DE60131250T2

DE60131250T2 - Nucleosid-analoga mit monozyklischen basischen carboxamidingruppen

Info

Publication number: DE60131250T2
Application number: DE60131250T
Authority: DE
Inventors: Robert Costa Mesa TAM; Kanda Costa Mesa RAMASAMY; Zhi Costa Mesa HONG; Johnson Costa Mesa LAU
Original assignee: Valeant Pharmaceuticals North America LLC
Current assignee: Bausch Health US LLC
Priority date: 2000-02-15
Filing date: 2001-02-15
Publication date: 2008-08-28
Also published as: WO2001060381B1; JP2004509061A; CA2399208A1; CZ20022798A3; US6455508B1; ATE377422T1; EP1813278A1; NZ521390A; AU3845001A; RU2002120483A; EP1278528A4; RU2002120922A; PL357945A1; RS20090086A; HUP0300912A2; NO20023852D0; MXPA02007931A; CA2399208C; EP1813278B9; JP5253204B2

Description

Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der Nucleosid-Analoga.
Hintergrund der Erfindung
Ribavarin (1-β-D-Ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamid) ist ein Nukleosid-Analogon, das Wirksamkeit bei der Behandlung von Viruserkrankungen sowohl als Monotherapie (Respiratorisches Syncytial Virus, Hall, C. B.; McBride, J. T.; Walsh, E. E.; Bell, D. M.; Gala, C. L.; Hildreth, S.; Ten Eyck, L. G.; W. J. Hall. Aerosolized ribavirin treatment of infants with respiratory syncytial viral infection. N. Engl. J. Med. 1983, 308, 1443–11447), als auch in Kombinationstherapie mit Interferon-alpha gezeigt hat (Hepatitis C Virus, Reichard, O.; Norkrans, G.; Fryden, A.; Braconier, J-H.; Sonnerborg, A.; Weiland, O. Randomized, double blind, placebo controlled trial of interferon alpha 2B with and without ribavirin for chronic hepatitis C. Lancet 1998, 351, 8387). Kürzlich berichtete Studien zeigen auf, dass die in vivo Nützlichkeit von Ribavarin nicht nur aus direkter Inhibierung viraler Replikation, sondern auch von ihrer Fähigkeit T-Zellen vermittelte Immunität zu steigern, resultieren kann. (Hultgren, C.; Milich, D. R.; Weiland, O.; Sällberg, M. The antiviral compound ribavirin modulates the T helper Type1/Type2 subset balance in hepatitis B and C virus specific immune responses. J. Gen. Virol. 1998, 79, 2381–2391; Ning, Q.; Brown, D.; Parodo, J.; Cattral, M.; Fung, L.; Gorczynski, R.; Cole, E.; Fung, L.; Ding, J. W.; Liu, M. F.; Rotstein, O.; Phillips, M. J.; Levy, G. Ribavirin inhibits viral-induced macrophage production of tumor necrosis factor, interleukin-1, procoagulant activity fgl2 prothrombinase and preserves Th1 cytokine production but inhibits Th2 cytokine response. J. Immunol. 1998, 160, 3487–3493; Martin, M. J.; Navas, S.; Quiroga, J. A.; Pardo, M.; Carreno, V. Effects of the ribavirin-interferon alpha combination an cultured peripheral blond mononuclear cells from chronic hepatitis C patients. Cytokine 1998, 79, 2381–2391). Diese immunomodulatorische Wirkung von Ribavirin ist in vitro durch Messen der Niveaus von Typ 1 Cytokinen, die durch aktivierte T-Zellen sowohl vom Menschen als auch von der Maus erzeugt werden (Tam, R. C.; Pai, B.; Bard, J.; Lim, C.; Averett, D. R.; Phan, U. T.; Milovanovic, T. Ribavirin polarizes human T cell responses towards a Type 1 cytokine Profile. J. Hepatol. 1999, 30, 376–382), und durch andere Maßnahmen demonstrierbar. Die Einleitung einer Typ 1 Cytokin Bias durch Ribavirin ist funktionell in vivo bei Maussystemen signifikant (Tam, R. C.; Lim, C.; Bard, J.; Pai, B. Contact hypersensitivity responses following ribavirin treatment in vivo are influenced by Type 1 cytokine polarization, regulation of IL-10 expression and costimulatory signaling. J. Immunol. 1999, 163, 3709–3717).
Säugetierimmunsysteme enthalten zwei Hauptklassen von Lymphocyten: B-Lymphocyten (B-Zellen), welche im Knochenmark entstehen, und T-Lymphocyten (T-Zellen), die im Thymus entstehen. B-Zellen sind größtenteils für die humorale Immunität verantwortlich (d. h. die Antikörperherstellung), während T-Zellen größtenteils für die zellvermittelte Immunität verantwortlich sind.
Im Allgemeinen gilt es, dass T-Zellen in zwei Unterklassen fallen: Helfer-T-Zellen und cytotoxische T-Zellen. Helfer-T-Zellen aktivieren andere Lymphocyten, einschließlich B-Zellen und cytotoxische T-Zellen, und Makrophagen, indem lösliche Proteinmediatoren, die Cytokine genannt werden, die bei der zellvermittelten Immunität involviert sind, freigesetzt werden.
Im allgemeinen gilt es ebenfalls, dass Helfer-T-Zellen in zwei Unterklassen fallen: Typ 1 und Typ 2. Typ 1 Zellen erzeugen Interleukin 2 (IL-2), Tumornekrosefaktor (TNFα) und Interferon Gamma (IFNγ) und sind hauptsächlich für die zellvermittelte Immunität, wie zum Beispiel Spättyp-Hypersensitivität und antivirale Immunität, verantwortlich. Im Gegensatz dazu erzeugen Typ 2 Zellen Interleukine, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 und IL-13 und sind hauptsächlich beim assistieren von humoralen Immunantworten, wie zum Beispiel jene, die in Antwort auf Allergen, zum Beispiel IgE und IgG4 Antikörper Isotyp-Umschalten, beobachtet werden, involviert (Mosmann, 1989, Annu Rev Immunol, 7: 145–173).
Wie hier verwendet bedeuten die Begriffe Typ 1 und Typ 2 "Antworten", dass der gesamte Bereich von Wirkungen, die aus der Induktion von Typ 1 bzw. Typ 2 Lymphocyten resultieren, beinhaltet sind. Unter anderem beinhalten diese Antworten die Variation bei der Herstellung der entsprechenden Cytokine durch Transkription, Translation, Sekretion und möglicherweise anderer Mechanismen, gesteigerte Proliferation der entsprechenden Lymphocyten und andere Wirkungen, die mit der gesteigerten Produktion von Cytokinen, einschließlich Beweglichkeitseffekten, verbunden sind.
Die US Patente 6,518,253 und 6,423,695 betreffen die Aspekte unserer neuesten Entdeckungen, einschließlich der Wirkung von verschiedenen Nukleosiden (welche hier so definiert sind, dass sie Derivate und Analoga nativer Nukleoside beinhalten) auf die selektive Modulierung von Lymphocyt-Antworten relativ zueinander. Unter anderem haben wir gezeigt, dass entweder Typ 1 und Typ 2 Antworten selektiv unterdrückt werden können, während die anderen entweder induziert oder relativ unbeeinflusst gelassen werden, und eine der Typ 1 oder Typ 2 Antworten selektiv induziert werden kann, während die andere entweder unterdrückt oder relativ unbeeinflusst gelassen wird. Wir haben ebenfalls die überraschende Wirkung herausgefunden, dass einige Nukleoside, die bei der selektiven Modulierung von Typ 1 und Typ 2 Antworten relativ zueinander wirksam sind, dazu neigen, eine bimodale Wirkung zu haben. Unter anderem neigen einige Nukleoside, die dazu neigen, allgemein sowohl Typ 1 als auch Typ 2 Aktivität bei einer relativ hohen Dosis zu unterdrücken oder zu induzieren, dazu Typ 1 und Typ 2 relativ zueinander bei relativ niedrigen Dosen selektiv zu modulieren.
