DE602005006157T2

DE602005006157T2 - STABILISIERTE 99mTC ZUSAMMENSETZUNG

Info

Publication number: DE602005006157T2
Application number: DE602005006157T
Authority: DE
Inventors: Grethe Karin Nydalen MARTINUSSEN; Gry Amersham Hea Stensrud; Ole Kristian Nydalen HJELSTUEN
Original assignee: GE Healthcare Ltd
Current assignee: GE Healthcare Ltd
Priority date: 2004-12-15
Filing date: 2005-10-14
Publication date: 2009-05-28
Anticipated expiration: 2025-10-15
Also published as: AU2005315503A1; AU2005315503B2; CA2590620A1; WO2006064175A1; EP1824525A1; GB0427392D0; BRPI0518636B1; NO340538B1; CN103028123A; DE602005006157D1; ATE392218T1; BRPI0518636B8; JP2008524178A; KR101297523B1; KR20070089156A; BRPI0518636A2; CN101107017A; JP5064236B2; MX2007007223A; US9694092B2

Description

Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf stabilisierte radiopharmazeutische ^99mTc-Zusammensetzungen aus ^99mTc-Tetrofosmin, die ein Ascorbinsäure- oder Ascorbat-Strahlenschutzmittel (Radioprotectant) beinhalten, bei Abwesenheit eines antimikrobiellen Konservierungsmittels. Lyophilisierte Kits, die sich zur Großmengen-Zubereitung mehrerer Patientendosiseinheiten der radiopharmazeutischen ^99mTC-Tetrofosmin-Zusammensetzung eignen, sind ebenfalls offenbart, zusammen mit Verfahren zur Zubereitung solcher Dosiseinheiten aus dem lyophilisierten Großmengen-Fläschchen.
Hintergrund der Erfindung
Radiopharmaka zur diagnostischen Bildgebung, die auf dem Radioisotop Technetium-99m (^99mTc) basieren, sind in Bezug auf eine Vielzahl klinischer Diagnostiken bekannt, einschließlich Untersuchungen funktioneller (z. B. renaler) Natur und der Perfusion (insbesondere von Herz und Gehirn). Da das Radioisotop ^99mTc eine Halbwertszeit von sechs Stunden besitzt, werden solche ^99mTc-Radiopharmaka meist aus sogenannten „Kits" zubereitet.
Diese Kits zur Zubereitung von ^99mTc-Radiopharmaka geben dem Benutzer die Möglichkeit, sich Vorräte nicht-radioaktiver, lyophilisierter Fläschchen anzulegen, welche die notwendigen Reagenzien enthalten, die zwecks Rekonstitution mit ^99mTc-Pertechnetat (TcO₄ ^–) aus einem Vorrat von ^99mTc so entworfen sind, dass sich das gewünschte sterile ^99mTc-Radiopharmakon in einfacher Weise ergibt. Eine sterile Lösung aus ^99mTc-Pertechnetat in isotonischer Kochsalzlösung wird durch Elution eines Technetiumgenerators mit steriler Kochsalzlösung erhalten, wie aus dem Stand der Technik bekannt.
Kits zur Zubereitung von ^99mTc-Radiopharmaka enthalten typischerweise:

(i) einen Liganden, der einen Metallkomplex mit ^99mTc bildet,
(ii) ein biokompatibles Reduktionsmittel, das in der Lage ist, Pertechnetat, also Tc(VII), zum niedrigeren Oxidationszustand des gewünschten ^99mTC-Metallkomplexprodukts zu reduzieren.

Das biokompatible Reduktionsmittel für ^99mTc-Pertechnetat ist typischerweise Zinnion, also Sn(II). Der Kit kann zusätzliche Exzipienten enthalten, z. B. schwache Chelatbildner (etwa Gluconat, Glucoheptonat, Tartrat, Phosphonat oder EDTA); Stabilisatoren; pH-Regulierungsmittel; Puffer; Lösungsvermittler oder Füllmittel (etwa Mannitol, Inosit oder Natriumchlorid), um den Umgang mit den Kit-Komponenten und deren Lyophilisierung zu erleichtern. Zwecks Vereinfachung von Lagerung und Verteilung werden die nicht-radioaktiven Kits meist gefriergetrocknet in einem sterilen Fläschchen mit Verschluss bereitgestellt. Außerdem ermöglicht die lyophilisierte Formulierung dem Endbenutzer eine einfache Rekonstitution mit sterilem ^99mTC-Pertechnetat in Kochsalzlösung, damit sich das gewünschte sterile, injizierbare ^99mTc-Radiopharmakon zur Anwendung beim Menschen ergibt. Die Haltbarkeitsdauer des nicht-radioaktiven Technetium-Kits kann sich auf mehrere Monate belaufen.
Radiopharmazeutische Zusammensetzungen können durch Radiolyse, insbesondere des Lösungsmittels (typischerweise Wasser), beeinträchtigt werden mit der darauf folgenden Erzeugung hochreaktiver freier Radikale, die nach der Rekonstitution eine oder mehrere Komponenten der Kit-Zusammensetzung zerlegen können. Bekannt ist die Verwendung von Strahlenschutzmitteln oder Fängern freier Radikale, um die Unterdrückung einer derartigen Zerlegung zu unterstützen. Kennzeichnenderweise werden Fänger freier Radikale aus bekannten Klassen antioxidativer Verbindungen gewählt. Ascorbinsäure und Ascorbate, die als Stabilisatoren für zinnhaltige nicht-radioaktive Kits zur Zubereitung von ^99mTc-Radiopharmaka fungieren, sind in US 4,364,920 offenbart und haben anschließend in radiopharmazeutischen ^99mTc-Zubereitungen weitverbreitete Anwendung gefunden. In US 4,233,284 sind Gentisinsäure-Stabilisatoren für ^99mTc-Radiopharmaka offenbart. Para-Aminobenzoesäure (PABA) und verwandte Stabilisatoren für radiopharmazeutische ^99mTc-Zubereitungen sind in US 4,451,451 offenbart.
Beim Myoview^TM-Kit handelt es sich um ein 10 ml-Fläschchen, das die folgende lyophilisierte Formulierung enthält:

Tetrofosmin 0,23 mg

Zinnchlorid-Dihydrat 30 μg

Dinatriumsulfosalicylat 0,32 mg

Natrium-D-Gluconat 1,0 mg

Natriumhydrogencarbonat 1,8 mg

pH-Wert bei Rekonstitution 8,3–9,1,

welche Formulierung unter Stickstoffgas USP/NF in einem 10 ml-Glasfläschchen versiegelt ist und nach Rekonstitution mit steriler Natrium-(^99mTc)-Pertechnetat-Injektion USP/Ph.Eur. eine Lösung ergibt, die das Radiopharmakon ^99mTc-Tetrofosmin zur Bildgebung vom Herzen enthält. Folglich ist im Myoview^TM-Kit kein Strahlenschutzmittel enthalten.
Ein injektionsfertiges oder „Konjugat"-Modell von Myoview^TM wird seit 1997 in Japan vertrieben. Diese „Konjugat"-Form umfasst den im Voraus gebildeten ^99mTc-Tetrofosmin-Technetium-Komplex in wässriger Lösung in einem Spritzenfläschchen, d. h. einem Fläschchen mit separatem Kolben und separater Nadel, das so entworfen ist, dass es sich sofort zusammenfügen lässt und eine das Radiopharmakon enthaltende Spritze ergibt. Die Myoview^TM-„Konjugat"-Lösung enthält Ascorbinsäure in einer Konzentration von 1,36 mg/ml (7,7 mmolar).
Bastien, u. a. [Nucl. Med. Comm., 20, 480-Kurzfassung 84 (1999)] legen dar, dass die Reihenfolge der Zugabe von Kochsalzlösung und Pertechnetat zum Myoview^TM-Kit die radiochemische Reinheit (RCP: Radiochemical Purity) von ^99mTc-Tetrofosmin beeinflussen kann. Des Weiteren berichten Murray, u. a. [Nucl. Med. Comm., 21, 845–849 (2000)], dass das Vorhandensein von zuviel Stickstoffgas im Kopfraum des Myoview^TM-Fläschchens während der Rekonstitution zu variablen RCP-Ergebnissen infolge unerwünschter radiochemischer Unreinheiten führen kann. Murray, u. a., und die Gebrauchsanweisungen auf der Packung des Myoview^TM-Kits erklären, dass Luft während der Rekonstitution absichtlich in das Fläschchen gezogen wird, um diese Probleme zu umgehen. Dies wird erreicht, indem 2 ml des Kopfraumgases entzogen werden, wenn eine Belüftungsnadel platziert ist, so dass 2 ml Luft in das Fläschchen gezogen werden. Es wird angenommen, dass die Ursache des Problems eine reduktive Autoradiolyse ist und dass das Einlassen von Sauerstoff diese Zerlegung inhibiert.
Patel, u. a. [J. Nucl. Med. Technol., 26(4), 269–273 (1998)] legen die Ergebnisse einer Untersuchung im Handel erhältlicher Myoview^TM-Fläschchen dar und kommen zu dem Schluss, dass eine Rekonstitution mit dem Doppelten der Obergrenze des Herstellers für Radioaktivität (bis zu 18 GBq von ^99mTc) erfolgreich ist, aber sie verdeutlichen nicht, welche Einschränkungen hinsichtlich des verwendeten ^99mTc-Pertechnetat-Generatoreluats gemacht wurden. Angeblich verschaffen solche höheren Radioaktivitätspegel die Vorteile, dass das Personal einer geringeren Strahlenbelastung ausgesetzt ist (eine Zubereitung statt mehrerer Zubereitungen) und dass die QK-Ergebnisse weniger stark variieren. Tatsächlich berichtet Murray, u. a. (siehe oben), dass der Einsatz radioaktiver Konzentrationen, welche die in den Gebrauchsanweisungen auf der Myoview^TM-Packung angegebenen überschreiten, zu schlechten RCP-Ergebnissen führen.
WO 02/053192 offenbart stabilisierte radiopharmazeutische Zusammensetzungen, welche Folgendes umfassen:

(i) einen ^99mTc-Metallkomplex;
(ii) ein Strahlenschutzmittel, welches Ascorbinsäure, para-Aminobenzoesäure oder Gentisinsäure, oder ein Salz davon mit einem biokompatiblen Kation umfasst;
(iii) eines oder mehrere antimikrobielle Konservierungsmittel der Formel (I):

_1-4

Die Beispiele aus WO 02/053193 beinhalten die Zubereitung stabilisierter ^99mTc-Tetrofosmin-Komplex-Zusammensetzungen via die Zugabe von Strahlenschutzmittellösung und Lösung antimikrobiellen Konservierungsmittels zu herkömmlichen Myoview^TM-Kits. Keine spezifischen Beispiele für lyophilisierte Kits, die sowohl Tetrofosmin als auch ein Strahlenschutzmittel enthalten, sind in WO 02/053192 offenbart.
Die vorliegende Erfindung
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Kits zur Zubereitung stabilisierter radiopharmazeutischer ^99mTc-Tetrofosmin-Zusammensetzungen, zusammen mit einem Verfahren zur Zubereitung von ^99mTc-Tetrofosmin-Dosiseinheiten.
Um das Problem der längeren Verfügbarkeit eines radiopharmazeutischen ^99mTC-Agens post-Rekonstitution zu lösen, muss das anfängliche Maß an Radioaktivität von ^99mTc bei der Rekonstitution hoch ausfallen, und zwar deshalb, weil aufgrund der sechsstündigen Halbwertszeit von ^99mTc die Hälfte der Radioaktivität, die zur Erstellung des diagnostischen Bilds verwendet wird, via radioaktiven Zerfall alle sechs Stunden verloren geht und daher nach Verstreichen von zwölf Stunden nur der ursprünglichen Radioaktivität verbleibt. Derartige hohe Radioaktivitätspegel über längere Zeiträume werfen möglicherweise erhebliche Radiolyseprobleme bezüglich der radiopharmazeutischen ^99mTc-Zusammensetzung auf.
Deswegen enthält die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung ein Strahlenschutzmittel. Der ^99mTc-Tetrofosmin-Aktiv-Inhaltsstoff ist entweder für Abbau durch die reduzierende Wirkung des Reduktionsmittels (das vorhanden ist, um das Durchführen des Markierens mit ^99mTc zu unterstützen) oder für Radiolyse empfänglich. Durch Verwendung der stabilisierten Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung eröffnet sich die Möglichkeit, die Nutzungslebensdauer nach Radiomarkierung selbst bei erhöhten ^99mTc-Radioaktivitätspegeln zu verlängern.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
In einem ersten Aspekt bietet die vorliegende Erfindung einen lyophilisierten, nicht-radioaktiven Kit, der nach Rekonstitution mit ^99mTc-Pertechnetatlösung eine stabilisierte radiopharmazeutische ^99mTc-Tetrofosmin-Zusammensetzung ergibt, wobei der Kit eine Formulierung aufweist, welche Folgendes umfasst:

(i) Tetrofosmin;
(ii) ein Strahlenschutzmittel, ausgewählt aus Ascorbinsäure oder einem Salz derselben mit einem biokompatiblen Kation;
(iii) ein biokompatibles Reduktionsmittel;
(iv) ein pH-Regulierungsmittel in einer Menge, die wirksam ist, um zu gewährleisten, dass, bei Rekonstitution des Kits mit Kochsalzlösung, die sich ergebende Lösung einen pH-Wert im Bereich von 8,0 bis 9,2 aufweist;

