobses keskkonnas.
Meetodid: L. plantarum Inducia DSM 21379 kasvatati mikroaeroobses ja anaeroobses keskkonnas 5% ksülitooli lisandiga söötmes 2 kuni 120 tundi. Viidi läbi kaks paralleelkatset. Ksülitooli detekteerimiseks kasutati mass-spektromeetrit QTRAP 3200 (Applied Biosystems, USA). Proove tsentrifuugid 3 minutit 10 000 g, tehti 100x lahjendus ja 50 μl segati 50 μl sisemise standardiga (5 mM D4 merevaikhape atsetonitriilis, 50 μl). Mass-spektromeetrisse süstiti 5 μl lahjendust, milles kasutati 50-protsendilist atsetonitriil/vee segu. Substraadid, ioonipaarid 151/101 (ksülitool) ja 121/77 (sisemine standard) tuvastati mitmekordse reaktsiooni monitoorimisel (MRM). Kontsentratsioon arvutati kaubandusliku ksülitooli (Sigma-Aldrich, Saksamaa) kindla kontsentratsiooniga lahuste kalibreerimiskõvera alusel.
Korduskatsetes selgus, et L. plantarum Inducia kasutas ksülitooli väga väikeses koguses, suhkru hulk söötmes püsis algväärtuse lähedane, muutus oli 0-0,6 mM (tabel 4).
Tabel 4. Ksülitooli hulk (mM) pärast tüvega L. plantarum Inducia DSM 21379 inkubeerimist 5 protsendilise ksülitooli lisandiga söötmes 120 tunni jooksul, mikroaeroobses ja anaeroobses keskkonnas
ND-ei tuvastatud
Seega mass-spektomeetri analüüs kinnitas, et L. plantarum Inducia kasutab ksülitooli väga väheses koguses.
C. difficile referentstüvede kasv ksülitooli ja ampitsilliini sisaldavas söötmes.
Uuringu eesmärgiks oli jäljendada soolestiku keskkonda in vitro katses Süüria
hamstritel välja töötatud C. difficile infektsiooni mudeliga samaselt.
Ksülitooli ja ampitsilliini mõju L. plantarum Inducia DSM 21379 ja C. difficile referentstüvede (VPI 10463 ja hüpertoksiline tüvi M 13042, ribotüüp O27) kasvule testiti BHI söötmes in vitro.
Tabel 5. Eri ksülitiooli (0,1-5-protsendilise) ja ampitsilliini (0,75 μl/ml) kontsentratsioonide toime 48 tunni jooksul Clostridium difficile ja L. plantarum Inducia DSM 21379 monokultuuride kasvule anaeroobses keskkonnas ja BHI söötmes
L. plantarum Inducia DSM 21379 ja kahe C. difficile referentstüve hulk tõusis BHI puljongis (kontroll) peaaegu 2 kuni 4 logaritmi 48 tunni pikkuse inkubatsiooni järel. Ksülitooli ja ampitsilliini lisamine ei mõjutanud C. difficile tüvede elulemust (Tabel 5). L. plantarum Inducia DSM 21379 kasv oli alla surutud ca 2 logaritmi võrra nii 5-protsendilise ksülitooli kui 0,75 μl/ml ampitsilliini lisamisel. Seega antibiootikumi ja kuni 5-protsendilise ksülitooli lahuse manustamisel on L. plantarum Inducia elulemus soolestiku mikrokeskkonnas tagatud.
Näide 4. L. plantarum Inducia DSM 21379 ja C.difficile referentstüvede elulemus kooskultiveerimisel, ksülitooli ja ampitsilliini erinevatel kontsentratsioonidel.
Uuringu eesmärk oli hinnata L plantarum Inducia DSM 21379 ja C. difficile referentstüvede elulemust kooskultiveerimisel ksülitooli ja ampitsilliini erinevate kontsentratsioonide juures.
L. plantarum Inducia DSM 21379 ja C. difficile referentstüvedega inokuleeriti 5-protsendilise ksülitooli ja 0,75 μl/ml ampitsilliini lisandiga BHI sööde ja inkubeeriti anaeroobses keskkonnas (aneroobne box Concept 400, UK) 24 ja 48 tundi. L. plantarum Inducia DSM 21379, C.difficile referentstüvede VPI ja M elulemust peale
kooskultiveerimist kontrolliti monokultuurina 5 protsendilise ksülitooli ja ampitsilliini lisandiga BHI söötmes (1, 2a, 2b).
