DE60027648T2

DE60027648T2 - Sulfonamide enthaltende indolderivate

Info

Publication number: DE60027648T2
Application number: DE60027648T
Authority: DE
Inventors: Toru Ushiku-shi Haneda; Akihiko Tsukuba-shi Tsuruoka; Junichi Tsukuba-shi Kamata; Tadashi Tsuchiura-shi Okabe; Keiko Ushiku-shi Takahashi; Kazumasa Tsukuba-shi Nara; Shinichi Tsuchiura-shi Hamaoka; Norihiro Tsukuba-shi Ueda; Takashi Tsukuba-shi OWA; Toshiaki Tsukuba-shi Wakabayashi; Yasuhiro Tsukuba-shi Funahashi; Taro Tsukuba-shi Semba; Naoko Tsukuba-shi Hata; Yuji Tsukuba-shi Yamamoto; Yoichi Tsukuba-shi OZAWA; Naoko Tsukuba-shi Tsukahara
Original assignee: Eisai Co Ltd
Current assignee: Eisai R&D Management Co Ltd
Priority date: 1999-02-26
Filing date: 2000-02-24
Publication date: 2007-04-05
Anticipated expiration: 2020-02-25
Also published as: JP2010180229A; KR100627611B1; PT1074542E; HUP0101434A2; EP1074542A1; KR20010042434A; DK1074542T3; NZ507464A; CA2327253A1; US20020128483A1; EP1074542B1; US20020128480A1; EP1074542A4; US6469043B1; NO20005357L; WO2000050395A1; US6638964B2; CN1294579A; HUP0101434A3; CA2327253C

Description

Erfindungsgebiet
Die vorliegende Erfindung betrifft ein bestimmtes Sulfonamid, das Indolverbindungen enthält, und dessen antiangiogene Wirkung. Genauer gesagt, betrifft es ein Antitumormittel, einen Krebsmetastasen-Suppressor, ein therapeutisches Mittel für die diabetische Retinopathie, ein therapeutisches Mittel für rheumatische Arthritis und ein therapeutisches Mittel für Hämatome auf Grundlage einer antiangiogenen Wirkung.
Stand der Technik
Es ist klar geworden, dass es einen engen Zusammenhang zwischen der Proliferation von Krebs und Angiogenese gibt. Das bedeutet, dass, wenn keine Angiogenese an der Stelle des Krebses erzeugt wird, der Krebs in einem Zustand eines schlafenden Tumors verbleibt. Es ist jedoch klar geworden, dass, wenn Angiogenese erzeugt wird, Sauerstoff und Nährstoffe im Blut zum Tumor geliefert werden, wodurch die Proliferation und Metastase des Krebses gefördert werden, was zu einem klinisch malignen Stadium führt. Dementsprechend, wird erwartet, dass, wenn Angiogenese eines Krebses unterdrückt wird, die Proliferation und die Metastasen des Krebses ebenfalls unterdrückt werden können. Da die angiogenen Gefäße aus Endothelzellen und interstitiellen Zellen des Wirts bestehen, sind das Ziel des antiangiogenen Mittels nicht die Krebszellen, sondern normale Zellen des Wirts. Aufgrund der Tatsache, dass die Krebszellen nicht ein direktes Ziel sind, kann eine Wirksamkeit gegenüber einem Krebs, welcher nicht auf bekannte Antikrebsmittel anspricht, ebenfalls erwartet werden, und zusätzlich wird es vermutet, dass die Möglichkeit eines Auftretens eines toleranten Krebses gering ist, was ein großes Problem in der Krebstherapie ist. Zusätzlich ist die Angiogenese ein tumorspezifisches Problem und es ist bei erwachsenen Individuen auf die Bildung des Endometriums, etc., begleitet vom Menstruationszyklus, beschränkt. Demnach geht man davon aus, dass die Nebenwirkungen im Vergleich mit bekannten Antikrebsmitteln gering sind. Kürzlich ist experimentell in präklinischen Tests bewiesen worden, dass antiangiogene Mittel in der Lage sind, die Proliferation des Krebses zu unterdrücken und in krebstransplantierten Modellen weiter zu reduzieren, und dass ein toleranter Krebs nicht erzeugt wird, und in klinischen Tests ist eine Korrelation zwischen der Angiogenese und der Malignität vieler solider Krebse, wie bei spielsweise Brustkrebs, Prostatakrebs, Lungenkrebs und Darmkrebs, gezeigt worden.
In Krebsgeweben treten kontinuierlich Apoptose und Proliferation von Krebszellen auf, und es ist bekannt gewesen, dass in Abhängigkeit von dem Gleichgewicht dazwischen ein progressiver Krebs oder ein ruhender Tumor entsteht. Ein antiangiogenes Mittel tötet die Krebszellen nicht direkt ab, sondern schneidet die Nährstoffquellen ab, so dass dieses Gleichgewicht in Richtung der Apoptose verschoben wird, was einen schlafenden Tumor verursacht, oder eine Reduzierung des Krebses, wodurch es ein Medikament ist, von dem erwartet werden kann, dass es eine herausragende Wirkung (Verlängerung des Lebens, Hemmung des Wiederauftretens und Unterdrückung von Metastasen) durch Langzeittherapie aufweist.
In einem präklinischen Stadium gibt es antiangiogene Mittel mit zahlreichen Wirkmechanismen, aber da ihre Antitumorwirkung in einem präklinischen Stadium unzureichend ist, ist ihre Nützlichkeit im klinischen Stadium noch immer zweifelbehaftet und deswegen gab es eine starke Nachfrage nach antiangiogenen Mitteln, deren Wirkung zuverlässig ist.