^99m

Unter dem Begriff „Tetrofosmin" ist der dargestellte Ether-substituierte Diphosphin-Chelatbildner 1,2-Bis[bis(2-ethoxyethyl)phosphino)]ethan zu verstehen:
der in dem im Handel vertriebenen ^99mTc-Kit mit dem Namen Myoview^TM verwendet wird, mit dem die Zubereitung von ^99mTc-Tetrofosmin, also ^99mTc(O)₂(tetrofosmin)₂ ⁺, erfolgt.
Als „Strahlenschutzmittel" wird eine Verbindung bezeichnet, welche Abbaureaktionen wie Redoxprozesse dadurch inhibiert, dass hochreaktive freie Radikale, etwa sauerstoffhaltige freie Radikale, die aus der Radiolyse von Wasser hervorgehen, eingefangen werden. Geeigneterweise werden die Strahlenschutzmittel der vorliegenden Erfindung aus Ascorbinsäure und Salzen derselben mit einem biokompatiblen Kation ausgewählt.
Unter dem Begriff „biokompatibles Kation" ist ein positiv geladenes Gegenion zu verstehen, das ein Salz mit einer ionisierten, negativ geladenen anionischen Gruppe bildet, wobei das positiv geladene Gegenion bei der erforderlichen Dosierung nicht toxisch ist und sich daher zur Verabreichung an den Körper eines Säugers, insbesondere den Körper eines Menschen, eignet. Zu den Beispielen für zweckmäßige biokompatible Kationen gehören: die Alkalimetalle Natrium und Kalium, die Erdalkalimetalle Calcium und Magnesium und ferner das Ammoniumion. Bevorzugte biokompatible Kationen sind Natrium und Kalium, wobei Natrium besonderer Vorzug gegeben wird.
Der Begriff „biokompatibles Reduktionsmittel" bezeichnet ein Reduktionsmittel, das zur Reduktion von Tc(VII)Pertechnetat zu niedrigeren Oxidationszuständen von Technetium taugt, das bei der erforderlichen Dosierung nicht toxisch ist und sich daher zur Verabreichung an den Körper eines Säugers, insbesondere an den Körper eines Menschen, eignet. Zu den zweckmäßigen Reduktionsmitteln zählen: Natriumdithionit, Natriumbisulfit, Ascorbinsäure, Formamidinsulfinsäure, Zinnion, Fe(II) oder Cu(I). Das biokompatible Reduktionsmittel ist bevorzugt ein Zinnsalz, wie z. B. Zinnchlorid oder Zinntartrat.
Der Begriff „lyophilisiert" wird in seiner herkömmlichen Bedeutung gebraucht, nämlich bezüglich einer gefriergetrockneten, bevorzugt in steriler Weise hergestellten Verbindung.
Mit dem Begriff „antimikrobielles Konservierungsmittel" ist ein Mittel gemeint, welches das Wachstum potentiell schädlicher Mikroorganismen wie Bakterien, Hefen oder Schimmelpilze inhibiert. In Abhängigkeit von der Dosis kann das antimikrobielle Konservierungsmittel auch einige bakterizide Eigenschaften aufweisen. Typischerweise werden antimikrobielle Konservierungsmittel eingesetzt, um das Wachstum von Mikroorganismen in der radiopharmazeutischen Zusammensetzung post-Rekonstitution, also im radioaktiven diagnostischen Produkt selbst, zu hemmen. Jedoch werden sie manchmal auch benutzt, um das Wachstum potentiell schädlicher Mikroorganismen in einer oder mehreren Komponenten nicht-radioaktiver Kits vor der Rekonstitution zu blockieren. Die antimikrobiellen Konservierungsmittel umfassen: die Parabene, d. h. Methyl-, Ethyl-, Propyl- oder Butylparaben oder Gemische aus denselben; Benzylalkohol; Phenol; Kresol; Cetrimid und Thiomersal. Bestimmte antimikrobielle Konservierungsmittel sind zu flüchtig, um die Lyophilisierung zu überstehen (z. B. Benzylalkohol oder Phenol), oder besitzen eine sehr geringe Wasserlöslichkeit. Dies gestaltet ihre Eingliederung in einen lyophilisierten Kit problematisch, der zur Rekonstitution mit einem wässrigen Lösungsmittel entworfen ist, damit sich eine radiopharmazeutische Lösung ergibt. Außerdem können bestimmte antimikrobielle Konservierungsmittel Metallkomplexe mit ^99mTc bilden, wodurch sie die radiochemische Reinheit (RCP) und damit die biologische Verteilung von ^99mTc-Tetrofosmin nachteilig beeinflussen. Ferner erhöht die Anwesenheit eines antimikrobiellen Konservierungsmittels in der Formulierung die Gefahr des Auftretens von Problemen chemischer Inkompatibilität bei der Kit-Lagerung, z. B. aufgrund der Sauerstoff- oder Schwefelatomabstraktion durch die Phosphine von Tetrofosmin.
Derartige Kits sind so gestaltet, dass sie sterile radiopharmazeutische Produkte ergeben, die zur Verabreichung an den Menschen, z. B. via direkte Injektion in den Blutkreislauf, taugen. Der lyophilisierte Kit ist zur Rekonstitution mit steriler ^99mTc-Pertechnetat-(TcO₄ ^–)-Lösung aus einem ^99mTc-Radioisotop-Generator entworfen, damit sich eine Lösung ergibt, die sich ohne weitere Handhabung an einen Menschen verabreichen lässt. Bereitgestellt wird die ^99mTc-Pertechnetat-Lösung in einem biokompatiblen Träger. Bei dem „biokompatiblen Träger" handelt es sich um ein Fluid, insbesondere eine Flüssigkeit, in der das Radiopharmakon suspendiert oder gelöst ist, so dass die Zusammensetzung physiologisch verträglich ist, was bedeutet, dass sie an den Körper eines Säugers ohne Hervorrufen toxischer Wirkungen oder übermäßiger Unannehmlichkeiten verabreicht werden kann. Zweckgemäß ist der biokompatible Träger eine injizierbare Trägerflüssigkeit, wie steriles, pyrogenfreies Injektionswasser; eine wässrige Lösung wie Kochsalzlösung (die vorteilhafterweise so ausgeglichen werden kann, dass das Endprodukt zur Injektion entweder isotonisch oder nicht hypotonisch ist); eine wässrige Lösung aus einer oder mehreren Substanzen zur Regulierung der Tonizität (z. B. Salze von Plasmakationen mit biokompatiblen Gegenionen), Zucker (z. B. Glukose oder Saccharose), Zuckeralkohole (z. B. Sorbit oder Mannitol), Glykole (z. B. Glycerol) oder andere nicht-ionische Polyolmaterialien (z. B. Polyethylenglykole, Propylenglykole und dergleichen). Der biokompatible Träger kann auch biokompatible organische Lösungsmittel wie z. B. Ethanol umfassen. Derartige organische Lösungsmittel sind nützlich, um mehr lipophile Verbindungen oder Formulierungen zu solubilisieren. Vorzugsweise handelt es sich beim biokompatiblen Träger um pyrogenfreies Injektionswasser, isotonische Kochsalzlösung oder wässrige Ethanollösung. Wie oben angegeben, liegt der pH-Wert des biokompatiblen Trägers zur intravenösen Injektion zweckgemäß im Bereich von 4,0 bis 10,5. Der biokompatible Träger umfasst bevorzugt ein wässriges Lösungsmittel, besonders bevorzugt isotonische Kochsalzlösung. Die Verwendung des biokompatiblen Trägers der vorliegenden Erfindung erfolgt in Abwesenheit eines antimikrobiellen Konservierungsmittels.
Die Kits der vorliegenden Erfindung umfassen einen geeigneten Behälter, der die Zusammensetzung der ersten Ausführungsform enthält. Das Tetrofosmin kann entweder in Form einer freien Base oder eines Säuresalzes oder auch in Form eines Komplexes aus Tetrofosmin und einem nicht-radioaktiven Metall vorliegen, der nach Zugabe des Technetiums eine Transmetallierung (d. h. einen Metallaustausch) durchläuft, aus der das gewünschte Produkt entsteht. Vorzugsweise liegt das Tetrofosmin in Form einer freien Base vor. Geeignete Behälter sind jene, die versiegelt sind und daher die Wahrung steriler Integrität und/oder radioaktiver Sicherheit ermöglichen, gegebenenfalls zuzüglich eines inerten Kopfraumgases (z. B. Stickstoff oder Argon), während sie ferner die Zugabe und Entnahme von Lösungen mittels Spritze gestatten. Ein solcher bevorzugter Behälter ist ein mit Septum versiegeltes Fläschchen, wobei der gasdichte Verschluss mit einer Übersiegelung (typischerweise aus Aluminium) aufgebördelt ist. Derartige Behälter besitzen den zusätzlichen Vorteil, dass der Verschluss einem Vakuum standhalten kann, falls gewünscht, z. B. zwecks Änderung des Kopfraumgases oder zwecks Entgasung von Lösungen.
Des Weiteren enthalten die nicht-radioaktiven Kits gegebenenfalls zusätzliche Komponenten, etwa einen Transchelator, ein pH-Regulierungsmittel oder eine Füllsubstanz. Bei einem „Transchelator" handelt es sich um eine Verbindung, die rasch reagiert, um einen schwachen Komplex mit Technetium zu bilden und dann durch den Liganden deplaciert wird. Dies minimiert die Gefahr, dass sich reduziertes hydrolysiertes Technetium (RHT) bildet, und zwar infolge der raschen Reduktion von Pertechnetat, die mit der Technetiumkomplexbildung konkurriert. Geeignete Transchelatoren sind Salze organischer Säuren mit einem biokompatiblen Kation, insbesondere „schwache organische Säuren" mit einem pKa im Bereich von 3 bis 7. Essigsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Gluconsäure, Glucoheptonsäure, Benzoesäure, Phenole oder Phosphonsäuren stellen geeignete schwache organische Säuren dar. Daher handelt es sich bei den geeigneten Salzen um Acetate, Zitrate, Tartrate, Gluconate, Glucoheptonate, Benzoate, Phenolate oder Phosphonate. Bevorzugte Salze sind Tartrate, Gluconate, Glucoheptonate, Benzoate oder Phosphonate, besonders bevorzugt Phosphonate, ganz besonders bevorzugt Diphosphonate. Ein bevorzugter Transchelator ist ein Salz der Gluconsäure, mit einem biokompatiblen Kation, insbesondere Natriumgluconat. Ein zusätzlicher bevorzugter Transchelator ist 5-Sulfosalicylsäure oder ein Salz derselben mit einem biokompatiblen Kation. Es besteht die Möglichkeit, zwei oder mehr Transchelatoren in Kombination anzuwenden, und die Tetrofosmin-Kits der vorliegenden Erfindung umfassen besonders bevorzugt eine Kombination aus Natrium-5-sulfosalicyclat und Natriumgluconat.
