DK159808B - Fremgangsmaade til fremstilling af et farmaceutisk praeparat til anvendelse ved behandling af osteitis - Google Patents

Description

DK 159808 B

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et farmaceutisk præparat til anvendelse ved behandling af osteitis og indeholdende et resorberbart fibrøst protein og en effektiv mængde af et vandoplø-5 seligt medikament.

Osteitis, der også undertiden kaldes osteomyelitis, er en sygdom i knoglemarven fremkaldt af bakterieinfektion; typiske former er hæmatogen osteitis, posttraumatisk ostetis og inficeret osteosyntese. Når knoglen er blevet infi-10 ceret er det yderst vanskeligt at kurere, og faktisk er osteitis karakteriseret ved tilbagefald der indtræder længe efter tilsyneladende helbredelse. Denne vanskelighed har været kendt længe og faktisk daterer operationer mod osteitis sig tilbage til klassiske tider og endog tidlige-15 re. Selv ved fremkomsten af antibiotika er der ikke blevet udviklet nogen virkelig tilfredsstillende permanent helbredelse af osteitis. Lignende vanskeligheder mødes ofte ved behandling af bylder som har dannet store fordybninger.

Ved behandling af osteitis er kirurgisk fjernelse 20 af nekrotiske væv (fx den avitale sekvester) og bakterielt inficeret væv med samtidig systemisk behandling med antibiotika som regel ikke tilstrækkelig. Det er nødvendigt at bruge metoder der kan tilvejebringe en høj lokal koncentration af antibiotika i tilstrækkelig lang tid til at mulig-25 gøre heling eller helbredelse.

Lokal dræning af den osteitiske hulhed har hidtil været anvendt som supplerende terapeutisk forholdsregel.

Denne metode er imidlertid ikke altid helt effektiv og medfører at der bliver en lang periode hvor patienten er 30 sengeliggende med begrænset bevægelsesfrihed og desuden har alvorlige smerter. Denne metode nødvendiggør også høje udgifter til sygepleje.

Det har tidligere været foreslået at behandle osteitis ved i det osteitiske hulrum at indsætte en kæde af 25 polymetylmetakrylatkugler imprægneret med det antibiotiske stof gentamycin. Når der bruges en sådan fremgangsmåde kan fjernelse af kuglerne have drastiske virkninger på 2

DK 159808 B

nyt væv som er dannet i hulrummet. Uheldigvis omgiver massen af frisk spongiosa og bindevæv kædens enkelte kugler tæt, og selv om kuglerne er anbragt i hulrummet på en sådan måde at kæden kan trækkes ud gennem massen, bevirkes der 5 uundgåeligt betydelig og smertefuld skade på det nydannede væv med ugunstige virkninger på helbredelsen. Desuden er gentamycin det eneste antibiotikum som har vist sig at modstå polymerisationsbetingelserne, men det er ikke altid fuldt og varigt effektivt mod osteitis og det medfører et 1 q større antal tilfælde af tilbagevenden af sygdommen.

Det har nu vist sig at det i stedet for at udforme den langsomt afgivende bærer for det antibakterielle stof således at det skal fjernes, er fordelagtigt hvis bæreren er resorberbar så at den ikke behøver at blive fjer-12 net ved en næste operation. Specielt har det vist sig at en vandig gel dannet ud fra et tværbundet fibrøst protein giver en særlig god resorberbar bærer.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er derfor ejendommelig ved det i krav 1's kendetegnende del anførte.

2Q Ved hjælp af et på denne måde fremstillet præparat kan man således helbrede en infektion i et hulrum i knogleeller andet væv, hvorved en resorberbar vandig gel, hvis vandige fase indeholder et vandopløseligt medikament såsom en antibakterielt virksom forbindelse, anbringes i hulrum-22 met og får lov til at blive der indtil gelen er resorberet.

Man kan eventuelt fremstille en gel som resorberes forholdsvis hurtigt, fx i løbet af nogle få uger, fordelagtigt 10-14 dage; det virksomme antibakterielle stof frigives primært ved resorptionsprocessen snarere end ved diffu-3q sion af det antibakterielle stof ud af gelen.

Gelen kan være i form af et formet fast stof såsom en stav til indsættelse i det hulrum som skal heles, hvorved den fx kan have en diameter på 2-20 mm og en længde på 20-150 mm. Ved en særlig fordelagtig udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen gives der gelen form af et granulat. Ved anvendelse af denne form er det muligt fuldstændigt at udfylde hulrum af en hvilken som helst

DK 159808 B

3 form og størrelse uden at behøve at implantere specielle konf igurationer.

Den hurtigt resorberbare gel er som anført i krav 1 en vandig gel af et tværbundet, vandopløseligt fibrøst 5 protein, fx et scleroprotein såsom tropokollagen eller partielt hydrolyseret kollagen, tropokollagen eller elastin (herunder navnlig gelatine). Elastin er det elastiske fibrøse protein i sener og arterier. Kollagen er det uelastiske fibrøse protein i hud, sener og knogler og består af stren-10 ge af molekyler af tropokollagen i en tredobbelt skruekonfiguration. Tropokollagenet kan frigives fra fx unge pattedyrs hud ved ekstraktion med citratpuffer. Molekylvægten af det partielt hydrolyserede kollagen, tropokollagen eller elastin er fortrinsvis i området 100.000-350.000. Ved 15 kogning i vand giver kollagen proteinet gelatine.

