DE60027729T2

DE60027729T2 - Benzophenone als reverse transcriptase inhibitore

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Publication number: DE60027729T2
Application number: DE60027729T
Authority: DE
Inventors: Webster Glaxo Wellcome Inc. Clarence Research Triangle Park ANDREWS; Howing Glaxo Wellcome Inc Joseph Research Triangle Park CHAN; Andrew Glaxo Wellcome Inc. George Research Triangle Park FREEMAN; Rene Glaxo Wellcome Inc. Karen Research Triangle Park ROMINES; H. Glaxo Wellcome Inc. Jeffrey Research Triangle Park TIDWELL; Maurice Pascal 25 Avenue de Quebec PIANETTI
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Current assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 1999-09-04
Filing date: 2000-08-31
Publication date: 2006-11-16
Anticipated expiration: 2020-09-01
Also published as: NO20021042D0; JP2006077019A; PE20010539A1; AR033344A1; TWI286550B; ZA200201664B; IL148322A0; PL354760A1; CN1636984A; NO20021042L; CN1391565A; DE60027729D1; EP1208091A1; AU7774300A; CZ2002807A3; JP2003510252A; ES2261242T3; WO2001017982A1; HUP0202593A2; KR20020086850A

Description

Hintergrund der Erfindung
Das humane Immundefektvirus („HIV") ist der Erreger des erworbenen Immundefizienzssyndroms („AIDS"), einer durch die Zerstörung des Immunsystems, insbesondere der CD4⁺-T-Zellen, gekennzeichneten Erkrankung, mit begleitender Anfälligkeit für opportunistische Infektionen, und seiner Vorstufe AIDS-related Complex („ARC"), eines Syndroms, das durch Symptome, wie persistierende generalisierte Lymphadenopathie, Fieber und Gewichtsverlust, gekennzeichnet ist. HIV ist ein Retrovirus; die Umwandlung seiner RNA in DNA wird durch die Wirkung des Enzyms reverse Transcriptase vollzogen. Verbindungen, die diese Funktion der reversen Transcriptase hemmen, hemmen die Replikation von HIV in infizierten Zellen. Derartige Verbindungen sind bei der Vorbeugung oder Behandlung von HIV-Infektionen bei Menschen verwendbar.
Nicht-nukleosidische Reverse-Transcriptase-Inhibitoren (NNRTIs) fanden neben den nukleosidischen Reverse-Transcriptase-Inhibitoren einen maßgeblichen Platz bei der Behandlung von HIV-1-Infektionen. Die NNRTIs treten mit einer spezifischen Stelle der reversen Transcriptase von HIV-1 in Wechselwirkung, die in engem Zusammenhang mit, aber verschieden von, der NRTI-Bindungsstelle, steht. NNRTIs sind jedoch für das schnelle Hervorrufen von Resistenz aufgrund von Mutationen der Aminosäuren, die die NNRTI-Bindungsstelle umgeben, bekannt (E. De Clercq, II Famaco 1999, 54, 26–45). Das Versagen der Langzeitwirksamkeit von NNRTIs ist oft mit dem Aufkommen arzneimittelresistenter Virusstämme verbunden (J. Balzarini, Biochemical Pharmacology 1999, Bd. 58, 1–27). Außerdem führen die Mutationen, die im Enzym reverse Transcriptase auftreten, häufig zu einer verringerten Sensitivität gegen andere Inhibitoren der reversen Transcriptase, was Kreuzresistenz zur Folge hat.
JP 59181246 offenbart bestimmte Benzophenone, die als Antikrebsmittel verwendbar sind. Bestimmte Benzophenonderivate als Inhibitoren der reversen Transcriptase von HIV-1 wurden in Wyatt et al. (J. Med. Chem. 1995, 38: 1657–1665) offenbart. Diese Verbindungen waren jedoch in erster Linie gegen die reverse Transcriptase von Wildtyp-HIV-1 wirksam, induzierten rasch ein resistentes Virus und waren gegen einen verbreiteten resistenten Stamm unwirksam.
Wir haben jetzt entdeckt, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen als Inhibitoren der reversen Transcriptase sowohl von Wildtyp-Varianten als auch mutanten Varianten von HIV verwendbar sind.
Kurzbeschreibung der Erfindung
Eine erste Ausführungsform der Erfindung bietet eine Verbindung, ausgewählt aus N-[4-(Aminosulfonyl)-2-methylphenyl]-2-[4-chlor-2-(3-chlor-5-cyanobenzoyl)phenoxy]acetamid und pharmazeutisch verträglichen Derivaten davon. Diese Verbindungen sind bei der Hemmung der reversen Transcriptase von HIV, insbesondere ihrer resistenten Arten, der Vorbeugung einer Infektion mit HIV, der Behandlung einer Infektion mit HIV und der Behandlung von AIDS und/oder ARC, entweder als Verbindungen, pharmazeutisch verträgliche Salze oder Arzneimittelbestandteile, verwendbar. Eine zweite Ausführungsform der Erfindung bietet Verwendungen der vorstehend erwähnten Verbindungen bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von AIDS oder zur Vorbeugung einer Infektion mit HIV oder zur Behandlung einer Infektion mit HIV als Monotherapie oder in Kombination mit anderen antiviralen Mitteln, antiinfektiösen Mitteln, Immunmodulatoren, Antibiotika oder Impfstoffen. Eine dritte Ausführungsform der Erfindung bietet Arzneimittel, die die vorstehend erwähnten Verbindungen umfassen und welche zur Vorbeugung oder Behandlung einer HIV-Infektion geeignet sind.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft eine Verbindung, ausgewählt aus N-[4-(Aminosulfonyl)-2-methylphenyl]-2-[4-chlor-2-(3-chlor-5-cyanobenzoyl)phenoxy]acetamid und pharmazeutisch verträglichen Derivaten davon, bei der Hemmung der reversen Transcriptase von HIV und ihrer resistenten Arten, der Vorbeugung oder Behandlung einer Infektion mit HIV und bei der Behandlung des daraus folgenden erworbenen Immundefektsyndroms (AIDS).
Der Begriff „pharmazeutisch wirksame Menge" bezieht sich auf eine Menge, die bei der Behandlung einer Virusinfektion, z. B. einer HIV-Infektion, bei einem Patienten entweder als Monotherapie oder in Kombination mit anderen Mitteln wirksam ist. Der Begriff „Behandlung", wie hierin verwendet, betrifft die Linderung von Symptomen einer speziellen Erkrankung bei einem Patienten oder die Verbesserung einer erfassbaren Messung, die mit einer speziellen Erkrankung in Zusammenhang steht, und kann die Unterdrückung der Wiederkehr der Symptome bei einem asymptomatischen Patienten, wie einem Patienten, bei welchem eine virale Infektion latent geworden ist, einschließen. Der Begriff „prophylaktisch wirksame Menge" bezieht sich auf eine Menge, die bei der Vorbeugung einer Virusinfektion, beispielsweise einer HIV-Infektion, oder der Vorbeugung des Auftretens von Symptomen solch einer Infektion bei einem Patienten wirksam ist. Wie hierin verwendet, betrifft der Begriff „Patient" einen Säuger, einen Menschen einschließend.
Der Begriff „pharmazeutisch verträglicher Träger oder Hilfsstoff" bezieht sich auf einen Träger oder Hilfsstoff, der einem Patienten, zusammen mit einer erfindungsgemäßen Verbindung, verabreicht werden kann und welcher die pharmakologische Wirksamkeit davon nicht zerstört und nicht toxisch ist beim Verabreichen in Dosen, die zum Abgeben einer therapeutischen Menge des antiviralen Mittels genügend sind.
Wie hierin verwendet, ist definiert, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen pharmazeutisch verträgliche Derivate davon einschließen. Ein „pharmazeutisch verträgliches Derivat" bedeutet jedes pharmazeutisch verträgliche Salz, jeden pharmazeutisch verträglichen Ester, jedes pharmazeutisch verträgliche Salz eines Esters oder anderes Derivat einer erfindungsgemäßen Verbindung, welches/welcher, nach Verabreichung an einen Empfänger, imstande ist, eine erfindungsgemäße Verbindung oder einen hemmend wirksamen Metaboliten oder Rückstand davon (direkt oder indirekt) zu liefern. Besonders bevorzugte Derivate und Prodrugs sind jene, die die Bioverfügbarkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen erhöhen, wenn derartige Verbindungen an einen Säuger verabreicht werden (z. B. eine oral verabreichte Verbindung leichter in das Blut aufnehmen lassen), oder welche die Abgabe der Stammverbindung an ein biologisches Kompartment (z. B. das Gehirn oder Lymphsystem) bezüglich der Stammverbindung verbessern.
Pharmazeutisch verträgliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen schließen jene ein, die sich aus pharmazeutisch verträglichen anorganischen und organischen Säuren und Basen ableiten. Beispiele geeigneter Säuren schließen Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Perchlorsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Phosphorsäure, Glycolsäure, Milchsäure, Salicylsäure, Bernsteinsäure, p-Toluolsulfonsäure, Weinsäure, Essigsäure, Citronensäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Ameisensäure, Benzoesäure, Malonsäure, 2-Naphthalinsulfonsäure und Benzolsulfonsäure ein. Andere Säuren, wie Oxalsäure, obwohl selbst nicht pharmazeutisch verträglich, können bei der Herstellung von Salzen, die als Zwischenprodukte bei der Erhaltung der erfindungsgemäßen Verbindungen und ihrer pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalze verwendbar sind, eingesetzt werden.
Salze, die sich aus geeigneten Basen ableiten, schließen Alkalimetall- (z. B. Natrium-), Erdalkalimetall- (z. B. Magnesium-), Ammonium- und NW₄ ⁺-Salze (wobei W C_1-4-Alkyl ist) ein. Physiologisch verträgliche Salze eines Wasserstoffatoms oder einer Aminogruppe schließen Salze von organischen Carbonsäuren, wie Essigsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Isethionsäure, Lactobionsäure und Bernsteinsäure; organischen Sulfonsäuren, wie Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Benzolsulfonsäure und p-Toluolsulfonsäure; und anorganischen Säuren, wie Salzsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure und Amidosulfonsäure; ein. Physiologisch verträgliche Salze einer Verbindung mit einer Hydroxygruppe schließen das Anion dieser Verbindung in Kombination mit einem geeigneten Kation, wie Na⁺, NH₄ ⁺ und NW₄ ⁺ (wobei W ein C_1-4-Alkylrest ist), ein.
Ester der erfindungsgemäßen Verbindungen sind unabhängig voneinander ausgewählt aus den folgenden Gruppen: (1) Carbonsäureester, erhalten durch Veresterung der Hydroxygruppen, bei welchen die Nichtcarbonyleinheit des Carbonsäureteils der Estergruppierung ausgewählt ist aus gerad- oder verzweigtkettigem Alkyl (z. B. Acetyl, n-Propyl, t-Butyl oder n-Butyl), Alkoxyalkyl (z. B. Methoxymethyl), Aralkyl (z. B. Benzyl), Aryloxyalkyl (z. B. Phenoxymethyl), Aryl (z. B. Phenyl, gegebenenfalls substituiert mit beispielsweise Halogen, C_1-4-Alkyl oder C_1-4-Alkoxy oder Amino); (2) Sulfonatester, wie Alkyl- oder Aralkylsulfonylester (z. B. Methansulfonylester); (3) Aminosäureester (z. B. L-Valyl- oder L-Isoleucylester); (4) Phosphonatester und (5) Mono-, Di- oder Triphosphatester. Die Phosphatester können beispielsweise durch einen C_1-20-Alkohol oder ein reaktives Derivat davon oder durch ein 2,3-Di(C_6-24)acylglycerin weiter verestert werden.
