DE60015187T2

DE60015187T2 - Urotensin-ii rezeptorantagonisten

Info

Publication number: DE60015187T2
Application number: DE60015187T
Authority: DE
Inventors: Dashyant Dhanak; David Steven KNIGHT; Lee Gregory WARREN; Jian Jin; L. Katherine WIDDOWSON; McCulloch Richard KEENAN
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1999-12-21
Filing date: 2000-12-19
Publication date: 2005-02-17
Anticipated expiration: 2020-12-20
Also published as: EP1246619A4; JP2003518059A; EP1246619B1; EP1246619A1; ATE279923T1; WO2001045700A1; ES2225297T3; DE60015187D1; US6514970B1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft allgemein Pyrrolidine, Arzneimittel, die sie enthalten, und ihre Verwendung als Urotensin-II-Antagonisten.
Die integrierte Kontrolle der kardiovaskulären Homöostase wird durch eine Kombination aus sowohl direkter neuronaler Kontrolle als auch systemischer neurohormoneller Aktivierung erreicht. Obwohl die resultierende Freisetzung von sowohl kontraktilen als auch relaxierenden Faktoren normalerweise streng geregelt ist, kann eine Abweichung von diesem status quo zu einer kardiohämodynamischen Dysfunktion mit pathologischen Folgen führen.
Die vasoaktiven Hauptfaktoren bei Säugern, die diese neurohumorale Schiene einschließen, nämlich Angiotensin-II, Endothelin-1, Norepinephrin, funktionieren alle über eine Wechselwirkung mit den spezifischen G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCR). Urotensin-II stellt ein neues Element dieser neurohumoralen Schiene dar.
Beim Fisch besitzt dieses Peptid in diversen Endorgan-Systemen und -Geweben bedeutende hämodynamische und endokrine Wirkungen:

• glatte Muskelkontraktion sowohl vaskulären als auch nichtvaskulären Ursprungs, einschließlich Präparationen glatter Mukulatur aus dem Gastrointestinal- und Urogenitaltrakt. Bei systemischer Verabreichung von exogenem Peptid wurde sowohl eine pressorische als auch depressorische Aktivität beschrieben.
• Osmoregulation: Wirkungen, die die Modulation des transepitelialen Ionen (Na⁺, Cl^–)-Transports umfassen. Obwohl eine diuretische Wirkung beschrieben wurde, wird postuliert, dass eine solche Wirkung gegenüber den direkten renovaskulären Wirkungen (GFR erhöht) sekundär ist.
• Metabolismus: Urotensin-II beeinflusst die Prolaktin-Sekretion und zeigt beim Fisch eine lipolytische Wirkung (Aktivieren von Triacylglycerinlipase führt zur Mobilisierung von nicht veresterten freien Fettsäuren). (Pearson, et. al. Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 1980, 77, 5021: Conlon, et. al. J. Exp. Zool. 1996, 275, 226.)

Bei Studien mit menschlichem Urotensin-II wurde festgestellt, dass es:

• ein extrem potenter und wirksamer Vasokonstriktor war
• eine lang anhaltende Kontraktionsaktivität aufwies, die gegenüber einem Auswaschen äußerst beständig war
• eine lang anhaltende Kontraktionsaktivität aufwies, die gegenüber einem Auswaschen äußerst beständig war
• nachteilige Wirkungen auf die Herzleistung (Myokard-Kontraktilität) aufwies.

Menschliches Urotensin-II wurde an der aus Ratten isolierten Aorta auf die Kontraktionsaktivität bewertet, und es wurde gezeigt, dass es der potenteste, bisher identifizierte Kontraktionsagonist ist. Auf der Grundlage der in vitro Pharmakologie und des hämodynamischen in vivo Profils von menschlichem Urotensin-II spielt es bei kardiovaskulären Krankheiten, die durch eine übermäßige oder abnorme Vasokonstriktion und eine myokardiale Dysfunktion gekennzeichnet sind, eine pathologische Rolle (Ames et. al. Nature 1999, 401, 282). Verbindungen, die den Urotensin-II-Rezeptor antagonisieren, können bei der Behandlung von kongestiver Herzinsuffizienz (dekompensierter Herzinsuffizienz), Schlaganfall, ischämischer Herzerkrankung (Angina, Myokardischämie), Herzrhythmusstörung, Hypertonie (essentiell und pulmonal), COPD, Restenose, Asthma, (Hay DWP, Luttmann MA, Douglas SA: 2000, Br J Pharmacol: im Druck), neurogener Entzündung und metabolischen Vaskulopathien, die alle durch eine abnorme Vasokonstriktion und/oder myokardiale Dysfunktion gekennzeichnet sind, geeignet sein. Da U-II und GPR 14 beide im Säuger-ZNS exprimiert werden (Ames et. al. Nature 1999, 401,282), können sie auch bei der Behandlung von Abhängigkeit, Schizophrenie, Impulsivität, Angst, Stress; Depression und neuromuskulärer Funktion geeignet sein. Die funktionalen U-II-Rezeptoren werden in Rhabdomyosarcom-Zelllinien exprimiert und können darum onkologische Indikationen besitzen. Urotensin kann auch an verschiedenen Stoffwechselerkrankungen, wie Diabetes, beteiligt sein (Ames et. al. Nature 1999, 401, 282, Nothacker et. al. Nature Cell Biology 1: 383–385, 1999).
