EA005138B1 - Фармацевтические композиции, усиливающие иммуногенность антигенов со слабой иммуногенностью - Google Patents
Фармацевтические композиции, усиливающие иммуногенность антигенов со слабой иммуногенностью Download PDFInfo
- Publication number
- EA005138B1 EA005138B1 EA200300640A EA200300640A EA005138B1 EA 005138 B1 EA005138 B1 EA 005138B1 EA 200300640 A EA200300640 A EA 200300640A EA 200300640 A EA200300640 A EA 200300640A EA 005138 B1 EA005138 B1 EA 005138B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- composition
- gangliosides
- treatment
- composition according
- outer membrane
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 50
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 50
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 50
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title abstract description 20
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title abstract 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 106
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 70
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 claims abstract description 53
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 44
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 35
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 34
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 108010030416 proteoliposomes Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 23
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 20
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 13
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 13
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical group NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 10
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims abstract description 7
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims abstract description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 108090000746 Chymosin Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 229940080701 chymosin Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 3
- GNOLWGAJQVLBSM-UHFFFAOYSA-N n,n,5,7-tetramethyl-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-amine Chemical compound C1=C(C)C=C2C(N(C)C)CCCC2=C1C GNOLWGAJQVLBSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract 4
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract 4
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract 4
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims abstract 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 22
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 22
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 9
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 4
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 claims description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims 1
- 210000003905 vulva Anatomy 0.000 abstract description 5
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 abstract description 3
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 abstract 7
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 abstract 2
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 abstract 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 abstract 2
- 201000005102 vulva cancer Diseases 0.000 abstract 2
- 101100123850 Caenorhabditis elegans her-1 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 abstract 1
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 abstract 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 54
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 47
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 36
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 description 27
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 26
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 18
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 10
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 8
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 8
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 7
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 6
- TXWRERCHRDBNLG-UHFFFAOYSA-N cubane Chemical compound C12C3C4C1C1C4C3C12 TXWRERCHRDBNLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 4
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 4
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 4
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 3
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 3
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 3
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 101100365490 Drosophila melanogaster Jon99Ci gene Proteins 0.000 description 2
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102000052508 Lipopolysaccharide-binding protein Human genes 0.000 description 2
- 108010053632 Lipopolysaccharide-binding protein Proteins 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150008449 ser3 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- SMVNDPAZIJEDPF-UHFFFAOYSA-N 3,5-dioxa-4lambda4-thia-2,6-diazatricyclo[5.3.1.04,11]undeca-1,4(11),6-triene Chemical compound C1CCC2=NOS3=C2C1=NO3 SMVNDPAZIJEDPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101100285389 Arabidopsis thaliana HLS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710141722 Arylsulfatase Proteins 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 101150030345 COP3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100206103 Caenorhabditis elegans tbb-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102100037831 DNL-type zinc finger protein Human genes 0.000 description 1
- 101710106778 DNL-type zinc finger protein Proteins 0.000 description 1
- 101100462378 Danio rerio otpb gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 101000967216 Homo sapiens Eosinophil cationic protein Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102000017033 Porins Human genes 0.000 description 1
- 108010013381 Porins Proteins 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 229940022005 RNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102220469221 S-adenosyl-L-methionine-dependent tRNA 4-demethylwyosine synthase TYW1B_E18A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 102100038583 Secreted Ly-6/uPAR-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- -1 aliphatic fatty acid Chemical class 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004640 cellular pathway Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- ZCDOYSPFYFSLEW-UHFFFAOYSA-N chromate(2-) Chemical compound [O-][Cr]([O-])(=O)=O ZCDOYSPFYFSLEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000009997 humoral pathway Effects 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 108700021021 mRNA Vaccine Proteins 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001103—Receptors for growth factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001103—Receptors for growth factors
- A61K39/001106—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ErbB4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
- A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6081—Albumin; Keyhole limpet haemocyanin [KLH]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Virology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к иммунологии, точнее к иммуногенным композициям, содержащим пептиды, полипептиды, белки и последовательности соответствующих им ДНК, клетки или их лизаты и протеолипосомы очень малого размера (VSSP), последние образуются путем связывания белкового комплекса наружной мембраны (СРМЕ) Neisseria meningitidis с ганглиозидами посредством гидрофобных связей. В частности, в изобретении демонстрируют, как получать указанные иммуностимулирующие композиции, которые способны генерировать антиген-специфические иммунные ответы даже у иммунологически скомпрометированных хозяев, таких как пациенты, страдающие раком или хроническими вирусными или бактериальными инфекциями. Введением разработанных в изобретении вакцинных композиций пациентам можно восстанавливать участки их иммунной системы. Разработанные в изобретении вакцинные композиции можно применять для предупреждения или лечения инфекционных, злокачественных или аутоиммунных заболеваний.
Description
Область техники
Изобретение относится к лечению человека, и в частности к профилактическим и/или терапевтическим вакцинам, которые обеспечивают защиту против инфекций, аутоиммунных заболеваний и рака; и в частности к вакцинным композициям, индуцирующим или усиливающим иммунный ответ на антигены со слабой иммуногенностью.
Предшествующий уровень техники
Незначительные успехи, достигнутые к настоящему времени в предупреждении и лечении группы инфекционных заболеваний, рака и аутоиммунных заболеваний при использовании вакцин, обусловлены сочетанием различных факторов. Факторами, главным образом, являются низкая иммуногенность соответствующих антигенов, незнание того, как манипулировать регуляцией иммунной системы, и стратегии устранения патогенных микроорганизмов и опухолей и иммуносупрессия хозяина.
На данном этапе хорошо известно, что антигены со слабой иммуногенностью представляют собой пептиды, полипептиды и белки (или последовательности соответствующих им ДНК), которые присутствуют в опухолях и нормальных тканях или ассоциированы с патогенными микроорганизмами, которые вызывают хронические инфекции, уклоняясь от воздействия иммунной системы.
Показано, что из числа антигенов со слабой иммуногенностью рецепторы факторов роста с киназной активностью по остатку тирозина тесно связаны с развитием опухолей и опухолевых метастазов, и, как было установлено, в некоторых случаях они оказываются ценными как показатели плохого прогноза при раке. Это относится к рецепторам, подобным рецептору эпидермального фактора роста (ЕСЕ-К), также известному как НЕК-1, рецептору 2 эпидермального фактора роста (НЕК-2) и рецептору фактора роста тромбоцитов (РЭСЕ-К).
Сверхэкспрессия упомянутых рецепторов при некоторых видах неоплазии, главным образом, эпителиального происхождения является мишенью иммунотерапии при раке. Это относится к опухолям молочной железы, мочевого пузыря, яичников, вульвы, прямой кишки, легкого, мозга, предстательной железы и опухолям головы и шеи. Доказано, что присутствие ЕСЕ-К является показателем плохого прогноза при раке молочной железы (Рете/ К. е! а1., 1984. Втеак! Сапсег аиб ТгеайпеЩ 4: 189-193). Хотя роль системы ЕСЕ/ЕСЕ-К в регуляции роста опухолей еще не установлена, высказано предположение, что экспрессия ЕСЕ-К в опухолевых клетках обеспечивает механизм аутокринного стимулирования, который приводит к нарушенной пролиферации названных клеток (ЗсЫеЫидег 1. е! а1., (1983) Стй. Ке\. ВюсЬет 14 (2): 93-111).
Вследствие присутствия высокоэкспрессированного рецептора эпидермального фактора роста в опухолях названный рецептор становится мишенью пассивной иммунотерапии (ΡΙ) моноклональными антителами в их нативной форме, ассоциированной с лекарственными средствами, токсинами или радиоактивными изотопами (Уо11таг А.М. е! а1. (1987) 1. Се11. РЬуДоЕ 131: 418-425). Проводится целый ряд клинических испытаний с моноклональными антителами (МаЬ), и в некоторых из них получены многообещающие результаты, как это имело место в случае клинического исследования с МаЬ С225 при раке молочной железы, на клетках поджелудочной железы и клетках почек в фазе ΙΙ и при опухолях головы и шеи в фазе ΙΙΙ испытания (МеибекоЬи 1. е! а1. (1999) Атепсап 8ос1е1у оГ С11тса1 Оисо1оду Меебид). Другое клиническое исследование в фазе ΙΙ, в котором получены хорошие результаты, является исследованием, проведенным в отношении МаЬ 1ОК едГ/г3 на опухолях головы и шеи (СготЬе! Т. е! а1. (2000) Саисег ВюШегару аиб ВюрЬагтасеибса1, в печати).
С другой стороны, специфическая активная иммунотерапия (8ΑΙ) с использованием ЕСЕ-К в качестве мишени никогда не разрабатывалась по причине слабой иммуногенности ЕСЕ-К как собственно молекулы и ее широкой экспрессии в тканях, что оказалось предметом обсуждения и привело к тому, что иммунологи вовсе исключили из рассмотрения такой подход (Όίδίδ М.Ь., аиб СЬееует М.А. (1996) Ситтеи! Оршюи ш 1ттиио1оду 8: 637-642). 8ΑΙ имеет преимущество по сравнению с ΡΙ, так как ΡΙ не активирует специфический клеточный эффекторный путь иммунного ответа, и его эффект зависит от периода полураспада таких используемых антител, которые обычно являются необходимыми для проведения длительных реинфузий, чтобы достигнуть требуемого действия.
Для проявления эффективных вакцин носители и адъюванты должны действовать так, чтобы преодолеть слабую иммуногенность соответствующих антигенов посредством надлежащей регуляции иммунной системы и совместно способствовать стратегии устранения патогенных микроорганизмов и опухолей. По этой причине в настоящее время поиск новых носителей и адъювантных систем представляет собой важный аспект исследований.
В последние годы новые теории и неожиданно появляющиеся сведения относительно регуляции иммунной системы открывают новые области экспериментирования для разработки новых, более эффективных носителей и адъювантов. Ееагои, е! а1., (8с1еисе, Уо1. 272, рр 50-53, 1996) сообщили, что защитный иммунитет является результатом взаимодействия двух решающих систем: врожденного иммунитета и приобретенного иммунитета. Клетки, ответственные за приобретенный иммунитет, не могут отличать структуры, требующие иммунного ответа, от структур, не требующих его, поэтому они должны быть проинформированы клетками системы врожденного иммунитета. Необходимая связь между врожденным иммунитетом и приобретенным иммунитетом обеспечивается антиген-представляющими клетками (АРС), среди которых дендритные клетки (ОС) являются наиболее эффективными индукторами иммунного ответа, как первичные, так и вторичные ОС. В частности, ОС являются существенными, так как они являются единственными АРС, способными активировать девственные Тлимфоциты.
Недавно были идентифицированы молекулы, связанные с врожденным иммунитетом, и их можно рассматривать как новую генерацию носителей и адъювантов, так как они способны заставлять ОС созревать и опосредовать перекрестное представление антигенов, связанных с ними.
