DE69416828T2

DE69416828T2 - Vorrichtung zur chromatographischen bestimmung, die einander entgegenstellbare teile enthalten

Info

Publication number: DE69416828T2
Application number: DE69416828T
Authority: DE
Inventors: Howard Chandler; Roger Piasio; Karen Prouty
Original assignee: SmithKline Diagnostics Inc
Current assignee: SmithKline Diagnostics Inc
Priority date: 1993-03-31
Filing date: 1994-03-31
Publication date: 1999-07-08
Anticipated expiration: 2014-04-01
Also published as: AU6497094A; US5877028A; NZ263754A; BG100104A; RU2124729C1; PL310953A1; HUT73379A; CN1124524A; SK122795A3; EP0692097A1; ES2131191T3; AU678461B2; KR960702109A; BR9406755A; DK0692097T3; WO1994023300A1; NO953872D0; JPH08508569A; EP0692097B1; NO953872L

Description

Ausgangspunkt der Erfindung

Diese Erfindung betrifft Teststreifen zur Bestimmung von Probeneigenschaften, nach dem Baukastenprinzip konstruierte Gehäuse und Bausätze, die die Teststreifen und die Gehäuse einschliessen und Verfahren zur Bestimmung von Probeneigenschaften unter Verwendung der Teststreifen und der Gehäuse.
Zu den vielen, zur Erfassung bzw. zum Nachweis und/oder zur Bestimmung von Analyten, insbesondere Analyten von biologischem Interesse, verwendeten analytischen Systemen zählen die chromatographischen Untersuchungssysteme. Zu den Analyten, die mit derartigen Systemen häufig untersucht werden, zählen:
(1) Hormone, wie beispielsweise menschliches Choriongonadotropin (hCG = human Chorionic Gonadotropin), das häufig als ein Marker für Schwangerschaft untersucht wird;
(2) Antigene, insbesondere Antigene, die für bakterielle, virale und Protozoen-Pathogene spezifisch sind, wie beispielsweise Streptococcus, das Hepatitis-Virus und Giardia;
(3) Antikörper, insbesondere Antikörper, die als Folge einer Infektion mit Pathogenen induziert werden, wie beispielsweise der Antikörper zum Bakterium Helicobacter pylori und zum menschlichen Immundefizienzvirus (HIV = Human Immunodefiency Virus);
(4) weitere Proteine, wie beispielsweise Hämoglobin, das häufig bei Bestimmungen von fäkalem Okkultblut untersucht wird, einem Frühindikator für gastrointestinale Störungen wie beispielsweise Darmkrebs;
(5) Enzyme, wie beispielsweise Aspartataminotransferase, Lactatdehydrogenase, alkalische Phosphataste und Glutamatdehydrogenase, die häufig als Indikatoren physiologischer Funktion und Gewebsschädigung untersucht werden;
(6) Arzneistoffe, sowohl therapeutische Arzneistoffe, wie beispielsweise Antibiotika, Beruhigungsmittel und Antikonvulsiva, als auch illegale Drogen bzw. Rauschgifte, wie beispielsweise Kokain, Heroin und Marihuana;
(7) Umweltschadstoffe, wie beispielsweise Pestizide und aromatische Kohlenwasserstoffe und
(8) Vitamine.
Derartige chromatographische Systeme werden häufig von Ärzten und Medizintechnikern zur schnellen Diagnose in der Praxis und zur therapeutischen Überwachung einer Vielzahl von Beschwerden und Störungen verwendet. Sie werden weiterhin zunehmend von Patienten selbst zur Überwachung derartiger Beschwerden und Störungen zu Hause verwendet.
Zu den wichtigsten derartigen Systemen zählen die "Dünnschichtsysteme", bei denen sich ein Lösungsmittel über ein dünnes, flaches, absorbierendes Medium bewegt.
Zu den wichtigsten Tests, die mit derartigen Dünnschichtsystemen durchgeführt werden können, zählen Immunoassays, die von der spezifischen Wechselwirkung zwischen einem Antigen oder Hapten und einem entsprechenden Antikörper abhängen. Die Verwendung von Immununtersuchungen bzw. Immunoassays als eine Einrichtung, um das Vorhandensein und/oder die Menge klinisch wichtiger Moleküle zu testen, ist seit einiger Zeit bekannt. Bereits 1956 berichtete J. M. Singer von der Verwendung eines Latex-Agglutinationstest auf Immun-Grundlage zur Erfassung eines Faktors, der mit rheumatoider Arthritis assoziiert ist (Singer et al., Am. J. Med. 22:888-892 (1956)).
Die WO-A-92/21977 beschreibt eine chromatographische Untersuchungs-Vorrichtung zur Erfassung und/oder Bestimmung zumindest eines Analyten, wobei die Vorrichtung zumindest erste und zweite gegenüberstellbare Bestandteile umfasst, und wobei zumindest einer der Bestandteile ein chromatographisches Medium einschliesst, wodurch das In-Gegenüberstellung-Bringen der Bestandteile verursacht, dass zumindest ein an der Erfassung und/oder Bestimmung des Analyten beteiligter Reaktionspartner auf das chromatographische Medium aufgebracht wird. Der Reaktionspartner kann sich in einer Probe oder in einer anderen Flüssigkeit befinden, die auf das chromatographische Medium aufgebracht wird. Abwandlungen dieser Vorrichtung sorgen dafür, dass eine Anzahl von Analyten durch chromatographische Verfahren, einschliesslich bi- bzw. zweidirektionaler Chromatographie, erfasst werden. Die Vorrichtungen können in Test-Bausätzen integriert sein und es werden weiterhin Untersuchungs- Verfahren beschrieben.
Zu den in Verbindungen mit Immunoassays verwendeten chromatographischen Techniken zählt ein als Immungchromatographie bekanntes Verfahren. Im Allgemeinen verwendet diese Technik ein Nachweisreagenz oder -partikel, das an einen Antikörper zum zu untersuchenden Molekül gebunden wurde, wodurch ein Konjugat gebildet wird. Dieses Konjugat wird dann mit einer Probe vermischt, und, wenn das zu untersuchende Molekül in der Probe vorhanden ist, binden die an das Nachweisreagenz gebundenen Antikörper an das zu untersuchende Molekül, wodurch sie anzeigen, dass das zu untersuchende Molekül vorhanden ist. Das Nachweisreagenz oder -partikel kann durch Farbe, magnetische Eigenschaften, Radioaktivität, spezifische Reaktivität mit einem anderen Molekül oder durch eine andere physikalische oder chemische Eigenschaft identifizierbar sein. Die spezifischen Reaktionen, die angewendet werden, variieren mit der Natur des zu untersuchenden Moleküls und der zu testenden Probe.
Immunchromatographische Untersuchungen fallen unter zwei Hauptkategorien: unter die "Sandwich" bzw. "Schicht" und unter die "Kompetitiv" -Hauptkategorie, je nach der Natur des Antigen-Antikörperkomplexes, der erfasst werden soll und der Reaktionsfolge, die erforderlich ist, um diesem Komplex zu erzeugen. Das Antigen, das erfasst werden soll, kann selbst ein Antikörper sein, wie beispielsweise in serologischen Untersuchungen auf H. pylori-spezifische Antikörper. In derartigen Fällen kann der zu erfassende Antikörper an ein spezifisches Antigen gebunden sein. Alternativ kann das zu erfassende Antigen indirekt durch Verwendung eines markierten zweiten Antikörpers erfasst werden, der an den ersten Antikörper zum Analyten, der erfasst werden soll, bindet.
Im Allgemeinen erfordern die Sandwich-Immunchromatographie- Verfahren ein Mischen der Probe, die den zu untersuchenden Analyten enthalten kann, mit Antikörpern zum Analyten. Diese Antikörper sind beweglich und typischerweise an eine Markierung oder ein Nachweisreagenz, wie beispielsweise gefärbtes Latex, ein kolloidales Metallsol oder ein Radioisotop, gebunden. Diese Mischung wird dann auf ein chromatographisches Medium aufgebracht, das eine Bande oder eine Zone immobilisierter Antikörper zum interessierenden Analyten enthält. Das chromatographische Medium hat oft die Form eines einem Messstab ähnlichen Streifens. Wenn der Komplex des zu untersuchenden Moleküls und des markierten Antikörpers die Zone der immobilisierten Antikörper auf dem chromatographischen Medium erreicht, tritt eine Bindung ein, und die gebundenen markierten Antikörper werden an der Zone lokalisiert. Dies zeigt das Vorhandensein des zu untersuchenden Moleküls an. Diese Technik kann verwendet werden, um quantitative oder halbquantitative Ergebnisse zu erzielen.
Beispiele von auf Teststreifen durchgeführten Sandwich- Immunoassays sind im US-Patent Nr. 4 168 146 auf den Namen Grubb et al. und im US-Patent Nr. 4 366 241 auf den Namen Tom et al. beschrieben.
Bei kompetitiven Immunoassays ist die Markierung typischerweise ein markierter Analyt oder ein Analyt-Analog, die um die Bindung eines Antikörpers mit irgendeinem unmarkierten Analyt, der in der Probe vorliegt, konkurrieren. Kompetitive Immunoassays werden typischerweise zur Erfassung von Analyten, wie beispielsweise Haptenen verwendet, wobei jedes Hapten monovalent ist und dazu in der Lage ist, nur ein Antikörper-Molekül zu binden. Beispiele kompetitiver Immunoassay-Vorrichtungen sind diejenigen, die im US-Patent Nr. 4 235 601 auf den Namen Deutsch et al., im US-Patent Nr. 4 442 204 auf den Namen Liotta und im US-Patent Nr. 5 208 535 auf den Namen Buechler et al. offenbart sind.
Obwohl sie brauchbar sind, weisen gegenwärtig erhältliche chromatographische Techniken, die Teststreifen verwenden, eine Anzahl von Nachteilen auf. Viele Proben, wie beispielsweise Fäkalproben, enthalten teilchenförmiges Material, das die Poren des chromatographischen Mediums verstopfen kann und dadurch das immunchromatographische Verfahren stark behindert. Andere Proben, wie beispielsweise Blut, enthalten Zellen und farbige Bestandteile, die die Auswertung des Tests erschweren. Selbst wenn die Probe keine Störung erzeugt, ist es bei bestehenden chromatographischen Testvorrichtungen häufig schwierig, die Probe so auf das chromatographische Medium aufzubringen, dass sich die Probenfront einheitlich durch das chromatographische Medium bewegt, um sicherzustellen, dass die Probe die Fläche, an der eine Bindung erfolgen soll, in einer einheitlichen, geradlinigen Weise erreicht.
Weitere Probleme existieren bei gegenwärtig erhältlichen Teststreifen wegen der Natur der zu untersuchenden Probe oder der auszuführenden Untersuchung. Bei derartigen Vorrichtungen ist es unpraktisch, Waschschritte durchzuführen, die häufig zur Verbesserung der Empfindlichkeit bzw. Sensitivität und zur Reduzierung von Hintergrund bzw. eines Störpegels erwünscht sind. Es ist weiterhin schwierig und in vielen Fällen unmöglich, Vorinkubationsschritte innerhalb der Vorrichtung auszuführen.
Zusätzlich existiert ein Bedarf für eine immunchromatographische Untersuchungs-Vorrichtung, die einen breiten Bereich von Trennungen bzw. Abtrennungen ausführen kann, wie beispielsweise die Abtrennung von Fett aus Milch oder die Abtrennung von organischen Chemikalien, wie beispielsweise der Abtrennung eines Benzols von Toluol.
Probenaufbereitung bzw. Probenvorbereitung und Abfallerzeugung sind für weitere Probleme bei gegenwärtig erhältlichen Vorrichtungen und Techniken zur Immunchromatographie verantwortlich. Die gestiegene Prävalenz von durch infiziertes Blut und Blutprodukte verbreiteten Krankheiten wie beispielsweise Aids und Hepatitis haben diese Probleme verschlimmert. Es ist selten möglich, eine Probe (wie beispielsweise Faeces) oder eine Probenvorrichtung (beispielsweise einen Rachenabstrichtupfer) direkt auf das chromatographische Medium aufzubringen. Mehrere Extraktions- und Vorbehandlungsreaktionen sind üblicherweise, erforderlich, bevor die Probe auf das chromatographische Medium aufgebracht werden kann. Diese Reaktionen werden typischerweise durch den Arzt oder den Techniker ausgeführt, die den Test in mehreren kleinen Gefässen, beispielsweise Teströhrchen bzw. Reagenzgläsern oder Mikrofugenröhrchen durchführen, die die Verwendung von Übertragungsvorrichtungen, wie beispielsweise Pipetten, erforderlich machen. Jede dieser Vorrichtungen ist dann kontaminiert und muss unter Verwendung spezieller Vorsichtsmassnahmen beseitigt werden, so dass Arbeiter oder Personen, die versehentlich mit dem Abfall in Kontakt kommen können, nicht kontaminiert werden.
Eine noch weitere Einschränkung bei gegenwärtig erhältlichen Vorrichtungen zur Verwendung durch den Kliniker oder den Techniker ist deren Unvermögen, eine zweidirektionale oder zweidimensionale Chromatographie durchzuführen. Diese Techniken waren lange als wirkungsvolle analytische Werkzeuge bekannt, jedoch machte es deren Kompliziertheit gegenüber der einfachen unidirektionalen Chromatographie schwierig, sie auf Teststreifen-Vorrichtungen in der Arztpraxis oder einem klinischen Labor aufzubringen.
Demgemäss existiert ein Bedarf nach einer verbesserten Untersuchungs-Vorrichtung zur Handhabung eines breiten Bereiches chromatographischer Untersuchungen. Eine derartige Vorrichtung sollte dazu in der Lage sein, alle Arten von Immunoassays, einschliesslich sowohl Sandwich- als auch kompetitiver Immunoassays, ebenso wie andere Arte von Untersuchungen unter Verwendung einer Chromatographie durchzuführen. Eine derartige Vorrichtung sollte dazu in der Lage sein, eine möglicherweise kontaminierte Probe oder eine Probenaufbereitungsvorrichtung direkt aufzunehmen, damit die Notwendigkeit von Extraktionsgefässen und Übertragungsvorrichtungen beseitigt wird. Eine derartige Vorrichtung, vorzugsweise in Form eines Teststreifens, sollte ebenfalls dazu in der Lage sein, immunchromatographische Untersuchungen farbiger Proben oder Proben, die teilchenförmiges Material enthalten, ohne Störung durchzuführen, und sollte die Probe gleichförmig und gleichmässig auf das chromatographische Medium aufbringen können, um die Genauigkeit und die Präzision des Tests zu verbessern. Zusätzlich sollte ein derartiger verbesserter Teststreifen dazu in der Lage sein, eine zweidirektionale oder zweidimensionale Chromatographie durchzuführen, wenn er in klinischen Laboratorien oder in Arztpraxen angewendet wird.

Zusammenfassung

Wir haben eine Untersuchungs-Vorrichtung entwickeln, die diesem Bedarf entgegenkommt und verbesserte Untersuchungen von Analyten von biologischem Interesse leistet, während die Durchführung der Untersuchung vereinfacht ist und eine Kontamination vermieden wird. Die Vorrichtung kann alle Arten von Immunoassays, einschliesslich Sandwich- Immunoassays, kompetitiver Immunoassays und Untersuchungen durchführen, die Kombinationen dieser Prinzipien verwenden. Die Vorrichtung kann serologische Untersuchungen durchführen, bei denen das zu erfassende Antigen selbst ein Antikörper ist, wie beispielsweise ein Antikörper für H. pylori. Die Vorrichtung kann Untersuchungen durchführen, bei denen das zu erfassende Antigen indirekt unter Verwendung eines zweiten markierten Antikörpers erfasst wird, der an den ersten Antikörper zum Analyten bindet.
Eine Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung macht von Druck Gebrauch, um Flüssigkeit bzw. Strömungsmittel von einem gegenüberstellbaren Bestandteil zum anderen gegenüberstellbaren Bestandteil zu übertragen, und um weiterhin Flüssigkeit durch das chromatographische Medium zu treiben. Nicht nur beschleunigt der Druck den Betrieb der Vorrichtung, sondern er ermöglicht auch die Durchführung zusätzlicher Schritte, wie beispielsweise von Extraktionsschritten, um störende teilchenförmige Bestandteile zu entfernen, innerhalb einer einzigen Vorrichtung. Der Druck wird erzeugt, indem die gegenüberstellbaren Bestandteile mit Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise Verschlusselementen, an jedem der gegenüberstellbaren Bestandteile zusammengehalten werden. Vorzugsweise wird ein vorherbestimmter Druck ausgeübt, um die optimale Leistung jedes Schritts des Untersuchungs- Verfahrens sicherzustellen.
Zusätzlich kann die Vorrichtung weitere Arten von spezifischen Bindungs-Untersuchungen durchführen, wie beispielsweise: (1) Untersuchungen auf der Grundlage der Affinität spezifischer Bindungsproteine, wie beispielsweise von Lectinen, Hormonrezeptoren oder viralen Rezeptoren zu ihren spezifischen Liganden; (2) Untersuchungen auf Grundlage der Affinität von Enzymen zu ihren entsprechenden Substraten oder Inhibitoren; oder (3) Untersuchungen auf Grundlage der Affinität eines Nucleinsäure (DNA oder RNA)- Segments für ein komplementäres Nucleinsäuresegment gemäss dem Watson-Crick Basenpaarungs-Schema.
Die Vorrichtung umfasst:
(1) zumindest zwei im wesentlichen ebene gegenüberstellbare Bestandteile, wobei einer der in wesentlichen ebenen Bestandteile auf seiner Oberfläche ein chromatographisches Medium aufweist; und
(2) Einrichtungen zum Gegenüberstellen der gegenüberstellbaren Bestandteile und zum Darauf-Ausüben von Druck, wobei der Druck ausreichend ist, um Flüssigkeit von einem gegenüberstellbaren Bestandteil auf den anderen gegenüberstellbaren Bestandteil in einer Richtung zu übertragen, die im wesentlichen senkrecht zum gegenüberstellbaren Bestandteil ist, so dass die Probe zur Erfassung und/oder Bestimmung des Analyten darauf, auf das chromatographische Medium aufgebracht wird.
Vorrichtungen gemäss der vorliegenden Erfindung können weiterhin umfassen:
(1) zumindest drei im wesentlichen ebene, gegenüberstellbare Bestandteile, wobei einer der im wesentlichen ebenen Bestandteile auf seiner Oberfläche ein chromatographisches Medium aufweist, wobei das chromatographische Medium erste und zweite Enden aufweist;
(2) Einrichtungen zum Gegenüberstellen der gegenüberstellbaren Bestandteile paarweise in zumindest zwei verschiedenen Kombinationen und zum Darauf-Ausüben von Druck, wobei der Druck ausreichend ist, um Flüssigkeit von einem gegenüberstellbaren Bestandteil zum anderen in einer Richtung zu übertragen, die im wesentlichen senkrecht zu den gegenüberstellbaren Bestandteilen ist, so dass die Probe auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und zur Erfassung und/oder Bestimmung des Analyten auf dem chromatographischen Medium von dem ersten Ende zum zweiten Ende durch das chromatographische Medium fliesst; und
(3) zumindest einen Applikator und einen Absorber, der sich auf einem der gegenüberstellbaren Bestandteil befindet und in derartiger Weise angeordnet ist, dass, wenn der gegenüberstellbare Bestandteil, auf dem sich der Applikator und der Absorber befinden, in Gegenüberstellung zum gegenüberstellbaren Bestandteil gebracht wird, auf dem sich das chromatographische Medium befindet, eine zweite Flüssigkeit auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und vom zweiten Ende zum ersten Ende durch dass chromatographische Medium fliesst, wobei der Fluss durch das chromatographische Medium umgedreht wird, wobei die Erfassung und/oder die Bestimmung des Analyten im Anschluss an die Flussumkehr durch das chromatographische Medium vorgenommen werden.
Gemäss einem Grundgedanken umfasst eine chromatographische Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der eine Probenaufbereitungszone einschliesst, die zur Aufnahme einer zu untersuchenden Probe angepasst ist; und
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der ein chromatographisches Medium einschliesst.
Eine Ausführungsform der chromatographischen Untersuchungs- Vorrichtung, die für Sandwich-Immunoassays geeignet ist, umfasst:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden;
(b) ein Detektoraufbringungskissen in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums;
(c) einen Leiter in Betriebsberührung mit dem Detektoraufbringungskissen und in indirekter Berührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und
(d) einen Absorber in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums; und
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der eine Probenaufbereitungszone zur Aufnahme einer zu untersuchenden Probe einschliesst.
Bei dieser Vorrichtung sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgestaltet, dass das In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten Bestandteile zur Folge hat, dass die Probenaufbereitungszone mit dem Leiter in Berührung steht, um die zu untersuchende Probe auf den Leiter und dann auf das erste Ende des chromatographischen Mediums durch das Detektoraufbringungskissen aufzubringen.
Typischerweise enthält die Probenaufbereitungszone zumindest ein Reaganz zur Behandlung der Probe. In einigen Fällen, wie beispielsweise, wenn eine Urin- oder Serumprobe untersucht wird, ist keine Extraktion oder weitere Behandlung der Probe erforderlich. Weiterhin enthält das Detektoraufbringungskissen typischerweise einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form, die durch Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Detektoraufbringungskissen wiederaufgelöst werden kann, wobei der erste spezifische Bindungspartner mit einer erfassbaren Markierung markiert ist und das chromatographische Medium weiterhin eine Erfassungszone umfasst, deren Fläche wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums ist. Bei dieser Anordnung enthält die Erfassungs- bzw. Nachweiszone daran immobilisiert einen spezifischen Bindungspartner zum Analyten, derartig, dass sich ein Dreifachkomplex mit dem ersten spezifischen Bindungspartner, dem Analyten und dem zweiten spezifischen Bindungspartner auf der Nachweiszone bildet, wenn der Analyt in der Probe vorhanden ist.
Vorzugsweise ist die nachweisbare Markierung eine visuell nachweisbare bzw. erfassbare Markierung.
Vorzugsweise sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile durch ein Gelenk verbunden. Typischerweise ist das Gelenk für eine wässrige Flüssigkeit undurchlässig. Die gegenüberstellbaren Elemente schliessen vorzugsweise umlaufende aufrechte Wände ein, die aneinander anstossend ineinandergreifen, wenn die Vorrichtung geschlossen und arretiert wird.
Ein Testbausatz kann in getrennten Behältern die vorstehend beschriebene chromatographische Untersuchungs-Vorrichtung und einen spezifischen Bindungspartner für den Analyten umfassen, der mit einer nachweisbaren Markierung markiert ist, und der auf das Detektoraufbringungskissen aufgebracht werden soll. Alternativ kann der Bausatz, wenn das Detektoraufbringungskissen einen wiederauflösbaren markierten ersten spezifischen Bindungspartner enthält, die Untersuchungs-Vorrichtung und eine wässrige Flüssigkeit zur Wiederauflösung des markierten spezifischen Bindungspartners umfassen. Ähnliche Testbausätze können für weitere Ausführungsformen einer Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung konstruiert werden.
Ein Verfahren zur Erfassung und/oder Bestimmung eines Analyten in einer Probe unter Verwendung dieser Untersuchungs-Vorrichtung zur Durchführung eines Sandwich- Immunoassays kann die folgenden Schritte umfassen:
(1) Aufbringen der wässrigen Probe auf das Probenaufbereitungskissen der chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung, die einen wiederauflösbaren, markierten ersten spezifischen Bindungspartner auf dem Detektoraufbringungskissen enthält;
(2) In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile der chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung derartig, dass die Probe eine wässrige Flüssigkeit umfasst, die den markierten, spezifischen Bindungspartner im Detektoraufbringungskissen wieder auflöst, und derartig, dass die Probe und der wieder aufgelöste markierte spezifische Bindungspartner auf den Leiter aufgebracht werden;
(3) Ermöglichen, dass die Probe und der markierte spezifische Bindungspartner sich durch den Leiter und dann durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums bewegen, so dass der markierte spezifische Bindungspartner einen erfassbaren Hinweis auf das Vorhandensein und/oder die Menge des Analyten in der Testprobe ergibt; und
(4) Beobachten und/oder Messen des markierten spezifischen Bindungspartners in zumindest einem Teil des chromatographischen Mediums, um den Analyten zu erfassen und/oder zu bestimmen.
Bei einer weiteren Variante dieser Ausführungsform kann der zweite gegenüberstellbare Bestandteil weiterhin ein zweites Detektoraufbringungskissen in Betriebsberührung mit der Probenaufbereitungszone enthalten. Bei dieser Variante enthält das zweite Detektoraufbringungskissen einen zweiten, markierten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in einer Form, die durch den Zusatz einer Probe zur Probenaufbereitungszone wiederaufgelöst werden kann; der zweite, markierte spezifische Bindungspartner ist mit einer erfassbaren Markierung markiert. Der zweite, markierte spezifische Bindungspartner ist derartig angeordnet, dass eine Aufbringung der Probe auf die Probenaufbereitungszone den zweiten, markierten spezifischen Bindungspartner wieder auflöst, so dass die Probenaufbereitungszone eine Mischung der Probe und des zweiten, markierten spezifischen Bindungspartners enthält. Die ersten und zweiten, markierten spezifischen Bindungspartner sind vorzugsweise identisch und mit einer identischen Markierung markiert.
Eine weitere Ausführungsform einer Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung umfasst:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden; und
(b) einen Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) eine Probenaufbereitungszone zur Aufnahme einer Probe, die untersucht werden soll; und
(b) einen Absorber, der von der Probenaufbereitungszone getrennt ist.
Bei dieser Vorrichtung sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgestaltet, dass das In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile zur Folge hat, dass die Probenaufbereitungszone mit dem Leiter in Betriebsberührung kommt, um die zu untersuchende Probe auf den Leiter und darauf auf das erste. Ende des chromatographischen Mediums aufzubringen und hat zur Folge, dass der Absorber mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung kommt, um Flüssigkeit aus dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums abzuziehen. Ein Bewegen des Absorbers zum zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, ermöglicht die Verwendung eines grösseren Absorbers, der von Vorteil sein kann, wenn es erwünscht ist, eine relativ grossvolumige Probe zu untersuchen.
Eine weitere Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung mit einem Absorber am zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil weist eine Probenaufbereitungszone am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, ein chromatographisches Medium und einen Leiter in Betriebsberührung mit der Probenaufbereitungszone und dem ersten Ende des chromatographischen Mediums auf, so dass der Leiter die Probenaufbereitungszone und das chromatographische Medium überbrückt. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil weist einen Applikator auf, der einen spezifischen Bindungspartner für einen Analyten in einer Form enthält, die durch den Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Applikator wieder aufgelöst werden kann und weist einen vom Applikator getrennten Absorber auf. Der im Applikator enthaltene spezifische Bindungspartner ist mit einer erfassbaren Markierung markiert. Bei dieser Vorrichtung hat das In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile zur Folge, dass der Applikator derartig mit der Probenaufbereitungszone in Betriebsberührung kommt, dass, wenn eine Probe der Probenaufbereitungszone zugesetzt wurde, der markierte spezifische Bindungspartner für den Analyten wieder aufgelöst wird bzw. wiederauflösbar gemacht wird und hat zur Folge, dass der Absorber mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung kommt, um Strömungsmittel von dem chromatographischen Medium abzuziehen.
Bei einer noch weiteren Variante einer Untersuchungs- Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung mit einem Absorber am zweiten Bestandteil, schliesst der erste gegenüberstellbare Bestandteil ein chromatographisches Medium und einen Leiter ein. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil schliesst einen ersten Applikator, einen zweiten Applikator und einen Absorber ein. Der Absorber ist sowohl vom ersten Applikator als auch vom zweiten Applikator getrennt. Der erste und zweite Applikator sind auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil derartig angeordnet, dass sie nicht in Betriebsberührung sind, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile nicht gegenübergestellt sind. Der Absorber ist derartig angeordnet, dass er in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums ist, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile sind so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile zur Folge hat, dass der Leiter mit dem ersten Applikator in Betriebsberührung kommt und hat zur Folge, dass der Leiter mit dem zweiten Applikator in Betriebsberührung kommt, was dadurch zur Folge hat, dass der erste und zweite Applikator miteinander in Betriebsberührung kommen.
Bei dieser Vorrichtung kann der zweite Applikator ein Detektoraufbringungskissen einschliessen, das einen ersten, markierten spezifischen Bindungspartner in wieder auflösbarer Form enthält.
Ein Verfahren zur Verwendung dieser Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung umfasst das Aufbringen der Probe auf den ersten Applikator und das In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile, so dass die Probe den markierten spezifischen Bindungspartner in dem Detektoraufbringungskissen wieder auflöst. Die Chromatographie- und Erfassungs-Schritte sind wie vorstehend beschrieben.
Eine noch weitere Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung, die einen Absorber auf dem zweiten Bestandteil einschliesst, umfasst:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden;
(b) einen Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und
(c) ein Detektoraufbringungskissen in direkter Berührung mit dem Leiter und derartig angeordnet, dass es in indirekter Berührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums ist; und
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein Probenaufbringungskissen; und
(b) einen Absorber, der vom Probenaufbringungskissen getrennt ist.
Bei dieser Vorrichtung sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile Folgendes zur Folge hat:
(1) das Probenaufbringungskissen bringt die Probe auf das Detektoraufbringungskissen und somit durch den Leiter auf das erste Ende des chromatographischen Mediums auf; und
(2) der Absorber ist in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums.
Ein Erfassungsverfahren, das diese Variante der Untersuchungs-Vorrichtung verwendet, ist denjenigen, die vorstehend beschrieben sind, ähnlich.
Eine noch weitere Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung, die einen Absorber am zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil integriert, umfasst:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden; und
(b) ein Detektoraufbringungskissen in direkter Berührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein Probenaufbringungskissen; und
(b) einen Absorber, der vom Probenaufbringungskissen getrennt ist.
Bei dieser Vorrichtung sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile verursacht, dass das Detektoraufbringungskissen und das Probenaufbringungskissen in Berührung kommen, ausser dem Bereich des Detektoraufbringungskissens, der direkt an das erste Ende des chromatographischen Mediums angrenzt. Ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile dieser Vorrichtung verursacht:
(1) dass die zu untersuchende Probe auf das Detektoraufbringungskissen und dann auf das erste Ende des chromatographischen Mediums aufgebracht wird; und
(2) dass der Absorber mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung gebracht wird.
Eine noch weitere Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung, die einen Absorber am zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil einschliesst, umfasst:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden; und
(b) einen Leiter, der derartig angeordnet ist, dass er nicht in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums ist, wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil nicht in Gegenüberstellung sind; und
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(i) einen ersten Applikator;
(ii) einen zweiten Applikator; und
(iii) einen Absorber, der von den ersten und zweiten Applikatoren getrennt ist, wobei die ersten und zweiten Applikatoren derartig auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil angeordnet sind, dass sie nicht in Betriebsberührung sind, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile nicht in Gegenüberstellung sind.
Bei dieser Vorrichtung sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile:
(1) zur Folge hat, dass der Leiter mit dem ersten Applikator in Betriebsberührung kommt, zur Folge hat, dass der Leiter mit dem zweiten Applikator in Betriebsberührung kommt und zur Folge hat, dass der zweite Applikator mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung kommt, wodurch die ersten und zweiten Applikatoren miteinander in Betriebsberührung gesetzt werden, um den Inhalt der ersten und zweiten Applikatores des chromatographischen Mediums aufzubringen; und
(2) zur Folge hat, dass der Absorber mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung kommt.
Eine weitere Ausführungsform einer Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung, die zur Durchführung eines Sandwich-Immunoassays geeignet ist, ermöglicht das Waschen des chromatographischen Mediums durch einen Teil der Probe zum Entfernen von ungebundenem, markierten spezifischen Bindungspartner und zur Reduzierung des Störpegels. Diese Ausführungsform umfasst:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden;
(b) einen Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und
(c) einen Absorber in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums; und
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der einen in zwei Sektoren unterteilten Applikator einschliesst:
(a) einen ersten Sektor, der einen ersten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in einer Form enthält, die durch Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Applikator wieder aufgelöst werden kann, wobei der erste spezifische Bindungspartner mit einer erfassbaren Markierung markiert ist; und
(b) einen zweiten Sektor ohne den markierten spezifischen Bindungspartner.
Bei dieser Vorrichtung sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den ersten Sektor, jedoch nicht den zweiten Sektor des Applikators in direkte Berührung mit dem Leiter setzt, wobei der zweite Leiter in indirekter Berührung mit dem Leiter ist, um den Inhalt des ersten Sektors des Applikators auf das chromatographische Medium aufzubringen. Im Anschluss an die Aufbringung des Inhalts des ersten Sektors des Applikators des chromatographischen Mediums wird der Inhalt des zweiten Sektors des Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht, um eine Waschung bereitzustellen.
Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst Untersuchungs-Vorrichtungen, die zur Durchführung eines kompetitiven Immunoassays unter Verwendung eines markierten Analyt-Analogs angepasst sind. Eine Variante dieser Ausführungsform umfasst:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein chromatographisches Medium mit einem ersten Ende und einem zweiten Ende und mit daran immobilisiertem Analyten oder dessen immunologischen Analogs in einer getrennten Fläche, die wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums ist;
(b) einen ersten Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und
(c) einen zweiten Leiter in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums;
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der einen ersten, einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten enthaltenden Applikator in einer Form einschliesst, die durch Zusatz einer ersten wässrigen Flüssigkeit zum ersten Applikator wieder aufgelöst werden kann; und
(3) einen dritten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) einen zweiten Applikator, der einen zweiten, markierten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch den Zusatz einer zweiten wässrigen Flüssigkeit zum zweiten Applikator wieder aufgelöst werden kann, wobei der zweite spezifische Bindungspartner mit einer erfassbaren Markierung markiert ist; und
(b) einen Absorber, der vom zweiten Applikator getrennt ist.
Bei dieser Vorrichtung sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den ersten Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Applikator setzt, so dass der Inhalt des ersten Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird. Die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile sind so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile den Absorber mit dem ersten Leiter in Betriebsberührung setzt, um Strömungsmittel vom chromatographischen Medium abzuziehen. Ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile verursacht, dass der zweite Applikator mit dem zweiten Leiter so in Betriebsberührung kommt, dass der Inhalt des zweiten Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird, der den Teil überlappt, durch den der Inhalt des ersten Applikators gezogen wird.
Bei dieser Vorrichtung sind der erste spezifische Bindungspartner und der zweite, markierte, spezifische Bindungspartner vorzugsweise jeweils Antikörper für den Analyten. Vorzugsweise umfasst der immobilisierte Analyt oder dessen Analog einen Analyten, der kovalent an ein Protein gebunden ist, dem eine spezifische Bindungsaktivität für den Analyten fehlt.
Ein Verfahren zur Verwendung dieser Untersuchungs- Vorrichtung zur Erfassung eines Analyten durch ein kompetitives Immunoassay umfasst:
(1) ein Aufbringen der Probe auf den ersten Applikator der chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung, wobei die Probe die erste wässrige Flüssigkeit umfasst;
(2) ein Aufbringen eines Rekonstitutions- bzw. Wiederherstellungs-Strömungsmittels auf den zweiten Applikator, wobei das Rekonstitutionsströmungsmittel die zweite wässrige Flüssigkeit umfasst;
(3) ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile der chromatographi schere Untersuchungs-Vorrichtung derartig, dass die Probe und der wiederaufgelöste erste spezifische Bindungspartner des Analyten auf den ersten Leiter und dann auf das erste Ende des chromatographischen Mediums aufgebracht werden;
(4) Ermöglichen, dass sich eine Probe und ein wieder aufgelöster, erster spezifischer Bindungspartner durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums bewegen und Bindungsstellen am in der getrennten Fläche immobilisierten immunologischen Analog blockieren;
(5) Trennen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile, so dass sie nicht länger in Gegenüberstellung sind;
(6) In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile derartig, dass der wieder aufgelöste, markierte zweite spezifische Bindungspartner auf den zweiten Leiter und darauf auf das zweite Ende des chromatographischen Mediums aufgebracht wird;
(7) Ermöglichen, dass der wieder aufgelöste, markierte zweite spezifische Bindungspartner sich durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums bewegt, der das gesamte chromatographische Medium überlappt, durch das die Probe und der wieder aufgelöste erste spezifische Bindungspartner gezogen wird, so dass, in der Gegenwart eines Analyten in der Testprobe, der zweite, markierte spezifische Bindungspartner an den Analyten oder dessen immunologisches Analog bindet, die in der getrennten Fläche immobilisiert sind, was auf die Bindung der Probe und des Analyten mit dem ersten spezifischen Bindungspartner zurückzuführen ist; und
(8) Beobachten und/oder Messen des zweiten spezifischen Bindungspartners in der getrennten Fläche, um den Analyten zu erfassen und/oder zu bestimmen.
Vorzugsweise umfasst dieses Verfahren weiterhin den Schritt, die chromatographische Untersuchungs-Vorrichtung im Anschluss an die Aufbringung der Probe auf den ersten Applikator zu inkubieren, um die Reaktion zwischen dem Analyt und dem ersten spezifischen Bindungspartner zu unterstützen.
Bei einem alternativen Untersuchungs-Verfahren unter Verwendung dieser Vorrichtung kann ein erstes Rekonstitutionsströmungsmittel zusätzlich zur Probe auf den ersten Applikator aufgebracht werden.
Weitere Varianten einer Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung, die für kompetitive Immunoassays geeignet sind, können in ähnlicher Weise verwendet werden.
Eine weitere Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung zur Durchführung eines kompetitiven Immunoassays umfasst:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein chromatographisches Medium mit einem ersten Ende und einem zweiten Ende und mit, daran immobilisiert, in einzelnen, getrennten und nicht überlappenden Flächen, wobei jede Fläche wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums ist:
(i) einem spezifischen Bindungspartner für den Analyten; und
(ii) einem sekundären spezifischen Bindungspartner, wobei der sekundäre spezifische Bindungspartner dazu in der Lage ist, einen Teil eines spezifischen Bindungspaares zu binden, dem eine Affinität für den Analyten fehlt, wobei der sekundäre spezifische Bindungspartner sich näher am ersten Ende des chromatographischen Mediums befindet als der erste spezifische Bindungspartner;
(b) einen ersten Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und
(c) einen zweiten Leiter in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums;
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) einen Applikator, der ein Analyt-Analog enthält, wobei das Analyt-Analog einen kovalent an einen Teil eines spezifischen Bindungspaares gebundenen Analyten umfasst, dem eine Affinität für den Analyten fehlt und der durch den sekundären spezifischen Bindungspartner bindbar ist, wobei der Teil des spezifischen Bindungspaars mit einer erfassbaren Markierung markiert ist, und wobei das Analyt- Analog in einer Form vorliegt, die durch den Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Applikator wieder aufgelöst werden kann; und
(b) einen Absorber, der vom Applikator getrennt ist.
Bei dieser Vorrichtung sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den zweiten Leiter mit dem Applikator in Betriebsberührung setzt, so dass der Inhalt des Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird, und setzt den Absorber mit dem ersten Leiter in Betriebsberührung, um Flüssigkeit aus dem chromatographischen Medium abzuziehen.
Diese Variante der Vorrichtung umfasst vorzugsweise weiterhin eine Abdeckung, die gelenkig an dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil befestigt ist, so dass sie über den ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil gefaltet werden kann, wenn diese in Gegenüberstellung sind. Die Abdeckung weist eine darin eingeschnittene Öffnung auf, um eine Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums zu ermöglichen, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung sind und die Abdeckung über die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile gefaltet ist.
Bei dieser Variante ist vorzugsweise der erste spezifische Bindungspartner ein für den Analyten spezifischer Antikörper und der sekundäre spezifische Bindungspartner ist ein zweiter Antikörper, der dazu in der Lage ist, ein Immunglobulin zu binden, dem eine Spezifität für den Analyten fehlt. Das Analyt-Analog umfasst vorzugsweise einen kovalent an ein Immunglobulin aus einer Spezies gebundenen Analyten und der spezifische Bindungspartner ist ein für diese Spezies spezifischer Antikörper.
Diese Variante kann weiterhin einen dritten gegenüberstellbaren Bestandteil umfassen, der einen derartig positionierten Absorber enthält, dass, wenn die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile gegenübergestellt sind, der Absorber mit dem gesamten chromatographischen Medium und beiden Leitern in Berührung gebracht wird. Bei dieser Variante ist hinter dem chromatographischen Medium eine Öffnung ausgebildet, die eine Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums von hinten zulässt, wenn der zweite gegenüberstellbare Bestandteil über den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil gefaltet ist und der dritte gegenüberstellbare Bestandteil über den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil gefaltet ist.
Bei einer weiteren Abwandlung ist die Fläche des am chromatographischen Medium immobilisierten, sekundären spezifischen Bindungspartners in zumindest zwei getrennte und nicht überlappende Banden unterteilt, wobei die Menge an sekundärem spezifischem Bindungspartner in jeder Bande so bestimmt ist, dass die Menge an Analyt-Analog, die an die Erfassungszone bindet und somit die Analytkonzentration in der Testprobe durch die Anzahl an Banden angezeigt wird, an die das Analyt-Analog bindet.
Eine noch weitere Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung, die für kompetitive Immunoassays geeignet sind, verwendet eine Biotin-Avidin- Bindung. Diese Variante der Vorrichtung umfasst:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der ein chromatographisches Medium mit einem ersten Ende und einem zweiten Ende und mit, daran immobilisiert, in einzelnen getrennten, nicht überlappenden Flächen, wobei jede Fläche wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums ist;
(a) einer Substanz, die zur spezifischen Bindung von Biotin in der Lage ist und die aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Avidin, Streptavidin, Anti-Biotin-Antikörpern und deren Derivaten besteht; und
(b) einem sekundären spezifischen Bindungspartner, der zur spezifischen Bindung eines Drei-Bestandteile- Komplexes in der Lage ist, wobei der Drei-Bestandteile- Komplex Folgendes umfasst:
(i) einen Analyten;
(ii) einen Teil eines spezifischen Bindungspaares, dem eine spezifische Bindungsaffinität für den Analyten fehlt, wobei der Teil kovalent an den Analyten gebunden ist; und
(iii) eine erfassbare Markierung, die an den Teil des spezifischen Bindungspaares gebunden ist;
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der einen ersten Applikator einschliesst, der einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch den Zusatz einer wässrigen Probe zum ersten Applikator wieder aufgelöst werden kann, wobei der erste spezifische Bindungspartner kovalent an Biotin gebunden ist, und wobei der erste spezifische Bindungspartner nicht dazu in der Lage ist, durch den sekundären spezifischen Bindungspartner gebunden zu werden;
(3) einen dritten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) einen zweiten Applikator, der den Drei- Bestandteile-Komplex enthält, wobei der Komplex in einer Form vorliegt, die durch den Zusatz einer zweiten wässrigen Flüssigkeit zum zweiten Applikator wieder aufgelöst werden kann; und
(b) einen Absorber, der vom zweiten Applikator getrennt ist.
Bei dieser Vorrichtung sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den ersten Leiter mit dem ersten Applikator so in Betriebsberührung setzt, dass der Inhalt des ersten Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird. Die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile sind so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile den Absorber mit dem ersten Leiter in Berührung setzt, um Flüssigkeit vom chromatographischen Medium abzuziehen und verursacht, dass der zweite Applikator mit dem zweiten Leiter in Betriebsberührung kommt, so dass der Inhalt des zweiten Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird, der den Teil überlappt, zu dem der Inhalt des ersten Applikator gezogen wird.
Vorzugsweise ist der erste spezifische Bindungspartner ein Anti-Analyt-Antikörper. Der Teil des spezifischen Bindungspaares im Drei-Bestandteile-Komplex kann Kaninchen- Immunglobulin G sein, in welchem Fall der sekundäre spezifische Bindungspartner Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG ist. Vorzugsweise ist die Substanz, die zur spezifischen Bindung von Biotin in der Lage ist, Streptavidin.
Die Fläche des am chromatographischen Medium immobilisierten sekundären spezifischen Bindungspartners kann in zumindest zwei getrennte und nicht überlappende Banden unterteilt sein, wobei die Menge an sekundärem spezifischen Bindungspartner in jeder Bande so bestimmt ist, dass die Menge an Drei-Bestandteile-Komplex, die an die Erfassungszone bindet und somit die ursprüngliche Analytkonzentration in der Testprobe durch die Anzahl von Banden angezeigt wird, an die der Drei-Bestandteile-Komplex bindet.
Eine noch weitere Variante einer chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung, die zur Durchführung eines kompetitiven Immunoassays geeignet ist, umfasst:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein chromatographisches Medium mit einem ersten Ende und einem zweiten Ende und mit, daran immobilisiert, in einzelnen und nicht überlappenden Flächen, die jeweils wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums sind:
(i) einem Analyt-Analog, dass zur Bindung eines spezifischen Bindungspartners für den Analyten in der Lage ist; und
(ii) einem sekundären spezifischen Bindungspartner, der zur Bindung eines spezifischen Bindungspaar-Teils in der Lage ist, der eine Affinität für den Analyten aufweist, wobei dem sekundären spezifischen Bindungspartner selbst eine Bindungsaffinität für den Analyten fehlt; und
(b) ein Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der einen Applikator einschliesst, der einen zum Analyten spezifischen Bindungspartner in einer Form enthält, die durch Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Applikator wieder aufgelöst werden kann.
Bei dieser Vorrichtung sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den Leiter mit dem Applikator so in Betriebsberührung setzt, dass der Inhalt des Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird.
Vorzugsweise ist der erste spezifische Bindungspartner ein für den Analyten spezifischer Antikörper und das Analyt- Analog umfasst einen kovalent an ein Protein gebundenen Analyten, dem eine spezifische Bindungsaktivität für den Analyten oder für den spezifischen Bindungspartner für den Analyten fehlt. Der sekundäre spezifische Bindungspartner bindet vorzugsweise den für den Analyten spezifischen Bindungspartner auf der Grundlage von Spezies-spezifischen Wechselwirkungen, die die Antigen-Verbindungsstelle des Antikörpers für den Analyten nicht einbeziehen.
Bei dieser Vorrichtung kann die Fläche des sekundären spezifischen Bindungspartners, der am chromatographischen Medium immobilisiert ist, in zumindest zwei getrennte und nicht überlappende Banden unterteilt sein, wobei die Menge an sekundärem spezifischen Bindungspartner in jeder Bande so bestimmt ist, dass die Menge an markiertem spezifischen Bindungspartner für den Analyt, der an die Erfassungszone bindet und somit die Menge an Analyt in der Testprobe, durch die Anzahl an Banden angezeigt wird, an die der markierte spezifische Bindungspartner für den Analyten bindet.
Eine weitere Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung, die zur Durchführung eines kompetitiven Immunoassays geeignet ist, ist eine Drei- Bestandteile-Vorrichtung, die zwei Schritte einer Reagenz- Wanderung durch das chromatographische Medium einschliesst, die beide in derselben Richtung auftreten. Diese Vorrichtung umfasst:
(1) einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) ein chromatographisches Medium mit einem ersten Ende und einem zweiten Ende und mit, daran immobilisiert, in einzelnen getrennten und nicht überlappenden Flächen, wobei jede Fläche kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums ist:
(i) einem spezifischen Bindungspartner für den Analyten; und
(ii) einem sekundären spezifischen Bindungspartner wie vorstehend beschrieben, wobei sich der spezifische Bindungspartner für den Analyten näher am ersten Ende des chromatographischen Mediums befindet;
(b) einen ersten Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums, wobei der erste Leiter dazu in der Lage ist, als ein erster Applikator zu funktionieren; und
(c) einen zweiten Leiter in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums;
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschliesst:
(a) einen zweiten Applikator, der ein Analyt- Analog wie vorstehend beschrieben enthält, wobei das Analyt- Analog in einer Form vorliegt, die durch den Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Applikator wieder aufgelöst werden kann; und
(b) einen ersten Absorber, der vom zweiten Applikator getrennt ist, und
(3) einen dritten gegenüberstellbaren Bestandteil, der einen zweiten Absorber einschliesst.
Bei dieser Vorrichtung sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den zweiten Applikator mit dem ersten Leiter in Betriebsberührung setzt und den ersten Absorber mit dem zweiten Leiter in Betriebsberührung setzt. Die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile sind so ausgestaltet, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile den zweiten Absorber mit dem ersten Leiter und mit dem chromatographischen Medium in direkte Berührung setzt, um von diesem Flüssigkeit abzuziehen.

