EA008826B1

EA008826B1 - Вторичные аминоанилиновые пиперидины в качестве антагонистов мкг1 и их применение

Info

Publication number: EA008826B1
Application number: EA200500152A
Authority: EA
Inventors: Мохаммад Марзабади; Ю Дзианг; Каи Лу; Чиен-Ан Чен; Джон Делеон; Джон Ветцель
Original assignee: Х. Лундбекк А/С
Priority date: 2002-07-03
Filing date: 2003-07-03
Publication date: 2007-08-31
Also published as: WO2004005257A1; CA2485379A1; AU2003259098A1; NO20050113L; CN1665786A; KR20050034710A; JP2005532399A; BR0312257A; EA200500152A1; EP1556351A4; NZ536329A; IL165730A0; US7473698B2; IS7560A; PL373621A1; US20050245743A1; MXPA04012103A; ZA200409425B; CN1319945C; EP1556351A1

Abstract

Данное изобретение направлено на соединения, которые являются селективными антагонистами рецепторов-1 меланинконцентрирующего гормона (МКГ-1). В изобретении предлагается фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество соединения изобретения и фармацевтически приемлемый носитель. В данном изобретении предлагается фармацевтическая композиция, полученная объединением терапевтически эффективного количества соединения данного изобретения и фармацевтически приемлемого носителя. В данном изобретении дополнительно предлагается способ получения фармацевтической композиции, включающий объединение терапевтически эффективного количества соединений изобретения и фармацевтически приемлемого носителя. В данном изобретении также предлагается способ снижения массы тела у субъекта, который включает введение субъекту количества соединения изобретения, эффективного для снижения массы тела у субъекта. В данном изобретении дополнительно предлагается способ лечения субъекта, страдающего депрессией и/или тревожностью, который включает введение субъекту количества соединения изобретения, эффективного для лечения у субъекта депрессии и/или тревожности. В данном изобретении дополнительно предлагается способ лечения субъекта, страдающего нарушением мочеиспускания.

Description

По данной заявке испрашивается приоритет на основании патента США № 10/189145, зарегистрированного 3 июля 2002 г., содержание которого включено в качестве ссылки.

По всему описанию к данной заявке в скобках даются ссылки на различные публикации, указывающие автора и год. Полные библиографические данные ссылок можно найти в конце описания непосредственно перед формулой изобретения.

Полное раскрытие данных публикаций, таким образом, включено в данную заявку в качестве ссылки для более подробного описания области техники, к которой относится изобретение.

Область техники, к которой относится изобретение

Меланинконцентрирующий гормон (МКГ) представляет собой циклический пептид, первоначально выделенный из гипофиза лососевых (костистые рыбы) (КагаисЫ е! а1., 1983). У рыб пептид из 17 аминокислот вызывает агрегацию меланина в меланофорах и ингибирует секрецию АКТГ, действуя в качестве функционального антагониста α-МСГ. МКГ млекопитающих (19 аминокислот) высоко консервативен у крысы, мыши и человека, проявляя 100% аминокислотную идентичность, но его физиологическая роль менее ясна. МКГ, как показано, участвует в различных процессах, включая регуляцию потребления пищи, водного баланса, энергетического метаболизма, состояния общего возбуждения/внимания, памяти и когнитивных функций, а также психиатрических нарушениях (в качестве обзоров смотри Вакег, 1991; Вакег, 1994; Ναΐιοη. 1994; Кшдде е! а1., 1996). Его роль в регуляции потребления пищи или массы тела подтверждается недавней публикацией в №11иге (Оп е! а1., 1996), в которой продемонстрировано, что наблюдается гиперэкспрессия МКГ в гипоталамусе мышей оЬ/оЬ по сравнению с мышами оЬ/+ и что при голодании дополнительно увеличивается мРНК МКГ как у мышей с ожирением, так и у нормальных мышей. МКГ также стимулирует потребление пищи у нормальных крыс при введении в боковые желудочки (Во881 е! а1., 1997).

Сообщалось также, что МКГ является функциональным антагонистом поведенческих эффектов αМСГ (МШег е! а1., 1993; Сопга1е7 е! а1., 1996; Запсйе/ е! а1., 1997); кроме того, как показано, стресс увеличивает уровень мРНК ПОМК, снижая в то же время уровень мРНК предшественника МКГ, препроМКГ (ппМКГ), (Ртеззе е! а1., 1992). Таким образом, МКГ может служить в качестве интегративного нейропептида, вовлеченного в реакцию на стресс, а также в регуляцию потребления пищи и половой активности (Вакег, 1991; Кшдде е! а1., 1996).

Биологические эффекты МКГ, как считается, опосредуются специфическими рецепторами. Меченный тритием лиганд ([³Н]-МКГ), как сообщалось, демонстрирует специфическое связывание с мембранами мозга, но непригодное для сатурационного анализа, так, что ни сродство, ни Втах не были определены (ΩΐΌζάζ апб ЕЬег1е, 1995). Йодирование тирозина в тринадцатом положении радиоактивным йодом дает лиганд с существенно сниженной биологической активностью (см. ΩΐΌζάζ апб ЕЬег1е, 1995). Напротив, йодирование радиоактивным йодом аналога МКГ, [Рйе¹³,Тут¹⁹]-МКГ, было успешным (^^οζбζ е! а1., 1995); лиганд сохраняет биологическую активность и демонстрирует специфическое связывание с различными клеточными линиями, включая мышиную меланому (В16-Г1, С4Г и С4Г-7), клетки РС12 и СО8. В клетках С4Г-7 Кс = 0,118 нМ и В_тах ~ 1100 сайтов/клетка. Важно, что связывание не ингибировалось α-МСГ, но слабо ингибировалось ΑΝΓ крысы (К1 = 116 нМ по сравнению с 12 нМ для нативного МКГ) (ΩΐΌζάζ е! а1., 1995). Позднее сообщалось о специфическом связывании МКГ в трансформированных кератиноцитах (Вигдаиб е! а1., 1997) и клетках меланомы (^^οζбζ е! а1., 1998), где исследования с поперечной фотосшивкой дают возможность предполагать, что рецептор представляет собой мембранный белок с кажущейся молекулярной массой 45-50 кДа, что сравнимо с диапазоном молекулярных масс суперсемейства рецепторов ОРСК. До сих пор не сообщалось о радиоавторадиографических исследованиях локализации рецептора МКГ с применением данного лиганда.

Локализация и типы биологической активности пептида МКГ предполагают, что модуляция активности рецептора МКГ может быть полезной для ряда терапевтических приложений. Роль МКГ в потреблении пищи наиболее хорошо охарактеризована в плане потенциального клинического применения. МКГ экспрессируется в латеральном гипоталамусе - области мозга, вовлеченной в регуляцию жажды и голода (СтШоп е! а1., 1997); недавно было показано, что орексины А и В, которые являются сильными орексигенными агентами, характеризуются очень сходной с МКГ локализацией в латеральном гипоталамусе (Закшш е! а1., 1998). Уровни мРНК МКГ в данной области мозга растут у крыс после лишения пищи в течение 24 ч (Нетуе апб Ге11тап, 1997); после введения инсулина наблюдается существенное увеличение распространенности и интенсивности окрашивания иммунореактивного МКГ перикарионов и волокон одновременно со значительным ростом уровня мРНК МКГ (Вай)аош-Воийабб1 е! а1., 1994).

В соответствии со способностью МКГ стимулировать потребление пищи у крыс находятся данные о том, что уровни мРНК МКГ повышаются в гипоталамусах мышей оЬ/оЬ с ожирением (Оп е! а1., 1996) и снижаются в гипоталамусах крыс, получавших лептин, чье потребление пищи и прибавка в массе тела также снижались (8айи, 1998). МКГ, очевидно, действует как функциональный антагонист меланокортиновой системы в плане своих эффектов на потребление пищи и на секрецию гормонов ГГА осью (гипоталамо-гипофизарно-адреналовая ось) (Гиб\\щ е! а1., 1998). Вместе эти данные дают возможность предполагать участие эндогенного МКГ в регуляции энергетического баланса и ответа на стресс и являются

- 1 008826 обоснованием для разработки конкретных соединений, действующих на рецепторы МКГ для применения при лечении ожирения и ассоциированных со стрессом нарушений.

У всех видов, исследованных к настоящему времени, основная часть нейронов содержащей МКГ группы клеток занимает достаточно постоянное положение в тех областях латерального гипоталамуса и субталамуса, где они расположены, и может представлять собой часть некоторых так называемых «экстрапирамидальных» моторных путей. Они включают важные стриатные и паллидофугальные пути, включая таламус и кору мозга, области гипоталамуса и реципрокные связи с субталамусным ядром, субстанцией нигра и центрами среднего мозга (ВШеисошТ е! а1., 1992). По своей локализации содержащая МКГ группа клеток может быть мостом или механизмом для установления связи гипоталамической висцеральной активности с подходящей и координированной моторной активностью. Клинически это может иметь определенную ценность для рассмотрения вовлечения данной системы МКГ в заболевания с нарушениями движения, такие как болезнь Паркинсона и хорея Гентингтона, в которые, как известно, вовлечены экстрапирамидальные пути.

Исследования генетических сцеплений человека локализовали локусы аутентичного МКГч на 12 хромосоме (12д23-24) и вариант локусов МКГч на 5 хромосоме (5η12-13) (Ребеи!оиг е! а1., 1994). Локус 12с|23-24 совпадает с локусом, в котором картирована аутосомная доминантная атаксия мозжечка типа II (8СА2) (АиЬигдег е! а1., 1992; Т\ге115 е! а1., 1992). Данное заболевание включает нейродегенеративные нарушения, включая оливопонтомозжечковую атрофию.

Кроме того, ген болезни Дарье был картирован в локусе 12с|23-24 (Сгаббоск е! а1., 1993). Болезнь Дарье характеризуется аномалиями в адгезии кератиноцитов I и психическими расстройствами в некоторых семьях. С точки зрения функционального и анатомического паттернов нервной системы МКГ в мозге крыс и человека ген МКГ может быть хорошим кандидатом для 8СА2 и болезни Дарье. Интересно, что заболевания с высоким социальным влиянием картированы в данном локусе. Действительно, ген, ответственный за хроническую и острую формы спинальной мышечной атрофии, был приписан к хромосоме 5с.|12-13 с применением анализа генетического сцепления (Ме1к1 е! а1., 1990; ^е§!Ьгоок е! а1., 1992). Более того, независимые линии доказательств поддерживают отнесение главного локуса шизофрении к хромосоме 5д11.2-13.3 (8йетпд!оп е! а1., 1988; Вакке!! е! а1., 1988; С1Шат е! а1., 1989). Представленные выше исследования предполагают, что МКГ может играть роль в нейродегенеративных заболеваниях и нарушениях эмоциональной сферы.

На основе наблюдаемых эффектов МКГ в других биологических системах предполагаются дополнительные терапевтические приложения соединений, относящихся к МКГ. Например, МКГ может регулировать репродуктивные функции у самцов и самок крыс. Транскрипты МКГ и пептид МКГ найдены в зародышевых клетках семенников взрослых крыс, предполагая, что МКГ может участвовать в обновлении стволовых клеток и/или дифференцировке ранних сперматоцитов (Негу1еи е! а1., 1996). МКГ, введенный прямо в медиальную преоптическую область (МРОА) или в вентромедиальное ядро (УМЫ), стимулировал половую активность у самок крыс (Сопха1ех е! а1., 1996). У овариэктомированных крыс, праймированных эстрадиолом, МКГ стимулировал секрецию лютеинизирующего гормона (ЛГ), в то время как антисыворотка против МКГ ингибировала секрецию ЛГ (Сопха1ех е! а1., 1997). 2опа шсейа, которая содержит большую популяцию тел клеток МКГ, идентифицирована ранее как регуляторная область предовуляторного выброса ЛГ (МасКеп/1е е! а1., 1984).

Сообщалось, что МКГ влияет на секрецию гипофизарных гормонов, включая АКТГ и окситоцин. Аналоги МКГ могут также быть пригодными для лечения эпилепсии. В модели припадков ΡΤΖ введение МКГ перед индукцией припадка предотвращало конвульсивную активность, как у крыс, так и у морских свинок, предполагая, что нейроны, содержащие МКГ, могут участвовать в нервных связях, лежащих в основе индуцированного ΡΤΖ припадка (Кшдде апб ^адпег, 1997). МКГ, как было обнаружено, влияет также на поведенческие корреляты когнитивных функций. Введение МКГ ускоряло угасание ответа пассивного избегания у крыс (МсВпбе е! а1., 1994), увеличивая вероятность того, что антагонисты рецептора МКГ могут быть полезны для сохранения памяти и/или ее удержания. Возможная роль МКГ в модуляции или восприятии боли поддерживается плотной иннервацией околоводопроводного серого вещества (РАС) МКГ-позитивными волокнами. Наконец, МКГ может участвовать в регуляции потребления воды. 1СУ инфузия МКГ находящейся в сознании овце вызывала диуретические, натрийуретические и калийуретические изменения в ответе на увеличенный объем плазмы (Рагкек, 1996).

Совместно с анатомическими данными, сообщающими о присутствии МКГ в областях мозга, регулирующих водный баланс, результаты указывают на то, что МКГ может быть важным пептидом, вовлеченным в центральный контроль водного гомеостаза у млекопитающих.

Недавно опубликованы данные об идентификации рецептора МКГ, ассоциированного с С-белками (СйатЬегк е! а1., 1999; 8айо е! а1., 1999). Данные группы идентифицировали МКГ как эндогенный лиганд сиротского рецептора 8БС-1 человека, ассоциированного с С-белками (Ьакауе е! а1., 1998). Крысиный гомолог данного рецептора (называемый сейчас МКГ-1), как сообщалось, локализован в областях мозга крыс, связанных с пищевым поведением (например, дорзомедиальном и вентромедиальном гипоталамусе). Связь между МКГ-1 и эффектами МКГ на потребление пищи была дополнительно подтверждена последними сообщениями о фенотипе нокаутных по МКГ-1 мышах. Две группы независимо показали

- 2 008826 (Магай с1 а1, 2002; СНсп с1 а1, 2002), что направленное разрушение гена рецептора МКГ-1 (нокаут МКГ-1) у мышей ведет к тому, что животные страдают гиперфагией, но являются худыми и имеют сниженную массу тела по отношению к детенышам дикого типа. Снижение массы тела обусловлено увеличением метаболизма. Каждая группа продемонстрировала, что нокаутные по МКГ-1 мыши являются устойчивыми к ожирению, индуцируемому диетой, и обычно имеют массу, сходную с детенышами, получающими обычную пищу.

Наконец, в настоящее время описаны в литературе синтетические молекулы-антагонисты рецептора МКГ-1. Вебиагек с1 а1. (2002) сообщили о синтезе высокоаффинных пептидных антагонистов МКГ-1. Кроме того, низкомолекулярный антагонист МКГ-1 описан Такеката с1 а1. (Такска\\а с1 а1., 2002). Данное соединение, Т-226296, характеризуется высоким сродством к рецептору МКГ-1 (~5-9 нМ для МКГ-1 крысы и человека) и, как показано, снижает потребление пищи, индуцируемое аппликацией МКГ в желудочек мозга. Эти данные обосновывают стратегию применения антагониста рецептора МКГ-1 для лечения ожирения.

Более того, в собственных исследованиях заявителей были протестированы антагонисты МКГ-1 на нескольких животных моделях, которые хорошо известны как предсказывающие эффективность соединений у человека (Вого\\ъку. с1 а1., №1Шгс Месйсше 2003). Данные эксперименты показывают, что антагонисты МКГ-1 пригодны для лечения ожирения, депрессии, тревожности, а также нарушений мочеиспускания.

Здесь заявители сообщают о синтезе вторичных аминоанилиновых пиперидинов, которые связываются с клонированным рецептором-1 меланинконцентрирующего гормона (МКГ-1) человека. Кроме того, данные соединения избирательно связываются с рецептором-МКГ-1 по сравнению с другим клонированным рецептором, ассоциированным с С-белком. Раскрыта способность ингибировать активацию клонированного рецептора, измеренную тестами ίη νίίτο.

Более того, соединения настоящего изобретения могут также быть использованы для лечения аномальных состояний, опосредованных инактивацией рецептора МКГ-1, таких как нарушения потребления пищи (ожирение, булимия и нейрогенная булимия), половые/репродуктивные нарушения, депрессия, тревожность, депрессия и тревожность, эпилептический припадок, гипертензия, кровоизлияние в мозг, застойная сердечная недостаточность, нарушения сна или любое состояние, при котором может быть благоприятен антагонизм рецептора МКГ-1.

Краткое изложение существа изобретения

В данном изобретении предлагается соединение, имеющее структуру:

где каждый А независимо представляет собой -Η, -Г, -С1, -Вг, -I, -ΟΝ, -ΝΟ₂ или С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью;

где В представляет собой СН;

где Ζ представляет собой СО;

где Кд представляет собой -ОВ₃, -ΝΗΒ₃, -СОВ₃, С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, § или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Г, -С1, -Вг, -I, -ОЯ₂ или С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью;

где каждый В₃ независимо представляет собой -Н; С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, С1-С7 монофторалкил или С1-С7 полифторалкил; С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, § или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Г, -С1, -Вг, -I, -ΝΟ₂, -ΟΝ, -ОРГ или -ΝΗΡΓ:

где каждый В₂ независимо представляет собой -Н, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, § или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Г, -С1, -Вг, -I, -ΝΟ₂ или -ΟΝ; и где и представляет собой целое число от 0 до 6 включительно;

или его фармацевтически приемлемая соль.

В дополнительном осуществлении указанного выше изобретения соединение является энантиомерно или диастереомерно чистым. В другом осуществлении соединение является энантиомерно или диастереомерно чистым. В одном осуществлении соединение представляет собой (+) энантиомер. В одном осуществлении соединение представляет собой (-) энантиомер.

Иллюстрацией изобретения является фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество любого из соединений изобретения.

Иллюстрацией изобретения является фармацевтическая композиция, полученная смешиванием любого из соединений, описанных выше, и фармацевтически приемлемого носителя.

-3 008826

Иллюстрацией изобретения является способ получения фармацевтической композиции, включающий смешивание любого из соединений изобретения и фармацевтически приемлемого носителя.

Иллюстрацией изобретения является применение любого соединения, описанного выше, для приготовления лекарственного средства для лечения нарушения, опосредованного рецептором МКГ1 нарушения, опосредуемого рецептором МКГ1, у нуждающегося в этом субъекта.

В одном осуществлении терапевтически эффективное количество составляет количество от приблизительно 0,03 до приблизительно 300 мг.

В одном осуществлении нарушение представляет собой депрессию. В одном осуществлении нарушение представляет собой тревожность. В одном осуществлении нарушение представляет собой ожирение. В одном осуществлении нарушение представляет собой ургентное недержание мочи.

Одно осуществление представляет собой применение любого соединения, описанного выше, для приготовления лекарственного средства для лечения депрессии, тревожности, недержания мочи или ожирения.

В одном осуществлении терапевтически эффективное количество составляет от приблизительно 0,03 до приблизительно 300 мг.

Подробное описание изобретения

где каждый А независимо представляет собой -Η, -Р, -С1, -Вт, -I, -СК -ΝΟ₂ или С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью;

где В представляет собой СН;

где Ζ представляет собой СО;

где Кд представляет собой -ОВ₃, -КНВ₃, -С ОЯ,. С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, § или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Р, -С1, -Вт, -I, -ОЯ₂ или С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью;

где каждый В₃ независимо представляет собой -Н; С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, С1-С7 монофторалкил или С1-С7 полифторалкил; С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, § или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Р, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂, -СК -ОВ₂ или -КНВ₂;

где каждый В₂ независимо представляет собой -Н, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, § или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Р, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂ или -СК и где и представляет собой целое число от 0 до 6 включительно;

или его фармацевтически приемлемая соль.