Es ist ebenfalls bekannt gewesen, dass Angiogenese an der Retinopathie oder Retinitis teilhat. Wenn ein Blutgefäß in der Retina proliferiert, verschlechtert sich das Augenlicht, und wenn es voranschreitet, führt es zur Blindheit. Es gab hierfür bis jetzt keine wirksamen therapeutischen Medikamente und es sind wirksame therapeutische Medikamente gesucht worden.
WO 9301182 offenbart Antitumormittel aufgrund einer spezifischen Tyrosinkinase-inhibierenden Wirkung der Verbindungen mit einem Indolskelett, aber sie sind Indolylmethylen-2-indolinon-Verbindungen und verschieden von der vorliegenden Erfindung. Gleichermaßen offenbart WO 964016 ein Antitumormittel mit einer spezifischen Tyrosinkinase-inhibierenden Wirkung der Verbindungen mit einem Indolskelett, aber sie sind 2-Indolinon-3-methylen-Verbindungen und verschieden von der vorliegenden Erfindung. Sulfonamidverbindungen mit einer Indolstruktur werden in JP-A 7-165708 und JP-A 8-231505 offenbart. Jedoch sind die Verbindungen, die spezifisch in JP-A 7-165708 offenbart sind und zwei Substituenten haben, die keine Aryl (oder Heteroaryl)sulfonylamino-Gruppe an einem Indolring haben, begrenzt und Kombinationen solcher Substituenten gibt es nur sechs, d.h. (1) 3-Cl und 4-Cl; (2) 3-Cl und 4-OCH₃; (3) 3-Cl und 4-OH; (4) 3-Cl und 4-CH₃; (5) 3-Cl und 4-CN; und (6) 3-CN und 5-Br. Es gibt keine Kombination aus (a) 3-CN und 4-CH₃; (b) 3-Cl und 5-Br; (c) 3-Cl und 4-Br; und (d) 3-Br und 4-CH₃. Im Hinblick auf 4-Halogen-monosubstituierte Verbindungen gibt es eine Beschreibung für 4-Br-Verbindungen, aber deren Sulfonylrest ist nur eine p-Nitrophenolverbindung. Des Weiteren sind die Indolverbindungen, die in JP-A 8-231505 offenbart sind, nur 3-Halogen- oder 3-Cyano-monosubstituierte Verbindungen. In diesen offengelegten Veröffentlichungen gibt es überhaupt keine Beschreibung einer antiangiogenen Wirkung und es gibt keine Beschreibung, die dieses vorschlägt.
Offenbarung der Erfindung
Ein Ziel der vorliegenden Erfindung liegt darin, ein neues antiangiogenes Mittel bereitzustellen, und ein Antitumormittel bereitzustellen, welches eine hohe Sicherheit und eine sichere Wirkung im Vergleich mit konventionellen Antitumormitteln hat, und das in der Lage ist, über einen langen Zeitraum verabreicht zu werden.
Die vorstelligen Erfinder haben eine intensive Studie durchgeführt und herausgefunden, dass die folgenden sulfonamidhaltigen Indolverbindungen das anvisierte Ziel erreichen, und die vorliegende Erfindung erfüllt. Das heißt, dass die vorliegende Erfindung eine Verbindung betrifft, die ausgewählt wird aus 3-Cyano-N-(3-cyano-4-methyl-1H-indol-7-yl)benzolsulfonamid, 6-Amino-N-(5-brom-3-chlor-1H-indol-7-yl)-3-pyridinsulfonamid und 6-Amino-N-(3-brom-4-chlor-1H-indol-7-yl)-3-pyridinsulfonamid, oder ein pharmakologisches Salz oder Hydrat einer dieser Verbindungen.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin irgendeine der obigen Verbindungen oder ihre pharmakologisch annehmbaren Salze oder Hydrate zur Verwendung als Medikament.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiter die Verwendung der oben genannten Verbindungen oder ihrer pharmakologisch annehmbaren Salze oder Hy drate zur Herstellung eines Antitumormittels, eines therapeutischen Mittels für Pankreaskrebs, eines therapeutischen Mittels für Darmkrebs, eines therapeutischen Mittels für Magenkrebs, eines therapeutischen Mittels für Brustkrebs, eines therapeutischen Mittels für Prostatakrebs, eines therapeutischen Mittels für Lungenkrebs, eines therapeutischen Mittels für Eierstockkrebs, einem Unterdrücker für Metastasen eines Krebses und ein therapeutisches Mittel für diabetische Retinopathie oder eines therapeutischen Mittels für Hämatome.
Die oben genannten Verbindungen können ein Salz mit einer Säure oder mit einer Base bilden. Die vorliegende Erfindung schließt auch Salze der oben genannten Verbindungen ein. Beispiele für das Salz mit einer Säure sind anorganische Säuresalze, wie beispielsweise Hydrochlorid, Hydrobromid oder Sulfat, und solche mit einer organischen Säure, wie beispielsweise Es sigsäure, Milchsäure, Bernsteinsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Citronensäure, Benzoesäure, Methansulfonsäure oder p-Toluolsulfonsäure. Beispiele des Salzes mit einer Base sind anorganische Salze, wie Natriumsalz, Kaliumsalz oder Calciumsalz, und die mit einer organischen Base, wie beispielsweise Triethylamin, Arginin oder Lysin.
Es ist überflüssig zu sagen, dass alle Hydrate solch einer Verbindung und ihrer pharmakologisch annehmbaren Salze eingeschlossen sind. Obwohl die erfindungsgemäßen Verbindungen eine starke antiangiogene Wirkung haben, sind Verbindungen, die in vivo einer Metabolisierung, beispielsweise einer Oxidierung, Reduzierung, Hydrolyse und Konjugierung, unterworfen sind, ebenfalls eingeschlossen. Die vorliegende Erfindung schließt weiter die Verbindungen ein, die die erfindungsgemäßen Verbindungen als Ergebnis einer Metabolisierung, wie Oxidierung, Reduzierung und Hydrolyse, in vivo herstellen, ein.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können durch zahlreiche Verfahren hergestellt werden und deren Repräsentative sind wie folgt.