Das US Patent 6,130,326 offenbart die Verwendung von D- und L-Ribavirin für die Behandlung verschiedener Krankheiten, einschließlich Infektionen, Infestationen, Geschwülste und Autoimmunerkrankungen. Insbesondere wird die Verwendung dieser Verbindungen gegen Hepatitis B Virus und Hepatitis C Virus offenbart.
Gabrielsen B. et al (J. Med. Chem. (1992) 35, 3231–3238) als auch Witkowski, J. T. et al. (J. Med. Chem. (1973) 16, 935– 937) berichten von der Verwendung verschiedener Analoga von Ribavirin, wie zum Beispiel Virabine, die eine biologische Aktivität gegenüber einer großen Vielfalt von Viren haben.
Viramidine^TM (1-β-D-Ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamidinhydrochlorid) hat sich bei zehn verschiedenen Viren aktiv gezeigt, was mit Ribavirin vergleichbar ist (J. T. Witkowski, R. K. Robins, G. P. Khare, R. W. Sidwell, J. Med. Chem., 16, 935–937, 1973; R. W. Sidwell, J. H. Huffman, D. L. Barnard, D. Y. Pifat, Antiviral Research, 10, 193–208, 1988; B. Gabrielsen, M. J. Phelan, L. Barthel-Rosa, C. See, J. W. Huggins, D. F. Kefauver, T. P. Monath, M. A. Ussery, G. N. Chmurny, E. M. Schubert, K. Upadhya, C. Kwong, D. A. Carter, J. A. Secrist III, J. J. Kirsi, W. M. Shannon, R. W. Sidwell, G. D. Kini, R. K. Robins, J. Med. Chem., 35, 3231–3238, 1992). Zusätzlich ist Viramidine^TM wie Ribavirin ein Inhibitor von IMP Dehydrogenase (R. C. Willis, R. K. Robins, J. E. Seegmiller, Molecular Pharmacology, 18, 287–295, 1980). Des Weiteren deuten vorläufige toxikologische Studien darauf hin, dass Viramidine^TM weniger toxisch ist als Ribavirin (D. Y. Pifat, R. W. Sidwell, P. G. Canonico, Antiviral Research, 9, 136, 1988). Ebenso haben neueste Studien in unserem Labor (R. Tam, K. Ramasamy, ICN Pharmaceuticals, Inc., unveröffentlichte Ergebnisse, 1999) offengelegt, dass Viramidine^TM und Ribavirin ähnliche immunomodulatorische Eigenschaften zeigen. Diese Ergebnisse, gekoppelt mit der geringen Bioverfügbarkeit und der Toxizität, die mit Ribavirin verbunden ist, haben uns dazu veranlasst, nicht nur Viramidine^TM für andere Viruserkrankungen zu erschließen, sondern ebenfalls andere Derivate von Viramidine^TM herzustellen, einschließlich der Synthese von Prodrugs von Viramidine^TM, und diese als potentielle Antivirus-Mittel zu screenen.
Die Wirkung von anderen analogen Nukleosidverbindungen für das selektive Modulieren von Lymphocyt-Antworten relativ zueinander ist bisher nicht untersucht oder dokumentiert worden. Wir haben entdeckt, dass die bimodale Wirkung oder die selektive Modulation von Typ 1 und Typ 2 Antworten relativ zueinander ebenfalls nach der Verabreichung von anderen analogen Nukleosidverbindungen, wie zum Beispiel Prodrug-Formen der Verbindungen, auftritt.
Es gibt viele Barrieren zu überwinden bei der Entwicklung von biologisch aktiven Verbindungen in klinisch verwendbare Agenzien. Viele wirksame biologisch aktive Verbindungen werden aufgrund ihrer unerwünschten biopharmazeutischen Eigenschaften, welche eine geringe Bioverfügbarkeit aufgrund einer geringen Durchlässigkeit durch biologische Barrieren, wie zum Beispiel die Blut-Hirn-Schranke (BBB) und die intestinale Barriere, beinhalten, niemals klinisch verwendbare Agenzien. Obwohl viele Faktoren die Bioverfügbarkeit eines Arzneimittels beeinflussen, sind die unerwünschten physikochemischen Eigenschaften (zum Beispiel Ladung, Lipophilität, Wasserstoffbindungspotential, Größe) vieler Arzneimittel wahrscheinlich einer der am häufigsten anzutreffenden Faktoren, die die Permeation von Arzneimitteln durch biologische Barrieren verhindern. Deshalb ist die Optimierung der physikochemischen Charakteristika (Ladung, Lipophilität, Wasserstoffbindungspotential, Größe) eines Arzneimittels die höchstwahrscheinlich allgemeinste Strategie, um den Transport von Arzneimitteln durch diese Membranbarrieren zu erleichtern.
Um die physikochemischen Eigenschaften von Arzneimitteln zu optimieren, ist eine mögliche Strategie die von Prodrugs (H. Bundgaard, Design of Prodrugs, Elsevier, Amsterdam, 1985; N. Bodor, L. Prokai, W. M. Wu, H. Farag, S. Jonalagadda, M. Kawamura, J. Simpkins, Science, 257, 1698–1700, 1992; H. E. Taylor, K. B. Sloan, J. Pharm. Sci., 87, 5–20, 1998). Der Begriff Prodrug wird verwendet, um ein Agens zu beschreiben, welches sich nach der Verabreichung einer chemischen oder enzymatischen Umwandlung in das aktive oder Hauptarzneimittel unterziehen muss, so dass das metabolische Produkt oder Hauptarzneimittel anschließend die gewünschte pharmakologische Antwort zeigen kann. In dem bestimmte polare funktionelle Gruppen in kleinen organischen Molekülen vorübergehend und bioreversibel derivatisiert werden, sind die unerwünschten physiko-chemischen Charakteristika (zum Beispiel Ladung, Wasserstoffbindungspotential) dieser Gruppen "maskiert" worden, ohne die pharmakologischen Eigenschaften der Moleküle permanent zu verändern. Diese Strategie ist sehr erfolgreich in Fällen verwendet worden, bei denn die Prodrugderivatisierung das Umwandeln einer funktionellen Carboxyl- oder einer Hydroxylgruppe in einen Ester, der leicht in vivo entweder chemisch oder enzymatisch hydrolisiert werden kann, beinhaltet. Aufgrund des erfolgversprechenden Prodrugkonzepts nehmen wir an, dass die Einführung anderer Einheiten in das Hauptarzneimittel die Bioverfügbarkeit, die Adsorption und die antiviralen Wirkungen erhöhen würde.
Trotz der Existenz eines bis jetzt undefinierten Mechanismus haben wir herausgefunden, dass enormer potentieller Nutzen aus der selektiven Modulation von Typ 1 und Typ 2 Antworten relativ zueinander abgeleitet werden kann. Wir haben daraus geschlossen, dass die spezifische Modulation von Typ 1 relativ zu Typ 2 bei der Behandlung einer großen Vielzahl von Bedingungen und Erkrankungen, die von Infektionen, Infestationen, Tumoren und Überempfindlichkeiten bis zu Autoimmunerkrankungen reichen, verwendbar sein können.