Одно осуществление представляет собой соединение, имеющее структуру:

где А, Ζ и и определены выше;

где Я | представляет собой С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, § или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Р, -С1, -Вт, -I, -СЖ₃или С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью;

где каждый В₃ представляет собой С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью, С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, § или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Р, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂, -ΟΝ или -ОК.₂;

где каждый В₂ представляет собой -Н, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, Сб или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, § или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Р, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂ или -СК

Еще одно осуществление представляет собой соединение, имеющее структуру:

где А и и определены выше;

-4008826 где В₂ представляет собой -Н, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью или Сб или Сю арил, где арил необязательно замещен одним или более -Р, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂ или -СИ.

где А определен выше;

где Я₂ представляет собой С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью; и где и представляет собой целое число от 3 до 6 включительно.

где каждый А представляет собой независимо -Η, -Е, -С1, -Вт или -I; и Я₂ определен выше.

где каждый А представляет собой независимо -Η, -Е или -С1; и где Я₂ представляет собой С1-С3 алкил с линейной или разветвленной цепью.

где А определен выше; и где В₂ представляет собой С₆ или Сю арил, где арил необязательно замещен одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ЫО₂или -СИ; и где и представляет собой целое число от 1 до 6 включительно.

где каждый А представляет собой независимо -Η, -Е, -С1, -Вт или -I; и где В₂ определен выше.

где каждый А представляет собой независимо -Η, -Е или -С1; и

-5008826 где К₂ представляет собой Сб или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1 или -Вт.

где каждый А представляет собой независимо -Η, -Е или -С1; и где К₂ представляет собой С₆ или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е.

где Α, Ζ, и и К₄ определены выше.

А А

где Апп определены выше; и где К₄ представляет собой С₆ или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ОК₃ или С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью;

где каждый К₃ представляет собой независимо С1 -С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью, С₆или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, § или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂, -СЛ или -ОК₂;

где каждый К₂ представляет собой независимо С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью.

где Ζ определен выше;

где каждый А независимо представляет собой -Η, -Е, -С1, -Вт или -I;

где К₄ независимо представляет собой -ОК₃, -ЛНК₃ или -СОК₃;

где К₃ представляет собой Сз или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ЛО₂, -СЛ, -ОК₂ или -ЛНК₂;

где каждый К₂ независимо представляет собой -Н, С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью или Сб или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, ΝΟ₂, -СЛ; и где и представляет собой целое число от 1 до 6 включительно.

где каждый А независимо представляет собой -Н или -Е;

где К.₃ представляет собой С₆ или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, - ЛО₂, -СЛ, -ОК₂ или -ЛНК₂;

где К₂ независимо представляет собой С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью или Сб или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт или -I; и

-6008826 где η представляет собой целое число от 1 до 6 включительно.

где А представляет собой -Η, -Е, -С1, -Вг или -I;

где К₃ представляет собой С₆ или Сю арил, необязательно замещенный -ΝΗΚ₂; и где К₂ представляет собой С₆ или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вг, -I;

где К₃ представляет собой Сб или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вг или -I.

Иллюстрацией настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый носитель и фармацевтически терапевтически эффективное количество любого из соединений, описанных выше.

Иллюстрацией изобретения является способ получения фармацевтической композиции, включающий смешивание любого из соединений, описанных выше, и фармацевтически приемлемого носителя.

Иллюстрацией изобретения является способ синтеза для получения любого из соединений, описанных выше.

Иллюстрацией изобретения является применение любого из соединений или фармацевтических композиций, описанных выше, для приготовления лекарственного средства для лечения нарушения, опосредованного рецептором МКГ1.

В данном изобретении также предлагается соединение, имеющее структуру:

где каждый ζ) независимо представляет собой водород;

нли

где X представляет собой фенил или гетероцикл, содержащий азот, где фенил или гетероцикл, содержащий азот, необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вг, -I, -ΖΚ₃, -ΖΟΚ₃, -ΟΖΚ₃, -ΖΝ(Κ₃)₂, -Ν(Κ₃)ΖΚ₃, -Ν(Κ₃)ΖΝ(Κ₃)₂, -ΟΝ, -ΝΟ₂, -8Κ₃, -(СН₂)_чОК₃, -(СН₂)_ч8Я₃, арилом, фенокси или гетероарилом, С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью, монофторалкилом или полифторалкилом, С2-С7 алкенилом или алкинилом с линейной или разветвленной цепью или С₃-С₇ циклоалкилом, монофторциклоалкилом, полифторциклоалкилом или циклоалкенилом;

где каждый Ζ независимо представляет собой СО; С8; 8О₂; или отсутствует;

где каждый К независимо представляет собой -Η; -Е; С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью, монофторалкил или полифторалкил; С₂-С₇ алкенил или алкинил с линейной или разветвленной цепью; -Ν(Κ₃)₂; -ΝΟ₂; -ΟΝ; -СО₂К₃; -ОСОК₃; -ОК₃; -Ν(Κ₃)ΟΟΚ₃ или -ΟΟΝ(Κ₃)₂;

где каждый К₂ независимо представляет собой -Н, С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью, арил или гетероарил, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вг, -I, -ΝΟ₂, -ΟΝ, Οι-С₇ алкилом с линейной или разветвленной цепью, монофторалкилом или полифторалкилом или С₂-С₇ алкенилом или алкинилом с линейной или разветвленной цепью;

где каждый В₃ независимо представляет собой -Η; С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, монофторалкил или полифторалкил; С₂-С₇ алкенил или алкинил с линейной или разветвленной цепью; С₃-С₇ циклоалкил, монофторциклоалкил, полифторциклоалкил или циклоалкенил; арил или гетероарил, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вг, -I, -Ν(Κ₂)₂, -ΝΟ₂, -ΟΝ, -СОВ₂, -СО₂В₂, -ОСОВ₂, -ОВ₂, -Ν(Β₂)ΟΟΒ₂, -Ν(Β₂)ΟΟΝ(Β₂)₂, -ΟΟΝ(Β₂), арилом, гетероарилом, фенокси, Οι-С₇ алкилом с линейной или разветвленной цепью, монофторалкилом или полифторалкилом, С₂-С₇ алкенилом или алкинилом с линейной или разветвленной цепью, С₃-С₇ циклоалкилом, монофторциклоалкилом, полифторциклоалкилом или циклоалкенилом;

где каждый В₄ независимо представляет собой -Η; -ΖΒ,. -ΖΟΒ,. -ΟΖΒ,. -ΖΝ(Β₃)₂, -Ν(Β₃)ΖΒ₃, -Ν(Β₃)ΖΝ(Β₃)₂, Οι-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью, монофторалкил или полифторалкил, арил, бензил или гетероарил, где арил, бензил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вг, -I, -ΖΚ₃, -ΖΟΒ₃, -ΟΖΒ₃, -ΖΝ(Κ₃)₂, -Ν(Β₃)ΖΒ₃, -Ν(Β₃)ΖΝ(Β₃)₂, -ΟΝ, -ΝΟ₂, -8Κ₃, -(СН₂)дОВ₃, -(СН₂)_ч8Я₃, арилом, бензилом, гетероарилом, С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью, монофторалкилом или полифторалкилом, С₂-С₇ алкенилом или алкинилом с линейной или разветвленной цепью или С₃-С₇ циклоалкилом, монофторциклоалкилом, полифторциклоалкилом или циклоалкенилом;

где каждый к независимо представляет собой целое число от 1 до 3 включительно;

где и представляет собой целое число от 0 до 6 включительно;

где с| представляет собой целое число от 1 до 3 включительно;

или его фармацевтически приемлемая соль.

где каждый А независимо представляет собой -Η, -Е, -С1, -Вт, -I, -ΖΒ,. -ΖΟΒ,. -ΟΖΒ,. -ΖΝ(Β₃)₂, -Ν(Β₃)ΖΒ₃, -Ν(Β₃)ΖΝ(Β₃)₂, -ΟΝ, -ΝΟ₂, -Ν(Κ₃)₂, -ΟΒ₃, -8Κ₃, -(СН₂)₄ΟΒ₃, -(СН₂)д8В₃, С1-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью, монофторалкил или полифторалкил, С₂-С₇ алкенил или алкинил с линейной или разветвленной цепью, С₃-С₇ циклоалкил, монофторциклоалкил, полифторциклоалкил или циклоалкенил;

где каждый В независимо представляет собой N или СН;

где каждый Ζ независимо представляет собой СО; С8; 8О₂ или отсутствует;

где каждый В независимо представляет собой -Η, -Е, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, монофторалкил или полифторалкил, С₂-С₇ алкенил или алкинил с линейной или разветвленной цепью, -Ν(Κ₃)₂, -ΝΟ₂, -СИ, -СО₂В₃, -ОСОВз, -ОВ₃, -Ν(Β₃)ΟΟΒ₃ или -ΟΟΝ(Β₃)₂;

где каждый В₂ независимо представляет собой -Н, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, арил или гетероарил, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂, -ΟΝ, С1-С₇ алкилом с линейной или разветвленной цепью, монофторалкилом или полифторалкилом или С₂-С₇ алкенилом или алкинилом с линейной или разветвленной цепью;

-8008826 где каждый К₃ независимо представляет собой -Н; С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью, монофторалкил или полифторалкил; С₂-С₇ алкенил или алкинил с линейной или разветвленной цепью; С3-С7 циклоалкил, монофторциклоалкил, полифторциклоалкил или циклоалкенил; арил или гетероарил, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -Ν(Κ₂)₂, -ΝΟ₂, -ΟΝ, -СОВ₂, -СО₂В₂, -ОСОВ₂, -ОВ₂, -Ν(Β₂)ΟΟΒ₂, -Ν(Β₂)ΟΟΝ(Β₂)₂, -ΟΟΝ(Β₂)₂, арилом, гетероарилом, фенокси, С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью, монофторалкилом или полифторалкилом, С₂-С₇ алкенилом или алкинилом с линейной или разветвленной цепью, С3-С7 циклоалкилом, монофторциклоалкилом, полифторциклоалкилом или циклоалкенилом;

где каждый В₄ независимо представляет собой -Η; -ΖΒ,. -ΖΟΒ,. -ΟΖΒ,. -ΖΝ(Β₃)₂, -Ν(Β₃)ΖΒ3, -Ν(Β3)ΖΝ(Β₃)₂, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, монофторалкил или полифторалкил, арил, бензил или гетероарил, где арил, бензил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΖΚ₃, -ΖΟΒ₃, -ΟΖΒ₃, -ΖΝ(Κ₃)₂, -Ν(Β₃)ΖΒ₃, -Ν(Β₃)ΖΝ(Β₃)₂, -ΟΝ, -ΝΟ₂, -8Κ₃, -(СН₂)_ЧОВ₃, -(СН₂)_Ч§В₃, арилом, бензилом, гетероарилом, С]-С₇ алкилом с линейной или разветвленной цепью, монофторалкилом или полифторалкилом, С₂-С₇ алкенилом или алкинилом с линейной или разветвленной цепью или С3-С7 циклоалкилом, монофторциклоалкилом, полифторциклоалкилом или циклоалкенилом;

или его фармацевтически приемлемая соль.

В одном осуществлении каждый А независимо представляет собой -Η, -Е, -С1, -Вт, -I, -ΖΒ ,. -ΖΟΒ ,. -ΟΖΒ3, -ΖΝ(Κ₃)₂, -Ν(Β₃)ΖΒ₃, -Ν(Β₃)ΖΝ(Β₃)₂, -Ν(Κ₃)₂, -ОЯз, -8Κ₃, -(СН₂)_чОВ₃, -(СН₂)_ч8В₃, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, монофторалкил или полифторалкил;

где каждый Ζ независимо представляет собой СО; С8 или отсутствует;

где каждый В независимо представляет собой -Η, -Е или С] -С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью;

где каждый В₂ независимо представляет собой -Н, С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью, арил или гетероарил, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂, -ΟΝ, С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью, монофторалкилом или полифторалкилом, или С₂-С₇ алкенилом или алкинилом с линейной или разветвленной цепью;

где каждый В₃ независимо представляет собой -Н, С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью, арил или гетероарил, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -Ν(Κ₂)₂, -ΝΟ₂, -ΟΝ, -СОВ₂, -СО₂В₂, -ОСОВ₂, -ОВ₂, -Ν(Β₂)ΟΟΒ₂, -Ν(Β₂)ΟΟΝ(Β₂)₂, -СОНГЕ,),, арилом, гетероарилом, фенокси, С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью, монофторалкилом или полифторалкилом, С₂-С₇ алкенилом или алкинилом с линейной или разветвленной цепью, 0 ,-С- циклоалкилом, монофторциклоалкилом, полифторциклоалкилом или циклоалкенилом;

В одном осуществлении соединение имеет структуру:

где В | представляет собой арил, где арил необязательно замещен одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, С]-С₇ алкилом с линейной или разветвленной цепью, монофторалкилом или полифторалкилом, С₂-С₇алкенилом или алкинилом с линейной или разветвленной цепью или С ,-С- циклоалкилом, монофторциклоалкилом, полифторциклоалкилом или циклоалкенилом.

-9008826

Аз где Я₃ представляет собой арил или гетероарил, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Р, -С1, -Вт, -I, -Ν(Κ₂)₂, -ΝΟ₂, -ΟΝ, -СОЯ₂, -СО₂Я₂, -ОСОЯ₂, -ОЯ₂, -Ν(Κ₂)ΟΟΚ₂, -Ν(Κ₂)ΟΟΝ(Κ₂)₂, -ΟΟΝ(Κ₂)₂, арилом, гетероарилом, фенокси, С]-С₇ алкилом с линейной или разветвленной цепью. В одном осуществлении соединение имеет структуру:

Η-Ν

Применяемый в описанных выше осуществлениях изобретения термин гетероарил используют для обозначения пяти- или шестичленных ненасыщенных циклов, которые могут содержать один или более атомов кислорода, серы или азота. Примеры гетероарильных групп включают, но не ограничиваются этим, карбазол, фуранил, тиенил, пирролил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, изоксазолил, изотиазолил, оксадиазолил, триазолил, тиадиазолил, пиридил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил и триазинил.

Кроме того, термин гетероарил применяют для обозначения конденсированных бициклических кольцевых систем, которые могут содержать один или более гетероатомов, таких как кислород, сера и азот. Примеры таких гетероарильных групп включают, но не ограничиваются этим, индолизинил, индолил, изоиндолил, бензо [Ь]фуранил, бензо [Ь]тиофенил, индазолил, бензимидазолил, пуринил, бензоксазолил, бензизоксазолил, бензо [Ь]тиазолил, имидазо [2,1-Ь]тиазолил, циннолинил, хиназолинил, хиноксалинил, 1,8-нафтиридинил, птеридинил, хинолинил, изохинолинил, фталимидил и 2,1,3-бензотиазолил.

Термин гетероарил также включает те отмеченные выше химические фрагменты, которые могут быть замещены одним или более из следующего: -Р, -С1, -Вт, -I, ΟΝ, -ΝΟ₂, С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью, С1-С7 монофторалкилом с линейной или разветвленной цепью, С1-С7 полифторалкилом с линейной или разветвленной цепью, С₂-С- алкенилом с линейной или разветвленной цепью, С₂С7 алкинилом с линейной или разветвленной цепью, С3-С7 циклоалкилом, С3-С7 монофторциклоалкилом, С3-С7 полифторциклоалкилом, С5-С7 циклоалкенилом.

Термин гетероарил дополнительно включает Ν-оксиды тех указанных выше химических фрагментов, которые включают по меньшей мере один атом азота. В настоящем изобретении термин арил включает фенил или нафтил.

В дополнительном осуществлении описанного выше изобретения соединение является энантиомерно и диастереомерно чистым. В другом осуществлении соединение является энантиомерно или диастереомерно чистым.

В одном осуществлении соединение является (+) энантиомером. В одном осуществлении соединение является (-) энантиомером.

-10008826

В изобретении предлагается для каждого из описанных выше соединений каждый из чистых стереоизомеров. Такие стереоизомеры могут включать энантиомеры, диастереомеры или Е или Ζ алкеновые или иминовые изомеры. В изобретении также предлагаются стереоизомерные смеси, включая рацемические смеси, диастереомерные смеси или Ε/Ζ изомерные смеси. Стереоизомеры могут быть синтезированы в чистой форме (Νόβήάτ М.; 81сгсо5с1ссОус §уи1йе818, (1987) УСН Εάίΐοτ ЕЬе1, Н. и ЛбутшеШс 8уп111С818. уо1ите8 3 В 5, (1983) Асабетю Рге88, Εάίΐοτ Μοττίβοη, 1.) или их можно разделить с помощью различных способов, таких как кристаллизация и хроматографические методы (1адие8, 1.; ΟοΙΕΐ, А.; ^11еп, 8.; Епап1ютег, К.асета1е8, апб Κ^δοίπΐίοηδ, 1981, άοΐιπ ^йеу апб δοηβ и Азуттейс 8уп1йе815, УЫ. 2, 1983, Асабетк Ргезз, Εάίΐοτ ΜοΓΓίδοπ, 1).

Кроме того, соединения настоящего изобретения могут присутствовать в виде энантиомеров, диастереомеров, изомеров, или два или более соединения могут присутствовать, образуя рацемическую или диастереомерную смесь.

Соединения настоящего изобретения являются предпочтительно чистыми на 80%, более предпочтительно чистыми на 90% и наиболее предпочтительно чистыми на 95%. В данное изобретение входят фармацевтически приемлемые соли и комплексы всех описанных здесь соединений. Кислоты и основания, из которых получают данные соли, включают, но не ограничиваются этим, перечисленные здесь кислоты и основания. Кислоты включают, но не ограничиваются этим, следующие неорганические кислоты: хлористо-водородную кислоту, бромисто-водородную кислоту, иодисто-водородную кислоту, серную кислоту и борную кислоту. Кислоты включают, но не ограничиваются этим, следующие органические кислоты: уксусную кислоту, яблочную кислоту, янтарную кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, малеиновую кислоту, лимонную кислоту, метансульфоновую кислоту, бензойную кислоту, гликолевую кислоту, молочную кислоту и миндальную кислоту. Основания включают, но не ограничиваются этим, аммиак, метиламин, этиламин, пропиламин, диметиламин, диэтиламин, триметиламин, триэтиламин, этилендиамин, гидроксиэтиламин, морфолин, пиперазин и гуанидин. В данном изобретении дополнительно предлагаются гидраты и полиморфы всех описанных здесь соединений.

В объем настоящего изобретения включаются пролекарства соединений изобретения. В целом такие пролекарства обычно являются функциональными производными соединений изобретения, которые легко превращаются ш νινο в требуемое соединение. Так, в настоящем изобретении термин введение должен охватывать лечение различных состояний, описанных вместе с конкретно раскрытым соединением или с соединением, которое может быть не раскрыто конкретно, но которое превращается в конкретно описанное соединение ш νινο после введения больному.

Традиционные процедуры выбора и получения подходящих пролекарственных производных описаны, например, в Оезщп ο£ Ρτο^τυβδ, еб. Н. Випбдаагб, Ε18еν^е^, 1985.

Настоящее изобретение дополнительно включает метаболиты соединений настоящего изобретения. Метаболиты включают активные формы, продуцируемые после введения соединений данного изобретения в биологическую среду.

Твердый носитель может включать одно или более веществ, которые также могут действовать в качестве эндогенных носителей (например, пищевые или микропищевые носители), отдушки, смазывающие агенты, солюбилизаторы, суспендирующие агенты, наполнители, агенты, обеспечивающие скольжение, средства для прессования, связующие агенты или разрыхляющие таблетку агенты; это может быть также инкапсулирующее вещество. В порошках носитель является тонко измельченным твердым веществом, которое находится в смеси с тонко измельченным активным ингредиентом. В таблетках активный ингредиент смешан с носителем, обладающим необходимыми свойствами для прессования, в подходящих пропорциях и которым придана желаемая форма и размер. Порошки и таблетки предпочтительно содержат до 99% активного ингредиента. Подходящие твердые носители включают, например, фосфат кальция, стеарат магния, тальк, сахара, лактозу, декстрин, крахмал, желатин, целлюлозу, поливинилпирролидин, низкоплавкие воски и ионообменные смолы.