Kurze Beschreibung der Zeichnungen

Diese und weitere Merkmale, Grundgedanken und Vorteile der vorliegenden Erfindung werden hinsichtlich der folgenden Beschreibung, der beigefügten Ansprüche und der begleitenden Zeichnung besser verständlich werden, bei denen:
Fig. 1A eine Zeichnung einer Variante einer chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist;
Fig. 1B eine Zeichnung der chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen nach Fig. 1A ist, die mit den beiden Bestandteilen in Gegenüberstellung gebracht dargestellt ist;
Fig. 2 eine Zeichnung einer Variante einer chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist, bei der der erste gegenüberstellbare Bestandteil eine Probenaufbereitungszone und ein chromatographisches Medium einschliesst, das nicht in Verbindung mit der Probenaufbereitungszone steht und bei der der zweite gegenüberstellbare Bestandteil ein leitendes Verbindungsteil einschliesst;
Fig. 3 eine Zeichnung einer weiteren Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung mit einer Probenaufbereitungszone ist, die in den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil integriert ist;
Fig. 4 eine Zeichnung einer Alternative der Variante nach Fig. 3 ist, mit einem Absorber am zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, eher als am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil;
Fig. 5 eine Zeichnung einer weiteren Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung mit einer Probenaufbereitungszone und einem Absorber ist, die sich auf demselben gegenüberstellbaren Bestandteil befinden;
Fig. 6 eine Zeichnung einer noch weiteren Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung mit zwei Detektoraufbringungskissen auf verschiedenen gegenüberstellbaren Bestandteilen ist;
Fig. 7 eine Zeichnung einer noch weiteren Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die zwei Applikatoren auf einem der beiden Bestandteile integriert;
Fig. 8 eine Zeichnung einer Alternative der Variante nach Fig. 7 mit einem Absorber auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, eher als auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil ist;
Fig. 9 eine Zeichnung einer noch weiteren Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die eine Diskontinuität bzw. Unterbrechung zwischen einem Leiter und dem chromatographischen Medium einschliesst, die überbrückt ist, wenn die Vorrichtung geschlossen ist;
Fig. 10A eine Zeichnung von einer noch weiteren Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die ein Detektoraufbringungskissen in Betriebsberührung mit dem chromatographischen Medium einschliesst;
Fig. 10B eine geschnittene Rückansicht der Untersuchungs- Vorrichtung mit zwei Bestandteilen nach Fig. 10A ist, die Einzelheiten der Bestandteile in Gegenüberstellung darstellt;
Fig. 11A eine noch weitere Variante einer Untersuchung- Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die allgemein der Variante nach Fig. 10 ähnlich ist, bei der jedoch das Detektoraufbringungskissen mit dem chromatographischen Medium in direkter Berührung ist;
Fig. 11B eine geschnittene Rückansicht der Untersuchungs- Vorrichtung mit zwei Bestandteilen nach Fig. 11A ist, die Einzelheiten der Bestandteile in Gegenüberstellung darstellt;
Fig. 12A eine Zeichnung einer Variante einer Untersuchungs- Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die zur Ausführung einer zweidirektionalen Chromatographie geeignet ist;
Fig. 12B eine Draufsicht der chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen nach Fig. 12A ist, die mit den beiden Bestandteilen in Gegenüberstellung gebracht dargestellt ist;
Fig. 13A ist eine Zeichnung einer weiteren Variante einer Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen, die zur Ausführung einer zweidirektionalen Chromatographie mit zwei Applikatoren und einem Leiter geeignet ist;
Fig. 13B eine Draufsicht der chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung mit den beiden Bestandteilen nach Fig. 13A ist, die mit den beiden Bestandteilen in Gegenüberstellung gebracht dargestellt ist;
Fig. 14 eine Zeichnung einer weiteren Untersuchungs- Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung mit einem Detektoraufbringungskissen auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil und einer Probenaufbereitungszone auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil ist;
Fig. 15 eine Zeichnung einer weiteren Untersuchungs- Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist, wobei der Applikator in zwei Sektoren unterteilt ist, die für eine Waschung des chromatographischen Mediums mit Probe vorgesehen sind, die frei von Markierungen ist;
Fig. 16A eine Zeichnung einer noch weiteren Untersuchungs- Vorrichtung mit zwei Bestandteilen ist, die zur zweidirektionalen Chromatographie geeignet ist, und die eine Abdeckung einschliesst;
Fig. 16B eine Draufsicht der chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen nach Fig. 16A ist, die mit den beiden Bestandteilen in Gegenüberstellung gebracht dargestellt ist;
Fig. 17A eine Zeichnung einer Untersuchungs-Vorrichtung mit drei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist;
Fig. 17B eine geschnittene Rückansicht der Untersuchungs- Vorrichtung mit drei Bestandteilen nach Fig. 17A ist, die Einzelheiten der Bestandteile in Gegenüberstellung darstellt;
Fig. 18A eine Zeichnung einer Untersuchungs-Vorrichtung mit drei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist, bei der der dritte Bestandteil zum Absorbieren von Flüssigkeit aus dem gesamten chromatographischen Medium und beiden Leitern dient;
Fig. 19 eine Zeichnung einer Mehrfach-Untersuchungs- Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die zur gleichzeitigen Untersuchung einer oder mehrerer Proben geeignet ist;
Fig. 20 eine Zeichnung einer Variante einer Mehrfach- Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die eine zusammenlegbare Wanne zur Aufnahme einer Probe enthält;
Fig. 21 eine Zeichnung einer anderen Variante einer Multiplex-Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die zur Aufnahme einer Testkarte angepasst ist;
Fig. 22 eine Zeichnung einer noch weiteren Variante einer Mehrfach-Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die zur Aufnahme einer Testkarte angepasst ist;
Fig. 23 eine Zeichnung einer Variante einer Untersuchungs- Vorrichtung mit drei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die zur Durchführung eines kompetitiven Immunoassays geeignet ist, der einen markierten Antikörper verwendet, der an ein am chromatographischen Medium immobilisiertes Analyt-Analog bindet;
Fig. 24 eine Zeichnung einer Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen ist, mit einer Abdeckung, die zur Durchführung eines kompetitiven Immunoassays unter Verwendung eines markierten Analyt-Analogs geeignet ist;
Fig. 25 eine Zeichnung einer Untersuchungs-Vorrichtung mit drei Bestandteilen ist, die zur Durchführung eines unidirektionalen kompetitiven Immunoassays unter Verwendung eines markierten Analyt-Analogs geeignet ist, bei dem der dritte Bestandteil zum Absorbieren von Flüssigkeit aus dem gesamten chromatographischen Medium und beiden Leitern dient;
Fig. 26 eine Zeichnung einer Untersuchungs-Vorrichtung mit drei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die zur Durchführung eines kompetitiven Immunoassays geeignet ist, wobei die Vorrichtung eine Biotin-Avidin-Bindung verwendet;
Fig. 27 eine Zeichnung einer Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen ist, die zur Durchführung eines kompetitiven Immunoassays unter Verwendung eines markierten Anti-Analyt-Antikörpers geeignet ist;
Fig. 28 eine Beschreibung einer Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung ist, die zur Aufnahme eines Pinsels bzw. Tupfers oder einer ähnlichen Probeentnahmevorrichung geeignet ist und zur Erfassung von Streptococcus A-Antigen entwickelt wurde.

Beschreibung

Definitionen

Im Kontext dieser Offenbarung sind die folgenden Begriffe wie folgt definiert, soweit nichts anderes angegeben ist:
Spezifischer Bindungspartner: ein Teil eines Molekülpaares, der mit Hilfe spezifischer, nicht kovalenter Wechselwirkungen in Wechselbeziehung steht, die von den dreidimensionalen Strukturen der betroffenen Molekülen abhängen. Typische Paare spezifischer Bindungspartner schliessen Antigen-Antikörper, Hapten-Antikörper, Hormon- Rezeptor, Nucleinsäurestrang-komplementärer Nucleinsäurestrang, Substrat-Enzym, Inhibitor-Enzym, Kohlenhydrat-Lectin, Biotin-Avidin und Virus-Zellrezeptor- Paare ein.
Betriebsberührung: zwei feste Bestandteile sind in Betriebsberührung, wenn sie entweder direkt oder indirekt in einer derartigen Weise in Berührung stehen, dass eine wässrige Flüssigkeit von einem der beiden Bestandteile zum anderen im wesentlichen ununterbrochen, durch Kapillarwirkung oder anderes strömen kann. "Direkte Berührung" bedeutet, dass die beiden Elemente sich physisch berühren, beispielsweise Kante-an-Kante oder Vorder- an Hinterseite. Wenn zwei Bestandteile in direkter Berührung stehen, sind sie typischerweise mit einer Überlappung von 0,5 bis ungefähr 3 mm überlappt. Jedoch können die Bestandteile mit anstossenden Kanten angeordnet sein. "Indirekte Berührung" bedeutet, dass sich die beiden Elemente nicht physisch berühren, jedoch durch eine oder mehrere Leiter überbrückt sind.
Finite Kapazität: ein Absorber weist eine finite Kapazität auf, wenn er durch eine Flüssigkeit gesättigt ist, die er während der normalen Durchführung einer Untersuchung in der Vorrichtung, in der sich der Absorber befindet, aufgenommen hat. An diesem Punkt kann die Absorptionseinrichtung zusätzlich absorbierte Flüssigkeit freisetzen und zumindest teilweise leitfähig werden.
Analyt: der Begriff "Analyt" schliesst sowohl das tatsächliche zu untersuchende Molekül als auch seine Analoge und Derivate ein, wenn derartige Analoge und Derivate ein anderes, bei der Untersuchung verwendetes Molekül in einer Weise binden, die im wesentlichen der des Analyten selbst entspricht.
Antikörper: der Begriff "Antikörper" schliesst sowohl intakte Antikörper-Moleküle der geeigneten Spezifität als auch Antikörper-Fragmente (einschliesslich Fab, F(ab') und F(ab')&sub2;-Fragmente) ebenso wie chemisch modifizierte intakte Antikörper-Moleküle und Antikörper-Fragmente, einschliesslich Hybrid-Antikörpern ein, die durch in vitro- Wiederverbindung von Untereinheiten zusammengesetzt sind.
Sekundärer spezifischer Bindungspartner: ein zusätzlicher spezifischer Bindungspartner, der an einen Teil eines spezifischen Bindungspartnerpaares bindet, wenn das spezifische Bindungspartnerpaar in Wechselbeziehung steht, wird als sekundärer spezifischer Bindungspartner bezeichnet.
Beispielsweise kann ein spezifisches Bindungspartnerpaar ein Giardia-Antigen und einen Kaninchen-Anti-Giardia-Antikörper umfassen. In diesem Fall kann der sekundäre spezifische Bindungspartner ein Ziegen-Antikörper gegen Kaninchen-IgG sein. Der sekundäre spezifische Bindungspartner kann für die Spezies, Klasse oder Subklasse eines Antikörper spezifischen Bindungspartners, an den er bindet, spezifisch sein. Alternativ kann, wenn einer der spezifischen Bindungspartner mit Biotin markiert ist, der sekundäre spezifische Bindungspartner ein mit Avidin verbundenes Molekül umfassen.

Überblick der Offenbarung

Zum Vorteil des Lesers und als eine Verständnishilfe der Gliederung der Offenbarung wird der folgende Überblick der Offenbarung präsentiert, der die Gliederung der Offenbarung in Form von Abschnittsüberschriften darlegt.
I. Chromatographische Untersuchungs-Vorrichtungen
A. Vorrichtungen mit zwei Bestandteilen
1. Allgemeine Anordnung
2. Spezielle Ausführungsformen einer Vorrichtung mit zwei Bestandteilen
a. Vorrichtung mit leitendem Verbindungsteil auf dem zweiten Bestandteil
b. Vorrichtung mit Probenaufbereitungszone auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil
c. Vorrichtung mit Absorber auf dem zweiten Bestandteil
d. Vorrichtung mit Probenaufbereitungszone und einem Absorber auf demselben gegenüberstellbaren Bestandteil
e. Vorrichtung mit zwei Detektoraufbringungskissen auf unterschiedlichen gegenüberstellbaren Bestandteilen
f. Vorrichtung, die zwei getrennte Applikatoren auf demselben gegenüberstellbaren Bestandteil einschliesst
g. Vorrichtung mit zwei Applikatoren und einem Absorber auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil
h. Vorrichtung mit Spalte oder Diskontinuität zwischen Leiter und chromatographischem Medium
i. Vorrichtung mit einem Kissen für einen markierten spezifischen Bindungspartner auf demselben gegenüberstellbaren Bestandteil wie das chromatographische Medium
j. Vorrichtung mit Detektoraufbringungskissen in direkter Berührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums
k. zweidirektionale Vorrichtung, die einen zweiten Applikator und einen Absorber auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil einschliesst
l. zweidirektionale Vorrichtung, die zwei Applikatoren und einen Leiter einschliesst
m. Vorrichtung mit Detektoraufbringungskissen auf dem ersten Bestandteil
n. Vorrichtung mit einem Applikator mit zwei Sektoren, um ein Waschen vorzusehen
B. Vorrichtung mit zwei Bestandteilen und mit einer Abdeckung
C. Vorrichtung mit drei Bestandteilen
D. Mehrfachvorrichtungen
1. Grund-Mehrfachvorrichtung
2. Mehrfachvorrichtung mit kollabierbarer Wanne
3. Mehrfachvorrichtungen, die zur Aufnahme einer Testkarte angepasst sind.
II. Chromatographische Untersuchungs-Vorrichtungen für kompetitive Untersuchungen
A. Zweidirektionale Strömungsvorrichtung mit drei Bestandteilen
B. Zweidirektionale Strömungsvorrichtung mit zwei Bestandteilen und mit einer Abdeckung
C. Unidirektionale Strömungsvorrichtung mit drei Bestandteilen und mit einem Absorber
D. Zweidirektionale Strömungsvorrichtung mit drei Bestandteilen unter Verwendung einer Biotin- Spezifität
E. Vorrichtung für einen kompetitiven Hemmungs- Immunoassay mit zwei Bestandteilen
III. Analyten und Antikörper zur Verwendung mit den Untersuchungs-Vorrichtungen
IV. Testbausätze

I. Chromatographische Untersuchungs-Vorrichtungen

Ein Grundgedanke der vorliegenden Erfindung umfasst chromatographische Untersuchungs-Vorrichtungen, die für die Untersuchung von Analyten in biologischen Proben besonders brauchbar sind. Diese Vorrichtungen sind zur direkten Aufbringung biologischer Proben ohne vorbereitende Extraktionsschritte geeignet und sind so aufgebaut, um eine Störung der Untersuchungsergebnisse auf ein Minimum zu reduzieren, die durch aus Partikeln bestehenden Stoffen oder farbigen Proben verursacht sind.
Die Vorrichtung weist zumindest zwei im wesentlichen ebene gegenüberstellbare Bestandteile auf. Einer der im wesentlichen ebenen Bestandteile weist an seiner Oberfläche ein chromatographisches Medium auf.
Die Vorrichtung weist weiterhin Einrichtungen zum Gegenüberstellen des gegenüberstellbaren Bestandteils und zum Darauf-Ausüben von Druck auf.
Der ausgeübte Druck ist ausreichend, um Strömungsmittel von einem gegenüberstellbaren Bestandteil zum anderen gegenüberstellbaren Bestandteil in einer Richtung zu übertragen, die im wesentlichen senkrecht zu den gegenüberstellbaren Bestandteilen ist, so dass die Probe zur Erfassung und/oder Bestimmung des sich darauf befindlichen Analyten auf das chromatographische Medium aufgebracht wird. Der Druck treibt weiterhin Strömungsmittel durch das chromatographische Medium, um das Chromatographieverfahren zu beschleunigen, wodurch ein erfassbares Ergebnis in geringerer Zeit gegeben wird. Zusätzlich macht der Druck die Durchführung von Schritten, wie beispielsweise Extraktionsschritten in der Vorrichtung möglich und kann verwendet werden, um überschüssiges Strömungsmittel aus dem chromatographischen Medium durch Absorber zu entfernen, um den Störpegel der Untersuchungen zu reduzieren. Der Druck wird durch In- Gegenüberstellung-Setzen der gegenüberstellbaren Bestandteile erzeugt und durch In-Gegenüberstellung-Halten der Bestandteile durch Eingriffsvorrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse oder Klammern bzw. Haken, aufrechterhalten.
Vorrichtungen gemäss der vorliegenden Erfindung können zur Durchführung entweder eines Sandwich- oder eines kompetitiven Untersuchungen aufgebaut sein.
Wenn die Vorrichtung zur Durchführung eines Sandwich- Immunoassays aufgebaut ist, weist typischerweise zumindest eines der gegenüberstellbaren Bestandteile der Vorrichtung darauf eingeschlossen einen ersten, markierten spezifischen Bindungspartner zum Analyten auf. Dieser erste, markierte spezifische Bindungspartner zum Analyten liegt in einer Form vor, die durch eine wässrige Flüssigkeit wieder aufgelöst werden kann. Die wässrige Flüssigkeit, die zur Wiederauflösung verwendet wird, kann die Probe sein. Der erste markierte, spezifische Bindungspartner ist so positioniert, dass er mit dem Analyten in der Probe reagieren kann.
In einer zur Durchführung eines Sandwich-Immunoassays geeigneten Vorrichtung weist das chromatographische Medium darauf integriert eine Erfassungszone eines zweiten, unmarkierten, spezifischen Bindungspartners für den Analyten auf, der an ihr immobilisiert ist. Die Erfassungszone ist wesentlich kleiner als das chromatographische Medium. Diese Bestandteile sind so angeordnet, dass ein Dreifachkomplex mit (1) dem ersten, markierten, spezifischen Bindungspartner, (2) dem Analyten und (3) dem zweiten unmarkierten spezifischen Bindungspartner an die Erfassungszone bindet, wenn der Analyt in der Probe vorhanden ist.
In einer zur Durchführung eines kompetitiven Immunoassays geeigneten Vorrichtung weist das chromatographische Medium, dass darin integriert ist, in zumindest einer Zone, die wesentlich kleiner als das chromatographische Medium ist, einen Teil eines spezifischen Bindungspaares auf, das aus der Gruppe ausgewählt ist, das aus dem Analyten oder dessen Analog und einem spezifischen Bindungspartner für den Analyten besteht. Mehrere unterschiedliche Anordnungen für Vorrichtungen gemäss der vorliegenden Erfindung, die zur Durchführung eines kompetitiven Immunoassays geeignet sind, sind möglich. Diese unterschiedlichen Anordnungen sind nachstehend beschrieben.
Typischerweise tritt die Erfassung und/oder Bestimmung des Analyten, nachdem die Probe in ein chromatographisches Medium aufgebracht wurde, ein, indem ein visuell erfassbarer, markierter Bestandteil verwendet wird. Der markierte Bestandteil ist bevorzugt entweder der Analyt oder dessen Analog, das an eine visuell erfassbare Markierung gebunden ist, oder ein spezifischer Bindungspartner für den Analyten, der an eine visuell erfassbare Markierung gebunden ist.
Untersuchungs-Vorrichtungen gemäss der vorliegenden Erfindung können für die gleichzeitige Durchführung von mehr als einer Untersuchung aufgebaut sein. Bei derartigen Vorrichtungen weist eine der im wesentlichen ebenen Bestandteile zumindest zwei getrennte und sich nicht berührende chromatographische Medien an diesem auf.
Eine Abwandlung der Vorrichtung ist insbesondere zur zweidirektionalen Chromatographie geeignet, obwohl sie nicht auf diese Verwendung beschränkt ist. Diese Vorrichtung weist zumindest drei im wesentlichen planare bzw. ebene gegenüberstellbare Bestandteile auf. Einer der im wesentlichen planaren Bestandteile weist an seiner Oberfläche ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden auf. Die Vorrichtung mit drei Bestandteilen weist ebenfalls Einrichtungen zum paarweise In- Gegenüberstellung-Bringen der gegenüberstellbaren Bestandteile in zumindest zwei unterschiedlichen Kombinationen und zum Darauf-Ausüben von Druck auf, indem die gegenübergestellten Bestandteile durch Eingriffsvorrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse oder Klammern, zusammengehalten werden. Der Druck ist ausreichend, um Flüssigkeit von einem gegenüberstellbaren Bestandteil zu einem anderen in einer Richtung zu übertragen, die im Wesentlichen zu den gegenüberstellbaren Bestandteilen senkrecht ist und um die Flüssigkeit durch das chromatographische Medium zu treiben. Dies verursacht, dass die Probe auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und dass sie vom ersten Ende zum zweiten Ende durch das chromatographische Medium fliesst bzw. strömt.
Die Vorrichtung weist zumindest einen Applikator und einen Absorber auf, die sich an einem der gegenüberstellbaren Bestandteile befinden und in einer Weise positioniert sind, dass, wenn der gegenüberstellbare Bestandteil, an dem sich der Applikator und der Absorber befinden, zum gegenüberstellbaren Bestandteil, an dem sich das chromatographische Medium befindet, in Gegenüberstellung gebracht werden, eine zweite Flüssigkeit auf das chromatographische Medium aufgebracht wird. Die zweite Flüssigkeit strömt vom zweiten Ende zum ersten Ende durch das chromatographische Medium. Dies kehrt die Strömung durch das chromatographische Medium um. Die Erfassung und/oder Bestimmung des Analyten wird im Anschluss an die Strömungsumkehr durchgeführt.

A. Vorrichtungen mit zwei Bestandteilen

Eine Ausführungsform der Untersuchungs-Vorrichtung der vorliegenden Erfindung ist eine chromatographische Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen, die in einer Dimension mit eindirektionaler Strömung arbeitet.