In derartigen Estern, wenn nicht anders angegeben, enthält jede vorhandene Alkyleinheit vorteilhaft zwischen 1 und 18 Kohlenstoffatomen, insbesondere zwischen 1 und 6 Kohlenstoffatomen, im ganz Besonderen zwischen 1 und 4 Kohlenstoffatomen. Jede in derartigen Estern vorliegende Cycloalkyleinheit enthält vorteilhaft zwischen 3 und 6 Kohlenstoffatomen. Jede in derartigen Estern vorliegende Aryleinheit umfasst vorteilhaft eine Phenylgruppe.
Jegliche Bezugnahme auf jede der vorstehenden Verbindungen schließt auch eine Bezugnahme auf pharmazeutisch verträgliche Salze davon ein.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in der medizinischen Therapie insbesondere zur Behandlung oder Prophylaxe von viralen Infektionen, wie einer HIV-Infektion, verwendet werden. Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben sich als wirksam gegen HIV-Infektionen erwiesen, obwohl diese Verbindungen auch gegen HBV-Infektionen wirksam sein können.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind besonders geeignet für die Behandlung oder Prophylaxe von HIV-Infektionen und damit verbundenen Zuständen. Die Bezugnahme hierin auf Behandlung erstreckt sich sowohl auf die Prophylaxe als auch die Behandlung von bestehenden Infektionen, Symptomen und damit in Zusammenhang stehenden klinischen Zuständen, wie AIDS-related Complex (ARC), Kaposi-Sarkom und AIDS-Demenz.
Insbesondere können die erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden, um sowohl Wildtyp-HIV-1 als auch einige Resistenzmutationen, z. B. K103N, L1001 oder Y181C, zu behandeln.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können außerdem bei der Adjuvanstherapie bei der Behandlung von HIV-Infektionen oder mit HIV in Zusammenhang stehenden Symptomen oder Wirkungen, z. B. Kaposi-Sarkom, verwendet werden.
In noch einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung einer erfindungsgemäßen Verbindung bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung oder Prophylaxe jeder der vorstehend erwähnten viralen Infektionen oder Zustände zur Verfügung.
Die vorstehenden erfindungsgemäßen Verbindungen und ihre pharmazeutisch verträglichen Derivate können in Kombination mit anderen therapeutischen Mitteln zur Behandlung der vorstehenden Infektionen oder Zustände verwendet werden. Erfindungsgemäße Kombinationstherapien umfassen die Verabreichung von mindestens einer erfindungsgemäßen Verbindung oder einem pharmazeutisch verträglichen Derivat davon und von mindestens einem weiteren pharmazeutisch wirksamen Bestandteil. Der/die Wirkstoff(e) und pharmazeutisch wirksamen Mittel können gleichzeitig entweder in derselben Arzneimittelformulierung oder verschiedenen Arzneimittelformulierungen oder der Reihe nach in jeder Reihenfolge verabreicht werden. Die Mengen der/des Wirkstoffe(s) und der/des pharmazeutisch wirksamen Mittel(s) und das jeweilige Timing der Verabreichung werden ausgewählt werden, um die gewünschte kombinierte therapeutische Wirkung zu erzielen. Bevorzugt beinhaltet die Kombinationstherapie die Verabreichung einer erfindungsgemäßen Verbindung und eines der hierin nachstehend erwähnten Mittel.
Beispiele von derartigen weiteren therapeutischen Mitteln schließen Mittel ein, die zur Behandlung von viralen Infektionen oder damit in Zusammenhang stehenden Zuständen wirksam sind, wie (1α,2β,3α)-9-[2,3-Bis(hydroxymethyl)cyclobutyl]guanin [(–)BHCG, SQ-34514], Oxetanocin-G (3,4-Bis-(hydroxymethyl)-2-oxetanosyl]guanin, acyclische Nukleoside (z. B. Aciclovir, Valaciclovir, Famciclovir, Ganciclovir, Penciclovir), acyclische Nukleosidphosphonate (z. B. (S)-1-(3-Hydroxy-2-phosphonylmethoxypropyl)cytosin (HPMPC)), PMEA, Ribonukleotidreduktase-Inhibitoren, wie 2-Acetylpyridin-5-[(2-chloranilino)thiocarbonyl)thiocarbonohydrazon], 3'-Azido-3'-desoxythymidin, andere 2',3'-Didesoxynukleoside, wie 2',3'-Didesoxycytidin, 2',3'-Didesoxyadenosin, 2',3'-Didesoxyinosin, 2',3'-Didehydrothymidin, Protease-Inhibitoren, wie Indinavir, Ritonavir, Nelfinavir, Amprenavir, Oxathiolannukleosidanaloga, wie (–)-cis-1-(2-(Hydroxymethyl)-1,3-oxathiolan-5-yl)cytosin (Lamivudin) oder cis-1-(2-(Hydroxymethyl)-1,3-oxathiolan-5-yl)-5-fluorcytosin (FTC), 3'-Desoxy-3'-fluorthymidin, 5-Chlor-2',3'-didesoxy-3'-fluoruridin, (–)-cis-4-[2-Amino-6-(cyclopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyclopenten-1-methanol (Abacavir), Ribavirin, 9-[4-Hydroxy-2-(hydroxymethyl)but-1-yl]guanin (H2G), TAT-Inhibitoren, wie 7-Chlor-5-(2-pyrryl)-3H-1,4-benzodiazepin-2-(H)on (Ro5-3335), 7-Chlor-1,3-dihydro-5-(1H-pyrrol-2yl)-3H-1,4-benzodiazepin-2-amin (Ro24-7429), Interferone, wie α-Interferon, Inhibitoren der renalen Exkretion, wie Probenecid, Inhibitoren des Nukleosidtransports, wie Dipyridamol; Pentoxifyllin, N-Acetylcystein (NAC), Procystein, α-Trichosanthin, Phosphonameisensäure sowie Immunmodulatoren, wie Interleukin II oder Thymosin, Granulozyt-Makrophagen-Kolonie stimulierende Faktoren, Erythropoetin, lösliches CD4 und gentechnisch manipulierte Derivate davon, oder andere nicht-nukleosidische Reverse-Transcriptase-Inhibitoren (NNRTIs), wie Nevirapin (BI-RG-587), Lovirid (α-APA) und Delavuridin (BHAP) und Phosphonoameisensäure, und 1,4-Dihydro-2H-3,1-benzoxazin-2-on-NNRTIs, wie (–)-6-Chlor-4-cyclopropylethinyl-4-trifluormethyl-1,4-dihydro-2H-3,1-benzoxazin-2-on (L-743, 726 oder DMP-266) und Chinoxalin-NNRTIs, wie Isopropyl(2S)-7-fluor-3,4-dihydro-2-ethyl-3-oxo-1(2H)-chinoxalincarboxylat (HBY 1293).
Der/die Träger muss/müssen pharmazeutisch verträglich in dem Sinne sein, dass er/sie mit anderen Bestandteilen der Formulierung verträglich und nicht schädlich für den Empfänger davon ist/sind.
Stärker bevorzugt beinhaltet die Kombinationstherapie die Verabreichung eines der vorstehend erwähnten Mittel und einer Verbindung innerhalb einer der bevorzugten oder besonders bevorzugten Untergruppen im Rahmen der Formeln (I)–(IV) (einschließend IA, IB, IC und ID), wie vorstehend beschrieben. Am meisten bevorzugt beinhaltet die Kombinationstherapie die gemeinsame Verwendung von einem der vorstehend genannten Mittel zusammen mit einer der erfindungsgemäßen Verbindungen, die hierin speziell genannt sind.
Die vorliegende Erfindung schließt außerdem die Verwendung einer erfindungsgemäßen Verbindung bei der Herstellung eines Medikaments zur gleichzeitigen oder sequenziellen Verabreichung mit mindestens einem anderen therapeutischen Mittel, wie jenen vorstehend definierten, ein.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können mit den folgenden Verfahren oder mit jedem auf dem Fachgebiet bekannten Verfahren synthetisiert werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können gemäß den repräsentativen Schemata, welche nachstehend aufgeführt sind, hergestellt werden. Diese Schemata schließen auch die Herstellung sowohl von anderen Benzophenonderivaten als auch Zwischenprodukten davon, die nicht im Umfang der Ansprüche eingeschlossen sind, ein. Die Verbindungen, welche gemäß diesen Schemen hergestellt werden können, werden nicht durch die in den Schemen enthaltenen Verbindungen oder durch spezielle Substituenten, die in den Schemen für erläuternde Zwecke verwendet werden, begrenzt.
Beispielsweise lässt man Carbonsäure 49 (Schema I) mit Amin 399 in DMF und in Gegenwart von EDAC und HOBt bei Umgebungstemperatur umsetzen, wodurch Verbindung 46 erhalten wird.
Schema I
Beispielsweise lässt man Carbonsäure 71 (Schema II) mit Oxalylchlorid in Dichlormethan und in Gegenwart einer katalytischen Menge an DMF umsetzen, wodurch das entsprechende Säurechlorid erhalten wird. Man lässt dann das Säurechlorid mit Amin 466 in einem Gemisch aus Aceton und Wasser und in Gegenwart eines Überschusses an Natriumhydrogencarbonat umsetzen, wodurch Verbindung 78 geliefert wird.
Schema II
Beispielsweise lässt man Phenol 4 (Schema III) mit 2'-Chloracetanilid in Gegenwart von Natriumcarbonat in unter Rückfluss erhitztem Aceton umsetzen, wodurch Verbindung 1 erhalten wird.
Schema III
Beispielsweise lässt man Phenol 47 (Schema IV) mit Ethylbromacetat in unter Rückfluss erhitztem Aceton und in Gegenwart von Kaliumcarbonat in umsetzen, wodurch Ester 48 erhalten wird.
Schema IV
Beispielsweise lässt man Ester 48 (Schema V) mit Lithiumhydroxid in einem Gemisch aus THF, Wasser und Ethanol umsetzen, wodurch Carbonsäure 49 erhalten wird.
Schema V
Beispielsweise wird 2-Brom-4-chloranisol (Schema VI) in Diethylether mit n-Butyllithium bei –78°C behandelt. Nach 15 Minuten bei –78°C lässt man die so erhaltene Lithiumverbindung mit Amid 68 umsetzen, wodurch das gewünschte Keton 69 erhalten wird.
Schema VI
Beispielsweise lässt man 1-Methyl-2-pyrrolcarbonsäure (Schema VII) in Dichlormethan mit einem Überschuss an Oxalylchlorid in Gegenwart einer katalytischen Menge an DMF umsetzen. Das so erhaltene Säurechlorid wird nicht in reiner Form isoliert, sondern man lässt es stattdessen mit N,O-Dimethylhydroxylamin in Chloroform und in Gegenwart von Triethylamin umsetzen, wodurch Amid 14 erhalten wird.
Schema VII
Beispielsweise wurde 2-Brom-4-chloranisol mit n-Butyllithium in Ether und bei –78°C behandelt. Man lässt dann die so erhaltene Lithioverbindung mit 2-Thiazolcarboxaldehyd umsetzen, wodurch das Zwischenprodukt Alkohol 2 erhalten wird. Man lässt anschließend Alkohol 2 mit einem Überschuss an Mangandioxid in Dichlormethan bei Raumtemperatur umsetzen, wodurch Keton 3 erhalten wird.
Schema VIII
Beispielsweise lässt man Keton 69 (Schema IX) mit einem Überschuss an Bortribromid in Dichlormethan bei –78°C umsetzen, wodurch Phenol 70 erhalten wird.
Schema IX
Beispielsweise lässt man 4-Chloranisol (Schema X) mit 3,5-Difluorbenzoylchlorid in unter Rückfluss erhitztem Dichlormethan in Gegenwart von Aluminiumchlorid umsetzen, wodurch Keton 47 erhalten wird.