WO 98/50934 offenbart Pyrrolidinverbindungen, einschließlich 1-(4-(3-(N,N-Dimethylamino)propoxy)benzyl-(3S)-[[N^α-(2-naphthylcarbonyl)-L-leucinyl]amino]pyrrolidin, als Inhibitoren von Cathepsin K und dass diese Verbindungen zur Behandlung von Krankheiten geeignet sind, bei denen eine Hemmung der Knochenresorption indiziert ist.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Bei einer Ausführungsform stellt die Erfindung Pyrrolidine und Arzneimittel, die sie enthalten, bereit.
Bei einer zweiten Ausführungsform stellt die Erfindung die Verwendung von Pyrrolidinen bei der Herstellung eines Medikaments bereit, das als Antagonist von Urotensin-II und als Inhibitor von Urotensin-II wirksam ist.
Bei einer anderen Ausführungsform stellt die Erfindung die Verwendung von Pyrrolidinen bei der Herstellung eines Medikaments bereit, das zur Behandlung von Zuständen wirksam ist, die mit einem Urotensin-Ungleichgewicht zusammenhängen.
Bei wieder einer anderen Ausführungsform stellt die Erfindung die Verwendung dieser Pyrrolidinanaloga zur Herstellung eines Medikaments bereit, das zur Behandlung von kongestiver Herzinsuffizienz (dekompensierter Herzinsuffizienz), Schlaganfall, ischämischer Herzerkrankung (Angina, Myokardischämie), Herzrhythmusstörung, Hypertonie (essentiell und pulmonal), COPD, Restenose, Asthma, neurogener Entzündung und metabolischer Vaskulopathien, Abhängigkeit, Schizophrenie, Impulsivität, Angst, Stress, Depression, neuromuskulärer Funktion und Diabetes wirksam ist.
Der Urotensin-Antagonist kann allein oder in Verbindung mit einem oder mehreren anderen therapeutischen Mitteln verabreicht werden, wobei die Mittel aus der Gruppe ausgewählt sind, bestehend aus Endothelin-Rezeptorantagonisten, Angiotensin-Converting Enzym (ACE)-Inhibitoren, Vasopeptidase-Inhibitoren, Diuretika, Digoxin und dualen, nicht selektiven β-Adrenozeptor- und α₁-Adrenozeptor-Antagonisten.
Weitere Ausführungsformen und Vorteile der vorliegenden Erfindung sind weiterhin in der folgenden ausführlichen Beschreibung der bevorzugten Ausführungsformen davon beschrieben.
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung stellt Verbindungen der Formel I:
wobei:
R1 Isobutyl, Isopropyl, Benzyl, Carbamoylmethyl ist;
R2 Methyl, Phenyl, Naphthyl, Indolyl, Benzimidazolyl, Chinolinyl, Furanyl, Thiophenyl, Pyridyl, Benzofuranyl oder Benzothiophenyl ist, unsubstituiert oder substituiert mit einem oder zwei Halogenatomen, Methyl-, Methoxy- oder Methylendioxygruppen;
R3 Wasserstoff, Halogen, Methyl, Methoxy, Nitro oder 2,3-(1,3-Butadien-1,4-yl) ist;
R4 3-Dimethylaminopropyl, 2-(Pyrrolidin-1-yl)ethyl, 2-(1-Morpholin)ethyl), 2-(N-Methylanilino)ethyl, 2-(1-Piperazinyl)ethyl, 2-(1-Pyrrolidinonyl)ethyl, (1-Methylpyrrolidin-2-(S)-yl)methyl, 1-Methylpyrrolidin-3(±)-yl, 1-Benzylpiperidin-4-yl, (6-Methylpyrid-2-yl)methyl, 3-Dimethylaminobenzyl, 2(S)-(Aminocarbonyl)pyrrolidin-4(S)-yl, Pyrrolidin-3(S)-yl, Piperidin-4-yl, Pyrrolidin-3(R)-yl oder cis-4-Aminocyclohexyl ist; und
n 1 oder 2 ist;
oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon bereit.