I. Allgemeine Anordnung einer Vorrichtung mit zwei Bestandteilen

Im Allgemeinen umfasst eine chromatographische Untersuchungs-Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung folgendes:
(1) Einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der eine Probenaufbereitungszone, die zur Aufnahme einer zu untersuchenden Probe angepasst ist, einschliesst;
(2) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der ein chromatographisches Medium einschliesst.
Bei dieser Vorrichtung können die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden, wenn die Vorrichtung geschlossen ist, um zu verursachen, dass eine Probenaufbereitungszone die zu untersuchende Probe auf das chromatographische Medium aufbringt. Bei Gebrauch sind die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile typischerweise in Gegenüberstellung gebracht, nachdem ein Erfassungsreagenz auf die Probenaufbereitungszone aufgebracht wurde. Wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht sind, bringt die Probenaufbereitungszone die Probe und das Erfassungsreagenz auf das chromatographische Medium auf. Danach lässt man die Probe und das Erfassungsreagenz zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums durchqueren, so dass das Erfassungsreagenz einen erfassbaren Hinweis des Vorhandenseins und/oder der Menge des Analyten ergibt; das Erfassungsreagenz wird dann in zumindest einem Teil des chromatographischen Mediums beobachtet und/oder gemessen. Dies hat die Erfassung und/oder die Bestimmung des Analyten zur Folge.
Die Beschreibung der Einzelheiten des Aufbaus dieser Grund- Vorrichtung richtet sich ebenfalls, so weit wie möglich, auf andere Untersuchungs-Vorrichtungen mit zwei Bestandteilen und drei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung.
Das Erfassungsreagenz umfasst den ersten spezifischen Bindungspartner für den Analyten, wie vorstehend beschrieben; es kann zusätzliche Bestandteile umfassen.
Dieses Verfahren kann den Analyten qualitativ und/oder quantitativ anzeigen, abhängig von der Dichte des zweiten spezifischen Bindungspartners in der Erfassungszone und abhängig von der Grösse der Erfassungszone.
Typischerweise benötigt die Untersuchung, um Ergebnisse zu erzielen, von 30 Sekunden bis 10 Minuten, typischerweise von 1 bis 5 Minuten, einschliesslich einer Inkubationszeitspanne der Probe auf der Probenaufbereitungszone, ebenso wie einschliesslich der Zeit, die für die Chromatographie selbst benötigt wird. Typischerweise wird die Untersuchung bei Raumtemperatur durchgeführt, obwohl sie bei 4ºC oder bis zu 37ºC oder in einigen Fällen höher, durchgeführt werden kann, abhängig von der Natur des Analyten und des spezifischen Bindungspartners. In einigen Fällen kann die Durchführung der Untersuchung bei einer niedrigeren Temperatur erwünscht sein, um einen Abbau zu beschränken, während in anderen Fällen eine Durchführung der Untersuchung bei einer höheren Temperatur bei geeigneten Analyten und spezifischen Bindungspartnern die Untersuchung beschleunigen kann.
Diese allgemeine Anordnung der chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung ist in Fig. 1A dargestellt. Die chromatographische Untersuchungs-Vorrichtung 10 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 11 und einem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 12 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 11 schliesst eine Probenaufbereitungszone 13 ein. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 12 enthält ein chromatographisches Medium 14. Das chromatographisches Medium 14 weist ein erstes Ende 15 und ein zweites Ende 16 auf; das chromatographische Medium 14 enthält eine Erfassungszone 17 und eine Kontrollzone 18. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 11 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 12 sind durch ein Gelenk 19 verbunden. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 11 und 12 umfassen weiterhin vorzugsweise Eingriffseinrichtungen, die die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung sichern. Die Eingriffseinrichtungen können Verschlüsse, wie beispielsweise die Verschlüsse 20 und 21 umfassen, die sich in Eingriff befinden, wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil 11 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 12 in Gegenüberstellung gebracht sind. Der Aufbau und die Abmessungen bzw. Dimensionen der Verschlüsse 20 und 21 können variiert werden, um den optimalen Grad an Druck auf die gegenüberstellbaren Bestandteile 11 und 12 auszuüben. Der Grad an Druck, der optimal ist, hängt von der Dicke und dem Aufbau des chromatographischen Mediums 14, vom beabsichtigten Probenvolumen und anderen Faktoren ab. Zum Schutz vor einem Auslaufen von Proben oder Reagenzien, ist ein Dichtungssteg oder eine Dichtung 22 um den Umfang der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 11 und 12 herum angebracht. Obwohl die Verwendung der Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise der Verschlüsse 20 und 21 und des Dichtungssteges oder der Dichtung 22 im Allgemeinen bevorzugt ist, sind diese Bestandteile nicht notwendig, um eine Grund-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung aufzubauen. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 12 weist ein erstes Fenster 23 auf; wahlweise kann der erste gegenüberstellbare Bestandteil 11 ein zweites Fenster 24 aufweisen, um eine Betrachtung des chromatographischen Mediums 14 von jeder Seite aus zu ermöglichen. Das zweite Fenster 24 ermöglicht eine Betrachtung des chromatographischen Mediums 14 von der Oberfläche aus, die der Oberfläche gegenüber liegt, auf die die Reagenzien aufgebracht werden. Als weitere Alternative kann das erste Fenster 23 fehlen und kann das zweite Fenster 24 zur Betrachtung des chromatographischen Mediums 14 verwendet werden. Im Allgemeinen können Vorrichtungen mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung entweder ein oder zwei Fenster, auch als Öffnungen bekannt, aufweisen, um eine Betrachtung des chromatographischen Mediums entweder durch den gegenüberstellbaren Bestandteil, der das chromatographische Medium nicht trägt, wie Fenster 23 in Fig. 1, oder durch den gegenüberstellbaren Bestandteil, der das chromatographische Medium trägt, wie Fenster 24 in Fig. 1, zu ermöglichen. Alternativ können die ersten und/oder zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 11 und 12 aus transparenten oder lichtdurchlässigen Materialien hergestellt sein, so dass das chromatographische Medium 14 ohne eine getrennte Öffnung oder Fenster betrachtet werden kann.
Fig. 1B zeigt die Vorrichtung 10, nachdem die gegenüberstellbaren Bestandteile 11 und 12 in Gegenüberstellung gebracht worden sind. Das chromatographische Medium 14, einschliesslich der Erfassungszone 17 und der Kontrollzone 18, ist durch Fenster 24 sichtbar. Die Probenaufbereitungszone 13 berührt das chromatographische Medium 14 am oder nahe dem ersten Ende 15, so dass der Inhalt der Probenaufbereitungszone 13 durch das chromatographische Medium 14, einschliesslich der Erfassungszone 17 und der Kontrollzone 18 strömen kann.
Die Vorrichtung 10 kann alternativ weiterhin einen Leiter 25 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 15 des chromatographischen Mediums 14, wie in Fig. 1A dargestellt, umfassen. Der Leiter 25 kann aus einem Material wie beispielsweise Cellulose oder aus anderen Materialien bestehen, die eine wässrige Flüssigkeit leiten können, ohne sie wesentlich zu absorbieren. Der Leiter 25 kann mit einem oberflächenaktiven Stoff behandelt sein, so dass die Reagenzien gleichmässiger auf das chromatographische Medium 14 aufgebracht werden können. Wenn der Leiter 25 vorhanden ist, berührt die Probenaufbereitungszone 13 vorzugsweise den Leiter 25, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 11 und 12 in Gegenüberstellung gebracht sind.
Die Vorrichtung 10 kann weiterhin einen Absorber 26 in Betriebsberührung mit den zweiten Ende 16 des chromatographischen Mediums 14 umfassen, um das Ziehen von Strömungsmittel durch das chromatographische Medium 14 vom ersten Ende 15 zum zweiten Ende 16 hin, wie in Fig. 1A dargestellt, zu unterstützen.
Die Probenaufbereitungszone 13 kann aus irgendeinem geeigneten Material, wie beispielsweise, jedoch nicht beschränkt auf, Zellulose, Papier, Nylon, Kunstseide, Glasfaser, Schurwolle oder nicht gewebten synthetischen Textilerzeugnissen hergestellt sein. Die Porosität der Probenaufbereitungszone 13 kann gewählt werden, um zelluläres oder teilchenförmiges Material und Proben, wie beispielsweise Vollblut oder fäkale Proben, herauszufiltern. Die Probenaufbereitungszone 13 kann zumindest ein Reagenz zur Behandlung der Probe enthalten, bevor die Probe auf das chromatographische Medium 14 aufgebracht wird.
Die Reagenzien, die in der Probenaufbereitungszone 13 vorliegen können, variieren mit der auf die Probenaufbereitungszone aufzubringenden Probe und mit dem zu untersuchenden Analyten. Sie können einschliessen, sind jedoch nicht beschränkt auf, Säuren oder Laugen, um den pH einzustellen, Puffer, um den pH zu stabilisieren, Chelierungsmittel, wie beispielsweise EDTA oder EGTA, um Metalle zu chelieren, hydrolytische Enzyme, um die Zellmembran von Tierzellen oder die Zellwand von Bakterien zur Freisetzung von Analyten aufzulösen, Substrate oder Koenzyme für Enzyme und dergleichen. Ein besonders brauchbares Extraktionsreagenz ist eine Mischung aus Natriumnitrit und Essigsäure zur Erzeugung von salpetriger Säure. Das Natriumnitrit kann in getrockneter bzw. wasserfreier Form auf der Probenaufbereitungszone 13 vorliegen und die Essigsäure kann der Probenaufbereitungszone 13 zugesetzt werden, nachdem die Probe zugesetzt wurde.
Die Probe oder wahlweise eine Probenentnahmevorrichtung, wie beispielsweise ein Rachenabstrichtupfer oder ein Mikroporenfilter können durch den Betreiber auf der Probenaufbereitungszone 13 angeordnet werden; wenn erforderlich, können weitere Reagenzien zugesetzt werden.
Die Körper der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 11 und 12 sind vorzugsweise aus laminierter Pappe hergestellt, die für Feuchtigkeit ausreichend undurchlässig ist, um die bei die Durchführung der Untersuchung beteiligten Flüssigkeiten zu enthalten. Andere Materialien auf Cellulosebasis, wie beispielsweise Karton oder fest gebleichtes Sulfid (solid bleached sulfite = SBS) können ebenfalls verwendet werden. Alternativ können die Körper aus Kunststoff hergestellt sein, der Feuchtigkeits- undurchlässig ist. Ein geeigneter Kohlenstoff ist ein Polykarbonat-Kunststoff, wie beispielsweise LexanTM.
Das Gelenk bzw. Scharnier 19 ist vorzugsweise aus einem Material hergestellt, das für eine wässrige Flüssigkeit undurchlässig ist, wie beispielsweise ein Kunststoff, der mit dem Material, das für die Körper der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 11 und 12 verwendet wird, kompatibel verbunden ist, oder aus dem selben Material besteht.
Typischerweise sind das chromatographische Medium 14, der Absorber 26, der Leiter 25 und weitere Flüssigkeits- aufnehmende Bestandteile an den Körpern der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 11 und 12 durch ein Klebemittel befestigt. Weitere Verbindungsverfahren, wie beispielsweise Zusammenklammern oder Heften, können ebenfalls angewendet werden.
Der Analyt wird entweder mit Hilfe eines markierten spezifischen Bindungspartners zum Analyten oder durch die Verwendung eines markierten sekundären spezifischen Bindungspartners für einen spezifischen Bindungspartner zum Analyten erfasst. In den meisten Fällen wird die Verwendung eines markierten spezifischen Bindungspartners zum Analyten bevorzugt. Die Markierung des markierten spezifischen Bindungspartners ist vorzugsweise eine visuell erfassbare Markierung, wie beispielsweise eine kolloidale Metallmarkierung. Vorzugsweise ist die kolloidale Metallmarkierung Gold, Silber, Bronze, Eisen oder Zinn; am meisten bevorzugt ist sie Gold. Die Zubereitung von Goldmarkierten Antikörpern ist in J. DeMey, "The Preparation and Use of Gold Probes", in Immunocytrochemistry: Modern Methods and Applications (J. M. Polak & S. VanNoorden, Hsg., Wright, Bristol, England, 1986), Kapitel 8, Seiten 115-145 beschrieben. Die mit kolloidalem Gold markierten Antikörper sind im Handel erhältlich, beispielsweise von der Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri.
Alternativ können andere kolloidale Markierungen, wie beispielsweise eine kolloidale Schwefelmarkierung oder eine Farbstoff-Silica-Markierung ebenfalls verwendet werden. Bei einer weniger bevorzugten Alternative kann die visuell erfassbare Markierung eine gefärbte Latexmarkierung sein. Es ist weiterhin möglich, andere Markierungen, wie beispielsweise radioaktive Markierungen zu verwenden.
Obwohl die Anmelder nicht notwendigerweise an diese Theorie gebunden sein möchten, ist die Reaktionskinetik zwischen dem Analyten und dem markierten spezifischen Bindungspartner extrem schnell, wenn eine wässrige, eine Probe enhaltende Flüssigkeit auf einen wieder auflösbaren spezifischen Bindungspartner aufgebracht wird, der mit einer kolloidalen Metallmarkierung, wie beispielsweise einer kolloidalen Goldmarkierung markiert ist. Diese schnelle Kinetik hat die im Wesentlichen vollständige Markierung des Analyten zur Folge, bevor die Kombination des Analyten und des markierten spezifischen Bindungspartners auf das chromatographische Medium aufgebracht wird. Somit ist bei einem eindirektionalen chromatographischen Verfahren, das mit einer Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung durchgeführt wird, das, was chromatographiert wird, überwiegend der binäre Komplex des Analyten und des entsprechenden markierten spezifischen Bindungspartners. Dies ermöglicht die Trennung dieses Komplexes von Verunreinigungen, die den spezifischen Bindungspartner nicht binden und verbessert die Genauigkeit der Untersuchung.
Bei dieser Ausführungsform liegt der markierte spezifische Bindungspartner vorzugsweise auf der Probenaufbereitungszone 13 in einer Form vor, die durch den Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zur Probenaufbereitungszone wieder aufgelöst werden kann. Typischerweise ist die wässrige Flüssigkeit die Probe selbst. Bei einigen Fällen, insbesondere bei Fällen, bei denen kleine Probenvolumina verwendet werden, kann es erwünscht sein, zusätzlichen Puffer oder eine weitere wässrige Flüssigkeit der Probenaufbereitungszone zuzusetzen.
Bei anderen, nachstehend besprochenen, Ausführungsformen kann der markierte spezifische Bindungspartner auf einem Element der chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung vorliegen, das von der Probenaufbereitungszone getrennt ist, jedoch mit ihr während der Durchführung der Untersuchung in Berührung kommt. Bei diesen Ausführungsformen liegt der markierte spezifische Bindungspartner vorzugsweise in einer wieder auflösbaren Form auf diesem Element vor und wird wieder aufgelöst, wenn die Probe mit dem Element in Berührung kommt. In einigen Fällen kann der spezifische Bindungspartner durch die Zugabe einer getrennten wässrigen Flüssigkeit zum Element, getrennt von der Probe, wieder aufgelöst werden.
Das chromatographische Medium 14 auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 12 ist ein flacher Streifen. Er ist typischerweise rechtwinklig mit ersten und zweiten Enden 15 und 15. In der gesamten Beschreibung betrifft der Begriff "erstes Ende 15" das Ende des chromatographischen Mediums 14, auf das die Probe aufgebracht wird und der Begriff "zweites Ende 16" betrifft das entgegengesetzte Ende. Die ursprüngliche Strömungsrichtung der Probe ist vom ersten Ende 15 hin zum zweiten Ende 16 des chromatographischen Mediums 14. Das chromatographische Medium 14 ist aus einem Material zusammengesetzt, das als ein Medium zur Dünnschichtchromatographie von Analyten und Analyt-Antikörper-Konjugaten geeignet ist, wie beispielsweise Nitrocellulose, Nylon, Kunstseide, Cellulose, Papier oder Silica. Das chromatographische Medium 14 kann vorbehandelt oder wie erforderlich modifiziert sein. Typischerweise ist das chromatographische Medium 14 lichtdurchlässig, so dass farbige Zonen, die auf ihm als ein Ergebnis der Untersuchung erscheinen, von jeder Seite aus betrachtet werden können.
Bei einigen Anwendungen wird bevorzugt, einen zweiten, biegsamen transparenten Träger oben auf dem chromatographischen Medium 14 anzubringen, um die Strömung der Probe durch das chromatographische Medium 14 zu regulieren und eine Wanderung über das Oberteil des chromatographischen Mediums zu verhindern. Geeignete biegsame transparente Träger schliessen Polyethylen, Vinyl, Mylar® und Cellophan ein.
Wenn die chromatographische Untersuchungs-Vorrichtung 10 für eine Untersuchung wie beispielsweise ein Sandwich- Immunoassay verwendet wird, kann das chromatographische Medium weiterhin eine Erfassungszone 17 umfassen, die wesentlich kleiner als das chromatographische Medium 14 ist. Diese Erfassungszone kann, daran immobilisiert, einen zweiten spezifischen Bindungspartner zum Analyten gegen Diffusion enthalten. Der zweite spezifische Bindungspartner kann an das chromatographische Medium entweder durch kovalente oder nicht kovalente Mittel gebunden sein. Wenn der zu untersuchende Analyt ein Antigen oder Hapten ist, kann der zweite spezifische Bindungspartner ein Antikörper zum Antigen oder zum Hapten sein. Alternativ kann der Analyt ein Antikörper und der zweite spezifische Bindungspartner ein Hapten oder ein Antigen sein, die dazu in der Lage sind, durch den Antikörper spezifisch gebunden zu werden.
Das chromatographische Medium 14 kann weiterhin eine Kontrollzone 18 umfassen, die wesentlich kleiner als das chromatographische Medium 14 und getrennt von der Erfassungszone 17 ist. Die Kontrollzone 18 kann einen Analyten umfassen, der daran nicht diffundierbar immobilisiert ist, um einen markierten Antikörper zu binden, der nicht an der Erfassungszone 17 durch die Bildung eines Dreifach-"Sandwich"-Komplexes gebunden ist. Jeder derartige Antikörper wird durch den immobilisierten Analyten gebunden und bildet eine erfassbare Zone oder eine Bande. Dieses ergibt eine Kontrolle für den Ablauf der Untersuchung und für die richtige Bindung der Reagenzien, wie nachstehend beschrieben. Die zur Bindung des zweiten spezifischen Bindungspartners in der Erfassungszone 17 und zur Bindung des Analyten in der Kontrollzone 18 verwendeten Verfahren sind in der Technik gut bekannt und müssen hier nicht weiter beschrieben werden.
Alternativ kann es bei einigen Analyten, wie beispielsweise Kohlenhydraten, schwierig oder unmöglich sein, den Analyten stabil am chromatographischen Medium 14 zu befestigen. Bei derartigen Fällen kann die Kontrollzone 18 eine immobilisierte Zone von Antikörpern umfassen, die für den markierten Analyt-Antikörper spezifisch sind. Beispielsweise kann die Kontrollzone 18, wenn der Analyt das Streptococcus A-spezifische Kohlenhydrat ist und der markierte Antikörper Kaninchen-IgG spezifisch für Streptococcus A-Antigen ist, Ziegen-Antikörper gegen Kaninchen-IgG umfassen. Bei derartigen Fällen kann es zur Vermeidung eines vollständigen Einfangens des markierten Anti-Analyt-Antikörpers in der Erfassungszone 17 bei hohen Analyt-Konzentrationen und zur Vermeidung eines nachfolgenden Verschwindens des markierten Anti-Analyt-Antikörpers aus der Kontrollzone 18 wünschenswert sein, markierten Antikörper zuzusetzen, der für den Analyten nicht spezifisch ist und der aus einer anderen Spezies als der markierte Anti-Analyt-Antikörper stammt. Einen derartigen Antikörper kann ein immunologisch indifferentes Immunglobulin oder ein Antikörper zu einem Analyten bilden, der nicht in der Testprobe gefunden wird. Die Kontrollzone 18 würde dann einen Anti-Spezies-Antikörper oder Analyt umfassen, der nicht in der Testprobe zu finden ist.
Mehrere Abwandlungen dieser Vorrichtung sind möglich. Bei einer Abwandlung kann die Probenaufbereitungszone 13, wie vorstehend besprochen, einen spezifischen Bindungspartner für den Analyten enthalten, der mit einer erfassbaren Markierung in einer Form markiert ist, die durch die Zugabe einer wässrigen Flüssigkeit zur Probenaufbereitungszone 13 wieder aufgelöst werden kann. Die wässrige Flüssigkeit kann die Probe selbst sein. Der, markierte spezifische Bindungspartner kann gefriergetrocknet oder reversibel ausgefällt sein, so dass er durch den Zusatz der Probe oder auf die Probenaufbereitungszone wieder aufgelöst und mobilisiert wird. Bei dieser Abwandlung ist es nicht notwendig, der Probenaufbereitungszone 13 ein Erfassungsreagenz zuzusetzen, weil das Erfassungsreagenz automatisch durch die Zugabe der Probe auf die Probenaufbereitungszone 13 erzeugt wird.
Bei einer weiteren Abwandlung kann der Leiter 25 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 15 des chromatographischen Mediums 14 auf dem zweiten betriebsbereiten Bestandteil durch einen Absorber 25a einer finiten Kapazität in Betriebsberührung ersetzt werden. Der Absorber 25a ist so gelegen, dass er mit der Probenaufbereitungszone 13 in Berührung kommt, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 11 und 12 in Gegenüberstellung gesetzt werden, um die Probe auf den Absorber aufzubringen. Dies kann bei der Kontrolle der Strömung der Probe in das chromatographische Medium 14 nützlich sein, so dass das chromatographische Medium 14 nicht überbeansprucht wird.
Bei dieser Variante kann der Absorber 25a einen markierten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in einer Form enthalten, die wie vorstehend beschrieben, wieder aufgelöst werden kann. Bei dieser Anordnung wird der markierte spezifische Bindungspartner wieder aufgelöst, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 11 und 12 in Gegenüberstellung gebracht sind, wodurch die Probe auf den Absorber 25 aufgebracht wird. Die Kombination der Probe und des wieder aufgelösten markierten spezifischen Bindungspartners tritt dann in das chromatographische Medium 14 an seinem ersten Ende 15 ein.

2. Spezielle Ausführungsformen einer Vorrichtung mit zwei Bestandteilen

a. Vorrichtung mit einem leitenden Verbindungsteil auf dem zweiten Bestandteil

Bei einer Ausführungsform einer Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung umfasst der erste gegenüberstellbare Bestandteil:
(1) eine Probenaufbereitungszone; und
(2) ein chromatographisches Medium, das mit der Probenaufbereitungszone nicht in Verbindung steht.
Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil umfasst ein leitendes Verbindungsteil. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile können in Gegenüberstellung gebracht werden, um zu verursachen, dass das Verbindungsteil eine Verbindung zwischen der Probenaufbereitungszone und dem chromatographischen Medium herstellt, um eine Aufbringung der Probe auf das chromatographische Medium zu ergeben.
Diese Ausführungsform ist in Fig. 2 geschildert. Die chromatographische Untersuchungs-Vorrichtung 40 umfasst einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 41 uni einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 42. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil schliesst eine Probenaufbereitungszone 43 und ein chromatographisches Medium 44 ein, mit einem ersten Ende 50 und einem zweiten Ende 51. Das chromatographische Medium 44 weist eine Erfassungszone 45 und eine Kontrollzone 46 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 42 schliesst ein leitendes Verbindungsteil 47 ein. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 41 und 42 sind durch ein Gelenk 48 verbunden. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 41 und 42 schliessen weiterhin Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse 52 und 53 mit einer Dichtung 54 ein, die die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 41 und 42 umgibt. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 42 weist eine Öffnung 49 auf, um eine Betrachtung des chromatographischen Mediums 44 zu ermöglichen.
Wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 41 und 42 in Gegenüberstellung gebracht sind, wird die Probenaufbereitungszone 43 auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 41 mit dem leitenden Verbindungsteil 47 auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 42 in Berührung gebracht, der dann wieder mit dem ersten Ende 50 des chromatographischen Mediums 44 in Berührung gebracht wird, um die Probe auf das chromatographische Medium 44 aufzubringen.
Bei Abwandlungen der Vorrichung von Fig. 2 kann das leitende Verbindungsteil 47 einen spezifischen Bindungspartner für den Analyten enthalten, der mit einer erfassbaren Markierung in einer Form markiert ist, die durch die Zugabe einer wässrigen Flüssigkeit wieder aufgelöst werden kann. Bei dieser Abwandlung wird die Probe der Probenaufbereitungszone 43 zugesetzt. Alternativ kann die Probenaufbereitungszone 43 für die Zugabe eines markierten spezifischen Bindungspartners für den Analyten in flüssiger Form verwendet werden, wobei die Probe selbst dem leitenden Verbindungsteil 47 zugesetzt wird. Bei einer noch weiteren Alternative kann die Probenaufbereitungszone 43 einen wieder auflösbaren spezifischen Bindungspartner für den Analyten enthalten, wobei die Probe wiederum dem leitenden Verbindungsteil 47 zugesetzt wird.

b. Vorrichtung mit einer Probenaufbereitungszone auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil

Eine weitere Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung ist eine Vorrichtung, die eine Probenaufbereitungszone auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil einschliesst, d. h., auf dem Bestandteil, auf dem sich das chromatographische Medium befindet. Typischerweise umfasst der zweite gegenüberstellbare Bestandteil bei dieser Ausführungsform einen Applikator, der einen markierten, spezifischen Bindungspartner für den Analyten in einer Form einschliesst, die wieder aufgelöst werden kann.
Bei dieser Ausführungsform bringt das In-Gegenüberstellung- Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den Applikator mit der Probenaufbereitungszone in Berührung, so dass der markierte spezifische Bindungspartner für den Analyten wieder aufgelöst wird.
Vorzugsweise umfasst der erste gegenüberstellbare Bestandteil weiterhin einen Leiter und eine Betriebsberührung zwischen der Probenaufbereitungszone und dem chromatographischen Medium wird erreicht, indem beide, die Probenaufbereitungszone und das chromatographische Medium, mit dem Leiter in Betriebsberührung stehen.
Vorzugsweise umfasst der erste gegenüberstellbare Bestandteil weiterhin einen Absorber in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums.
Das chromatographische Medium ist vorzugsweise, wie vorstehend beschrieben, mit Erfassungs- und Kontrollzonen aufgebaut.
Diese Ausführungsform der Untersuchungs-Vorrichtung ist in Fig. 3 dargestellt. Die chromatographische Untersuchungs- Vorrichtung 60 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 61 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 62 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 61 schliesst eine Probenaufbereitungszone 63, einen Leiter 64 in Betriebsberührung mit der Probenaufbereitungszone 63, ein chromatographisches Medium 65 mit einem ersten Ende 66 und einem zweiten Ende 67, und einen Absorber 68 in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 67 des chromatographischen Mediums 65 ein. Das chromatographische Medium 65 enthält eine Erfassungszone 69 und eine Kontrollzone 70. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 62 enthält einen Applikator 71, der vorzugsweise einen markierten spezifischen Bindungspartner in einer Form enthält, die wieder aufgelöst werden kann. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 61 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 62 sind durch ein Gelenk 72 verbunden. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 62 enthält ein Fenster 73, um die Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums 65 zuzulassen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 61 und 62 weisen Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse 74 und 75 mit einer Dichtung 76 auf, die die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 61 und 62 umgibt.
Bei Betrieb wird eine Probe auf die Probenaufbereitungszone 63 aufgebracht. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 61 und 62 werden dann in Gegenüberstellung gebracht, so dass die Probe in der Probenaufbereitungszone 63 den Inhalt des Applikators 71, der den markierten spezifischen Bindungspartner einschliesst, wieder auflöst. Der Inhalt der Probenaufbereitungszone 63 und des Applikators 71 wird dann auf das chromatographische Medium 65 durch die Probenaufbereitungszone 63 und den Leiter 64 aufgebracht.

c. Vorrichtung mit einem Absorber auf dem zweiten Bestandteil

Bei einer Alternative dieser Ausführungsform kann der Absorber auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil anstatt auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil angeordnet sein. Bei dieser Alternative kommt der Absorber mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gesetzt werden. Dies zieht einen grösseren Absorber in Betracht, der erwünscht sein kann, wenn es notwendig ist, eine grössere Probe, wie beispielsweise bei der Erfassung eines Analyten, der nur in niedrigen Konzentrationen vorliegt, zu verenden.
Diese Alternative der Ausführungsform ist in Fig. 4 dargestellt. Die chromatographische Untersuchungs- Vorrichtung 80 umfasst den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 81 und den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 82. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 81 schliesst die Probenaufbereitungszone 83, den Leiter 84 in Betriebsberührung mit der Probenaufbereitungszone 83 und das chromatographische Medium 85 mit dem ersten Ende 86 und dem zweiten Ende 87 ein, mit der Erfassungszone 88 und der Kontrollzone 89. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 82 enthält den Applikator 90 und den Absorber 91; der Applikator 90 ist vom Absorber 91 auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 82 getrennt. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 81 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 82 sind durch ein Gelenk 92 verbunden. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 82 enthält weiterhin eine Öffnung 93, um eine Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums 85 zu ermöglichen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 81 und 82 schliessen weiterhin Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse 94 und 95 und eine Dichtung 96, wie vorstehend beschrieben, ein.
Bei Gebrauch wird die Probe auf die Probenaufbereitungszone 83 aufgebracht, wo eine Extraktion oder eine andere Behandlung der Probe eintreten kann. Die Probe tritt dann in das erste Ende 85 des chromatographischen Mediums 85 ein, indem sie, wie vorstehend beschrieben, durch den Leiter 84 strömt. Wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil 81 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 82 in Gegenüberstellung gebracht sind, wird der Applikator 90 mit dem Leiter 84 in Betriebsberührung gebracht, um den markierten spezifischen Bindungspartner im Applikator 90 wieder aufzulösen und um den wieder aufgelösten markierten spezifischen Bindungspartner auf den Leiter 84 und dann auf das erst Ende 86 des chromatographischen Mediums 85 aufzubringen, was verursacht, dass der wieder aufgelöste, markierte spezifische Bindungspartner in das chromatographische Medium 85 eintritt. Der Absorber 91 wird gleichzeitig mit dem zweiten Ende 87 des chromatographischen Mediums 85 in Betriebsberührung gebracht, um Strömungsmittel vom chromatographischen Medium 85 abzuziehen.

d. Vorrichtung mit einer Probenaufbereitungszone und einem Absorber auf demselben gegenüberstellbaren Bestandteil

Eine weitere Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungs-Vorrichtung gemäss der vorliegenden Erfindung ist eine Vorrichtung mit zwei Bestandteilen, bei sich der die Probenaufbereitungszone und der Absorber auf demselben gegenüberstellbaren Bestandteil befinden. Dies hat bei bestimmten Anwendungen den Vorteil, einen grösseren Absorber verwenden zu können, um Strömungsmittel schneller und effizienter vom zweiten Ende des chromatographischen Mediums abzuziehen.
Diese Ausführungsform der chromatographischen Untersuchungenvorrichung mit zwei Bestandteilen ist in Fig. 5 dargestellt. Die chromatographische Vorrichtung 100 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 101 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 102 auf, die durch ein Gelenk 103 verbunden sind. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 101 schliesst ein chromatographisches Medium 104 mit einem ersten Ende 105 und einem zweiten Ende 106, und einen Leiter 107 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 105 des chromatographischen Mediums 104 ein. Das chromatographische Medium 105 enthält eine Erfassungszone 108 und wahlweise eine Kontrollzone 109.
Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 102 schliesst eine Probenaufbereitungszone 110 zur Aufnahme einer zu untersuchenden Probe und einen Absorber 111 ein, der von der Probenaufbereitungszone 110 getrennt ist. Die Probenaufbereitungszone 110 kann einen markierten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in wieder auflösbarer Form enthalten. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 102 weist darin eine Öffnung 112 auf, um eine Betrachtung des chromatographischen Mediums zu ermöglichen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 101 und 102 weisen Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse 113 und 114 und eine Dichtung 115, wie vorstehend beschrieben, auf.
Wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 101 und 102 in Gegenüberstellung gebracht sind, kommt die Probenaufbereitungszone 110 mit dem Leiter 107 in Betriebsberührung, um die Probe auf den Leiter 107 und dann auf das erste Ende 105 des chromatographischen Mediums 104 aufzubringen. Der Absorber 211 kommt mit dem zweiten Ende 106 des chromatographischen Mediums 104 in Betriebsberührung, um Strömungsmittel vom zweiten Ende 106 des chromatographischen Mediums 104 abzuziehen. In anderer Hinsicht ist die Gestaltung und der Betrieb dieser Vorrichtung, derjenigen in Fig. 4 vorstehend geschilderten, ähnlich.

e. Vorrichtung mit zwei Detektoraufbringungskissen auf unterschiedlichen gegenüberstellbaren Bestandteilen

Eine noch weitere Ausführungsform einer Untersuchungs- Vorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäss der vorliegenden Erfindung schliesst zwei getrennte Detektoraufbringungskissen auf verschiedenen gegenüberstellbaren Bestandteilen ein. Diese Anordnung ist insbesondere brauchbar, wenn es erwünscht ist, ein grosses Volumen eines markierten spezifischen Bindungspartners zu verwenden, wie wenn ein markierter Antikörper nur in verdünnter Form erhältlich ist und Versuche, den Antikörper zu konzentrieren, ihn denaturieren oder inaktivieren würden.
Diese Ausführungsform der chromatographischen Untersuchungs- Vorrichtung mit zwei Bestandteilen ist in Fig. 6 geschildert. Die chromatographische Untersuchungs- Vorrichtung 120 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 121 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 122 auf, die über ein Gelenk 123 verbunden sind. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 121 schliesst ein chromatographisches Medium 124 mit einem ersten Ende 125 und einem zweiten Ende 126 ein. Das chromatographische Medium 124 schliesst eine Erfassungszone 127 und wahlweise eine Kontrollzone 128 ein.
Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 121 weist weiterhin ein erstes Detektoraufbringungskissen 129 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 125 des chromatographischen Mediums 124 auf. Das erste Detektoraufbringungskissen 129 enthält einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form, die durch eine Zugabe einer wässrigen Flüssigkeit zum ersten Detektoraufbringungskissen 129 wieder aufgelöst werden kann. Der erste spezifische Bindungspartner ist typischerweise mit einer erfassbaren Markierung markiert. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 121 weist weiterhin einen Leiter 130 in Betriebsberührung mit dem ersten Detektoraufbringungskissen 129 auf, so dass das erste Detektoraufbringungskissen 129 den Leiter 130 und das erste Ende 125 des chromatographischen Mediums 124 überbrückt.
Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 121 weist ebenfalls einen Absorber 131 in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 126 des chromatographischen Mediums 124 auf.
Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil schließt eine Probenaufbereitungszone 132 zur Aufnahme einer zu untersuchenden Probe ein. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 122 enthält weiterhin ein zweites Detektoraufbringungskissen 133 in Betriebsberührung mit der Probenaufbereitungszone 132, wobei die Probenaufbereitungszone 132 über dem zweiten Detektoraufbringungskissen 133 untergebracht ist. Die Probenaufbereitungzone 132 und das zweite Detektoraufbringungskissen 133 können durch ein Fixiermittel oder Klebstoff zusammengehalten werden. Das zweite Detektoraufbringungskissen 133 und die Probenaufbereitungszone 132 sind so positioniert, dass eine Probe, die auf die Probenaufbereitungszone 132 aufgebracht wird, die Probenaufbereitungszone 132 durchqueren muss, bevor sie in das zweite Detektoraufbringungskissen 133 eintritt. Das zweite Detektoraufbringungskissen 133 enthält einen zweiten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in einer Form, die durch die Zugabe einer Probe zur Probenaufbereitungszone 132 wieder aufgelöst werden kann. Das zweite Detektoraufbringungskissen 133 ist derartig positioniert, dass eine Aufbringung der Probe auf die Probenaufbereitungszone 132 den zweiten spezifischen Bindungspartner so wieder auflöst, dass die Probenaufbereitungszone 132 eine Mischung der Probe und des zweiten spezifischen Bindungspartners enthält.
Der zweite spezifische Bindungspartner ist mit einer erfassbaren Markierung markiert. Vorzugsweise sind die ersten und zweiten spezifischen Bindungspartner identisch und sind die erfassbaren Markierungen, die die ersten und zweiten spezifischen Bindungspartner markieren, identisch.
Im zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 122 befindet sich weiterhin eine Öffnung 134, um eine Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums 124 zu ermöglichen, der die Erfassungszone 127 und, wenn vorhanden, die Kontrollzone 128 einschließt. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 121 und 122 weisen weiterhin Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse 135 und 136 und eine wie vorstehend beschriebene Dichtung 137 für die Basisvorrichtung mit zwei Bestandteilen auf.
Wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 121 und 122 in Gegenüberstellung gebracht werden, wird die Probenaufbereitungszone 132 mit dem Leiter 130 in Berührung gebracht, um die Probe und den zweiten spezifischen Bindungspartner auf den Leiter 130 und dann durch das erste Detektoraufbringungskissen 129 auf das erste Ende 125 des chromatographischen Mediums 124 aufzubringen. Somit berührt die Probe aufeinanderfolgend den zweiten spezifischen Bindungspartner und dann den ersten spezifischen Bindungspartner, bevor sie auf das erste Ende 125 des chromatographischen Mediums 124 zur Chromatographie aufgebracht wird. Dies hat zur Folge, dass ein größeres Volumen an markiertem spezifischen Bindungspartner mit der Probe in Berührung ist, um die Empfindlichkeit der Untersuchung zu erhöhen.

f) Vorrichtung, die zwei getrennte Applikatoren auf demselben gegenüberstellbaren Bestandteil einschließt

Eine noch weitere Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung schließt zwei getrennte Applikatoren auf demselben gegen überstellbaren Bestandteil ein. Diese beiden Applikatoren sind nicht in Betriebsberührung, bis sie durch einen Leiter auf dem gegenüberliegenden Element überbrückt werden, wenn die Elemente in Gegenüberstellung gebracht werden.
Diese Ausführungsform der chromatographischen Untersuchungsvorrichtung ist in Fig. 7 dargestellt. Die chromatographische Untersuchungsvorrichtung 140 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 141 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 142 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 141 schließt ein chromatographisches Medium 143 mit einem ersten Ende 144 und einem zweiten Ende 145, einem Leiter 146 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 144 und einen Absorber 147 in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 145 des chromatographischen Mediums 143 ein. Das chromatographische Medium 143 enthält eine Erfassungszone 148 und eine Kontrollzone 149. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 142 enthält einen ersten Applikator (Probenaufbringungskissen) 150 und einen zweiten Applikator (Detektoraufbringungskissen) 151. Der erste Applikator 150 und der zweite Applikator 151 sind nicht in Betriebsberührung, bis der erste gegenüberstellbare Bestandteil 141 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 142 in Gegenüberstellung gebracht sind. Wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil 141 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 142 in Gegenüberstellung gebracht sind, wird der erste Applikator 150 mit dem Leiter 146 in Berührung gebracht und der zweite Applikator 151 wird sowohl mit dem Leiter 146 als auch dem ersten Ende 144 des chromatographischen Mediums 143 in Berührung gebracht. Die Überlappung ist typischerweise mehrere Millimeter, d. h. genug, um eine Übertragung von Strömungsmittel sicher zu stellen. Dies hat zur Folge, dass der erste Applikator 150 und der zweite Applikator 151 durch den Leiter 146 so überbrückt werden, dass der Inhalt des ersten Applikators 150 und des zweiten Applikators 151 auf das chromatographische Medium 143 aufgebracht werden. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 141 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 142 sind durch ein Gelenk 152 verbunden. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 142 enthält ein Fenster 153, um eine Betrachtung des chromatographischen Mediums 143 zu ermöglichen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 141 und 142 schließen ebenfalls Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse 154 und 155 und eine Dichtung 156 ein.
Der erste Applikator 150 kann ein Probenaufbringungskissen umfassen und der zweite Applikator 151 kann ein Detektoraufbringungskissen umfassen, auf das ein Erfassungsreagenz aufgebracht werden kann. Wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 141 und 142 in Gegenüberstellung gebracht werden, wird der Inhalt des Probenaufbringungskissens und des Detektoraufbringungskissens über den Leiter 146 auf das chromatographische Medium 143 aufgebracht.
Vorzugsweise enthält der zweite Applikator 151 (Detektoraufbringungskissen) einen spezifischen Bindungspartner für den Analyten, der mit einer erfassbaren Markierung in einer Form markiert ist, die durch die Zugabe einer wässrigen Flüssigkeit auf den zweiten Applikator 151 wieder aufgelöst werden kann. Die wässrige Flüssigkeit ist typischerweise die Probe selbst, die den markierten spezifischen Bindungspartner wieder auflöst, wenn die ersten zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 141 und 142 in Gegenüberstellung gebracht werden. Bei einigen Untersuchungen kann es wünschenswert sein, dem Detektoraufbringungskissen eine getrennte rekonstituierende wässrige Flüssigkeit zuzusetzen. Alternativ kann der markierte spezifische Bindungspartner in flüssiger Form auf den zweiten Applikator 151 aufgebracht werden.