I almindelighed bringes den resorberbare gel til at indeholde gelatine, selv når der er andre fibrøse proteiner til stede. Dette sikrer bøjelighed af gelen og afværger uhensigtsmæssig 20 stivhed, der i nogle tilfælde ville bevirke problemer ved indsættelse af gelen i det hulrum som skal heles. Når en høj grad af bøjelighed er fordelagtig, fx når gelen har form af en tredimensional genstand såsom en stav, indeholder den fortrinsvis 80-100 vægt% gelatine, fordelagtigt 25 praktisk taget 100%. Når gelen foreligger i form af et granulat må graden af bøjelighed eller flexibilitet imidlertid afbalanceres af en vis grad af fasthed for at muliggøre god granulering. I dette tilfælde kan der bruges visse mængder andre fibrøse proteiner end gelatine, og gelati-30 neindholdet kan være i området 60-80%, fx 70 vægt% af den samlede proteinmængde, idet resten kan være tropokollagen eller partielt hydrolyseret kollagen, tropokollagen eller elastin eller eventuelt fibre af uhydrolyseret kollagen eller elastin. Sådanne granulater kan naturligvis om 35 ønsket indeholde større mængder gelatine, og der kan bruges 100% gelatine hvis den er tværbundet i tilstrækkelig grad.

4

DK 159808 B

Gelatinens egenskaber kan påvirkes af den måde hvorpå den er fremstillet, såkaldt spiselig gelatine fremstilles ved sur hydrolyse af hudkollagen og den giver en pH-værdi på ca. 4,2 ved dispergering i vand. På den anden ^ side fremstilles "knoglegelatine" ofte ved alkalisk hydrolyse af knoglekollagen, og ved dispergering i vand giver den en mindre sur pH-værdi, fx ca. 6,0. Det har vist sig at ved reaktion med lige store mængder tværbindingsmiddel giver den mindre sure knoglegelatine en fastere og mere 1Q elastisk gel end den surere spiselige gelatine. Det kan imidlertid være at foretrække at neutralisere gelatineopløsningen fx til ca. 7,0 før tværbindingen for at gøre gelen mere fuldstændigt fysiologisk kompatibel.

Det fibrøse protein udgør fortrinsvis 5-30 vægt% af gelen, fordelagtigt 10-20% i afhængighed af de ønskede egenskaber. Gelen forbliver fortrinsvis fast ved legemstemperaturer, men dette er ikke afgørende. Når således gelen fx er forholdsvis hård bliver resorptionen langsommere. Dette kan opnås ved at bruge mere formaldehyd.

2Q På tilsvarende måde kan en blødere gel være hensigtsmæssig hvis der ønskes en hurtigere resorption. Hårdere geler kan være at foretrække når der behøves granulater fordi sådanne hårdere geler lettere kan underkastes mekanisk granulering.

2^ Gelerne kan også indeholde andre additiver som på ønsket måde påvirker deres fysiske og/eller biokemiske egenskaber. Et nyttigt sådant additiv af kalciumfosfat som har den virkning at det forbedrer gelernes fasthed.

Det antages desuden at kalciumfosfat kan virke til at forsyne knoglen med kalcium ved forsinket afgivelse når gelen er på plads i hulrummet. Polysakkarider og polyvinyl-pyrrolidon, navnlig med højere molekylvægt som fx ca.

40.000, kan også give langsommere resorption.

Resorberbare vandige geler, fx geler baseret på __ tværbundet vandopløseligt fibrøst protein såsom gelatine, 35 kollagen eller elastin og med et eller flere vandopløselige medikamenter såsom antibakterielle midler opløst eller dispergeret

DK 159808 B

5 deri er hidtil ukendte. Disse geler leveres som anført hensigtsmæssigt i granulær form.

De anvendte antibakterielle stoffer kan være antibiotika og andre mikrobiocide eller mikrobiostatiske stof-5 fer. Desuden kan der indgå yderligere medikamenter, som er opløselige i gelernes kvældningsvand, fx analgetiske midler. Desuden kan kvældningsvandet også indeholde andre opløste additiver som fremmer sårhelingen og/eller som gunstigt påvirker gelens fysiske og biokemiske egenskaber.

10 Skådanne stoffer er fx aminosyrer, sukker, polyvalente alkoholer, kogsalt og andre stoffer. Desuden kan gelerne indeholde et røntgenkontrastmiddel.