Wenn hier verwendet, bedeuten die Begriffe "Halogen" und "Halo" Fluor, Chlor, Brom und Iod bzw. einen Fluor-, Chlor-, Brom- und Iodsubstituenten.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können ein oder mehrere asymmetrische Kohlenstoffatome enthalten und können in racemischer und optisch aktiver Form vorkommen. Alle diese Verbindungen und ihre Diastereomere werden als im Umfang der vorliegenden Erfindung betrachtet.
R₁ ist vorzugsweise Isobutyl, Isopropyl oder Benzyl.
R₂ ist vorzugsweise Phenyl, Naphthyl, Furanyl, Thiophenyl, Benzofuranyl oder Benzothiophenyl, substituiert oder unsubstituiert mit einem oder zwei Halogenatomen, Methyl-, Methoxy- oder Methylendioxygruppen.
R₃ ist vorzugsweise Wasserstoff, Halogen, Methyl oder Methoxy.
R₄ ist vorzugsweise 3-Dimethylaminopropyl, 2-(1-Piperazinyl)ethyl, 2-(1-Pyrrolidinonyl)ethyl, 1-Methylpyrrolidin-3(±)-yl, 1-Benzylpiperidin-4-yl, Pyrrolidin-3(S)-yl, Piperidin-4-yl oder Pyrrolidin-3(R)-yl.
Bevorzugte Verbindungen sind:
Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-iod-3-(2-piperazin-1-ylethoxy)benzyl]pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid;
Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[3-(3-dimethylaminopropoxy)-4-iodbenzyl]pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid;
Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-(3-dimethylaminpropoxy)benzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid;
Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-(1-benzylpiperidin-4-yloxy)-3-chlorbenzyl]pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid;
Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[3-brom-4-(3-dimethylaminpropoxy)-benzyl]pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid;
Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[3-brom-4-(1-methylpyrrolidin-3-yloxy)-benzyl]pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid;
Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-(1-benzylpiperidin-4-yloxy)-3-brombenzyl]pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid;
Benzofuran-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-(3-dimethylaminopropoxy)benzyl]pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid;
Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-[3-brom-4-(piperidin-4yloxy)benzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid; und
Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[3-brom-4-((R)-pyrrolidin-3-yloxy)benzyl]pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid.
Die Verbindungen der Formel (I) können hergestellt werden, wie in den folgenden Schemata ausgeführt: Schema 1
Bedingungen: a) 2-Nitrobenzolsulfonylchlorid, Pyridin, CH₂Cl₂, 0°C-RT; b) 4 M HCl in 1,4-Dioxan, MeOH, RT; c) 2,6-Dimethoxy-4-polystryrolbenzyloxybenzaldehyd (DMHB-Harz), Na(OAc)₃BH, Diisopropylethylamin, 1% Essigsäure in 1-Methyl-2-pyrroldinon, RT; d) Fmoc-HNCH(R₁)COOH, 1,3-Diisopropylcarbodiimid, 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol, 1-Methyl-2-pyrrolidinon, RT; e) 20% Piperidin in 1-Methyl-2-pyrrolidinon, RT; f) R₂COOH, 1,3-Diisopropylcarbodiimid, 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol, 1-Methyl-2-pyrrolidinon, RT; g) K₂CO₃, PhSH, 1-Methyl-2-pyrrolidinon, RT; h) (R3)(OH)PhCHO, Na(OAc)₃BH, 10% Essigsäure in 1-Methyl-2-pyrrolidinon, RT; i) R₄OH, Diisopropylazodicarboxylat, PPh₃, Tetrahydrofuran, –78°C-RT; j) 50% Trifluoressigsäure in 1,2-Dichlorethan, RT. (R₁, R₂, R₃ und R₄ sind wie vorstehend definiert).
