MXPA05006764A

MXPA05006764A - Vacuna vlp l1 del vph-16 y -18.

Info

Publication number: MXPA05006764A
Application number: MXPA05006764A
Authority: MX
Inventors: Anne Cecile Wettendorf Martine
Original assignee: Glaxosmithkline Biolog Sa
Priority date: 2002-12-20
Filing date: 2003-12-18
Publication date: 2005-09-08
Also published as: IS7885A; DK1572233T3; EA009179B1; AU2003293942A1; MY144492A; CY1111552T1; CA2510457C; EA200500834A1; KR20120123616A; AR042530A1; PL377710A1; BR0317544A; EP1572233B1; NZ540811A; CA2510457A1; ATE503492T1; AU2003293942B2; KR20120118087A; NO20052846L; BE2015C069I2

Abstract

La invencion se refiere al uso de VLPs del VPH 16 y del VPH 18 para proporcionar proteccion cruzada contra la infeccion y/o enfermedad por otros tipos del VPH.

Description

VACUNA VLP L1 DEL VPH-16 Y -18 La presente invención se refiere a partículas tipo viroides (VLPs) del virus del papiloma humano (VPH) y a sus usos en medicina, en particular a proporcionar protección contra la infección y/o enfermedad provocada por tipos heterólogos del VPH.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los virus dei papiloma son pequeños virus tumorales de ADN, que son altamente específicos de especie. Hasta la fecha, se han descrito más de 100 genotipos individuales del virus del papiloma humano (VPH). Los VPH son generalmente específicos de piel (por ejemplo VPH-1 y -2) o de superficies mucosas (por ejemplo VPH-6 y -1 1 ) y habitualmente provocan tumores benignos (verrugas) que persisten durante varios meses o años. Tales tumores benignos pueden ser preocupantes para los individuos afectados pero tienden a no ser potencialmente mortales, con algunas excepciones. Algunos VPH están asociados también a cánceres, conocidos como tipos oncógenos del VPH. La asociación positiva más fuerte entre un VPH y el cáncer humano es la que existe entre el VPH-16 y el VPH-18 y el carcinoma de cuello uterino. El cáncer de cuello uterino es el proceso maligno más común en los países en vías de desarrollo, dándose aproximadamente 500.000 casos nuevos en el mundo cada año. Otros VPH de interés particular con respecto al cáncer son los tipos 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66 y 68. Se han sugerido partículas viroides (VLPs) del VPH como vacunas potenciales para el tratamiento del VPH. Los estudios en animales han demostrado que las VLP no producen protección cruzada contra la infección por otros tipos de VPH - véase, por ejemplo Suzich, J. A., y cois. , Proc Nati Acad Sci, 92: 1 1553-1 1557, 1995, y Breitburd, Seminars in Cáncer Biology, vol. 9, 1999, páginas 431 - 445. Existe todavía la necesidad de una vacuna que proteja contra múltiples tipos de VPH. La presente invención responde a esta necesidad.

BREVE DESCRI PCIÓN DE LA INVENCIÓN En un primer aspecto, la presente invención se refiere al uso de una mezcla que comprende VLPs del VPH 16 y del VPH 18 en la prevención de la infección o enfermedad provocada por uno o más del grupo de tipos oncógenos del VPH , excluyendo los tipos 16 y 18. La invención se refiere también al uso de una mezcla que comprende VLPs del VPH 16 y del VPH 18 en la preparación de un medicamento para la prevención de la infección o enfermedad provocada por uno o más del grupo de tipos del VPH oncógenos, excluyendo los tipos 16 y 18. En un segundo aspecto, la invención se refiere al uso de una mezcla que comprende VLPs del VPH 16 y del VPH 18 en la prevención de la infección o enfermedad provocada por uno o más del grupo de tipos del VPH 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. La invención también se refiere al uso de una mezcla de VLPs del VPH 16 y del VPH 18 en la preparación de un medicamento para la prevención de la infección o enfermedad provocada por uno o más de los tipos del VPH del grupo 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. En un tercer aspecto la presente invención se refiere al uso de una VLP del VPH 16 en la prevención de la infección o enfermedad provocada por uno o más del grupo de tipos del VPH 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. La invención también se refiere al uso de una VLP del VPH 16 en la preparación de un medicamento para la prevención de la infección o enfermedad provocada por uno o más del grupo de tipos del VPH 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. En un cuarto aspecto la presente invención se refiere al uso de una VLP del VPH 1 8 en la prevención de la infección o enfermedad provocada por uno o más del grupo de tipos del VPH 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. La invención también se refiere al uso de una VLP del VPH 1 8 en la preparación de un medicamento para la prevención de la infección o enfermedad provocada por uno o más de los tipos del VPH del grupo 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. De forma más particular, la invención se refiere a un método para inducir una respuesta inmune contra uno o más tipos del VPH seleccionados del grupo constituido por todos los tipos cancerosos oncógenos excluyendo los tipos 16 y 1 8, comprendiendo el método la administración a un sujeto de una composición que comprende una VLP del VPH 16. Se prefiere un método en el que los tipos del VPH se seleccionan del grupo constituido por los tipos 18, 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66 y 68. También se prefiere un método para inducir una respuesta inmune contra uno o más de los tipos del VPH seleccionados del grupo constituido por VPH31 , VPH33, VPH35, VPH52 y VPH58. Lo más preferido es un método para inducir una respuesta inmune contra uno o más de los tipos del VPH seleccionados del grupo constituido por VPH31 , VPH35 y VPH58. En otra modalidad, la composición de utilidad en el método comprende además una VLP del VPH 18 y/o un adyuvante. Todavía en otra modalidad, la respuesta inmune que se induce da como resultado la prevención de la infección por los tipos del VPH que se listan. En una modalidad adicional, la invención se refiere a un método para inducir una respuesta inmune contra uno o más tipos del VPH seleccionados del grupo constituido por todos los tipos cancerosos oncógenos excluyendo los tipos 16 y 18, comprendiendo el método la administración a un sujeto de una composición que comprende una VLP del VPH 18. Se prefiere un método para inducir una respuesta inmune contra uno o más de los tipos del VPH seleccionados del grupo constituido por 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66 y 68, comprendiendo el método la administración a un sujeto de una composición que comprende una VLP del VPH 18. Se prefiere un método para inducir una respuesta inmune contra uno o más de los tipos del VPH seleccionados del grupo constituido por VPH45 y VPH58. En otra modalidad, la composición de utilidad en el método comprende además una VLP del VPH 16 y/o un adyuvante. Todavía en otra modalidad, la respuesta inmune que se induce da como resultado la prevención de la infección por los tipos del VPH que se listan. Se prefiere un método como se describe anteriormente, en el que se induce una respuesta inmune contra cualquiera de los tipos 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 ó 12 del VPH de los grupos específicos identificados, (según sea apropiado para el tamaño del grupo preferido).