Uuritavate mikroobide hulga määramiseks tehti kümnendlahjendused. L. plantarum Inducia DSM 21379 külvati MRS söötmele ja inkubeeriti mikroaeroobses keskkonnas ning C. difficile külvati LAB160 söötmele ja inkubeeriti anaeroobses keskkonnas.
Tabel 6. C. difficile referentstüvede inhibitsioon kooskultiveerimisel L. plantarum Inducia DSM 21379 protsendilise ksülitooli ja 0,75 μl/ml ampitsilliini lisandiga BHI söötmes anaeroobses keskkonnas 0, 24, 48 tundi.
L. plantarum Inducia DSM 21379 (3) C. difficile referentstüvede (4, 5) kokultiveerimisel ksülitooli ja ampitilliini lisandiga BHI söötmes (hamstri mudeli jäljendamine) oli C. difficile vegetatiivsete rakkude kasv inhibeeritud. VPI tüve puhul oli täielik kasv täielikult inhibeeritud ja M tüve puhul osaline kasvu inhibitsioon 5 logaritmi võrra (5,0-2,0 log PMÜ/ml).
Seega, hamstri mudelit jäljendav in vitro katse tõestas C. difficile täielikku või osalist inhibeerimist, kui manustada loomadele ainult L. plantarum Inducia DSM 21379 (tabel 5) või selle kombinatsiooni ksülitooliga (tabel 6).
Näide 5. Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 ja ksülitooli kombinatsioon inhibeerivad Clostridium difficile referentstüve VPI eoste germinatsiooni
Katse eesmärgiks oli hinnata L. plantarum Inducia DSM 21379 võimet takistada Clostridium difficile eoste germinatsiooni L. plantarum Inducia DSM 21379 eelneval preinkubeerimisel söötmes. Kontrolliti ka ksülitooli ja taurokolaadi mõju Clostridium difficile eoste germinatsioonile. Taurokolaat on peensooles leiduv aine, mis soodustab Clostridium difficile eoste germinatsiooni.
L. plantarum Inducia DSM 21379 inkubeeriti erinevaid lisandeid sisaldavas BHI puljongis, anaeroobses keskkonnas 24 tundi. Pärast L. plantarum Inducia DSM 21379 inkubeerimist lisati Clostridium difficile eosed ning lisati kontsentreeritud BHI söödet vahekorras 1:10.
Kontrolli ja katsesegusid inkubeeriti anaeroobses keskkonnas 48 tundi. Kontroll ja katsesegud külvati Fastiodious Anaeroobne Agar söötmele (FAA) ja MRS söötmele, katse alguses, 24 tunni möödudes ja 48 tunni möödudes. Arvutati L. plantarum Inducia DSM 21379 ja Clostridium difficile hulgad.
Tabel 7. Clostridium difficile hulgad (log10) eri lisanditega söötmetes (Z. plantarum Inducia DSM 21379, ksülitool, taurokolaat)
nd- mitte tuvastatav, (alla määramispiiri, 1,00 log10 PMÜ/ml).
Z. plantarum Inducia DSM 21379 preinkubeerimine ksülitooli või ksülitooli ja taurokolaadi kombinatsiooniga BHI söötmes inhibeerib Clostridium difficile germinatasiooni (tabel 7). Ksülitooli ja/või taurokolaadi lisamine BHI söötmele ei mõjutanud Z. plantarum Inducia DSM 21379 kasvu. Antud tulemused toetavad loomkatse tulemusi.
Näide 6. Loomkatse
Uuringu eesmärk oli hinnata Z. plantarum Inducia DSM 21379 mõju referentstüve Clostridium difficile VPI 10463 eostega nakatud infektsiooniga hamstritel.
Süüria hamstrid (Mesocricetus auratus) sobivad hästi Clostridium difficile infektsiooni mudeliks. Rikkudes hamstrite käärsoole mikrofloora antibiootikumide manustamisega ja seejärel manustades loomadele C. difficile eoseid, kujuneb loomadel C. difficile
kõhulahtisus vähem kui 48 tunni jooksul ja annab 100 protsendilise suremuse.
