EA009179B1 - Вакцина на основе вирусоподобных частиц вируса папилломы человека 16 и вируса папилломы человека 18 l1 - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к применению вирусоподобных частиц (ВПЧ) вируса папилломы человека (HPV) 16 и HPV 18 для обеспечения перекрестного иммунитета к инфекции и/или заболеванию, вызываемым другими типами HPV.

Description

Настоящее изобретение относится к вирусоподобным частицам (ВПЧ) из вируса папилломы человека (НРУ) и к их применению в медицине, в частности к обеспечению защиты от инфекции и/или заболевания, вызываемых гетерологичными типами НРУ.

Предшествующий уровень техники

Вирусы папилломы представляют собой небольшие опухолеродные ДНК вирусы, которые являются высоковидоспецифичными. На сегодняшний день описано более 100 индивидуальных генотипов вируса папилломы человека (НРУ). Как правило, НРУ специфичны либо к коже (например, НРУ-1 и -2), либо к поверхностям слизистых (например, НРУ-6 и -11) и обычно вызывают доброкачественные опухоли (бородавки), которые сохраняются в течение нескольких месяцев или лет. Такие доброкачественные опухоли могут внушать людям беспокойство, но не склонны представлять собой угрозу для жизни, за некоторыми исключениями.

Некоторые НРУ также ассоциированы с раком, они известны как онкогенные типы НРУ. Самой сильной положительной связью между НРУ и раком человека является связь, существующая между НРУ-16 и НРУ-18 и раком шейки матки. Рак шейки матки представляет собой наиболее распространенное злокачественное заболевание в развивающихся странах, причем каждый год в мире происходит около 500000 новых случаев заболевания.

Другими НРУ, представляющими особенный интерес в отношении рака, являются типы 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68.

Вирусоподобные частицы (ВПЧ) НРУ были предложены в качестве потенциальных вакцин для лечения НРУ. Исследования на животных показали, что ВПЧ не обеспечивают перекрестный иммунитет к инфекции, вызываемой другими типами НРУ, см., например, διιζίοΐι. 1.Л. с( а1., Ргос Νηΐΐ Лсай δα, 92: 11553-11557, 1995, и ВтейЬшй, Зешшага ίη Сапсег Вю1оду, νοί. 9, 1999, рр. 431-445.

До сих пор имеется потребность в вакцине, защищающей от многочисленных типов НРУ.

Настоящее изобретение направлено на эту потребность.

Краткое изложение сущности изобретения

В первом аспекте настоящее изобретение относится к применению смеси, содержащей ВПЧ НРУ 16 и НРУ 18, в предупреждении инфекции или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы онкогенных типов НРУ, исключая типы 16 и 18.

Изобретение также относится к применению смеси, содержащей ВПЧ НРУ 16 и НРУ 18, в изготовлении лекарственного средства для предупреждения инфекции или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы онкогенных типов НРУ, исключая типы 16 и 18.

Во втором аспекте изобретение относится к применению смеси, содержащей ВПЧ НРУ 16 и НРУ 18, в предупреждении инфекции или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы типов НРУ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.

Изобретение также относится к применению смеси ВПЧ НРУ 16 и НРУ 18 в изготовлении лекарственного средства для предупреждения инфекции или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы типов НРУ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.

В третьем аспекте настоящее изобретение относится к применению ВПЧ НРУ 16 в предупреждении инфекции или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы типов НРУ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.

Изобретение также относится к применению ВПЧ НРУ 16 в изготовлении лекарственного средства для предупреждения инфекции или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы типов НРУ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.

В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к применению ВПЧ НРУ 18 в предупреждении инфекции или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы типов НРУ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.

Изобретение также относится к применению ВПЧ НРУ 18 в изготовлении лекарственного средства для предупреждения инфекции или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы типов НРУ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.

Более конкретно, изобретение имеет отношение к способу индукции иммунного ответа против одного или более чем одного типа НРУ, выбранных из группы, состоящей из всех онкогенных раковых типов, исключая типы 16 и 18, который включает введение субъекту композиции, содержащей ВПЧ НРУ16. Предпочтительным является способ, в котором типы НРУ выбраны из группы, состоящей из типов 18 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68. Также предпочтительным является способ индукции иммунного ответа против одного или более чем одного типа НРУ, выбранных из группы, состоящей из НРУ31, НРУ33, НРУ35, НРУ52 и НРУ58. Наиболее предпочтительным является способ индукции иммунного ответа против одного или более чем одного типа НРУ, выбранных из группы, состоящей из НРУ31, НРУ35 и НРУ58. В другом воплощении композиция, полезная в способе, дополнительно содержит ВПЧ НРУ18 и/или адъювант. В еще одном воплощении индуцируемый иммунный ответ приводит к предупреждению инфекции, вызываемой перечисленными типами НРУ.

В еще одном воплощении изобретение имеет отношение к способу индукции иммунного ответа против одного или более чем одного типа НРУ, выбранных из группы, состоящей из всех онкогенных

- 1 009179 раковых типов, исключая типы 16 и 18, который включает введение субъекту композиции, содержащей ВПЧ НРУ18. Предпочтительным является способ индукции иммунного ответа против одного или более чем одного типа НРУ, выбранных из группы, состоящей из типов 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 63, который включает введение субъекту композиции, содержащей ВПЧ НРУ18. Предпочтительным является способ индукции иммунного ответа против одного или более чем одного типа НРУ, выбранных из группы, состоящей из НРУ45 и НРУ58. В другом воплощении композиция, полезная в способе, дополнительно содержит ВПЧ НРУ16 и/или адъювант. В еще одном воплощении индуцируемый иммунный ответ приводит к предупреждению инфекции, вызываемой перечисленными типами НРУ.

Предпочтительным является способ, как описано выше, в котором иммунный ответ индуцируют против любого из типов НРУ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 из специфических идентифицированных групп (соответственно размеру предпочтительной группы).