g. Vorrichtung mit zwei Applikatoren und einem Absorber auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil

Bei einer weiteren Abwandlung dieser Ausführungsform kann der Absorber vom ersten gegenüberstellbaren Bestandteil (d. h. der gegenüberstellbare Bestandteil, der das chromatographische Medium enthält) zum zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil (d. h. der gegenüberstellbare Bestandteil, der die ersten und zweiten Applikatoren enthält) verlegt werden. Dies ermöglicht die Verwendung einer größeren Probe und kann zur Erfassung von Analyten, die in niedriger Konzentration vorliegen, erwünscht sein.
Diese Abwandlung ist in Fig. 8 dargestellt. Die chromatographische Untersuchungsvorrichtung 160 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 162 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 164 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 162 schließt ein chromatographisches Medium 166 mit einem ersten Ende 168 und einem zweiten Ende 170 und einen Leiter 172 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 168 des chromatographischen Mediums 166 auf. Das chromatographische Medium 166 enthält eine Erfassungszone 174 und eine Kontrollzone 176. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 164 enthält einen ersten Applikator (Probenaufbringungskissen) 178 und einen zweiten Applikator (Detektoraufbringungskissen) 180. Der erste Applikator 178 und der zweite Applikator 180 sind nicht in Betriebsberührung, bis der erste gegenüberstellbare Bestandteil 162 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 164 in Gegenüberstellung gebracht werden und werden dann, wie vorstehend für die in Fig. 7 geschilderte Untersuchungsvorrichtung beschrieben, überbrückt. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 164 enthält weiterhin einen Absorber 182, der vom ersten Applikator 178 und dem zweiten Applikator 180 getrennt ist. Wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil 162 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 164 in Gegenüberstellung gebracht werden, wird der erste Applikator 178 und der zweite Applikator 180 durch den Leiter 172 so überbrückt, dass der Inhalt des ersten Applikators 178 und des zweiten Applikators 180 auf das chromatographische Medium 166 aufgebracht wird. Gleichzeitig wird der Absorber 182 mit dem zweiten Ende 170 des chromatographischen Mediums 166 in Betriebsberührung gebracht, um Strömungsmittel vom, chromatographischen Medium 166 zu absorbieren. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 162 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 164 sind durch ein Gelenk 184 verbunden. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 164 enthält ein Fenster 186, um die Betrachtung des chromatographischen Mediums 166 zu ermöglichen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 162 und 164 schließen weiterhin Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse 185 und 187 und eine Dichtung 188 ein.

h. Vorrichtung mit einer Spalte oder Diskontinuität zwischen Leiter und chromatographischem Medium

Eine weitere Abwandlung dieser Vorrichtung schließt eine Spalte oder Diskontinuität zwischen dem Leiter und dem chromatographischen Medium ein, so dass der Weg der Strömungsmittelströmung vom ersten Applikator durch den Leiter, dann durch den zweiten Applikator und zuletzt durch das chromatographische Medium erfolgt.
Diese Abwandlung der Vorrichtung ist in Fig. 9 dargestellt. Die chromatographische Untersuchungsvorrichtung 190 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 191 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 192 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 191 schließt ein chromatographisches Medium 193 mit einem ersten Ende 194 und einem zweiten Ende 195, einem Leiter 196 nicht in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 194 des chromatographischen Mediums 193, wenn die Vorrichtung 190 in offener Stellung ist, und einen Absorber 197 in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 195 des chromatographischen Mediums 193 ein. Das chromatographische Medium 193 enthält eine Erfassungszone 198 und eine Kontrollzone 199. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 192 enthält einen ersten Applikator (Probenaufbringungskissen) 200 und einen zweiten Applikator (Detektoraufbringungskissen) 201. Der erste Applikator 200 und der zweite Applikator 201 sind nicht in Betriebsberührung, bis der erste gegenüberstellbare Bestandteil 191 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 192 in Gegenüberstellung gebracht sind. Wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil 191 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 192 in Gegenüberstellung gebracht sind, indem ein Gelenk 203, das den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 191 und den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 192 verbindet, geschlossen wird, werden der erste Applikator 200 und der zweite Applikator 201 durch den Leiter 196 überbrückt und der zweite Applikator 201 berührt das chromatographische Medium 193. Somit erfolgt der Weg der Strömungsmittelströmung vom ersten Applikator 200 durch den Leiter 195, dann durch den zweiten Applikator 201 und dann in das chromatographische Medium 193. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 192 enthält ein Fenster 202, um eine Betrachtung des chromatographischen Mediums 193 zu ermöglichen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 191 und 192 schließen weiterhin Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse 204 und 205 und eine Dichtung 206, wie vorstehend beschrieben, ein.

i. Vorrichtung mit einem Kissen für einen markierten spezifischen Bindungspartner auf demselben gegenüberstellbaren Bestandteil wie das chromatographische Medium

Eine noch weitere Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung ist eine Vorrichtung mit zwei Bestandteilen, die ein Kissen für einen markierten spezifischen Bindungspartner auf demselben gegenüberstellbaren Bestandteil wie das chromatographische Medium einschließt. Bei dieser Vorrichtung befindet sich der Probenapplikator auf dem anderen gegenüberstellbaren Bestandteil.
Diese Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung ist in Fig. 10A geschildert. Die chromatographische Untersuchungsvorrichtung 210 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 212 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 214 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 212 weist ein chromatographisches Medium 216 mit einem ersten Ende 218 und einem zweiten Ende 220 auf. Das chromatographische Medium weist eine Erfassungszone 222 und, wahlweise, eine Kontrollzone 224, wie vorstehend für andere Abwandlungen einer für Sandwich-Immunoassays geeigneten Untersuchungsvorrichtung beschrieben, auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 212 weist weiterhin einen Leiter 226 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 218 des chromatographischen Mediums 216 und einen Absorber 228 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 220 des chromatographischen Mediums 216 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 212 weist weiterhin ein Detektoraufbringungskissen 230 in direkter Berührung mit dem Leiter 226 auf und ist derartig positioniert, dass er mit dem ersten Ende 218 des chromatographischen Mediums 216 in indirekter Berührung steht. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 214 weist ein Probenaufbringungskissen 232 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 212 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 214 sind durch ein Gelenk 234 verbunden. Wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil 212 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 214 in Gegenüberstellung gebracht werden, wird das Probenaufbringungskissen 232 mit dem Detektoraufbringungskissen 230 in Berührung gebracht. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 214 enthält ein Fenster 236, um eine Betrachtung des chromatographischen Mediums 216 zu ermöglichen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 212 und 214 weisen Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse 233 und 235 und eine Dichtung 237, wie vorstehend beschrieben, auf.
Eine geschnittene Rückansicht der Vorrichtung 210 ist in Fig. 10B veranschaulicht. Fig. 10B stellt den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 212 und den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 214 in Gegenüberstellung dar. Das Probenaufbringungskissen 232 ist in Berührung mit dem Detektoraufbringungskissen 230 dargestellt. Das Detektoraufbringungskissen 230 ist in Berührung mit dem Leiter 226, der wiederum mit dem ersten Ende 218 des chromatographischen Mediums 216 in Berührung ist. Die Erfassungszone 222 und die Kontrollzone 224 des chromatographischen Mediums 216 sind dargestellt. Das zweite Ende 220 des chromatographischen Mediums 216, näher an der Kontrollzone 224, ist mit dem Absorber 228 in Berührung.
Ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 212 und 214 verursacht, dass das Probenaufbringungskissen 232 die zu untersuchende Probe auf das Detektoraufbringungskissen 230 und somit auf das erste Ende 218 des chromatographischen Mediums 216 durch den Leiter 226 aufbringt.
Vorzugsweise enthält das Detektoraufbringungskissen 230 einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form, die durch Zugabe einer wässrigen Flüssigkeit zum Detektoraufbringungskissen 230 wieder aufgelöst werden kann und der erste spezifische Bindungspartner ist mit einer erfassbaren Markierung markiert.
Vorzugsweise umfasst der Inhalt des Probenaufbringungskissens 232, nachdem eine Probe darauf aufgebracht wird, eine wässrige Flüssigkeit, und die wässrige Flüssigkeit, die auf das Detektoraufbringungskissen 230 aufgebracht wird, umfasst den Inhalt des Probenaufbringungskissens. Bei dieser Anordnung ist keine zusätzliche Flüssigkeit notwendig, um den markierten spezifischen Bindungspartner wieder aufzulösen.
Bei einer Abwandlung dieser Vorrichtung befindet sich der Absorber auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, anstatt sich auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil zu befinden. Der Absorber ist vom Probenaufbringungskissen, das sich ebenfalls auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil befindet, getrennt, und wird in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums gesetzt, wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil in Gegenüberstellung gebracht werden, wie vorstehend in Fig. 5 dargestellt.

j. Vorrichtung mit einem Detektoraufbringungskissen in direkter Berührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums

Eine weitere Abwandlung dieser Vorrichtung lässt den Leiter zwischen dem Detektoraufbringungskissen und dem chromatographischen Medium weg, so dass das Detektoraufbringungskissen mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums in direkter Berührung ist. Bei dieser Abwandlung sind das Detektoraufbringungskissen und das Probenaufbringungskissen außer dem Bereich des Detektoraufbringungskissens in Berührung, der direkt an das erste Ende des chromatographischen Mediums angrenzt, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden. Es existiert eine dünne Spalte oder ein Absatz bzw. eine Versetzung an diesem Bereich des Detektoraufbringungskissens, so dass eine Probe nicht direkt vom Probenaufbringungskissen zum chromatographischen Medium fliessen kann. Diese Spalte oder Versetzung ist typischerweise von ungefähr 0,5 mm bis ungefähr 2 mm, noch typischerweise von ungefähr 0,5 mm bis ungefähr 1 mm.
Diese Abwandlung ist insbesondere zur Erfassung von fäkalem Okkultblut durch Anwendung eines markierten Anti-Hämoglobin- Antikörpers geeignet und kann Hämoglobinkonzentrationen erfassen, die 17 ml Blut pro 100 g Faeces (13 mg Hämoglobin pro Gramm Faeces) entsprechen, ohne das Auftreten von falsch-negativen Ergebnissen, die auf einen Hochdosis- "Haken" ("Hook"-Effekt) zurückzuführen sind.
Diese Abwandlung ist in Fig. 11A dargestellt. Die chromatographische Untersuchungsvorrichtung 250 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 252 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 254 auf. Der erste gegen überstellbare Bestandteil 252 weist ein chromatographisches Medium 256 mit einem ersten Ende 258 und einem zweiten Ende 260 auf. Das chromatographische Medium 256 weist eine Erfassungszone 262 und eine Kontrollzone 264 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 252 weist weiterhin einen Absorber 266 in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 260 des chromatographischen Mediums 256 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 252 weist ebenfalls ein Detektoraufbringungskissen 268 in direkter Berührung mit dem ersten Ende 258 des chromatographischen Mediums 256 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 254 weist ein Probenaufbringungskissen 270 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 252 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 254 sind durch ein Gelenk 272 verbunden. Wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil 252 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 254 in Gegenüberstellung gebracht werden, wird das Probenaufbringungskissen 270 mit dem Detektoraufbringungskissen 268, bis auf eine schmale Spalte oder Versetzung 274 an dem Ende des Detektoraufbringungskissens 268, das mit dem ersten Ende 258 des chromatographischen Mediums 256 in Berührung ist, in Berührung gebracht. Diese Spalte 274 verhindert, dass Probe, die auf das Probenaufbringungskissen 270 aufgebracht wurde, direkt in das chromatographische Medium 266 fließt. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 254 weist ein Fenster 276 auf, um eine Betrachtung des chromatographischen Mediums 256 zu ermöglichen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 252 und 254 weisen Eingriffseinrichtungen, wie beispielsweise Verschlüsse 278 und 280 und eine Dichtung 282, wie vorstehend beschrieben, auf.
Eine geschnittene Rückansicht der Vorrichtung 250 nach Fig. 11A ist in Fig. 11B dargestellt. Fig. 11B stellt den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 252 und den zweiten gegen überstellbaren Bestandteil 254 in Gegenüberstellung dar, wobei das Gelenk 272 in geschlossener Stellung ist. Das Probenaufbringungskissen 270 ist mit dem Detektoraufbringungskissen 268 in Berührung dargestellt, bis auf die schmale Spalte 274 an dem Ende des Detektoraufbringungskissens 268, das dem chromatographischen Medium 256 am nächsten ist. Das Detektoraufbringungskissen 268 ist in direkter Berührung mit dem ersten Ende 258 des chromatographischen Mediums 256. Die Erfassungszone 262 und die Kontrollzone 264 des chromatographischen Mediums 256 sind dargestellt. Das zweite Ende 260 des chromatographischen Mediums 256, das der Kontrollzone 264 näher ist, ist in Berührung mit dem Absorber 266.

k. Zweidirektionale Vorrichtung, die einen zweiten Applikator und einen Absorber auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil einschließt

Eine weitere Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung umfasst eine Vorrichtung, die zur Ausführung einer zweidirektionalen Chromatographie in der Lage ist.
Diese Ausführungsform der chromatographischen Untersuchungsvorrichtung ist in Fig. 12A dargestellt. Die Untersuchungsvorrichtung 300 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 302 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 304 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 302 weist ein chromatographisches Medium 306 mit einem ersten Ende 308 und einem zweiten Ende 310 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 302 weist weiterhin einen ersten Applikator 312 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 308 des chromatographischen Mediums 306 auf. Das chromatographische Medium 306 umfasst weiterhin eine Erfassungszone 314 und wahlweise eine Kontrollzone 316, die sich zwischen der Erfassungszone 314 und dem zweiten Ende 310 des chromatographischen Mediums 306 befindet. Die Erfassungszone 314 und die Kontrollzone 316 sind, wie vorstehend, für andere Ausführungsformen der für Sandwich- Immunoassays geeigneten Vorrichtung besprochen, ausgebildet. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 314 schließt einen Absorber 318, der ein absorbierendes Kissen sein kann und einen zweiten Applikator 320 ein. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 312 und 314 sind durch ein Gelenk 322 verbunden. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 314 schließt Fenster 324 ein, um eine Betrachtung des chromatographischen Mediums 306 zu ermöglichen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 312 und 314 schließen Eingriffseinrichtungen 323 und 325 und eine Dichtung 326, wie vorstehend beschrieben, ein.
Wenn das Gelenk 322 geschlossen ist, erscheint die Vorrichtung 300 wie in einer Draufsicht in Fig. 12B dargestellt. Das chromatographische Medium 306, einschließlich der Erfassungszone 314 und, wenn vorhanden, der Kontrollzone 316, ist durch das Fenster 324 sichtbar.
Bei dieser Ausführungsform der Vorrichtung verursacht die Zugabe einer ersten Flüssigkeit zum ersten Applikator 312, dass die erste Flüssigkeit auf das erste Ende 308 des chromatographischen Mediums 306 aufgebracht wird. Das In- Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 302 und 304 verursacht dann, dass der zweite Applikator 320 mit dem zweiten Ende 310 des chromatographischen Mediums 306 in Betriebsberührung kommt, um eine zweite Flüssigkeit auf das zweite Ende 310 des chromatographischen Mediums 306 aufzubringen und verursacht, dass der Absorber 318 mit dem ersten Applikator 312 in Betriebsberührung kommt, um Strömungsmittel vom chromatographischen Medium 306 durch den ersten Applikator 312 abzuziehen, wodurch somit die Strömung umgekehrt wird. Bei dem Betrieb dieser Vorrichtung wird die Probe auf den ersten Applikator 312 aufgebracht und eine Lösung eines markierten spezifischen Bindungspartners wird auf den zweiten Applikator 320 aufgebracht. Die Probe bewegt sich dann durch das chromatographische Medium 306 vom ersten Ende 308 hin zum zweiten Ende 310, so dass irgendein Analyt, der in der Probe vorliegt, an den immobilisierten Antikörper an der Erfassungszone 314 gebunden wird. Wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 302 und 304 in Gegenüberstellung gebracht werden, wird der markierte spezifische Bindungspartner auf das chromatographische Medium 306 aufgebracht und bewegt sich vom zweitem Ende 310 hin zum ersten Ende 308 durch das chromatographische Medium 306. Der markierte spezifische Bindungspartner bindet dann an irgendeinen Analyten, der an den immobilisierten Antikörper an der Erfassungszone 314 gebunden ist, wodurch ein erfassbarer Dreifachkomplex erzeugt wird. Der markierte spezifische Bindungspartner bindet weiterhin an den immobilisierten Analyten oder an das Analog an der Kontrollzone 316, wodurch die korrekte Durchführung der Untersuchung angezeigt wird.

l. Zweidirektionale Vorrichtung, die zwei Applikatoren und einen Leiter einschließt

Eine weitere Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung ist eine Vorrichtung, die zur zweidirektionalen Chromatographie geeignet ist, die einen Absorber zur Umkehr der Strömung und ein Reagenzkissen in Betriebsberührung mit dem chromatographischen Medium einschließt.
Diese Ausführungsform der chromatographischen Untersuchungsvorrichtung ist in Fig. 13A dargestellt. Die Untersuchungsvorrichtung 340 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 342 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 344 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 342 weist ein chromatographisches Medium 346 mit einem ersten Ende 348 und einem zweiten Ende 350 auf. Angrenzend an und in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 348 des chromatographischen Mediums 346 ist ein erster Applikator 352. Angrenzend an und in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 350 des chromatographischen Mediums 346 ist ein Leiter 354. Das chromatographische Medium 346 enthält eine Erfassungszone 356 und wahlweise eine Kontrollzone 358. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 344 umfasst einen Absorber 360 und einen zweiten Applikator 362. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 342 und 344 sind durch ein Gelenk 364 verbunden. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 344 enthält ein Fenster 366, um eine Betrachtung des chromatographischen Mediums 346 zu ermöglichen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 342 und 344 schließen Eingriffseinrichtungen 365 und 367 und eine Dichtung 368, wie vorstehend beschrieben, ein.
Wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 342 und 344 in Gegenüberstellung gebracht werden, wird der Absorber 360 mit dem ersten Applikator 352 in Betriebsberührung gebracht und der zweite Applikator 362 wird mit dem Leiter 354 in Betriebsberührung gebracht, wodurch die Strömung umgekehrt wird. Der Teil des chromatographischen Mediums 346, der die Erfassungszone 356 und, falls vorhanden, die Kontrollzone 358 einschließt, kann durch das Fenster 366 im zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 344 betrachtet werden, wenn die ersten und zweiten gegenüber stellbaren Bestandteile 342 und 344 in Gegenüberstellung gesetzt werden.
Fig. 13B stellt eine Draufsicht der Vorrichtung 340 dar, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 342 und 344 in Gegenüberstellung gesetzt werden; die Erfassungszone 356 und die Kontrollzone 358 sind durch das Fenster 366 im zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 344 sichtbar.
Bei dieser Vorrichtung kann der erste Applikator 352 ein Probenaufbringungskissen umfassen, auf das die zu untersuchende Probe aufgebracht wird und der zweite Applikator 362 kann ein Pufferaufbringungskissen umfassen, dem Puffer zugesetzt wird. Der erste Applikator 352 (Probenaufbringungskissen) kann zumindest ein Reagenz zur Behandlung der Probe enthalten, bevor sie auf das chromatographische Medium, wie vorstehend beschrieben, aufgebracht wird. Der zweite Applikator 362 (Pufferaufbringungskissen) enthält typischerweise einen spezifischen Bindungspartner für den Analyten in einer Form, die durch den Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit, wie vorstehend beschrieben, wieder aufgelöst werden kann.
Der erste Applikator 352 (Probenaufbringungskissen) umfasst vorzugsweise weiterhin einen inerten Farbstoff, so dass die Strömung der Probe durch das chromatographische Medium 346 optisch überwacht werden kann. Vorzugsweise ist der inerte Farbstoff eine Kontrastfarbe zur derjenigen der erfassbaren Markierung. Wenn beispielsweise die erfassbare Markierung pinkfarbenes kolloidales Gold ist, kann der inerte Farbstoff blau sein. Die Probenwanderung wird durch Beobachtung des inerten Farbstoffes überwacht. Nachdem die Probe eine ausreichende Distanz, beispielsweise zwei Drittel oder drei Viertel der Länge des chromatographischen Mediums 346 gewandert ist, werden die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 342 und 344 in Gegenüberstellung gebracht und der Absorber 360 wird mit dem ersten Applikator 352 in Berührung gebracht. Dies kehrt die Strömung der Probe durch das chromatographische Medium 346 um, was ein zusätzliches Einfangen des Analyten an der Erfassungszone 356 ermöglicht. Dies bringt den zweiten Applikator 362 ebenfalls in Berührung mit dem Leiter 354 und verursacht, dass die Pufferlösung, die den wieder aufgelösten markierten spezifischen Bindungspartner zum Analyten enthält, auf das chromatographische Medium 346 aufgebracht wird. Die Pufferlösung wandert durch das chromatographische Medium 346 vom zweiten Ende 350 hin zum ersten Ende 348. Wenn sie die Erfassungszone 356 erreicht, bindet der markierte spezifische Bindungspartner zum Analyten an den Analyten, der bereits an der Erfassungszone 356 gebunden ist. Eine Erfassung und/oder Bestimmung des Analyten wird dann wie vorstehend beschrieben durchgeführt.
Weil die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 342 und 344 nicht in Berührung sind, wenn die Probe als die erste Flüssigkeit auf den ersten Applikator 352 aufgebracht wird, ist es möglich, entweder die Probe auf den ersten Applikator 352 zuerst aufzubringen oder den Puffer auf den zweiten Applikator 352 zuerst aufzubringen, um den markierten spezifischen Bindungspartner zu rekonstituieren.
Eine Abwandlung dieser zweidirektionalen Vorrichtung ersetzt den Leiter 354 auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 342 mit einem ersten Absorber einer finiten Kapazität 354. Der Absorber 360 auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 344 ist dann ein zweiter Absorber. Der Absorber einer finiten Kapazität 354a auf dem ersten gegenüberstell baren Bestandteil 344 weist die Eigenschaft auf, dass Flüssigkeit durch ihn zurückgezogen werden kann, wenn der zweite Applikator 362, der einen wieder auflösbaren markierten spezifischen Bindungspartner enthält, in Betriebsberührung mit ihm gesetzt wird und der zweite Absorber 360 mit dem ersten Applikator 352 in Betriebsberührung gesetzt wird.

m. Vorrichtung mit einem Detektoraufbringungskissen auf dem ersten Bestandteil

Eine weitere Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäß der vorliegenden Erfindung weist ein Detektoraufbringungskissen auf, das sich auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil befindet und weist eine Probenaufbereitungszone auf, die sich auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil befindet. Bei dieser Vorrichtung ist das Detektoraufbringungskissen so angeordnet, dass es in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums ist. Das Detektoraufbringungskissen enthält vorzugsweise einen markierten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form, die durch den Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Detektoraufbringungskissen wieder aufgelöst werden kann. Die Vorrichtung umfasst weiterhin einen Leiter in Betriebsberührung mit dem Detektoraufbringungskissen und in indirekter Berührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums, ebenso wie einen Absorber in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums.
Beim Betrieb dieser Ausführungsform der Vorrichtung wird die Probe auf die Probenaufbereitungszone auf den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil aufgebracht, wonach die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden. Dies bringt den Inhalt der Probenaufbereitungszone auf den Leiter und dann auf das erste Endes des chromatographischen Mediums durch das Detektoraufbringungskissen auf. Wenn die Probe das Detektoraufbringungskissen erreicht, wird der Inhalt des Detektoraufbringungskissens wieder aufgelöst. Wenn der Inhalt des Detektoraufbringungskissens einen spezifischen Bindungspartner für den Analyten einschließt, hat die Passage der Probe durch das Detektoraufbringungskissen zur Folge, dass der spezifische Bindungspartner an irgendeinen Analyten, der in der Probe vorliegt, bindet.
Diese Ausführungsform der Vorrichtung ist in Fig. 14 dargestellt. Die Untersuchungsvorrichtung 380 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 382 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 384 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 382 schließt ein chromatographisches Medium 386 mit einem ersten Ende 388 und einem zweiten Ende 390 ein. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 382 schließt weiterhin ein Detektoraufbringungskissen 392 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 388 des chromatographischen Mediums 386, einen Leiter 394 in Betriebsberührung mit dem Detektoraufbringungskissen 392 und in indirekter Berührung mit dem ersten Ende 388 des chromatographischen Mediums 386, und einen Absorber 396 in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 390 des chromatographischen Mediums 385 ein. Das chromatographische Medium 386 schließt eine Erfassungszone 398 und eine Kontrollzone 400 ein. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 384 schließt eine Probenaufbereitungszone 402 ein. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 382 und 384 sind durch ein Gelenk 404 verbunden. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 384 weist eine Öffnung 406 auf, um eine Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums 386 zu ermöglichen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile schließen Eingriffseinrichtungen 405 und 407 und eine Dichtung 408, wie vorstehend beschrieben, auf.
Eine Abwandlung dieser Erfindung schließt einen spezifischen Bindungspartner für den Analyten in einer Form ein, die auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 384 ebenso wie auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 382 wieder aufgelöst werden kann. Wenn sich der wieder auflösbare spezifische Bindungspartner auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 384 befindet, befindet er sich vorzugsweise nicht direkt in der Probenaufbereitungszone 402 selbst. Er umgibt eher vorzugsweise die Probenaufbereitungszone 402 in einem Bereich 403 derartig, dass die Probe zuerst die Probenaufbereitungszone 402 durchquert und sich dann in den Bereich 403 bewegt, der die Probenaufbereitungszone 402 umgibt, wodurch der spezifische Bindungspartner wieder aufgelöst wird. Beispielsweise kann die Probenaufbereitungszone 402 ein Stück eines in geeigneter Weise behandelten Filterpapiers umfassen, das auf der Oberfläche des zweiten gegenüberstellbaren Bestandteils 384, angeheftet durch einen Klebstoff oder ein Fixiermittel, angeordnet wird. Dies ermöglicht die Behandlung der Probe, beispielsweise um den pH einzustellen, um intakte Zellen zu lysieren und/oder um teilchenförmiges Material zu entfernen, bevor die Probe den wieder auflösbaren spezifischen Bindungspartner berührt. Diese Abwandlung dieser Ausführungsform kann einen breiteren dynamischen Bereich ergeben und kann nützlich sein, wenn der verfügbare Antikörper eine niedrige Affinität aufweist oder niedrige Analytkonzentrationen erfasst werden sollen.

n. Vorrichtung mit einem Applikator mit zwei Sektoren, um ein Waschen vorzusehen

Eine weitere Ausführungsform einer Untersuchungsvorrichtung mit zwei Bestandteilen gemäß der vorliegenden Erfindung weist einen Applikator mit zwei Sektoren auf, um ein Waschen einer mit dem markierten spezifischen Bindungspartner nicht- umgesetzten Probe vorzusehen, nachdem die Mischung der Probe und des markierten spezifischen Bindungspartners das chromatographische Medium durchquerten. Diese Ausführungsform hat den Vorteil, einen klareren Hintergrund bereitzustellen und macht es einfacher, ein schwach positives Ergebnis abzulesen.
Bei dieser Ausführungsform schließt der erste gegenüberstellbare Bestandteil ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden, einen Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums und einen Absorber in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums ein. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil schließt einen Applikator ein, der in zwei Sektoren unterteilt ist: einen ersten Sektor, der einen markierten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in wieder auflösbarer Form enthält und einen zweiten Sektor ohne den markierten spezifischen Bindungspartner. Ein In- Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile setzt den ersten Sektor, jedoch nicht den zweiten Sektor des Applikators in direkte Berührung mit dem Leiter, um den Inhalt des ersten Sektors des Applikators auf den Leiter und dann auf das erste Ende des chromatographischen Mediums aufzubringen. Der zweite Sektor wird mit dem Leiter in indirekte Berührung gesetzt, wenn der Inhalt des zweiten Sektors durch den ersten Sektor und dann durch den Leiter strömt. Somit werden im Anschluß an die Aufbringung des Inhalts des ersten Sektors des Applikators auf den Leiter der Inhalt des zweiten Sektors auf den Leiter aufgebracht. Der Inhalt des zweiten. Sektors, der Probe, jedoch keinen markierten spezifischen Bindungspartner einschließt, dient dazu, ungebundenen markierten spezifischen Bindungspartner aus dem chromatographischen Medium auszuwaschen, wodurch der Störpegel einer sichtbaren Markierung, die im chromatographischen Medium sichtbar ist, vermindert wird und wodurch die Ablesung der Untersuchungsvorrichtung verbessert wird. Dies ist insbesondere bei schwach positiven Untersuchungen vorteilhaft.
Diese Ausführungsform der Untersuchungsvorrichtung ist in Fig. 15 dargestellt. Die Untersuchungsvorrichtung 420 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 422 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 424 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 422 schließt ein chromatographisches Medium 426 mit einem ersten Ende 428 und einem zweiten Ende 430, einen Leiter 432 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 428 des chromatographischen Mediums 426 und einen Absorber 434 in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 430 des chromatographischen Mediums 426 ein. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 424 weist einen Applikator 436 auf, der in zwei Sektoren unterteilt ist: einen ersten Sektor 438 in direkter Berührung mit dem Leiter 432, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 422 und 424 in Gegenüberstellung gebracht sind und einen zweiten Sektor 440 in indirekter Berührung mit dem Leiter 432, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 422 und 424 in Gegenüberstellung gebracht sind. Das chromatographische Medium 426 weist eine Erfassungszone 442 und eine Kontrollzone 444 auf. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 422 und 424 sind durch ein. Gelenk 446 verbunden. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 424 weist ein Fenster 448 auf, um eine Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums 426 zu ermöglichen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 422 und 424 schließen weiterhin Eingriffseinrichtungen 423 und 425 und eine Dichtung 427, wie vorstehend beschrieben, auf.

B. Vorrichtung mit zwei Bestandteilen und mit einer Abdeckung

Eine weitere Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung ist eine Vorrichtung aus zwei Bestandteilen mit einer Abdeckung.
Diese Ausführungsform der Untersuchungsvorrichtung ist in Fig. 16A dargestellt. Die Untersuchungsvorrichtung 460 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 462, einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 464 und eine Abdeckung 466 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 464 ist gelenkig an einer Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 462 durch ein erstes Gelenk 468 angebracht. Die Abdeckung 466 ist an der gegenüberliegenden Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 462 gelenkig durch ein zweites Gelenk 470 angebracht. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 462 weist ein chromatographisches Medium 472 mit einem ersten Ende 474 und einem zweiten Ende 476 auf. Angrenzend an oder in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 474 des chromatographischen Mediums 472 ist ein erster Applikator oder Probenkissen 478, das sich in einer Ausnehmung 480 befindet. Der erste Applikator 478 kann eine Probenaufbereitungszone einschließen, die zumindest ein Reagenz zur Behandlung der Probe enthält, bevor sie auf das chromatographische Medium, wie vorstehend beschrieben, aufgebracht wird. Der erste Applikator 478 kann ebenfalls einen inerten Farbstoff enthalten, um das Fortschreiten der Chromatographie, wie vorstehend beschrieben, anzuzeigen. Ein erster Absorber 482 ist angrenzend an und in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 476 des chromatographischen Mediums 472. Das chromatographische Medium 472 enthält eine Erfassungszone 484 und eine Kontrollzone 486 und ist wahlweise mit einer Grenzlinie 488 markiert. Die Grenzlinie 488 kann wahlweise ebenfalls auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 462 markiert sein. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 464 umfasst einen zweiten Applikator 490, der typischerweise einen markierten spezifischen Bindungspartner für den Analyten und einen zweiten Absorber 492 enthält. Die Abdeckung 466 enthält eine erste Öffnung 494. Vorzugsweise enthält der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 462 eine zweite Öffnung 496. Bei dieser Vorrichtung schließt der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 464 und die Abdeckung 466 Eingriffseinrichtungen 491 und 493 ein. Die Vorrichtung 460 ist durch eine Dichtung 495, wie vorstehend beschrieben, umgeben.
Fig. 16B stellt eine Draufsicht dieser Vorrichtung 460 dar, wenn der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 464 über den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 462 gefaltet ist und die Abdeckung 466 über den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 464 gefaltet ist. Ein Teil des chromatographischen Mediums 472 ist durch die erste Öffnung 494 der Abdeckung 466 und durch die zweite Öffnung 496 des zweiten gegenüberstellbaren Bestandteils 464, einschließlich der Erfassungszone 484 und der Kontrollzone 486 sichtbar.
Bei Betrieb dieser Vorrichtung verursacht die Zugabe einer ersten Flüssigkeit zum ersten Applikator 478, dass die erste Flüssigkeit auf das erste Ende 474 des chromatographischen Mediums 472 aufgebracht wird. Typischerweise ist die erste Flüssigkeit eine Probe, die einen Analyten enthalten kann.
Bei dieser Vorrichtung ist die Funktion der Ausnehmung 480 im ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 452, den zweiten Absorber 492 so zu positionieren, dass er zumindest teilweise in direkter Berührung mit dem chromatographischen Medium 472 steht, um überschüssige Probe zu entfernen, während verhindert wird, dass der erste Applikator 478 diese Berührung blockiert.
Bei Gebrauch wird die Probe dem ersten Applikator 478 zugesetzt, so dass eine Chromatographie im chromatographischen Medium 472 vom ersten Ende 474 hin zum zweiten Ende 476 fortschreiten kann. Wenn der Farbstoff die Grenzlinie 488 erreicht, werden die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 462 und 464 in Gegenüberstellung gebracht, was verursacht, dass der zweite Applikator 490 mit dem ersten Absorber 482 in Betriebsberührung kommt, um die zweite Flüssigkeit auf das zweite Ende 476 des chromatographischen Mediums 472 aufzubringen, und was verursacht, dass der zweite Absorber 492 mit dem ersten Applikator 478 in Betriebsberührung kommt, um Flüssigkeit vom chromatographischen Medium 472 über den ersten Applikator 478 abzuziehen. Dies kehrt die chromatographische Strömung um und zieht den markierten spezifischen Bindungspartner zurück durch das chromatographische Medium 472 vom zweiten Ende 476 hin zum ersten Ende 474. Diese Vorrichtung ist deswegen für eine zweidirektionale Chromatographie brauchbar.
Die Abdeckung 466 kann über den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 464 zum sichereren Verschluss und zum Halten des zweiten gegenüberstellbaren Bestandteils 464 gegen den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 462 gefaltet werden. Dies ermöglicht eine bequemere Aufbewahrung der Vorrichtung nach Gebrauch, wie bei einem medizinischen Dokument.