Toetudes meie in vitro katsete tulemustele uurisime, kas L. plantarum Inducia DSM 21379 manustamine aitab vähendada C. difficile 'ga nakatatud hamstrite suremust. Enne ampitsilliini manustamist (30 mg/kg) manustasime hamstritele sondiga 5-1 järjestikusel päeval L. plantarum Inducia DSM 21379 suspensiooni 1010 PMÜ/ml kas 5-protsendilise ksülitooli lisandiga või ilma. L. plantarum Inducia DSM 21379 manustamist jätkasime kogu katse vältel. Hamstrid nakatati 10-30 C. difficile VPI 10463 eosega katse 7. päeval. Hamstreid jälgiti järgnevad 5 päeva ja C. difficile infektsiooni sümptomite ilmnedes: märg saba- tehti C. difficile A/B toksiini test X/pect Remel test). Kontrollgrupina kasutati C. difficile VPI tüvega nakatud hamstreid.
Tabel 8. L. plantarum Inducia DSM 21379 ja/või ksülitooliga eeltoidetud ja C. difficile 'ga nakatatud hamstrid (n=15)
Seega, C. difficele eostega nakatatute seas kõrgeim ellujäämise määr oli L. plantarum Inducia DSM 21379 ja ksülitooli lahusega ette toidetud loomade grupis (tabel 8). Antud juhul olid kõik ellujäänud hamstrite (7/9) toksiini testid negatiivsed, st C. difficile eoste germinatsioon oli alla surutud. Ainult ksülitooli manustamisel oli toksiinitest negatiivne neljal loomal ellujäänud viiest ja ainult ühel ellujäänud loomadest oli test positiivne. Seega. L plantarum Inducia DSM 21379 ja ksülitooli kombinatsioon surub alla eoste germinatsiooni toksiini tootvateks vegetatiivseteks rakkudeks. A ja B toksiini leidumise korral kontrollisime ka C. difficile kasvu olemasolu peale Inducia ja ksülitooliga
mõjutamist (Tabel 9). L. plantarum Inducia DSM 21379 ja ksülitooliga ettetoidetud ellujäänud kuuel hamstril seitsmest ei tuvastatud C. difficile vegetatiivseid rakke (ainult ühel juhul leiti C. difficile kasv) peen- ja jämesooles. Nii anaeroobide kui indigeensete laktobatsillide hulka asendav L. plantarum Inducia DSM 21379 hulk oli peen- ja jämesooles kõrge. See näitab L. plantarum Inducia DSM 21379 ja ksülitooli manustamise kasulikkust soole mikrofloora stabiliseermisel ja taastamisel peale ampitsilliini manustamist ja C. difficile eostega nakatumisel.
Tabel 9. Anaeroobide, laktobatsillide, L. plantarum Inducia DSM 21379 ja C. difficile hulgad L. plantarum Inducia DSM 21379 ja ksülitooliga ettetoidetud ja ellujäänud hamstrite peensooles ja jämesooles
AN-anaeroobid C.d.-Clostridium difficile
Hamstrite ellujäämismäär oli 22 protsenti suurem tänu L. plantarum Inducia DSM 21379 manustamisele (tabel 16). Seda tõestas ka toksiini puudumine jämesoole sisus (tabel 9).
L. plantarum Inducia DSM 21379 hulk oli kõrge tühisooles (vahemikus 0-6,0, mediaan 4,0 PMÜ log10/g) ja niudesooles (6,0-7,6, mediaan 6,7). Tõenäoliselt toimis L.
plantarum Inducia DSM 21379 happe produtseerimise ja SCFA profiil kaudu.
C. difficile'ga nakatatud hamstrite morfoloogilised uuringud
Clostridium difficile infektsiooni moduleerimiseks kasutati tüüpilist hamstri mudelit, kuna patogeneesi peamine modulaator on toksiinide poolt põhjustatud organite kahjustus. Meie katses kasutatav C. difficile VPI 10643 omab nii A kui B toksiini ning need toksiinid esinesid ka maksas ja peensooles (joonised fig 2 ja fig 3).
C. difficile infektsioonist ellujäänud hamstritel ei leitud lahkamisel ulatuslikke limaskesta kahjustusi, pseudomembraane ega polümorfonukleaarsete rakkude infiltratsiooni (joonis fig 4a).
C. difficile infektsioonist kahjustatud hamstrite surmaeelseteks iseloomulikeks leidudeks oli põletik koos polümorfonukleaaride infiltratsiooniga limaskesta ja pseudomembraanide olemasolu. Raske enterokoliit põhjustas punaliblede ja polümorfonukleaarsete leukotsüütide infiltratsiooni soole limaskesta, maksa ja põrna, põhjustades loomade surma. Elundites esines hüpereemia (joonis fig 5f).

