DE69714083T2

DE69714083T2 - Die verwendung von lactoperoxidase, einem peroxiddonor und thiocyanat zur herstellung eines medikaments zur behandlung einer infektion mit helicobacter pylori

Info

Publication number: DE69714083T2
Application number: DE69714083T
Authority: DE
Inventors: Olof Claesson; Gustaf Lindewald
Original assignee: Semper AB
Current assignee: Nestec SA
Priority date: 1996-01-23
Filing date: 1997-01-22
Publication date: 2003-03-27
Anticipated expiration: 2017-01-23
Also published as: ATE220556T1; JP2000509367A; WO1997026908A1; SE9600233D0; AU731221B2; US6149908A; SE506529C2; SE9600233L; CA2243708C; EP1007086A1; AU1562797A; EP1007086B1; DE69714083D1; CA2243708A1

Description

Technisches Gebiet

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung eines bekannten antibakteriellen Systems, welches effektiv gegen eine Infektion mit den Helicobacter pylori Bakterien wirkt, die in der Magenschleimhaut zu finden sind und die im Zusammenhang mit Magengeschwüren stehen.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, eine Möglichkeit zu schaffen, die Mikroorganismen Helicobacter pylori zu bekämpfen, bei denen es sich um spiralförmig ausgebildete, gramnegative Bakterien handelt, die in der menschlichen Magenschleimhaut und auch zwischen den Zellen und in der Magenschleimhaut intrazellular vorkommen, wobei herausgefunden worden ist, dass die Baketerien in Verbindung mit Entzündungen von Geschwüren (Magengeschwürerkrankung) stehen.
Weitere Merkmale werden durch die folgende Beschreibung deutlich.