Sie kann durch die Umsetzung einer Sulfonsäure, dargestellt durch die Formel (II), hergestellt werden:
(in der Formel stellt der Ring Aa eine Cyanophenylgruppe, Aminosulfonylphenylgruppe, Aminopyridylgruppe, Aminopyrimidinylgruppe, Halogenpyridylgruppe oder Cyanothiophenylgruppe) oder ein reaktives Derivat, mit einer Verbindung, dargestellt durch die Formel (III), davon dar:
(in der Formel stellt R^1a ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine Cyanogruppe dar; und R^2a und R^3a sind gleich oder verschieden voneinander und stellen jeweils ein Wasserstoffatom, eine C₁-C₄-Alkylgruppe oder ein Halogenatom dar, vorausgesetzt, dass der Fall, in dem alle von R^1a, R^2a und R^3a Wasserstoffatome sind, oder wo beide R^2a und R^3a Wasserstoffatome sind, ausgeschlossen ist).
Beispiele der reaktiven Derivate der Sulfonsäure (II) sind allgemein und gut verwendbare reaktive Derivate, wie ein Sulfonylhalid, Sulfonylsäureanhydrid und N-Sulfonylimidazolid, und das besonders vorteilhafte Beispiel ist ein Sulfonylhalid. Obwohl es keine besondere Beschränkung für das in der Reaktion verwendete Lösungsmittel gibt, sind solche, die die materiellen Substanzen lösen und nicht mit diesen reagieren, bevorzugt. Beispielsweise Pyridin, Tetrahydrofuran, Dioxan, Benzol, Ethylether, Dichlormethan, Dimethylformamid und ein gemischtes Lösungsmittel, das aus zwei oder mehr von diesen ausgewählt ist, kann verwendet werden. Zusätzlich ist es bevorzugt, die Reaktion in Gegenwart eines geeigneten Deazidifizierungsmittels durchzuführen, wenn eine Säure in einem Reaktionsfortschritt freigesetzt wird, wie im Falle der Verwendung eines Sulfonylhalids in der Reaktion, und deswegen ist die Verwendung eines basischen Lösungsmittels wie Pyridin besonders geeignet. Wenn ein neutrales Lösungsmittel verwendet wird, kann eine basische Substanz, wie beispielsweise ein Alkalicarbonat oder ein organisches tertiäres Amin hinzugegeben werden. Natürlich ist das zu verwendende Lösungsmittel nicht auf die hier aufgelisteten begrenzt. Für gewöhnlich läuft die vorliegende Erfindung bei Raumtemperatur ab, aber falls notwendig, kann sie abgekühlt oder erwärmt werden. Die Reaktionsdauer reicht für gewöhnlich von 10 Minuten bis 20 Stunden und wird gegebenenfalls in Abhängigkeit von der Art der materiellen Bestandteile und der Reaktionstemperatur ausgewählt.
Wenn eine Aminogruppe in dem Endprodukt geschützt ist, kann eine konventionelle Entschützungsbehandlung, wie beispielsweise eine Behandlung mit einer Säure, eine Behandlung mit Alkali und eine katalytische Reduzierung durchgeführt werden, falls das notwendig ist, wodurch es möglich wird, eine Indolverbindung zu erhalten, die eine freie Aminogruppe hat.
Jetzt werden Verfahren zur Herstellung der Ausgangsverbindungen (II), der reaktiven Derivate davon und (III), die in der vorliegenden Erfindung verwendet werden, dargestellt.
Die Ausgangsverbindung (II) und die reaktiven Derivate davon schließen sowohl bekannte Verbindungen und neue Verbindungen ein. Im Falle neuer Verbindungen können sie durch Anwenden des bereits beschriebenen Syntheseverfahrens für bekannte Verbindungen oder durch deren Kombinieren hergestellt werden. Beispielsweise kann neues Sulfonylchlorid durch ein Verfahren hergestellt werden, bei dem die Synthesemethoden, die in Chem. Ber., 90, 841 (1957); J. Med. Chem., 6, 307 (1963); J. Chem. Soc. (c), 1968; 1265; Chem. Lett., 1992, 1483; J. Am. Chem. Soc., 59, 1837 (1937); J. Med. Chem., 23, 1376 (1980); J. Am. Chem. Soc., 70, 375 (1948); J. Am. Chem. Soc., 78, 2171 (1956) etc. erwähnt werden, angewandt werden.
Wenn R^1a und R^3a Wasserstoffatome sind und R^2a ein Halogenatom in der Ausgangsverbindung (III) ist, kann es durch ein bekanntes Syntheseverfahren hergestellt werden. Wenn R^2a und R^3a gleich sind oder voneinander verschieden und jedes ein Wasserstoffatom, eine C₁-C₄-Alkylgruppe oder ein Halogenatom (der Fall, dass beide Wasserstoffatome sind, ist ausgeschlossen) und R^1a eine Cyanogruppe darstellt, kann sie wie folgt hergestellt werden.
Reaktionsformeln 1
In den Formeln haben R^1a, R^2a und R^3a die gleichen Bedeutungen wie oben definiert.
Reaktionsformeln 2
In den Formeln haben R^1a, R^2a und R^3a die gleichen Bedeutungen wie oben definiert; und DPPA bedeutet Diphenylphosphorylazid.
Wenn R^1a ein Halogenatom ist, kann es in einer solchen Weise hergestellt werden, dass die Formel (a) oder Formel (g) in den oben erwähnten Reaktionsformeln (1) und (2) durch eine konventionelle Methode halogeniert wird, und die Nitrogruppe reduziert ist oder eine Schutzgruppe einer Aminogruppe eliminiert ist.