C. Vorrichtung mit drei Bestandteilen

Eine weitere Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung ist eine Untersuchungsvorrichtung mit drei Bestandteilen, die eine zweidirektionale Chromatographie verwendet.
Diese Ausführungsform der Untersuchungsvorrichtung mit drei Bestandteilen ist in Fig. 17A dargestellt. Die Untersuchungsvorrichtung 520 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 522, einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 524 und einen dritten gegenüberstellbaren Bestandteil 526 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 524 ist gelenkig an einer Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 522 durch ein erstes Gelenk 528 befestigt; der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 526 ist gelenkig an der entgegengesetzten Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 522 durch ein zweites Gelenk 530 befestigt. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 522 weist ein chromatographisches Medium 532 mit einem ersten Ende 534 und einem zweiten Ende 536 auf. Das chromatographische Medium 532 weist eine Erfassungszone 538 und eine Kontrollzone 540 auf. Mit dem ersten Ende 534 des chromatographischen Mediums 532 in Betriebsberührung ist ein erster Leiter 542 und mit dem zweiten Ende 536 des chromatographischen Mediums 532 ist ein zweiter Leiter 544 in Betriebsberührung. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 524 umfasst einen ersten Absorber 546 und einen ersten Applikator 548, der zur Aufbringung der Probe vorgesehen ist. Typischerweise enthält der erste Applikator 548 einen ersten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in einer Form, die durch die Aufbringung einer wässrigen Probe auf den ersten Applikator 548 wieder aufgelöst werden kann. Eine erste Öffnung 550 ist in den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 524 geschnitten, um eine Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums 532 zu ermöglichen. Die erste Öffnung 550 befindet sich zwischen dem ersten Absorber 546 und dem ersten Applikator 548. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 526 umfasst einen zweiten Applikator 552, der für einen markierten, sekundären spezifischen Bindungspartner vorgesehen ist und einen zweiten Absorber 554. Eine zweite Öffnung 556 ist in den dritten gegenüberstellbaren Bestandteil 526 geschnitten, um eine Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums 532 zu ermöglichen. Die zweite Öffnung 556 befindet sich zwischen dem zweiten Applikator 552 und dem zweiten Absorber 554. Wenn die Vorrichtung 520 geschlossen ist, wobei der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 524 über den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 522 gefaltet ist, und der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 526 über den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 522 gefaltet ist, ist zumindest ein Teil des chromatographischen Mediums 532 durch die erste Öffnung 550 und die zweite Öffnung 556 (Fig. 17B) sichtbar. Die zweiten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile 524 und 526 schließen Eingriffseinrichtungen 551 und 555 zum Zusammenhalten der Bestandteile auf. Ein biegsamer Steg oder eine Dichtung 557 umgibt die Kanten der Bestandteile, um die Reagenzien oder Proben in der Vorrichtung 520 zurückzuhalten. Eine ähnliche Anordnung von Eingriffseinrichtungen und ein Steg oder eine Dichtung wird für andere Vorrichtungen mit drei Bestandteilen, wie nachstehend beschrieben, verwendet.
Bei dieser Vorrichtung verursacht das In-Gegenüberstellung- Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 522 und 524, dass der erste Absorber 546 mit dem zweiten Leiter 544 in Betriebsberührung kommt und dass der erste Applikator 548 mit dem ersten Leiter 542 in Betriebsberührung kommt, um Flüssigkeit auf das chromatographische Medium 532 aufzubringen, so dass eine erste Flüssigkeit, die auf den ersten Applikator 548 aufgebracht wird, durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums 532, einschließlich der Erfassungszone 538 und der Kontrollzone 540, gezogen wird.
Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 522 und 524 werden dann aus Gegenüberstellung zurückgezogen und die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile 522 und 526 werden in Gegenüberstellung gebracht. Dies verursacht, dass der zweite Absorber 554 mit dem ersten Leiter 542 in Betriebsberührung kommt, um Flüssigkeit vom chromatographischen Medium 532 abzuziehen und verursacht, dass der zweite Applikator 552 mit dem zweiten Leiter 544 in Betriebsberührung kommt, um Strömungsmittel auf das chromatographische Medium 532 aufzubringen. Dies verursacht eine Umkehr der Strömung, so dass eine zweite Flüssigkeit, die auf den zweiten Applikator 552 aufgebracht ist, durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird, durch den die erste Flüssigkeit gezogen wurde, in der zu der Richtung entgegengesetzten Richtung, in der die erste Flüssigkeit durch das chromatographische Medium 532 gezogen wurde. Die ersten 522, zweiten 524 und dritten 526 gegenüberstellbaren Bestandteile liegen in einer derartigen Ausgestaltung vor, dass, wenn der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 526 mit dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 522 in Gegenüberstellung gebracht wird, der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 524 über die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile 522 und 526 gefaltet werden kann, um eine Abdeckung zu bilden.
Bei der Durchführung einer serologischen Untersuchung unter Verwendung dieser Vorrichtung, ist ein fester Druck zwischen dem zweiten Absorber 554 und dem ersten Leiter 542 wichtig, um sicher zu stellen, dass unspezifisches Immunglobulin vor der vorrückenden Front des markierten sekundären spezifischen Bindungspartners aus dem chromatographischen Medium 532 abgezogen wird, oder um das Abziehen von freiem Analyten vor dem Vorrücken des markierten spezifischen Anti-Analyten sicher zu stellen. Wenn ein Mischen zwischen Anti-Immunglobulin-Markierung und unspezifischem Immunglobulin auftritt, neutralisiert das unspezifische Immunglobulin die Anti-Immunglobulin-Markierung (Konjugat) und lässt weniger oder keine Anti-Immunglobulin-Markierung zurück, die zur Markierung des spezifisch eingefangenen Immunglobulins verfügbar ist. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 526 der Vorrichtung trägt dazu bei, einen gleichmäßigen Druck auszuüben, um diese Funktion zuverlässig zu bewirken. Dies ist einer der Vorteile von Untersuchungsvorrichtungen gemäß der vorliegenden Erfindung.
Der erste spezifische Bindungspartner kann mit einer erfassbaren Markierung direkt markiert sein.
Alternativ kann eine indirekte Markierung des ersten spezifischen Bindungspartners verwendet werden. Bei einer indirekten Markierung ist der erste spezifische Bindungspartner nicht markiert, er wird jedoch durch Aufbringung eines markierten, sekundären spezifischen Bindungspartners erfasst, der den ersten spezifischen Bindungspartner spezifisch mittels des zweiten Applikators bindet. Eine indirekte Markierung ist insbesondere zum Testen auf Giardia oder andere Antigene nützlich, für die im Handel erhältliche Antikörper nur unter Schwierigkeiten direkt markiert werden können. Wenn der erste spezifische Bindungspartner nicht direkt markiert ist, enthält der zweite Applikator 552 vorzugsweise einen sekundären markierten spezifischen Bindungspartner für den ersten spezifischen Bindungspartner, wie vorstehend in Abschnitt III besprochen.
Eine weitere Ausführungsform einer Vorrichtung mit drei Bestandteilen verwendet einen Absorber auf dem dritten Bestandteil, der positioniert ist, um Strömungsmittel aus dem gesamten chromatographischen Medium und aus Bestandteilen, die mit ihm in Betriebsberührung stehen, zu entfernen. Dies dient dem Zweck, überschüssige Probe zu entfernen, die eine Hintergrund- bzw. Störpegelfarbe erzeugen kann und somit die Empfindlichkeit vermindert.
Diese Ausführungsform ist in Fig. 18 dargestellt. Die Untersuchungsvorrichtung 560 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 561, einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 562 und einen dritten gegenüberstellbaren Bestandteil 563 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 562 ist gelenkig an einer Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 561 durch ein erstes Gelenk 564 befestigt. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 563 ist an der anderen Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 561 durch ein zweites Gelenk 565 gelenkig befestigt. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 561 weist ein chromatographische Medium 566 mit einem ersten Ende 567 und einem zweiten Ende 568 auf. Angrenzend an oder in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 567 des chromatographischen Mediums 566 ist ein erster Applikator 569. Angrenzend an oder in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 568 des chromatographischen Mediums 566 ist ein Leiter 570.
Das chromatographische Medium enthält eine Erfassungszone 571 und wahlweise eine Kontrollzone 572. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 562 umfasst einen ersten Absorber 573 und einen zweiten Applikator 574, der typischerweise einen markierten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in wieder auflösbarer Form einschließt. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 563 umfasst einen zweiten Absorber 575, der sich im Wesentlichen entlang der Länge des chromatographischen Mediums 566 erstreckt, um Strömungsmittel aus dem chromatographischen Medium 566, aus dem ersten Applikator 569 und aus dem Leiter 570 zu absorbieren, wenn der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 563 mit dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 561 in Gegenüberstellung gebracht wird. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 561 weist eine Öffnung 576 hinter dem chromatographischen Medium 566 zur Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums 566 hinter dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 561 auf. Die zweiten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile 562 und 563 schließen ebenfalls Eingriffseinrichtungen 577 und 579 und eine Dichtung 580, wie vorstehend beschrieben, ein.
Bei Gebrauch wird die zu testende Probe auf den ersten Applikator 569 aufgebracht und eine Pufferlösung wird auf den zweiten Applikator 574 aufgebracht. Man lässt dann die Probe durch das chromatographische Medium 566 einschließlich der Erfassungszone 571 und der Kontrollzone 572 strömen. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 561 und 562 werden dann in Gegenüberstellung gebracht, so dass der zweite Applikator 574 den ersten Applikator 569 berührt und der erste Absorber 573 den Leiter 570 am zweiten Ende 568 des chromatographischen Mediums 566 berührt. Dies verursacht, dass der wieder aufgelöste, markierte spezifische Bindungspartner, ursprünglich im zweiten Applikator 574, durch das chromatographische Medium strömt. Nach Abschluß der Strömung der Probe und des wieder aufgelösten spezifischen Bindungspartners durch das chromatographische Medium 566 wird der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 563 mit dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 561 in Gegenüberstellung gebracht, so dass der zweite Absorber 575 Strömungsmittel vom chromatographischen Medium 566, vom ersten Applikator 569 und vom Leiter 570 entfernen kann. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 562 wird dann zurück über den dritten gegenüberstellbaren Bestandteil 563 gefaltet und das chromatographische Medium 566, einschließlich der Erfassungszone 567 und der Kontrollzone 568 wird durch die Öffnungen 576, die sich hinter dem chromatographischen Medium 566 befinden, betrachtet.

D. Mehrfachvorrichtungen

Eine weitere Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung ist eine Mehrfach- bzw. Multiplexuntersuchungsvorrichtung, die mehrfache Untersuchungen gleichzeitig durchführen kann. Die Untersuchungen können bei demselben Analyten oder bei unterschiedlichen Analyten durchgeführt werden. Im Allgemeinen sind alle Varianten der vorstehend beschriebenen Vorrichtung zum Mehrfachgebrauch geeignet, indem sie erste und zweite gegenüberstellbare Bestandteile und dritte gegenüberstellbare Bestandteile, wenn notwendig, mit mehrfachen chromatographischen Medien, Probenaufbereitungszonen, Applikatoren, Leitern, Absorbern und anderen erforderlichen Elementen vorsehen.

1. Grund-Mehrfachvorrichtung

Eine Variante einer Mehrfachuntersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung ist in Fig. 19 dargestellt. Die Untersuchungsvorrichtung 590 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 592 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 594 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 594 ist gelenkig an dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 592 durch ein Gelenk 596 befestigt. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 592 umfasst eine Vielzahl von chromatographischen Medien 598. Jedes der chromatographischen Medien 598 weist ein erstes Ende 600 und ein zweites Ende 602 auf und umfasst eine Erfassungszone 604 und eine Kontrollzone 606. Das zweite Ende 602 jedes chromatographischen Mediums 598 ist mit einem Absorber 608 in Betriebsberührung, um die Strömung durch das chromatographische Medium 598 zu treiben. Es existiert ein getrennter Absorber 608 für jedes chromatographische Medium 598. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 594 umfasst eine Vielzahl von Probenaufbereitungszonen 610, eine für jedes chromatographische Medium 598. Typischerweise enthält jede Probenaufbereitungszone 610 einen markierten spezifischen Bindungspartner für den zu testenden Analyten in einer Form, die durch den Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zur Probenaufbereitungszone 610 wieder aufgelöst werden kann. Alternativ kann der markierte spezifische Bindungspartner in einer flüssigen Form der Probenaufbereitungszone 610 vor oder nach dem Darauf-Zusetzen der Probe zugesetzt werden. Das In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 592 und 594 verursacht, dass jede der Probenaufbereitungszonen 610 auf das entsprechende chromatographische Medium 598 am ersten Ende 600 aufgebracht wird. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 594 enthält eine Vielzahl von Öffnungen 612, eine für jedes chromatographische Medium 598. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 592 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 594 schließt Eingriffseinrichtungen 614 und 616 und eine Dichtung 618 ein, wie vorstehend beschrieben.
Diese Mehrfachvorrichtung kann von 2 bis 12 oder mehr Probenaufbereitungszonen und chromatographische Medien enthalten, abhängig von der Untersuchung, für die die Vorrichtung verwendet werden soll. Typischerweise enthält die Vorrichtung von 2 bis 5 getrennte Probenaufbereitungszonen und chromatographische Medien.
Diese Ausführungsform der Vorrichtung kann zur Untersuchung einer Anzahl verschiedener Analyten in verschiedenen Teilmengen derselben Probe verwendet werden oder kann verwendet werden, um denselben Analyten in einer Anzahl verschiedener Proben zu untersuchen. Diese letztere Art ist besonders bei der Untersuchung eines Zustands bzw. von Beschwerden brauchbar, bei denen zu unterschiedlichen Zeitpunkten von demselbem Patienten entnommene Proben auf den interessierenden Analyten, wie beispielsweise fäkales Okkultblut, untersucht werden müssen. Das Vorhandensein von fäkalem Okkultblut wird häufig mittels einer Reihe von Stuhlproben, die einmal am Tag oder zu anderen Zeitabständen für eine vorgeschriebene Zeitspanne entnommen werden, bestimmt. Alternativ können eine oder mehrere der Untersuchungen für. Kontrollen oder Referenz-Standards verwendet werden.

2. Mehrfachvorrichtung mit kollabierbarer Wanne

Bei einer noch weiteren Abwandlung der Mehrfachvorrichtung kann zumindest eine Probenaufbereitungszone eine zusammenlegbare bzw. kollabierbare Wanne umfassen, der ein Extraktionstupfer bzw. Pinsel oder eine andere Proben- enthaltende Vorrichtung hinzugefügt werden kann. Bei dieser Abwandlung kann der erste gegenüberstellbare Bestandteil weiterhin gelenkig faltbare Flügel umfassen, die sich über den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil falten, wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil in Gegenüberstellung gebracht werden.
Diese Variante der Mehrfachvorrichtung ist in Fig. 20 dargestellt. Die Vorrichtung 620 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 622 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 624 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 624 ist gelenkig am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 622 durch ein Gelenk 626 befestigt. Am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 622 sind zwei faltbare Flügel 628 und 630 gelenkig befestigt. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 622 weist eine Kontrollwanne 632 und eine kollabierbare Probenwanne 634 ein, d. h. die aus einem Schwamm- bzw. Schaumstoff-artigen Material hergestellt ist. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 624 weist eine Vielzahl chromatographischer Medien 636 auf, bei diesem Beispiel zwei, jede mit einer Erfassungszone 638 und einer Kontrollzone 640. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil weist eine Öffnung 642 zur Betrachtung eines Teils jedes der chromatographischen Medien 636 einschließlich der Erfassungszone 638 und der Kontrollzone 640 auf. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 622 und 624 schließen Eingriffseinrichtungen 641 und 643 ein. Wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil 622 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 624 in Gegenüberstellung sind, werden Proben in der Kontrollwanne 632 und der kollabierbaren Probenwanne 634 auf die entsprechenden chromatographischen Medien 636 zur Chromatographie aufgebracht.

3. Mehrfachvorrichtungen, die zur Aufnahme einer Testkarte angepasst sind

Eine noch weitere Abwandlung der Mehrfachvorrichtung ist insbesondere zur Bestimmung von Hämoglobin in fäkalem Okkultblut brauchbar. Diese Vorrichtung ist angepasst, um eine Testkarte aufzunehmen, die mehrere getrocknete Fäkalproben einschließt, die typischerweise an aufeinander folgenden Tagen entnommen wurden.
Diese Vorrichtung ist in Fig. 21 dargestellt. Die Untersuchungsvorrichtung 660 umfasst einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 662, einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 664, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 662 durch ein erstes Gelenk 656 gelenkig befestigt ist und einen dritten gegenüberstellbaren Bestandteil 668, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 662 durch ein zweites Gelenk 670 befestigt ist. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 662 ist angepasst, um eine Testkarte 672 aufzunehmen, die eine Vielzahl von darauf angebrachten getrockneten Proben 674 aufweist. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 664 weist ein Reagenzkissen 676 darin eingeschlossen ein. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 668 weist eine Vielzahl von chromatographischen Medien 678 auf, jede mit einer Erfassungszone 680 und einer Kontrollzone 682, wie vorstehend beschrieben. Es existiert ein getrenntes chromatographisches Medium 678 für jede Probe, die untersucht werden soll. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 668 weist eine Öffnung 684 auf, um eine Betrachtung zumindest eines Teils der chromatographischen Medien 678 einschließlich jeder Erfassungszone 680 und Kontrollzone 682 zu ermöglichen. Die zweiten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile schließen Eingriffsein richtungen 681 und 685 ein, wobei die Vorrichtung 660 eine Dichtung 686, wie vorstehend für Vorrichtungen mit drei Bestandteilen beschrieben, einschließt.
Bei Gebrauch wird die Testkarte 672, die eine Vielzahl von getrockneten Proben 674 enthält, in den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 664 eingesetzt. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 664 wird über den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 662 gefaltet, der das Reagenzkissen 676 enthält, so dass die Reagenzkissen 676 die Vielzahl getrockneter Proben 674 in der Testkarte 672 berühren und Analyten aus den getrockneten Proben 674 extrahieren. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 664 wird dann vom ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 662 aufgeklappt. Zuletzt wird der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 568 über den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 662 gefaltet, um den Inhalt der Reagenzkissen 676 und den aus den getrockneten Proben 674 extrahierten Analyten auf die chromatographische Medien 678 aufzubringen, so dass eine Chromatographie stattfinden kann.
Bei dieser Vorrichtung umfassen die Reagenzkissen 676 einen spezifischen Bindungspartner für den Analyten, der mit einer erfassbaren Markierung in einer Form markiert ist, die durch die Zugabe eines wässrigen Reagenzes zum Reagenzkissen 676 wieder aufgelöst werden kann. Das zugesetzte Reagenz ist ein Extraktionsreagenz für den zu untersuchenden Analyten, wie beispielsweise Hämoglobin.
Wenn der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 664 dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 662 gegenüber gestellt wird, wird der Analyt aus den Proben auf der Testkarte 672 extrahiert und bindet an den markierten spezifischen Bindungspartner. Wenn der dritte gegenüber stellbare Bestandteil 668 nachfolgend dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil gegenüber gestellt wird, wandert irgendein Analyt, der an den markierten spezifischen Bindungspartner gebunden ist, durch die chromatographischen Medien 668 und bindet an die Erfassungszone 680 in jedem der chromatographischen Medien 578.
Eine noch weitere Abwandlung einer Mehrfachvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung ist eine Mehrfachvorrichtung, die derjenigen in Fig. 19 dargestellten ähnlich ist, die jedoch zur Aufnahme einer Testkarte angepasst ist. Die Testkarte kann eine Vielzahl von Proben, wie beispielsweise getrocknete Fäkalproben, enthalten, wenn ein fäkaler Okkultbluttest durchgeführt wird.
Diese Abwandlung ist in Fig. 22 dargestellt. Die Untersuchungsvorrichtung 700 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 702 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 704 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 704 ist über ein Gelenk 706 gelenkig am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 702 befestigt. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 702 umfasst eine Vielzahl von chromatographischen Medien 708. Jedes der chromatographischen Medien 708 weist ein erstes Ende 710 und ein zweites Ende 712 auf und umfasst eine Erfassungszone 718 und eine Kontrollzone 720. Das erst Ende 710 jedes chromatographischen Mediums 708 ist in Betriebsberührung mit einem Leiter 714 und das zweite Ende 712 jedes chromatographischen Mediums 708 ist in Betriebsberührung mit einem Absorber 716. Es existiert ein getrennter Leiter 714 und Absorber 716 für jedes chromatographische Medium 708. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 702 ist zur Aufnahme einer Testkarte 722 angepasst, die eine Vielzahl von getrockneten Proben 724 enthält, die so positioniert sind, dass sie mit jedem Leiter 714 in Betriebsberührung sind. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 704 umfasst eine Vielzahl von Applikatoren 726, eine für jedes chromatographische Medium 708. Jeder Applikator 726 enthält vorzugsweise markierten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in wieder auflösbarer Form.
Bei Gebrauch wird ein Puffer oder eine andere wässrige Flüssigkeit auf jeden Applikator 726 aufgebracht, um den markierten spezifischen Bindungspartner zu rekonstituieren. Ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 702 und 704 verursacht, dass jeder der Applikatoren 726 auf die entsprechende getrocknete Probe 724 aufgebracht wird, so dass der Inhalt jeder getrockneten Probe 724 und jedes Applikators 726 auf jeden Leiter 714 und somit auf jedes chromatographische Medium 708 aufgebracht wird. Die Testkarte 722 hält jede der Proben 724 in ihrer Stellung, so dass sie den Inhalt der Applikatoren 726 aufnehmen können, und so dass Analyt in den Proben 724 extrahiert wird, mit dem markierten spezifischen Bindungspartner reagiert und auf die Leiter 714 aufgebracht wird. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 704 enthält eine Vielzahl von Öffnungen 728, eine für jedes chromatographische Medium 708, zur Betrachtung jedes chromatographischen Mediums 708. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 702 und 704 schließen jeweils Eingriffseinrichtung 725 und 727 und eine Dichtung 730 ein, um Proben und Reagenzien zurückzuhalten.

II. Chromatographische Untersuchungsvorrichtungen für kompetitive Untersuchungen

Untersuchungsvorrichtungen, die den vorstehend Offenbarten im Aufbau ähnlich sind, können für kompetitive Untersuchungen von monovalenten Analyten verwendet werden. Die monova lenten Analyten sind typischerweise Haptene, jedoch könnten dieselben Prinzipien verwendet werden, um irgendeinen Analyten, der monovalent ist, wie beispielsweise ein normales multivalentes Antigen, an dem die zusätzlichen Antikörper- Bindungsstellen blockiert oder modifiziert sind, zu untersuchen. Untersuchbare Analyten schließen die Folgenden ein: Theophyllin, Digoxin, Disopyramid, Lidocain, Procainamid, Propranolol, Chinidin, Amikacin, Penicillin und weitere β- Lactam-Antibiotika, Chloramphenicol, Gentamicin, Kanamycin, Netilmicin, Tobramycin, tricyclische Antidepressiva, Ethosuximid, Phenobarbital, Diazepam, Phenytoin, Primidon, Valproinsäure, Paracetamol, Acetylsalicylsäure, Ibuprofen, Methotrexat, Rauschgifte bzw. Drogen, wie beispielsweise Morphin, Codein, Cocain, Fentanyl, 3-Methylfentanyl, Amphetamine, Lysergsäurediethylamid, Phencyclidin und Heroin und deren Metaboliten, DNP, 1-substituierte-4-hydroxy-2- Nitrobenzole, 4-substituierte-2-nitro-trialkylanilinium- Salze und umweltverschmutzende Stoffe, wie beispielsweise Benzol, Toluol, Xylol, Ethylbenzol, Chlordan, DDT und seine Metaboliten, 2,4-D, 2,4,5-T und Atrazin.
Spezifische, für die Durchführung dieser Untersuchungen geeignete Bindungspartner schließen ein, sind jedoch nicht beschränkt auf, Antikörper und spezifische Bindungsproteine. Ein Beispiel der Letzteren ist das Penicillin-Bindungs- Protein (PBP), das aus Bacillus stearothermophilus isoliert wurde.
Anders als frühere Untersuchungsvorrichtungen, die zur Ausführung kompetitiver Immunoassays angepasst sind, weisen die Vorrichtungen gemäß der vorliegenden Erfindung den Vorteil auf, dass das Vorhandensein von Analyten in der Probe ein positives oder erfassbares Ergebnis, jeweils eine farbige Linie in der Erfassungszone der Vorrichtung, ergibt.
Typischerweise zeigt die Entwicklung eines erfassbaren Signals bei kompetitiven Immunoassays ein negatives Ergebnis an (kein Analyt vorhanden). Somit besteht eine umgekehrte Beziehung zwischen dem beobachteten Ergebnis und der Erfassung. Die Vorrichtungen der vorliegenden Erfindung, die eine direkte Beziehung zwischen der Analytkonzentration und dem erfassbaren Signal ergeben, ergeben weniger wahrscheinlich falsch-negative Ergebnisse. Diese Vorrichtungen besitzen weiterhin einen ausgedehnten dynamischen Bereich.

A. Zweidirektionale Strömungsvorrichtung mit drei Bestandteilen

Eine Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung für kompetitive Untersuchungen gemäß der vorliegenden Erfindung ist eine zweidirektionale Strömungsvorrichtung mit drei Bestandteilen.
Die Vorrichtung weist drei gegenüberstellbare Bestandteile auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil schließt ein chromatographisches Medium mit einem ersten Ende und einem zweiten Ende ein. Die Strömung in der ersten Richtung ist vom ersten Ende zum zweiten Ende und in der zweiten Richtung vom zweiten Ende zum ersten Ende. Das chromatographische Medium weist daran immobilisiert in einer getrennten Fläche, die wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums ist, einen Analyten oder dessen immunologisches Analog auf.
Ein immunologisches Analog ist vorzugsweise ein Analyt, der kovalent an ein Protein gebunden ist, dem eine spezifische Bindungsaktivität für den Analyten fehlt, wie beispielsweise normales IgG oder anderes nicht immunes IgG. Derartiges IgG wird vorzugsweise gegen den interessierenden Analyten absorbiert, um irgendwelche Immunglobulinfraktionen mit spezifischer Bindungsaktivität zu entfernen, entweder natürliche Antikörper für den Analyten, oder Antikörper, die zur Kreuzreaktion mit dem Analyten in der Lage sind.
Die Konjugation von Haptenen an Proteine, einschließlich nicht immunen IgG's, ist in der Technik gut bekannt und ist beispielsweise bei P. Tijssen, "Practice and Theory of Enzyme Immunoassays" (Elsevier, Amsterdam, 1985), Seiten 279-296 beschrieben. Kurz, Haptene, die Carboxylgruppen enthalten oder die carboxyliert werden können, können durch die gemischte Anhydridreaktion verbunden werden, durch Reaktion mit einem wasserlöslichen Carbodiimid oder durch Veresterung mit N-Hydroxysuccinimid. Eine Carboxylierung kann durch Reaktionen, wie beispielsweise einer Alkylierung von Sauerstoff oder Stickstoffsubstituenten mit Haloestern, gefolgt von Hydrolyse der Ester oder der Bildung von Hemisuccinatestern oder von Carboxymethyloximen auf Hydroxyl- oder Keton-Gruppen von Steroiden durchgeführt werden.
Haptene mit Aminogruppen oder Nitrogruppen, die zu Aminogruppen reduzierbar sind, können zu Diazoniumsalzen umgewandelt werden und mit Proteinen bei schwach alkalischem pH für aromatische Amine in Reaktion gebracht werden. Haptene mit aliphatischen Aminen können durch verschiedene Verfahren an Proteine konjugiert werden, die eine Reaktion mit Carbodiimiden, eine Reaktion mit dem homobifunktionellen Reagenz Toluol-2,4-diisocyanat oder die Reaktion mit Maleimid-Verbindungen einschließen. Aliphatische Amine können ebenfalls durch Reaktion mit p-Nitrobenzoylchlorid und nachfolgender Reduktion zu einem p-Aminobenzoylamid zu aromatischen Aminen umgewandelt werden, die dann nach Diazotierung an Proteine gebunden werden können. Weiterhin können bifunktionelle Imidat-Ester, wie beispielsweise Dimethylpimelimidat, Dimethyladipimidat oder Dimethylsuberimidat verwendet werden, um Aminogruppen- enthaltende Haptene an Proteine zu konjugieren.
Thiol-enthaltene Haptene können an Proteine mit Malemiden, wie beispielsweise 4-(N-Maleimidomethyl)-cyclohexan-1- carbonsäure N-Hydroxysuccinimidester konjugiert werden.
Für Haptene mit Hydroxylgruppen kann eine Alkoholfunktion zum Hemisuccinat umgewandelt werden, was eine Carboxylgruppe für die Konjugation verfügbar einführt. Alternativ wandelt das bifunktionelle Reagenz Sebacoyldichlorid einen Alkohol in ein Säurechlorid um, das dann mit Proteinen reagiert.
Phenole können mit diazotierter p-Aminobenzoesäure aktiviert werden, was eine Carboxylgruppe einführt, und kann dann mit den Proteinen durch die gemischte Anhydridreaktion in Reaktion gebracht werden. Zucker können aktiviert werden, indem ein p-Nitrophenylglycosid gebildet wird, gefolgt von Reduktion der Nitrogruppe zu einer Aminogruppe und Konjugation durch Diazotierung. Weitere Verfahren schließen die Spaltung von vizinalen Glykolen von Zuckern zu Aldehyden durch Reaktion mit Periodat, gefolgt von Bindung an Amine durch reduktive Alkylierung mit Natriumborhydrid ein. Alternativ können Hydroxyl-enthaltende Haptene nach Umwandlung zu Chlorkohlensäureestern durch Reaktion mit Phosgen verbunden werden.
Für Haptene mit Aldehyd- oder Ketogruppen können Carboxylgruppen durch die Bildung von O-Carboxymethyloximen eingeführt werden. Ketogruppen können weiterhin mit p-Hydrazinbenzoesäure derivatisiert werden, um Carboxylgruppen zu erzeugen. Haptene-enthaltende Aldehyde können direkt durch die Bildung von Schiffschen Basen konjugiert werden, die durch Reaktion mit einem Reduktionsmittel, wie beispielsweise Borhydrid, stabilisiert werden.
Das chromatographische Medium ist vorzugsweise Nitrocellulose, an die das Analyt-Analog nicht-kovalent durch eine hydrophobe Wechselwirkung gebunden ist. Weitere chromatographische Medien können verwendet werden, und das Analyt- Analog kann alternativ kovalent an das chromatographische Medium gebunden sein.
Der erste gegenüberstellbare Bestandteil umfasst weiterhin einen ersten Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums und einen zweiten Leiter in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums.
Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil schließt einen ersten Applikator ein, der einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch Zugabe einer wässrigen Flüssigkeit zum ersten Applikator wieder aufgelöst werden kann. Die erste Aufbringungsflüssigkeit kann die Probe sein; vorzugsweise jedoch ist sie eine Kombination der Probe und eines ersten Rekonstitutionsströmungsmittels, wobei das erste Rekonstitutionsströmungsmittel zuerst aufgebracht wird.
Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil schließt einen zweiten Applikator ein, der einen zweiten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch Zugabe eines zweiten Rekonstitutionsströmungsmittels zum zweiten Applikator wieder aufgelöst werden kann. Der zweite spezifische Bindungspartner ist mit einer erfassbaren Markierung, vorzugsweise einer visuell erfassbaren Markierung, wie beispielsweise einer Gold-Solmarkierung, wie vorstehend offenbart, markiert. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil schließt weiterhin einen Absorber ein, der vom zweiten Applikator auf dem dritten gegenüberstellbaren Bestandteil getrennt ist.
Die ersten und zweiten spezifischen Bindungspartner sind typischerweise Antikörper zum Analyten. Sie können identisch sein, sie müssen es jedoch nicht sein. Anstatt intakter, bivalenter Antikörper können monovalente Antikörper- Fragmente, wie beispielsweise Fab oder Fab'-Fragmente verwendet werden. Dies kann für einige Anwendungen bevorzugt sein, weil bei derartigen kompetitiven Untersuchungen für kein Antikörpermolekül das Erfordernis besteht, mit mehr als einem entsprechenden Analyten zu reagieren.
Bei Gebrauch wird der erste spezifische Bindungspartner auf dem ersten Applikator wieder aufgelöst, bevorzugt durch die Aufbringung der Probe allein oder alternativ durch die Aufbringung eines ersten Rekonstitutionsströmungsmittels, gefolgt von der Zugabe der Probe. Der zweite spezifische Bindungspartner auf dem zweiten Applikator wird ebenfalls durch Zugabe eines zweiten Rekonstitutionsströmungsmittels rekonstituiert. Typischerweise sind die ersten und zweiten Rekonstitutionsströmungsmittel gleich. Das Rekonstitutionsströmungsmittel ist vorzugsweise eine Pufferlösung, die zusätzliche Bestandteile, wie beispielsweise Chelierungsmittel, Detergenzien, antibakterielle Mittel und Konservierungsmittel enthalten kann. Ein geeignetes Rekonstitutionsströmungsmittel wird durch Mischen gleicher Volumina an Phosphat-gepufferter Salzlösung, 0,1 M, pH 7,2, hergestellt, die 0,8% Tween-20TM und 2,5 mM HEPES-Puffer, pH 7,5 enthält, der wiederum 0,005% Triton X-100TM, 0,003% Tetranatrium EDTA und 0,05% Natriumazid enthält. Vorzugsweise ist das Volumen des auf sowohl den ersten als auch auf den zweiten Applika tor aufgebrachten Rekonstitutionsströmungsmittels von ungefähr 5 ul bis ungefähr 200 ul, bevorzugter von ungefähr 10 ul bis ungefähr 100 ul, am meisten bevorzugt ungefähr 20 ul. Das Probenvolumen, das aufgebracht wird, ist vorzugsweise von ungefähr 5 ul bis ungefähr 40 ul, am meisten bevorzugt ungefähr 30 ul.
Nach Aufbringung der Probe auf den ersten Applikator wird die Vorrichtung inkubiert, um eine Wiederauflösung des wieder auflösbaren spezifischen Bindungspartners zuzulassen und eine Reaktion des ersten spezifischen Bindungspartners mit dem Analyten zuzulassen. Diese Inkubation ist vorzugsweise von ungefähr 5 Minuten bis ungefähr 30 Minuten, am meisten bevorzugt ungefähr 15 Minuten. Die Inkubation wird typischerweise bei Raumtemperatur durchgeführt, sie kann jedoch bei niedrigeren oder höheren Temperaturen stattfinden. Eine Inkubation bei höheren Temperaturen kann die Reaktion beschleunigen; eine Inkubation bei niedrigeren Temperaturen kann erwünscht sein, um eine Oxidation oder eine andere Störung empfindlicher Proben zu verhindern.
Nach der Inkubation wird der erste gegenüberstellbare Bestandteil und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil in Gegenüberstellung gebracht, wodurch die Probe und der wieder aufgelöste erste spezifische Bindungspartner zum Analyten auf den ersten Leiter und dann in das erste Ende des chromatographischen Mediums aufgebracht wird. Man lässt zu, dass die Probe und der wieder aufgelöste spezifische Bindungspartner sich dann durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums bewegen und am Analyten oder dem immunologischen Analog, das in der getrennten Fläche auf dem chromatographischen Medium immobilisiert ist, vorbeigehen. Dies erfordert typischerweise ungefähr 10 bis ungefähr 20 Sekunden.
An diesem Punkt werden die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile durch Öffnen getrennt und die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile werden in Gegenüberstellung gebracht, um den Absorber mit dem ersten Leiter in Berührung zu bringen und um den zweiten Applikator mit dem zweiten Leiter in Berührung zu bringen. Dies verursacht, dass der Absorber Strömungsmittel vom ersten Endes des chromatographischen Mediums abzieht und verursacht, dass der zweite Applikator Strömungsmittel, einschließlich des wieder aufgelösten, markierten spezifischen Bindungspartners auf das zweite Ende des chromatographischen Mediums aufbringt. Vorzugsweise wird der zweite gegenüberstellbare Bestandteil dann über den ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteil zurückgefaltet, um sicher zu stellen, dass genügend Flüssigkeit aus dem zweiten Applikator ausgetrieben wird und durch den Absorber absorbiert wird, so dass die Strömungsumkehr wirksam ist. Der auf das chromatographische Medium durch das Zurückfalten des zweiten Bestandteils ausgeübte Druck steigert die Strömungsmittelumkehr.
Man lässt den markierten, wieder aufgelösten spezifischen Bindungspartner sich dann durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums bewegen, der den Teil des chromatographischen Mediums überlappt, durch den die Probe und der erste spezifische Bindungspartner wanderten, und der die den immobilisierten Analyten oder das immunologische Analog enthaltende abgetrennte Fläche einschließt. Wenn Analyt in der Probe vorliegt, bindet der markierte spezifische Bindungspartner in der getrennten Fläche und wird erfasst. Wenn die erfassbare Markierung eine visuell erfassbare Markierung ist, ist eine Linie in der getrennten Fläche sichtbar.
Die Untersuchung kann als eine qualitative Untersuchung, d. h. als eine An/Aus-Untersuchung durchgeführt werden. Bei einer derartigen Untersuchung liegt der erste spezifische Bindungspartner in einer Konzentration vor, die tatsächlich den gesamten immobilisierten Analyten oder dessen immunologisches Analog in der getrennten Fläche bindet. Die Stellen in der getrennten Fläche, die an den ersten spezifischen Bindungspartner gebunden sind, werden für eine weitere Bindung blockiert. Wenn der Analyt in der Probe vorliegt, bindet der Analyt den ersten spezifischen Bindungspartner, der verhindert, dass der erste spezifische Bindungspartner an den immobilisierten Analyten oder das Analyt-Analog in der getrennten Fläche bindet. Somit kann der zweite, spezifische markierte Bindungspartner an den Analyten oder dessen immunologisches Analog in der getrennten Fläche binden, wodurch sich ein erfassbares Signal ergibt.
Eine quantitative Variante kann zwei oder mehrere chromatographische Medien in einem Gehäuse verwenden, wobei zumindest eines für einen Kontrollstandard, der als eine Referenz verwendet werden soll, vorgesehen ist.
Eine für diese Variante einer kompetitiven Untersuchung geeignete Vorrichtung ist in Fig. 23 dargestellt. Die chromatographische Untersuchungsvorrichtung 740 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 742, einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 744 und einen dritten gegenüberstellbaren Bestandteil 746 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 744 ist an einer Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 742 durch ein erstes Gelenk 748 befestigt. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 746 ist an der anderen Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 742 durch ein zweites Gelenk 750 befestigt. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 742 weist ein chromatographisches Medium 752 mit einem ersten Ende 754 und einem zweiten Ende 756 auf, wobei ein erster Leiter 758 mit dem ersten Ende 754 des chromatographischen Mediums 752 in Betriebsberührung steht und ein zweiter Leiter 760 mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums 756 in Betriebsberührung steht. Das chromatographische Medium 752 weist weiterhin eine getrennte Fläche 762 eines Analyten oder dessen immunologischen Analogs auf, die daran befestigt sind, wie vorstehend besprochen, was als das Signal abgelesen wird.
Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 744 weist einen ersten Applikator 764 auf, der einen ersten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in wieder auflösbarer Form enthält, und auf den die Probe vorzugsweise aufgebracht wird.
Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 746 weist einen zweiten Applikator 766 auf, der einen zweiten spezifischen Bindungspartner für den Analyten enthält, der mit einer erfassbaren Markierung markiert ist, und der in einer Form vorliegt, die durch Zugabe einer zweiten wässrigen Flüssigkeit zum zweiten Applikator 766 wieder aufgelöst werden kann. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 746 weist einen Absorber 768 auf, der vom zweiten Applikator 766 getrennt ist. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 746 weist weiterhin eine Öffnung 770 zur Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums 752, einschließlich der getrennten Fläche 762, auf. Alternativ befindet sich eine Öffnung 772 hinter der getrennten Fläche 762 des chromatographischen Mediums 752 im ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 742 zur Betrachtung von der hinteren Seite der Vorrichtung 740 aus, wenn sie geschlossen ist. Die zweiten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile 744 und 746 weisen Eingriffseinrichtungen 769 und 773 auf und die Vorrichtung 740 schließt eine Dichtung 774 ein, um Reagenzien zurückzuhalten.
Wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil 742 und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 744 in Gegenüberstellung gebracht werden, wird der erste Applikator 764 mit dem ersten Leiter 758 in Betriebsberührung gebracht, um den Inhalt des ersten Applikators 764 auf den ersten Leiter 758 und dann auf das erste Ende 754 des chromatographischen Mediums 752 aufzubringen. Wenn der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 746 und der erste gegenüberstellbare Bestandteil 742 in Gegenüberstellung gebracht werden, wird der Absorber 768 mit dem ersten Leiter 758, der an das erste Ende 754 des chromatographischen Mediums 752 angrenzt, in Betriebsberührung gebracht, und der zweite Applikator 766 wird mit dem zweiten Leiter 760, der an das zweite Ende 756 des chromatographischen Mediums 752 angrenzt, in Betriebsberührung gebracht, wodurch die Strömungsmittelströmungsrichtung im chromatographischen Medium 752 umgekehrt wird.