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

Es ist bekannt, das Enzym Lactoperoxidase zusammen mit einem Thiocyanat und einem Peroxiddonator zu verwenden, um die Haltbarkeit von Milch zu verlängern. Es ist ferner z. B. aus der Veröffentlichung "Dialog Information Services", Heft 5, Biosis, Dialog Accession No. 7195912 bekannt, bestimmte Bakterien der Gattung Campylobacter mit dem gleichen Lactoperoxidasesystem zu behandeln, indem antibakterielle Zusammensetzungen hergestellt werden, die im Magen-Darm-System gegen Durchfall und andere Darmerkrankungen wirksam sind. Es wird gezeigt, dass das System eine aktive Wirkung auf Campylobacter jejuni und Campylobacter coli hat. Das EP 0 397 227 beschreibt die Verwendung eines ähnlichen Lactoperoxidasesystems zur Behandlung von Listeria-Bakterien.
Das in diesen Zusammensetzungen verwendete Enzym Lactoperoxidase wird aus Rindermilch oder häufiger aus Trockenmilchprodukten gewonnen und isoliert. Aus Stabilitätsgründen ist es wichtig, dass das Enzym einen pH-Wert von unter 6,5 aufweist, z. B. pH 3,25-6.
Allgemein ist Natriumthiocyanat als Thiocyanatquelle verwendet worden. Alternativ ist es möglich, ein Thiocyanat zu verwenden, das aus den Sekundärmetaboliten von Pflanzen, vorzugsweise der Familie der Kreuzblütler, z. B. Arten der Gattung Brassica (Kohlarten wie beispielsweise Grünkohl) und Sinapis (z. b. Senfsamen) gewonnen wird. Es ist wichtig, dass das pflanzliche Rohmaterial hitzebehandelt wird, so dass vorhandene pflanzliche Peroxidasen inaktiviert werden.
Als Peroxiddonator wurden verschiedene peroxiderzeugende Systeme wie Glucose-Glucoseoxidase und feste Peroxide verwendet, und zwar insbesondere im Zusammenhang mit Milch, um deren Lagerfähigkeiten zu verlängern. Zur antibakteriellen Verwendung im Magen-Darm-Trakt sind feste Peroxiddonatoren wie z. B. Alkalipercarbonate (Natriumpercarbonat), Erdalkaliperoxide (Magnesiumperoxid) und andere feste Peroxide (Karbamidperoxid) verwendet worden, da in der Umgebung des Magen-Darm-Traktes sauerstoffreduzierende Bedingungen herrschen.
Es ist ferner wichtig, dass das erfindungsgemäße System bis zu dem Zeitpunkt, zu dem es konsumiert wird, im inaktiven Zustand gelagert wird, insbesondere in Pulver- oder Tablettenform, und dass es direkt vor dem Verzehr in einer Flüssigkeit reaktiviert wird, da das System nur für eine kurze Zeit (z. B. zwischen 1 und 24 Stunden) aktiv ist.
Es hat sich ferner gezeigt, dass ein Zusatz von Lactoferrin zu dem System den antibakteriellen Effekt gegen Helicobacter pylori erhöht.
Von den Bakterien Campylobacter wurde früher angenommen, dass sie mit den heute als Gattung Helicobacter bekannten Bakterien entfernt verwandt seien. Ca. 1983/1984 wurden Campylobacter Bakterien isoliert und gezüchtet, von denen angenommen wurde, Gastritis und Magengeschwüre, eventuell sogar Magenkrebs zu verursachen. Den Bakterien wurden zuerst der Name Campylobacter pyloridis gegeben, der aber 1987 in Campylobacter pylori geändert wurde. Eine exaktere Charakterisierung belegte später, dass die isolierten Bakterien sich stark von anderen Bakterien der Art Campylobacter unterscheiden, und seit 1989 besitzen die betreffenden Bakterien eine eigene Gattung mit dem Namen Helicobacter.
Zwischen Campylobacter und Helicobacter gibt es große Unterschiede, und zwar hinsichtlich sowohl des Wegs des Angriffs der jeweiligen Bakterien auf das Verdauungssystem als auch der Stellen des Verdauungssystems, an dem die jeweiligen Bakterien angreifen. In der Publikation International Journal of Systematic Bacteriology, Oktober 1989, Seiten 397-405 wird beschrieben, dass die Bakterien, die heute die Gattung Helicobacter pylori bilden, tatsächlich nicht zu der Gattung Campylobacter gehören, und dass sie sich deutlich von Campylobacter unterscheiden, beispielsweise in Bezug auf die Ultrastruktur und die Morphologie, zellulare Fettsäuren, Menaquinone, Wachstumscharakteristika und die Enzymfähigkeit und weiter darin, dass die antibiotische Empfindlichkeit sich von derjenigen der Campylobacter Bakterien unterscheidet.
Verschiedene Tests haben gezeigt, dass eine Infektion mit Campylobacter eine der häufigsten Ursachen für eine sporadische Entritis ist, die in erster Linie eine Entzündung des Dünndarms verursacht. Die Infektion beginnt wahrscheinlich mit einer Kollonisierung der Schleimhaut des Darms. Andererseits gibt es keinen Hinweis darauf, dass Campylobacter die Ventrikelschleimhaut infiziert. Normalerweise ist bei einer Infektion mit Campylobacter keine medizinische Behandlung notwendig. Die Infektion geht im Allgemeinen ohne medizinische Behandlung vorüber. Für den Fall jedoch, dass eine durch Campylobacter verursachte ernsthafte Dickdarmentzündung vorliegt, wird die Infektion heutzutage mit Antibiotika, z. B. Norfloxacin oder Erythromycin, behandelt. Wie aus dem folgenden deutlich wird, unterscheidet sich eine derartige Behandlung stark von der Behandlung bei Infektionen mit Helicobacter pylori und weder die prophylaktische noch die therapeutische Behandlung der jeweiligen Bakterien sind kompatibel.
Im Gegensatz dazu haben viele Studien belegt, dass es eine klaren Zusammenhang zwischen Infektionen mit Helicobacter pylori und Gastritis, Magenschleimhaut- und Magenkrebs gibt. Studien haben belegt, dass das Risiko einer Infektion mit dem Alter ansteigt und dass 40-50% der Bevölkerung mit einem Alter von ungefähr 50 Jahren mit Helicobacter pylori infiziert sind, wobei diese Bakterien vor allem in der Schleimhautschicht des Magens zu finden sind.