Schema X
Beispielsweise lässt man Ester 223 (Schema XI) mit Trimethylsilylacetylen in Gegenwart von Tetrakis(triphenylphosphin)palladium, Triethylamin und Kupfer(I)-iodid umsetzen, wodurch das trimethylsilylgeschützte Produkt als Zwischenprodukt erhalten wird. Behandlung des Zwischenprodukts mit Tetrabutylammoniumfluorid in THF liefert Verbindung 224.
Schema XI
Beispielsweise lässt man Verbindung 465 (Schema XII) mit wässriger 1 N Salzsäurelösung in Ethanol bei Rückflusstemperatur umsetzen, wodurch 466 erhalten wird.
Schema XII
Beispielsweise lässt man Sulfonylchlorid 464 (Schema XIII) mit Ammoniumhydroxid in THF bei Umgebungstemperatur umsetzen, wodurch Sulfonamid 465 erhalten wird.
Schema XIII
Beispielsweise lässt man Verbindung 463 (Schema XIV) mit Thionylchlorid in DMF bei 0°C umsetzen, wodurch Sulfonylchlorid 464 erhalten wird.
Schema XIV
Beispielsweise lässt man 2-Aminotoluol-5-sulfonsäure (Schema XV) mit Essigsäureanhydrid in Pyridin bei Umgebungstemperatur umsetzen, wodurch Verbindung 462 erhalten wird.
Schema XV
Beispielsweise lässt man Verbindung 397 (Schema XVI) mit Palladium auf Kohle zusammen mit Wasserstoffgas in Ethylalkohol bei Umgebungstemperatur umsetzen, wodurch Verbindung 399 erhalten wird.
Schema XVI
Beispielsweise lässt man Verbindung 394 (Schema XVII) mit MCPBA in Chloroform bei Raumtemperatur umsetzen, wodurch sowohl das Sulfoxid 397 als auch das Sulfon 398 erhalten werden.
Schema XVII
Zwei Beispiele sind nachstehend in Schema XIX dargestellt. Im ersten Beispiel lässt man 5-Fluor-2-nitrotoluol mit Thiomorpholin in Pyridin und Wasser und in Gegenwart von Kaliumcarbonat umsetzen, wodurch Verbindung X erhalten wird. Im zweiten Beispiel lässt man 5-Fluor-2-nitrotoluol mit Imidazol in Dimethylsulfoxid, in Gegenwart von Kaliumcarbonat, bei 70°C umsetzen, wodurch Verbindung 394 erhalten wird.
Schema XIX
Die gewünschten Heterocyclen, wie jene in den vorstehenden Schemen verwendeten, sind entweder im Handel erhältlich oder können unter Verwendung von den Fachleuten bekannten Literaturverfahren hergestellt werden.
Beispielsweise lässt man Verbindung 139 (Schema XX) mit Palladium auf Kohle in Ethylalkohol und in Gegenwart von Wasserstoff-Druckgas umsetzen, wodurch Amin 140 erhalten wird.
Schema XX
Beispielsweise lässt man 4-Nitro-3-methylphenol (Schema XXI) mit 1,3-Dibrompropan in DMF und in Gegenwart von Kaliumcarbonat umsetzen, wodurch Verbindung 249 erhalten wird.
Schema XXI
Beispielsweise lässt man Sulfonylchlorid 260 (Schema XXII) mit Dimethylamin in Dichlormethan bei 0°C umsetzen, wodurch Sulfonamid 264 erhalten wird.
Schema XXII
Beispielsweise lässt man Verbindung 253 (Schema XXIII) mit Thionylchlorid in DMF bei 0°C umsetzen, wodurch Sulfonylchlorid 254 erhalten wird.
Schema XXIII
Beispielsweise lässt man 3-Methyl-4-nitrophenol (Schema XXIV) mit 1,3-Propansulton in THF und in Gegenwart von Natriumhydrid umsetzen, wodurch Sulfonsäuresalz 253 erhalten wird.
Schema XXIV
Die gewünschten Sultone, wie 1,3-Propansulton, sind entweder im Handel erhältlich oder können mit den Fachleuten bekannten Literaturverfahren hergestellt werden.
Beispielsweise lässt man 5-Fluor-2-nitrotoluol (Schema XXV) mit 4-(3-Aminopropyl)morpholin in Pyridin und Wasser und in Gegenwart von Natriumhydrogencarbonat umsetzen, wodurch Verbindung 308 erhalten wird.
Schema XXV
Beispielsweise kann 5-Amino-4-methyl-2-pyridinsulfonamid aus 2-Chlor-4-methyl-5-nitropyridin wie in Schema XXVI dargestellt hergestellt werden. Man lässt im Handel erhältliches 2-Chlor-4-methyl-5-nitropyridin mit einem Agens, das zum Ersetzen der 2-Chlorgruppe durch ein Schwefelatom imstande ist, umsetzen, wodurch 4-Methyl-5-nitro-2-pyridinthiol erhalten wird, beispielsweise mit Thioharnstoff. Diese Umsetzungen werden typischerweise in einem polaren, protischen Lösungsmittel, z. B. Essigsäure, und in Gegenwart einer Base, z. B. Kalium- und Natriumhydroxid, und bei Temperaturen zwischen 20°C und 150°C durchgeführt. Das so erhaltene Thiol lässt man anschließend mit einem Reagenz, das zum Oxidieren des Thiols zu dem Sulfonsäurederivat imstande ist, z. B. Wasserstoffperoxid, Oxon oder Chlorgas, umsetzen. Die Oxidation kann günstig unter Verwendung von Chlorgas als Oxidationsmittel in einem sauren Lösungsmittel, z. B. 1 N Salzsäure, mit gleichzeitiger Bildung des entsprechenden, gewünschten Sulfonylchlorids durchgeführt werden. Das so erhaltene Sulfonylchlorid lässt man dann mit einem Agens, das zum Umwandeln dieses in das entsprechende Sulfonamid imstande ist, Ammoniakgas oder einer Lösung von Ammoniak in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Dichlormethan, umsetzen, wodurch 4-Methyl-5-nitro-2-pyridinsulfonamid erhalten wird. Die Nitrogruppe kann anschließend unter Verwendung von den Fachleuten bekannten Verfahren reduziert werden, z. B. Palladium auf Kohle in Gegenwart von Wasserstoffgas als Reduktionsmittel, wodurch das gewünschte 5-Amino-4-methyl-2-pyridinsulfonamid hergestellt wird. Die Reduktionsreaktionen werden typischerweise in einem polaren, protischen Lösungsmittel, z. B. Methanol, und bei Temperaturen zwischen 20°C und 100°C, bevorzugt bei Umgebungstemperatur, durchgeführt.
Schema XXVI
Beispielsweise ließ man 5-Amino-2-methyl-3-nitropyridin mit t-Butylnitrit umsetzen, wodurch das entsprechende Diazoniumsalz hergestellt wurde, gefolgt von Umsetzung mit Trimethylsilylchlorid in einem aprotischen Lösungsmittel, z. B. Dichlormethan, wodurch 5-Chlor-2-methyl-3-nitropyridin erhalten wurde. Man lässt dann die Chlorgruppe mit einem Agens, das zum Bewirken einer Substitution an dem Pyridinring imstande ist, umsetzen, wodurch das entsprechende Thiolderivat hergestellt wird. Beispielsweise ließ man 5-Chlor-2-methyl-3-nitropyridin mit Thioharnstoff in einem Gemisch aus Essigsäure, Kaliumhydroxid und Natriumhydroxid umsetzen, wodurch das gewünschte 6-Methyl-5-nitro-2-pyridinthiol erhalten wurde. Man lässt das so erhaltene Thiol anschließend mit einem Reagenz, das zum Oxidieren des Thiols zu dem Sulfonsäurederivat imstande ist, z. B. Wasserstoffperoxid, Oxon oder Chlorgas, umsetzen. Die Oxidation kann vorteilhaft unter Verwendung von Chlorgas als Oxidationsmittel in einem sauren Lösungsmittel, z. B. 1 N Salzsäure, mit gleichzeitiger Bildung des entsprechenden, gewünschten Sulfonylchlorids durchgeführt werden. Das so erhaltene Sulfonylchlorid lässt man dann mit einem Agens, das zum Umwandeln dieses in das entsprechende Sulfonamid imstande ist, Ammoniakgas oder einer Lösung von Ammoniak in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Dichlormethan, umsetzen, wodurch 6-Methyl-5-nitro-2-pyridinsulfonamid erhalten wird. Die Nitrogruppe kann anschließend unter Verwendung von den Fachleuten bekannten Verfahren reduziert werden, z. B. Palladium auf Kohle in Gegenwart von Wasserstoffgas als Reduktionsmittel, wodurch das gewünschte 5-Amino-6-methyl-2-pyridinsulfonamid hergestellt wird. Die Reduktionsreaktionen werden typischerweise in einem polaren, protischen Lösungsmittel, z. B. Methanol, und bei Temperaturen zwischen 20°C und 100°C, bevorzugt bei Umgebungstemperatur, durchgeführt.
Schema XXVII
Beispielsweise kann 6-Amino-5-methyl-3-pyridinsulfonamid hergestellt werden, wie in Schema XXVIII dargestellt. Man lässt im Handel erhältliches 2-Amino-3-methylpyridin mit einem Agens, das zum Sulfonylieren des Pyridinrings imstande ist, z. B. Oleum, umsetzen. Diese Umsetzungen werden typischerweise in einem Gemisch aus 20% SO₃/H₂SO₄ bei Temperaturen, die sich zwischen 75°C und 200°C bewegen, bevorzugt 160°C, durchgeführt, wodurch 6-Amino-5-methyl-3-pyridinsulfonsäure hergestellt wird. Man lässt dann die Aminogruppe mit einer Kombination von Mitteln, die zum Herbeiführen eines Schutzes der Aminogruppe vor Oxidation in nachfolgenden Schritten imstande sind, umsetzen. Beispielsweise ließ man 6-Amino-5-methyl-3-pyridinsulfonsäure mit einem Gemisch aus N,N-Dimethylformamid (DMF) und Thionylchlorid, so genannten Vilsmeier-Reagenzien, umsetzen, wodurch das gewünschte Zwischenprodukt 6-[(Dimethylamino)methyliden]amino-5-methyl-3-pyridinsulfonsäure hergestellt wurde. Man lässt diese Verbindung anschließend mit einer Kombination von Mitteln, die zum Umwandeln der Sulfonsäure in das entsprechende Sulfonylchlorid imstande sind, umsetzen, gefolgt von Umsetzung mit einem Agens, das zum Umwandeln des Sulfonylchlorids in das entsprechende Sulfonamidderivat imstande ist. Beispielsweise lässt man die gewünschte 6-[(Dimethylamino)methylyden]amino-5-methyl-3-pyridinsulfonsäure mit Phosphoroxidchlorid umsetzen, wodurch das Zwischenprodukt Sulfonylchlorid hergestellt wird, gefolgt von Umsetzung mit Ammoniumhydroxid, wodurch das gewünschte 6-Amino-5-methyl-3-pyridinsulfonamid erhalten wird.
Schema XXVIII
Beispielsweise kann 4-Amino-N,3-dimethylbenzolsulfonamid aus im Handel erhältlicher 4-Amino-3-methylbenzolsulfonsäure durch Umsetzung mit einer Kombination von Mitteln, die zum Herbeiführen eines Schutzes der Aminogruppe vor Oxidation in späteren chemischen Schritten imstande sind, hergestellt werden. Beispielsweise ließ man 4-Amino-3-methylbenzolsulfonsäure mit N,N-Dimethylformamid (DMF) und Oxalylchlorid in Dichlormethan umsetzen, um den gleichzeitigen Schutz der Aminogruppe wie des entsprechenden Amidins sowie die Umwandlung der Sulfonsäure in das gewünschte Sulfonylchlorid zu bewirken. Man ließ dann das Sulfonylchlorid mit einem Amin, z. B. Methylamin, umsetzen, wodurch 4-[(Dimethylamino)methylyden]amino-N,3-dimethylbenzolsulfonamid hergestellt wurde. Die Amidin-Schutzgruppe wurde anschließend unter Verwendung von Hydrazinhydrochlorid abgespalten.
Schema XXIX
