DE60023493T2

DE60023493T2 - Verwendung von synthetischen FXR Liganden zur Behandlung von Krankheiten die mit einem gestörten Gleichgewicht des Cholesterin-Spiegels verbunden sind und von Kolonkrebs

Info

Publication number: DE60023493T2
Application number: DE60023493T
Authority: DE
Inventors: M. Barry FORMAN; L. Richard BEARD; A. Roshantha CHANDRARATNA
Original assignee: Allergan Inc
Current assignee: Allergan Inc
Priority date: 1999-06-11
Filing date: 2000-06-09
Publication date: 2006-07-20
Anticipated expiration: 2020-06-10
Also published as: CA2377320A1; DE60023493D1; ATE307595T1; EP1185277B1; CN1368884A; JP2003501477A; BR0011743A; WO2000076523A1; AU768806B2; HK1047705A1; AU5603200A; EP1185277A1

Description

Diese Anmeldung beansprucht die Priorität gemäß 35 USC 119 (e) auf die vorläufige Patentanmeldung Nr. 60/138,968, die am 11. Juni 1999 eingereicht wurde und durch Inbezugnahme hier inkorporiert ist.
Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung ist für die Gebiete der menschlichen und Veterinärmedizin, Physiologie und Biochemie relevant, insbesondere für die Regulation des Lipidstoffwechsels und Katabolismus und der Cholesterinsynthese und des Cholesterinabbaus.
Hintergrund der Erfindung
Eine große Vielzahl spezifischer metabolischer, Entwicklungs- und katabolischer Prozesse scheinen direkt oder indirekt in vivo durch vergleichsweise kleine Moleküle wie Steroide, Retinoide und Thyroidhormone reguliert zu werden. Der Mechanismus, wodurch eine einzelne solche Verbindung zu den Regulationen vielzähliger unterschiedlicher zellulärer Ereignisse beitragen kann, war bis relativ kürzlich der Gegenstand vieler Spekulationen, als entdeckt wurde, dass sich diese Verbindungen alle die Fähigkeit zur Bindung an transkriptionell aktive proteinartige Rezeptoren teilen. Diese Proteinrezeptoren wiederum sind dazu in der Lage, spezifische cis-wirkende Nukleinsäure-regulatorische Sequenzregionen zu binden, die als "Responseelemente" oder REs bezeichnet werden und die stromaufwärts von der kodierenden Sequenz bestimmter Gene lokalisiert sind und die Transkription dieser Gene zu aktivieren. So können diese proteinartigen Rezeptoren als spezifische ligandenabhängige Regulatoren der Gentranskription und Expression wirken.
Es wurde schnell festgestellt, dass die Aminosäuresequenzen dieser verschiedenen Rezeptoren sich Regionen einer Homologie teilen, wodurch jeder solcher Rezeptor zu einem Mitglied einer Familie von den ligandenmodulierten Rezeptormolekülen wurde. Diese Familie wurde Steroid-Superfamilie der nukleären Hormonrezeptoren genannt; nukleär, da die Rezeptoren in der Regel in hoher Konzentration im Kern der Zelle angetroffen werden.
Weitere Untersuchungen hinsichtlich der strukturellen und funktionellen Beziehungen zwischen den nukleären Hormonrezeptoren haben bestimmte Charakteristika gezeigt, die zusätzlich zu der Sequenzhomologie von allen geteilt werden, siehe z.B. Evans et al. Science 240: 889–895 (1988). Wie oben erwähnt, sind die nukleären Hormonrezeptoren dazu in der Lage, an cis-wirkende regulatorische Elemente zu binden, die in den Promotoren der Zielgene vorliegen. Die Glucocorticoid-, Östrogen-, Androgen-, Progestin- und Mineral-Corticoidrezeptoren können erwiesenermaßen als Homodimere an spezifische Responseelemente binden, die als inverted Repeats organisiert sind.
Eine andere Klasse nukleärer Hormonrezeptoren, die den Retinoidrezeptor RAR (Retinolsäurerezeptor), den Thyroidrezeptor, den Vitamin D-Rezeptor, den Peroxisomen-Proliferator-Rezeptor und den Insekten-Ecdyson-Rezeptor beinhaltet, binden ihr Responseelement als Heterodimer zusammen mit dem Retinoid X-Rezeptor (RXR), der wiederum positiv durch 9-cis Retinolsäure aktiviert wird. Siehe Mangelsdorf, et al., The Retinoid Receptors in The Retinoids: Biology, Chemistry and Medicine, Kap. 8 (Sporn et al., Hrsg. 2. Auflage, Raven Press Ltd. 1994); Nagpal und Chandraratna, Current Pharm. Design 2: 295–316 (1996), die beide durch Inbezugnahme hier inkorporiert sind. Die Retinoidrezeptoren RAR und RXR, wie viele nukleäre Rezeptoren, existieren als eine Anzahl von Untertypen (RARα, RARβ, RARγ, und RXRα, RXRβ, und RXRγ). Zusätzlich kann jeder Untertyp als unterschiedliche Isoformen existieren.
Während die oben in Bezug genommenen nukleären Hormonrezeptoren alle erwiesenermaßen spezifische Ligandenpartner haben, haben Nukleinsäure- und Aminosäure-Sequenzierungsexperimente und Sequenzausrichtungen und Vergleiche eine Klasse von Proteinmolekülen offenbart, die sich eine signifikante Sequenzhomologie wie auch eine strukturelle Ähnlichkeit zu der nukleären Hormonrezeptor-Superfamilie erhalten, für die jedoch noch kein korrespondierender Ligand entdeckt wurde. Tatsächlich wurde entdeckt, dass einige dieser "Rezeptoren" keine Ligandenbindung benötigen, um eine transkriptionelle Aktivität auszuüben. Diese Rezeptoren wurden kollektiv als "Orphan"-Rezeptoren bezeichnet.
Produkte des intermediären Stoffwechsels sind bekannte transkriptionelle Regulatoren bei Prokaryonten und niederen Eukaryonten wie z.B. der Hefe; daher gab es Spekulationen, dass diese Metaboliten auch in dieser Funktion in höheren Organismen wirken könnten, vielleicht durch eine Wechselwirkung mit den nukleären Hormonrezeptoren.
Farnesol ist ein Isoprenoid, das am Mevalonatbiosyntheseweg involviert ist, was zu der Synthese von Cholesterin, Gallensäuren, Porphyrin, Dolichol, Ubichinon, Karotinoiden, Retinoiden, Vitamin D, Steroidhormonen und farnesylierten Proteinen führt. Farnesylpyrophosphat, ein Derivat von Farnesol, ist das letzte übliche Intermediat im Mevalonat-Biosyntheseweg.
Foreman et al., Cell 81: 687–693 (1995) haben demonstriert, dass ein Orphanrezeptor, der jetzt als Farnesoid X-aktivierter Rezeptor (FXR) bezeichnet wird, durch Farnesol und verwandte Moleküle aktiviert wird. Diese Referenz ist hier durch Inbezugnahme inkorporiert. FXR wird in der Leber, dem Verdauungstrakt, der Nebenniere und der Niere exprimiert.
Die Aminosäuresequenz von FXR ergibt eine konservierte DNA-Bindungsdomäne (DBD) und eine Liganden-Bindungsdomäne (LBD). Die LBD umfasst Subdomänen, die für die Ligandenbindung, die Rezeptordimerisierung und die Transaktivierung verantwortlich sind. Zusätzlich transkribierten Zellen, die Chimäre Proteine exprimierten, die die LBD von FXR, fusioniert an die DBD des Hefe-GAL4-Transkriptionsaktivators enthielten, ein Reportergen nicht, das ein GAL4-Responseelement enthielt, außer, das FXR-Konstrukt wurde mit einem anderen Protein coexprimiert, umfassend die Dimerisierung und Liganden-Bindungssubdomänen von RXR. Diese Daten legten nahe, dass FXR und RXR in Wechselwirkung treten, um ein transkriptionell aktives Dimer zu bilden. Es wurde keine Interaktion zwischen FXR und irgendwelchen anderen nukleären Hormonrezeptoren, die getestet wurden, beobachtet. Id.
Unter den nukleären Hormonrezeptoren ist eine Aminosäuresequenzhomologie zu FXR bei dem Insekten-Ecdyson-Rezeptor (EcR) hoch, der mit einem RXR homolog Dimere bildet. Wenn er mit RXRα dimerisiert ist, konnte für FXR gezeigt werden, dass er spezifisch an hsp27, ein EcR-Responseelement bindet, jedoch wurde keine Bindung beobachtet, wenn FXR allein exprimiert wurde. FXR und RXR binden an bestimmte Sequenzen als Heterodimer.
Es wurde gezeigt, dass der FXR-RXRα-Komplex durch das juvenile Hormon III (JH III) aktiviert wird; eine Inkubation von Zellen, transfiziert mit RXR und FXR. Die Zellen wurden ebenfalls mit einem Reporterplasmid transfiziert, enthaltend 5 Kopien des hsp27 Responseelements innerhalb eines Teils des Maus-Brusttumor-Virus (MTV) -Promotors; der Promotor wurde stromaufwärts vom Glühwürmchen-Luciferasegen positioniert. Die Aktivierung dieses Gens führt zu einer Expression von Luciferase, die einfach als Maß einer Transaktivierungsaktivität quantifizierbar ist. Andere potenzielle Liganden, einschließlich selektierten Steroiden und Eicosanoiden erwiesen sich als wirkungslos in diesem System. JH III konnte andere nukleäre Hormonrezeptoren nicht aktivieren und aktiviert weder FXR noch RXR allein. Forman et al., Cell 81: 687–693 (1995).
JH III ist ein Derivat von Farnesylpyrophosphat. Andere Farnesylderivate wurden im Hinblick auf ihre Fähigkeit zur Aktivierung des FXR-RXR-Komplexes getestet. Es wurde demonstriert, dass Farnesol das Heterodimer stark aktiviert. Andere Derivate, wie z.B. Farnesal, Farnesylacetat, Farnesolsäure und Geranylgeraniol aktivierten den FXR-RXR-Komplex etwas weniger stark; die Farnesylmetaboliten Geraniol, Squalen und Cholesterin aktivierten FXR-RXR nicht. Id.
Die Cholesterinsynthese wird eng durch eine Modulation der Niveaus der 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A-Reduktase (HMG-CoA) reguliert, die die Umwandlung von 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A in Mevalonat reguliert. Durch eine Reihe von Phosphorylierungen und eine Decarboxylierungsreaktion wird Mevalonat in 3-Isopentenylpyrophosphorsäure umgewandelt, das zu 3,3-Dimethylallylpyrophosphorsäure isomerisiert. Eine enzymvermittelte Kondensationsreaktion zwischen den 5 Kohlenstoff-Isoprenylverbindungen 3-Isopentenylpyrophosphorsäure und 3,3-Dimethylallylpyrophosphorsäure führt zu einer Bildung der 10 Kohlenstoff-Diisoprenylverbindung Geranylpyrophosphorsäure. Diese reagiert wiederum mit einem anderen Molekül 3-Isopentenylpyrophosphorsäure zur Bildung der 15 Kohlenstoffverbindung Farnesylpyrophosphat. Zwei Moleküle dieser letzteren Verbindung reagieren miteinander zur Bildung des 30 Kohlenstoffmoleküls Presqualinpyrophosphat, das zur Bildung von Squalin dephosphoryliert wird. Squalin wird dann cyclisiert, um Cholesterin zu bilden. So vermittelt die HMG-CoA-Reduktase die anfängliche Bildung der Isopreneinheiten, die darauffolgend in Reihe angeordnet und cyclisiert werden, um Cholesterin zu bilden.
Die Niveaus der HMG-CoA-Reduktase werden teilweise durch Kontrolle der Gentranskription, Translation und Abbau des Enzyms gesteuert. Es wurde kürzlich gezeigt, dass Farnesol an der Regulation des Abbaus der HMG-CoA-Reduktase beteiligt ist. Es existieren Beweise für eine synergistische Unterstützung des HMG-CoA-Reduktaseabbaus durch Farnesol und eine Sterolkomponente, wie z.B. 25-Hydroxycholesterin. Siehe z.B. Meigs et al., J. Biol. Chem. 271: 7916–7922 (1996).
Cholesterin ist der Vorläufer verschiedener Verbindungen, wie z.B. der Sterole, Gallensäuren, wie z.B. Cholsäure und der Steroidhormone, wie z.B. Testosteron und Progesteron. Alle diese Verbindungen behalten den zugrundeliegenden Cholesterinkern. Die polareren Gallensäuren werden in der Leber gebildet und in den Dünndarm sezerniert, wo sie bei der Absorption von Lipiden helfen. Die Bildung von Gallensäuren aus Cholesterin ist daher ein wichtiger Abbauweg für Cholesterin und ein Schlüsseldeterminanz der Gleichgewichtskonzentration von Cholesterin im Körper.
Das die Rate begrenzende Enzym bei der Bildung von Gallensäuren aus Cholesterin ist die Cholesterin 7α-Hydrolase (Cyp7a). Es ist seit einiger Zeit bekannt, dass Gallensäuren in einer negativen Feedbackschleife wirken, um ihre eigene Produktion über diesem Weg zu limitieren, auf welche Weise dies bewirkt wird, ist jedoch noch nicht aufgeklärt worden. Kürzlich ergaben sich Beweise, dass die Cyp7a-Synthese und Expression durch Gallensäuren inhibiert wird. Chiang, Front. Biosci. 3: D176–93 (1998).
Trotz der Tatsache, dass Cholesterin für die Synthese von Zellmembranen und verschiedenen Hormonen und anderen kleinen Molekülen essenziell ist, werden angehobene Cholesterinniveaus, insbesondere in Form des niedrigdichten Lipoproteins (LDL) in enger Weise mit einer Arteriosklerose und anderen kardiovaskulären Erkrankungen verbunden. Zusätzlich ist der Erhalt einer geeigneten Gallensäurekonzentration für die Regulation des Lipidstoffwechsels wichtig und kann bei der Verhinderung von Kolonkrebs und einer Gallensteinbildung nützlich sein.
Unter den zur Zeit zur Verfügung stehenden Arzneimitteln für die Behandlung einer Hypercholesterolinämie befinden sich Ionenaustauschmedien wie Colestipol und Cholestyramine. Diese Arzneimittel wirken durch einen Einfang von Gallensäuren im Verdauungstrakt; die Gallensäuren werden dann mit den Fäkalien ausgeschieden. Da der Darm die eingefangenen Gallensäuren nicht wieder absorbiert, stehen die Gallensäuren nicht länger zur Verfügung, um die Bildung von Gallensäuren durch den Cholesterinabbau zu inhibieren. Im Ergebnis wird die Gallensäuresynthese "unterdrückt", mit dem Ergebnis, dass sich die Gleichgewichtskonzentration von Cholesterin erniedrigt.
Unglücklicherweise werden diese Ionenaustauscharzneimittel mit einer erhöhten Inzidenz von Intestinaltumoren bei Nagern assoziiert. Zusätzlich sind diese Arzneimittel, da sie hoch geladen sind, dazu in der Lage, andere Verbindungen zu adsorbieren, wie z.B. über die Verdauung aufgenommene Arzneimittel, natürlich auftretende Hormone, regulatorische Faktoren und ähnliche.
Kürzlich diskutierte ein Poster, das von Neisor, Flach, Weinberger & Bentzen auf der AACR conference on Nuclear Receptors in Palm Springs, California, 8. Januar bis 11. Januar 1999 gezeigt wurde, die Fähigkeit bestimmter 1,1-Biphosphonatester FXR zu aktivieren und Plasma-Cholesterin-Niveaus bei Säugern zu erniedrigen.
So verbleibt ein Bedarf auf dem Gebiet an einem Verfahren zur Modulation der Gleichgewichtskonzentration von Cholesterin und/oder Gallensäuren. Solche Verfahren stehen vorzugsweise nicht signifikant in Weselwirkung mit anderen Therapeutika und wirken, um den Abbau oder die Bildung von Cholesterin in direkterer Weise zu unterstützen.
Kurze Beschreibung der Zeichnungen
1 ist eine Dosisreaktionskurve, die die Fähigkeit der GAL-RXR- und GAL-RXR_m-Proteine zur Transkriptionsaktivierung von URS_G-Tk-Luc in Gegenwart eines RXR-Agonisten, LG 268 aufträgt.
2 ist eine Grafik, die die Fähigkeit von FXR-RXRα- und FXR-RXR_m-Heterodimeren zur Transaktivierung eines Reportergens in Gegenwart einer bovinen Gallensäurepräparation, LG 268 und AGN 10 vergleicht.
3 ist eine Grafik, die die Fähigkeit des FXR-RXR_m-Heterodimers zur Transaktivierung eines Reportergens in Gegenwart gewählter Gallensäuren, LG 268 und AGN 10 vergleicht.
4 zeigt eine Dosisreaktionskurve, die die Agonistenaktivität gewählter Gallensäuren und AGN 10 vergleicht.
5a bis 5d stellen die Strukturen von Verbindungen bereit, umfassend ein Panel prospektiver FXR-Liganden.