Es ist offensichtlich Tatsache, dass die Campylobacter Bakterien ausschließlich die äußere Schicht der Schleimhaut angreifen und dass die Campylobacter Bakterien durch die Mundhöhle, die Speiseröhre oder die Kehle, den Magen und schließlich durch die unmittelbar am Magen gelegenen Teile des Darmsystems gelangen, ohne eine Infektion zu verursachen.
In Hinblick auf die Helicobacter pylori Bakterien ist die Situation tatsächlich umgekehrt, die Bakterien sind nämlich in der Mundhöhle, in der Kehle und vor allem im Magen zu finden und können dort eine Infektion verursachen, während die Bakterien das Darmsystem nicht angreifen. Der Grund dafür ist wahrscheinlich, dass Helicobacter zwischen die Zellen des Magens und sogar in die Zellen der Magenschleimhaut dringt und diese Zellen intrazellular angreift, und dass sich das Bakterium in der Magenschleimhaut unter einer dicken Schleimschicht schützen kann. Aufgrund des oben erwähnten intrazellularen Eindringens sind die Bakterien auch gegen Antibiotika geschützt. Hinweise darauf, dass die Bakterien intrazellular eindringen, sind z. B. in der Publikation Journal of Clinical Pathology, Nr. 47, Seiten 699-704, Noach L. A. "Electon microscopy study of associating between Helicobacter pylori and gastric and duodinal mucosa" zu finden.
Die Fähigkeit der Bakterien, sich selbst unter einer dicken Schleimschicht zu schützen, sich intrazellular in der Magenschleimhaut anzusiedeln und die Tatsache, dass die saure Umgebung des Magens bestimmte antimikrobiologische Substanzen negativ beeinflusst, führt zu der Schlussfolgerung, dass Informationen bezüglich einer "in vitro" Vernichtung des Bakteriums Helicobacter pylori nicht auf eine "in vivo"-Situation übertragen werden können.
In der Publikation "Manual of Clinical Microbiology", 6. Ausgabe, Herausgeber P. Murray, E. Baron, M. Pfaller, F. Tenover, R. Tolken, ASM Press, Washington 1995, wird beschrieben, dass aufgrund der Inaktivität bestimmter Substanzen in der sauren Umgebung des Magens die meisten Laborversuche gezeigt haben, dass es nicht möglich gewesen ist, eine Infektion mit Helicobacter pylori "in vivo" zu behandeln.
In einem Artikel in "Läkartidningen", Seiten 4268-4271, wird ferner festgestellt: "Helicobacter pylori ist gegenüber einer großen Vielzahl von antimikrobischen Substanzen "in vitro" anfällig. Dessen ungeachtet ist es schwierig, den Organismus zu vernichten. Die Bakterien liegen im Magen gut geschützt unter einer dicken Schleimschicht und Antibiotika kann schlecht eindringen". Stattdessen sind Helicobacter- Infektionen mit gewissem Erfolg durch eine sogenannte Dreifachtherapie behandelt worden, beispielsweise für 14 Tage mit einer Kombination aus einem Bismutsalz, Metronidazol und Amoxocillin oder Tetracyklin. "Es wurde jedoch eine ansteigende Resistenz gegen Metronicazol berichtet und dieses hat wiederrum den Bedarf nach alternativen Therapien gesteigert".
Helicobacter pylori Bakterien besitzen ferner die beinahe einzigartige Eigenschaft, dass sie sehr selten serologisch mit anderen Bakterien reagieren. Eine Helicobacter pylori-Infektion tritt üblicherweise eher in Entwicklungsländern als in Industrieländern auf und dies kann eventuell an unterschiedlichen der Hygienezuständen des Wassers liegen, da das Bakterium mehr als eine Woche in Flusswasser überlebt.
Soweit es heute bekannt ist, kann Helicobacter pylori vorwiegend nur die Ventrikelschleimhaut infizieren, wodurch es Gastritis, allgemein im Antrum, verursacht. Helicobacter pylori bindet über Proteine an Kohlenhydrate der Schleimhaut. Das Bakterium dringt danach zwischen und in jede Zelle ein und neutralisiert die Salzsäure im Magen, indem es Urease absondert, die Harnstoff in Ammoniak und Bicarbonat zersetzt, wodurch sich die Bakterien selbst gegen einen zu geringen ph-Wert schützen. Ammoniak vergiftet die Wände der epithelen Zellen und ändert die Struktur des Schleims, wodurch die Bakterien die Zellen intrazellular angreifen. Ferner sondern die Bakterien Protease ab, die Proteine und Fette zersetzten und den Schleim schädigen. Die Reaktionen des Patienten auf Infektionen bewirken Beschädigungen der benachbarten Zellen, aber keine an den Bakterien. Lokale hormonale Störungen führen zu einer gesteigerten Produktion von Säure.
Bei fast allen an einem Zwölffingerdarmgeschwür leidenden Patienten kann eine Gastritis festgestellt werden, die von den Helicobacter pylori Bakterien ausgelöst worden ist. Tatsächlich sind 60-80% der an einem Magengeschwür leidenden Patienten mit Helicobacter pylori infiziert, der Zusammenhang ist aber nicht so groß wie bei einem Zwölffingerdarmgeschwür.
Infektionen mit Helicobacter pylori wurden bis jetzt, wie es weiter oben beschrieben wurde, mit einer Dreifachbehandlung, die eine Behandlung mit Bismut, Metronidazol und alternativ Amoxocillin oder Tetracyklin umfasst, oder mit einer Behandlung mit einem H&sub2;-Rezeptor-Blocker und zwei Antibiotika behandelt. Die zuerst erwähnte Behandlung erzielt ein ungenügendes Resultat und führt oft zu mehreren Nebeneffekten. Die zuletzt erwähnte Behandlung erzielt zu 60-80% eine Heilung.
Auf der anderen Seite gibt es heutzutage aufgrund des Risikos des Entstehens von antibiotikaresistenen Stämmen eine restriktive Anschauung in Hinblick auf die Verwendung von Antibiotika.
Daher gab es einen Bedarf nach alternativen Formen der Behandlung.