Существует серия работ, в известном смысле отражающая уровень развития данной области. Οιγοιγ (Сгй. Саге Мей., Уо1. 5, рр 780789, 1993), Се11а, е! а1. (Ыа!иге, Уо1. 388, рр 782787, 1997), и Найтап, е! а1. (1. Ехр. Мей., Уо1. 79, рр 269-277, 1994) сообщали, что взаимодействие между липополисахаридом (ЬР8) и системами узнавания врожденного иммунитета является наиболее мощным из всех и стимулирует продукцию цитокина и провоспалительных медиаторов в моноцитах, макрофагах и нейтрофилах, тем самым дополнительно увеличивая экспрессию молекул адгезии. Упомянутые воспалительные цитокины являются очень важными для ответа на инфекции и опухоли, но их чрезмерная секреция приводит к септическому шоку, который может быть смертельным для пациентов и препятствует применению ЬР8 в качестве вакцинного адъюванта. Ответ опосредуется комплексом, образованным между ЬР8 и связывающим белком, называемым липополисахаридсвязывающий белок (ЬВР), который, в свою очередь, взаимодействует с СО 14-молекулой. Упомянутая молекула способствует взаимодействию ЬР8 с сигнальными молекулами, называемыми То11-рецепторами (ТЬВ). Многочисленные данные указывают на То11-рецептор 4 (ТЬВ4) как молекулу То11-семейства, вовлеченного в трансдукцию сигнала ЬР8.
СИНсй, е! а1. (1п Уассте Оек1дп: Тйе киЬипй апй ай)иуап! арргоасй р 495, еййей Ьу М.Е. Ро\ге1 апй М.1. Ые^тап, Р1епит Ргекк, Ыете Уогк, 1995), Тйо1еп, е! а1. (Уассте, Уо1. 16, р 708, 1998), Ое Вескег, е! а1. (1п!. 1ттипо1, Уо1. 12, рр 807-815, 2000) установили, что имеются нетоксичные производные ЬР8, как в случае монофосфориллипида А (МРЬА), который проявляет адъювантную активность в клеточных и гуморальных путях иммунного ответа и который вводили человеку в нескольких клинических испытаниях. Хотя, если установлено, что МРЬА сохраняет иммуностимулирующие свойства ЬР8, в приведенных работах показано, что
МРЬА индуцирует миграцию и функциональное созревание ОС ш νίνο, но на более низких уровнях, чем ЬР8.
Татига, е! а1. (8с1епсе, Уо1. 278, рр 117-120, 1997) и Втйег, е! а1. (Ыа!иге 1ттипо1., Уо1. 1, рр 151-155, 2000) сообщили, что белки теплового шока (Н8Р) являются эффективными носителями, которые стимулируют клеточный иммунитет через феномен перекрестного представления антигена, для их сопутствующих антигенов. Полученные из опухолей Н8Р демонстрируют интересные противоопухолевые эффекты на различных моделях. Идентификация СО91 как рецептора для Н8Р др96 может отражать существование специфического пути захвата дендритными клетками белков теплового шока, которые эволюционируют до эффективно рекрутирующих пептидов, ассоциированных с антигенами, инфекционными агентами или пораженными клетками и представлены в этих клетках в главном комплексе гистосовместимости типа I (МНС I). Однако применение Н8Р как вакцинных носителей имеет неудобства, связанные с Н8Р, полученными из природного источника, например из опухолей. Это делает процедуру сложной и дорогой, и никогда точно не известно, который антиген ответственен за эффект.
Найтапп, е! а1. (Ргос. Ыа!1. Асай. 8ск И8А, Уо1. 96, рр 9305-9310, 1999), Нетт1, е! а1. (Ка!иге, Уо1. 6813, рр 740-5, 2000), 8рагтаккег, е! а1. (Еиг. 1. 1ттипо1. Уо1. 12, рр 3591-3597, 2000), Носйгейег, е! а1. (1п!. Агсй. А11егду 1ттипо1., Уо1 124, рр 406-410, 2001), и Оепд, е! а1. (Аййпйк Век. Уо1. 3, рр 48-53, 2001) показали, что среди молекул, связанных с врожденным иммунитетом, идентифицированных как индукторы созревания ОС, обнаружены последовательности СрС бактериальной ДНК. Недавно было продемонстрировано, что клеточный ответ на последовательности СрС опосредован ТЬК.9, что указывает на то, что названный рецептор способен отличать бактериальную ДНК от своей собственной ДНК. Индукция цитотоксических Т-лимфоцитов (СТЬ) против различных растворимых антигенов была воспроизведена на генетически модифицированных мышах, негативных по маркерам СО40, СО4 или МНС II. Это позволило сделать заключение, что активация СТЬ, которая опосредована СрС, происходит в отсутствие помощи от СО4-Т-клеток, придавая адъювантные свойства рассматриваемому виду молекул. Тем не менее, ш νίνο способность последовательностей СрС отклонять характер ответа от Тй2 к Тй1 полностью зависит от природы антигена и условий иммунизации, делая этот факт особо справедливым, если они являются белками. Это может представлять собой препятствие для эффективного применения олигонуклеотидов СрС как адъювантов, главным образом, у иммунологически скомпрометированных хозяев. Также описано, что бактериальные последовательности СрС могут быть причиной артрита.
.Теапшп, с1 а1. (№11игс 1ттипо1., Уо1. 6, рр 502-509, 2000), и М1еопие!, е1 а1. (1. 1ттипо1., Уо1. 166, рр 4612-4619, 2001), в частности, обнаружили важные иммуностимулирующие свойства у белка ОтрА К1еЬ51е11а рпеитопеае, грамотрицательных бактерий. Эксперименты, проведенные с упомянутым белком, экспрессированным рекомбинантными способами (крОтрА), показали, что белок связывает ЭС и индуцирует полное созревание ОС. используя молекулу ТЬК.2 как сигнальную молекулу. Другим важным свойством, установленным для рассматриваемого белка, является его способность вести антигены по пути представления класса I, при условии, что эти антигены гидрофобно или ковалентно связаны. В действительности, это является основным ограничением для них как вакцинных носителей, поскольку способ ковалентной конъюгации имеет недостаток - образование химических модификаций как самого белка, так и антигена, и гидрофобное связывание может быть использовано только подгруппой гидрофобных антигенов.
Ьо\\'е11 в патенте США № 5726292 описывает иммунопотенцирующую систему для повышения иммуногенности пептидов, полипептидов и белков, которую можно рассматривать как ближайший прототип данного изобретения. В вышеупомянутом патенте композиции характеризуются антигенами, которые химически модифицированы посредством добавления по меньшей мере одного остатка цистеина, а затем конъюгацией с алифатической жирной кислотой или гидрофобным пептидом. Впоследствии модифицированные антигены образуют комплексы с протеосомой при диализе или лиофилизации. В частности, упомянутые композиции не включают в себя гликозиды.
Краткое описание изобретения
Новизна данного изобретения заключается в создании препаратов, которые придают иммуногенность пептидам, полипептидам, белкам и последовательностям их соответствующих ДНК и клеткам-мишеням для представляющих интерес вакцин посредством связывания их с протеолипосомами очень небольшого размера (У88Р) из бактерий №15кепа тешпдй1й15, которые несут эффективные лиганды врожденного иммунитета, и ганглиозидами, без необходимости в структурных изменениях в названных антигенах.
В данном изобретении показано, что иммунопотенцирующий носитель состоит именно из протеолипосом очень небольшого размера (У88Р), полученных в результате ассоциации белкового комплекса наружной мембраны (ОМРС) из грамотрицательных бактерий №15кепа тешпдй1й15 с ганглиозидами.
Данное изобретение относится к композициям, которые особенно эффективны, когда выбирают антигены со слабой иммуногенностью и вводят их иммунологически скомпрометированным хозяевам.
Один аспект данного изобретения заключается в обеспечении иммуногенными композициями, содержащими пептиды, полипептиды, белки, последовательности соответствующих им ДНК, клетки-мишени или их лизаты в качестве антигенов и протеолипосомы очень небольшого размера (У88Р), которые образуются в результате связывания белкового комплекса наружной мембраны (ОМРС) из №15кепа тешпдй1й15 (грамотрицательных бактерий) с ганглиозидами гидрофобной связью. Кроме того, установлено, что упомянутые композиции могут быть приготовлены отдельно или в виде эмульсий с неполным адъювантом Фрейнда (1ЕА), а также могут быть лиофилизированы.
Другой аспект изобретения заключается в обеспечении иммуностимулирующими композициями, способными вызывать антигенспецифические иммунные ответы даже у иммунологически скомпрометированных хозяев, таких как пациенты, страдающие раком или хроническими вирусными инфекциями. У названных пациентов введение вакцинных композиций, описанных в данном изобретении, позволяет восстановить функциональность иммунной системы.
Кроме того, описанные в данном изобретении вакцинные композиции являются решением проблем иммуногенности рецепторов факторов роста и их влияния при лечении опухолей, так как названные рецепторы, проявляющие тирозинкиназную активность, и ганглиозиды, которые, в частности, ассоциированы с ними в мембранных молекулярных кластерах, одновременно присутствуют в иммунной системе хозяина как гей Дад-сигналы, представленные посредством У88Р, и необходимы, чтобы эффективно активировать дендритные клетки (ОС) и вызывать перекрестную презентацию. Такие вакцинные композиции избавляют от применения химических способов белковой конъюгации, при которых образуются новые поддельные иммунодоминантные эпитопы, в дополнение к факту, что они представляют их компоненты в иммунной системе, имитируя молекулярные ассоциации, в которых они по природе встречаются в опухолевых клетках.
С другой стороны, описанное технологическое решение позволяет использовать целостные структуры рецепторов, тем самым разрешая проблему иммунодоминантной генетической рестрикции, в противоположность остальным решениям, когда используют производные пептидов, и в этом случае может быть больше ограничений в этом отношении.
Точнее, изобретением предусматриваются вакцинные композиции для лечения рака. Названные вакцинные композиции содержат в качестве активного ингредиента один или более рецепторов факторов роста или их внеклеточные домены, содержащие или не содержащие их
Ί трансмембранные домены, и в качестве вакцинного носителя - протеолипосомы очень небольшого размера (У88Р), полученные из белкового комплекса наружной мембраны №188епа тешпДцбЕ. и ганглиозиды, которые специфически ассоциированы с ними, тем самым формируя мембранные молекулярные кластеры. Названные вакцинные композиции дополнительно могут содержать подходящий адъювант.
Вакцинные композиции согласно изобретению можно применять в активной иммунотерапии, особенно при опухолях, таких как рак предстательной железы, прямой кишки, легкого, молочной железы, яичника, головы и шеи, вульвы и мочевого пузыря, глиома, а также при нетрансмиссивных хронических заболеваниях.
Описание изобретения
Данное изобретение относится к созданию фармацевтических композиций, способных потенцировать иммуногенность антигенов со слабой иммуногенностью, содержащих (A) один или более антигенов со слабой иммуногенностью;
(B) вакцинный носитель, содержащий протеолипосомы, полученные из белкового комплекса наружной мембраны штамма грамотрицательных бактерий и несущие в себе ганглиозиды; и (C) возможно, один или более адъювантов.
Композиции данного изобретения усиливают иммуногенность слабоиммуногенных антигенов, которые могут быть пептидами, полипептидами, белками и соответствующими им последовательностями нуклеиновых кислот, а также клетками-мишенями для вакцин или их лизатами и их комбинациями.
В антигенах со слабой иммуногенностью могут быть использованы рецепторы факторов роста или их внеклеточные домены. Названные внеклеточные домены рецепторов факторов роста могут содержать или не содержать их трансмембранные области.