6 stellt eine Grafik bereit, die die FXR-Agonistenaktivitäten der Verbindungen der 5a bis 5d in Gegenwart und Abwesenheit von FXR allein, RXRα allein, einem FXR-RXR-Heterodimer und einem FXR-RXR_m-Heterodimer vergleicht.
Zusammenfassung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung ist auf die Verwendung synthetischer FXR-Liganden für eine Modulation der Transkriptionsaktivität von FXR gerichtet. Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform sind die Zusammensetzungen Liganden von FXR, die dazu in der Lage sind, FXR allein oder vorzugsweise in Kombination mit anderen nukleären Hormonrezeptoren, wie z.B. RXR zu einer Suppression, Inhibition oder Stimulation der Transkription eines gegebenen Zielgens zu stimulieren. In der zur Zeit besonders bevorzugten Ausführungsform ist FXR im wesentlichen inaktiv in seiner Fähigkeit zur Modulation der Genexpression, außer es ist mit RXR assoziiert. Zusätzlich wird bevorzugt, dass der FXR-Ligand nicht substanziell als modulierender Ligand von entweder RAR- oder RXR-Rezeptoren oder beiden aktiv ist.
Es wurde entdeckt, dass FXR, wenn er durch einen geeigneten Liganden aktiviert wird, ein Gallensäurerezeptor ist, der zur Regulation der Expression von Cyp7a in der Lage ist, wodurch ein Schlüsselschritt beim Abbau von Cholesterin kontrolliert wird. So betrifft die Erfindung in einer besonders bevorzugten Ausführungsform Verfahren zur Kontrolle der Konzentration von Cholesterin und Gallensäuren in vivo durch Verwendung von spezifischen FXR-Liganden. Siehe Wang, et al., Molec. Cell 3: 543–553 (Mai 1999), hier durch Inbezugnahme inkorporiert. Gemäß einer anderen Ausführungsform kann ein synthetischer FXR-Agonist verwendet werden, um die Konzentration von Cholesterin bei einem hypocholesterolämischen Säuger zu erhöhen.
Natürlich können die ligandenabhängigen Aktivitäten von FXR außer der Regulation der Cyp7a-Expression ebenfalls durch die Verwendung eines geeigneten FXR-Liganden kontrolliert werden.
Zum Beispiel werden in der vorliegenden Erfindung auch Verfahren zur Regulation der Konzentration von Gallensäuren bei einem Säuger mit betrachtet. Eine erhöhte Konzentration von Gallensäuren bei Säugern wurde mit einem erhöhten Auftreten von Kolonkrebs assoziiert; so kann die Verwendung von FXR-Liganden zur Erniedrigung von abnormal hohen Gallensäurekonzentrationen eine therapeutische und/oder prophylaktische Wirkung für diese Indikation bereitstellen. Zusätzlich werden andere Proteine als Cyp7a durch Gallensäuren reguliert; diese beinhalten die intestinalen Gallensäure-Bindungsproteine und die Cyclooxygenase 2 (die beide von CDCA hochreguliert werden) und die Sterol-27-Hydroxylase, den intestinalen Gallensäure-Transporter und den Leber-Gallensäure-Transporter (diese Proteine werden von CDCA herabreguliert).
Die Verfahren der vorliegenden Erfindung sind daher für die Modulation der Expression dieser Proteine ebenfalls nützlich.
Die FXR-Liganden der vorliegenden Erfindung können FXR-Agonisten, FXR-Antagonisten oder FXR-inverse Agonisten sein. Unter "Agonist wird verstanden, dass der Ligand eine ligandenabhängige FXR-Aktivität oberhalb irgendwelcher Grundlinienniveaus stimuliert, die in Abwesenheit des Liganden vorliegen. Unter "FXR-Aktivität" wird die ligandenabhängige direkte oder indirekte Inhibition der LXRα-Aktivität verstanden. Unter "Antagonist" wird verstanden, dass der Ligand an FXR bindet und als kompetitiver oder nicht-kompetitiver Inhibitor der FXR-Agonistaktivität wirkt. Unter "inverser Agonist" wird verstanden, dass der Ligand an FXR binden wird und die Unterdrückung der FXR-Aktivität auf ein niedrigeres Niveau auslösen wird als dasjenige, das in Abwesenheit irgendeines FXR-Liganden angetroffen wird.
Ebenfalls von der vorliegenden Erfindung mit betrachtet wird die Verwendung einer pharmazeutisch akzeptablen Zusammensetzung, umfassend einen FXR-Antagonisten oder FXR inversen Agonisten für die Herstellung eines Medikaments zur Erniedrigung von Cholesterin bei einem Säuger.
Gemäß einem anderen Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung einer pharmazeutisch akzeptablen Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung, gewählt aus der Gruppe, bestehend aus den Formeln 1, 3 und 4
Formel 1
Formel 3
Formel 4 worin die gestrichelte Linie eine Bindung oder Abwesenheit einer Bindung darstellt;
X ist S, O, NR', worin R' H oder ein Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist oder
X ist (C(R₁)₂)_n, worin R₁ H oder ein Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist und n ist eine ganze Zahl mit einem Wert von 0 oder 1;
R₂ ist Wasserstoff, ein Niederalkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, F, Cl, Br, I, CF₃, ein fluorsubstituiertes Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, OH, SH, ein Alkoxy mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder ein Alkylthio mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen, Benzyloxy oder C₁-C₁₂-Alkylbenzyloxy;
R₃ ist Wasserstoff, ein Niederalkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder F;
m ist eine ganze Zahl mit einem Wert von 0 bis 3 in den Formeln (1) und (3) und 0 bis 5 in Formel (4);
o ist eine ganze Zahl mit einem Wert von 0 bis 4, wenn die gestrichelte Linie die Abwesenheit einer Bindung darstellt, und 0 bis 3, wenn die gestrichelte Linie eine Bindung darstellt;
R'₃ ist Wasserstoff, ein Niederalkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, F oder (R₁₅)_r-Phenyl, (R₁₅)_r-Naphthyl oder (R₁₅)_r-Heteroaryl, worin die Heteroarylgruppe 1 bis 3 Heteroatome aufweist, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus O, S und N, r ist eine ganze Zahl mit den Werten von 0 bis 5;
R₄ ist ein Alkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen oder Phenyl;
Y ist eine Phenyl- oder Naphthylgruppe oder ein Heteroaryl, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Pyridyl, Thienyl, Furyl, Pyridazinyl, Pyrimidinyl, Pyrazinyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Imidazolyl und Pyrrazolyl, wobei die Phenyl- und Heteroarylgruppen optional mit ein oder zwei R₂-Gruppen substituiert sind;
R₁₅ ist unabhängig H, F, Cl, Br, I, NO₂, N(R₈)₂, NH(R₈), COR₈, NR₈CON(R₈)₂, OH, OCOR₈, OR₈, CN, eine Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen, eine fluorsubstituierte Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen, eine Alkenylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen und 1 bis 3 Doppelbindungen, eine Alkinylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen und ein bis 3 Dreifachbindungen oder eine Trialkylsilyl- oder Trialkylsilyloxygruppe, wobei die Alkylgruppen unabhängig 1 bis 6 Kohlenstoffatome aufweisen;
A ist (CH₂)_q, worin q 0 bis 5 bedeutet; ein verzweigtes Niederalkyl mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, ein Cycloalkyl mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, ein Alkenyl mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen und 1 oder 2 Doppelbindungen, ein Alkinyl mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen und 1 oder 2 Dreifachbindungen;
B ist Wasserstoff, COOH, NO₂, P(O)(OH)₂, P(O)(OH)OR₈, P(O)(OR₈)₂, SO₂OH, SO₂(OR₈), COOR₈, CONR₉R₁₀, -CH₂OH, CH₂OR₁₁, CH₂OCOR₁₁, CHO, CH(OR₁₂)₂, CHOR₁₃O, -COR₇, CR₇(OR₁₂)₂, CR₇OR₁₃O oder ein tri-Niederalkylsilyl, worin R₇ eine Alkyl-, Cycloalkyl- oder Alkenylgruppe mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen ist, R₈ ist eine Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen oder Trimethylsilylalkyl, worin die Alkylgruppe 1 bis 10 Kohlenstoffatome aufweist, oder eine Cycloalkylgruppe mit 5 bis 10 Kohlenstoffatomen oder R₈ ist Phenyl oder Niederalkylphenyl, R₉ und R₁₀ bedeuten unabhängig Wasserstoff, eine Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen oder eine Cycloalkylgruppe mit 5 bis 10 Kohlenstoffatomen oder Phenyl oder Niederalkylphenyl, R₁₁ ist Niederalkyl, Phenyl oder Niederalkylphenyl, R₁₂ ist Niederalkyl und R₁₃ ist ein divalenter Alkylrest mit 2 bis 5 Kohlenstoffatomen oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes dieser Verbindung für die Herstellung eines Medikaments für die Stimulation oder Inhibition der Aktivität eines FXR-Rezeptors.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform dieses letzteren Aspekts der Erfindung wird ein Säuger, der an einer Hypercholesterolinämie oder Hyperlipoproteinämie leidet mit einer pharmazeutisch akzeptablen Zusammensetzung behandelt, umfassend einen FXR-Antagonisten, gewählt aus der Gruppe solcher Verbindungen. Vorzugsweise ist der Säuger menschlich.
Gemäß einer anderen bevorzugten Ausführungsform desselben Aspekts der Erfindung wird ein Säuger, der an einer Hypocholesterinämie leidet, mit einer pharmazeutisch akzeptablen Zusammensetzung behandelt, umfassend einen FXR-Agonisten, gewählt aus der Gruppe solcher Verbindungen. Vorzugsweise ist der Säuger menschlich.
Andere Aspekte und Ausführungsformen der Erfindung sind in der folgenden Offenbarung und den Ansprüchen, die die Beschreibung abschließen, enthalten.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
Die Erfindung betrifft die Verwendung eines synthetischen FXR-Liganden für die Herstellung eines Medikaments zur Modulation der Aktivität eines Säuger-FXR-Rezeptors, vorzugsweise des menschlichen FXR-Proteins.
Solche Verwendungen involvieren Verbindungen, die an den FXR-Rezeptor binden werden, und dadurch die Fähigkeit von FXR zur Auswirkung seiner biologischen Wirkungen beeinflussen, entweder direkt oder durch Blockierung der Fähigkeit eines natürlich auftretenden Liganden, seine Wirkungen auszuüben. Die FXR-Liganden der vorliegenden Erfindung können FXR-Antagonisten, FXR-Agonisten oder FXR-inverse Agonisten sein. Vorzugsweise, jedoch nicht notwendigerweise haben die FXR-Liganden substanziell keine Aktivität auf die Retinoid-nukleären Rezeptoren RAR und RXR. Gemäß einer anderen Ausführungsform kann der FXR-Ligand eine bispezifische Verbindung sein, die dazu in der Lage ist, sowohl FXR als auch RXR zu binden und zu modulieren.
Ebenfalls im Umfang der Erfindung beinhaltet sind Aspekte, gerichtet auf die Verwendung eines synthetischen FXR-Liganden für die Herstellung eines Medikaments zur Senkung der Plasmakonzentration von Cholesterin bei einem Säuger, wobei der Säuger mit einer pharmazeutisch akzeptablen Zusammensetzung, umfassend einen FXR-Antagonisten oder FXR-inversen Agonisten, behandelt werden soll.
Ebenfalls beinhaltet sind Aspekte der Erfindung, gerichtet auf die Verwendung eines synthetischen FXR-Liganden für die Herstellung eines Medikaments zur Erhöhung der Plasmakonzentration von Cholesterin bei einem Säuger, dem Cholesterin pathologisch fehlt, durch Verwendung eines FXR-Agonisten.
Ein anderer Aspekt der Erfindung betrifft die Verwendung eines FXR-Agonisten in einem pharmakologisch akzeptablen Träger für die Herstellung eines Medikaments zur Erniedrigung der Konzentration von Gallensäuren bei einem Säuger. Alternativ wird gemäß einem anderen Aspekt der Erfindung ein FXR-Antagonist oder reverser Agonist verwendet, um die Synthese von Gallensäuren bei einem Patienten anzuheben, der im Hinblick auf die Gallensäuresynthese defizient ist.
Obwohl die Anmelder nicht an diese Theorie gebunden sein wollen nehmen sie an, dass der FXR-Rezeptor, wenn er an einen FXR-Agonisten gebunden ist, wirkt, um die Transkription des Oxysterolrezeptors LXRα zu inhibieren, der wiederum die Transkription von Cyp7a aktiviert. Die Unterdrückung der Transkription dieses Schlüsselenzyms in der Biosynthese von Gallensäuren resultiert daher in einer niedrigeren Konzentration der Gallensäuren im Körper; hohe Gallensäurekonzentrationen wurden mit einem erhöhten Risiko an Kolonkrebs assoziiert.
Als Hilfe zum weiteren Verständnis dieser Erfindung bieten die Anmelder die folgenden Beispiele an, die die Erfindung illustrieren sollen.
Material und Methoden
Alle Säuger-Expressionsvektoren waren Derivate des bakteriellen/Säuger-Shuttle-Vektors pCMX, einem Expressionsvektor, enthaltend den Zytomegalievirus (CMV) Promotor/Enhancer, gefolgt von einem Bacteriophagen T7-Promotor zur Transkription des klonierten Gens in vitro. Das Plasmid pCMX enthält auch die SV40 kleine t-Intron/Polyadenylierungssignalsequenz, Polyomavirus Enhancer/Origin und den SV40 Enhancer/Origin des Plasmids CDM8 (siehe Seed, Nature 329: 840–842 (1987), hier durch Inbezugnahme inkorporiert), kloniert in das große Pvu II-Fragment von pUC 19. PUC 19 ist ein üblicherweise verwendeter Klonierungsvektor, der von New England Biolabs, Inc. erhältlich ist. Dieses Pvu II-Fragment enthält einen Col E 1 origin der Replikation und ein Ampicillin-Resistenzgen für die Plasmidselektion, jedoch fehlt die pUC19-Polylinker-Klonierungsstelle. Um eine neue Polylinkerstelle zu kreieren, wird ein synthetischer Polylinker, umfassend die folgenden Restriktionsstellen: 5'-KpnI, EcoRV, BamHI, MscI, NheI-3', gefolgt von einer Translations-Terminationssequenz in alle drei Leserahmen inseriert. Siehe Umesono et al., Cell 65: 1255–1266 (1991), hier durch Inbezugnahme inkorporiert.
Die Nukleinsäureregionen, die die folgenden Gesamtlängenproteine kodieren, wurden an pCMX kloniert. Die Sequenzen dieser Gene und/oder ihrer korrespondierenden Polypeptide haben die angegebenen Genbank-Zugangsnummern: Ratten-FXR (Zugangsnummer U 18374); Maus-FXR (Zugangsnummer U 09416); menschlicher FXR (Zugangsnummer NM 005123) und menschlicher RXRα (Zugangsnummer X 52773). Die GenBank-Information, korrespondierend zu diesen Zugangsnummern, wird hier durch Inbezugnahme in ihrer Gesamtheit inkorporiert. Die Ratten-FXR-Aminosäuresequenz, Maus-FXR-Aminosäuresequenz und menschliche FXR-Aminosäuresequenz werden hier als SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 bzw. SEQ ID NO: 3 bereitgestellt. Die menschliche RXRα-Aminosäuresequenz wird hier als SEQ ID NO: 4 bereitgestellt.
GAL4-Fusionsproteine wurden unter Verwendung von standardisierten molekularbiologischen Verfahren konstruiert (siehe z.B. Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2. Auflage, Cold Spring Harbor Laboratory Press 1989), hier in seiner Gesamtheit durch Inbezugnahme inkorporiert), indem eine Nukleotidsequenz, kodierend das angegebene Polypeptid, direkt stromabwärts von der Hefe-GAL4-DNA-Bindungsdomäne in Plasmid pSG424 inseriert wurde, beschrieben von 5adowski et al., Nucleic Acids Research 17: 7539, hier durch Inbezugnahme inkorporiert. Die Aminosäuresequenz des Hefe-GAL4 4-DBD, hier als SEQ ID NO: 5 bezeichnet, ist die folgende:
Es wurden, wie oben angegeben, Fusionsproteine hergestellt, wobei übliche molekularbiologische Techniken verwendet wurden, durch Erzeugung von offenen Nukleinsäure-Leserahmen, kodierend die angegebenen Polypeptide und Klonierung in den Polylinkerbereich von pCMX.
Für GAL-L-RXR kodierten die Plasmid-Nukleinsäuren Aminosäuren Glu203 bis Thr462 von menschlichem RXRα (SEQ ID NO: 4), fusioniert an die GAL4-Sequenzen. Die Verbindung zwischen dem carboxyterminalen Ende von GAL4 und dem aminoterminalen Bereich von RXR LBD hatte die folgende Struktur:
Diese Verbindungs-Nukleotidsequenz
wird hier als SEQ ID NO: 6 bezeichnet.
Für GAL-L-FXR kodierten die Plasmid-Nukleinsäuren die Aminosäuren Leu181 bis Gln469 von Ratten-FXR (SEQ ID NO: 1), fusioniert an die GAL4-Sequenzen. Die Verbindung zwischen dem carboxyterminalen Bereich von GAL4 und dem aminoterminalen Bereich von FXR LBD hat die folgende Struktur:
Diese Verbindungs-Nukleotidsequenz (von 5' zu 3')
wird hier als SEQ ID NO: 7 bezeichnet.