Wenn die erfindungsgemäße Verbindung als Medikament verwendet wird, wird sie entweder oral oder parenteral verabreicht. Die Dosis variiert in Abhängigkeit vom Grad des Symptoms, dem Alter, dem Geschlecht, dem Körpergewicht und der unterschiedlichen Empfindlichkeit des Patienten, dem Verabreichungsverfahren, der Verabreichungsdauer, dem Intervall der Verabreichung, der Eigenschaft des pharmazeutischen Präparats, der Art des Präparats, der Art der wirksamen Inhaltsstoffe etc. und ist nicht besonders begrenzt. Im Fall einer intravenösen Verabreichung ist es 1–2000 mg, bevorzugt 1–1500 mg und mehr bevorzugt 5–1000 mg, während es im Falle einer oralen Verabreichung für gewöhnlich 10–6000 mg, bevorzugt ungefähr 50–4000 mg und mehr bevorzugt 100–3000 mg pro Tag bei Erwachsenen, und sie täglich oder durch das Aufteilen in drei Male pro Tag verabreicht wird.
Wenn ein festes Präparat zur oralen Verabreichung hergestellt wird, werden Füllmittel und falls nötig Bindemittel, Desintegrationsförderer, Schmiermittel, Farbstoffe, Corrigentien etc. zu dem Hauptinhaltsstoff hinzugegeben, gefolgt vom Unterwerfen gegenüber einem gewöhnlichen Verfahren, um es in Tabletten, beschichtete Tabletten, Körnchen, feine Körnchen, Pulver, Kapseln etc. zu bringen.
Beispiele für die Füllstoffe sind Lactose, Maisstärke, Saccharose, Glucose, Sorbitol, kristalline Cellulose und Silikondioxid; Beispiele für das Bindemittel sind Polyvinylalkohol, Ethylcellulose, Methylcellulose, Gummi arabicum, Hydroxypropylcellulose und Hydroxypropylmethylcellulose; Beispiele für das Schmiermittel sind Magnesiumstearat, Talk und Kieselerde; Beispiele für den Farbstoff sind solche, die erlaubt sind, um sie zu Pharmazeutika zuzugegeben; und Beispiele für Geschmacksstoffe sind Kakaopulver, Menthol, Aroma, Pfefferminzöl, Borneol und Zimtpulver. Es ist natürlich kein Problem, dass solche Tabletten und Körnchen in geeigneter Weise mit einer Zuckerbeschichtung, Gelatinebeschichtung oder anderen beschichtet sind, falls es notwendig ist.
Beim Herstellen einer Injektion werden, falls es nötig ist, zum Hauptinhaltsstoff, ein pH-Einstellungsmittel, ein Puffer, ein Suspensionsmittel, ein Lösungsvermittler, ein Stabilisator, ein isotonisierendes Mittel, ein Konservierungsmittel etc. hinzugefügt, gefolgt vom Unterwerfen gegenüber einem konventionellen Verfahren, um es in Injektionen für die intravenöse, subkutane oder intramuskuläre Verabreichung zu bringen. Zu diesem Zeitpunkt kann es, falls notwendig, mit einem gewöhnlichen Verfahren in ein gefriergetrocknetes Produkt gebracht werden.
Beispiele der Suspendierungsmittel sind Methylcellulose, Polysorbat 80, Hydroxyethylcellulose, Gummi arabicum, Traganthpulver, Natriumcarboxymethylcellulose und Polyoxyethylensorbitanmonolaurat.
Beispiele für den Lösungsvermittler sind Polyoxyethylen-hydrogeniertes Castoröl, Polysorbat 80, Nicotinamid, Polyoxyethylensorbitanmonolaurat, Macrogol und Castorölfettsäureethylester.
Beispiele für dem Stabilisator sind Natriumsulfit und Natriummetasulfit. Beispiele des Konservierungsstoffes sind Methyl-para-hydroxybenzoat, Ethyl-para-hydroxybenzoat, Sorbinsäure, Phenol, Cresol und Chlorcresol.
Die Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen wird im Wege der folgenden pharmakologischen experimentellen Beispiele gezeigt.
Pharmakologisches experimentelles Beispiel 1. Antiangiogene Wirkung
Der Inhibierungsgrad der Angiogenese, welche beobachtet wurde, wenn Aortastücke einer Ratte in Collagen inkubiert wurden, wurde als antiangiogene Wirkung definiert. Das heißt, dass die Aorta, die aus einer männlichen Ratte des Sprague-Dawley-Stammes (10–12 Wochen Alter) ausgeschnitten worden war, mit Hanks-Lösung gewaschen wurde, so dass das umliegende Fettgewebe vorsichtig entfernt wurde. Die Aorta wurde eingeschnitten, um Stücke von 2 mm² herzustellen, und es wurde ihnen ermöglicht, in einer 24 Well-Platte, die die Endothelzellen enthält, senkrecht zu stehen. Dann wurden 500 μl neutralisiertes Typ I-Collagen (Cell Matrix Type I-A; hergestellt von Nitta Gelatin) über jede Vertiefung geschüttet und für ungefähr 20 Minuten auf einer Sterilbank bei Raumtemperatur stehengelassen, um das Gel zu festigen. Nach der Bestätigung, dass das Gel verfestigt war, wurden 500 μl MCDB 131-Medium (hergestellt von Chlorella Kogyo) hinzugegeben, gefolgt vom Inkubieren in einem CO₂-Inkubator (5% CO₂) bei 37°C. Am nächsten Tag wurde das Kulturmedium gegen 500 μl MCDB 131-Medium ausgetauscht, welches die Testverbindung enthielt, und die Inkubation wurde fortgesetzt. Nach drei Tagen wurde das Medium wiederum durch 500 μl MCDB 131-Medium ausgetauscht, welches die Testverbindung enthält, und im Stadium des 7. Tages nach dem Beginn der Zugabe der Testverbindung wurde die Anzahl der Kapillaren, die sich um die Aorta gebildet hatten, unter einem Mikroskop ausgezählt. Die Lösung, die die Testverbindung enthält, wurde in einem dreifachen Verdünnungssystem hergestellt, wobei 10 μg/ml die höchste Konzentration war.