Unter dem Begriff „pH-Regulierungsmittel" ist eine Verbindung oder ein Gemisch von Verbindungen zu verstehen, welche(s) zur Sicherstellung dient, dass der pH-Wert des rekonstituierten Kits zwecks Verabreichung an Mensch oder Säuger innerhalb akzeptabler Grenzen (von annähernd 4,0 bis 10,5) liegt. Zu den geeigneten pH-Regulierungsmitteln zählen pharmazeutisch annehmbare Puffer wie Tricin, Phosphat oder TRIS [d. h. Tris(hydroxymethyl)aminomethan] und pharmazeutisch annehmbare Basen wie Natriumcarbonat, Natriumbicarbonat oder Gemische daraus. Ein bevorzugtes pH-Regulierungsmittel für die Tetrofosmin-Kits der vorliegenden Erfindung stellt Natriumbicarbonat dar.
Unter dem Begriff „Füllsubstanz" ist ein pharmazeutisch annehmbares Füllmittel zu verstehen, das den Umgang mit dem Material während Produktion und Lyophilisierung erleichtern kann. Zu den geeigneten Füllsubstanzen gehören anorganische Salze wie Natriumchlorid und wasserlösliche Zucker oder Zuckeralkohole wie Saccharose, Maltose, Mannitol oder Trehalose. Bestimmte pH-Regulierungsmittel können auch als Füllmittel fungieren. Eine bevorzugte Füllsubstanz mit einer solchen zweifachen Funktion stellt Natriumbicarbonat dar. Bevorzugte Kits der vorliegenden Erfindung umfassen eine Füllsubstanz zur Erleichterung der Lyophilisierung. Eine bevorzugte Füllsubstanz für die Tetrofosmin-Kits der vorliegenden Erfindung ist Natriumbicarbonat als Füllsubstanz mit zweifacher Funktion.
Es wurde herausgefunden, dass die Eingliederung eines Strahlenschutzmittels in die Kits der vorliegenden Erfindung den Vorteil verleiht, dass der ^99mTc-Tetrofosmin-Komplex mit guter radiochemischer Reinheit und post Rekonstitution bis zu zwölf Stunden nach Zubereitung über gute Stabilität verfügt, ohne dass die Notwendigkeit eines Luftzuführungsschritts besteht, der sowohl vom Stand der Technik als auch von den Gebrauchsanweisungen auf der Myoview^TM-Packung gelehrt wird. Dies stellt eine nützliche Vereinfachung dar, weil ein Verfahrensschritt beseitigt wird, wodurch ein Handhabungsvorgang entfällt, was nicht nur in einer verringerten Strahlungsdosis für den Bediener sondern auch in einer schnelleren und einfacheren Ausführung resultiert. Ferner ist der Schritt der Luftzuführung in der radiopharmazeutischen Praxis etwas unüblich, weshalb die Gefahr besteht, dass er versehentlich vergessen wird, mit der daraus folgenden nachteiligen Wirkung auf die radiochemische Reinheit.
Die Konzentration des Strahlenschutzmittels zur Verwendung in den Kits der vorliegenden Erfindung beläuft sich geeigneterweise auf 0,0003 bis 0,7 molar, bevorzugt auf 0,001 bis 0,07 molar, besonders bevorzugt auf 0,0025 bis 0,01 molar. Für Ascorbinsäure entspricht dies einer geeigneten Konzentration von 0,05 bis 100 mg/cm³, bevorzugt 0,2 bis 10 mg/cm³, besonders bevorzugt 0,4 bis 1,5 mg/cm³.
Wenn das ^99mTc-Tetrofosmin-Radiopharmakon dieser Erfindung einem Menschen verabreicht wird, liegt eine zu verwendende zweckmäßige Radioaktivitätsmenge im Bereich von 185 bis 1221 MBq (5–33 mCi). Zur Bildgebung vom Herzen sollte, bei Verabreichung von Ruhe- und Belastungsinjektion am selben Tag, die erste Dosis 185–444 MBq (5–12 mCi) aufweisen, gefolgt von einer zweiten Dosis mit 555–1221 mBq (15–33 mCi), die annähernd 1 bis 4 Stunden später gegeben wird. Daher liegt die anfängliche ^99mTc-Aktivität in den stabilisierten radiopharmazeutischen ^99mTc-Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung im Bereich von 0,2 bis 100 GBq, was selbst unter Berücksichtigung des radioaktiven Zerfalls von ^99mTC eine mehrfache Dosierung aus der selben Zubereitung erlaubt.
Der lyophilisierte Kit der vorliegenden Erfindung ist vorzugsweise so formuliert, dass sich der pH-Wert der Lösung bei Rekonstitution mit Wasser oder Kochsalzlösung auf 8,0 bis 9,2, besonders bevorzugt auf 8,0 bis 8,6, beläuft. Dies bedeutet, dass die Menge des pH-Regulierungsmittels angepasst werden muss, wenn es sich beim Strahlenschutzmittel um Ascorbinsäure, also um eine Säure, handelt. Notwendig ist dies, um den optimalen pH-Wert des Kits für die ^99mTc-Radiomarkierung von Tetrofosmin zu gewährleisten; die Stabilität post Rekonstitution und die Eignung zur Verabreichung an Patienten bleiben gewahrt. Eine bevorzugte Kit-Formulierung für ein 30 ml-Fläschchen-Modell ist in Beispiel 2 angeführt, welches darstellt, dass die Natriumbicarbonatmenge gegenüber der herkömmlichen 10 ml-Fläschchen-Formulierung von Myoview^TM erheblich heraufgesetzt werden muss. Die Erfinder haben herausgefunden, dass bei einem 30 ml-Fläschchen-Kit das Erhöhen der Ascorbinsäuremenge auf 5,5 mg/Fläschchen oder das Verringern der Natriumbicarbonatmenge auf 10 mg/Fläschchen in gefriergetrockneten Kuchen mit inakzeptablem visuellen Erscheinungsbild resultiert. Als Grund dafür wird die geringe Glasübergangstemperatur von Ascorbinsäure (–54°C) angenommen, die wahrscheinlich die Glasübergangstemperatur der Formulierung senkt. Deshalb besteht eine Obergrenze für die Ascorbinsäuremenge, die hinzugefügt werden kann, wenn ein annehmbarer lyophilisierter Kit hergestellt werden soll. Es wurde herausgefunden, dass signifikant höhere Natriumbicarbonatlevel nötig sind, damit der Ascorbinsäure entsprochen wird und sich auch weiterhin ein annehmbarer lyophilisierter Plug ergibt.
Die Strahlenschutzmittel der vorliegenden Erfindung sind im Handel bei einer Anzahl von Lieferanten erhältlich. Tetrofosmin kann so zubereitet werden, wie beschrieben von Chen, u. a. [Zhong. Heyix. Zazhi, 17(1) 13–15 (1997)] oder von Reid, u. a. [Synth. Appl. Isotop. Lab. Corp., Band 7, 252–255 (2000)]. Die übliche Synthese schließt zunächst das Herstellen von 1,2-Bis(phosphino)ethan oder H₂PCH₂CH₂PH₂ ein, gefolgt von der Zugabe freier Radiale von überschüssigem Ethylvinylether unter Verwendung eines Radikalinitiators, wie in Beispiel 1 beschrieben.
In einem zweiten Aspekt bietet die vorliegende Erfindung einen Mehr-Dosen-Kit, der die lyophilisierte Formulierung der ersten Ausführungsform umfasst, und zwar in einem versiegelten, sterilen Behälter, der mit einem Verschluss ausgestattet ist, der die Zugabe und Entnahme von Lösungen ermöglicht, während er die sterile Integrität bewahrt; wobei der Kit so formuliert ist, dass sich 4 bis 30 Patientendosiseinheiten von ^99mTc-Tetrofosmin-Radiopharmakon aus einem einzigen Mehr-Dosen-Kit gewinnen lassen.
Der Mehr-Dosen-Kit muss so robust sein, dass er signifikant höheren Radioaktivitätspegeln und auch größeren Lösungsvolumen standhält als der herkömmliche Myoview^TM-Kit. Als Mehr-Dosen-Fläschchen geeignete Behälter besitzen bevorzugt ein Volumen von 20 bis 50 cm³, besonders bevorzugt von 20 bis 40 cm³ und ganz besonders bevorzugt von 30 cm³. Der Behälter ist mit einem gasdichten Siegel versehen, in das mehrfach mit einer Injektionsnadel eingestochen werden kann (z. B. ein Siegelverschluss aus einem aufgebördelten Septum).
Der Mehr-Dosen-Kit umfasst für mehrere Patientendosen ausreichendes Material (z. B. bis zu 100 GBq ^99mTC pro Fläschchen), wodurch die Möglichkeit besteht, Patientendosiseinheiten in Spritzen von klinischer Qualität zu verschiedenen Zeitintervallen während der brauchbaren Lebensdauer der stabilisierten Zubereitung in Entsprechung zur klinischen Situation zu entnehmen. Als Alternative dazu kann eine Dosiseinheit von ^99mTc-Tetrofosmin-Radiopharmakon in einem versiegelten Behälter bereitgestellt werden, wie oben erläutert. Unter dem Begriff „Patientendosiseinheit" bzw. „Dosiseinheit" ist eine radiopharmazeutische ^99mTc-Tetrofosmin-Zusammensetzung mit einem radioaktiven ^99mTc-Gehalt zu verstehen, der sich zur in vivo Bildgebung nach Verabreichung an einen einzelnen Patienten eignet. Derartige „Dosiseinheiten" sind in der fünften Ausführungsform (unten) weiter beschrieben. Die Mehr-Dosen-Kits der vorliegenden Erfindung sind so formuliert, dass sich 4 bis 30, vorzugsweise 6 bis 24 solcher Dosiseinheiten von ^99mTc-Tetrofosmin-Radiopharmakon erhalten lassen, und zwar in reproduzierbarer Weise bei einer Reihe von ^99mTc-Generatoreluaten. Jedoch wird es auch möglich sein, den Mehr-Dosen-Kit in einer Weise zu benutzen, dass er 1 bis 40 und möglicherweise sogar mehr als 40 solcher Dosiseinheiten ergibt.
Wie bei der ersten Ausführungsform ist beim Mehr-Dosen-Kit der zweiten Ausführungsform kein Luftzuführungsschritt im Rekonstitutionsprotokoll notwendig, was einen wichtigen Vorteil darstellt. Überdies ermöglicht der Mehr-Dosen-Kit der vorliegenden Erfindung viel kürzere Herstellungszeiten für mehrere radiopharmazeutische ^99mTc-Tetrofosmin-Zubereitungen, was mit einer wesentlich verringerten Strahlendosis für den Bediener einhergeht. Der Mehr-Dosen-Kit weist ferner eine erhöhte Haltbarkeitsstabilität von mindestens 78 Wochen auf, wohingegen der herkömmliche Myoview^TM-Kit eine Haltbarkeit von 37 Wochen besitzt. Weitere Vorteile des Mehr-Dosen-Kits werden hinsichtlich des Verfahrens der dritten Ausführungsform (unten) dargelegt.
In einem dritten Aspekt bietet die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Zubereitung mehrerer Patientendosiseinheiten des Radiopharmakons ^99mTC-Tetrofosmin, welches Folgendes umfasst:

(i) Rekonstituieren des Mehr-Dosen-Kits der zweiten Ausführungsform entweder mit einer sterilen Lösung aus ^99mTc-Pertechnetat oder zunächst mit einem biokompatiblen Träger, gefolgt von einer sterilen Lösung aus ^99mTC-Pertechnetat;
(ii) gegebenenfalls Ausführen von Schritt (i) in Anwesenheit eines antimikrobiellen Konservierungsmittels;
(iii) Ermöglichen, dass eine ^99mTc-Tetrofosmin-Komplexbildung stattfindet, damit sich eine Lösung ergibt, die einen Großvorrat des gewünschten ^99mTc-Tetrofosmin-Radiopharmakons umfasst;
(iv) gegebenenfalls Überprüfen der radiochemischen Reinheit des Großvorrats an ^99mTc-Tetrofosmin-Komplex;
(v) Entnehmen einer Dosiseinheit aus dem Großvorrat aus Schritt (iii) in eine zweckmäßige Spritze oder einen zweckmäßigen Behälter;
(vi) Wiederholen von Schritt (v) mit einer zusätzlichen Spritze oder einem zusätzlichen Behälter zu späteren Zeitpunkten, damit sich weitere Dosiseinheiten ergeben.

Die Dosiseinheit ist so, wie bezüglich der ersten Ausführungsform (oben) definiert, und ist ausführlicher in der vierten Ausführungsform (unten) beschrieben. Auch der biokompatible Träger und bevorzugte Ausführungsformen desselben sind so, wie bezüglich der ersten Ausführungsform (oben) definiert. Einen bevorzugten biokompatiblen Träger für dieses Verfahren stellt sterile Kochsalzlösung dar. Vorzugsweise erfolgt die Durchführung des Verfahrens in Abwesenheit eines antimikrobiellen Konservierungsmittels.
Die sterile ^99mTc-Pertechnetat-Lösung wird vorzugsweise aus einem Technetium-Generator gewonnen. Der radioaktive Gehalt des in Schritt (i) zu verwendenden ^99mTc-Pertechnetats befindet sich zweckgemäß im Bereich von 2 bis 100 GBq, bevorzugt 5 bis 75 GBq. Die radioaktive Konzentration von ^99mTc beträgt bevorzugt nicht mehr als 10 GBq/cm³, besonders bevorzugt nicht mehr als 2,5 GBq/cm³. Einmal hergestellt, verfügt der Großvorrat des gewünschten ^99mTc-Tetrofosmin-Radiopharmakons über eine Nutzungshaltbarkeit von bis zu 12 Stunden.
Die ^99mTc-Tetrofosmin-Komplexbildung, d. h. Schritt (iii), ist bei Raumtemperatur normalerweise innerhalb von 15 Minuten abgeschlossen.
Das Verfahren der vorliegenden Erfindung besitzt die folgenden Vorteile gegenüber der Alternative einer Rekonstitution mehrerer Myoview^TM-10 ml-Fläschchen:

(a) die Anzahl der Handhabungsvorgänge, welche Radioaktivität (^99mTc-Pertechnetat) involvieren, wird signifikant verringert;
(b) ein Luftzuführungsschritt ist nicht notwendig;
(c) es sollte nur eine einzige QK-Bestimmung pro Charge Dosiseinheiten erforderlich sein gegenüber einer QK-Bestimmung pro Dosis;
(d) das Großmengen-Fläschchen wird in solch einer Weise formuliert, dass die Formulierung einer Reihe von ^99mTc-Generatoreluat-Bedingungen standhalten kann;
(e) weniger Schritte sind involviert, weshalb sich die Automation einfacher gestaltet;
(f) weniger nicht-radioaktive Kit-Fläschchen werden benötigt, was Kühllagerraum spart.

Für den Bediener stellen eine kürzere Verarbeitungszeit (d. h. mehr Effizienz) und eine reduzierte Strahlungsdosis die entscheidenden Folgen dar, die umso wesentlicher sind je größer die Anzahl der zuzubereitenden Dosiseinheiten ausfällt.
In einem vierten Aspekt bietet die vorliegende Erfindung eine stabilisierte radiopharmazeutische Zusammensetzung, welche Folgendes umfasst:

(i) den ^99mTc-Komplex von Tetrofosmin in einem biokompatiblen Träger;
(ii) ein Strahlenschutzmittel mit einer Konzentration von 0,5 bis 6,0 mmolar, das ausgewählt ist aus Ascorbinsäure oder einem Salz davon mit einem biokompatiblen Kation;