Das RXR-Liganden-Bindungsdomänen (LBD) -Expressionskonstrukt L-RXR enthält Nukleotidreste, kodierend die SV40 Tag nukleäre Lokalisierungssignalsequenz (vom Amino- zum Carboxyende):
die direkt stromaufwärts lokalisiert ist (d.h. zum 5'-Ende des Kodierungsstrangs) von einer Nukleotidsequenz, kodierend die menschliche RXRα LBD (Glu₂₀₃ bis Thr₄₆₂)- CMX-βgal enthält die E. coli β-Galaktosidase kodierende Sequenz, abgeleitet von Plasmid pCH110 (Zugangsnummer U 02445), inseriert stromabwärts vom CMV-Promotor im Plasmid pCMX. RXRm enthält eine Einzelpunktmutation, die Asp-322 zu Pro in der LBD von menschlichem RXRα verändert.
Luciferase-Reporterplasmide (bezeichnet als TK-Luc) wurden konstruiert, indem die cDNA, kodierend Glühwürmchen-Luciferase, direkt stromabwärts von dem Herpesvirus-Thymidinkinase-Promotor (lokalisiert an den Nukleotidresten –105 bis +51) der Thymidinkinase-Nukleotidsequenz) platziert wurde, gebunden wiederum an verschiedene Responseelemente. Der Promotorbereich der TK-Luc-Plasmide hatte die folgende Struktur:
Diese Nukleotidsequenz (kontinuierlich von 5' zu 3')
wird als SEQ ID NO: 9 bezeichnet.
Responseelemente wurden in das Plasmid TK-Luc an der einzigartigen Hind III-Stelle inseriert. Das Hefe GAL4 UAS_G-Responseelement hatte die Nukleotidsequenz und wurde in 4 Direct Repeats inseriert:
Das hsp EcRE (Ecdyson-Responseelement) wurde in die Hind III-Stelle des Plasmids TK-Luc als sechs direct Repeats der folgenden Sequenz inseriert:
Beispiel 1
Da bekannt ist, dass FXR an sein Responseelement als Heterodimer mit RXR bindet und da das Heterodimer durch Liganden für RXR aktiviert werden kann, wurde ein mutiertes RXRα-Protein (RXR_m; auch als D322P in den Figuren bezeichnet) konstruiert, enthaltend eine Einzelpunktmutation (Asp₃₂₂ zu Pro) in der Liganden-Bindungsdomäne von RXR. Die Verwendung von FXR-RXR_m-Heterodimeren erlaubt eine unzweideutige Identifizierung von Modulatoren der FXR-Aktivität unter Testverbindungen.
So wurde ein Reporterplasmid konstruiert, enthaltend 4 Kopien des GAL4-Responseelementes UAS_G, positioniert stromabwärts vom Glühwürmchen-Luciferasegen, das sich wiederum unter der Kontrolle des Herpes-simplex-Virus Thymidinkinase (TK)-Promotors befindet. Dieses Reporterplasmid wurde in afrikanische Rhesusaffen (green monkey)-CV-1-Zellen mit einem Expressionsvektor (pCMX, der den Zytomegalievirus CMV-Promotor enthält, lokalisiert stromaufwärts von der Klonierungsstelle), kodierend entweder GAL-L-RXR (umfassend die LBD von RXRα von Glu₂₀₃ bis Thr₄₆₂) und den DNA-Bindungsbereich (Aminosäuren 1–147) des Hefe-GAL4-Genprodukts oder GAL-L-RXRm (identisch zu GA-L-RXR bis auf die einzelne Asp₃₂₂ → Pro-Punktmutation in der LBD der RXR kodierenden Sequenz) cotransfiziert.
Die vorübergehende Transfektion der CV-1-Zellen wurde wie folgt durchgeführt. CV-1-Zellen wurden in Dulbeccos modifiziertem Eagle's Medium kultiviert, enthaltend 10% Harzkohle abgezogenes fötales Rinderserum (FBS), 50 Einheiten/ml Penicillin G und 50 μg/ml Streptomycinsulfat (bezeichnet als DMEM-FBS). Am Tag vor der Transfektion wurden die Zellen auf 50% bis 80% Konfluenz plattiert.
Die Zellen wurden transient durch Lipofektion, wie beschrieben von Forman et al., Cell 83: 803–12 (1995), hier durch Inbezugnahme inkorporiert, transformiert. Liposomen (N-[1-(2,3-Dioleoyloxy)propyl]-N,N,N-ammoniummethylsulfat, verkauft von Boehringer Mannheim unter dem Namen DOTAP) wurden gemäß den Anweisungen des Herstellers gebildet. Die Liposomen enthielten Reportergenkonstrukte (300 ng/10⁵ Zellen) und entweder den GAL-L-RXR- oder den GAL-L-RXR_M-Expressionsvektor (20 bis 50 ng/10⁵ Zellen). Die Zellen und Liposomen wurden zusammen 2 Stunden inkubiert.
Die Liposomen wurden durch Aspiration entfernt und die Zellen wurden dann ungefähr 44 Stunden (± 2 Stunden) in Gegenwart verschiedener Konzentrationen des RXR-Agonisten LG 268, gelöst in Dimethylsulfoxid (DMSO) inkubiert. LG 268 hatte die folgende Struktur:
Folgend auf das Aussetzen gegenüber dieser Verbindung wurden die Zellen geerntet und im Hinblick auf die Gegenwart einer Luciferase-Aktivität überprüft. Die Zellen wurden in 0,1 M KP04 (pH 7,8), 1,0% TRITON^® X-100, 1,0 mM Dithiolthreitol (DTT) und 2 mM Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) lysiert. Die Luciferase-Aktivität wurde durch Reaktion der Zelllysate mit Luciferin in einem Reaktionspuffer gemessen, umfassend: 20 mM Tricin, 1,07 mM Mg(CO₃)₄-Mg(OH)₂-5 H₂O, 2,67 mM MgSO₄-7H₂O, 0,1 mM EDTA, 0,5 mM Natriumluciferin, 0,15 mg/ml Coenzyme A, 5 mM DTT und 0,5 mM Adenosintriphosphat (ATP). Die resultierende Chemilumineszenz wurde in einem Luminometer gemessen. Siehe de Wet et al., Mol. Cell Biol. 7: 725 (1987) (hier durch Inbezugnahme inkorporiert).
Alle Verbindungen wurden dreifach überprüft. Jedes Experiment wurde drei- oder mehrmals wiederholt.
Die Ergebnisse sind in 1 dargestellt. Wie dort angegeben, vermindert die Einführung der RXR Asp₃₂₂ → Pro-Mutation signifikant (≥ 50fach) die ligandenabhängige transaktivierende Aktivität von RXRm in Gegenwart eines bekannten RXR-Agonisten, LG268, im Vergleich mit der Transaktivierungsfähigkeit der nicht mutierten Liganden-Bindungsdomäne von GAL-L-RXR.
Beispiel 2
Da die FXR-Transaktivierungsaktivität die Bildung eines Heterodimers mit RXR erforderlich macht, wurde das folgende Transaktivierungsexperiment durchgeführt um zu zeigen, dass RXR_m seine Fähigkeit zur Potenzierung der FXR-Aktivität trotz einer nicht funktionellen Liganden-Bindungsdomäne in einem Assay auf eine ligandenabhängige FXR-Aktivität beibehält.
Gesamtlängen rekombinanter Ratten-FXR und menschlicher RXR (oder RXR_m), kloniert in die Klonierungsstelle des Plasmids pCMX, wurden in CV-1-Zellen unter Verwendung des vorübergehenden Transfektionsverfahrens, im wesentlichen wie oben beschrieben, cotransfiziert. Zusätzlich wurden Reporterplasmide mit den Expressionsplasmiden wie oben beschrieben, cotransfiziert.
Die Luciferase-Reporterplasmide TK-Luc (beschrieben von Heyman et al., Cell 68: 397 (1992), hier durch Inbezugnahme inkorporiert) wurden konstruiert, indem die Glühwürmchen-Luciferase-cDNA-Kodierungssequenz in frame direkt stromabwärts vom Herpes-Virus-Thymidinkinasepromotor (lokalisiert an den Nukleotidresten –105 bis +51) der Thymidinkinase-Nukleotidsequenz) platziert wurde. Sechs Repeats des EcRE-Responseelementes, an das die DNA-Bindungsdomäne (DBD) von FXR bindet, wurden ebenfalls stromaufwärts vom Reportergen eingeschlossen. Weitere Details werden oben bereitgestellt.
Folgend auf die Transfektion wurden die Zellen ungefähr 44 Stunden entweder in bovinem Gallenextrakt, 5 bis 10 μM der FXR-Testverbindung AGN 10 (auch als AGN 192337 bezeichnet) oder 100 nM des RXR-Agonisten LG 268 inkubiert, jeweils gelöst in DMSO. AGN 10 hat die folgende Struktur:
Boviner Gallenextrakt wurde kommerziell von Sigma Chemicals, Inc. erhalten. Ein Gramm des Gallenextrakts wurde in 50 ml Wasser gelöst und auf einen pH von 4,0 eingestellt. Dasjenige Material, das in Wasser unlöslich war, wurde in 200 ml Methanol extrahiert. Jeder dieser Extrakte wurde vollständig im Vakuum bei 40°C getrocknet und dann wieder gelöst.
Die Zellen wurden dann wie oben beschrieben lysiert und die Luciferase-Aktivität wurde als Anzeige des Ausmaßes einer Heterodimer-induzierten FXR-Transaktivierungsaktivität wie oben beschrieben, gemessen. Die Ergebnisse sind in 2 dargestellt.
Wie festgestellt werden kann, hat der bovine Gallenextrakt eine signifikante Fähigkeit, die FXR-vermittelte Transaktivierung sowohl bei FXR-RXR- als auch FXR-RXR_m-cotransfizierten Zellen zu potenzieren. Auch hat der FXR-Ligandenkandidat AGN 10 fast genauso viel Aktivität zu einem FXR-Ziel (sowohl im FXR-RXR- als auch im FXR-RXR_m-Assay). LG 268, von dem im Beispiel 1 gezeigt wurde, dass es wenig FXR-spezifische Aktivität aufweist, kann eine Transaktivierung des Reportergens auslösen, wenn es einem Heterodimer, umfassend Ratten-FXR und -RXR ausgesetzt wird.
Demgegenüber weist der RXR-Ligand LG 268 eine bemerkenswerte Aktivität in FXR-RXR-transfizierten Zellen auf, jedoch nicht in den FXR-RXRm-transfizierten Zellen.
Diese Daten demonstrieren daher, dass die FXR-Transaktivierung, potenziert durch FXR-Liganden, von einer Transaktivierung unterscheidbar ist, die durch eine RXRspezifische Liganden-Wechselwirkung mit der RXR-Hälfte des aktiven FXR-RXR-Heterodimers durch Verwendung einer mutierten Form von RXR ausgelöst wird. Dieses Beispiel legt auch zusammen mit den Daten aus Beispiel 1 nahe, dass RXRm dazu in der Lage ist, ein transkriptionell aktives Heterodimer mit FXR zu bilden, obwohl RXRm nicht dazu in der Lage ist, den Liganden effektiv zu binden. Ähnliche Ergebnisse werden unter Verwendung des Gesamtlängen menschlichen FXR-Proteins beobachtet.
Beispiel 3
Die in Beispiel 2 verwendeten FXR-RXRm-Cotransfektionsverfahren wurden verwendet, um die FXR-Agonistenaktivität von AGN 10 mit der FXR-Aktivität verschiedener Gallensäuren zu vergleichen, einschließlich Deoxycholsäure (DCA) und Chenodeoxycholsäure (CDCA), von denen bekannt ist, dass sie natürlich auftretende FXR-Liganden sind. Siehe z.B. Wang et al., Molec. Cell 3: 543–553 (Mai, 1999), hier durch Inbezugnahme inkorporiert.
CV-1-Zellen wurden mit Säuger-Expressionsvektoren cotransfiziert, kodierend Gesamtlängen-FXR und RXRm, wie auch mit dem Luciferase-Reporterplasmid, das in dem letzten Experiment verwendet wurde. Die Zellen wurden dann mit einem der folgenden Mittel für ungefähr 44 Stunden bei einer Konzentration von 100 nM inkubiert, falls nicht anders angegeben: LG 268; AGN 10 (10 μM); 7-Ketolithocholsäure, 3,7-Diketolithocholsäure; Ursodeoxycholsäure; a-Muricholsäure; Murocholsäure; Dehydrocholsäure; Taurocholsäure; Cholsäure (CA); Lithocholsäure (LCA); Taurodeoxycholsäure; Deoxycholsäure (DCA); Glycochenodeoxycholsäure; Taurochenodeoxycholsäure und Chenodeoxycholsäure (CDCA). Alle Verbindungen wurden in DMSO gelöst, außer Glycochenodeoxycholsäure, Taurochenodeoxycholsäure, Taurodeoxycholsäure und Taurocholsäure, die in phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) gelöst wurden. Folgend auf ein Aussetzen gegenüber den Verbindungen wurden die Zellen gewaschen, lysiert und die Luciferase-Aktivität wie oben angegeben gemessen.
3 zeigt an, dass von den getesteten Verbindungen AGN 10, 7-Ketolithocholsäure, 3-7-Diketolithocholsäure, Lithocholsäure, Deoxycholsäure und Chenodeoxycholsäure eine messbare FXR transaktivierende Aktivität in diesem Assaysystem aufwiesen. Von den natürlich auftretenden Gallensäuren zeigte nur Chenodeoxycholsäure (zugeführt mit einer Konzentration von 100 μM) ein Aktivitätsniveau, das so groß war wie dasjenige von 10 μM AGN 10.
Beispiel 4
Ein ähnliches Experiment wurde durchgeführt, um die FXR transaktivierende Aktivität gewählter Verbindungen als Funktion der Ligandenkonzentration zu bestimmen. Eine vorübergehende Cotransfektion von Gesamtlängen Ratten-FXR, menschlichem RXR und dem Luciferase-Reporterplasmid wurde wie oben durchgeführt. Ein Satz der cotransfizierten CV-1-Zellen wurde in 1,2, 10 und 20 μM AGN 10 inkubiert. Getrennten Sätzen von Cotransformanden wurden 1, 10, 20, 100 und 200 μM von entweder CDCA, DCA oder LCA verabreicht. Alle Verbindungen wurden in DMSO gelöst. Alle transformierten Zellen ließ man ungefähr 44 Stunden mit der angegebenen Verbindung inkubieren, dann wurde die Menge der Transaktivierungsaktivität unter Verwendung des Luciferase-Assays wie oben angegeben, gemessen.
4 zeigt die Ergebnisse dieses Experiments. Wie man sehen kann, steigt die konzentrationsabhängige Fähigkeit von AGN 10, agonistisch auf die FXR-Transaktivierungsaktivität zu wirken, in dosisabhängiger Weise zwischen Konzentrationen von 1 und 10 μM. Bei dieser letzteren Konzentration scheint die FXR-Agonistenaktivität von AGN 10 ihr Maximum in diesem Assay-System erreicht zu haben.
Demgegenüber bleiben, wie 4 zeigt, die Aktivitäten von CDCA und DCA bei einer Grundlinie bis zu 10 μM, und steigen dann in ungefähr linearer Weise auf ihre Maxima, bei ungefähr 100 μM. LCA weist auch eine sehr niedrige Aktivität auf, bis eine Konzentration von 10 μM erreicht wird, dann steigt die Aktivität jedoch zwischen 10 und 100 μM. Die maximale Aktivität von DCA und LCA beträgt ungefähr 1/2 bzw. 1/4 von derjenigen von AGN 10, während die maximale Aktivität von CDCA bei 100 μM ungefähr der von AGN 10 bei 10 μM entspricht.
Beispiel 5
Um zusätzliche Verbindungen im Hinblick auf ihre FXR-Agonist-Aktivität zu überprüfen, wurde ein Panel von Verbindungen gesammelt. Diese Verbindungen waren: TTNPB (das eine FXR-Aktivität aufweist), Am 580 (das keine FXR-Aktivität aufweist), juveniles Hormon (JH) III (50 μM)(ein FXR-Agonist); all-trans Retinolsäure (ein natürlich auftretender RAR-Agonist); 9-cis Retinolsäure (ein RXR-Agonist); LG 268, LG 69 (synthetische RXR-Agonisten) und 28 Verbindungen, die als AGN 1 bis AGN 28 bezeichnet wurden.
Die Strukturen von AGN 1 bis AGN 28 werden in den 5a, 5b, 5c und 5d bereitgestellt.
