DK169703B1

DK169703B1 - Pyrimidinderivater, fremgangsmåde til fremstilling deraf, farmaceutiske præparater indeholdende disse samt anvendelse af disse derivater til fremstilling af et lægemiddel til antitumor- eller cancerterapi

Info

Publication number: DK169703B1
Application number: DK158589A
Authority: DK
Inventors: Hiroaki Nomura; Hiroshi Akimoto; Tetsuo Miwa
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1988-04-01
Filing date: 1989-03-31
Publication date: 1995-01-16
Also published as: JP2830008B2; NO891369L; CN1036567A; DE68911197D1; DE68911197T2; JPH0228162A; DK158589D0; US4946846A; NO169842C; EP0340905B1; NO891369D0; KR890016020A; DK158589A; HU908278D0; CN1024007C; HU203102B; NO169842B; EP0340905A1; HUT51620A

Description

DK 169703 B1

Denne opfindelse angår hidtil ukendte kondenserede pyrimidinderiva-ter, der kan anvendes som antitumormidler, samt en fremgangsmåde til fremstilling deraf, antitumorpræparat indeholdende dem og anvendelsen deraf samt mellemprodukter, der kan anvendes ved fremstilling af de 5 hidtil ukendte forbindelser.

Folinsyre er en bærer af en Cl-enhed, der er afledt af myresyre eller formaldehyd, og virker som et coenzym i forskellige enzymatiske reaktioner såsom de reaktioner, der er involveret ved biosyntese af nukleinsyre, ved metabolisme af aminosyrer og peptider og ved dannel-10 se af methan. Især i biosyntese af nukleinsyre er folinsyre væsentlig for formyleringen i de to synteseveje, dvs. purinsyntesevejen og thymidinsyntesevejen. Det kræves sædvanligvis, at folinsyre omdannes til sin aktiverede coenzymform ved reduktion i to trin, inden den bliver biologisk aktiv. Det er kendt, at amethopterin (methotrexat: 15 MTX) og beslægtede forbindelser inhiberer reduktionen fra dihydrofo-linsyre til tetrahydrofolinsyre ved at koble sig stærkt med det dominerende enzym.i det andet trin (dihydrofolinsyrereduktase). Disse lægemidler er blevet udviklet som antitumor-lægemidler, fordi de kan forstyrre DNA-syntesen og følgelig forårsage celledød og betragtes i 20 øjeblikket som værende af væsentlig klinisk vigtighed. På den anden side er der blevet opdaget et hidtil ukendt tetrahydroaminopterin-antitumormiddel (5,10-dideaza-5,6,7,8-tetrahydroaminopterin: DDATHF), som i modsætning til de ovenfor beskrevne lægemidler ikke inhiberer dihydrofolinsyrereduktase, og hvis primære mekanisme består i in-25 hibering af glycinamid-ribonucleotid-transformylase, der er nødvendig i den indledende fase af purinbiosyntesen [Journal of Medicinal Chemistry, 28, 914 (1985)].

Der foretages i øjeblikket forskellige studier angående cancerterapi, og det forventes, at der vil ske en udvikling af lægemidler, som er 30 mere effektive og har toksiciteter, der er særdeles specifikke overfor cancerceller baseret på en ny mekanisme. Antitumormidlet MTX, hvis virkningsmekanisme består i antagonisme mod folinsyre, bliver anvendt klinisk, selvom den terapeutiske virkning stadig er utilfredsstillende, fordi det har relativt stærk toksicitet med ringe 35 virkning overfor massiv cancer. Det er også et stort problem, at cancerceller opnår tolerance overfor midlet (MTX).

i 2 DK 169703 B1

Det har nu vist sig, at hidtil ukendte kondenserede pyrimidinderiva- | ter, der har en trimethylenkæde mellem de to ringsystemer, har toksi- | citeter, som er særdeles specifikke over for tumorceller, og som har udmærkede antitumorvirkninger.

5 I DK 4721/86, EP-A-0 248 573 og TIS 4.460.591 beskrives forbindelser, der angives at have antineoplastisk virkning. Disse forbindelser har imidlertid ikke en trimethylenkæde mellem ringene, som pyrimidin-derivateme ifølge den foreliggende opfindelse har, men derimod en dimethylenkæde. Som vist i eksempel 32 heri har pyrimidinderivateme 10 ifølge opfindelsen forbedrede antitumor-egenskaber i forhold til disse kendte forbindelser.

Den foreliggende opfindelse angår: (1) en forbindelse med den almene formel (I): X R1 R2

I vO R3 \-/ I

CH2CH2C00Re hvor ringen er en pyridinring, som eventuelt er hydrogeneret, 15 eller en benzenring, som eventuelt er hydrogeneret, X er en amino -gruppe eller en hydroxylgruppe, bA, R^, og R^ uafhængigt af hinanden er hydrogen, fluor eller lavere alkyl, og -COOR^ og -COOR^ uafhængigt af hinanden er en carboxylgruppe, som eventuelt er este-rificeret med en lavere alkylgruppe med 1-5 carbonatomer, en benzyl-20 gruppe, som eventuelt er substitueret med nitro eller en lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer, eller en phenylgruppe, som eventuelt er substitueret med nitro eller en lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer, eller et salt deraf; 3 DK 169703 B1 (2) en fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse (I) som defineret ovenfor, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at en , forbindelse med den almene formel (II): X R* R* R*

Vcooh l i* \=r (n)

H*N

hvor ringen ^a) , X, R-*-, R^, R^ og R^ har de ovenfor i forbindelse med 5 (I) anførte betydninger, eller et reaktivt derivat ved carboxylgrup- pen eller et salt deraf omsættes med en forbindelse med den almene formel (III):

HjNCHCOOR5 • (I) C H 2C H 2C 0 0 R6 hvor -C00R.5 og -COOR^ har de ovenfor i forbindelse med (I) anførte betydninger, eller et salt deraf; 10 (3) en forbindelse med den almene formel (IV): X R‘ R’ R* ^ 'Vcooli ’ 1 Iwj 8’ «=/ (IV) hvor ringen ^a) , X, R^, R^, R·^ og har de ovenfor i forbindelse med (I) anførte betydninger, og -COOR'7 er en carboxylgruppe, som eventuelt er esterificeret med en lavere alkylgruppe med 1-5 carbonatomer, en benzylgruppe, som eventuelt er substitueret med nitro eller en 15 lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer, eller en phenylgruppe, som eventuelt er substitueret med nitro eller en lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer, eller et salt deraf, der er mellemprodukter, der kan anvendes ved fremstilling af forbindelserne med formlen (I); 4 DK 169703 B1 (4) et antitumormiddel indeholdende en forbindelse (I) som defineret ovenfor eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf; og (5) anvendelse af en forbindelse (I) som defineret ovenfor eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf til fremstilling af et lægemiddel 5 til antitumor- eller cancerterapi.

Når X i de ovenfor beskrevne formler er en hydroxylgruppe, kan hver af forbindelserne (I), (II), og (IV) eksistere som en ligevægtsblanding af de respektive tautomerer. Følgende delvise strukturelle formler viser de steder i strukturen, hvor der forekommer tautomeri, 10 og ligevægten mellem tautomererne illustreres som følger: 0H 1

For nemheds sisyld med hensyn til beskrivelsen er det kun hydroxyfor-merne og de tilsvarende navne, der er beskrevet i hele denne beskrivelse, men de tilsvarende oxoformer er hele tiden omfattet.

Der kan være to eller flere asymmetriske centre i forbindelserne (I) 15 ifølge opfindelsen, og den absolutte konfiguration ved alle de asymmetriske carbonatomer kan have S-form, R-form eller en blandet S-R-form, bortset fra at den absolutte konfiguration ved det asymmetriske carbonatom i sidekæden, der er afledt af glutaminsyre, altid er S(L). Forbindelserne (I) kan derfor have to eller flere diastereomerer, 20 der, om nødvendigt, let kan adskilles fra hinanden ved en sædvanlig fremgangsmåde til adskillelse og oprensning. Alle diastereomererne, som kan adskilles ved sådan en fremgangsmåde, er omfattet af den foreliggende opfindelse.

Pyridinringen, som kan være hydrogeneret, og som blandt andet er 25 angivet ved ringen i ovenstående formler, kan være enten pyridin 5 DK 169703 B1 eller tetrahydropyridin. Endvidere kan benzenringen, som kan være hydrogeneret, og som også er angivet ved ringen , være benzen, cyclohexen eller 1,3-cyclohexadien. Foretrukne eksempler på ringen omfatter en pyridinring, som kan være hydrogeneret, såsom pyridin 5 eller tetrahydropyridin, og særligt foretrukne eksempler omfatter tetrahydropyridin.

Udtrykket "lavere alkylgruppe", der blandt andet er angivet ved rA, R.2, r3 og R^- i ovenstående formler, omfatter en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer (fx methyl, ethyl, propyl eller isopropyl).

10 En esterificeret carboxylgruppe i en carboxylgruppe, som eventuelt er esterificeret, og som er angivet ved -C00R-’, -COOR^ og -COOR^, omfatter en carboxylgruppe, der er esterificeret med (i) en lavere alkylgruppe med 1-5 carbonatomer, (ii) en benzylgruppe, som eventuelt er substitueret, fortrinsvis med én eller to nitrogrupper eller en 15 lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer (fx methoxy, ethoxy), eller (iii) en phenylgruppe, som eventuelt er substitueret, fortrinsvis med én eller to nitrogrupper eller en lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer (fx methoxy, ethoxy eller propoxy).

Udtrykket "lavere alkylgruppe" omfatter methyl, ethyl, propyl, iso-20 propyl, n-butyl, iso-butyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, iso- pentyl, sec-pentyl, neo-pentyl og tert-pentyl. Udtrykket "benzylgruppe, som eventuelt er substitueret" omfatter benzyl, nitrobenzyl og methoxybenzyl. Udtrykket "phenylgruppe, som eventuelt er substitueret" omfatter phenyl, nitrophenyl og methoxyphenyl.

25 Foretrukne eksempler på R^· omfatter hydrogen og en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer, og særligt foretrukne eksempler omfatter hydrogen.

Foretrukne eksempler på R^, R^, R^, R-* og R® omfatter hydrogen.

Foretrukne eksempler på X omfatter en aminogruppe.

I den følgende delstrukturformel af forbindelserne (I), (II) og (IV) ; 6 DK 169703 B1 :om V * hvor ringen er en pyridinring, som kan være hydrogeneret, sidder bA i 5-stillingen deraf, og trimethylensidekæden er bundet til den kondenserede struktur 2 f 8 i dennes 6-stilling.

5 Foretrukne eksempler på forbindelsen (I) og et salt deraf omfatter en forbindelse med den almene formel: X . R* R* ' R* \-C0NHCHC00R5 «.AV RI .- CK.CiWOOR· Γ

H

hvor symbolerne X, rA, R^, , R^, R^ og R^ har de ovenfor anførte betydninger, og et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

10 Forbindelserne (I) eller salte deraf (som beskrevet i det følgende) kan vindes ved acylering af glutaminsyrederivater (III) eller salte deraf (som beskrevet for forbindelsen (I)) med carboxylsyrerne (II) eller reaktive derivater eller salte deraf (som beskrevet for for-

_I

7 DK 169703 B1 bindeisen (I)). Acylering kan fx udføres ved acylering af forbindelsen (III) eller et salt deraf med forbindelsen (II) eller et salt deraf i nærværelse af et carbodiimid. Der anvendes sædvanligvis ca. 1 til 20 molækvivalenter, fortrinsvis 1-5 molækvivalenter af forbindel-5 sen (III) eller et salt deraf i forhold til forbindelsen (II) eller et salt deraf. Der anvendes sædvanligvis ca. 1 til 25 molækvivalenter, fortrinsvis ca. 1-5 molækvivalenter af et carbodiimid i forhold til forbindelsen (II) eller et salt deraf.

Som carbodiimidet foretrækkes I praksis dicyclohexyl-carbodiimid, men 10 andre carbodiimider såsom diphenylcarbodiimid, di-o-tolylcarbodiimid, di-p-tolylcarbodiimid, di-tert-butylcarbodiimid, l-cyclohexyl-3-(2-morpholinoethyl)carbodiimid, l-cyclohexyl-3-(4-diethylaminocyclo-hexyl)carbodiimid, l-ethyl-3-(2-diethylaminopropyl)carbodiimid og l-ethyl-3-(3-diethylaminopropyl)carbodiimid kan også anvendes.

15 Acyleringen udføres fortrinsvis i nærværelse af et egnet opløsningsmiddel, og sådanne opløsningsmidler omfatter estere (fx ethylacetat), ethere (fx dimethylether, diethylether, tetrahydrofuran, dioxan, monoglyme, diglyme), halogenerede carbonhydrider (fx dichlormethan, chloroform, carbontetrachlorid), nitriler (fx acetonitril), aromati-20 ske carbonhydrider (fx benzen, toluen, xylen), nitromethan, pyridin, dimethylformamid, dimethylsulfoxid, hexamethylphosphoramid og egnede blandinger af disse opløsningsmidler.

Reaktionen udføres sædvanligvis ved et pH fra 2 til 14, fortrinsvis ved et pH fra ca. 6 til 9, ved en temperatur fra ca. -10°C til det 25 anvendte opløsningsmiddels kogepunkt (op til ca. 100°C), fortrinsvis ved en temperatur fra ca. 0 til 50°C i ca. 1 til 100 timer.

Acyleringsreaktionen kan med fordel udføres i nærværelse af en katalysator, som fremmer acylering. Sådanne katalysatorer omfatter basekatalysatorer og syrekatalysatorer. Basekatalysatorer omfatter terti-30 ære aminer (fx alifatiske tertiære aminer såsom triethylamin; aromatiske tertiære aminer såsom pyridin, a-, β- eller γ-picolin, 2,6-lu-tidin, 4-dimethyl-aminopyridin, 4-(l-pyrrolidinyl)pyridin, di-methyl-anilin og diethylanilin), og syrekatalysatorer omfatter Lewis-syrer [fx vandfrit zinkchlorid, vandfrit aluminiumchlorid (AICI3), vandfrit 8 DK 169703 B1 ferrichlorid, titaniumtetrachlorid(TiGl^) , tintetrachlorid (SnCl^) , antimonpentachlorid, koboltchlorid, cuprichlorid eller bortrifluorid-ethyletherkompleks] , stærke uorganiske syrer (fx svovlsyre, perch-lorsyre, hydrogenchlorid, hydrogenbromid, etc.), stærke organiske 5 syrer (fx benzensulfonsyre, p-toluensulfonsyre, trifluoreddikesyre eller trichloreddikesyre) og sure ionbytterharpikser (fx polystylen-sulfonsyre). Blandt de ovenfor beskrevne katalysatorer foretrækkes I de fleste tilfælde 4-dimethylaminopyridin eller 4-(1-pyrrolidinyl)-pyridin. Den egnede mængde katalysator er den mængde, der er til-10 s trækkelig til at fremme acylering, sædvanligvis fra ca. 0,01 til 10 molækvivalenter, fortrinsvis fra ca. 0,1 til 1 molækvivalent i forhold til forbindelsen (II) eller et salt deraf. De reaktive derivater af carboxylsyrer (II) ved carboxylgruppen, der anvendes til acylerin-gen ved carboxylgruppen i carboxylsyren, omfatter syrehalogenider (fx 15 fluorid, chlorid, bromid, iodid), syreanhydrider (fx iodeddikesyre-arihydrid, isosmørsyreanhydrid), blandede syreanhydrider af carboxylsyren (II) med mono-lavere alkylkulsyreestere (fx monomethylkulsyre-ester, monoethylkulsyreester, monopropylkulsyreester, mono-iso-pro-pylkulsyrees ter, monobutylkulsyrees ter, mono - isobutylkulsyrees ter, 20 mono-see-buty lkulsyreester eller mono- tert-butylkulsyreester) , aktive estere (fx cyanomethylester, carboethoxymethylester, methoxymethyl-ester, phenylester, o-nitrophenylester, p-nitrophenylester, p-carbo-methoxyphenylester, p-cyanophenylester eller thiophenylester), syre-azider, blandede syreanhydrider med phosphorsyrediestere (fx 25 dimethylphosphat, diethylphosphat, dfbenzylphosphat, diphenyl- phosphat) og blandede syreanhydrider med phosphorsyrlingdiestere (fx dimethylphosphit, diethylphosphit, dfbenzylphosphit eller diphenyl-phosphit), som fremstillet på konventionel måde.

Til acylering med et sådan reaktivt derivat af (II) anvendes det 30 samme opløsningsmiddel, den samme katalysator og den samme reaktions-temperatur som til acylering i nærværelse af et carbodiimid som beskrevet ovenfor.

Til fremstilling af forbindelsen (1-1) eller et salt deraf, hvor -C00R.5 og -COOR^ i forbindelsen (I) eller et salt deraf er carboxyl-35 grupper, er det ønskeligt, at forbindelsen (III) eller et salt deraf, hvor -COORp og -COOR^ er esterificerede carboxylgrupper, omsættes med 9 DK 169703 B1 forbindelsen (II) eller et reaktivt derivat eller salt deraf efterfulgt af deesterificering ved hjælp af en sædvanlig degradations -reaktion eller katalytisk reduktionsreaktion.