Der „biokompatible Träger" und bevorzugte Ausführungsformen desselben sind so, wie oben definiert.
Bei einer millimolaren (mmolaren) Konzentration ist 1,0 mmolar gleich 0,001 molar. Die Konzentration des Strahlenschutzmittels liegt bevorzugt im Bereich von 0,6 bis 5,7 mmolar, besonders bevorzugt von 0,7 bis 5,5 mmolar. Diese Bereiche entsprechen jenen Konzentrationsbereichen, die erhalten werden, wenn die bevorzugten Kits der ersten Ausführungsform mit dem erforderlichen Volumenbereich von ^99mTc-Perechnetat in Kochsalzlösung rekonstituiert werden. Darüber hinaus sind diese Konzentrationen des Strahlenschutzmittels niedriger als jene, die in der Myoview^TM-„Konjugat"-Lösungszubereitung verwendet werden, die in Japan erhältlich ist.
Bevorzugte Strahlenschutzmittel für die stabilisierte Zusammensetzung sind so, wie bezüglich der ersten Ausführungsform definiert.
Bevorzugt liegt der pH-Wert der stabilisierten Zusammensetzung im Bereich von 7,5 bis 9,0, besonders bevorzugt von 8,0 bis 8,6.
In einem fünften Aspekt bietet die vorliegende Erfindung eine Patientendosiseinheit des Radiopharmakons ^99mTc-Tetrofosmin, welche die Zusammensetzung der vierten Ausführungsform umfasst, mit einem radioaktiven ^99mTc-Gehalt, der sich zur Bildgebung von einem einzelnen Patienten eignet.
Die Patientendosiseinheit ist so, wie bezüglich der ersten Ausführungsform definiert, und wird in zur Verabreichung an den Menschen geeigneter, steriler Form in einem zweckmäßigen Behälter oder einer zweckmäßigen Spritze zur Verfügung gestellt. Derartige Spritzen taugen zur klinischen Anwendung und sind vorzugsweise Einwegspritzen, so dass die Spritze niemals bei mehr als einem Patienten benutzt würde. Gegebenenfalls kann die Spritze mit einem Spritzenschild versehen sein, um den Bediener vor einer Strahlendosis zu schützen. Geeignete radiopharmazeutische Spritzenschilder sind im Handel erhältlich und umfassen vorzugsweise entweder Blei oder Wolfram, wie beschrieben von Logan [J. Nucl. Med. Technol., 21(3), 167–170 (1993)].
Alternativ dazu kann die Dosiseinheit von ^99mTc-Tetrofosmin-Radiopharmakon in einem Behälter zur Verfügung gestellt werden, der eine Versiegelung aufweist, die für ein mehrfaches Einstechen mit einer Injektionsnadel taugt (z. B. ein Versiegelungsverschluss in Form eines aufgebördelten Septums). Die Dosiseinheit der vorliegenden Erfindung wird bevorzugt in einer Spritze von klinischer Qualität bereitgestellt und ist besonders bevorzugt mit einem Spritzenschild ausgestattet.
Der radioaktive ^99mTc-Gehalt der Dosiseinheit beträgt geeigneterweise 150 bis 1500 MBq, bevorzugt 185 bis 1250 MBq. Wenn Ruhe- und Belastungsinjektion am selben Tag verabreicht werden, sollte sich die erste Dosis auf 185 bis 450 MBq belaufen, 1–4 Stunden später gefolgt von einer zweiten Dosis mit 550 bis 1250 MBq. Die Zusammensetzungen, die in der Dosiseinheit bevorzugt eingesetzt werden, sind so, wie in der dritten Ausführungsform (oben) beschrieben.
Die Erfindung wird durch die nicht einschränkenden Beispiele veranschaulicht, die nachstehend im Einzelnen ausgeführt sind.
Beispiel 1 erläutert die Synthese von Tetrofosmin. Beispiel 2 stellt einen lyophilisierten Mehr-Dosen- oder „Großmengen"-Kit der vorliegenden Erfindung dar, mit einem Myoview30 genannten bevorzugten Modell. Beispiel 3 zeigt, wie ein lyophilisierter Mehr-Dosen- oder „Großmengen"-Kit der vorliegenden Erfindung zur Zubereitung mehrerer Dosiseinheiten von ^99mTc-Tetrofosmin eingesetzt werden kann. Beispiel 4 veranschaulicht, dass Strahlenschutzmittel-haltige lyophilisierte Kits post-Rekonstitution mit ^99mTc-Pertechnetat über viele Stunden hinweg eine ausgezeichnete radiochemische Reinheit aufweisen.
Beispiel 5 führt vor Augen, dass beim Myoview30-Kit selbst ohne Luftzuführungsschritt die Stabilität post-Rekonstitution bei steigenden radioaktiven Konzentrationen (RACs: Radioactive Concentrations) höher ist als bei Myoview^TM. Außerdem veranschaulicht Beispiel 5, dass sich der Myoview30-Kit bei einem umfassenderen Bereich von Elutionsintervallen für den ^99mTc-Generator erfolgreich einsetzen lässt. Was sowohl den Bereich der radioaktiven Konzentrationen (RAC) als auch jenen des ^99mTc-Generator-Elutionsintervalls anbelangt, verfügen die Kits der vorliegenden Erfindung über nutzbringende Flexibilität, insbesondere hinsichtlich eines radiopharmazeutischen Vorgangs, bei dem unter Umständen mehrere ^99mTc-Tetrofosmin-Zubereitungen pro Tag hergestellt werden müssen.
Beispiel 6 beweist, dass der Myoview30-Kit der vorliegenden Erfindung weitaus kürzere Herstellungszeiten für mehrere radiopharmazeutische ^99mTc-Tetrofosmin-Zubereitungen ermöglicht, mit wesentlich reduzierter Strahlungsdosis für den Bediener. Zwar ist die für die Qualitätskontrollprobe verwendete Radioaktivitätsmenge bei Myoview30 und Myoview^TM die gleiche, aber Myoview30 involviert 70% weniger Zeit und 75% weniger Radioaktivität. Zusätzlich ist es für den Bediener einfacher, vier Chromatographiestreifen zur Qualitätskontrolle hinter einem Strahlungsschild zu platzieren als sechzehn.
Aus Beispiel 7 geht hervor, dass ein Mehr-Dosen-Fläschchen der vorliegenden Erfindung zur Herstellung von dreißig ^99mTc-Tetrofosmin-Dosiseinheiten verwendbar ist, unter Wahrung einer zufriedenstellenden radiochemischen Reinheit und ohne Gefährdung der Sterilität der Fläschcheninhalte. So entsprach die radiochemische Reinheit zwölf Stunden post-Rekonstitution der Spezifikation, selbst nachdem der Stöpsel mehrmals durchstochen worden war. Im Kulturmedium trat nach zwölf Stunden kein Wachstum auf, und das Produkt bestand den USP/Ph.Eur.- Sterilitätstest. Die untersuchten Zubereitungsverdünnungen zeigten einen Gehalt an bakteriellen Endotoxinen unter 313 IU/Fläschchen. Dies bedeutet, dass keine lebensfähigen Bakterien oder Abbauprodukte derselben nachgewiesen wurden und daher das Mehr-Dosen-Fläschchen ohne Bedarf eines antimikrobiellen Konservierungsmittels effizient funktioniert.
Aus Beispiel 8 ist ersichtlich, dass die Verschlüsse der Mehr-Dosen-Fläschchen der vorliegenden Erfindung bis zu fünfunddreißig Nadeleinstichen standhalten. Beispiel 9 veranschaulicht, dass Mehr-Dosen-Fläschchen der vorliegenden Erfindung eine nicht-radioaktive Nutzungshaltbarkeit von 78 Wochen (18 Monaten) besitzen, wenn sie bei 5°C (2°C bis 8°C) gelagert und vor Licht geschützt werden.
Aus 1 geht hervor, dass die Strahlenschutzmittelzusammensetzungen der vorliegenden Erfindung eine zufriedenstellende radiochemische Reinheit von über 95% bis zu zwölf Stunden post-Rekonstitution ergeben (d. h. die Nutzungshaltbarkeit der Zubereitung).
2 zeigt die Ergebnisse aus einem Vergleich der Verlustrate bezüglich der radiochemischen Reinheit von ^99mTc-Tetrofosmin im Verlauf der Zeit, und zwar als Funktion der radioaktiven Konzentration (RAC) bei Myoview30 und Myoview^TM (mit Luftzuführung). Es ist ersichtlich, dass der Myoview30-Kit der vorliegenden Erfindung weitaus robuster ist.
Beispiel 1: Synthese von Tetrofosmin
Alle Reaktionen und Handhabungsvorgänge wurden entweder in vacuo oder unter einer sauerstofffreien Stickstoffatmosphäre durchgeführt. Die Lösungsmittel wurden getrocknet und vor Verwendung mittels Stickstoffspülung entgast. α-Azoisobutyronitril (AIBN) und Ethylvinylether wurden jeweils aus BDH und Aldrich gewonnen. Bis(diphosphino)ethan wurde der Literatur entsprechend hergestellt [Inorganic Synthesis, Band 14, 10].
Eine mit einem Teflon^TM-Rührstab ausgestattete Fischer-Druckflasche wurde mit Ethylvinylether (5 cm³, 52,3 mmol), Bis(diphosphino)ethan (1 cm³, 10 mmol) und α- Azo-isobutyronitril (0,1 g, 0,61 mmol) gefüllt. Daraufhin wurde das Reaktionsgemisch gerührt und 16 Stunden lang auf 75°C erhitzt. Nach Abkühlen zurück auf Raumtemperatur wurde die viskose Flüssigkeit in einen 50 cm³-Rundkolben umgefüllt. Flüchtige Materialien wurden durch Erhitzen unter Vakuum entfernt. Das erhaltene, nicht flüchtige Material war gemäß NMR rein. Ausbeute: 3,0 g, 80%.
¹H NMR (CDCl₃): δ 1,12 (12H, dt J = 1,16 Hz, 7,15 Hz; OCH₂CH₃) 1,51 (4H, br m; PC₂H₄P), 1,7 (8H; br t, J = 7,4 Hz; PCH₂CH₂OEt), 3,4 (8H, dt J = 1,16 Hz, 7,15 Hz, OCH₂CH₃), 3,49 (8H; br m; PCH₂CH₂OEt) ppm.
³¹P NMR: δ –33,17 ppm.
Bei Raumtemperatur wurde Tetrofosmin zu Tetrofosminsulfosalicylat gewandelt durch Umsetzung mit 2,3 bis 2,5 molaren Äquivalenten von 5-Sulfosalicylsäure in Ethanol, gefolgt von Rekristallisation aus Ethanol/Ether.
Beispiel 2: Formulierung und Herstellung eines lyophilisierten Großmengen-Fläschchen-Kits

Eine optimierte Formulierung für die Herstellung eines 30 ml-Großmengen-Fläschchens lautet wie folgt:

Tetrofosmin	0,69 mg,
Zinnchlorid-Dihydrat	90 μg,
Dinatriumsulfosalicylat	0,96 mg,
Natrium-D-Gluconat	3,0 mg,
Ascorbinsäure	5,0 mg,


Natriumhydrogencarbonat	11,0 mg,
pH-Wert nach Rekonstitution	mit 8,3 bis 9,1.
Kochsalzlösung

Diese Kit-Formulierung trägt den Namen „Myoview30".
Es erfolgte die Herstellung von 500 ml-Chargen. So wurden annähernd 90% vom Gesamtvolumen des Injektionswassers (WFI: Water for Injektion) in ein Zubereitungsgefäß gegeben. Durch Spülen mit Stickstoff wurde das Injektionswasser von Sauerstoff befreit. Tetrofosminsulfosalicylat, Zinnchlorid-Dihydrat, Natrium-D-Gluconat, Ascorbinsäure und Natriumhydrogencarbonat wurden dispensiert, hinzugegeben und der Reihe nach unter konstantem Mischen aufgelöst. Die Dispensierbecher wurden mit von Sauerstoff befreitem Injektionswasser gespült. Unter kontinuierlichem Mischen wurde die Großmengen-Lösung mit von Sauerstoff befreitem Injektionswasser auf 100% des Endvolumens reguliert. Die Stickstoffspülung wurde nicht fortgesetzt. Während des verbleibenden Herstellungsverfahrens wurde im Kopfraum ein Stickstoffpolster angewandt.
Die Lösung wurde steril filtriert, und 3,0 ml der filtrierten Lösung wurden in 30 ml-Fläschchen dispensiert. Die Fläschchen wurden teilweise zugestöpselt und dann lyophilisiert.
Beispiel 3: Verfahren zur Rekonstitution eines Strahlenschutzmittel-haltigen Großmengen-Kits
Ein 30 ml-Fläschchen des Myoview30-Kits (aus Beispiel 2) wurde in einen zweckmäßigen Behälter mit strahlungssicherer Abschirmung gegeben, und das Gummiseptum wurde mittels eines mit Isopropylalkohol getränkten Tupfers desinfiziert. Eine sterile Nadel (die Lüftungsnadel) wurde durch das Gummiseptum eingeführt. ^99mTc-Pertechnetat-Generatoreluat [mit einem Volumen von 10–30 cm³; verdünnt mit Natriumchlorid-Injektion, USP wie angemessen, ohne Bakteriostatikum; bei einer radioaktiven Konzentration von bis zu 10 GBq/cm³ und einem radioaktiven ^99mTc-Gesamtgehalt von bis 100 GBq (2,7 Ci)] wurde unter Verwendung einer sterilen Spritze mit Schild zugegeben. Daraufhin wurde die Lüftungsnadel entfernt. Der Inhalt des rekonstituierten Fläschchens wurde zehn Sekunden lang schonend vermischt, um die vollständige Lösung des lyophilisierten Pulvers zu gewährleisten, und dann bei Raumtemperatur fünfzehn Minuten lang inkubiert.
Das rekonstituierte Myoview30-Fläschchen wurde bei 2–25°C gelagert, und der Inhalt wurde innerhalb von zwölf Stunden nach Zubereitung verwendet. Entnommene Aliquots wurden ebenfalls bei 2–25°C gelagert und innerhalb des gleichen 12-stündigen Zeitraums wie das rekonstituierte Myoview30-Fläschchen benutzt.
Beispiel 4: Radiochemische Analyse der radiochemischen Reinheit eines Strahlenschutzmittel-haltigen lyophilisierten Kits im Verlauf der Zeit
Radiochemische Reinheit des Kits im Verlauf der Zeit
Die radiochemische Reinheit [RCP] des rekonstituierten Myoview30-Kits (Beispiel 2) wurde mittels zweier chromatographischer Systeme gemessen:

System 1: Stationäre Phase: ITLC-SG

Mobile Phase: Aceton/Dichlormethan [35:65

v/v]
Dieses System bewirkt die Trennung des lipophilen ^99mTc-Tetrofosmins von den ^99mTc-Hydrophilen und den lipophilen Unreinheiten [Spezie B, C und X] und ^99mTc-Pertechnetat.