Die Struktur von Am 580 ist die folgende:
Die Struktur von LG 69 ist die folgende:
Die Struktur des juvenilen Hormons III (JH III) ist die folgende:
Die Struktur von TTNPB ist die folgende:
Diese Verbindungen wurden im Hinblick auf ihre FXR modulierende Aktivität unter Verwendung des oben beschriebenen Transaktivierungsassays hin untersucht. Alle Verbindungen wurden in DMSO gelöst. Wie oben, enthielt das Reporterplasmid sechs Kopien des Ecdyson-Responseelementes (EcRE), platziert zusammen mit dem Herpesvirus Thymidinkinasepromotor stromaufwärts vom Glühwürmchen-Luciferasegen. Das Reporterplasmid wurde in CV-1-Zellen transfiziert, entweder a) allein, b) mit einem Expressionsplasmid, kodierend Gesamtlängen-FXR, c) mit einem Expressionsplasmid, kodierend Gesamtlängen-RXRα, d) mit zwei Expressionsplasmiden, kodierend Gesamtlängen FXR bzw. RXRα und e) mit zwei Expressionsplasmiden, kodierend Gesamtlängen FXR bzw. RXR_m. Plasmidkonstruktionen, Transfektion, Inkubation mit Testverbindungen und Luciferase-Aktivitätsassays wurden wie in Beispiel 1 beschrieben, durchgeführt.
Die Ergebnisse sind in 6 dargestellt. Es wurde im wesentlichen keine Transaktivierungsaktivität in Abwesenheit von FXR und RXRα beobachtet. Bei Transfektion der Zellen mit FXR allein wurde kein signifikanter Anstieg der Grundlinienaktivität beobachtet. Wenn die Zellen mit RXRα allein transfiziert wurden, wurde kein Anstieg der Aktivität über die Grundlinie beobachtet. Zellen, die mit dem Reporterplasmid und beiden FXR und RXRα Expressionsplasmiden cotransfiziert waren, reagierten allgemein mit einem deutlichen Anstieg der Luciferaseaktivität nach Aussetzung gegenüber den Testverbindungen. Diese Zellen, denen TTNPB, AGN 10 und AGN 20 verabreicht wurde, ergaben wieder die höchsten Aktivitätsreaktionen. Schließlich stellten Zellen, cotransfiziert mit sowohl FXR als auch RXRm, ein sehr viel besser diskriminierendes Aktivitätsprofil bereit; das Gesamtausmaß der transaktivierenden Aktivität war universell vermindert und nur TTNPB, AGN 10 und AGN 20 zeigten signifikante Niveaus einer Transaktivierungsaktivität.
Bei Cotransfektion mit FXR und entweder RXRα oder RXRm trat jedoch eine signifikante ligandenabhängige Transaktivierung auf. Dies ist fast sicher zurückzuführen auf die Bildung von FXR-RXR-Heterodimeren und zeigt, dass die Fähigkeit von sowohl FXR als auch RXR die Transaktivierung zu unterstützen, in deutlicher Weise von einer Heterodimerbildung abhängt. Die Verwendung von RXRm als Heterodimerpartner für FXR ermöglicht FXR-spezifischen Liganden von denen unterschieden zu werden, die auf die RXR-Hälfte des Heterodimerpaars wirken.
Schließlich zeigen die Daten, dass AGN 10 und AGN 20 FXR-Agonisten sind und dass die ligandenabhängige Aktivierung von FXR ohne ligandenabhängiges Priming von RXR auftreten kann.
Das folgende Beispiel stellt eine detaillierte Beschreibung von Verbindungen mit FXR-modulierender Aktivität bereit, wie auch Verfahren zur Herstellung solcher Verbindungen. Der Fachmann wird erkennen, dass die Strukturen der FXR-Agonisten AGN 10, CDCA und DCA verwendet werden können, um ein oder mehr gemeinsame Merkmale für das molekulare Modellieren anderer FXR-Agonisten zu selektieren. Ohne Begrenzung beinhalten einige dieser Merkmale die Gegenwart einer sauren Gruppe auf der rechten Seite der Struktur, die Gegenwart eines Rings oder einer ringähnlichen Struktur in der Position der Trimethylsilangruppe von AGN 10 und vielleicht die Addition von ein oder mehr Hydroxylgruppen zum Pseudonaphthylkern dieser Verbindungen.
Ähnlich ist viel bekannt über die Art von Modifikationen, die an einem Agonisten durchgeführt werden können, um ihn in einen Antagonisten umzuwandeln. So ist die Bildung von FXR-Antagonisten oder inversen Agonisten, auf der Grundlage der Struktur eines starken Rezeptoragonisten wie AGN 10 möglich. Tatsächlich wurden solche Modifikationen an einem Rezeptor-Agonisten bereits bei dem Entwurf von Antagonisten und inversen Agonisten der Retinoid-Rezeptoren durchgeführt. Siehe z.B. US-Patent 5,776,699, hier durch Inbezugnahme inkorporiert. Da ein Agonist an die LBD des nukleären Hormons zur Ausübung seines Effekts bindet, involviert die Modifikation eines solchen Agonisten zur Erzeugung eines Rezeptorantagonisten im allgemeinen die Retention derselben allgemeinen Struktur wie derjenigen des Agonisten (was dem Antagonisten ermöglicht, die Bindung an den Rezeptor fortzusetzen), kombiniert mit der Addition von etwas "größeren" Gruppen um zu verhindern, dass die spezifischen Konformationsänderungen des Rezeptors, die zu einer Aktivierung der Gentranskriptionsfunktionen des Rezeptors führen, auftreten.
So würde vom Fachmann im vorliegenden Fall erwartet werden, dass ein FXR-Antagonist oder inverser Agonist eine ähnliche Struktur wie AGN 10 aufweist, jedoch bestimmte Modifikationen enthält, einschließlich, ohne Begrenzung, die Addition einer Arylgruppe zu dem sechsgliedrigen nicht-aromatischen Ring, insbesondere in der oberen Position des Rings (relativ zu Formeln 1 bis 5, infra); die Addition einer Alkylgruppe, die größer ist als C2 oder einer Arylgruppe am Silylbestandteil und die Addition einer Arylgruppe zum unsubstituierten Kohlenstoff der Doppelbindung zum rechten hin der Trimethylsilylsubstitution von AGN 10. Andere solche Modifikationen werden dem Fachmann deutlich werden und sind in den folgenden Beispielen und den Ansprüchen enthalten, die diese Beschreibung beschließen.
Beispiel 6
Bevorzugte FXR-modulierende Verbindungen und ihre Synthese
ALLGEMEINE AUSFÜHRUNGSFORMEN UND SYNTHESE-VERFAHRENSWEISE
Definitionen
Die Bezeichnung Alkyl betrifft alle Gruppen, die als normale Alkyl-, verzweigte Alkyl- und Cycloalkylgruppen bekannt sind und umfasst diese. Die Bezeichnung Alkenyl betrifft und umfasst normale Alkenyl-, verzweigte Alkenyl- und Cycloalkenylgruppen mit ein oder mehr nicht gesättigten Stellen. Ähnlich bezeichnet und umfasst die Bezeichnung Alkinyl normale Alkinyl- und verzweigte Alkinylgruppen mit ein oder mehr Dreifachbindungen.
Falls nicht anders festgehalten, bedeutet Niederalkyl die oben definierte breite Definition von Alkylgruppen mit 1 bis 6 Kohlenstoffen im Fall von normalen Niederalkylgruppen und 3 bis 6 Kohlenstoffen für niedere verzweigte Cycloalkylgruppen. Niederalkenyl ist ähnlich definiert als 2 bis 6 Kohlenstoffe für normale Niederalkenylgruppen aufweisend und 3 bis 6 Kohlenstoffe für verzweigte und Cyclo-Niederalkenylgruppen. Niederalkinyl ist ebenfalls ähnlich definiert mit 2 bis 6 Kohlenstoffen für normale Niederalkinylgruppen und 4 bis 6 Kohlenstoffatomen für verzweigte Niederalkinylgruppen.
Die Bezeichnung "Ester", wie hier verwendet, bezieht sich auf und umfasst alle Verbindungen, die in die Definition dieser Bezeichnung, wie sie klassischerweise in der organischen Chemie verwendet wird, fallen. Sie beinhaltet organische und anorganische Ester. Wenn B von Formel 1, 3 oder 4 -COOH ist, umfasst die Bezeichnung die Produkte, abgeleitet von der Behandlung dieser Funktion mit Alkoholen oder Thiolen, vorzugsweise mit aliphatischen Alkoholen mit 1 bis 6 Kohlenstoffen. Wenn der Ester von den Verbindungen abgeleitet ist, worin B -CH₂OH ist, umfasst diese Bezeichnung Verbindungen, abgeleitet von organischen Säuren, die Ester bilden können, einschließlich auf Phosphor und Schwefel basierenden Säuren oder Verbindungen der Formel -CH₂OCOR₁₁, worin R₁₁ eine substituierte oder nicht substituierte aliphatische, aromatische, heteroaromatische oder aliphatische aromatische Gruppe ist, vorzugsweise mit 1 bis 6 Kohlenstoffen in den aliphatischen Teilen.
Unter "synthetische Verbindung" wird eine organische Verbindung verstanden, die normalerweise in einem Säuger nicht auftritt. Spezifisch soll eine synthetische Verbindung keine natürlich auftretende Gallensäure umfassen.
Unter "Ligand" wird eine Verbindung verstanden, die dazu in der Lage ist, an ein gegebenes biologisches Molekül zu binden oder ein Satz von Isotypen eines gegebenen biologischen Moleküls mit einem hohen Grad an Avidität und Spezifität.
Unter "synthetischer FXR-Ligand" wird eine synthetische Verbindung verstanden, die zur Bindung an ein FXR-Rezeptor-Protein mit einem hohen Grad an Avidität und Spezifität in der Lage ist.
Falls in der gegenwärtigen Anmeldung nicht anders festgehalten, stammen bevorzugte Ester von den gesättigten aliphatischen Alkoholen oder Säuren mit zehn oder weniger Kohlenstoffen oder den cyclischen oder gesättigten aliphatischen cyclischen Alkoholen und Säuren bei 5 bis 10 Kohlenstoffatomen ab.
Besonders bevorzugte aliphatische Ester sind diejenigen, die von niederen Alkylsäuren und Alkoholen abstammen. Ebenfalls bevorzugt werden die Phenyl- oder Niederalkylphenylester.
Amid hat die Bedeutung, die ihm klassischer Weise in der organischen Chemie zugeordnet wird. In diesem Fall beinhaltet dies die unsubstituierten Amide und alle aliphatischen und aromatischen mono- und di-substituierten Amide. Falls in dieser Anmeldung nicht anders festgehalten, sind bevorzugte Amide die mono- und di-substituierten Amide, abgeleitet von den gesättigten aliphatischen Resten mit zehn oder weniger Kohlenstoffatomen oder den cyclischen oder gesättigten aliphatisch-cyclischen Resten mit 5 bis 10 Kohlenstoffatomen. Besonders bevorzugte Amide sind diejenigen, die von substituierten oder nicht-substituierten Niederalkylaminen abstammen. Ebenfalls bevorzugt werden mono- und disubstituierte Amide, abstammend von den substituierten und nicht-substituierten Phenyl- oder Niederalkylphenylaminen. Nicht-substituierte Amide werden ebenfalls bevorzugt.
Acetale und Ketale beinhalten die Reste der Formel -CK, worin K (-OR)₂ ist. Hier ist R ein Niederalkyl. Ebenfalls kann K -OR₇O- sein, worin R₇ ein Niederalkyl mit 2 bis 5 Kohlenstoffatomen ist, linear oder verzweigt.
Ein pharmazeutisch akzeptables Salz kann für jede Verbindung dieser Erfindung hergestellt werden, mit einer Funktionalität, die in der Lage ist ein Salz zu bilden, z.B. einer Säurefunktionalität. Ein pharmazeutisch akzeptables Salz ist jedes Salz, das die Aktivität der Elternverbindung beibehält und keinerlei nachteilige oder ungeeignete Wirkungen an das Subjekt weitergibt, an das es verabreicht wird und in dem Kontext, in dem es verabreicht wird.
Pharmazeutisch akzeptable Salze können von organischen oder anorganischen Basen abgeleitet werden. Die Salze können mono- oder polyvalente Ionen sein. Von besonderem Interesse sind die anorganischen Ionen, Natrium, Kalium, Calcium und Magnesium. Organische Salze können mit Aminen hergestellt werden, insbesondere Ammoniumsalze wie z.B. Mono-, Di- und Trialkylamine oder Ethanolamine. Salze können auch mit Koffein, Tromethamin und ähnlichen Molekülen gebildet werden. Wenn ein Stickstoff ausreichend basisch ist, um zur Bildung von Säureadditionssalzen fähig zu sein, können solche mit allen anorganischen oder organischen Salzen oder Alkylierungsmitteln wie z.B. Methyliodid gebildet werden. Bevorzugte Salze sind diejenigen, die mit anorganischen Säuren gebildet werden, wie z.B. Salzsäure, Schwefelsäure oder Phosphorsäure. Jede aus einer Anzahl einfacher organischer Säuren, wie Mono-, Di- oder Trisäuren können ebenfalls verwendet werden.
Viele Verbindungen der vorliegenden Erfindung weisen trans- und cis- (E- und Z-) Isomere auf. Eine spezifische Orientierung des Substituenten relativ zu einer Doppelbindung ist in dem Namen der jeweiligen Verbindung angegeben und/oder durch spezifische Darstellung in der Strukturformel der Orientierung des Substituenten relativ zur Doppelbindung. Falls nicht spezifisch anders festgehalten, umfasst die Erfindung trans- wie auch cis-Isomere. Wenn der chemische Name ein spezifisches Isomer angibt, soll diese Bezeichnung durch den Namen eine Struktur kontrollieren, die zweideutig gezeichnet werden kann oder ein unterschiedliches Isomer darstellt.
Einige der Verbindungen der vorliegenden Erfindung können ein oder mehr chirale Zentren enthalten und können daher in enantiomeren und diastereomeren Formen existieren. Der Umfang der vorliegenden Erfindung soll alle Isomere per se abdecken, wie auch Mischungen aus cis- und trans-Isomeren, Mischungen von Diastereomeren und razemische Mischungen von Enantiomeren (optische Isomeren).
Unter Bezugnahme auf das Symbol Y in den Formeln 1, 3 und 4 sind die bevorzugten Verbindungen der Erfindung diejenigen, bei denen Y Phenyl, Naphthyl, Pyridyl, Thienyl oder Furyl ist. Noch bevorzugter werden Verbindungen, in denen Y Phenyl ist. Soweit Substitutionen an den Y (Phenyl) und Y (Pyridyl) -Gruppen betroffen sind, werden Verbindungen bevorzugt, bei denen die Phenylgruppe 1,4-(para)substituiert ist und bei denen der Pyridinring 2,5-substituiert ist. (Eine Substitution in der 2-Position in der "Pyridin"-Nomenklatur korrespondiert zu einer Substitution in der 6-Position in der "Nicotinsäure"-Nomenklatur.) Bei den zur Zeit bevorzugten Verbindungen der Erfindung gibt es keinen R₂-Substituenten an der Y-Gruppe.
Die A-B-Gruppe der bevorzugten Verbindungen ist (CH₂)_qCOOH oder (CH₂)_q-COOR₈, worin R₈ wie oben definiert ist. Noch bevorzugter ist q null und R₈ ist Niederalkyl oder (Trialkylsilyl)ethyl (oder Alkyl) oder (Trimethylsilyl)ethyl und noch bevorzugter ist R₈ Wasserstoff. Es werden auch Verbindungen bevorzugt, in denen die A-B-Gruppe CH₂OH ist.
Unter Bezugnahme auf die Gruppe X in den Formeln 1 und 3 ist in den zur Zeit bevorzugten Verbindungen der Erfindung X O (Chroman- oder Chromenverbindungen) oder X bedeutet C(R₁)₂ (Tetrahydronaphthalin- oder Dihydronaphthalin-Derivate). Noch bevorzugter ist R₁ von C(R₁)₂ Methyl.
R₂ ist vorzugsweise Wasserstoff oder Niederalkyl, noch bevorzugter Methyl und R₂ ist vorzugsweise in 3-Position des Tetrahydronaphthalins und des Dihydronaphthalin-Bestandteils und vorzugsweise an 8-Position des Chroman-, Chromen-, Thiochroman-, Thiochromen-, Dihydro- oder Tetrahydrochinolin-Bestandteils. Wenn R₂ nicht Wasserstoff ist, gibt es vorzugsweise nur einen R₂-Substituenten im aromatischen Teil des kondensierten Rings.
R₃ ist vorzugsweise Wasserstoff oder Methyl. Die zur Zeit besonders bevorzugte Substitution des nicht-aromatischen Teils des kondensierten Rings, wenn die gepunktete Linie die Abwesenheit einer Bindung in den Formeln 1 und 3 darstellt ist derartig, dass es Zwillings-Dimethylgruppen in 2- oder 4-Stellungen gibt oder in beiden, wenn X ein Heteroatom ist und Zwillings-Dimethylgruppen in den 5- und 8-Positionen, wenn der kondensierte Ring Tetrahydronaphthylen ist und Zwillings-Dimethylgruppen in der 5-Position, wenn der kondensierte Ring Dihydronaphthalin ist. Wenn die gestrichelte Linie eine Bindung darstellt, ist R₃ vorzugsweise (R₁₅)_r-Phenyl, (R₁₅)_r-Naphthyl oder (R₁₅)_r-Heteroaryl, noch bevorzugter (R₁₅)_r-Phenyl oder (R₁₅)_r-Thienyl und R₁₅ ist vorzugsweise eine Alkylgruppe. Wie hier repräsentiert, ist die Nummerierung der bicyclischen Ringstruktur wie folgt.