En sådan degradation kan udføres ved hydrolyse under basiske betin-5 gelser (fremgangsmåde A), hydrolyse under sure betingelser (fremgangsmåde B-l) eller hydrolyse under sure, ikke-vandige betingelser (fremgangsmåde B-2). De baser, der anvendes i fremgangsmåde A, omfatter metalalkoxider såsom natriummethoxid, natriumethoxid, natrium-butoxid og kaliumbutoxid, metalhydroxider såsom natriumhydroxid, 10 kaliumhydroxid, lithiumhydroxid og bariumhydroxid og aminer såsom ammoniak, triethylamin og pyridin. De syrer, der anvendes i fremgangsmåde B-l, omfatter mineralsyrer såsom saltsyre, brombrintesyre, svovlsyre, salpetersyre og phosphorsyre og organiske syrer såsom trifluoreddikesyre, trichloreddikesyre, methan-sulfonsyre, benzensul-15 fonsyre, p-toluensulfonsyre og camphorsulfonsyre. De katalysatorer, der anvendes i fremgangsmåde B-2, omfatter mineralsyrer såsom hydro-genchlorid, hydrogenbromid, perchlorsyre, svovlsyre, salpetersyre og phosphorsyre, organiske syrer såsom trifluoreddikesyre, trichloreddikesyre, me thansulf onsyre, benzensulf onsyre, p-toluensulf onsyre og 20 camphorsulfonsyre og Lewis-syrer såsom vandfrit zinkchlorid, vandfrit aluminiumchlorid (AICI3), vandfrit ferrichlorid, titaniumtetrachlorid (TiCl^), tintetrachlorid (SnCl^), antimonpentachlorid, koboltchlorid, cuprichlorid og bortrifluorid-ethyletherkompleks. Degradationen udføres i et egnet opløsningsmiddel ved en temperatur fra 0°C til 25 opløsningsmidlets kogepunkt, fortrinsvis ved 10 til 80°C, i fra 30 minutter til 2 dage. Det opløsningsmiddel, der er anvendt til reaktionen ifølge fremgangsmåde A eller ifølge fremgangsmåde B-l, kan være vand, methanol, ethanol, propanol, butanol, ethylenglycol, methoxyethanol, ethoxyethanol, tetrahydrofuran, dioxan, monoglyme, 30 diglyme, pyridin, dimethylformamid, dimethylsulfoxid eller sulfolan eller en egnet blanding af to eller flere af disse opløsningsmidler; det opløsningsmiddel, der anvendes til reaktionen ifølge fremgangsmåde B-2 kan være ethylacetat, dimethylether, diethylether, tetrahydrofuran, dioxan, monoglyme, diglyme, dichlormethan, chloroform, 35 carbontetrachlorid, acetonitril, benzen, toluen, xylen, nitromethan eller pyridin eller en egnet blanding af to eller flere af disse opløsningsmidler.

10 DK 169703 B1

En sådan katalytisk reduktion (fremgangsmåde C) udføres i et egnet opløsningsmiddel ved en temperatur fra ca. -40° C til det anvendte opløsningsmiddels kogepunkt, fortrinsvis ved fra ca. 0 til 50°C. De anvendte opløsningsmidler omfatter vand, alkoholer (fx methanol, 5 ethanol, propanol, iso-propanol, butylalcohol, sec-butylalcohol, tert-butylalcohol, ethoxyethanol) , eddikesyreestere (fx me thy lace tat, ethylacetat), ethere (fx dimethylether, diethylether, tetrahydro-furan, dioxan, monoglyme, diglyme), aromatiske carbonhydrider (fx benzen, toluen, xylen), pyridin, dimethylformamid, og egnede blandin-10 ger af to eller flere af disse opløsningsmidler. Katalysatorer for den katalytiske reaktion omfatter palladium, platin, rhodium og Raney-nikkel. Tilsætningen af en spormængde af eddikesyre, trifluor-eddikesyre, saltsyre eller svovlsyre tillader, at reaktionen forløber mere fordelagtigt.

15 Fremgangsmåden til fremstilling af forbindelsen (1-1) eller et salt deraf vælges alt efter arten af -C00R-* og -COOR^; når -C00R^ og -C00R^ er carboxylgrupper, der er esterificeret med methyl, ethyl, propyl, butyl, sec-butyl, phenyl eller substitueret phenyl, anvendes hensigtsmæssigt fremgangsmåde A eller fremgangsmåde B-l; når -COOR^ 20 og -C00R® er carboxylgrupper, der er esterificerede med isopropyl eller tert-butyl, anvendes fremgangsmåde B-2; og når -C00R^ og -G00R® er carboxylgrupper, der er esterificerede med benzyl eller substitueret benzyl, anvendes hensigtsmæssigt fremgangsmåde B-l eller fremgangsmåde C. Når -C00R^ og -C00R^ er forskellige fra hinanden, kan 25 fremgangsmåderne A, B-l, B-2 og C kombineres på passende måde.

I det følgende beskrives fremgangsmåderne til fremstilling af udgangsforbindelserne (XI) og (III) eller salte deraf.

Forbindelsen (II), hvor ringen (^A) er en pyridinring, som kan være hydrogeneret, eller et salt deraf kan fx fremstilles ved følgende 30 processer.

OR2 0 0 ^ ♦ Forbindelse (VI)

Forbindelse (V) 11 DK 169703 B1 . 0 V R4 o »-ιΛ-Λ^ο-ί-ο-»"- proce> 2

Forbindelse (7ΊΙ) O R2 R4 o .

.MVyl.4-r froces.3 CH(-2-Ra) forbindelse (VIII) R1 R2 R4 o

Ho^YVSO^c-o-r'-Proces, 4 CH(-Z-R9)2 Forkin<3else ^^^ R‘ R2 R4 o J\ÅÅ/r\ II Proces 5 L _» R3 Forbindelse /v) CH<-Z-R9), 1 ' R1 R2 r o ''rAVVc-o-r Proces> 6 CN R3 Forbin- (xi) CHC-Z-R°)2 delse Y pI pi D* Λ 7 H 2 N ^ tø'Ha Forbindelse (XII) CH(-Z-R3)z

X R1 R2 R4 O

J_01t Proces_8 J. II J p3 '-' * Forbindelse . (n-i) X R‘ R2 R4 .0 H 2 ^ Forbindelse ^ 12 DK 169703 B1 I de ovenfor viste reaktions formler har X, kA, R^, R^ og R^ de ovenfor anførte betydninger; L er et halogenatom (fx et chlor-, bromeller iodatom), en eliminerbar gruppe, som let kan afledes af en hydroxygruppe (fx en methansulfonyloxy-, benzensulfonyloxy-, p-tolu-5 ensulfonyloxy- eller trif luorme than-sulf ony lgruppe) eller en car- boxylsyreester (fx acetoxy eller benzoyloxy); Y er et hydrogen- eller et halogenatom (fx fluor, chlor, brom eller iod, etc.), Z er et oxygenatom eller et svovlatom, -COOR^' er en esterificeret carboxyl-gruppe; R^ og R^ er uafhængigt af hinanden en lavere alkylgruppe med 10 1-4 carbonatomer (fx methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, sec- butyl eller tert-butyl), benzyl eller en substitueret benzylgruppe (p-nitrobenzyl eller p-methoxy-benzyl), eller phenyl eller en substitueret phenylgruppe (fx p-nitrophenyl eller p-methoxypheny1); R^ er en lavere alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, benzyl eller en sub-15 stitueret phenylgruppe som nævnt ovenfor. Eksempler på den esterifi-cerede carboxylgruppe, der er angivet ved -COOR^', er sådanne esteri-ficerede carboxylgrupper som for "carboxylgruppen, der kan være esterificeret", og som er angivet ved -COOR^.

Forbindelsen (XII) kan fx være et syreadditionssalt som nævnt neden-20 for i relation til salte af forbindelsen (I).

I det følgende beskrives de ovenfor beskrevne reaktionsprocesser i detalj er.

PROCES 1

Forbindelsen (V) og forbindelsen (VI) underkastes kondensation (al-25 dolreaktion, Wittig-reaktion eller Reformatsky-reaktion) og derefter katalytisk reduktion under hydrogenatmosfære til dannelse af forbindelsen (VII).

For kondensationen ved aldolreaktion omfatter de anvendelige basekatalysatorer metalhydroxider såsom natriumhydroxid, kaliumhydroxid, 30 lithiumhydroxid og bariumhydroxid, metalalkoxider såsom natrium- methoxid, natriumethoxid og kalium-tert-butoxid, metalamider såsom natriumamid og lithiumdiisopropylamid, metalhydrider såsom natrium- 13 DK 169703 B1 hydrid og kaliumhydrid, organiske metalforbindelser såsom phenyl-lithium og butyllithium og aminer såsom triethylamin, pyridin, α- , β-eller γ-picolin, 2,6-lutidin, 4-dimethylaminopyridin, 4-(1-pyrroli-dinyl)pyridin, dimethylanilin og diethylanilin; de anvendelige syre-5 katalysatorer omfatter mineralsyrer såsom saltsyre, svovlsyre, salpetersyre, phosphorsyre og borsyre og organiske syrer såsom oxalsyre, vinsyre, eddikesyre, trifluoreddikesyre, methansulfonsyre, benzensul-fonsyre, p-toluensulfonsyre og camphersulfonsyre. Kondensationen kan udføres ifølge en kendt fremgangsmåde [Ei-Ichi Negishi, Organo-10 metallics in Organic Synthesis, bind 1, John Wiley & Sons, New York, Chichester, Brisbane, Toronto (1980)], hvilken fremgangsmåde omfatter omdannelse af en ketonform til silylenoletherformen, som derefter underkastes kondensation med et aldehyd eller en ækvivalent deraf i nærværelse af en Lewis-syre [fx vandfrit zinkchlorid, vandfrit alumi-15 niumchlorid (AICI3), vandfrit ferrichlorid, titaniumtetrachlorid (TiCl^), tintetrachlorid (SnCl^), antimonpentachlorid, koboltchlorid, cuprichlorid, bortrifluorid-ethyletherkompleks, etc.] eller omdannelse af en ketonform til enolatet ved behandling af ketonformen med et metaltriflat (fx dialkylbortin(II)triflat) i nærværelse af en amin 20 (fx triethylamin, pyridin, α-, β- eller γ-picolin, 2,6-lutidin, 4-dimethylaminopyridin, 4-(l-pyrrolidinyl)pyridin, dimethylanilin, diethylanilin), hvorefter enolatet underkastes kondensation med et aldehyd eller en ækvivalent deraf. Kondensationen udføres i et egnet opløsningsmiddel ved en temperatur fra ca. -100°C til opløsningsmid-25 lets kogepunkt, fortrinsvis fra -78 til 100°C, i fra 1 minut til 3 dage. De opløsningsmidler, der kan anvendes til reaktionen, omfatter vand, flydende ammoniak, alkoholer (fx methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butylalkohol, sec-butylalkohol, tert-butylalkohol, ethylenglycol, methoxyethanol, ethoxyethanol), ethere (fx dimethyl-30 ether, diethylether, tetrahydrofuran, dioxan, monoglyme, diglyme), halogenerede carbonhydrider (fx dichlormethan, chloroform, carbon-tetrachlorid), alifatiske carbonhydrider (fx pentan, hexan, heptan), aromatiske carbonhydrider (fx benzen, toluen, xylen), dimethylformamid, dimethylsulfoxid, hexamethylphospholamid, sulfolan og egnede 35 blandinger deraf. For kondensationen ved en Wittig-reaktion omfatter anvendelige reagenser metalhydroxider såsom natriumhydroxid, kaliumhydroxid, lithiumhydroxid og bariumhydroxid, metalalkoxider såsom natriummethoxid, natriumethoxid og kalium-tert-butoxid, metalamider 14 DK 169703 B1 såsom natriumamid og lithiumdiisopropylamid, metalhydrider såsom natriumhydrid og kaliumhydrid, organiske metalforbindelser såsom phenyllithium og butyllithium, og aminer såsom triethylamin, pyridin, a.-, β- eller 7-picolin, 2,6-lutidin, 4-dimethylaminopyridin, 4-(l-5 pyrrolidinyl)pyridin, dimethylanilin og diethylanilin. Reaktionen udføres i et egnet opløsningsmiddel ved en temperatur fra ca. -20°C til det anvendte opløsningsmiddels kogepunkt, fortrinsvis fra ca. 0 til 150°C, i fra 1 minut til 10 dage. De opløsningsmidler, der kan anvendes til reaktionen, omfatter flydende ammoniak, alkoholer (fx i 10 methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butylalkohol, sec-butyl-alkohol, tert-butylalkohol, ethylenglycol, methoxyethanol, ethoxy-ethanol), ethere (fx dimethylether, diethylether, tetrahydrofuran, dioxan, monoglyme, diglyme), alifatiske carbonhydrider (fx pentan, hexan, hep tan) , aromatiske carbonhydrider (fx benzen, toluen, xylen), 15 dimethylformamid, dimethylsulfoxid, hexamethylphospholamid, sulfolan og egnede blandinger deraf.

Kondensationen kan udføres under anvendelse af en Reformatsky-reaktion. De reagenser, der kan anvendes til Reformatsky-reaktionen, omfatter zink, magnesium, aluminium og tin, og reaktionen udføres i 20 et egnet opløsningsmiddel ved en temperatur fra ca. -20°C til det anvendte opløsningsmiddels kogepunkt, fortrinsvis fra ca. 0 til 150°C, i fra 30 minutter til 3 dage. De opløsningsmidler, der kan anvendes til reaktionen, omfatter ethere (fx dimethylether, diethylether, tetrahydrofuran, dioxan, monoglyme, diglyme), alifatiske 25 carbonhydrider (fx pentan, hexan, heptan), aromatiske carbonhydrider (fx benzen, toluen, xylen) og de egnede blandinger deraf.

Der anvendes de samme reaktionsbetingelser til den katalytiske reduktion, der udføres umiddelbart efter kondensationen, som til deesteri-ficeringen med -C00R-* og -C00R^ i forbindelsen (I) eller et salt 30 deraf (fremgangsmåde C).

15 DK 169703 B1 PROCES 2

Dette er den proces, hvorved en gruppe, der er ækvivalent med aldehyd, der har en Cl-enhed, indføres i den aktive methylen (a-stillingen af carboxylsyreesteren) i forbindelsen (VII). Gruppen, der er 5 ækvivalent med aldehyd, eksemplificeres ved -CH(0CH3)2, -CH(OCH2CH3)2, -CH(SCH3)2, -CHiOC^CgHs^, etc. og kan let fremstilles ud fra den tilsvarende ortho-myresyreester, ortho-thiomyresyre-ester, etc. under anvendelse af kendte reagenser ifølge en i og for sig kendt fremgangsmåde.

10 PROCES 3

Den i proces 2 vundne forbindelse (VIII) underkastes reduktion med et hydrid (fx lithiumborhydrid, natriumborhydrid, lithiumcyanoborhydrid, lithiumaluminiumhydrid, di-isobutylaluminiumhydrid) til dannelse af alkoholformen (IX; hvor R·*· er et hydrogenatom) . Ved reduktionen

7 t O

15 vælges R' og R° hensigtsmæssigt således, at der etableres en reaktivitetsforskel (eller en selektivitetsforskel) mellem carbonylgrupper-ne overfor hydridet. “*

Reduktionen udføres i et egnet opløsningsmiddel ved en temperatur fra ca. -40°C til det anvendte opløsningsmiddels kogepunkt, fortrinsvis 20 fra ca. 0 til 50°C. Det opløsningsmiddel, der kan anvendes til reaktionen, omfatter vand, alkoholer (fx methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butylalkohol, sec-butylalkohol, tert-butylalkohol, ethylenglycol, methoxyethanol, ethoxyethanol), eddikesyreestere (fx methylacetat, ethylacetat), ethere (fx dimethylether, diethylether, 25 tetrahydrofuran, dioxan, monoglyme, diglyme), aromatiske carbonhydri-der (fx benzen, toluen, xylen), pyridin, dimethylformamid og egnede blandinger deraf. Den anvendte mængde reduktionsreagens er på ca. 1 til iOO mol, fortrinsvis ca. 2 til 20 mol pr. mol af den reducerede forbindelse. Omdannelse af forbindelsen (IX; hvor R·*· er et hydrogen-30 atom) til forbindelsen (IX: hvor R^ er en lavere alkylgruppe som defineret ovenfor) kan fx udføres ved følgende processer.

16 DK 169703 B1 s1 v r o . JL Jl - JL /7—\ II Oxidationsreaktion ΐΜ^Χ)-£-»-«ν --► CHC-Z-R3)2

Forbindelse (IX: hvor er et hydrocrenatom)

Reaktion, der 0 R2 ' R+‘ n forøger antallet i i ,__ ν af C-atomer /yWVS-o-f” -.

R3 W

CHC-Z-Rs) 2 Forbindelse (XIII) x Oxidations- ? ? ? 0 · reaktion ιΛχ^-ο-ΐ"'—— GH(-Z-R9)2 (Forbindelse (IX: hvor R"*" er en lavere altylgruppe)

Dette er den proces, hvorved forbindelsen (IX: hvor R^· er et hydrogenatom) oxideres til opnåelse af aldehydformen (XIII), hvorpå den vundne form (XIII) underkastes en reaktion, der øger antallet af carbonatomer, til dannelse af den tilsvarende forbindelse (IX: hvor 5 R·*· er en lavere altyl gruppe). Oxidationsreaktionen til dannelse af en aldehydform kan udføres tinder anvendelse af kendte reagenser ifølge en i og for sig kendt fremgangsmåde. Den reaktion, der øger antallet af carbonatomer, kan med fordel udføres under anvendelse af organiske metalreagenser (fx Grignard-reagens, alkyllithiumreagens, alkylzink-10 reagens, etc.), og kan også udføres under kendte betingelser ifølge en i og for sig kendt fremgangsmåde.

PROCES 4

Hydroxylgruppen hos den i proces 3 vundne alkoholform (IX) kan let omdannes til den ønskede eliminerbare gruppe ifølge en i og for sig 15 kendt metode til halogenering, acylering eller sulfonylering.

17 DK 169703 B1 PROCES 5

Den i proces 4 vundne forbindelse (X) underkastes kondensation med

* 1 A

malononitril eller en cyanoeddikesyreester med formlen NC-CH2COOR , hvor R^ har den ovenfor anførte betydning, under basiske betingelser 5 til dannelse af forbindelsen (XI). Der kan anvendes de baser, opløsningsmidler og reaktionsbetingelser, der er sædvanlige ifølge kendte fremgangsmåder.

