DE60115237T2 - Praziquantel zusammensetzungen zur behandlung von krankheiten verursacht durch kokzidien - Google Patents

Description

• GEBIET DER ERFINDUNG
• Die vorliegende Erfindung betrifft eine Praziquantelzusammensetzung zur Behandlung von Tieren, die mit Parasiten infiziert sind, die abortive oder neurologische Erkrankungen verursachen. Genauer gesagt betrifft die vorliegende Erfindung eine Praziquantelzusammensetzung, die bei der Behandlung von parasitären Protozoen, wie z.B. Kokzidien, die abortive oder neurologische Erkrankungen in Säugetieren auslösen, von Nutzen ist.
• Kurze Beschreibung des Stands der Technik:
• Um verschiedene Säugetiere, Insekten und Fische vor Erkrankungen, die durch Protozoen ausgelöst werden, welche wahrscheinlich neurologische und/oder abortive Erkrankungen verursachen, zu schützen oder diese zu behandeln, werden auf dem Gebiet der Erfindung verschiedene Verbindungen eingesetzt, seit kurzem beispielsweise Triazinonverbindungen. Im Allgemeinen umfassen Protozoen, die diesen Verbindungen gegenüber empfindlich sind, Parasiten, welche die Eingeweide von Vögeln, Säugetieren und Insekten infizieren und zu Durchfall, zum Wasting-Syndrom, Übelkeit und Erbrechen führen. Vor kurzem wurde herausgefunden, dass manche Parasiten, welche die Blut-Hirn-Schranke durchbrechen, sowie Parasiten, welche die Plazentaschranke durchbrechen, mit den Triazinonen behandelt werden können. Veranschaulichende Beispiele für Parasiten, von denen bekannt ist, dass sie die Blut-Hirn-Schranke oder die Plazentaschranke durchbrechen, sind solche, die Kokzidienerkrankungen verursachen, wie z.B. Toxoplasma gondii, Sarcocystis neurona, Neospora caninum, Neospora hugesii und Isospora suis. Veranschaulichende Beispiele für Trazinonverbindungen sind Triazindione, wie z.B. Diclazurilverbindungen, und Triazintrione, wie z.B. Toltrazurilverbindungen. Siehe US-Patente Nr. 4.933.341; 4.935.423; 5.114.938; 5.141.938; 5.188.832; 5.196.562; 5.256.631 und 5.464.837.
• Während in diesem Bereich auch andere Verbindungen, wie beispielsweise Praziquantel (2-Acyl-4-oxohexahydro-4H-pyrazino[2,1-α]isochinolinderivate), zur Behandlung von Parasiten offenbart sind, finden sich in den Offenbarungen keinerlei Lehren oder Hinweise in Bezug darauf, dass die Verbindungen auch zur Behandlung von Parasiten nützlich sind, welche die Blut- oder Plazentaschranke durchbrechen. Im Allgemeinen wurde Praziquantel alleine oder in Kombination mit anderen Verbindungen verwendet, um anthelminthische Zusammensetzungen zur Behandlung von Zestoden- und Nematodenbefall und dergleichen herzustellen. Siehe US-Patente 4.001.411, 4.447.414 und 5.824.653.
• Das US-Patent Nr. 5.663.155 offenbart die Verwendung von Praziquantel zur Vorbeugung und Behandlung von parasitären Infektionen, die zu Krankheiten wie Malaria, Trypanosomiasis, Leishmania, Schistosomiasis und Elephantiasis führen. Das Patent geht außerdem davon aus; dass Praziquantel zur Behandlung von parasitären Infektionen verwendet werden könnte, die auf das Blut, die Lymphe und die Gewebe beschränkt sind. Toxoplasmose und Sarcocystis werden ausdrücklich im Zusammenhang mit einer Infektion von Muskelgewebe oder Eingeweiden erwähnt. Die Behandlung oder Vorbeugung von Erkrankungen, bei denen Toxoplasma, Sarcocystis, Neospora oder Isospora im Gehirn eines erwachsenen Säugetiers eingebettet sind oder die Plazentaschranke passieren, um das Gewebe des Zentralnervensystems des Fötus zu infizieren und so zu einem Abort zu führen oder zu schwachen Neugeborenen zu führen, werden aber nicht erwähnt.