Die Inhibierungsrate wurde durch die folgende Formel berechnet, und 50% inhibitorisches Oligonucleotid (IC₅₀) jeder Testverbindung wurde bestimmt. Inhibitionsrate (%) = (C – T)/C × 100

C:: Anzahl an Kapillaren, wenn keine Verbindung hinzugegeben wurde
T:: Anzahl an Kapillaren, wenn eine Verbindung hinzugegeben wurde

Tabelle 1
Pharmakologisches experimentelles Beispiel 2. Inhibitorische Wirkung auf das Wachstum von Endothelzellen
Endothelzellen, die aus der menschlichen Nabelschnurvene stammen (HUVEC; hergestellt von Sanko Junyaku), inkubiert in einem EGM-Medium (hergestellt von Sanko Junyaku), enthaltend 100 Einheiten an Penicillin und 100 μgml Streptomycin, wurden auf 0,8–1 × 10⁴ Zellen/ml eingestellt, und jeweils 100 μl wurden getrennt in eine 96 Well-Platte getan. Nach dem Inkubieren in einem CO₂-Inkubator (5% CO₂) bei 37°C über Nacht, wurden 100 μl EGM-Medium, enthaltend die Testverbindung, die dreifach verdünnt wurde, hinzugegeben, gefolgt vom Inkubieren für drei Tage. Die Zellzahlen zu diesem Zeitpunkt wurden durch das MTT-Verfahren gemessen. Das bedeutet, dass 50 μl Phosphatpuffer, enthaltend 0,33% 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (MTT) hinzugegeben wurden und die Inkubation für 3–4 Stunden fortgesetzt wurde. Dann wurden, nachdem die Überstandsflüssigkeit der Kultur entfernt worden war, 100 μl Dimethylsulfoxid (DMSO) hinzugegeben, um das Formazan zu lösen, das sich in den Zellen gebildet hat, und die Absorption bei einer Wellenlänge von 540 nm wurde unter Verwendung eines Plattenlesegeräts gemessen (hergestellt von Corona Denki).
Die Inhibierungsrate wurde durch folgende Formel berechnet, und die 50%ige inhibitorische Konzentration (IC₅₀) für jede Verbindung wurde bestimmt. Inhibierungsrate (%) = (C – T)/C × 100

C:: Absorption, wenn keine Verbindung hinzugegeben wurde
T:: Absorption, wenn eine Verbindung hinzugegeben wurde

Tabelle 2
Pharmakologisches experimentelles Beispiel 3. Inhibitorische Wirkung auf die Proliferation des Maus B16-Melanoms
Maus B16-Melanomazellen wurden in Dulbecco's-modifiziertem Eagle-Medium inkubiert (DMED; hergestellt von Nissui Seiyaku), enthaltend 10% fötales Kälberserum, 100 Einheiten/ml Penicillin und 100 μg/ml Streptomycin, und auf 2 × 10⁴ Zellen/ml eingestellt, von denen jeweils 100 μl getrennt in eine 96 Well-Platte gegeben wurden. Nachdem eine Inkubation in einem CO₂-Inkubator (5% CO₂) bei 37°C für eine Nacht durchgeführt worden war, wurden 100 μl der obigen Kultur, welche die Testverbindung enthält, in 3fachen Serien verdünnt, hinzugegeben, gefolgt vom Inkubieren über 3 Tage, und die Zellzahlen zu diesem Zeitpunkt wurden durch das MTT-Verfahren gemessen. Im Übrigen wurde eine Behandlung mit einer 0,33%igen MTT-Lösung für eine 1–2 Stunde(n) durchgeführt.
Die Inhibierungsrate wurde durch folgende Formel berechnet, und die 50%ige inhibitorische Konzentration (IC₅₀) wurde für jede Verbindung bestimmt. Inhibierungsrate (%) = (C – T)/C × 100

Tabelle 3
Es wird aus dem pharmakologischen experimentellem Beispiel 1 klar, dass die Verbindungen der vorliegenden Erfindung eine klare antiangiogene Wirkung aufweisen. Es ist aus den pharmakologischen experimentellen Beispielen 2 und 3 klar, dass die Proliferations-inhibierende Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen bei B16-Melanomzellen 5- bis 100-mal schwächer war als bei Endothelzellen, und dass sie daher spezifisch auf die Endothelzellen in Blutgefäßen wirken.
Zwischenzeitlich wurde eine Untersuchung der Antitumorwirkung in Übereinstimmung mit dem Verfahren von Koyanagi, et al. (Cancer Res., 54, 1702–1706, 1994) unter Verwendung des KP-1-Zellstammes, welcher aus einem menschlichen Pankreaskarzinom stammt, und des HCT 116-Zellstamms, der aus einem menschlichen Colonkarzinom stammt, durchgeführt. Die oben erwähnten menschlichen Krebszellen (5 × 10⁶ Zellen) wurden subkutan in Nacktmäuse mit einem Alter von 6 bis 7 Wochen transplantiert, und von diesem Zeitpunkt an, bis sie eine Größe von ungefähr 100 mm³ hatten, wurde die Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindung gestartet. In den Experimenten wurden zehn Mäuse in einer Gruppe verwendet, denen kein Medikament verabreicht wurde, während in einer Gruppe, der Medikamente verabreicht wurden, fünf Mäuse für jede Dosis verwendet wurden. Die Dosis von 50 mg/kg, 100 mg/kg der 200 mg/kg wurde kontinuierlich per so zweimal täglich verabreicht, und die Größe des Tumors am 22. Tag nach Beginn der Verabreichung wurde mit der in der Gruppe verglichen, der kein Medikament verabreicht worden war. Das Ergebnis betrug 37%, 30% bzw. 11% bei dem KP-1-Zellstamm, der aus dem menschlichen Pankreaskarzinom stammt, und 0,2%, 0,3% bzw. 0,0% bei dem HCT-116-Zellstamm, der aus einem menschlichen Krebs des Darms stammt, mit einer Gruppe, der die Verbindung des Beispiels 1 z.B. verabreicht wurde. Das heißt, dass die Verbindung des Beispiels 1 eine signifikante Antitumorwirkung zeigte.