PROCES 6

Forbindelsen (XI) kan, når den behandles med guanidin, reagere ved 10 cyanogruppen eller esterresten efterfulgt af ringslutning til nydannelse af en pyrrolopyrimidinring. Ringslutning under basiske betingelser kan tillade, at reaktionen forløber hensigtsmæssigt. De baser, der kan anvendes, omfatter metalalkoxider såsom natriummethoxid, natriumethoxid og kalium-tert-butoxid. De opløsningsmidler, der kan 15 anvendes til reaktionen, omfatter methanol, ethanol, propanol, tert-butylalkohol, tetrahydrofuran, dioxan, dimethylsulfoxid og hexa-methylphospholamid. Reaktionstemperaturen ligger i området fra ca. 0 til 150°C, fortrinsvis fra ca. 20 til 100°C. Reaktionstiden ligger i området fra ca. 1 til 24 timer.

20 PROCES 7 Når den i proces 6 vundne forbindelse (XII) underkastes deesterifi-cering af esterresten [-COOR^] og derefter fjernelse af en beskyttelsesgruppe [ZR^] i den beskyttede gruppe, der er ækvivalent med aldehyd [-CH(ZR^)2], fås sædvanligvis carboxylsyren (II-l), som 25 delvist oxideres automatisk. Til deesterificeringen kan der anvendes de betingelser, der anvendes ved deesterificeringen af esterresterne [-C00R-’ og -COOR^] i forbindelsen (I) (fremgangsmåderne A, B-l, B-2 og C). Fjernelsen af en beskyttelsesgruppe [ZR^] i gruppen, der er ækvivalent med aldehyd, kan udføres ifølge en i og for sig kendt 30 fremgangsmåde. Deesterificeringen og fjernelsen af en beskyttelses- 18 DK 169703 B1 gruppe i gruppen, der er ækvivalent med aldehyd, kan udføres i en hvilken som helst rækkefølge.

PROCES 8

Den i proces 7 vundne forbindelse (II-1) kan underkastes katalytisk 5 reduktion under hydrogenatmosfære til opnåelse af tetrahydroformen (II-2). Den katalytiske reduktion kan med fordel udføres under de betingelser, der er anvendt til deesterificeringen af -COOR^ og -C00r6 i forbindelsen (I) (fremgangsmåde C).

Selvom forbindelsen (1-2), der har en tetrahydropyridinring som 10 ringen A i ovenstående formel (I), kan fremstilles ved at underkaste forbindelsen (II-2) og forbindelsen (III) kondensation, er det bedre at fremstille den ved at underkaste forbindelsen (1-1), der har en pyridinring som ringen A i formlen (I), katalytisk reduktion under hydrogenatmosfære. Den katalytiske reduktion kan udføres under 15 de betingelser, der anvendes til deesterificeringen af -C00R-* og -COOR^ i forbindelsen (I) eller et salt deraf (fremgangsmåde C).

Forbindelsen (II), hvor ringen A er en benzenring, som kan være hydrogeneret, eller et salt deraf kan fx fremstilles ved følgende fremgangsmåder.

19 DK 169703 B1 r2 r o-K11

Μ,ρΛ^Ο-”” + Q

R3 τ'V

(XIV*) o (Ph :Q-) (XV) R1 R* R + Proces 10Rl R2 g+ rV^NØ^cooR7'-> ί^γ^Y^Qy-mr'

Rll0 R3 R3 (xvo ‘ (XVI) V ΓΓ ,

Proces. 11 r^^Λγ^N^^_COOR7, Proces 12 ^ / V S D3 ' ' ’ ^ HO β (XVI) ri R2 R+ jVy^Q- coor’' 0 (XE)

Proces 13

Proces 15 Ψ NH2R1 y |+ V-C00R7/ Proces 14 L.%1 L w -Kl-3) lill^ 8 (XX) R‘ 81 8*

Proces 16 r w (XXI) OH R1 R2 R+ 11 Λ I π Proces 17 NMmV^L/'C00R7,--(Π-4) h.jV^ 83 (X X H) 20 DK 169703 B1 I de ovenfor beskrevne reaktions formler har kA, R^, R^, R^ og R^ de ovenfor anførte betydninger, og R^- er en beskyttelsesgruppe for en hydroxylgruppe. Sådanne beskyttelsesgrupper af R^ omfatter fx Cj_ _ g - alkylgrupper (fx methyl, ethyl, n-propylisopropyl, n-butyl, 5 sec-butyl, tert-butyl, etc.), benzylgrupper, som kan være substitueret med fx én eller to grupper valgt blandt nitro, Cj__3-alkoxy såsom methoxy og ethoxy, halogen såsom chlor og brom, cyano og phenyl (fx benzyl, p-nitrobenzyl, p-methoxybenzyl, p-chlorbenzyl, p-cyanobenzyl, diphenylmethyl, trityl, etc.), silylgrupper, som er substitueret med 10 fx tre ens eller forskellige grupper valgt blandt C^.g alkyl som nævnt ovenfor, phenyl, triphenylmethyl, benzyl og xylyl (fx tri-methylsilyl, triethylsilyl, iso-propyldimethylsilyl, tert-butyldi-methylsilyl, triphenylmethyldimethylsilyl, tert-butyldiphenylsilyl, methyldi-iso-propylsilyl, methyldi-tert-butylsilyl, tribenzylsilyl, 15 trixylylsilyl, tri-iso-propylsilyl, triphenylsilyl, etc.), methoxy-methyl, isopropyloxymethyl, tetrahydropyranyl og tetrahydrofuranyl. Eksempler på den esterificerede carboxylgruppe, der er angivet ved -C00r7,j er sådanne esterificerede carboxylgrupper som eksemplificeret for "carboxylgruppen, som kan være esterificeret", der er 20 angivet ved -COOR^.

Forbindelserne (XX) og (XXII) kan omfatte syreadditionssalte som nævnt nedenfor i salte af forbindelsen (I).

I det følgende er de ovenfor beskrevne reaktionsprocesser beskrevet mere detaljeret.

25 PROCES 9

Forbindelserne (XIV) og (XV), der er fremstillet ved kendte metoder underkastes en Wittig-reaktion og kondenseres, hvilket giver forbindelsen (XVI). Der anvendes de samme reaktionsbetingelser i denne Wittig-reaktion som i proces 1.

21 DK 169703 B1 PROCES 10

Beskyttelsesgruppen R-^ for hydroxylgruppen i forbindelsen (XVI) kan let fjernes under anvendelse af kendte reagenser ifølge en i og for sig kendt fremgangsmåde, som det fx er beskrevet i "Protective Groups 5 in Organic Chemistry", Plenum Press, London og New York (1973).

PROCES 11

Den I proces 10 vundne forbindelse (XVII) kan let underkastes reduktion til dannelse af forbindelsen (XVIII). Reduktionen kan med fordel udføres ved katalytisk reduktion med tilsætning af en katalysator (fx 10 nikkel, palladium, platin, rhodium, etc.) under en atmosfære af hydrogen. Den katalytiske reduktion kan med fordel udføres under de reaktionsbetingelser, der er anvendt til deesterificeringen af -COOR^ og -COOR^ i forbindelsen (I) (fremgangsmåde C). Processerae 10 og 11 kan udføres i en hvilken som helst rækkefølge til dannelse af slut-15 forbindelsen i hver fremgangsmåde og til slut give forbindelsen (XVIII).

PROCES 12

Den i proces 11 vundne forbindelse (XVIII) kan let omdannes til ketonformen (XIX) under anvendelse af kendte reagenser ifølge en i og 20 for sig kendt fremgangsmåde.

PROCES 13

Forbindelsen (XIX) kan omsættes med dicyanodiamid under opvarmning efterfulgt af ringslutning til nydannelse af en kondenseret pyrimi-dinring til at give forbindelsen (XX). Reaktions temperaturen i denne 25 reaktion ligger i området fra 100 til 300°C, fortrinsvis fra 150 til 250°C. Reaktionstiden ligger i området fra 1 til 24 timer. Om nødvendigt kan ringen omdannes til den tilsvarende aromatiske ring ved 22 DK 169703 B1 dehydro genering tinder anvendelse af kendte reagenser ifølge en i og for sig kendt fremgangsmåde.

PROCES 14

Den i proces 13 vundne esterform (XX) kan underkastes deesterifi-5 cering til at give carboxylsyren (II-3). Deesterificeringen kan udføres ifølge den i proces 7 anvendte fremgangsmåde.

PROCES 15

Den i proces 12 vundne forbindelse (XIX) kan aktiveres i o-stillingen i forhold til oxogruppen, og derefter kan en ethoxycarbonylgruppe 10 indføres deri ifølge en sædvanlig fremgangsmåde til dannelse af forbindelsen (XXI).

PROCES 16

Forbindelsen (XXI) kan, når den behandles med guanidin, reagere ved oxogruppen og esterresten efterfulgt af ringslutning (dvs. cykli-15 sering) til nydannelse af en kondenseret pyrimidinring. Der kan anvendes de samme reaktionsbetingelser som I proces 6. Om nødvendigt kan ringen Q omdannes til den tilsvarende aromatiske ring ved dehydrogenering under anvendelse af kendte reagenser ifølge en i og for sig kendt fremgangsmåde.

20 PROCES 17

Den i proces 16 vundne esterform (XXII) kan underkastes deesterifi-cering til dannelse af carboxylsyren (II-4). Esterificeringen kan udføres ifølge den i proces 7 anvendte fremgangsmåde.

De reaktioner, reagenser og reaktionsbetingelser, der er anvendt i 23 DK 169703 B1 processerne 1 til 17 og i fremstillingen af udgangsforbindelsen (II), er kendte og forklaret detaljeret i den følgende litteratur.

[J. F. W. Mcomine, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, London og New York (1973)], [Pine, Hendrikson, Hammond, 5 Organic Chemistry (4. udgave)[I]-[II], Hirokawa Shoten (1982)], og [M. Fieser og L. Fieser, Reagents for Organic Synthesis, bind 1-10,

Wiley Interscience, New York, London, Sydney og Toronto (1969-1982)].

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse og mellemprodukter deraf, der er fremstillet ved disse fremgangsmåder, kan isoleres fra 10 reaktionsblandingerne ved konventionelle metoder til adskillelse og oprensning, såsom koncentration, ekstraktion med opløsningsmiddel, kromatografi, azeotropi og omkrystallisation.

Forbindelserne (I), (II) og (III) ifølge den foreliggende opfindelse kan danne salte. Sådanne salte fremstilles ved de kendte fremgangs-15 måder og er eksemplificeret ved saltene af farmaceutisk acceptable baser eller syrer og kvaternære salte. Salte af baser omfatter salte af alkalimetaller, jordalkalimetaller, ikke-toksiske metaller, ammonium og substitueret ammonium såsom natrium, kalium, lithium, calcium, magnesium, aluminium, zink, ammonium, trimethylammonium, tri-20 ethylammonium, triethanolammonium, pyridinium og substitueret pyridi-nium. Salte af syrer omfatter salte af mineralsyrer såsom saltsyre, svovlsyre, salpetersyre, phosphorsyre og borsyre og salte af organiske syrer såsom oxalsyre, vinsyre, eddikesyre, trifluoreddikesyre, methansulfonsyre og camphorsulfonsyre. Kvaternære salte omfatter 25 salte af methylbromid, methyliodid, methylmethansulfonat, methylben-zensulfonat og methyl-p-toluensulfonat.

Forbindelserne (I), (II) og (IV) kan også danne zwitterioner.

Forbindelserne (I) eller salte deraf ifølge opfindelsen udviser fortræffelige antitumorvirkninger i musetumorcellestammer (P388, 30 L1210, L5178Y, B16 melanoma, MethA, Lewis Lung Carcinoma, S180 sar coma, Ehrlich Carcinoma, Colon38) og humane tumorcellestammer (HL60, Lu65), reducerer tumorer i varmblodige dyr [fx melanoma, sarcoma, 24 DK 169703 B1 mastocytoma, carcinoma, neoplasia, etc.], og forlænger levetiden for varmblodige dyr, der har tumorer.

I det følgende beskrives de resultater, der indikerer de farmaceutiske virkninger hos forbindelserne (I) eller salte deraf ifølge op-5 findelsen.

Den cellevækstinhiberende virkning (IC50) hos de forbindelser, der er vundet i de nedenfor beskrevne eksempler 11 og 12, i HL-60 og HEL blev bestemt ved følgende fremgangsmåde.

(1) En suspension af humane leukæmiceller (2 x 10^ celler/ml) i GTT-10 dyrkningsmedium (Wako Pure Chemicals) indeholdende en forbindelse ifølge opfindelsen blev inokuleret i hver brønd af en 96-micro-brøndplade (0,2 ml pr. brønd) og underkastet stående dyrkning ved 37°C under 5% CO2 i 68 timer. Til suspensionen blev der sat l/tCi[3H]thymi-din (5Ci/mmol) og den blev igen underkastet dyrkning i 4 timer. Til 15 måling af inkorporeringen af thymidin i cellerne blev de syreuoplø-selige fraktioner opsamlet, og radioaktiviteten deraf blev målt ved hjælp af en væskescintillationstæller. Forbindelsens IC50-værdi blev defineret som den koncentration af forbindelsen, der krævedes for at sænke den radioaktivitet, der blev inkorporeret i cellerne i den 20 ubehandlede kontrolgruppe, med 50%.

(2) En suspension af humane føtale lungefibroblaster HEL (1 x 104 celler/ml) i MEM-dyrkningsmedium (Japan Flow Laboratories) blev inokuleret i hver brønd på en 96-micro-brøndplade (0,1 ml pr. brønd) og underkastet stående dyrkning ved 37°C under 5% CO.2 i 24 timer.

25 Hertil blev der sat MEM-dyrkningsmedium indeholdende en forbindelse ifølge opfindelsen, og suspensionen blev igen underkastet dyrkning i 72 timer. Derefter blev dyrkningsmediet erstattet med et dyrkningsmedium indeholdende 1 /ig MTT (Dojindo Laboratories), og derefter blev der tilsat 10% SDS (Wako Pure Chemicals) efterfulgt af inkubering 30 natten over. Absorbansen ved 590 nm blev målt ved hjælp af et Multi-scan-instrument (Titertek), og IC50-værdien blev defineret ved sammenligning med den ubehandlede kontrolgruppe. De opnåede resultater er vist i tabel 1.

25 DK 169703 B1

Tabel 1

Testforbindelse HL-60 HEL

Og/ml) (jug/ml) 5 Forbindelse fra eksempel 11 <0,0025 10,0

Forbindelse fra eksempel 12 <0,0025 5,0

Som vist ved de ovenstående resultater er forbindelserne (I) og salte deraf udmærkede til irihibering af cellevækst af HL-60, medens de ikke udviser toksicitet mod HEL. Forbindelserne (I) ifølge opfindelsen og 10 salte deraf har lav toksicitet og har bemærkelsesværdig antitumorvirkning. Præparater, der indeholder forbindelsen (I) eller et salt deraf, kan derfor anvendes som antitumormidler til behandling af tumorer hos varmblodige dyr, især pattedyr (fx mennesker, mus, rotter , katte, hunde, kaniner, etc.).

15 Når forbindelserne (I) og salte deraf anvendes som antitumoraidler, kan de administreres oralt og parenteralt som sådanne og i form af pulvere, granuler, tabletter, kapsler, suppositorier og injektions -præparater, som fremstilles ifølge de sædvanlige fremgangsmåder under anvendelse af farmaceutisk acceptable excipienser, bærere og diluen-20 ter. Dosen varierer afhængigt af det pågældende dyr, sygdommen, symptomerne, forbindelserne og administrationsvejene; fx er den daglige dosis af en forbindelse ifølge opfindelsen ca. 1,0 til 50 mg pr. kg kropsvægt af de ovenfor beskrevne varmblodige dyr til oral administration og ca. 1,0 til 20 mg/kg til parenteral administration.

25 Injektionspræparater kan administreres intramuskulært, intraperitone-alt, subkutant eller intravenøst.

Præparaterne fremstilles på i og for sig kendt måde. De ovennævnte orale præparater, fx tabletter, fremstilles ved en egnet kombination med et bindemiddel (fx hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethyl-30 cellulose, macrogol, etc.), et sprængemiddel (fx stivelse, calcium-carboxylmethylcellulose, etc.) eller et glittemiddel (fx magnesium-stearat, talkum, etc.).

26 DK 169703 B1

Parenterale præparater, fx injektionspræparater, fremstilles ved en passende kombination med et middel til opnåelse af isotonicitet (fx glucose, D-sorbitol, D-mannitol, natriumchlorid, etc.)i et antiseptisk middel (fx benzylalkohol, chlorbutanol, methyl-p-hydroxybenzoat, 5 propyl-p-hydroxybenzoat, etc.) og en puffer (fx phosphatpuffer, natriumacetatpuffer, etc.).

Et eksempel på en fremgangsmåde til fremstilling af tabletter omfatter blanding af ca. 1,0 til 50 mg af forbindelsen ifølge opfindelsen, 100 til 500 mg lactose, ca. 50 til 100 mg majsstivelse og ca. 5 10 til 20 mg hydroxypropylcellulose til fremstilling af en tablet ved sædvanlige metoder, granulering, blanding med majsstivelse og magne-siumstearat og tablettering, så der fås tabletter, der hver vejer ca.

100 til 500 mg og har en diameter på ca. 3 til 10 mm. Tabletterne kan overtrækkes med en blanding af acetone og ethanol, idet blandingen 15 indeholder hydroxypropylmethylmethylcellulosephthalat (ca. 10 til 20 mg pr. tablet) og ricinusolie (0,5 til 2 mg) ved en koncentration på ca. 5 til 10% til dannelse af enterisk overtrukne tabletter.