• Im Allgemeinen besteht die Wirkungsweise der Triazinonen darin, dass sie die parasitären Zwischenstufen in den Eingeweiden und den Darmwandzellen angreifen, was dazu führt, dass das endoplasmatische Retikulum, der perinucleäre Raum und die Mitochondrien des Parasiten anschwellen. Das beeinträchtigt angeblich die Fähigkeit zur Zellteilung, sodass die Schizonten und Mikrogamonten klein bleiben und nur wenige Merozoiten bzw. Mikrogameten bilden. Das Endergebnis ist, wie berichtet wird, dass diese späteren Stufen der Parasiten in neue Säugetierzellen nicht mehr eindringen können, wodurch die Replikation des Parasiten im Wirt effektiv gestoppt wird.
• Die Wirkungsweise von im US-Patent 5.663.155 (ibd.) offenbarten Praziquantel betrifft die Störung enzymatischer Prozesse des Parasiten, die mit dem Metabolismus von Purinderivaten und purinähnlichen chemischen Strukturen zusammenhängen.
• Parasiten sind äußerst empfindlich gegenüber einer Störung dieser Prozesse, sodass Zusammensetzungen verwendet werden können, die spezifisch auf diese Prozesse ausgerichtet sind, um eine parasitäre Infektion selektiv zu eliminieren. Praziquantel wird so verabreicht, dass es Parasiten angreift, die für Infektionen von Muskelgewebe, Eingeweiden oder Blut verantwortlich sind. Die Behandlung von Parasiten im Zentralnervensystem (Hirn und Rückenmark) oder Parasiten, welche die Plazentaschranke durchbrechen können, wird nicht erwähnt.
• Obwohl der Schwerpunkt in diesem Bereich seit den 1970ern auf Protozoen lag, von denen man vermutete, dass sie neurologische und/oder abortive Erkrankungen in Säugetieren auslösten, stellte sich die erfolgreiche Isolation und In-vitro-Kultivierung mancher dieser Protozoen als schwierig heraus. Eine erfolgreiche Isolation von Parasiten aus der Hirn- oder Rückenmarksflüssigkeit wurde beispielsweise nicht vor den späten 1980ern erreicht. Sobald jedoch feststand, dass neurologische Erkrankungen durch Protozoen ausgelöst werden können, die das Hirn infizieren, und abortive Erkrankungen durch Protozoen ausgelöst werden können, die den Fötus infizieren, wurde die Notwendigkeit erkannt, effektive Arzneimittel gegen Protozoen zu entwickeln, welche die Blut-Hirn-Schranke und die Plazentaschranke durchbrechen können und keine schädlichen Nebenwirkungen aufweisen. Nur sehr wenige Arzneimittel können die Blut-Hirn-Schranke oder die Plazentaschranke von Säugetieren überwinden. Unglücklicherweise weisen viele der auf dem Gebiet der Erfindung bekannten Arzneimittel, welche die Blut-Hirn-Barriere und/oder die Plazentaschranke passieren und parasitäre Infektionen des Hirns effektiv bekämpfen, schädliche Nebenwirkungen auf, sodass sie nur unter großen Risiko eingesetzt werden können. Folglich gibt es derzeit keine genehmigten effektiven Arzneimittel, die eine effektive Behandlung neurologischer oder abortiver Erkrankungen ermöglichen.
• Es gilt anzumerken, dass aufgrund der im US-Patent 5.663.155 offenbarten Wirkungsweise von Praziquantel und seines starken Angriffs gegen Enzyme, die den Purinmetabolismus beeinflussen, zu erwarten gewesen wäre, dass diese Verbindung auch bei der Verwendung zur Behandlung von Säugetieren mit parasitären Hirninfektionen schädliche Wirkungen aufweisen würde.
• Nachstehend findet sich eine kurze Beschreibung der parasitären Erkrankungen der vorliegenden Erfindung, die mit Praziquantel behandelt werden können. Pferdeprotozoenmyelenzephalitis (EPM) ist eine neurologische Erkrankung bei Pferden, die vorwiegend junge Pferde befällt, die Stress ausgesetzt sind (z.B. vollblütige Rennpferde und reinrassige Turnierpferde), und ist somit eine Krankheit mit bedeutenden finanziellen Auswirkungen für die Pferdeindustrie. EPM, das in den 1970ern erstmals als Krankheit erkannt wurde, wurde erst 1991 aus einem Pferd mit EPM isoliert und kultiviert und als Sarcocystis neurona bezeichnet. 1997 wurde eine Neospora spp., die heute den Namen Neospora hugesi trägt, aus dem Gehirn eines Pferdes mit EPM isoliert. Demgemäß wird nun angenommen, dass EPM durch diesen neu entdeckten Organismus alleine, durch Sarcocystis neurona alleine oder durch eine Kombination der beiden ausgelöst wird.