Når det antibakterielle stof er et antibiotikum er det fortrinsvis et bredspektret antibiotikum som er 15 aktivt både mod gramnegative og grampositive bakterier, fx β-laktamantibiotika såsom et penicillin eller et cephalosporin, et tetracyklinantibiotikum, et makrolid-anti-biotikum såsom erythromycin, et polypeptidantibiotikum såsom bacitracin, novobiocin eller, foretrukket i højere 20 grad, et aminoglykosid antibiotikum såsom streptomycin, neomycin, lincomycin, kanamycin, vancomycin, gentamicin eller sisomicin. Typiske inficerende bakterier er bl.a. Staphylococcus aureus, Proteus, Pseudomonas, Streptococcus, Escherichia coli samt Enterococci, Klebsiella og 25 Staphylococcus albus. Antibiotika er imidlertid ofte kontraindicerede til anvendelse i forbindelse med kirurgisk behandling på grund af deres tendens til at frembringe resistente stammer, og en foretrukken type antibakterielt stof er et metyloloverføringsmiddel, navnlig noxytiolin 30 (1-hydroxymetyl-3-metyl-2-tiourinstof) eller endnu mere foretrukket taurolidin eller en nær analog dertil. Taurolidin er bis-(1,l-dioxoperhydro-1,2,4-tia-diazin-4-yl)-metan, og denne forbindelse og dens nære analoger kan gengives ved formlen 35 6

DK 159808 B

, "0v hvor R·*" er hydrogen eller en metyl-, ætyl-, propyl-, butyl- 2 eller pentylgruppe og R er hydrogen eller en gruppe 10 f1 N^ S ^S02 Γ I 11

-ch2-Hx/J

1 12 15 hvor Rx har den ovenfor angivne betydning. Når Rx og R

begge er hydrogen er det metyloloverførende antibakteriel- le middel taurultam.

De foretrukne aktive stoffer er bredspektrede antibiotika og metyloloverføringsmidler såsom taurolidin.

20 Taurolidin og dets analoger er aktive både mod gramnegative og grampositive organismer såvel som mod de toxiner der dannes af gramnegative bakterier. Når der bruges taurolidin er dets koncentration i den vandige opløsning som er absorberet i gelen fortrinsvis 0,5-5 vægt%, fx 25 1-4%. Når gelen er i form af et granulat foretrækkes der 2% taurolidin til brug i store hulrum. I små hulrum, fx i håndleddet, foretrækkes 4% taurolidin. Taurolidin er kun opløseligt i vand til ca. 3% ved stuetemperatur, så ved højere koncentrationer vil noget materiale være til 30 stede som suspension. Når der bruges gentamicin er koncentrationen deraf fortrinsvis i området 0,05-0,2 vægt%, fx ca. 0,1%.

Komplekset af elementært jod og polyvinylpyrrolidon kan også med fordel bruges som mikrobiocid substans.

35 Tværbinding af det fibrøse protein er nødvendig for at sikre gelens kohæsion og tjener desuden til at nedsætte immunologiske reaktioner mod det "fremmede" pro- 7

DK 159808B

tein ved at reagere med frie aminogrupper. Det foretrukne tværbindingsmiddel er et metyloloverføringsmiddel såsom formaldehyd eller et metyloloverføringsmiddel afledet af formaldehyd såsom det antibakterielle stof taurolidin.

5 Koncentrationen af metyloloverføringsmidlet er fortrinsvis 2,0-5,0 vægt% i forhold til proteinet. I almindelighed kan ved anvendelse af formaldehyd som tværbindingsmiddel procenten af bundet formaldehyd i gelen i forhold til proteinet fortrinsvis være i området 2,0-5,0 og fordelagtigt 10 2,3-4,0. Hvis der således fx bruges 10%s vandig gelatine er det hensigtsmæssigt først at tilsætte ca. 3,6% formaldehyd, hvorved mængden af bundet formaldehyd efter vask falder til ca. 2,7%. Hvis der imidlertid fra første færd kun tilsættes ca. 2,7% formaldehyd, kan man ofte undvære 15 en efterfølgende vask.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede geler har vist sig at have en overraskende høj grad af modstandsevne mod bakterielle infektioner. Det formodes at dette kan stå i forbindelse med anvendelse af formalde-20 hyd eller dets derivater som tværbindingsmiddel. Selv om der ikke er noget frit formaldehyd til stede i slutproduktet, kan det tværbundne proteinmateriale i nogen grad fungere som metyloloverføringsmiddel på lignende måde som taurolidin, hvorved gelen i nogen grad i sig selv 25 har antiseptisk virkning. Desuden kan det være muligt at danne tværbundne geler hvori der ikke bruges noget toxisk tværbindingsmiddel sådan som dem der bruges til tværbinding af visse andre polymere materialer. Dette betyder at der ikke er nogen risiko 30 for at der er tilbageværende mængder toxiske stoffer til stede i gelerne når de anbringes i knoglehulrummet. Eftersom de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede geler er resorberbare, har de den fordel at der kun behøves at være én operation nødvendig ved behandling af et 35 givet tilfælde af osteitis. Når hulrummet først er blevet fyldt med gelen kan såret lukkes og skulle ikke behøve 8

DK 159808 B

at blive åbnet på ny. Det har vist sig i praksis at postoperativ exsudation fra såret meget hurtigt bliver steril og sårhelingen er i almindelighed fri for komplikationer.