Diese Entdeckungen sind insbesondere signifikant, da moderne Behandlungsstrategien für viele der oben aufgelisteten Erkrankungen eine begrenzte Wirksamkeit, signifikante Nebenwirkungen oder beides haben. Die Behandlung von Autoimmunerkrankungen ist zum Beispiel häufig auf palliative Maßnahmen, die Entfernung von toxischen Antikörpern (wie bei Myasthenie Gravis) und die Verabreichung von gefährlichen Arzneimitteln, einschließlich Corticosteroide, Chloroquin-Derivate und antimetabolischen oder Antitumor-Arzneimitteln und Arzneimitteln, wie zum Beispiel Cyclosporine, die auf Immunsystemzellen zielen, beschränkt.
Zusammenfassung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung einer Verbindung gemäß Formel 1 zur Herstellung eines Medikaments für die Behandlung einer Hepatitis C Virus (HCV) Viralinfektion oder einer Hepatitis B Virus (HBV) Viralinfektion
Formel 1 – Viramidine^TM (ICN 3142)
Kurze Beschreibung der Zeichnung
1 ist ein beispielhaftes Syntheseschema für die Synthese einer Verbindung gemäß Formel 1.
2 ist eine graphische Darstellung der Wirkung der in Betracht gezogenen und anderer Verbindungen auf die Typ 1 Cytokinsynthese in SEB-aktivierten menschlichen T-Zellen.
3 ist eine graphische Darstellung der Wirkung von 0.625– 10 μM Konzentration einer in Betracht gezogenen Verbindung auf die Typ 1 Cytokinsynthese in SEB-aktivierten menschlichen T-Zellen.
4 ist eine graphische Darstellung der Wirkung einer in Betracht gezogenen Verbindung auf CHS Antworten bei BALG/c Mäusen.
5 ist eine graphische Darstellung einer Spitzenantwort und eines Spitzenbereichs von in Betracht gezogenen und anderen Verbindungen auf die Typ 1 Cytokinsynthese in SEB-aktivierten menschlichen T-Zellen.
Detaillierte Beschreibung
Dort wo die folgenden Begriffe in dieser Beschreibung verwendet werden, werden sie wie unten definiert verwendet.
Die Begriffe "Nukleosid" und "analoge Nukleosidverbindung" sind austauschbar und betreffen eine Verbindung, die aus irgendeiner Pentose- oder modifizierten Pentoseeinheit besteht, die an eine spezifische Position eines Heterocyclus, aromatischen Heterocyclus oder an die natürliche Position eines Purins (9-Position) oder Pyrimidins (1-Position) oder an die äquivalente Position in einem Analogon gebunden ist.
Der Begriff "Nukleotid" betrifft einen Phosphatester, der an der 5'-Position eines Nukleosids substituiert ist.
Der Begriff "Heterocyclus" betrifft einen einwertigen gesättigten oder ungesättigten carbocyclischen Rest mit mindestens einem Heteroatom, wie zum Beispiel N, O oder S, innerhalb des Rings, wobei jede zur Verfügung stehende Position davon optional zum Beispiel mit Hydroxy, Oxo, Amino, Imino, niederem Alkyl, Brom, Chlor und/oder Cyano substituiert sein kann. Eingeschlossen in diese Klasse von Substituenten sind Purine, Pyrimidine.
Der Begriff "Purin" betrifft stickstoffhaltige bicyclische Heterocylen.
Der Begriff "Pyrimidin" betrifft stickstoffhaltige monocyclische Heterocyclen.
Der Begriff "D-Nukleoside" betrifft die Nukleosid-Verbindungen, die eine D-Ribose Zuckereinheit (zum Beispiel Adenosin) haben.
Der Begriff "L-Nukleoside" betrifft die Nukleosid-Verbindungen, die eine L-Ribose Zuckereinheit haben.
Die Begriffe "L-Konfiguration" und "D-Konfiguration" werden überall in der vorliegenden Erfindung verwendet, um die chemische Konfiguration der Ribofuranosyl-Einheit der Verbindungen, die mit dem Pyrrolo-Pyrimidon-Teil des Moleküls verbunden sind, zu beschreiben.
Der Begriff "C-Nukleoside" wird überall in der Beschreibung verwendet, um den Verbindungstyp, der sich zwischen der Ribose Zuckereinheit und der heterocyclischen Base bildet, zu beschreiben. In C-Nukleosiden stammt die Verbindung von der C-1 Position der Ribose Zuckereinheit und verbindet sich mit dem Kohlenstoff der heterocyclischen Base. Die Verbindung, die sich bei C-Nukleosiden bildet, ist vom Kohlenstoff-zu-Kohlenstoff Typ.
Der Begriff "N-Nukleoside" wird überall in der Beschreibung verwendet, um den Verbindungstyp, der sich zwischen der Ribose Zuckereinheit und der heterocyclischen Base bildet, zu beschreiben. In N-Nukleosiden stammt die Verbindung von der C-1 Position der Ribose Zuckereinheit und verbindet sich mit dem Stickstoff der heterocyclischen Base. Die Verbindung, die sich bei N-Nukleosiden bildet, ist vom Kohlenstoff-zu-Stickstoff Typ.
Der Begriff "Schutzgruppe" betrifft eine chemische Gruppe, die an ein Sauerstoff- oder Stickstoffatom angebracht wird, um dessen weitere Reaktion während des Verlaufs der Derivatisierung anderer Einheiten in dem Molekül, in dem sich der Sauerstoff oder Stickstoff befindet, zu verhindern. Eine große Vielzahl von Sauerstoff- und Stickstoff-Schutzgruppen sind dem Durchschnittsfachmann auf dem Gebiet der organischen Synthese bekannt.
Der Begriff "niederes Alkyl" betrifft Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, t-Butyl, i-Butyl oder n-Hexyl. Dieser Begriff wird weiter durch eine cyclische, verzweigte oder gerade Kette von ein bis sechs Kohlenstoffatomen beispielhaft erläutert.
Der Begriff "Aryl" betrifft einen einwertigen ungesättigten aromatischen carbocyclischen Rest mit einem einzelnen Ring (zum Beispiel Phenyl) oder zwei kondensierten Ringen (zum Beispiel Naphthyl), der/die optional mit Hydroxyl, niederem Alkyl, Chlor und/oder Cyano substituiert sein kann.
Der Begriff "Heterocyclus" betrifft einen einwertigen gesättigten oder ungesättigten carbocyclischen Rest mit mindestens einem Heteroatom, wie zum Beispiel N, O, S, Se oder P, innerhalb des Rings, wobei jede verfügbare Position davon optional unabhängig mit Hydroxy, Oxo, Amino, Imino, niederem Alkyl, Brom, Chlor und/oder Cyano substituiert oder unsubstituiert sein kann.
Der Begriff "monocyclisch" betrifft einen einwertigen gesättigten carbocyclischen Rest mit mindestens einem Heteroatom, wie zum Beispiel O, N, S, Se oder P, innerhalb des Rings, wobei jede verfügbare Position davon optional unabhängig mit einer Zuckereinheit oder irgendwelchen anderen Gruppen, wie zum Beispiel Brom, Chlor und/oder Cyano, substituiert sein kann, so dass das monocyclische Ringsystem letztendlich aromatisch (zum Beispiel Thymidin) ist.
Die Begriffe "Immunomodulator" und "Modulator" werden hier synonym verwendet und betreffen natürliche oder synthetische Produkte, die das normale oder aberrante Immunsystem durch Stimulation oder Unterdrückung modifizieren können.