Жидкие носители применяют для получения растворов, суспензий, эмульсий, сиропов, эликсиров и композиций под давлением. Активный ингредиент может быть растворен или суспендирован в фармацевтически приемлемом жидком носителе, таком как вода, органический растворитель, их смесь или фармацевтически приемлемые масла или жиры. Жидкий носитель может содержать другие подходящие фармацевтические добавки, такие как солюбилизаторы, эмульгаторы, буферы, консерванты, подсластители, отдушки, суспендирующие агенты, загущающие агенты, окрашивающие агенты, регуляторы вязкости, стабилизаторы или осморегуляторы. Подходящие примеры жидких носителей для перорального и парентерального введения включают воду (в особенности содержащую добавки, описанные выше, на

- 11 008826 пример, производные целлюлозы, предпочтительно раствор натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы), спирты (включая одноатомные и многоатомные спирты, например, гликоли) и их производные, и масла (например, фракционированное кокосовое масло и арахисовое масло). Для парентерального введения носителем может быть также эфир жирных кислот, такой как этилолеат или изопропилмиристат. Стерильные жидкие носители пригодны в композициях стерильной жидкой формы для парентерального введения. Жидким носителем для композиций под давлением может быть галогенированный углеводород или другой фармацевтически приемлемый пропеллент.

Жидкие фармацевтические композиции, которые являются стерильными растворами или суспензиями, могут быть применены, например, для внутримышечного, интратекального, эпидурального, внутрибрюшинного или подкожного введения. Стерильные растворы можно также вводить внутривенно. Соединения могут быть получены в виде стерильной твердой композиции, которая может быть растворена или суспендирована перед введением с применением стерильной воды, физиологического солевого раствора или другой подходящей стерильной среды для инъекций. Подразумевается, что носители включают необходимые и инертные связующие агенты, суспендирующие агенты, смазывающие агенты, отдушки, подсластители, консерванты, красители и покрывающие агенты. Соединение можно вводить перорально, в форме стерильного раствора или суспензии, содержащих другие растворы или суспендирующие агенты (например, физиологический раствор или глюкозу в количестве, достаточном для придания раствору изотоничности), соли желчных кислот, камедь, желатин, сорбитмоноолеат, полисорбат 80 (олеатные сложные эфиры сорбита и сополимеры их ангидридов с этиленоксидом) и тому подобное.

Соединение можно также вводить перорально либо в жидкой, либо в твердой форме композиции. Композиции, пригодные для перорального введения, включают твердые формы, такие как пилюли, капсулы, гранулы, таблетки и порошки, и жидкие формы, такие как растворы, сиропы, эликсиры и суспензии. Формы, пригодные для парентерального введения, включают стерильные растворы, эмульсии и суспензии.

Оптимальные дозы для введения могут быть определены специалистами в данной области техники и должны варьироваться в зависимости от конкретного применяемого соединения, состава препарата, способа введения и прогрессирования состояния заболевания. Дополнительные факторы, зависимые от конкретного субъекта, подлежащего лечению, включая возраст субъекта, массу, пол, диету и время введения, должны приводить к необходимости подбора доз.

Иллюстрацией изобретения является способ синтеза для получения любого из соединений изобретения.

Иллюстрацией изобретения является способ лечения нарушения, опосредуемого рецептором МКГ 1, у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества любого из соединений или фармацевтических композиций изобретения и фармацевтически приемлемого носителя.

Одно осуществление представляет собой способ лечения субъекта, страдающего нарушением, выбранным из депрессии, тревожности, ожирения или ургентного неудержания мочи у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения изобретения.

В другом осуществлении нарушение представляет собой депрессию. В одном осуществлении нарушение представляет собой тревожность. В одном осуществлении нарушение представляет собой ожирение. В одном осуществлении нарушение представляет собой ургентное недержание мочи.

В применении к субъекту терапевтически эффективное количество представляет собой любое количество соединения, которое при введении субъекту, страдающему заболеванием, против которого соединения являются эффективными, вызывает подавление, ремиссию или регрессию заболевания. В применении к субъекту, субъект является позвоночным, млекопитающим или человеком.

В данном изобретении предлагается способ лечения субъекта, страдающего нарушением, где нарушение облегчается путем снижения активности рецептора МКГ-1, который включает введение субъекту соединения изобретения, которое является антагонистом рецептора МКГ-1, в количестве, эффективном для лечения нарушения у субъекта.

В отдельных осуществлениях нарушение представляет собой нарушение регуляции стероидного или гипофизарного гормона, нарушение секреции адреналина, желудочно-кишечное нарушение, сердечно-сосудистое заболевание, нарушение электролитного баланса, гипертензию, диабет, респираторное заболевание, астму, нарушение репродуктивной функции, иммунное нарушение, эндокринное заболевание, заболевание скелетных мышц, нейро-эндокринное заболевание, нарушение когнитивных функций,

- 12 008826 нарушение памяти, такое как болезнь Альцгеймера, нарушение сенсорной модуляции и трансмиссии, нарушение координации движений, нарушение сенсорной интеграции, нарушении интеграции движений, нарушение дофаминэргической функции, такое как болезнь Паркинсона, нарушение сенсорной трансмиссии, нарушение обоняния, нарушение симпатической иннервации, аффективное расстройство, такое как депрессия и тревожность, связанное со стрессом нарушение, нарушение баланса жидкостей, припадочное состояние, боль, психотическое поведение, такое как шизофрения, толерантность к морфину, опиатная зависимость, мигрень или нарушение мочеиспускания, такое как недержание мочи.

В предпочтительном осуществлении предметом изобретения является способ лечения по следующим показаниям: депрессия, тревожность, нарушения питания/массы тела и нарушения мочеиспускания. Примерами нарушения питания/массы тела являются ожирение, булимия или нейрогенная булимия. Примеры нарушения мочеиспускания включают, но не ограничиваются этим, недержание мочи, гиперактивный мочевой пузырь, ургентное недержание мочи, частое мочеиспускание, срочное мочеиспускание, ночное недержание мочи или энурез. Гиперактивный мочевой пузырь и срочное мочеиспускание могут быть или не быть связанными с доброкачественной гиперплазией простаты.

В данном изобретении предлагается способ модификации пищевого поведения субъекта, который включает введение субъекту количества соединения изобретения, эффективного для снижения потребления пищи субъектом.

В данном изобретении также предлагается способ лечения нарушения питания у субъекта, который включает введение субъекту количества соединения данного изобретения, эффективного для снижения потребления пищи субъектом. В осуществлении настоящего изобретения нарушение питания представляет собой булимию, ожирение или нейрогенную булимию. В осуществлении настоящего изобретения субъект является позвоночным, млекопитающим, человеком или собакой. В дополнительном осуществлении соединение вводят в сочетании с пищей.

В настоящем изобретении дополнительно предлагается способ снижения массы тела субъекта, который включает введение субъекту количества соединения изобретения, эффективного для снижения массы тела субъекта.

В настоящем изобретении также предлагается способ лечения субъекта, страдающего депрессией, который включает введение субъекту количества соединения данного изобретения, эффективного для лечения депрессии у субъекта. В настоящем изобретении дополнительно предлагается способ лечения субъекта, страдающего тревожностью, который включает введение субъекту количества соединения данного изобретения, эффективного для лечения тревожности у субъекта. В настоящем изобретении также предлагается способ лечения субъекта, страдающего депрессией и тревожностью, который включает введение субъекту количества соединения данного изобретения, эффективного для лечения депрессии и тревожности у субъекта.

В настоящем изобретении также предлагается способ лечения субъекта, страдающего главным депрессивным нарушением, дистимическим нарушением, биполярными нарушениями I и II, шизоаффективным нарушением, нарушениями когнитивных способностей с состоянием депрессии, нарушениями личности, бессонницей, сонливостью, нарколепсией, нарушением циркадного ритма сна, ночными кошмарами, состоянием ужаса во сне, лунатизмом, принудительным навязчивым состоянием, паническим состоянием с или без клаустрофобии, посттравматическим стрессом, состоянием социальной тревожности, социальной фобией и состоянием генерализованной тревожности.

В настоящем изобретении также предлагается способ лечения субъекта, страдающего нарушением мочеиспускания, который включает введение субъекту количества соединения данного изобретения, эффективного для лечения нарушения мочеиспускания у субъекта. В некоторых осуществлениях нарушения мочеиспускания представляют собой недержание мочи, гиперактивный мочевой пузырь, ургентное недержание мочи, частое мочеиспускание, ургентное мочеиспускание, ночное недержание мочи или энурез.

Данное изобретение будет лучше понято из последующих подробных экспериментов. Однако специалист в данной области техники должен с легкостью понять, что конкретные обсуждаемые способы и результаты являются только иллюстрациями изобретения, как описано более полно в формуле изобретения, следующей после них.

Экспериментальная часть

I. Синтез химических соединений.

Общие способы. Все реакции проводили в атмосфере аргона, и реагенты, в чистом виде или в подходящих растворителях, переносили в реакционный сосуд посредством шприца или канюли. Множественные реакции параллельного синтеза проводили в сосудах (без инертной атмосферы) с применением IКЕМ мешалок с нагревателем (ΞαίηΙ Ьоищ, МО). Безводные растворители получали от А1бпс11 С11С1шеа1 Сотрапу (Мй^аикее, XVI) и использовали сразу после получения.

Если это не отмечено специально, 'Н спектры записывали при 400 МГц (Втикет, Мобе1: Ауапсе) с тетраметилсиланом в качестве внутреннего стандарта, с = синглет; д = дублет; т = триплет; кв = квартет; р = квинтет; секстет; септет; уш. = уширенный; м = мультиплет.

- 13 008826

Элементный анализ проводился КоЬейкои ΜίοτοΙίΙ ЬаЬога1опс5. 1ис. Если не указано иначе, массспектры получали на приборе Уб РаIГоπη II с применением электрораспыления (Ε8Ι-Μ8) с представлением МН⁺. Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на стеклянных пластинах, предварительно покрытых силикагелем 60 Е₂54 (0,25 мм, ЕМ Бератабоик Теей.). Препаративную тонкослойную хроматографию проводили на стеклянных листах, предварительно покрытых силикагелем ОЕ (2 мм, АпаИссй). Колоночную флеш-хроматографию проводили на силикагеле Метек 60 (230-400 меш). Точки плавления (т.пл.) определяли в открытых капиллярных трубках на приборе Ме1-Тешр и они являются нескорректи рованными.

Следующие схемы иллюстрируют способы синтеза соединений настоящего изобретения. Схема I

(а) ЬОА/ Ρ11ΝΤΕ /ТГФ/ -78°С, затем 0°С в течение ночи. (Ь) Аминофенилбороновая кислота/ Ρά(ΡΡ1ι)₄ /ЫС1/ №1₂СО₃/ ЭМЕ-Н_;О/ кипячение с обратным холодильником 3 ч. (с) 10% Ρά/С /Н₂/ ЕЮН/ комн. темп. 24-48 ч. (ά) Хлорангидрид/ триэтиламин/ ТГФ/ 0°С, затем комн. темп. 2-3 ч или карбоновая кислота/ ЕЭС/ ОМАР/ СН₂С1₂/ ДМФА/ комн. темп. 12 ч. (е) 4М НС1 в 1,4-диоксане/ комн. темп. 1 ч или ТФУ/ СН₂С1₂/ комн. темп. 10 мин.

течение ночи.

в

О_ч Λ

Вос (Ъ) К₂СО₃/ Ράα₂άρρί7 (а) Бис (пинаколато) дибор/КОАс/РбС1₂бррШрр£/80°С

ДМФА/ 80°С в течение ночи, (с) 10% Ρά/С /Н₂/ ЕЮН/ комн. темп. 24-72 ч. (ά) 4М НС1 в 1,4-диоксане/ комн. темп. 1 ч или ТФУ/ СН₂С1₂/ комн. темп. 10 мин. (е) Карбоновая кислота/ ЕОС/ ОМАР/ СН₂С1₂/ ДМФА/ комн. темп. 12 ч. (Г) Н₂§0₄/ ΗΝΟ₃, 0°С, 10 мин. (§) Ее/ ΝΗ,Ο/ ТГФ/ Н₂О/ ЕЮН/ 95°С, 1,5 ч. (Ь) СЬх-С1/№НС0₃/ ΟΗ₃ΟΝ/ комн. темп. 12 ч.

-14008826

Схема III

(Ь) К₂СО₃/ Рс1С1₂с1ррГ/ ДМФА/ 85°С 24 ч. (с) 10% Ρά/С /Н₂ (200 фунтов/дюйм²; 1379 кПа)/ ЕЮАс/ МеОН/ комн. темп. 24-72 ч. (с1) 4 М НС1 в 1,4-диоксане/ комн. темп. 1 ч или ТФУ/ СН₂С1₂/ комн. темп. 0,2 ч. (е) Карбоновая кислота/ ЕОС/ ОМАР/ СН₂С1₂/ ДМФА/ комн. темп. 12 ч.

Общая методика пиперидинового синтеза (схема 1).

о

Вос Вос трет-Бутил 4-{[(трифторметил)сульфонил]окси}-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилат: н-Бутил лития (17,6 мл, 44,2 ммоль, 2,5 М в гексанах) добавляли к раствору диизопропиламина (96,2 мл, 44,2 ммоль) в безводном ТГФ (40,0 мл) при 0°С, и полученную смесь перемешивали в течение 20 мин. Реакционную смесь охлаждали до -78°С, и трет-бутил 4-оксо-1-пиперидинкарбоксилат (ΑΙάποΙι С11ет1са1 Сотрапу, 7,97 г, 40,0 ммоль) в ТГФ (40,0 мл) по каплям добавляли к реакционной смеси, которую затем перемешивали в течение 30 мин. К реакционной смеси по каплям добавляли Τ£₂ΝΡ1ι (42,0 ммоль, 15,0 г) в ТГФ (40,0 мл), и реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение ночи.

Реакционную смесь концентрировали в вакууме, повторно растворяли в смеси гексаны:Е1ОАс (9:1), пропускали через слой оксида алюминия, и слой оксида алюминия промывали смесью гексаны:Е1ОАс (9:1). Объединенные экстракты концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (16,5 г), который был загрязнен некоторым количеством исходного вещества Τ£₂ΝΡ1ι.

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 5,77 (с, 1Н), 4,05 (дм, 2Н, 1=3,0 Гц), 3,63 (т, 2Н, 1=5,7 Гц), 2,45 (м, 2Н), 1,47 (с, 9Н).

Вос трет-Бутил 4-(3 -амино фенил)-3,6-дигидро-1 (2Н)-пиридинкарбоксилат.

Дегазированную смесь 2М водного раствора №₂СО₃ (4,20 мл), трет-бутил 4-{ [(трифторметил) сульфонил]окси}-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилата (0,500 г, 1,51 ммоль), гемисульфата 3аминофенилбороновой кислоты (0,393 г, 2,11 ммоль), хлорида лития (0,191 г, 4,50 ммоль) и тетракистрифенилфосфинпалладий (0,080 г, 0,075 ммоль) в диметоксиэтане (5,00 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч в атмосфере аргона. Органический слой охлажденной реакционной смеси отделяли, и водный слой промывали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические растворы сушили и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт хроматографировали (диоксид кремния, смесь гексаны:Е1:ОАс: дихлорметан 6:1:1 с 1% изопропиламином) с получением желаемого продукта (0,330 г, 81%).

Ή ЯМР (400 МГц, ΟϋΟ1₃) δ 7,12 (т, 1Н, 1=7,60 Гц), 6,78 (д, 1Н, 1=8,4 Гц), 6,69 (т, 1Н, 1=2,0 Гц), 6,59 (д.д., 1Н, 1=2,2, 8,0 Гц), 6,01 (уш, 1Н), 4,10-4,01 (д, 2Н, 1=2,4 Гц), 3,61 (т, 2Н, 1=5,6 Гц), 2,52-2,46 (м, 2Н), 1,49 (с, 9Н); Е§М§ ш/е: 275,2 (М + Н)⁺. Аналит. рассчит. для СкДгдЩЭг: С 70,04; Н 8,08; N 10,2. Найдено: С 69,78; Н 7,80; N 9,92.

- 15 008826 трет-Бутил 4-[3 -(амино)фенил] -1 -пиперидинкарбоксилат.

Смесь трет-бутил 4-(3-аминофенил)-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилата (3,10 г, 11,3 ммоль) и 10% Ρά/С (1,00 г) в этаноле (100 мл) гидрировали при комнатной температуре с применением баллонного способа в течение 2 дней. Реакционную смесь фильтровали через целит и промывали этанолом. Объединенные этанольные экстракты концентрировали в вакууме, и остаток хроматографировали на диоксиде кремния (смесь дихлорметан:метанол:изопропиламин 95:5:1) с получением желаемого продукта (2,63 г, 84%).

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1з) δ 7,10 (т, 1Н, 1=7,6 Гц), 6,62 (д, 1Н, 1=8,4 Гц), 6,60-6,59 (м, 2Н), 4,27-4,18 (м, 2Н), 3,62-3,58 (м, 2Н), 2,80-2,72 (м, 2Н), 2,62-2,59 (м, 1Н), 1,89-1,52 (м, 4Н), 1,49 (с, 9Н); Е8М8 ш/е: 277,2 (М + Н)⁺.

трет-Бутил 4-{3-[(6-бромгексаноил)амино]фенил}-1-пиперидинкарбоксилат: 25-мл круглодонный сосуд, наполненный трет-бутил 4-[3-(амино)фенил]-1-пиперидинкарбоксилатом (2,00 ммоль, 0,553 г), 6бромгексаноилхлоридом (0,427 г, 2,00 ммоль, 1,0 экв.), триэтиламином (0,404 г, 4,00 ммоль) и ТГФ (8,00 мл), перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли хлороформом (50 мл) и промывали водой (100 мл), насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄ и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией (силикагель, смесь гексаны/ЕЮАс 10:1) с получением желаемого продукта (0,921 г, 95,8%).

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 7,47 (с, 1Н), 7,28-7,22 (м, 2Н), 7,11 (с, 1Н), 6,5 (д, 1Н, 1=7,0 Гц), 3,453,39 (м, 2Н), 2,85-2,70 (м, 2Н), 2,68-2,58 (м, 1Н), 2,37 (т, 2Н, 1=7,4 Гц), 1,96-1,71 (м, 7Н), 1,68-1,50 (м, 5Н), 1,48 (с, 9Н); Е8М8 ш/е: 355,4, 476,6.

трет-Бутил 4-(3-{[6-(3,4-дифторанилино)гексаноил]амино}фенил)-1-пиперидинкарбоксилат: 5-мл круглодонный сосуд, наполненный трет-бутил 4-{3-[(6-бромгексаноил)амино]фенил}-1-пиперидинкарбоксилатом (40,9 мг, 0,100 ммоль), 3,4-дифторанилином (0,100 ммоль, 12,9 мг), К₂СО₃ (0,100 ммоль, 13,8 мг), ΝηΙ (22,5 мг, 0,150 ммоль) и ДМФА (1,00 мл), нагревали при 120°С в течение 12 ч. Смесь разбавляли водой (10 мл). Водный слой экстрагировали хлороформом (3 х 10 мл), и объединенные экстракты промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄ и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией (смесь гексаны/ЕЮАс 10:1) с получением желаемого продукта в виде светложелтого масла (7,14 мг, 14,3%).

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 7,47 (с, 1Н), 7,31-7,18 (м, 1Н), 6,98-6,90 (м, ЗН), 6,50-6,43 (м, 1Н), 6,406,30 (м, 2Н), 6,26-6,20 (м, 1Н), 4,28-4,18 (м, 2Н), 3,06 (т, 2Н, 1=7,2 Гц), 2,97-2,87 (м, 1Н), 2,84-2,72 (м, 2Н), 2,68-2,58 (м, 2Н), 2,38 (т, 2Н, 1=7,4 Гц), 1,85-1,73 (м, 4Н), 1,7-1,54 (м, 4Н), 1,48 (с, 9Н); Е§М§ ш/е: 502,2 (М + Н)⁺.