Der er høj grad af forekomst af primær heling.

5 Når gelen tværbindes ved hjælp af formaldehyd frem stilles den hensigtsmæssigt ved opvarmning af en passende mængde af det geldannende protein i en vandig opløsning af det aktive antibakterielle stof, samt andre ønskede komponenter, for at opløse proteinet hvorpå formaldehydet 10 tilsættes, fortrinsvis i vandig opløsning eller i form af en polymer af formaldehyd såsom paraformaldehyd. Formalin, der er en 36-40%s vandig opløsning af formaldehyd, er særlig hensigtsmæssig. Når der bruges gelatine kan det fx være spiselig gelatine eller knoglegelatine. Som angivet 15 foran giver knoglegelatine i almindelighed en hårdere og fastere gel end spiselig gelatine. I almindelighed vil der pr. 100 g vandig opløsning indeholdende fx 0,3-4,75 g taurolidin blive anvendt 7,0-12,0 g, fx 10,0 g gelatine, eventuelt sammen med 1-35, fx 25 g dibasisk 20 kalciumfosfat. Den vandige opløsning kan foruden taurolidin indeholde sådanne additiver som gentamycinsulfat, kondroitinsulfat (mukopolysakkarider der findes i knoglevæv og bindevæv og virker som fleksibel forbindelsesmatrix mellem de seje proteinfilamenter i brusk til dannelse af 25 et polymert system der ligner armeret kautsjuk) og polyvinylpyrrolidon; der kan eventuelt 30 35

DK 159808 B

9 også tilsættes finitialet knoglepulver. I almindelighed vil der i en sådan blanding blive anvendt 0,75-1,0 g ca.

36%s vandig formaldehydopløsning. Opløsningen udhældes i en eller flere forvarmede forme, fx et rør af passen-5 de længde, og får lov til at afkøle. Efter afkøling og hærdning kan gelen eventuelt udskæres i stykker af passende størrelse og disse stykker kan eventuelt granuleres ved hjælp af en konventionel granuleringsmaskine eller hakkemaskine. Kornene i granulatet skal i almindelighed TO have en gennemsnitlig diameter i området 1-5 mm og fordelagtigt 2-5 mm for at muliggøre at de let kan indfyldes i hulrummet men ikke udvaskes ved exsudation. Der er i nogle tilfælde muligt at lade granulatet være så finkornet at det kan bruges postoperativt, fx når exsuda-T5 tet viser sig at være usterilt, idet granulatet indføres ved hjælp af en sprøjte via et dræn. Der foretrækkes partikelstørrelser på under 0,5 mm, fx ca. 0,4 mm, til dette formål.

Gelen vil normalt indeholde en ringe mængde frit 20 formaldehyd, og det kan fjernes ved vask indtil der ikke optræder mere formaldehyd i vaskevandet; for at undgå samtidig fjernelse af det antibakterielle stof udføres vasken fortrinsvis med en vandig opløsning af det antibakterielle stof. Testning ved gaskromatografi (GC-WLD eller 25 FID) kan vise frit formaldehyd ned til 0,003%. Som anført ovenfor er den oprindelig tilsatte mængde formaldehyd større end den der til slut er bundet i gelen efter vask. I almindelighed kan der fra begyndelsen i forhold til proteinmængden tilsættes 4% formaldehyd for at frem-30 bringe 2,7% bundet formaldehyd. Når der tilsætte poly-vinylpyrrolidon er procenten af formaldehyd fortrinsvis lavere, fx ca. 3%.

Gelen behøver mindst 24 timer til størkning, men det har vist sig at det er fordelagtigt at lade den 35 stå i en længere periode end dette før den vaskes og eventuelt granuleres. Således bør gelen henstå mindst 1-8 døgn, fordelagtigt 4-7 døgn, i løbet af hvilken periode dens fasthed forbedres kraftigt, muligvis på grund af DK 159808 £ 10 at der fortsat sker tværbindingsrekationer inde i gelen.

Denne fremgangsmåde .er særlig fordelagtig når gelen skal have form af et granulat, idet forøgelsen af fastheden forbedrer gelens granulerbarhed.

5 Som anført foran kan tværbindingen udføres med antibakterielt virksomme metyloloverføringsmidler såsom taurolidin, der i sig selv er det foretrukne antibakteriel-le middel på grund af dets anti-endotoxæmiske virkninger og mangel på udvikling af resistente patogener. Tauroli-10 din kan således inkorporeres i en mængde på ca. 4,75% i en opløsning af spiselig gelatine og henstå i nogle dage. Der sker et svagt fald i mængden af aktivt taurolidin, fx til ca. 3,7%, men tværbindingen indtræder til frembringelse af en gel med tilfredsstillende fasthed.

15 Der behøves ikke nogen vask til fjernelse af overskydende formaldehyd.

Det har vist sig under visse omstændigheder at være nyttigt at nedsætte vandindholdet i gelmaterialet ved partiel tørring. Materialet kan fx tørres til nedsæt-20 ning af vandindholdet med 60-80%, fx ca. 70 vægt%.