Bei den zur Zeit bevorzugten Verbindungen der Erfindung ist der siliciumhaltige Substituent vorzugsweise an der 6-Position von Chroman, Chromen, Thiochroman, Thiochromen, Tetrahydrochinolin- oder Dihydronaphthalin-Nucleus angehaftet und an die 2-Position des Tetrahydronaphthalin oder Dihydronaphthalin-Nukleus.
Die gegenwärtigen spezifischen Beispiele der Verbindungen der Erfindung sind in Tabelle 1 unter Bezugnahme auf Formel 5 und Formel 6 offenbart und ihre Herstellung durch die zur Zeit bevorzugte Syntheseverfahrensweise wird im experimentellen Teil dieser Anmeldung beschrieben.
Formel 5
Formel 6
Tabelle 1
Die Verbindungen der Erfindung können durch ein generalisiertes Syntheseschema hergestellt werden, wie dargestellt in Reaktionsschema 1, 1a und Reaktionsschema 2.
Unter Bezugnahme auf Reaktionsschemata 1 und 1a wird ein zur Zeit bevorzugter Syntheseweg für die Verbindungen der Erfindung der Formel 3 offenbart. Gemäß Schema 1 wird eine Bromarylmethylalkoholverbindung der Formel 7 als Ausgangsmaterial verwendet. In Formel 7 werden die Symbole Y und R₂ im Zusammenhang mit den Formeln 1, 3 und 4 definiert. Beispiele für die Verbindungen der Formel 7, die für die Synthese der gegenwärtig bevorzugten beispielhaften Verbindungen der Erfindung verwendet werden, sind 4-Brombenzylalkohol und (5-Bromthiophen-2-yl)-methylalkohol. Andere Beispiele sind 3-Brombenzylalkohol, (6-Brompyridin-3-yl)methylalkohol und (5-Bromfuran-2-yl)methylalkohol. Diese Ausgangsmaterialien sind entweder kommerziell erhältlich oder können einfach gemäß der chemischen Literatur erhalten werden. Die Alkohole der Formel 7 werden mit einem Reagenz umgesetzt, das eine Schutzgruppe an der primären Alkoholfunktion einführt. Ein Beispiel eines geeigneten Reagenzes zur Einführung der Schutzgruppe und eines, das bei der Synthese der gegenwärtig bevorzugten Verbindungen der Erfindung verwendet wird, ist tert-Butyldiphenylsilylchlorid, dargestellt in Reaktionsschema 1. Das Produkt der Reaktion mit tert-Butyldiphenylsilylchlorid (durchgeführt in Gegenwart einer Base) ist ein (Bromaryl)methyl-t-butyldiphenylsilylether der Formel 8.
REAKTIONSSCHEMA 1
REAKTIONSSCHEMA 1a
Der (Bromaryl)methyl-t-butyldiphenylsilylether der Formel 8 wird mit (Trimethylsilyl)acetylen in Gegenwart von Bis(triphenylphosphin)palladium(II)-chlorid-Katalysator, Kupfer(I)-iodid und einer geeigneten Base wie z.B. Triethylamin umgesetzt. Die letztere Kupplungsreaktion einer Bromarylverbindung mit (Trimethylsilyl)acetylen in Gegenwart eines Palladiumkomplex-Katalysators per se ist auf dem Gebiet wohlbekannt und wird z.B. in den US-Patenten Nrn. 5,663,347 und 5,808,083 beschrieben, deren Beschreibung hier ausdrücklich durch Inbezugnahme inkorporiert ist. Das Produkt der Kopplungsreaktion mit (Trimethylsilyl)acetylen ist ein ((Trimethylsilyl)ethinylaryl)methyl-t-butyldiphenylsilylether der Formel 9.
Unter Bezugnahme auf Reaktionsschema 1a ist das Ausgangsmaterial eine Bromarylverbindung der Formel 13, worin die Symbole Y, R₂, A, und B wiederum wie in Verbindungen mit den Formeln 1, 3 und 4 definiert sind. Beispiele für die Ausgangsverbindungen der Formel 13 sind Ethyl-4-brombenzoat, Ethyl-6-bromnicotinat, Ethyl-2-bromthiophen-3-carboxylat und Ethyl-2-bromfuran-3-carboxylat. Diese und analoge Bromarylester stehen einfach gemäß der chemischen Literatur zur Verfügung. Die Bromarylverbindung der Formel 13 wird mit (Trimethylsilyl)acetylen auf dieselbe Weise wie in Reaktionsschema 1 beschrieben, umgesetzt, um die (Trimethylsilyl)ethinylarylverbindungen der Formel 14 bereitzustellen. Es wird für den Fachmann natürlich sofort klar sein, dass anstelle der Bromderivate die geeigneten Iodderivate ebenfalls in den Verbindungen der Formeln 7 und 13 verwendet werden können.
In dem nächsten Schritt der Reaktionssequenz, die in beiden Reaktionsschemata 1 und 1a dargestellt ist, werden die (Trimethylsilyl)ethinylarylverbindungen der Formel 9 (Schema 1) oder der Formel 14 (Schema 1a) mit Bis(cyclohexanyl)boran umgesetzt, das hergestellt wird, indem Boranmethylsulfid mit zwei Äquivalenten Cyclohexen in einem Etherlösungsmittel wie z.B. Tetrahydrofuran (THF) umgesetzt wird. Bis(cyclohexanyl)boran, das im Reaktionsschema angegeben ist, reagiert mit den (Trimethylsilyl)ethinylarylverbindungen der Formel 9 (Schema 1) oder Formel 14 (Schema 1a) zur Bildung eines intermediären Addukts. Dieses Addukt wird in Gegenwart von Tetrakis(triphenylphosphin)palladium (0) in einem Etherlösungsmittel umgesetzt, wie z.B. THF, und zwar mit einer Bromarylverbindung der Formel 10. Die Kupplung der Brom- (oder Iod-)arylverbindung der Formel 10 mit dem Addukt wird typischerweise unter Rückflussbedingungen in inerter (Argon)Gasatmosphäre durchgeführt. Eine Base (NaOH) und Wasserstoffperoxid werden der Reaktionsmischung dann zugesetzt, um das (Trimethylsilyl)vinylprodukt der Formel 15 in Schema 1a bereitzustellen. Gemäß Schema 1 beinhaltet das Produkt der Kopplungsreaktion immer noch die Diphenyl-t-butylsilyl-Schutzgruppe, die durch Behandlung mit Tetrabutylammoniumfluorid entfernt wird, um die (Trimethylsilyl)vinyl)arylmethylalkoholderivate der Formel 11 zu ergeben.
Die kondensierten cyclischen Bromarylverbindungen der Formel 10, die in der Kopplungsreaktion verwendet werden, stehen gemäß der chemischen wissenschaftlichen oder Patentliteratur zur Verfügung oder können innerhalb des Wissens eines üblichen Fachmanns in Analogie zu Syntheseverfahren, die in der wissenschaftlichen oder Patentliteratur beschrieben werden, erhalten werden. Beispiele für Verbindungen der Formel 10, die für die Präparation der zur Zeit bevorzugten Verbindungen der Erfindung verwendet werden, sind 2-Brom-3,5,5,8,8-pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin, 2-Brom-5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin und 6-Brom-2,2,4,4-tetramethylchroman. Weitere Beispiele sind 6- oder 7-Brom-4,4-dimethylchroman, 6- oder 7-Brom-4,4-dimethylthiochroman und 2- oder 3-Brom-tetrahydrochinolinderivate, die gemäß den Lehren der US-Patente Nrn. 5,348,972, 5,053,523 und 5,877,207 zur Verfügung stehen, deren Beschreibung hier durch Inbezugnahme inkorporiert sind. Als weitere Beispiele beschreiben die US-Patente Nrn. 5,278,318, 5,407,937 und 5,407,937 2-alkyl- und/oder 4-alkylsubstituierte Thiochromane, ebenfalls mit einer Bromgruppe in 6-Position substituiert. Das US-Patent Nr. 5,346,585 beschreibt 2-alkyl- und/oder 4- alkylsubstituierte Thiochromane, substituiert mit einer Bromgruppe in der 7-Position. Die US-Patente Nrn. 5,324,744, 5,348,975 und 5,346,585 beschreiben 2-alkyl- und/oder 4-alkylsubstituierte Chromane, substituiert mit einer Bromgruppe in der 7-Position. Das US-Patent Nr. 5,348,972 beschreibt 4-alkylsubstituierte Tetrahydrochinolinverbindungen, substituiert mit einer Bromgruppe in 2-Position. Die Beschreibung der US-Patente Nrn. 5,278,318, 5,324,744, 5,346,585, 5,348,975 und 5,407,937 werden hier ebenfalls ausdrücklich durch Inbezugnahme inkorporiert.
Kondensierte cyclische Bromarylverbindungen der Formel 10, bei denen die gestrichelte Linie eine Bindung darstellt und insbesondere diejenigen, bei denen die gestrichelte Linie eine Bindung darstellt und der R'₃-Substituent eine Aryl- oder Heteroarylgruppe ist, können von den korrespondierenden bromierten Chroman-4-on-, Thiochroman-4-on-, Tetrahydrochinolin-4-on- und Tetrahydronaphthalinonderivaten erhalten werden, indem zunächst die (Trifluormethyl)sulfonyloxyderivate von der Oxofunktionalität gebildet werden und daraufhin diese mit einem (organometallischen) Derivat umgesetzt werden, das die R'₃-Gruppe einführt, in Analogie zu den Reaktionen, wie beschrieben in US-Patent Nr. 5,877,207. Alternativ können die Verbindungen der Erfindung, bei denen die gestrichelte Linie eine Bindung darstellt und der R₁₃-Substituent eine Aryl- oder Heteroarylgrupe ist, aus den korrespondierenden (Trimethylsilyl)vinylderivaten erhalten werden, die eine Oxofunktion in 4-Position des Chroman-, Thiochroman- oder Tetrahydrochinolin- und in 8-Position des Tetrahydronaphthalinnukleus beinhalten. Diese Reaktionen werden auch über die (Trifluormethyl)sulfonyloxy-Intermediate in Analogie zu den Lehren des US-Patents Nr. 5,877,207 durchgeführt.
Wiederum unter Bezugnahme auf Reaktionsschema 1 sind die primären Alkoholderivate der Formel 11 Verbindungen im Umfang der Erfindung, insbesondere im Umfang der Formel 3. Die primären Alkohole können auf die Esterstufe oxidiert werden, z.B. wie in Schema 1 dargestellt, durch Behandlung mit Mangandioxid, das zunächst den primären Alkohol zum Aldehydstadium oxidiert und danach durch Behandlung des Aldehyds mit Mangandioxid und Natriumcyanid in Alkohol, um die Ethylesterderivate der Formel 12 bereitzustellen. Die Verbindungen der Formeln 11 und 12 in Reaktionsschema 1 und die Verbindungen der Formel 15 in Reaktionsschema 1a können zu weiteren erfindungsgemäßen Verbindungen durch Syntheseverfahren umgewandelt werden, die auf dem Gebiet wohlbekannt sind. Dies wird im Reaktionsschema 1 und 1a als Umwandlung zu "Homologen und Derivativen" angegeben und die hier symbolisierten Transformationen betreffen primär Reaktionen der als A-B in den Formeln bezeichneten Gruppe. Bei diesen und verwandten Reaktionen können die folgenden wohlbekannten und veröffentlichten allgemeinen Prinzipien und Syntheseverfahren verwendet werden.
Carbonsäuren werden typischerweise durch Rückfluss der Säure in einer Lösung des geeigneten Alkohols in Gegenwart eines Säurekatalysators, wie z.B. Wasserstoffchlorid oder Thionylchlorid verestert. Alternativ kann die Carbonsäure mit dem geeigneten Alkohol in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) und 4-(Dimethylamino)pyridin (DMAP) kondensiert werden. Der Ester wird durch konventionelle Verfahren wiedergewonnen und gereinigt. Acetale und Ketale werden einfach durch das in March, "Advanced Organic Chemistry", 2. Auflage, McGraw-Hill Book Company, Seite 810, beschriebene Verfahren hergestellt. Alkohole, Aldehyde und Ketone können alle durch die jeweilige Bildung von Ethern und Estern, Acetalen oder Ketalen durch bekannte Verfahren geschützt werden, wie z.B. die in McOmie, Plenum Publishing Press, 1973 and Protecting Groups, Ed. Greene, John Wiley & Sons, 1981 beschriebenen.
Die von den Verbindungen der Erfindung abgeleiteten Säuren und Salze werden einfach aus den korrespondierenden Estern erhalten. Eine basische Verseifung mit einer Alkalimetallbase wird die Säure bereitstellen. Zum Beispiel kann ein Ester der Erfindung in einem polaren Lösungsmittel wie z.B. einem Alkanol gelöst werden, vorzugsweise unter inerter Atmosphäre bei Raumtemperatur, mit ungefähr drei Molar Überschuss der Base, z.B. Lithiumhydroxid oder Kaliumhydroxid. Die Lösung wird für eine längere Zeitspanne, zwischen 15 und 20 Stunden gerührt, abgekühlt, angesäuert und das Hydrolysat durch konventionelle Mittel gewonnen.
Das Amid kann durch geeignete Amidierungsmittel, die auf dem Gebiet bekannt sind, aus den korrespondierenden Estern oder Carbonsäuren gebildet werden. Eine Möglichkeit, um solche Verbindungen herzustellen, ist die Umwandlung einer Säure in ein Säurechlorid und dann die Behandlung der Verbindung mit Ammoniumhydroxid oder einem geeigneten Amin. Der Ester wird z.B. mit einer alkoholischen Basenlösung wie z.B. ethanolischem KOH (in ungefähr 10%igem molaren Überschuss) bei Raumtemperatur für ungefähr 30 Minuten behandelt. Das Lösungsmittel wird entfernt und der Rest wird in einem organischen Lösungsmittel wie z.B. Diethylether aufgenommen, behandelt mit einem Dialkylformamid und dann einem 10fachen Überschuss Oxalylchlorid. Dies wird alles bei moderat reduzierter Temperatur zwischen ungefähr –10 und +10°C durchgeführt. Die zuletzt erwähnte Lösung wird dann bei reduzierter Temperatur 1 bis 4 Stunden, vorzugsweise 2 Stunden, gerührt. Die Lösungsmittelentfernung stellt einen Rest bereit, der in einem inerten organischen Lösungsmittel wie z.B. Benzol aufgenommen wird, auf ungefähr 0°C abgekühlt und mit konzentriertem Ammoniumhydroxid behandelt wird. Die resultierende Mischung wird bei reduzierter Temperatur 1 bis 4 Stunden gerührt. Das Produkt wird durch konventionelle Mittel wiedergewonnen.
Alkohole werden durch Umwandlung der korrespondierenden Säuren zum Säurechlorid mit Thionylchlorid oder anderen Mitteln hergestellt (J. March, "Advanced Organic Chemistry", 2. Auflage, McGraw-Hill Book Company), dann durch Reduktion des Säurechlorids mit Natriumborhydrid (March, Ibid, Seite 1124), was die korrespondierenden Alkohole ergibt. Alternativ können die Ester mit Lithiumaluminiumhydrid bei reduzierten Temperaturen reduziert werden. Die Alkylierung dieser Alkohole mit geeigneten Alkylhalogeniden unter Williamson-Reaktionsbedingungen (March, Ibid, Seite 357) ergibt die korrespondierenden Ether. Diese Alkohole können zu Estern durch Umsetzung mit geeigneten Säuren in Gegenwart von Säurekatalysatoren oder Dicyclohexylcarbodiimid und Dimethylaminopyridin umgewandelt werden.
Aldehyde können aus den korrespondierenden primären Alkoholen unter Verwendung milder Oxidationsmittel wie z.B. Pyridiniumdichromat in Methylenchlorid (Corey, E. J., Schmidt, G., Tet. Lett., 399, 1979) oder Dimethylsulfoxid/Oxalylchlorid in Methylenchlorid (Omura, K., Swern, D., Tetrahedron. 1978, 34, 1651) hergestellt werden.
Ketone können aus einem geeigneten Aldehyd durch Behandlung des Aldehyds mit einem Alkyl-Grignard-Reagenz oder ähnlichem Reagenz, gefolgt von einer Oxidation, hergestellt werden.
Acetale oder Ketale können aus dem korrespondierenden Aldehyd oder Keton durch das in March, Ibid, Seite 810 beschriebene Verfahren hergestellt werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen gemäß Formel 4 können in Analogie zu den in Reaktionsschemata 1 und 1a beschriebenen Syntheseverfahren hergestellt werden. Um diese erfindungsgemäßen Verbindungen zu erhalten, wird ein halogeniertes Benzolderivat, wie z.B. Brombenzol, Iodbenzol (oder ein substituiertes Derivat davon, worin der Substituent R₂ ist) mit den (Trimethylsilyl)ethinylarylverbindungen der Formel 9 (Schema 1) oder Formel 14 (Schema 1a) umgesetzt.
Unter Bezugnahme auf Reaktionsschema 2 wird ein Syntheseweg zum Erhalt von Verbindungen der Erfindung gemäß Formel 1 beschrieben.