Рецепторами факторов роста, которые можно применять для усиления иммуногенности, являются НЕК.-1, НЕК.-2, ΡΌΟΕ-Β или любые их комбинации, содержащие внеклеточный домен в отсутствие или в присутствии их трансмембранной области.
Протеолипосомы для вакцинного носителя, используемого в данном изобретении, получают из белкового комплекса наружной мембраны (ОМРС) штамма грамотрицательных бактерий, предпочтительно Ыещкепа тешпдШбщ, которые могут быть штаммом дикого типа или генетически модифицированным штаммом.
В композициях согласно изобретению протеолипосомы, несущие в себе ганглиозиды, получают путем гидрофобного включения названных ганглиозидов в белковый комплекс наружной мембраны (ОМРС) Ыещкепа тешпдШбЦ. Для этой цели можно использовать ганглиозиды
СМ1 и СМ3 или их Ν-гликолилированные варианты.
Дополнительно композиции содержат адъювант, который может быть масляным адъювантом или природным или рекомбинантным полипептидом.
Предпочтительным масляным адъювантом является неполный адъювант Фрейнда или монтанид (Моп1ашбе) Ι8Α 51.
Аналогично, если используют полипептидный адъювант, он может представлять собой цитозин, такой как гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор, или химозин.
Композиции данного изобретения могут быть эффективными при профилактике и лечении рака, в особенности рака предстательной железы, прямой кишки, легкого, молочной железы, яичника, головы и шеи, вульвы и мочевого пузыря и глиомы, а также трансмиссивных хронических заболеваний.
Также композиции можно применять для предупреждения и лечения вирусных и бактериальных инфекционных заболеваний, и в частности композиции можно использовать для лечения синдрома приобретенного иммунодефицита, а также при лечении аутоиммунных заболеваний.
Данное изобретение предусматривает композиции, которые придают иммуногенность слабоиммуногенным пептидам, рекомбинантным или природным белкам, клеточным лизатам, интактным клеткам и нуклеиновым кислотам. Иммуностимулирующие композиции могут быть охарактеризованы как препараты, обладающие способностью стимулировать как гуморальный, так и клеточный ответы против определенного антигена.
Кроме того, рассматриваемые композиции обладают особым свойством восстанавливать иммунитет у иммунологически скомпрометированных индивидуумов, таких как пациенты, страдающие раком и хроническими вирусными инфекциями или особым типом аутоиммунного заболевания.
В данном изобретении отмечено, что иммунопотенцирующий носитель состоит из протеолипосом очень небольшого размера (У88Р), полученных из ассоциации белкового комплекса наружной мембраны (ОМРС) штамма грамотрицательных бактерий №188епа тешпдШбщ с включенными в нее ганглиозидами. Компоненты ОМРС подвергают диализу, который проводят в течение 2-15 дней, в результате которого включаются гликозилированные и/или ацетилированные ганглиозиды. Невезикулярный препарат получают в результате включения ганглиозидов в комплекс наружной мембраны; полученный невезикулярный препарат имеет очень небольшой размер, является видимым при электронной микроскопии, растворимым и проявляет высокую флотационную активность.
У88Р данного изобретения демонстрируют неожиданные иммунологические свойства, такие как удивительную способность вызывать созревание дендритных клеток и иммунологически восстанавливать иммуносупрессивных пациентов. У88Р5 получают в соответствии с кубинскими патентами 131/93 и 130/97, патентами США 5788985 и 6149921, а также по опубликованной статье Ецсусх. с1 а1. (Уассте, Уо1. 18, рр 190-197, 1999).
Используемые в данном изобретении антигенные пептиды могут быть синтетическими или экстрагированными из некоторых источников. Предпочтительный размер пептидов может составлять между 7 и 25 аминокислотами, в зависимости от типа Т-клеток, которые предполагают стимулировать. Кроме того, длина может колебаться между 3 и 50 аминокислотами. Пептиды могут быть нейтральными или положительно или отрицательно заряженными. Гидрофобная природа пептидов также может варьировать.
В данном изобретении в некоторой степени показано, что используемые в изобретении рекомбинантные белки можно экспрессировать в различных экспрессирующих системах, таких как бактерии, дрожжи, растения и клетки млекопитающих. В предпочтительном аспекте данного изобретения предлагается применение N. тешидй1б18 в качестве экспрессирующей системы, в которой представляющие интерес белки экспрессируются на наружной мембране самой бактерии. Это делает возможным то, что представляющий интерес белок непосредственно будет составлять часть ОМРС. В этом случае оказывается в равной степени обоснованной экспрессия целого белка или вставка некоторых из его полипептидов или пептидов в одну или более связей белка наружной мембраны из №188епа тешпщббй. такого как ТВР, Ора, Орс, и порины Р1, Р2 и Р3.
В особых аспектах изобретения показано, что антигены из описываемых вакцинных композиций могут быть рецепторами факторов роста, имеющими киназную активность, которые сверхэкспрессируются в опухолевых тканях, и, альтернативно, внеклеточными доменами с трансмембранной областью или без нее, и они имеют специфическую связь с ганглиозидами, экспрессированными в мембране опухолевых клеток. Это, кроме прочего, имеет место с НЕР1, НЕР-2 и рецептором РИСЕ.
Упоминаемые в данном изобретении рецепторы факторов роста являются белками, полученными с плазмидами, экспрессирующимися в клетках млекопитающих, по рекомбинантным способам и полимеразно-цепьевой реакции (РСР), за которыми следуют обычные процедуры, описанные в публикациях по молекулярной биологии (8атЬгоок 1., Епзсй Е.Е., МашаИз Т., Мо1еси1аг С1ошид А ЬаЬога1огу Мапиа1, зесоиб ебйюп, Со1б 8рппд НагЬог ЬаЬога1огу Ргезз, 1989). Плазмиды, содержащие эти гены и коди рующие рецепторы или их варианты, устойчиво трансфицированы в клетки млекопитающих, такие как НЕК 293 (АТСС СИЕ 1573), ΝΙΗ-3Τ3 (АТСС СРЬ 1658) и СНО. Рецепторы или их варианты экспрессируются на мембранах трансфицированных линий или секретируются в супернатант, возможен любой вариант.
Рассматриваемые антигены экстрагируют из мембран клеток млекопитающих, экспрессирующих их, или из супернатанта клеточных культур и очищают методом хроматографии. Затем их фильтруют в стерильных условиях и лиофилизируют. Их хранят при 4°С. Оптимальные количества полученных антигенов в вакцинных препаратах колеблются от 1 до 1000 мкг на дозу.
Для данного определенного типа антигенов У88Р, используемые в вакцинных препаратах, содержат ганглиозиды, которые выбраны из ганглиозидов, специфически связанных с рецепторами факторов роста, таких как СМ3 и СМ1, среди прочего, образующих мембранные молекулярные кластеры.
У88Р находятся в упомянутой вакцинной композиции в количестве от 1 до 1000 мкг, в зависимости от количества ганглиозидов на дозу вакцины.
Предпочтительные вакцинные композиции согласно изобретению, содержащие рецепторы факторов роста в качестве антигенов, иммуногенность которых должна быть усилена, можно получать различными способами.
(a) Данное количество растворов У88Р добавляют к лиофилизированным рецепторам факторов роста или их внеклеточным доменам (содержащим или не содержащим трансмембранную область) (1-100 мг белка) так, чтобы массовое соотношение рецептор/ганглиозид составляло от 0,1/1 до 1/1. Смесь перемешивают при 4-20°С в течение периода времени от 5 мин до 24 ч. Полученный препарат сохраняют при температуре 4°С до его введения хозяину.
Непосредственно перед введением хозяину вышеупомянутый препарат добавляют к 1ЕА в соотношении от 40/60 до 60/40, объем/объем, и перемешивают в течение 10-30 мин при комнатной температуре. Для требуемого типа эмульсии объемные соотношения охватывают адекватный диапазон в соответствии с используемым способом вакцинации.
(b) Другой, в равной степени подходящий, способ приготовления заключается в хранении в отдельных контейнерах для лиофилизированных рецепторов факторов роста или их внеклеточных доменов (содержащих или не содержащих трансмембранную область) и для растворов У88Р, сохраняемых при 4°С. Определенное количество раствора У88Р добавляют к рецепторам факторов роста прямо перед введением хозяину; затем вакцинную композицию получают таким же способом, как описанный в п.(а).
(с) Третий способ получения заключается в комбинировании в вакцинной композиции более одного рецептора фактора роста или его внеклеточного домена (содержащего или не содержащего трансмембранную область) с соответствующими растворами У88Р. Количество каждого антигена в вакцинной композиции и соотношения между ними должны находиться в пределах от 1 до 1000 мкг на дозу вакцины. Аналогично, количество каждого ганглиозида в У88Р в вакцинной композиции должно соответствовать области 1-1000 мкг на дозу вакцины.
Для того чтобы приготовить комбинированную вакцину, рецепторы ростовых факторов или их внеклеточные домены (содержащие или не содержащие трансмембранную область), которые будут частью композиции, лиофилизируют в вышеупомянутых количествах, как указано в соответствующем пункте. Впоследствии определенные количества раствора У88Р добавляют так, чтобы соотношение масс рецептор/ганглиозид соответствовало диапазону от 0,1/1 до 1/1. Затем смесь перемешивают при 420°С в течение от 5 мин до 24 ч. Полученный препарат хранят при температуре 4°С до его введения хозяину.
Непосредственно перед введением хозяину вышеупомянутый препарат смешивают взбалтыванием с ΙΡΑ в соотношении между 40/60 и 60/40, объем/объем, в течение от 10 до 30 мин при комнатной температуре. Указанные объемные соотношения охватывают область, подходящую для требуемого типа эмульсии в соответствии с используемым способом вакцинации.
(б) Другим способом приготовления комбинированной вакцины, упомянутой в п.(с), является способ, рассматриваемый в п.(Ь).
С другой стороны, мультиантигенные системы, будучи клетками, взятыми из установленных опухолевых линий или непосредственно полученными от раковых больных, также используют в композициях данного изобретения. Инактивацию клеток проводят посредством гамма-лучевой терапии или обработкой митомицином С. Другая, в равной степени подходящая альтернатива представляет собой применение онколизатов, полученных механическим разрушением или вирусным инфицированием опухолевых клеток.
Иммунопотенцирующие препараты данного изобретения могут быть успешно использованы в ДНК- и РНК-вакцинах. Иммуногенность ретро- и аденовирусных векторов, используемых в качестве вакцинных носителей, также возрастает при комбинировании их с описанными препаратами согласно изобретению. Упомянутые векторы содержат гены, кодирующие рассматриваемые антигенные белки.
Обычно различные иммуногенные препараты получают при комбинировании разных антигенных систем с предварительно получен ными У88Р. Антигены, которые непосредственно вводят по рекомбинантному способу в наружную мембрану N. шешидШбЕ, и антигены, которые вводят в протеолипосомы в процессе диализа, включаются уже в конце процесса получения У88Р. Кроме того, названные модифицированные протеолипосомы также могут быть использованы с другими, не включенными антигенами. Это дает возможность получения мультивалентных вакцин.