B. Zweidirektionale Strömungsvorrichtung mit zwei Bestandteilen und mit einer Abdeckung

Eine zweite Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung für kompetitive Untersuchungen gemäß der vorliegenden Erfindung ist eine zweidirektionale Strömungsvorrichtung aus zwei Bestandteilen und mit einer Abdeckung. Bei dieser Ausführungsform wird die zu testende Probe nicht mit Antikörpern vorinkubiert, sondern wird direkt auf einen Leiter in direkter Berührung mit einem chromatographischen Medium aufgebracht.
Die zweite Ausführungsform der chromatographischen Untersuchungsvorrichtung für kompetitive Immunoassays kann einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil umfassen. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil weist ein chromatographisches Medium mit einem ersten Ende und einem zweiten Ende auf. Das chromatographische Medium weist daran immobilisiert: (1) einen ersten spezifischen Bindungspartner für den Analyten; und (2) einen sekundären spezifischen Bindungspartner auf, der zur Bindung eines spezifischen Bindungspaar-Teils, dem eine Affinität für den Analyten fehlt, in der Lage ist. Diese Bestandteile sind auf dem chromatographischen Medium in einzelnen getrennten und nicht überlappenden Flächen angeordnet. Der sekundäre spezifische Bindungspartner befindet sich näher am ersten Ende des chromatographischen Mediums als der erste spezifische Bindungspartner für den Analyten. Vorzugsweise befindet sich der erste spezifische Bindungspartner ungefähr 0,25 Zoll (6,35 mm) vom sekundären spezifischen Bindungspartner im chromatographischen Medium, um den Wirkungsgrad zu erhöhen.
Der erste spezifische Bindungspartner für den Analyten ist typischerweise ein Antikörper für den Analyten oder ein Antikörper-Bruchstück, wie vorstehend offenbart.
Der sekundäre spezifische Bindungspartner ist typischerweise ein Antikörper, der zur Bindung eines anderen Immunglobulins auf der Grundlage einer Spezies-spezifischen Determinante in der Lage ist und nicht auf der Grundlage der Antikörper- Spezifität, wenn vorhanden, des Immunoglobulins, das gebunden werden soll. Beispielsweise kann der sekundäre spezifische Bindungspartner ein Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG-Antikörper sein, der alle Kaninchen-Immunglobulin-G-Moleküle bindet, ohne Rücksicht auf ihre immunologische Spezifität.
Der erste gegenüberstellbare Bestandteil schließt ebenfalls einen ersten Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums und einen zweiten Leiter in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums ein. Vorzugsweise ist der erste gegenüberstellbare Bestandteil mit einer Grenzlinie markiert, die den Punkt anzeigt, an dem die Strömungsumkehr im zweidirektionalen chromatographischen Verfahren stattfinden soll.
Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil schließt ein: (1) einen Applikator, der ein Analyt-Analog in einer Form enthält, die durch den Zusatz eines Rekonstitutionsströmungsmittel zum Applikator wieder aufgelöst werden kann; und (2) einen Absorber, der vom Applikator getrennt ist.
Das Analyt-Analog ist ein Analyt, der kovalent an einen Teil eines spezifischen Bindungspaares, das durch den sekundären spezifischen Bindungspartner bindbar ist, gebunden ist. Der Teil des spezifischen Bindungspaars im Analyt-Analog ist mit einer erfassbaren Markierung markiert. Vorzugsweise ist die erfassbare Markierung eine visuell erfassbare Markierung. Am meisten bevorzugt ist die visuell erfassbare Markierung ein Metallsol, wie beispielsweise Gold-, Silber- oder Kupfersol.
Wenn beispielsweise der sekundäre spezifische Bindungspartner Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG ist, ist der Teil des spezifischen Bindungspaares, der an den Analyten konjugiert ist, normalerweise Kaninchen-IgG ohne Antikörperaktivität für den Analyten.
Ein Beispiel für ein Analyt-Analog, das für diese Variante der Untersuchung geeignet ist, wenn Penicillin der Analyt ist, ist 7-amino-cephalosporansäure, die kovalent an Kaninchen-IgG gebunden ist, wobei das Kaninchen-IgG mit Kolloidal-Gold markiert ist.
Ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile setzt einen zweiten Leiter mit dem Applikator in Betriebsberührung, so dass der Inhalt des Applikators auf den zweiten Leiter aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird. Es setzt weiterhin den Absorber mit dem ersten Leiter in Betriebsberührung, um Strömungsmittel vorn ersten Ende des chromatographischen Mediums zur Umkehr der Strömung im chromatographischen Medium abzuziehen.
Während der ersten Phase der Abwärtsströmung passiert der Analyt, der in einer positiven Probe vorliegt, die Fläche des sekundären spezifischen Bindungspartners auf dem chromatographischen Medium ungehindert und bindet dann die Fläche des ersten spezifischen Bindungspartners für den Analyten. Für eine positive Probe wird während der zweiten Phase einer Aufwärtsströmung das markierte Analyt-Analog daran gehindert, an den ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten zu binden und bindet dann an den sekundären spezifischen Bindungspartner. Wenn in der Probe kein Analyt vorhanden ist, existiert keine Bindung des Analyten an den ersten spezifischen Bindungspartner während der Abwärtsströmungsphase, und das Analyt-Analog wird an den ersten spezifischen Bindungspartner während der zweiten, Aufwärtsströmungsphase gebunden und erreicht den sekundären spezifischen Bindungspartner nicht, so dass kein Signal am sekundären spezifischen Bindungspartner entwickelt wird.
Vorzugsweise umfasst die Vorrichtung weiterhin eine Abdeckung, die gelenkig am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil befestigt ist, so dass sie über die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile gefaltet werden kann, wenn sie in Gegenüberstellung sind. Die Abdeckung kann eine Öffnung aufweisen, die darin eingeschnitten ist, um eine Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums in den ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteilen zu ermöglichen, wenn sie in Gegenüberstellung sind.
Alternativ befindet sich eine Öffnung hinter dem chromatographischen Medium und eine Betrachtung findet von der Rückseite der geschlossenen Vorrichtung aus statt.
Die Vorrichtung kann weiterhin zwei oder mehr chromatographische Medien in einem Gehäuse enthalten, wobei zumindest eines für einen Kontrollstandard entwickelt wurde, der als eine Referenz zur halb-quantitativen oder quantitativen Anzeige auf die Analytkonzentration, die in der Probe vorliegt, verwendet werden soll.
Bei einer anderen Variante dieser Ausführungsform kann der sekundäre spezifische Bindungspartner in der Erfassungszone in mehrfachen Banden immobilisiert sein, so dass das markierte Analyt-Analog, das zur Bindung des sekundären spezifischen Bindungspartners verfügbar ist, titriert wird. Die Menge an sekundärem spezifischen Bindungspartner in jeder Bande ist so bestimmt, dass die Menge an Analyt- Analog, die an die Erfassungszone bindet und somit die Analytkonzentration in der Testprobe durch die Anzahl an Banden angezeigt wird, an die das Analyt-Analog bindet. Dies ergibt eine halb-quantitative Beurteilung der Analytkonzentration. Typischerweise weist bei dieser Variante die Bande des sekundären spezifischen Bindungspartners, die zum ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten auf dem chromatographischen Medium am nächsten ist, die niedrigste Konzentration an sekundärem spezifischen Bindungspartner auf, wobei jede nachfolgende Bande eine höhere Konzentration an sekundärem spezifischen Bindungspartner als die Konzentration in der niedrigsten Bande aufweist.
Wenn die Analytkonzentration ausreichend hoch war, dass genug ungebundenes markiertes Analyt-Analog vorlag, um die erste Bande des sekundären spezifischen Bindungspartners zu sättigen, würde ein Teil des markierten Analyt-Analogs an die zweite Bande des sekundären spezifischen Bindungspartners binden. Somit würden zwei Linien an der Erfassungszone des chromatographischen Mediums sichtbar sein. Ein Bereich von Analyt-Konzentrationen wird demgemäß durch das Auftreten von ein, zwei oder drei Linien in der Erfassungszone angezeigt.
Der erwartete Konzentrationsbereich des Analyten, der untersucht werden soll, bestimmt die Konzentrationen, die das Auftreten einer oder mehrerer Linien in der Erfassungszone auslösen. Beispielsweise kann unter Verwendung des Nikotin-Metaboliten Cotinin eine 10 ppb (= 10 parts per billion = 10 Teile pro eine Milliarde Teile)- Konzentration in einer Körperflüssigkeit eine signifikante passive Exposition gegenüber Zigarettenrauch anzeigen, eine 500 ppb-Konzentration kann einen aktiven Raucher anzeigen und eine 10000 ppb-Konzentration kann einen sehr starken Raucher anzeigen. Die Untersuchungsvorrichtung kann so angeordnet sein, dass eine Linie an der Erfassungszone bei 10 ppb Cotinin, zwei Linien bei 500 ppb und drei Linien bei 10000 ppb auftreten.
Bei Betrieb wird Rekonstitutionsströmungsmittel wie vorstehend beschrieben auf den Applikator aufgebracht, um das Analyt-Analog wieder aufzulösen. Die Probe wird dann auf den ersten Leiter aufgebracht und zur Grenzlinie wandern gelassen. Typischerweise dauert die Chromatographie in der ersten Richtung ungefähr 5 bis ungefähr 25 Sekunden, typischerweise ungefähr 10 Sekunden. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil wird dann über den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil gefaltet, so dass sie in Gegenüberstellung sind. Die Abdeckung wird dann über die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile gefaltet. Nach einer Inkubationszeit von ungefähr 30 Sekunden bis ungefähr 10 Minuten, typischerweise ungefähr 2 Minuten, ist eine sichtbare Linie am sekundären spezifischen Bindungspartner sichtbar, wenn der Analyt in der Probe vorliegt. Bevorzugte Probenvolumina und Rekonstitutionsströmungsmittel sind vorstehend für die erste Ausführungsform der kompetitiven Immunoassay-Vorrichtung beschrieben.
Eine für diese Ausführungsform des kompetitiven Immunoassays geeignete Vorrichtung ist in Fig. 24 dargestellt. Die chromatographische Untersuchungsvorrichtung 780 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 782, einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 784 und eine Abdeckung 786 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 784 ist gelenkig an einer Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 782 durch ein erstes Gelenk 788 befestigt. Die Abdeckung 786 ist gelenkig an der anderen Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 782 durch ein zweites Gelenk 790 befestigt. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 782 weist ein chromatographisches Medium 792 mit einem ersten Ende 794 und einem zweiten Ende 796 auf. Das chromatographische Medium 792 weist eine Fläche eines daran immobilisierten ersten spezifischen Bindungspartners für den Analyten 798 und eine nicht überlappende Fläche eines daran immobilisierten sekundären spezifischen Bindungspartners 800 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 782 schließt weiterhin einen ersten Leiter 802 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 794 des chromatographischen Mediums 792 und einen zweiten Leiter 804 in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 796 des chromatographischen Mediums 792 ein. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 782 schließt weiterhin eine Grenzlinie 806 zur Anzeige des Punktes ein, an dem die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 782 und 784 in Gegenüberstellung gebracht werden, um die Richtung der Strömungsmittelströmung während der Durchführung der Untersuchung umzukehren.
Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 784 schließt einen Applikator 808 ein, der das Analyt-Analog in einer Form enthält, die durch die Zugabe des Rekonstitutionsströmungsmittels wieder aufgelöst werden kann. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 784 schließt weiterhin einen Absorber 810, der vom Applikator 808 getrennt ist und eine Öffnung 814 ein. Wenn die ersten und die zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 782 und 784 in Gegenüberstellung gebracht werden, wird der Applikator 808 mit dem zweiten Leiter 804 in Betriebsberührung gesetzt und der Absorber 810 wird mit dem ersten Leiter 802 in Betriebsberührung gesetzt, um die Richtung der Strömungsmittelströmung umzukehren. Die Abdeckung 786 weist darin eingeschnitten eine Öffnung 812 auf, um eine Betrachtung eines Teils des chromatographischen Mediums 792 zu ermöglichen. Vorzugsweise ermöglicht die Öffnung 812 eine Betrachtung der Fläche des sekundären spezifischen Bindungspartners 800 und nicht der Fläche des ersten spezifischen Bindungspartners zum Analyten 798. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 784 und die Abdeckung 786 schließt weiterhin Eingriffseinrichtungen 811 und 813 ein. Die Vorrichtung ist durch eine Dichtung 815 umgeben.

C. Unidirektionale Strömungsvorrichtung mit drei Bestandteilen und mit einem Absorber

Eine weitere, für diese Ausführungsform des kompetitiven Immunoassays geeignete Vorrichtung ist in Fig. 25 dargestellt. Diese Vorrichtung weist einen dritten Bestandteil auf, der einen Absorber oder ein Löschblatt enthält, das Strömungsmittel vom chromatographischen Medium und von beiden Leitern abzieht. Der Absorber erstreckt sich quer über einen beträchtlichen Anteil des chromatographischen Mediums, wenn er sich mit ihm in Betriebsberührung befindet. Die chromatographische Untersuchungsvorrichtung 820 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 822, einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 824 und einen dritten gegenüberstellbaren Bestandteil 826 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 824 ist an einer Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 822 durch ein erstes Gelenk 828 befestigt. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 826 ist an der anderen Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 822 gelenkig durch ein zweites Gelenk 830 befestigt. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 822 weist ein chromatographisches Medium 832 mit einem ersten Ende 834 und einem zweiten Ende 836 auf. Das chromatographische Medium weist daran immobilisiert eine Fläche eines ersten spezifischen Bindungspartners für den Analyten 840 und eine nicht überlappende Fläche eines sekundären spezifischen Bindungspartners 838 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 822 schließt weiterhin einen ersten Leiter 842 ein, der als ein Applikator dient, in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums 832 und schließt einen zweiten Leiter 844 in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 836 des chromatographischen Mediums 832 ein. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 822 schließt weiterhin eine Grenzlinien ein, um den Punkt anzuzeigen, an dem die ersten und zweitem gegenüberstellbaren Bestandteile 822 und 824 in Gegenüberstellung gebracht werden.
Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 824 schließt einen zweiten Applikator 850 ein, der das Analyt-Analog enthält. Typischerweise wird eine wässrige Flüssigkeit dem zweiten Applikator 850 zugesetzt, um das Analyt-Analog auf dem zweiten Applikator 850 wieder aufzulösen. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 824 schließt weiterhin einen ersten Absorber 848 ein, der vom zweiten Applikator 850 getrennt ist. Wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 822 und 824 in Gegenüberstellung gebracht werden, wird der zweite Applikator 850 mit dem ersten Leiter 842 in Betriebsberührung gesetzt und der erste Absorber 848 wird mit dem zweiten Leiter 844 in Betriebsberührung gesetzt, um Strömungsmittel abzuziehen. Eine Öffnung 852 befindet sich hinter dem chromatographischen Medium, wodurch eine Betrachtung eines Teils des chromatographischen Mediums 832 von hinten ermöglicht wird. Die zweiten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile 824 und 826 schließen Eingriffseinrichtungen 849 und 853 ein. Die Vorrichtung 820 schließt weiterhin eine Dichtung 858 ein.
Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 826 schließt einen zweiten Absorber 854 derartig positioniert ein, dass er in Betriebsberührung mit einer beträchtlichen Fläche des chromatographischen Mediums 832 ist, wenn die dritten und ersten gegenüberstellbaren Bestandteile 826 und 822 in Gegenüberstellung gebracht werden. Dies entfernt überschüssiges Strömungsmittel vom ersten Leiter 842 und vom zweiten Leiter 844 ebenso wie vom chromatographischen Medium 832.
Bei Gebrauch wird Probe auf den ersten Leiter oder Applikator 842 aufgebracht und durch das chromatographische Medium 832 wandern gelassen. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 826 wird mit dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 822 in Gegenüberstellung gebracht, um den zweiten Absorber 854 mit dem ersten Leiter oder Applikator 842 und dem chromatographischen Medium 832 in direkte Berührung zu bringen, wodurch überschüssige Flüssigkeit in den zweiten Absorber 854 gezogen wird. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 824 und der erste gegenüberstellbare Bestandteil 822 werden dann gegenübergestellt, was den zweiten Applikator 850, der wieder aufgelöstes markiertes Analyt-Analog enthält, mit dem Leiter oder Applikator 842 am ersten Ende 834 des chromatographischen Mediums 832 in Berührung bringt. Weiterhin wird der erste Absorber 848 dem zweiten Leiter 844 auf dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums 832 in Berührung gebracht. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 826 wird dann über dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 824 als eine Abdeckung geschlossen. Ein Teil des chromatographischen Mediums ist von der Öffnung 856 aus, die sich hinter dem chromatographischen Medium 832 befindet, sichtbar.
Die Erfassung und/oder Bestimmung des Analyten findet in der selben wie vorstehend in Abschnitt II (B) besprochenen Weise für die zweidirektionale Strömungsvorrichtung statt.

D. Zweidirektionale Strömungsvorrichtung mit drei Bestandteilen unter Verwendung der Spezifität von Biotin

Eine weitere Ausführungsform einer chromatographischen Vorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung ist eine zweidirektionale Strömungsvorrichtung mit drei Bestandteilen unter Verwendung der Spezifität der Biotin-Avidin-Bindung.
Der erste gegenüberstellbare Bestandteil weist ein chromatographisches Medium mit einem ersten Ende und einem zweiten Ende wie vorstehend beschrieben auf. Das chromatographische Medium weist daran immobilisiert: (1) eine Substanz auf, die zur spezifischen Bindung von Biotin in der Lage ist, und die aus der Gruppe bestehend aus Avidin, Streptavidin, Anti- Biotin-Antikörper und deren Derivaten ausgewählt ist; und weist (2) einen sekundären spezifischen Bindungspartner auf. Der sekundäre spezifische Bindungspartner ist zur spezifischen Bindung eines Drei-Bestandteile-Komplexes in der Lage, wobei der Komplex mit drei Bestandteilen Folgendes umfasst: (a) einen Analyten; (b) einen Teil eines spezifischen Bindungspaars, dem eine spezifische Bindungsaffinität für den Analyten fehlt, kovalent konjugiert an den Analyten und (c) eine erfassbare Markierung, die an den Teil des spezifischen Bindungspaars gebunden ist. Dieser Drei- Bestandteile-Komplex ist auf einem dritten gegenüberstellbaren Bestandteil, wie nachstehend beschrieben, angeordnet.
Die Bindungsbestandteile sind auf dem chromatographischen Medium in einzelnen getrennten, nicht überlappenden Flächen immobilisiert, wobei jede Fläche wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums ist. Der sekundäre spezifische Bindungspartner ist in der ersten getrennten Fläche immobilisiert und befindet sich näher am ersten Ende des chromatographischen Mediums als die Substanz, die zur Bindung von Biotin (hierin im Allgemeinen als "Avidin" bezeichnet) in der Lage ist, die in der zweiten getrennten Fläche immobilisiert ist.
Der erste gegenüberstellbare Bestandteil schließt weiterhin einen ersten Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums und einen zweiten Leiter in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums ein.
Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil schließt einen ersten Applikator ein, der einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch die Zugabe einer wässrigen Flüssigkeit zum Applikator wieder aufgelöst werden kann. Wie vorstehend beschrieben, kann die wässrige Flüssigkeit vorzugsweise die Probe allein oder ein erstes Rekonstitutionsströmungsmittel, gefolgt von der Probe sein. Der erste spezifische Bindungspartner ist nicht durch den sekundären spezifischen Bindungspartner bindbar. Der erste spezifische Bindungspartner ist an Biotin konjugiert.
Verfahren zur Bindung von Biotin an kugelförmige Proteine, einschließlich Antikörpern, sind in der Technik gut bekannt und sind beispielsweise bei P. Tijssen, siehe oben, auf den Seiten 25 bis 31 beschrieben. Biotin kann an ein Protein als ein reaktiver Ester konjugiert sein, entweder direkt oder durch Einführung einer Abstandsgruppe bzw. eines Spacers, wie beispielsweise &epsi;-Aminocapronsäure. Typische reaktive Ester sind Biotinyl-p-nitrophenylester, Biotinyl-N-hydroxysuccinimidester und Caproylamidobiotinyl-N-hydroxysuccinimidester, wobei das Letzte eine Abstandsgruppe zwischen dem Biotinanteil und dem Protein ergibt. Biotin kann ebenfalls durch andere Gruppen aktiviert sein.
Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil schließt Folgendes ein: (1) einen zweiten Applikator, der den wie vorstehend beschriebenen Drei-Bestandteile-Komplex mit dem Analyten, dem Teil des spezifischen Bindungspaars, dem eine Affinität für den Analyten fehlt und die erfassbare Markierung und (2) einen Absorber enthält, der vom ersten Applikator getrennt ist.
Bei der Vorrichtung setzt ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den ersten Leiter mit dem ersten Applikator so in Betriebsberührung, dass der Inhalt des ersten Applikators auf den ersten Leiter und in das erste Ende des chromatographischen Mediums aufgebracht wird. Somit wandert der Inhalt des ersten Applikators durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums. Ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile verursacht, dass der zweite Applikator mit dem zweiten Leiter zum Aufbringen des Inhalts des zweiten Applikators auf das zweite Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung kommt und verursacht, dass der Absorber mit dem ersten Leiter zum Abziehen von Strömungsmittel vom ersten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung kommt und die Strömung umkehrt.
Ein Beispiel einer zur Verwendung bei dieser Ausführungsform der chromatographischen Untersuchungsvorrichtung geeigneten Kombination von Antikörpern mit Theophyllin als dem Analyten, ist biotinylierter monoklonaler Maus-Anti- Theophyllin-IgG-Antikörper als der biotinylierte erste spezifische Bindungspartner, Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG- Antikörper als der immobilisierte sekundäre spezifische Bindungspartner und Kaninchen-IgG, dem eine Theophyllin- Aktivität als der Teil des spezifischen Bindungspaars im Drei-Bestandteile-Komplex fehlt.
Ein weiteres Beispiel eines Analyten, der durch eine Vorrichtung gemäß dieser Ausführungsform untersucht werden kann, ist Penicillin, unter Verwendung von Penicillin- Bindungsprotein (penicillin binding protein = PBP) als dem spezifischen Bindungspartner und einem Drei-Bestandteile- Komplex mit 7-Aminocephalosporansäure, die kovalent an Kaninchen-IgG gebunden ist, wobei das Kaninchen-IgG mit kolloidalem Gold markiert ist. Weitere β-Lactamantibiotika können in ähnlicher Weise untersucht werden.
Bei Betrieb wird der erste biotinylierte spezifische Bindungspartner auf dem ersten Applikator wieder aufgelöst, entweder vorzugsweise durch die Aufbringung der Probe allein oder durch die Aufbringung eines ersten Rekonstitutionsströmungsmittels, gefolgt von der Aufbringung der Probe, wie vorstehend besprochen. Der Drei-Bestandteile- Komplex auf dem zweiten Applikator wird durch ein zweites Rekonstitutionsströmungsmittel, wie vorstehend in Abschnitt II (A) beschrieben, wieder aufgelöst. Nach einer Inkubationszeitspanne, die ausreicht, um irgendeinen Analyten in der Probe an den ersten spezifischen Bindungspartner binden zu lassen, werden die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht, um die Probe und den wieder aufgelösten ersten spezifischen Bindungspartner auf den ersten Leiter und dann auf das erste Ende des chromatographischen Mediums aufzubringen. Die Probe und der erste spezifische Bindungspartner wandern durch das chromatographische Medium und durchqueren die beiden getrennten, nicht überlappenden Flächen der immobilisierten Reagenzien im chromatographischen Medium. Der erste biotinylierte spezifische Bindungspartner bindet den Bestandteil, der zur Bindung von Biotin in der zweiten getrennten Fläche in der Lage ist. Wenn der Analyt in der Probe vorliegt, wird der biotinylierte spezifische Bindungspartner, der über die Biotin-Avidin-Bindung an den festen Träger gebunden ist, selbst an den Analyten gebunden. Wenn kein Analyt in der Probe vorliegt, wird kein Analyt an den biotinylierten spezifischen Bindungspartner gebunden.
Nachdem die Probe und der wieder aufgelöste erste spezifische Bindungspartner die zweite getrennte Fläche passieren, werden die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile getrennt und die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht, wodurch die Strömung umgekehrt wird und wodurch der Drei-Bestandteile-Komplex auf den zweiten Leiter aufgebracht wird. Der Drei-Bestandteile-Komplex wandert dann durch das chromatographische Medium, beginnend am zweiten Ende, hin zum ersten Ende. Wenn ein Analyt in der Testprobe vorliegt, kann der biotinylierte spezifische Bindungspartner, der an das Avidin in der zweiten getrennten Fläche gebunden ist, den Analyten im Drei-Bestandteile-Komplex nicht binden, so dass der Drei- Bestandteile-Komplex den sekundären spezifischen Bindungspartner erreicht. Der sekundäre spezifische Bindungspartner bindet dann den Teil des spezifischen Bindungspaares im Drei-Bestandteile-Komplex, wo er erfasst wird. Typischerweise weist der dritte gegenüberstellbare Bestandteil der Vorrichtung eine Öffnung auf, so dass nur die erste getrennte Fläche des sekundären spezifischen Bindungspartners und nicht die zweite getrennte Fläche des Avidin auf dem chromatographischen Medium sichtbar ist, wenn der dritte gegenüberstellbare Bestandteil mit dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil in Gegenüberstellung ist. Jedoch, wenn kein Analyt in der Probe vorhanden ist, wird der Drei-Bestandteile-Komplex durch den ersten spezifischen Bindungspartner gebunden, der an das Avidin gebunden wird, dessen Antigen-Bindungsstelle unbesetzt ist. Der Drei- Bestandteile-Komplex erreicht dann die erste getrennte Fläche, die den sekundären spezifischen Bindungspartner zur Erfassung enthält, nicht.
Eine chromatographische Untersuchungsvorrichtung, die zur Durchführung dieser Variante des kompetitiven Immunoassays geeignet ist, ist in Fig. 26 dargestellt. Die chromatographische Untersuchungsvorrichtung 860 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 862, einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 864 und einen dritten gegenüberstellbaren Bestandteil 866 auf. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 864 ist an einer Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 862 durch ein erstes Gelenk 868 gelenkig befestigt und der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 866 ist an der anderen Seite des ersten gegenüberstellbaren Bestandteils 862 durch ein zweites Gelenk 870 gelenkig befestigt. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 862 weist ein chromatographisches Medium 872 mit einem ersten Ende 874 und einem zweiten Ende 876 auf, wobei ein erster Leiter 878 mit dem ersten Ende 874 des chromatographischen Mediums 872 in Betriebsberührung ist und ein zweiter Leiter 880 mit dem zweiten Ende 876 des chromatographischen Mediums 872 in Betriebsberührung ist. Das chromatographische Medium 872 weist eine erste getrennte Fläche eines sekundären spezifischen Bindungspartners 882 und eine zweite getrennte Fläche von Avidin 884 auf. Die ersten 882 und zweiten 884 getrennten Flächen sind nicht überlappend, wobei die erste getrennte Fläche 882 sich näher am ersten Ende 874 des chromatographischen Mediums 872 befindet. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 864 weist einen ersten Applikator 886 auf, der einen wieder auflösbaren ersten spezifischen Bindungspartner für den Analyten enthält. Der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 866 weist einen zweiten Applikator 888 auf, der einen wieder auflösbaren Drei-Bestandteile-Komplex enthält und einen Absorber 890, der vom zweiten Applikator 888 getrennt ist. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 854 und der dritte gegenüberstellbare Bestandteil 866 weisen darin weiterhin Öffnungen 892 und 894 zur Betrachtung eines Teils des chromatographischen Mediums 872 auf. Vorzugsweise ermöglichen die Öffnungen 892 und 894 eine Betrachtung der ersten getrennten Flächen 882, die den sekundären spezifischen Bindungspartner enthält, jedoch nicht der zweiten getrennten Fläche 884, die das Avidin enthält. Die zweiten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile 864 und 865 schließen weiterhin Eingriffseinrichtungen 891 und 895 ein. Die Vorrichtung 860 schließt weiterhin eine Dichtung 896 ein.
Eine In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile 862 und 864 verursacht, dass der erste Applikator 886 mit dem ersten Leiter 878 in Betriebsberührung kommt, um die Strömung durch das chromatographisches Medium 872 zu beginnen. Anschließend verursacht das In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile 862 und 864, dass der zweite Applikator 888 mit dem zweiten Leiter 880 in Betriebsberührung kommt, und dass der Absorber 890 mit dem ersten Leiter 878 in Betriebsberührung kommt, wobei die Richtung der Strömung durch das chromatographische Medium 872 umgekehrt wird.
Bei einer Abwandlung dieser Ausführungsform der Vorrichtung kann die Erfassungszone zwei oder mehr Banden eines sekundären spezifischen Bindungspartners, wie vorstehend in Abschnitt II (B) beschrieben, einschließen. Diese kann die Menge des markierten Drei-Bestandteile-Komplexes, der zur Bindung zur Verfügung steht, titrieren, um durch die Anzahl sichtbarer Banden in der Erfassungszone die Analytmenge anzuzeigen, die in der Testprobe vorliegt.

E. Vorrichtung mit zwei Bestandteilen für kompetitive Hemmungs-Immunoassays

Eine weitere Ausführungsform einer chromatographischen Untersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung ist zur Durchführung kompetitiver Immunoassays geeignet. Diese Vorrichtung ergibt einen positiven Hinweis auf die Analyt-Konzentration, indem sie ein erfassbares Signal ergibt, wenn der Analyt in der Testprobe vorliegt.
Diese Ausführungsform ist eine Vorrichtung mit zwei Bestandteilen und die Strömung ist in der gesamten Vorrichtung unidirektional. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil schließt ein chromatographisches Medium mit einem ersten Ende und einem zweiten Ende ein. Das chromatographische Medium weist daran immobilisiert Folgendes auf: (1) ein Analyt-Analog, das zur Bindung eines spezifischen Bindungspartners für den Analyten in der Lage ist und (2) einen sekundären spezifischen Bindungspartner, der zur Bindung eines spezifischen Bindungspaar-Teils in der Lage ist, der eine Affinität für den Analyten aufweist, wobei dem sekundären spezifischen Bindungspartner selbst die Affinität zum Analyten fehlt. Die Bestandteile sind auf dem chromatographischen Medium in einzelnen getrennten und nicht überlappenden Flächen angeordnet. Das Analyt-Analog befindet sich näher am ersten Ende des chromatographischen Mediums, als der sekundäre spezifische Bindungspartner.
Das Analyt-Analog ist kovalent an ein Proteinmolekül, wie beispielsweise ein unspezifisches Immunglobulin, gebunden, das an das chromatographische Medium gebunden werden kann.
Das Proteinmolekül sollte keine Bindungsaffinität zum Analyten oder für einen spezifischen Bindungspartner zum Analyten aufweisen.
Der sekundäre spezifische Bindungspartner bindet spezifisch einen spezifischen Bindungspartner für den Analyten auf der Grundlage einer Spezies-spezifischen Determinante, wie vorstehend beschrieben. Die Wechselwirkung zwischen dem sekundären spezifischen Bindungspartner und dem spezifischen Bindungspartner für den Analyten schließt die Antigen- Bindungsstellen des spezifischen Bindungspartners für den Analyten nicht ein.
Der erste gegenüberstellbare Bestandteil schließt weiterhin einen Leiter in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums ein. Vorzugsweise schließt der erste gegenüberstellbare Bestandteil weiterhin einen Absorber in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums ein.
Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil schließt einen Applikator ein, der einen spezifischen Bindungspartner für den Analyten enthält, der mit einer erfassbaren Markierung markiert ist. Vorzugsweise ist die erfassbare Markierung eine visuell erfassbare Markierung, wie beispielsweise ein Metall-Sol. Bei einer Alternative kann der zweite gegenüberstellbare Bestandteil weiterhin einen Absorber einschliessen, der vom Applikator getrennt ist, wenn dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil ein Absorber fehlt. Vorzugsweise schließt der zweite gegenüberstellbare Bestandteil weiterhin eine Öffnung ein, um eine Betrachtung eines Teils des chromatographischen Mediums zu ermöglichen. Vorzugsweise ermöglicht die Öffnung eine Betrachtung der Fläche des sekundären spezifischen Bindungspartners und nicht der Fläche des Analyt-Analogs.
Bei Gebrauch wird die zu testende Probe auf den Applikator aufgebracht, um den markierten spezifischen Bindungspartner wieder aufzulösen. Typischerweise wird die Probe mit dem spezifischen Bindungspartner für ungefähr 1 Minute bis ungefähr 3 Minuten inkubiert, obwohl diese Zeitspanne erhöht werden kann, wenn eine höhere Empfindlichkeit erwünscht ist.
Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile werden dann in Gegenüberstellung gebracht, wodurch der Inhalt des Applikators auf den Leiter und dann auf das erste Ende des chromatographischen Mediums aufgebracht wird. Ein in einer positiven Testprobe vorliegender Analyt besetzt die Analyt-Bindungsstellen auf dem markierten spezifischen Bindungspartner, so dass der markierte spezifische Bindungspartner nicht an das Analyt-Analog auf dem chromatographischen Medium bindet. Statt dessen rückt der markierte spezifische Bindungspartner zu dem Bereich des sekundären spezifischen Bindungspartners vor, an dem er gebunden wird und eine erfassbare Linie bildet, die einen positiven Hinweis auf das Vorhandensein eines Analyten ergibt.
Bei Fehlen eines Analyten in der Testprobe wird der gesamte markierte spezifische Bindungspartner für den Analyten durch das Analyt-Analog gebunden und erreicht den sekundären spezifischen Bindungspartner nicht. Die Reagenzmengen, die verwendet werden, können titriert werden, so dass die Analyt-Konzentration, die zur Erzeugung einer positiven Antwort bzw. Reaktion erforderlich ist, eingestellt werden können, um klinischen oder pharmakologischen Erfordernissen zu entsprechen.
Eine Vorrichtung, die für diese Ausführungsform des kompetitiven Immunoassays geeignet ist, ist in Fig. 27 dargestellt. Die Vorrichtung 900 weist einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 902 und einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 904 auf, der durch ein Gelenk 906 gelenkig befestigt ist. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 902 weist ein chromatographisches Medium 908 mit einem ersten Ende 910 und einem zweiten Ende 912 auf. Das chromatographische Medium 908 weist eine Fläche eines daran immobilisierten Analyt-Analogs 914 und eine nicht überlappende Fläche eines daran immobilisierten sekundären spezifischen Bindungspartners 916 auf. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 902 weist weiterhin einen Leiter 918 in Betriebsberührung mit dem ersten Ende 910 des chromatographischen Mediums 908 und einen Absorber 920 in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende 912 des chromatographischen Mediums 908 auf.
Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 904 schließt einen Applikator 922 ein, der den markierten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in einer Form enthält, die durch die Zugabe der Probe wieder aufgelöst werden kann. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 904 schließt weiterhin eine Öffnung 924 ein, um eine Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums 908 zu ermöglichen. Vorzugsweise ermöglicht die Öffnung 924 eine Betrachtung der Fläche des sekundären spezifischen Bindungspartners 916 und nicht der Fläche des Analyt-Analogs 914. Die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile schließen weiterhin Eingriffseinrichtungen 923 und 925 und eine Dichtung 926, wie vorstehend beschrieben, für Vorrichtungen mit zwei Bestandteilen ein.
Bei einer anderen Variante dieser Ausführungsform der Vorrichtung kann die Erfassungszone zwei oder mehrere Banden eines sekundären spezifischen Bindungspartners einschließen, um eine halbquantitative Anzeige einer Analyt-Konzentration in der Testprobe, wie vorstehend in Abschnitt II (B) beschrieben, zu ergeben. Diese titriert die Menge an markiertem spezifischen Bindungspartner, der zur Bindung zur Verfügung steht, um die Analytmenge, die in der Testprobe vorliegt, durch die Anzahl an Banden anzuzeigen, die in der Erfassungszone sichtbar sind.