Подробное описание

В настоящем изобретении авторы изобретения неожиданно обнаружили, что применение ВПЧ НРУ16 и НРУ18 обеспечивает перекрестный иммунитет к инфекции, вызываемой одним или более чем одним типом НРУ из группы онкогенных НРУ (исключая типы 16 и 18), причем онкогенными типами являются те типы, которые способны вызывать рак. Группа онкогенных типов включает или состоит из типов 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, 82, 26, 53 и 66. В частности применение ВПЧ НРУ16 и НРУ18 обеспечивает перекрестный иммунитет к инфекции и/или заболеванию, вызываемым группой типов НРУ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68, далее называемых группой «типов с высоким риском рака». Была идентифицирована защита от всей группы типов с высоким риском рака и от определенных специфических типов и комбинаций типов. Эффект является дополнением к «гомологичному» защитному эффекту, наблюдаемому против НРУ 16 и НРУ18 при применении ВПЧ НРУ 16 и НРУ18 соответственно. Как таковые, ВПЧ НРУ 16 и ВПЧ НРУ 18 можно использовать в вакцине и против НРУ 16, НРУ 18 и против других типов НРУ.

Перекрестный иммунитет здесь обозначает, что число случаев инфекции для группы онкогенных типов НРУ (случайная инфекции или хроническая инфекция) и/или онкогенного заболевания, вызываемого инфекцией НРУ, ниже в группе пациентов, вакцинированных ВПЧ НРУ 16 и/или НРУ 18, предпочтительно типами 16 и 18, чем в невакцинированной группе. Полный перекрестный иммунитет к типу или группе типов не требуется в настоящем изобретении - на самом деле, любой уровень перекрестного иммунитета обеспечивает преимущество. Предпочтительно уровень наблюдаемого перекрестного иммунитета такой, что в вакцинированной группе инфекций и/или заболеваний меньше на 5%, чем в сравнительной невакциированной группе, более предпочтительно до 10, до 15, до 20, до 25, до 30, до 35, до 40, до 45, до 50, до 55, до 60, до 65, до 70, до 80, до 90 или даже до 100% меньше инфекций и/или заболеваний.

Перекрестный иммунитет можно оценить путем определения присутствия нуклеиновых кислот, специфических для различных онкогенных типов, в вакцинируемой и контрольной группе. Определение можно проводить, например, используя методики, как описано в XVО 03014402 и ссылках, упомянутых там, особенно для неспецифической амплификации ДНК НРУ и последующего определения типов ДНК, используя систему ЫРЛ, как описано в νθ 99/14377 и в К1е1ег е1 а1., [1оигиа1 о£ С11шса1 М1сгоЫо1оду (1999), 37(8): 2508-2517], которые включены здесь посредством ссылки. Однако может быть использован любой подходящий метод для определения ДНК НРУ в образце, такой как типоспецифическая ПЦР (полимеразная цепная реакция) с использованием праймеров, специфических для каждого целевого типа НРУ. Подходящие праймеры известны специалистам или могут быть легко сконструированы при условии, что последовательности онкогенных типов НРУ известны.

Подходящий перекрестный иммунитет наблюдается в женской популяции предпочтительно среди женщин с серонегативной реакцией на инфекцию НРУ или с серонегативной реакцией на НРУ 16 и 18, предпочтительно среди женщин подросткового возраста с пресексуальной активностью.

Перекрестный иммунитет (оцененный по защите, наблюдаемой в вакцинированной группе, относительно контрольной группы) предпочтительно наблюдается против любого онкогенного типа, отличного от 16 или 18, например, любого из группы типов с высоким риском рака 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 или 68, или совместно, против групп типов с высоким риском рака, например 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 типов, или на самом деле против всех типов с высоким риском рака. Все возможные комбинации 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и 11 типов с высоким риском рака рассматриваются специфически, и, по существу, имеется несколько различных «групп» типов ВПЧ, индивидуализированных здесь, для которых уровень перекрестного иммунитета можно анализировать по сравнению с группой плацебо.

Применение ВПЧ НРУ 16 и/или НРУ 18 для обеспечения предупреждения инфекции НРУ за счет любой такой группы типов НРУ является предпочтительным.

Соответственно настоящее изобретение обеспечивает перекрестный иммунитет к инфекции и/или заболеванию, вызываемым следующими предпочтительными группами типов НРУ:

А группа, включающая один или более чем один тип НРУ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68,

В группа из утверждения А, включающая тип 31 и один или более чем один тип 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68,

- 2 009179

С группа из утверждения А или В, включающая тип 33 и один или более чем один тип 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68,

Ό группа из утверждений А-С, включающая тип 35 и один или более чем один тип 39, 45, 51, 52, 56,

58, 59, 66, 68,

Е группа из утверждений А-Ό, включающая тип 39 и один или более чем один тип 45, 51, 52, 56, 58,

59, 66, 68,

Е группа из утверждений А-Е, включающая тип 45 и один или более чем один тип 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68,

С группа из утверждений А-Е, включающая тип 51 и один или более чем один тип 52, 56, 58, 59, 66, 68,

Н группа из утверждений А-С, включающая тип 52 и один или более чем один тип 56, 58, 59, 66, 68, I группа из утверждений А-Н, включающая тип 56 и один или более чем один тип 58, 59, 66, 68, 1 группа из утверждений А-1, включающая тип 58 и один или более чем один тип 59, 66, 68, К группа из утверждений А-1, включающая тип 59 и один или более чем один тип 66, 68, Ь группа из утверждений А-К, включающая тип 66 и один или более чем один тип 68.