• Ein weiterer Kokzidienparasit, Toxoplasma gondii, ist schon seit einiger Zeit bekannt und wurde zum ersten Mal aus den Eingeweiden und dem Muskelgewebe von Katzen isoliert. Der Hauptwirt für diesen Parasiten ist die Katze, die den Organismus lange Zeit in sich tragen und Oozysten auf andere Tiere übertragen kann, wie beispielsweise Rinder, Schafe, Schweine und Menschen. Eine solche Infektion in Schafen, Rindern und Menschen wurde mit Aborten und angeborenen Erkrankungen in Zusammenhang gebracht, die vor allem das Zentralnervensystem betreffen. Vor kurzem wurde sie auch mit Abort und Missbildungen bei jungen Katzen in Zusammenhang gebracht, die von infizierten Katzen zur Welt gebracht werden, die vor der Infektion während der Trächtigkeit seronegativ waren. Wirte, die keine Katzen sind, wie z.B. Rinder, Schafe, Schweine und Menschen, produzieren keine Oozysten, können aber an einem Befall von Muskeln oder Gehirn durch Tachyzoiten und Bradyzoiten leiden, der zu den klinischen Anzeichen der Krankheit führt – neurologische Symptome und Abort mit fötalen Defekten. Es wurde berichtet, dass 60 % aller Katzen für T. gondii seropositiv sind. Wie schon erwähnt gibt es keine genehmigte Behandlung oder Prophylaxe für Toxoplasmose.
• Ein weiterer Kokzidienparasit, Neospora caninum, der 1988 zum ersten Mal aus Hunden isoliert wurde, löst in Tieren sowohl eine neurologische als auch eine aborti ve Erkrankung aus. Vorher wurde er mit Toxoplasma gondii verwechselt. Die Krankheit, die durch diesen Parasit ausgelöst wird, ist bei diaplazentar infizierten Welpen am stärksten ausgeprägt und ist durch fortschreitende aufsteigende Lähmung der Welpen, insbesondere an den Hinterbeinen, gekennzeichnet; Polymyositis und Hepatitis können ebenfalls auftreten. Diese Erkrankung wurde erst vor kurzem als Hauptursache für Abort und neurologische Defekte an Extremitäten von neugeborenen Kälbern erkannt. Mikroskopische Läsionen von nichteitriger Enzephalitis und Myokarditis bei abortierten Föten finden sich im Hirn, im Rückenmark und im Herzen. Als Hauptwirt für Neospora caninum wurde vor kurzem der Hund identifiziert. Derzeit ist keine genehmigte Behandlung oder Prophylaxe für entweder Neospora caninum bei Hunden oder Rindern oder Neospora hugesi bei Pferden verfügbar.
• Wie aus der obigen Erläuterung ersichtlich ist, gibt es nach dem Stand der Technik, einschließlich der oben genannten Verweise, keine Vorschläge oder Lehren für die Verwendung von Praziquantel bei der Behandlung von Tieren mit Infektionen durch Kokzidien, oder genauer gesagt durch die Familie der Sarcocystidae, die zu abortiven oder neurologischen Erkrankungen führt, die nicht zu ungewünschten Nebenwirkungen führt. In der vorliegenden Erfindung wird eine verbesserte und sichere Behandlungsmethode für Tiere bereitgestellt, die an parasitären Erkrankungen leiden, die sich als neurologische oder abortive Erkrankungen manifestieren.
• ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
• In Übereinstimmung mit der obigen Erläuterung beschreibt die vorliegende Erfindung die Verwendung von Praziquantel zur Herstellung einer Zusammensetzung zur Behandlung eines erkrankten Säugetiers, das an einer durch Kokzidien verursachten, parasitären neurologischen oder abortiven Erkrankung leidet.
• Das beschriebene Verfahren umfasst die Verabreichung einer pharmazeutisch effektiven Menge Praziquantel an das Tier.