BESCHREIBUNG DER VORLIEGENDEN ERFINDUNG

Bis heute steht bis auf die Anwendung der oben erwähnten Dreifachbehandlung einschließlich der Behandlung mit Antibiotika keine einfache und effektive Behandlung von Helicobacter pylori zur Verfügung.
Es ist daher sehr überraschend, dass es sich als möglich erwiesen hat, Infektionen mit Helicobacter pylori und sogar eine intrazellulare Infektion der Magenschleimhaut unter Verwendung eines Lactoperoxidasesystems der anfänglich genannten Art zu bekämpfen, indem erfindungsgemäß ein antibakterielles System mit Lactoperoxidase, einem Thiocyanat und einem Peroxiddonator zur Herstellung einer Zubereitung zur Behandlung einer durch in der Mundhöhle, dem Rachen und vor allem in dem im Magen vorkommenden Helicobacter pylori Bakterien verursachten Infektion verwendet wird.
Oft ist es möglich, verschiedene Bakterien "in vitro" zu behandeln, wohingegen es schwierig oder unmöglich sein kann, die gleichen Bakterien "in vivo" zu behandeln. Helicobacter pylori kann durch eine große Vielzahl antimikrobischer Substanzen "in vitro" behandelt werden. Trotzdem ist es schwierig, den Organismus selbst unter Verwendung der oben beschriebenen Dreifachbehandlung mit Antibiotika zu vernichten. Selbst nach einer derartigen Behandlung ist die Rückfallquote hoch. Es ist daher umso überraschender, dass das oben erwähnte Lactoperoxidasesystem sich als effektiv bei der "in vivo"-Behandlung von Helicobacter pylori herausstellte und dass eine Langzeitbehandlung daher ohne das Risiko möglich ist, dass eine Antibiotikaresistenz entsteht.
Die vorliegende Erfindung stellt eine pharmazeutische Zubereitung zur Verfügung, deren Verwendung das Risiko ausräumt, dass resistente Stämme wachsen.
Die vorliegende Erfindung wurde ursprünglich "in vitro" an einem Zuchtmedium wie folgt getestet: 25 ml Brucella Broth, pH 7.4 und 0,1 ml H. pylori, Stamm NCTC 11637, wurden in drei Flaschen vermischt. Die Bakterien wurden für 48 Stunden in einer mikroaerophilen Umgebung wachsen gelassen. In die verschiedenen Flaschen wurde dann nach den 48 Stunden folgendes hinzugegeben:
1. Prüfprodukt, keine Zugabe;
2. Thiocyanat 35 mg/l;
3. Lactoperoxidase-Glucose-Glucoseoxidase-Thiocyanat, 50 mg/l Lactoperoxidase (25 U/mg> ; 4.5 g/l Glucose; 6.1 mg/l Glucoseoxidase (200 U/mg); 35 mg/l Thiocyanat.
Es wurden die folgenden Daten erhalten: Tabelle 1
Die "in vitro" erhaltenen Resultate zeigen, dass zwischen 0 und 24 Stunden nach Zugabe des erfindungsgemäßen Systems eine vollständige Vernichtung des Helicobacter pylori Bakteriums stattfand.
Das System wurde danach getestet, um die Fähigkeit des Systems zu untersuchen, Helicobacter pylori Bakterien intrazellular zur vernichten.

Test zur intrazellularen Vernichtung von Helicobacter pylori

Bei den Bakterien handelt es sich um Helicobacter pylori, Stamm M:72, die in einer Brucella Broth, pH 6.0, innerhalb von 2 Tagen gezüchtet worden sind.
Bei der Testprozedur wurden Zellen der menschlichen Epithelzelllinie HEp-1 für 12 Stunden infiziert. Überflüssige Bakterienzellen wurden mit Gentamicin (50 mg/l) abgetötet und die verschiedenen Systeme wurden hinzugegeben. Die Zellen wurden nach 0,6 und 24 Stunden lysiert, siehe Kurve K in dem Diagramm der beiliegenden Fig. 1. Die Figur zeigt Kurven für die folgenden Systeme:
2. Glucoseoxidase + Lactoperoxidase + Glucose + SCH (aktives Thiocyanat);
3. MgO&sub2; + Lactoperoxidase + Glucose + SCH;
5. Glucoseoxidase + Lactoperoxidase + Glucose + SCH + Lactoferrin.
Wie es aus Fig. 1 ersichtlich wird, wurden in allen der oben erwähnten Systeme 2, 3 und 5 alle Helicobacter pylori Bakterien vernichtet. Das zeigt, dass das System in die Zellen eindringt und alle Bakterien intrazellular abtötet.
Es ist deutlich zu erkennen, dass die beim Auflösen in einer Flüssigkeit von dem System gebildete aktive Komponente in die Zellen eindringen kann und die Helicobacter pylori Bakterien abtötet.
Das System wurde ferner "in vivo" an einem Maus-Modell und in menschlichen Körpern getestet.