Tørringen kan udføres ved at man lægger strimler eller ark af gelen i en ovn eller et varmluftskab ved en temperatur lidt over omgivelsernes, fx 30-50°C såsom ca. 40°C. Som alternativ kan der bruges vakuumtørring.

25 Afvandingsgraden må overvåges omhyggeligt, da det ikke er meningen at materialet skal dehydratiseres fuldstændigt. Tørring af materialet på denne måde har vist sig at medføre den fordel at gelernes fasthed og granulerbarhed forøges.

30 Hvis gelen får form af stave eller andre fauner kan disse hensigtsmæssigt indpakkes sterilt i passende vand- og luftuigennemtrængelige pakkematerialer såsom forsegleligt polyvinylklorid eller polyætylenfolie der er steriliseret fx ved vask med 70%s vandig isopropanol.

35 Folien kan have en bagklædning af papir og/eller aluminiumfolie for at forøge vanduigennemtrængeligheden. Hvis alle de forudgående trin udføres under sterile betingelser behøves der ikke nogen yderligere sterilisation. El- 11

DK 159808 B

lers kan sterilisation udføres ved hjælp af ætylenoxyd eller formaldehyd. Gelen kan således henstå i fx ca.

20 dage med ca. 100 ppm ætylenoxyd. Ætylenoxydniveauet falder omkring denne periode til 1-2 ppm på grund 5 af hydrolysen, og fjernes til sidst. Steriliteten kan lettere opretholdes hvis der bruges en indre og en ydre konvolut af indpakningsfolie og således at kun den indvendige konvolut medtages i operationsstuen.

En særlig hensigtsmæssig behandlingsmetode ved 10 hjælp af det ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede præparat består i at blande gelen i steril gra-nulær form med autologt spongiøst væv vundet fra en sund knogle hos samme patient. Hoftebensranden kan give små mængder spongiøst væv, mens større mængder kan opnås fra 15 trochanter major og spina iliaca posterior. Ved denne anvendelsesmåde er det væsentligt at gelen er isotonisk for at undgå osmotiske virkninger ved kontakt med det spongiøse væv. Gelens vandige fase kan således være fysiologisk kogsaltopløsning eller Ringers laktatopløsning 20 (0,22% mælkesyre, 0,6% NaCl, 0,4% KC1, 0,4% CaCl2,6H20; neutraliseret med NaOH til at være orange over for fenolrødt indikator (pH 7,0), steriliseret i 15 minutter ved 120°C). I almindelighed har de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede geler et kolloidosmotisk tryk 25 som huden kan tåle. Det kolloidosmotiske tryk kan forhøjes ved inkorporering af lavmolekylært polyvinyl-pyrrolidon, fx i molekylvægtsområdet 8000-12000 dalton, fx ca. 11000 dalton. I og med at saltene i sådanne opløsninger kan påvirke gelens størkning ved afkøling indføres 30 de fortrinsvis efter at gelen er størknet, ved at blive inkorporeret i den vaskeopløsning der bruges til at fjerne formaldehyd. For at accelerere inkorporeringen af saltene i gelen kan koncentrationerne af saltene i sådant vaskevand være hypertonisk, og deres optagelse i gelen 35 kan overvåges indtil der er opnået isotoni. Optagelsen er imidlertid ganske hurtig fra isotoniske opløsninger.

I afhængighed af det særlige tilfælde af osteitis kan der træffes foranstaltninger til at dræne området.

DK 159808 B

12 Når helingen sker hurtigt foregår der en sund exsudation af væske. Det har vist sig at når der bruges et ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillet præparat, så konstateres der normalt en forøgelse af sådanne exsudati-5 oner, der faktisk er fuldstændig sterile. Desuden viser hulrummet sig at blive helet overmåde hurtigt.

En ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillet gel (10% gelatine indeholdende 2% taurolidin) er prøvet mod eksperimentelt fremkaldt osteomyelitis hos støver-10 hunde. Det anæsteserede dyrs lår åbnedes fra trochanter major, udskrabedes med et venoscleroticum og podedes med 1 ml af en infektiv blanding isoleret fra osteomyelitis hos en hund og bestående først og fremmest af stammer af Proteus og koagulasepositive stammer af Staphylococcus 1 5 aureus. Der blev implanteret en stålstang som fremmedlegeme for at accelerere inficeringen. Infektionens forløb overvågedes ved røntgenundersøgelse og scintigrafisk undersøgelse.

Da det var konstateret at osteomyeliten var etable-20 ret, blev låret genåbnet og hulrummet fyldt med stave af tværbundet kollagengel indeholdende 2% taurolidin.

Derefter lukkedes såret uden dræn. Helingen af osteomyeliten overvågedes derefter ved røntgen- og scintigrafiske undersøgelser (TC99, 0,2 mCi/kg). Derefter underkastedes 25 den helbredte knogle bakteriologisk og histologisk undersøgelse .