Et eksempel på en fremgangsmåde til fremstilling af et injicerbart præparat omfatter opløsning af ca. 5,0 til 50 mg af et natriumsalt 20 af en forbindelsen ifølge opfindelsen i ca. 2 ml fysiologisk saltvand til fremstilling af en ampul, forsegling af den resulterende opløsning i en ampul og sterilisation af ampullen ved 110'C i ca. 30 minutter eller opløsning af ca. 5,0 til 50 mg af et natriumsalt af en forbindelse ifølge opfindelsen i ca. 2 ml sterilt destilleret vand, 25 hvor ca. 10 til 40 mg mannitol eller sorbitol opløses i ampullen, frysetørring og forsegling af ampullen. Til anvendelse af den frysetørrede forbindelse til subkutan, intravenøs, eller intramuskulær injektion, åbnes ampullen, og indholdet opløses i fx fysiologisk saltvand, idet koncentrationen af forbindelsen kan være ca. 1,0 til 30 20 mg/ml.

Følgende referenceeksempler og eksempler beskriver den foreliggende opfindelse mere detaljeret. I disse eksempler betegner stuetemperatur ca. 20°C.

DK 169703 B1 . 27 REFERENCEEKSEMPEL 1

Fremstilling af methyl-5-[4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl]pentanoat:

Under en atmosfære af argon blev kalium (25 g) sat til tørret tert-butylalkohol (820 ml), som blev tilbagesvalet under opvarmning indtil 5 fuldstændig opløsning. Opløsningen blev afkølet til 20“C, og der blev tilsat ether (300 ml), hvorpå en opløsning af methylerotonat (63,93 g) og tert-butyl-4-formylbenzoat (71,0 g) i tert-butylalko-hol/ether (2:1, 300 ml) blev langsomt tilsat, medens den indre temperatur blev holdt på 10°C. Efter omrøring ved den samme temperatur i 10 2 timer blev IN kaliumhydrogensulfat i vand (75 ml) tilsat under afkøling på en sådan måde, at pH blev indstillet til 4. Opløsningen blev ekstraheret med ether, vasket med vand og derefter med mættet saltvand og underkastet afdampning af opløsningsmidlet under reduceret tryk. Den resulterende remanens blev opløst i ethylacetat 15 (100 ml), hvortil 5%Pd-C (15 g: Engelhard Co.) blev tilsat og omrørt kraftigt under et hydrogentryk på 4 kg/cm^ ved stuetemperatur i 3 timer. Katalysatoren blev filtreret fra, opløsningsmidlet blev af-dampet under reduceret tryk, og til remanensen blev der sat tørret methanol (200 ml), 4-(N,N-dimethylamino)pyridin (30 mg) og dichlor-20 methan (250 ml), hvorpå en opløsning af 1,3-dicyclohexylcarbodiimid (132 g) i dichlormethan (250 ml) langsomt og dråbevis blev tilsat ved 0°C. Efter omrøring ved stuetemperatur i 18 timer blev blandingen afkølet til 0eC, og eddikesyre (30 ml) blev tilsat, hvorpå blandingen blev omrørt ved 0eC i 30 minutter og derefter ved stuetemperatur i 30 25 minutter. Det resulterende bundfald blev filtreret fra, filtratet blev koncentreret til tørhed under reduceret tryk, og til remanensen blev der tilsat ethylacetat (100 ml), og blandingen blev holdt ved 0°C i 2 timer, hvorpå det resulterende bundfald igen blev filtreret fra. Filtratet blev koncentreret under reduceret tryk, og remanensen 30 blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silieagel, 500 g; eluent: ether:hexan = 1:15->1:5), hvilket gav slutforbindelsen (59,7 g).

Smp. (kogepunkt) 145-155°C/0,2-0,3 mmHg 28 DK 169703 B1 IR (ren): 2980, 2950, 1740, 1712, 1605 cm'1 1H-NMR (CDC13) S: 1,40-1,75 (4H,m), 1,55 (9H,s), 2,15-2,45 (2H,m), 2,50-2,75 (2H,m), 3,62 (3H,s), 7,16 (2H,d,J=8Hz), 7,85 (H,d, J=8Hz).

5 REFERENCEEKSEMPEL 2

Fremstilling af methyl-5-[4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl]-2-(di-methoxymethyl) pentanoat :

Under en atmosfære af argon blev der til en opløsning af diisopropyl-amin (8,35 g) i tetrahydrofuran (150 ml) tilsat en opløsning af 10 butyllitbium (82,5 mmol) i hexan (51,6 ml) ved 0°C, hvorpå blandingen blev omrørt i 10 minutter. Hertil blev der efter afkøling til -78°C dråbevis tilsat en opløsning af den i referenceeksempel 1 vundne forbindelse (21,93 g) i tetrahydrofuran (50 ml) i løbet af 30 minutter. Efter omrøring i 30 minutter blev chlortrime thyls ilan (15 ml) 15 tilsat på én gang. Blandingens temperatur blev bragt op på stuetemperatur i løbet af 2 timer, efterfulgt af afdampning af opløsningsmidlet og tilsætning af tørret toluen (30 ml x 2). Chlor-trimethyl-silanen blev afdampet fuldstændigt under reduceret tryk. Til remanensen blev der tilsat tørret toluen (30 ml). Efter at det uopløselige 20 stof var blevet fjernet ved filtrering, blev opløsningsmidlet afdampet under reduceret tryk, hvilket gav ketensilylacetalen af mellemproduktet. Under en atmosfære af argon blev tin(I)chlorid (2,84 g) og triphenylmethylchlorid (4,18 g) suspenderet i dichlormethan (150 ml), og dertil blev der langsomt tilsat en opløsning af den 25 ovenfor beskrevne ketensilylacetal og methylorthoformiat (9,55 g) i dichlormethan (50 ml) . Da reaktionsblandingens klare gule farve forsvandt, blev der tilsat titaniumtetrachlorid (1,5 ml). Efter omrøring ved -78°C i 30 minutter blev reaktionsblandingen sat til en opløsning (150 ml) af 0,5 N natriumhydrogencarbonat, efterfulgt af 30 omrøring ved stuetemperatur i 30 minutter. Bundfaldet blev fjernet ved filtrering, og filtratet blev ekstraheret med dichlormethan. Ekstrakten blev tørret over vandfrit natriumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk. Den vundne remanens blev 29 DK 169703 B1 oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 200 g; eluent: ethylacetat:hexan = 1:12-*1:8), hvilket gav slutforbindelsen (11,0 g).

IR (ren): 2940, 1740, 1715, 1608 cm'1 %-NMR (CDC13) δ: 1,40-1,85 (4H,m), 1,57 (9H,s), 2,45-2,90 (3H,m), 5 3,30 (3H,s), 3,33 (3H,s), 3,69 (3H,s), 4,48 (lH,d,J=8Hz), 7,20 (2H,d,J=8Hz), 7,88 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 3

Fremstilling af t-butyl-4-[4-(dimethoxymethyl)-5-hydroxypentyl]ben-10 zoat:

Under en atmosfære af argon blev til en opløsning af den i reference-eksempel 2 vundne forbindelse (11,0 g) i ether (50 ml) tilsat lithiumborhydrid .(980 mg) ved 0°C, og temperaturen blev hurtigt bragt op på stuetemperatur, efterfulgt af omrøring natten over. Til reak-15 tionsblandingen blev der tilsat methanol (70 ml) ved 0°C, og efter omrøring i 30 minutter blev pH indstillet til 6 med isvand (10 ml) og IN vandig kaliumhydrogensulfatopløsning. Blandingen blev ekstraheret med ether, og ekstrakten blev vasket med vand, derefter med mættet natriumchloridopløsning og tørret over vandfrit natriumsulfat. Op-20 løsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og remanensen blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 200 g; eluent: ethylacetat:hexan=l:3), hvilket gav slutforbindelsen (7,98 g).

IR (ren) : 3450, 2925, 1707, 1604 crn-1 1H-NMR (CDCI3) 5: 1,20-1,95 (5H,m), 1,60 (9H,s), 2,33 (2H,t,J=8Hz), 25 2,40 (lH.brs), 3,35 (3H,s), 3,41 (3H,s), 3,50-3,73 (2H,m), 4,27 (IH,d,J=6Hz), 7,21 (2H,d,J=8Hz), 7,90 (2H,d,J=8Hz).

30 DK 169703 B1 REFERENCEEKSEMPEL 4

Fremstilling af t-butyl-4-[4-(dimethoxymethyl)-5-(methylsulfonyloxy)-p enty 1 ] b enz o at:

Den i referenceeksempel 3 vundne forbindelse (7,98 g) blev opløst i 5 en blanding af pyridin og dichlormethan (1:1, 40 ml) og dertil blev der tilsat methansulfonylchlorid (3,24 g) ved -15°C. Temperaturen blev hurtigt bragt op på 0°C, efterfulgt af omrøring i 2 timer. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og til remanensen blev der tilsat ether (150 ml) og triethylamin (476 mg), efter-10 fulgt af omrøring i 3 minutter. Etherfasen blev successivt vasket med vand, mættet vandig kobbersulfatopløsning og mættet natriumchlorid-opløsning og blev derefter tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, hvilket gav slut-forbindelsen (9,83 g).

15 IR (ren): 2940, 1714, 160.8, 1370, 1180 cm’1 1H-NMR (CDC13) 6: 1,30-1,80 (5H,m), 1,63 (9H,s), 2,68 (2H,t,J=7Hz), 3,00 (3H,s), 3,43 (6H,s), 4,20-4,35 (3H,m), 7,26 (2H,d,J=8Hz), 7,93 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 5 20 Fremstilling af ethyl-7-[4-tert-butoxycarbonyl)phenyl]-2-cyano-4-(di-methoxymethyl) hep tanoat:

Under en atmosfære af argon blev der til en suspension af kalium-tert-butoxid (10,60 g) og natriumiodid (3,54 g) i tetrahydrofuran (100 ml) dråbevis tilsat en opløsning af ethylcyanoacetat (10,68 g) i 25 tetrahydrofuran (50 ml) og hexamethylphosphoramid (25 ml) ved 0eC.

Efter omrøring ved stuetemperatur i 5 minutter blev der til denne blanding sat en opløsning af den i referenceeksempel 4 vundne forbindelse (9,83 g) i tetrahydrofuran (50 ml). Efter tilbagesvaling under opvarmning i 2,5 timer blev temperaturen afkølet til stuetem-30 peratur. Reaktionsblandingen blev hældt i isvand og indstillet til pH 6 med IN vandig kaliumhydrogensulfatopløsning. Der blev ekstraheret 31 DK 169703 B1 med ether, og ekstrakten blev vasket med vand og derefter med mættet natriumchloridopløsning og tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og den resulterende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 5 250 g; eluent: ethylacetat:hexan=l:7), hvilket gav slutforbindelsen (7,52 g).

IR (ren): 2980, 2940, 2245, 1748, 1713, 1697 cm*1 ^-NMR (CDC13) S: 1,20-2,20 (7H,m), 1,30 (3H,d,J=7Hz), 1,60 (9H,s), 2,66 (2H,t,J=7Hz), 3,30-3,40 (6H,m), 3,63-4,10 10 (lH,m), 4,15 (lH,d, J=3Hz) , 4,23 (2H,t,J=7Hz), 7,23 (2H,d,J=8Hz), 7,93 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 6

Fremstilling af tert-butyl-4-[5-(2,6-diamino-4-hydroxypyrimidin-5-yl)-4-(dimethoxymethyl)pentyl]benzoat: 15 Til en opløsning af kalium-tert-butoxid (3,89 g) og guanidin-hydro-chlorid (1,99 g) i tert-butylalkohol (30 ml) blev der tilsat en opløsning af den i referenceeksempel 5 vundne forbindelse (7,52 g) i tert-butylalkohol (30 ml) under en atmosfære af argon, og blandingen blev tilbagesvalet under opvarmning i 3,5 timer. Til reaktionsbian -20 dingen blev der tilsat eddikesyre (834 mg) og vand (50 ml), efterfulgt af ekstraktion med en blanding af chloroform:tetrahydrofuran (1:1). Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og den resulterende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 240 g; eluent: dichlormethan:ethanol=10:l), hvilket gav 25 slutforbindelsen (5,14 g).

IR (KBr): 3350, 2930, 1710, 1620, 1497, 1450 cnf1 1H-NMR (CDCI3) S: 1,10-2,00 (5H,m), 1,56 (9H,s), 2,10-2,40 (2H,m), 2,58 (2H,brt,J=7Hz), 3,33 (3H,s), 3,38 (3H,s), 4,12 (IH,d,J=4Hz), 5,03 (2H,brs), 5,70 (2H,brs), 30 7,18 (2H,d,J=8Hz), 7,78 (2H,d,J-8Hz).

32 DK 169703 B1 REFERENCEEKSEMPEL 7

Fremstilling af tert-butyl-4-[6,6-dicyano-4-(dime thoxyme thyl)hexyl]-benzoat:

Under en atmosfære af argon blev der til en suspension af natrium-5 hydrid (3,00 g) og natriumiodid (3,75 g) i dimethylsulfoxid (15 ml) dråbevis under isafkøling tilsat en opløsning af malononitril (8,26 g) i dimethylsulfoxid (15 ml). Efter omrøring ved stuetemperatur i 15 minutter blev en opløsning af den i referenceeksempel 4 vundne forbindelse (10,41 g) i dimethylsulfoxid (15 ml) tilsat, 10 efterfulgt af opvarmning ved 60°C i 5 timer og derefter afkøling til stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev hældt i isvand og indstillet til pH 6 med IN vandig kaliumhydrogensulfatopløsning. Efter ekstraktion med ether blev den organiske fase vasket successivt med vand og mættet natriumchloridopløsning og blev derefter tørret over vandfrit 15 natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev af dampet under reduceret tryk, og den resulterende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 300 g; eluent: ethylacetat:hexan=l:8), hvilket gav slutforbindelsen (6,97 g).

IR (ren): 2948, 2255, 1715, 1605 cm-1 20 1H-NMR (CDC13) S: 1,15-2,50 (7H;m), 1,60 (9H,s), 2,67 (2H,t,J=7Hz), 3,36 (3H,s), 3,40 (3H,s), 4,13 (lH,d,J=3Hz), 4,32 (IH,dd,J=10Hz,6Hz), 7,20 (2H,d,J=8Hz), 7,90 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 8 25 Fremstilling af tert-butyl-4-[5-(2,4,6-triaminopyridin-5-yl)-4-(di-methoxyme thyl)penty1]benzoat:

Den i referenceeksempel 7 vundne forbindelse (663 mg) blev underkastet den samme reaktion som i referenceeksempel 6, hvilket gav slutforbindelsen (648 mg).

33 DK 169703 B1 IR (KBR): 3480, 3390, 3200, 2940, 1710, 1604, 1570, 1430 cm'1 ‘•H-NMR (CDC13) 5: 1,30-2,00 (5H,m), 1,60 (9H,s), 2,05-2,43 (2H,m), 2,43-2,77 (2H,m), 3,34 (3H,s), 3,39 (3H,s), 4,15 (IH,d,J=3Hz), 4,47 (2H,brs), 4,62 (4H,brs), 7,18 5 (2H,d,J=8Hz), 7,88 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 9

Fremstilling af tert-butyl-4- [4- (dimethoxymethyl) -5-oxopentyl]ben-zoat:

Til en opløsning af oxalylchlorid (558 mg) i dichlormethan (10 ml) 10 blev der tilsat en opløsning af dimethylsulfoxid (668 mg) i dichlormethan (2 ml) ved -50°C, efterfulgt af omrøring i 2 minutter, hvorpå der til den resulterende reaktionsblanding blev tilsat en opløsning af den i referenceeksempel 3 vundne forbindelse (1,354 g) i dichlormethan (5 ml), og dertil blev efter omrøring i 15 minutter 15 dråbevis tilsat triethylamin (2,8 ml). Efter omrøring i 5 minutter blev temperaturen bragt op på stuetemperatur i løbet af 30 minutter.

Til den resulterende blanding blev der tilsat vand (20 ml), efterfulgt af ekstraktion med dichlormethan. Ekstrakten blev tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdampet under redu-20 ceret tryk, og den resulterende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 20 g; eluent: ethylacetat:hexan=l:5), hvilket gav slutforbindelsen (1,27 g).

IR (KBr): 2975, 2940, 1727, 1708, 1604 cm'1 1H-NMR (CDCI3) S: 1,40-1,80 (4H,m), 1,55 (9H,s), 2,45-2,76 (3H,m), 25 3,30 (3H,s), 3,33 (3H,s), 4,45 (lH,d,J=6Hz), 7,15 (2H,d,J=8Hz), 7,85 (2H,d,J=8Hz), 9,60 (lH,d,J=4Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 10

Fremstilling af tert-butyl-4- [4- (dime thoxyme thyl)-5-hydroxyhexyl]ben-30 zoat: 34 DK 169703 B1

Til en opløsning af den i referenceeksempel 9 vundne forbindelse (5,45 g) i tetrahydrofuran (15 ml) blev der dråbevis tilsat en opløsning af methylmagnesiumbromid i tetrahydrofuran (12,3 ml, 24,1 mmol) ved -78eC under en atmosfære af argon. Efter omrøring ved 5 -78°C i 1 time og derefter ved stuetemperatur i 1 minut blev der tilsat en mættet vandig ammoniumchloridopløsning (80 ml), efterfulgt af ekstraktion med ether. Den vundne organiske fase blev vasket med mættet natriumchloridopløsning og tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og den resul-10 terende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silica-gel, 100 g; eluent: ethylacetat:hexan=l:3), hvilket gav slutforbin-delsen (4,46 g).

