DE69730040T2 - In ovo impfung gegen die newcastle-krankheit - Google Patents
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Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung eines Newcastle Disease Virus-Stammes bei der Herstellung eines Vakzins zur in ovo-Vakzination von Geflügel gegen eine Infektion mit Newcastle Disease (atypische Geflügelpest).
- Die Vakzination in ovo mit Virus-hältigen Vakzinen wurde von Sharma et al. ausführlich beschrieben (US-Patent Nr. 4458630). Insbesondere lehrt dieses, dass lebendes Mareksches Krankheits-Virus in die Amnionflüssigkeit im Ei injiziert werden kann, wonach der Embryo infiziert wird und sich das Vakzin-Virus bis zu einem hohen Titer repliziert, was die Bildung von schützenden Antikörpern im behandelten Embryo induziert (Sharma; Avian Diseases 29, 1155, 1167–68 (1985).
- Im US-Patent Nr. 5427791 beschreiben Ahmad et al. die embryonale Vakzination gegen Newcastle Disease. Dabei wurden die Viren durch die Verwendung von Ethylmethansulfonat (EMS) modifiziert, um eine nicht-pathogene Abschwächung des lebenden Newcastle-Disease-Virus (Stamm NDV-B1) vorzusehen.
- Ein Nachteil dieser Art der Modifizierung ist die Tatsache, dass EMS ein Mutagen ist und dass der Verdacht besteht, dass das Vakzin ebenso als Mutagen wirkt, was für eine reguläre Verabreichung des Vakzins unerwünscht ist. Anderseits kann unbehandeltes NDV-B1 nicht für eine Vakzination in ovo verwendet werden, da fast alle Embryonen nach einer Injektion dieses unmodifizierten Virus in die Eier sterben.
- Weiters stellte man fest, dass die Spanne zwischen der wirksamen Mindestdosis und der Höchstdosis für die Sicherheit bei diesen modifizierten Viren weniger als 10 ist (daher weniger als log1). Für praktische Zwecke und im Hinblick auf Fehler als Folge der Produktion und infolge von Verlusten während der Lagerung ist diese Spanne zu gering.
- Überraschenderweise stellte man fest, dass Vakzine, die Newcastle Disease-Viren vom Stamm NDW enthalten, für die Anwendung in ovo besonders geeignet sind. Folglich betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung des Newcastle Disease-Virus des Stamms NDW bei der Herstellung eines Vakzins, das für eine in ovo-Verabreichung an Geflügel geeignet ist.
- Proben des Newcastle Disease-Virus-Stamms NDW wurden beim CNCM des Institut Pasteur unter Nr. 781 hinterlegt. Siehe
EP 351908 - Vorteilhaft wird der NDW-Stamm in einer Menge von zwischen 10–1 und 103, und insbesondere in einer Menge von zwischen 10–0,7 und 102,2 pro Ei verabreicht.
- Zum Erhalt der besten Immunisierungsergebnisse stellte man fest, dass das NDW-hältige Vakzin in ovo zwischen dem Tag 17 und dem Tag 19 der Inkubation, vorzugsweise am Tag 18 der Inkubation, verarbeicht werden kann.
- Beispiel 1
- Herstellung eines NDW-Vakzins zur Verabreichung in ovo
- Eine Arbeits-Impf-Virus-Stammlösung wurde von einem Master-Impf-Virus (hinterlegt am CNCM, Institut Pasteur unter Nr. I-781) durch Impfung in den Allantois-Hohlraum embryonierter SPF-Hühnereier hergestellt.
- Auf dieselbe Weise wird das Vakzin durch Impfen des Arbeits-Impf-Virus in den Allantois-Hohlraum embryonierter SPF-Eier erzeugt. Nach Inkubation wird die das Vakzin-Virus enthaltende Allantois-Flüssigkeit geerntet. Die Allantois-Flüssigkeit wird verdünnt und gefroren und bei –50°C gelagert.
- Vor dem Abfüllen wird die Allantois-Flüssigkeit aufgetaut, weiter bis zur erforderlichen Konzentration des Vakzin-Virus verdünnt, mit Stabilisator gemischt, in Phiolen abgefüllt und gefriergetrocknet.
- Beispiel 2
- Sicherheit des in ovo-NDW-Vakzins in SPF-Eiern
- SPF-Eier wurden am Tag 18 der Inkubation mittels dem von Sharma und Burmester (Avian Diseases 26 (1), 134–149) beschriebenen Verfahren mit dem in Beispiel 1 beschriebenen Vakzin in das Amnion geimpft.
- Sechs Gruppen von Eiern wurden gemäß dem in der folgenden Tabelle umrissenen Schema geimpft.