Белковые антигенные препараты получают путем смешивания от 10 до 1000 мкг антигенного пептида или белка с определенными количествами У88Р, так, чтобы общее массовое соотношение белок/ганглиозид составляло от 1 до 3. Препараты хранят при температуре 4°С до введения хозяину. Другой, в равной степени подходящий способ получения заключается в отдельном хранении антигенных растворов и растворов У88Р при 4°С и смешивании их прямо перед введением.
Композиции с нуклеиновыми кислотами получают путем непосредственного смешивания У88Р с растворами ДНК или РНК. Смешивание проводят при 4°С, используя 2-100 мкг нуклеиновой кислоты на 0,1 мг ганглиозида в У88Р. Описанный способ оказался осуществимым благодаря отсутствию нуклеаз в препаратах У88Р.
В особо благоприятном способе, описанном в изобретении, живые вирусные векторы (вирус коровьей оспы, оспы птиц и другие вирусы), содержащие последовательности ДНК белков, представляющих интерес, вводят хозяину в/в (внутривенно) в количестве, колеблющемся от 106 до 5х107 бляшкообразующих единиц. У88Р вводят внутримышечным, подкожным, внутрикожным, пероральным или внутриназальным способом за 12 ч до и через 12 ч после введения вирусного вектора.
Препараты с представляющими интерес клетками-мишенями или их лизатами получают сначала посредством осаждения соответствующих культур при центрифугировании и затем повторным суспендированием клеточного осадка в определенном количестве У88Р так, чтобы получить от 103 до 5х106 клеток на 0,1 мг ганглиозида. Названные количества непосредственно перемешивают взбалтыванием при 4-20°С в течение от 5 до 24 ч. Препараты хранят при температуре 4°С до введения хозяину.
Другой, в равной степени подходящий способ приготовления заключается в хранении отдельно клеточных суспензий или их соответствующих лизатов и растворов У88Р при 4°С и смешивании их вместе непосредственно перед введением.
Описанные в данном изобретении препараты, в которых антигены смешиваются с У88Р или включаются в У88Р, можно вводить отдельно или в виде эмульсии с неполным адъю вантом Фрейнда (ΙΕ А). Эмульсии готовят непосредственно перед введением хозяину. Каждый препарат смешивают взбалтыванием с адъювантом в соотношении в диапазоне от 40/60 до 60/40, объем/объем, в течение от 10 до 30 мин при комнатной температуре. Названный диапазон объемного соотношения охватывает соответствующий требованиям диапазон для желаемого типа эмульсии согласно используемому способу вакцинации.
В другом предпочтительном аспекте изобретения описанные препараты, в которых антигены смешивают с У88Р или включают в У88Р, лиофилизируют перед применением или отдельно, или в виде эмульсии с неполным адъювантом Фрейнда (ΙΕΑ).
Вакцинные композиции согласно изобретению можно вводить пациенту парентеральными способами (внутримышечным, внутрикожным, подкожным) или непосредственным нанесением на слизистые оболочки.
Примеры
Пример 1. Получение антигена вакцинной композиции, представляющего собой внеклеточный домен (ЕСИ) мышиного ЕОЕ-Я (ЕСИтЕОЕ-Я).
Ген, кодирующий ЕСЭ-тЕСЕ-Я амплифицировали, используя способ РСЯ, из комплементарной ДНК (кДНК) из печени крысы. РСЯ проводили смешиванием 1 мкг кДНК с 10 пмоль каждого специфического праймера. Позднее добавляли 0,2 мМ каждого 6ЛТР и 1 ед. Тадполимеразы. Осуществляли все из 30 циклов РСЯ: 9°С, 1 мин (исключение для первого цикла, который продолжался 3 мин); 56°С, 1 мин; 72°С, 1 мин и 30 с (исключение для последнего цикла, который продолжался 5 мин). Амплифицированный ген клонировали в экспрессирующий вектор рсЭЛА3 клеток млекопитающих (Атрг, Γ'οπ, Со1Е оп, СМУ-промотор, 8У40 оп, 8У40ра, неомицин, ΙηνίίΓΟβοη). а затем клеточную линию НЕК-293 устойчиво трансфицировали упомянутой плазмидой. Трансфекцию осуществляли по обычным способам и клетки выращивали в селективной среде. ЕСИ-тЕОЕ-Я получали из супернатанта линии НЕК-293/ЕС.'ЭтЕОЕ-Я, которая устойчиво экспрессирует ЕСО-тЕОЕ-Я.
ЕСИ-тЕОЕ-Я, полученный в супернатанте культуры, очищали методами аффинной хроматографии посредством связывания лиганда с матриксом (ΑΓΓίηίΙν СйготаФдгарЬу Ргтар1е8 апб Ме11юб5 3:12, Рйагтааа Ппе Сйеткак); в дальнейшем стерилизовали через фильтр и лиофилизировали.
Пример 2. Получение вакцинной композиции, содержащей ЕСИ-тЕОЕ-Я, У88Р-ОМ3 и неполный адъювант Фрейнда (1ЕА), и объединение всех компонентов непосредственно перед введением.
Протеолипосомы, извлеченные из белкового комплекса наружной мембраны (ОМРС) из Летела тешпдШбЦ содержащего включенный ганглиозид ОМ3, получали, как описано в патенте США № 6149921.
Используемый для этой цели комплекс ОМРС из N. шешпдШбЦ поставлялся институтом Сапок I. Еш1ау (С. Сатра е! а1., ЕР 301992). 10 мг упомянутого комплекса ОМРС диспергировали в 0,5% растворе дезоксихолата натрия и 0,1% растворе додецилсульфата натрия, дополнительно содержащего 10 мг ЛОсОМ3, при осторожном перемешивании в течение ночи при 4°С.
Отделение растворенного ОМРС-ЛОсОМ3 от детергентов осуществляли путем диализа в течение 14 дней, используя мембрану 3,5 кДа.
Диализат центрифугировали на ультрацентрифуге при 100000 д в течение 1 ч, а иммуногенный комплекс, присутствующий в супернатанте, стерилизовали через фильтр.
Степень включения ганглиозида в белок определяли, используя реагент Βίο-Яаб для белков и резорцин для сиаловой кислоты.
Этим способом получали включение 1 мг ЛОсОМ3 на мг ОМРС.
Количество вакцинного носителя, который предварительно получали, составляло 120 мкг по количеству ганглиозидов, включенных в протеолипосомы на дозу вакцины.
Для приготовления иммуногенного материала 1 мг ЕСИ-тЕОЕ-Я лиофилизировали и хранили при 4°С до иммунизации. Непосредственно перед введением мышам к антигену добавляли 2,4 мг У88Р-ОМ3 (на основании количества ганглиозида) в объеме 1 мл и оба компонента смешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем добавляли 1 мл 1ЕА и смешивали взбалтыванием при комнатной температуре в течение 20 мин.
Пример 3. Получение вакцинной композиции, содержащей ЕСИ-тЕОЕ-Я, У88Р-ОМ3 и 1ЕА, путем смешивания части этих компонентов и хранения смеси до введения.
Протеолипосомы, происходящие из белкового комплекса наружной мембраны (ОМРС) из Летела тешпдШбщ, содержащего включенный ганглиозид ОМ3, получали, как описано в патенте США № 6149921. Количество используемого вакцинного носителя составляло 120 мкг на основании количества включенных ганглиозидов на дозу вакцины.
Для приготовления иммуногенного материала 1 мг ЕСИ-тЕОЕ-Я лиофилизировали, а затем добавляли 2,4 мг У88Р-ОМ3 (по количеству включенных ганглиозидов) в объеме 1 мл. Оба компонента смешивали при комнатной температуре в течение 15 мин и смесь хранили при 4°С до иммунизации. Непосредственно перед введением мышам добавляли 1 мл 1ЕА и смешивали, взбалтывая при комнатной температуре в течение 20 мин.
Пример 4. Получение комбинированной вакцины, содержащей ΕΟΌ-ΗΕΚ-Ι, ЕСЭ-НЕЕ-2. У88Р-СМ3 и ΙΕΑ.
Протеолипосомы, полученные из белкового комплекса наружной мембраны (ОМРС) из №155спа тешидйгбщ, содержащего включенный ганглиозид СМ3. получали, как описано в патенте США № 6149921. Количество используемого вакцинного носителя составляло 120 мкг на основании количества ганглиозидов, включенных в протеолипосомы, на дозу вакцины.
Для приготовления иммуногенного материала 1 мг ΕΓΌ-ΗΕΡ-1 и 1 мг ЕСЭ-НЕИ-2 лиофилизировали вместе и хранили при 4°С до иммунизации. Непосредственно перед введением мышам добавляли 2,4 мг У88Р-СМ3 (по количеству ганлиозида) в объеме 1 мл. Все компоненты смешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем добавляли 1 мл ΙΕΑ и смешивали, взбалтывая при комнатной температуре в течение 20 мин.
Пример 5. Индукция специфического иммунного ответа против аутогенного БСЕ-К с помощью вакцинной композиции.
Мышей линии С57ВЬ/6 иммунизировали вакцинной композицией, содержащей ΕΟΟтΕСЕ-Β/V88Β-СМ3 и ΙΕΑ, полученной, как описано в примере 2. Доза иммуногенного материала составляла 50 мкг на мышь по количеству антигена в композиции. Схема иммунизации заключалась в трех дозах, вводимых внутримышечно (в.м.) каждые 15 дней, с взятием крови на 0, 21, 35 и 56 день после первой иммунизации (группа II). В качестве контрольной группы, мышей той же линии иммунизировали 50 мкг ΕС^-тΕСЕ-Β. химически сопряженного с ΚΕΗ и внесенного в полный адъювант Фрейнда (СЕА) и ΙΕΑ, следуя той же схеме иммунизации (группа I). Полученную сыворотку анализировали методом ΕΠδΑ (твердофазный иммуноферментный анализ) для определения ΕΟΟтБСЕ-К.. ΕΕΙ8Α осуществляли, покрывая плашки 10 мкг/мл ΕС^-тΕСЕ-Β. После блокирова ния плашки РВ8/5% телячьей сывороткой сыворотки от контрольных и иммунизированных животных инкубировали в сериях различных разведений. Затем добавляли анти-ЦС-антитела мыши (специфичные в отношении Ес), конъюгированные с щелочной фосфатазой (81§та). Все вышеупомянутые инкубированные пробы оставляли на 1 ч при 37°С и после каждой из упомянутых стадий проводили три отмывки РВ8/0,05% твином 20. Реакцию начинали добавлением 1 мг/мл субстрата (паранитрофенилфосфата) в диэтаноламин-буфере, рН 9,8. Оптическую плотность при 405 нм измеряли с помощью ΕΕΙδΑ-ридера через 30 мин.
У 100% мышей, иммунизированных вакцинной композицией согласно изобретению, индуцировался ответ антител, специфичных к ΕС^-тΕСЕ-Β: ответ становился более выраженным в процессе иммунизации, и достигались титры антител вплоть до 1/160000, тогда как преиммунные сыворотки не распознавали ΕС^-тΕСЕ-Β. Изотипом ответа антител, в основном, был тип ЦС.
Распределение подклассов антител индуцированного ответа определяли методом ΕΕΙ8Α. 20,21% антител составляли Ι^2α, 36,03% - !цС1 и 38,93% составляли [цСДЬ, определяя сдвиг относительно характера ответа Т111 по сравнению с контрольной группой (фиг. 1).