Beispielsweise kann 4-Amino-N,N,3-trimethylbenzolsulfonamid mit auf dem Fachgebiet bekannten Verfahren oder wie in Schema XXX dargestellt hergestellt werden. Man lässt im Handel erhältliche 4-Amino-3-methylbenzolsulfonsäure mit einem Agens, das zum Herbeiführen eines Schutzes der Aminogruppe vor Oxidation in weiteren Syntheseschritten imstande ist, umsetzen. Beispielsweise ließ man 4-Amino-3-methylbenzolsulfonsäure mit Benzylbromid in Gegenwart einer Base, z. B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, umsetzen, wodurch Natrium-4-(dibenzylamino)-3-methylbenzolsulfonat erhalten wurde. Diese Umsetzungen werden typischerweise in einem polaren, aprotischen Lösungsmittel, z. B. N,N-Dimethylformamid, bei einer Temperatur, die sich zwischen 25°C und 125°C, vorzugsweise 75–100°C, bewegt, durchgeführt. Man lässt das Natriumsalz anschließend mit einem Agens, das zum Umwandeln des Salzes in das entsprechende Sulfonylchlorid imstande ist, umsetzen. Beispielsweise ließ man Natrium-4-(dibenzylamino)-3-methylbenzolsulfonat mit Thionylchlorid in N,N-Dimethylformamid (DMF) umsetzen, wodurch das gewünschte 4-(Dibenzylamino)-3-methylbenzolsulfonylchlorid erhalten wurde. Diese Umsetzungen werden typischerweise in einem aprotischen Lösungsmittel, z. B. Dichlormethan, und bei Temperaturen zwischen 0°C und 75°C, bevorzugt 0°C, durchgeführt. Man lässt dann das Sulfonylchlorid mit einem geeigneten Amin umsetzen, wodurch das gewünschte Sulfonamid erhalten wird. Beispielsweise ließ man 4-(Dibenzylamino)-3-methylbenzolsulfonylchlorid mit Dimethylamin umsetzen, wodurch das gewünschte 4-(Dibenzylamino)-N,N,3-trimethylbenzolsulfonamid erhalten wurde. Man lässt anschließend das Sulfonamid mit einer Kombination von Mitteln, die zum Herbeiführen des Schutzes des Amins imstande sind, umsetzen, wodurch das gewünschte Anilinderivat hergestellt wird. Beispielsweise ließ man gewünschtes 4-(Dibenzylamino)-N,N,3-trimethylbenzolsulfonamid mit Wasserstoffgas in Gegenwart eines Katalysators Palladium auf Kohle umsetzen, wodurch die Abspaltung der Benzyl-Schutzgruppen bewirkt und das gewünschte 4-Amino-N,N,3-trimethylbenzolsulfonamid erhalten wurde.
Schema XXX
Beispielsweise lässt man 3-Methoxythiophen (Schema XXXI) mit Benzoylchlorid in unter Rückfluss erhitztem Dichlormethan in Gegenwart von Aluminiumchlorid umsetzen, wodurch Keton 664 erhalten wird.
Schema XXXI
Beispielsweise wurde 3,5-Dibromtoluol in Diethylether mit n-Butyllithium bei –78°C versetzt. Nach 15 Minuten bei –78°C lässt man die so erhaltende Lithiumverbindung mit 675 umsetzen, wodurch das gewünschte Keton 676 erhalten wird (siehe Schema XXXIII).
Schema XXXIII
Siehe auch Synthesis 1984, 847 für die Synthese von 673, welche nach Hydrolyse die Verbindung 674 lieferte (Schema XXXIV).
Schema XXXIV
Die erfindungsgemäßen Verbindungen, hierin auch als Wirkstoff bezeichnet, können zur Therapie über jeden geeigneten Weg, umfassend oral, rektal, nasal, topisch (umfassend transdermal, bukkal und sublingual), vaginal und parenteral (umfassend subkutan, intramuskulär, intravenös, intradermal und intravitreal) verabreicht werden. Es ist selbstverständlich, dass der bevorzugte Weg mit dem Zustand und Alter des Empfängers, der Art der Infektion und dem ausgewählten Wirkstoff variieren wird.
Im Allgemeinen wird eine geeignete Dosis für jeden der vorstehend erwähnten Zustände im Bereich von 0,01 bis 250 mg pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers (z. B. eines Menschen) pro Tag, bevorzugt im Bereich von 0,1 bis 100 mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag und am meisten bevorzugt im Bereich von 0,5 bis 30 mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag und insbesondere im Bereich von 1,0 bis 20 mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag, liegen. Wenn nicht anders angegeben, werden alle Wirkstoffgewichte als die Stammverbindung der Formel (I) berechnet; für Salze oder Ester davon würden die Gewicht proportional erhöht werden. Die gewünschte Dosis kann als eine, zwei, drei, vier, fünf, sechs oder mehr Teildosen in geeigneten Abständen über den ganzen Tag dargereicht werden. In einigen Fällen kann die gewünschte Dosis an abwechselnden Tagen gegeben werden. Diese Teildosen können in Einzeldosisformen, die beispielsweise 10 bis 1000 mg oder 50 bis 500 mg, bevorzugt 20 bis 500 mg und am meisten bevorzugt 100 bis 400 mg des Wirkstoffs pro Einzeldosisform enthalten, verabreicht werden.
Obgleich es möglich ist, dass der Wirkstoff allein verabreicht wird, ist es bevorzugt, ihn als ein Arzneimittel darzureichen. Die erfindungsgemäßen Formulierungen umfassen mindestens einen Wirkstoff, wie vorstehend definiert, zusammen mit einem oder mehreren verträglichen Trägern davon und gegebenenfalls anderen therapeutischen Mitteln. Jeder Träger muss „verträglich" in dem Sinne sein, dass er mit den anderen Bestandteilen der Formulierung verträglich und nicht schädlich für den Patienten ist.
Formulierungen schließen jene für die orale, rektale, nasale, topische (umfassend transdermale, bukkale und sublinguale), vaginale oder parenterale (umfassend subkutane, intramuskuläre, intravenöse, intradermale und intravitreale) Verabreichung geeigneten ein. Die Formulierungen können in Einzeldosisform einfach dargereicht werden und können mit allen auf dem Fachgebiet der Pharmazie bekannten Verfahren hergestellt werden. Derartige Verfahren verkörpern ein weiteres Merkmal der vorliegenden Erfindung und schließen den Schritt des Zusammenbringens der Wirkstoffe mit dem Träger, welcher ein oder mehrere Zusatzbestandteile bildet, ein. Im Allgemeinen werden die Formulierungen durch gleichmäßiges und inniges Zusammenbringen der Wirkstoffe mit flüssigen Trägern oder feinverteilten festen Trägern oder beiden und, gegebenenfalls, anschließendes Formen des Produkts hergestellt.
Die vorliegende Erfindung schließt außerdem ein Arzneimittel wie vorstehend definiert ein, wobei eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch verträgliches Derivat davon und mindestens ein weiteres therapeutisches Mittel getrennt voneinander als ein Satz von Teilen dargereicht werden.
Für die transdermale Verabreichung geeignete Mittel können als einzelne Pflaster, die angepasst sind, in engem Kontakt mit der Epidermis des Empfängers über einen verlängerten Zeitraum zu bleiben, dargereicht werden. Derartige Pflaster enthalten entsprechend den Wirkstoff 1) in einer gegebenenfalls gepufferten, wässrigen Lösung oder 2) gelöst und/oder dispergiert in einem Klebstoff oder 3) dispergiert in einem Polymer. Eine geeignete Konzentration der wirksamen Verbindung ist etwa 1% bis 25%, bevorzugt etwa 3% bis 15%. Als eine spezielle Möglichkeit kann die wirksame Verbindung durch Elektrotransport oder Iontophorese aus dem Pflaster abgegeben werden, wie allgemein beschrieben in Pharmaceutical Research 1986, 3 (6), 318.
Zur oralen Verabreichung geeignete erfindungsgemäße Formulierungen können als diskrete Einheiten, wie Kapseln, Cachets oder Tabletten, die jeweils eine vorgegebene Menge der Wirkstoffe enthalten; als Pulver oder Granulatkörner; als Lösung oder Suspension in einer wässrigen oder nichtwässrigen Flüssigkeit; als flüssige Öl-in-Wasser-Emulsion oder flüssige Wasser-in-Öl-Emulsion dargereicht werden. Der Wirkstoff kann auch als Bolus, Electuarium oder Paste dargereicht werden.
Eine Tablette kann durch Pressen oder Formen, gegebenenfalls mit einem oder mehreren Zusatzbestandteilen, hergestellt werden. Gepresste Tabletten können durch Pressen der Wirkstoffe in einer rieselfähigen Form, wie Pulver oder Granulatkörner, gegebenenfalls vermischt mit einem Bindemittel (z. B. Povidon, Gelatine, Hydroxypropylmethylcellulose), Gleitmittel, inerten Verdünnungsmittel, Konservierungsmittel, Sprengmittel (z. B. Natriumstärkeglycolat, vernetztes Povidon, vernetzte Natriumcarboxymethylcellulose), oberflächenaktiven Mittel oder Dispergiermittel, in einer geeigneten Maschine hergestellt werden. Geformte Tabletten können durch Formen eines Gemischs aus der pulverisierten Verbindung, angefeuchtet mit einem inerten flüssigen Verdünnungsmittel, in einer geeigneten Maschine hergestellt werden. Die Tabletten können gegebenenfalls überzogen oder mit einer Kerbe versehen werden und können formuliert werden, um eine langsame oder kontrollierte Freisetzung der Wirkstoffe darin unter Verwendung von beispielsweise Hydroxypropylmethylcellulose in variierenden Anteilen zur Bereitstellung des gewünschten Freisetzungsprofils zu gewährleisten. Tabletten können gegebenenfalls mit einem magensaftresistenten Überzug versehen werden, um für die Freisetzung in Teilen des Darms außer im Magen zu sorgen.
Zur topischen Verabreichung in den Mund geeignete Formulierungen schließen Pastillen, umfassend die Wirkstoffe in einer aromatisierten Grundlage, gewöhnlich Saccharose und Gummi arabicum oder Tragant; Pastillen, umfassend den Wirkstoff in einer inerten Grundlage, wie Gelatine und Glycerin oder Saccharose und Gummi arabicum; und Mundwässer, umfassend den Wirkstoff in einem geeigneten flüssigen Träger, ein.
Formulierungen zur rektalen Verabreichung können als Zäpfchen mit einer geeigneten Grundlage, umfassend beispielsweise Kakaobutter oder ein Salicylat, dargereicht werden.
Zur vaginalen Verabreichung geeignete Formulierungen können als Vaginalzäpfchen, Tampons, Cremes, Gele, Pasten, Schäume oder Sprayformulierungen, die neben dem Wirkstoff derartige Träger enthalten, wie sie auf dem Fachgebiet als geeignet bekannt sind, dargereicht, werden.
Zur rektalen Verabreichung geeignete Arzneimittelformulierungen, wobei der Träger ein Feststoff ist, werden am meisten bevorzugt als Einzeldosiszäpfchen dargereicht. Geeignete Träger schließen Kakaobutter und andere auf dem Fachgebiet im Allgemeinen verwendete Stoffe ein. Die Zäpfchen können durch Beimischung der wirksamen Kombination zu dem/den erweichten oder geschmolzenen Träger(n), gefolgt von Abkühlen und Ausformen in Formen, einfach geformt werden.