DESCRIPCIÓN DETALLADA En la presente invención los inventores han encontrado sorprendentemente que el uso de la VLP del VPH 16 y del VPH 18 proporciona protección cruzada contra la infección por uno o más de los grupos de tipos oncógenos del VPH (excluyendo los tipos 16 y 18), siendo los tipos oncógenos aquellos tipos capaces de provocar cáncer. El grupo de tipos oncógenos comprende o está constituido por los tipos 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 68, 73, 82, 26, 53, y 66. En particular, el uso de VLP del VPH 16 y del VPH 18 proporciona protección cruzada contra la infección y lo enfermedad provocada por el grupo de tipos del VPH 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, y 68, denominado en lo sucesivo el grupo de 'tipos cancerosos de alto riesgo'. Se ha identificado la protección contra el grupo completo de tipos cancerosos de alto riesgo, y contra ciertos tipos específicos y combinaciones de tipos. El efecto se añade al efecto protector de 'homólogos' observado contra VPH 16 y VPH 18 mediante el uso de VLP del VPH 16 y del VPH 18 respectivamente. Como tales, pueden usarse VLP del VPH 16 y VLP del VPH 1 8 tanto en una vacuna contra el VPH 16, el VPH 1 8 como contra otros tipos del VPH. La protección cruzada en la presente memoria se considera que significa que la incidencia de la infección para un grupo de tipos oncógenos del VPH (siendo la infección probable o persistente) y/o enfermedad oncógena provocada por la infección por VPH es menor en un grupo de individuos vacunados con VLP de VPH 16 y/o 18, preferentemente los tipos 16 y 18, que en un grupo no vacunado. En la presente invención no se requiere la protección cruzada completa contra un tipo, o grupo de tipos, de hecho, cualquier nivel de protección cruzada proporciona un beneficio. Preferentemente, el nivel de protección cruzada observado es tal que el grupo vacunado tiene una infección y/o enfermedad menor en un 5% que un grupo comparable no vacunado, más preferentemente una infección y/o enfermedad hasta un 10%, hasta un 15%, hasta un 20%, hasta un 25%, hasta un 30%, hasta un 35%, hasta un 40%, hasta un 45%, hasta un 50%, hasta un 55%, hasta un 60%, hasta un 65% hasta un 70%, hasta un 80%, hasta un 90% o incluso hasta un 100% menor. La protección cruzada puede evaluarse detectando la presencia de ácidos nucleicos específicos para diversos tipos oncógenos en los vacunados y el grupo de control. La detección puede llevarse a cabo, por ejemplo, usando técnicas como las descritas en WO03014402, y las referencias que en él se incluyen, en particular para la amplificación no específica de ADN del VPH y la detección subsiguiente de los tipos de ADN usando un sistema LiPA como se describe en WO 99/14377, y en Kleter y cois. , [Journal of Clinical Microbiology (1999), 37 (8): 2508-2517], cuyo contenido completo se incorpora a la presente memoria como referencia. Sin embargo, puede usarse cualquier método adecuado para la detección de ADN del VPH en una muestra, tal como la PCR específica de tipo usando cebadores específicos para cada tipo del VPH de interés. Los cebadores adecuados son conocidos por los expertos en la materia, o pueden construirse fácilmente dado que se conocen las secuencias de los tipos oncógenos del VPH. De forma adecuada la protección cruzada se observa en la población femenina, preferentemente en mujeres que son seronegativas para la infección por el VPH, o seronegativas para el VPH 16 y 18, preferentemente mujeres adolescentes antes de comenzar la actividad sexual. La protección cruzada (como se evalúa por la protección observada en un grupo vacunado comparado con un grupo de control) se observa preferentemente contra uno cualquiera de los tipo oncógenos distintos de 16 ó 18, por ejemplo uno cualquiera del grupo de tipos cancerosos de alto riesgo 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66 ó 68 o, colectivamente, grupos de tipos cancerosos de alto riesgo tales como cualquiera de los tipos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ó 1 1 , o de hecho todos los tipos cancerosos de alto riesgo. Específicamente se contemplan todas las combinaciones posibles de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 1 0 y 1 1 de los tipos cancerosos de alto riesgo, y como tal en la presente memoria hay diversos 'grupos' diferentes de tipos de VLP individualizados, para los que puede analizarse el nivel de protección cruzada en comparación con un grupo tratado con placebo. Se prefiere el uso de VLP del VPH 16 y/o del VPH 18 para proporcionar prevención contra la infección por cualquiera de tales grupos de tipos del VPH. De forma adecuada la presente invención proporciona protección cruzada contra la infección y/o enfermedad por los siguientes grupos preferidos de tipos del VPH: A el grupo que comprende uno o más de los tipos del VPH 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. B el grupo del enunciado A que comprende el tipo 31 y uno o más de los tipos 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. C el grupo del enunciado A o B que comprende el tipo 33 y uno o más de los tipos 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. D el grupo de los enunciados A-C que comprende el tipo 35 y uno o más de los tipos 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. E el grupo de los enunciados A-D que comprende el tipo 39 y uno o más de los tipos 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. F el grupo de los enunciados A-E que comprende el tipo 45 y uno o más de los tipos 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68.

