DK148903B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af enkephalin-analoge pentapeptidderivater eller syreadditionssalte deraf - Google Patents

Description

148903

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte, enkephalin-analoge pentapeptidderivater med den almene formel I

A - B - Gly - D - E I

5 hvor A betegner en gruppe med den a|mene formel ,*2 /fly I1 L4 ly)-CH -C-CO-

Xj/ 2 i

R, '-' N

H

.NH

hvor betegner hydrogen eller C^_^-alkyl, og R2 betegner hy drogen, eller og R2 sammen betegner en ethylenbro, og Rg betegner hydroxy eller C^_^-alkoxy i 3-, 4- eller 5-stil- 10 lingen; B betegner resten af D-isomeren af en naturligt forekommende ikke- aromatisk o-aminosyre; D betegner en gruppe med den almene formel

Z

?4 CH2 r 1 2 -N - CH - CO- hvor R4 betegner hydrogen eller C^_4-alkyl, og 15 Z betegner phenyl eller phenyl, der er mono- eller disubsti- tueret med halogen, nitro, C^_4-alkyl eller C^_4-alkoxy, og 2 148903 E betegner en gruppe med den almene formel ?5 *6

- N - CH - CH2OH

hvor Rg er hydrogen eller C^ ^-alkyl, og

Rg er hydrogen, den substituent, der er bundet til a-car-bonatomét i en naturligt forekommende α-aminosyre, en 5 gruppe med den almene formel

-(CHJ-CH-OH L m L

hvor m er et helt tal fra 1 til 6, eller en gruppe med den almene formel -(CH2)n-CH2-S(0)p-R7 10 hvor Ry er C^_g-alkyl, og n og p uafhængigt af hinanden er 0, 1 eller 2 med det forbehold, at Ry er andet end methyl, når n er 1, og p er 0, hvorhos grupperne A og D har L-konfiguration, og gruppen E har D-elter L-konfiguration, eller fysiologisk hydrolyserbare, fysiologisk 15 tolerable estere deraf med C2_g-aliphatiske mono- eller dicarboxylsy-rer eller benzoesyre eller fysiologisk tolerable syreadditionssalte af sådanne pentapéptider og estere.

Ved beskrivelsen af de her omhandlede polypeptider som pentapepti-der skal det bemærkes, at aminoalkoholgruppen E regnes som et 20 aminosyrederivat.

Forbindelser, der svarer til forbindelserne med den almene formel I uden en amidrnogruppe i gruppen A, er kendte og hører til den klasse af forbindelser, der beskrives i tysk offentliggørelsesskrift nr.

2702711 og den ækvivalente britiske patentbeskrivelse nr. 1.578.873.

25 Alle de her omhandlede forbindelser er hidtil ukendte og udviser overraskende LH-sekretionsinhiberende virkning i modsætning til de kendte enkephalinpentapeptider.

3 148903 I pentapeptiderne med formlen I foretrækkes følgende betydninger eller kombinationer deraf: 1) R-| og R2 betegner begge hydrogen; 2) Rg betegner hydroxy. Mest foretrukket sidder Rg i 4-stilling og 5 betegner især 4-hydroxy; 3) B betegner -(D)-Ala-; 4) R^ betegner C^-alkyl, f.eks. methyl. Når R^ betegner Cg alkyl er dette fortrinsvis n-propyl, isopropyl eller n-butyl, især n-propyl; 10 5) Z betegner phenyl eller phenyl, der er mono- eller disubstitue- ret med én eller to substituenter udvalgt blandt gruppen bestående af fluor, chlor og nitro, især fluor. Når Z betegner substitueret phenyl, er dette fortrinsvis monosubstitueret phenyl, især m- eller p-substitueret phenyl. Mest foretrukket betegner 15 Z pheny! eller m- eller p-fluorphenyl, især phenyl eller p-fluor- phenyl; 6.1) Rg betegner fortrinsvis hydrogen; 6.2) som substituenten knyttet til o-carbonatomet i en naturlig a-aminosyre betegner Rg fortrinsvis en gruppe med formlen 20 CHg-S-CHg-CHg-, HO-CHg-, CHg-CH(OH)- eller H2NCO-CH2-CH2; 6.3) når Rg har en anden betydning end angivet i 6.2), betegner det fortrinsvis en gruppe med formlen CHg-SO-CHg-CHg- eller CHg-S02-CH2-CH2-; 25 6.4) Rg betegner mest foretrukket gruppen med formlen CHg-SO-CH2-CH2-; 6.5) resten E, herunder de foretrukne rester E angivet under 6.1) - 6.4) ovenfor, har fortrinsvis L-konfiguration. Mest foretrukket betegner E -Met(0)-ol, dvs. resten af L-methioninolsulfoxid.