IR (ren): 3480, 2980, 2940, 1712, 1608 cm"1 1H-NMR (CDC13) S: 1,07 (1,5H,d,J=7Hz), 1,12 (l,5H,d,J=7Hz), 15 1,25-1,90 (5H,m), 1,54 (9H,s), 2,50-2,75 (2H,m),‘ 3,93 (IH,d,J=5Hz), 3,30 (l,5H,s), 3,32 (l,5H,s), 3,37 (3H,s), 3,70-4,20 (lH,m), 4,27 (0,5H,d,J=7Hz), 4,32 (0,5H,d,J=5Hz), 7,18 (2H,d,J-8Hz), 7,84 (2H,d,J-8Hz).

20 REFERENCEEKSEMPEL 11

Fremstilling af tert-butyl-4-[4-(dimethoxymethyl)-5-(methyl-sulfonyloxy)hexyl]benzoat:

Den i referenceeksempel 10 vundne forbindelse (4,46 g) blev underkastet den samme reaktion som i referenceeksempel 4, hvilket gav 25 slutforbindelsen (5,45 g).

35 DK 169703 B1 IR (ren): 2920, 1700, 1604, 1340, 1170cm·1 1H-NMR (CDC13) S: 1,20-1,95 (5H,s), 1,33 (l,5H,d,J=6Hz), 1,40 (l,5H,d,J=5Hz), 1,59 (9H,s), 2,66 (2H,t,J=7Hz), 2,95 (3H,s), 3,35 (6H,s), 4,22 (IH,dd,J=8Hz, 5 6Hz), 4,83-5,13 (lH,m), 7,21 (2H,d,J=8Hz), 7,89 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 12

Fremstilling af ethyl-7-[4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl]-2-cyano- 3-methyl-4- (dime thoxymethyl)]heptanoat: 10 Den i referenceeksempel 11 vundne forbindelse (5,70 g) blev underkastet den samme reaktion som i referenceeksempel 5, hvilket gav slutforbindelsen (2,88 g).

IR (KBr): . .2980, 2940, 2240, 1743, 1710, 1604 cm'1 1H-NMR (CDCI3) S : 0,88-1,15 (3H,m), 1,20-1,80 (6H,m), 1,31 15 (3H,t,J=7Hz), 1,58 (9H,s), 2,65 (2H,t,J=7,5Hz), 3,35 (6H,s), 4,07-4,25 (2H,m), 4,23 (2H,q,J=7Hz), 7,20 (2H,d,J=8Hz), 7,89 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 13

Fremstilling af tert-butyl-4-[5-(2,6-diamino-4-hydroxypyrimidin-20 5-yl) -4- (dime thoxyme thyl) -5-methylpentyl]benzoat:

Den i referenceeksempel 12 vundne forbindelse (569 mg) blev underkastet den samme reaktion som i referenceeksempel 6, hvilket gav slutforbindelsen (274 mg) som diastereomereme i forholdet 1:3 (ifølge elueringen).

36 DK 169703 B1

Hovedprodukt: IR (KBr): 3350, 2978, 2940, 1710, 1650, 1640-1600 cm'1 ^-NMR (CDC13) S: 1,25 (3H,d,J=7Hz), 1,30-1,95 (4H,m), 1,60 (9H,s), 2,03-2,33 (lH,m), 2,40-2,73 (3H,m), 3,26 (3H,s), 5 3,31 (3H,s), 4,05 (IH,d,J=3Hz), 4,83 (2H,brs), 5,38 (2H,brs), 7,21 (2H,d,J=8Hz), 7,89 (2H,d,J=8Hz).

Biprodukt: IR (KBr): 3350, 2935, 1710, 1637, 1620, 1605 cm’1 10 ^-H-NMR (CDCI3) δ : 1,25-1,85 (4H,m), 1,31 (3H,d, J=7Hz), 1,60 (9H,s), 1,95-2,25 (lH,m), 2,55 (2H,t,J=7Hz), 2,60-2,90 (lH,m), 3,38 (6H,s), 4,27 (2H,d,J=5Hz), 4,93 (2H,brs), 5,25 (2H,brs), 7,17 (2H,d,J=8Hz), 7,83 (2H,d,J=8Hz).

15 REFERENCEEKSEMPEL 14

Fremstilling af 5- [4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl]-5-hydroxy-2-hexen-syre:

Til en suspension, der var vundet ved at tilsætte en opløsning af 4-acetylbenzoesyre-tert-butylester (7,82 g) i benzen/ether/tetrahy-20 drofuran (3:3:2, 80 ml) til 4,64 g (71 mmol) zink, blev der lidt efter lidt under opvarmning og omrøring tilsat 4-bromerotonsyre-methylester (6,36 g) og iod (20 mg). Efter tilbagesvaling under opvarmning i et oliebad ved 70°C i 1 time blev methyl-4-bromcrotonat (2,13 g) og zink (1,55 g) tilsat, efterfulgt af tilbagesvaling under 25 opvarmning i 30 minutter. Temperaturen blev sænket til stuetemperatur, og reaktionsblandingen blev hældt i vand (300 ml) og indstillet til pH 5 med eddikesyre. Den organiske fase, der var vundet ved ekstraktion med ether, blev vasket med 5% vandig ammoniak og derefter tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdampet 30 under reduceret tryk, og den resulterende remanens blev oprenset ved 37 DK 169703 B1 søjlekromatografi (bærer: silicagel, 200 g; eluent: ethylacetat:hexan = 1:4), hvilket gav slutforbindelsen (9,2 g).

IR (ren): 3480, 2975, 1720, 1700, 1650, 1605 cm'1 %-NMR (CDC13) δ: 1,53 (12H,s), 2,64 (2H,d,J=7Hz), 2,67 (lH,brs), 5 3,63 (3H,s), 5,80 (lH,d,J=15Hz), 6,80 (lH,dt,J=15Hz,7Hz), 7,45 (2H,d,J=8Hz), 7,90 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 15

Fremstilling af methyl-5- [4- (tert-butoxycarbonyl)phenyl]hexanoat: 10 Til en opløsning af den i referenceeksempel 14 vundne forbindelse (120 mg) i ethanol (3 ml) blev der tilsat 10% Pd-C (60 mg) og eddikesyre (30 mg), efterfulgt af kraftig omrøring i 10 timer under et hydrogentryk på 4 kg/cm^. Katalysatoren blev fjernet ved filtrering, og opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk. Den resul-15 terende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 10 g; eluent: ethylacetat:hexan = 10:1), hvilket gav slutforbindelsen (107 mg) som en farveløs olie.

IR (ren): 2950, 2920, 1735, 1700, 1602 cm"1 1H-NMR (CDCI3) δ: 1,20-1,75 (4H,m), 1,23 (3H,d,J=6,5Hz), 1,57 20 (9H,s), 2,24 (2H,brt,J=6,5Hz), 2,53-2,95 (lH,m), 3,62 (3H,s), 7,21 (2H,d,J=8Hz), 7,90 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 16

Fremstilling af 5-[4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl]-2-(dimethoxy-25 methyl)hexansyre:

Den i referenceeksempel 15 vundne forbindelse (5,62 g) blev underkastet den samme reaktion som i referenceeksempel 2, hvilket gav slutforbindelsen (4,86 g).

38 DK 169703 B1 IR (ren): 2959, 1732, 1703, 1600 cm-1 %-NMR (CDC13) S: 1,22 (3H,d,J=7Hz), 1,25-1,70 (4H,m), 1,59 (9H,s), 2,50-2,90 (2H,m), 3,25 (3H,s), 3,31 (3H,s), 3,68 (3H,s), 4,43 (lH,dd,J=8Hz,3Hz), 7,20 5 (2H,d,J=8Hz), 7,93 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 17

Fremstilling af tert-butyl-4- [4- (dimethoxymethyl) -5-hydroxy-l-methyl-pentyl ] benzoat:

Den i referenceeksempel 16 vundne forbindelse (4,83 g) blev under-10 kastet den samme reaktion som i referenceeksempel 3, hvilket gav s lutforbindelsen (4,14 g).

IR (ren): 3460, 2940, 1712, 1606, 1570 cm-1 1H-NMR (CDCI3) S: 1,10-2,20 (6H,m), 1,24 (3H,d,J=7Hz), 1,56 (9H,s), 2,72 (IH,tq,J=7Hz,7Hz), 3,28 (3H,s), 3,36 (3H,s), 15 3,45-3,68 (2H,m), 4,20 (lH,d,J-6Hz), 7,20 (2H,d,J=8Hz), 7,88 (2H,d, J=*8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 18

Fremstilling af tert-butyl-4- [4- (dime thoxyme thyl) -1-methyl-5- (methyl-sulfonyloxy)pentyl]benzoat: 1

Den i referenceeksempel 17 vundne forbindelse (4,13 g) blev underkastet den samme reaktion som i referenceeksempel 4, hvilket gav slutforbindelsen (5,03 g).

39 DK 169703 B1 IR (ren): 2970, 2945, 1713, 1608, 1360, 1175 cm’1 1H“NMR (CDC13) 5: 1,20-1,80 (4H,m), 1,25 (3H,d,J=7Hz), 1,56 (9H,s), 2,72 (2H,tq,J=7Hz,7Hz), 2,91 (l,5H,s), 2,92 (1,5H,s), 3,30 (3H,s), 3,31 <l,5H,s), 3,32 5 (1,5H,s) 4,15-4,26 (3H,m), 7,21 (2H,d,J=8Hz), 7.90 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 19

Fremstilling af ethyl-7- [4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl] -2-cyano-4-(dimethoxymethyl)oetanoat: 10 Den i referenceeksempel 18 vundne forbindelse (5,25 g) blev underkastet den samme reaktion som i referenceeksempel 5, hvilket gav slutforbindelsen (3,84 g).

IR (ren): . .2960, 2930, 2240, 1745, 1710, 1603 cm"1 1H-NMR (CDCI3) 5: 1,10-2,20 (7H,m), 1,25 (3H,d,J=7Hz), 1,31 15 (3H,t,J=7Hz), 1,58 (9H,s), 2,68 (IH,tq,J=7Hz,7Hz), 3,20-3,40 (6H,m), 4,00-4,10 (2H,m), 4,21 (2H,q,J=7Hz), 7,20 (2H,d,J=8Hz), 7.91 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 20 20 Fremstilling af tert-butyl-4-[5-(2,6-diamino-4-hydroxypyridin-5-yl)-4-(dimethoxymethyl)-l-methylpentyl]benzoat:

Den i referenceeksempel 19 vundne forbindelse (3,84 g) blev underkastet den samme reaktion som i referenceeksempel 6, hvilket gav slutforbindelsen (3,64 g).

40 DK 169703 B1 IR (KBr): 3355, 3220, 2965, 2940, 1713, 1620 cm'1 l-H-NMR (CDC13) S: 1,10-1,95 (5H,m), 1,19 (3H,d,J=7Hz), 1,58 (9H,s), 2,15-2,40 (2H,m), 2,50-2,83 (lH,m), 3,20-3,40 (6H,m), 4,10 (lH,d,J=4,5Hz), 5,00 (2H,brs), 5,62 5 (2H,brs), 7,20 (2H,d,J=8Hz), 7,90 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 21

Fremstilling af 4-[(tert-butyldimethylsilyl)oxy]cyclohexanol:

Til en opløsning af 1,4-cyclohexandiol (cis:trans = ca. 1:1, 25,0 g) og t-butylchlordimethylsilan (32,4 g) i dimethylformamid (150 ml) 10 blev der langsomt og dråbevis tilsat en opløsning af triethylamin (21,8 g) og 4-(dimethylamino)pyridin (1,05 g) i dimethylformamid (50 ml) ved 0°C. Efter omrøring i én time blev vand og ether sat til reaktionsblandingen. Etherfasen blev skilt fra, vasket med vand og mættet vandig natriumchlorid og tørret over vandfrit magnesiumsulfat.

15 Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og den resulterende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silica-gel, 300 g; eluent: ethylacetat:hexan = 1:5), hvilket gav slutfor-bindelsen (17,8 g) som en blanding af cis- og trans-isomerer (ca.

1:1).

20 IR (ren): 3350, 2955, 2940, 2895, 2865, 1375, 1255 cm’1 1H-NMR (CDCI3) S: -0,03 (6H,s), 0,90 (9H,s), 1,13-1,90 (8H,m), 1,30 (IH,s), 3,40-3,80 (2H,m) cm'1.

REFERENCEEKSEMPEL 22

Fremstilling af t-[(tert-butyldimethylsilyl)oxy]cyclohexanon: 25 Til en opløsning af oxalylchlorid (10,73 g) i dichlormethan (200 ml) blev der tilsat en opløsning af dimethylsulfoxid (14,40 g) i dichlormethan (30 ml) ved -60°C, efterfulgt af omrøring i 5 minutter.

Til reaktionsblandingen blev der tilsat en opløsning af den i referenceeksempel 21 vundne forbindelse (17,7 g) i dichlormethan 41 DK 169703 B1 (75 ml), og efter omrøring i 15 minutter blev der yderligere dråbevis tilsat triethylamin (38,9 g). Efter omrøring i 5 minutter blev temperaturen bragt op på stuetemperatur i løbet af 30 minutter. Til blandingen blev der sat vand (200 ml) , og ekstraktion blev udført med 5 dichlormethan. Ekstrakten blev tørret over vandfrit natriumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk. Den resulterende remanens blev inddampet under reduceret tryk, hvilket gav slutfor-bindelsen (16,3 g).

Ko gepunkt: 7 60 C/0,3 mmHg.

10 IR (KBr): 2955, 2928, 2860, 1720, 1250 cm-1 1H-NMR (CDC13) S: -0,03 (6H,s), 0,80 (9H,s), 1,13-1,95 (8H,m), 1,30 (IH,s), 3,40-3,80 (2H,m).

REFERENCEEKSEMPEL 23

Fremstilling af methyl-3-[4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl]acrylat: 15 En opløsning af tert-butyl-4-formylbenzoat (28,4 g) og methyl-(tri-phenylphosphoranyliden)acetat (46,0 g) i toluen (400 ml) blev omrørt under opvarmning i 1 time. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og den resulterende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 400 g; eluent: ethylacetat:hexan = 20 1:30), hvilket gav slutforbindelsen (27,8 g).

IR (KBr): 2985, 1720, 1710, 1640, 853 cm'1 ^H-NMR (CDCI3) S: 1,57 (9H,s), 3,79 (3H,s), 6,48 (IH,d,J=15,5Hz), 7,55 (2H,d,J=8Hz), 7,68 (lH,d,J=15,5Hz), 7,97 (2H,d,J=8Hz).

25 REFERENCEEKSEMPEL 24

Fremstilling af methyl-3- [4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl]propionat: 42 DK 169703 B1

Den i referenceeksempel 23 vundne forbindelse (22,5 g) blev opløst i en blanding af ethylacetat og methanol (2:1, 300 ml), og dertil blev der tilsat 10% Pd-C (4,0 g), efterfulgt af omrøring ved stuetemperatur i 4 timer under en atmosfære af hydrogen. Pd-C blev fjernet ved 5 filtrering med celit, og opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, hvilket gav slutforbindelsen (22,5 g).

IR (ren): 2980, 1745, 1717, 1610, 850 cm-1 ^-H-NMR (CDC13) 5: 1,57 (9H,s), 2,55 (lH,dd,J=6,5Hz,l,5Hz), 2,65 (lH,d,J=6,5Hz), 2,94 (H,d,J=6,5Hz), 3,02 10 (IH,dd,J=6,5Hz,1,5Hz), 3,64 (3H,s), 7,23 (2H,d,J-8Hz), 7,90 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 25

Fremstilling af tert-butyl-4-(3-hydroxypropyl)benzoat:

Til en opløsning af den i referenceeksempel 24 vundne forbindelse 15 (22,8 g) i tørret ether (150 ml) blev der tilsat lithiumborhydrid (2,81 g) ved 0°C. Temperaturen blev hurtigt bragt op på stuetemperatur, efterfulgt af omrøring i 15 timer. Til reaktionsblandingen blev der ved 0°C tilsat IN vandig kaliumhydrogensulfatopløsning (ca.

125 ml), således at pH blev indstillet til 6,5. Efter ekstraktion med 20 ether blev etherfasen vasket med mættet vandig natriumchlorid og tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, hvilket gav slutforbindelsen (20,1 g).

IR (ren): 3400, 2978, 2935, 1712, 1607, 848 cm'1.

%-NMR (CDCI3) δ: 1,48 (IH,s), 1,60 (9H,s), 1,70-2,01 (2H,m), 2,73 25 (2H,t,J=6,5Hz), 3,63 (2H,t,J-6,5Hz), 7,22 (2H,d,J-8Hz), 7,89 (2H,d,J-8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 26

Fremstilling af tert-butyl-4-(3-brompropyl)benzoat: 43 DK 169703 B1

Til en opløsning af N-bromsuccinimid (15,06 g) og triphenylphosphin (22,20 g) i dimethylformamid (100 ml) blev der tilsat en opløsning af den i referenceeksempel 25 vundne forbindelse (10,0 g) i dimethylformamid (50 ml) ved stuetemperatur, efterfulgt af omrøring i 30 5 minutter. Temperaturen blev bragt op på 50°C, og efter omrøring i 1 time blev reaktionsblandingen hældt i isvand og ekstraheret med ether. Etherfasen blev vasket med vand og derefter med mættet vandig natriumchlorid og tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og den resulterende remanens 10 blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 100 g; eluent: ethylacetat:hexan = 1:15), hvilket gav slutforbindelsen (11,89 g).

IR (ren): 2975, 2930, 1710, 1606, 846 cm-1.

^-NMR (CDC13) δ: 1,58 (9H,s), 1,98-2,40 (2H,m), 2,82 (2H,t,J=7,5Hz), 3,35 (2H,t,J=6Hz), 7,25 15 (2H,d,J=8Hz), 7,90 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 27

Fremstilling af 3-[4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl]propyl]triphenyl-phosphoniumbromid:

En opløsning af den i referenceeksempel 26 vundne forbindelse 20 (11,89 g) og triphenylphosphin (10,41 g) i xylen (50 ml) blev op varmet til 155°C og omrørt i 48 timer. Efter afkøling blev de udfældede hvide krystaller opsamlet ved filtrering og vasket med benzen, hvilket gav slutforbindelsen (19,78 g).