Studien an Mäusen

An diesem Modell ist das oben beschriebene "Lactoperoxidasesystem" getestet worden. Ferner ist das gleiche antibakterielle System zusammen mit Lactoferrin getestet worden, um herauszufinden, ob Lactoferrin das System verstärken kann.
Verfahren: 30 Mäuse wurden mit Helicobacter pylori infiziert. 7 Tage nachdem die Bakterien zugegeben wurden, wurde durch Aufzucht und Nachweis von Helicobacter pylori durch PCR-Techniken überprüft, ob die Mäuse wirklich infiziert worden sind.
Anschließend wurden die Mäuse in drei Gruppen mit jeweils 10 Mäusen aufgeteilt, einer Kontrollgruppe und zwei Testgruppen. Den Mäusen der ersten der Testgruppen wurde das oben erwähnte antibakterielle Lactoperoxidasesystem verabreicht und den Mäusen der zweiten Testgruppe wurde das gleiche System mit Lactoferrin verabreicht.
Das antibakterielle System mit Lactoperoxidase, Glucose, Glucoseoxidase und Thiocyanat wurde zugegeben. Das System wurde in getrockneter Form geliefert und in Wasser gelöst, und über einen Zeitraum von sieben Tagen wurde drei mal am Tag 0,1 ml verabreicht. Anschließend wurden bei den Mäusen neue Analysen im Hinblick auf das Vorhandensein von Helicobacter pylori durchgeführt und zwar sowohl durch Anzucht im Magen als auch durch PCR-Analysen.
Ergebnisse: Die Ergebnisse zeigten, dass 8 von 10 Mäusen in der Kontrollgruppe mit Helicobacter pylori befallen waren. In der ersten Testgruppe, in der den Mäusen das antibakterielle System verabreicht wurde, waren 7 von 10 Mäuse Anzuchtnegativ, was bedeutet, dass das Helicobacter pylori- Bakterium effektiv getötet wurde, und in der zweiten Testgruppe, in der den Mäusen das antibakterielle System mit Lactoferrin verabreicht wurde, waren 8 von 10 Mäuse Anzuchtnegativ.
Die Ergebnisse zeigen somit, dass das antibakterielle System die Helicobacter pylori Bakterien auch "in vivo" vernichten kann, was in Hinblick auf die Eigenheit des Bakteriums nicht erwartet werden konnte, dass es sich selbst in der Magenschleimhaut unter einer Schleimschicht schützt und intrazellular und zwischen den Zellen der Magenschleimhaut vorkommt.