Der Begriff "wirksame Menge" betrifft die Menge einer Verbindung der Formel (1), die die Immunfunktion auf normalen Niveaus hält oder die Immunfunktion über normale Niveaus bringt, um die Infektion zu eliminieren.
Die Verbindungen der Formel 1 haben mehrere asymmetrische Zentren. Entsprechend können sie entweder in einer optisch aktiven Form oder als ein racemisches Gemisch hergestellt werden. Der Umfang der beschriebenen und beanspruchten Erfindung umfasst die einzelnen optischen Isomere und nichtracemischen Gemische davon, als auch die racemischen Formen der Verbindungen der Formel 1.
Die Begriffe "α" und "β" bezeichnen die spezifische stereochemische Konfiguration eines Substituenten an einem asymmetrischen Kohlenstoffatom in einer gezeichneten chemischen Struktur.
Der Begriff "Enantiomere" betrifft ein Paar von Stereoisomeren, die nicht zur Deckung zu bringende Spiegelbilder voneinander sind. Ein Gemisch eines Paares von Enantiomere in einem 1:1 Verhältnis ist ein "racemisches" Gemisch.
Der Begriff "Isomere" betrifft verschiedene Verbindungen, die dieselbe Formel haben. "Stereoisomere" sind Isomere, die sich nur in der Art wie die Atome im Raum angeordnet sind unterscheiden.
"Pharmazeutisch annehmbare Salze" können irgendwelche Salze von anorganischen und organischen Säuren oder Basen sein.
Verbindungen
Die analoge Nukleosidverbindung, die in der vorliegenden Erfindung verwendet wird, wird im Allgemeinen durch die Formel 1 beschrieben:
Formel 1 – Viramidine^TM (ICN 3142) wobei die chemische Konfiguration der Verbindung die L-Konfiguration oder die D-Konfiguration ist. Eine beispielhafte Synthese der in Betracht gezogenen Verbindungen (hier: Viramidine^TM) kann einem Verfahren folgen, das unten angegeben und in 1 gezeigt ist.
3-Cyano-1-(2,3,5-tri-O-acetyl-β-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol (7): Eine Mischung von 3-Cyano-1,2,4-triazol (18.8 g, 200 mmol) (6), 1,2,3,5-Tetra-O-acetyl-β-D-ribofuranose (63.66 g, 200 mmol) und Bis(p-Nitrophenyl)phosphat (1 g) wurden in einen RB Kolben (500 ml) gegeben. Der Kolben wurde in ein auf 165–175°C vorgeheiztes Ölbad unter Wasserstrahlpumpenvakuum unter Rühren für 25 Minuten gegeben. Die abgeschiedene Essigsäure wurde in einer Eiskühlfalle, die zwischen der Wasserstrahlpumpe und dem RB Kolben platziert ist, gesammelt. Der Kolben wurde aus dem Ölbad entfernt und man lies ihn abkühlen. Wenn die Temperatur des Kolbens ungefähr 60–70°C erreicht hatte, wurden EtOAc (300 ml) und gesättigte NaHCO₃ (150 ml) hineingegeben und in EtOAc extrahiert. Die wässrige Schicht wurde erneut mit EtOAc (200 ml) extrahiert. Das vereinigte EtOAc Extrakt wurde mit gesättigter NaHCO₃ (300 ml), Wasser (200 ml) und Kochsalzlösung (150 ml) gewaschen. Das organische Extrakt über wasserfreiem Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und das Filtrat zur Trockne verdampft. Der Rest wurde in Ether (100 ml) aufgelöst, was durch Kühlung bei 0°C für 12 h farblose Kristalle bereitstellte. Der Feststoff wurde filtriert, mit einem Minimum an kalten EtOH (20 ml) gewaschen und in Hochvakuum über festem NaOH getrocknet. Ausbeute: 56.4 g (80%). Schmp: 96–97°C. ¹HMR (CDCl₃): δ 2.11 (s, 3H, COCH₃), 2.13 (s, 3H, COCH₃), 2.14 (s, 3H, COCH₃), 4.22 (dd, 1H), 4.46 (m, 2H), 5.52 (t, 1H, J = 6.0 Hz), 5.70 (m, 1H), 6.01 (d, 1H, C₁H J = 3.6 Hz) und 8.39 (s, 1H, C₅H). Anal. ber. für C₁₄H₁₆N₄O₇ (352. 30): C, 47.73; H, 4.58; N, 15.90. Gefunden: C, 47.70; H, 4.63; N, 16.01.
1-β-D-Ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamidin (Viramidin^TM) hydrochlorid (8): Eine Mischung von (7) (14.08 g, 40.0 mmol), NH₄Cl (2.14 g, 40.0 mmol) und wasserfreier Ammoniak (150 ml) wurden in einer Stahlbombe bei 85°C für 18 h erwärmt. Die Stahlbombe wurde gekühlt, geöffnet und der Inhalt wurde zur Trockne verdampft. Der Rest wurde aus MeCN-EtOH kristallisiert, um 10.6 g (95%) von 8 bereitzustellen. Schmp: 177–179°C. ¹HMR (DMSO-d₆): δ 3,44-4.2 (m, 3H), 4.40 (m, 2H), 5.04 (t, 1H), 5.29 (m, 1H), 5.74 (m, 1H), 5.87 (d, 1H, C₁H), 8.96 (bs, 3H) und 9.17 (s, 1H, C₅H). Anal. ber. für C₈H₁₄ClN₅O₄ (279.68): C, 34.35; H, 5.05; N, 25.04; Cl, 12.69. Gefunden: C, 34.39; H, 5.10; N, 25.14; Cl, 12.71.
Alternativ kann die Synthese aus handelsüblichem Ribavirin^TM wie folgt durchgeführt werden:
2'‚3',5-Tri-O-acetyl-1-β-D-ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamid (9). Eine Suspension von 1-β-D-Ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamid (Ribavirin^TM) (28.4 g, 116.4 mmol) (5) in Essigsäureanhydrid (200 ml) und Pyridin (50 ml) wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Die resultierende klare Lösung wurde im Vakuum aufkonzentriert, um einen klaren Schaum (43.1 g, quantitativ) zu ergeben. Dieser Schaum war auf TLC homogen und wurde ohne Reinigung direkt für den nächsten Schritt verwendet. Eine kleine Menge wurde durch Flashchromatographie gereinigt, um eine analytische Probe zu ergeben. ¹H NMR (300 MHz), DMSO-d₆) δ 2.01, 2.08, 2.09 (3s, 9H, COCH₃), 4.10 (m, 1H), 3.52 (m, 2H), 5.58 (t, 1H), 5.66 (m, 1H); 6.33 (d, 1H, J = 3.0 Hz, C₁H), 7.73, 7.92, (2s, 2H, CONH₂), 8.86 (s, 1H, C₅H Triazol). Anal. (C₁₀H₁₈N₄O₈) C, H, N.