- 16008826

Пример 6. 6-(3,4-Дифторанилино)-Х-[3-(4-пиперидинил)фенил]гексанамид. В раствор трет-бутил 4(3-{[6-(3,4-дифторанилино)гексаноил]амино}фенил)-1-пиперидинкарбоксилата (11,2 мг, 0,0224 ммоль) в дихлорметане (0,500 мл) при 0°С медленно добавляли трифторуксусную кислоту (25,5 мг, 2,24 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в смеси изо-РгОН/СНС1₃ (1:3, 10 мл) и подщелачивали до рН 11 10% раствором КОН, промывали Н₂О и затем насыщенным раствором соли. Органический слой сушили над М§§0₄ и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (8,98 мг, 99%): 'Н ЯМР (400 МГц, ΟϋΟ1₃) δ 7,39-7,08 (м, 5Н), 7,06-6,94 (м, 2Н), 6,91-6,81 (м, 1Н), 6,77-6,67 (м, 1Н), 3,54-3,42 (м, 2Н), 3,25-3,04 (м, ЗН), 2,91-2,80 (м, 1Н), 2,45-2,32 (м, 2Н), 2,11-1,99 (м, 2Н), 1,98-1,83 (м, 2Н), 1,80-1,62 (м, 4Н), 1,55-1,40 (м, 2Н), 1,34-1,23 (м, 1Н); Е§М§ ш/е: 402,2 (М + Н)⁺.

Следующие соединения получали согласно схеме I.

Пример 1. 5-(2-Метоксифенил)-М-[3-(4-пиперидинил)фенил]пентанамид.

трет-Бутил 4-(3-{[5-(2-метоксифенил)пентаноил]амино}фенил)-1-пиперидинкарбоксилат обрабатывали в соответствии со схемой I с получением продукта.

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 7,52-6,68 (м, 8Н), 3,74 (с, ЗН), 3,61-3,35 (м, 2Н), 3,14-2,90 (м, 2Н), 2,882,56 (м, ЗН), 2,52-2,27 (м, 2Н), 2,10-1,51 (м, 8Н); ЕБ1МБ ш/е: 367,2 (М + Н)⁺.

Пример 2. 5-Фенил-М-[3-(4-пиперидинил)фенил]пентанамид.

трет-Бутил 4-{3-[(5-фенилпентаноил)амино]фенил}-1-пиперидинкарбоксилат обрабатывали в соответствии со схемой I с получением продукта.

^!Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 7,51-6,83 (м, 9Н), 3,66-3,40 (м, 2Н), 3,08-2,80 (м, 2Н), 2,78-2,45 (м, ЗН), 2,43-2,28 (м, 2Н), 2,08-1,06 (м, 8Н); ЕБ1МБ ш/е: 337,2 (М + Н)⁺.

Пример 3. 6-Оксо-6-фенил-М-[3-(4-пиперидинил)фенил]гексанамид.

трет-Бутил 4-{ 3 -[(6-оксо-6-фенилгексаноил)амино] фенил} -1 -пиперидинкарбоксилат обрабатывали в соответствии со схемой I с получением продукта.

Ή ЯМР (400 МГц, СО₃ОО) δ 7,98-7,83 (м, 2Н), 7,60-7,31 (м, 4Н), 7,28-7,12 (м, 2Н), 6,97-6,87 (м, 1Н), 3,48-3,31 (м, 2Н), 3,10-2,68 (м, 5Н), 2,40-2,26 (м, 2Н), 2,05-1,63 (м, 8Н); ЕБ1МБ ш/е: 365,2 (М + Н)⁺.

Пример 4. 2-Фенокси-М-{3-(4-пиперидинил)фенил]никотинамид.

Смесь трет-бутил 4-[3-(амино)фенил]-1-пиперидинкарбоксилата (0,15 ммоль), 2-феноксиникотиноилхлорида (0,23 ммоль) и триэтиламина (0,30 ммоль) в 3 мл растворителя (смеси СН₂С1₂:ТГФ, 1:3) перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. Реакционную смесь очищали препаративной ТСХ (диоксид кремния, смесь Е1ОАс:гексаны 1:1) с получением желаемого продукта, трет-бутил 4-(3{[(2-фенокси-3-пиридинил)карбонил]амино}фенил)-1-пиперидинкарбоксилата. К очищенному продукту, растворенному в 1,0 мл СН₂С1₂, добавляли трифторуксусную кислоту (1,0 мл), и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 мин. Реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением соли ТФУ желаемого продукта.

^!Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 9,85 (с, 1Н), 8,76-8,64 (уш., 1Н), 8,30-8,14 (уш., 1Н), 7,67 (с, 1Н), 7,49 (т, 2Н, 1=7,8 Гц), 7,42-7,29 (м, ЗН), 7,24 (т, ЗН, 1=5,2 Гц), 7,03 (д, 1Н, 1=7,2 Гц), 3,59 (уш.д, 2Н, 1=11,5 Гц), 3,16-3,02 (м, 2Н), 2,9-2,79 (м, 1Н), 2,14-2,01 (м, 4Н); ЕБ1МБ ш/е: 374,1 (М + Н)⁺.

Пример 5. 5-(4-Метоксифенил)-Х-[3-(4-пиперидинил)фенил]пентанамид.

Получали в соответствии с методикой, описанной на схеме 1

Метил (22)-2-ацетил-3-(4-фторфенил)-2-пропеноат. Смесь 4-фторбензальдегида (25,5 г, 0,220 моль), метил 3-оксобутаноата (21,80 г, 0,220 моль) и пиперидина (1,0 мл) в безводном бензоле (250 мл) перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре и затем кипятили с обратным холодильником и насадкой Дина-Старка. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры, и растворитель удаляли в вакууме с получением метил (2Ζ)-2-ацетил-3-(4-фторфенил)-2-пропеноата в виде черного твердого вещества (48,6 г, 99%), которое использовали на следующей стадии без очистки.

Метил 6-(4-фторфенил)-2-метокси-4-метил-1,6-дигидро-5-пиримидинкарбоксилат. Смесь метил (2Ζ)-2-3ποτΐΓΐ-3-(4-φτορφθΗίΓΐ)-2-προπθΗθ3τη (0,220 моль, 48,8 г), бисульфата О-метилизомочевины (53,40 г, 0,310 г, 1,5 экв.), ХаНСО₃ (61,74 г, 0,74 моль, 3,5 экв.) и этанола (1,2 л) кипятили с обратным

- 17008826 холодильником в течение 24 ч, охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Твердое вещество промывали этанолом (200 мл), и объединенный фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией (силикагель, смесь гсксаны/ЕЮАс/ЕьН 50:50:0,1) с получением смеси таутомеров (4:1, 33,0 г, 53,9%).

Ή ЯМР (ΟϋΟ1₃) δ 7,32-7,24 (м, 2Н), 7,04-6,95 (м, 2Н), 5,81 (с, 1Н), 5,38 (д, 1Н, 1=2,9 Гц), 4,00 (с, ЗН), 3,63 (с, ЗН), 2,34 (с, ЗН).

5-Метил 1-(4-нитрофенил) 6-(4-фторфенил)-2-метокси-4-метил-1,5(6Н)-пиримидиндикарбоксилат. К раствору метил 6-(4-фторфенил)-2-метокси-4-метил-1,6-дигидро-5-пиримидинкарбоксилата (1,76 г, 6,34 ммоль) и 4-диметиламинопиридина (12,7 ммоль, 1,55 г) в безводном СН₂С1₂ (20,0 мл) добавляли раствор 4-нитрофенилхлорформиата (4,47 г, 22,2 ммоль) в СН₂С1₂ (20,0 мл) при 23 °С. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли СН₂С1₂ (50 мл), промывали водой, насыщенным раствором соли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали моментальной колоночной хроматографией (смесь гексаны/этилацетат 4:1). Продукт получали в виде желтого сиропа, который после растирания с гексанами превращался в белый порошок (2,40 г, 84,3%). Неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метил 1-{[(4-трет-бутокси-4-оксобутил)амино]карбонил}-6-(4-фторфенил)-2-метокси-4-метил-1,6дигидро-5-пиримидинкарбоксилат. К раствору 5-метил 1-(4-нитрофенил) 6-(4-фторфенил)-2-метокси-4метил-1,5(6Н)-пиримидиндикарбоксилата (88,7 мг, 0,200 ммоль) и К₂СО₃ (41,5 мг, 0,300 ммоль) в смеси СН₃ОН/СН₂С1₂ (0,1/2,0 мл) добавляли трет-бутил 4-аминобутаноат (31,8 мг, 0,200 ммоль). После перемешивания при комн. темп, в течение 1 ч смесь промывали насыщенным 1\Га₂СО₃ и насыщенным раствором соли. Органический слой сушили над Мд§О₄ и концентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очищали флэш-хроматографией (5-10% 2М ΝΗ₃/ΜεΟΗ в 50% смеси ЕЮАс/гексаны) с получением продукта (92,2 мг, 99%). Т. пл. 135-138°С.

Ή ЯМР (Οϋ₃Οϋ) δ 7,29-7,23 (м, 2Н), 6,97-6,88 (м, 2Н), 6,65 (с, 1Н), 3,98 (с, ЗН), 3,66 (с, ЗН), 3,383,30 (м, 2Н), 2,43 (с, ЗН), 2,28 (т, 2Н, 1=7,2 Гц), 1,89-1,78 (м, 2Н), 1,43 (с, 9Н); Е8М8 ш/е: 464,1 (М + Н)⁺.

4-{[(6-(4-Фторфенил)-5-(метоксикарбонил)-4-метил-2-оксо-3,6-дигидро-1(2Н)-пиримидинил)карбонил]амино}масляная кислота. К раствору метил 1-{[(4-трет-бутокси-4-оксобутил)амино]карбонил}-6(4-фторфенил)-2-метокси-4-метил-1,6-дигидро-5-пиримидинкарбоксилата (77,3 мг, 0,166 ммоль) в дихлорметане (2,00 мл) при 0°С медленно добавляли трифторуксусную кислоту (189 мг, 1,66 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в смеси изо-РгОН/СНС1₃ (1:3, 10 мл) и подщелачивали до рН 11 10% раствором КОН, промывали Н₂О и затем насыщенным раствором соли. Органический слой сушили над Мд§О₄ и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (58,1 мг, 88,9%). Е8М8 ш/е: 394,1 (М + Н)⁺.

и

- 18008826

Метил 3-{[(4-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)-4-пиперидинил]анилино}-4-оксобутил)амино]карбонил}-4-(4-фторфенил)-6-метил-2-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинкарбоксилат. В 10-мл круглодонный сосуд загружали 4-{[(6-(4-фторфенил)-5-(метоксикарбонил)-4-метил-2-оксо-3,6-дигидро-1(2Н)пиримидинил)карбонил]амино}масляную кислоту (77,0 мг, 0,189 ммоль), трет-бутил-4-[3-(амино)фенил]-1-пиперидинкарбоксилат (52,2 мг, 0,189 ммоль), гидрохлорид 1-[3-(диметиламино)пропил]-3этилкарбодиимида (0,567 ммоль, 87,8 мг), 4-диметиламинопиридин (11,5 мг, 0,0945 ммоль) в смеси ДМФА/ДХМ (0,2:2,0 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 12 ч, и к реакционной смеси добавляли воду (10,0 мл). Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали СНС1₃ (3 х 10 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали (диоксид кремния, смесь гексаны:Е1ОАс 9:1) с получением желаемого продукта (40,9 мг, 33,2%):

Ή ЯМР (400 МГц, ΓΌΟΙ,) δ 8,03 (м,ЗН), 7,57 (с, 1Н), 7,36-7,28 (м, ЗН), 7,27-7,22 (м, 1Н), 6,97-6,89 (м, ЗН), 6,72 (с, 1Н), 3,72 (с, ЗН), 3,47-3,37 (м, 2Н), 2,42 (с, ЗН), 2,37-2,29 (м, 2Н), 1,98-1,91 (м, 2Н), 1,86-

1,75 (м, 2Н), 1,72-1,54 (м, 7Н), 1,48 (с, 9Н); Е§М§ ш/е: 652,2 (М + Н)⁺.

Пример 7. Метил 4-(4-фторфенил)-6-метил-2-оксо-3-[({4-оксо-4-[3-(4-пиперидинил)анилино]бутил} амино)карбонил] -1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинкарбоксилат.

К раствору метил 3-{[(4-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)-4-пиперидинил]анилино}-4-оксобутил)амино]карбонил}-4-(4-фторфенил)-6-метил-2-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинкарбоксилата (40,9 мг, 0,0628 ммоль) в дихлорметане (2,00 мл) при 0°С медленно добавляли трифторуксусную кислоту (71,6 мг, 0,628 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в смеси изо-РгОН/СНС1з (1:3, 10 мл) и подщелачивали до рН 11 10% раствором КОН, промывали Н₂О и затем насыщенным раствором соли. Органический слой сушили над М§§0₄ и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (34,6 мг, 99%):

Ή ЯМР (400 МГц, ΓΌΟΙ,) δ 8,00 (м, ЗН), 7,67 (с, 1Н), 7,35-7,27 (м, 4Н), 7,04-6,98 (м, ЗН), 6,65 (с, 1Н), 3,72 (с, ЗН), 3,5-3,48 (м, 2Н), 3,20-3,11 (м, ЗН), 2,42 (т, 2Н, 1=7, 5 Гц), 2,36 (с, ЗН), 2,13-2,06 (м, 2Н), 1,97-1,88 (м, 4Н); Е§М§ ш/е: 552,3 (М + Н)⁺.

трет-Бутил-4-{3-[(4-{[(5-метоксилкарбонил-6-(3,4-дифторфенил)-4-метил-2-оксо-3,6-дигидро1(2Н)-пиримидинил)карбонил]амино}бутаноил)амино]фенил}-1-пиперидинкарбоксилат. В 50-мл сосуд загружали 4-{[(5-ацетил-6-(3,4-дифторфенил)-4-метил-2-оксо-3,6-дигидро-1(2Н)-пиримидинил)карбонил]амино}масляную кислоту (313 мг, 0,854 ммоль), трет-бутил-4-[3-(амино)фенил]-1-пиперидинкарбоксилат (235 мг, 0,857 ммоль), гидрохлорид 1-[3-(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимида (7,71 ммоль, 265 мг), 4-диметиламинопиридин (10,4 мг, 0,0854 ммоль) в смеси ДМФА/ДХМ (0,8:8,0 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 12 ч, и к реакционной смеси добавляли воду (20,0 мл). Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали СНС1з (3 х 10 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали (диоксид кремния, смесь гексаньгЕЮАс 9:1) с получением желаемого продукта (378 мг, 67,8%):

Ή ЯМР (400 МГц, ΓΌΟΙ,) δ 8,03 (м, 2Н), 7,57 (с, 1Н), 7,36-7,28 (м, ЗН), 7,27-7,22 (м, 1Н), 6,97-6,89 (м, ЗН), 6,72 (с, 1Н), 3,72 (с, ЗН), 3,47-3,37 (м, 2Н), 2,42 (с, ЗН), 2,37-2,29 (м, 2Н), 1,98-1,91 (м, 2Н), 1,86-

1,75 (м, 2Н), 1,72-1,54 (м, 7Н), 1,48 (с, 9Н); Е§М§ ш/е: 554,3 (М-100).

- 19008826

Пример 8. 5-Метоксикарбонил-6-(3,4-дифторфенил)-4-метил-2-оксо-Н-{4-оксо-4-[3-(4-пиперидинил)анилино] бутил } -3,6 -дигидро -1 (2Н) -пиримидинкарбоксамид.

К раствору трет-бутил 4-{3-[(4-{[(5-метоксилкарбонил-6-(3,4-дифторфенил)-4-метил-2-оксо-3,6дигидро-1 (2Н)-пиримидинил)карбонил]амино }бутаноил)амино] фенил}-1 -пиперидинкарбоксилата (378 мг, 0,579 ммоль) в дихлорметане (5,00 мл) при 0°С медленно добавляли трифторуксусную кислоту (659 мг, 5,79 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в смеси изо-РгОН/СНС1з (1:3, 10 мл) и подщелачивали до рН 11 10% раствором КОН, промывали Н₂О и затем насыщенным раствором соли. Органический слой сушили над М§§0₄ и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (смесь дихлорметан:метанол 5:1) с получением желаемого продукта (93,8 мг, 29,3%).

Ή ЯМР (400 МГц, СБС1₃) δ 7,46-7,43 (м, ЗН), 7,35-7,29 (м, 2Н), 7,12-7,06 (м, ЗН), 6,63-6,60 (м, 1Н), 6,56-6,52 (м, 2Н), 3,26 (с, ЗН), 3,22 (с, ЗН), 2,72 (д.т., 6Н, 1=2,3, 12,3 Гц), 2,66 (т.т., 2Н, 1=3,6, 11,9 Гц), 2,55 (т.т., 1Н, 1=3,8, 11,9 Гц), 1,88-1,82 (м, 1Н), 1,75-1,63 (м, 6Н); Е8М8 ш/е: 554,3 (М + Н)⁺.

Общая методика пиперидинового синтеза (схема 2)

трет-Бутил 4-(4,4,5,5-те1раметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилат.

В 50-мл круглодонный сосуд загружали бис(пинаколато)дибор (422 мг, 1,66 ммоль), КО Ас (444 мг, 4,53 ммоль), Рс1С1₂с1ррГ (37,0 мг, 3,00 моль%) и с1ррГ (25 мг, 3,00 моль%), добавляли раствор трет-бутил 4[{(трифторметил)сульфонил]окси}-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилата (500 мг, 1,51 ммоль) в 1,4диоксане (10,0 мл) при комнатной температуре в атмосфере аргона. Смесь нагревали до 80°С в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали через целит, и целит промывали ЕЮ Ас (3 х 20 мл). Объединенные фильтраты промывали Н₂О и насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали моментальной хроматографией (смесь ЕЮАс:гексаны 9:1) с получением трет-бутил 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2диоксаборолан-2-ил)-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилата (355 мг, 76%).

Ή ЯМР (400 МГц, СБС1₃) δ 6,60-6,34 (уш., 1Н), 4,06-3,86 (уш., 2Н), 3,55-3,34 (уш., 2Н), 2,35-2,09 (уш., 2Н), 1,46 (с, 9Н), 1,26 (с, 12Н); Е8М8 ш/е: 310,4 (М + Н)⁺.

5-Бром-2,4-дифторнитробензол. К суспензии 1-бром-2,4-дифторбензола (53,0 ммоль, 6,00 мл) в концентрированной Н₂§0₄ (38,5 мл) при 0°С по каплям добавляли концентрированную ΗΝΟ₃ (34,0 мл), поддерживая температуру реакционной массы ниже 20°С. Полученную смесь перемешивали в течение 10 мин при 0°С и затем выливали в смесь воды и льда при интенсивном перемешивании. Смесь экстрагировали Е1₂О (3 х 100 мл). Объединенные органические экстракты промывали водным раствором ΝηНСО₃ (3 х 100 мл) и насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (смесь ЕЮАс:гексаны 1:9) с получением 5-бром-2,4-дифторнитробензола в виде желтого масла (12,2 г, 97%).

Ή ЯМР (400 МГц, СБС1₃) δ 8,45 (т, 1Н, 1=7,5 Гц), 7,16 (д.д., 1Н, 1=11,0, 8,6 Гц); Е8М8 ш/е: 240, 238, 223,221, 112.

-20008826

5-Бром-2,4-дифторанилин. В 250-мл круглодонный сосуд загружали 5-бром-2,4-дифторнитробензол (5,04 г, 21,3 ммоль), насыщенный ΝΗ,Ο (25,0 мл), порошок железа (5,00 г, 89,5 ммоль), этанол (100 мл), ТГФ (50,0 мл) и воду (25,0 мл), нагревали с обратным холодильником до 95°С в течение 1,5 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли насыщенный раствор ΝηΗίΌ;, (100 мл), и смесь фильтровали через целит, и целит промывали ЕЮ Ас (3 х 50 мл). Объединенные фильтраты промывали Н₂О и насыщенным раствором соли, сушили над Мд§О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (смесь ЕЮАс:гексаны 1:9) с получением 5-бром-2,4дифторанилина (2,61 г, 59,1%).

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 6,97 (д.д., 1Н, 1=7,2, 6,7 Гц), 6,85 (τ, 1Н, 1=8,2 Гц), 3,63 (уш., 2Н).