Studien an Menschen

Sieben Personen wurden zur Teilnahme an der Studie ausgesucht. Es hat sich durch den sogenannten "Harnstoff Atemtest" gezeigt, dass alle Testpersonen mit Helicobacter pylori infiziert waren.
Den Testpersonen wurde über einen Zeitraum von fünf Tagen das oben erwähnte antibakterielle System zusammen mit LOSEC® (Astra) als Säureinhibitor verabreicht. Das antibakterielle System war in verschiedenen Produkten wie beispielsweise Haferbrei, Milch, Joghurt und einem Schokoladengetränk enthalten. Der Haferbrei wurde drei mal am Tag eingenommen und als eine Zwischenmahlzeit wurde wahlweise Milch, Joghurt oder ein Schokoladengetränk eingenommen.
Harnstoff-Atemtests wurden unmittelbar vor Verabreichung des antibakteriellen Systems und nach fünf Tagen, während denen Produkte mit dem antibakteriellen System eingenommen worden sind, durchgeführt.
Die Ergebnisse zeigt die folgende Tabelle 2 und die beigelegte Fig. 2. Die Infektion mit Helicobacter pylori wurde bei sechs der Testpersonen deutlich vermindert. Die siebte Person, bei der keine Verminderung der Infektion festgestellt wurde, hatte von Beginn an ein sehr geringes Infektionsniveau. Tabelle 2
Die oben gezeigten Ergebnisse müssen als sensationell und erfolgreich angesehen werden, bedenkt man die Tatsache, dass es bis jetzt notwendig gewesen ist, eine Behandlung mit zwei Antibiotika in Kombination mit einem Säureabsonderungsinhibitor zur Vernichtung der Helicobacter pylori Bakterien "in vivo" anzuwenden. Nichteinmal die bis jetzt praktizierte energische Behandlung war zu 100% effektiv.
Die intrazellularen Tests, die Tests an Mäusen und die Tests am Menschen belegen somit, dass das System mit Lactoperoxidase, Glucose, Glucoseoxidase und Thiocyanate die Helicobacter pylori Bakterien nicht nur in einem "in vitro"- System, sondern auch in einer "in vivo"-Situation vernichten kann. Es ist gezeigt worden, dass dies möglich ist, obwohl das Bakterium insoweit besonders ist als es sich in der Magenschleimhaut unter einer dicken Schleimschicht selbst schützt und in diese intrazellular eindringen und sich selbst vor Antibiotika schützen kann.
Das oben erwähnte Lactoperoxidasesystem Stamm NCTC 11637 ist gegen Helicobacter pylori getestet worden. Entsprechende Tests sind gegen andere Stämme von Helicobacter pylori durchgeführt worden, nämlich VBG H, SVA40, V44-2010, G57, 17874 Vac-A, H:72 und 88-23. Es wurden die gleichen guten Ergebnisse erzielt.
Wie es weiter oben im Zusammenhang mit den Tests am Menschen gezeigt wurde, ist es ferner möglich, Infektionen mit dem Bakterium Helicobacter pylori mit verschiedenen Zubereitungen wie beispielsweise reinen pharmazeutischen Zubereitungen aber auch mit Nahrungsmittel-Zubereitungen bei verschiedenen Diäten zu behandeln. Bei der zuletzt genannten Art ist es möglich, eine Weizendiät mit zerdrücktem Weizen, Milchpulver von entrahmter Milch, Sojamehl, Kalziumkaseinat, Fetten, Ballaststoffen und Emulgatoren herzustellen, denen der Peroxiddonator Natriumthiocyanat, Lactoperoxidase und SCH zugesetzt worden sind. Es ist ferner möglich, verschiedene Milchprodukte zu verwenden und diesen einen Peroxiddonator hinzuzufügen, und es ist ebenfalls möglich, eine Art von Lactobazillen produzierende Dickmilch mit Peroxiden zu verwenden. Durch eine spezielle Fütterung von milchgebenden Tieren ist es ferner möglich, für einen Anstieg des Thiocyanatgehaltes in der Milch zu sorgen.
Ein Beispielprodukt ist ein Haferbrei, der zubereitet wird, indem eine Dosis des getrockneten Lactoperoxidasesystems, ungefähr 1, 2 bis 1,6 Gramm, mit 3/4 dl Wasser gemischt wird und dreimal am Tag zu sich genommen wird; eine Alternative dazu ist ein Getränk mit einem 1,2-1,6 Gramm des getrockneten Lactoperoxidasesystem enthaltenen Portionierungsbeutel, der in 2 dl Milch oder 2 dl Joghurt eingemischt dreimal am Tag zu sich genommen wird; eine weitere Alternative ist ein Schockoladengetränk, zubereitet aus einer Menge von ebenfalls ungefähr 1, 2 bis 1,6 Gramm, die mit einer Instant-Schockoladenzubereitung und 1 dl Milch vermischt wird und welche in zwei Portionen pro Tag zu sich genommen wird.
Beim Dosieren der pharmazeutischen Zubereitung mit dem antibakteriellen System sollte die Zubereitung soviel Thiocyanat enthalten, dass dessen Konzentration im Magen-Darm- Trakt zumindest 0,1 mM beträgt, und die Menge an festem, wasserlöslichen Peroxiddonator oder Enzymsystem sollte so groß sein, dass dessen Konzentration eine Hydrogenperoxidkonzentration von zumindest 0,1 mM bedingt. Das Verhältnis zwischen dem Peroxiddonator und Thiocyanat sollte kleiner als 4 sein, vorzugsweise 1-2. Die Menge an Lactoperoxidase (50 U/mg) ist so ausgelegt, dass die Konzentration zumindest 1 mg/l beträgt.
Bei der Herstellung pharmazeutischer Zubereitungen mit einem erfindungsgemäßen antibakteriellen System kann die Zubereitung in Form von oralen Präparaten wie Tabletten, Gelatinekapseln oder Pulver hergestellt worden. Dabei werden die ausgewählten Substanzen mit einem feststoffartigen Träger wie Lactose, Saccharose, Sorbitol, Mannitol, Stärke wie Kartoffelstärke, Kornstärke, Amylopectin, Cellulosederivaten oder Gelatine und mit einigen Gleitmitteln wie Magnesiumstearat, Kalziumstearat, Polyethylenglucolwachse und ähnlichem vermischt, um eine Herstellung von Tabletten zu ermöglichen. Wenn zur vereinfachten peroralen Verabreichung beschichtete Tabletten bereitgestellt werden sollen, können die Tabletten mit einem Polymer beschichtet werden, das von dem Magensaft aufgelöst wird oder das eine Diffusion der aktiven Komponenten in den Magensaft erlaubt. Dem Polymer können färbende Substanzen und Geschmacksstoffe zugesetzt werden.
Beim Herstellen von Gelatinekapseln (tropfenförmige, geschlossene, harte oder weiche Kapseln) wird die aktive Komponente mit einem Pflanzenöl vermischt. Die Kapseln können ferner ein Granulat der aktiven Komponenten in Kombination mit festen Trägern der oben angegebenen Art wie Lactose, Saccharose, Sorbitol, Mannitol, Stärke wie Kartoffelstärke, Kornstärke, Amylopectin, Cellulosederivate oder Gelatine enthalten. Das Granulat kann ferner Aufspaltungssubstanzen zum Zersetzen der einzelnen Stärkegranulate enthalten, wodurch ein schnelleres Freisetzen gewährleistet wird und sich diese schneller auflösen.
Flüssige Zubereitungen zur oralen Verabreichung können in der Form von Sirups oder Suspensionen bereitgestellt werden, beispielsweise Lösungen mit 0,2-20 Gewichtsprozent der oben beschriebenen aktiven Substanzen zusammen mit Ethanol, Glycerol oder Propylenglycol. Der Peroxiddonator wird dabei in Form eines Mikrokapselproduktes hinzugegeben, um ein Freisetzen vor der Verabreichung zu verhindern.
Die Herstellung von Tabletten erfolgt mit üblichen, einem Fachmann bekannten Techniken. Das gleiche gilt für Verfahren zur Herstellung von Granulat zur Verfüllung in Gelatinekapseln.
Die tägliche Dosis des aktiven Systems zur peroralen Verabreichung variiert und hängt von der Art der Verabreichung ab, aber als eine allgemeine Regel beträgt die Dosis zwischen 8-400 mg pro Tag, bezogen auf Natriumthiocyanat, und 10-500 mg pro Tag bezogen auf Natriumpercarbonat.
Die folgende Tabelle 3 gibt einen allgemeinen Überblick über die Mengen der aktiven Komponenten, die zur Verwendung in verschiedenen Zubereitungsarten geeignet sind.