3-Cyano-2',3',5'-tri-O-acetyl-1-β-D-ribofuranosyl-1,2,4-triazol (10). Zu einer Lösung von (9) (43.1 g, 116.4 mmol) in Chloroform (500 ml) wurde Triethylamin (244 ml) hinzugegeben und die Mischung wurde in einem Eis-Salzbad auf 0°C gekühlt. Phosphoroxychlorid (30.7 ml, 330 mmol) wurde tropfenweise unter Rühren hinzugegeben und man lies die Lösung auf Raumtemperatur erwärmen. Nachdem die Mischung bei Raumtemperatur für 1 h gerührt wurde, wies TLC (Hexan/Aceton 3:1) auf das vollständige Verschwinden des Ausgangsmaterials hin. Die braune Reaktionsmischung wurde zur Trockne im Vakuum aufkonzentriert und der Rest wurde in Chloroform (500 ml) aufgelöst. Diese organische Lösung wurde mit gesättigtem wässrigem Natriumbicarbonat (3 × 200 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum aufkonzentriert. Der Rest wurde über Silikagel mit 20% Aceton in Hexan chromatographiert (Flashchromatographie), um 33.14 g (81% von Ribavirin) als reines 10 als einen amorphen Feststoff zu ergeben. Der Feststoff war in allem mit einer authentischen Probe identisch. Schmp.: 101–103°C; IR (Kaliumbromid) ν 2250 (CN), 1750 (C=O), cm^–1; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.04, 2.06, 2.07 (3s, 9H, Acetylmethyle), 4.15 (dd, 1H), 4.40 (m, 1H), 5.47 (t, 1H), 5.63 (dd, 1H), 5.95 (d, 1H, J = 3.2 Hz, C₁H), 8.34 (s, 1H, C₅H Triazol).
1-β-D-Ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamidinhydrochlorid (8). Zu einer Suspension von 10 (4.0 g, 11.4 mmol) in Methanol (100 ml) wurde eine molare Methanollösung von Natriummethoxid (12 ml) hinzugegeben und die Mischung wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Die Lösung wurde mit mit Methanol gewaschenem Dowex H+ Harz bis zu einem pH von 4 angesäuert, das Harz wurde filtriert und das Filtrat wurde im Vakuum zur Trockne aufkonzentriert. Der Rest wurde in einer minimalen Menge Methanol (15 ml) aufgelöst und in eine Druckflasche transferiert. Ammoniumchlorid (0.61 g, 11.4 mmol) und eine bei 0°C mit trockenem Ammoniakgas (75 ml) gesättigte Methanollösung wurde hinzugegeben, die Flasche wurde versiegelt und die Lösung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde zur Trockne im Vakuum aufkonzentriert und der resultierende Rest wurde aus Acetonitril/Ethanol kristallisiert, um 8 als einen kristallinen Feststoff (2.95 g, 93%) zu ergeben. Diese Probe war in allem mit einer authentischen Probe identisch.
In bestimmten pharmazeutischen Dosierungsformen sind die Prodrugformen der Verbindungen, die nicht zu der Erfindung gehören, insbesondere einschließlich der acylierten (acetyliert oder anders) Derivate, Pyridinester und verschiedenen Salzformen der vorliegenden Verbindungen bevorzugt und können in einem Verfahren zur Behandlung einer Bedingung eines Patienten verabreicht werden. Der Durchschnittsfachmann wird erkennen, wie die vorliegenden Verbindungen leicht zu Prodrugformen modifiziert werden können, um die Abgabe der aktiven Verbindungen an eine Targetstelle innerhalb des Wirtorganismus oder des Patienten zu erleichtern. Der Durchschnittsfachmann wird sich ebenso die Vorteile der favorisierten pharmakokinetischen Parameter der Prodrugformen, wo anwendbar, bei der Abgabe der vorliegenden Verbindungen an die Targetstelle innerhalb des Wirtsorganismus oder des Patienten zu Nutze machen, um die beabsichtigte Wirkung der Verbindung zu maximieren.
Ein in Betracht gezogenes Beispiel der Bildung einer Prodrugform, die nicht zur Erfindung gehört, der verwendeten Verbindungen ist wie folgt. Eines der einfachsten Prodrugs von Viramidine^TM ist das Tri-O-acetyl-Derivat von Viramidine^TM. Das Tri-O-acetyl-Derivat wird wie in Schema 1 dargestellt hergestellt:
Schema 1
Das 5'-Retinoylderivat von Viramidine^TM ist eine andere einfache Prodrugform, die nicht zur Erfindung gehört, und wird wie folgt hergestellt:
Schema 2
Andere 5'-Derivate von Viramidine^TM beinhalten das folgende in Schema 3 gezeigte:
Schema 3
Die meisten dieser Verbindungen können wie beschrieben erhalten werden (C. Sergheraert, C. Pierlot, A. Tartar, Y. Henin, M. Lemaitre, J. Med. Chem., 36, 826–830, 1993).
Die Synthese einer auf Cumarin-basierenden Prodrugform von Viramidine^TM, die nicht zur Erfindung gehört, kann wie folgt erhalten werden:
Schema 4
Aminosäureester werden als bessere Prodrugformen, die nicht Teil der Erfindung sind, angesehen, aufgrund einer möglichen Einbeziehung eines stereoselektiven Transporters. Aminosäurederivate von Viramidine^TM können wie unten gezeigt hergestellt werden:
Schema 5
Für die spezifische Abgabe der Arzneimittel an die Leber und das Gallensystem ist das endogene Gallensäuretransportsystem ein attraktiver Kandidat. Die Synthese von Gallensäurekonjugaten von Viramidine^TM könnte wie unten dargestellt erreicht werden:
Nukleotid-Derivate sind eine andere Klasse von Prodrugs oder Prodrugformen, die nicht Teil der Erfindung sind. Die Herstellung von geschützten 5'-Monophosphatderivaten ist unten gezeigt. Durch Schützen der negativen Ladungen des Phosphats mit neutralen Substituenten würden mehr lipophile Derivate gebildet werden, von denen angenommen wird, dass sie sich zu den entsprechenden Monophosphaten zurückwandeln, wenn sie einmal in der Zelle sind.
Schema 6
Nukleotid-Derivate sind eine andere Klasse von Prodrugs oder Prodrugformen, die nicht Teil der Erfindung sind. Die Herstellung von geschützten 5'-Monophosphatderivaten ist unten gezeigt. Durch Schützen der negativen Ladungen des Phosphats mit neutralen Substituenten würden mehr lipophile Derivate gebildet werden, von denen angenommen wird, dass sie sich zu den entsprechenden Monophosphaten zurückwandeln, wenn sie einmal in der Zelle sind.
Schema 7 wobei R₁ eine Alkylgruppe, wie zum Beispiel CH₃C(O)S-CH₂CH₂-, (CH₃)₂CHC(O)S-CH₂CH₂-, (CH₃)₃CC(O)S-CH₂CH₂-, (CH₃)₃CC(O)OCH₂-, C₆H₅C(O)S-CH₂CH₂- oder HOCH₂CH₂SS-CH₂CH₂-, ist.
Aminosäurephosphoramidate sind eine andere Klasse von Prodrugs, die nicht Teil der Erfindung sind, die wie unten beschrieben synthetisiert werden können:
Schema 8
Andere Derivate von Monophosphatprodrugs, die nicht zur Erfindung gehören, sind unten gezeigt:
Schema 8A
Auf Salicylat-basierende Prodrugs von Viramidine^TM, die nicht zur Erfindung gehören, können durch das folgende Schema erhalten werden:
Schema 9
Prodrugs von Nukleosid 5'-Di- oder Triphosphaten, die nicht zur Erfindung gehören, wären interessanter, da sie mehr metabolische Schritte umgehen würden.
Das Folgenden sind potentielle lipophile Nukleotidprodrugs, die nicht zur Erfindung gehören, und werden wie unten dargestellt hergestellt:
Schema 10
Schema 11
Das Folgende ist eine andere Klasse potentieller Phosphonatprodrugs von Viramidine^TM, die nicht Teil der Erfindung sind:
Schema 12
Andere mögliche Prodrugs, die nicht zur Erfindung gehören, beinhalten die möglichen Kombinationen der Gruppen, die in den PCT Patentanmeldungen WO 98/39342 , WO 98/39343 , WO 98/39344 und WO 98/45016 gezeigt sind.