System 2: Stationäre Phase: Whatman Nr. Papier

Mobile Phase: Acetonitril/Wasser [50:50 v/v]
Dieses System bewirkt die Trennung reduzierten hydrolysierten Technetiums [RHT], das am Anfang des Streifens zurückbleibt, von den anderen Technetiumkomplexen, die wandern.
Das Myoview30-Fläschchen wurde ohne den Einsatz eines Luftzuführungsschritts rekonstituiert. Ergebnisse bezüglich der Rekonstitution eines Myoview30-Fläschchens mit ^99mTc-Pertechnetat (37,9 GBq in 17,5 ml; RAC = 2,2 GBQ/ml) sind in 1 aufgeführt.
Beispiel 5: Radiochemische Analyse der radiochemischen Reinheit eines Strahlenschutzmittel-haltigen lyophilisierten Kits im Verlauf der Zeit, verglichen mit dem Stand der Technik
Myoview^TM-Kits wurden von Amersham plc (nun Teil von GE Healthcare) erhalten. Die Stabilität der Myoview30-Kit-Formulierung der vorliegenden Erfindung und jene der im Handel erhältlichen Myoview^TM-10 ml-Kit-Formulierung post-Rekonstitution bei zunehmender radioaktiver Konzentration (RAC) wurden verglichen. Bezüglich Myoview^TM wurde das Rekonstitutionsverfahren entsprechend der Verpackungsbeilage durchgeführt, d. h. der Luftzuführungsschritt wurde vorgenommen.
Die Untersuchung beruhte auf acht Myoview^TM-Zubereitungen und neunundachtzig Myoview30-Zubereitungen. Myoview^TM-Fläschchen wurden mit bis zu 4,5 GBq/ml und Myoview30-Fläschchen mit bis zu 11,0 GBq/ml rekonstituiert. Alle der acht Myoview^TM-Zubereitungen wurden mit Eluat aus einem ^99mTc-Generator rekonstituiert, eluiert innerhalb eines 24-stündigen Elutionsintervalls. Hingegen wurden die Myoview30-Fläschchen mit Eluat aus ^99mTc-Generatoren mit verschiedenen Elutionsintervallen rekonstituiert, und zwar bis zu 96 Stunden ohne den Einsatz eines Luftzuführungsschritts. Die Ergebnisse sind in 2 aufgeführt.
Beispiel 6: Vergleich von Zubereitungszeit und Strahlungsdosis für den Bediener bei Myoview30 und Mvoview^TM
Sechzehn Dosiseinheiten mit jeweils 18,5 GBq (500 mCi) ^99mTc-Tetrofosmin wurden nach dem einen oder dem anderen der folgenden Verfahren zubereitet:

Verfahren 1: Rekonstituieren von vier Myoview30-Fläschchen (aus Beispiel 2) mit jeweils 74 GBq ^99mTc-Pertechnetat;
Verfahren 2: Rekonstituieren von sechzehn Myoview^TM-Fläschchen mit jeweils 18,5 GBq ^99mTc-Pertechnetat.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 aufgelistet:

Verfahren Relative Strahlungsdosis auf die Hände des Bedieners Verbindungszeit (min) QK-Zeit (min) Gesamtzeit für die Zubereitung (min)

1 88 11 2 13

2 175 28 7 35
Beispiel 7: Nachweis der Sterilität eines Mehr-Dosen-Fläschchens
Drei separate Chargen von Myoview30, hergestellt entsprechend der Beschreibung aus Beispiel 2, wurden untersucht. Unmittelbar vor der Rekonstitution wurde in jedes der beiden Fläschchen aus den drei Myoview-30 ml-Chargen eine Lüftungsnadel, BD Microlance 21 G, zusammengesetzt mit einem 0,22 μm sterilen und pyrogenfreien Millex GP-Filter, eingeführt. Die Fläschchen wurden mit 23 ml steriler Kochsalzlösung rekonstituiert. Sofort danach wurde verdünntes ^99mTc-Eluat (2 ml) in die Fläschchen injiziert, so dass der radioaktive Gehalt etwa 2 GBq/Fläschchen betrug. Bei 25°C wurden die Fläschchen zwölf Stunden lang gelagert. Nach fünfzehn Minuten wurden die Fläschchen so behandelt, wie in Tabelle 2 dargestellt. Tabelle 2

Zeit post-Rekonstitution (Stunden) Entnommenes Volumen (ml) der simulierten Dosis Gesamtzahl entnommener Einzeldosen

0,25 0,25 10

6 0,5 10

12 1 10
So wurden dreißig simulierte Dosen nach 15 Minuten, 6 Stunden und am Ende der Haltbarkeit, also nach 12 Stunden, entnommen. Die Dosen wurden unter Verwendung von 1 ml-BD-(Becton Dickinson)-Spritzen entnommen, die mit den Nadeln BD Microlance 25 G zusammengesetzt waren. Für jede Entnahme wurde eine frische Spritze/Nadel verwendet. Die Dosen Nummer 1 und 21 wurden zu Analysen auf radiochemische Reinheit geschickt. Die letzte Dosis (Nummer 30) wurde zum LAL-Test (Limulus-Amoebocyten-Lysat zur Bestimmung bakterieller Endotoxine) und zur Untersuchung des osmotischen Drucks geschickt. Das nach 12 Stunden in den Myoview30-Fläschchen verbleibende Volumen, nämlich annähernd 7,5 ml, wurde gemäß derzeitigem USP/Ph.Eur-Test auf Sterilität überprüft. So wurde das verbleibende Volumen durch zwei geteilt, die Sterilitätstests wurden vorgenommen, und es erfolgte eine 14-tägige Inkubation in Thioglycolat-Medium (TGY) und Trypton-Soja-Bouillon (TSB) in 25°C- und 32°C-Inkubatoren.
LAL-Test
Dosis Nummer 30 jedes Fläschchens wurde zur Untersuchung auf bakterielle Endotoxine geschickt. Der Inhalt der Fläschchen wurde anfänglich mit 25 ml steriler Kochsalzlösung rekonstituiert. Eine weitere Verdünnung wurde durchgeführt, indem 0,1 ml dieser Lösung genommen und zu 9,9 ml Injektionswasser (WFI) gegeben wurden. Der LAL-Test erfolgte mittels des Röhrchen-Verfahrens. Bei dieser Verdünnung belief sich die Grenze für bakterielle Endotoxine auf 313 IU/Fläschchen.
Ergebnisse

Sterilität: Als Ergebnis wurde angegeben, dass das Produkt den Sterilitätstest besteht (Bestehen = P), falls kein Wachstum im Kulturmedium auftritt.
RCP: Bei allen Zubereitungen belief sich die radiochemische Reinheit von ^99mTc-Tetrofosmin auf 96–97%.
pH-Wert: Der pH-Wert jedes Fläschchens wurde mit 8,2 gemessen.
LAL: Als Ergebnis für jedes der Fläschchen wurde angegeben, dass das Produkt besteht (P), wenn es der gesetzte Grenze entspricht.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 zusammengefasst: Tabelle 3: Zusammenfassung der Ergebnisse bezüglich Sterilität und RCP-Stabilität

Charge	GBq/Fläschche n	Zeit p. r., Stunden	Sterilität	LAL/Fläschchen
1	2,05	0,25	NA	NA
	2,04
	NA	12	P	P
			P	P
2	1,95	0,25	NA	NA
	1,83
	NA	12	P	P
			P	P
3	1,97	0,25	NA	NA
	2,06
	NA	12	P	P
			P	P
Gesamtdurchschnitt	NA	NA	P	NA
NA = nicht ausgeführt, P = bestanden