ЫНСЬг

Бензил 5-бром-2,4-дифторфенилкарбамат. В 250-мл круглодонный сосуд добавляли 5-бром-2,4дифторанилин (5,00 г, 24,2 ммоль), хлорбензилформиат (4,10 мл, 29,0 ммоль), ΝηΗίΌ;, (6,10 г, 72,6 ммоль) и ацетонитрил (100 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 12 ч, затем фильтровали через грубый фильтр из пористого стекла, воронку с тонким стеклянным фильтром, промывали ЕЮ Ас (3 х 20 мл) и концентрировали в вакууме. Фильтрат промывали Н₂О и насыщенным раствором соли, сушили над Мд§О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (смесь ЕЮАстексаны 1:9) с получением бензил 5-бром-2,4дифторфенилкарбамата (5,05 г, 61,0%).

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 8,38 (с, 1Н), 7,49-7,31 (м, 5Н), 6,94-6,89 (м, 1Н), 6,81-6,77 (м, 1Н), 5,22 (с, 2Н); Е8М8 ш/е: 340,1 (М - Н⁺).

трет-Бутил 4-(5-{[(бензилокси)карбонил]амино}-2,4-дифторфенил)-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилат.

В 250-мл круглодонный сосуд, содержащий трет-бутил 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-

2-ил)-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилат (4,58 г, 14,8 ммоль), К₂СО₃ (6,14 г, 44,4 ммоль) и Рс1С1₂с1ррГ (1,48 ммоль, 1,21 г), добавляли раствор бензил 5-бром-2,4-дифторфенилкарбамата (5,05, 14,8 ммоль) в ДМФА (150 мл) при комнатной температуре в атмосфере аргона. Смесь нагревали до 80°С в атмосфере аргона в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали через целит, и целит промывали ЕЮАс (3 х 100 мл). Фильтраты промывали Н₂О (3 х 200 мл), насыщенным раствором соли (100 мл), сушили над Мд§О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очищали флэш-хроматографией (смесь ЕЮАстексаны 1:9) с получением трет-бутил 4-(5{[(бензилокси)карбонил]амино}-2,4-дифторфенил)-3,6-дигидро-1(2Н)-карбоксилата (1,60 г, 24,5%):

Ή ЯМР (400 МГц, СЛС1з) δ 8,08 (с, 1Н), 7,45-7,35 (м, 5Н), 6,85-6,70 (м, 1Н), 5,95-5,85 (м, 1Н), 5,20 (с, 2Н), 4,05 (м, 2Н), 3,6-3,5 (м, 2Н), 2,5-2,4 (м, 2Н), 1,50 (с, 9Н); Е8М8 ш/е: 443,3 (М - Н⁺).

трет-Бутил 4-(5-амино-2,4-дифторфенил)-1-пиперидинкарбоксилат.

Смесь трет-бутил 4-(5-{[(бензилокси)карбонил]амино}-2,4-дифторфенил)-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилата (1,60 г, 3,60 ммоль) и 5% Рс1/С (320 мг, 0,100 ммоль) в этилацетате (25.0 мл) и метаноле (25,0 мл) гидрировали при комнатной температуре в течение 72 ч с применением баллона с водородом (200 фунтов/дюйм²; 1379 кПа). Реакционную смесь фильтровали через целит и промывали смесью ЕЮАс/МеОН (1:1, 3 х 50 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме с получением трет-бутил 4-(5-амино2,4-дифторфенил)-1-пиперидинкарбоксилата (1,39 г, 100%).

-21 008826

Ή ЯМР (400 МГц, ΓΌΟΙ,) δ 6,73 (т, 1Н, 1=10,6 Гц), 6,60-6,54 (д.д., 1Н, 1=7,6, 6,57 Гц), 4,20 (уш., 2Н), 3,55 (с, 2Н), 2,96-2,72 (м, ЗН), 1,79-1,71 (м, 2Н), 1,58-1,52 (м, 2Н), 1,47 (с, 9Н); Е§М§ ш/е: 257,3 (М 56).

Этил (4Е)-5-(2-метоксифенил)-4-пентеноат.

В круглодонный сосуд на 200 мл добавляли 2-иоданизол (5,00 г, 21,4 ммоль), этил 4-пентеноат (3,30 г, 25,6 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,740 г, 0,600 ммоль), триэтиламин (6,00 мл, 42,7 ммоль) и смесь ΓΉ₃Γ'Ν (45,0 мл) и ТГФ (15,0 мл). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи и затем охлаждали до комнатной температуры. После удаления растворителей в вакууме полученный темно-коричневый остаток растворяли в 5% НС1 (водн.) и экстрагировали СН₂С12 трижды. Объединенные экстракты промывали насыщенным раствором №1НС0₃. сушили над М§§0₄, концентрировали в вакууме. Темно-коричневое масло очищали хроматографией (силикагель, смесь Е1ОАс:гексаны 1:10) с получением продукта в виде светло-желтого масла (3,40 г, 68%).

Этил 5-(2-метоксифенил)пентаноат. К раствору этил (4Е)-5-(2-метоксифенил)-4-пентеноата (3,40 г, 14,5 ммоль) в смеси ЕЮ Ас и МеОН (40,0/10,0 мл) добавляли небольшими порциями Ρά/С (палладий на угле 10%, 0,700 г) во избежание возгорания. Реакционную смесь затем перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и давлении водорода 300 ры (2068 кПа). После снятия давления смесь фильтровали через целит и целит промывали ЕЮ Ас (3 х 50 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме с получением неочищенного продукта в виде светло-желтого масла (3,40 г, 100%), который использовали без дополнительной очистки.

5-(2-Метоксифенил)пентановая кислота. В 250-мл круглодонный сосуд загружали этил 5-(2метоксифенил)пентаноат (3,40 г, 14,5 ммоль), ΝηΟΗ (1,74 г, 42,8 ммоль), ТГФ (25,0 мл) и воду (25,0 мл). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч и охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, и полученный водный раствор подкисляли 6 М НС1 до рН < 5. Кислую смесь экстрагировали смесью хлороформ/изопропиловый спирт (3:1, 3 х 50 мл), и объединенные органические фазы промывали насыщенным раствором соли, сушили над Νη₂8Ο₄ и концентрировали в вакууме с получением продукта в виде белого твердого вещества (2,68 г, 90%), который использовали без дополнительной очистки.

Ή ЯМР (400 МГц, МеСГО) δ 7,23-7,03 (м, 2Н), 6,95-6,76 (м, 2Н), 3,81 (с, ЗН), 2,63 (т, 2Н, 1=7,2 Гц), 2,38 (т, 2Н, 1=7,2 Гц), 1,77-1,53 (м, 4Н).

трет-Бутил 4-(2,4-дифтор-5-{[5-(2-метоксифенил)пентаноил]амино}фенил)-1-пиперидинкарбоксилат. В 15-мл круглодонный сосуд загружали 5-(2-метоксифенил)пентановую кислоту (69,0 мг, 0,810 ммоль), трет-бутил 4-(5-амино-2,4-дифторфенил)-1-пиперидинкарбоксилат (229 мг, 0,740 ммоль), гидрохлорид 1-[3-(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимида (2,22 ммоль, 426 мг), 4-диметиламинопиридин (9 мг, 0,07 ммоль) в смеси ДМФА/ДХМ (0,2:5,0 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 12 ч, и к реакционной смеси добавляли воду (10,0 мл). Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали СНС1₃ (3 х 10 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением трет-бутил 4-(2,4-дифтор-5-{[5-(2-метоксифенил)пентаноил]амино}фенил)-1-пиперидинкарбоксилата (310 мг, 83,2%):

-22008826 ^!Н ЯМР (400 МГц, СИС1з) δ 8,36-8,13 (м, 1Н), 7,39 (с, 1Н), 7,26-7,06 (м, 1Н), 7,06-6,92 (м, 1Н), 6,92-

6,75 (м, ЗН), 4,41-4,02 (м, 2Н), 3,80 (с, ЗН), 2,90-2,70 (м, 2Н), 2,70-2,63 (м, 2Н), 2,63-2,51 (м, 1Н), 2,49-2,32 (м, 2Н), 1,87-1,72 (м, 4Н), 1,72-1,63 (м, 2Н), 1,63-1,52 (м, 2Н), 1,48 (с, 9Н).

Пример 11. Н-[2,4-Дифтор-5-(4-пиперидинил)фенил]-5-(2-метоксифенил)пентанамид.

К раствору трет-бутил 4-(2,4-дифтор-5-{[5-(2-метоксифенил)пентаноил]амино}фенил)-1-пиперидинкарбоксилата (310 мг, 0,620 ммоль) в дихлорметане (5,00 мл) при 0°С медленно добавляли трифторуксусную кислоту (707 мг, 6,20 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в смеси изо-РгОН/СНС1з (1:3, 10 мл) и подщелачивали до рН 11 10% раствором КОН, промывали Н₂О и затем насыщенным раствором соли. Органический слой отделяли, сушили над М§§0₄ и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (108 мг, 43,3%):

^!Н ЯМР (400 МГц, ΟϋΟ1₃) δ 7,59 (т, 1Н, 1=8,2 Гц), 7,10-6,96 (м, 2Н), 6,90-6,68 (м, ЗН), 3,67 (с, ЗН), 3,09 (д, 2Н, 1=12,4 Гц), 2,89 (т.т., 1Н, 1=11,8 Гц), 2,69 (д.т., 2Н, 1=2,6, 12,4 Гц), 2,54 (т, 2Н, 1=7,2 Гц), 2,33 (т, 2Н, 1=7,2 Гц), 1,76-1,48 (м, 8Н); Е8М8 ш/е: 403,3 (М + Н)⁺.

Общая методика пиперидинового синтеза (схема 3)

Е

трет-Бутил 4-(4-фтор-3 -нитрофенил)-3,6-дигидро-1 (2Н)-пиридинкарбоксилат.

В 150-мл круглодонный сосуд, содержащий трет-бутил 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан2-ил)-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилат (5,58 г, 16,5 ммоль), К₂СО₃ (5,60 г, 40,5 ммоль) и ΡάΓ’ΓάρρΓ (1,48 моль, 1,21 г), добавляли раствор 4-бром-1-хлор-2-нитробензола (3,30 г, 15,0 ммоль) в ДМФА (50,0 мл) при комнатной температуре в атмосфере аргона. Смесь нагревали до 80°С в атмосфере аргона в течение 12 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали через целит, и целит промывали ЕЮ Ас (3 х 100 мл). Фильтраты промывали Н₂О (3 х 200 мл), насыщенным раствором соли (100 мл), сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме.

Неочищенное вещество очищали флэш-хроматографией (смесь ЕЮ Ас: гексаны 1:9) с получением трет-бутил 4-(4-фтор-3-нитрофенил)-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилата (3,13 г, 65,1%).

^!Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 8,06-7,89 (м, 1Н), 7,66-7,49 (м, 1Н), 7,30-7,10 (м, 1Н), 6,19-5,95 (уш., 1Н), 4,10-3,95 (м, 2Н), 3,58 (т, 2Н, 1=5,6 Гц), 2,49-2,34 (м, 2Н), 1,42 (с, 9Н).

трет-Бутил-4-(3-амино-4-фторфенил)-1-пиперидинкарбоксилат. Смесь трет-бутил 4-(4-фтор-3нитрофенил)-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилата (2,35 г, 8,85 ммоль) и 10% Ρά/С (400 мг) в этилацетате (40,0 мл) и метаноле (10,0 мл) гидрировали при комнатной температуре в течение 72 ч с применением баллона с водородом (200 фунт/дюйм²; 1379 кПа). Реакционную смесь фильтровали через целит и промывали смесью ЕЮАс/МеОН (1:1, 3 х 50 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме с получением трет-бутил-4-(3-амино-4-фторфенил)-1-пиперидинкарбоксилата (2,10 г, 98,0%): 'Н ЯМР (400 МГц,

СОС1₃) δ 6,96-6,76 (м, 1Н), 6,67-6,54 (м, 1Н), 6,54-6,40 (м, 1Н), 4,38-4,09 (уш., 2Н), 4,09-3,58 (уш., 2Н), 2,87-2,62 (м, 2Н), 2,60-2,39 (м, 1Н), 1,85-1,65 (м, 2Н), 1,64-1,40 (м, 2Н), 1,48 (с, 9Н).

-23 008826 трет-Бутил 4-(4-фтор-3-{[5-(2-метоксифенил)пентаноил]амино}фенил)-1-пиперидинкарбоксилат: В 25-мл круглодонный сосуд загружали 5-(2-метоксифенил)пентановую кислоту (53,0 мг, 0,250 ммоль), трет-бутил-4-(3-амино-4-фторфенил)-1-пиперидинкарбоксилат (59,0 мг, 0,200 ммоль), гидрохлорид 1-[3(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимида (0,400 ммоль, 62,0 мг), 4-диметиламинопиридин (10 мг) в смеси ДМФА/ДХМ (0,2:2,0 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 12 ч, и к реакционной смеси добавляли воду (10,0 мл). Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали СНС1₃ (3 х 10 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали хроматографией (силикагель, смесь гексаны:Е1ОАс 6:1) с получением трет-бутил 4-(4-фтор-3{[5-(2-метоксифенил)пентаноил]амино}фенил)-1-пиперидинкарбоксилата (48,4 мг, 50,0%).

Ή ЯМР (400 МГц, ΟϋΟ1₃) δ 8,36-8,13 (м, 1Н), 7,39 (с, 1Н), 7,26-7,06 (м, 2Н), 7,06-6,92 (м, 1Н), 6,92-

Пример 10. М-[2-Фтор-5-(4-пиперидинил)фенил]-5-(2-метоксифенил)пентанамид.

К раствору трет-бутил 4-(4-фтор-3-{[5-(2-метоксифенил)пентаноил]амино}фенил)-1-пиперидинкарбоксилата (48,4 мг, 0,100 ммоль) в СН₂С1₂ (2,0 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (114 мг, 1,0 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в смеси СНС1₃/изо-РгОН (3:1, 10 мл) и подщелачивали до рН 11 5% раствором КОН. Органический слой отделяли и водный слой экстрагировали смесью СНС1₃/изо-РгОН (3:1, 3 х 10 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 1\1-[2-фтор-5-(4-пиперидинил) фенил]-5-(2-метоксифенил)пентанамида (38,0 мг, 95%).

Ή ЯМР (400 МГц, Οϋ₃Οϋ) δ 8,30-8,12 (м, 1Н), 7,64-7,41 (м, 1Н), 7,24-7,07 (м, 2Н), 7,06-6,92 (м, 1Н), 6,92-6,74 (м, ЗН), 3,80 (с, ЗН), 3,25-3,06 (м, 2Н), 2,80-2,49 (м, 5Н), 2,48-2,24 (м, ЗН), 1,89-1,71 (м, 4Н), 1,71-1,46 (м, 4Н); Е§М§ ш/е: 385,2 (М + Н)⁺.

О

3-[4-(3,4-Дифторфенокси)фенил]пропановая кислота. В 50-мл круглодонный сосуд добавляли 3-(4гидроксифенил)пропионовую кислоту (1,66 г, 10,0 ммоль), 3,4-дифториодбензол (2,40 г, 10,0 ммоль), дибромид меди(1) (0,100 г), карбонат калия (2,76 г, 20,0 ммоль) и н-метил-2-пирролидон (20 мл) в качестве растворителя. Смесь перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре и затем нагревали до 140°С (масляная баня). После перемешивания в течение 12 ч при 140°С реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли ЕЮАс (100 мл). Разбавленную смесь промывали лимонной кислотой (води., 30 мл), водой (3 х 50 мл), насыщенным раствором соли и сушили над М§§0₄. Удаление растворителя в вакууме давало неочищенный продукт, который очищали хроматографией (0,901 г, 32%):

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 11,44-11,06 (уш., 1Н), 7,24-7,14 (м, 2Н), 7,14-7,00 (м, 1Н), 7,00-6,86 (м, 2Н), 6,86-6,75 (м, 1Н), 6,75-6,61 (м, 1Н), 2,94 (т, 2Н, 1=7,6 Гц), 2,68 (т, 2Н, 1=7,6 Гц); Е§М§ ш/е: 277,2 (М Н⁺)·

трет-Бутил-4-[3 -({ 3 -[4-(3,4-дифторфенокси)фенил]пропаноил}амино)-4-фторфенил] -1 -пиперидинкарбоксилат. В 25-мл круглодонный сосуд загружали 3-[4-(3,4-дифторфенокси)фенил]пропановую кислоту (180 мг, 0,650 ммоль), трет-бутил-4-(3-амино-4-фторфенил)-1-пиперидинкарбоксилат (180 мг, 0,610 ммоль), гидрохлорид 1-[3-(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимида (1,22 ммоль, 190 мг), 4диметиламинопиридин (20 мг) в смеси ДМФА/ДХМ (0,4:4,0 мл) при комнатной температуре. Реакцион

-24008826 ную смесь перемешивали в течение 12 ч, и к реакционной смеси добавляли воду (10,0 мл). Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали СНС1₃ (3 х 10 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали хроматографией (силикагель, смесь гексаны:Е1ОАс 6:1) с получением трет-бутил 4-[3 -({ 3 -[4-(3,4-дифторфенокси)фенил]пропаноил}амино)-4-фторфенил] -1 -пиперидинкарбоксилата (85,0 мг, 25,0%):

Ή ЯМР (400 МГц, ΟΌΟ1₃) δ 8,32-8,15 (м, 1Н), 7,47-6,45 (м, ЮН), 4,41-4,07 (уш., 2Н), 3,17-2,96 (м, 2Н), 2,90-2,67 (м, 4Н), 2,67-2,56 (м, 1Н), 1,91-1,69 (м, 2Н), 1,68-1,48 (м, 2Н), 1,47 (с, 9Н); Е8М8 ш/е: 553,3 (М - Н⁺).

К раствору трет-бутил-4-[3-({3-[4-(3,4-дифторфенокси)фенил]пропаноил}амино)-4-фторфенил]-1пиперидинкарбоксилата (85,0 мг, 0,150 ммоль) в СН₂С1₂ (2,0 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (170 мг, 1,50 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в смеси СНС1₃/изо-РгОН (3:1, 10 мл) и подщелачивали до рН 11 5% раствором КОН. Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали смесью СНС1₃/изо-РгОН (3:1, 3 х 10 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 3-[4-(3,4дифторфенокси)фенил]-М-[2-фтор-5-(4-пиперидинил)фенил]пропанамида (65,0 мг, 92%):

Ή ЯМР (400 МГц, 0Ο₃ΟΌ) δ 8,27-8,12 (м, 1Н), 7,39 (с, 1Н), 7,33-7,17 (м, 2Н), 7,17-7,06 (м, 1Н), 7,066,97 (м, 1Н), 6,97-6,87 (м,ЗН), 6,86-6,74 (м, 1Н), 6,74-6,62 (м, 1Н), 6,15-5,63 (уш., 1Н), 3,55-3,31 (м, 2Н), 3,15-2,97 (м, 2Н), 2,97-2,79 (м, 2Н), 2,79-2,59 (м, ЗН), 2,05-1,79 (м, 4Н); Е8М8 ш/е: 455,2 (М + Н)⁺.

трет-Бутил 4-{4-фтор-3-[(6-оксо-6-фенилгексаноил)амино]фенил}-1-пиперидинкарбоксилат. Загружали в 25-мл круглодонный сосуд 6-оксо-6-фенилгексановую кислоту (51,0 мг, 0,250 ммоль), трет-бутил-

4-(3-амино-4-фторфенил)-1-пиперидинкарбоксилат (59,0 мг, 0,200 ммоль), гидрохлорид 1-[3-(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимида (0,400 ммоль, 62,0 мг), 4-диметиламинопиридин (10 мг) в смеси ДМФА/ДХМ (0,2:2,0 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 12 ч, и к реакционной смеси добавляли воду (10,0 мл). Органический слой отделяли и водный слой экстрагировали СНС1₃ (3 х 10 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали хроматографией (силикагель, смесь гексаны:Е1ОАс 6:1) с получением трет-бутил 4-{4-фтор-3-[(6-оксо-6фенилгексаноил)амино]фенил}-1-пиперидинкарбоксилата (49,0 мг, 51,0%):

Ή ЯМР (400 МГц, ΟΌΟ1₃) δ 8,30-8,14 (м, 1Н), 8,04-7,89 (м, 2Н), 7,62-7,50 (м, 1Н), 7,50-7,37 (м, ЗН), 7,09-6,93 (м, 1Н), 6,93-6,76 (м, 1Н), 4,38-4,01 (уш., 2Н), 3,13-2,95 (м, 2Н), 2,89-2,69 (м, 2Н), 2,65-2,54 (м, 1Н), 2,54-2,35 (м, 2Н), 1,95-1,74 (м, 6Н), 1,69-1,48 (м, 2Н), 1,47 (с, 9Н).