Das harzgebundene Amin 3 wurde durch reduktive Aminierung von 2,6-Dimethoxy-4-polystyrolbenzyloxybenzaldehyd (DMHB-Harz) mit N-nosyliertem Diaminhydrochloridsalz 2 hergestellt, welches aus 3(S)-(–)-(tert.-Butoxycarbonylamino)pyrrolidin (1) hergestellt wurde (Schema 1). Die Umsetzungen des harzgebundenen Amins 3 mit verschiedenen Aminosäuren und die anschließende Entfernung der Schutzgruppe lieferten die harzgebundenen Amine 4. Anschließend wurden die Amine 4 mit verschiedenen Säuren unter Erhalt der entsprechenden harzgebundenen Amide umgesetzt, die sodann mit Kaliumcarbonat und Thiophenol unter Erhalt der sekundären Amine 5 behandelt wurden. Die reduktive Aminierung der harzgebundenen Amine 5 mit verschiedenen Hydroxybenzaldehyden erzeugte die harzgebundenen Phenole 6. Die Phenole 6 wurden sodann mit verschiedenen Alkoholen in Gegenwart von Triphenylphosphin und Diisopropylazodicarboxylat unter Erhalt der entsprechenden harzgebundenen Phenolether umgesetzt, die mit 50% Trifluoressigsäure in 1,2-Dichlorethan unter Erhalt der Zielverbindungen 7 behandelt wurden.
Schema 2:
Bedingungen: a) 2-Nitrobenzolsulfonylchlorid, Natriumhydrid, Tetrahydrofuran, RT, b) Ether, Wasser, 0°C; c) Bis-nosylate 8, Tetrabutylammoniumiodid, 1-Methyl-2-pyrrolidinon, RT bis 65°C; d) Kaliumtrimethylsilanolat, Tetrahydrofuran, RT; e) R₄OH, Diisopropylazodicarboxylat, PPh₃, Tetrahydrofuran, –78°C-RT; f) 50% Trifluoressigsäure in 1,2-Dichlorethan, RT.
Wie in Schema 2 gezeigt, wurden die Bis-nosylate 8 aus verschiedenen, im Handel erhältlichen oder bekannten Hydroxyphenethylalkoholen synthetisiert. Die Phenole 9 wurden durch die Reaktionen der zuvor synthetisierten Amine 5 (Schema 1) mit den Bis-nosylaten 8 in Gegenwart von Tetrabutylammoniumiodid und anschließende Hydrolyse der resultierenden Mono-nosylat-Zwischenverbindungen hergestellt. Sodann wurden die Phenole 9 mit verschiedenen Alkoholen in Gegenwart von Triphenylphosphin und Diisopropylazodicarboxylat unter Erhalt der entsprechenden harzgebundenen Phenolether umgesetzt, die mit 50% Trifluoressigsäure in 1,2-Dichlorethan unter Erhalt der Zielverbindungen 10 behandelt wurden.
Zur Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon zur Behandlung von Menschen oder anderen Säugern wird sie normalerweise nach der pharmazeutischen Standardpraxis als Arzneimittel formuliert.
Die Verbindungen der Formel (I) und ihre pharmazeutisch verträglichen Salze können auf eine Standardweise zur Behandlung der angegebenen Krankheiten beispielsweise oral, parenteral, sublingual, transdermal, rektal, über Inhalation oder durch buccale Anwendung verabreicht werden.
Die Verbindungen der Formel (I) und ihre pharmazeutisch verträglichen Salze, die bei oraler Verabreichung wirksam sind, können als Sirupe, Tabletten, Kapseln und Lutschpastillen formuliert sein. Eine Sirupformulierung besteht in der Regel aus einer Suspension oder Lösung der Verbindung oder eines Salzes in einem flüssigen Träger, beispielsweise Ethanol, Erdnussöl, Olivenöl, Glycerin oder Wasser, mit einem Geschmacks- oder Farbmittel. Wenn die Zusammensetzung in Form einer Tablette vorliegt, kann jeder pharmazeutische Träger, der routinemäßig zur Herstellung fester Formulierungen verwendet wird, verwendet werden. Beispiele für solche Träger umfassen Magnesiumsterat, Terra Alba, Talk, Gelatine, Agar Agar, Pektin, gummi arabicum, Stearinsäure, Stärke, Lactose und Saccharose. Wenn die Zusammensetzung in Form einer Kapsel vorliegt, ist jede routinemäßige Verkapselung geeignet, beispielsweise unter Verwendung der zuvor genannten Träger in einer Hartgelatine-Kapselhülle. Wenn die Zusammensetzung in Form einer Weichgelatine-Kapselhülle vorliegt, kann jeder routinemäßig zur Herstellung von Dispersionen oder Suspensionen verwendete Träger in Betracht gezogen werden, beispielsweise wässrige Gummen, Cellulosen, Silicate oder Öle, die in eine Weichgelatine-Kapselhülle eingearbeitet werden.