Beispiel 8: Nachweis der Verschlussintegrität eines Mehr-Dosen-Fläschchens
Beim verwendeten Myoview30-Verschluss handelte es sich um PH 701/45 rot-braun (1178) und beim Behälter um ein 30 ml-Fläschchen vom Typ 1, Schott. Zehn Myoview30-Fläschchen wurden gemäß Ph.Eur.3.2.9 getestet, außer dass statt zehn Einstichen wie bei Ph.Eur. fünfunddreißig Einstiche vorgenommen wurden. Dies war notwendig, um die erhöhte Anzahl multipler Dosierungen eines Mehr-Dosen-Fläschchens zu simulieren. Jeder Verschluss wurde fünfunddreißigmal mithilfe einer frischen Injektionsnadel mit einem Außendurchmesser von 0,8 mm durchstochen, wobei jeder Einstich an einer anderen Stelle erfolgte. Beim letzten Einstich handelte es sich gleichzeitig um eine Injektion ultrafiltrierten Wassers bis zum Nennvolumen von 30 ml. Die zehn gefüllten Fläschchen mit Einstichen wurden aufrecht in einen Becher mit Methylenblau-Lösung (1 g/l) getaucht. Der Außendruck wurde 10 min lang um 270 mbar auf 750 mbar verringert. Anschließend wurde der Umgebungsdruck wiederhergestellt, und die Fläschchen wurden, eingetaucht in die Methylenblau-Lösung, weitere dreißig Minuten lang ruhen gelassen. Die Fläschchen wurden gründlich gespült und vor einem weißen Hintergrund auf jegliche Verfärbung überprüft. Im Test wurde kein Eindringen von Farbstoff in irgendeines der Fläschchen nachgewiesen.
Beispiel 9: Stabilitäts-Untersuchung von Mehr-Dosen-Fläschchen
Mehrere Fläschchen aus drei separaten Myoview30-Chargen, zubereitet wie in Beispiel 2, wurden vor Licht geschützt und bei einer kontrollierten Temperatur von 5°C gelagert. Bei einer Lagerung von bis zu 52 Wochen wurden Fläschchen in Intervallen getestet. Tetrofosmin, Ascorbinsäure, Stanno, Dinatriumsulfosalicylat, Sauerstoffgehalt und Feuchtigkeitsgehalt wurden einem Assay unterzogen. Die Reinheit des Tetrofosmins wurde durch ¹H und ³¹P NMR überwacht. Die radiochemische Reinheit des mithilfe der gelagerten Kits zubereiteten ^99mTc-Tetrofosmins wurde ebenfalls zu jedem Zeitpunkt gemessen.
Alle erhaltenen Ergebnisse zeigten, dass das Produkt, wenn es vor Licht geschützt bei 5°C (2 bis 8°C) gelagert wurde, über den vollen Zeitraum von 52 Wochen alle Spezifikationen erfüllte. Sämtliche Ergebnisse wurden ausgewertet, und es wurde eine statistische Analyse durchgeführt. An quantitativen Parametern wurde eine Linearregressionsanalyse vorgenommen, um das Verhältnis zwischen jedem der Parameter und der Lagerzeit zu ermitteln. Der aus der Regressionsanalyse gewonnene Korrelationskoeffizient wurde unter Anwendung des Pearson-Tests auf seine Signifikanz untersucht. Das 95%-Vertrauensintervall für einen individuellen Parameter wurde berechnet. Wenn der Parameter im Verlauf der Zeit nur abnehmen (oder zunehmen) konnte, wurde ein einseitiges Vertrauensintervall berechnet. Die 95%-Vetrauensintervalle und Regressionslinien wurden bis zur 78. Woche (zum 18. Monat) extrapoliert, also 6 Monate über jenen Zeitraum hinaus, der von den Langzeitdaten abgedeckt ist. Dies stellt die maximale Verlängerung der Haltbarkeit dar, basierend auf den verfügbaren Ergebnissen gemäß ICH (The International Conference an Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use) Richtlinie Q1E. Der früheste Zeitpunkt, zu dem die 95%-Vertrauensgrenze für den Durchschnitt das vorgeschlagene Annehmbarkeitskriterium schneidet, liegt bezüglich Proben, die bei 5°C gelagert sind, jenseits der 78. Woche. Myoview30-Chargen, die in der beschriebenen Form länger als 78 Wochen gelagert wurden, wiesen zwölf Stunden post-Rekonstitution eine radiochemische Reinheit von über 90% auf, wenn die Rekonstitution mit 5,5 bis 89 GBq ^99mTc-Pertechnetat erfolgt war.

Claims

Lyophilisierter, nicht-radioaktiver Kit, der nach Rekonstitution mit ^99mTc-Pertechnetatlösung eine stabilisierte radiopharmazeutische ^99mTc-Tetrofosmin-Zusammensetzung ergibt, wobei der Kit eine Formulierung aufweist, welche Folgendes umfasst: (i) Tetrofosmin; (ii) ein Strahlenschutzmittel, ausgewählt aus Ascorbinsäure oder einem Salz derselben mit einem biokompatiblen Kation; (iii) ein biokompatibles Reduktionsmittel; (iv) ein pH-Regulierungsmittel in einer Menge, die wirksam ist, um zu gewährleisten, dass, bei Rekonstitution des Kits mit Salzlösung, die sich ergebende Lösung einen pH-Wert im Bereich von 8,0 bis 9,2 aufweist; mit der Maßgabe, dass weder der Kit noch die radiopharmazeutische ^99mTc-Tetrofosmin-Zusammensetzung ein antimikrobielles Konservierungsmittel enthält.
Kit nach Anspruch 1, welcher weiterhin mindestens einen Transchelator umfasst, ausgewählt aus 5-Sulfosalicylsäure und Gluconsäure oder Salzen derselben mit einem biokompatiblen Kation.
Kit nach Anspruch 1 oder 2, wobei das biokompatible Reduktionsmittel das Zinn-Ion umfasst.
Kit nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei das pH-Regulierungsmittel Natriumbicarbonat umfasst.
Mehr-Dosen-Kit, welcher die lyophilisierte Formulierung nach Anspruch 1 bis 4 umfasst, in einem versiegelten, sterilen Behälter, der mit einem Verschluss ausgestattet ist, der die Zugabe und Entnahme von Lösungen ermöglicht, während er die sterile Integrität bewahrt; wobei der Kit so formuliert ist, dass sich 4 bis 30 Patientendosiseinheiten von ^99mTc-Tetrofosmin-Radiopharmakon aus einem einzigen Mehr-Dosen-Kit gewinnen lassen.
Mehr-Dosen-Kit nach Anspruch 5, wobei der Behälter ein mit Septum versiegeltes Fläschchen mit einem Volumen von 20 bis 40 cm³ ist.
Verfahren zur Herstellung mehrerer Patientendosiseinheiten des Radiopharmakons ^99mTc-Tetrofosmin, welches Folgendes umfasst: (i) Rekonstituieren des Mehr-Dosen-Kits nach Anspruch 5 oder 6 entweder mit einer sterilen Lösung aus ^99mTc-Pertechnetat oder zunächst mit einem biokompatiblen Träger, gefolgt von einer sterilen Lösung aus ^99mTc-Pertechnetat; (ii) gegebenenfalls Ausführen von Schritt (i) in Anwesenheit eines antimikrobiellen Konservierungsmittels; (iii) Ermöglichen, dass eine ^99mTc-Tetrofosmin-Komplexbildung stattfindet, damit sich eine Lösung ergibt, die einen Großvorrat des gewünschten ^99mTc-Tetrofosmin-Radiopharmakons umfasst; (iv) gegebenenfalls Überprüfen der radiochemischen Reinheit des Großvorrats an ^99mTc-Tetrofosmin-Komplex; (v) Entnehmen einer Dosiseinheit aus dem Großvorrat aus Schritt (iii) in eine zweckgemäße Spritze oder einen zweckgemäßen Behälter; (vi) Wiederholen von Schritt (v) mit einer zusätzlichen Spritze oder einem zusätzlichen Behälter zu späteren Zeitpunkten, damit sich weitere Dosiseinheiten ergeben.
Verfahren nach Anspruch 7, wobei das in Schritt (i) verwendete ^99mTc-Pertechnetat einen radioaktiven Gehalt im Bereich von 5 bis 100 GBq aufweist.
Stabilisierte radiopharmazeutische Zusammensetzung, welche Folgendes umfasst: (i) den ^99mTc-Komplex aus Tetrofosmin in einem biokompatiblen Träger; (ii) ein Strahlenschutzmittel, ausgewählt aus Ascorbinsäure oder einem Salz derselben mit einem biokompatiblen Kation, in einer Konzentration von 0,5 bis 6,0 mmolar; mit der Maßgabe, dass die radiopharmazeutische Zusammensetzung kein antimikrobielles Konservierungsmittel enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 9, wobei die Strahlenschutzmittelkonzentration im Bereich von 1,4 bis 5,5 mmolar liegt.
Zusammensetzung nach Anspruch 9 oder 10, wobei das Strahlenschutzmittel Ascorbinsäure ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 9 oder 10, wobei das Strahlenschutzmittel Natriumascorbat ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 9 bis 12, wobei der biokompatible Träger Salzlösung umfasst.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 9 bis 13, wobei der radioaktive Gehalt des ^99mTc 150 bis 850 MBq beträgt.
Patientendosiseinheit des Radiopharmakons ^99mTc-Tetrofosmin, welche die Zusammensetzung nach Anspruch 9 bis 14 in einem Behälter oder einer Spritze von klinischer Qualität umfasst, wobei sich der radioaktive ^99mTc-Gehalt des Radiopharmakons zur Bilderzeugung von einem einzigen Patienten eignet.
Patientendosiseinheit nach Anspruch 15, welche in einer Spritze mit einem Spritzen-Abschirmungsteil bereitgestellt wird, um den Bediener gegen eine Strahlendosis zu schützen.