30 Hydroxygrupper i pentapeptiderne med formlen I, især hydroxygrup- pen i den endestillede β-aminoal kohol rest E, kan være esterificeret med C2_g-aliphatiske mono- eller dicarboxylsyrer eller benzoesyre til 4 148903 dannelse af tilsvarende fysiologisk hydrolyserbare, fysiologisk tolerable estere, dvs. estere, der hydrolyseres til dannelse af en fysiologisk tolerabel syre.

Egnede esterformer blandt C2_g-aliphatiske mono- eller dicarboxylsy-5 rer omfatter f.eks. acetaterne.

Pentapeptiderne med formlen I og deres estere kan foreligge i syre-additionssaltform. Syreadditionssalte kan f.eks. dannes med organiske syrer, polymere syrer og uorganiske syrer. Sådanne syreadditions-saltformer omfatter f.eks. hydrochloriderne og acetaterne.

10 En klasse af de her omhandlede forbindelser omfatter pentapeptiderne med formlen I, hvor B betegner -D-Ala-, Z betegner phenyl eller phenyl, der er mono- eller disubstitueret med halogen, nitro, C^-alkyl eller C^-alkoxy, og R^, R2, Rg, R4 og E har den i sammenhæng med formlen I angivne betydning samt syreadditionssaltene 15 deraf.

Analogifremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at a) to eventuelt beskyttede peptidenheder, som hver indeholder mindst én aminosyre-, aminoalkohol- eller aminoalkoholesterrest, ved hjælp af en peptidbinding kondenseres i den til opnåelse af 20 det ønskede peptid med den almene formel I, eller en ester deraf med en Cg.g-aliphatisk mono- eller dicarboxylsyre eller med benzoesyre, nødvendige rækkefølge, hvorefter om ønsket en således opnået eventuelt beskyttet forbindelse med den almene formel I, der indeholder mindst én fri hydroxygruppe, esterifice- 25 res med en C2_g-aliphatisk mono- eller dicarboxylsyre eller med benzoesyre, eller b) en eventuelt beskyttet forbindelse med den almene formel I, hvor E er methioninol, eller en ester deraf med en Cj.g-aliphatisk mono- eller dicarboxylsyre eller med benzoesyre, oxideres til en 30 tilsvarende forbindelse eller ester, hvor E er methioninol-sulfoxid eller -sulfon, eller 5 148903 c) en eventuelt beskyttet forbindelse med den almene formel I, hvor’ den N-terminale aminogruppe ikke bærer en amidinogruppe, eller en ester deraf med en C2_g-aliphatisk mono- eller dicarboxylsyre eller med benzoesyre, omsættes med et reagens, der er i stand til 5 at indføre en amidinogruppe på N-terminalen af forbindelsen eller esteren, og eventuelle beskyttelsesgrupper fjernes, og forbindelserne med den almene formel I eller estere deraf med Cj^-aliphatiske mono- eller dicarboxylsyrer eller med benzoesyre udvindes i fri form eller i 10 syreadditionssaltform.

De ovenstående fremgangsmåder kan f.eks. udføres i analogi med de fremgangsmåder, der beskrives i nedenstående eksempler.

For så vidt som fremstillingen af udgangsmaterialerne ikke nøje beskrives, er forbindelserne kendte eller kan fremstilles og renses i 15 overensstemmelse med kendte fremgangsmåder.