• Der Begriff "pharmazeutisch effektive Menge" bedeutet hierin, dass die verabreichte Menge Praziquantel oder eines Derivats davon ausreicht, um das In-vivo- oder In-vitro-Wachstum der parasitären Protozoen zu hemmen, ohne Nebenwirkungen im behandelten Säugetier auszulösen. Typischerweise sind die parasitären Protozoen Kokzidien, die eine neurologische Erkrankung und/oder Aborte verursachen. Die pharmazeutisch effektive Menge kontrolliert die Parasiten im infizierten Gewebe; folglich verbessert sich der Gesundheitszustand des Tiers. Außerdem ist die pharmazeutisch effektive Menge in dem Sinne neurologisch effektiv oder plazentar effektiv, dass das Praziquantel oder ein Derivat davon in einer Menge vorliegt, die dazu fähig ist, die Blut-Hirn-Schranke zu durchbrechen, um die Parasiten, die das Zentralnervensystem infizieren, zu bekämpfen, oder die Plazentaschranke zu durchbrechen, ohne Nebenwirkungen im behandelten Säugetier auszulösen.
• Außerdem beschreibt die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur metaphylaktischen Behandlung eines Tiers, das mit einem Parasiten infiziert ist, der eine neurologische oder abortive Erkrankung auslösen kann, die mit Praziquantel behandelt werden kann. Die metaphylaktische Behandlung umfasst die Verabreichung von Praziquantel an das Tier unter Verwendung eines metaphylaktisch effektiven Schemas. Der Begriff "metaphylaktisch effektives Schema" steht für die planmäßige Verabreichung von intermittierenden Dosen einer Praziquantelverbindung oder eines Derivats davon über einen längeren Zeitraum, bis das Tier die eindringenden Parasiten besiegt hat, beispielsweise durch die Entwicklung einer schützenden Immunantwort oder eine andersartige Clearance des Parasiten. Typischerweise ist das Schema so aufgebaut, dass es die Parasiten effektiv kontrolliert und klinische Anzeichen der Krankheit verhindert. Die metaphylaktisch effektive Dosis kann auch über einen Zeitraum von fünf Jahren oder über die gesamte Lebensdauer des Tiers verabreicht werden, vor allem wenn der Parasit schwer zu kontrollieren ist.
• Ferner beschreibt die vorliegende Erfindung die Behandlung der Tiere mit einer einzelnen hohen Dosis. Dieses Verfahren umfasst die Verabreichung einer einzelnen hohen Dosis einer pharmazeutisch effektiven Menge Praziquantel an ein erkranktes Tier, das an einer parasitären neurologischen oder abortiven Erkrankung leidet, die mit einer Praziquantelverbindung oder einem Derivat davon behandelt werden kann. Der Begriff "einzelne hohe Dosis" steht für eine Menge, die nur ein Mal verabreicht wird, um die krankheitserregenden Parasiten zu kontrollieren. Diese Menge ist bedeutend größer als die Dosierungsmenge, die bei der therapeutischen oder metaphylaktischen Behandlung eingesetzt wird, und kontrolliert die krankheitserregenden Parasiten effektiv, weshalb sie zu keinen schädlichen Wirkungen, wie z.B. Toxizität, führen würde. Die einzelne hohe Dosis Praziquantel ist demgemäß größer als 10 mg/kg. Dieser und andere Aspekte der Erfindung werden nachstehend genauer erläutert.
• DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
• Wie oben erläutert beschreibt die vorliegende Erfindung eine Zusammensetzung oder ein Verfahren zur Behandlung eines infizierten oder erkrankten Säugetiers, das an einer parasitären Erkrankung leidet, die sich als neurologische oder abortive Erkrankung manifestiert, die mit einer Praziquantelverbindung oder einem Derivat davon behandelt werden kann. Das beschriebene Verfahren umfasst die Verabreichung einer Zusammensetzung an das Tier, die eine pharmazeutisch effektive Menge Praziquantel enthält. Veranschaulichende, nichteinschränkende Beispiele für die Tiere sind Pferde, Rinder, Katzen, Hunde, Schweine, Schafe, Vögel, Insekten und Menschen. Die Parasiten, die zu einer Infektion oder Erkrankung führen, sind Kokzidien der Familie Sarcocystidae, die sich als neurologische oder abortive Erkrankung manifestieren können. Veranschaulichende, nichteinschränkende Beispiele können aus der aus Sarcocystis spp., Neospora spp. und Toxoplasma spp. bestehenden Gruppe ausgewählt werden. Die Sarcocystidae sind typischerweise aus der aus S. neurona, N. hugesi, N. caninum und T. gondii bestehenden Gruppe ausgewählt. Die Protozoeninfektionen oder -erkrankungen umfassen EPM, Neosporose und Toxoplasmose, sind jedoch nicht darauf beschränkt.