Claims (12)

  1. 1. Probiootilist mikroorganismi tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 sisaldav kompositsioon kasutamiseks Clostridium difficile põhjustatud kõhulahtisuse (CDAD) riski vähendamiseks Clostridium difficile eoste germinatsiooni takistamise ja Clostridium difficile vegetatiivsete rakkude paljunemise allasurumise teel.
  2. 2. Kompositsioon vastavalt punktile 1, mis sisaldab lisaks ksülitooli.
  3. 3. Kompositsioon vastavalt punktile 1 või 2, mis on valitud rühmast, mis sisaldab farmaatsia-, toidu- või veterinaarset kompositsiooni.
  4. 4. Toiduaine, mis sisaldab kompositsiooni vastavalt punktile 1 või 2.
  5. 5. Toiduaine vastavalt punktile 4, milleks on piimatoode.
  6. 6. Toiduaine vastavalt punktile 5, milleks on fermenteeritud piimatoode.
  7. 7. Toiduaine vastavalt punktile5, milleks on juust.
  8. 8. Toiduaine vastavalt punktile 5, milleks on jogurt.
  9. 9. Toidulisand, mis sisaldab kompositsiooni vastavalt punktile 1 või 2.
  10. 10. Farmaatsia- või veterinaariatoode, mis sisaldab kompositsiooni vastavalt punktile 1 või 2.
  11. 11. Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 kasutamiseks antimikroobse agendina eksogeenset ja/või endogeenset päritolu Clostridium difficile põhjustatud kõhulahtisuse (CDAD) riski vähendamiseks Clostridium difficile eoste germinatsiooni takistamise ja Clostridium difficile vegetatiivsete rakkude paljunemise allasurumise teel.
  12. 12. Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 kasutamiseks antimikroobse agendina, vastavalt punktile 11 koos ksülitooliga.
EEP201800005A 2008-05-13 2014-10-31 Probiootilist mikroorganismi tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 sisaldav kompositsioon kasutamiseks Clostridium difficile põhjustatud kõhulahtisuse (CDAD) riski vähendamiseks EE05809B1 (et)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EEP200800027A EE05341B1 (et) 2008-05-13 2008-05-13 Isoleeritud mikroorganismi tvi Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 kui organismi loomulikku kaitsev?imet t?stev probiootik, seda sisaldav toiduaine ja kompositsioon ning mikroorganismi kasutamine rakulist immuunsust t?stva ravimi valmistamisek
US14/244,284 US20140335066A1 (en) 2008-05-13 2014-04-03 Lactobacillus plantarum inducia dsm 21379 as enhancer of cellular immunity, hypocholesterolemic and anti-oxidative agent and antimicrobial agent against clostridium difficile
EEP201400038A EE05799B1 (et) 2014-04-03 2014-10-31 Hüpokolestereemilist probiootilist mikroorganismi tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 sisaldav kompositsioon kasutamiseks südame-veresoonkonnahaiguste ennetamiseks