G el grupo de los enunciados A-F que comprende el tipo 51 y uno o más de los tipos 52, 56, 58, 59, 66, 68. H el grupo de los enunciados A-G que comprende el tipo 52 y uno o más de los tipos 56, 58, 59, 66, 68. I el grupo de los enunciados A-H que comprende el tipo 56 y uno o más de los tipos 58, 59, 66, 68. J el grupo de los enunciados A-l que comprende el tipo 58 y uno o más de los tipos 59, 66, 68. K el grupo de los enunciados A-J que comprende el tipo 59 y uno o más de los tipos 66, 68. L el grupo de los enunciados A-K que comprende el tipo 66 y uno o más de los tipos 68. En particular los inventores han determinado que, en una población, un grupo tratado con placebo tenía posibilidades un 38% mayores de ser infectada con, al menos, uno del grupo de tipos cancerosos de alto riesgo en comparación con las mujeres vacunadas con una vacuna que comprende VLP de los VPH 16 y 18. Así la invención se refiere en particular al uso de una composición que comprende VLP de los VPH 16 y 18 en la prevención de la infección en una población por uno o más de los tipos cancerosos de alto riesgo. Preferentemente, la composición es hasta o al menos un 20% más efectiva que un placebo en la prevención de la infección en una población por el grupo constituido por tipos cancerosos de alto riesgo, preferentemente hasta o al menos un 25 % más efectiva, lo más preferentemente hasta o al menos un 30% más efectiva, de forma adecuada hasta o al menos un 34% más efectiva en la prevención de la infección, lo más preferentemente hasta o al menos un 38% más efectiva en la prevención de infección. Preferentemente, la presente invención se refiere a una composición que comprende VLP del VPH 16 y del VPH 18 en la preparación de un medicamento para la prevención de la infección por uno o más de los VPH 31 , 33, 35, 52 y 58. Los inventores han determinado que, en una población, un grupo tratado con placebo tenía posibilidades un 43% mayores de ser infectado con, al menos, uno de los tipos del VPH del grupo 31 , 33, 35, 52 y 58 en comparación con las mujeres vacunadas con VLP del VPH 16 y del VPH 18. De esta manera, la invención se refiere en particular al uso de una composición que comprende VLPs del VPH 16 y del VPH 1 8 para la prevención de la infección en una población por uno o más de VPH 31 , 33, 35, 52 y 58. Preferentemente, la combinación es hasta o al menos un 1 0% más efectiva que un placebo en la prevención de la infección en una población por el grupo constituido por los VPH 31 , 33, 35, 52 ó 58, más preferentemente hasta o al menos un 15 % efectiva, más preferentemente hasta o al menos un 20% efectiva, 25% efectiva, 30% efectiva o de forma adecuada hasta o al menos un 37% efectiva en la prevención de infección. Preferentemente, la presente invención se refiere a una composición que comprende VLPs del VPH 16 y del VPH 18 en la preparación de un medicamento para la prevención de la infección por uno o más de los VPH 31 , 35 y 58. Los inventores han determinado que, en una población, un grupo tratado con placebo tenía posibilidades un 58% mayores de ser infectado con, al menos, uno del grupo de tipos del VPH 31 , 35 y 58 en comparación con mujeres vacunadas con VLPs del VPH 16 y del VPH 18. De esta manera, la invención se refiere en particular al uso de una composición que comprende VLPs del VPH 16 y del VPH 1 8 en la prevención de la infección en una población por uno o más de VPH 31 , 35 y 58. Preferentemente, la composición es hasta o al menos un 15% más efectiva que un placebo en la prevención de la infección en una población por el grupo constituido por VPH 31 , 35 ó 58, preferentemente hasta o al menos un 20% efectiva, preferentemente hasta un 25% efectiva, hasta un 30%, hasta un 35%, hasta un 40%, hasta 45%, hasta 49%, hasta 55% o incluso más efectiva, de forma adecuada hasta o al menos un 58% efectiva en la prevención de la infección. Preferentemente, la presente invención se refiere a una composición que comprende VLPs del VPH 16 y del VPH 18 en la preparación de un medicamento para la prevención de la infección por uno o más de VPH 45 y 59. En particular los inventores han determinado que, en una población, un grupo tratado con placebo tenía posibilidades un 33% mayores de ser infectado con, al menos, uno (o más) del grupo de tipos 45 y 59 del VPH en comparación con las mujeres vacunadas con una vacuna que comprende VLP de los VPH 16 y 18. Así la invención se refiere en particular al uso de una composición que comprende VLPs de los VPH 16 y 18 en la prevención de la infección en una población por uno o más de VPH 45 y VPH 59. Preferentemente, la composición es hasta o al menos un 20% más efectiva que un placebo en la prevención de la infección en una población por el grupo constituido por VPH 45 y VPH 59, preferentemente hasta o al menos un 25% más efectiva, más preferentemente hasta un 30% más efectiva, más preferentemente hasta o al menos un 33 % efectiva en la prevención de la infección. Preferentemente, la presente invención se refiere a un método para la prevención de la infección por el VPH en una población, en la que la vacunación con VLPs del VPH 16, VLP del VPH 18 o una mezcla de ellas proporciona protección