В частности авторы изобретения определили, что среди населения в группе плацебо вероятность инфекции была на 38% больше для по меньшей мере одного из типов группы с высоким риском рака по сравнению с теми женщинами, которых вакцинировали вакциной, содержащей ВПЧ ΗΡV 16 и 18. Таким образом, изобретение относится в особенности к применению композиции, содержащей ВПЧ ΗΡν 16 и 18, в предупреждении инфекции в популяции, вызванной одним или более чем одним типом с высоким риском рака. Предпочтительно композиция является до или по меньшей мере на 20% более эффективной, чем плацебо, в предупреждении инфекции в популяции, вызванной группой, состоящей из типов с высоким риском рака, предпочтительно до или по меньшей мере на 25% более эффективной, наиболее предпочтительно до или по меньшей мере на 30% более эффективной, подходяще до или по меньшей мере на 34% более эффективной в предупреждении инфекции, наиболее предпочтительно до или по меньшей мере на 38% более эффективной в предупреждении инфекции.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к композиции, содержащей ВПЧ ΗΡν 16 и ΗΡν 18, в изготовлении лекарственного средства для предупреждения инфекции, вызванной одним или более чем одним типом ΗΡν 31, 33, 35, 52 и 58.

Авторы изобретения определили, что среди популяции в группе плацебо вероятность инфекции была на 43% больше для по меньшей мере одного из группы типов ΗΡν 31, 33, 35, 52 и 58 по сравнению с теми женщинами, которых вакцинировали ВПЧ ΗΡν 16 и ΗΡν 18. Таким образом, изобретение относится в особенности к применению композиции, содержащей ВПЧ ΗΡν 16 и ΗΡν 18, в предупреждении инфекции в популяции, вызванной одним или более чем одним типом ΗΡν 31, 33, 35, 52 и 58. Предпочтительно комбинация является до или по меньшей мере на 10% более эффективной, чем плацебо, в предупреждении инфекции в популяции, вызванной группой, состоящей из типов ΗΡν 31, 33, 35, 52 и 58, более предпочтительно до или по меньшей мере на 15% более эффективной, более предпочтительно до или по меньшей мере на 20% более эффективной, на 25% более эффективной, на 30% более эффективной, на 37% более эффективной или подходяще до или по меньшей мере на 43% более эффективной в предупреждении инфекции.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к композиции, содержащей ВПЧ ΗΡν 16 и ΗΡν 18, для изготовления лекарственного средства для предупреждения инфекции, вызываемой одним или более чем одним типом ΗΡν31, 35 и 58.

Авторы изобретения определили, что среди популяции в группе плацебо вероятность инфекции была на 58% больше для по меньшей мере одного из группы типов ΗΡν 31, 35 и 58 по сравнению с теми женщинами, которых вакцинировали ВПЧ ΗΡν 16 и ΗΡν 18. Таким образом, изобретение относится в особенности к применению композиции, содержащей ВПЧ ΗΡν 16 и ΗΡν 18, в предупреждении инфекции в популяции, вызываемой одним или более чем одним типом ΗΡν 31, 35 и 58. Предпочтительно композиция является до или по меньшей мере на 15% более эффективной, чем плацебо, в предупреждении инфекции в популяции, вызываемой группой, состоящей из типов ΗΡν 31, 35 и 58, предпочтительно до или по меньшей мере на 20% более эффективной, предпочтительно до или по меньшей мере на 25% более эффективной, до 30% более эффективной, до 35% более эффективной, до 40% более эффективной, до 45% более эффективной, до 49% более эффективной, до 55% более эффективной или даже более подходяще до или по меньшей мере на 58% более эффективной в предупреждении инфекции.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к композиции, содержащей ВПЧ ΗΡν 16 и ΗΡν 18, для изготовления лекарственного средства, для предупреждения инфекции, вызываемой одним или более чем одним типом ΗΡν 45 и 59.

В частности, авторы изобретения определили, что среди популяции в группе плацебо вероятность инфекции была на 33% больше для по меньшей мере одного (или более) из группы типов ΗΡν 45 и 59 по сравнению с теми женщинами, которых вакцинировали вакциной, содержащей ВПЧ ΗΡν 16 и 18. Таким образом, изобретение относится в особенности к применению композиции, содержащей ВПЧ ΗΡν 16 и 18, в предупреждении инфекции в популяции, вызываемой одним или более чем одним типом ΗΡν 45 и

- 3 009179

НРУ 59. Предпочтительно композиция является до или по меньшей мере на 20% более эффективной, чем плацебо, в предупреждении инфекции в популяции, вызываемой группой, состоящей из типов НРУ 45 и НРУ 59, предпочтительно до или по меньшей мере на 25% более эффективной, более предпочтительно до 30% более эффективной, более предпочтительно до или по меньшей мере на 33% более эффективной в предупреждении инфекции.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к способу предупреждения инфекции НРУ в популяции, при котором вакцинация ВПЧ НРУ 16, ВПЧ НРУ 18 или их смесью обеспечивает перекрестный иммунитет к инфекции, вызванной следующими группами типов НРУ: все онкогенные типы НРУ (исключая типы 16 и 18), любая из групп, обозначенных выше в параграфах Л-Ь, группа типов с высоким риском рака, группа НРУ 31, 35, 58; группа НРУ 31, 33, 35, 52, 58; группа НРУ 45 и 59, при этом достигаемая защита против всех членов группы вместе является более сильной, чем та, которая наблюдается при применении плацебо.

Предпочтительно композиция, содержащая ВПЧ НРУ 16 и НРУ 18, обеспечивает перекрестный иммунитет к инфекции, вызванной по меньшей мере одним из типов НРУ 35 и НРУ 52.

Предпочтительно композиция ВПЧ НРУ 16 и НРУ 18 также обеспечивает защиту против инфекции, вызванной НРУ 16 и/или НРУ 18, предпочтительно и НРУ16, ННРУ18.

Изобретение также относится к применению ВПЧ НРУ 16 в предупреждении инфекции, вызванной одним или более чем одним типом из группы типов с высоким риском рака, предпочтительно из группы, состоящей из НРУ 31, 33, 35, 52, 58, или из группы, состоящей из 31, 35, 58.