REAKTIONSSCHEMA 2
REAKTIONSSCHEMA 2 (Fortsetzung)
Die Ausgangsverbindungen, die in Reaktionsschema 2 verwendet werden, sind die kondensierten cyclischen Bromarylverbindungen der Formel 10, die oben in Verbindung mit Reaktionsschema 1 und 1a beschrieben wurden. Die Bromarylverbindungen der Formel 10 werden in ein organometallisches, vorzugsweise Organolithiumreagenz umgewandelt, wie dargestellt in Schema 2. Ein Austausch des Broms (oder des Iods, wenn ein Iodarylreagenz verwendet wird) durch Lithium wird unter den Bedingungen durchgeführt, die üblicherweise auf dem Gebiet praktiziert werden, typischerweise mit zwei Äquivalenten tert-Butyllithium, in einem Etherreagenz (THF) in Kälte, typischerweise –78°F. Das resultierende kondensierte cyclische Aryllithiumreagenz der Formel 16 wird dann mit einem Dialkyldichlorsilan-, Alkylphenyldichlorsilan- oder Diphenyldichlorsilanreagenz der Formel 17 umgesetzt. Die R₄-Gruppen in Formel 17 haben dieselbe Definition wie in Verbindung mit Formeln 1, 3 und 4. Die Dialkyldichlorsilan-, Alkylphenyldichlorsilan- oder Diphenyldichlorsilanreagenzien sind kommerziell erhältlich oder können gemäß bekannten Verfahren im Wissen des üblichen Fachmanns auf dem Gebiet hergestellt werden.
Wie in Reaktionsschemata 2 dargestellt, bildet mit der Bromarylverbindung der Formel 10 das (R₄)₂SiCl₂-Reagenz ein Aryldialkylchlorsilan der Formel 18. Das letztere wird typischerweise nicht isoliert, sondern ohne Isolation zur Umsetzung mit einer Organolithiumverbindung der Formel 19 verwendet, die ebenfalls durch Bromin-Lithiumaustausch aus dem (Bromaryl)methyl-t-butyldiphenylsilylether der Formel 8 hergestellt wird, beschrieben oben in Verbindung mit Reaktionsschema 1. Das (Aryl)methyl-t-butyldiphenylsilyletherlithiumreagenz der Formel 19 wird ebenfalls typischerweise nicht vor seiner Umsetzung mit dem Reagenz der Formel 18 isoliert. Dies ist in dem Reaktionsschema angegeben, indem die Reagenzien der Formeln 18 und 19 in großen quadratischen Klammern platziert sind.
Das Reaktionsprodukt aus Aryldialkylchlorsilan der Formel 18 und (Aryl)methyl-t-butyldiphenylsilyletherlithiumreagenz der Formel 19 ist die Diarylsilanverbindung der Formel 20, die immer noch die tert-Butyldiphenylsilyl-Schutzgruppe an der primären Alkoholfunktion aufweist. Diese wird durch Behandlung mit Tetrabutylammoniumfluorid entfernt und der resultierende primäre Alkohol kann auf die Esterstufe oxidiert werden (Formel 21), in Analogie zu den Reaktionen, die in Verbindung mit Reaktionsschema 1 beschrieben wurden. Die Diarylsilanverbindungen der Formel 21 liegen innerhalb des Umfangs der Erfindung, insbesondere innerhalb des Umfangs der Formel 1 und können zu weiteren Homologen und Derivaten, wie oben beschrieben, umgewandelt werden. Ein besonders bevorzugter Schritt einer solchen Umwandlung ist eine Verseifung der Estergruppe mit einer Base, um die freien Carbonsäuren (oder Salze davon) der Erfindung bereitzustellen.
REAKTIONSSCHEMA 4
Die Reaktionsschemata 3 und 4 illustrieren die Synthese bestimmter beispielhafter Verbindungen der Erfindung. Die in diesen beiden Schemata illustrierten Syntheseverfahren werden im Detail in dem Teil beschrieben, der den Titel "Spezifische chemische Beispiele" unten aufweist.
SPEZIFISCHE CHEMISCHE BEISPIELE
4-Hrombenzyl-tert-butyldiphenylsilylether (Verbindung 1)
Tert-Butyldiphenylsilylchlorid (10,4 ml, 40,1 mmol) wurde zu einer Lösung aus 4-Brombenzylalkohol (5,0 g, 26,7 mmol) und 50 ml Dichlormethan zugesetzt. Die Lösung wurde mit Triethylamin (3,72 ml, 26,7 mmol) und (Dimethylamino)pyridin (163 mg, 1,34 mmol) behandelt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde mit 300 ml Dichlormethan verdünnt und mit 50 ml 10%iger wässriger HCl gewaschen. Die Schichten wurden getrennt und die wässrige Schicht mit 50 ml Dichlormethan extrahiert. Die kombinierten organischen Extrakte wurden mit Sole gewaschen und getrocknet (MgS0₄) sowie filtriert und die Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der Rest wurde durch einen Stopfen (6@ × 2@) Silicagel gefiltert unter Verwendung einer Lösung von 97% Hexan/Ethylacetat. Nach Entfernung des Lösungsmittels wurde der Rest unter Vakuum (3 Torr) auf 170°C 1 Stunde erwärmt, um eine niedrigsiedende Unreinheit zu entfernen. Das verbliebene Material ist die Titelverbindung.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·1,09 (s, 9H), 4,70 (s, 2H), 7,20 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 7,35–7,45 (m, 8H), 7,65 (überlappend ds, 4H).
4-[(Trimethylsilylethinyl]benzyl)-tert-butyldiphenylsilylether (Verbindung 2)
Ein 25 ml Rundbodenkolben wurde unter Hochvakuum flammgetrocknet. Das Vakuum wurde durch Zugabe von trockenem Argon gebrochen und den Kolben ließ man auf Raumtemperatur abkühlen. Der Kolben wurde mit 2,0 g (4,70 mmol) 4-Brombenzyl-tert-butyldiphenylsilylether (Verbindung 1), 2,0 ml (14,1 mmol)(Trimethylsilyl)acetylen und 16,5 ml Triethylamin beladen. Die Lösung wurde mit Argon 15 Minuten gespült und Bis(triphenylphosphin)palladium(II)-chlorid (83 mg, 0,12 mmol) und Kupfer(I)-iodid (22 mg, 0,12 mmol) wurden zugesetzt und die Lösung bei Umgebungstemperatur 3 Tage gerührt. Die Lösung wurde in einen Trenntrichter, enthaltend Wasser und Ether, gegossen. Die Schichten wurden getrennt und die wässrige Schicht dreimal mit Ether extrahiert. Die kombinierten Etherschichten wurden einmal mit Sole gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet und die Lösungsmittel wurden bei reduziertem Druck entfernt. Der Rest wurde durch Destillation (Siedepunkt = 180°C 185°C, 1 Torr) gereinigt, um die Titelverbindung zu erhalten.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·0,23 (s, 9H), 1,09 (s, 9H), 4,73 (s, 2H), 7,23 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 7,31–7,45 (m, 8H), 7,65 (überlappend ds, 4H).
(Z)-4-[2-(3,5,5,8,8-Pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzylalkohol (Verbindung 3) Allgemeines Verfahren A
Ein Dreihals 25 ml -Rundbodenkolben wurde mit einem Rückflusskondensator ausgerüstet und unter Hochvakuum flammgetrocknet. Das Vakuum wurde durch Zugabe von trockenem Argon (3x) gebrochen und man ließ den Kolben auf Raumtemperatur abkühlen. Der Kolben wurde mit 0,5 ml (1,0 mmol) Boranmethylsulfid und THF (0,3 ml) beladen und auf 0°C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 0,20 ml (2 mmol) Cyclohexen behandelt und bei 0°C 1 Stunde gerührt. Reines 4-[(Trimethylsilyl)ethinyl]benzyl-tert-butyldiphenylsilylether (Verbindung 2,443 mg, 1 mmol) wurde zugefügt und nach 15 Minuten wurde die Lösung auf Raumtemperatur erwärmt und 2,25 Stunden gerührt. In einem zweiten Kolben wurde eine Lösung aus Tetrakis(triphenylphosphin)palladium (0)(58 mg, 0,05 mmol) und 2-Brom-3,5,5,8,8-pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin (1,26 g, 4,5 mmol) in 5 ml THF hergestellt, das mit Argon 10 Minuten gespült wurde. Die Lösungsmittel im ersten Kolben wurden unter Hochvakuum entfernt und der Rest in 1 ml THF und 1 ml 2 M wässrigem NaOH gelöst und die resultierende Lösung wurde 10 Minuten mit Argon gespült. Ein 1 ml Aliquot der Lösung aus dem zweiten Kolben wurde zu dem ersten Kolben zugefügt und die Reaktion wurde vor Licht geschützt und 5 Stunden im Rückfluss erwärmt. Die Reaktion wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und mit 2 M NaOH (1 ml) und 30% Wasserstoffperoxid (0,4 ml) behandelt. Die Lösung wurde in einen Trenntrichter gegossen, der Wasser und Pentan enthielt. Die Schichten wurden getrennt und die wässrige Schicht wurde dreimal mit Pentan extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden einmal mit Sole gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet und die Lösungsmittel wurden bei reduziertem Druck entfernt. Der Rest wurde teilweise durch Silikagelchromatographie (99: 1, Hexan:Ethylacetat) gereinigt. Die letzteren Fraktionen wurden kombiniert und bei reduziertem Druck konzentriert. Der Rest (203 mg) wurde in 3,2 ml THF gelöst und mit 313 mg Tetrabutylammoniumfluorid (Tbaf), adsorbiert auf Silikagel (1,6 mmol Fluorid pro Gramm) behandelt. Die Suspension wurde 5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann wurde das Silikagel mit Ether gewaschen und die abgetrennten Etherextrakte wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Die gefilterten Lösungsmittel wurden bei reduziertem Druck entfernt und der Rest durch Silikagelchromatographie (4:1, Hexan:Ethylacetat) zum Erhalt der Titelverbindung gereinigt.
PNMR (300 MHz, CDCl₃) – 0,10 (s, 9H), 1,29 (s, 12H), 1,68 (s, 4H), 2,24 (s, 3H), 4,72 (s, 2H), 6,87 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,35 (s, 4H).
Ethyl(Z)-4-[2-(3,5,5,8,8-pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)-vinyl]benzoat (Verbindung 4) Allgemeines verfahren B
Mangandioxid (265 mg, 2,96 mmol) wurde zu einer Lösung aus (Z)-4[2-(3,5,5,8,8-Pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzylalkohol (Verbindung 3, 60 mg, 0,15 mmol) und 3,65 ml Hexan zugefügt. Die Lösung wurde 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, das Mangandioxid abgefiltert und Hexan im Vakuum entfernt. Der Rest wurde in 2 ml Ethanol gelöst und mit Natriumcyanid (37,5 mg, 0,77 mmol) behandelt sowie mit Essigsäure (13,7 mg, 0,23 mmol). Nach 15 Minuten wurde die Lösung mit 265 mg (3,0 mmol) Mangandioxid behandelt. Die Suspension wurde 6 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und das Mangandioxid durch Filtration entfernt. Die Lösung wurde in einen Trenntrichter, enthaltend Wasser und Ether gegossen. Die Schichten wurden abgetrennt und die wässrige Schicht dreimal mit Ether extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden einmal mit Sole gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet und die Lösungsmittel wurden bei reduziertem Druck entfernt. Der Rest wurde durch Silikagelchromatographie (97:3, Hexan:Ethylacetat) zum Erhalt der Titelverbindung gereinigt.
PNMR (300 MHz, CDCl₃) – 0,11 (s, 9H), 1,28 (s, 12H), 1,41 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 1,68 (s, 4H), 2,23 (s, 3H), 4,39 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 6,86 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,41 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 8,03 (d. 2H, J = 8,5 Hz).
(Z)-4-[2-(3,5,5,8,8-Pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzoesäure (Verbindung 5) Allgemeines Verfahren C
Zu einer Lösung aus Ethyl-(Z)-4-[2-(3,5,5,8,8-pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzoat (Verbindung 4, 0,034 g, 0,076 mmol) und 2 ml Ethylalkohol wurde 1 N KOH (0,5 ml) zugefügt. Die resultierende Lösung wurde in einem 50°C Bad erwärmt, bis die Hydrolysereaktion abgeschlossen war, beurteilt durch Dünnschichtchromatographie. Die Lösung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, mit Wasser verdünnt und einmal mit 1:1 Ether:Hexan-Lösung gewaschen und die Schichten getrennt. Die wässrige Schicht wurde mit 1 N wässriger HCl angesäuert und das Produkt dreimal mit Ethylacetat extrahiert. Die kombinierten organischen Extrakte wurden mit Sole gewaschen und über MgS0₄ getrocknet und gefiltert und die Lösungsmittel wurden im Vakuum entfernt, um die Titelverbindung als weißen Feststoff zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·–0,09 (s, 9H), 1,28 (s, 12H), 1,68 (s, 4H), 2,24 (s, 3H), 6,86 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,46 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 8,11 (d, 2H, J = 8,1 Hz).
(Z)-4[2-(5,5,8,8-Tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzylalkohol (Verbindung 6)
Folgend dem allgemeinen Verfahren A wurden 4-[(Trimethylsilyl)ethinyl]benzyl-tert-butyldiphenylsilylether (Verbindung 2, 0,898, 2,0 mmol) und 2-Brom-5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin (0,60 g, 2,25 mmol) gekoppelt, um die Titelverbindung zu ergeben. 2-Brom-5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin kann gemäß dem in J. Med. Chem. 34: 2930–41 (1994) beschriebenen Verfahren hergestellt werden. Das Pentamethylderivat davon kann gemäß demselben Verfahren hergestellt werden.
PNMR (300 MHz, CDCl₃) – 0,05 (s, 9H), 1,30 (s, 6H), 1,32 (s, 6H), 1,70 (s, 4H), 4,72 (s, 2H), 6,97 (dd, 1H, J = 2,0, 8,1 Hz), 7,10 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,24 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,28 (s, 1H), 7,33 (s, 4H).
Ethyl-(Z)-4-[2-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzoat (Verbindung 7)
Folgend dem allgemeinen Verfahren B wurde (Z)-4-[2-(5,5,8,8-Tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzylalkohol (Verbindung 6, 0,50 g, 1,3 mmol) oxidiert, um die Titelverbindung zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·– 0,05 (s, 9H), 1,29 (s, 6H), 1,31 (s, 6H), 1,41 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 1,69 (s, 4H), 4,39 (d, 2H, J = 7,1 Hz), 6,95 (dd, 1H, J = 2,0, 8,1 Hz), 7,09 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,24 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,27 (s, 1H), 7,38 (d, 2H, 8,3 Hz), 8,02 (d, 2H, J = 8,3 Hz).
(Z)-4-[2-(5,5,8,8-Tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzoesäure (Verbindung 8)
Folgend dem allgemeinen Verfahren C wurde Ethyl-(Z)-4-[2-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzoat (Verbindung 7, 0,205 g, 0,47 mmol) hydrolysiert, um die Titelverbindung zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃) – 0,04 (s, 9H), 1,29 (s, 6H), 1,32 (s, 6H), 1,70 (s, 4H), 6,97 (dd, 1H, J = 2,0, 8,1 Hz), 7,09 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,25 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,29 (s, 1H), 7,43 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 8,09 (d, 2H, J = 8,1 Hz).
Ethyl-4-[(trimethylsilyl)-ethinyl]benzoat (Verbindung 9)
Ein wieder versiegelbares Röhrchen wurde unter Hochvakuum flammgetrocknet. Das Vakuum wurde durch Zugabe von trockenem Argon gebrochen und den Kolben ließ man auf Raumtemperatur abkühlen. Der Kolben wurde mit 5,0 g (18,1 mmol) Ethyl-4-brombenzoat, 7,7 ml (54,3 mmol)(Trimethylsilyl)acetylen und 65 ml Diethylamin beladen. Die Lösung wurde mit Argon 15 Minuten gespült und Bis(triphenylphosphin)palladium(II)-chlorid (320 mg, 0,45 mmol) und Kupfer(I)-iodid (87 mg, 0,45 mmol) wurden zugefügt, das Röhrchen versiegelt und die Lösung bei 55°C 3 Tage gerührt. Die Lösung wurde in einen Trenntrichter, enthaltend Wasser und Ether gegossen. Die Schichten wurden abgetrennt und die wässrige Schicht dreimal mit Ether extrahiert. Die kombinierten Etherschichten wurden einmal mit Sole gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet und die Lösungsmittel bei reduziertem Druck entfernt. Der Rest wurde durch Silikagelchromatographie (95:5 Hexan:Ethylacetat) zum Erhalt der Titelverbindung gereinigt.
PNMR (300 MHz, CDCl₃) 0,26 (s, 9H), 1,39 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 4,36 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 7,51 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,97 (d, 2H, J = 8,6 Hz).