Aufgrund der obigen Ergebnisse kann erwartet werden, dass die erfindungsgemäße Verbindung eine herausragende Wirkung im Hinblick auf die Wirk samkeit und Sicherheit im Vergleich mit bekannten bakteriziden Antitumormitteln hat, welche direkt auf Krebszellen zielen.
Wie in den oben gemachten experimentellen Beispielen festgestellt wurde, haben die erfindungsgemäßen Verbindungen eine herausragende antiangiogene Wirkung und sind als Antitumormittel für Pankreaskrebs, Colonkarzinom, Magenkrebs, Brustkrebs, Prostatakrebs, Lungenkrebs und Eierstockkrebs und auch als therapeutische Mittel für die diabetische Retinopathie, rheumatische Arthritis und Hämatome nützlich.
Beispiele
Nachfolgend werden die Produktionsbeispiele, die die Herstellung der materiellen Bestandteile der erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen, und Beispiele, die die Verbindungen der vorliegenden Erfindung zeigen, dargestellt, obwohl es überflüssig ist, zu sagen, dass die vorliegende Erfindung nicht darauf begrenzt ist.
Produktionsbeispiel 8. 4-Methyl-1H-indol-7-carbonsäure
Zu einer Lösung (200 ml) aus 35,5 g (169 mmol) der Verbindung des Produktionsbeispiels 7 in Tetrahydrofuran wurde unter Rühren eine 1,6 M-Lösung (350 ml) Butyllithium (384 mmol) in Hexan in einer Stickstoffatmosphäre bei –78°C hinzugegeben. Nach dem Rühren über 40 Minuten unter Abkühlung in Eis wurde Kohlendioxid bei –50°C zur Reaktionslösung hinzugegeben und so wie es ist für 15 Minuten gerührt. Wasser wurde zum Reaktionsgemisch bei der gleichen Temperatur hinzugegeben, das Lösungsmittel wurde verdampft und die erhaltenen Präzipitate wurden durch Filtrieren eingesammelt und mit Wasser gewaschen. Die Präzipitate wurden in 300 ml Tetrahydrofuran gelöst, über Magnesiumsulfat getrocknet und dann bis zur Trockenheit aufkonzentriert, um 25,9 g der Titelverbindung zu erhalten.
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ (ppm); 2,51 (3H, s), 6,53 (1H, s), 6,88 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,31 (1H, s), 7,62 (1H, d, J = 7,6 Hz), 10,99 (1H, brs), 12,79 (1H, brs).
Produktionsbeispiel 12. 7-Amino-3-cyano-4-methyl-1H-indol
In eine gemischte Lösung aus 100 ml Tetrahydrofuran und 100 ml Methanol wurden 12,6 g (62,6 mmol) der Verbindung des Produktionsbeispiels 6 suspendiert und eine Hydrogenierung wurde bei 3 Atmosphären Druck und bei Umgebungstemperatur in Gegenwart von 430 mg (1,87 mmol) Platinoxid durchgeführt. Das Filtrat wurde abfiltriert, gefolgt vom Aufkonzentrieren bis zur Trockenheit, eine gemischte Lösung aus tert.-Butylmethylether und Hexan wurde zu dem Rest hinzugegeben und die Kristalle wurden durch Filtrieren eingesammelt, um 10,7 g der Titelverbindung zu erhalten. In 400 ml Dichlormethan wurden 50,5 g (186 mmol) der Verbindung des Produktionsbeispiels 11 gelöst und 210 ml (2,76 mmol) Trifluoressigsäure wurden hier bei 0°C in einer Stickstoffatmosphäre hinzugegeben, gefolgt vom Rühren bei Raumtemperatur für 40 Minuten. Zu der Reaktionslösung wurde eine 5 N wässrige Lösung von Natriumhydroxid bei –20°C hinzugegeben, um den pH auf 7 einzustellen. Das Lösungsmittel wurde entfernt und der Rest wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Wasser und Lauge nacheinander gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit aufkonzentriert. Eine gemischte Lösung aus Diethylether und Hexan wurde zu dem erhaltenen Rest hinzugegeben und die Kristalle wurden durch Filtrieren eingesammelt, um 24,5 g der Titelverbindung zu ergeben.
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ (ppm); 2,47 (3H, s), 5,07 (2H, s), 6,34 (1H, d, J = 7,6 Hz), 6,64 (1H, d, J = 7,6 Hz), 8,10 (1H, s), 11,70 (1H, brs).