III. Analyten und Antikörper zur Verwendung mit den Untersuchungsvorrichtungen

Die zur Erfassung mit einer Untersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung geeigneten Analyten schließen Antigene, Haptene und Antikörper ein. Mit der Vorrichtung erfassbare Antigene schließen Hämoglobin, Streptococcus A und -B-Antigene, Antigene, die für den Protozoenparasit Giardia spezifisch sind und virale Antigene, einschließlich Antigene ein, die für HIV und das Australia-Antigen, das für Hepatitis spezifisch ist, spezifisch sind. Antikörper, die untersucht werden können, schließen Antikörper für Bakterien, wie beispielsweise Helicobacter pylori und für Viren, einschließlich HIV ein. Haptene, die erfassbar sind, schließen die Haptene ein, die vorstehend in Abschnitt III aufgezählt sind, ebenso wie weitere Haptene ein, zu denen Antikörper ausreichender Spezifität erzeugt werden können.
Wenn der Analyt ein Antigen oder ein Hapten ist und ein Sandwich-Verfahren angewendet wird, sind die ersten und zweiten spezifischen Bindungspartner vorzugsweise Antikörper. Bei vielen Anwendungen wird bevorzugt, dass die ersten und zweiten spezifischen Bindungspartner Antikörper für verschiedene Epitope auf dem Analyten sind, dies ist jedoch nicht erforderlich. Die Antikörper können polyclonal oder monoclonal und können IgG, IgM oder IgA sein. Bei vielen Anwendungen werden polyclonale Antikörper bevorzugt, weil ihre natürliche Veränderlichkeit eine genauere Erfassung in Systemen ermöglichen kann, in denen ein Antigen-Polymorphismus besteht oder bestehen kann.
Wenn der Analyt ein Hapten ist und ein Sandwich-Untersuchungsverfahren verwendet wird, wird es stark bevorzugt, dass die ersten und zweiten spezifischen Bindungspartner Antikörper für verschiedene Epitope sind; anderenfalls kann eine unerwünschte Konkurrenzreaktion verursacht werden, die die Bindung des Komplexes des markierten spezifischen Bindungspartners und des Analyten an den immobilisierten zweiten spezifischen Bindungspartner stören kann. Es wird eingeräumt, dass nicht alle Haptene groß genug sind, um mehr als ein Epitop unterzubringen; jedoch sind manche Haptene, obwohl sie nicht groß genug sind, um eine Antigen-Bildung zu induzieren, wenn sie selbst injiziert werden, nichtsdestoweniger groß genug, um mehr als ein Epitop zu besitzen. In Fällen, in denen Antikörper zu mehr als einem Epitop eines Haptens nicht erhältlich sind, werden kompetitive Untersuchungsverfahren im Allgemeinen bevorzugt.
Wenn der Analyt ein Antikörper ist und ein Sandwich-Untersuchungsverfahren verwendet wird, ist der erste spezifische Bindungspartner typischerweise ein markierter Antikörper, der an den Analyten auf der Grundlage einer Spezies-, Klassen- oder Subklassen- (Isotyp-)Spezifität bindet. Es wird stark bevorzugt, dass der erste spezifische Bindungspartner zu einem Antikörper-Analyten an die konstante Region des Antikörper-Analyten bindet, um eine Störung zu vermei den. Wenn der Analyt ein Antikörper ist, ist der sekundäre spezifische Bindungspartner bevorzugt ein Antigen oder Hapten, für das der Antikörper-Analyt spezifisch ist.
Bei einigen Anwendungen ist es wünschenswert, eine indirekte Markierung zu verwenden. Beispielsweise kann beim Testen auf Giardia-Antigen ein IgM-Antikörper verwendet werden, der schwierig direkt zu markieren ist. In diesem Fall kann ein sekundärer spezifische Bindungspartner, der für den beweglichen ersten spezifischen Bindungspartner spezifisch ist, markiert werden. Typischerweise bindet der markierte sekundäre spezifische Bindungspartner an den Antikörper, der der erste spezifische Bindungspartner ist, auf der Grundlage einer Spezies-, Klassen- oder Subklassen-Spezifität.
Als eine Alternative zur Verwendung eines sekundären spezifischen Bindungspartners kann der erste spezifische Bindungspartner an Biotin konjugiert werden und eine Avidin- konjugierte Markierung kann verwendet werden.
Diese Beziehungen zwischen Analyten, spezifischen Bindungspartnern und Markierungen für Sandwich-Immunoassays werden in Tabelle 1 nachstehend zusammengefasst. Tabelle I Bindungsschemata für Sandwich-Immunoassays
Ag = Antigen
H = Hapten
Ak = Antikörper
Ak&sub1; = 1. Antikörper
Ak&sub2; = 2. Antikörper
Akc, Akc1, Akc2 = Antikörper, der für einen anderen Antikörper spezifisch ist
Bi = Biotin
Av = Avidin
M = Markierung
* zeigt markierten Bestandteil an
(1) Ak&sub2; und Ak&sub1;* binden bevorzugt an verschiedene Epitope;
nicht alle Haptene besitzen derartig unterschiedliche Epitope.
Die Beziehungen zwischen Analyten, spezifischen Bindungspartnern, Markierungen und anderen Teilnehmern in den Reaktionsschemata für kompetitive Immunoassays sind in Tabelle 2 nachstehend dargestellt. Tabelle II Bindungsschemata für kompetitive Untersuchungen
H: Hapten
Ak&sub1;, Ak&sub2;: Erste und zweite Antikörper, die für ein Hapten spezifisch sind
Ig: Immunglobulin, dem eine spezifische Bindungsaktivität fehlt
Aks: Sekundärer Antikörper, der Ak&sub1; oder Ak&sub2; bindet
Bi: Biotin
Av: Avidin
M: Markierung
-: nicht-kovalente Bindung
=: kovalente Bindung

IV. Testbausätze

Ein weiterer Grundgedanke der vorliegenden Erfindung sind Testbausätze, die zur Erfassung spezieller Analyten verwendet werden können. Ein Testbausatz umfasst in getrennten Behältern:
(1) eine chromatographische Untersuchungsvorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung;
(2) irgendwelche notwendigen Reagenzien, die zur Behandlung oder zur Extraktion der Probe erforderlich sind; und
(3) wahlweise, wenn die Untersuchungsvorrichtung einen markierten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form, die wieder aufgelöst werden kann, nicht einschließt, den erforderlichen spezifischen Bindungspartner.
Die Bestandteile, die in (2) und (3) erforderlich sind, sind getrennt verpackt und können in flüssiger oder fester Form (gefriergetrocknet, kristallisiert, ausgefällt oder aggregiert) vorliegen. Bei Letzterem werden sie durch den Verwender typischerweise mit destilliertem oder gereinigtem Wasser, mit physiologischer Salzlösung oder einer Pufferlösung wieder aufgelöst.
In manchen Fällen können Testbausätze weiterhin ein Rekonstitutionsströmungsmittel für ein Reagenz einschließen, das auf der Vorrichtung in wieder auflösbarer Form vorliegt, entweder ein spezifischer Bindungspartner oder ein. Analyt- Analog. Spezielle Beispiele sind vorstehend offenbart, mit der Offenbarung des Betriebs jeder Vorrichtungsart.
Noch weitere Abwandlungen von Testvorrichungen gemäß der vorliegenden Erfindung sind möglich. Beispielsweise können irgendwelche der Vorrichungen mit zwei Bestandteilen, die beschrieben wurden, eine Abdeckung aufweisen, die an einem der gegenüberstellbaren Bestandteile gelenkig befestigt ist. Diese Abdeckung kann eine Öffnung aufweisen, die darin eingeschnitten ist, um eine Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums zu ermöglichen. Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele veranschaulicht. Die Beispiele sind nur zu Veranschaulichungszwecken vorgesehen und sollen nicht als den Umfang der Erfindung in irgendeiner Weise einschränkend ausgelegt werden.

Beispiele

Beispiel 1

Aufbau einer Vorrichtung zur Erfassung von Streptokokkenantigen

Eine Vorrichtung zur Erfassung von Streptococcus A-Antigen wurde unter Verwendung eines markierten Antikörpers zu Streptococcus A-Antigen aufgebaut. Die Vorrichtung war im Wesentlichen wie in Fig. 28 dargestellt aufgebaut.
Fig. 28 stellt eine chromatographische Untersuchungs- Vorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung mit einem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 942, einem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 944, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil 942 gelenkig befestigt ist, und eine Abdeckung 946 dar, die am zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 944 gelenkig befestigt ist. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 942 schließt ein chromatographisches Medium 948 ein. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil 944 schließt ein Band 952 ein, das ein tränenförmiges Behältnis 950 durch die Spannung des Bandes 952, das über den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil 944 ausgespannt ist, festhält bzw. am Ort hält. Das tränenförmige Behältnis 950 bildet eine Wanne, wenn es durch die Spannung des Bandes 952 festgehalten wird. Der erste gegenüberstellbare Bestandteil 942 enthält ein erstes Fenster 954 und die Abdeckung 946 enthält ein zweites Fenster 956.
Die gegenüberstellbaren Bestandteile werden aus einem harten, undurchlässigen Kunststoff, wie beispielsweise Polycarbonat hergestellt. Die ersten und zweiten gegen überstellbaren Bestandteile weisen ebenso wie die Abdeckung eine Länge von ungefähr 7,62 cm (3 Zoll) auf; der erste gegenüberstellbare Bestandteil wies eine Breite von ungefähr 5,71 cm (2,25 Zoll) auf, während der zweite gegenüberstellbare Bestandteil und die Abdeckung jeweils eine Breite von ungefähr 6,04 cm (2,375 Zoll) aufwiesen. Der zweite gegenüberstellbare Bestandteil war mit einem Schaumstoffbehältnis ausgelegt, in das eine tränenförmige Wanne geschnitten wurde, um einen Pinsel oder eine andere Probenentnahmevorrichtung aufzunehmen. Der Pinsel wurde mit einem getrennt in den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil über die Wanne hinweg eingefügten Band am Ort festgehalten.
Das chromatographische Medium war ein Nitrocellulose- Streifen einer Porengröße von 8 um und einer Länge von 1,27 cm (0,5 Zoll) (MSI, Westborough, Mass.), das am Träger mittels eines doppelseitigen Bandes (3M, Minneapolis, Minnesota) befestigt war. Der Leiter und der Absorber waren Cellulose-Streifen (Ahlstrom Filtration, Holly Springs, Pennsylvania) mit einer Länge von 1,35 cm (17/32 Zoll) für den Absorber, der Ahlstrom-Güte 939 aufwies und mit einer Länge von 0,635 cm (0,25 Zoll) für den Leiter, der Ahlstrom- Güte 1281 aufwies. Das Detektoraufbringungskissen wies ebenfalls Ahlstrom-Güte 1281 und eine Breite von 0,95 cm (0,375 Zoll) auf. Das Detektoraufbringungskissen überlappte leicht mit dem Leiter, der wiederum leicht mit dem chromatographischen Medium an seinem ersten Ende überlappte. Das chromatographische Medium überlappte leicht an seinem zweiten Ende mit dem Absorber.
Die erforderlichen Reagenzien wurden zuerst in das chromatographische Medium und das Detektoraufbringungskissen eingebracht, wonach die Vorrichtung unter Verwendung eines doppelseitigen Bandes zusammengesetzt wurde, um die Bestandteile am Träger festzuhalten.
Die Erfassungszone umfasste Kaninchen-Anti-Streptococcus A- Antikörper zu 2 mg/ml in 0,001 Mol/l Phosphat-gepufferter Salzlösung, pH 7,2. Die Kontrollzone umfasste Ziegen-Anti- Kaninchen-IgG in einer ähnlichen Konzentration in demselben Puffer. Die Antikörperlösungen wurden auf die geeigneten Bereiche des chromatographischen Mediums aufgebracht und bei 37,8ºC (100ºF) in einer Umgebung mit niedriger Feuchtigkeit getrocknet. Das chromatographische Medium wurde in überschüssiger Blockierungslösung (Blocking Reagent for ELISA, Boehringer Mannheim, Mannheim, Deutschland, verdünnt 1 : 10 mit destilliertem Wasser, das 0,2% Tween 20® enthielt) angefeuchtet und wiederum bei 37,8ºC (100ºF) getrocknet.
Das Detektoraufbringungskissen enthielt Kaninchen-Anti- Streptococcus-Antikörper, der mit 40 nm kolloidalen Goldteilchen markiert war. Um den markierten Antikörper auf das Detektoraufbringungskissen aufzubringen, wurden der markierte Antikörper 1 : 1,5 mit DBN (1,5 Mol/l Tris-HCl, pH 7,4, 1% (V/V) Tween 20®, 0,4% (V/V) Brij 35®, 0.02% (G/V) Natriumazid, 3 mg/ml Kaninchen-IgG) verdünnt. Pro Test wurden 15 ul verdünnter markierter Antikörper dem Detektoraufbringungskissen zugesetzt. Das Detektoraufbringungskissen wurde für 30 Minuten bei 37,8ºC (100ºF) getrocknet.

Beispiel 2

Erfassung von Streptokokken-Antigen unter Verwendung der Vorrichtung nach Beispiel 1

Die Vorrichtung nach Beispiel 1 wurde zur Erfassung von Streptococcus A-Antigen verwendet. Ein gewobener Dacron®- Tupfer, dem verschiedene Mengen Streptococcus-Typ A- Bakterien zugesetzt wurden, wurde in die Testwanne eingesetzt. Drei Tropfen Extraktionsreagenz A (0,25% Essigsäure, 5% Tween 20®) und drei Tropfen Extraktionsreagenz B (2 Mol/l Natriumnitrit, 5% Tween 20®) wurden dem Tupfer zugesetzt, durch sanftes Schwenken des Tupfers gemischt und für eine Minute inkubiert. Die Vorrichtung wurde dann geschlossen, so dass die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Berührung gebracht wurden und die Abdeckung wurde dann über den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil gefaltet. Das Ergebnis wurde nach einer Inkubationszeit von 2 Minuten bis 5 Minuten abgelesen. Die Entwicklung eines pink-roten Bandes in der Erfassungszone des chromatographischen Mediums zeigte die Erfassung von Streptococcus A-Antigen an.
Die Vorrichtung nach Beispiel 1 konnte 1 · 10&sup5; Streptococcus A-Organismen nach einer 2-minütigen Inkubation erfassen und konnte 5 · 10&sup4; Streptococcus A-Organismen nach einer 5- minütigen Inkubation erfassen. Zum Vergleich konnte der Concise TM Immunoassay von Hybritech (La Jolla, Kalifornien) 1 · 10&sup5; Streptococcus A-Organismen nur nach einer 5-minütigen Inkubation erfassen und konnte 5 · 10&sup4; Streptococcus A- Organismen sogar nach einer 20-minütigen Inkubation nicht erfassen. In ähnlicher Weise konnte der SmartTM Immunoassay der Fa. New Horizons 1 · 10&sup5; Streptococcus A-Organismen nur nach einer 7-minütigen Inkubation erfassen und ergab ein zweideutiges Ergebnis bei 5 · 10&sup4; Streptococcus A-Organismen nach einer 7-minütigen Inkubation.

Beispiel 3

Kompetitiver Immunoassay für Theophyllin unter Verwendung einer Untersuchungsvorrichtung mit drei Bestandteilen

Eine Vorrichtung für einen kompetitiven Immunoassay wurde aufgebaut, um den Bronchodilator Theophyllin zu erfassen. Eine 12 Mikrometer Nitrocellulose-Membran von Schleicher und Schuell (Keene, New Hampshire) wurde an einem doppelseitigen Klebemittel in 6,35 cm (2,5 Zoll) mal 1,75 cm (11/16 Zoll)- Blöcken befestigt. Ein Theophyllin-Analog, das zur hydrophoben Bindung an Nitrocellulose in der Lage ist, wurde durch kovalente Bindung von Theophyllin an normales Kaninchen-Immunglobulin G durch das folgende Verfahren hergestellt: eine Lösung von 8-(3-carboxypropyl)-1,3- dimethylxanthin (18 mg, 0,068 mM) in 2 ml Tetrahydrofuran und 1 ml Dimethylformamid wurde mit N-hydroxysuccinimid (17 mg, 0,15 mM) und Dicyclohexylcarbodiimid (27 mg, 0,13 mM) behandelt. Nach Stehenlassen bei Raumtemperatur über Nacht wurde die Reaktionsmischung für 2 Stunden abgekühlt bzw. tiefgekühlt und dann durch Glaswolle filtriert. Die Kristalle aus der Reaktionsmischung wurden mit Tetrahydrofuran gewaschen und die Lösungen wurden vereinigt. Die Lösungsmittel wurden unter Vakuum entfernt und der Rückstand wurde mit 3-4 ml Diethylether gewaschen, um überschüssiges Carbodiimid zu entfernen. Der gewaschene Rückstand wurde in 1 ml Dimethylformamid gewaschen. Normales Kaninchen-IgG (3,75 ml einer 13,7 mg/ml-Lösung) wurde dann mit Wasser auf 10 ml verdünnt. Der aktive N-hydroxysuccinimidester wurde der Immunglobulin G-Lösung langsam zugesetzt, gefolgt von 10 ul Triethylamin. Somit enthielt die Reaktionsmischung ungefähr 190 Äquivalente an aktivem Ester pro Mol Protein. Die Reaktionsmischung wurde im Kühlschrank für 3 Tage stehen gelassen.
10 ul einer Lösung des Theophyllin-Kaninchen-IgG-Konjugats (1 mg/ml in 0,05 M Phosphatpuffer) wurden gleichmäßig über eine Hamilton-Spritze quer über den oberen Bereich der 6,35 cm (2,5 Zoll) Länge der Membranen aufgebracht. Die Membranen wurden in einem Trockenapparat für 15 Minuten getrocknet, dann in eine Protein-Blockierungslösung (0,2% fettfreie getrocknete Milch, 0,2% Tween 20®) eingetaucht und für weitere 15 Minuten erneut getrocknet. Die Linie des Theophyllin-Kaninchen-Immunglobulin G wurde als das Oberteil der Membran bezeichnet. Ein 0,635 cm (1/4 Zoll)- Streifen von Ahlstrom Cytosep 799-13 (Ahlstrom Filtration) wurde an das Oberteil der Membrane angehängt, um als ein Leitungsbereich zu dienen. Ein zweites Leitungsband einer Ahlstrom 992- Membran wurde an dem unteren Bereich der Membran befestigt. Die Membranblöcke wurden dann in 0,635 cm (1/4 Zoll)- Streifen geschnitten und getrocknet aufbewahrt.
Für Reagenzkissen wurden Quadrate aus 0,635 cm (1/4 Zoll) · 0,635 cm (1/4 Zoll) Lipore (Güte 9254 Glasfaserfilter, Lydall Technical Papers, Rochester, New Hampshire) ausgeschnitten. Für das erste Reagenzkissen wurden 40 ul Anti- Theophyllin-Antikörper (Maus-monoklonal, O.E.M. Concepts, Toms River, New Jersey) in einer Konzentration vor. 180 ug/ml eines trocknenden/ stabilisierenden Puffers (0,5 M Tris-HCl, pH 7,2, 0,1% Tween 20®, 0,1% Brij-35®, 1,0% Rinderserumalbumin) auf das Kissen aufgebracht und für 2 Stunden getrocknet. Für das zweite Reagenzkissen wurden 20 ul einer Arbeitsverdünnung von Anti-Theophyllin-Goldkonjugat (E-Y Laboratories) unter Verwendung eines monoklonalen Anti- Theophyllin-Antikörpers auf das Kissen aufgebracht; das zweite Reagenzkissen wurde ebenfalls für 2 Stunden getrocknet.
Die Membranstreifen wurden in einem Pappegehäuse derartig befestigt, dass die Theophyllin-Kaninchen-IgG-Linie durch die Gehäusefenster sichtbar waren, wie in Fig. 23 dargestellt. Das erste Reagenzkissen, das Anti-Theophyllin- Antikörper enthielt, wurde im oberen Bereich des linken Drittels des Gehäuses so angeordnet, dass, wenn es geschlossen war, es den oberen Leitungs-Bereich auf der Membran berühren würde, wie Applikator 764 in Fig. 23. Das zweite Reagenzkissen, das das Anti-Theophyllin-Goldkonjugat enthielt, wurde im unteren Bereich des rechten Drittels des Gehäuses so angeordnet, dass es den unteren Leitungsbereich der Membran berühren würde, wie Applikator 768 in Fig. 23. Ein 2 · 2 cm Quadrat von Ahlstrom 270 wurde als ein absorbierendes Kissen verwendet und wurde im oberen Bereich des rechten Drittels des Gehäuses derartig angeordnet, dass, wenn das rechte Drittel über dem Zentrum geschlossen wurde, es mit dem oberen Leitungsbereich in Berührung kam.

Beispiel 4

Konjugat von Atrazin mit Kaninchen- und Ziegen-Immunglobulin G

Um die Durchführbarkeit der Konjugation von Haptenen an Immunglobulin G zu demonstrieren, wurden Konjugate von Atrazin mit Kaninchen- und Ziegen-Immunglobulin G hergestellt. Für das Konjugat mit Kaninchen-Immunglobulin G wurde Kaninchen-IgG (34,1 mg in 5 ml Phosphat-gepufferter Salzlösung) mit 12 mg Thiolacetylbernsteinsäureanhydrid und 20 ul Triethylamin (ungefähr 300 Äquivalente Anhydrid pro Mol Protein) behandelt. Die Lösung wurde über Nacht im Kühlschrank stehen gelassen und wurde dann einmal gegen 2 Liter Wasser und viermal gegen 2 Liter Phosphat-gepufferter Salzlösung dialysiert. Eine Lösung von Hydroxylaminhydrochlorid wurde in einer Konzentration von 63 mg/ml hergestellt. Dem wie vorstehend erzeugten Kaninchen-IgG in 8 ml PBS wurden 52 ul der Hydroxylaminlösung (3,3 mg, ungefähr 200 Äquivalente) zugesetzt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur für 45 Minuten stehen gelassen.
Ein Atrazin-Derivat, bei dem die endständige Methylgruppe des Substituenten am Stickstoff aktiviert ist, wurde in Acetonitril zu einer Konzentration von 19,7 mg/ml aufgelöst. Ein Teil dieser Lösung (200 Äquivalente, 16,6 mg, 844 ul) wurde der Kaninchen-IgG-Thiollösung zugesetzt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur über Nacht stehen gelassen.
Ein ähnliches Verfahren wurde verwendet, um das Atrazin an Ziegen-Immunglobulin G zu binden. Ziegen-IgG (7,8 mg in 1,5 ml PBS) wurde mit 8 mg Thiolacetylbernsteinsäureanhydrid und 10 ul Triethylamin behandelt. Die Lösung wurde im Kühlschrank über Nacht stehen gelassen und dann wie für das Kaninchen-IgG dialysiert. Die dialysierte Ziegen-IgG-Lösung wurde mit 10 ul Hydroxylamin-Lösung (0,75 mg, ungefähr 200 Äquivalente) behandelt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur für 45 Minuten stehen gelassen. Eine zweite Menge des Atrazin-Derivats (200 Äquivalente, 3,8 mg, 190 ul) wurde der Ziegen-IgG-Thiollösung zugesetzt und über Nacht reagieren gelassen. Ein ELISA (ELISA = enzym linked immunosorbant assay), bei dem das Ziegen-IgG-Atrazin-Konjugat auf Polystyrol-Mikrotiter-Platten immobilisiert war, zeigte, dass die Reaktion erfolgreich war.

Beispiel 5

Vorrichtung für einen kompetitiven Immunoassay unter Verwendung eines markierten Drei-Bestandteile-Konjugats

Eine kompetitive Immunoassay-Vorrichtung gemäß der vorliegenden Erfindung zur Erfassung von Theophyllin unter Verwendung eines markierten Drei-Bestandteile-Konjugats wurde konstruiert. Die Vorrichtung war eine Vorrichtung mit zwei Bestandteilen und mit einer Abdeckung, die derjenigen in Fig. 24 vorstehend dargestellten Vorrichtung, ähnlich war. Die hier beschriebenen Ausrichtungen sind bezüglich der Vorrichtung, wie in dieser Figur dargestellt, seitlich ausgerichtet.
Eine Nitrocellulose-Membran (12 um Porengröße) (Schleicher und Schuell) wurde am doppelseitigen Klebemittel (3 M) in 6,35 cm (2,5 Zoll) · 1,75 cm (11/16 Zoll)-Blöcken befestigt. Ein Block aus durchsichtigem Kunststoff wurde bereits an der Hinterseite des Klebemittels positioniert. Ein monoklonaler Anti-Theophyllin-Antikörper (s. Beispiel 4) in Phosphatgepufferter Salzlösung (10 ul) wurde gleichmäßig mit einer Hamilton-Spritze quer über den oberen Bereich der 6,35 cm (2,5 Zoll) Länge der Nitrocellulose-Membran aufgebracht, 0,79 cm (5/16 Zoll) vom bezeichneten Oberteil entfernt. Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG wurde von Pel-Freez Biologicals (Rogers, Arkansas) bezogen. Reines IgG wurde aus dem Serum durch Fällung mit Caprylsäure und Ammoniumsulfat gewonnen. 10 ul gereinigten Ziegen-Anti-Kaninchen-IgGs (3,5 mg/ml in Phosphat-gepufferter Salzlösung) wurden über die erste Linie von Anti-Theophyllin-Antikörper, 0,32 cm (1/8 Zoll) vom oberen Ende entfernt aufgebracht. Die Membranen wurden in einem umlaufenden Trockenapparat für 10 Minuten getrocknet, dann in Blockierungslösung (s. Beispiel 4) eingetaucht und erneut für 15 Minuten getrocknet. Eine 0,635 cm (1/4 Zoll) Bande von Ahlstrom 1281 (Ahlstrom Filtration) wurde am oberen Teil der Membrane angeheftet, um als ein Leitungsbereich zu dienen. Eine zweites Leitungsband, Ahlstrom 992, wurde am unteren Bereich befestigt. Die Membran-Blocks wurden dann in 0,635 cm (1/4 Zoll)-Streifen geschnitten.
Für die Reagenzkissen wurden 0,635 cm · 0,635 cm (1/4 · 1/4 Zoll) Quadrate Ahlstrom 1281 geschnitten. Vorverdünntes Theophyllin-Kaninchen-IgG-Gold (E. Y. Laboratories) wurden auf jedes Quadrat aufgebracht. Die Quadrate wurden für 2 Stunden getrocknet. Membranstreifen wurden im Gehäuse derartig befestigt, dass nur die oberste Ziegen-Anti-Kaninchen- IgG-Linie am oberen Ende durch die Fenster sichtbar war. Das Reagenzkissen wurde im unteren Bereich des linken Drittels des Gehäuses derartig angeordnet, dass, wenn es über das Zentralfeld geschlossen wurde, mit dem unteren Leitungsbereich auf der Membran in Berührung kommen würde. Ein 2 · 2 cm Quadrat Ahlstrom 270 wurde im oberen Bereich des linken Drittels des Gehäuses angeordnet, gerade oberhalb des Fensters, wo es als ein absorbierendes Kissen dienen würde. Es wurde positioniert, um den oberen Leitungsbereich der Membran zu berühren, wenn die Vorrichtung geschlossen war.

Beispiel 6

Vorrichtung mit zwei Bestandteilen für einen kompetitiven Hemmungs-Immunoassay

Eine Vorrichtung mit zwei Bestandteilen wurde unter Verwendung der Nitrocellulose-Membranstreifen, des Klebemittels und der Reagenzkissen von Beispiel 4, siehe oben, aufgebaut. Die Vorrichtung war derjenigen in Fig. 27, siehe oben, dargestellten Vorrichtung ähnlich. Die hier beschriebenen Ausrichtungen sind bezüglich der Vorrichtung, wie in dieser Figur dargestellt, seitlich ausgerichtet. Zwei Linien wurden auf der chromatographischen Nitrocellulose- Membran immobilisiert. Die erste Linie enthielt 10 ul Affinitäts-gereinigtes Ziegen-Anti-Maus-IgG (O.E.M. Concepts), verdünnt in Trocknungspuffer (0,01 M Phosphat, 3% Saccharose, 0,5% Rinderserumalbumin, 0,5% Tween 20®, 0,05% Natriumazid (pH 7,4)). Die zweite Linie enthielt 10 ul des Theophyllin-Kaninchen-IgG-Konjugats von Beispiel 4 in 0,05 M Phosphatpuffer zu 1 ug/ml. Die Membranen wurden in einem Trockenapparat getrocknet und in Proteinblockierungslösung (0,1 M Tris-HCl, 0,1% Rinderserumalbumin, pH 7,4) eingetaucht, dann erneut getrocknet. Für den Applikator auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil wurden 20 ul einer Arbeitsverdünnung von monoklonalen Maus-Anti-Theophyllin- Antikörpern (O.E.M. Concepts), die mit Kolloidalgold (E-Y Laboratories) konjugiert waren, in Trocknungspuffer aufgebracht und für 2 Stunden getrocknet.
Für die Untersuchung wurde Theophyllin (Aldrich Chemical, Milwaukee, Wisconsin) in Methanol aufgelöst, um eine Stammlösung zu bilden und nachfolgende Expansionen. bzw. Ausweitungen wurden in PBS oder Serum hergestellt. Die Probe (30 ul) wurde dem Applikator auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil zugesetzt, um das Anti-Theophyllin- Gold-Konjugat wieder aufzulösen. Nach einer 1-minütigen Inkubation wurden die beiden gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht, so dass der Applikator mit dem unteren Leiter auf dem Teststreifen in Berührung kam. Innerhalb 2 bis 5 Minuten erschien eine visuell erfassbare Linie an der Zone des Ziegen-Anti-Maus-IgG- Antikörpers, die einzige durch die Öffnung des Gehäuses sichtbare Linie. Es konnten so niedrige Konzentrationen wie ein ppb Theophyllin erfasst werden.

Beispiel 7

Vorrichtung mit zwei Bestandteilen für einen kompetitiven Immunoassay, der halbquantitative Ergebnisse liefert

Eine Vorrichtung mit zwei Bestandteilen für einen kompetitiven Immunoassay von Atrazin wurde gemäß Beispiel 9 aufgebaut, außer dass die Erfassungszone drei Linien Affinitäts-gereinigten Ziegen-Anti-Maus-IgG's (GAM) (O.E.M. Concepts) enthielt, zusätzlich zu einer Linie von Atrazin- Ziegen-IgG-Konjugat (Beispiel 6). Die dem Ziegen-IgG- Atrazin-Konjugat auf dem chromatographischen Medium nächste Linie enthielt den am meisten verdünnten Antikörper in einer Konzentration von 0,5 mg/ml; die anderen beiden Linien enthielten konzentriertere Antikörper, jeweils in einer Konzentration von 1,0 mg/ml. Monoklonaler Maus-Anti-Atrazin-Antikörper wurde von Agri-Diagnostics (Cinnaminson, N. J.) bezogen. Der Trocknungs/Stabilisierungspuffer für das Anti-Atrazin-Goldkonjugat, das auf den zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil aufgebracht wurde, war 4% Saccharose, 10 mM Phosphat, 0,5% Rinderserumalbumin, 0,25% Tween 20®, 0,05% Natriumazid, pH 7,4.
Für die Untersuchung wurde Atrazin (Supelco, Inc., Bellefonte, Pennsylvania) als ein Standard in Methanol aufgelöst und nachfolgend wurden Verdünnungen in entionisiertem Wasser zur Verwendung als Arbeitsstandards hergestellt. 30 ul Probe wurden dem Applikator auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil zugesetzt. Nach einer 1-minütigen Inkubation wurden die beiden gegenüberstellbaren Bestandteile zusammengebracht, um das wieder aufgelöste Anti-Atrazin-Gold auf das chromatographische Medium aufzubringen. Innerhalb von 3 Minuten ergab eine Atrazin-Konzentration in der Probe von 1 bis 10 ppb eine Linie auf dem chromatographischen Medium; eine Konzentration von 11 bis 100 ppb ergab zwei Linien und eine Konzentration von 101 bis 1000 ppb ergab drei Linien.