Prodrugs von Viramidine^TM, die nicht zur Erfindung gehören, können nicht nur durch Modifizieren des Zuckerteils des Hauptmoleküls erhalten werden, sondern ebenso auch durch Derivatisieren der Amidinfunktionalität. Im Anschluss sind ein paar Klassen von Prodrugs, die durch Modifizieren der Amidingruppe, wie unten beschrieben, hergestellt werden können.
Schema 13
Schema 14
Schema 15
Schema 16
Verwendungen
Es ist beabsichtigt, dass Verbindungen gemäß Formel 1 verwendet werden, um Hepatitis B Virus (HBV) oder Hepatitis C Virus (HCV) Infektionen zu behandeln.
Ein anderer Aspekt in Verbindung mit der Verwendung der Verbindung der Erfindung umfasst das Verabreichen einer therapeutisch und/oder prophylaktisch wirksamen Menge eines Arzneimittels, das eine Verbindung der vorliegenden Erfindung enthält. In diesem Aspekt kann die Wirkung sich auf die Modulation eines Teils des Immunsystems eines Säugetiers, insbesondere die Modulation von Lymphokinprofilen von Typ 1 und Typ 2 in Bezug zueinander beziehen. Dort wo Modulation von Typ 1 und Typ 2 Lymphokinen auftritt ist es besonders beabsichtigt, dass die Modulation sowohl eine Unterdrückung von Typ 1 als auch Typ 2 und bevorzugter die Stimulation von Typ 1 Lymphokinen oder einen relativen Anstieg einer Typ 1 Antwort zu einer Typ 2 Antwort beinhaltet.
Es ist besonders beabsichtigt, dass Viramidine^TM (1.39 μg/ml) die Exprimierung und die Synthese von Typ 1 Cytokinen in (bevorzugt aktivierten) T-Lymphocyten erhöht und Ergebnisse von verschiedenen Experimenten sind in den 2–5 gezeigt. 2 zeigt die Wirkung von 5 μM Viramidine (eine Verbindung gemäß Formel 1), Ribavirin und Levovirin auf die Typ 1 Cytokinsynthese in SEB-aktivierten menschlichen T-Zellen (n = 5 Donoren), wobei Viramidine einen klaren Anstieg der Typ 1 Antwort im Vergleich zu der Kontrolle mit Triazol zeigt. 3 ist eine graphische Darstellung einer Dosis-Antwortwirkung von Viramidine im Bereich von 0.625–10 μM auf die Typ 1 Cytokinsynthese in SEB (Staphylokokken Enterotoxin B)-aktivierten menschlichen T-Zellen (die Daten repräsentieren 4 einzelne Donoren). Die in vivo Wirkung einer erhöhten Typ 1 Antwort in einem Kontak-Überempfindlichkeits (CHS) Assay von Viramidine wird klar in 4 demonstriert und 5 zeigt einen Vergleich zwischen Viramidine und Levovirin/Ribavirin in Bezug auf die Spitzenantwort der Nukleosidkonzentration und den Spitzenbereich von Antworten (die y-Achse zeigt die Anzahl von Antworten in einem bestimmten Experiment).
Herstellung von menschlichen T-Zellen und Aktivierung in vitro
Periphere mononukleare Blutzellen wurden aus gesunden Spendern oder Patienten mit Gelenkrheumatismus durch Dichtegradientzentrifugation, gefolgt von T Zellenanreicherung unter Verwendung von Lymphokwik (One Lambda, Canoga Park CA) isoliert. Kontaminierte Monocyten wurden durch Anhaften an Kunststoff entfernt. Gereinigte T-Zellen waren > 99% CD2+, < 1% HLA-DR+ und < 5% CD25+ und wurden in RPMI-AP5 gehalten (RPMI-1640 Medium, das 20 mM HEPES Puffer, pH 7.4, 5% autologes Plasma, 1% L-Glutamin, 1% Penicillin/Streptomycin und 0.05% 2-Mercaptoethanol enthält).
Zur Bestimmung der Cytokinproteinniveaus wurden T-Zellen (1 × 10⁶ Zellen in einem Volumen von 1 ml) durch die Zugabe von 10 ng PMA plus 0.5 μg Ionomycin (beides von Calbiochem, La Jolla, CA) aktiviert und in Platten mit 24 Vertiefungen in Gegenwart von 0 bis 20 μM Nukleosid für bis zu 48 h bei 37°C und 5% CO₂ in einem befeuchteten Inkubator inkubiert. Im Anschluss an die Aktivierung wurden die Überstände für Zellabgeleitete Cytokinproduktion analysiert. Für Proliferations- und Lebensfähigkeitsstudien wurde das oben genannte Protokoll in ein Format mit einer Platte mit 96 Vertiefungen unter Verwendung von 0.2 × 10⁶ Zellen in einem Volumen von 0.2 ml und einer Aktivierung mit 2 ng PMA und 0.1 μg Ionomycin modifiziert. In getrennten Experimenten wurden 5 × 10⁶ T-Zellen in 2 ml mit 20 ng PMA plus 1 μg Ionomycin aktiviert. Alternativ können Zellen in vitro mit SEB, veröffentlichten Verfahren folgend, aktiviert werden. Hier wurde die gesamte RNA von den T-Zellen im Anschluss an 6–24 h Inkubation isoliert und durch RT-PCR analysiert, um mRNA Niveaus von verschiedenen Cytokinen und Entzündungsmediatoren zu bestimmen. Ebenfalls wurden in getrennten Experimenten menschliche T-Zellen weiter gereinigt (unter Verwendung von Zellanreicherungsreagenzien von Stem Cell Technologies, Vancouver, BC), um reine Populationen von CD4+ (< 1% CD8+ unter Verwendung von RosetteSep menschliches CD4+ T-Zellen Reagenz) und CD8+ (< 1% CD4+ unter Verwendung von RosetteSep menschliches CD4+ T-Zellen Isolationsreagenz) T-Zellen-Teilmengen zu ergeben, wonach 1 × 10⁶ Zellen pro ml mit PMA und Ionomycin, wie bei den gesamten T-Zellen-Experimenten, aktiviert wurden.
Extrazelluläre Cytokinanalysen
Menschliche Cytokinniveaus wurden in allen Überständen bestimmt, im Anschluss an eine angemessene Verdünnung, unter Verwendung von ELISA kits, die für IL-2, IFNg, TNFa, IL-4 und IL-5 spezifisch sind (Biosource International, Camarillo, CA). Maus Cytokinniveaus wurden unter Verwendung von ELISA kits, die für Maus IFNg und IL-4 spezifisch sind, bestimmt (R and D Systems, Minneapolis, MN). Alle ELISA Ergebnisse wurden als pg/ml ausgedrückt. Einige Daten wurden als Prozentsatz von aktivierter Kontrolle gezeigt, berechnet als das Verhältnis von aktivierten T-Zell-Cytokinniveaus in Gegenwart eines Testnukleosids gegenüber dem Cytokinniveau unbehandelter T-Zellen × 100%. Eine Nullwirkung auf die Cytokinniveaus bei den Testnukleosiden würde einen Prozentsatz eines Werts an aktivierter Kontrolle von 100% ergeben. Alternativ wurden die Daten als Prozentsatzänderung von aktivierter Kontrolle gezeigt ([Test pg/ml – aktivierte Kontrolle pg/ml)/aktivierte Kontrolle pg/ml] × 100%). Eine Nullwirkung auf die Cytokinniveaus durch die Testnukleoside würde 0% sein.