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EE201800005A true EE201800005A (et) 2018-07-16
EE05809B1 EE05809B1 (et) 2018-09-17

Family

ID=40957913

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EEP200800027A EE05341B1 (et) 2008-05-13 2008-05-13 Isoleeritud mikroorganismi tvi Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 kui organismi loomulikku kaitsev?imet t?stev probiootik, seda sisaldav toiduaine ja kompositsioon ning mikroorganismi kasutamine rakulist immuunsust t?stva ravimi valmistamisek
EEP201800005A EE05809B1 (et) 2008-05-13 2014-10-31 Probiootilist mikroorganismi tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 sisaldav kompositsioon kasutamiseks Clostridium difficile põhjustatud kõhulahtisuse (CDAD) riski vähendamiseks

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EEP200800027A EE05341B1 (et) 2008-05-13 2008-05-13 Isoleeritud mikroorganismi tvi Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 kui organismi loomulikku kaitsev?imet t?stev probiootik, seda sisaldav toiduaine ja kompositsioon ning mikroorganismi kasutamine rakulist immuunsust t?stva ravimi valmistamisek

Country Status (10)

Country Link
US (3) US20110274789A1 (et)
EP (2) EP2288360B1 (et)
KR (1) KR101595042B1 (et)
AT (1) ATE536879T1 (et)
DK (2) DK2288360T3 (et)
EE (2) EE05341B1 (et)
LT (1) LT3193895T (et)
PL (1) PL2288360T3 (et)
RU (1) RU2486234C2 (et)
WO (1) WO2009138092A1 (et)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EE05799B1 (et) * 2014-04-03 2017-10-16 Biocc Oü Hüpokolestereemilist probiootilist mikroorganismi tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 sisaldav kompositsioon kasutamiseks südame-veresoonkonnahaiguste ennetamiseks
EE05341B1 (et) * 2008-05-13 2010-08-16 O� Tervisliku Piima Biotehnoloogiate Arenduskeskus Isoleeritud mikroorganismi tvi Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 kui organismi loomulikku kaitsev?imet t?stev probiootik, seda sisaldav toiduaine ja kompositsioon ning mikroorganismi kasutamine rakulist immuunsust t?stva ravimi valmistamisek
FR2955774A1 (fr) 2010-02-02 2011-08-05 Aragan Preparation destinee a traiter l'exces ponderal et les desordres associes et applications de ladite preparation
ES2402014B1 (es) 2011-09-07 2014-02-27 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) Peptido secretado por lactobacillus plantarum con función inmunomoduladora
BR112014015527B1 (pt) * 2011-12-21 2021-06-22 Compagnie Gervais Danone Composição, método para obtenção de uma composição e uso da composição
US10688129B2 (en) 2013-11-26 2020-06-23 Central Biomedia, Inc. Method of producing a designer blood product, method of using a designer blood product, and diet for selectively enhancing blood profile
SG11201607557WA (en) * 2014-03-24 2016-10-28 Otsuka Pharma Co Ltd Novel lactobacillus paracasei strain
US10226492B2 (en) 2014-11-25 2019-03-12 Dsm Ip Assets B.V. Probiotic and new biomarker
RU2567149C1 (ru) * 2014-12-24 2015-11-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Горский государственный аграрный университет" ШТАММ Lactobacillus plantarum, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ И ПРОБИОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
KR101675035B1 (ko) * 2015-07-17 2016-11-22 주식회사 빙그레 락토바실러스 속 균주를 포함하는 생균제 조성물, 동물사료용 첨가제 및 동물사료 조성물
US9730969B2 (en) 2015-11-06 2017-08-15 Mead Johnson Nutrition Company Nutritional compositions for promoting gut barrier function and ameliorating visceral pain
KR101794772B1 (ko) * 2016-06-08 2017-12-01 강원대학교산학협력단 폴리아민 고생산 신균주 바실러스 서브틸리스 ee5 균주
US10166262B2 (en) 2017-04-20 2019-01-01 Ewelina Sosnowska-Turek Strain of bacteria and composition comprising the same
KR102486970B1 (ko) * 2017-09-22 2023-01-10 주식회사 고바이오랩 클로스트리디움 디피실레(Clostridium difficile) 성장 억제효과를 갖는 락토바실러스 균주
TWI740101B (zh) * 2019-02-12 2021-09-21 大江生醫股份有限公司 降膽固醇之益生菌株的用途
SK502019A3 (sk) * 2019-05-15 2020-12-02 Labas Miroslav Spôsob výroby mlieka a mliečnych doplnkov s unikátnym zložením mastných kyselín obnovovaním komenzálnej prirodzenej mikrobioty
US20230148258A1 (en) * 2020-04-07 2023-05-11 Kalin Health Llc Spermidine-supplemented food products
WO2021261423A1 (ja) * 2020-06-22 2021-12-30 株式会社明治 インターロイキン－１０の産生促進用組成物
KR102363975B1 (ko) * 2020-12-11 2022-02-17 주식회사 바이오뱅크힐링 락토바실러스 플란타룸 균주, 및 그의 유래의 소포체 및 그의 항염증 및 항균 용도
CN112553115B (zh) * 2020-12-23 2022-09-16 南昌大学 植物乳杆菌zdy2013在制备缓解肾损伤产品中应用
CN113881604B (zh) * 2021-11-10 2023-02-28 深圳大学 一株植物乳杆菌mm89及其多糖和应用
CN115381005B (zh) * 2022-08-25 2023-09-19 中国农业科学院饲料研究所 植物乳杆菌cicc 6240在消减水产品体内抗生素残留中的应用
CN117417847B (zh) * 2023-08-22 2024-03-15 大理大学 一种大理梭菌及其在制备抗氧化功能性物质中的应用