Пример 9. М-[2-Фтор-5-(4-пиперидинил)фенил]-6-оксо-6-фенилгексанамид.

К раствору трет-бутил 4-{4-фтор-3-[(6-оксо-6-фенилгексаноил)амино]фенил}-1-пиперидинкарбоксила (49,0 мг, 0,101 ммоль) в СН₂С1₂ (3,0 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (114 мг, 1,01 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и концентриро

-25 008826 вали в вакууме. Остаток растворяли в смеси СНС1₃/изо-РгОН (3:1, 10 мл) и подщелачивали до рН 11 5% раствором КОН. Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали смесью СНС1₃/изо-РгОН (3:1,3 х 10 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором соли, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением №[2-фтор-5-(4пиперидинил)фенил]-6-оксо-6-фенилгексанамида (35,5 мг, 86,0%).

Соль НС1: Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 8,14-8,01 (уш., 1Н), 8,01-7,89 (м, 2Н), 7,65-7,52 (м, 1Н), 7,527,43 (м, 2Н), 7,43-7,26 (уш., 1Н), 7,13-7,00 (м, 1Н), 7,00-6,88 (уш., 1Н), 3,68-3,43 (м, 2Н), 3,19-2,92 (уш., 4Н), 2,89-2,67 (м, 1Н), 2,61-2,36 (уш., 2Н), 2,26-2,06 (м, 2Н), 2,06-1,93 (м, 2Н), 1,93-1,71 (уш., 4Н); Ε8Μ8 т/е: 383,2 (М + Н)⁺.

II. Способы синтеза общих структур.

Описанные в разделе I примеры служат исключительно иллюстрацией способов, применяемых для синтеза антагонистов МКГ1. Другие производные могут быть получены с применением обобщенных способов на основе способов синтеза, примененных для синтеза веществ примеров.

Для создания дополнительных производных может быть необходимо включить в обобщенные способы синтеза стратегии введения защиты и снятия защиты для таких заместителей, как амино, амидо, карбоновая кислота и гидроксильные группы. Способы введения защиты и снятия защиты таких групп хорошо известны в данной области техники, и их можно найти, например, в Огееп, Т.У. апб УиК Р.О.М. (1991) Р^οΐесΐ^οη Огоирз ш Огдашс 8упШез1з, 2^пб Εб^ΐ^οη Ιο1ιπ Уйеу & 8οηз, №\ν ΥογΚ.

III. Пероральные композиции.

В качестве конкретного осуществления пероральной композиции данного изобретения 100 мг одного из описанных здесь соединений объединяют с достаточно тонко измельченной лактозой с получением общего количества от 580 до 590 мг для наполнения капсулы из твердого геля размером 0.

IV. Фармакологическая оценка соединений на клонированном рецепторе МКГ1 крысы.

Фармакологические свойства соединений настоящего изобретения оценивали на клонированном рецепторе МКГ1 крысы с применением протоколов, описанных ниже.

Клетки-хозяева

Для исследования гетерологично экспрессируемых белков может быть использовано множество клеток-хозяев. Данные клетки включают, но не ограничиваются этим, классифицированные линии клеток млекопитающих, такие как: ^з-7, СНО, ΌΜ(ΐ^), НΕК293, Реак гар1б 293, и т.д.; линии клеток насекомых, такие как: 8£9, 8121 и т.д.; клетки амфибий, такие как ооциты шпорцевой лягушки; и другие.

Клетки СО8-7 выращивают в 150-мм чашках в ΌΜΕΜ с добавками (модифицированной Дульбекко среде Игла с 10% околоплодной бычьей сывороткой, 4 мМ глутамином, 100 единицами/мл пенициллина/ 100 фг/мл стрептомицина) при 37°С, 5% СО₂. Исходные чашки клеток СО8-7 обрабатывают трипсином и рассевают в отношении 1:6 каждые 3-4 дня.

Клетки 293 почек эмбриона человека выращивают в 150-мм чашках в ΌΜΕΜ с добавками (10% околоплодной бычьей сывороткой, 4 мМ глутамином, 100 единицами/мл пенициллина/100 фг/мл стрептомицина) при 37°С, 5% СО₂. Исходные чашки клеток 293 обрабатывают трипсином и рассевают в отношении 1:6 каждые 3-4 дня.

Клетки Реак гар1б 293 (Реакг293) почек эмбриона человека выращивают в 150-мм чашках в ΌΜΕΜ с добавками (10% околоплодной бычьей сывороткой, 10% Ь-глутамином, 50 фг/мл гентамицина) при 37°С, 5% СО₂. Исходные чашки клеток Реак гар1б 293 обрабатывают трипсином и рассевают в отношении 1:12 каждые 3-4 дня.

Фибробластные ΓΜ(ΐΚ-) клетки мыши выращивают в 150-мм чашках в ΌΜΕΜ с добавками (модифицированной Дульбекко среде Игла с 10% околоплодной бычьей сывороткой, 4 мМ глутамином, 100 единицами/мл пенициллина/100 фг/мл стрептомицина) при 37°С, 5% СО₂. Исходные чашки клеток ΌΜ(ΐ^) обрабатывают трипсином и рассевают в отношении 1:10 каждые 3-4 дня.

Клетки яичников китайского хомячка (СНО) выращивают в 150-мм чашках в среде НАΜ=з Р-12 с добавками (10% околоплодной бычьей сывороткой, 4 мМ Ь-глутамином и 100 единицами/мл пенициллина/100 фг/мл стрептомицина) при 37°С, 5% СО₂. Исходные чашки клеток СНО обрабатывают трипсином и рассевают в отношении 1:8 каждые 3-4 дня.

Фибробластные клетки МН-3Т3 эмбриона мыши выращивают в 150-мм чашках в модифицированной Дульбекко среде Игла (ΌΜΕΜ) с добавками (10% околоплодной бычьей сывороткой, 4 мМ глутамином, 100 единицами/мл пенициллина/100 фг/мл стрептомицина) при 37°С, 5% СО₂. Исходные чашки клеток МН-3Т3 обрабатывают трипсином и рассевают в отношении 1:15 каждые 3-4 дня.

Клетки 8£9 и 8121 выращивают в монослое в 150-мм чашках для культуры ткани в среде ΤΜΝ-РН с добавкой 10% сыворотки плодов телят, при 27°С без СО₂. Клетки насекомых Н1дй РЬе выращивают в монослое в 150-мм чашках для культуры ткани в среде Εχ-Сей 400™ с добавкой Ь-глутамина, также при 27°С без СО2.

В некоторых случаях линии клеток, которые растут в прикрепленных монослоях, могут быть переведены в суспензионную культуру для повышения выхода клеток и получения больших партий однородного материала тестирования для обычных проектов скрининга рецепторов.

- 26 008826

Временная экспрессия

ДНК, кодирующая подлежащие исследованию белки, может быть временно экспрессирована во многих линиях клеток млекопитающих, насекомых, амфибий и других с помощью нескольких способов, включая, но не ограничиваясь этим, опосредуемую фосфатом кальция, опосредуемую ДЭАЭ-декстраном, опосредуемую липосомами, опосредуемую вирусами, опосредуемую электропорацией доставку и доставку микроинъекцией. Для каждого из данных способов может потребоваться оптимизация подходящих экспериментальных параметров в зависимости от ДНК, линии клеток и типа применяемого затем тестирования.

Ниже описан типичный протокол для кальций-фосфатного способа в применении к клеткам Реак гар1б 293.

Прикрепленные клетки собирают приблизительно за двадцать четыре часа до трансфекции и повторно высевают при плотности 3,5 х 10⁶ клеток/чашку в 150-мм чашку для культуры ткани и инкубируют в течение ночи при 37°С с 5% СО₂. 250 фл смеси СаС1₂ и ДНК (15 фг ДНК в 250 мМ СаС1₂) вносят в 5мл пластиковую пробирку, и при легком перемешивании медленно добавляют 500 фл 2Х НВ8 (280 мМ №1С.’1. 10 мМ КС1, 1,5 мМ Ыа₂НРО₄, 12 мМ декстроза, 50 мМ НЕРЕ8). Смесь инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре для образования преципитата ДНК. Смесь преципитата ДНК затем добавляют к среде культивирования в каждую чашку и инкубируют в течение 5 ч при 37°С, 5% СО₂. После инкубации в каждую чашку добавляют 5 мл среды культивирования (ΌΜΕΜ, 10% ЕВ8, 10% Ь-глут и 50 мкг/мл гентамицина). Клетки затем инкубируют в течение от 24 до 48 ч при 37°С, 5% СО₂.

Ниже описан типичный протокол для ДЭАЭ-декстранового способа в применении к клеткам Сок-7; Клетки, подлежащие трансфекции, рассевают за 24 ч до трансфекции для получения сосудов с 70-80% конфлуентностью ко времени трансфекции. Вкратце, 8 фг рецепторной ДНК плюс 8 фг любой дополнительной необходимой ДНК (например, экспрессионного вектора С_а-белка, репортерного конструкта, маркера устойчивости к антибиотику, ложного вектора и т.д.) добавляют к 9 мл полной ΌΜΕΜ плюс смесь ДЭАЭ-декстран (10 мг/мл в ЗФР). Клетки Сок-7, помещенные во флакон Т225 (субконфлуентно), промывают один раз ЗФР, и в каждый флакон добавляют смесь ДНК. Клетки инкубируют в течение 30 мин при 37°С, 5% СО₂. После инкубации в каждый флакон добавляют 36 мл полной ΌΜΕΜ с 80 фМ хлорохина и инкубируют еще в течение 3 ч. Среду затем удаляют и ровно на 2 мин добавляют 24 мл полной среды, содержащей 10% ДМСО, которую затем удаляют. Клетки затем промывают 2 раза ЗФР, и в каждый флакон добавляют 30 мл полной ΌΜΕΜ. Клетки затем инкубируют в течение ночи. На следующий день клетки собирают с помощью обработки трипсином и пересевают в зависимости от требований типа проводимого тестирования.

Ниже описан типичный протокол для опосредуемой липосомами трансфекции клеток СНО; Клетки, подлежащие трансфекции, рассевают за 24 ч до трансфекции для получения сосудов с 70-80% конфлуентностью ко времени трансфекции. В целом 10 фг ДНК, которая может включать различные соотношения рецепторной ДНК плюс любой дополнительной необходимой ДНК (например, экспрессионного вектора С_а-белка, репортерного конструкта, маркера устойчивости к антибиотику, ложного вектора и т.д.), применяют для трансфекции каждого 75-см² флакона с клетками. Трансфекцию, опосредуемую липосомами, проводят в соответствии с рекомендациями производителя (^^роГесΐΑΜINΕ, С1ЬсоВКЕ, ВеШекба, ΜΌ). Трансфецированные клетки собирают через 24 ч после трансфекции и используют либо пересевают в зависимости от требований типа проводимого тестирования.

Ниже описан типичный протокол для способа электропорации в применении к клеткам Сок-7; Клетки, подлежащие трансфекции, рассевают за 24 ч до трансфекции для получения сосудов с субконфлуентностью ко времени трансфекции. Клетки, собранные с применением обработки трипсином, ресуспендируют в их среде выращивания и подсчитывают. 4 х 10⁶ Клеток суспендируют в 300 фл ΌΜΕΜ и помещают в кювету для электропорации. К клеточной суспензии добавляют 8 фг рецепторной ДНК плюс 8 фг любой дополнительной необходимой ДНК (например, экспрессионного вектора С_а-белка, репортерного конструкта, маркера устойчивости к антибиотику, ложного вектора и т.д.), и кювету помещают в ВюЯаб Сепе Ри1кег и подвергают действию электрического импульса (установки Сепе Ри1кег: напряжение 0,25 кВ, емкость 950 ЕЕ). После действия импульса в каждую кювету вносят 800 фл полной ΌΜΕΜ, и суспензию переносят в стерильную пробирку. В каждую пробирку вносят полную среду для доведения конечной концентрации клеток до 1 х 10⁵ клеток/100 Е1. Клетки затем размещают в зависимости от требований типа проводимого тестирования.

Ниже описан типичный протокол для опосредуемой вирусом экспрессии гетерологичных белков в применении к бакуловирусной инфекции клеток 8Г9 насекомого. Кодирующая область ДНК, кодирующей раскрытый здесь рецептор, может быть субклонирована в рВ1иеВас111 в имеющиеся сайты рестрикции или сайты, сконструированные в 5' и 3' последовательностях по отношению к области, кодирующей полипептид. Для создания бакуловируса 0,5 фг вирусной ДНК (Васи1одо1б) и 3 фг конструкта ДНК, кодирующего полипептид, могут быть совместно трансфецированы в 2 х 10⁶ клеток 8Г9 насекомого 8робор!ега Ггищрегба с помощью способа кальций-фосфатной копреципитации, как описано в общих чертах Рйатипдеп (в Васи1оу1гик Нхргеккюп УесЮг 8ук!ет: Ртосебитек апб Μеΐйобк Μ;·ιηιι;·ι1). Клетки затем ин

- 27 008826 кубируют в течение 5 дней при 27°С. Супернатант из чашки с совместной трансфекцией может быть собран центрифугированием, и рекомбинантная вирусная бляшка очищена. Процедуры инфекции клеток вирусом, получения исходных препаратов вируса и титрования исходных препаратов вируса соответствуют описанным в руководстве Рйаттшдеи. Сходные принципы могут в целом быть применены в отношении экспрессии в клетках млекопитающих посредством ретровирусов, лесного вируса 8ίιη1ί1<ί и вирусов с двойной цепью ДНК, таких как адено-, герпес- и вирусы коровьей оспы и тому подобное.

Стабильная экспрессия

Гетерологичная ДНК может быть стабильно включена в клетки-хозяева, что заставляет клетку постоянно экспрессировать чужеродный белок. Способы доставки ДНК в клетку сходны с таковыми, описанными выше для временной экспрессии, но при этом требуется совместная трансфекция вспомогательного гена для обеспечения устойчивости к лекарству целевой клетки-хозяина. Последующая устойчивость к лекарству может быть использована для отбора и поддержания клеток, которые захватили гетерологичную ДНК. Имеется целый набор генов устойчивости, включая, но не ограничиваясь этим, устойчивость к неомицину, канамицину и гигромицину. Для целей исследований рецепторов стабильную экспрессию гетерологичного рецепторного белка осуществляют в клетках млекопитающих, включая СНО, НЕК293, ЬМ(1к-) и т.п., но не обязательно только в них.

Получение клеточной мембраны

Для тестирования связывания осадки трансфецированных клеток суспендируют в охлажденном до температуры льда буфере (20 мМ трис.НС1, 5 мМ ЭДТА, рН 7,4) и гомогенизируют обработкой ультразвуком в течение 7 с. Клеточные лизаты центрифугируют при 200 х д в течение 5 мин при 4°С. Супернатанты затем центрифугируют при 40000 х д в течение 20 мин при 4°С. Полученные осадки промывают один раз в буфере гомогенизации и суспендируют в буфере для связывания (смотри способы для радиолигандного связывания). Концентрацию белка определяют способом Брэдфорда (1976) с применением бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта. Анализ связывания обычно проводят немедленно, но возможно получение партии мембран и ее хранение в замороженном виде в жидком азоте для последующего применения.

Тестирование связывания радиолиганда

Тестирование связывания радиолиганда рецептором МКГ1 крысы проводили с применением плазмиды ρεΌΝΑ3.1-гМСН 1-Г (с присвоенным № РТА-3505 патентного депозита в АТСС). Плазмида ροΌΝΑ3.1-τΜΟΗ1-£ включает регуляторные элементы, необходимые для экспрессии ДНК в клетке млекопитающего, оперативно связанные с ДНК, кодирующей рецептор МКГ1 мыши, таким образом, что это обеспечивает ее экспрессию. Плазмида ροΟΝΑ3.1-ιΜί.Ή1-Γ была депонирована 05 июля 2001 Американской коллекцией типов клеточных культур (АТСС), 12301 Ратк1атеи Элуе. КоекуШе, Мату1аи6 20852, США в соответствии с условиями Будапештского договора о Международном признании депозита микроорганизмов для целей процедуры патентования, и ей был присвоен № РТА-3505 патентного депозита в АТСС.

Тестирование связывания также может быть проведено, как описано здесь ниже, с применением плазмиды рЕХ1.НК-ТЬ231 (регистрационный № 203197 в АТСС). Плазмида рЕХ1.НК-ТЬ231 кодирует рецептор МКГ1 человека и была депонирована 17 сентября 1998 Американской коллекцией типов клеточных культур (АТСС), 12301 Ратк1атеи Опуе, КоекуШе, Мату1аи6 20852, США в соответствии с условиями Будапештского договора о Международном признании депозита микроорганизмов для целей процедуры патентования, и ей был присвоен регистрационный № 203197 АТСС.

Клетки Реак гар16 293 почек эмбриона человека (клетки Реакг293) временно трансфецировали ДНК, кодирующей рецептор МКГ1, с помощью кальций-фосфатного способа, и клеточные мембраны получали, как описано выше. Эксперименты по связыванию с мембранами из клеток Реакг293, трансфецированных рецептором МКГ1 крысы, проводили с 0,08 нМ [³Н] соединением А (меченым по заказу Атегзйат) (синтез соединения А подробно описан ниже) с применением буфера инкубации, состоящего из 50 мМ трис рН 7,4, 10 мм МдС1₂, 0,16 мМ РМБЕ, 1 мМ 1,10 фенантролина и 0,2% БСА. Связывание проводили при 25°С в течение 90 мин. Инкубацию прекращали быстрой вакуумной фильтрацией через стеклянные волоконные фильтры СЕ/С, предварительно пропитанные 5% РЕ1, с применением 50 нМ трис рН 7,4 в качестве буфера промывки. Во всех экспериментах неспецифическое связывание определяли с помощью 10 фМ соединения А.

Функциональные тесты

Клетки могут быть подвергнуты скринингу на присутствие эндогенного рецептора млекопитающего с применением функциональных тестов. Клетки с отсутствующим или присутствующим на низком уровне эндогенным рецептором могут быть трансфецированы экзогенным рецептором для применения в функциональных тестах.

Для скрининга активации рецептора может быть применен широкий спектр тестов. Данные тесты варьируют от, например, традиционных измерений фосфатидилинозита, цАМФ, Са⁺⁺ и К⁺; до систем измерения тех же самых вторичных посредников, но которые были модифицированы или адаптированы для большей производительности, большей специфичности и большей чувствительности; до основанных на клетках платформ, сообщающих о более общих клеточных событиях, вызываемых активацией рецеп

- 28 008826 тора, таких как, например, метаболические изменения, дифференцировка и деление/пролиферация клеток; до тестов высокой ступени на уровне организма, которые отслеживают сложные физиологические или поведенческие изменения, которые, как полагают, инициируются в результате активации рецептора, включая, например, сердечно-сосудистые, анальгетические, орексигенные, анксиолитические и седативные эффекты.

Результаты анализа связывания радиолиганда

Описанные выше соединения тестировали с применением клонированного МКГ1 крысы. Связывающее сродство соединений показано в таблице I.

V. Синтез соединения А.

Ниже описан синтез соединения А. Соединение А представляет собой радиоактивно меченое соединение, которое применяли в тестах радиолигандного связывания, описанных выше.

Ы-[3-(1,2,3,6-Тетрагидро-4-пиридинил)фенил]ацетамид.

