DE865502T1 - Auf fluoreszenz basierendes erkennungsverfahren für liganden - Google Patents
Auf fluoreszenz basierendes erkennungsverfahren für ligandenInfo
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Claims (8)
1. Auf Fluoreszenz basierendes Absuchverfahren zur Identifizierung eines Liganden,
der an ein vorher bestimmtes Zielprotein bindet, wobei das Verfahren die folgenden Schritte umfaßt:
(a) Auswahl einer großen Anzahl von Verbindungen als Testliganden, von
denen nicht bekannt ist, ob sie an das Zielprotein binden;
(b) Inkubation des Zielproteins zusammen mit jedem der Testliganden, wodurch
eine Testzusammensetzung hergestellt wird, und in Abwesenheit eines
Testliganden, wodurch eine Kontrollzusammensetzung hergestellt wird;
(c) Inkontaktbringen der Test- und Kontrollzusammensetzungen mit einer
Konformation-sensitiven Fluoreszenzsonde;
(d) Behandlung der Test- und Kontrollzusammensetzungen unter Bedingungen,
die bewirken, daß das Zielprotein bis zu einem geeigneten Ausmaß entfaltet wird;
(e) Messung der Fluoreszenzemission der Konformation-sensitiven Fluoreszenzsonde
in den Test- und Kontrollzusammensetzungen; und
(f) Vergleich der in Schritt (d) durchgeführten Messung der Test- und Kontrollzusammensetzungen,
wobei der Testligand ein Ligand ist, der an das Zielprotein bindet, wenn die Intensität der Fluoreszenzemission der Sonde in der
Testzusammensetzung stärker oder schwächer ist als in der Kontrollzusammensetzung.
'
2. Verfahren nach Anspruch 1, das außerdem die Wiederholung der Schritte (b) bis
(f) mit einer großen Anzahl von Testliganden umfaßt, bis ein Ligand identifiziert
ist, der an das Zielprotein bindet.
3. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Fluoreszenzsonde vorzugsweise an die
gefaltete, ungefaltete oder geschmolzene globuläre Form des Proteins bindet.
..... .p.E/EP O 365502 Tl
4. Verfahren nach Anspruch 3, wobei die Sonde aus der Gruppe ausgewählt ist,
die aus 1-Anilino-8-naphthalensulfonat (ANS), Bis-1-anilino-8-naphthalensulfonat
(Bis-ANS) und 6-Propionyl-2-(N,N-dimethyl)aminonaphthalen (Prodan) besteht.
5. Verfahren nach Anspruch 4, wobei die Fluoreszenzsonde Bis-ANS ist.
6. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Behandlung umfaßt, daß die Temperatur,
der die Test- und Kontrollzusammensetzungen ausgesetzt werden, erhöht wird, daß die Test- und Kontrollzusammensetzungen mit einem Protein-Denaturierungsmittel
in Kontakt gebracht werden oder daß Kombinationen davon angewendet werden.
7. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Zielprotein im Vergleich zur Wildtyp-Version
des Proteins stabilisierende oder destabilisierende Mutationen enthält.
8. Verfahren nach Anspruch 1, wobei der Testligand aus der Gruppe ausgewählt
ist, die aus Metallen, Peptiden, Proteinen, Lipiden, Polysacchariden, Nucleinsäuren,
kleinen organischen Molekülen und Kombinationen davon besteht.
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