Typische parenterale Zusammensetzungen bestehen aus einer Lösung oder Suspension der Verbindung oder des Salzes in einem sterilen wässrigen oder nicht wässrigen Träger, der gegebenenfalls ein parenteral verträgliches Öl, beispielsweise Polyethylenglycol, Polyvinylpyrrolidon, Lecithin, Erdnussöl oder Sesamöl, enthält.
Typische Zusammensetzungen zur Inhalation liegen in Form einer Lösung, Suspension oder Emulsion vor, die als trockenes Pulver oder in Form eines Aerosols unter Verwendung eines herkömmlichen Treibmittels, wie Dichlordifluormethan oder Trichlorfluormethan, verabreicht werden kann.
Eine typische Suppositorienformulierung umfasst eine Verbindung der Formel (1) oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon, das bei Verabreichung auf diesem Wege aktiv ist, mit einem Binde- und/oder Gleitmittel, beispielsweise polymere Glycole, Gelatinen, Kakaobutter oder andere niedrig schmelzende pflanzliche Wachse oder Fette oder ihre synthetischen Analoga.
Typische transdermale Formulierungen umfassen ein herkömmliches wässriges oder nicht wässriges Vehikel, beispielsweise eine Creme, Salbe, Lotion oder Paste, oder sie liegen in Form eines wirkstoffhaltigen Pflasters, Patches oder -Membran vor.
Vorzugsweise liegt die Zusammensetzung in einer Dosierungseinheit vor, beispielsweise einer Tablette, Kapsel oder einer Dosierungsaerosoldosis, so dass der Patient sich selbst eine Einzeldosis verabreichen kann.
Jede Dosierungseinheit zur oralen Verabreichung enthält zweckmäßigerweise 0,1 bis 500 mg/kg und vorzugsweise 1 mg bis 100 mg/kg, und jede Dosierungseinheit zur parenteralen Verabreichung enthält zweckmäßigerweise 0,1 bis 100 mg einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon, berechnet als freie Säure. Jede Dosierungseinheit zur intranasalen Verabreichung enthält zweckmäßigerweise 1 bis 400 mg und vorzugsweise 10 bis 200 mg pro Person. Eine typische Formulierung enthält zweckmäßigerweise 0,01 bis 1,0% einer Verbindung der Formel (I).
Die tägliche Dosierungsvorschrift zur oralen Verabreichung beträgt zweckmäßigerweise etwa 0,01 mg/kg bis 40 mg/kg einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon, berechnet als freie Säure. Die tägliche Dosierungsvorschrift zur parenteralen Verabreichung beträgt zweckmäßigerweise etwa 0,001 mg/kg bis 40 mg/kg einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon, berechnet als freie Säure. Die tägliche Dosierungsvorschrift zur intranasalen Verabreichung und oralen Inhalation beträgt zweckmäßigerweise etwa 10 bis etwa 500 mg/Person. Der Wirkstoff kann 1 bis 6 Mal pro Tag verabreicht werden, ausreichend, um die gewünschte Wirkung zu zeigen.
Diese Pyrrolidin-Analoga können zur Behandlung von kongestiver Herzinsuffizienz (dekompensierter Herzinsuffizienz), Schlaganfall, ischämischer Herzerkrankung (Angina, Myokardischämie), Herzrhythmusstörung, Hypertonie (essentiell und pulmonal), COPD, Restenose, Asthma, neurogener Entzündung, metabolischer Vaskulopathien, Abhängigkeit, Schizophrenie, Impulsivität, Angst, Stress, Depression, neuromuskulärer Funktion oder Diabetes verwendet werden.
Der Urotensin-Antagonist kann allein oder in Verbindung mit einem oder mehreren anderen therapeutischen Mitteln verabreicht werden, wobei die Mittel aus der Gruppe ausgewählt sind, bestehend aus Endothelin-Rezeptorantagonisten, Angiotensin-Converting Enzym(ACE)-Inhibitoren, Vasopeptidaseinhibitoren, Diuretika, Digoxin und dualen, nicht selektiven (3-Adrenoceptor- und α₁-Adrenorezeptor-Antagonisten.
Bei erfindungsgemäßer Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindungen werden keine unverträglichen toxischen Wirkungen festgestellt.