Produktionsbeispiel 13. 3-Cyanobenzolsulfonylchlorid
Einer gemischten Lösung aus 200 l Wasser und 250 ml konzentrierter Salzsäure wurden 25,0 g (212 mmol) 3-Cyanoanilin hinzugegeben, gefolgt von Umrühren. Eine wässrige Lösung (80 ml) 15,5 g (223 mmol) Natriumnitrit wurde tröpfchenweise bei –10°C) hinzugegeben. Die Reaktionslösung wurde zu mit Schwefeloxid gesättigter Essigsäure hinzugegeben (hergestellt durch Sättigen von Schwefeldioxid in 250 ml Essigsäure, gefolgt von Zugeben von 2,1 g Kupferchlorid) unter Eiskühlung und Rühren. Nach 1 Stunde wurde die Reaktionslösung in 500 ml Eiswasser geschüttet und mit Diethylether extrahiert. Der Extrakt wurde mit einer gesättigten wässrigen Lösung Natriumbicarbonat, mit Wasser und Lauge nacheinander gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde verdampft, eine gemischte Lösung aus Diethylether und Hexan wurde zu dem Rest hinzugegeben und die Kristalle wurden durch Filtrieren eingesammelt, um 16,0 g der Titelverbindung zu ergeben.
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ (ppm); 7,55 (1H, t, J = 8,0 Hz), 7,78 (1H, dd, J = 8,0, 1,2 Hz), 7,86–7,92 (2H, m).
Produktionsbeispiel 16. 7-Amino-5-brom-3-chlor-1H-indolhydrochlorid
Zu einer Lösung (250 ml) von 14,84 g (53,9 mmol) der Verbindung des Produktionsbeispiels 15 in Methanol wurden 70 ml konzentrierte Salzsäure und 31,97 g (269 mmol) Zinnstaub hinzugegeben, gefolgt vom Rühren bei Raumtemperatur für 80 Minuten. Nachdem eine 5 N wässrige Lösung Natriumhydroxid unter Eiskühlung hinzugegeben worden war, um auf pH 10 einzustellen, wurden die erhaltenen Präzipitate abfiltriert und das Filtrat wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde nacheinander mit gesättigter Natriumbicarbonatlösung und Lauge gewaschen, über Magnesiumsulfat getrock net und aufkonzentriert. Dann wurde der erhaltene Rest durch Kieselgelsäulenchromatographie gereinigt, um 14,35 g 7-Amino-5-brom-3-chlor-1H-indol zu ergeben. Dies wurde in Ethylacetat gelöst und eine gemischte Lösung (17 ml) aus 4 N Salzsäure und Ethylacetat wurde hinzugegeben. Die erhaltenen Präzipitate wurden durch Filtrieren eingesammelt und mit Hexan gewaschen, um 13,23 g der Titelverbindung zu ergeben.
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ (ppm); 5,11 (3H, brs), 6,64 (1H, s), 6,93 (1H, s), 7,50 (1H, d, J = 2,0 Hz), 11,38 (1H, brs).
Produktionsbeispiel 22: 6-Amino-3-pyridinsulfonylchlorid
Zu 123,8 g (1,06 mol) Chlorsulfonsäure wurden 10,00 g (0,106 mol) 2-Aminopyridin in Teilen unter Eiskühlung hinzugegeben. Thionylchlorid (50,56 g, 0,425 mol) wurde hinzugegeben, gefolgt vom Erwärmen im Rückfluss für 2,5 Stunden und weiterem Rühren für Stunden bei 150°C. Die Reaktionslösung wurde in Eiswasser geschüttet, durch Zugabe von Natriumbicarbonat neutralisiert und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit einer gesättigten Natriumbicarbonatlösung, Wasser und Lauge nacheinander gewaschen, getrocknet, über Magnesiumsulfat getrocknet und dann bis zur Trockenheit aufkonzentriert. Der erhaltene Rest wurde in Ethylether suspendiert und die unlöslichen Substanzen wurden abfiltriert. Das Filtrat wurde bis zur Trockenheit aufkonzentriert und der erhaltene Rest wurde aus Ethylether-Hexan rekristallisiert, um 6,58 g der Titelverbindung zu erhalten.
Beispiel 1. 3-Cyano-N-(3-cyano-4-methyl-1H-indol-7-yl)benzolsulfonamid
Die Verbindung (2,00 g 11,7 mmol) des Produktionsbeispiels 12 wurde in 60 ml Tetrahydrofuran gelöst und dann wurden 4,0 ml (49,5 mmol) Pyridin und 2,60 g (12,9 mmol) der Verbindung des Produktionsbeispiels 13 hinzugegeben. Nach dem Rühren bei Raumtemperatur für 16 Stunden wurde 2 N Salzsäure hinzugegeben, um den pH-Wert auf 1–2 einzustellen, und das Gemisch wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde nacheinander mit Wasser und Lauge gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und aufkonzentriert. Dann wurde der erhaltene Rest durch Kieselgelsäulenchromatographie aufgereinigt, um 3,90 g der Titelverbindung zu ergeben.
Schmelzpunkt: 220–221°C (rekristallisiert aus Ethanol/n-Hexan)
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ (ppm); 2,55 (3H, s), 6,50 (1H, d, J = 8,0 Hz), 6,77 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, t, J = 8,0 Hz), 7,90 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,05–8,13 (2H, m), 8,16 (1H, s), 10,11 (1H, brs), 12,01 (1H, brs).
Beispiel 4. 6-Amino-N-(5-brom-3-chlor-1H-indol-7-yl)-3-pyridinsulfonamid
Die Verbindung (1,00 g, 3,55 mmol) des Produktionsbeispiels 16 wurde in 25 ml Tetrahydrofuran suspendiert und dann wurden 0,86 ml (10,6 mmol) Pyridin und 718 mg (3,73 mmol) der Verbindung des Produktionsbeispiels 8 hinzugegeben unter Eiskühlung. Nach dem Rühren bei Raumtemperatur für 3 Stunden wurde Wasser hinzugegeben und das Gemisch wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde nacheinander mit Wasser und Lauge gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und aufkonzentriert. Dann wurde der erhaltene Rest durch Kieselgelsäulenchromatographie aufgereinigt, um 1,27 g der Titelverbindung zu ergeben.