cruzada contra la infección por los siguientes grupos de tipos del VPH: todos los tipos oncógenos del VPH (excluyendo los tipos 16 y 18), cualquiera de los grupos identificados en los párrafos A-L anteriores, el grupo de tipos cancerosos de alto riesgo, el grupo de los VPH 31 , 35, 58; el grupo de los VPH 31 , 33, 35, 52, 58; el grupo de los VPH 45 y 59, siendo la protección lograda contra todos los miembros del grupo colectivamente mayor que la que se observa con un placebo. Preferentemente, la composición que comprende VLPs del VPH 16 y del VPH 18 proporciona protección cruzada contra la infección por, al menos, uno de VPH 35 y VPH 52. Preferentemente, la composición de VLPs del VPH 16 y del VPH 18 también proporciona protección contra la infección por VPH 16 y/o VPH 18, preferentemente ambos VPH 16 y VPH 18. La invención también se refiere al uso de una VLP del VPH 16 en la prevención de la infección por uno o más del grupo de tipos cancerosos de alto riesgo, preferentemente el grupo constituido por VPH 31 , 33, 35, 52, 58, o el grupo constituido por 31 , 35, 58. La invención también se refiere al uso de una VLP del VPH 16 en la preparación de un medicamento para la prevención de la infección por uno o más del grupo de tipos cancerosos de alto riesgo, preferentemente el grupo constituido por los VPH 31 , 33, 35, 52, 58, o el grupo constituido por tipos 31 , 35 y 58 del VPH. La invención también se refiere al uso de VLP del VPH 18 en la prevención de la infección por uno o más del grupo de tipos cancerosos de alto riesgo, preferentemente el grupo constituido por los VPH 45 y 59. La VLP del VPH 16 de la invención puede usarse en ausencia de cualquier otro tipo de VLP del VPH , o puede usarse en combinación con otro tipo de VLP del VPH. Preferentemente, la VLP del VPH 16 se usa en combinación con una VLP del VPH 18. La VLP del VPH 18 de la invención puede usarse en ausencia de cualquier otro tipo de VLP del VPH, o puede usarse en combinación con otro tipo de VLP del VPH. Preferentemente, la VLP del VPH 18 se usa en combinación con una VLP del VPH 16. Preferentemente, las VLPs del VPH, VLP del VPH 18 y sus combinaciones se usan para proporcionar protección contra tipos oncógenos individuales, preferentemente los tipos cancerosos de alto riesgo, de forma específica los tipos 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68 del VPH. Además del efecto de protección cruzada, preferentemente la composición inmunógena de la invención, lo más preferentemente una combinación VLP de VPH 16 y VPH 18, se usa en la inmunización activa de mujeres adultas y adolescentes a partir de los 1 0 años de edad en adelante para prevenir uno o más de: infección por VPH-16 y VPH-18, infección por VPH-16 y VPH-18 persistente y neoplasia de cuello uterino asociada a VPH-16 y VPH-1 8. Preferentemente, el uso de la composición inmunógena de la invención se usa para evitar la neoplasia de cuello uterino asociada a la infección por otros tipos oncógenos (distintos de VPH 16, 18). Las VLPs de VPH y los métodos para la producción de VLP son notorios en la técnica. Las VLPs típicamente se construyen a partir de las proteínas estructurales L1 y opcionalmente L2 del virus, véase por ejemplo en WO9420137 y WO9405792. En la presente invención puede usarse cualquier VLP del VPH adecuada que proporcione protección cruzada, tal como una VLP de L1 o L1 + L2. Preferentemente, la VLP es una VLP sólo en L1 . La VLP puede comprender la proteína L1 de longitud total. Preferentemente, la proteína L1 usada para formar la VLP es una proteína L1 truncada. Preferentemente, el truncado elimina una señal de localización nuclear. Preferentemente, el truncado es un truncado en el extremo C. Preferentemente, el truncado en el extremo C elimina menos de 50 aminoácidos, más preferentemente menos de 40 aminoácidos. Cuando la VLP es una VLP del VPH 16 entonces preferentemente el truncado del extremo C elimina 34 aminoácidos de L1 del VPH 16. Cuando la VLP es una VLP del VPH 18 entonces preferentemente el truncado del extremo C elimina 35 aminoácidos de L1 del VPH 18. Las proteínas L1 truncadas son, de forma adecuada, derivados funcionales de la proteína L1. Los derivados funcionales de la proteína L1 son capaces de provocar una respuesta inmune (si fuera necesario, cuando se adyuvan de forma adecuada), siendo dicha respuesta inmune capaz de reconocer una VLP constituida por la proteína L1 de longitud completa y/o el tipo del VPH del que se derivó la proteína L1 . Las VLPs de la invención pueden comprender también otros tipos de derivados funcionales de proteínas, incluyendo mutantes de las proteínas L1 del VPH de longitud completa o truncadas tales como mutantes por supresión, sustitución, o inserción. Los derivados adecuados incluyen también secuencias con codones optimizados. La proteína o derivado de L1 puede ser también una proteína de fusión, tal como la fusión de la proteína L1 con L2 o con una proteína temprana. La proteína L1 o un derivado funcional de proteína es capaz de formar una VLP, y la formación de VLP puede evaluarse mediante técnicas estándar tales como, por ejemplo, microscopía electrónica y dispersión dinámica de luz láser.