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5895758A (en) * 1997-06-10 1999-04-20 Bio-Energy Systems Strain of lactobacillus Plantarum
IT1298918B1 (it) * 1998-02-20 2000-02-07 Mendes Srl Uso di batteri dotati di arginina deiminasi per indurre apoptosi e/o ridurre una reazione infiammatoria e composizioni farmaceutiche
EP1313574B1 (en) * 2000-08-11 2008-10-29 WHITLOCK, David R. Compositions including ammonia oxidizing bacteria to increase production of nitric oxide and nitric oxide precursors and methods of using same
GB2369777B (en) * 2000-10-05 2004-10-27 St Ivel Ltd Food products with antimicrobial lactic acid bacteria
ITMI20020399A1 (it) * 2002-02-28 2003-08-28 Ct Sperimentale Del Latte S P Composizioni dietetiche e/o farmaceutiche per uso umano e/o animale abase di preparati microbici probiotici
PT1485463E (pt) * 2002-03-21 2008-12-30 Bifodan As Estirpes de lactobacillus
RU2247148C2 (ru) * 2002-05-28 2005-02-27 Пименов Евгений Васильевич Штамм бактерий lactobacillus plantarum p4, штамм бактерий lactobacillus buchneri p0 и препарат-пробиотик на их основе для коррекции дисбактериозов различной этиологии у людей и животных
WO2004076615A2 (en) * 2003-02-27 2004-09-10 Bioneer A/S Immunomodulating probiotic compounds
SE527555C2 (sv) * 2003-04-04 2006-04-11 Probi Ab Anti-inflammatorisk komposition innehållande tannasproducerande Lactobacillusstammar
GB0513556D0 (en) * 2005-07-01 2005-08-10 Matforsk As Product
FR2898014B1 (fr) * 2006-03-03 2008-09-12 Gervais Danone Sa Procede de fabrication d'un dessert glace et dessert glace ainsi obtenu
EE05340B1 (et) * 2008-05-13 2010-08-16 O� Tervisliku Piima Biotehnoloogiate Arenduskeskus Isoleeritud mikroorganismi tvi Lactobacillus plantarum Tensia DSM 21380 ja selle kasutamine antimikroobse ning verer?hku alandava probiootikuna ning ravimi valmistamiseks ning toiduaine realiseerimisaja pikendamiseks ja toiduaines kontamineerivatemi
EE05341B1 (et) * 2008-05-13 2010-08-16 O� Tervisliku Piima Biotehnoloogiate Arenduskeskus Isoleeritud mikroorganismi tvi Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 kui organismi loomulikku kaitsev?imet t?stev probiootik, seda sisaldav toiduaine ja kompositsioon ning mikroorganismi kasutamine rakulist immuunsust t?stva ravimi valmistamisek
EP2311473A1 (en) * 2009-10-09 2011-04-20 AB-Biotics Producciones Industriales De Microbiotas, S.L. Lactobacillus plantarum strains as probiotics