Изобретение также относится к применению ВПЧ НРУ 16 в изготовлении лекарственного средства для предупреждения инфекции, вызванной одним или более чем одним типом из группы типов с высоким риском рака, предпочтительно из группы, состоящей из НРУ 31, 33, 35, 52, 58, или из группы, состоящей из 31, 35 и 58.

Изобретение также относится к применению ВПЧ НРУ 18 в предупреждении инфекции, вызванной одним или более чем одним типом из группы типов с высоким риском рака, предпочтительно из группы, состоящей из НРУ 45 и 59.

ВПЧ НРУ 16 по изобретению можно использовать в отсутствие ВПЧ любых других типов НРУ или можно использовать в комбинации с ВПЧ другого типа НРУ. Предпочтительно ВПЧ НРУ 16 используют в комбинации с ВПЧ НРУ 18.

ВПЧ НРУ 18 по изобретению можно использовать в отсутствие ВПЧ любых других типов НРУ или можно использовать в комбинации с ВПЧ другого типа НРУ. Предпочтительно ВПЧ НРУ 18 используют в комбинации с ВПЧ НРУ 16.

Предпочтительно ВПЧ НРУ 16, ВПЧ НРУ 18 и их комбинации используют для обеспечения защиты от индивидуальных онкогенных типов, предпочтительно типов с высоким риском рака, конкретно, типов НРУ 31, 33, 35, 39,45,51,52,56,58,59,66,68.

В дополнение к эффекту перекрестного иммунитета, предпочтительно иммуногенную композицию по изобретению, более предпочтительно комбинацию ВПЧ НРУ 16 и НРУ 18, используют в активной иммунизации взрослых и девушек-подростков от 10 лет и старше для предупреждения одного или более чем одного из следующего: инфекция НРУ-16 и НРУ-18, хроническая инфекция НРУ-16 и НРУ-18 и цервикальная неоплазия, ассоциированная с НРУ-16 и НРУ-18.

Предпочтительно применение иммуногенной композиции по изобретению используют для предупреждения цервикальной неоплазии, ассоциированной с инфекцией, вызванной другими (не НРУ 16, 18) онкогенными типами.

ВПЧ НРУ и способы получения ВПЧ хорошо известны в уровне техники. ВПЧ обычно конструируют из структурных белков Ь1 и, возможно, Ь2 вируса, см., например, XV О 9420137 и XVО 9405792. В настоящем изобретении можно использовать любые подходящие ВПЧ НРУ, которые обеспечивают перекрестный иммунитет, например, Ь1 или Ь1+Ь2 ВПЧ.

Предпочтительно ВПЧ представляют собой только Ь1 ВПЧ.

ВПЧ могут содержать полноразмерный белок Ь1.

Предпочтительно белок Ь1, используемый для образования ВПЧ, является процессированным белком Ь1. Предпочтительно при процессировании удаляется сигнал ядерной локализации. Предпочтительно процессирование представляет собой С-терминальное процессирование. Предпочтительно при Стерминальном процессировании удаляется менее 50 аминокислот, более предпочтительно менее 40 аминокислот. Если ВПЧ представляют собой ВПЧ НРУ 16, то предпочтительно при С-терминальном процессировании удаляется 34 аминокислоты из Ь1 НРУ 16. Если ВПЧ представляют собой ВПЧ НРУ 18, то предпочтительно при С-терминальном процессировании удаляется 35 аминокислот из Ь1 НРУ 18.

Процессированные белки Ь1 представляют собой достаточно функциональные производные белка Ь1. Функциональные производные белка Ь1 способны вызывать иммунный ответ (если необходимо, при применении подходящего адъюванта), этот иммунный ответ способен распознавать ВПЧ, состоящие из полноразмерного белка Ь1 и/или типа НРУ, из которого был получен белок Ь1.

ВПЧ по изобретению могут также содержать другие типы функциональных производных белков, включая мутанты полноразмерных или процессированных белков Ь1 НРУ, такие как делеционные, заме

- 4 009179 няющие и инсерционные мутанты. Подходящие производные также включают последовательности с оптимизированными кодонами. Белок Ь1 или производное может также быть слитым белком, таким как слияние белка Ь1 с Ь2 или с ранним белком. Белок Ь1 или функциональное производное белка способны образовывать ВПЧ, и образование ВПЧ может быть оценено посредством стандартных методик, таких как, например, электронная микроскопия и динамическое рассеяние лазерного излучения.

ВПЧ можно изготовить в любом подходящем клеточном субстрате, таком как дрожжевые клетки или клетки насекомых, например, бакуловирусные клетки, и методики получения ВПЧ хорошо известны в уровне техники, например, νθ 9913056 и И8 6245568 и ссылки в них, которые полностью включены здесь посредством ссылки.

Предпочтительно ВПЧ изготавливают путем методик разборки и повторной сборки, что может обеспечить более стабильные и/или однородные ВПЧ вируса папилломы. Например, МсСабйу с1 а1., 1998 ЮнапШабуе О18а88ешЫ1у апб К.еа88ешЫу οί Нитап РарШошауииз Туре 11 У1Ш8Йке Рагйс1е8 ίη νίίτο

1. νίΐΌΐοβ.ν 72(1):33-41, описывает разборку и повторную сборку ВПЧ из рекомбинантного Ь1 ΗΡν 11, очищенного из клеток насекомых с целью получения однородного препарата ВПЧ. В XVО 9913056 и И86245568 также описаны способы разборки/повторной сборки для изготовления ВПЧ ΗΡν.

Предпочтительно ВПЧ ΗΡν по изобретению изготавливают, как описано в νθ 9913056 или И8 6245568.

ВПЧ по изобретению можно объединять с адъювантом. Вакцины по изобретению могут содержать подходящий адъювант или иммуностимулятор, такой как детоксицированный липид А из любого источника и нетоксичные производные липида А, сапонины и другие реагенты, способные стимулировать ответ ТН1-типа, но не ограничиваются ими.