Zur parenteralen Verabreichung geeignete Formulierungen schließen wässrige und nichtwässrige, isotonische, sterile Injektionslösungen, die Anitoxidanzien, Puffer, Bakteriostatika und gelöste Stoffe, welche die Formulierung mit dem Blut des vorgesehenen Empfängers isotonisieren, enthalten können; und wässrige und nichtwässrige, sterile Suspensionen, welche Suspensionsmittel und Verdickungsmittel enthalten können; und Liposomen oder andere Mikropartikelsysteme, welche die Verbindung auf die Blutkomponenten oder ein oder mehrere Organe zielen sollen; ein. Die Formulierungen können in verschlossenen Einzeldosis- oder Multidosisbehältern, z. B. Ampullen und Fläschchen, dargereicht werden und können in einem gefriergetrockneten (lyophilisierten) Zustand aufbewahrt werden, was nur den Zusatz des sterilen flüssigen Trägers, z. B. Wasser zur Injektion, unmittelbar vor der Verwendung erfordert. Unvorbereitete Injektionslösungen und -suspensionen können aus sterilen Pulvern, Granulatkörnern und Tabletten der vorstehend beschriebenen Art hergestellt werden.
Bevorzugte Einheitsdosierungsformulierungen sind jene, die eine Tagesdosis oder eine Tagessubdosis der Wirkstoffe, wie vorstehend aufgeführt, oder einer geeigneten Fraktion davon enthalten.
Es sollte selbstverständlich sein, dass die erfindungsgemäßen Formulierungen außer den vorstehend speziell erwähnten Bestandteilen andere auf dem Fachgebiet herkömmliche Mittel in Bezug auf den in Frage kommenden Formulierungstyp enthalten können, beispielsweise können jene zur oralen Verabreichung geeigneten derartige weitere Mittel, wie Süßungsmittel, Verdickungsmittel und Aromastoffe enthalten.
Die folgenden Beispiele sind nur zur Erläuterung bestimmt und sollen den Umfang der Erfindung in keiner Weise beschränken. „Wirkstoff" bedeutet eine erfindungsgemäße Verbindung oder Vielfache davon oder ein physiologisch funktionelles Derivat von jeder der vorstehend erwähnten Verbindungen.
Generelle Verfahren:
Allgemeines Verfahren II: Alkylierung von Phenolen mit Ethylbromacetat
In einen Rundkolben, ausgestattet mit einem Rührstab, Rückflusskühler und Stickstoff bei Bedarf, wurden das entsprechende Phenol, Kaliumcarbonat (2–10 mmol/mmol Phenol), Ethylbromacetat (1–1,5 mmol/mmol Phenol) und Aceton (1–10 ml/mmol Phenol) gegeben. Das so erhaltene Gemisch wurde 1–20 h unter Rückfluss erhitzt, nach dieser Zeit ließ man es auf RT abkühlen, und es wurde in einen Scheidetrichter, der Ethylacetat und Wasser enthielt, gegossen. Die organische Schicht wurde gesammelt und mit Wasser, Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck entfernt, wobei ein Öl zurückblieb. Siehe spezielle Beispiele für Details in Bezug auf zusätzliche Reinigung.
Allgemeines Verfahren III: Verseifung von Ethylestern zu den Carbonsäuren
Ein Rundkolben wurde mit einem Rührstab, Stickstoff bei Bedarf ausgerüstet und wurde mit Stickstoff gespült. Zu dem Kolben wurden Tetrahydrofuran (THF, 1–5 ml/mmol Ester), Ethylalkohol (EtOH, 1–5 ml/mmol Ester), Wasser (1–5 ml/mmol Ester) und Lithiumhydroxid-Monohydrat (1–5 mmol/mmol Ester), hinzugegeben. Die so erhaltene Suspension wurde kräftig gerührt und der Ester wurde in einer Portion zugegeben. Man ließ das Gemisch 1–20 h bei RT rühren, nach dieser Zeit wurde der pH-Wert durch das langsame Zusetzen von wässriger 1 N Salzsäure auf ungefähr pH 5 eingestellt. Das Gemisch wurde anschließend in einen Scheidetrichter, der Ethylacetat und Wasser enthielt, gegossen. Die organische Schicht wurde gesammelt und wurde mit Wasser, Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck entfernt, wobei ein weißer Feststoff zurückblieb. Siehe spezielle Beispiele, um festzustellen, ob weitere Reinigung des Produkts benötigt wurde.
Allgemeines Verfahren V: Synthese von Säurechloriden aus Carbonsäuren unter Verwendung von Oxalylchlorid
In einen Rundkolben wurden die entsprechende Carbonsäure, Methylenchlorid (CH₂Cl₂, 1–10 ml/mmol Säure) und N,N-Dimethylformamid (1–10 Tropfen) gegeben. Das Gemisch wurde auf 0°C abgekühlt und Oxalylchlorid (1–2 mmol/mmol Säure) wurde tropfenweise zugesetzt, nach dieser Zeit ließ man das Gemisch auf RT erwärmen und 1–24 h rühren. Die Lösungsmittel wurden anschließend unter vermindertem Druck entfernt und der verbleibende Rückstand wurde im Vakuum getrocknet. In den meisten Fällen wurden die Säurechloride direkt in nachfolgenden Umsetzungen ohne weitere Reinigung verwendet.
Allgemeines Verfahren VI: Kupplung von Säurechloriden an aromatische Amine unter Verwendung von Natriumhydrogencarbonat
In einen Rundkolben wurden das entsprechende aromatische Amin, Aceton (1–10 ml/mmol Amin), Natriumhydrogencarbonat (2–10 mmol/mmol Amin) und Wasser (0,25–10 ml) gegeben. Das Säurechlorid wurde als Lösung in Aceton (1–10 ml/mmol Säurechlorid) tropfenweise zugesetzt und man ließ das Reaktionsgemisch 1–24 h bei RT rühren. Wenn als abgeschlossen eingeschätzt, wurde das Gemisch in einen Scheidetrichter, der Ethylacetat und Wasser enthielt, gegossen. Die organische Schicht wurde gesammelt und wurde mit Wasser, Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck entfernt. Siehe spezielle Beispiele für Details in Bezug auf die weitere Reinigung der Produkte.
Allgemeines Verfahren VII: Synthese von Weinreb-Amiden aus Säurechloriden unter Verwendung von N,O-Dimethylhydroxylamin-Hydrochlorid
In einen Rundkolben, ausgestattet mit einem Rührstab und Stickstoff bei Bedarf, wurden N,O-Dimethylhydroxylamin (1–2 mmol/mmol Säurechlorid) und Chloroform (CHCl₃, 1–10 ml/mmol Säurechlorid) gegeben. Das Gemisch wurde auf 0°C abgekühlt und Triethylamin (Et₃N, 1–5 mmol/mmol Säurechlorid) wurde in einer Portion zugesetzt. Das Säurechlorid wurde hinzugefügt und man ließ das Gemisch 0,5–5 h bei 0°C rühren, nach dieser Zeit wurde es in einen Scheidetrichter, der Chloroform und Wasser enthielt, gegossen. Die Organika wurden gesammelt, mit Wasser und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck entfernt. Siehe spezielle Beispiele, um festzustellen, ob weitere Reinigung des Produkts benötigt wurde.
Allgemeines Verfahren IX: Entfernung der Schutzgruppe von Anisolderivaten unter Verwendung von Bortribromid
Zu einem Rundkolben, ausgestattet mit einem Rührstab, Stickstoff bei Bedarf und einem Zugabetrichter, wurden das entsprechende Anisolderivat und Methylenchlorid (CH₂Cl₂, 1–15 ml/mmol Anisol) hinzugegeben. Das Gemisch wurde auf –78°C abgekühlt und Bortribromid wurde bei –78°C tropfenweise zugesetzt. Man ließ das so erhaltene Gemisch 30–120 min bei –78°C rühren, nach dieser Zeit ließ man es auf RT erwärmen und weitere 15–120 min rühren. Wenn als abgeschlossen eingeschätzt, wurde das Reaktionsgemisch über Eis gegossen und mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die Organika wurden gesammelt, mit Wasser gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und die Lösungsmittel wurden entfernt. Siehe spezielle Beispiele, um festzustellen, ob weitere Reinigung benötigt wurde.
Referenzbeispiel 24
Schritt A:
In einen Rundkolben, ausgestattet mit einem Rührstab und Stickstoff bei Bedarf, wurden N,O-Dimethylhydroxylamin-Hydrochlorid (2,80 g; 28,7 mmol), Et₃N (9,0 ml; 64,57 mmol) und CHCl₃ (50 ml) gegeben. Die Lösung wurde auf 0°C abgekühlt und 3-Trifluormethyl-5-fluorbenzoylchlorid (5,0 g; 22,07 mmol) wurde über mehrere Minuten tropfenweise zugesetzt. Man ließ die so erhaltene Lösung 30 min bei 0°C rühren, nach dieser Zeit ließ man sie auf RT erwärmen und weitere 30 min rühren. Das Gemisch wurde anschließend in einen Scheidetrichter, der Ethylacetat und Wasser enthielt, gegossen. Die organische Schicht wurde gesammelt und wurde mit Wasser, Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck entfernt, wodurch 68 als klares Öl erhalten wurde, welches ohne weitere Reinigung verwendet wurde. ¹H-NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 7,83 (s, 1H), 7,65 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,42 (s, 3H).
Schritt B:
In einen Rundkolben, ausgestattet mit einem Rührstab und Stickstoff bei Bedarf, wurden 2-Brom-4-chloranisol (4,05 g; 18,29 mmol) und Et₂O (75 ml) gegeben. Die Lösung wurde auf –78°C abgekühlt und n-Butyllithium (13 ml einer 1,6 M Lösung in Hexan; 20,8 mmol) wurde tropfenweise zugesetzt. Man ließ das so erhaltene Gemisch 15 min bei –78°C rühren, nach dieser Zeit wurde Amid 68 (5,04 g; 20,07 mmol) tropfenweise zugegeben. Man ließ das Gemisch 30 min bei –78°C rühren, nach dieser Zeit ließ man es auf RT erwärmen und weitere 2 h rühren. Das Gemisch wurde dann in einen Scheidetrichter, der Ethylacetat und Wasser enthielt, gegossen. Die organische Schicht wurde gesammelt und wurde mit Wasser, Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck entfernt, wobei 69 als gelber Feststoff (6,14 g; 92%) erhalten wurde, welcher in nachfolgenden Umsetzungen ohne weitere Reinigung verwendet wurde. ¹H-NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 7,84 (s, 1H), 7,68 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,58–7,51 (m, 2H), 7,44 (d, J = 3 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H).
Schritt C:
In einen Rundkolben, ausgestattet mit einem Rührstab und Stickstoff bei Bedarf, wurden 69 (6,14 g; 18,46 mmol) und CH₂Cl₂ (100 ml) gegeben. Die Lösung wurde auf –78°C abgekühlt und Bortribromid (50 ml einer 1,0 M Lösung in CH₂Cl₂, 50 mmol) würde über mehrere Minuten tropfenweise zugesetzt. Man ließ das so erhaltene dunkle Gemisch 30 min bei –78°C rühren, nach dieser Zeit ließ man es auf RT erwärmen und weitere 1 h rühren. Das Gemisch wurde vorsichtig über Eis gegossen und das Zweiphasengemisch wurde 30 min gerührt. Es wurde anschließend in einen Scheidetrichter, der CH₂Cl₂ und Wasser enthielt, gegossen. Die organische Schicht wurde gesammelt, mit Wasser, Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck entfernt, wobei 70 als gelber Feststoff (5,68 g; 96%) erhalten wurde, welcher ohne weitere Reinigung verwendet wurde. ¹H-NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 11,61 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,65–7,54 (m, 3H), 7,47 (d, J = 3 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 9 Hz, 1H).
Schritt D:
Phenol 70 (5,68 g; 17,83 mmol), Ethylbromacetat (2 ml; 18,03 mmol), K₂CO₃ (9,61 g; 69,53 mmol) und Aceton (35 ml) wurden gemäß dem allgemeinen Verfahren II verwendet, wodurch der Ester als gelbes, viskoses Öl erhalten wurde, welches ohne weitere Reinigung verwendet wurde. Der Ester (6,83 g; 16,88 mmol), Lithiumhydroxid (1,42 g; 33,84 mmol), Wasser (20 ml), THF (50 ml) und EtOH (20 ml) wurden gemäß dem allgemeinen Verfahren III verwendet. Das Produkt wurde mit mehreren Portionen Ether gewaschen, wodurch 71 als weißer Feststoff erhalten wurde, der ohne weitere Reinigung verwendet wurde.