- Tabelle 1: Sicherheit der in ovo-Vakzination von SPF-Eiern mit NDW-Vakzin
- Schlussfolgerung: Eine in ovo-Vakzination von SPF-Eiern mit NDV-Vakzin am Tag 18 der embryonalen Entwicklung ist sicher bei einer maximalen Dosis von zwischen 101,2 und 102,2 EID50 pro Ei.
- Beispiel 3
- Sicherheit des in ovo-NDW-Vakzins bei Eiern handelsüblicher Brathühner mit mütterlichen Antikörpern
- Eier handelsüblicher Brathühner mit mütterlichen Antikörpern wurden am Tag 18 der Inkubation mit dem in Beispiel 1 beschriebenen Vakzin in das Amnion mittels dem von Sharma und Burmester (Avian Diseases 26 (1), 134–149) beschriebenen Verfahren geimpft.
- Acht Gruppen von Eiern wurden gemäß dem in der folgenden Tabelle umrissenen Schema geimpft.
- Tabelle 2: Sicherheit der in ovo-Vakzination der Eier handelsüblicher Brathühner mit NDW-Vakzin
- Schlussfolgerung: Eine in ovo-Vakzination von Eiern von Brathühnern mit mütterlichen Antikörpern ist sicher (keine Auswirkung auf das Ausschlüpfen) bis zu einer Dosis von mindestens 102 EID50 pro Ei.
- Beispiel 4
- Wirksamkeit der in ovo-Vakzination von SPF-Einern mit NDV-Vakzin
- Die Wirksamkeit von gemäß Beispiel 1 hergestelltem NDV-Vakzin wurde in SPF-Eiern untersucht.
- Parameter für den Schutz waren die Antikörper-Reaktion nach der Vakzination (Haemagglutinations-Inhibierungs-Test = HI-Test) und der Prozentsatz der Mortalität nach dem Challenge. Das Challenge-Virus war der Stamm Hertz 33/56 des Newcastle Disease-Virus, welches jedem der Hühner in einer Menge von 105.0EID50 verabreicht wurde.
- Fünf Gruppen von Eiern wurden gemäß dem in der folgenden Tabelle umrissenen Schema geimpft:
- Tabelle 3: Wirksamkeit der in ovo-Vakzination von SPF-Eiern
- Schlussfolgerung: Die in ovo-Vakzination von SPF-Eiern am Tag 18 der embryonalen Entwicklung mit NDV-Vakzin ist wirksam. Eine Vakzin-Dosis von etwa 10–0,7 pro Ei ist die wirksame Mindestdosis für die NDV-Vakzination in ovo.
- Beispiel 5
- Wirksamkeit der in ovo-NDV-Vakzination von Eiern handelsüblicher Brathühner mit mütterlichen Antikörpern mit NDV-Vakzin
- Die Wirksamkeit des gemäß Beispiel 1 hergestellten NDV-Vakzins wurde bei Eiern handelsüblicher Brathühner mit mütterlichen Antikörpern (HI-Titer von 5,1 im Alter von 1 Tag) untersucht.
- Parameter für den Schutz waren die Antikörper-Reaktion nach der Vakzination (HI-Test) und der Prozentsatz der Mortalität nach dem Challenge. Das Challenge-Virus war der Stamm Hertz 33/56 des Newcastle Disease-Virus, welches jedem der Hühner in einer Menge von 105.0EID50 verabreicht wurde.
- Drei Gruppen von Eiern wurden gemäß dem in der folgenden Tabelle umrissenen Schema geimpft:
- Tabelle 4: Wirksamkeit der in ovo-Vakzination bei Eiern handelsüblicher Brathühner
- Schlussfolgerung: Die in ovo-Vakzination von Eiern handelsüblicher Brathühner mit NDV-Vakzin am Tag 18 der embryonalen Entwicklung ist wirksam. Dies wird nicht durch das Vorhandensein mütterlicher Antikörper beeinflusst.
Claims (6)
- Verwendung eines Newcastle Disease Virus-Stamms NDW, hinterlegt am CNCM (Institut Pasteur) unter der Nummer I-781, zur Herstellung eines Vakzins für eine Vakzination in ovo.
- Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Viren vom Stamm NDW in einer Menge von zwischen 10–1 und 103 pro Ei vorhanden sind.
- Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Viren vom Stamm NDW in einer Menge von zwischen 10–0,7 und 102,2 pro Ei vorhanden sind.
- Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Viren vom Stamm NDW in einer Allantois-Flüssigkeit verabreicht werden.
- Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Viren vom Stamm NDW zwischen Tag 17 und Tag 19 der Inkubation in ovo verabreicht werden.
- Verwendung nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Viren vom Stamm NDW am Tag 18 der Inkubation in ovo verabreicht werden.
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