Давно известно, что энтеробактериальный липополисахарид (ЛПС) является мощным стимулятором иммунной системы, хотя его применение в адъювантах было ограничено вследствие его токсичных эффектов. Нетоксичное производное ЛПС, монофосфориллипид А (МРЬ), получаемое путем удаления коровой углеводной группы и фосфата от восстанавливающего конца глюкозамина, было описано ΚΛί е1 а1. (1986, 1шшипо1о§у апб 1шшипорйагшасо1о§у οί Ыас(ег1а1 епбоЮхпъ. Р1епиш РиЫ1. Согр., ΝΥ, р. 407419), и оно имеет следующую структуру:

СНз

Другой дектоксицированный вариант МРЬ получается при удалении ацильной цепи из положения 3 дисахаридного остова и называется 3-О-деацилированный монофосфориллипид А (30-МРБ). Он может быть очищен и получен способами, указанными в ОВ 2122204 В, в котором также раскрыто получение дифосфориллипида А и его 3-О-деацилированных вариантов.

Предпочтительной формой 30-МРБ является форма эмульсии, имеющая небольшой размер частиц, менее 0,2 мкм в диаметре, и способ ее изготовления раскрыт в νθ 94/21292. Водные препараты, содержащие монофосфориллипид А и поверхностно-активное вещество, описаны в νθ 9843670 А2.

Адъюванты, имеющие происхождение из бактериального липополисахарида, подлежащие приготовлению в виде композиций по настоящему изобретению, могут быть очищены и обработаны из бактериальных источников или в качестве альтернативы они могут быть синтетическими. Например, очищенный монофосфориллипид А описан К.1Ы1 е1 а1. 1986 (выше), и 3-О-деацилированный монофосфорил- или дифосфориллипид А, происходящий из 8а1шопе11а ер., описан в ОВ 2220211 и И8 4912094. Были описаны другие очищенные и синтетические липополисахариды (Нйдегз е1 а1., 1986, 1п1. АгсН. А11егду. 1шшипо1., 79(4):392-6; Нбдегз е1 а1., 1987, 1шшипо1о§у, 60(1):141-6; и ЕР 0549074 В1). Особенно предпочтительным адъювантом на основе бактериального липополисахарида является 30-МРБ.

Соответственно, производными ЛПС, которые могут быть использованы в настоящем изобретении, являются те иммуностимуляторы, которые похожи по структуре на таковые ЛПС, или МРЬ, или 3ΌМРЬ. В другом аспекте настоящего изобретения производные ЛПС могут представлять собой ацилиро

- 5 009179 ванный моносахарид, который является субфрагментом вышеупомянутой структуры МРЬ.

Сапонины описаны в: ЬасаШе-ОиЬо18, М. апб Уадпег Н. (1996, А гехчеху οί Шс Ью1одюа1 апб рйагшасо1од1са1 асИуШез οί зарошпз. Рйу1отебюше νοί. 2 рр. 363-386). Сапонины представляют собой стероидные или тритерпеновые гликозиды, широко распространенные в царствах растений и морских животных. Сапонины известны за счет образования коллоидных растворов в воде, которые пенятся при встряхивании, и за счет осаждения холестерина. Когда сапонины находятся около клеточных мембран, они формируют в мембране структуры, подобные порам, которые вызывают разрыв мембраны. Гемолиз эритроцитов представляет собой пример этого феномена, который является свойством определенных, но не всех, сапонинов.

Сапонины известны как адъюванты в вакцинах для системного введения. Адъювантную и гемолитическую активность конкретных сапонинов активно изучают в уровне технике (Гасай1е-ОиЬо18 апб Уадпег, выше). Например, 0ш1 А (полученный из коры южно-американского дерева 0ш11а)а 8ароиапа Мо1ша) и его фракции описаны в И8 5057540 и 8ароши5 аз \'ассше абрнюШ, Кепзй, С.К., Сгй Κ^ν Тйег Эгид Сатег 8уз1, 1996, 12 (1-2):1-55, и ЕР 0362279 В1. Структуры в форме частиц, называемые комплексами с иммуностимулирующими свойствами (18СОМ8), содержащие фракции Оиб А, являются гемолитическими и использовались в изготовлении вакцин (Могеш, В., ЕР 0109942 В1; XVО 96/11711; XVО 96/33739). Гемолитические сапонины 0821 и 0817 (очищенные при помощи ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) фракции Ош1 А) были описаны как мощные системные адъюванты, и способ их получения раскрыт в патенте США № 5057540 и ЕР 0362279 В1. Другие сапонины, которые применяли в исследованиях системной вакцинации, включают сапонины, полученные из других видов растений, таких как Оурзорйба и 8ароиапа (ВотГогб е! а1., Уассше, 10(9):572-577, 1992).

Усиленная система включает комбинацию нетоксичного производного липида А и производного сапонина, особенно комбинацию 0821 и 3П-МРЬ, как раскрыто в ХУО 94/00153, или менее реактогенную композицию, где 0821 погашен холестерином, как раскрыто в ХУО 96/33739.

Особенно мощный адъювантный препарат, включающий 0821 и 30-МРБ в эмульсии масло в воде, описан в ХУО 95/17210 и является предпочтительным препаратом.

Соответственно в одном воплощении настоящего изобретения предложена вакцина с адъювантом детоксицированным липидом А или нетоксичным производным липида А, более предпочтительно с адъювантом монофосфориллипидом А или его производным.

Предпочтительно вакцина дополнительно содержит сапонин, более предпочтительно 0821.

Предпочтительно препарат дополнительно содержит эмульсию масло в воде. В настоящем изобретении также предложен способ получения вакцинного препарата, включающий смешивание пептида Ь2 по настоящему изобретению вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом, таким как 3ΌМРЬ.