Also Published As

Publication number Publication date
EP3193895A1 (en) 2017-07-26
LT3193895T (lt) 2020-07-27
EE05341B1 (et) 2010-08-16
EP2288360A1 (en) 2011-03-02
EE05809B1 (et) 2018-09-17
WO2009138092A1 (en) 2009-11-19
RU2010147343A (ru) 2012-06-20
US20110274789A1 (en) 2011-11-10
DK2288360T3 (da) 2012-03-19
ATE536879T1 (de) 2011-12-15
RU2486234C2 (ru) 2013-06-27
PL2288360T3 (pl) 2012-06-29
US20160296570A1 (en) 2016-10-13
KR20110018898A (ko) 2011-02-24
DK3193895T3 (da) 2020-07-20
KR101595042B1 (ko) 2016-02-17
EP3193895B1 (en) 2020-04-15
US10272122B2 (en) 2019-04-30
EE200800027A (et) 2009-12-15
EP2288360B1 (en) 2011-12-14
US20140335066A1 (en) 2014-11-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EE201800005A (et) Probiootilist mikroorganismi tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 sisaldav kompositsioon kasutamiseks Clostrdium difficile põhjustatud kõhulahtisuse (CDAD) riski vähendamiseks
Kizerwetter-Swida et al. Protective effect of potentially probiotic Lactobacillus strain on infection with pathogenic bacteria in chickens
Dec et al. Screening of Lactobacillus strains of domestic goose origin against bacterial poultry pathogens for use as probiotics
EP2672980B1 (en) Synbiotic compositions for restoration and reconstitution of gut microbiota
Victor et al. Probiotic properties of lactobacilli strains isolated from raw cow milk in the western highlands of Cameroon
CN102905712B (zh) 用于治疗肠炎的益生菌组合物
EP2900805B1 (en) Probiotic and prebiotic compositions
EP3209307B1 (en) Probiotic and prebiotic compositions
EE05799B1 (et) Hüpokolestereemilist probiootilist mikroorganismi tüve Lactobacillus plantarum Inducia DSM 21379 sisaldav kompositsioon kasutamiseks südame-veresoonkonnahaiguste ennetamiseks
JP2015535280A (ja) 胃腸管において有益な細菌を刺激する方法及び組成物
Mulaw et al. Protective effect of potential probiotic strains from fermented ethiopian food against Salmonella Typhimurium DT104 in mice
KR102452792B1 (ko) 고창을 감소시키기 위한 조성물 및 방법
Jiang et al. Probiotics in piglet: from gut health to pathogen defense mechanisms
WO2008052468A1 (en) New lactobacillus rhamnosus strain, its pharmaceutical composition and the uses thereof, and the method for preparation
Evivie et al. Suppressive effects of Streptococcus thermophilus KLDS 3.1003 on some foodborne pathogens revealed through in vitro, in vivo and genomic insights
CA3137083A1 (en) Compositions including novel microbes with enhanced persistence, synergistic combinations of novel microbes and prebiotics, and methods for the isolation of such microbes
Moretti et al. Probiotic characterization of indigenous lactic acid bacteria isolates from chickens to be used as biocontrol agents in poultry industry
KR101164512B1 (ko) 비피도박테리움 슈도카테눌라튬 ｓｐｍ１２０４ 유산균 또는 이의 배양물을 유효성분으로 하는 가축용 생균제 조성물
Vlková et al. Selection of probiotic bifidobacteria for lambs
DebMandal et al. Detection of intestinal colonization of probiotic Lactobacillus rhamnosus by stool culture in modified selective media
Pospíšková et al. Effect of probiotics in the pig nutrition on the pathogenic bacteria counts in the gut
Bian An in vitro antimicrobial and safety study of Lactobacillus reuteri DPC16 for validation of probiotic concept
EP4259171A1 (en) Decolonization of enterobacteria, such as klebsiella pneumoniae, from the gut using strains of klebsiella oxytoca
James Effect of inulin on the growth and antimicrobial activity of Bifidobacterium animalis Subsp. Lactis 420-an assessment
Cui et al. Probiotic characteristics and protective effects of chicken-derived Enterococcus faecium against infection with Avian Pathogenic Escherichia coli and Salmonella in laying hens

Legal Events

Date Code Title Description
GB1A Change in the ownership or in the address of the owner