Den først undersøgte hund blev inficeret på den ovenfor beskrevne måde i højre lår og udviklede en klassisk osteomyelitis med udtalt periostal reaktion. For at elimi-30 nere den mulighed at fjernelse af metalstangen bevirkede spontan heling, blev stangen genimplanteret. Bakteriologisk undersøgelse viste i begyndelsen tilstedeværelse af Staphylococcus aureus og Proteus. Tre uger efter operationen var den periostale reaktion stadig konstaterbar 35 ved røntgenundersøgelse, men var allerede ved at trække sig sammen. Forskellen i aktivitet mellem venstre og højre ben, som vist på scintigrammet, var 3,98. Efter seks uger viste røntgenstudier yderligere heling af osteomyelitten.

DK 159808B

13

Scintigrafi viste på det tidspunkt et forhold højre/ven-stre på 1,37-1,39 (to kontroller) nær ved en normal observation.

Seks måneder senere blev der lagt snit gennem 5 knoglen.

Bakteriologi: to prøver var sterile.

Histologi: arplader der delvis indesluttede amorft materiale. Spongiøst væv med aktiv regeneration hvor der kunne ses talrige osteoblastlinjer. Mellem de delvis 10 ødelagte knogle-trabeculae var der større arealer af arplader som var karforsynet ved periferien.

Hos det andet dyr blev begge lår inficeret, det venstre noget kraftigere end det højre. Venstre knogle blev behandlet som beskrevet ovenfor og fyldt med tauro-15 lidin-kollagen-stave, og to måneder senere viste røntgenundersøgelse en kontraktion af den periostale reaktion i den venstre knogle med samtidig forøgelse i den højre. Aktivitetsforholdet i scintigrammet var ændret på tilsvarende måde idet højre/venstre-forholdet ændredes fra 0,79-20 1,16.

Bakteriologi i venstre lår: 1. skrabning, ingen bakterievækst. 2. skrabning, ingen bakterievækst,

Bakteriologi i højre lår: Proteus.

Histologi af venstre lår: udtalt cellulær reak-25 tion; intet fremmed materiale, dvs. taurolidingelen var resorberet; aktiv regeneration af knogle-trabeculae.

Histologi af højre lår: udviste meget udtalt osteomyelitis .

Hos det tredje dyr blev højre lår inficeret mens 30 der i det venstre kun skete implantation af et metallisk fremmedlegeme. Forløbet af behandlingen med taurolidin-kollagen-stave var som i foregående tilfælde og fulgtes af røntgen- og scintigrafisk undersøgelse. Forholdet højre/venstre af deni scintigrammet viste aktivitet ændre-35 de sig fra 3,19 oprindelig til 1,17 efter 3 måneder.

Bakteriologi: 1. skrabning - ingen bakterievækst.

2. skrabning - ingen bakterievækst.

Histologi af højre lår: udtalt cellefattig ardan- DK 159808 B ' 14 ί r nelse som var bygget op mellem de stadig delvis dannede knogle-trabeculae. Ardannelsesprocessen var ophørt i betydelig grad.

Histologi af venstre lår: betændelsesaktivitet 5 omkring det implanterede fremmedlegeme.

Nogle eksempler tjener til nærmere belysning af fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Eksempel 1 '10 125 g spiselig gelatine blev dispergeret i 1250 ml l%s vandig taurolidin i ca. 10 minutter og opvarmedes derefter til 60°C og omrørtes. Der sattes 12 ml 36%s vandig formaldehydopløsning til væskegelen under omrøring. Blandin-gen omrørtes yderligere ved 60°C i 10-15 minutter og ud-hældtes derefter i rene, forvarmede polyvinylkloridrør med diameter på 14 mm. Rørene afkøledes natten over og blev udskåret til længder på 15 cm og skåret åbne. De på denne måde dannede gennemsigtige stave vaskedes i en _ l%s taurolidinopløsning i ca. 4 timer for at fjerne overbo skydende formaldehyd. Formaldehydet konstateredes kvantitativt ved gaskromatografi (GC-WLD) og vasken fortsattes indtil der ikke diffunderede mere frit formaldehyd ind i vaskevandet. Opdagelsesgrænsen for frit formaldehyd ved denne fremgangsmåde var 0,003%.

Et antal af stavene blev granuleret i en elektrisk hakkemaskine med sigteåbninger på 4,5 mm.

Stavene såvel som granulatet blev derefter indesluttet i et hylster af forseglelig polyætylenfolie med bagklædning af aluminiumfolie, i forvejen vasket med 70%s 3 0 isopropanol. Dette hylster kan derefter hermetisk indesluttes i et yderligere, lignende sterilt hylster.

Til dannelse af granulatet kan gelmassen også formes i en større beholder, fx en krystallisationsskål, ^ og efter afkøling kan massen vaskes som ovenfor med en l%s taurolidinopløsning og derefter granuleres i den elektriske hakkemaskine.