Дополнительные компоненты, которые предпочтительно присутствуют в вакцинном препарате с адъювантом по изобретению, включают неионные детергенты, такие как октоксинолы и полиоксиэтиленовые эфиры, как описано здесь, особенно ΐ-октилфеноксиполиэтоксиэтанол (Тгбоп Х-100) и полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат (Тетееи 80), и соли желчных кислот или производные холевой кислоты, как описано здесь, особенно дезоксихолат натрия или тауродезоксихолат. Таким образом, особенно предпочтительный препарат содержит 3Э-МРЕ Тгбоп Х-100, Тетееп 80 и дезоксихолат натрия, его можно объединять с препаратом антигена Ь2 для получения подходящей вакцины.

В одном предпочтительном воплощении настоящего изобретения вакцина содержит везикулярный адъювантный препарат, содержащий холестерин, сапонин и производное ЛПС. В этом отношении предпочтительный адъювантный препарат содержит однослойную везикулу, содержащую холестерин, имеющую липидный бислой, предпочтительно содержащий диолеоилфосфатидилхолин, где сапонин и производное ЛПС ассоциированы с липидным бислоем или внедрены в него. Более предпочтительно эти адъювантные препараты содержат 0821 в качестве сапонина и 30-МРБ в качестве производного ЛПС, при этом соотношение 0821: холестерин составляет от 1:1 до 1:100 мас./мас., наиболее предпочтительно 1:5 мас./мас. Такие адъювантные препараты описаны в ЕР 0822831 В, описание которого включено сюда посредством ссылки.

Подходяще вакцины по изобретению используют в комбинации с алюминием, и они соответственно адсорбируются или частично адсорбируются на алюминиевых адъювантах. Соответственно адъювант представляет собой соль алюминия, предпочтительно в комбинации с 3Ό МРЬ, такую как фосфат алюминия и 3Ό МРЬ. Гидроксид алюминия, возможно в комбинации с 3Ό МРЬ, также является предпочтительным.

Наиболее предпочтительной в настоящем изобретении является комбинация ВПЧ с солью алюминия или с солью алюминия + 3Ό МРЬ. Гидроксид алюминия является предпочтительным в качестве соли алюминия.

Вакцина может также содержать алюминий или алюминиевое соединение в качестве стабилизатора.

Вакцины по изобретению могут быть предоставлены посредством любого из множества путей, таких как пероральный, местный, подкожный, слизистый (обычно внутривлагалищный), внутривенный, внутримышечный, интраназальный, сублингвальный, интрадермальный и посредством суппозитория.

- 6 009179

Вакцина возможно может также быть изготовлена в виде препарата или введена совместно с другими антигенами НРУ, такими как ранние антигены или не-ΗΡν антигены. Соответственно эти не-НРУ антигены могут обеспечивать защиту от других заболеваний, наиболее предпочтительно венерических заболеваний, таких как вирус простого герпеса, вирус Эпштейна-Барра (ЕВУ), хламидии и вирус иммунодефицита человека (ВИЧ). Авторы изобретения особенно предпочитают, чтобы вакцина содержала дИ Н8У (11сгрс5 81шр1ех νίπ.15. вирус простого герпеса) или его процессированный фрагмент. В этом случае вакцина обеспечивает защиту и от НРУ, и от Н8У.

Дозировка компонентов вакцины будет различаться в зависимости от состояния, пола, возраста и массы пациента, способа введения и НРУ вакцины. Количество также может различаться в зависимости от числа типов ВПЧ. Подходяще осуществляют доставку количества вакцины, подходящего для генерации иммунологически защитного ответа. Подходяще каждая доза вакцины содержит 1-100 мкг каждой ВПЧ, предпочтительно 5-80 мкг, более предпочтительно 5-30 мкг каждой ВПЧ, наиболее предпочтительно 5-20 мкг каждой ВПЧ, особенно предпочтительно 5, 6, 10, 15 или 20 мкг.

Для всех вакцин по изобретению предпочтительно, чтобы вакцину применяли для вакцинации девушек-подростков в возрасте 10-15, предпочтительно 10-13 лет. Вакцину также можно вводить женщинам после ненормального РАР мазка (мазка по Папаниколау) или после оперативного вмешательства после удаления поражения, вызванного НРУ, или тем, которые имеют серонегативную реакцию и ДНК негативную реакцию на раковые типы НРУ.

Предпочтительно вакцину доставляют в 2 или 3 дозовом режиме, например 0, 1 месячном режиме или 0, 1 и 6 месячном режиме соответственно.

Подходяще режим вакцинации включает бустер-инъекцию через 5-10 лет, предпочтительно 10 лет.

Предпочтительно вакцина представляет собой жидкий вакцинный препарат, хотя вакцина может быть лиофилизована и повторно восстановлена перед введением.

Предпочтительно иммуноген, используемый в настоящем изобретении (ВПЧ НРУ 16 или НРУ 18), используют в качестве вакцины, и он может быть включен в вакцину с использованием соответствующих эксципиентов. Таким образом, изобретение в особенности относится к применению вакцины НРУ 16 или НРУ 18, такой как вакцина только из Ь1, в предупреждении инфекции НРУ.

Настоящее изобретение проиллюстрировано здесь со ссылкой на следующий неограничивающий пример.

Пример. Здоровые женщины в возрасте между 15 и 25 годами были иммунизированы смесью ВПЧ НРУ 16 и НРУ 18 Ь1. Женщины в момент включения имели: 1) серонегативную реакцию на НРУ 16 и НРУ 18; 2) негативную реакцию на высокий риск инфекции НРУ шейки матки (определено путем НРУ ПЦР; 3) 6 или менее сексуальных партнеров в течение жизни и 4) нормальные РАР мазки.

Смесь содержала на 0,5 мл дозу 20 мкг ВПЧ НРУ-16 Ь1, 20 мкг ВПЧ НРУ-18 Ь1 и 500 мкг гидроксида алюминия и 50 мкг 3Ό МРЬ в качестве адъюванта. Группе плацебо делали инъекции 500 мкг одного гидроксида алюминия.

Оценивали эффективность вакцины (У.Е.) в отношении типов НРУ с высоким риском рака, при этом У.Е. представляет собой улучшение защиты против инфекции, осуществляемой вакциной, по сравнению с группой плацебо, выраженное в %.