Vorteile der Erfindung

Chromatographische Untersuchungsvorrichtungen gemäß der vorliegenden Erfindung ergeben einen Vorteil, indem sie aus gegenüberstellbaren Elementen aufgebaut sind. Die Verwendung von gegenüberstellbaren Elementen ergibt sehr vielseitige Verwendungsmöglichkeiten, weil es die Durchführung von Reaktionen in einer Anzahl unterschiedlicher Reihenfolgen zulässt. Dies ist möglich, weil der Gebrauch derartiger gegenüberstellbarer Elemente die Zuführung von Reagenzien auf genau definierte Bereiche auf einem Teststreifen oder einem anderen Reaktionsbestandteil ermöglicht. Der Gebrauch gegenüberstellbarer Bestandteile ergibt weiterhin eine bestmögliche Leistung bei minimalem Verbrauch von Reagenzien, indem sicher gestellt wird, dass Reagenzien nicht verschwendet werden, indem sie in Totvolumen von Apparaturen abgesondert werden. Zuletzt ergibt der Gebrauch von gegenüberstellbaren Bestandteilen einen optimalen Einschluss von möglicherweise kontaminierten Blutproben, wie beispielsweise denjenigen, die den HIV- oder Hepatitis-Virus enthalten.
Ein weiterer Vorteil von Untersuchungsvorrichtungen gemäß der vorliegenden Erfindung liegt in der Fähigkeit der Vorrichtungen, Druck auszuüben, um Strömungsmittel von einem gegenüberstellbaren Bestandteil zum anderen und durch das chromatographische Medium zu treiben und den ausgeübten Druck so zu kontrollieren, dass er für jede auszuführende Untersuchung optimal ist. Dies beschleunigt den Untersuchungsvorgang und ermöglicht die Durchführung von Operationen, wie beispielsweise einer Extraktion innerhalb der Untersuchungsvorrichtung. Dies verringert weiterhin die Totvolumina von Reagenzien, die in den Bestandteilen zurückbleiben, wodurch der Gebrauch kleinerer Proben und kleinerer Mengen teurer oder schwer zu reinigender Reagenzien, wie beispielsweise markierter Antikörper, ermöglicht wird.
Zusätzlich ermöglichen die chromatographischen Untersuchungsvorrichtungen gemäß der vorliegenden Erfindung die schnelle und genaue Erfassung von klinisch wichtigen Analyten, wie beispielsweise von Streptococcus A und B- Antigen, von Hämoglobin zur Bestimmung von fäkalem Okkultblut und von Antikörpern zu Helicobacter pylori, ebenso wie von klinisch wichtigen Haptenen. Der Aufbau der Vorrichtungen ermöglicht eine gleichmäßigere Aufbringung der Proben auf das chromatographische Medium und verringert Störungen, die ansonsten durch teilchenförmiges Material oder farbige Proben eingeschleppt werden könnten. Der Gebrauch kolloidaler Metallmarkierungen in einer wieder auflösbaren Form ergibt eine extrem schnelle Markierungskinetik und ermöglicht eine im Wesentlichen vollständige Bildung binärer Analyt-Markierungskomplexe, bevor die Probe auf das chromatographische Medium aufgebracht wird. Dies unterstützt die Abtrennung von Verunreinigungen und verbessert die Leistung der Untersuchung. Zusätzlich hilft der Aufbau und die Anordnung des Gehäuses der Vorrichtung bei der Durchführung der Untersuchung, indem das Abziehen von überschüssiger Immunglobulin-enthaltender Probe sicher gestellt wird, die ansonsten Störungen erzeugen könnte.
Eine Extraktion biologischer Proben, wie beispielsweise Blut, Sputum oder Faeces kann direkt in den Vorrichtungen durchgeführt werden, wodurch die Menge an kontaminiertem Material verringert wird, die entsorgt werden muß und wodurch die Wahrscheinlichkeit einer zufälligen Infektion von Ärzten, Technikern oder der Öffentlichkeit durch ein derartig kontaminiertes Material verringert wird. Zusätzlich sind die Vorrichtungen dazu in der Lage, eine zweidirektionale Chromatographie durchzuführen, um die Genauigkeit zu erhöhen und Störungen zu verringern. Testverfahren unter Verwendung von Vorrichtungen gemäß der vorliegenden Erfindung weisen einen breiten dynamischen. Bereich auf und sind im Wesentlichen frei von falsch- negativen Ergebnissen, die bei anderen Testverfahren bei hohen Analytkonzentrationen auftreten können.
Obwohl die vorliegende Erfindung bezüglich bestimmter bevorzugter Varianten ziemlich detalliert beschrieben wurde, sind andere Varianten und Ausführungsformen möglich. Diese Varianten schließen andere Anordnungen von Vorrichtungen mit zwei oder drei Bestandteilen ein, die mit den hierin beschriebenen Grundprinzipien arbeiten und irgendetwas von Folgendem verwenden: (a) in situ-Extraktion von Proben; (b) Wieder-Auflösen eines markierten spezifischen Bindungspartners und schnelle Bindung an den Analyten; und (c) Anordnen des chromatographischen Mediums und des Absorbers, um überschüssige Probe zu entfernen, die ansonsten Störungen verursachen könnte. Diese Varianten schließen Untersuchungsvorrichtungen in verschiedenen Anordnungen ein, die für kompetitive Immunoassays ebenso wie für Sandwich- Immunoassays angepasst sind. Insbesondere können Vorrichtungen gemäß der vorliegenden Erfindung angepasst sein, um eher von radialer bzw. strahlenförmiger oder circumferentieller Strömung durch ein chromatographisches Medium als von linearer Strömung Gebrauch zu machen. Die vorliegende Erfindung enthält weiterhin Abwandlungen, bei denen die zwei oder drei Bestandteile der Vorrichtung nicht in einer dauerhaft befestigten Anordnung gehalten werden, sondern getrennt und zusammen gebracht werden können, um die Untersuchung durchzuführen, wie beispielsweise durch elektrische oder magnetische Kräfte oder durch Verwendung eines getrennten Beschleunigers, wie beispielsweise ein "hook-and- eye"-Erzeugnisses, beispielsweise Velcro®. Deswegen wird der Umfang der Erfindung durch die folgenden Ansprüche bestimmt.

Claims

1. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung zur Erfassung und/oder Bestimmung eines Analyten in einer Probe mit:

(a) einem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschließt:

(i) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden;

(ii) ein erstes Detektoraufbringungskissen in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums, wobei das erste Detektoraufbringungskissen zumindest ein Reagenz zur Erfassung des Analyten enthält;

(iii) einen Leiter zum Ermöglichen des Durchgangs eines Strömungsmittels, in Betriebsberührung mit dem ersten Detektoraufbringungskissen und in indirekter Berührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und

(iv) einen Absorber zum Absorbieren von Strömungsmittel in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums; und

b) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der eine Probenaufbereitungszone zur Aufnahme einer zu untersuchenden Probe einschließt, wobei der zweite gegenüberstellbare Bestandteil am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil so befestigbar ist, dass, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden, das Strömungsmittel vom zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil zum ersten gegenüberstellbaren Bestandteil übertragen wird;

wobei die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass eine Probe auf die Probenvorbereitungszone auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil aufgebracht werden kann, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile nicht in Gegenüberstellung sind und dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile zur Folge hat, dass die Probenvorbereitungszone mit dem Leiter in Berührung ist, um die zu testende Probe auf den. Leiter zur Strömung durch den Leiter und dann durch das erste Detektoraufbringungskissen auf das erste Ende des chromatographischen Mediums aufzubringen, um der Probe das Reagenz zur Erfassung des Analyten zuzusetzen, wobei die Strömung vom Leiter durch das erste Detektoraufbringungskissen zum ersten Ende des chromatographischen Mediums durch Absorption von Strömungsmittel durch den Absorber unterstützt wird.

2. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 1, bei der das erste Detektoraufbringungskissen auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum ersten Detektoraufbringungskissen wieder aufgelöst werden kann, wobei der erste spezifische Bindungspartner mit einer abtrennbaren Markierung markiert ist und wobei das chromatographische Medium weiterhin eine Erfassungszone einschließt, deren Fläche wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums ist, wobei die Erfassungszone daran immobilisiert einen zum Analyten spezifischen Bindungspartner enthält, derartig, dass sich ein Dreifachkomplex mit dem ersten spezifischen Bindungspartner, dem Analyten und dem zweiten spezifischen Bindungspartner auf der Erfassungszone bildet, wenn ein Analyt in der Probe vorhanden ist.

3. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 2, bei der der zweite gegenüberstellbare Bestandteil weiterhin ein zweites Detektoraufbringungskissen in Betriebsberührung mit der Probenaufbereitungszone einschließt, wobei das zweite Detektoraufbringungskissen einen zweiten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in einer Form enthält, die durch den Zusatz einer Probe zur Probenaufbereitungszone wieder aufgelöst werden kann, wobei der zweite spezifische Bindungspartner mit einer erfassbaren Markierung markiert ist und wobei das zweite Detektoraufbringungskissen sich an die Probenaufbereitungszone angrenzend auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil befindet, derartig, dass eine Aufbringung der Probe auf die Probenaufbereitungszone den zweiten spezifischen Bindungspartner so wieder auflöst, dass die Probenaufbereitungszone eine Mischung der Probe und des zweiten spezifischen Bindungspartners enthält.

4. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 3, bei der die erfassbaren Markierungen identisch und visuell erfassbar sind.

5. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung zur Erfassung und/oder Bestimmung eines Analyten in einer Probe mit:

(a) einem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschließt:

(i) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden; und

(ii) einen Leiter zum Ermöglichen des Durchgangs eines Strömungsmittels, in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und

(iii) eine Probenaufbereitungszone, die so gelegen ist, dass der Leiter mit der Probenaufbereitungszone in Betriebsberührung ist, so dass der Leiter die Probenaufbereitungszone und das chromatographische Medium überbrückt, um eine Strömungsmittelströmung von der Probenaufbereitungszone durch den Leiter und durch das erste Ende des chromatographischen Mediums zu ermöglichen; und

(b) einem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil befestigbar ist, so dass die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden und Strömungsmittel vom zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil auf den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil übertragen wird, wobei der zweite gegenüberstellbare Bestandteil Folgendes einschließt:

(i) einen Absorber zum Absorbieren von Strömungsmittel, der von der Probenaufbereitungszone auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil getrennt ist; und

(ii) einen Applikator zum Aufbringen von Strömungsmittel auf die Probenaufbereitungszone auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht sind, der einen spezifischen Bindungspartner für einen mit einer erfassbaren Markierung markierten Analyten in einer Form enthält, die durch den Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Applikator wieder aufgelöst werden kann;

wobei die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass eine Probe auf die Probenaufbereitungszone aufgebracht werden kann, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile nicht in Gegenüberstellung sind und, dass ein In-Gegenüberstellung- Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile zur Folge hat, dass die zu testende Probe auf den Leiter zur Strömung durch den Leiter und dann zum ersten Ende des chromatographischen Mediums aufgebracht wird und hat zur Folge, dass der Absorber mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung kommt, um Strömungsmittel vom zweiten Ende des chromatographischen Mediums abzuziehen, um die Strömungsmittelströmung durch das chromatographische Medium vom ersten Ende zum zweiten Ende zu unterstützen.

6. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung zur Erfassung und/oder Bestimmung eines Analyten in einer Probe mit:

(a) einem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschließt:

(i) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden; und

(b) einem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil so befestigbar ist, dass die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden und Strömungsmittel vom zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil zum ersten gegenüberstellbaren Bestandteil übertragen wird, wobei der zweite gegenüberstellbare Bestandteil Folgendes einschließt:

(i) einen ersten Applikator zum Aufbringen eines Strömungsmittels auf den Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht sind, wobei der erste Applikator eine Probenaufbereitungszone zur Aufnahme einer Probe einschließt, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile nicht in Gegenüberstellung sind;

(ii) einen zweiten Applikator, der auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil vom ersten Applikator getrennt ist, zum Aufbringen eines Strömungsmittels auf den Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht sind, wobei der zweite Applikator ein Detektoraufbringungskissen einschließt, auf das zumindest ein Erfassungsreagenz zur Erfassung des Analyten aufgebracht sein kann; und

(iii) einen Absorber zum Absorbieren von Strömungsmittel, der darin, auf dem zweiten gegen überstellbaren Bestandteil vom ersten Applikator und dem zweiten Applikator getrennt ist, wobei sich der erste Applikator und der zweite Applikator auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil befinden, derartig, dass sie nicht in Betriebsberührung miteinander sind, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile nicht in Gegenüberstellung sind, wobei der Absorber sich auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil befindet, derartig, dass er mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung ist, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht sind;

wobei die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass ein In-Gegenüberstellung- Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile zur Folge hat, dass der Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil mit dem ersten Applikator und dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil in Betriebsberührung kommt und zur Folge hat, dass der Leiter mit dem zweiten Applikator auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil in Betriebsberührung kommt, so dass der Inhalt des Probenaufbringungskissens und des Detektoraufbringungskissens auf den Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil aufgebracht wird und, so dass eine Strömung durch den Leiter und das chromatographische Medium durch Absorption von Strömungsmittel durch den Absorber unterstützt wird.

7. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 6, bei der das Detektoraufbringungskissen auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Detektoraufbringungskissen wieder aufgelöst werden kann, wobei der erste spezifische Bindungspartner mit einer erfassbaren Markierung markiert ist und wobei das chromatographische Medium auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil weiterhin eine Erfassungszone einschließt, deren Fläche kleiner als das chromatographische Medium ist, wobei die Erfassungszone daran immobilisiert einen zweiten spezifischen Bindungspartner zum Analyten enthält, derartig, dass ein Dreifachkomplex mit dem ersten spezifischen Bindungspartner, dem Analyten und dem zweiten spezifischen Bindungspartner sich auf der Erfassungszone bildet, wenn Analyt in der Probe vorhanden ist.

8. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung zur Erfassung und/oder Bestimmung eines Analyten in einer Probe mit:

(a) einem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschließt:

(i) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden; und

(ii) ein Detektoraufbringungskissen, das zumindest ein Reagenz zur Erfassung des Analyten enthält, in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und

(b) einem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil so befestigbar ist, dass die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden und Strömungsmittel vom zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil in den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil übertragen wird, wobei der zweite gegenüberstellbare Bestandteil Folgendes einschließt:

(i) ein Probenaufbringungskissen für die Darauf-Aufbringung einer Probe; und

(ii) einen Absorber zum Absorbieren von Strömungsmittel, der vom Probenaufbringungskissen auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil getrennt ist;

wobei die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass eine Probe auf das Probenaufbringungskissen auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil aufgebracht werden kann, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile nicht in Gegenüberstellung sind und, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile Folgendes nach sich zieht:

(1) das Probenaufbringungskissen auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil bringt die Probe auf das Detektoraufbringungskissen auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil und somit auf das erste Ende des chromatographischen Mediums auf; und

(2) der Absorber auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil ist mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil in Betriebsberührung, so dass die Strömung durch das chromatographische Medium durch Absorption von Strömungsmittel durch den Absorber unterstützt wird.

9. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 8, die weiterhin einen Leiter zum Ermöglichen des Durchgangs eines Strömungsmittels umfasst, in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums und derartig gelegen, dass er mit dem Detektoraufbringungskissen in direkter Berührung ist, wobei das Detektoraufbringungskissen somit mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums in indirekter Berührung ist.

10. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 9, bei der das Detektoraufbringungskissen auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit auf das Detektoraufbringungskissen wieder aufgelöst werden kann, wobei der erste spezifische Bindungspartner mit einer erfassbaren Markierung markiert ist und wobei das chromatographische Medium auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil weiterhin eine Erfassungszone einschließt, deren Fläche wesentlich kleiner als das chromatographische Medium ist, wobei die Erfassungszone daran immobilisiert einen zweiten spezifischen Bindungspartner zum Analyten enthält, derartig, dass sich ein Dreifachkomplex mit dem ersten spezifischen Bindungspartner, dem Analyten und dem zweiten spezifischen Bindungspartner auf der Erfassungszone bildet, wenn der Analyt in der Probe vorhanden ist.

11. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 8, bei der das Detektoraufbringungskissen in direkter Berührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums ist und bei der die ersten und zweiten Bestandteile so ausgebildet sind, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile verursacht, dass das Detektoraufbringungskissen und das Probenaufbringungskissen in Berührung kommen, außer für den Bereich des Detektoraufbringungskissens, der direkt an das erste Ende des chromatographischen Mediums angrenzt, um Strömungsmittel vom Probenaufbringungskissen zum Detektoraufbringungskissen zu übertragen, während die Übertragung von Strömungsmittel vom Probenaufbringungskissen direkt auf das chromatographische Medium auf ein Minimum reduziert wird.

12. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 11, bei der das Detektoraufbringungskissen auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Detektoraufbringungskissen wieder aufgelöst werden kann, wobei der erste spezifische Bindungspartner mit einer erfassbaren Markierung markiert ist und wobei das chromatographische Medium auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil weiterhin eine Erfassungszone einschließt, deren Fläche wesentlich kleiner als das chromatographische Medium ist, wobei die Erfassungszone daran immobilisiert einen zweiten spezifischen Bindungspartner zum Analyten enthält, derartig, dass sich ein Dreifachkomplex mit dem ersten spezifischen Bindungspartner, dem Analyten und dem zweiten spezifischen Bindungspartner auf der Erfassungszone bildet, wenn Analyt in der Probe vorhanden ist.

13. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung zur Erfassung und/oder Bestimmung eines Analyten in einer Probe mit:

(a) einem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschließt:

(i) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden; und

(ii) einen Leiter, der sich auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil befindet, zum Ermöglichen des Durchgangs eines Strömungsmittels; und

(i) einen ersten Applikator zum Aufbringen eines Strömungsmittels auf den Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht sind, wobei der Leiter derartig gelegen ist, dass er nicht mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung ist, wenn der erste gegenüberstellbare Bestandteil und der zweite gegenüberstellbare Bestandteil nicht in Gegenüberstellung sind:

(ii) einen zweiten Applikator, der auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil vom ersten Applikator getrennt ist, zum Aufbringen von Strömungsmittel auf den Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestand teil, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht sind; und

(iii) einen Absorber zum Absorbieren von Strömungsmittel, der auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil von den ersten und zweiten Applikatoren getrennt ist, wobei die ersten und zweiten Applikatoren derartig auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil positioniert sind, dass sie nicht miteinander in Betriebsberührung sind, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile nicht in Gegenüberstellung sind;

wobei die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass ein In-Gegenüberstellung- Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile:

(1) zur Folge hat, dass der Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil mit dem ersten Applikator in Betriebsberührung kommt, zur Folge hat, dass der Leiter mit dem zweiten Applikator in Betriebsberührung kommt und zur Folge hat, dass der zweite Applikator mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung kommt, um den Inhalt der ersten und zweiten Applikatoren auf das chromatographische Medium aufzubringen, und

(2) zur Folge hat, dass der Absorber auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung kommt, so dass eine Absorption von Strömungsmittel durch den Absorber eine Strömungsmittelströmung von den ersten und zweiten Applikatoren durch den Leiter und durch das chromatographische Medium unterstützt.

14. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 13, bei der der erste Applikator auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil ein Probenaufbringungskissen zur Darauf- Aufbringung einer Probe einschließt, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile nicht in Gegenüberstellung sind und wobei der zweite Applikator auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil ein Detektoraufbringungskissen einschließt, auf das zumindest ein Erfassungsreagenz aufgebracht werden kann, wodurch, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht sind, der Inhalt des Probenaufbringungskissens und des Detektoraufbringungskissen durch den Leiter auf das chromatographische Medium aufgebracht wird.

15. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 14, bei der das Detektoraufbringungskissen auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Detektoraufbringungskissen wieder aufgelöst werden kann, wobei der erste spezifische Bindungspartner mit einer erfassbaren Markierung markiert ist und wobei das chromatographische Medium auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil weiterhin eine Erfassungszone einschließt, deren Fläche wesentlich kleiner als das chromatographische Medium ist, wobei die Erfassungszone daran immobilisiert einen spezifischen Bindungspartner zum Analyten enthält, derartig, dass ein Dreifachkomplex mit dem ersten spezifischen Bindungspartner, dem Analyten und dem zweiten spezifischen. Bindungspartner sich auf der Erfassungszone bildet, wenn ein Analyt in der Probe vorhanden ist.

16. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung zur Erfassung und/oder Bestimmung eines Analyten in einer Probe mit:

(a) einem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschließt:

(i) ein chromatographisches Medium mit ersten und zweiten Enden;

(ii) einen Leiter zum Ermöglichen des Durchgangs von Strömungsmittel, in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und

(iii) einen Absorber zum Absorbieren von Strömungsmittel in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums; und

(b) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil so befestigbar ist, dass die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden und Strömungsmittel vom zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil auf den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil übertragen wird, wobei der zweite gegenüberstellbare Bestandteil einen Applikator zum Aufbringen von Strömungsmittel auf den Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil einschließt, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden, wobei der Applikator in zwei Sektoren unterteilt ist:

(i) einen ersten Abschnitt, der einen ersten spezifischen Bindungspartner für den Analyten in einer Form enthält, die durch den Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Applikator wieder aufgelöst werden kann, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile nicht in Gegenüberstellung sind, wobei der erste spezifische Bindungspartner mit einer erfassbaren Markierung markiert ist; und

(ii) einen zweiten Sektor, dem ein erster spezifischer Bindungspartner für den Analyten fehlt;

wobei die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass ein In-Gegenüberstellung- Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den ersten Sektor, jedoch nicht den zweiten Sektor des Applikators auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil mit dem Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil in direkte Berührung setzt, wobei der zweite Sektor des Applikators durch den ersten Sektor in indirekter Berührung mit dem Leiter ist, um den Inhalt des ersten Sektors des Applikators auf das chromatographische Medium aufzubringen, und um im Anschluß an die Aufbringung des Inhalts des ersten Sektors des Applikators auf das chromatographische Medium den Inhalt des zweiten Sektors des Applikators auf das chromatographische Medium aufzubringen, wobei der Absorber Strömungsmittel vom chromatographischen Medium abzieht, um eine Strömungsmittelströmung vom Applikator durch den Leiter und das chromatographische Medium zu unterstützen.

17. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 16, bei der das chromatographische Medium auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil weiterhin eine Erfassungszone einschließt, deren Fläche wesentlich kleiner als das chromatographische Medium ist, wobei die Erfassungszone daran immobilisiert einen zweiten spezifischen Bindungspartner zum Analyten enthält, derartig, dass sich ein Dreifachkomplex mit dem ersten spezifischen Bindungspartner, dem Analyten und dem zweiten spezifischen Bindungspartner auf der Erfassungszone bildet, wenn Analyt in der Probe vorhanden ist.

18. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung zur Erfassung und/oder Bestimmung eines immunologisch monovalenten Analyten in einer Probe durch einen kompetitiven Immunoassay mit:

(a) einem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschließt:

(i) ein chromatographisches Medium mit einem ersten Ende und einem zweiten Ende und mit daran immobilisiert, in einer getrennten Fläche, die wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums ist, einem Analyten oder dessen immunologischen Analog;

(ii) einen ersten Leiter zum Ermöglichen des Durchgangs eines Strömungsmittels, in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und

(iii) einen zweiten Leiter zum Ermöglichen des Durchgangs eines Strömungmittels, in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums;

(b) einem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil so befestigbar ist, dass die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden, und Strömungsmittel vom zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil zum ersten gegenüberstellbaren Bestandteil übertragen wird, wobei der zweite gegenüberstellbare Bestandteil einen ersten Applikator zum Aufbringen von Strömungsmittel auf den ersten Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil einschließt, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden, wobei der erste Applikator einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch Zusatz einer ersten wässrigen Flüssigkeit zum ersten Applikator wieder aufgelöst werden kann; und

(c) einem dritten gegenüberstellbaren Bestandteil, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil so befestigbar ist, dass die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden und Strömungsmittel vom dritten gegenüberstellbaren Bestandteil auf den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil übertragen wird, wobei der dritte gegenüberstellbare Bestandteil Folgendes einschließt:

(i) einen zweiten Applikator zum Aufbringen eines Strömungsmittels auf den zweiten Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, wenn die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht sind, wobei der zweite Applikator einen zweiten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch den Zusatz einer zweiten wässrigen Flüssigkeit zum zweiten Applikator wieder aufgelöst werden kann, wobei der zweite spezifische Bindungspartner mit einer erfassbaren Markierung markiert ist; und

(ii) einen Absorber zum Absorbieren von Strömungsmittel, der auf dem dritten gegenüberstellbaren Bestandteil vom zweiten Applikator getrennt ist;

wobei die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass ein In-Gegenüberstellung- Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren. Bestandteile den ersten Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil mit dem ersten Applikator auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil so in Betriebsberührung setzt, dass der Inhalt des ersten Applikators auf das chromatographische Medium durch den ersten Leiter aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird;

und wobei die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile den Absorber auf dem dritten gegenüberstellbaren Bestandteile mit dem ersten Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil in Betriebsberührung setzt, um Strömungsmittel vom chromatographischen Medium durch den ersten Leiter abzuziehen und verursacht, dass der zweite Applikator auf dem dritten gegenüberstellbaren Bestandteil mit dem zweiten Leiter auf dem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil in Betriebsberührung kommt, so dass der Inhalt des zweiten Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird, der den Teil überlappt, durch den der Inhalt des ersten Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile mit dem chromatographischen Medium in Berührung sind.

19. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 18, bei der die ersten und zweiten spezifischen Bindungspartner jeweils Antikörper sind, die für den Analyten spezifisch sind, und bei der der immobilisierte Analyt oder dessen Analog einen kovalent an ein Protein gebundenen Analyten umfasst, dem eine spezifische Bindungsaktivität für den Analyten fehlt.

20. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung zur Erfassung und/oder Bestimmung eines immunologisch monovalenten Analyten in einer Probe durch einen kompetitiven Immunoassay mit:

(a) einem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschließt:

(i) ein chromatographisches Medium mit einem ersten Ende und einem zweiten Ende und mit daran immobilisiert in einzelnen getrennten und nicht überlappenden Flächen, wobei jede Fläche wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums ist:

(A) einem spezifischen Bindungspartner für den Analyten; und

(B) einem sekundären spezifischen Bindungspartner, wobei der sekundäre spezifische Bindungspartner zur Bindung eines Teils eines spezifischen Bindungspaars in der Lage ist, dem eine Affinität für den Analyten fehlt, wobei der sekundäre spezifische Bindungspartner sich näher am ersten Ende des chromatographischen Mediums befindet, als der spezifische Bindungspartner für den Analyten;

(ii) einen ersten Leiter zum Ermöglichen des Durchgangs eines Strömungsmittels in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und

(iii) einen zweiten Leiter zum Ermöglichen des Durchgangs einer Flüssigkeit in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums; und

(b) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil so befestigbar ist, dass die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden und Strömungsmittel vom zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil zum ersten gegenüberstellbaren Bestandteil übertragen wird, wobei der zweite gegenüberstellbare Bestandteil Folgendes einschließt:

(i) einen Applikator zum Aufbringen von Strömungsmittel auf den zweiten Leiter, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht sind und der ein Analyt-Analog enthält, wobei das Analyt-Analog einen kovalent an einen Teil des spezifischen Bindungspaars gebundenen Analyten umfasst, dem die Affinität für den Analyten fehlt und durch den sekundären spezifischen Bindungspartner bindbar ist, wobei der Teil des spezifischen Bindungspaars mit einer erfassbaren Markierung markiert ist, wobei das Analyt-Analog in einer Form vorliegt, die durch den Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Applikator wieder aufgelöst werden kann; und

(ii) einen Absorber zum Absorbieren von Strömungsmittel, der auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil vom Applikator getrennt ist;

wobei die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass ein In-Gegenüberstellung- Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den zweiten Leiter in Betriebsberührung mit dem Applikator setzt, so dass der Inhalt des Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird, und setzt den Absorber mit dem ersten Leiter in Betriebsberührung, um Strömungsmittel vom chromatographischen Medium abzuziehen.

21. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 20, die weiterhin eine Abdeckung umfasst, die gelenkig am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil befestigt ist, so dass sie über die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile gefaltet werden kann, wenn sie gegenübergestellt sind, wobei die Abdeckung darin eingeschnitten eine Öffnung aufweist, um die Betrachtung zumindest eines Teils des chromatographischen Mediums zuzulassen, wenn die ersten und zweiten gegenüberstellbare Bestandteil gegenübergestellt sind und die Abdeckung über die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile gefaltet wird.

22. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 20, bei der der erste spezifische Bindungspartner ein für den Analyten spezifischer Antikörper ist und der sekundäre spezifische Bindungspartner ein zweiter Antikörper ist, der zur Bindung eines Antikörpers in der Lage ist, dem eine Spezifität für den Analyten fehlt, und bei der das Analyt- Analog einen Analyten umfasst, der kovalent an ein Immunglobulin gebunden ist.

23. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 20, bei der die Fläche des sekundären spezifischen Bindungspartners, der am chromatographischen Medium immobilisiert ist, in zumindest zwei getrennte und nicht überlappende Banden unterteilt ist, wobei die Menge an sekundärem spezifischen Bindungspartner in jeder Bande so bestimmt wird, dass die Menge an Analyt-Analog, die an die Erfassungszone bindet und somit die Konzentration an Analyt in der Testprobe durch die Anzahl an Banden angezeigt wird, an die das Analyt-Analog bindet.

24. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 20, bei der der erste Leiter dazu in der Lage ist, als ein erster Applikator zu dienen, wobei der Applikator auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil folglich der zweite Applikator ist, und bei der die Vorrichtung weiterhin einen dritten gegenüberstellbaren Bestandteil umfasst, der einen zweiten Absorber zum Absorbieren eines Strömungsmittels einschließt; bei der die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass ein In- Gegenüberstellung-Bringen der ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile den zweiten Absorber in direkte Berührung mit dem ersten Leiter und mit dem chromatographischen Medium setzt, um Strömungsmittel vom chromatographischen Medium durch den ersten Leiter abzuziehen.

25. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung zur Erfassung und/oder Bestimmung eines immunologisch monovalenten Analyten in einer Probe durch einen kompetitiven Immunoassay mit

(a) einem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschließt:

(i) ein chromatographische Medium mit einem ersten und einem zweiten Ende und mit daran immobilisiert, in einzelnen getrennten, nicht überlappenden Flächen, wobei jede Fläche wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums ist:

(A) einer Substanz, die zur spezifischen Bindung von Biotin in der Lage ist, die aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Avidin, Streptavidin, Antibiotin- Antikörpern und deren Derivaten besteht; und

(B) einem sekundären spezifischen Bindungspartner, der zur spezifischen Bindung eines Drei- Bestandteile-Komplexes in der Lage ist, wobei der Drei- Bestandteile-Komplex (1) einen Analyten; (2) einen Teil eines spezifischen Bindungspaares, dem eine spezifische Bindungsaffinität für den Analyten fehlt, wobei der Teil kovalent an den Analyten konjugiert ist; und (3) eine erfassbare Markierung umfasst, die an den Teil des spezifischen Bindungspaars gebunden ist;

(ii) einen ersten Leiter zum Ermöglichen des Durchgangs eines Strömungsmittels, in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums;

(iii) einen zweiten Leiter zum Ermöglichen des Durchgangs eines Strömungsmittels, in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums;

(b) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil so befestigbar ist, dass die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden und Strömungsmittel vom zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil auf den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil übertragen wird, wobei der zweite gegenüberstellbare Bestandteil einen ersten Applikator zum Aufbringen von Strömungsmittel auf den ersten Leiter einschließt, der einen ersten spezifischen Bindungspartner zum Analyten in einer Form enthält, die durch den Zusatz einer wässrigen Probe auf den ersten Applikator wieder aufgelöst werden kann, wobei der erste spezifische Bindungspartner kovalent an Biotin gebunden ist, und wobei der erste spezifische Bindungspartner nicht durch den sekundären spezifischen Bindungspartner bindbar ist; und

(c) einem dritten gegenüberstellbaren Bestandteil, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil derartig befestigbar ist, dass die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden und Strömungsmittel vom dritten gegenüberstellbaren Bestandteil auf den ersten gegenüberstellbaren Bestandteil übertragen wird, wobei der dritte gegenüberstellbare Bestandteil Folgendes einschließt:

(i) einen zweiten Applikator zum Aufbringen eines Strömungsmittels auf den zweiten Leiter, der den Drei- Bestandteile-Komplex enthält, wobei der Komplex in einer Form vorliegt, die durch den Zusatz einer zweiten wässrigen Flüssigkeit zum zweiten Applikator wieder aufgelöst werden kann; und

wobei die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass ein In-Gegenüberstellung- Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den ersten Leiter mit dem ersten Applikator in Betriebsberührung setzt, so dass der Inhalt des ersten Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird; und wobei die ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und dritten gegenüberstellbaren Bestandteile den Absorber mit dem ersten Leiter in Berührung setzt, um Strömungsmittel aus dem chromatographischen Medium abzuziehen und verursacht, dass der zweite Applikator mit dem zweiten Leiter in Betriebsberührung kommt, so dass der Inhalt des zweiten Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums, der den Teil überlappt, durch den der Inhalt des ersten Applikators gezogen wurde, gezogen wird.

26. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 25, bei der der erste spezifische Bindungspartner ein Anti- Analyt-Antikörper ist, wobei der Anteil des spezifischen Bindungspaares im Drei-Bestandteile-Komplex Kaninchen- Immunglobulin G ist und der zweite spezifische Bindungspartner Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG ist und wobei die Substanz, die zur spezifischen Bindung von Biotin in der Lage ist, Streptavidin ist.

27. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 25, bei der die Fläche des sekundären spezifischen Bindungspartners, der am chromatographischen Medium immobilisiert ist, in zumindest zwei getrennte und nicht überlappende Banden unterteilt ist, wobei die Menge an sekundärem spezifischen Bindungspartner in jeder Bande so bestimmt ist, dass die Menge an Drei-Bestandteile-Komplex, der an der Erfassungszone bindet und somit die ursprüngliche Analytkonzentration in der Testprobe durch die Anzahl an Banden angezeigt wird, an die der Drei-Bestandteil-Komplex bindet.

28. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung zur Erfassung und/oder Bestimmung eines immunologisch monovalenten Analyten in einer Probe durch einen kompetitiven Immunoassay mit:

(a) einem ersten gegenüberstellbaren Bestandteil, der Folgendes einschließt:

(i) ein chromatographisches Medium mit einem ersten und zweiten Ende und mit daran immobilisiert in getrennten und nicht überlappenden einzelnen Flächen, die jeweils wesentlich kleiner als die Fläche des chromatographischen Mediums sind:

(A) ein Analyt-Analog, das zur Bindung eines spezifischen Bindungspartners für den Analyten in der Lage ist; und

(B) einen sekundären spezifischen Bindungspartner, der zur Bindung eines spezifischen Bindungspaar- Teils in der Lage ist, der eine Affinität für den Analyten aufweist, wobei der sekundäre spezifische Bindungspartner selbst keine Bindungsaffinität für den Analyten aufweist; und

(ii) einen Leiter zum Ermöglichen des Durchgangs eines Strömungsmittels in Betriebsberührung mit dem ersten Ende des chromatographischen Mediums; und

(b) einen zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil, der am ersten gegenüberstellbaren Bestandteil so befestigbar ist, dass die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile in Gegenüberstellung gebracht werden und Strömungsmittel vom zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil auf einen ersten gegenüberstellbaren Bestandteil übertragen wird, wobei der zweite gegenüberstellbare Bestandteil einen Applikator einschließt, der einen markierten, zum Analyten spezifischen Bindungspartner in einer Form enthält, die durch Zusatz einer wässrigen Flüssigkeit zum Applikator wieder aufgelöst werden kann;

wobei die ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile so ausgebildet sind, dass ein In-Gegenüberstellung- Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den Leiter in Betriebsberührung mit dem Applikator setzt, so dass der Inhalt des Applikators auf das chromatographische Medium aufgebracht wird und durch zumindest einen Teil des chromatographischen Mediums gezogen wird.

29. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 28, bei der der erste spezifische Bindungspartner ein für den Analyten spezifischer Antikörper ist, oei der das Analyt-Analog einen Analyten umfasst, der kovalent an ein Protein gebunden ist, dem eine spezifische Bindungsaffinität für den Analyten oder für den spezifischen Bindungspartner für den Analyten fehlt und bei der der sekundäre spezifische Bindungspartner den Antikörper, der für den Analyten spezifisch ist, auf der Grundlage von Spezies-spezifischen Wechselwirkungen bindet, die die Antigen-Bindungsstelle des Antikörpers für den Analyten nicht einschliessen.

30. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 28, bei der der erste gegenüberstellbare Bestandteil weiterhin einen Absorber zum Absorbieren eines Strömungsmittels in Betriebsberührung mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums einschließt, um eine Strömungsmittelströmung durch das chromatographische Medium zu unterstützen.

31. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 28, bei der der zweite gegenüberstellbare Bestandteil weiterhin einen Absorber zum Absorbieren von Strömungsmittel einschließt, der vom Applikator getrennt ist, wobei der Absorber auf dem zweiten gegenüberstellbaren Bestandteil so positioniert ist, dass ein In-Gegenüberstellung-Bringen der ersten und zweiten gegenüberstellbaren Bestandteile den Absorber mit dem zweiten Ende des chromatographischen Mediums in Betriebsberührung setzt, um eine Strömungsmittelströmung durch das chromatographische Medium zu unterstützten.

32. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 28, bei der die Fläche des sekundären spezifischen Bindungspartners, der am chromatographischen Medium immobilisiert ist, in zumindest zwei getrennte und nicht überlappende Banden unterteilt ist, wobei die Menge an sekundärem spezifischen Bindungspartner in jeder Bande so bestimmt ist, dass die Menge an markiertem spezifischen Bindungspartner für den Analyten, der an der Testzone bindet, und somit die Menge an Analyt in der Testprobe durch die Anzahl an Banden angezeigt wird, an die der markierte spezifische Bindungspartner für den Analyten bindet.

33. Chromatographische Untersuchungsvorrichtung nach Anspruch 7, 15, 17, 18, 20, 24, 25 oder 28, bei der die erfassbare Markierung eine visuell erfassbare Markierung ist.