Хотя исследуемую вакцинную композицию сравнивали с композицией, в которой ΕΟΟтΕСЕ-Κ. химически связан с ΚΕΗ и в которой СЕΑ использовали как адъювант, индуцированные титры антител для препаратов оказались выше, а тенденция распределения подклассов оказалась тенденцией структуры ТЬ1, являясь благоприятной для эффективности названной вакцины.
Мыши, иммунизированные ΕС^-тΕСЕΒ/V88Р-СМ3/IЕΑ, не проявляли клинических симптомов токсичности, а биохимические тесты, выполненные на сыворотках названных животных, не выявили отличий от сывороток неиммунизированных животных (табл. 1).
Таблица 1
| Группы | Животные-респондеры | Титры-ЦС | ||||||
| 21 день | 1/100 | 1/500 | 1/1000 | 1/2500 | 1/5000 | 1/10000 | 1/20000 | |
| Ι | 8/10 | 1 | 3 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| ΙΙ | 10/10 | 1 | 1 | 2 | 5 | 1 | ||
| 35 день | 1/100 | 1/1000 | 1/2500 | 1/5000 | 1/10000 | 1/20000 | 1/40000 | |
| Ι | 10/10 | 2 | 2 | 1 | 5 | |||
| ΙΙ | 10/10 | 1 | 2 | 1 | 6 | |||
| 56 день | 1/1000 | 1/5000 | 1/10000 | 1/20000 | 1/40000 | 1/80000 | 1/160000 | |
| Ι | 10/10 | 1 | 1 | 1 | 2 | 1 | 4 | |
| ΙΙ | 10/10 | 1 | 1 | 2 | 4 | 2 |
Группа Ι - Животные, иммунизированные ΕС^-тΕСЕ-Κ/Κ^Η-СЕΑ и ΙΕΑ
Группа ΙΙ - Животные, иммунизированные ΕС^-тΕСЕ-Κ/V88Р-СМ3/монтанидом-I8А 51
Пример 6. Распознавание сыворотками мышей, иммунизированных ЕСБ-НЕЕ-1/У88РСМ3/1ЕА, клеток, экспрессирующих ЕСЕ-И человека.
Линию клеток А431 (10000 клеток/лунку), экспрессирующую рецептор эпидермального фактора роста, инкубировали с преиммунной сывороткой мышей С57ВЬ/6, разведенной до 1/5 (А); моноклональными антителами ίοτ сдГ-г3 против ЕСЕ-И в качестве позитивного контроля в концентрации 10 мкг/мл (В); и сыворотками иммунизированных мышей С57ВЬ/6, разведенными до 1/5 (С), в течение 30 мин при комнатной температуре.
Промывками фосфатным буфером/0,5% раствором телячьей сыворотки удаляли избыток антител, не связанных с рецептором или связанных с ним неспецифическим образом. Иммунодетекцию клеток осуществляли инкубацией клеток с вторичными антимышиными антителами, конъюгированными с флуоресцеинизотиоцианатом, разведенными до 1/50, в течение 30 мин при комнатной температуре. Интенсивность флуоресценции измеряли в проточном цитометре (ЕС). Сыворотки мышей, иммунизированных вакцинным препаратом, распознавали клетки, экспрессирующие ЕСЕ-И, при интенсивности, сравнимой с интенсивностью экспериментального позитивного контроля, в отличие от преиммунных сывороток от тех же самых животных (фиг. 2).
Пример 7. Цитолитическая активность сывороток мышей, иммунизированных ЕСБ-НЕЕ1/У88Р-СМ3/1ЕА.
Клеточные линии А431 (3х106 клеток) инкубировали с радиоактивным хроматом натрия 51 Сг в течение 1 ч и удаляли избыток радиоактивной соли трехкратным промыванием культуральной средой. Клетки, меченные Сг51, инкубировали с
ί) 50 мкг/мл моноклональных антител ίοτΐ3 (МАЬ против СБ3. как негативный контроль);
ίί) 50 мкг/мл моноклональных антител ίοτедГ-г3 (МаЬ против ЕСЕ-И, как позитивный контроль);
ϊϊΐ) преиммунной сывороткой мышей С57ЬВ/6, разведенной до 1/20;
ίν) сыворотками от мышей С57ЬВ/6, иммунизированных ЕСБ-НЕЕ-1/У88Р-СМ3/1ЕА, разведенными до 1/20.
После 1 ч инкубации при 37°С добавляли 40 мкл кроличьего комплемента, продолжая инкубацию при 37°С. Позднее пробирки центрифугировали и по 100 мкл супернатанта использовали для измерения в гамма-счетчике высвобождения 51 Сг как оценку клеточного лизиса, опосредованного антителами и комплементом. Тотальное включение измеряли при тотальном лизисе под действием детергента.
Сыворотки мышей, иммунизированных названной вакцинной композицией, вызывали 80% лизис клеток А431, экспрессирующих ЕСЕ-И, с другой стороны, преиммунные сыворотки указанных мышей вызывали только 35% лизис (фиг. 3).
Пример 8. Нейтрализующая способность сывороток мышей, иммунизированных ЕСБНЕК.-1/У88Р-СМ3/1ЕА.
Сыворотки мышей, иммунизированных вакцинной композицией данного изобретения, анализировали, чтобы определить их способность ингибировать связывание ЕСЕ с его рецептором на мембране клеток А431. Для этого клетки А431 выращивали в культуральных планшетах до конфлуэнтности. Как только достигалась конфлуэнтность, добавляли пул иммунных сывороток в различных разведениях (1/5, 1/10, 1/20, 1/40), а затем добавляли ЕСЕ-1251 в соотношении 100000 число импульсов/лунку. Емкость каждой лунки заполняли вплоть до 500 мкл РВ8/1% В8А. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч, после инкубации реакцию гасили добавлением 2 мл холодной смеси РВ8/1% В8А. После этого жидкость из каждой лунки удаляли, а лунки осторожно промывали РВ8/1% В8А и добавляли 300 мкл 2М ΝαΟΗ в каждую лунку. После 30 мин экспозиции при комнатной температуре отбирали по 200 мкл из каждой лунки и регистрировали счет в гамма-счетчике.
Показано, что пул иммунных сывороток ингибирует связывание ЕСЕ-1251 с его рецептором в мембране клеток А431. Степень ингибирования зависела от разведения сывороток (фиг. 4).
Пример 9. Жизненный цикл мышей, иммунизированных ЕСБ -НЕИ- 1/У88Р-СМ3 /1ЕА.
Мышей линии С57/ВЬ6, иммунизированных ЕС.’Б-тЕСЕ-Е/У88Р-СМ3/1ЕА (тремя дозами 50 мкг, каждые 15 дней внутримышечно), вакцинировали 100000 клетками Льюиса (Ее\\%) и за мышами наблюдали, чтобы определить их жизненный цикл. Клетки Льюиса получали из аденокарциномы легких мыши, экспрессирующей ЕСЕ-И. Жизненный цикл исследуемых мышей сравнивали с циклом группы мышей, иммунизированных ЕСБ-тЕСЕ-Р/СЕА (тремя дозами по 50 мкг каждые 15 дней подкожно). У мышей, иммунизированных вакцинной композицией с еСп-шЕСЕ-Р/У88Р-СМ3/1ЕА, установлен жизненный цикл, значительно более продолжительный (р<0,05), чем у контрольной группы (фиг. 5).
Пример 10. Получение вакцинной композиции, содержащей химерные моноклональные антитела Р3 (Р3 сМАЬ), У88Р(СМ3) и 1ЕА.
Протеолипосомы, происходящие из белкового комплекса наружной мембраны №188епа шешпдй1б18, содержащие ганглиозид СМ3 [У88Р(СМ3)], получали, как описано в патенте Кубы 130/97 и патенте США № 6149921. У88Р(СМ3) хранили в концентрации 4,8 мг/мл в растворе трис/НС1, рН 8,9, при температуре 4°С до применения.
Для приготовления иммуногенного материала раствор, содержащий 2 мг/мл химерных моноклональных антител Р3 (Р3 сМЛЬ) (патент США № 5817513), смешивали в забуференном фосфатом физиологическом растворе с полученными У88Р(СМ3) в соотношении 1/1 (объем/объем). Процесс смешивания заключался в перемешивании на магнитной мешалке при комнатной температуре в течение 15 мин. Потом добавляли ΙΡΑ в соотношении 1/1 (объем/объем). Пул перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин до тех пор, пока не получали эмульсию.
Другой, в равной степени подходящий способ заключался в смешивании раствора, содержащего 2 мг/мл сМАЬ Р3 в забуференном фосфатом физиологическом растворе с полученными У88Р(СМ3) в соотношении 1/1 (объем/объем). Процесс смешивания заключался в перемешивании на магнитной мешалке при комнатной температуре в течение 15 мин, а полученный раствор стерилизовали путем фильтрации через ацетатцеллюлозную мембрану 0,2 мкм. После измерения, заполнения в контейнеры и герметического закупоривания контейнеров препарат хранили при 4°С вплоть до 1 года. Непосредственно перед введением хозяину добавляли препарат ΙΡΑ в соотношении 1/1 (объем/объем) и эмульсификацию получали перемешиванием при комнатной температуре в течение 15 мин.
Пример 11. Получение вакцинной композиции, содержащей пептид из вариабельной области тяжелой цепи сМЛЬ Р3 (СЭР3/УН-Р3) и У88Р(СМ3).
Протеолипосомы, происходящие из белкового комплекса наружной мембраны №188епа тешидй1й18, содержащие ганглиозид СМ3 [У88Р(СМ3)], получали, как описано в патенте Кубы 130/97 и патенте США № 6149921. У88Р(СМ3) хранили в концентрации 4,8 мг/мл в растворе трис/НС1, рН 8,9, при температуре 4°С до применения.
Непосредственно перед введением хозяину иммуногенный материал получали сначала посредством растворения лиофилизированного пептида СОЯ3/УН-Р3 в забуференном фосфатом физиологическом растворе до концентрации 4 мг/мл. Затем раствор смешивали с препаратом У88Р(СМ3) в соотношении 1/1 (объем/объем). Процесс смешивания заключался в перемешивании на магнитной мешалке при комнатной температуре в течение 15 мин.
Другой, в равной степени подходящий способ заключался сначала в растворении лиофилизированного пептида СЭР3/УН-Р3 в забуференном фосфатом физиологическом растворе до концентрации 4 мг/мл. Затем раствор смешивали с препаратом У88Р(СМ3) в соотношении 1/1 (объем/объем). Процесс смешивания заключался в перемешивании на магнитной мешалке при комнатной температуре в течение 15 мин, а полученный раствор стерилизовали путем филь трации через ацетатцеллюлозную мембрану 0,2 мкм. После измерения, заполнения в контейнеры и герметического закупоривания контейнеров препарат хранили при 4°С вплоть до 1 года.
Пример 12. Получение вакцинной композиции, содержащей онколизат меланомы В16, У88Р(СМ3) и ΙΡΑ.
Протеолипосомы, происходящие из белкового комплекса наружной мембраны №188епа тешидй1й18, содержащие ганглиозид СМ3 [У88Р(СМ3)], получали, как описано в патенте Кубы 130/97 и патенте США № 6149921. У88Р(СМ3) хранили в концентрации 2,4 мг/мл в растворе трис/НС1, рН 8,9, при температуре 4°С до применения.