Schmelzpunkt: Es begann sich bei 237°C zu verfärben und zersetzte sich bei 240–242°C (rekristallisiert aus Ethanol-Wasser)
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ (ppm); 6,37 (1H, d, J = 8,8 Hz), 6,94 (2H, brs), 6,9781H, s), 7,36 (1H, s), 7,54–7,57 (2H, m), 8,16 (1H, d, J = 2,8 Hz), 9,94 (1H, brs), 11,17 (1H, brs).
Hydrochlorid: ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ (ppm); 6,59 (1H, d, J = 9,2 Hz), 7,00 (1H, s), 7,40 (1H, s), 7,56 (1H, d, J = 2,4 Hz), 7,70 (1H, dd, J = 9,2, 2,0 Hz), 8,20 (1H, d, J = 2,0 Hz), 10,20 (1H, brs), 11,37 (1H, brs).
Beispiel 7. 6-Amino-N-(4-chlor-1H-indol-7-yl)-3-pyridinsulfonamid
Die Titelverbindung (961 mg) wurde durch Behandlung von 1330 mg (6,4 mmol) der Verbindung des Produktionsbeispiels 22 und 1000 mg (4,9 mmol) der Verbindung des Produktionsbeispiels 12 in gleicher Weise wie in Beispiel 1 gewonnen.
Schmelzpunkt: 204–206°C
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ (ppm); 6,38 (1H, d, J = 9,0 Hz), 6,43 (1H, t, J = 2,2 Hz), 6,77 (1H, d, J = 7,7 Hz), 6,86 (2H, brs), 7,42 (1H, t, J = 2,6 Hz), 7,56 (1H, dd, J = 2,6, 9,0 Hz), 8,14 (1H, d, J = 2,6 Hz), 9,70 (1H, brs), 11,07 (1H, brs).
Beispiel 8. 6-Amino-N-(3-brom-4-chlor-1H-indol-7-yl)-3-pyridinsulfonamid und Hydrochlorid davon
Zu einer Lösung (10 ml) aus 650 mg (2,0 mmol) der Verbindung des Beispiels 7 in Tetrahydrofuran wurden 1 ml Dimethylformamid und 359 mg (2,0 mmol) N-Bromsuccinimid gegeben, gefolgt von Rühren bei Raumtemperatur über Nacht. Eine 0,2 N wässrige Lösung Salzsäure wurde hinzugegeben, gefolgt vom Extrahieren mit Ethylacetat. Die organische Schicht wurde nacheinander mit einer wässrigen Lösung aus Natriumthiosulfat, Wasser und Lauge gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und aufkonzentriert. Dann wurde der erhaltene Rest durch Kieselgelsäulenchromatographie gereinigt, um 662 mg der Titelverbindung zu ergeben.
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ (ppm); 6,38 (1H, d, J = 8,8 Hz), 6,76 (1H, d, J = 8,4 Hz), 6,88 (2H, brs), 6,97 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,52–7,56 (2H, m), 8,12 (1H, d, J = 2,4 Hz), 9,68 (1H, brs), 11,44 (1H, brs).
In 3 ml Aceton wurden 660 mg der erhaltenen Titelverbindung gelöst, 0,62 ml einer 4 N Salzsäure in Ethylacetat wurden hinzugegeben und die erhaltenen Präzipitate wurden durch Filtration eingesammelt, um 590 mg eines Hydrochlorids der Titelverbindung zu ergeben.
Schmelzpunkt: Begann sich innerhalb 267°C graduierlich zu zersetzen.
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ (ppm); 6,65 (1H, d, J = 9,2 Hz), 6,78 (1H, d, J = 8,1 Hz), 6,98 (1H, d, J = 8,2 Hz), 7,57 (1H, d, J = 2,6 Hz), 7,73 (1H, dd, J = 2,0, 9,0 Hz), 8,15 (1H, d, J = 2,4 Hz), 10,00 (1H, brs), 11,67 (1H, brs).

Claims

Eine Verbindung, ausgewählt aus 3-Cyano-N-(3-cyano-4-methyl-1H-indol-7-yl)benzolsulfonamid, 6-Amino-N-(5-brom-3-chlor-1H-indol-7-yl)-3-pyridinsulfonamid und 6-Amino-N-(3-brom-4-chlor-1H-indol-7-yl)-3-pyridinsulfonamid, oder ein pharmakologisch annehmbares Salz oder Hydrat von irgendeiner dieser Verbindungen.
Verbindung gemäß Anspruch 1 oder ein pharmakologisch annehmbares Salz oder Hydrat davon zur Verwendung als Medikament.
Verwendung einer beliebigen Verbindung gemäß Anspruch 1 oder pharmakologisch annehmbarer Salze oder Hydrate davon zur Herstellung eines Antitumormittels, eines therapeutischen Mittels für Pankreaskrebs, eines therapeutischen Mittels für Dickdarmkrebs, eines therapeutischen Mittels für Magenkrebs, eines therapeutischen Mittels für Brustkrebs, eines therapeutischen Mittels für Prostatakrebs, eines therapeutischen Mittels für Lungenkrebs, eines therapeutischen Mittels für Eierstockkrebs oder eines Mittels zur Unterdrückung von Krebsmetastasen.
Verwendung einer beliebigen Verbindung gemäß Anspruch 1 oder pharmakologisch annehmbarer Salze oder Hydrate davon zur Herstellung eines therapeutischen Mittels für diabetische Retinopathy.
Verwendung einer beliebigen Verbindung gemäß Anspruch 1 oder pharmakologisch annehmbarer Salze oder Hydrate davon zur Herstellung eines therapeutischen Mittels für rheumatische Arthritis.
Verwendung einer beliebigen Verbindung gemäß Anspruch 1 oder pharmakologisch annehmbarer Salze oder Hydrate davon zur Herstellung eines therapeutischen Mittels für Hämatome.