DK 159808 B

15

Eksempel 2

Gelatinestave blev fremstillet på den måde der er beskrevet i eksempel 1, men dog med anvendelse af 2%s ^ vandigt taurolidin ved dannelsen af gelen og i vasketrinnet, og med frembringelse af stave med diameter 10 mm og 15 mm.

Eksempel 3 1 0

Fremgangsmåden i eksempel 1 blev gentaget, men dog med anvendelse i stedet for gelatine af 125 g af en blanding af gelatine og tropokollagen i mængdeforholdet 2:1. Tropokollagenet stammede fra dyrehud (kalveskind) med en molekylvægt på ca. 130.000.

15

Eksempel 4

Fremgnagsmåden i eksempel 1 blev gentaget, men med anvendelse i stedet for gelatine af en blanding af 20 . kollagenfibre og gelatine i vægtforholdet 1:3. Produktet var mindre gennemsigtigt end det der vandtes ved anvendelse af gelatine alene. Kollagenfibrene tilsattes i en 10%s suspension i vand. Et lignende produkt fremstilledes ved hjælp af en blanding af kollagenfibre og gelatine 25 i forholdet 1:2, og således at den samlede koncentration af gelatine blev forøget til 20% og mængden af 36%s vandigt formaldehyd til 24 ml.

Eksempel 5 30

Fremgangsmåden i eksempel 1 blev gentaget, men således at vasketrinnet blev udført med 2%s vandigt taurolidin indeholdende isotonisk Ringer-laktatopløsning (0,22% mælkesyre, 0,6% NaCl, 0,4% HC1, 0,4% CaC^/Ol^O; neutrali- _ seret med NaOH til at være orange over for fenolrødt indi-35 q kator; steriliseret i 15 minutter ved 120 C).

Efter oparbejdning af gelen til et granulat blev dette blandet med en lige så stor vægtmængde frisk vundet

DK 159808 B

16 spongiøst væv under sterile betingelser, og ved en operation på osteomyelitis i låret blev produktet indfyldt i det hulrum der dannedes ved fjernelse af inficeret væv. Såret blev lukket under tilvejebringelse af dræn og der-5 efter heledes såret godt, idet exsudationen fra drænet viste sig at være sterilt.

Eksempel 6 1q 10 g spiselig gelatine omrørtes i 30 minutter i 100 ml 2%s vandig taurolidinopløsning indeholdende 5% polyvinylpyrrolidon (PVP). pH reguleredes til 7,0 med 25%s vandigt NaOH. Der tilsattes 1 g af en 36-37%s vandig formaldehydopløsning og blandingen omrørtes i yderligere 15 5 minutter hvorefter der tilsattes 25 g dibasisk kalcium fosfat og omrøringen fortsattes mens opløsningen fik lov til at køle af.

Gelen henstod i mindst 4 og fortrinsvis 4-7 døgn, hvorefter den blev udskåret i stykker med dimensioner 20 ca. 2x3x3 cm, der derpå vaskedes med enten a) en opløsning af ”Drainasept"/NaCl eller b) en opløsning af Ringer-laktat plus 2% taurolidin, idet vasken i begge tilfælde udførtes i 4 timer hvorefter den første opløsning fjernedes og gelen vaskedes i frisk 25 opløsning i yderligere 4 timer.

Gelen vaskedes til slut med 2% taurolidinopløsning indtil der var opnået isotoni. Gelens osmotiske tryk var som følger: før vask 200-400 mmol/kg, 20 efter vask 280-320 mmol/kg, målt ved et 5100 damptryksosmometer leveret af Wescor Inc.

Gelen granuleredes i en hakkemaskine til en partikelstørrelse på omkring 1-2 mm. Eventuelt anbragtes geler-22 ne i en homogenisator (fx "Homocenta") og blev formalet meget fint for at muliggøre at de kunne injiceres i hulrummet gennem et passende dræn. Til slut anbragtes den granulerede gel i plastbeholdere der i forvejen var vasket

DK 159808 B

17 med isopropanol.

Eksempel 7 5 Eksempel 6 blev gentaget med følgende ingredienser: g 2%s taurolidinopløsning (indeholdende 5% PVP) 100

Knoglegelatine 10 1 q 36-37%s vandigt formaldehyd 1

Dibasisk kalciumfosfat 25

Eksempel 8

Eksempel 6 blev gentaget med følgende ingredienser: 15 g

Destilleret vand 100

Taurolidin 2

Spiselig gelatine 10 36-37%s vandigt formaldehyd 1 20

Dibasisk kalciumfosfat 25

Eksempel 9

Eksempel 6 blev gentaget med følgende ingredienser: 25 g 2%s taurolidinopløsning (indeholdende 5% PVP) 100

Knoglegelatine 10

Gentamycinsulfat 0,15 30 36-37%s vandigt formaldehyd 1

Dibasisk kalciumfosfat 25

Eksempel 10

Eksempel 6 blev gentaget med følgende bestanddele:

DK 159808 B

18 g 2%s taurolidinopløsning (indeholdende 5% PVP) 100

Knoglegelatine 10 5 Kondroitinsulfat (natriumsalt) 2 36-37%s vandigt formaldehyd 1