Для получения иммуногенного материала суспензию линии клеток меланомы В16 мыши (50х106 клеток/мл) подвергали 5 циклам замораживания/оттаивания, чередованию инкубации в банях с жидким азотом и банях с дистиллированной Н2О при 37°С. Полученный клеточный лизат центрифугировали при 500 х д в течение 10 мин. Полученный осадок повторно суспендировали в У88Р(СМ3) до концентрации клеточного осадка, соответствующей 10х106 клеток на 2,4 мг СМ3 в У88Р. Смесь перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем препарат добавляли к ΙΡΑ в соотношении 1/1 (объем/объем). Смесь перемешивали при комнатной температуре приблизительно в течение 15 мин до тех пор, пока не была получена эмульсия.
Пример 13. Получение вакцинной композиции, содержащей клетки меланомы В16, У88Р(СМ3) и ΙΡΑ.
Протеолипосомы, происходящие из белкового комплекса наружной мембраны №188епа тешидй1й18, содержащие ганглиозид СМ3 [У88Р(СМ3)], получали, как описано в патенте Кубы 130/97 и патенте США № 6149921. У88Р(СМ3) хранили в концентрации 2,4 мг/мл в растворе трис/НС1, рН 8,9, при температуре 4°С до применения.
Для получения иммуногенного материала суспензию линии клеток меланомы В16 мыши (50х106 клеток/мл) центрифугировали при 300 х д в течение 10 мин. Полученный осадок повторно суспендировали в У88Р(СМ3) до концентрации 10х106 клеток на 2,4 мг СМ3 в У88Р. Смесь перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем препарат добавляли к ΙΡΑ в соотношении 1/1 (объем/объем). Смесь перемешивали при комнатной температуре приблизительно в течение 15 мин до получения эмульсии.
Пример 14. Получение вакцинной композиции, содержащей плазмиду с геном, кодирующим внеклеточный домен рецептора ЕСР человека (ЕСП-НЕК-1), У88Р(СМ3) и ΙΡΑ.
Протеолипосомы, происходящие из белкового комплекса наружной мембраны №188епа тешидй1й18, содержащие ганглиозид СМ3 [У88Р(СМ3)], получали, как описано в патенте Кубы 130/97 и патенте США № 6149921. У88Р(СМ3) хранили в концентрации 4,8 мг/мл в растворе трис/НС1, рН 8,9, при температуре 4°С до применения.
Вектором для инсерции представляющей интерес ДНК была экспрессирующая плазмида ροΌΝΑ3 млекопитающего, содержащая ориджин репликации участок 8У40, а также промотор гена раннего ответа человека и промотор цитомегаловируса (1ЕСР). В названную плазмиду вставляли ген, кодирующий внеклеточный домен рецептора ЕСЕ (ЕСП-НЕВ-1) человека. Полученную плазмиду (ЕС^-НЕΚ.-1/ρс^NΑ3) использовали для получения иммуногенного материала.
Для получения иммуногенного материала раствор плазмиды (ЕС^-НЕΚ.-1/ρс^NΑ3) доводили до концентрации 2 мг/мл в забуференном фосфатом физиологическом растворе. Затем раствор смешивали с препаратом У88Р(СМ3) в соотношении 1/1 (объем/объем). Смешивание заключалось в перемешивании при комнатной температуре в течение 5 мин. Впоследствии препарат добавляли к ΙΕΑ в соотношении 1/1 (объем/объем). Смесь перемешивали при комнатной температуре приблизительно в течение 15 мин до тех пор, пока не была получена эмульсия.
Пример 15. Индукция созревания дендритных клеток препаратом У88Р(СМ3) ίη νίίτο.
Дендритные клетки человека получали из моноцитов, выделенных из периферической крови, и выращивали в течение 7 дней в присутствии рекомбинантного СМ-С8Е человека (йг) (50 нг/мл) и йт-1Ь4 (1000 ед./мл). На 7-й день полученные дендритные клетки или подвергали, или не подвергали действию У88Р(СМ3) (1 мкг/мл) в течение 18 ч. Как контроль, дендритные клетки инкубировали с 0,1 мкг/мл ЬР8, очищенного из штамма №188епа тешпдФйЦ 44/76, или с МРЬА (81дта). Фенотип каждого препарата исследовали методом проточной цитометрии.
Как показано в табл. 2, обработка посредством У88Р(СМ3) вызывала повышение экспрессии СИ 11с и значительное изменение маркера созревания ИС СИ83. Наблюдали увеличение уровней экспрессии молекулы НЬА-ΌΚ.. У88Р-(СМ3) индуцировал увеличение количества клеток, экспрессирующих молекулу СИ 86. У88Р и ЬР8 продемонстрировали одинаковую способность индуцировать созревание обработанных ИС. С другой стороны, обеззараженный вариант ЬР8, МРЬА номинально ниже.
Таблица 2
Индукция созревания дендритных клеток различными препаратами ίη νίίτο
| СЭ11с | СЭ86 | СЭ83 | НЬА-ЭЙ | С1140 | |
| Культуральн. среда | 37,5 | 12,5 | 5,5 | 401,5 | 9 |
| ЬР8 | 57,1 | 35,4 | 14,6 | 672,7 | 15,8 |
| У88Р | 60 | 29,6 | 13,3 | 656,4 | 14,1 |
| МРЬА | 40,1 | 15,4 | 5,6 | 415,5 | 9,7 |
Средние величины интенсивности флуоресценции определяли посредством ЕАС8.
Пример 16. Индукция специфического гуморального иммунного ответа на химерные сМАЬ Р3 (Р3с Май), ассоциированная с введением вакцинной композиции.
Мышей штамма С57ВЬ/6 иммунизировали вакцинной композицией, упомянутой в примере
10. Делали прививку 50 мкг химерных моноклональных антител посредством внутримышечной инъекции, применяя две дозы (каждую каждые 14 дней). Образцы сывороток отбирали на 21-й день после первой иммунизации. В качестве контрольной группы, мышей того же самого штамма иммунизировали аналогично Р3 сМаЬ, растворенными в 1ЕА или гидроокиси алюминия. Полученные сыворотки анализировали методом ЕЬ18А для того, чтобы определить присутствие анти-Р3-сМаЬ-антител.
100% мышей, иммунизированных вакцинной композицией, описанной в данном изобретении, продуцировали более высокие титры специфических 1дС-антител против Р3 сМаЬ относительно контрольных групп (табл. 3).
Таблица 3
Ответ антител против Р3с Май, индуцированный у мышей С57ВЬ/6, иммунизированных различными препаратами
| Препарат | Животныереспондеры | Специфические титры 1дС (среднее значение) |
| Р3 сМаЬ/У88Р/1ЕА | 5/5 | 8000 |
| Р3 сМАЬ/1ЕА | 4/5 | 4000 |
| Р3 сМаЬ/алюминий | 2/5 | 1000 |
Пример 17. Индукция пролиферативного клеточного ответа, специфичного в отношении пептида СОР3/УН-Р3 и ассоциированного с введением вакцинной композиции.
Мышей штамма МС57ВЬ/6 иммунизировали вакцинной композицией, упоминаемой в примере 11. Прививку делали 100 мкг пептида посредством внутримышечной инъекции в четырех дозах (каждую каждые 14 дней). В качестве контрольной группы, мышей той же самой линии аналогичным образом иммунизировали пептидом СОК.3/УН-Р3, растворенным в 1ЕА или в квасцах. Паховый лимфатический узел удаляли у животных на 7-й день после введения последней дозы и выделяли лимфоциты посредством органной перфузии. Лимфоциты выращивали в течение 96 ч с пептидом СОР3/УН-Р3 (50 мкг/мл). Во время последних 18 ч культивирования клетки обрабатывали 1 мкКи тритированного тимидина (Атегайат, Ипйей Кшдйот), а затем клетки собирали и определяли β-эмиссию в сцинтилляционном счетчике (ЬКВ \Уа11ас. Е1п1апй). Определяли уровни клеточной пролиферации как индекс стимуляции (8Ι). Полученные в данном исследовании результаты представлены в табл. 4.
Таблица 4 Индукция пролиферативного клеточного ответа, специфичного в отношении пептида СОЯ3/УН-Р3, у мышей С57ВЬ/6, иммунизированных различными препаратами
| СЭЯ3/УН-Р3/ У88Р(СМ3) | СЭЯ3/УН-Р3/ ЛЕЕ | СЭЯ3/УН-Р3/ оксид алюминия | |
| 50 мкг/мл | 4+/-0,2 | 1,8+/-0,1 | 1,6+/-0,2 |
Величина индекса стимуляции. Очевидно, только пептид, содержащийся в препарате с У88Р(СМ3), способен индуцировать специфическую антигенную пролиферацию.
Пример 18. Индукция цитотоксического клеточного ответа, специфичного в отношении ЕСО-тЕСЕ-Я и ассоциированного с введением вакцинной композиции, содержащей рекомбинантные АРУ, ЕСИ-тЕСЕ-Я/АРУ, У88Р(ОМ3) и 1ЕА.
Протеолипосомы, происходящие из белкового комплекса наружной мембраны Дебела тешидйИЦ содержащие ганглиозид ОМЗ [У88Р(ОМ3)], получали, как описано в патенте Кубы 130/97 и патенте США № 6149921. У88Р(СМ3) хранили в концентрации 2,4 мг/мл в растворе трис/НС1, рН 8,9, при температуре 4°С до применения.
Вирусным вектором для инсерции представляющей интерес ДНК был вирус оспы птиц (АРУ). Ген, кодирующий внеклеточный домен рецептора ЕСЕ мыши (ЕСИ-тЕСЕ-Я), вставляли в АРУ посредством гомологичной рекомбинации. Раствор рекомбинантного вектора ЕСЭтЕСЕ-Я/АРУ доводили до концентрации 108 бляшкообразующих единиц/мл.
Одновременно получали эмульсию У88Р(СМ3), добавляя раствор носителя к 1ЕА в соотношении 1/1 (объем/объем). Смесь перемешивали при комнатной температуре приблизительно в течение 15 мин.
Впоследствии мышей Ва1Ь/е иммунизировали 1Р (внутрибрюшинно) 200 мкл раствора ЕСИ-тЕСЕ-Я/АРУ и впоследствии 100 мкл внутримышечно У88Р(СМ3)/1ЕА. Контрольная группа состояла из мышей, которым вводили ЕСИ-тЕСЕ-Я/АРУ и забуференный фосфатом физиологический раствор (8РВ8). Две дозы вводили каждые 2 недели, и через 21 день после начала экспериментальных мышей умерщвляли, с тем чтобы получить соответствующие клетки селезенки. СЭ8-Т-клетки выделяли из спленоцитов, используя способ «магнитных зерен». Названные Т-клетки стимулировали в течение 5 дней дендритными клетками, полученными из костного мозга (ЬтЭС), предварительно меченные ЕСЭ-тЕСЕ-Я-иммунодоминантным пептидом ’ИУСТИЯТСЕ' в соотношении 10:1 (Т:ЬтЭС) в присутствии 1Ь-2 (50 ед./мл). В конце стимуляции проводили цитотоксический эксперимент, в ходе которого оценивали высвобождение Сг51 при сопоставлении различных количеств названных клеток с линией Р815, меченной пептидом 'ИУСТИЯТСЬ' (табл. 5).