• Bei der Umsetzung der Erfindung führt die Behandlung der parasitären Infektionen oder Erkrankungen, die durch die hierin beschriebenen Protozoen ausgelöst werden, zu einer Linderung der Symptome der neurologischen und abortiven Erkrankungen.
• Im Allgemeinen umfassen die Symptome Lahmheit, Ataxie, Paralyse, Abort, schwache Neugeborene und andere verwandte Störungen. Für die therapeutische Behandlung sind Tiere, die schon an den oben genannten Anzeichen der Krankheit leiden, mit einer Praziquantelverbindung zu behandeln. Typischerweise beträgt die Dauer der Behandlung etwa 28 Tage bis 90 Tage, vorzugsweise etwa 28 bis 60 Tage. Es versteht sich, dass das Behandlungsschema bei der therapeutischen Behandlung eine Verabreichung ein Mal pro Tag, zwei Mal oder öfter pro Tag, ein Mal jeden zweiten Tag oder sogar ein Mal pro Woche umfassen kann, in Abhängigkeit von Faktoren wie der Schwere der Krankheit und der Art des krankheitserregenden Parasiten. In manchen Fällen kann das Behandlungsschema jedoch zeitlich unbegrenzt sein und sogar das restliche Leben des Tiers andauern. Letzteres Behandlungsschema wäre beispielsweise bei der Behandlung einer Infektion eines Tiers mit einem resistenteren Stamm eines Parasiten erforderlich. Die Behandlung kann jedoch auch länger durchgeführt werden als erforderlich, bis die Anzeichen der Krankheit eliminiert sind. Vorzugsweise erfolgt die Behandlung ein Mal täglich über einen Zeitraum von etwa 28 Tagen. Die bevorzugte Behandlungsdosis reicht von 1 mg/kg bis 100 mg/kg, vorzugsweise 2,5 mg/kg bis 25 mg/kg.
• Bei der metaphylaktischen Behandlung sind infizierte Tiere zu behandeln, um sie vor klinischen Manifestationen der Erkrankungen zu schützen. Diese Behandlung führt schließlich dazu, dass die Tiere die Fähigkeit erwerben, den Parasiten zu kontrollieren, beispielsweise durch die Entwicklung einer effektiven Immunantwort, die ihnen Schutz gegen zukünftige Infektionen verleiht, ohne dass sie eine weitere Verabreichung von Praziquantel brauchen würden. Die metaphylaktische Aktivität bezieht sich in Übereinstimmung mit der Erfindung auf die Verwendung von Praziquantelverbindungen zur Herstellung eines Medikaments, das in einem geplanten intermittierenden Behandlungsschema (metaphylaktisch effektives Schema) verabreicht wird, um die Protozoen zu kontrollieren, die das Tier eventuell seit der letzten Behandlung infiziert haben. Demgemäß ist das metaphylaktisch effektive Schema durchzuführen, um ihre Fähigkeit zu verringern, eine Krankheit auszulösen, beispielsweise indem sie getötet werden oder ihre Zahl verringert wird. Im Wesentlichen kann die metaphylaktisch effektive Behandlung etwa ein Mal pro Monat durchgeführt werden, und zwar während der gesamten Lebensdauer des Tiers oder bis sich ein inhärenter Clearance-Mechanismus, beispielsweise eine effektive Immunantwort, im Tier entwickelt, der es vor zukünftigen Infektionen schützt. Letzteres kann innerhalb von 5 Jahren oder früher auftreten. Wie erkennbar ist, basiert die metaphylaktische Behandlung auf der Erkennung, dass, wenn Tiere mit den hierin beschriebenen Protozoen infiziert sind, sie erst nach längerer Zeit (z.B. 2-6 Monate nach der Infektion) klinische Anzeichen, wie z.B. neurologische Anzeichen oder Abort, aufweisen. Im Gegensatz dazu manifestieren sich die enterischen Protozoeninfektionen selbst kurz nach der Infektion. Gemäß dieser Erfindung verhindert die metaphylaktische Behandlung, dass Parasiten sich etablieren und eine klinische Erkrankung auslösen. Das Behandlungsschema basiert auf einem intermittierenden Schema mit einer Verabreichung eines Dosisäquivalents von etwa zwischen 1,0 und 100 mg/kg, vorzugsweise etwa 1,0 bis 25 mg/kg, insbesondere etwa 2,5 bis 10 mg/kg, etwa ein Mal pro Monat, ein Mal alle zwei Monate oder ein Mal alle zwei Wochen. Die hohen Dosen wären in insbesondere resistenten Fällen einzusetzen (z.B. wenn ein Tier mit einem resistenten Stamm infiziert ist). Die erforderlichen Dosen und die erforderliche Behandlungsdauer unterliegen dem Ermessen des Fachmanns. Ein bevorzugtes Behandlungsschema für Pferde mit EPM oder Rindern und Hunden mit Neosporose umfasst etwa 1,0 bis 25 mg/kg, und ein noch bevorzugterer Bereich beträgt etwa 2,5 bis 10 mg/kg Praziquantel oder Derivate davon alle 28 Tage.