Перекрестный иммунитет оценивали путем определения присутствия нуклеиновой кислоты, специфической для разных онкогенных типов, среди вакцинируемых и в контрольной группе. Определение проводили, используя методики, описанные в \УО 03014402 и ссылках в ней, особенно для неспецифической амплификации ДНК НРУ и последующего определения типов ДНК с использованием системы ЫРА, как описано в XVО 99/14377 и в К1е1ег е! а1., Цоигпа1 οί Сйшса1 М1сгоЫо1оду (1999), 37(8): 25082517], которые полностью включены сюда посредством ссылки.

Однако для определения ДНК НРУ в образце может быть использован любой подходящий способ, такой как типоспецифическая ПЦР с использованием праймеров, специфичных для каждого целевого типа НРУ. Подходящие праймеры известны специалистам или могут быть легко сконструированы при условии, что известны последовательности онкогенных типов НРУ.

Была оценена эффективность вакцины против инфекций, вызванных всеми 12 типами с высоким риском рака, типами, филогенетически родственных НРУ 16 (группы 31, 35 и 58; 31, 33, 35, 52 и 58) и типами, филогенетически родственных НРУ 18 (45 и 59).

Первичный анализ проводили на ΙΤΤ (1п1еп1юп То Тгеа!, группе с намерением лечения, представляющей собой всех пациентов, которые получали по меньшей мере одну дозу вакцины). Эти данные показаны в табл. 1.

Результаты, представленные в табл. 2 и 3, относятся к группе АТР (Ассогбшд То Рго!осо1, соответствующие протоколу) для тех пациентов, которые соответствовали всем критериям исследования. Табл. 2 представляет собой анализ средних точек, причем данные были получены от всех пациентов в момент времени, когда по меньшей мере для 50% группы прошло 18 месяцев после их первой вакцинации. Табл. 3 предоставляет конечные результаты, причем все данные были получены от субъектов через 18 месяцев после первой вакцинации (месяц 0). В группе АТР все пациенты получали 3 дозы вакцины в 0, 1 и 6 месяцы и имели серонегативную реакцию на 6 месяце.

- 7 009179

Как демонстрируют данные, представленные в табл. 1, иммунизация смесью ВПЧ НРУ 16 и НРУ 18 обеспечила явный перекрестный иммунитет к другим типам НРУ. На этой точке размеры образцов слишком малы для получения точного статистического анализа, но данные демонстрируют положительную тенденцию и свидетельствуют о том, что иммунизация ВПЧ НРУ 16 и НРУ 18 является эффективной против инфекции, вызванной другими типами НРУ.

Это было подтверждено в ходе исследования.

Табл. 2 демонстрирует, что НРУ 16 и НРУ 18 обеспечивают статистически значимый перекрестный иммунитет к группе типов с высоким риском рака 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68.

Табл. 3 демонстрирует, что кроме типов, родственных НРУ-18 (которые демонстрируют очень сильную тенденцию), имеется статистически значимый перекрестный иммунитет к группам: НРУ 31, 35, 58; НРУ 31, 33, 35, 52, 58, и 12 проанализированных типов с высоким риском (не НРУ-16/18).

Таблица 1

Проанализированные типы НРУ	Число инфицированных женщин (группа вакцины)	% инфицированных женщин (группа вакцины) = А	Число инфицированных женщин (группа плацебо)	% инфицированных женщин (группа плацебо) =В	% эффективности вакцины 1-(А/В)х100, скорректиованное на относительный размер группы вакцины и плацебо	95% доверительные пределы нижний предел	95% доверительные пределы - вехний предел	Р
НРУ 31,35, 58	5	1.1	11	2.4	55,1	-29,1	84,4	0,127
НРУ 31, 33, 35, 52, 58	17	3,8	24	5.4	30,3	-29,7	62,6	0,252
НРУ 45, 59	3	0,7	6	1.3	50.6	-97,7	87,6	0,309
НРУ 31. 33. 35. 39, 45. 51, 52, 56. 58, 59. 66, 68	27	6,3	40	9.4	34,6	-6,5	59,9	0,086

Образцы отбирали у пациентов на 9, 12, 15 и 18 месяцах и тестировали на инфекцию НРУ, вызванную типами, указанными выше.

Табл. 2 - эффективность вакцины в предупреждении случаев гетерологичных инфекций после трех доз.

Таблица 2 Эффективность вакцины против инфекции, вызванной типами, филогенетически родственными НРУ-16, типами, филогенетически родственными НРУ-18, типами, филогенетически родственными НРУ-16 и/или НРУ-18, и всеми типами с высоким риском, исключая НРУ-16 и НРУ-18 - группа АТР (месяцы 6-18)

Тип инфекции	Степень заболевания	Эффективность вакцины
Вакцина	Плацебо
N	η	АН	N	η	АК	%	95% С1	р- величина
Родственные НРУ-16	433	12	2,8	438	24	5,5	49,4	0,2 74,4	0,060
Родственные НРУ-16*	423	29	6,9	423	46	10,9	37,0	1,6 59,6	0,052
Родственные НРУ-18	442	9	2,0	449	16	3,6	42,9	-27,9 74,5	0,223
Родственные НРУ-16/18	433	21	4,9	438	41	9,4	48,2	13,8 68,9	0,012
Родственные НРУ-16/18*	423	34	8,0	423	56	13,2	39,3	9,0 59,5	0,019
С высоким риском *’	385	53	13,8	386	88	22,8	39,6	17,7 55,7	0,001

N = число субъектов в специфической группе η = число субъектов со случаем инфекции НРУ

АВ = Степень заболевания = η/Ν

95% С1 = 95% доверительный интервал нижний предел = 1-ехр(1од(агу/агр)+1,96* 5ςΠ(1/ην-1/Νν+1/ηρ-1/Νρ)) верхний предел = 1-ехр(1од(агу/агр)-1,96* 5ςΠ(1/ην-1/Νν+1/ηρ-1/Νρ)) когда число случаев в группе вакцины = 0:

нижний предел* = 1-ехр(1од(агу*/агр*)+1,96* 5ςΠ(1/(ην+Ο.5)-1/(Νν+Ο.5)+1/(ηρ+Ο.5)-1/(Νρ+Ο.5))) верхний предел* = 1-ехр(1од(агу*/агр*)-1,96* 8дп(1/(иу+0,5)-1/Щу+0,5)+1/(ир+0,5)-1/Щр+0,5))), где агу = степень заболевания среди реципиентов вакцины агр = степень заболевания среди реципиентов плацебо

- 8 009179 ην = число случаев среди реципиентов вакцины

Νν = число случаев и не случаев среди реципиентов вакцины пр = число случаев среди реципиентов плацебо

Νρ = число случаев и не случаев среди реципиентов плацебо

Родственные НРУ-16: филогенетически родственные НРУ-16 типы 35, 31, 58 без рассмотрения других типов НРУ

Родственные НРУ-16*: филогенетически родственные НРУ-16 типы 35, 31, 58, 33, 52 без рассмотрения других типов НРУ

Родственные НРУ-18: филогенетически родственные НРУ-18 типы 45, 59 без рассмотрения других типов НРУ

Родственные НРУ-16 и/или НРУ-18: филогенетически родственные НРУ-16 и/или НРУ-18 типы 35, 31, 58, 45, 59 без рассмотрения других типов НРУ

Родственные НРУ-16 и/или НРУ-18*: филогенетически родственные НРУ-16 и/или НРУ-18 типы

35, 31, 58, 33, 52, 45, 59 без рассмотрения других типов НРУ ** = Типы с высоким риском, исключая НРУ-16 и НРУ-18

Таблица 3

Проанализированные типы НРУ	Общее число субъектов с доступной информацией на группу	Число инфицированных женщин (группа вакцины)	% инфицированных женщин (группа вакцины) = А	Число инфицированных женщин (группа плацебо)	% инфицированных женщин (группа плацебо) =В	% эффективности вакцины 1 — (А/В) х 100, ско рректиро ван ное на относительный размер группы вакцины и плацебо	95% доверительные пределы - нижний предел	95% доверительные пределы верхний предел	Р
ΗΡν31,35, 58	412	11	2,7	26	6,3	57,9	15,9	78,9	0,012
НРУ 31.33. 35, 52, 58	403	28	6.9	48	12,2	43,0	11.0	63,5	0,015
НРУ 45, 59	421	10	2,4	15	3.6	33,5	-46,3	69,8	0,319
НРУ 31т33. 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66. 68	368	58	15,8	90	25,3	37,7	16.2	53,6	0,002

Образцы отбирали у пациентов на 18 месяце и тестировали на инфекцию НРУ, вызванную типами, указанными выше.

Claims (18)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Применение композиции, содержащей вирусоподобные частицы (ВПЧ) вируса папилломы человека (НРУ) 16 и НРУ 18, в изготовлении лекарственного средства для предупреждения инфекции и/или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы онкогенных типов НРУ, причем из группы исключены типы НРУ 16 и НРУ 18.
2. 2. Применение композиции по п.1 для предупреждения инфекции и/или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы типов НРУ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.
3. 3. Применение по п.2 для предупреждения инфекции и/или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы НРУ 31, НРУ 33, НРУ 35, НРУ 52 и НРУ 58.
4. 4. Применение по п.3 для предупреждения инфекции и/или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы НРУ 31, НРУ 35 и НРУ 58.
5. 5. Применение по любому из пп.1-4, где степень предупреждения определяют путем сравнения вакцинированной популяции с невакцинированной популяцией (группой плацебо) относительно всех членов группы типов НРУ.
6. 6. Применение по любому из пп.1-5, где ВПЧ НРУ объединены с адъювантом.
7. 7. Применение по п.6, где адъювант представляет собой комбинацию соли алюминия и 3-Одеацилированного монофосфориллипида А (30-МРБ).
8. 8. Применение по п.7, где адъювант представляет собой комбинацию гидроксида алюминия и 3ΌМРЬ.
9. 9. Применение по п.8, где композиция содержит 20 мкг Ь1 ВПЧ НРУ 16 и 20 мкг ВПЧ НРУ 18, а адъювант содержит 500 мкг гидроксида алюминия и 50 мкг 3П-МРЬ.
10. 10. Применение по любому из пп.1-9, где ВПЧ содержат белок Ь1 или его иммуногенный фрагмент, но не белок Ь2.
11. 11. Способ индукции иммунного ответа против одного или более чем одного типа НРУ из группы онкогенных типов НРУ, причем из группы исключены типы НРУ 16 и НРУ 18, который включает введение субъекту композиции, содержащей ВПЧ НРУ 16 и ВПЧ НРУ 18.
12. 12. Способ предупреждения инфекции и/или заболевания, вызываемых одним или более чем одним типом НРУ из группы онкогенных типов НРУ, причем из группы исключены типы НРУ 16 и НРУ 18, который включает введение субъекту композиции, содержащей ВПЧ НРУ 16 и ВПЧ НРУ 18.

    - 9 009179
13. 13. Способ по п.11 или 12, где типы НРУ выбраны из группы, состоящей из типов 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68.
14. 14. Способ по любому из пп.11-13, где типы НРУ выбраны из группы, состоящей из НРУ типов НРУ 31, НРУ 33, НРУ 35, НРУ 52 и НРУ 58.
15. 15. Способ по любому из пп.11-14, где типы НРУ выбраны из группы, состоящей из НРУ 31, НРУ 35 и НРУ 58.
16. 16. Способ по любому из пп.11-15, где композиция дополнительно содержит адъювант.
17. 17. Способ по п.16, где адъювант содержит соль алюминия и 3Б-МРБ.
18. 18. Способ по п.17, где соль алюминия представляет собой гидроксид алюминия.