Таблица 5
Цитотоксический клеточный ответ, специфичный в отношении ЕСИ-тЕСЕ-Я
| Иммунизированы ЕСЭ- тЕОЕЯ/АРУ+У88Р(ОМ3) | Иммунизированы ЕСЭтЕСЕЯ/АРУ+8ТЕ8 | |||
| Р815+пептид | Р815 | Р815+пептид | Р815 | |
| Высвобождение Сг51, % | ||||
| 100:1 | 78 | 8 | 43 | 9 |
| 50:1 | 51 | 6 | 25 | 7 |
| 25:1 | 29 | 5 | 14 | 5 |
Введение животным У88Р(СМ3) вызывало 2-кратное усиление индуцирующей способности цитотоксических Т-клеток по сравнению с АРУ.
Пример 19. Иммуновосстановительные свойства вакцинного носителя У88Р.
Вакцинный носитель У88Р, описанный в данном изобретении, вводили внутримышечной инъекцией пациентам с метастатической меланомой в фазе I клинического испытания. Пациенты получали девять доз (200 мкг ИСеСМ3 в У88Р) в течение 6 месяцев. Первые пять доз вводили в течение первых 2 месяцев, а четыре оставшиеся дозы вводили ежемесячно.
У пациентов брали кровь в 0 день (до введения первой дозы), а также на 56-й день (пятая доза). Одновременно кровь брали у 8 здоровых волонтеров. Соответствующие периферические мононуклеарные клетки (РМС) получали из названных образцов методом градиента фиколла, а методом проточной цитометрии определяли % клеток СЭ3+. СЭ4+ и СЭ8+. Как показано в табл. 6, относительная экспрессия маркеров СЭ3. СЭ4 и СЭ8 Т-клеток из РМС 3 пациентов оказалась ниже, чем средняя экспрессия у здоровых доноров в 0 день.
Очевидно, что уровни относительной экспрессии маркеров СЭ3. СИ4 и СИ8 Т-клеток в РМС тех же самых больных возвращались к нормальным уровням на 56-й день, то есть после получения четырех инъекций У88Р(ИСеСМ3).
Таблица 6 Сравнительная экспрессия Т-клеточных маркеров на мононуклеарных клетках периферической крови (РМС) у 3 пациентов с меланомой и у здоровых доноров
| % общего количества РМС День 0 | % общего количества РМС День 56 | |||||
| С03+ | СО4 + | СБ8 + | С03+ | СО4 + | СО8 + | |
| Здоровые доноры | 70 | 45 | 25 | |||
| ЕМ | 30 | 25 | 70 | 48 | 22 | |
| ЗД | 26 | 40 | 70 | 40 | 1.8 | |
| νο | 15 | 28 | 4 | 70 | 56 | 20 |
Краткое описание фигур
Фиг. 1. Распределение подклассов индуцированных антител в результате иммунизации ЕСИ-тЕСЕ-Я/У88Р-СМ3/1ЕА.
Сыворотки мышей С57ВЯ/6, иммунизированных ЕСИ-тЕСЕ-Я/КЕН/СЕА (I) или ЕСЭшЕСЕ-Я/У88Р-СМ3/1ЕА (II), анализировали ме тодом ЕЫ8А, чтобы определить распределение подклассов 1дС, индуцированных иммунизацией.
Фиг. 2. Распознавание сывороток мышей, иммунизированных ЕСО-НЕК-1/У88Р-СМ3/1ЕА, клетками, экспрессирующими ЕСЕ-К.
Линию клеток А431 инкубировали вместе с преиммунной сывороткой мышей С57ВБ/6 (А); моноклональными антителами юг едГ-г3 в качестве позитивного контроля (В); сывороткой иммунизированных мышей С57ВБ/6. Для иммунодетекции использовали вторичные антимышиные антитела, конъюгированные с флуорофором. Интенсивность флуоресценции определяли проточной цитометрией.
Фиг. 3. Цитолитическая активность сывороток мышей, иммунизированных ЕСЭ-НЕК-1/ У88Р-СМ3/1ЕА.
Клетки А431, меченные Сг51, инкубировали с комплементом и Ι) моноклональными антителами 1ог-(3 (против СЭ3. в качестве негативного контроля); II) моноклональными антителами югЕСЕК-г3 (против ЕСЕ-К, в качестве позитивного контроля); ΙΙΙ) преиммунной сывороткой мышей С57ВБ/6; 1У) сывороткой мышей С57ВБ/6, иммунизированных ЕСО-НЕК-1/У88Р-СМ3/1ЕА; и У) одинаковым количеством тех же самых клеток, которые лизировали с детергентами, чтобы определить величину общего включения Сг51. Результаты представляли в % специфического лизиса.
Фиг. 4. Нейтрализующая способность сывороток, полученных у мышей, иммунизированных ЕСЭ-НЕК-1/У88Р-СМ3/1ЕА.
Клетки А431, полученные из пула сывороток мышей, иммунизированных ЕСЭ-НЕК-1/У88РСМ3/1ЕА, инкубировали в разведениях 1/5, 1/10, 1/20 и 1/40 или полученные из пула преиммунных сывороток инкубировали в тех же разведениях. ЕСЕ-1251 (100000 число импульсов в минуту) добавляли в каждую лунку и определяли общее связывание инкубацией клеток с ЕСЕ125Ι. Число импульсов в минуту определяли в гамма-счетчике.
Фиг. 5. Жизненный цикл мышей, иммунизированных ЕСО-тЕСЕ-К/У88Р-СМ3/1ЕА, с трансплантированной опухолью Льюиса.
Мышам С57ВБ/6, иммунизированным, как описано в примере 9, трансплантировали 100000 клеток опухоли Льюиса и наблюдали, чтобы определить жизненный цикл. В контрольную группу включали мышей той же линии, иммунизированных ЕСЭ-тЕСЕ-К/СЕА, которым трансплантировали клетки таким же образом.
Claims (23)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Фармацевтическая композиция, усиливающая иммуногенность антигенов со слабой иммуногенностью, содержащая (A) один или более антигенов со слабой иммуногенностью;(B) один вакцинный носитель, заключающий в себе протеолипосомы, полученные из белкового комплекса наружной мембраны штамма грамотрицательных бактерий Щерена тешидШбЕ), который содержит включенные в него ганглиозиды; и (С) возможно, один или более адъювантов.
- 2. Композиция по п.1, в которой антигены со слабой иммуногенностью могут быть выбраны из группы, состоящей из пептидов, полипептидов, белков или последовательностей соответствующих им нуклеиновых кислот или клеток-мишеней вакцин, представляющих интерес, или их лизатов, или их комбинаций.
- 3. Композиция по п.2, в которой антигены со слабой иммуногенностью являются рецепторами факторов роста или их внеклеточными доменами.
- 4. Композиция по п.3, в которой внеклеточные домены рецепторов факторов роста могут содержать или не содержать трансмембранную область.
- 5. Композиция по пп.3 и 4, в которой рецепторами факторов роста являются НЕК-1, НЕК-2, РЭСЕ-К или любые разновидности, содержащие внеклеточный домен с трансмембранной областью или без нее.
- 6. Композиция по п.1, в которой протеолипосомы вакцинного носителя получены из белкового комплекса наружной мембраны либо из штамма дикого типа, либо генетически модифицированного штамма №55епа тешидШбЕ.
- 7. Композиция по п.1, в которой протеолипосомы вакцинного носителя с включенными в них ганглиозидами получены путем гидрофобного введения указанных ганглиозидов в белковый комплекс наружной мембраны №188епа тешидШбЕ.
- 8. Композиция по п.7, в которой ганглиозиды, которые гидрофобно включены в белковый комплекс наружной мембраны №188епа тешидШбЕ, представляют собой СМ1, СМ3 или их Ν-гликолилированные варианты.
- 9. Композиция по п.1, в которой адъювант является масляным адъювантом либо природным или рекомбинантным полипептидом.
- 10. Композиция по п.9, в которой масляный адъювант представляет собой неполный адъювант Фрейнда.
- 11. Композиция по п.10, в которой неполный адъювант Фрейнда представляет собой монтанид Ι8Α 51.
- 12. Композиция по п.9, в которой полипептидный адъювант представляет собой цитозин или химозин.
- 13. Композиция по п.12, в которой цитозин является гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором.
- 14. Композиция по пп.1-13 для предупреждения и лечения рака, в частности рака предстательной железы, прямой кишки, легкого, молочной железы, яичника, опухолей головы и шеи, рака вульвы, мочевого пузыря и мозга, глиомы, а также нетрансмиссивных хронических заболеваний.2Ί
- 15. Композиция по пп.1-13 для предупреждения и лечения вирусных и бактериальных инфекционных заболеваний.
- 16. Композиция по п.14 для лечения синдрома приобретенного иммунодефицита.
- 17. Композиция по пп.1-13 для лечения аутоиммунных заболеваний.
- 18. Применение композиции по пп.1-17 для предупреждения и лечения рака, в частности рака предстательной железы, прямой кишки, легкого, молочной железы, яичника, опухолей головы и шеи, рака вульвы, мочевого пузыря и мозга, глиомы, а также нетрансмиссивных хронических заболеваний.
- 19. Применение композиции по пп.1-17 для предупреждения и лечения вирусных и бактериальных инфекционных заболеваний.
- 20. Применение композиции по пп.1-17 для лечения аутоиммунных заболеваний.
- 21. Применение протеолипосом очень малого размера (У88Р), полученных из ассоциации белкового комплекса наружной мембраны (ОМРС) штамма грамотрицательных бактерий №18§епа тешпдШйЕ с ганглиозидами, включенными в нее, для производства лекарственного средства для применения при лечении для восстановления иммунитета у иммуносупрессивных пациентов.
- 22. Применение по п.21, при котором протеолипосомы с включенными в них ганглиозидами получают путем гидрофобного включения указанных ганглиозидов в белковый комплекс наружной мембраны №1§§епа тешпдШйЕ.