IR (KBr): 2975, 2850, 2775, 1710, 1605, 1290, 1110, 856 cm*1.

25 l-H-NMR (CDCI3) δ: 1,55 (9H,s), 1,80-2,13 (2H,m), 3,12 (2H,t,J=7,5Hz), 3,70-4,10 (2H,m), 7,25 (2H,d,J=8Hz), 7,50-7,95 (15H,m), 7,83 (2H,d,J=8Hz).

44 DK 169703 B1 REFERENCEEKSEMPEL 28

Fremstilling af tert-butyl-4-[3-[4-[(tert-butyldimethylsilyl)oxy] -cyclohexyliden] propyl ] benzoat:

Til natriumhydrid (0,845 g) blev der tilsat dimethylsulfoxid (20 ml), 5 og efter omrøring ved 75° C i én time blev der under afkøling dråbevis tilsat en suspension af den i referenceeksempel 27 vundne forbindelse (19,8 g) i dimethylsulfoxid (60 ml), efterfulgt af omrøring ved stuetemperatur i 30 minutter. Til denne suspension blev der tilsat en opløsning af den i referenceeksempel 22 vundne forbindelse (8,06 g) i 10 dimethylsulfoxid (40 ml), og efter omrøring ved stuetemperatur i 1 time og ved 60“C i 1 time blev reaktionsblandingen hældt i isvand og ekstraheret med ether. Etherfasen blev vasket med vand og derefter med mættet vandig natriumchlorid og tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og den 15 resulterende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 200 g; eluent: ethylacetat:hexan = 1:20), hvilket gav slutforbindelsen (6,11 g).

IR (ren): 2950, 2930, 2855, 1713, 1605, 1575, 860 cm-1.

1H-NMR (CDC13) ff: 0,00(6H,s), 0,90(9H,s), 1,10-1,70 (4H,m), 1,59 20 (9H,s), 1,70-2,80 (8H,m), 3,65-3,90 (lH,m), 5,10 (lH,dt,J=7,5Hz,lHz), 7,20 (2H,d,J-8Hz), 7,87 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 29

Fremstilling af tert-butyl-4- [3 - (4-hydroxycyclohexyliden)propyl]ben-25 zoat:

Til en opløsning af den i referenceeksempel 28 vundne forbindelse (6,11 g) i tetrahydrofuran (30 ml) blev der ved 0°C tilsat en opløsning af tetrabutylammoniumfluorid (28,4 mmol) i tetrahydrofuran (28,4 ml), hvorpå temperaturen blev bragt op på stuetemperatur. Efter 30 omrøring i 16 timer blev reaktionsblandingen hældt i isvand og ekstraheret med ether. Etherfasen blev vasket med vand og derefter med 45 DK 169703 B1 mættet vandig natriumchlorid og tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og den resulterende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silica-gel, 150 g; eluent: ethylacetat:hexan = 1:4), hvilket gav slutfor-5 bindeisen (3,93 g).

IR (ren): 3390, 2955, 2930, 1710, 1605, 1570, 847 cm'1.

%-NMR (CDC13) S: 1,10-1,70 (4H,m), 1,60 (9H,s), 1,70-2,80 (8H,m) , 3,60-3,90 (lH,m), 5,13 (lH,dt,J=7,5Hz,lHz), 7,20 (2H,d,J=8Hz), 7,90 (2H,d,J=8Hz).

10 REFERENCEEKSEMPEL 30

Fremstilling af tert-butyl-4-[3-(4-hydroxycyclohexyl)propyl]benzoat:

Til en opløsning af den i referenceeksempel 29 vundne forbindelse (3,90 g) i ethanol (30 ml) blev der tilsat 10% Pd-C, efterfulgt af omrøring ved stuetemperatur i 18 timer under en atmosfære af hydro-15 gen. Pd-C blev fjernet ved filtrering med celit, og filtratet blev kondenseret under reduceret tryk, hvilket gav slutforbindelsen (3,77 g).

IR (ren): 3380, 2975, 2930, 2853, 1710, 1605, 846 cm-1.

^-NMR (CDCI3) 5: 0,80-2,15 (14H,m), 1,57 (9H,s), 2,63 20 (2H,t,J=7,5Hz), 3,35-3,70 (0,5H,m), 3,85-4,05 (0,5H,m), 7,20 (2H,d,J=8Hz), 7,90 (2H,d,J=8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 31

Fremstilling af tert-butyl-4-[3-(4-oxocyclohexyl)propyl]benzoat:

Til en opløsning af oxalylchlorid (1,65 g) i dichlormethan (30 ml) 25 blev der tilsat en opløsning af dimethylsulfoxid (2,21 g) i dichlormethan (5 ml) ved 60eC, efterfulgt af omrøring i 5 minutter. Til reaktionsblandingen blev der tilsat en opløsning af den i referenceeksempel 30 vundne forbindelse (3,77 g) i dichlormethan (10 ml), og 46 DK 169703 B1 efter omrøring i 15 minutter blev der yderligere dråbevis tilsat triethylamin (5,97 g). Efter omrøring i 5 minutter blev temperaturen bragt op på stuetemperatur i løbet af 30 minutter, 40 ml vand blev tilsat, og der blev foretaget ekstraktion med dichlormethan. Dichlor-5 methanfasen blev vasket successivt med vand, 0,5N vandig kaliumhydro-gensulfatopløsning og mættet vandig natriumchlorid og tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, hvilket gav slutforbindelsen (3,60 g) som farveløse krystaller.

10 IR (KBr): 2950, 2940, 1720, 1700, 1608, 1290, 1110, 848 cm'1.

%-NMR (CDC13) S: 1,20-2,23 (9H,m), 1,57 (9H,s), 2,23-2,46 (4H,m), 2,66 (2H,t,J=7Hz), 7,22 (2H,d,J=8Hz), 7,90 (2H,d,J-8Hz).

REFERENCEEKSEMPEL 32 15 Fremstilling af tert-butyl-4-[3-[3-(ethoxycarbonyl)-4-oxocyclohexyl]-propyl]benzoat:

Under en atmosfære af argon blev der til en opløsning af lithium-diisopropylamid (1,74 mmol) i tetrahydrofuran (2 ml) tilsat en opløsning af den i referenceeksempel 31 vundne forbindelse (460 mg) i 20 tetrahydrofuran (3 ml) ved -78°C, efterfulgt af omrøring i 30 minutter. Til den resulterende blanding blev der tilsat en opløsning af l,3-dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2(lH)pyrimidinon (186 mg) i tetrahydrofuran (1 ml) og en opløsning af ethylcyanoformiat (172 mg) I tetrahydrofuran (1 ml), og efter omrøring i 10 minutter blev der 25 tilsat vand for at standse reaktionen. Der blev foretaget ekstraktion med ether, og ekstrakten blev vasket med mættet vandig natriumchlorid og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og den resulterende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 20 g; eluent: ethyla-30 cetat:hexan = 1:30), hvilket gav slutforbindelsen (308 mg).

47 DK 169703 B1 IR (ren): 2980, 2945, 2865, 1740, 1720, 1710, 1660, 1650, 1610 cm'1. ^-NMR (CDC13) δ: 1,15-1,90 (7H,m), 1,26 (3H,t,J=7Hz), 1,57 (9H,s), 2,15-2,50 (3H,m), 2,63 (2H,t,J=7Hz), 4,20 (2H,q,J=7Hz), 7,20 (2H,d,J=8Hz), 7,85 5 (2H,d,J=8Hz).

EKSEMPEL 1

Fremstilling af diethyl-N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxypyrido[2,3-d]pyri-midin- 6 -yl)propyl ]benzoyl ] -L-glutamat:

Trifluoreddikesyre (30 ml) blev sat til en opløsning af forbindelsen 10 (4,67 g) fra referenceeksempel 6 i dichlormethan (25 ml), efterfulgt af omrøring ved stuetemperatur i 18 timer. Til den resulterende reaktionsblanding blev der dråbevis tilsat vand (6 ml), efterfulgt af omrøring i 1 time. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og til remanensen blev der tilsat ethanol og derefter benzen.

15 Efter at trifluoreddikesyren var blevet fjernet fuldstændigt ved azeotropi blev den resulterende blanding tørret ved 60°C under reduceret tryk, hvilket gav rå krystaller af 4-[3-(2-amino-4-hydroxypyrido[2,3-d-]pyrimidin-6-yl)propyl]benzoesyre. Under en atmosfære af argon blev der til en suspension af krystallerne og 20 diethyl-glutamat-hydrochlorid (5,04 g) i dimethylformamid (10 ml) dråbevis tilsat en opløsning af diphenylphosphorylazid (5,78 g) i dimethylformamid (15 ml) og en opløsning af triethylamin (4,27 g) i dimethylformamid (15 ml) ved 0°C. Den resulterende blanding blev omrørt i 1 time ved 0°G og derefter i 66 timer ved stuetemperatur.

25 Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og remanensen blev skilt fra og oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 200 g; eluent; ethylacetat:ethanol, 9:1 -+ dichlormethan:eddikesyre-:ethanol, 14:1:1 -* 9:1:1], hvilket gav slutforbindelsen (2,85 g).

48 DK 169703 B1 IR (KBr): 3250, 2990, 1737, 1720, 1673, 1605, 1595, 1563, 1493 cm-1 1H-NMR (DMSO-dg) S: 1,17 (6H,t,J-7Hz), 1,70-2,20 (4H,m), 2,20-2,75 (2H,m), 3,00-3,40 (4H,m), 4,00 (2H,q,J=7Hz), 4,08 (2H,q,J=7Hz), 4,42 (IH,dt,J=7Hz,7Hz), 6,60-7,20 5 (3H,m), 7,30 (2H,d,J=8Hz), 7,80 (2H,d,J=8Hz), 8,03 (IH,d,J=3Hz), 8,40-8,53 (lH,m), 8,60 (IH,d,J=7Hz).

EKSEMPEL 2

Fremstilling af diethyl-N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahy-10 dropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)propyl]benzoyl] -L-glutamat:

Til en opløsning af det i eksempel 1 vundne produkt (2,28 g) i tri-fluoreddikesyre (25 ml) blev der tilsat 10% Pd-C (50 g, Engelhard Co. Ltd.), efterfulgt af kraftig omrøring i 16 timer under et hydrogentryk på 4 kg/cm^. Katalysatoren blev fjernet ved filtrering, og 15 filtratet blev inddampet under reduceret tryk. Den resulterende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 150 g; eluent; ethylacetat -» ethylacetat:ethanol, 10:1-*· dichlor-methan:ethanol, 4:1), hvilket gav slutforbindelsen (2,78 g).

IR (KBr): 3250, 2935, 1720, 1685, 1625, 1545, 800 cm_1 20 l-H-NMR (Me2SO-d6) 6: 1,10-1,50 (2H,m) , 1,23 (3H,t, J=7Hz) , 1,31 (3H,t,J=7Hz), 1,50-2,00 (5H,m), 2,00-3,00 (7H,m), 3,33 (lH.brd,J=llHz), 4,10 (2H,q,J=7Hz), 4,23 (2H,q,J=7Hz), 4,60-4,85 (lH,m), 6,75 (lH,brs), 7,22 (2H,d,J=8Hz), 25 7,74 (2H,d,J=8Hz), 8,35 (2H,brs).

EKSEMPEL 3

Fremstilling af diethyl-N-[4-[3-(2,4-diaminopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)propyl] benzoyl] -L-glutamat: 49 DK 169703 B1

Den i referenceeksempel 8 vundne forbindelse (300 mg) blev underkastet den samme reaktion som i eksempel 1, hvilket gav slutforbin-delsen (185 mg).

IR (KBr): 3455, 3330, 3200, 2980, 2935, 1738, 1650, 1613, 1580, 5 1548 cm'·1- %i-NMR (CDCI3/CD3OD) 5: 1,23 (3H,t,J=Hz), 1,31 (3H,t,J=7Hz), 1,70-2,82 (10H,m), 4,10 (2H,q,J=7Hz), 4,22 (2H,q,J=7Hz), 4,70 (lH,dd,J=8Hz,6Hz), 7,21 (2H,d,J=8Hz), 7,74 (H,d,J=8Hz), 8,80 10 (IH,d,J=2Hz), 8,52 (IH,d,J=2Hz).

EKSEMPEL 4

Fremstilling af diethyl-N- [4- [ 3- (2,4-diamino-5,6,7,8- tetrahydropyri-do [ 2,3 - d ] pyr imidin- 6 - y 1) propyl) benzoyl ] - L- glutamat:

Den i eksempel 3 vundne forbindelse (124 mg) blev underkastet den 15 samme reaktion som i eksempel 2, hvilket gav slutforbindelsen (112 mg).

IR (KBr): 3392, 3220, 2940, 1740, 1640, 1610, 1580, 1538, 1505, 1445 cm"^- ^-NMR (CDCI3) S: 1,20-3,15 (14H,m) , 1,21 (3H,t,J=7Hz) , 1,30 20 (3H,t,J=7Hz), 3,30 (lH.brd, J-llHz) , 4,10 (2H,q,J=7Hz), 4,23 (2H,q,J=7Hz), 4,45 (5H,brs), 4,65-4,90 (lH,m), 4,93 (IH,d,J=3Hz), 7,13 (lH,d,J=7Hz), 7,25 (2H,d,J=8Hz) , 7,73 (2H,d,J=8Hz).

25 EKSEMPEL 5

Fremstilling af diethyl-N- [4- [3- (2-amino-4-hydroxy-5-methylpyrido-[2,3-d]pyrimidin-6-y1)propyl]benzoy1]-L-glutamat: 50 DK 169703 B1

Den i referenceeksempel 13 vundne forbindelse (590 mg) blev underkastet den samme reaktion som i eksempel 1, hvilket gav slutforbin-delsen (306 mg).

IR (ren): 3250, 2925, 1737, 1700, 1663 cm'1 5 ^-NMR (DMSO-d6/TFA-d) S: 1,20 (3H,t,J=7Hz), 1,60-2,20 (4H,m), 2,30-3,30 (6H,m), 2,78 (3H,s), 4,05 (2H,q,J=7Hz), 4,13 (2H,q,J=7Hz), 4,33-4,56 (lH,m) , 7,27 (2H,d,J=8Hz), 7,83 (2H,d,J=8Hz), 8,37 (IH,s).

10 EKSEMPEL 6

Fremstilling af diethyl-N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-5-methyl-tetrahydro -pyrido [ 2,3 - d] pyrimidin- 6 -yl)propyl ] benzoyl ] -L-glutamat:

Den i eksempel 5 vundne forbindelse (416 mg) blev underkastet den samme reaktion som i eksempel 2, hvilket gav slutforbindelsen 15 (150 mg).

IR (KBr): 3350, 2930, 1730, 1685, 1633, 1615, 1540 cm-1 ^-H-NMR (CDCI3/CD3OD) S: 0,87 (3H,d,J=7Hz), 1,10-1,90 (6H,m), 1,22 (3H,t,J=7Hz), 1,30 (3H,t,J=7Hz), 1,95-3,00 (8H,m), 3,10 (4H,brs), 4,10 (2H,q,J-7Hz), 20 4,23 (2H,q,J=7Hz), 4,67-4,90 (lH,m), 7,22 (2H,d,J=8Hz), 7,46 (lH,d,J=8,5Hz), 7,73 (2H,d,J=8Hz).

EKSEMPEL 7

Fremstilling af diethyl-N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxypyrido[2,3-d]pyri-25 midin-6-yl)-1-methylpropyl]benzoyl]-L-glutamat:

Den i referenceeksempel 20 vundne forbindelse (2,15 g) blev underkastet den samme reaktion som i eksempel 1, hvilket gav slutforbindelsen (1,51 g).

51 DK 169703 B1 1H-NMR (DMSO-dg/TFA-d) δ: 1,19 (6H,t,J=7,5Hz), 1,22 (3H,d,J=7Hz), 1,50-2,25 (4H,m), 2,30-3,10 (5H,m), 4,06 (2H,q,J=7,5Hz), 4,12 (2H,q,J=7,5Hz), 4,35-4,62 (lH,m), 7,42 5 (2H,d,J=8Hz), 7,85 (2H,d,J=8Hz), 8,41 (IH,d,J=2Hz), 8,51 (IH,d,J=2Hz).

EKSEMPEL 8

Fremstilling af diethyl-N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahy-dr o - py r ido [ 2,3 - d ] pyr imi din-6-yl)-l-me thy lp r opy 1 ] b enz oy 1 ] - L - glutamat: 10 Den i eksempel 7 vundne forbindelse (230 mg) blev underkastet den samme reaktion som i eksempel 2, hvilket gav slutforbindelsen (232 g).

IR (KBr): 3370, 2930, 1720, 1685, 1640, 1610, 1548 cm-1 1H-NMR (CDCI3/CD3OD) δ: 1,00-1,40 (2H,m), 1,22 (3H,t,J=7Hz), 1,31 15 (3H,t,J=7Hz), 1,45-2,00 (4H,m), 2,00-3,00 (7H,m), 3,23 (4H,brd,J=llHz), 4,12 (2H,q,J=7Hz), 4,23 (2H,q,J=7Hz), 4,63-4,76 (IH,m),7,22 (2H,d,J=8Hz), 7,74 (2H,d,J=8Hz).

EKSEMPEL 9 20 Fremstilling af N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxypyrido[2,3-d]pyrimidin-6-y1)propy1]benzoyl]-L-glutaminsyre:

Den i eksempel 1 vundne diethylester (100 mg) blev opløst i hydrati-seret tetrahydrofuran (1:1,10 ml). Til den resulterende opløsning blev der tilsat IN vandig natriumhydroxidopløsning (1,7 ml), hvorpå 25 hydrolysen blev udført ved stuetemperatur i 18 timer. Uopløseligt stof blev fjernet ved filtrering, og til filtratet blev der tilsat eddikesyre (1,7 ml). Den resulterende blanding blev koncentreret til 1 ml under reduceret tryk, hvorpå vand (2 ml) blev tilsat, hvilket 52 DK 169703 B1 gav hvide krystaller. Krystallerne blev opsamlet ved filtrering, vasket med isvand og tørret, hvilket gav slutforbindelsen (60 mg).