Et egnet reagens til udførelse af fremgangsmådetrin c) er f.eks.

1-amidino-3,5-dimethylpyrazol, hensigtsmæssigt anvendt i saltform, f.eks. i form af nitratet. Omsætningen udføres hensigtsmæssigt, i et opløsningsmiddel eller fortyndingsmiddel, der er inert over for reakti-20 onsdeltagerne under reaktionsbetingelserne, f.eks. dimethyIformamid.

De her omhandlede peptapeptider og estere samt de fysiologisk tolerable syreadditionssalte deraf udviser værdifulde farmakologiske egenskaber, som det indiceres ved dyreforsøg. De udviser især en lutei-niseringshormon-LH-sekretionshæmning og CNS-depressantvirkning, 25 som det f.eks. indiceres ved nedenstående testmetoder.

1. LH-Sekretionsinhiberende aktivitet; ovulationsinhibering i rotten.

Voksne hunrotter, som hver vejer 200-250 g, og som har en påvist regulær 4-dages oestruscyklus holdes under standardbetingelser (14 timers lys (04.00 -18.00), 24°C og 55-60%’s relativ luftfugtighed) og 30 tillades adgang ad libitum til foder og vand. Testforbindelsen admini- 6 148903 streres subcutant under præ-oestrusfasen, idet doserne administreres én gang ki. -13.00 og igen kf. 16.00. 20 timer efter den første dosis dræbes dyrene, æggelederne åbnes, og det totale antal æg i begge ledere tælles med et dissektionsmikroskop. Vurderingen udføres efter 5 et "alt-eller-intet"-princip, idet ovulationen kun anses for at være inhiberet, når der ikke findes nogen æg. Der anvendes fem rotter pr. dosis. Ved denne test har forbindelsen ifølge eksempel 1 en EDgQ-værdi på 0,03 mg.

2. CNS-depressantvirkning: 10 Observation af ændringer i den spontane opførsel hos mus og rotter (P.O.T.-test) i overensstemmelse med de af J.H. Nodide et al. i "Animal and Clinical Pharmacological Techniques in Drug Evaluation”,

Chicago, 1964 og i "Psyehopharmacologia", 13, 222 - 257 (Berlin, 1968) beskrevne principper.

15 Pentapeptiderne, esterne og saltene er derfor indiceret til anvendelse i) ved behandlingen af individer med sygdomme med en ætiologi forbundet med eller moduleret af LH-sekretion eller med en ætiologi, i hvilken den fysiologiske regulering af LH-sekretionen er impliceret, f.eks. ved behandlingen af prostatahypertrofi eller ved behandlingen 20 af menopausesyndrom, især post-menopausale hedeture, f.eks. i overensstemmelse med de af Tataryn et al. ("Thermo-regulatory mechanisms and their Therapeutic Implications, 4th. Int. Symp. on the Pharmacology og Thermoregulation, Oxford, 1979" published -Karger, Basel 1980, side 202-207) og Casper et al. ("Science", 205, 25 side 823-825 (1979)), beskrevne undersøgelser og ii) som psykofar-maceutika, f.eks. ved behandling af psykotiske tilstande. Ved begge anvendelser i) og ii) er en indiceret dosis i området fra 0,1 til 10 mg pentapeptid eller ester, hensigtsmæssigt administreret i delte doser 2-4 gange daglig i enhedsdosisform eller i retardform. Egnede en-30 hedsdosisformer, f.eks. til oral administration, indeholder således fra 0,025 til 5,0 mg af et peptapeptid eller en ester som beskrevet ovenfor eller af en ækvivalent mængde af et farmaceutisk tolerabelt salt eller complex deraf sammen med et(en) fast eller flydende farmaceutisk fortyndingsmiddel eller bærer derfor. Sådanne præparater kan 35 f.eks. være i form af en opløsning eller en tablet.