Kontakt-Überempfindlichkeit
Reaktivität gegenüber dem Kontaktallergen, DNFB, wurde bei BALG/c Mäusen wie zuvor beschrieben bestimmt (Ishii, N., K. Takahashi, H. Nakajima, S. Tanaka, P. W. Askenase. 1994. DNFB contact sensitivity (CS) in BALG/c and C3H/He mice. J. Invest. Dermatol. 102: 321). In Kürze, Mäuse wurden durch Anwendung von 20 μl 0.3% DNFB in Aceton:Olivenöl 4:1 auf die rasierten Bäuche naiver Mäuse sensibilisiert. Für ein optimales Auslösen von CHS wurden die Mäuse auf beiden Seiten des Ohrs mit 20 μl 0.12% DNFB herausgefordert, 5 Tage nach der Sensibilisierung. Nicht sensibilisierte Mäuse wurden ebenfalls herausgefordert und als Kontrollen in jedem Experiment verwendet. Nach 24 Stunden wurden Dickemessung des Ohrs durchgeführt und die Antwort auf DNFB wurde durch Subtrahieren der Werte nach der Herausforderung von denen vor der Herausforderung festgestellt. Wo angezeigt wurde 7-β-D-Ribofuranosyl-4-oxopyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-carboxamidin in einer Dosis von 6.2 μg in 50 μl PBS (0.3 mg/kg) oder 12.4 μg in 100 μl PBS (0.6 mg/kg) durch i. p. Injektion zum Zeitpunkt der Herausforderung mit DNFB verabreicht. Diese Dosen von 7-β-D-Ribofuranosyl-4-oxopyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-carboxamidin ergaben eine maximale Wirkung in vorläufigen Optimierungsstudien. Im Anschluss and die letzten Dickemessungen des Ohrs wurden die Mäuse durch zervikale Dislokation geopfert und die Achsel-/lateralen Achsellymphknoten wurden entfernt. Im Anschluss an die Isolierung der gesamten zellulären RNA aus isolierten Lymphknotenzellen wurden RT-PCR und Southern Blot Analysen durchgeführt, um Maus IFNg, IL-2 und IL-10 mRNA Niveaus zu beobachten.
Weitere Experimente
Es ist allgemein beabsichtigt, dass eine Verschiebung einer Immunantwort in Richtung Typ 1 Antwort favorisiert wird. Konsequenterweise ist es beabsichtigt, dass die Verwendung von Verbindungen gemäß Formel 1 besonders bei der Behandlung von HCV oder HBV Virusinfektionen (bei denen die Typ 1 Antwort verringert oder unterdrückt ist) verwendbar ist. Um die Wirksamkeit der Modulation einer Immunantwort zu bestätigen, sind verschiedene Experimente durchgeführt worden und das Folgende ist eine exemplarische Zusammenfassung von einigen der Experimente, die mit den beabsichtigten Verbindungen durchgeführt wurden:
In vitro – Viramidine inhibierte Punta Toro Virusinfektion von LLC-MK2 (Rhesusaffen-Nierenzellen) mit EC50 von 8 mg/ml (Adames Stamm) und 12 mg/ml (Balliet Stamm) – CC50 war 320 mg/ml (1.0–1.2 Virusrating).
In vivo – Verabreichung s. c. oder oral von Viramidine resultierte in 100 Überleben (10 C57BL/6 Mäuse/gp) von PTV s. c. injiziert (Adames Stamm).
Für eine 24 h Postinfektion durch PTV in vivo war die minimale wirksame s. c. Dosis 32 mg/kg für Ribavirin und 96 mg/kg für Viramidine s. c. b. i. d. für 5 Tage gegeben. Für 24 h Postinfektion durch PTV in vivo war die minimale wirksame p. o. Dosis 20 mg/kg für Ribavirin und 40 mg/kg für Viramidine p. o. b. i. d. für 5 Tage gegeben.
Im Allgemeinen sind die bevorzugtesten Verwendungen gemäß der vorliegenden Erfindung die, bei denen die aktiven Verbindungen relativ wenig cytotoxisch gegenüber Nicht-Target Wirtszellen sind und relativ wirksamer gegenüber dem Target. In diesem Zusammenhang kann es ebenfalls vorteilhaft sein, dass L-Nukleoside eine erhöhte Stabilität gegenüber D-Nukleosiden haben, was zu besseren Pharmacokinetiken führen kann. Dieses Ergebnis erreicht werden, da L-Nukleoside nicht von Enzymen erkannt werden können und deshalb längere Halbwertszeiten haben können.
Es ist beabsichtigt, dass Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung in vitro oder ex vivo in irgendeiner geeigneten pharmazeutischen Formulierung und unter einem geeigneten Protokoll verwendet werden werden. Somit kann die Verabreichung oral, parenteral (einschließlich subkutane Injektionen, intravenös, intramuskulär, durch intrasternale Injektion oder Infusionstechniken), durch Inhalationsspray oder rektal, topikal usw. und Formulierungen mit Dosierungseinheiten stattfinden, die herkömmliche nichttoxische pharmazeutisch geeignete Träger, Hilfsstoffe und Vehikel enthalten.
Beispielsweise ist es beabsichtigt, dass Verbindungen, die in der vorliegenden Erfindung verwendet werden, in einer Mischung mit einem pharmazeutisch geeigneten Träger formuliert werden können. Zum Beispiel können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung oral als pharmakologisch geeignete Salze verabreicht werden. Da die in der vorliegenden Erfindung verwendeten Verbindungen größtenteils wasserlöslich sind, können sie intravenös in physikalischer Kochsalzlösung (zum Beispiel auf einen pH von ungefähr 7.2 bis 7.5 gepuffert) verabreicht werden. Herkömmliche Puffer, wie zum Beispiel Phosphate, Bicarbonate oder Citrate können für diesen Zweck verwendet werden. Natürlich kann der Durchschnittsfachmann die Formulierungen innerhalb der Lehre der Beschreibung modifizieren, um viele Formulierungen für einen bestimmten Verabreichungsweg bereitzustellen, ohne die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung instabil zu machen oder ihre therapeutische Aktivität zu beeinträchtigen. Insbesondere kann, die Modifikation der verwendeten vorliegenden Verbindungen, die diese in Wasser oder einem anderen Vehikel löslicher macht, zum Beispiel leicht durch kleinere Modifikationen (Salzbildung, Veresterung etc.), die alle im Durchschnittswissen liegen, erreicht werden. Es liegt ebenfalls im Durchschnittswissen die Verabreichungsart und Dosierungskur einer bestimmten Verbindung zu modifizieren, um die Pharmacokinetik der vorliegenden Verbindungen für eine maximale vorteilhafte Wirkung bei den Patienten zu steuern.
Zusätzlich können die in der vorliegenden Erfindung verwendeten Verbindungen alleine oder zusammen mit anderen Mitteln zur Behandlung der oben genannten Infektionen und Bedingungen verabreicht werden. Kombinationstherapien in Zusammenhang mit der Verwendung der vorliegenden Erfindung umfassen die Verabreichung einer Verbindung gemäß Formel I und mindestens eines anderen pharmazeutisch aktiven Inhaltsstoffs. Der aktive Inhaltsstoff(e) und die pharmazeutisch aktiven Mittel können alleine oder zusammen verabreicht werden und wenn getrennt verabreicht kann dies gleichzeitig oder getrennt in irgendeiner Reihenfolge passieren. Die Mengen des aktiven Inhaltsstoffs(e) und des pharmazeutisch aktiven Mittels und die relative Steuerung der Verabreichung wird ausgewählt werden, um die gewünschte kombinierte therapeutische Wirkung zu erreichen. Bevorzugt beinhaltet die Kombinationstherapie die Verabreichung einer Verbindung der vorliegenden Erfindung oder eines physiologischen funktionellen Derivats davon und eines der hier unten angegeben Mittel.