Las VLPs pueden prepararse en cualquier sustrato celular adecuado tal como células de levaduras o células de insectos por ejemplo células de baculovirus, y las técnicas para la preparación de VLP son notorias en la técnica, tales como en WO9913056 y US6245568, y las referencias que se incluyen en los mismos, cuyos contenidos completos se incorporan a la presente memoria como referencia. Las VLPs se preparan preferentemente mediante técnicas de desmontaje y remontaje, que pueden proporcionar VLP del virus de papiloma más estables y/u homogéneas. Por ejemplo, McCarthy y cois., 1 998 "Quantitative Disassembly and Reassembly of Human Papillomavirus Type 1 1 Viruslike Partióles in Vitro" J. Virology 72(1 ):33-41 , describe el desmontado y remontado de VLP de L1 del VPH 1 purificadas a partir de células de insectos para obtener una preparación homogénea de VLP. Los documentos WO9913056 y US6245568 también describen métodos de desmontaje/remontaje para preparar VLP del VPH. Preferentemente, las VLP del VPH de la invención se preparan como se describe en WO9913056 o US6245568. Las VLPs de la invención pueden combinarse con un adyuvante. Las vacunas de la invención pueden comprender un adyuvante o imunoestimulador adecuado tal como, pero sin limitación, lípido A desintoxicado de cualquier fuente y derivados no tóxicos de lípido A, saponinas y otros reactivos capaces de estimular una respuesta tipo TH 1 .