7 148903 I beskrivelsen og kravene samt i nedenstående eksempler anvendes følgende forkortelser:

Met-ol = (L)-meth ion i nol resten med formlen ch3sch2ch2ch(ch2oh)nh- 5 Met(0)-ol = (L)-methioninolsulfoxidresten med formlen ch3-s(o)-ch2ch2ch(ch2oh)nh-

MeTyr = -N-methyl-Tyr-

MeTyKBu*) = -N-methyl-O-tert.butyl-Tyr-

MePhe = -N-methyl-Phe- 10 (N-propyl)Phe = -N-n-propyl-Phe- (N-i.butyl)Phe = -N-isobutyl-Phe- (N-butyl)Phe = -N-n-butyl-Phe- (N-propyi)Phe(p-F) = -N-n-propyl-p-fluor-Phe- DMF = dimethylformamid 15 Boc = tert.butyloxycarbonyl Z = benzyloxycarbonyl.

I overensstemmelse med standardnomenklatur forstås det, at alle aminosyrerester indiceret ved trebogstavsforkortelsen har L-konfigu-ration, medmindre andet er angivet.

20 Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse belyses nærmere ved nedenstående eksempler: EKSEMPEL 1

Na-Amidino-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-Met(0)-ol-acetat.

1 g H-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-Met(0)-ol-hydrochlorid opløst i 10 ml 25 dimethylformamid omsættes med 1,9 g 1-amidino-3,5-dimethylpyrazolni-trat i 0,5 ml N-methylmorpholin og 0,8 ml triethylamin. Efter 5 dage indstilles reaktionsblandingen til pH-værdi 5-6 ved tilsætning af IN eddikesyre og inddampes til tørhed i vakuum. Remanensen opløses i vand, og opløsningen anbringes på en chromatograf i kolonne, som 30 indeholder 50 g af en svagt sur ionbytter. Efter vask med 0,1%’s 8 148903 eddikesyre elueres produktet med en eddikesyregradient på fra 0,1% til 95%. Fraktioner, som indeholder den i overskriften nævnte forbindelse, samles og lyofiliseres, hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse i form af et lyst amorft pulver, der sønderdeles ved 5 140°Cr [a]^ = -50,8° Cc = 0,7 i dimethylformamid).

EKSEMPEL 2

Na-Amidino-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe(p-F)-Met(0)-ol-hydrochlorid.

Den i overskriften nævnte forbindelse fremstilles i analogi med eksempel 1 under anvendelse af H-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe(p-F)-Met- 20 10 (O)-ol-hydrochlorid som udgangsmaterialet. [<x]q = -29,3° (c = 1 i 95%’s eddikesyre).

EKSEMPEL 3

Na-Amidino-Tyr-(D)-Ala-Gly-(N-propyl)Phe-Met-ol-hydrochlorid 1,3 ml 8N HCI i dioxan og derefter 0,35 ml tert.butylnitrit sættes til 15 en opløsning af 1,04 g Na-amidino-Tyr-(D)-Ala-NH-NH2-hydrochlorid i 20 ml dimethylformamid ved en temperatur på -18°C. Efter henstand i 10 minutter ved -18°C neutraliseres reaktionsblandingen med 2,3 ml N-ethyldiisopropylamin og forenes med en i forvejen afkølet opløsning, som indeholder 1,5 g H-GIy-(N-propyl)Phe-Met-ol-hydrochlorid og 20 0,62 ml N-ethyldiisopropylamin i 15 ml dimethylformamid. Efter omsæt ning i 1 time ved -15°C og i yderligere 3 timer ved -10°C afdampes opløsningsmidlet i vakuum, og remanensen optages i vand og vaskes adskillige gange med methylenchlorid. Den vandige fase inddampes til ca. 60 ml, adsorberes på en polystyrenadsorptionsharpiks, vaskes 25 med vand og elueres med vandigt methanol. Efter inddampning til tørhed og udfældning fra methanol/ethylether fås den i overskriften 20 nævnte forbindelse, [ot]^ = -41,0° (c = 1 i dimethylformamid), sønderdeling ved 90°C.

9 148903

Udgangsmaterialerne til anvendelse i ovenstående fremgangsmåde fremstilles som følger: a) H-(N-Propyl)Phe-NH-NH-Z-hydrochlorid.