IR (KBr): 3500-2300, 1705, 1665, 1600, 802 cnf1 ^-NMR (TFA-d) δ: 1,95-2,36 (4H,m), 2,36-2,70 (2H,m), 2,70-3,10 5 (4H,m), 5,10 (lH,dd,J=8Hz,5Hz), 7,40 (2H,d,J=8Hz), 7,82 (2H,d,J=8Hz), 8,63 (iH,brs), 8,96 (lH,d,J=2Hz) EKSEMPEL 10

Fremstilling af N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydropyri-10 do[2,3-d]pyrimidin-6-yl)propyl]benzoyl] -L-glutaminsyre:

Den i eksempel 2 vundne diester (2,78 g) blev hydrolyseret på samme måde som i eksempel 9, hvilket gav slutforbindelsen (1,20 g).

IR (KBr): 3350, 2930, 1710, 1660, 1640 cnT1 ^H-NMR (Me2SO-d6) S: 1,00-1,45 (2H,m), 1,45-1,80 (4H,m), 15 1,80-2,20 (2H,m), 2,20-2,90 (6H,m), 3,15 (lH,brd, J=12Hz) , 4,40 (lH,dt,J=8Hz, 8Hz) , 5,90 (2H,brs), 6,18 (lH.brs), 7,32 (2H,d,J-8Hz), 7,83 (2H,d,J=8Hz), 8,50 (lH,d,J-8Hz) .

20 EKSEMPEL 11

Fremstilling af N-[4-[3-(2,4-diaminopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)pro-pyl ] benzoyl ] - L- glutaminsyre:

Den i eksempel 3 vundne forbindelse (50 mg) blev underkastet den samme reaktion som i eksempel 9, hvilket gav slutforbindelsen 25 (42 mg).

53 DK 169703 B1 IR (KBr): 3350, 3200, 2945, 1640, 1597, 1540, 1505, 1400, 800 cm"1 ^-NMR (DMS0-d6) S: 1,75-2,20 (4H,m), 2,20-2,43 (2H,m), 2,45-2,83 (6H,m), 4,25-4,54 (lH,m), 7,13 (2H,brs), 7,31 (2H,d,J=8Hz), 7,83 (2H,d,J=8Hz), 7,88 (2H,brs), 5 8,31 (lH.brs), 8,41 (lH.brs), 8,55 (lH.brs).

EKSEMPEL 12

Fremstilling af N-[4-[3-(2,4-diamino-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]-pyrimidin- 6 -yl)propyl ]benzoyl ] -L- glutaminsyre:

Den i eksempel 4 vundne forbindelse (100 mg) blev underkastet den 10 samme reaktion som i eksempel 9, hvilket gav slutforbindelsen (74 mg).

IR (KBr): 3350, 3240, 2940, 1650, 1565, 1503, 1400, 762 cm"1 ^-H-NMR (DMS0-dg) S: 1,10-1,48 (2H,m), 1,50-3,05 (12H,m), 3,23 (lH,brd,J=12Hz), 4,16-4,45 (lH,m), 6,66 (4H, 15 brs), 7,21 (IH,brs), 7,27 (2H,d,J=8Hz), 7,80 (H,d,J=8Hz), 8,20 (lH,d,J=7Hz).

EKSEMPEL 13

Fremstilling af N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5-methylpyrido[2,3-d]-pyrimidin- 6 -yl)propyl ]benzoyl] -L-glutaminsyre: 20 Den i eksempel 5 vundne forbindelse (56 mg) blev underkastet den samme reaktion som i eksempel 9, hvilket gav slutforbindelsen (31 mg).

IR (KBr): 350-2300, 1700, 1650 cm"1 ^-NMR (DMSO-dg/TFA-d) δ: 1,60-2,16 (4H,m), 2,30 (2H,d,J=6,5Hz), 25 2,35-2,90 (4H,m), 2,73 (3H,s), 4,23-4,50 (lH,m), 7,28 (2H,d,J=8Hz), 7,80 (2H,brd,J=8Hz), *8,33 (IH,s).

EKSEMPEL 14

Fremstilling af N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5-methyl-5,6,7,8-tetrahy- dropyrido[ 2,3 - d]pyrimidin-6-yl)propyl]benzoyl]-L-glutaminsyre: 54 DK 169703 B1

Den i eksempel 6 vundne forbindelse (75 mg) blev underkastet den 5 samme reaktion som i eksempel 9, hvilket gav slutforbindelsen (37 mg).

IR (KBr): 3340, 2920, 1700, 1640, 1540 cm"1 ^H-NMR (DMS0-d6) S: 0,74 (3H,d,J=7Hz), 1,00-1,35 (2H,m), 1,35-1,80 (4H,m), 1,80-2,20 (2H,m), 2,20-2,90 (6H,m), 10 4,23-4,56 (lH,m), 5,95 (2H, brs), 6,25 (lH,brs), 7,30 (2H,d,J=*8Hz) , 7,82 (2H,d, J=8Hz), 7,48 (IH,d,J=7,5Hz).

EKSEMPEL 15

Fremstilling af N- [4- [3-(2-amino-4-hydroxypyrido[2,3-d]pyrimidin-15 6-yl)-1-methylpropyl]benzoyl]-L-glutaminsyre:

Den i eksempel 7 vundne forbindelse (65 mg) blev underkastet den samme reaktion som i eksempel 9, hvilket gav slutforbindelsen (38 mg).

IR (KBr): 3500-2300, 1697, 1675 .cm"1 20 -^H-NMR (DMSO-dg/TFA-d) 5: 1,27 (3H,d, J-7Hz), 1,70-2,23 (4H,m), 2,25-2,98 (5H,m), 4,33-4,60 (lH,m), 7,33 (2H,d,J-8Hz), 7,87 (2H,d,J-8Hz), 8,43 (lH,d,J«l,5Hz), 8,49 (lH,d,J=l,5Hz).

Fremstilling af N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydro-pyri- do[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-1-methylpropyljbenzoyl]-L-glutaminsyre: EKSEMPEL 16 55 DK 169703 B1

Den i eksempel 8 vundne forbindelse (232 mg) blev underkastet den 5 samme reaktion som i eksempel 9, hvilket gav slutforbindelsen (102 mg).

IR (KBr): 3345, 2925, 1700, 1640, 1540 cm’1 1H-NMR (DMSO-dg) 5: 1,00-1,40 (2H,m), 1,21 (3H,d,J=6Hz), 1,40-2,80 (llH,m], 3,30 (IH.brd,J=12Hz), 4,23-4,56 (lH.m), 10 5,92 (2H,brs), 6,20 (lH.brs), 7,27 (2H,d,J=8Hz), 7,73 (2H,d,J=8Hz), 8,43 (IH,d,J=8Hz).

EKSEMPEL 17

Fremstilling af tert-butyl-4-[3-(2,4-diamino-5,6,7,8-tetrahydroquina-zolin-6-yl)propyl]benzoat: 15 En blanding af den i referenceeksempel 31 vundne forbindelse (316 mg) og dicyanodiamid (126 mg) blev opvarmet ved 180°G i 4 timer, og den resulterende sortbrune olie blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 15 g; eluent: dichlormethan:methanol= 12:1 + 7:1), hvilket gav slutforbindelsen (78 mg). 1 IR (KBr): 3480, 3340, 3160, 2950, 1718, 1640, 1610, 1590, 1573, 1450, 1293, 1170, 1115, 1020, 850 cm'1 1H-NMR (CDC13) 6: 1,20-2,50 (9H,m), 1,58 (9H,s), 2,50-2,80 (4H,m), 4,80 (4H,brs), 7,18 (2H,d,J=8Hz), 7,89 (2H,d,J=8Hz).

Fremstilling af diethyl-N- [4-[3-(2,4-diamino-5,6,7,8-tetrahydroquina- zolin-6-yl)propyl]benzoyl]-L-glutamat: 56 DK 169703 B1 EKSEMPEL 18

Til den i eksempel 17 vundne forbindelse (70 mg) blev der tilsat 5 trifluoreddikesyre (1 ml), efterfulgt af omrøring ved stuetemperatur i 2 timer. Opløsningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, og remanensen blev tørret under vacuum ved 70eC, hvilket gav rå krystaller af 4-[3-(2,4-diamino-5,6,7,8-tetrahydroquinazolin-6-yl)propyl]-benzoesyre. Til en opløsning af disse krystaller og diethyl-L-gluta-10 mat-hydrochlorid (132 mg) i dimethylformamid (0,5 ml) blev der under en atmosfære af argon og ved 0°C tilsat en opløsning af diphenylphos-phorylazid (116 mg) i dimethylformamid (0,5 ml), efterfulgt af omrøring i 15 minutter, hvorpå der ved den samme temperatur dråbevis blev tilsat en opløsning af triethylamin (93 mg) i dimethylformamid 15 (0,5 ml). Efter omrøring ved 0°C i 30 minutter og derefter ved stue temperatur i 72 timer blev opløsningsmidlet afdampet under reduceret tryk, og den resulterende remanens blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 10 g; eluent: dichlormethan skilt fra koncentreret vandig ammoniak -»· dichlormethan skilt fra koncentreret vandig 20 ammoniak: ethanol = 20:1), hvilket gav slutforbindelsen (82 mg) som hvide krystaller.

IR.(KBr): 3448, 3350, 3130, 2948, 1738, 1660, 1635, 1630, 1570, 1445, 1200, 1020 cm'1 %-NMR (CDC13) S: 1,23 (3H,t,J»7Hz), 1,31 (3H,t,J-7Hz), 1,33-1,50 25 (3H,m), 1,66-1,83 (3H,m), 1,83-2,01 (2H,m), 2,03-2,52 (5H,m), 3,60 (2H,dd,J=9Hz,4Hz), 3,70 (2H,t,J=7Hz), 4,12 (2H,q,J=7Hz), 4,25 (2H,q,J=7Hz), 4,58 (2H,brs), 4,62 (2H,brs), 4,75-4,88 (lH,m), 7,03 (lH,d,J-8,5Hz), 7,26 30 (2H,d,J=8Hz), 7,76 (2H,d,J=8Hz).

EKSEMPEL 19

Fremstilling af N-[4-[3-(2,4-diamino-5,6,7,8-tetrahydroquinazolin- 6-yl)propyl]benzoyl]-L-glutaminsyre: 57 DK 169703 B1

Til en opløsning af den i eksempel 18 vundne forbindelse (77 mg) i en 5 blanding af tetrahydrofuran og vand (3:2, 2,5 ml) blev der tilsat IN vandig natriumhydroxidopløsning (0,76 ml), og efter omrøring ved stuetemperatur i 2 timer blev supernatanten fjernet ved filtrering med et milliporefilter. Til filtratet blev der tilsat eddikesyre (0,5 ml), og den resulterende blanding blev koncentreret til ca.

10 1 ml ved afdampning af opløsningsmidlet under reduceret tryk, efter fulgt af tilsætning af vand (5 ml) og bestråling med supersoniske bølger, hvilket gav hvide krystaller.

Disse krystaller blev opsamlet ved filtrering, vasket tilstrækkeligt med isvand og tørret ved 60°C under reduceret tryk, hvilket gav 15 slutforbindelsen (64 mg).

IR (KBr):5 3350, 3200, 2935, 1710, 1660, 1650, 1640, 1530, 1500, 1400 cm-1 1H-NMR (Me2SO-d6) S: 1,10-1,45 (3H,m), 1,50-2,17 (8H,m), 2,20-2,50 (4H,m), 2,55-2,73 (2H,m), 20 3,00-5,10 (4H,m), 4,29 (IH, dd,J=7Hz, 6,5Hz), 7,08 (lH.brs), 7,28 (2H,d,J-8Hz), 7,30 (lH,brs), 7,78 (2H,d,J=8Hz), 8,27 (lH,d,J=6,5Hz).

EKSEMPEL 20 25 Fremstilling af tert-butyl-4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahy-dro quinaz olin-6-yl)propyl]b enz o at:

Under en atmosfære af argon blev der til en opløsning af kalium-tert-butoxid (86 mg) og guanidin-hydrochlorid (79,5 mg) i tert-butylalko-hol (2 ml) tilsat en opløsning af den i referenceeksempel 32 vundne 30 forbindelse (308 mg) i tert-butylalkohol (4 ml), efterfulgt af op- 58 DK 169703 B1 varmning under tilbagesvaling i 3 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i isvand, og de resulterende krystaller blev opsamlet ved filtrering og vasket med acetone og derefter ether, hvilket gav slutforbindelsen (263 mg).

5 IR (KBr): 3320, 3080, 2980, 2940, 1708, 1670, 1650, 1605, 1495, 1367, 1290, 1168, 1118, 1108, 1013, 848 cm’1 ^H-NMR (Me2SO-d6-CD3C00D) δ: 1,20-1,40 (3H,m), 1,50-1,85 (6H,m), 1,55 (9H,s), 2,30-2,48 (2H,m), 2,68 (2H,t,J=7Hz), 7,33 (2H,d,J=8Hz), 7,84 10 (2H,d,J-8Hz).

EKSEMPEL 21

Fremstilling af diethyl-N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahy-droquinazolin-6-yl)propyl]benzoyl]-L-glutamat.

Slutforbindelsen (132 mg) blev vundet som hvide krystaller på samme 15 måde som i eksempel 18 ud fra den i eksempel 20 vundne forbindelse (250 mg).

IR (KBr): 3390, 3165, 2940, 1738, 1660, 1650, 1640, 1608, 1525, 1503, 1390, 1180, 1095, 1120, 853 cm-1 l-H-NMR (Me2S0-d6) δ: 1,16 (3H,t,J=7Hz), 1,19 (3H, t, J=7Hz) , 20 1,25-1,38 (2H,m), 1,40-2,20 (7H,m), 2,25-2,45 (6H,m), 2,65 (2H,t,J=6,5Hz), 4,05 (2H,q,J=7Hz), 4,12 (2H,q, J«7Hz), 4,37-4,50 (lH,m), 6,19 (2H,brs), 7,32 (2H,d,J=8Hz), 7,81 (2H,d,J=8Hz), 8,66 (lH,d,J-7,5Hz).

25 EKSEMPEL 22

Fremstilling af N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydroquinazo-lin-6-yl)propyl]benzoyl] -L-glutaminsyre: 59 DK 169703 B1

Slutforbindelsen (106 mg) blev vundet på samme måde som i eksempel 19 ud fra den i eksempel 21 vundne forbindelse (130 mg).

IR (KBr): 3360, 3185, 2930, 1705, 1607, 855, 820 cm-1 1H-NMR (Me2SO-d6) δ: 1,15-1,40 (3H,m), 1,40-1,86 (5H,m), 5 1,86-2,20 (2H,m), 2,24-2,50 (5H,m), 2,65 (2H,t,J=7Hz), 4,32-4,47 (lH,m), 6,20 (2H,brs), 7,31 (2H,d,J=8Hz), 7,81 (2H,d,J=8Hz), 8,53 (lH,d, J=8Hz).

EKSEMPEL 23 10 Fremstilling af tert-butyl-4-[3-(2,4-diaminoquinazolin-6-yl)propyl]-benzoat:

Den i eksempel 17 vundne forbindelse (200 mg) blev opløst i 1,4-dioxin (3 ml)., og blandingen blev tilbagesvalet under opvarmning i nærværelse af 10% Pd-C (200 mg) i 7 dage. Efter fjernelse af kata-15 lysatoren ved filtrering med celit blev filtratet koncentreret til tørhed under reduceret tryk. Remanensen blev oprenset ved søjlekromatografi (bærer: silicagel, 20 g; eluent: dichlormethan:methanol = 7:1), hvilket gav slutforbindelsen (79 mg).

IR (KBr): 3470, 3350, 2950, 1718, 1640, 1610, 1590, 848 cm'1 20 l-H-NMR (CDC13) S: 1,59 (9H,s), 1,90-2,05 (2H,m), 2,60-2,80 (4H,m), 4,63 (2H,brs), 5,27 (2H,brs), 7,19 (2H,d,J=8Hz), 7,28-7,39 (lH,m), 7,53-7,63 (lH,m), 7,85-7,93 (lH,m).

EKSEMPEL 24 25 Fremstilling af diethyl-N-[4-[3-(2,4-diaminoquinazolin-6-yl)propyl]-benzoyl]-L-glutamat:

Slutforbindelsen (79 mg) blev vundet på samme måde som i eksempel 18 ud fra den i eksempel 23 vundne forbindelse (79 mg).

f 60 DK 169703 B1 IR (KBr): 3448, 3350, 2950, 1735, 1660, 1630, 1570 cm-1 1H-NMR (CDC13) S: 1,23 (3H,t,J=7Hz), 1,31 (3H,t,J-7Hz), 1,93-2,19 (4H,m), 2,44 (2H,t,J=6Hz), 2,58-2,82 (4H,m), 4,12 (2H, q, J*=7Hz), 4,25 (2H,q, J=7Hz) , 4,62 (2H,brs) , 5 4,75-4,88 (ΙΗ,ιη), 4,95 (2H,brs), 7,26 (2H,d,J=8Hz), 7,28-7,45 (2H,m), 7,53-7,63 (lH,m), 7,76 (2H, d, J=*8Hz), 7,85-7,93 (lH,m).

EKSEMPEL 25

Fremstilling af N- [4- [3- (2,4-diaminoquinazolin-6-yl)propyl]benzoyl] -10 L- glutaminsyre:

Slutforbindelsen (63 mg) blev vundet på samme måde som i eksempel 19 ud fra den i eksempel 24 vundne forbindelsen (79 mg) .