Se conoce desde hace tiempo que el lipopolisacárido enterobacteriano (LPS) es un estimulador potente del sistema inmunitario, aunque se ha restringido su uso en adyuvantes debido a sus efectos tóxicos. Un derivado no tóxico del LPS, monofosforil-lípido A (MPL), producido por eliminación del grupo carbohidrato del núcleo y el fosfato de la glucosamina del extremo reductor, ha sido descrito Ribi y cois. (1986, Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Publ. Corp. , NY, páginas 407-419) y tiene la estructura siguiente: Una versión desintoxicada más de MPL resulta de la eliminación de la cadena acilo de la posición 3 del esqueleto disacárido y se denomina monofosforil-Iípido A 3-O-desacilado (MPL- 3D). Puede purificarse y prepararse mediante los métodos que se enseñan en GB 2122204B, referencia que describe también la preparación de difosforil lípido A, y sus variantes 3-O-desaciladas. Una forma preferida de MPL-3D es en la forma de emulsión que tiene un tamaño de partículas pequeñas inferior a 0,2 µ?? de diámetro, y el método para su fabricación se describe en WO 94/21292. Las formulaciones acuosas que comprenden monofosforil-lípido A y un agente tensoactivo han sido descritas en WO9843670A2. Los adyuvantes derivados de lipopolisacáridos bacterianos a formular en las composiciones de la presente invención pueden purificarse y procesarse de fuentes bacterianas, o de forma alternativa pueden ser sintéticos. Por ejemplo, se describe monofosforil-lípido A purificado en Ribi y cois. 1986 (referencia anterior), y monofosforil- o difosforil-lípido A 3-O-desacilado derivado de Salmonella sp. se describen en GB 222021 1 y US 4912094. Se han descrito otros lipopolisacáridos purificados y sintéticos (Hilgers y cois. , 1986, Int. Arch. Allergy. Immunol. , 79(4):392-6; Hilgers y cois. , 1987, Immunology, 60(1 ): 141 -6; y en EP 0 549 074 B1 ). Un adyuvante lipopolisacárido bacteriano preferido particular es MPL-3D. De acuerdo con lo anterior, los derivados de LPS que pueden usarse en la presente invención son los inmunoestimulantes que tienen estructuras similares a la de LPS o MPL o MPL-3D. En otro aspecto de la presente invención los derivados de LPS pueden ser un monosacárido acilado, que es una subporción de la estructura anterior de MPL. Las saponinas se enseñan en: Lacaille-Dubois, M y Wagner H . (1 996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol. 2, páginas 363-386). Las saponinas son glicósidos esteroideos o triterpénicos ampliamente distribuidos en los reinos vegetal y animal marino. Las saponinas son notorias porque forman soluciones coloidales en agua que forman espuma al agitar, y porque precipitan el colesterol. Cuando las saponinas están cerca de membranas celulares crean estructuras tipo poro en la membrana q ue hacen q ue la membrana estalle. La hemolisis de los eritrocitos es un ejemplo de este fenómeno, que es una propiedad de ciertas, pero no todas, las saponinas. Las saponinas se conocen como adyuvantes en vacunas para la administración sistémica. La actividad de adyuvante y hemolítica de las saponinas individuales ha sido estudiada de forma extensa en la técnica (Lacaille-Dubois y Wagner, referencia anterior). Por ejemplo, Quil A (derivado de la corteza del árbol sudamericano Quillaja Saponaria Molina), y sus fracciones, se describen en US 5.057.540 y "Saponins as vaccine adyuvante", Kensil, C. R. , Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1 996, 12 (1 -2): 1 -55; y en EP 0 362 279 B1 . Las estructuras particuladas, denominadas complejos ¡nmunoestimuladores (ISCOMS), q ue comprenden fracciones de Quil A son hemolíticos y se han usado en la fabricación de vacunas (Morein, B. , EP 0 1 09 942 B1 ; WO 96/1 1 71 1 ; WO 96/33739). Las saponinas hemolíticas QS21 y QS17 (fracciones de Quil A purificadas por HPLC) han sido descritas como adyuvantes sistémicos potentes, y el método para su producción se describe en la patente de Estados Unidos No. 5.057.540 y en EP 0 362 279 B1 . Otras saponinas que se han usado en estudios de vacunación sistémicos incluyen los derivados de otras especies de plantas tales como Gypsophila y Saponaria (Bomford y cois.., Vaccine, 10(9):572-577, 1992). Un sistema mejorado implica la combinación de un derivado no tóxico del lípido A y un derivado de saponina en particular la combinación de QS21 y MPL-3D como se describe en WO 94/00153, o una composición menos reactógena en la que QS21 se inactiva con colesterol como se describe en WO 96/33739. En WO 95/17210 se describe una formulación de adyuvante particularmente potente que implica QS21 y MPL-3D en una emulsión de aceite en agua y es una formulación preferida. De acuerdo con lo anterior, en una modalidad de la presente invención se proporciona una vacuna con adyuvantes como lípido A desintoxicado o un derivado no tóxico del lípido A, más preferentemente con adyuvante como un monofosforil-lípido A o su derivado. Preferentemente, la vacuna de forma adicional comprende una saponina, más preferentemente QS21 . Preferentemente, la formulación de forma adicional comprende una emulsión de aceite en agua. La presente invención también proporciona un método para producir una formulación de vacuna que comprende mezclar un péptido L2 de la presente invención junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable, tal como MPL-3D. Los componentes adicionales que están preferentemente presentes en una formulación de vacuna con adyuvante de acuerdo con la invención incluyen detergentes no iónicos tales como los esteres de octoxinoles y ásteres de polioxietileno como se describen en la presente memoria, en particular rerc-octilfenoxi-polietoxietanol (Tritón X-100) y monooleato de polioxietilen-sorbitan (Tween 80); y derivados de sales biliares o ácido cólico como se describe en la presente memoria, en particular desoxicolato o taurodesoxicolato sódico. De esta manera, una formulación particularmente preferida comprende MPL-3D, Tritón X-100, Tween 80 y desoxicolato sódico, que puede combinarse con una preparación de antígeno l_2 para proporcionar una vacuna adecuada. En una modalidad preferida de la presente invención, la vacuna comprende una formulación de adyuvante vesicular que comprende colesterol, una saponina y un derivado de LPS. A este respecto, la formulación de adyuvante comprende una vesícula unilaminar que comprende colesterol, que tiene una bicapa lipídica que preferentemente comprende dioleoil-fosfatidil-colina, en la que la saponina y el derivado de LPS se asocian, o están insertadas en la bicapa lipídica. Más preferentemente, estas formulaciones de adyuvantes comprenden QS21 como saponina, y MPL-3D como el derivado de LPS, en las que la relación de QS21 :colesterol es de 1 : 1 a 1 : 100 peso/peso, y más preferentemente 1 :5 peso/peso. Tales formulaciones de adyuvantes se describen en EP 0 822 831 B, cuya descripción se incorpora a la presente memoria como referencia. De forma adecuada, vacunas de la invención se usan combinadas con aluminio y, de forma adecuada, se adsorben o se adsorben parcialmente sobre adyuvantes de aluminio. De forma adecuada el adyuvante es una sal de aluminio, preferentemente combinada con MPL-3D, tal como fosfato de aluminio y MPL-3D. Se prefiere también el hidróxido de aluminio, opcionalmente combinado con MPL-3D. La más preferida en la presente invención es la combinación de VLP con una sal de aluminio o con una sal de aluminio + MPL-3D. Como sal de aluminio se prefiere la sal hidróxido de aluminio. La vacuna puede comprender también aluminio o un compuesto de aluminio como estabilizador. Las vacunas de la invención pueden proporcionarse por cualquiera de una diversidad de vías tales como oral, tópica, subcutánea, mucosa (típicamente intravaginal), intravenosa, intramuscular, intranasal, sublingual, intradérmica y mediante supositorio. Opcionalmente la vacuna puede formularse también o administrarse conjuntamente con otros antígenos del VPH tales como antígenos tempranos o antígenos que no sean del VPH. De forma adecuada, estos antígenos no VPH pueden proporcionar protección contra otras enfermedades, más preferentemente enfermedades de transmisión sexual tales como el virus herpes simplex, VEB, clamidia y VIH. Los inventores en particular prefieren que la vacuna comprenda gD o un truncado de la misma del VHS. De esta forma la vacuna proporciona protección contra el VPH y VHS. La dosis de los componentes de la vacuna variará dependiendo del estado, sexo, edad y peso del individuo, la vía de administración y VPH de la vacuna. La cantidad puede variarse también dependiendo del número de tipos de VLP. De forma adecuada, la administración es de una cantidad de vacuna adecuada para generar una respuesta inmunológicamente protectora. De forma adecuada cada dosis de vacuna comprende 1 -100 de cada VLP, preferentemente 5-80 µg, más preferentemente 5-30 µ9 de cada VLP, lo más preferentemente 5-20 µg de cada VLP siendo especialmente preferidos 5 µg, 6 µg , 10 µ9, 15 µQ o 20 µg. Para todas las vacunas de la invención, se prefiere que la vacuna se use para la vacunación de niñas adolescentes con edades entre los 10-15, preferentemente 10-13 años. La vacuna puede administrarse también a mujeres después de un frotis vaginal anormal o después de cirugía tras la eliminación de una lesión provocada por VPH, o que son seronegativas y negativas para el ADN de los tipos cancerosos del VPH. Preferentemente, la vacuna se administra con una pauta de administración de 2 ó 3, por ejemplo con una pauta de mes 0, 1 o una pauta de mes 0, 1 y 6 respectivamente. De forma adecuada, la pauta de vacunación incorpora una inyección de recuerdo después de 5 a10 años, preferentemente 10 años. Preferentemente, la vacuna es una formulación de vacuna líquida, aunque la vacuna puede liofilizarse y reconstituirse antes de su administración. Preferentemente, el ¡nmunógeno utilizado en la presente invención (VLP del VPH 16 y/o del VPH 18) se usa como vacuna y puede formularse en forma de vacuna usando excipientes apropiados. De esta manera, la invención en particular se refiere al uso de una vacuna del VPH 16 o VPH 18, tal como una vacuna únicamente con L1 , en la prevención de la infección por VPH. La presente invención se ilustra a continuación mediante referencia al siguiente ejemplo no limitante.