Die biologische Aktivität der Verbindungen der Formel (I) wird durch die folgenden Tests gezeigt:
Radioligand-Bindung:
HEK-293-Zellmembranen, die stabil klonierte Menschen- und Ratten-GPR-14 (20 μg/Test) enthalten, wurden mit 200 pM [¹²⁵I]h-U-II (200 Ci/mmol in Gegenwart zunehmender Konzentrationen von Testverbindungen in DMSO (0,1 nM bis 10 μM) in einem Inkubationsendvolumen von 200 μl (20 mM Tris-HCl, 5 mM mgCl₂) inkubiert. Die Inkubation erfolgte 30 min bei Raumtemperatur, gefolgt von Filtration mit GF/B-Filtern mit einem Brandel-Zellerntegerät anschloss. Die Bindung von ¹²⁵I-markiertem U-II wurde durch Gamma-Zählen quantifiziert. Die nicht spezifische Bindung wurde durch ¹²⁵I-U-II-Bindung in Gegenwart von 100 nM unmarkiertem menschlichem U-II definiert. Die Analyse der Daten wurde durch die nicht lineare kleinste quadratische Anpassung durchgeführt.
Ca²⁺-Mobilisierung:
Ein Ca²⁺-Mobilisierungs-FLIPR-Test auf Mikrotiterplattenbasis (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) wurde zur Funktionsidentifizierung der Liganden, die HEK-293-Zellen aktivieren, die (stabil) rekombinantes GPR-14 exprimieren, verwendet. Am Tag nach der Transfektion wurden die Zellen auf Poly-D-Lysin beschichtete schwarze/klare Platten mit 96 Vertiefungen ausplattiert. Nach 18 bis 24 h wurde das Medium abgesaugt, und die 3AM-beladenen Fluo-Zellen wurden verschiedenen Konzentrationen (10 nM bis 30 μM) der Testverbindungen und anschließend h-U-II ausgesetzt. Nach dem Start des Tests wurde die Fluoreszenz eine Minute lang jede Sekunde und sodann in der folgenden Minute alle 3 Sekunden abgelesen. Für die verschiedenen Testverbindungen wurde die inhibitorische Konzentration bei 50% (IC50) berechnet.
Inositphosphat-Tests:
HEK-293-GPR-14-Zellen in T150-Kolben wurden über Nacht mit 1 μCi Myo-[³H]-Inosit pro ml Inosit-freiem Dulbecco modifiziertem Eagel-Medium vormarkiert. Nach dem Markieren wurden die Zellen zweimal mit Phosphat-gepufferter Dulbecco-Salzlösung (DPBS) gewaschen und sodann 10 min bei 37°C in DPBS, enthaltend 10 mM LiCl, inkubiert. Das Experiment wurde durch Zugabe steigender Konzentrationen von h-U-II (1 pM bis 1 μM) in Abwesenheit und Gegenwart von 3 verschiedenen Konzentrationen (0,3, 1 und 10 μM) der Testverbindungen gestartet und die Inkubation für zusätzliche 5 min bei 37°C fortgesetzt, wonach die Umsetzung durch Zugabe von 10% (Endkonzentration) Trichloressigsäure und Zentrifugation beendet wurde. Die Überstände wurden mit 100 μl 1M Trizma-Base neutralisiert, und die Inositphosphate wurden über AG-1-X8-Säulen (0,8 ml gepackt, 100–200 Mesh) in der Formiatphase aufgetrennt. Inositmonophosphat wurde mit 8 ml 200 mM Ammoniumformiat eluiert. Kombiniertes Inosit-di- und -triphosphat wurde mit 4 ml 1 M Ammoniumformiat/0,1 M Ameisensäure eluiert. Die eluierten Fraktionen wurden in einem Beta-Szintillationszähler gezählt. K_B wurde auf der Basis der Abweichung von der Kontrollkurve berechnet.
Die Aktivität für die erfindungsgemäßen Verbindungen reicht von (Radioliganden-Bindungstest): Ki = 1 nM–10000 nM (Beispiel: 15 Ki = 390 nM).