Взаимодействие насыщенного водного раствора Ыа₂СО₃ (25 мл), трет-бутил 4-{ [(трифторметил) сульфонил]окси}-1,2,3,6-тетрагидро-1-пиридинкарбоксилата (20 ммоль), 3-ацетамидофенилборной кислоты (30 ммоль) и тетракистрифенилфосфинпалладия(0) (1,15 г) в диметоксиэтане (40 мл) при температуре кипения с обратным холодильником в течение ночи давало трет-бутил 4-[3-(ацетиламино)фенил]3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинкарбоксилат. Снятие защиты ВОС группы с применением НС1 в диоксане с последующим защелачиванием (рН 11-12) давало желаемый продукт.

Трет-бутил Ы-(3-бромпропил)карбамат: получали из 3-бромпропиламина гидробромида и ВОС₂О в присутствии основания в дихлорметане.

Ы-{3-[1-(3-аминопропил)-1,2,3,6-тетрагидро-4-пиридинил]фенил}ацетамид. Взаимодействие третбутил Ы-(3-бромпропил)карбамата и М-[3-(1,2,3,6-тетрагидро-4-пиридинил)фенил]ацетамида при температуре кипения с обратным холодильником в диоксане с каталитическим количеством Ви₄Ы1 и основанием, как описано на схеме А, давало трет-бутил 3-(4-[3-(ацетиламино)фенил]-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинил)пропилкарбамат. Снятие защиты группы ВОС с применением НС1 в диоксане с последующим подщелачиванием (рН 11-12) давало желаемый продукт.

Метил (48)-3-({[3-(4-[3-(ацетиламино)фенил]-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинил)пропил]амино}карбонил)-4-(3,4-дифторфенил)-6-(метоксиметил)-2-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинкарбоксилат.

Получали в результате взаимодействия 5-метил 1-(4-нитрофенил)-(68)-6-(3,4-дифторфенил)-4(метоксиметил)-2-оксо-3,6-дигидро-1,5(2Н)-пиримидиндикарбоксилата (описанного в публикации РСТ № XV О 00/37026, опубликованной 29 июня 2000 г.) и Н-{3-[1-(3-аминопропил)-1,2,3,6-тетрагидро-4пиридинил] фенил } ацетамида.

Ή ЯМР δ 8,90 (т, 1Н, 1=3,6 Гц), 7,75 (с, 1Н), 7,50-7,00 (м, 8Н), 6,68 (с, 1Н), 6,03 (уш.с, 1Н), 4,67 (с, 2Н), 3,71 (с, 3Н), 3,47 (с, 3Н), 3,38 (АВм, 2Н), 3,16 (м, 2Н), 2,71 (т, 2Н, 1=5,4 Гц), 2,56 (м, 4Н), 2,35-1,90 (уш., 2Н), 2,17 (с, 3Н), 1,82 (р, 2Н, 1=7,2 Гц); Е8М8: 612,25 (М+Н)⁺.

Тритированный метил (48)-3-{[(3-{4-[3-(ацетиламино)фенил]-1-пиперидинил}пропил)амино]карбонил}-4-(3,4-дифторфенил)-6-(метоксиметил)-2-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинкарбоксилат.

Метил (48)-3-({[3-(4-[3-(ацетиламино)фенил]-3,6-дигидро-1(2Н)-пиридинил)пропил]амино}карбонил)-4-(3,4-дифторфенил)-6-(метоксиметил)-2-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинкарбоксилат тритировали (Атегайат) с применением описанного холодного способа (Н₂, баллонный способ, метанол, Рб/С, в течение ночи) с получением тритированного метил (48)-3-{[(3-{4-[3-(ацетиламино)фенил]-1-пиперидинил}пропил)амино]карбонил}-4-(3,4-дифторфенил)-6-(метоксиметил)-2-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-5пиримидинкарбоксилата ((+)-изомера), который в свою очередь применяли в качестве радиолиганда в фармакологических тестах для МКГ.

- 29 008826

Таблица I

Пример КЙ	Структура	Κί (нМ)
1		79.6
2		197,
3		1104
4		353
5		476
6	^!χχ	438
7	«ъДХ	142
а		181

-30008826

Пример Ме	Структура	Κί (нМ)
9		313
10		20.9
11		46.6
12		33.8

VI. Способы ίη νίνο.

Следующие способы ίη νίνο проводят для предсказания эффективности антагонистов МКГ1 для лечения ожирения (3-дневная масса тела и подслащенное сгущенное молоко), депрессии (тест принудительного плавания), тревожности (тест социального взаимодействия) и нарушений мочеиспускания (О1КС и С8Т1).

Влияние антагонистов МКГ1 на массу тела (3 дня).

Самцов крыс Ьоп§ Ενηηδ (С11аг1с5 Βίνετ) с массой 180-200 г содержат в группах по четыре при 12часовом цикле светового/темнового периода при свободном доступе к пище и воде. Тестируемые соединения вводят дважды в день посредством в/б инъекции за 1 ч до темнового цикла и через 2 ч после включения света на протяжении трех дней. Всех крыс взвешивают ежедневно после каждой утренней инъекции. Обобщенные результаты выражают в виде прибавки массы тела (грамм) в день (среднее ± ст. сш. ср.) и анализируют с помощью двустороннего теста ΑΝΟνΑ. Данные для каждой временной точки анализируют с помощью одностороннего теста ΑΝΟνΑ и затем вторичного теста Ньюмана-Кеулса. Данные анализируют с применением ОтарйРаб Ρπδΐη (ν2.01) (ОгарйРаб 8оП\\агс. 1ис., 8аи ϋίε§ο, СА). Все данные представлены в виде среднего ± ст. ош. ср.

Действие антагонистов МКГ1 на потребление подслащенного сгущенного молока.

Самцов мышей С57ВБ/6 (С11а1с5 Βίνετ) массой 17-19 г в начале экспериментов содержат в группах по четыре или пять при 12-часовом цикле светового/темнового периода при свободном доступе к пище и воде. В течение 7 дней мышей взвешивают, помещают в индивидуальные клетки и дают пить подслащенное сгущенное молоко (Νεκίΐε, разведенное 1:3 водой) в течение 1 ч на 2-4 ч светового цикла. Количество употребленного молока определяют путем взвешивания бутылки молока до и после каждого периода питья. В день тестирования мыши получали в/б инъекции тестируемого соединения (3, 10 или 30 мг/кг в 0,01% молочной кислоте), носителя (0,01% молочную кислоту) или фенфлурамин (10 мг/кг в 0,01% молочной кислоте) за 30 мин до доступа к молоку. Количество употребленного молока в день тестирования (в мл молока/кг массы тела) сравнивают с исходным употреблением для каждой мыши, определенным в предшествующие 2 дня. Данные для каждой временной точки анализируют с помощью одностороннего теста ΑΝΟνΑ.

Тест принудительного плавания (Е8Т) у крысы.

-31 008826

Животные.

Во всех экспериментах применяют самцов крыс 8ргадие-ОаЮеу (Тасошс Еагтк, ΝΥ). Крыс содержат по пять в клетке при 12:12 ч цикле светового/темнового периода. Крыс подготавливают в течение 1 мин ежедневно в течение 4 дней перед поведенческим тестом.

Введение лекарства.

Животных случайным образом отбирают для получения однократного в/б введения носителя (2,5% ΕΐΟΗ / 2,5% Твин-80), имипрамина (положительный контроль; 60 мг/кг) или тестируемого соединения за 60 мин до начала 5-минутного периода тестирования. Все инъекции проводят с применением 1-мл туберкулинового шприца с иглами размером 26 3/8 (Вес!оп-Эюк1п8оп, ννκ 8с1епййс, Вгкдерой, N1). Объем инъекции составляет 1 мл/кг.

Построение эксперимента.

Применяемая в данном исследовании процедура сходна с таковой, описанной ранее (РогаоИ, е! а1., 1978), за исключением того, что в данной процедуре глубина воды составляет 31 см. Большая глубина в данном тесте мешает крысам удерживать себя за счет касания дна цилиндра конечностями. Процедуры плавания проводят помещением крыс в индивидуальные плексигласовые цилиндры (высотой 46 см х 20 см в диаметре), содержащие воду с температурой 23-25°С глубиной 31 см. Тесты плавания проводят всегда между 9.00 и 17.00 часами, и они состоят из первоначального 15-минутного подготавливающего теста с последующим через 24 ч 5-минутным тестом. Лекарство вводят за 60 мин до 5-минутного периода тестирования. После всех плавательных процедур крыс извлекают из цилиндров, сушат с помощью бумажных полотенец и помещают в подогреваемую клетку на 15 мин и возвращают в их исходные клетки. Все процедуры тестирования снимаются на видеокамеру с применением цветной видеокамеры и записываются для последующей оценки.

Оценка поведения.

Поведение крыс оценивается в 5-секундных интервалах во время 5-минутного теста единственным индивидуумом, которому не известны условия лечения. Оцениваемыми формами поведения являются:

1. Неподвижность - крыса остается на поверхности воды без напряжения и осуществляет лишь движения, необходимые для поддержания ее головы над водой;

2. Клайминг - крыса осуществляет активные движения своими передними лапками в воде и вне воды, обычно направленные к стенкам;

3. Плавание - крыса осуществляет активные плавательные движения, больше, чем это необходимо для простого поддержания ее головы над водой, например двигаясь вокруг цилиндра; и

4. Ныряние - все тело крысы погружается под воду.

Анализ результатов.

Данные теста принудительного плавания (неподвижность, плавание, клайминг, ныряние) подвергают рандомизированному одностороннему тесту ΑΝΟνΑ и вторичным тестам, проводимым с применением теста Ньюмана-Кеулса. Результаты анализируют с помощью СргайРаб Ргып (ν2.01) (СгарИРай 8ойгаге, Шс., 8ап О|едо. СА). Все данные представлены в виде среднего ± ст. ош. ср.

Тест принудительного плавания у мышей.

Во всех экспериментах применяют мышей ΌΒΑ/2 (Тасошс Еагтк, ΝΥ). Животных содержат по пять в клетке при контролируемых условиях при периодичности 12:12 ч цикла светового/темнового периода. Животных подготавливают в течение 1 мин ежедневно в течение 4 дней перед экспериментом. Данная процедура включала ложное искусственное питание с применением 1,5-футовой трубки для кормления.

Введение лекарства.

Животных случайным образом отбирали для однократного введения носителя (5% ΕΐΟΗ/5% Твин80), тестируемого соединения или имипрамина (60 мг/кг) с помощью перорального лаважа за 1 ч перед тестом плавания.

Построение эксперимента.

Процедура теста принудительного плавания у мышей является сходной с таковой, описанной выше для крыс, с некоторыми модификациями. Применяемый для теста цилиндр представляет собой 1литровый лабораторный стакан (10,5 см в диаметре х 15 см высоты), наполненный до 800 мл (10 см глубины) водой с температурой 23-25°С. Для каждой мыши проводят лишь один 5-минутный тест на плавание между 13.00 и 17.00 ч. Лекарство вводят за 30-60 мин до 5-минутного периода тестирования. После всех процедур плавания мышей извлекают из цилиндров, сушат с помощью бумажных полотенец и помещают в подогреваемую клетку на 15 мин. Все процедуры тестирования снимаются на видеокамеру с применением цветной видеокамеры 8опу и записываются для последующей оценки.

Оценка поведения.

Поведение во время 2-5-минутного теста проигрывается на мониторе ТВ и оценивается исследователем. Регистрируется общее время, проведенное животным в неподвижном состоянии (животное находится на поверхности воды лишь при минимальных движениях для сохранения на плаву) и подвижном состоянии (плавание и движения, превышающие необходимые для того, чтобы оставаться на плаву).

Анализ результатов.

- 32 008826

Данные теста принудительного плавания (время проявления неподвижности, подвижности; секунды) подвергают рандомизированному одностороннему тесту ΑΝΟνΑ и вторичным тестам, проводимым с применением теста Ньюмана-Кеулса. Результаты анализируют с помощью ОгарйРаб Рпкт (ν2.01) (ОгарйРаб 8ой^аге, 1пс., 8аи Ωίοβο. СА). Все данные представлены в виде среднего ± ст. ош. ср.

Тест социального взаимодействия (8ΙΤ).

Крысам дают привыкнуть к приспособлениям по уходу за животными в течение 5 дней и содержат по одиночке в течение 5 дней до тестирования. Животных подготавливают по 5 мин в день. Построение и методику теста социального взаимодействия осуществляют. как описано ранее Кеиией, е1 а1. (1997). В день тестирования подобранные по массе пары крыс (± 5%), неродственные друг другу, получают идентичные варианты лечения и их возвращают в их домашние клетки. Животных подразделяют рандомизированно на 5 групп для вариантов лечения, по 5 пар на группу, и они получают один из следующих вариантов в/б лечения: тестируемое соединение (10, 30 или 100 мг/кг), носитель (1 мл/кг) или хлордиазепоксид (5 мг/кг). Дозы вводят за 1 ч до тестирования. Крыс затем помещают в белую камеру или арену из органического стекла (54 х 37 х 26 см), пол которой разделен на 24 равных квадрата, на 15 минут. Для генерации фонового шума и поддержания камеры при температуре приблизительно 74°Р (23,3°С) применяют воздушный кондиционер. Все эксперименты записывают на видеокамеру с применением портативной видеокамеры ЩС (модель ΟΒ-8Ζ1, Е1тетооб Рагк, Νί) с применением 30-минутных видеокассет либо ТОК (НС иЫта1е Ьгаиб), либо 8опу. Все испытания проводят между 13.00 и 16.30 часами. Активное социальное взаимодействие, определяемое в виде груминга, фырканья, покусывания, драки, борьбы, преследования, ползания поверху или понизу, оценивают с помощью остановки кадра (8ройк1ше шобе1 № 226, возможность разрешения 1/100 с). Оценивают количество эпизодов вертикальных стоек (животное полностью встает на задние конечности), груминга (облизывания, покусывания, почесывания тела) и умывания (т. е. лапки повторно движутся по мордочке) и количество пересеченных квадратов. Пассивное социальное взаимодействие (животные лежат рядом или друг на друге) не оценивают. Все элементы поведения затем оцениваются наблюдателем, которому неизвестно лечение каждой пары. В конце каждого теста камеру тщательно протирают с помощью влажных бумажных полотенец.

Животные.

Самцов белых крыс 8ргадие-0а^1еу (Тасошс Еагтк, ΝΥ) содержат попарно при 12-часовом световом режиме (освещение с 07.00 ч) при свободном доступе к пище и воде.

Введение лекарства.

Тестируемое соединение растворяют в 100% ДМСО или 5% молочной кислоте, об/об (81дта С11ет1са1 Со., 8ΐ. Ьошк, МО). Хлордиазепоксид (81дта Сйетка1 Со., 8ΐ. Ьошк, МО) растворяют в дважды дистиллированной воде. Носитель состоит из 50% ДМСО (об/об) или 100% диметилацетамида (ΌΜΑ). Все растворы лекарства готовят за 10 мин до инъекции, и растворы отбрасывают в конце дня тестирования. Объем вводимого раствора лекарства составляет 1 мл/кг.

Анализ результатов.

Данные социального взаимодействия (время взаимодействия, стойки и пересеченные квадраты) подвергают рандомизированному одностороннему тесту ΑΝΟνΑ и вторичным тестам с применением теста Стьюдента-Ньюмана-Кеулса. Данные тестируют на соответствие нормальному распределению (тест Шапиро-Уилка). Данные анализируют с помощью программы ОВ8ТАТ, версия 6.5 (Этап-иск Μίсгокуйетк, 1пс., 81йег 8ргтд, ΜΌ, 1997). Все результаты представлены в виде среднее ± ст. ош. ср.

Модели 1п νί\Ό рефлекса болезненного позыва на мочеиспускание.

Действие соединений на рефлекс болезненного позыва на мочеиспускание оценивают с помощью моделей «индуцируемого растяжением ритмического сокращения» (ΌΙΚΠ), как описано в предшествующих публикациях (например, Мадд1 е1 а1, 1987; Мопката е1 а1, 1992), и «непрерывной медленной чрезпузырной инфузии» (С8Т1) у крыс.

Модель ΌΙΚΠ.

Самок крыс 8ргадие ЭаМеу с массой тела приблизительно 300 г анестезируют с помощью подкожного введения уретана (1/2 г/кг). Трахею канюлируют с помощью трубки РЕ240 для обеспечения свободного доступа воздуха на протяжении эксперимента. Производят брюшной надрез по средней линии, и отделяют левую и правую уретры. На уретры накладывают лигатуры дистально (для предотвращения утечки жидкости из мочевого пузыря), и в них проксимально вводят канюли с применением трубки РЕ10. Вход закрывают с помощью швов из 4-0 шелковой нити при сохранении путей через РЕ10 наружу для удаления мочи. Мочевой пузырь канюлируют посредством трансуретрального способа с применением трубки РЕ50, вставленной на 2,5 см выше открытия уретры. Данную канюлю прикрепляют к хвосту с помощью клейкой ленты и присоединяют к датчику давления. Для предотвращения утечки из мочевого пузыря канюлю прочно связывают с внешним отверстием уретры с помощью шелковой нити 4-0.

Для инициации рефлекса болезненного позыва на мочеиспускание мочевой пузырь сначала опорожняют путем надавливания на нижнюю часть живота и затем наполняют обычным физиологическим раствором в виде 100 порций (максимум = 2 мл) до начала спонтанных сокращений мочевого пузыря (обычно при давлении 20-40 мм Нд со скоростью одно сокращение каждые 2 или 3 мин). После установления регулярного ритма в/в или в/б вводят носитель (физиологический раствор) или тестируемое со

- 33 008826 единение для исследования его действия на активность мочевого пузыря. В качестве положительного контроля вводят антагонист 5-ΗΤι_Α ^ΆΥ-100635. Данные представляют в виде интервала между сокращениями (в секундах) перед введением лекарства (базального) или после введения носителя или тестируемого вещества.

Крысиная модель непрерывной медленной чреспузырной инфузии (С8Т1).

В данном исследовании применяют самцов крыс линии 8ргадие Оа\\'1еу с массой тела приблизительно 300 г. Крыс анестезируют пентобарбитоном натрия (50 мг/кг, в/б). Посредством срединного брюшного разреза открывают мочевой пузырь, в мочевой пузырь вставляют полиэтиленовую канюлю (РЕ 50) через маленький надрез в верхней части пузыря, и канюлю закрепляют наложением шва ремешок для кошелька. Другой конец канюли выводят подкожно на дорсальной стороне шеи. Сходным образом другую канюлю (РЕ 50) вводят в желудок посредством околосрединного брюшного разреза со свободным концом, выведенным подкожно в область шеи. Хирургические раны закрывают швом из шелка 4-0, и животному дают восстановиться с применением подходящей послеоперационной помощи. На следующий день животное помещают в фиксатор для крыс. Открытый конец канюли мочевого пузыря соединяют с датчиком давления, а также инфузионным насосом через трехходовой запорный кран. Циклы опорожнения мочевого пузыря инициируют продолжительной инфузией обычного физиологического раствора со скоростью 100 мкл/мин. Повторные сокращения опорожнения регистрируют с помощью работающей в реальном режиме времени программы сбора данных Ро\гег ЬаЬ. После регистрации базальной картины опорожнения в течение часа непосредственно в желудок через внутрижелудочный катетер вводят тестируемое лекарство или носитель, и циклы опорожнения регистрируют в течение 5 ч. Для каждого животного рассчитывают давление и частоту мочеиспускания до и после лечения (для каждого 30-минутного интервала). Емкость мочевого пузыря рассчитывают на основании частоты мочеиспускания на основе постоянной инфузии 100 мкл/мин. Действие тестируемого лекарства выражают в виде процента от базальной до введения лекарства емкости мочевого пузыря. Для сравнения в качестве положительного контроля применяют \νΆΥ 100635.

Ссылки

АиЬигдег, С., е1 а1., (1992) Азз1дптеп( оГ (Не зесопб (сиЬап) 1осиз оГ аи(озота1 ботшап( сегеЬе11аг а(ах1а (о сйготозоте 12ц23-24.1. Ье1\\'ееп Папктд тагкегз Ό12858 апб РЬА2. Су(одепе(. Се11. Сеие(. 61:252-256.