Ejemplo 1 Se inmunizó a mujeres sanas con edades entre 15 y 25 años con una mezcla de VLP L1 del VPH 16 y VPH 18. Al inicio las mujeres eran: 1 ) seronegativas para el VPH-16 y el VPH-18; 2) negativas para infección por VPH del cuello uterino de alto riesgo (detectado por PCR del VPH); 3) tenían 6 o menos parejas sexuales en su vida y 4) tenían frotis vaginales normales. La mezcla comprendía por cada dosis de 0.5 mi, 20 pg de VLP L1 del VPH-16, 20 pg de VLP L1 del VPH-18 y tenía como adyuvante 500 pg de hidróxido de aluminio y 50 pg de MPL-3D. Se inyectaron 500 pg de hidróxido de aluminio solo al grupo tratado con placebo.

Se evaluó la eficacia de la vacuna (E.V.) contra tipos cancerosos de alto riesgo del VPH, en la que la E.V. es el % de mejora en la protección contra la infección por la vacuna comparada con la de un grupo tratado con placebo. Se evaluó la protección cruzada detectando la presencia de ácidos nucleicos específicos para diversos tipos oncógenos en las personas vacunadas y el grupo de control. La detección se llevó a cabo usando las técnicas descritas en WO03014402, y las referencias que se incluyen en él, en particular para la amplificación no específica de ADN del VPH y detección subsiguiente de tipos de ADN usando un sistema LiPA como se describe en WO 99/14377, y en Kleter y cois. , [Journal of Clinical Microbiology (1999), 37 (8): 2508-2517], cuyo contenido completo se incorpora a la presente memoria como referencia. Sin embargo, puede usarse cualquier método adecuado para la detección de ADN del VPH en una muestra, tal como las PCR específicas de tipo usando cebadores específicos para cada tipo del VPH de interés. Los expertos en la materia conocen cebadores adecuados, o pueden construirlos fácilmente dado que se conocen las secuencias de los tipos oncógenos del VPH. Se evaluó la eficacia de la vacuna contra las infecciones para todos los 12 tipos cancerosos de alto riesgo, tipos relacionados filogenéticamente con el VPH-16 (los grupos de: 31 , 35, y 58; 31 , 33, 35, 52 y 58) y tipos relacionados filogenéticamente con el VPH-1 8 (45 y 59).

Los resultados presentados en las Tablas 2 y 3 se refieren al grupo "ATP" (De acuerdo Al Protocolo) para aquellos pacientes que se sometieron a todos los criterios de la prueba. La tabla 2 es un análisis de punto medio con datos tomados de todos los pacientes en el punto de tiempo al cual al menos 50% de cohorte fueron 18 meses después de la primera vacuna. La Tabla 3 da los resultados finales, todos los datos que son de sujetos a los 18 meses de la primera post vacuna (mes 0). En el grupo ATP todos los pacientes recibieron 3 dosis de la vacuna en los meses 0, 1 y 6 y fueron seronegativos a los 6 meses. Como demuestran los datos que se presentan en la tabla 1 , la inmunización con una mezcla de VPH16 y VPH1 8 proporcionó una aparente protección cruzada contra otros tipos del VPH. En este punto los tamaños de las muestras son demasiado pequeños para proporcionar un análisis estadístico riguroso, los datos demuestran una tendencia positiva y sugieren que la inmunización con VLP del VPH16 y del VPH 18 serán eficaces contra la infección con otros tipos del VPH. Esto se confirmó a medida que el estudio avanzó. La tabla 2 demuestra que el VPH 16 y el VPH 18 proporcionan una protección cruzada estadísticamente significativa contra el grupo de tipos cancerosos de alto riesgo 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66 y 68. La tabla 3 demuestra que, excepto para los tipos relacionados a VPH 18 (los cuales muestran una tendencia muy fuerte), existe una protección cruzada estadísticamente cruzada contra los grupos de: VPH 31 , 35, 58; VPH 31 , 33, 35, 52, 58; y los 12 tipos de alto riesgo evaluados (no VPH 16/18).