• Bei der Behandlung mit einer einzelnen hohen Dosis sind pharmazeutisch effektive Mengen, die mehr als 10 mg/kg und bis zu etwa 100 mg/kg betragen, zu verabreichen. Ein unterscheidendes Merkmal der Erfindung ist, dass die Verbindungen der Erfindung nichttoxisch sein können, sodass sie in hohen Dosen verabreicht werden können. Der Vorteil der Verabreichung von hohen Dosen beruht auf der Tatsache, dass keine wiederholten Dosen erforderlich sind.
• Ohne sich auf eine bestimmte Theorie der Erfindung festzulegen, gehen die Erfinder davon aus, dass der unerwartete Erfolg der hierin beschriebenen Behandlungen aus der Fähigkeit von Praziquantel resultiert, die Blut-Hirn-Schranke oder die Plazentaschranke zu durchbrechen. Es wird angenommen, dass die Verbindungen dieser Er findung die Blut-Hirn-Schranke leicht überwinden können und auch in die Plazenta eindringen können, wo sie die Protozoen im Hirn und in der Hirn- und Rückenmarksflüssigkeit/Rückenmark in situ töten. Außerdem wurde herausgefunden, dass die Verbindungen dieser Klasse auch bei höheren Dosen, die für das hierin beschriebene Behandlungsschema mit einer einzelnen hohen Dosis erforderlich sind, nichttoxisch und nichtmutagen sind.
• Bisher waren keine kosteneffektiven, leicht verabreichbaren Arzneimittel zur effektiven Behandlung von und zum effektiven Schutz vor diesen Krankheiten verfügbar, die keine ungewünschten Nebenwirkungen, wie z.B. Toxizität oder Mutagenität, bei Säugetieren auslösten.
• Bei der Umsetzung der Erfindung kann Praziquantel auf jede beliebige Weise für die Verabreichung an Tiere formuliert werden. Formulierungen, die zur oralen Verabreichung geeignet sind, welche hierin bevorzugt ist, können Suspensionen, Tabletten, Kapseln, Gele, Pasten, Boli oder Präparate in Form von Pulvern, Granulaten oder Pellets sein. Insbesondere bevorzugt als oral verabreichbare Formulierung ist die Form einer Paste oder eines Nahrungsmittelzusatzes. Weitere Verabreichungsmodi, die eingesetzt werden können, umfassen parenterale, topische, intramuskuläre und intramukosale Verabreichung oder andere auf dem Gebiet der Erfindung bekannte Wege. Eine topische Verabreichung in Form eines Ausschüttens ist ebenfalls bevorzugt.
• Typischerweise werden pharmazeutisch annehmbare Träger und Hilfsmittel in den Formulierungen verwendet. Beispiele dafür sind Verdickungsmittel, die aus der aus Carbopol; anorganischen Verdickungsmitteln, wie z.B. Silicaten, Bentoniten oder kolloidaler Kieselsäure; und organischen Verdickungsmitteln, wie z.B. Fettalkoholen oder Fettsäureestern, ausgewählt sind, und Benetzungsmittel, die aus der aus Polyethylenglyköl und Natriumlaurylsulfat mit Carbopolen bestehenden Gruppe ausgewählt sind. Als Verdickungsmittel für Pastenformulierungen sind hierin Carbopol 974P und Carbopol 934P bevorzugt. Auch Konservierungsmittel, die aus der aus Parabenen, Alkoholen und Aldehyden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, können hierin verwendet werden. Diese können flüssige, feste oder gasförmige Materialien sein, die ansonsten inert oder medizinisch annehmbar und mit den aktiven Bestandteilen kompatibel sind.