IR (KBr): 3350, 3200, 2930, 1708, 1660, 1638, 1530 cnT1 ^H-NMR (Me2S0-d6) δ: 1,75-2,20 (4H,m), 2,40 (2H, t, J«7Hz), 15 2,60-2,80 (4H,m), 3,20-4,50 (4H,m), 4,39 (IH,dd, J=7Hz,6Hz) , 7,30 (2H,d,J«8Hz) , 7,30-7,40 (lH,m), 7,50-7,65 (lH,m), 7,82 (2H,d,J=8Hz), 7,85-7,93 (lH,m), 8,48 (lH,d,J=6Hz).

20 EKSEMPEL 26

Fremstilling af tert-butyl-4- [3-(2-amino-4-hydroxyquinazolin-6-yl)-propyl]benzoat:

Slutforbindelsen (73 mg) blev vundet på samme måde som i eksempel 23 ud fra den i eksempel 20 vundne forbindelse (200 mg).

61 DK 169703 B1 IR (KBr): 3325, 3075, 2975, 2945, 1710, 1675, 1650, 1600, 1495, 848 cm'l ^-NMR (Me2SO-d6-CD3COOD) δ: 1,59 (9H,s), 1,90-2,05 (2H,m), 2,60-2,85 (4H,m), 7,25-7,42 (lH,m), 5 7,32 (2H,d,J=8Hz) , 7,50-7,65 (lH,m), 7,85-7,95 (lH,m), 7,85 (2H,d,J=8Hz).

EKSEMPEL 27

Fremstilling af diethyl-N- [4- [3- (2-amino-4-hydroxyquinazolin-6-yl) -propyl ] benzoyl -L- glutamat: 10 Slutforbindelsen (80 mg) blev vundet på samme måde som i eksempel 18 ud fra den i eksempel 26 vundne forbindelse (73 mg).

IR (KBr): 3395, 3170, 2945, 1740, 1663, 853 cm'1 1H-NMR (Me2SO-d6) S: 1,16 (3H,t,J=7Hz), 1,19 (3H,t,J=7Hz), 1,90-2,20 (4H,m), 2,20-2,50 (2H,m), 15 2,55-2,85 (4H,m), 4,05 (2H,q,J=7Hz), 4,12 (2H,q,J=7Hz), 4,35-4,53 (lH,m), 6,10 (2H,brs), 7,29 (2H,d,J=8Hz), 7,30-7,43 (lH,m), 7,50-7,60 (lH,m), 7,80 (2H,d,J=8Hz), 7,85-7,93 (lH,m), 8,54 (lH,d,J=7,5Hz).

20 EKSEMPEL 28

Fremstilling af N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxyquinazolin-6-yl)propyl]ben-z oy1]-L-glutaminsyre:

Slutforbindelsen (62 mg) blev vundet på samme måde som i eksempel 19 ud fra den i eksempel 27 vundne forbindelse (80 mg).

62 DK 169703 B1 IR (KBr): 3360, 3180, 2925, 1710, 1605, 850 cm'1 ^-NMR (Me2SO-d6) S: 1,70-2,20 (4H,m), 2,60-2,80 (4H,m), 2,64 (2H,t,J=7Hz), 4,30-4,42 (lH.m), 6,29 (2H,brs), 7,30 (2H,d,J=8Hz), 7,32-7,40 5 (lH,m), 7,55-7,65 (lH,m), 7,82 (2H,d,J»8Hz), 7,85-7,93 (lH,m), 8,58 (IH,d,J=7Hz).

EKSEMPEL 29

Den i eksempel 12 vundne forbindelse (50 mg til fremstilling af en tablet), lactose (250 mg til fremstilling af en tablet), majsstivelse 10 (51 mg til fremstilling af en tablet) og hydroxypropylcellulose L

(9 mg til fremstilling af en tablet) blev blandet og granuleret på sædvanlig måde. De vundne granuler blev blandet med majsstivelse (8 mg til fremstilling af en tablet) og magnesiumstearat (2 mg til fremstilling af en tablet), efterfulgt af tablettering på sædvanlig 15 måde, hvilket gav tabletter (370 mg til fremstilling på sædvanlig måde, hvilket gav tabletter (370 mg til fremstilling af en tablet).

EKSEMPEL 30 111 fysiologisk saltvand blev der opløst 10 g af natriumsaltet af den i eksempel 11 vundne forbindelse, og efter filtrering gennem et 20 mikrofilter blev 2,2 ml af filtratet hældt i en ampul, der blev forseglet. Ampullen blev steriliseret ved 110°C i 30 minutter, hvilket gav en ampul til subkutan, intravenøs eller intramuskulær injektion af forbindelsen.

EKSEMPEL 31 25 111 destilleret vand blev der opløst 5 g af hydrochloridet af den i eksempel 12 vundne forbindelse og 10 g mannitol, og efter sterilisation og filtrering blev 2 ml af filtratet hældt i en ampul. Ampullen blev frysetørret og forseglet i en frysetørrer, hvilket gav en ampul til anvendelse under samtidig opløsning af indholdet. Ved brug åbnes 63 DK 169703 B1 ampullen, og indholdet opløses i fx 2 ml fysiologisk saltvand, hvilket giver et injektionspræparat.

EKSEMPEL 32

Sammenligningsforsøg mellem et pyrimidinderivat ifølge den fore-5 liggende opfindelse og N-(4-[2-(2,4-diamino-5,6,7,8-tetrahydro-pyrido[2,3-d]-pyrimidin-6-yl)ethyl]benzoyl)-L-glutaminsyre (et derivat kendt fra DK 4721/86) Følgende forbindelser blev testet:

Pyrimidinderivat ifølge den foreliggende opfindelse (forbindelse X): >fH* _

• /V >v* J °H

Hxtf H

10 Forbindelse ifølge Eksempel 20 i DK 4721/86, nemlig N-(4-[2-(2,4-diamino-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]-pyrimidin-6-yl)ethyl]-benzoyl)-L-glutaminsyre (forbindelse A): : tjjfy 'η · ΟΗΛΗ^οοΗ

Ovennævnte forbindelser X og A blev underkastet følgende test: i) Undersøgelse af den cellevækstinhiberende virkning i KB-celler 15 Humane nasopharyngeale cancer KB-celler (1 x 10^ celler/ml) blev inokuleret i hver sin brønd på en 96-mikro-brøndplade (0,1 ml pr. brønd) og underkastet stående dyrkning ved 37°C under 5% CO2 i 24 timer. Hertil blev der sat en opløsning af en af forbindelserne i 10% MEM (Nissui Pharmaceutical Co. Ltd., Japan), og den resulterende 20 blanding blev igen underkastet stående dyrkning ved 37°C under 5% CO2 i 72 timer. Derpå blev kulturen udpipetteret, og yderligere 0,1 ml MTT-opløsning (Dojindo Laboratories, Japan) i 10% MEM (1,0 mg/ml) DK 169703 Bl 64 blev tilsat og inkuberet for yderligere 24 timer. Absorbansen ved 590 mn blev målt, og IC^O-værdien af den testede forbindelse blev defineret som den koncentration, der kræves af forbindelsen til at sænke antallet af celler i den ubehandlede kontrolgruppe med 50%. De 5 opnåede resultater er vist nedenfor i Tabel 1.

Tabel 1

Testforbindelse IC50 (pg/ml)

Forbindelse X 0,0010 10 Forbindelse A 0,0006 ii) Toxicitetstest (1) CDF1-hunmus (5 uger gamle, en gruppe på 5 mus) fik én gang dagligt i fem dage oralt administreret 0,2 ml af en vandig opløsning af 15 hver testforbindelse (natriumsalt) med en koncentration på 2,0, 4,0 og 8,0 mg/kg, og de blev observeret i seks dage. Antal overlevende efter administration er vist i Tabel 2.

(2) BALB/c-hunmus (9 uger gamle, en gruppe på fem mus) fik én gang dagligt i fem dage intraperitonealt administreret 0,2 ml af hver 20 testforbindelse (natriumsalt) opløst i fysiologisk salt med en koncentration på 2,0, 4,0 og 8,0 mg/kg, og de blev observeret i seks dage. Antal overlevende efter administration er også vist i Tabel 2.

65 DK 169703 B1

Tabel 2

Testforbindelse Administreret Antal overlevende mængde (mg/kg/dag) i CDF1 i BALB/c 5 Forbindelse X 2,0 5 5 4.0 5 5 8.0 5 5

Forbindelse A 2,0 4 1 4.0 1 0 10 8,0 0 0

De ovenfor beskrevne forsøg viser, at selvom den cellevækstinhibe-rende virkning i KB-celler hos forbindelse X er lidt lavere end hos forbindelse A, så har forbindelsen X (pyrimidinderivat ifølge den 15 foreliggende opfindelse) en væsentlig lavere toxicitet end forbindelse A (mindre end 1/4). Disse forhold betyder, at forbindelsen X har væsentligt bedre farmakologiske egenskaber som antitumor-midler end forbindelse A.

Claims

1 AwJ r3 W hvor ringen er en pyridinring, som eventuelt er hydrogeneret, 15 eller en benzenring, som eventuelt er hydrogeneret, X er en amino-gruppe eller en hydroxylgruppe, R^, R^, R^ 0g R^ uafhængigt af hinanden er hydrogen, fluor eller lavere alkyl, og -COOR^ er en DK 169703 B1 carboxylgruppe, som eventuelt er esterificeret med en lavere alkyl-gruppe med 1-5 carbonatomer, en benzylgruppe, som eventuelt er . substitueret med nitro eller en lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer, eller en phenylgruppe, som eventuelt er substitueret med 5 nitro eller en lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer, eller et salt deraf.

1. Pyrimidinderivater med den almene formel: X R‘ R* R* i u) U W/ i . 1 X. R ch2ch:coor8 Η,ΙΓ^Τ hvor ringen er en pyridinring, som eventuelt er hydrogeneret, 5 eller en benzenring, som eventuelt er hydrogeneret, X er en amino -gruppe eller en hydroxylgruppe, R^-, R^, R^ og R^ uafhængigt af hinanden er hydrogen, fluor eller lavere alkyl, og -COOR^ og -COOR^ uafhængigt af hinanden er en carboxylgruppe, som eventuelt er este-rificeret med en lavere alkylgruppe med 1-5 carbonatomer, en benzyl-10 gruppe, som eventuelt er substitueret med nitro eller en lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer, eller en phenylgruppe, som eventuelt er substitueret med nitro eller en lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer, eller et salt deraf.

2. Pyrimidinderivater ifølge krav 1, 15 kendetegnet ved, at ringen ^A^ er pyridin eller tetrahy-dropyridin.

3. Pyrimidinderivater ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den lavere alkylgruppe er en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer. 1

4. Pyrimidinderivater ifølge krav 1, kendetegnet ved, at saltet er et farmaceutisk acceptabelt salt. DK 169703 B1

5 N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydroquinazolin-6-yl)propyl]-benzoyl]-L-glutaminsyre, diethyl-N- [4- [3- (2,4-diaminoquinazolin-6-yl)propyl]benzoyl] -L-glutamat, N- [4- [3- (2,4-diaminoquinazolin-6-yl)propyl]benzoyl] -L-glutaminsyre, 10 diethyl-N- [4- [3- (2-amino-4-hydroxyquinazolin-6-yl)propyl]benzoyl-L-glutamat eller N- [4- [3- (2-amino-4~hydroxyquinazolin-6-yl)propyl]benzoyl] -L-glutamin-syre.

5. Pyrimidinderivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det er en forbindelse med den almene formel: X R* R1 RA V-CONHCHCOOR5 η,ϊ^Λτ R3 ch.ch.coor8 r ‘ H 5 hvor X, rA, , R^, R^, R-* og R® har de i krav 1 anførte betydninger, eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

6. Pyrimidinderivater ifølge krav 5, kendetegnet ved, at R^, R^, R^, R^ og R^ er hydrogen.

7. Pyrimidinderivater ifølge krav 5, 10 kendetegnet ved, at er hydrogen eller en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer.

8. Pyrimidinderivater ifølge krav 5, kendetegnet ved, at X er en aminogruppe.

9. Pyrimidinderivat ifølge krav 1, 15 kendetegnet ved, at det er diethyl-N- [4- [3-(2-amino-4-hy-droxypyrido [ 2,3 - d] pyrimidin- 6 -yl) propyl ] benzoyl ] -L- glutamat, diethyl-N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydropyrido[ 2,3 - d] -pyrimidin-6-yl)propyl] -benzoyl] -L-glutamat, diethyl-N- [4- [3- (2,4-diaminopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)propyl]ben-20 zoyl]-L-glutamat, diethyl-N- [4-[3-(2,4 - diamino -5,6,7,8- tetrahydropyrido [ 2,3 - d] pyr imi -din- 6 - y 1) propyl) benzoyl ] - L- glutamat, diethyl-N- [4- [3- (2-amino-4-hydroxy-5-methylpyrido [2,3-d] pyrimidin-6-yl)propyl]benzoyl]-L-glutamat, DK 169703 B1 diethyl-N-[4-[3-(2-amino- 4 -hy droxy-5-methyl-5,6,7,8-tetrahydropyrido [2 , 3-d]pyrimidin-6-yl)propyl]benzoyl] -L-glutamat, diethyl-N- [4- [3- (2-amino-4-hydroxypyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl) -1-methylpropyl]-benzoyl]-L-glutamat, 5 diethyl-N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydro-pyrido[2,3-d]-pyrimidin-6-yl)-l-methylpropyl]benzoyl]-L-glutamat, N-[4-[3-(2 - amino-4-hydroxypyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)propyl]benzoyl] -L-glutaminsyre, N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidin-10 6-yl)propyl]benzoyl] -L-glutaminsyre, N-[4-[3-(2,4-diaminopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-y1)propy1]benzoyl]-L-glutaminsyre, N-[4-[3-(2,4-diamino-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-propyl]benzoyl]-L-glutaminsyre,

15 N-[4-[3-(2 - amino - 4 -hydroxy- 5 -methylpyrido [ 2,3 - d] pyrimidin- 6-yl)pro- pyl ] benzoyl ] -L- glutaminsyre, N- [4- [3- (2-amino-4-hydroxy-5-methyl-5,6,7,8-tetrahydropyrido [2,3-d] -pyrimidin-6-yl) propyl] -benzoyl] -L-glutaminsyre, N- [4- [3- (2-amino-4-hydroxypyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl) -1-methylpro-20 pyl]benzoyl]-L-glutaminsyre, N-[4-[3-(2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydro-pyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-1-methylpropyl]-benzoyl]-L-glutaminsyre, diethyl-N-[4-[3-(2,4-diamino-5,6,7,8-tetråhydroquinazolin-6-yl)pro-pyl]benzoyl] -L-glutamat, DK 169703 B1 N-[4-[3-(2,4-diamino-5,6,7,8-tetrahydroquinazolin-6-yl)propyl]ben-zoyl ] - L- glutaminsyre, die thyl-N- [4- [3- (2-amino-4-hydroxy-5,6,7,8- tetrahydroquinazolin-6-yl)propyl]benzoyl]-L-glutamat,

10. Fremgangsmåde til fremstilling af et pyrimidinderivat med den 15 almene formel: X R1 R* V \ 7~C0i\ff[CHC00Rs 1 I I w r3 \—/. i CH2CH2C00Re hvor ringen er en pyridinring, som eventuelt er hydrogeneret, eller en benzenring, som eventuelt er hydrogeneret, X er en aminogruppe eller en hydroxylgruppe, R1, R^, R3 og uafhængigt af 20 hinanden er hydrogen, fluor eller en lavere alkyl gruppe, og -C00R3 og -COOR^ uafhængigt af hinanden er en carboxylgruppe, som eventuelt er esterificeret med en lavere alkylgruppe med 1-5 carbonatomer, en benzylgruppe, som eventuelt er substitueret med nitro eller en lavere DK 169703 B1 alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer, eller en phenylgruppe, som eventuelt er substitueret med nitro eller en lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer, eller et salt deraf, kendetegnet ved, at en forbindelse med den almene formel: X R* Rs R+ hvor ringen , X, R^-, , R^ og R^ har de ovenfor anførte betyd ninger, eller et reaktivt derivat ved carboxylgruppen eller et salt deraf omsættes med en forbindelse med den almene formel: H2NCHCOOR5 IH CH2CH2COOR6 10 hvor -COOR^ og -C00R® har de ovenfor anførte betydninger, eller et salt deraf.

11. Pyrimidinderivater med den almene formel: x R' R* R* fjr^7\Y^T Vcoor7 iv

12. Antitumorpræparat, kendetegnet ved, at det indeholder en virksom mængde af et pyrimidinderivat med den almene formel: X R1 R2 R* in COfiHCHCOOR5 T I (0 i* I 1 CH2CH2C00R8 hvor ringen er en pyridinring, som eventuelt er hydrogeneret, eller en benzenring, som eventuelt er hydrogeneret, X er en amino-gruppe eller en hydroxylgruppe, βΑ, R^, R3 og R^ uafhængigt af hinanden er hydrogen, fluor eller en lavere alkylgruppe, og -C00R3 og 15 -C00R6 uafhængigt af hinanden er en carboxylgruppe, som eventuelt er esterificeret med en lavere alkylgruppe med 1-5 carbonatomer, en benzylgruppe, som eventuelt er substitueret med nitro eller en lavere alkoxygruppe med 1-3 carbonatomer, eller en phenylgruppe, som eventuelt er substitueret med nitro eller en lavere alkoxygruppe med 1-3 20 carbonatomer, eller et salt deraf, sammen med én eller flere bærere, fortyndingsmidler eller excipienser. 1 Anvendelse af et pyrimidinderivat med formlen (I) som defineret i krav 1 eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf til fremstilling af et lægemiddel til antitumor- eller cancerterapi.