10.0 g NaBHgCN og, efter yderligere 5 minutter, 3,2 ml propional- 5 dehyd sættes til en opløsning af 14,0 g H-Phe-NH-NH-Z-hydrochlorid i 120 ml methanol ved 20°C. Efter omsætning i 2 1/2 time afdampes opløsningsmidlet i vakuum, der tilsættes 50 ml vand, og pH-værdien indstilles til stærk basisk reaktion (= pH-værdi 12) ved tilsætning af ION natriumhydroxid, og produktet ekstraheres med methylenchlorid.

10 Ekstrakten vaskes grundigt med vand, tørres over natriumsulfat og behandles med et overskud af HCI i ethylether. Krystallisationen fuldendes ved tilsætning af yderligere ether, hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse, [o]q. = +42,5° (c = 1 i dimethyl-formamid).

15 b) Boc-Gly-(N-Propyl) Phe-NH-NH-Z.

11,8 ml pivaloylchlorid sættes til en opløsning af 16,8 g Boc-Gly-OH i 100 ml tetrahyd rof uran ved -20°C, og blandingen omrøres i 15 minutter ved -15°C. Derefter tilsættes en opløsning af 12,5 g H-(N-prop-yl)Phe-NH-NH-Z og 5,5 ml N-ethyldiisopropylamin i 50 ml tetrahydro-20 furan, og reaktionsblandingen omrøres i 1 time ved -15°C, 1 time ved 0°C og i 20 timer ved 10°C. Efter behandling med 150 ml IN kalium-hydrogencarbonat ekstraheres produktet med ethylacetat, vaskes med fortyndet kaliumhydrogencarbonat og kaliumhydrogensulfat og vand og tørres over natriumsulfat, og opløsningsmidlet afdampes i vakuum.

25 Den i overskriften nævnte forbindelse renses chromatografisk under anvendelse af silicagel og methylenchlorid/methanol som elueringsmid-del.

c) Boc-GIy-(N-Propyl)Phe-NH-NH2· 21.1 g Boc-Gly-(N-propyl)Phe-NH-NH-Z i 100 ml methanol hydrogene-30 res i nærværelse af en palladiumkatalysator i 1 time ved 2-3 bar hydrogentryk. Opløsningsmidlet afdampes i vakuum, og den amorfe 148903 ίο remanens tørres over phosphorpentoxid og kaliumhydroxid i vakuum,

2 O

hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse, [«]q = -39,4° (c = 1 i dimethylformamid).

d) Boc-Gly-(N-Propyl) Phe-Met-ol.

5 8,6 ml 8N HCI i dioxan og derefter 2,1 ml tert.butylnitrit sættes under omrøring til en opløsning af 7,8 g Boc-Gly-(N-propyl) Phe-NH-NHj i 50 ml dimethylformamid ved -18°C. Efter henstand i 10 minutter ved -18°C neutraliseres blandingen ved tilsætning af 12,0 ml N-ethyldiisopropylamin og forenes med en i forvejen afkølet opløsning 10 af 5,4 g methioninol [CHgSC^C^CHCN^yC^OHj i 30 ml dimethylformamid. Efter omsætning i 3 timer ved -10°C fortyndes reaktionsblandingen med ethylacetat, vaskes med fortyndet kaliumhydrogencar-bonat og kaliumhydrogensulfat og vand og tørres over natriumsulfat. Opløsningsmidlet afdampes i vakuum, og produktet renses chromato-15 grafisk under anvendelse af silicagel og methylenchlorid/methanol som elueringsmiddel, hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse.

e) H-Gly-(N-Propyl) Phe-Met-ol-hydrochlorid.

En opløsning af 9,9 g Boc-Gly-(N-propyl) Phe-Met-ol i 20 ml ethyl-ether behandles med 100 ml 5N HCI i ethylether ved 0°C. Efter yder-20 ligere 1 time ved 0°C afdampes opløsningsmidlet i vakuum, og remanensen omkrystalliseres af ethylacetat/methanol/ethylether, hvorved 2 0 fås den i overskriften nævnte forbindelse, [o]^ = -72,5° (c = 1 i dimethylformamid). Produktet sønderdeles ved 60°C.

f) Boc-Tyr-(D)-Ala-NH-NH-Z.