Beispiele von anderen Arzneimitteln oder aktiven Inhaltsstoffen, die zusammen mit einem Modulator gemäß Formel 1 als wirksam betrachtet werden, sind Antivirusmittel, wie zum Beispiel Interferon, einschließlich Interferon α and β, Ribavirin, Acyclovir, und AZT^TM; anti-Pilzmittel, wie zum Beispiel Tolnaftate, Fungizone^TM, Lotrimin^TM, Mycelex^TM, Nystatin und Amphoteracin; anti-Parasitika, wie zum Beispiel Mintezol^TM, Niclocide^TM, Vermox^TM, und Flagyl^TM, Darmmittel, wie zum Beispiel Immodium^TM, Lomotil^TM und Phazyme^TM; anti-Tumormittel, wie zum Beispiel Interferon α und β, Adriamycin^TM, Cytoxan^TM, Imuran^TM, Methotrexate, Mithracin^TM, Tiazofurin^TM, Taxol^TM; Hautmittel, wie zum Beispiel Aclovate^TM, Cyclocort^TM, Denorex^TM, Florone^TM, Oxsoralen^TM, Steinkohlenteer und Salicylsäure; Migränezubereitungen, wie zum Beispiel Ergotamine-Verbindungen; Steroide und Immunosuppresiva, die oben nicht aufgelistet sind, einschließlich Cyclosporine, Diprosone^TM, Hydrocortison; Floron^TM, Lidex^TM, Topicort und Valisone; und Stoffwechselmittel, wie zum Beispiel Insulin, und andere Arzneimittel, die nicht gut in die oben genannten Kategorien passen, einschließlich Cytokine, wie zum Beispiel IL2, IL4, IL6, IL8, IL10 und IL12. Besonders bevorzugt Erstarzneimittel sind AZT, 3TC, 8-substituierte Guanosin-Analoga, 2,3-Dideoxynucleoside, Interleukin II, Interferone, wie zum Beispiel IαB-Interferone, Tucaresol, Levamisole, Isoprinosine und Cyclolignane.
Beispiele dieser weiteren therapeutischen Mittel schließen Mittel ein, die für die Modulation des Immunsystems oder verbundener Bedingungen, wie zum Beispiel AZT, 3TC, 8-substituierte Guanosin-Analoga, 2',3'-Dideoxynukleoside, Interleukin II, Interferone, wie zum Beispiel α-Interferon, Tucaresol, Levamisole, Isoprinosine und Cyclolignane, wirksam sind. Bestimmte Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung können zur Steigerung der biologischen Aktivität bestimmter Mittel gemäß der vorliegenden Erfindung durch Verringern des Metabolismus oder Inaktivierung anderer Verbindungen wirksam sein und werden als solche für diese beabsichtigte Wirkung co-verabreicht.
In Bezug auf die Dosierung wird der Durchschnittsfachmann erkennen, dass eine therapeutisch wirksame Menge mit der Infektion oder Bedingung, die behandelt werden soll, ihrer Schwere, der zu verwendenden Behandlungskur, den Pharmakokinetiken der verwendeten Mittel, als auch den behandelten Patienten (Mensch oder Tier) variieren wird. Es ist beabsichtigt, dass verschiedene alternative Dosierungen ebenfalls geeignet sind, einschließlich Dosierungen zwischen 0.5 mg/kg und 0.1 mg/kg und weniger, aber ebenfalls Dosierungen zwischen 0.5 und 1.0 mg/kg und mehr. Es ist weiter beabsichtigt, dass während bei einigen Virusinfektionen bei relativ niedrigen Plasmakonzentrationen der Verbindungen der Formel 1 Behandlungserfolg erzielt werden kann, andere Virusinfektionen relativ hohe Dosierungen erfordern können. Es ist jedoch beabsichtigt, dass eine angemessene Kur durch Verabreichung einer kleinen Menge und dann Erhöhen der Menge entwickelt werden wird, bis die Nebenwirkungen übermäßig nachteilig werden oder die beabsichtigte Wirkung erreicht wird.
Die Verabreichung der aktive Verbindung kann von kontinuierlicher (Infusion) bis mehrere orale Verabreichungen pro Tag (zum Beispiel Q. I. D.) reichen und kann orale, topikale, parenterale, intramuskuläre, intravenöse, subkutane, transdermale (was ein Durchdringungsverstärkungsmittel beinhalten kann), bukkale und Zäpfchen-Verabreichung neben anderen Verabreichungsarten beinhalten.
Um die in der vorliegenden Erfindung verwendeten pharmazeutischen Zusammensetzungen herzustellen, wird eine therapeutisch wirksame Menge von einer oder mehreren der Verbindungen gemäß Formel 1 bevorzugt ganz genau mit einem pharmazeutisch geeigneten Träger gemäß herkömmlicher Arzneimittelherstellungstechniken gemischt, um eine Dosis herzustellen. Ein Träger kann eine große Vielfalt an Formen abhängig von der Form der Zubereitung, die für die Verabreichung, zum Beispiel oral oder parenteral, gewünscht ist, einnehmen. Bei der Herstellung pharmazeutischer Zusammensetzungen in oraler Dosierungsform kann irgendeines der gewöhnlichen Medien verwendet werden. Somit können für flüssige orale Zubereitungen, wie zum Beispiel Suspensionen, Elixire und Lösungen, geeignete Träger und Additive einschließlich Wasser, Glykole, Öle, Alkohole, Geschmacksmittel, Konservierungsmittel, Färbemittel und ähnliches verwendet werden. Für feste orale Zubereitungen, wie zum Beispiel Pulver, Tabletten, Kapseln, und für feste Zubereitungen, wie zum Beispiel Zäpfchen, können geeignete Träger und Additive einschließlich Stärken, Zuckerträger, wie zum Beispiel Dextrose, Mannitol, Laktose und verbundene Träger, Verdünnungsmittel, Granulierungsmittel, Gleitmittel, Bindemittel, Zerfallmittel und ähnliches verwendet werden. Wenn gewünscht können die Tabletten und Kapseln magensaftresistent oder retardfreisetzenden durch Standardtechniken sein.
Für parenterale Formulierungen wird der Träger gewöhnlich steriles Wasser oder wässrige Natriumchloridlösung umfassen, obwohl andere Inhaltsstoffe einschließlich derer, die die Dispersion unterstützen, beinhaltet sein können. Natürlich müssen die Zusammensetzungen und Träger ebenfalls sterilisiert werden, dort wo steriles Wasser verwendet werden soll und steril bleiben soll. Injizierbare Suspensionen können ebenfalls hergestellt werden, wobei in diesem Fall geeignete flüssige Träger, Suspensionsmittel und ähnliches verwendet werden können.

Claims

Verwendung einer Verbindung gemäß Formel 1 zur Herstellung eines Medikaments für die Behandlung einer Hepatitis C Virus (HCV) Viralinfektion oder einer Hepatitis B Virus (HBV) Viralinfektion
Formel 1 wobei die Verbindung in L-Konfiguration oder D-Konfiguration ist.
Die Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Viralinfektion eine HCV Infektion ist.
Die Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, wobei das Medikament für orale Verabreichung formuliert ist.
Die Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei das Medikament formuliert ist, um eine Dosis der Verbindung zwischen 0.1 mg pro kg Körpergewicht des Patienten und 40 mg pro kg Körpergewicht des Patienten zu beinhalten.
Die Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei das Medikament weiter ein Interferon umfasst.
Die Verwendung nach Anspruch 5, wobei das Interferon Interferon-Alpha ist.