Ethyl-(Z)-4-[2-(2,2,4,4-tetramethylchroman-6-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzoat (Verbindung 10)
Folgend dem allgemeinen Verfahren A wurden Ethyl-4-[(trimethylsilyl)ethinyl]benzoat (Verbindung 9, 0,51 g, 2,0 mmol) und 6-Brom-2,2,4,4-tetramethylchroman (0,57 g, 2,25 mmol) gekoppelt, um die Titelverbindung zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·– 0,06 (s, 9H), 1,36 (s, 6H), 1,37 (s, 6H), 1,39 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 1,85 (s, 2H), 4,38 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 6,75 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,94 (dd, 1H, J = 2,3, 8,3 Hz), 7,07 (s, 1H), 7,26 (d, 1H, J = 2,3 Hz), 7,38 (d, 2H, 7,9 Hz), 8,02 (d, 2H, J = 7,9 Hz).
(Z)-4-[2-(2,2,4,4-Tetramethylchroman-6-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzoesäure (Verbindung 11)
Folgend dem allgemeinen Verfahren C wurde Ethyl-(Z)-4-[2-(2,2,4,4-tetramethylchroman-6-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]benzoat (Verbindung 10, 0,48 g, 1,1 mmol) hydrolysiert, um die Titelverbindung zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·– 0,04 (s, 9H), 1,37 (s, 6H), 1,39 (s, 6H), 1,86 (s, 2H), 6,76 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,94 (dd, 1H, J = 2,2, 8,3 Hz), 7,09 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 7,29 (s, 1H), 7,44 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 8,11 (d, 2H, J = 8,2 Hz).
(5-Hromthiophen-2-yl)methyl-tert-butyldiphenylsilylether (Verbindung 12)
Tert-butyldiphenylsilylchlorid (7,8 ml, 30,1 mmol) wurde zu einer Lösung aus 5-Brom(thiophen-2-yl)methylalkohol (4,9 g, 25,1 mmol) und 9,7 ml Dimethylformamid zugefügt. Die Lösung wurde mit Imidazol (4,29 g, 62,8 mmol) behandelt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde mit Ether verdünnt und mit 2%iger wässriger HCl gewaschen. Die Schichten wurden getrennt und die wässrige Schicht mit Ether extrahiert. Die kombinierten organischen Extrakte wurden mit Sole gewaschen und getrocknet (MgSO₄) sowie filtriert und die Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der Rest wurde durch Silikagelchromatographie (Hexan) zur Erzeugung der Titelverbindung gereinigt.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·1,10 (s, 9H), 4,80 (s, 2H), 6,56 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,38–7,50 (m, 8H), 7,70 (m, 4H).
5-[(Trimethylsilyl)ethinyl]thiophen-2-ylmethyl-tert-butyldiphenylsilylether (Verbindung 13)
Ein Rundbodenkolben wurde im Hochvakuum flammgetrocknet. Das Vakuum wurde durch Zugabe von trockenem Argon gebrochen und man ließ den Kolben auf Raumtemperatur abkühlen. Der Kolben wurde mit 2,16 g (5,0 mmol)(5-Bromthiophen-2-yl)methyl-tert-butyldiphenylsilylether (Verbindung 12), 2,12 ml (15 mmol) (Trimethylsilyl)acetylen und 17,5 ml Triethylamin beladen. Die Lösung wurde mit Argon 15 Minuten gespült und Bis(triphenylphosphin)palladium(II)-chlorid (88 mg, 0,125 mmol) und Kupfer(I)iodid (24 mg, 0,125 mmol) wurden zugefügt und die Lösung bei Umgebungstemperatur 3 Tage gerührt. Die Lösung wurde in einen Trenntrichter, enthaltend Wasser und Ether, gegossen. Die Schichten wurden getrennt und die wässrige Schicht dreimal mit Ether extrahiert. Die kombinierten Etherschichten wurden einmal mit Sole gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet und die Lösungsmittel wurden bei reduziertem Druck entfernt. Der Rest wurde durch Silikagelchromatographie (Hexan) zum Erhalt der Titelverbindung gereinigt. PNMR (300 MHz, CDCl₃)·0, 25 (s, 9H), 1,08 (s, 9H), 4,83 (s, 2H), 6,63 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 7,06 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 7,41 (m, 8H), 7,68 (überlappend ds, 4H).
(Z)-5-[2-(3,5,5,8,8-Pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]thiophen-2-ylmethylalkohol (Verbindung 14)
Folgend dem allgemeinen Verfahren A werden 5-[(Trimethylsilyl)ethinyl]thiophen-2-ylmethyl-tert-butyldiphenylsilylether (Verbindung 13, 0,75 g, 1,8 mmol) und 2-Brom-3,5,5,8,8-pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin (0,45 g, 1,67 mmol) gekoppelt, um die Titelverbindung zu erhalten.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·0,2 (s, 9H), 1,42 (s, 6H), 1,43 (s, 6H), 1,83 (s, 4H), 2,34 (s, 3H), 4,95 (s, 2H), 6,97 (s, 1H), 7,04 (s, 2H), 7,19 (s, 1H), 7,21 (s, 1H).
Ethyl-(Z)-5-[2-(3,5,5,8,8-pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]thiophen-2-carboxylat (Verbindung 15)
Folgend dem allgemeinen Verfahren B wurde (Z)-5-[2-(3,5,5,8,8-Pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]thiophen-2-ylmethylalkohol (Verbindung 14, 0,088 g, 0,213 mmol) oxidiert, um die Titelverbindung zu erhalten.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·– 0,029 (s, 9H), 1,26 (s, 6H), 1,27 (s, 6H), 1,39 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 1,67 (s, 4H), 2,17 (s, 3H), 4,35 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 6,80 (s, 1H), 7,00 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 7,02 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,69 (d, 1H, J = 3,8 Hz).
(Z)-5-[2-(3,5,5,8,8-Pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]thiophen-2-carbonsäure (Verbindung 16)
Folgend dem allgemeinen Verfahren C wurde Ethyl-(Z)-5-[2-(3,5,5,8,8-pentamethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]thiophen-2-carboxylat (Verbindung 15, 0,050 g, 0,11 mmol) hydrolysiert, um die Titelverbindung zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·0,04 (s, 9H), 1,26 (s, 6H), 1,27 (s, 6H), 1,67 (s, 4H), 2,18 (s, 3H), 7,02 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 7,05 (d, 1H, J = 4,1 Hz), 7,26 (s, 1H), 7,79 (d, 1H, J = 4,1 Hz).
(Z)-5-[2-(5,5,8,8-Tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]thiophen-2-ylmethylalkohol (Verbindung 17)
Folgend dem allgemeinen Verfahren A wurden 5-[(Trimethylsilyl)ethinyl]thiophen-2-ylmethyl-tert-butyldiphenylsilylether (Verbindung 13, 0,75 g, 1,8 mmol) und 2-Brom-5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin (0,46 g, 1,62 mmol) gekoppelt, um die Titelverbindung zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·0,2 (s, 9H), 1,42 (s, 6H), 1,43 (s, 6H), 1,83 (s, 4H), 4,95 (s, 2H), 6,97 (s, 1H), 7,04 (s, 2H), 7,19 (s, 1H), 7,21 (s, 1H).
Ethyl-(Z)-5-[2-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]thiophen-2-carboxylat (Verbindung 18)
Folgend dem allgemeinen Verfahren B wurde (Z)-5-[2-(3,5,5,8,8-Tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]thiophen-2-ylmethylalkohol (Verbindung 17, 0,30 g, 0,753 mmol) oxidiert, um die Titelverbindung zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·– 0,029 (s, 9H), 1,26 (s, 6H), 1,27 (s, 6H), 1,39 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 1,67 (s, 4H), 4,35 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 6,80 (s, 1H), 7,00 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 7,02 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,69 (d, 1H, J = 3,8 Hz).
(Z)-5-[2-(5,5,8,8-Tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]thiophen-2-carbonsäure (Verbindung 19)
Folgend dem allgemeinen Verfahren C wurde Ethyl-(Z)-5-[2-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl)-2-(trimethylsilyl)vinyl]thiophen-2-carboxylat (Verbindung 18, 0,125 g, 0,284 mmol) hydrolysiert, um die Titelverbindung zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·0,04 (s, 9H), 1,26 (s, 6H), 1,27 (s, 6H), 1,67 (s, 4H), 7,02 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 7,05 (d, 1H, J = 4,1 Hz), 7,26 (s, 1H), 7,79 (d, 1H, J = 4,1 Hz).
4-[Diethyl-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl]silylbenzylalkohol (Verbindung 20)
Zu einer Lösung bei –78°C wurde 2-Brom-5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin (1,34 g, 5,0 mmol) in 6,9 ml THF wurde n-Butyllithium (1,6 M, 3,13 ml, 5,0 mmol) zugefügt. Nach 10 Minuten wurde die Lösung über eine Kanüle zu einer –78°C-Lösung von Diethyldichlorsilan (0,61 ml, 5,0 mmol) und THF (4,4 ml) zugefügt und das Rühren 1 Stunde fortgesetzt. In einem zweiten Kolben, enthaltend 4-Brombenzyl-tert-butyldiphenylsilylether (Verbindung 1, 3,19 g, 7,5 mmol) und THF (2 ml) bei –78°C wurde n-Butyllithium (1,6 M, 4,69 ml, 7,5 mmol) zugefügt. Nach 10 Minuten wurde der Inhalt des zweiten Kolbens über eine Kanüle zum ersten Kolben zugefügt. Nach 30 Minuten bei –78°C wurde die Reaktion durch Zugabe von 5 ml gesättigtem wässrigem NH₄Cl gelöscht. Die Lösung wurde in einen Trenntrichter, enthaltend Wasser und Hexan, gegossen. Die Schichten wurden getrennt und die wässrige Schicht wurde dreimal mit Hexan extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden einmal mit Sole gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet und die Lösungsmittel bei reduziertem Druck entfernt. Der Rest wurde in 20 ml THF gelöst und mit 3,2 g Tetrabutylammoniumfluorid (Tbaf), adsorbiert an Silikagel (1 bis 1,6 mmol Fluorid pro Gramm) behandelt. Die Suspension wurde 5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann wurde das Silikagel mit Ether gewaschen und die abgetrennten Etherextrakte wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Die gefilterten Lösungsmittel wurden bei reduziertem Druck entfernt und der Rest durch Silikagelchromatographie (9:1, Hexan:Ethylacetat) zum Erhalt der Titelverbindung gereinigt.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·0,91–1,06 (m, 10H), 1,25 (s, 6H), 1,28 (s, 6H), 1,68 (s, 4H), 4,70 (s, 2H), 7,22–7,25 (überlappend ds, 2H), 7,35 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,44 (s, 1H), 7,53 (d, 1H, J = 8,1 Hz).
Ethyl-4-[diethyl(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl]silylbenzoat (Verbindung 21)
Folgend dem allgemeinen Verfahren B wurde 4-[Diethyl-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-
Verbindung 21 tetrahydronaphthalin-2-yl]silylbenzylalkohol (Verbindung 20, 1,25 g, 3,30 mmol) oxidiert, um die Titelverbindung zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃) 0,99–1,09 (m, 10H), 1,24 (s, 6H), 1,28 (s, 6H), 1, 39 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 1, 67 (s, 4H), 4, 37 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 7,22–7,29 (überlappend ds, 2H), 7,42 (s, 1H), 7,60 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 8,00 (d, 1H, J = 8,1 Hz).
4-[Diethyl)-5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl]silylbeazoesäure (Verbindung 22)
Verbindung 22
Folgend dem allgemeinen Verfahren C wurde Ethyl-4-[diethyl(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin-2-yl]silylbenzoat (Verbindung 21, 0,650 g, 1,54 mmol) hydrolysiert, um die Titelverbindung zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃)·0,99–1,10 (m, 10H), 1,25 (s, 6H), 1,28 (s, 6H), 1,68 (s, 4H), 7,22–7,30 (überlappend ds, 2H), 7,42 (s, 1H), 7,64 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 8,07 (d, 1H, J = 8,1 Hz).
4-[(Z)-(5,5-Dimethyl-8-p-tolyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl)trimethylsilanylvinyl]benzylalkohol (Verbindung 23)
Verbindung 23
Folgend dem allgemeinen Verfahren A wurden 4-[(Trimethylsilyl)ethinyl]benzyl-tert-butyldiphenylsilylether und 6-Brom-1,1-dimethyl-4-p-tolyl-1,2-dihydronaphthalin (hergestellt wie beschrieben in Klein, et al., US-Patent 5,952,345) gekoppelt, um die Titelverbindung (Verbindung 23) zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃): δ 0,13 (s, 9H), 1,47 (s, 6H), 2,48 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 2,54 (s, 3H), 4,82 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 6,10 (t, 7 = 4,4 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,18 (dd, J = 2,2, 7,9 Hz, 1H), 7,30–7,45 (m, 10H).
Ethyl(Z)-4-[(5,5-Dimethyl-8-p-tolyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl)trimethylsilanylvinyl]benzoat (Verbindung 24)
Verbindung 24
Folgend dem allgemeinen Verfahren B wurde 4-[(Z)-(5,5-Dimethyl-8-p-tolyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl)trimethylsilanylvinyl]benzylalkohol oxidiert, um die Titelverbindung (Verbindung 24) zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃): (Verbindung 34) 0,0 (s, 9H), 1,47 (s, 6H), 1,53 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 2,48 (d, J = 4,7 Hz, 2H), 2,54 (s, 3H), 4,50 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 6,10 (t, J = 4,7 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,17 (dd, J = 2,0, 7,9 Hz, 1H), 7,30–7,54 (m, 8H), 8,11 (d, J = 8,2 Hz, 2H).
(Z)-4-[(5,5-Dimethyl-8-p-tolyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl)trimethylsilanylvinyll-benzoesäure (Verbindung 25)
Verbindung 25
Folgend dem allgemeinen Verfahren C wurde Ethyl-(Z)-4-[(5,5-dimethyl-8-p-tolyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl)trimethylsilanylvinyl]benzoat hydrolysiert, um die Titelverbindung (Verbindung 25) zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃): δ 0,0 (s, 9H), 1,47 (s, 6H), 2,48 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 2,54 (s, 3H), 6,10 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,16 (dd, J = 2,0, 7,9 Hz, 1H), 7,30–7,60 (m, 8H), 8,15 (d, J = 8,3 Hz, 2H).
(Z)-[4-(5,5-Dimethyl-8-phenyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl)trimethylsilanylvinyl]-benzylalkohol (Verbindung 26)
Verbindung 26
Folgend dem allgemeinen Verfahren A wurden 4-[(Trimethylsilyl)ethinyl]benzyl-tert-butyldiphenylsilylether und 6-Brom-1,1-dimethyl-4-phenyl-1,2-dihydronaphthalin (die gemäß dem von Klein, et al., US-Patent 5,952,345 beschriebenen Verfahren hergestellt werden können), gekoppelt, um die Titelverbindung zu ergeben (Verbindung 26).
PNMR (300 MHz, CDCl₃): δ 0,0 (s, 9H), 1,49 (s, 6H), 2,50 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 4,80 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 6,13 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,21 (dd, J = 2,2, 7,9 Hz, 1H), 7,31–7,60 (m, 7H).
Ethyl-(Z)-4-[(5,5-dimethyl-8-phenyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl)trimethylsilanyl-vinyl]benzoat (Verbindung 27)
Verbindung 27
Folgend dem allgemeinen Verfahren B wurde (Z)-4-[(5,5-Dimethyl-8-phenyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl)trimethylsilanylvinyl]benzylalkohol oxidiert, um die Titelverbindung (Verbindung 27) zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃): δ 0,0 (s, 9H), 1,50 (s, 6H), 1,55 (t, J = Q7,4 Hz, 3H), 2,51 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 4,52 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 6,15 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,21 (dd, J = 2,2, 7,9 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,40–7,60 (m, 7H), 8,12 (d, J = 8,3 Hz, 2H).
(Z)-4-[(5,5-Dimethyl-8-phenyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl)trimethylsilanylvinyl]-benzoesäure (Verbindung 28)
Verbindung 28
Folgend dem allgemeinen Verfahren C wurde Ethyl-(Z)-4-[(5,5-dimethyl-8-phenyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl)trimethylsilanylvinyl]benzoat hydrolysiert, um die Titelverbindung (Verbindung 28) zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃): δ 0,13 (s, 9H), 1,49 (s, 6H), 2,50 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 6,13 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 1,7, 7,9 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,39–7,54 (m, 8H), 8,17 (d, J = 8,4 Hz, 2H).
(Z)-4-{[8-(4-tert-Butylphenyl)-5,5-dimethyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl]-trimethylsilanylvinyl}-benzylalkohol (Verbindung 29)
Verbindung 29
Folgend dem allgemeinen Verfahren A wurden 4-[(Trimethylsilyl)ethinyl]benzyl-tert-butyldiphenylsilylether und 6-Brom-4-(tert-butylphenyl)-1,1-dimethyl-1,2-dihydronaphthalin (die gemäß dem von Klein, et al., US-Patent 5,952,345 beschriebenen Verfahren hergestellt werden können) gekoppelt, um die Titelverbindung (Verbindung 29) zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃): δ 0,0 (s, 9H), 1,48 (s, 6H), 1,51 (s, 9H), 2,49 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 4,82 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 6,13 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,22 (dd, J = 1,7, 7,9 Hz, 1H), 7,30–7,50 (m, 8H), 7,55 (d, J = 8,8 Hz, 2H).