Tabelle 3

Lactoperoxidase (25 U/mg) 5-150 mg/l
Glucose zumindest 0,5 g/l*
Glucoseoxidase 2,0-15 mg/l*
Thiocyanat 3-50 mg/l
*) Glucose - Glucoseoxidase ist ein Peroxiddonator. Glucose jedoch sollte in solcher Menge vorhanden sein, dass die Glucoseoxidase Peroxid bereitstellen kann. Eine Menge von 2,0-15 mg/l Glucoseoxidase entspricht 5-8,5 ml/l Glucose. Es ist ferner möglich, einen festen Peroxiddonator hinzuzufügen, der bei einer Reaktion eine äquivalente Menge an Hydrogenperoxid ergibt. Ferner kann ein Stamm von Peroxid erzeugenden Lactobazillus zum Erzeugen von Peroxid verwendet werden.
Lactoperoxidase wird als Reinprodukt, als Milchpulver oder als ein Molkeprodukt hinzugefügt. Glucoseoxidase wird allgemein durch Zucht von Aspergillus niger und Isolation der Glucoseoxidase aus dem Medium hergestellt, aber ein natürliches Rohprodukt wie Honig kann eine Alternative sein. Das Thiocyanat wird als Natrium- oder Kaliumsalz hinzugefügt, es kann aber auch in Form eines Naturproduktes wie Grünkohl oder eines anderen Kreuzblüters oder in Form eines Thiocyanat enthaltendenden Sinapisproduktes hinzugefügt werden.

Beispielpräparat 1

Natriumpercarbonatgranulat
mit 10% aktivem Sauerstoff 100 g
Natriumthiocyanat 40 g
Lactoperoxidase (50 U/mg) 2 g
Polyvinylpyrrolidon 10 g
Lactose 50 g
Magnesiumstearat 10 g
Die Lactoperoxidase wird mit Lactose gemischt und unter Verwendung einer Lösung von Polyvinylpyrrolidon granuliert.
Das Natriumpercarbonat wird mit dem Lactoperoxidasegranulat gemischt. Das Magnesiumstearat wird hinzugefügt, woraufhin das Granulat zu Tabletten geformt wird.
Die Tabletten haben ein durchschnittliches Gewicht von 212 mg und sind zur Vereinfachung der Verabreichung mit einer im Magensaft löslichen Polymerbeschichtung überzogen.

Beispielpräparat 2

Magnesiumperoxid 50 g
Natriumthiocyanat 0,8 g
Lactoperoxidase (50 U/mg) 0,04 g
Polyvinylpyrrolidon 5 g
Lactose 100 g
Magnesiumstearat 2 g
Die drei aktiven Komponenten werden unter Verwendung von Polyvinylporrolidon als Granulierungssubstanz separat granuliert. Lactose und Magnesiumstearat werden hinzugefügt, und die Mischung anschließend zu Tabletten geformt. Die erhaltenen Tabletten (100 Tabletten) mit einem durchschnittlichen Gewicht von 155 mg sind mit einer im Magensaft löslichen Polymerlösung überzogen.