• Überraschenderweise sind die Pasten gemäß vorliegender Erfindung wirksam, wenn sie zur Behandlung der Parasiten eingesetzt werden. Genauer gesagt ist es überraschend, dass die Pasten der vorliegenden Erfindung in einer neurologisch effektiven Dosis verabreicht werden können. Sie können Praziquantel effektiv über die Blut-Hirn- oder Plazentaschranke bringen und die Parasiten angreifen, die schon in das Hirn eingedrungen sind oder den Fötus eines trächtigen Tiers infiziert haben. Zum besseren Verständnis findet sich hierin eine Beschreibung einer spezifischen Ausführungsform der hierin bevorzugten Pasten und ihrer Herstellung. Eine bevorzugte Paste gemäß vorliegender Erfindung enthält eine mikronisierte Suspension aus Praziquantel, Propylenglykol, einem Verdickungsmittel, wie z.B. Carbopol, Konservierungsmitteln, wie z.B. Methylparaben und Propylparaben, und Wasser. Die Paste kann durch Vereinigen von Wasser, typischerweise gereinigtem Wasser, und Propylenglykol, Erhitzen der Kombination auf etwa 70 °C und Zusetzen der Konservierungsmittel bei dieser Temperatur hergestellt werden. Das resultierende Gemisch wird auf Raumtemperatur abgekühlt, wonach Carbopol, vorzugsweise in Form von Carbopol 974P oder 934P, zugesetzt wird. Schließlich wird das Praziquantel zugesetzt. Nachdem das Ganze gut durchmischt wurde, wird der pH mit Natriumhydroxid auf etwa 6,0 eingestellt. Die insbesondere bevorzugten Pasten umfassen 15 Gew.-% Praziquantel, 20 Gew.-% Propylenglykol, 0,5 Gew.-% Carbopol 974P, 0,14 Gew.-% Methylparaben, 0,02 Gew.-% Propylparaben, 0,1 Gew.-% Natriumhydroxid und den Rest gereinigtes Wasser. Süßungsmittel, einschließlich Dextrose, Saccharose, Fructose, Sorbit, Xylit, künstlicher Süßstoffe und Melasse, können zugesetzt werden, um den Geschmack zu verbessern. Zum selben Zweck können auch Hefe- oder Lebergeschmacksstoffe zugesetzt werden.
• Die Erfindung wird in den nachstehenden veranschaulichenden, nichteinschränkenden Beispielen genauer erläutert.
• BEISPIEL 1
• Um den Schutzumfang zu bestimmen, der durch Praziquantel bereitgestellt wird, wurde ein In-vitro-Test durchgeführt. Sarcocystis neurona wurde auf seine Empfindlichkeit gegenüber dieser Verbindung untersucht. Der Stamm SN3 von Sarcocystis neurona wurde verwendet. Praziquantel wurde in zwei Konzentrationen, 10 μg/ml und 20 μg/ml, getestet.
• Rindernasenmuschel-(BT-)Zellen wurden für alle In-vitro-Tests verwendet. Die Zellen wurden in 25-cm²-Kolben in einem Medium RMPI 1640, das mit 10 Vol.-% fötalem Rinderserum (FBS), 100 Einheiten Penicillin (g/ml), 100 mg Streptomycin/ml und 5 × 10^–2 mM 2-Mercaptoethanol ergänzt war, bis zur Konfluenz gezüchtet. Nachdem die Zellkonfluenz erreicht worden war, wurden die Zellen im gleichen Medium mit weniger FBS (2 Vol.-%) gelassen. Die Zellkulturen wurden bei 37 °C in einer befeuchteten Atmosphäre aus 5 % Kohlendioxid und 95 % Luft inkubiert.
• Um die Parasiten zu züchten, wurden BT-Zellmonoschichten mit Parasiten infiziert und mithilfe eines umgekehrten Mikroskops auf die Entwicklung von Läsionen (zytopathischer Effekt, "CPE") oder die Gegenwart vieler extrazellulärer Merozoiten untersucht. Sobald Läsionen zu erkennen waren oder viele extrazelluläre Parasiten vorhanden waren, wurde die Monoschicht mit der Spitze einer 5-ml-Pipette abgeschabt, und 1 bis 3 Tropfen der merozoitenhältigen Flüssigkeit wurden zu zwei Kolben mit frischen BT-Zellen zugesetzt. Merozoiten von S. neurona wurden auf diese Weise alle 5 bis 10 Tage passagiert.