Ethyl-(Z)-4-{[8-(4-tert-butylphenyl)-5,5-dimethyl-5,6-dihydronapthalin-2-yl]trimethylsilanylvinyl}benzoat (Verbindung 30)
(Verbindung 30)
Folgend dem allgemeinen Verfahren B wurde (Z)-4-{[8-(4-tert-Butylphenyl)-5,5-dimethyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl]trimethylsilanylvinyl}benzylalkohol oxidiert, um die Titelverbindung (Verbindung 30) zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃): δ 0,0 (s, 9H), 1,49 (s, 15H), 1,53 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 2,50 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 4,51 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 6,13 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 2,2, 8,0 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,40–7,54 (m, 7H), 8,12 (d, J = 8,4 Hz, 2H).
(Z)-4-{[8-(4-tert-Hutylphenyl)-5,5-dimethyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl]-trimethylsilanylvinyl}-benzoesäure (Verbindung 31)
(Verbindung 31)
Folgend dem allgemeinen Verfahren C wurde Ethyl-(Z)-4-{[8-(4-tert-butylphenyl)-5,5-dimethyl-5,6-dihydronaphthalin-2-yl]-trimethylsilanylvinyl}-benzoat hydrolysiert, um die Titelverbindung (Verbindung 31) zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃): δ 0,0 (s, 9H), 1,49 (s, 15H), 2,50 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 6,13 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 2,2, 7,9 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,44–7,54 (m, 7H), 8,18 (d, 8,4 Hz, 2H).
(Z)-4-[2-(3,5-Di-tert-butylphenyl)-2-trimethylsilanylvinyl]-benzylalkohol (Verbindung 32)
(Verbindung 32)
Folgend dem allgemeinen Verfahren A wurden 4-[(Trimethylsilyl)ethinyl]benzyl-tert-butyldiphenylsilylether und 1-Brom-3,5-di-tert-butylbenzol (die gemäß dem von Komen und Bickel, Synth. Commun, 1996, 26, 1693–1698 beschriebenen Verfahren hergestellt werden können) gekoppelt, um die Titelverbindung (Verbindung 32) zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7,40 (s, 4H), 7,33 (s, 2H), 7,08 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 4,78 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 1,41 (s, 18H), 0,00 (s, 9H).
Ethyl-4-[2-(3,5-di-tert-butylphenyl)-2-trimethylsilanylvinyl]benzoat (Verbindung 33)
(Verbindung 33)
Folgend dem allgemeinen Verfahren B wurde (Z)-4-[2-(3,5-Di-tert-butylphenyl)-2-trimethylsilanylvinyl]benzylalkohol oxidiert, um die Titelverbindung (Verbindung 33) zu ergeben.
PNMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,08 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,32 (m, 2H), 7,07 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 4,45 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,47 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,41 (s, 18H), 0,00 (s, 9H).
4-[2-(3,5-Di-tert-butylphenyl)-2-trimethylsilanylvinyl]-benzoesäure (Verbindung 34)
(Verbindung 34)
Folgend dem allgemeinen Verfahren C wurde Ethyl-4-[2-(3,5-Di-tert-butylphenyl)-2-trimethylsilanylvinyl]-benzoat hydrolysiert, um die Titelverbindung (Verbindung 34) zu ergeben.
PNMR (300 MHz, Aceton-d₆) δ 8,09 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,39 (m, 2H), 7,13 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 1,39 (s, 18H), 0,00 (s, 9H).
Die hier dargestellten Beispiele sollen nur illustrativ sein, jedoch nicht den Umfang der Erfindung begrenzen, der sich ausschließlich durch die Ansprüche definiert, die diese Beschreibung beenden.
SEQUENZPROTOKOLL

Claims

Verwendung eines synthetischen FXR-Liganden, der in der Lage ist, die Aktivität von FXR-Rezeptor aus Säugetieren zu stimulieren, zu blockieren oder zu inhibieren, wobei der synthetische FXR-Ligand eine Verbindung der Formel umfaßt, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Formel (1), (3) und (4)
worin die gestrichelte Linie eine Bindung oder Abwesenheit einer Bindung darstellt; X ist S, O, NR', worin R' H oder ein Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist oder X ist (C(R₁)₂)_n, worin R₁ H oder ein Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist und n ist eine ganze Zahl mit einem Wert von 0 oder 1; R₂ ist Wasserstoff, ein Niederalkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, F, Cl, Br, I, CF₃, ein fluorsubstituiertes Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, OH, SH, ein Alkoxy mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder ein Alkylthio mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen, Benzyloxy oder C₁-C₁₂-Alkylbenzyloxy; R₃ ist Wasserstoff, ein Niederalkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder F; m ist eine ganze Zahl mit einem Wert von 0 bis 3 in den Formeln (1) und (3) und 0 bis 5 in Formel (4); o ist eine ganze Zahl mit einem Wert von 0 bis 4, wenn die gestrichelte Linie die Abwesenheit einer Bindung darstellt, und 0 bis 3, wenn die gestrichelte Linie eine Bindung darstellt; R'₃ ist Wasserstoff, ein Niederalkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, F oder (R₁₅)_r-Phenyl, (R₁₅)_r-Naphthyl oder (R₁₅)_r-Heteroaryl, worin die Heteroarylgruppe 1 bis 3 Heteroatome aufweist, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus O, S und N, r ist eine ganze Zahl mit den Werten von 0 bis 5; R₄ ist ein Alkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen oder Phenyl; Y ist eine Phenyl- oder Naphthylgruppe oder ein Heteroaryl, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Pyridyl, Thienyl, Furyl, Pyridazinyl, Pyrimidinyl, Pyrazinyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Imidazolyl und Pyrrazolyl, wobei die Phenyl- und Heteroarylgruppen optional mit ein oder zwei R₂-Gruppen substituiert sind; R₁₅ ist unabhängig H, F, Cl, Br, I, NO₂, N(R₈)₂, NH(R₈), COR₈, NR₈CON(R₈)₂, OH, OCOR₈, OR₈, CN, eine Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen, eine fluorsubstituierte Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen, eine Alkenylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen und 1 bis 3 Doppelbindungen, eine Alkinylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen und ein bis 3 Dreifachbindungen oder eine Trialkylsilyl- oder Trialkylsilyloxygruppe, wobei die Alkylgruppen unabhängig 1 bis 6 Kohlenstoffatome aufweisen; A ist (CH₂)_q, worin q 0 bis 5 bedeutet; ein verzweigtes Niederalkyl mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, ein Cycloalkyl mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, ein Alkenyl mit 2 bis b Kohlenstoffatomen und 1 oder 2 Doppelbindungen, ein Alkinyl mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen und 1 oder 2 Dreifachbindungen; B ist Wasserstoff, COOH, NO₂, P(O)(OH)₂, P(O)(OH)OR₈, P(O)(OR₈)₂, SO₂OH, SO₂(OR₈), COOR₈, CONR₉R₁₀, -CH₂OH, CH₂OR₁₁, CH₂OCOR₁₁, CHO, CH(OR₁₂)₂, CHOR₁₃O, -COR₇, CR₇(OR₁₂)₂, CR₇OR₁₃O oder ein tri-Niederalkylsilyl, worin R₇ eine Alkyl-, Cycloalkyl- oder Alkenylgruppe mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen ist, R₈ ist eine Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen oder Trimethylsilylalkyl, worin die Alkylgruppe 1 bis 10 Kohlenstoffatome aufweist, oder eine Cycloalkylgruppe mit 5 bis 10 Kohlenstoffatomen oder R₈ ist Phenyl oder Niederalkylphenyl, R₉ und R₁₀ bedeuten unabhängig Wasserstoff, eine Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen oder eine Cycloalkylgruppe mit 5 bis 10 Kohlenstoffatomen oder Phenyl oder Niederalkylphenyl, R₁₁ ist Niederalkyl, Phenyl oder Niederalkylphenyl, R₁₂ ist Niederalkyl und R₁₃ ist ein divalenter Alkylrest mit 2 bis 5 Kohlenstoffatomen; oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz dieser Verbindung für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung eines pathologischen Zustands, der durch die FXR-abhängige Transkription eines Gens modifiziert werden kann, wobei der pathologische Zustand eine Hypercholesterinämie, eine Hypocholesterinämie, eine Hyperlipoproteinämie, Kolonkrebs oder Gallensteinbildung bei einem Säuger ist.
Verwendung gemäß Anspruch 1, worin X (C(R₁)₂)n bedeutet und n ist 1.
Verwendung gemäß Anspruch 1, worin X S bedeutet.
Verwendung gemäß Anspruch 1, worin X O bedeutet.
Verwendung gemäß Anspruch 1, worin X NR bedeutet.
Verwendung gemäß Anspruch 1, worin Y Phenyl bedeutet.
Verwendung gemäß Anspruch 1, worin Y Thienyl bedeutet.
Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei die Verbindung eine aus Formel (1) ausgewählte Struktur aufweist.
Verwendung gemäß Anspruch 8, wobei die Verbindung eine Struktur von Formel (1) aufweist, wobei die gestrichelte Linie die Abwesenheit einer Bindung darstellt.
Verwendung gemäß Anspruch 8, wobei die Verbindung eine Struktur von Formel (1) aufweist, wobei die gestrichelte Linie eine Bindung darstellt.
Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei die Verbindung eine aus den Formeln (3) und (4) aufgewählte Struktur aufweist.
Verwendung gemäß Anspruch 11, wobei die Verbindung eine Struktur von Formel (3) aufweist, wobei die gestrichelte Linie die Abwesenheit einer Bindung darstellt.
Verwendung gemäß Anspruch 11, wobei die Verbindung eine Struktur von Formel (3) aufweist, wobei die gestrichelte Linie eine Bindung darstellt.
Verwendung eines synthetischen FXR-Liganden, der die Aktivität von FXR-Rezeptor aus Säugern stimulieren, blockieren oder inhibieren kann, wobei der synthetische FXR-Ligand eine Verbindung der Formel umfaßt:
worin R₂ H oder Methyl ist, R₄ ist ein Niederalkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, Y ist Phenyl oder Thienyl und B ist CH₂OH oder COOR₈, worin R₈ H oder Ethyl ist, für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung eines pathologischen Zustands, der durch die FXR-abhängige Transkription eines Gens modifiziert werden kann, wobei der pathologische Zustand eine Hypercholesterinämie, eine Hypocholesterinämie, eine Hyperlipoproteinämie, Kolonkrebs oder Gallensteinbildung bei einem Säuger ist.
Verwendung gemäß Anspruch 14, worin R₄ Methyl ist.
Verwendung gemäß Anspruch 15, worin Y Phenyl ist.
Verwendung gemäß Anspruch 16, worin R₂ H ist.
Verwendung gemäß Anspruch 17, worin B CH₂OH ist.
Verwendung gemäß Anspruch 17, worin B COOR₈ ist.
Verwendung gemäß Anspruch 16, worin R₂ CH₃ ist.
Verwendung gemäß Anspruch 20, worin B CH₂OH ist.
Verwendung gemäß Anspruch 20, worin B COOR₈ ist.
Verwendung gemäß Anspruch 15, worin Y Thienyl ist.
Verwendung gemäß Anspruch 23, worin R₂ H ist.
Verwendung gemäß Anspruch 24, worin B CH₂OH ist.
Verwendung gemäß Anspruch 24, worin B COOR₈ ist.
Verwendung eines synthetischen FXR-Liganden, der die Aktivität von FXR-Rezeptor von Säugern stimulieren, blockieren oder inhibieren kann, wobei der synthetische FXR-Ligand eine Verbindung der Formel umfaßt:
worin R₂ H oder Methyl ist, R₄ ist ein Niederalkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen und B ist CH₂OH oder COOR₈, worin R₈ H oder Ethyl ist, für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung eines pathologischen Zustands, der durch die FXR-abhängige Transkription eines Gens modifiziert werden kann, wobei der pathologische Zustand eine Hypercholesterinämie, eine Hypocholesterinämie, eine Hyperlipoproteinämie, Kolonkrebs oder Gallensteinbildung bei einem Säuger ist.
Verwendung gemäß Anspruch 27, worin R₂ H ist.
Verwendung gemäß Anspruch 28, worin B CH₂OH ist.
Verwendung gemäß Anspruch 29, worin B COOR₈ ist.
Verwendung eines FXR-Antagonisten oder inversen Agonisten ausgewählt aus den Formeln (1), (3) und (4):
worin die gestrichelte Linie eine Bindung oder Abwesenheit einer Bindung darstellt; X ist S, O, NR', worin R' H oder ein Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist oder X ist (C(R₁)₂)_n, worin R₁ H oder ein Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist und n ist eine ganze Zahl mit einem Wert von 0 oder 1; R₂ ist Wasserstoff, ein Niederalkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, F, Cl, Br, I, CF₃, ein fluorsubstituiertes Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, OH, SH, ein Alkoxy mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder ein Alkylthio mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen, Benzyloxy oder C₁-C₁₂-Alkylbenzyloxy; R₃ ist Wasserstoff, ein Niederalkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder F; m ist eine ganze Zahl mit einem Wert von 0 bis 3 in den Formeln (1) und (3) und 0 bis 5 in Formel (4); o ist eine ganze Zahl mit einem Wert von 0 bis 4, wenn die gestrichelte Linie die Abwesenheit einer Bindung darstellt, und 0 bis 3, wenn die gestrichelte Linie eine Bindung darstellt; R'₃ ist Wasserstoff, ein Niederalkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, F oder (R₁₅)_r-Phenyl, (R₁₅)_r-Naphthyl oder (R₁₅)_r-Heteroaryl, worin die Heteroarylgruppe 1 bis 3 Heteroatome aufweist, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus O, S und N, r ist eine ganze Zahl mit den Werten von 0 bis 5; R₄ ist ein Alkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen oder Phenyl; Y ist eine Phenyl- oder Naphthylgruppe oder ein Heteroaryl, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Pyridyl, Thienyl, Furyl, Pyridazinyl, Pyrimidinyl, Pyrazinyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Imidazolyl und Pyrrazolyl, wobei die Phenyl- und Heteroarylgruppen optional mit ein oder zwei R₂-Gruppen substituiert sind; R₁₅ ist unabhängig H, F, Cl, Br, I, NO₂, N(R₈)₂, NH(R₈), COR₈, NR₈CON(R₈)₂, OH, OCOR₈, OR₈, CN, eine Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen, eine fluorsubstituierte Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen, eine Alkenylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen und 1 bis 3 Doppelbindungen, eine Alkinylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen und ein bis 3 Dreifachbindungen oder eine Trialkylsilyl- oder Trialkylsilyloxygruppe, wobei die Alkylgruppen unabhängig 1 bis 6 Kohlenstoffatome aufweisen; A ist (CH₂)_q, worin q 0 bis 5 bedeutet; ein verzweigtes Niederalkyl mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, ein Cycloalkyl mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, ein Alkenyl mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen und 1 oder 2 Doppelbindungen, ein Alkinyl mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen und 1 oder 2 Dreifachbindungen; B ist Wasserstoff, COOH, NO₂, P(O)(OH)₂, P(O)(OH)OR₈, P(O)(OR₈)₂, SO₂OH, SO₂(OR₈), COOR₈, CONR₉R₁₀, -CH₂OH, CH₂OR₁₁, CH₂OCOR₁₁, CHO, CH(OR₁₂)₂, CHOR₁₃O, -COR₇, CR₇(OR₁₂)₂, CR₇OR₁₃O oder ein tri-Niederalkylsilyl, worin R₇ eine Alkyl-, Cycloalkyl- oder Alkenylgruppe mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen ist, R₈ ist eine Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen oder Trimethylsilylalkyl, worin die Alkylgruppe 1 bis 10 Kohlenstoffatome aufweist, oder eine Cycloalkylgruppe mit 5 bis 10 Kohlenstoffatomen oder R₈ ist Phenyl oder Niederalkylphenyl, R₉ und R₁₀ bedeuten unabhängig Wasserstoff, eine Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen oder eine Cycloalkylgruppe mit 5 bis 10 Kohlenstoffatomen oder Phenyl oder Niederalkylphenyl, R₁₁ ist Niederalkyl, Phenyl oder Niederalkylphenyl, R₁₂ ist Niederalkyl und R₁₃ ist ein divalenter Alkylrest mit 2 bis 5 Kohlenstoffatomen; oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz dieser Verbindung für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung eines Säugers mit Hypercholesterinämie.
Verwendung eines synthetischen FXR-Liganden, der die Aktivität von FXR-Rezeptor aus Säugern stimulieren, blockieren oder inhibieren kann, wobei der synthetische FXR-Ligand die Formel aufweist:
worin R₂ H oder Niederalkyl ist, R₄ ist ein Niederalkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen und B ist CH₂OH oder COOR₈, worin R₈ H oder Ethyl ist, für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung eines pathologischen Zustands, der durch die FXR-abhängige Transkription eines Gens modifiziert werden kann, wobei der pathologische Zustand eine Hypercholesterinämie, eine Hypocholesterinämie, eine Hyperlipoproteinämie, Kolonkrebs oder Gallensteinbildung bei einem Säuger ist.
Verwendung gemäß Anspruch 31, worin R₂ H und R₄ Ethyl ist.
Verwendung gemäß Anspruch 31, worin B CH₂OH ist.
Verwendung gemäß Anspruch 31, worin B COOR₈ ist.