25 6,6 ml isobutylchlorformiat sættes til en opløsning af 14,1 g Boc-

Tyr-OH og 5,6 ml N-methylmorpholin i 100 ml tetrahydrofuran ved -20°C.

Efter yderligere 5 minutter ved -20°C tilsættes en opløsning indeholdende 13,7 g H-(D)-Ala-NH-NH-Z-hydrochlorid og 5,0 ml N-meth-30 ylmorpholin i 50 ml dimethylformamid. Efter omsætning i 2 1/2 time 11 148903 ved -15°C tilsættes 100 ml IN kaliumhydrogencarbonat, og blandingen fortyndes med ethylacetat, vaskes med fortyndet kaliumhydrogencarbonat og kaliumhydrogensulfat og vand og tørres over natriumsulfat.

Den i overskriften nævnte forbindelse udvindes ved afdampning af 5 opløsningsmidlet i vakuum og omkrystallisation af remanensen af ethylacetat/hexan/ethylether.

g) H-Tyr-(D)-Ala-NH-NH-Z-hydrochlorid.

100 ml 5N HCI i ethylether sættes til en opløsning af 25,0 g Boc-Tyr-(D)-Ala-NH-NH-Z i 50 ml ethylacetat ved 0°C. Krystallisa-10 tionen fuldendes efter 1 1/2 time ved tilsætning af yderligere ethylether, og den i overskriften nævnte forbindelse udvindes ved fil-2 0 trering, [a]^ = +32,8° (c = 1 i dimethylformamid), sønderdeling ved 200°C.

h) Na-Amidino-Tyr-(D)-Ala-NH-NH-Z-hydrochlorid.

15 12,1 g 1-amidino-3,5-dimethylpyrazol-nitrat sættes til en opløsning af 8,8 g H-Tyr-(D)-Ala-NH-NH-Z-hydrochlorid og 2,8 ml triethylamin i 50 ml dimethylformamid. Blandingen omrøres i 4 dage ved 50-60°C, og der tilsættes 3,0 ml triethylamin. Opløsningsmidlet fjernes ved afdampning i vakuum, og remanensen optages i vand og ekstraheres adskilli-20 ge gange med methylenchlorid. Den vandige fase inddampes derefter til ca. 400 ml og adsorberes på en polystyrenadsorptionsharpiks, og den i overskriften nævnte forbindelse elueres som nitratet under anvendelse af methanol/vand som elueringsmiddel. Eluatet inddampes til tørhed, tørres atter i vakuum, opløses i ethylacetat i nærværelse 25 af en mindre mængde ethanol, og den i overskriften nævnte forbindelse udvindes som sit hydrochlorid ved tilsætning af ethylether og 2 n overskud af 5N HCI i ethylacetat. [a]^ = +23,3° (c = 1 i dimethylformamid), sønderdeling ved 50°C.

i) Na-Amidino-Tyr-(D)-Ala-NH-NH2-hydrochlorid.

30 1,6 g Na-amidino-Tyr-(D)-Ala-NH-NH-Z-hydrochlorid i 20 ml methanol hydrogeneres i nærværelse af en palladiumkatalysator ved 2-3 bar

Claims (2)

148903 hydrogentryk. Efter 30 minutter frafiltreres katalysatoren, opløsningsmidlet afdampes i vakuum, og remanensen omkrystalliseres af methanol/ethylether, hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse, = +13,2° (c = 1 i dimethylformamid), sønderdeling ved 5 80°C. EKSEMPEL 4 Na-Amidino-Ty r- CD) - Ala-Gly-(N-propyl) Phe-Met(O) -ol-hydrochlorid 1,05 g N0-amidino-Tyr-(D)-Ala-Gly-(N-propyI)Phe-Met-ol-hydrochlorid Cjfr. eksempel 3) opløses i 10 ml eddikesyre og oxideres ved 20°C 10 under anvendelse af 0,15 ml 11M hydrogenperoxid. Efter 10 minutter udfældes produktet med ethylether. Det rå produkt renses ved modstrømsfordeling i en blanding af chloroform:methanol:vand (65:35:10) (v/v)). Den i overskriften nævnte forbindelse fås efter omkrystallisa- 2 0 tion af methanol/ethylether, [«]q = -33,6° (c = 1 i 95%'s eddikesy-15 re).