Beispielpräparat 3

Carbamidperoxid 50 g
Natriumthiocyanat 20 g
Lactoperoxidase 1 g
Lactose 100 g
Stearinsäurepulver 2 g
Das Carbamidperoxid wird unter Verwendung von Eudragit 5 granuliert. Die Lactoperoxidase wird mit Lactose und Natriumthiocyanat vermischt und die Mischung wird unter Verwendung von Eudragit S granuliert. Die beiden Granulate werden vermischt und mit dem Stearinsäurepulver vermischt und die Gesamtmischung wird zu Tabletten mit einem durchschnittlichen Gewicht von 175 mg geformt.

Beispielpräparat 4

I Natrium Percarbonat 100 g
Mannitol 20 g
II Natriumthiocyanat 40 g
Mannitol 20 g
III Lactoperoxidase (50 U/mg) 2 g
Mannitol 20 g
Aus I, II und III wird unter Verwendung einer Eudragit S-Lösung ein Granulat zubereitet. Die vereinigten Granulate werden mit einer Geschmack gebenden Substanz wie Zucker, Kakaopulver, mikroverkapseltes Zitronenaroma, oder Mischungen davon vermischt. Das Granulat wird mit Hilfe eines Dosierungslöffels dosiert. Das Granulat wird in einem luftdichten Material verpackt.

Claims

1. Verwendung eines Lactoperoxidase und einen Peroxiddonator enthaltenden antibakteriellen Systems bei der Zubereitung eines Präparats für die prophylaktische oder therapeutische "In vivo"-Behandlung einer von den in der Mundhöhle, im Rachen und im Magen vorkommenden Bakterien Helicobacter pylori verursachten Infektion, wobei das Präparat in Gegenwart von Thiocyanaten in antibakterieller Konzentration fertiggestellt wird.

2. Verwendung eines Lactoperoxidase, Glucose, Glucoseoxidase und Thiocyanat enthaltenden antibakteriellen Systems nach Anspruch 1 für die prophylaktische oder therapeutische Behandlung einer von den in der Mundhöhle, im Rachen und im Magen vorkommenden Bakterien Helicobacter pylori verursachten Infektion.

3. Verwendung eines Lactoperoxidase, Glucose, Glucoseoxidase und Thiocyanat enthaltenden antibakteriellen Systems nach Anspruch 1 oder 2 für die prophylaktische oder therapeutische "In vivo"-Behandlung einer von den in der Mundhöhle, im Rachen und im Magen vorkommenden Bakterien Helicobacter pylori verursachten Infektion, wobei ein Lactobacillus als Peroxiddonator verwendet wird.

4. Verwendung eines Lactoperoxidase, Glucose, Glucoseoxidase und Thiocyanat enthaltenden antibakteriellen Systems nach Anspruch 1, 2 oder 3 für die prophylaktische oder therapeutische "In vivo" Behandlung einer von den in der Mundhöhle, im Rachen und im Magen vorkommenden Bakterien Helicobacter pylori verursachten Infektion, wobei das Thiocyanat aus den Sekundärmetaboliten von Pflanzen, vorzugsweise von Pflanzen aus der Familie der Kreuzblütler, z. B. Arten der Gattung Brassica und Sinapis, gebildet wird.

5. Verwendung eines antibakteriellen Systems nach einem der Ansprüche 1-4, wobei das System in Tablettenform ausgebildet und peroral zu verabreichen ist.

6. Verwendung eines antibakteriellen Systems nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das System in Form eines Trockenpulvers ausgebildet ist, das durch Auflösen in einer Flüssigkeit unmittelbar vor seiner Verabreichung aktiviert wird.

7. Verwendung eines antibakteriellen Systems nach einem der Ansprüche 1-5, wobei das System in Form eines Trockenpulvers ausgebildet ist, das durch Auflösung in Wasser, Milch, Dickmilch oder einem Schokoladengetränk aktiviert wird und einen Brei bildet, der in 2-3 Portionen pro Tag eingenommen wird.

8. Verwendung eines antibakteriellen Systems nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das System ferner durch Zugabe von Lactoferrin zur Verstärkung der antibakteriellen Wirkung fertiggestellt wird.

9. Verwendung eines antibakteriellen Systems nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Präparat zur Behandlung eines Menschen in einer täglichen Dosis, die 8-400 mg Thiocyanat oder 10-500 mg eines Peroxiddonators entspricht, zu verabreichen ist.

10. Verwendung eines antibakteriellen Systems nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Präparat gemischt in einem Brei, in Milch, in Joghurt, in einem Schokoladengetränk etc. 3 mal pro Tag, jeweils in einer Dosis von 1,2- 1,6 g des Systems, zu verabreichen ist.