Dibasisk kalciumfosfat 25

Eksempel 11 10

Eksempel 6 blev gentaget med følgende ingredienser: g

Taurolidinopløsning (indeholdende 5% PVP) 100 ^ 5 Knoglegelatine 10

Kollagen (100%) 2 36-37%s vandigt formaldehyd 1

Dibasisk kalciumfosfat 25 2q Eksempel 12

Eksempel 6 blev gentaget med følgende ingredienser: £ 2%s taurolidinopløsning 100

Knoglegelatine 10 ^ 36-37%s vandigt formaldehyd 1

Dibasisk kalciumfosfat 25 I dette tilfælde henstod gelen kun i 1-4 døgn for at størkne. Før vask som i eksemplerne 1-6 var gelens ^ osmotiske tryk 300 mmol/kg. Efter vask var det 290 mmol/kg. Gelen granuleredes som i de foregående eksempler.

Eksempel 13 35 1000 ml af en vandig opløsning indeholdende 2,55% taurolidin og 5% "Kollidon" ® K 17 PF (polyvinylpyrrolidon) og destilleret vand indti] 1000 ml opvarmedes til 60°C og der opløstes 100 g spiselig gelatine (S.0.260) af 260- 19

DK 159808 B

280 Bloom g. pH reguleredes til 7,0 med 25%s NaOH. Der tilsattes 7,5 g 35%s vandig formaldehydopløsning ("Merck" og blandingen omrørtes i 15 minutter. Gelen henstod i 7 døgn hvorefter den vaskedes i 9 timer i en 5 lige så stor vægtmængde Ringer-laktaopløsning indeholdende 10% taurolidin, efterfulgt af 60 timer i frisk opløsning. Gelen granuleredes som i tidligere eksempler.

Eksempel 14 10

Eksempel 13 blev gentaget med følgende ingredienser: g 4,75%s taurolidinopløsning 1000

Spiselig gelatine, S.o. 260 100 1 g 35%s vandigt formaldehyd ("Merck" ®) 7,5

Den anvendte taurolidinopløsning indeholdt: g "Kollidon" ® K 17 PF 5 2q (polyvinylpyrrolidon) taurolidin 4,75 destilleret vand indtil 100

Eksempel 15 25

Eksempel 14 blev gentaget under udeladelse af vasketrinnet .

Eksempel 16 30 2,0 g taurolidin blev opløst ved 60°C i 94 g destil leret vand og efter afkøling til stuetemperatur tilsattes der 1,5 g mælkesyre (ca. 91%) og pH reguleredes til 7,0 med 95%s vandigt natriumhydroxyd. Der tilsattes 0,024 g kaliumklorid, 0,024 g kalciumklorid-hexahydrat og 0,33 35 g natriumklorid. Opløsningen opvarmedes til 60°C og der dispergeredes 2 g spiselig gelatine deri. pH reguleredes til 7,0 med 25%s NaOH. Derpå tilsattes der 0,035 g 100%s formaldehyd og opløsningen omrørtes indtil den var helt

DK 159808 B

20 klar. Opløsningen udhældtes i en 250 ral stor infusionskolbe og autoklaveredes i 20 minutter ved 120°C.

Eksempel 17 5 4,0 g taurolidin opløstes i 100 g destilleret vand og der dispergeredes 10 g spiselig gelatine deri under omrøring. pH reguleredes til 7,0 med 25%s NaOH. Opløsningen opvarmedes til 60°C i 10-15 minutter og udhældtes 10 i forvarmet polyvinylkloridrør med diameter 14 mm. Rørene henstod i nogle døgn og blev derefter skåret op. De på denne måde vundne gennemsigtige stave viste sig at have lignende fasthed som de geler der var dannet ved tværbinding ved hjælp af formaldehyd. Der konstateredes en ringe 1 5 mængde taurinamid hvilket viser metyloloverførmg ved hjælp af taurolidinet.

Eksempel 18 20 Eksempel 16 blev gentaget med anvendelse af 4,75 g taurolidin og 5 g polyvinylpyrrolidon.

25 30 35

Claims (4)

1. Fremgangsmåde til fremstilling af et farmaceutisk præparat til anvendelse ved behandling af osteitis og inde- ^ holdende et resorberbart fibrøst protein og en effektiv mængde af et vandopløseligt medikament, kendetegnet ved at man danner en resorberbar vandig gel ved at opløse eller dispergere (1) et fibrøst protein indeholdende en overvejende mængde gelatine og (2) en effektiv mængde af ^q det vandopløselige medikament, hvorefter man tværbinder det fibrøse protein med formaldehyd, taurolidin eller tau-rultam i en mængde på 2,0-5,0 vægt% af proteinmængden og derefter lader gelen størkne.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet .jtj ved at præparatet oparbejdes til at have form af granuler eller stave.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved at præparatet oparbejdes til granulær form af gelen i blanding med spongiøst væv. 2Q

4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, kendetegnet ved at der som medikament bruges et antibiotikum eller taurolidin eller taurultam. 25 30 35