OI n en Tabla 1 Las muestras se tomaron a los 9, 12, 15 y 18 meses de las pacientes y se analizaron para determinar la infección por VPH por los tipos especificados anteriormente. ) ?> n o n o n La Tabla 2 - eficacia de la vacuna después de tres dosis para prevenir probables infecciones heterólogas. Tabla 2: Eficacia de la vacuna contra la infección con tipos relacionados filogenéticamente con el VPH-16, tipos relacionados filogenéticamente con el VPH-1 8, tipos relacionados filogenéticamente con el VPH-16 y/o VPH-1 8 y todos los tipos de alto riesgo excluyendo la VPH-16 y VPH-18 - Cohorte ATP (mes 6-18). número de sujetos en la cohorte específica número de sujetos con infección probable por VHP Tasa de ataque = n / N Intervalo de confianza al 95% límite inferior = 1 - exp (log (tav / tap) + 1 ,96 * raíz cuadrada (1 /nv - 1 /Nv + 1 /np - 1 /Np)) límite superior = 1 - exp (log (tav / tap) - 1 ,96 * raíz cuadrada (1 /nv - 1 /Nv + 1 /np - 1 /Np)) cuando el número de casos en vacuna = 0: l ímite inferior* = 1 - exp (log (tav* / tap*) + 1 ,96 * raíz cuadrada (1 /(nv+0.5) - 1 /(Nv+0.5) + 1 /(np+0.5) - 1 /(Np+0.5))) límite superior* = 1 - exp (log (tav* / tap*) - 1 ,96 * raíz cuadrada (1 /(nv+0.5) - 1 /(Nv+0.5) + 1 /(np+0.5) ¦ 1 /(Np+0.5))) tasa de ataque en las receptoras de vacuna tasa de ataque en las receptoras de placebo número de casos en las receptoras de vacuna número de casos y casos negativos en las receptoras de vacuna número de casos en las receptoras de placebo número de casos y casos negativos en las receptoras de placebo Relacionado con VPH-1 6 : Tipos relacionados fiiogenéticamente con el VPH-16: 35, 31 , 58 sin considerar otros tipos del VPH Relacionado con VPH-16 *: Tipos relacionados fiiogenéticamente con el VPH-16: 35, 31 , 58, 33, 52 sin considerar otros tipos del VPH Relacionado con VPH-18: Tipos relacionados fiiogenéticamente con el VPH-18: 45, 59 sin considerar otros tipos del VPH Relacionado con VPH-16 y/o VPH-1 8: Tipos relacionados fiiogenéticamente con el VPH-16 y/o el VPH-18: 35, 31 , 58, 45, 59 sin considerar otros tipos del VPH Relacionado con VPH-16 y/o VPH-1 8 *: Tipos relacionados fiiogenéticamente con el VPH-1 6 y/o el VPH-18: 35, 31 , 58, 33, 52, 45, 59 sin considerar otros tipos del VPH = Tipos de alto riesgo excluyendo el VPH-16 y el VPH-18 Ol o Tabla 3 Las muestras se tomaron a los 18 meses de las pacientes y se analizaron para la infección por VPH por los tipos especificados anteriormente.

Claims

REIVINDICACIONES 1 . Uso de una composición que comprende VLPs del VPH 16 y del VPH 18 en la preparación de un medicamento para la prevención de la infección y/o enfermedad por uno o más del grupo de tipos oncógenos del VPH, excluyendo del grupo los tipos del VPH 16 y VPH 18. 2. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1 para la prevención de la infección y/o enfermedad por uno o más del grupo de tipos de VPH 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66, 68. 3. Uso de acuerdo con la reivindicación 2 para la prevención de la infección y/o enfermedad por uno o más del grupo de VPH 31 , VPH 33, VPH 35, VPH 52 y VPH 58. 4. Uso de acuerdo con la reivindicación 3 para la prevención de la infección y/o enfermedad por uno o más del grupo de VPH 31 , VPH 35, y VPH 58. 5. Uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente en donde el grado de prevención se determina al comparar una población vacunada con una población no vacunada (grupo placebo) con respecto a todos los miembros del grupo de tipos del VPH. 6. Uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente en donde la prevención lograda es al menos 1 5% mejor al placebo. 7. Uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente en donde las VLPs del VPH se combinan con un adyuvante. 8. Uso de acuerdo con la reivindicación 7 en donde el adyuvante es una combinación de una sal de aluminio y MPL-3D. 9. Uso de acuerdo con la reivindicación 8 en donde el adyuvante es una combinación de un hidróxido de aluminio y MPL-3D. 10. Uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente en donde la VLP una proteína L1 o fragmento inmunogénico de la misma pero no proteína L2. 1 1 . Un método para inducir una respuesta inmune contra uno o más del grupo de tipos oncógenos del VPH, excluyendo el grupo los tipos del VPH 16 y VPH 18, comprendiendo el método la administración a un sujeto de una composición que comprende una VLP del VPH 16 y una VLP del VPH 18. 12. Un método para prevenir la infección y/o enfermedad provocada por uno o más del grupo de tipos oncógenos del VPH, excluyendo el grupo los tipos del VPH 16 y VPH 18, comprendiendo el método la administración a un sujeto de una composición que comprende una VLP del VPH 16 y una VLP del VPH 18. 13. El método de la reivindicación 1 1 ó 12 en donde los tipos del VPH se seleccionan del grupo constituido por los tipos 31 , 33, 35, 39, 45, 51 , 52, 56, 58, 59, 66 y 68. 14. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 1 -13 en donde los tipos del VPH se seleccionan del grupo constituido por los tipos del VPH, VPH31 , VPH33, VPH35, VPH52 y VPH58. 15. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 1 -14 en donde los tipos del VPH se seleccionan del grupo constituido por VPH31 , VPH35 y VPH58. 16. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 1 - 15 en donde la composición comprende además un adyuvante. 17. El método de la reivindicación 16 en donde el adyuvante comprende una sal de aluminio y MPL-3D. 18. El método de la reivindicación 17 en donde la sal de aluminio es hidróxido de aluminio. 1 9. Un método para prevenir la infección de una población de sujetos por uno o más tipos del VPH seleccionados del grupo constituido por tipos oncógenos del VPH, excluyendo los tipos 16 y 1 8, comprendiendo el método la administración a un sujeto de una composición que comprende una VLP del VPH 16 y una VLP del VPH 18, en donde la administración de la composición evita la infección y o enfermedad hasta o al menos un 15% más de la población que la administración de un placebo. 20. Uso de una mezcla de VLP del VPH 16 y del VPH 18 en la preparación de un medicamento para la prevención de la infección y/o enfermedad en un grupo de humanos por el grupo de tipos oncógenos del VPH excluyendo los tipos 16 y 1 8, en donde el nivel de la infección y/o enfermedad observada en el grupo es significativamente inferior que el que se observa con un placebo. 21 . Una composición de vacuna que comprende una VLP del VPH 16 y una VLP del VPH 1 8 que confiere protección cruzada contra la infección y/o enfermedad provocada por tipos oncógenos del VPH distintos de los tipos 16 y 1 8.