Вай)аош-Воийабб1, М., е( а1., (1994) Гпзийп (геа(теп( з(1ти1а(ез (Не га( те1ашп-сопсеп(га(тд йогтопергобисшд пеигопз. №игорер(1без 24:251-258.

Вакег, В.1., (1991) Ме1ашп-сопсеп(га(тд йогтопе: а депега1 уег(еЬга(е пеигорерйбе. 1п(. Реу. Су(о1. 126:1-47.

Вакег, В.1. (1994) Ме1ашп-сопсеп(га(тд йогтопе ирба(е: Гипс(юпа1 сопз1бега(юп. ТЕМ 5: 120-126.

Ва8ве((, Ά.8., е( а1., (1988) Рагйа1 (пзоту сйготозоте 5 созедгедайпд \\йй зсЫхорйгеша. Ьапсе( 1: 799801.

Вебпагек, М.А., е( а1. 8уп(йез1з апб Ью1одюа1 еуа1иа(юп т уйго оГ а 8е1есйуе, Ыдй ро(епсу рерйбе адошз( оГ йитап те1ашп-сопсеп(га(тд йогтопе асйоп а( йитап те1ашп-сопсеп(га(тд йогтопе гесер(ог 1.

1. Вю1. Сйет. 277(16): 13821-13826 (2002).

Вй(епсоиг(, ЕС., е( а1., (1992) Тйе те1ашп-сопсеп(га(тд йогтопе 8уз(ет оГ (йе га( Ьгаш: Ап 1ттипоапб йуйпб|ха1юп Ыз(осйет1са1 сйагасЮпхабоп. 1. Сотр. №иго1. 319: 218-245.

Вого^зку, В., е( а1. На(иге МеШсте, 2003.

ВгабГогб, М.М. (1976) А гар1б апб зепзй1уе те(йоб Гог (йе с.|иапШа1юп оГ ткгодгат диапййез оГ рго(еш и(1Нхлпд (йе рппс1р1е ог рго(ет-буе Ьшбтд. Апа1. Вюсйет. 72: 248-254.

Вигдаиб, ЕЬ., е( а1., (1997) Ме1ашп-сопсеп(га(тд йогтопе Ыпб1пд зйез ш йитап 8УК14 кега(1посу(ез. Вюсйет. Вюрйуз. Рез. Соттип., 241(3): 622-629.

СйатЬегз, 1., е( а1., Ме1ашп-сопсеп(га(тд йогтопе 1з (йе содпа(е йдапб Гог (йе огрйап С-рго(етсоир1еб гесер(ог 8ЬС-1. На(иге 400(6741); 261-6 (1999).

Сйеп, Υ., е( а1, Тагде(еб б1згир(юп оГ (йе те1ашп-сопсеп(га(тд йогтопе гесер(ог-1 гези1(з т йурегрйад1а апб гез1з(апсе (о б1е(-тбисеб оЬезйу. Епбосппо1оду 143(7); 2469-2477(2002).

Сгаббоск, Ν., е( а1., (1993) Тйе депе Гог Эапег=з б1зеазе тарз (о сйготозоте 12с.|23-с|24.1. Нит. Мо1. Сепе(. 2:1941-1943.

Оопбопк А., е( а1., (1995) Т. 8уп(йез1з, 181.

Эгохбх, Р. апб ЕЬег1е, Α.Ν., (1995) Втбтд зйез Гог те1ашп-сопсеп(га(тд йогтопе (МСН) т Ьгаш зупар(озотез апб тетЬгапез Егот репрйега1 йззиез 1беп(Шеб тейй Ыдйу (пйа(еб МСН. 1. Ресер(. 81дпа1. Тгапзбиск. Рез. 15(1-4): 487-502.

Эгохбх, Р., е( а1., (1995) Ме1ашп-сопсеп(га(тд йогтопе Ьтбшд (о тоизе те1апота се11з шуйго. ЕЕВ8 359: 199-202.

Эгохбх, Р., е( а1., (1998) СйагасЮпхабоп оГ(йе гесер(ог Гог те1ашп-сопсеп(га(тд йогтопе оп те1апота се11з Ьу рйо(осгозз1шкшд. Апп. ΝΥ Асаб. 8сЕ 839 (1): 210-213.

С1Шат, Т.С., е( а1., (1989) Пе1е(юп тарртд оГ ^NΑ тагкегз (о а гедюп оГ сйготозоте 5 (йа( созедгеда(ез тейй зсЫхорйгета. Сепоткз 5: 940-944.

- 34 008826

Оοηζа1еζ, Μ.Σ., еΐ а1., (1997) 8Нти1акгу еГГес! οΓ те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс οη 1и1е1п1хдпд 1югпюпс ге1еазе. Nеи^οеηбοс^^ηο1οду 66(4):254-262.

Оοηζа1еζ, Μ.Σ., еΐ а1., (1996) ВеНахюга1 еГГес1з οΓ α-те1аηοсу(е-з(^ти1а(^ηд 1югпюпс Ια-Μδ^ апб те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс (Μί,Ή) айег сеп(га1 абт^η^з(^а(^οη т Гета1е га(з. Рер11без 17:171-177.

0Γί11οπ, 8., еΐ а1., (1997) Εχρ1οή^ (Не ехргеззюп οΓ (Не те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс теззепдег К№А ш (Не га11а(ега1 Ηурο(Ηа1атиз айег дο1б(Η^οд1исοзе т)ес(юп. №еигорерНбез 31(2): 131-136.

Нсгус, С. апб Ре11тапп, Ό. (1997) СНапдез ш га( те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс апб бугюгрНт теззепдег πΗοπικΕχ ас1бз тбисеб Ьу Γοο6 берпха(юп. №еигорерНбез 31(3): 237-242.

Нетей, О., е( а1., (1996) □ехекртеги апб з(аде-берепбеп( ехргеззюп οΓ тс1аη^η-сοηссηΐ^аΐ^ηд 1югпюпс ш таттаНап дегт се11з. Вккду οΓ Кер^οбис(^οη 54: 1161-1172.

КаигоасНг Н., е( а1., (1983) СΗа^ас(е^^ζа(^οη οΓ те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс ш сНит за1тοη рНиНаг1ез. №а(иге 305: 321-333.

Кшдде, Κ.Μ., е( а1., (1996) Μе1аηο(^οр^с рерНбез ш (Не таттаНап Ьгат: ТНе те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс. РерНбез 17: 1063-1073.

Кшдде, Κ.Μ. апб Уадпег, Σ.Ε. (1997) Μе1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс (Μί,Ή) ^ηνο1νетеη( т реп(у1епеΕ(ηζοΕ (РΤΖ)-^ηбисеб зс1/иге т га1 апб дшпеа р1д. РерНбез 18(7): 1095-1097.

Ьакауе, В., е( а1., Скшпд οΓ (Не га( Ьгат сО№А ептобтд Γογ (Не 8ЬС-1 О гесеркг геνеа1з (Не ргезепсе οΓ ап т(гоп т (Не депе. ВксНет. ВкрНуз. Ас(а 1401(2): 216-220 (1998).

Ьибго1д, Ό.8., е( а1., (1998) Μе1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс: а Γиηс(^οηа1 те1аηοсο^Ηη аη(адοη^з( т (Не НурοΐНа1атиз. Ат. Σ. РНузк1. Ε^ο^μΗ Μе(аЬ. 274 (4): Ε627-Ε633.

ΜасΚеηζ^е, Ρ.Σ., е( а1., (1984) Εν^ι^ (На( (Не бοрат^ηе^д^с ^ηсе^(ο-Ηурο(Ηа1ат^с (гас( Наз а зНти1акгу ейес( οη ονи1а(^οη апб дοηабο(^οр^η ге1еазе. Nеи^οеηбοс^^ηο1οду 39: 289-295.

Μадд^, С.А., е( а1., 8рта1 апб зиргазрта1 сοтрοηеη(з οΓ ОАВАегдк тЫЬНюп οΓ (Не тк(ип(юп геПех ш га(з. Σ. РНагтаотН Εxр. ТНег. 240: 998-1005 (1987).

Μ-гзН, Ό.Σ., е( а1., Μе1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд Ηο штопе 1 ^есерк^-беΓккη( пасе аге 1еап, НурегасШе, апб НурегрНадк апб Нахе а1(егеб те(аЬο1^зт. Ргос. №аН. Асаб. 8с1. И8А 99(5): 3240-3245 (2002).

Μа^(^η. К., е( а1., (1997) Σ. Те(гаНебгоп Ье((егз, 38, 1633.

ΜсВ^^бе, К.В., е( а1., (1994) ТНе ас(юпз οΓ те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс (ΜΕΉ) οη раззгое а^^бансе ш га(з: А ргеНттагу з(ибу. РерНбез 15: 757-759.

Μе1к^, Σ., е( а1., (1990) Оепе Γογ сНгопк ргох1та1 зрша1 тизси1аг а(горНкз тарз (ο сН^οтοзοте 5с.|. №а(иге (Εο^οΗ) 344; 767-768.

Μι1Εγ, С.Ь., е( а1., (1993) α-Μ8Н апб ΜΕΉ аге ^^^^1 аη(адοη^з(з т а С№8 аиб1кгу рагаб1дт. РерНбез 14: 1-10.

ΜοΚΙ^-πν-Γ К., е( а1., [пкЫЮг^· еПсс( οΓ ^ηаре^^зοηе Нуб^οсН1ο^^бе (^ηаре^^зοηе), а пего сеп(га11у асНпд тизс1е ге1ахап(, οη (Не тю(ип(юп геДех. Ειιγ. Σ. РНа^тасο1. 213: 409-415 (1992).

М-Нюп Σ-Ь. (1994) ТНе те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд Ηο гптоне: Нют (Не рерНбе (ο (Не депе. СпНса1 Ксу. ш №еитоЬю1. 221: 221-262.

Рагкез, Э.О., (1996) ОтгеНс апб па(пиге(к ас(юпз οΓ те1апт сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс ш то^скиз зНеер. Σ. Nеи^οеηбοс^^ηο1. 8: 57-63.

Ребеикиг, Р., е( а1., (1994) Азз1дптеп( οΓ (Не Нитап р^ο-те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд Ηοπιιοικ депе (ΓΜ^) (ο сН^οтοзοте 12с.|23-24 апб (νο хапап( депез ^Μ^Μ апб ΗΜΗ-ΉΕΣ) (ο сН^οтοзοте 5р14 апб 5с|12-с|13. Ос^т^з 19: 31-37.

Рο^зο1(, Κ.Ό., е( а1., ВеНахюига1 безрак ш га(з: а пего тοбе1 зепзйгое (ο ап(1бергеззап( (геа(теп(з Ειιγ Σ РНагта^ 47 (4): 379-391 (1978).

Ргеззе, Р., е( а1. (1992) Ка( те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд Ηο штопе теззепдег πΗοπικΕχ ас1б ехргеззюп: тагкеб сНапдез биппд беνе1οртеη( апб айег з(гезз апб д1исοсο^Ηсο^б зНти1г Εηбοс^^ηο1οду 131: 1241-1250.

Си, Ό., е( а1. (1996) А га1е Γογ те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс ш (Не сеп(га1 ^еди1а(^οη οΓ кебшд ЬеНахкиг. №а(иге 380: 243-247.

Кοзз^, Μ., е( а1., (1997) Μе1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд Ηο штопе аси(е1у зНти1а(ез кебшд, Ьи( сНготс абт1шз(^а(^οη Наз гю еПсс( οη Ьοбу гое1дН(. Εηбοс^^ηο1οду 138: 351-355.

8аНи, А. (1998) Εν^ι^ зиддезНпд (На( да1ашп (ОАЬ), те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд 1югпюпс (ΜΟΉ), пеига(епзт (№Т), ргоοркте1аηοсο^Ηη (РОΜС) апб пеигорерНбе Υ (ΝΈΥ) аге (агде(з οΓ 1ер(т з1дпа11пд т (Не Ηурο(На1атиз. Εηбοс^^ηο1οду 139(2): 795-798.

8акига1, Т., е( а1., (1998) Огехшз апб ο^еχ^η гесеркгз: А Γат^1у οΓ Ηурο(Ηа1ат^с пеигорерНбез апб О р^ο(е^η-сοир1еб гесеркгз (На( геди1а(е кебтд ЬеНахюг. Се11 92: 573-585.

8аηсΗеζ, Μ., е( а1., (1997) Μе1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд Ηοηιιοικ (ΜΕΉ) аη(адοη^ζез (Не еДес^ οΓ α-Μ8Н апб пеигорерНбе ΕΗ οη д^οοт^ηд апб 1οсοтο(ο^ ас(^ν^(^ез ш (Не га(. РерНбез 18: 393-396.

8а1к, Υ., е( а1., ΜοΕαιΗ-π сНагас(е^а(кп οΓ (Не те1аη^η-сοηсеη(^а(^ηд-Ηο^тοηе гесеркг. №а(иге 400(6741): 265-269 (1999).

8Нетпдкп, К., е( а1., (1988) ^οса1^ζа(^οη οΓ а зизсерНЬПНу ксиз Γογ зсΗ^ζοрΗ^еη^а οη сΗ^οтοзοте 5. №а(иге (^οηбοη) 336:164-167.

- 35 008826

ЗтеЬгак, Μ., е! а1., (1988) 1. Огд. СЬеш., 53, 2916-2920.

Такска\\а. 8., с1 а1., Т-226296: а ηονεί, ога11у искус апс! 5с1ссОус ше1ашп-сопсеи1га1шд когтопс гесер1ог ап1адош81. Еиг. 1. Ркагтасок 438(3); 129-35 (2002).

Т\\с115. К., с1 а1., (1992) Скгото5ота1 акыдшпеи! о£ 1кс 1оси§ саиыид οΙίνο-ροηΐο-сегеЬеПаг а!горку (8СА2) ίη а сиЬап Гоипбсг рори1аИоп. СуЮдспск Се11: Сенек 61: 262-265.

ХУсЧЬгоок. С.А., с1 а1., (1992) Керой о£ 111е 5ссопс1 т1ета1юиа1 \\ог1<5кор оп китап сйготокоте 5 тарртд. Су1одепе1. Се11. Сенек 61: 225-231.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение, имеющее структуру где каждый А независимо представляет собой -Η, -Е, -С1, -Вт, -I, -ΟΝ, -ΝΟ₂ или С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью;

В представляет собой СН;

Ζ представляет собой СО;

К₄ представляет собой -ОК₃, -ΝΗΚ₃, -СОК₃, С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, 8 или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ОК₂ или С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью;

где каждый К₃ независимо представляет собой -Н; С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, С1-С7 монофторалкил или С1-С7 полифторалкил; С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, 8 или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂, -С14, -ОК₂ или -ΝΗΚ₂;

где каждый К₂ независимо представляет собой -Н, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, 8 или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂ или -СКГ; и и представляет собой целое число от 0 до 6 включительно;

или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение по п.1, где соединение имеет структуру /

где А и Ζ определены в π. 1;

К₄ представляет собой С₆ или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, 8 или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ОК₃ или С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью;

где каждый К₃ представляет собой С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, Сб или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, 8 или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂, -СИ или -ОК₂;

где каждый К₂ представляет собой -Н, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью, Сб или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, 8 или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂ или -СКГ; и и определено в π. 1.
3. Соединение по и.2, где соединение имеет структуру где А определен в п.1;

К₂ представляет собой -Н, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью или Сб или Сю арил, где арил необязательно замещен одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂ или -С14; и и определено в π. 1.
4. Соединение по п.З, где соединение имеет структуру

-36008826 где А определен в п.1;

Я₂ представляет собой С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью и и представляет собой целое число от 3 до 6 включительно.
5. Соединение по п.4, где соединение имеет структуру где каждый А представляет собой независимо -Η, -Р, -С1, -Вт или -I и К₂ определен в п.4.
6. Соединение по п.5, где соединение имеет структуру где каждый А представляет собой независимо -Η, -Р или -С1; и где Я₂ представляет собой С1-С3 алкил с линейной или разветвленной цепью.
7. Соединение по п.6, где соединение имеет структуру
8. Соединение по п.6, где соединение имеет структуру
9. Соединение по п.1, где соединение имеет структуру где А определен в π. 1 и

К₂ представляет собой С₆ или Сю арил, где арил необязательно замещен одним или более -Р, -С1, Вт, -I, -ЫО₂или -СЫ; и и представляет собой целое число от 1 до 6 включительно.
10. Соединение по п.9, где соединение имеет структуру где каждый А представляет собой независимо -Η, -Р, -С1, -Вт или -I и Я₂ определен в п.9.
11. Соединение по п. 10, где соединение имеет структуру где каждый А представляет собой независимо -Η, -Р или -С1 и

Я₂ представляет собой Сб или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Р, -С1 или -Вт.
12. Соединение по п. 11, где соединение имеет структуру

-37008826 где каждый А представляет собой независимо -Η, -Е или -С1 и

Я₂ представляет собой С₆ или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е.
13. Соединение по и. 12, где соединение имеет структуру
14. Соединение по π. 1, где соединение имеет структуру где А, Ζ, и и К₄ определены в π. 1.
15. Соединение по и. 14, где соединение имеет структуру где А определен в п.1; и

К₄ представляет собой Сз или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ОК₃ или С1-С7 алкилом с линейной или разветвленной цепью;

где каждый К₃ представляет собой независимо С] -С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью, Сб или Сю арил или С₃-Сю гетероарил, содержащий один или более атомов Ν, § или О, где арил или гетероарил необязательно замещены одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂, -ΟΝ или -ОК₂;

где каждый К₂ представляет собой независимо С]-С₇ алкил с линейной или разветвленной цепью; и и определено в π. 1.
16. Соединение по π. 1, где соединение имеет структуру где Ζ определен в п.1;

каждый А независимо представляет собой -Η, -Е, -С1, -Вт или -I;

К₄ независимо представляет собой -ОК₃, -ΝΗΚ₃ или -СОЯ,:

где К₃ представляет собой С₆ или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂, -ΟΝ, -ОЯ₂ или -ΝΗΚ₂;

где каждый К₂ независимо представляет собой -Η, С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью или Се или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂, -ΟΝ; и и представляет собой целое число от 1 до 6 включительно.
17. Соединение по и. 16, где соединение имеет структуру где каждый А независимо представляет собой -Н или -Е;

где К.₃ представляет собой С₆ или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт, -I, -ΝΟ₂, -ΟΝ, -ОК₂ или -ΝΗΚ₂;

где К₂ независимо представляет собой С1-С7 алкил с линейной или разветвленной цепью или Се или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт или -I; и и представляет собой целое число от 1 до 6 включительно.
18. Соединение по и. 16, где соединение имеет структуру

-38008826

Я₃ представляет собой Сб или Сю арил, необязательно замещенный -ΝΗΚ₂ и где К₂ представляет собой С₆ или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт,
19. Соединение по и. 18, где соединение имеет структуру
20. Соединение по и. 16, где соединение имеет структуру

2Е Соединение по и. 20, где соединение имеет структуру

.Л й^ где А представляет собой -Η, -Е, -С1, -Вт или -I;

Из представляет собой Сб или Сю арил, необязательно замещенный одним или более -Е, -С1, -Вт или
22. Соединение по и.21, где соединение имеет структуру
23. Соединение по п.21, где соединение имеет структуру
24. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по π. 1 и фармацевтически приемлемый носитель.
25. Способ получения фармацевтической композиции, включающий смешивание соединения по п.1 и фармацевтически приемлемого носителя.
26. Применение соединения по π. 1 для приготовления лекарственного средства для лечения нарушения, опосредованного рецептором МКГЕ
27. Применение по п.26, где терапевтически эффективное количество составляет количество от приблизительно 0,03 до приблизительно 300 мг.
28. Применение по п.27, где нарушение представляет собой депрессию.
29. Применение по п.27, где нарушение представляет собой тревожность.
30. Применение по п.27, где нарушение представляет собой ожирение.

ЗЕ Применение по п.27, где нарушение представляет собойургентное недержание мочи.
32. Применение соединения по π. 1 для приготовления лекарственного средства для лечения депрес сии, тревожности, недержания мочи или ожирения.
33. Применение по п.32, где терапевтически эффективное количество составляет от приблизительно 0,03 до приблизительно 300 мг.