• Der zur Bestimmung der Wirksamkeit von Praziquantel verwendete Test war der Microtiter Monolayer Disruption Assay (MMDA). Dieser Test wurde verwendet, um zu bestimmen, ob die Parasiten oder die Verbindung für BT-Zellen toxisch waren. 96-Well-Mikrotiterplatten mit flachem Boden wurden mit BT-Zellen inokuliert, und die resultierenden Monoschichten wurden verwendet, um die Wirkung von Praziquantel auf die Merozoitenproduktion zu bestimmen, die durch den CPE (zytopathischer Effekt – Plaquebildung) bestimmt wurde. Die Monoschichten wurden mit Parasiten in okuliert (S. neurona, 50.000/Well). Alle Wells wurden 2 Stunden nach der Infektion der Monoschichten mit der korrekten Konzentration Praziquantel inokuliert. Unbehandelte und nicht infizierte Monoschicht-Wells dienten als Parasitenkontrolle, und nicht infizierte, mit dem Mittel behandelte BT-Zellen dienten als Toxizitätskontrolle. Jede Behandlung wurde 6-mal wiederholt. Jeder Well wurde täglich visuell geprüft, und der Test wurde gestoppt, wenn 90-100 % der unbehandelten merozoiteninfizierten Zellen lysiert waren (90-100 % CPE). Alle Wells der Platten wurden in phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) gespült und in 100 % Methanol 5 Minuten lang fixiert, wonach sie in einer Kristallviolettlösung gefärbt wurden. Bereiche mit merozoiteninduzierter Zerstörung oder BT-Zelltod aufgrund von Toxizität nahmen das Kristallviolett nicht auf. Ein ELISA-Plattenlesegerät wurde verwendet, um die Kristallviolettinkorporation zu quantifizieren, und diese Daten wurden verwendet, um die Konzentration von Praziquantel zu bestimmen, welche die Zerstörung zu 50 % hemmt (Hemmkonzentration₅₀ oder HK₅₀). Die Daten in Bezug auf die Hemmung sind in Tabelle 1 zusammengefasst. Es gilt anzumerken, dass nur 10 μg/ml Praziquantel zu einer 51 %igen Hemmung der Zellzerstörung führten. Eine Konzentration von 20 μg/ml Praziquantel führte zu einer 69%igen Hemmung der Zellzerstörung. Dies zeigt, dass Praziquantel effektiv zur Behandlung von Erkrankungen eingesetzt werden kann, die durch Kokzidien ausgelöst werden, die mit neurologischen und abortiven Krankheitssymptomen in Zusammenhang stehen, einschließlich durch S. neurona, N. caninum, N. hugesi, T. gondii und I. Suis ausgelöste Erkrankungen. Außerdem war Praziquantel in den BT-Zellen nicht toxisch.
• Tabelle 1: In-vitro-Daten über die Wirkung von Praziquantel auf Sarcocystis neurona

  
• Diese Daten zeigen, dass eine Dosis von 2,5 bis 10 mg/kg bei der Behandlung eines Säugetiers, das an einer durch Sarcocystis neurona verursachten Erkrankung leidet, neurologisch effektiv wäre.

Claims (7)

1. Verwendung von Praziquantel zur Herstellung einer Zusammensetzung zur Behandlung eines erkrankten Säugetiers, das an einer durch Kokzidien verursachten, parasitären, neurologischen oder abortiven Erkrankung leidet.
2. Verwendung nach Anspruch 1, worin die Kokzidien zu der aus Sarcocystis spp., Neospora spp., Toxoplasma spp. und Isospora spp. bestehenden Gruppe gehören.
3. Verwendung nach einem der vorangegangenen Ansprüche, worin die Sarcocystis spp. Sarcocystis neurona ist, die Neospora spp. Neospora caninum oder Neospora hugesi ist, die Toxoplasma spp. Toxoplasma gondii ist und die Isospora spp. Isospora suis ist.
4. Verwendung nach Anspruch 3, worin Sarcocystis neurona der Verursacher von durch Protozoen ausgelöste Pferdeenzephalomyelitis ist.
5. Verwendung nach Anspruch 3, worin Neospora caninum der Verursacher von Neosporose bei Rindern oder Hunden ist.
6. Verwendung nach Anspruch 3, worin Neospora hugesi der Verursacher von durch Protozoen ausgelöste Pferdeenzephalomyelitis ist.
7. Verwendung nach Anspruch 3, worin Toxoplasma gondii der Verursacher von mit Toxoplasma in Zusammenhang stehendem Abort bei Säugetieren ist.