- 23. Применение по п.22, при котором ганглиозиды, которые гидрофобно включены в белковый комплекс наружной мембраны №1§§епа тепшдШШз, представляют собой СМ1, СМ3 или их Ν-гликолилированные варианты.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CU20000285A CU23000A1 (es) | 2000-12-06 | 2000-12-06 | Composiciones vacunales para la inmunoterapia activa específica del cáncer |
| CU20010167A CU23009A1 (es) | 2001-07-12 | 2001-07-12 | Preparaciones para potenciar la inmunogenicidad depreparaciones para potenciar la inmunogenicidad de antígenos poco inmunogénicos antígenos poco inmunogénicos |
| PCT/CU2001/000010 WO2002045746A2 (es) | 2000-12-06 | 2001-12-06 | Composiciones farmaceuticas para potenciar la inmunogenicidad de antigenos poco inmunogenicos |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200300640A1 EA200300640A1 (ru) | 2003-12-25 |
| EA005138B1 true EA005138B1 (ru) | 2004-12-30 |
Family
ID=38812545
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200300640A EA005138B1 (ru) | 2000-12-06 | 2001-12-06 | Фармацевтические композиции, усиливающие иммуногенность антигенов со слабой иммуногенностью |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7776342B2 (ru) |
| EP (1) | EP1356822B1 (ru) |
| JP (1) | JP4210519B2 (ru) |
| KR (1) | KR100850473B1 (ru) |
| CN (1) | CN1291755C (ru) |
| AR (1) | AR031638A1 (ru) |
| AT (1) | ATE485833T1 (ru) |
| AU (2) | AU2151902A (ru) |
| BR (1) | BRPI0116013B8 (ru) |
| CA (1) | CA2431188C (ru) |
| DE (1) | DE60143363D1 (ru) |
| DK (1) | DK1356822T3 (ru) |
| EA (1) | EA005138B1 (ru) |
| MX (1) | MXPA03005032A (ru) |
| NZ (1) | NZ526282A (ru) |
| PE (1) | PE20020572A1 (ru) |
| UY (1) | UY27059A1 (ru) |
| WO (1) | WO2002045746A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA200304411B (ru) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1358910A1 (de) * | 2002-05-02 | 2003-11-05 | B.R.A.H.M.S Aktiengesellschaft | Verfahren und Mittel zur Prävention, Hemmung und Therapie von Krebserkrankungen |
| EP1367395A1 (de) * | 2002-05-02 | 2003-12-03 | B.R.A.H.M.S Aktiengesellschaft | Diagnose von Neoplasmen mit Hilfe von anti-Gangliosid-Antikörpern |
| CU23257A1 (es) * | 2003-02-27 | 2008-01-24 | Centro Inmunologia Molecular | COMPOSICIONES VACUNALES A BASE DE GANGLIOSIDOS PARA LA ADMINISTRACION SUBCUTáNEA |
| AR045815A1 (es) * | 2003-10-09 | 2005-11-16 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Composiciones farmaceuticas que contienen antigenos del virus de papiloma humano |
| WO2005111079A2 (en) * | 2004-05-14 | 2005-11-24 | The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Hiv vaccine immunogens and immunization strategies to elicit broadly-neutralizing anti-hiv-1 antibodies against the membrane proximal domain of hiv gp41 |
| US20110189231A1 (en) * | 2008-06-17 | 2011-08-04 | Denis Leclerc | Compositions Comprising Salmonella Porins and Uses Thereof as Adjuvants and Vaccines |
| CN103501810A (zh) * | 2010-12-22 | 2014-01-08 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 牛物种中增强的免疫应答 |
| KR101323845B1 (ko) * | 2011-01-21 | 2013-10-31 | 광주과학기술원 | 외막소포체를 유효성분으로 포함하는 항암용 약제학적 조성물 |
| CU24070B1 (es) * | 2011-12-27 | 2015-01-29 | Ct De Inmunología Molecular | Composiciones farmacéuticas para el tratamiento de tumores que expresan regf y gangliósidos n-glicolilados gm3 (neugcgm3) |
| WO2014140894A2 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Bioven 3 Limited | Self-assembling synthetic proteins |
| CU24299B1 (es) * | 2013-08-02 | 2017-12-08 | Centro De Inmunología Molecular | Composiciones vacunales bivalentes basadas en los receptores de tipo 1 y 2 del factor de crecimiento epidérmico |
| HK1194912A2 (en) * | 2013-09-17 | 2014-10-24 | Bestop Group Holdings Ltd | Growth factor concentrate and the use thereof |
| US10105306B2 (en) * | 2013-09-17 | 2018-10-23 | Bestop Group Holdings Limited | Method of preparing a growth factor concentrate |
| JP6609565B2 (ja) * | 2014-03-11 | 2019-11-20 | ユニヴェルシテ デクス−マルセイユ | 細胞膜ガングリオシドと相互作用するキメラペプチド |
| US12019073B2 (en) * | 2017-03-15 | 2024-06-25 | Centro De Inmunologia Molecular | Method for the treatment of patients with carcinomas |
| WO2018166542A1 (es) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Centro De Inmunologia Molecular | Método para el tratamiento de pacientes con carcinomas |
| AU2018341578B2 (en) * | 2017-09-27 | 2024-02-08 | L2 Diagnostics, Llc | ErbB peptide pharmaceutical and vaccine compositions and therapeutics uses thereof for cancer |
| CU24534B1 (es) * | 2017-11-06 | 2021-07-02 | Ct Inmunologia Molecular | Adyuvantes nano-particulados que contienen variantes sintéticas del gangliósido gm3 |
| CU20170173A7 (es) * | 2017-12-27 | 2019-11-04 | Ct Inmunologia Molecular | Nano-partículas que contienen el gangliósido gm3 como inmunomoduladoras |
| CN109865137A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-06-11 | 天德悦（北京）生物科技有限责任公司 | 经碘代乙酰基活化的琼脂糖微球在提高多肽或蛋白类免疫原免疫原性中的应用 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4857637A (en) * | 1986-05-07 | 1989-08-15 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for immunologically modulating growth hormone receptor activity |
| IT1206250B (it) * | 1987-02-18 | 1989-04-14 | Ist Farmacoterapico It Spa | Stiche umane e relativi prodotti metodo per l'estrazione di antigeni di membrana aventi proprieta' immunogene a partire da cellule neopla- |
| US5726292A (en) * | 1987-06-23 | 1998-03-10 | Lowell; George H. | Immuno-potentiating systems for preparation of immunogenic materials |
| AU4662393A (en) | 1992-07-08 | 1994-01-31 | Schering Corporation | Use of gm-csf as a vaccine adjuvant |
| ES2166770T3 (es) * | 1993-12-09 | 2002-05-01 | Centro Inmunologia Molecular | Anticuerpos monoclonales contra gangliosidos y sus utilizaciones en la inmunoterapia activa especifica de tumores malignos. |
| CU22420A1 (es) * | 1993-12-29 | 1996-01-31 | Centro Inmunologia Molecular | Composicion vacunal para el desarrollo de una respuesta contra gangliosidos n glicolilados y su uso para el tratamiento del cancer |
| US6149921A (en) * | 1993-12-29 | 2000-11-21 | Centro De Inmunologia Molecular | Vaccine compositions for eliciting an immune response against N-acetylated gangliosides and their use for cancer treatment |
| US5880141A (en) | 1995-06-07 | 1999-03-09 | Sugen, Inc. | Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease |
| EP1045698B1 (en) * | 1998-01-16 | 2006-06-07 | Biomira Usa Inc. | Patient-specific white blood cell malignancy vaccine from membrane-proteoliposomes |
-
2001
- 2001-11-29 PE PE2001001202A patent/PE20020572A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-12-05 AR ARP010105662A patent/AR031638A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-12-06 EP EP01999387A patent/EP1356822B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-06 AU AU2151902A patent/AU2151902A/xx active Pending
- 2001-12-06 US US10/003,463 patent/US7776342B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-06 JP JP2002547529A patent/JP4210519B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-06 CA CA2431188A patent/CA2431188C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-06 MX MXPA03005032A patent/MXPA03005032A/es active IP Right Grant
- 2001-12-06 UY UY27059A patent/UY27059A1/es unknown
- 2001-12-06 EA EA200300640A patent/EA005138B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-12-06 DK DK01999387.2T patent/DK1356822T3/da active
- 2001-12-06 AU AU2002221519A patent/AU2002221519B2/en not_active Expired
- 2001-12-06 KR KR1020037007634A patent/KR100850473B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-06 CN CNB018215602A patent/CN1291755C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-06 BR BR0116013-3 patent/BRPI0116013B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-12-06 WO PCT/CU2001/000010 patent/WO2002045746A2/es not_active Ceased
- 2001-12-06 DE DE60143363T patent/DE60143363D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-06 AT AT01999387T patent/ATE485833T1/de active
-
2003
- 2003-06-04 NZ NZ526282A patent/NZ526282A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-06-05 ZA ZA200304411A patent/ZA200304411B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MXPA03005032A (es) | 2004-09-10 |
| UY27059A1 (es) | 2002-04-26 |
| AR031638A1 (es) | 2003-09-24 |
| KR20030061838A (ko) | 2003-07-22 |
| US7776342B2 (en) | 2010-08-17 |
| DE60143363D1 (de) | 2010-12-09 |
| ZA200304411B (en) | 2004-07-29 |
| WO2002045746A3 (es) | 2002-12-27 |
| KR100850473B1 (ko) | 2008-08-07 |
| EA200300640A1 (ru) | 2003-12-25 |
| DK1356822T3 (da) | 2011-02-07 |
| WO2002045746A2 (es) | 2002-06-13 |
| JP2004523494A (ja) | 2004-08-05 |
| CN1291755C (zh) | 2006-12-27 |
| CA2431188C (en) | 2010-09-07 |
| HK1063726A1 (en) | 2005-01-14 |
| BRPI0116013B1 (pt) | 2018-07-24 |
| BRPI0116013B8 (pt) | 2021-05-25 |
| AU2002221519B2 (en) | 2006-11-23 |
| EP1356822A2 (en) | 2003-10-29 |
| BR0116013A (pt) | 2004-01-06 |
| PE20020572A1 (es) | 2002-07-31 |
| EP1356822B1 (en) | 2010-10-27 |
| CA2431188A1 (en) | 2002-06-13 |
| JP4210519B2 (ja) | 2009-01-21 |
| AU2151902A (en) | 2002-06-18 |
| ATE485833T1 (de) | 2010-11-15 |
| US20020136735A1 (en) | 2002-09-26 |
| CN1484532A (zh) | 2004-03-24 |
| NZ526282A (en) | 2005-01-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA005138B1 (ru) | Фармацевтические композиции, усиливающие иммуногенность антигенов со слабой иммуногенностью | |
| EP0859627B1 (en) | Mimicking peptides in cancer therapy | |
| JP2004523494A6 (ja) | 低免疫原性抗原の免疫原性を増強する医薬組成物 | |
| US20010033839A1 (en) | Vaccine and immunotherapy for solid nonlymphoid tumor and related immune dysregulation | |
| US20070275049A1 (en) | Anti-tumor molecular vacine and method of making thereof | |
| CN111295200B (zh) | 作为疫苗中的佐剂的包含合成的神经节苷脂gm3变体的纳米颗粒 | |
| US12311019B2 (en) | Vaccine composition and uses thereof | |
| JP2013047230A (ja) | Ｈｌａ−ａ２陽性者用ｈｓｐ１０５由来癌拒絶抗原ペプチド及びこれを含む医薬 | |
| Gathuru et al. | Identification of DHBcAg as a potent carrier protein comparable to KLH for augmenting MUC1 antigenicity | |
| US20030212027A1 (en) | Vaccine formulations and methods for immunizing an individual against shed antigen specific B cells | |
| AU2005306186B2 (en) | Immunotherapeutic formulations with Interleukin-2-neutralising capacity | |
| TW201823267A (zh) | 瘧疾疫苗 | |
| WO2022083805A1 (es) | Antígeno quimérico que comprende el dominio extracelular de pd-l1 | |
| JP4223813B2 (ja) | 免疫増強特性を有するムチンペプチド | |
| ES2353857T3 (es) | Composiciones farmacéuticas que mejoran la inmunogenicidad de antígenos poco inmunogénicos. | |
| Maraveyas et al. | Division of Oncology, St George's Hospital Medical School | |
| HK1063726B (en) | Pharmaceutical compositions enhancing the immunogenicity of poorly immunogenic antigens |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ KZ KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): BY |
|
| MK4A | Patent expired |
Designated state(s): RU |