Beispiel 196
Carbonsäure 71 (0,091 g; 0,24 mmol), Methylenchlorid (3 ml), DMF (4 Tropfen), Oxalylchlorid (0,057 ml; 0,65 mmol) wurden wie im allgemeinen Verfahren V verwendet und zu einer Lösung von 6-Amino-1,1-dioxobenzo(b)thiophen (Maybridge; 0,044 g; 0,24 mmol), Aceton (10 ml), Natriumhydrogencarbonat (0,184 g; 2,2 mmol) und Wasser (1 ml), wie im allgemeinen Verfahren VI verwendet, hinzugegeben. Das Produkt wurde durch Filtrieren durch ein Silikakissen, eluiert mit Methylenchlorid, gereinigt. Die Organika wurden mit gesättigtem Natriumhydrogencarbonat gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum eingeengt. Das Produkt wurde mit Flash-Chromatographie unter Verwendung von Methylenchlorid:Methanol 9:1 als Elutionsmittel weiter gereinigt, wodurch 461 als gelber Feststoff (0,013 g; 10%) erhalten wurde. ¹H-NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 4,75 (s, 2H), 7,2 (d, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,5 (d, 1H), 7,54–7,58 (m, 2H), 7,59–7,64 (m, 2H), 7,85 (d, 2H), 7,9 (d, 1H), 8 (s, 1H), 10,4 (s, 1H); MS (ES^–) m/z 538 (M – H)^–.
In einen Rundkolben wurden 2-Aminotoluol-5-sulfonsäure (50,0 g; 267 mmol) und Pyridin (300 ml) gegeben. Essigsäureanhydrid (38 ml; 403 mmol) wurde tropfenweise aus einem Zugabetrichter zugesetzt und man ließ das so erhaltene Gemisch 2 h bei RT rühren. Die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck entfernt, wobei ein brauner Feststoff zurückblieb. Mehrere Portionen Ethylalkohol wurden zu dem Feststoff hinzugefügt und danach unter vermindertem Druck entfernt, wodurch ein brauner Feststoff erhalten wurde, welcher filtriert und mit mehreren zusätzlichen Portionen Ethylakohol gewaschen und unter Vakuum getrocknet wurde (67,03 g; 81%). ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ 2,08 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 7,39 (s, 2H), 7,45 (s, 1H), 8,02 (t, J = 6 Hz, 2H), 8,53 (t, J = 6 Hz, 1H), 8,92 (t, J = 6 Hz, 2H), 9,31 (s, 1H).
Verbindung 462 (67,03 g; 217 mmol) wurde zu einem Rundkolben, der 1 N NaOH (225 ml) enthielt, gegeben und man ließ das so erhaltene Gemisch 3 h bei RT rühren. Das Gemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt, wobei ein brauner Feststoff erhalten wurde. Mehrere Portionen Ethylalkohol wurden zugesetzt und danach unter vermindertem Druck entfernt. Der zurückbleibende Feststoff würde filtriert, mit einer letzten Portion Ethylalkohol gewaschen und unter Vakuum getrocknet (42,34 g; 77%). ¹H-NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ 2,08 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 7,39 (s, 2H), 7,45 (s, 1H), 9,31 (s, 1H).
Sulfonsäuresalz 463 (42,34 g; 169 mmol) und DMF (300 ml) wurden zu einem Kolben, der mit einem Rührstab und Stickstoff bei Bedarf ausgestattet war, gegeben und wurde auf 0°C abgekühlt. Thionylchlorid (30 ml; 411 mmol) wurde tropfenweise aus einem Zugabetrichter mit einer Geschwindigkeit so zugesetzt, dass die Temperatur des Reaktionsgemisches 10°C nicht überschritt. Wenn das Zusetzen abgeschlossen war, ließ man das Gemisch auf RT erwärmen und über weitere 2½ h rühren, nach dieser Zeit wurde es in ein Becherglas, das zerstoßenes Eis enthielt, gegossen. Der so erhaltene Feststoff wurde durch Filtration gesammelt, mit mehreren Portionen Wasser gewaschen und unter Vakuum getrocknet (25,63 g; 61%). ¹H-NMR (DMSO, d₆, 400 MHz) δ 2,02 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 7,33 (s, 2H), 7,38 (s, 1H), 9,27 (s, 1H).
In einen Rundkolben, ausgestattet mit einem Rührstab und Stickstoff bei Bedarf, wurden Natriumacetat (19,82 g; 241,6 mmol) und Ethylalkohol (200 ml) gegeben und das Gemisch wurde auf 0°C abgekühlt. Ammoniakgas wurde 5 min durch die Natriumacetatlösung hindurchperlen gelassen, anschließend wurde Sulfonylchlorid 464 (25,63 g; 103 mmol) als Feststoff und in einer Portion hinzugefügt. Man ließ das so erhaltene Gemisch 30 min bei 0°C rühren und ließ es dann auf RT erwärmen und weitere 18 h rühren. Das Gemisch wurde anschließend mit Wasser verdünnt und in einen Scheidetrichter, der Wasser und Ethylacetat enthielt, gegossen. Die organische Schicht wurde gesammelt, mit Wasser, Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck entfernt, wodurch 465 als gelber Feststoff (8,4 g; 36%) erhalten wurde, welcher ohne weitere Reinigung verwendet wurde.
Ein Rundkolben wurde mit einem Rührstab, einem Rückflusskühler und Stickstoff bei Bedarf ausgestattet. In den Kolben wurden Sulfonamid 465 (8,4 g; 36,80 mmol), Ethylalkohol (200 ml) und 2 N Salzsäure (128 ml) gegeben. Man ließ das so erhaltene Gemisch über Nacht unter Rückfluss erhitzen, nach dieser Zeit ließ man es auf RT abkühlen, und es wurde mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung neutralisiert. Es wurde dann in einen Scheidetrichter, der Wasser und Ethylacetat enthielt, gegossen, die organische Schicht wurde gesammelt, mit Wasser, Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck entfernt, wodurch ein gelbbrauner Feststoff (6,35 g; 93%) erhalten wurde, welcher ohne weitere Reinigung verwendet wurde. ¹H-NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 2,06 (s, 3H), 5,54 (s, 2H), 6,58 (d, J = 12 Hz, 1H), 6,82 (s, 2H), 7,30 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H).
Referenzbeispiel 197:
Schritt A:
Die Titelverbindung wurde gemäß dem allgemeinen Verfahren VII aus 3,5-Dimethoxybenzoylchlorid (2,00 g; 10,0 mmol) hergestellt. Die Umsetzung ergab 468 als farbloses Öl (2,143 g; 95%): ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 6,75 (d, 2H), 6,49 (t, 1H), 3,76 (s, 6H), 3,55 (s, 3H), 3,29 (s, 3H).
Schritt B:
Eine Lösung von 2-Brom-4-chlorphenol (0,830 g; 4,0 mmol) in 20 ml THF wurde in einem Trockeneis/Aceton-Bad auf –78°C abgekühlt. Es wurde n-Butyllithium (5,5 ml einer 1,6 M Lösung in Hexanen; 8,8 mmol) über 5 min tropfenweise zugesetzt, und das so erhaltene Gemisch wurde 1 h bei –78°C gerührt. Eine Lösung von 468 (0,901 g; 4.0 mmol) in 5 ml THF wurde über 4 min tropfenweise zugegeben und das so erhaltene Gemisch wurde 1,25 h bei –78°C, dann 14 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in 50 ml Wasser gegossen und mit zwei 50-ml-Portionen EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden anschließend über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 1,193 g eines braunen Öls erhalten wurden. Reinigung mit Flash-Chromatographie unter Verwendung von 10% EtOAc/Hexanen als Elutionsmittel, gefolgt von Kristallisation aus heißem Ether, ergab 469 als gelbe Kristalle (0,234 g; 20%): ¹H-NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 11,83 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,45 (dd, 1H), 7,03 (d, 1H), 6,76 (d, 2H), 6,68 (t, 1H), 3,84 (s, 6H).
Schritt C:
Eine Lösung von 466 (5,0 g; 26,85 mmol) und Pyridin (2,4 ml; 29,53 mmol) in 150 ml Chloroform wurde in einem Eisbad auf 0°C abgekühlt. Bromacetylbromid (2,6 ml; 29,53 mmol) wurde über 20 min tropfenweise zugesetzt, und man ließ das so erhaltene Gemisch über 18 h langsam auf Raumtemperatur erwärmen, während es gerührt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde anschließend in 150 ml Wasser gegossen und mit zwei 100-ml-Portionen CH₂Cl₂ extrahiert. Sowohl die organischen als auch die wässrigen Schichten wurden filtriert, wobei sich ein beiger Feststoff ergab. Dieser Feststoff wurde in 40 ml 1 N HCl suspendiert und mehrere Minuten gerührt. Der Feststoff wurde anschließend filtriert und mit CH₂Cl₂, MeOH und Hexanen gewaschen, wodurch sich 470 (5,705 g; 69%) ergab: ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 9,84 (s, 1H), 7,66–7,56 (m, 3H), 7,23 (br s, 2H), 4,09 (s, 2H), 2,24 (s, 3H).
Schritt D:
Ein Gemisch aus 469 (0,144 g; 0,49 mmol), 470 (0,162 g; 0,53 mmol) und Kaliumcarbonat (0,339 g; 2,45 mmol) in 5 ml Aceton wurde 6 h unter Rückfluss erwärmt, dann über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch trocknete über Nacht, so wurden weitere 5 ml Aceton zugegeben, und das so erhaltene Gemisch wurde 8 h unter Rückfluss erhitzt, anschließend 22 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in 30 ml Wasser gegossen und mit zwei 30-ml-Portionen EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden filtriert, um den Feststoff abzutrennen, mit Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 0,195 g eines gelben Feststoffs erhalten wurden. Reinigung durch Suspension in heißem Ether, gefolgt von Filtration ergab 467 (0,094 g; 37%): MS (AP+) m/z 518,9 (M + H); ¹H-NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,15 (s, 1H), 7,63–7,60 (m, 3H), 7,56 (dd, 1H), 7,39 (d, 1H), 7,22 (s, 2H), 7,18 (d, 1H), 6,82 (d, 2H), 6,71 (t, 1H), 4,76 (s, 2H), 3,69 (s, 6H), 2,12 (s, 3H).
Referenzbeispiel 198
Schritt A:
Eine Lösung von 1,3,5-Tribrombenzol (9,44 g; 30 mmol) in 120 ml Ether wurde in einem Trockeneis/Aceton-Bad auf –78°C abgekühlt. Es wurde n-Butyllithium (13,2 ml einer 2,5 M Lösung in Hexanen; 33 mmol) über 10 min tropfenweise zugesetzt. Das so erhaltene Gemisch wurde weitere 10 min bei –78°C gerührt, anschließend wurde Hexachlorethan (7,15 g; 30,2 mmol) über 3 min in kleinen Portionen zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde dann 15 min bei –78°C gerührt, gefolgt von 3,2 h bei RT. Das Gemisch wurde zwischen 100 ml Wasser und 100 ml EtOAc verteilt. Die wässrige Schicht wurde abgetrennt und mit weiteren 100 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden anschließend über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 472 als blassbrauner Feststoff (7,72 g; 95%) erhalten wurde: ¹H-NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 7,57 (t, 1H), 7,47 (d, 2H).
Schritt B:
Eine Lösung von 472 (7,62 g; 28,2 mmol) in 100 ml Ether wurde in einem Trockeneis/Aceton-Bad auf –78°C abgekühlt. Es wurde n-Butyllithium (12,6 ml einer 2,5 M Lösung in Hexanen; 31,5 mmol) über 30 min tropfenweise zugesetzt. Das so erhaltene Gemisch wurde weitere 13 min bei –78°C gerührt, anschließend wurde 183 (6,57 g; 28,6 mmol) über 23 min in kleinen Portionen zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde dann 22 h gerührt, während man das Bad auf Raumtemperatur erwärmen ließ. Das Gemisch wurde in 100 ml Wasser gegossen und mit zwei 100-ml-Portionen EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden anschließend über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 9,46 g eines beigen Feststoffs erhalten wurden. Umkristallisieren aus heißem MeOH ergab 473 (6,45 g; 64%): MS (AP–) m/z 358 (M – H); ¹H-NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 7,76 (t, 1H), 7,70 (t, 1H), 7,65 (t, 1H), 7,47 (dd, 1H), 7,36 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 3,72 (s, 3H).
Schritt C:
Die Titelverbindung wurde gemäß dem allgemeinen Verfahren IX aus 473 (0,338 g; 0,94 mmol) hergestellt. Die Umsetzung ergab 474 (0,325 g; 100%): ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 11,54 (s, 1H), 7,72 (t, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,52 (d, 1H), 7,46 (dd, 1H), 7,41 (d, 1H), 7,02 (d, 1H).
Schritt D:
Ein Gemisch aus 474 (0,173 g; 0,50 mmol), 470 (0,154 g; 0,50 mmol) und Kaliumcarbonat (0,346 g; 2,5 mmol) in 10 ml Aceton wurde 15 h unter Rückfluss erwärmt und bei Raumtemperatur weitere 4 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde anschließend in 35 ml Wasser gegossen und mit zwei 35-ml-Portionen EtOAc extrahiert. Die wässrige Schicht wurde dann filtriert und mit weiteren 20 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden mit Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 0,230 g eines gelben Öls erhalten wurden. Reinigung mit Flash-Chromatographie unter Verwendung von 0,5–1% MeOH/CH₂Cl₂ ergab 471 (0,048 g; 17%): MS (AP+) m/z 573 (M + H); ¹H-NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,36 (s, 1H), 7,97 (t, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,68–7,47 (m, 4H), 7,45 (d, 1H), 7,21 (s, 2H), 7,20–7,18 (d, 1H), 4,77 (s, 2H), 2,13 (s, 3H).
Beispiel 199:
Schritt A:
Eine Lösung von 473 (0,299 g; 0,83 mmol), Natriumcyanid (0,086 g; 1,76 mmol), Kupfer(I)iodid (0,028 g; 0,15 mmol) und Tetrakis(triphenylphosphin)palladium (0,113 g; 0,10 mmol) in 8 ml Acetonitril wurde 40 min unter Rückfluss erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde dann mit 50 ml EtOAc verdünnt und durch Celite filtriert. Die so erhaltene Lösung wurde mit 25 ml Wasser gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 0,375 g eines orangen Gummis erhalten wurden. Reinigung mit Flash-Chromatographie unter Verwendung von 5% EtOAc/Hexan als Elutionsmittel ergab 476 (0,171 g; 56%): ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 7,93 (t, 1H), 7,82 (t, 1H), 7,76 (t, 1H), 7,47 (dd, 1H), 7,37 (d, 1H), 6,93 (d, 1H), 3,67 (s, 3H).
Schritt B:
Die Titelverbindung wurde gemäß dem allgemeinen Verfahren IX aus 476 (0,165 g; 0,54 mmol) hergestellt. Die Umsetzung ergab 477 (0,174 g; 100%): ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 11,43 (s, 1H), 7,84–7,82 (m, 2H), 7,78 (t, 1H), 7,49 (dd, 1H), 7,34 (d, 1H), 7,05 (d, 1H).
Schritt C:
Ein Gemisch aus 477 (0,157 g; 0,54 mmol), 470 (0,165 g; 0,54 mmol) und Kaliumcarbonat (0,373 g; 2,7 mmol) in 10 ml Aceton wurde 17,5 h unter Rückfluss erwärmt. Das Reaktionsgemisch wurde anschließend in 35 ml Wasser gegossen und mit zwei 35-ml-Portionen EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden mit Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 0,276 g eines gelben Öls erhalten wurden. Reinigung mit Flash-Chromatographie unter Verwendung von 0,5–1% MeOH/CH₂Cl₂ ergab 475 (0,033 g; 12%): MS (AP–) m/z 517 (M – H); ¹H-NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,42 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 8,03 (t, 1H), 7,63 (dd, 1H), 7,60–7,53 (m, 3H), 7,49 (d, 1H), 7,22 (s, 2H), 7,19 (d, 1H), 4,77 (s, 2H), 2,14 (s, 3H).
Hemmung der Virusreplikation
I. HeLa-Zell-Assay
Der HeLa-Zell-Assay wurde gemäß einer Modifikation von J. Kimpton und M. Emerman, Detection of replication-competent and pseudotyped human immunodeficiency virus with a sensitive cell live on the basis of activation of an integrated β-galactosidase gene, J. Virol. 1992, 66: 2232–2239 durchgeführt, in welchem die HIV-1-Infektion durch die Aktivierung eines durch HIV-LTR gesteuerten β-Galactosidase-Reporters, der in das Genom einer CD4⁺-HeLa-Zelllinie integriert wird, festgestellt wird. Die Quantifizierung von β-Galactosidase wird durch Messung der Aktivierung eines chemilumineszenten Substrats (Tropix) erreicht. Die benötigte Konzentration jeder Verbindung, um 50% des durch HIV-1 induzierten β-Galactosidase-Signals zu hemmen (IC₅₀), bezüglich der unbehandelten Kontrollproben, wurde für jedes isogene, rekombinante Virus ermittelt.
A. Experimentelles Verfahren
Wachstum und Aufrechterhaltung der CD4-HIV-LTR-β-Gal-HeLa-Zelllinie
HeLa-CD4-LTR-β-Gal-Zellen wurden von dem NIH AIDS Research and Reference Reagent Program erhalten. Die Zellen wurden in DMEM, das 10% fötales Rinderserum, 0,2 mg/ml Geneticin und 0,1 mg/ml Hygromycin B enthielt, propagiert. Die Zellen wurden routinemäßig durch Trypsinisierung geteilt, wenn die Konfluenz 80% erreichte (ungefähr alle 2 bis 3 Tage).
B. Konstruktion von Mutanten der reversen Transcriptase (RT) von HIV-1
DNA, welche die Reverse-Transcriptase von HIV-1 codiert, wurde aus einem M13-Phagen in einen üblichen Shuttle-Vektor, pBCSK+, als ein mit EcoRI/HindIII endendes DNA-Fragment von ca. 1,65 kbp subkloniert. Das HIV-DNA-Insert des so erhaltenen Plasmids, pRT2, wurde an beiden Strängen vor der Verwendung in Versuchen der ortsgerichteten Mutagenese vollständig sequenziert. Spezifische Substitution von Aminosäuren wurden unter Verwendung von Stratagene-Quick-Change-Reagenzien von und mutagenen Oligonukleotiden von Oligos vorgenommen. Der Mutagenese folgend, wurde die vollständige codierende Sequenz der mutanten RT durch Sequenzieren beider DNA-Stränge bestätigt.
C. Konstruktion eines isogenen Virus der HIV-1-RT-Mutante
Mutierte HIV-1-Stämme wurden mit einem modifizierten Recombinant Virus Assay (P. Kellam und B. Larder, Recombinant virus assay: a rapid, phenotypic assay for assessment of drug susceptibility of human immunodeficiency virus type 1 isolates, Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1994, 38: 23–30) isoliert. 1 × 10⁷ Jurkat-T-Zellen (aufrechterhalten in RPMI, enthaltend 10% fötales Rinderserum, alle 5 bis 6 Tage 1:5 geteilt) wurden mit mit EcoRI/HindIII verdautem mutierten RT-Plasmid und mit BstEII verdauter HIV-1_HXB2ART-DNA in Gegenwart von Transfektionsreagenz DMRIE-C (Gibco) gemäß dem vom Lieferanten empfohlenen Protokoll cotransfektiert. Jede mutierte RT codierende Sequenz wurde in das keine RT enthaltende DNA-Gerüst des HIV-1-Virus durch homologe Rekombination in vivo gekreuzt. Transfektierte Zellkulturen wurden erweitert und überwacht, bis Syncytienbildung und CPE beträchtlich waren. Das Virus wurde durch Klarschleudern der Kulturüberstände geerntet und bei –80°C als Vorrat eingefroren. Der rekombinante Virusabkömmling wurde in der RT-Region sequenziert, um den mutierten Genotyp zu bestätigen. Virusstämme wurden durch Infektion von Jurkat-Zellen weiter erweitert, geerntet und als gefrorene Aliquote aufbewahrt. Stämme wurden für den Assay in HeLa-MAGI-Zellen getitert.
D. Titern von Virusstämmen
Die HIV-1_HXB2-Mutanten wurden in das HeLa-MAGI-Assay-System getitert, um die relativen Lichteinheiten (RLU) pro ml, ein Maß der für dieses Assay-System relevanten Infektiosität, zu ermitteln. Virusstämme wurden in einer Zweifachreihe in DMEM, enthaltend 10% fötales Rinderserum und 20 μg/ml DEAE-Dextran, verdünnt und untersucht, wie in dem Abschnitt Versuchsprotokoll nachstehend beschrieben.
E. Versuchsprotokoll
Mikrotiterplatte(n) mit 96 Vertiefungen (Costar 3598) wurde(n) mit 3 × 10³ HeLa-CD4-LTR-β-gal in 100 μl DMEM, enthaltend 10% fötales Rinderserum, geimpft. Die Platten wurden über Nacht in einen befeuchteten Inkubator mit 37°C, 5% CO₂, gestellt. Am folgenden Tag wurden die Vorräte des mutierten Virus in einem Bad bei Raumtemperatur aufgetaut und in DMEM, enthaltend 10% fötales Rinderserum und 20 μg/ml DEAE-Dextran, verdünnt, um einen Eingang von 1500 bis 2000 RLU/ml zu erzielen. Alle Medien wurden mit einem 8-Kanal-Aspirator entfernt, und 35 μl (50 bis 70 RLU insgesamt) verdünnter Virus wurden zur Virusadsorption zu jeder Vertiefung gegeben. Die Platten wurden 1,5 bis 2 Stunden in einen befeuchteten Inkubator mit 37°C, 5% CO₂, gestellt.
Verbindungstitrationsplatten wurden während der Virusadsorptionsperiode mit 1,35facher Endkonzentration hergestellt. Die Verbindungen wurden automatisch in fünf Schritten von 2,7 μM (2 μM Endkonzentration) bis 1,35 pM (1 pM Endkonzentration) titriert. Dieses Programm lässt 8 zu testende Verbindungen pro Platte mit 96 Vertiefungen mit 10 Verdünnungspunkten und 2 Kontrollproben pro Verbindung (n = 1) zu. Verbindungen wurden in DMEM, enthaltend 10% fötales Rinderserum und 0,135% DMSO (0,1% Endkonzentration), titriert. 100 μl der titrierten Verbindung wurden aus jeder Vertiefung der Titrationsplatte abgetrennt und zu der Virusadsorptionsplatte gegeben. Die Platten wurden 72 Stunden in einen befeuchteten Inkubator mit 37°C, 5% CO₂, gestellt.
Der Inkubation folgend wurden die Überstände aus jeder Vertiefung wie vorstehend beschrieben abgesaugt und 100 μl phosphatgepufferte Kochsalzlösung wurden zugesetzt. Die PBS wurde dann wie vorstehend abgesaugt und 15 μl Lysispuffer (Tropix) wurden zugegeben. Die Platten wurden 10 Minuten bei Raumtemperatur gehalten, während dieser Zeit wurde das chemilumineszente Substrat (Tropix) 1:50 in Substratverdünnungspuffer (Tropix), der Raumtemperatur hatte, verdünnt. 100 μl des verdünnten Substrats wurden dann zu jeder Vertiefung hinzugefügt. Die Platten wurden bei Raumtemperatur 1 bis 1,5 Stunden inkubiert. Der Inkubation folgend wurde die Chemilumineszenz jeder Vertiefung mit einem Dynatech-Plattenlesegerät unter Verwendung der folgenden Einstellungen gemessen:

PARAMETER WERT

Lauf Zyklus

Daten alle

Verstärkung gering

Zyklen 1 s

Pause 2 s

Reihen abcdefgh

Temp. Raumtemperatur

Rühren off
Die unaufbereiteten Ausgangsdaten, RLUs, wurden mit nichtlinearer Regression analysiert, um die IC₅₀-Werte zu ermitteln (siehe nachstehenden Abschnitt Datenanalyse).
F. Datenanalyse
Relative Lichteinheiten (RLU) werden als % Kontrollprobe formuliert: (RLU bei Verbindung []/RLU keine Verbindung)·100 = % Kontrollprobe
Die Konzentration der Verbindung, die 50% des in unbehandelten Proben erzeugten Signals hemmt (IC₅₀), wird mit dem folgenden nichtlinearen Regressionsmodell, das auf dem ROBOSAGE-Softwarepaket verfügbar ist, bestimmt: Y = Vmax·(1 – (Xn/(Kn + Xn)))
Diese Gleichung beschreibt eine sigmoidale Hemmungskurve mit einer Nullgrundlinie. X ist die Inhibitorkonzentration und Y ist die Antwort, die gehemmt wird. V_max ist die begrenzende Antwort, wenn sich X Null annähert. Wenn X ohne Grenze ansteigt, tendiert Y gegen seine untere Grenze, Null. K ist der IC₅₀-Wert für die Hemmungskurve, das heißt, Y ist gleich 50% von V_max, wenn X = K.
Die Ergebnisse in Tabelle 1 werden als Bereiche repräsentativer IC₅₀-Werte wiedergegeben.
II. MT4-Zell-Assay
A. Experimentelles Verfahren
Die antivirale Wirksamkeit gegen HIV und die verbindungsinduzierte Zytotoxizität wurden parallel mit Hilfe eines Verfahrens auf Basis von Propidiumiodid in der durch humanes T-Zelllymphotropes Virus transformierten Zelllinie MT4 gemessen. Aliquote der Testverbindungen wurden in Medium (RPMI 1640, 10% fötales Kälberserum (FCS) und Gentamycin) in Platten mit 96 Vertiefungen (Costar 3598) unter Verwendung eines Cetus Pro/Pette seriell verdünnt. Die exponentiell wachsenden MT4-Zellen wurden geerntet und 10 min bei 1000 rpm in einer Jouan-Zentrifuge (Modell CR 4 12) zentrifugiert. Zellpellets wurden in frischem Medium (RPMI 1640, 20% FCS, 20% IL-2 und Gentamycin) mit einer Dichte von 5 × 10⁵ Zellen/ml resuspendiert. Zellaliquote wurden durch den Zusatz von HIV-1 (Stamm IIIB) infiziert und verdünnt, um eine virale Multiplizität der Infektion von 100 × TCID50 zu ergeben. Ein gleicher Zellaliquot wurde mit Medium verdünnt, um eine scheininfizierte Kontrollprobe zu erhalten. Man ließ die Zellinfektion 1 h bei 37°C in einem Gewebekulturinkubator mit einer befeuchteten 5% CO₂-Atmosphäre ablaufen. Nach der Inkubation von 1 h wurden die Virus-Zellsuspensionen mit frischem Medium 6fach verdünnt, und 125 μl der Zellsuspension wurden zu jeder Vertiefung der Platte, die vorverdünnte Verbindung enthaltend, hinzugefügt. Die Platten wurden anschließend 5 Tage in einen Gewebekulturinkubator mit befeuchteten 5% CO₂ gestellt. Am Ende der Inkubationsperiode wurden zu jeder Vertiefung der Inkubationsplatte 27 μl von 5%igem Nonidet-40 gegeben. Nach innigem Vermischen mit einem Costar-Multipipetter wurden 60 μl des Gemischs in Filterbodenplatten mit 96 Vertiefungen überführt. Die Platten wurden in einem automatisierten Analysengerät (Screen Machine, Idexx Laboratories) analysiert. Die verwendete Kontroll- und Standardprobe war 3'-Azido-3'-desoxythymidin über einen Konzentrationsbereich von 0,01 bis 1 μM in jedem Assay. Der erwartete Bereich der IC₅₀-Werte für 3'-Azido-3'-desoxythymidin ist 0,04 bis 0,12 μM. Der Assay nutzt einen Propidiumiodidfarbstoff zur Berechnung des DNA-Gehalts jeder Vertiefung.
B. Analyse
Die antivirale Wirkung einer Testverbindung wird als IC₅₀-Wert, d. h. die hemmende Konzentration, die eine 50%ige Abnahme der HIV-induzierten zytopathischen Wirkung hervorrufen würde, wiedergegeben. Diese Wirkung wird durch die benötigte Menge der Testverbindung, um 50% des Zellwachstums von HIV-infizierten MT4-Zellen, im Vergleich zu Kontrollproben nicht infizierter MT4-Zellen, wiederherzustellen, gemessen. IC₅₀ wurde mit RoboSage, Automated Curve Fitting Program, Version 5.00, 10. Juli 1995, berechnet.
Für jede Assay-Platte wurden die Ergebnisse (relative Fluoreszenzeinheiten, RFU) der Vertiefungen, die nicht infizierte bzw. infizierte Zellen mit keiner Verbindung enthielten, gemittelt. Für Messungen der verbindungsinduzierten Zytotoxizität wurden die Ergebnisse aus Vertiefungen, die unterschiedliche Verbindungskonzentrationen und nicht infizierte Zellen enthielten, mit dem Mittelwert von nicht infizierten Zellen ohne Behandlung mit der Verbindung verglichen. Die verbleibenden Zellen in Prozent werden mit der folgenden Formel ermittelt: Verbleibende Zellen in Prozent = (mit der Verbindung behandelte nicht infizierte Zellen, RFU/unbehandelte nicht infizierte Zellen) × 100.
Ein Prozentwert von verbleibenden Zellen von 79% oder weniger zeigt einen wesentlichen Wert der direkten verbindungsinduzierten Zytotoxizität für die Verbindung bei dieser Konzentration. Wenn dieser Zustand auftritt, werden die Ergebnisse von den mit der Verbindung behandelten infizierten Vertiefungen bei dieser Konzentration nicht in die Berechnung von IC₅₀ einbezogen.
Für Messungen der antiviralen Wirksamkeit der Verbindung werden die Ergebnisse von den Vertiefungen, die unterschiedliche Verbindungskonzentrationen und infizierte Zellen enthalten, mit dem Mittelwert von nicht infizierten und infizierten Zellen ohne Behandlung mit der Verbindung verglichen. Die Hemmung des Virus in Prozent wird mit der folgenden Formel bestimmt: Hemmung des Virus in Prozent = (1 – ((Mittelwert unbehandelter nicht infizierter Zellen – behandelte infizierte Zellen)/(Mittelwert unbehandelter nicht infizierter Zellen – Mittelwert unbehandelter infizierter Zellen))) × 100
Literaturnachweis:

1. D. R. Averett, Anti-HIV compound assessment by two novel high capacity assays, J. Virol. Methods 1989, 23: 263–276.
2. O. Schwartz et al., A rapid and simple colorimetric test for the study of anti-HIV agents, AIDS Res. and Human Retroviruses 1988, 4 (6): 441–447.
3. S. M. Daluge et al., 5-chloro-2',3'-dideoxy-3'-fluorouidine (935U83), a selective antihuman immunodeficiency virus agent with an improved metabolic and toxicological profile, Antimicro. Agents and Chemother. 1994, 38 (7): 1590–1603.
4. R. E. Dornsife et al., Anti-human immunodeficiency virus synergism by zidovudine (3'-azidothymidine) and didanosine (dideoxyinosine) contrasts with the additive inhibition of normal human marrow progenitor cells, Antimicro. Agents and Chemother. 1991, 35 (2): 322–328.

Die Ergebnisse in Tabelle 1 sind als repräsentative IC₅₀-Bereiche ausgedrückt. Tabelle 1

* A zeigt einen IC₅₀-Wert von 10 nM oder weniger an.
B zeigt einen IC₅₀-Wert zwischen 11 nM und 100 nM an.
C zeigt einen IC₅₀-Wert zwischen 101 nM und 1000 nM an.
D zeigt einen IC₅₀-Wert zwischen 1000 nM und 3000 nM an.

Claims

Verbindung ausgewählt aus N-[4-(Aminosulfonyl)-2-methylphenyl]-2-[4-chlor-2-(3-chlor-5-cyanobenzoyl)phenoxy]acetamid; und pharmazeutisch verträglichen Salzen, Estern oder Estersalzen davon.
Verbindung nach Anspruch 1 zur Verwendung in medizinischer Therapie.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer viralen Infektion.
Verwendung nach Anspruch 3, wobei die virale Infektion eine HIV-Infektion ist.
Arzneimittel, umfassend eine wirksame Menge einer Verbindung nach Anspruch 1 zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger.
Arzneimittel nach Anspruch 5 in Tabletten- oder Kapselform.
Arzneimittel nach Anspruch 5 in flüssiger Form.