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af enkephalin-analoge penta-peptidderivater med den almene formel I A - B - Gly - D - E I 20 hvor A betegner en gruppe med den almene formel /*2 / 3 k j*l {In-CH2-C-C0- S%5 6// i R3 n 7 \C-HH H J" m2 NH 148903 hvor R.| betegner hydrogen eller C-j^-alkyl, og 1*2 betegner hydrogen, eller Rj og R2 sammen betegner en ethylenbro, og Rg betegner hydroxy eller ^-alkoxy i 3-, 4- eller 5-stil-5 lingen; B betegner resten af D-isomeren af en naturligt forekommende ikke-aromatisk o-aminosyre; O betegner en gruppe med den almene formel Z R. CH i4 12 -N - CH - CO- hvor R^ betegner hydrogen eller _^-alkyl, og 10 Z betegner phenyl eller phenyl, der er mono- eller disubsti- tueret med halogen, nitro, C^_^-alkyl eller C^^-alkoxy, og E betegner en gruppe med den almene formel ?5 ?6 - N - CH - CHgOH hvor Rg er hydrogen eller C-j^-alkyl, og 15 R6 er hydrogen, den substituent, der er bundet til a-car- bonatomet i en naturligt forekommende α-aminosyre, en gruppe med den almene formel -(CH9) -ch9oh L m / hvor m er et helt tal fra 1 til 6, 20 eller en gruppe med den almene formel -(CH2)n-CH2-S(0)p-R7 148903 hvor Ry er C^g-alkyl, og n og p uafhængigt af hinanden er 0, 1 eller 2 med det forbehold, at Ry er andet end methyl, når n er 1, og p er 0, hvorhos grupperne A og D har L-konfiguration, og gruppen E har D-5 eller L-konfiguration, eller fysiologisk hydrolyserbare, fysiologisk tolerable estere deraf med Cj^-aliphatiske mono- eller dicarboxylsy-rer eller med benzoesyre eller fysiologisk tolerable syreadditionssalte af sådanne pentapeptider og estere, kendetegnet ved, at 10 a) to eventuelt beskyttede peptidenheder, som hver indeholder mindst én aminosyre-, aminoalkohol- eller aminoalkoholesterrest, ved hjælp af en peptidbinding kondenseres i den til opnåelse af det ønskede peptid med den almene formel I, eller en ester deraf med en Cjg-aliphatisk mono- eller dicarboxylsyre eller med 15 benzoesyre, nødvendige rækkefølge, hvorefter om ønsket en således opnået eventuelt beskyttet forbindelse med den almene formel I, der indeholder mindst én fri hydroxygruppe, esterifice-res med en C2_g-aliphatisk mono- eller dicarboxylsyre eller med benzoesyre, eller 20 b) en eventuelt beskyttet forbindelse med den almene formel I, hvor E er methioninol, eller en ester deraf med en C2_g-aliphatisk mono- eller dicarboxylsyre eller med benzoesyre, oxideres til en tilsvarende forbindelse eller ester, hvor E er methioninol-sulfoxid eller -sulfon, eller 25 c) en eventuelt beskyttet forbindelse med den almene formel I, hvor den N-terminale aminogruppe ikke bærer en amidinogruppe, eller en ester deraf med en C2_g-aliphatisk mono- eller dicarboxylsyre eller med benzoesyre, omsættes med et reagens, der er i stand til at indføre en amidinogruppe på N-terminalen af forbindelsen eller 30 esteren, og eventuelle beskyttelsesgrupper fjernes, og forbindelserne med den almene formel I eller estere deraf med C2_g-aliphatiske mono- eller