Beispiel 1
Herstellung von Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-(3-dimethylaminopropoxy)benzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl]}3-methylbutyl
a) 3(S)-Amino-N-(2-nitrobenzolsulfonyl)pyrrolidin-HCl-Salz
Einer Lösung von 3(S)-(–)-(tert.-Butoxycarbonylamino)pyrrolidin (20,12 g, 108 mmol) in 250 ml wasserfreiem Methylenchlorid bei 0°C wurden 13,1 ml (162 mmol) wasserfreies Pyridin zugesetzt, gefolgt von langsamer Zugabe von 25,2 g (113,4 mmol) 2-Nitrobenzolsulfonylchlorid. Das Gemisch wurde innerhalb von 1 h auf RT aufgewärmt und bei RT 16 h gerührt. Das Gemisch wurde in 300 ml wässrige 1 M NaHCO₃-Lösung gegossen. Nach 30 min Rühren des resultierenden Gemisches bei RT wurde die organische Schicht abgetrennt und zweimal mit 500 ml wässriger 1 N HCl-Lösung gewaschen. Die resultierende organische Schicht wurde über mgSO₄ getrocknet und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde im nächsten Schritt ohne weitere Reinigung verwendet.
Einem Gemisch des obigen Rückstands in 140 ml wasserfreiem MeOH wurden 136 ml (544 mmol) 4 M HCl in 1,4-Dioxan-Lösung zugesetzt. Das Gemisch wurde 16 h bei RT gerührt, in vacuo konzentriert und 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C weiter getrocknet, um das 3(S)-Amino-N-(2-nitrobenzolsulfonyl)pyrrolidin-HCl-Salz als gelben Feststoff zu erhalten (30,5 g, 92% in den zwei Stufen): ¹H-NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 8,63 (s, 3H), 8,08–7,98 (m, 2H), 7,96–7,83 (m, 2H), 3,88–3,77 (m, 1H), 3,66–3,56 (m, 2H), 3,46–3,35 (m, 2H), 2,28–2,16 (m, 1H), 2,07–1,96 (m, 1H).
b) Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-(3-dimethylaminopropoxy)benzyl]pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid
Einem Gemisch von 7,20 g (10,37 mmol, 1,44 mmol/g) 2,6-Dimethoxy-4-polystyrolbenzyloxybenzaldehyd (DMBH-Harz) in 156 ml 1% Essigsäure in wasserfreiem 1-Methyl-2-pyrrolidinon wurden 9,56 g (31,1 mmol) von Beispiel 1a und 9,03 ml (51,84 mmol) Diispropylethylamin und anschließend 11,0 g (51,84 mmol) Natriumtriacetoxyborhydrid zugesetzt. Nach 72 h Schütteln des resultierenden Gemisches bei RT wurde das Harz mit DMF (3×250 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×250 ml) und MeOH (3×250 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Elementaranalyse N: 4,16, S: 3.12.
Einem Gemisch von 800 mg (0,860 mmol, 1,075 mmol/g) des obigen Harzes in 15 ml wasserfreiem 1-Methyl-2-pyrrolidinon wurden 1,52 g (4,30 mmol) Fmoc-Leu-OH und 117 mg (0,86 mmol) 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol und anschließend 0,82 ml (5,16 mmol) 1,3-Diisopropylcarbodiimid zugesetzt. Nach 24 h Schütteln des resultierenden Gemisches bei RT wurde das Harz mit DMF (3×25 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×25 ml) und MeOH (3×25 ml) geschüttelt. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Eine analytische Menge des Harzes wurde 2 h bei RT mit 50% Trifluoressigsäure in Dichlormethan gespalten. Die resultierende Lösung wurde in vacuo konzentriert: MS (ESI) 607 [M+H]⁺.
Das obige Harz (0,860 mmol) wurde in wasserfreier 1-Methyl-2-pyrrolidinon-Lösung mit 15 ml 20% Piperidin behandelt. Nach 15 min Schütteln des Gemisches bei RT wurde die Lösung abgeschüttet, und weitere 15 ml 20% Piperidin in wasserfreier 1-Methyl-2-pyrrolidinon-Lösung wurden zugesetzt. Das Gemisch wurde weitere 15 min bei RT geschüttelt. Die Lösung wurde abgeschüttet, und das Harz wurde mit DMF (3×25 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×25 ml) und MeOH (3×25 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Eine analytische Menge des Harzes wurde 2 h bei RT mit 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan gespalten. Die resultierende Lösung wurde in vacuo konzentriert: MS (ESI) 385 [M+H]⁺.
Einem Gemisch von 200 mg (0,1918 mmol, 0,959 mmol/g) des obigen trockenen Harzes in 5 ml wasserfreiem 1-Methyl-2-pyrrolidinon wurden 267,3 mg (1,50 mmol) Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure und 41 mg (0,30 mmol) 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol und anschließend 0,28 ml (1,80 mmol) 1,3-Diisopropylcarbodiimid zugesetzt. Nach 24 h Schütteln des resultierenden Gemisches bei RT wurde das Harz mit DMF (3×10 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×10 ml) und MeOH (3×10 ml) gewaschen.
Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Eine analytische Menge des Harzes wurde 2 h bei RT mit 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan gespalten. Die resultierenden Lösung wurde in vacuo konzentriert: MS (ESI) 545 [M+H]⁺.
Einem Gemisch des obigen trockenen Harzes (0,1918 mmol) in 6,4 ml 1-Methyl-pyrrolidinon wurden 265 mg (1,918 mol) K₂CO₃ und 0,0985 ml (0,96 mmol) PhSH zugesetzt. Nach 2 h Schütteln des resultierenden Gemisches bei RT wurde das Harz mit DMF (3×10 ml), H₂O (3×10 ml), DMF (3×10 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×10 ml) und MeOH (3×10 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Eine analytische Menge des Harzes wurde 2 h bei RT mit 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan gespalten. Die resultierende Lösung wurde in vacuo konzentriert: NS (ESI) 719 [2M+H]⁺, 360 [M+H]⁺.
Einem Gemisch des obigen Harzes (0,1918 mmol) in 6,4 ml 10% HOAc in wasserfreier 1-Methyl-2-pyrrolidinon-Lösung wurden 234 mg (1,918 mmol) 4-Hydroxybenzaldehyd und 407 mg (1,918 mmol) Natriumtriacetoxyborhydrid zugesetzt. Nach 72 h Schütteln des resultierenden Gemisches bei RT wurde das Harz mit DMF (3×10 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×10 ml) und MeOH (3×10 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Eine analytische Menge des Harzes wurde 2 h bei RT mit 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan gespalten. Die resultierende Lösung wurde in vacuo konzentriert: MS (ESI) 466 [M+H]⁺.
Einem Gemisch des obigen trockenen Harzes (0,1918 mmol) in 10,7 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wurden 227 ☐1 (1,918 mmol) 3-Dimethylaminopropanol und 503 mg (1,918 mmol) Triphenylphosphin zugesetzt. Nach Abkühlen des Gemisches auf –78°C wurden dem kalten Gemisch 378 ml (1,918 mmol) Diisopropylazodicarboxylat zugesetzt. Das resultierende Gemisch wurde 30 min bei –70°C unter Schütteln gehalten. Sodann ließ man das Gemisch sich in 1 h auf 0°C aufwärmen und es wurde 16 h bei RT geschüttelt. Das Harz wurde mit DMF (3×10 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×10 ml) und MeOH (3×10 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Das trockene Harz wurde 2 h mit 4 ml 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan bei RT behandelt. Nach dem Sammeln der Spaltungslösung wurde das Harz 10 min bei RT mit weiteren 4 ml 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan behandelt. Die vereinigten Spaltungslösungen wurden in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde unter Verwendung eines halbpräparativen Gilson HPLC-Systems mit einer YMC ODS-A (C-18)-Säule, 50 mm auf 20 mm ID, unter Elution mit 10% B bis 90% B in 3,2 min, 1 min Halten, wobei A = H₂O (0,1% Trifluoressigsäure) und B = CH₃CN (0,1% Trifluoressigsäure), gepumpt mit 25 ml/min, eluiert, um Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-(3-dimethylaminopropoxy)benzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3- methylbutyl)amid als Bis-trifluoressigsäuresalz herzustellen (weißes Pulver, 101 mg, 68% in 7 Stufen): MS (ESI) 551 [M+H]⁺.
Verbindungen, die sich von Schema 1 ableiten:
Beispiel 96
Herstellung von Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure[(S)-3-methyl-1-((S)-1-{2-[4-((S)-pyrrolidin-3-yloxy)phenyl]ethyl}pyrrolidin-3-ylcarbamoyl)butyl)amid
a) 2-Nitrobenzolsulfonsäure-2-[4-(2-nitrobenzolsulfonyloxy)phenyl]ethylester
Einem Gemisch von 2,76 g (20 mmol) 4-Hydroxyphenethylalkohol in 70 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran bei RT wurden 4,8 g (200 mmol) Natriumhydrid (95%, trockenes Pulver) zugesetzt. Nach 10 min Rühren bei RT wurden 18,5 g (80 mmol) 2-Nitrobenzolsulfonylchlorid zugesetzt. Nach 16 h Rühren des resultierenden Gemisches bei RT wurden 250 ml Ether zugesetzt. Das Gemisch wurde auf 0°C abgekühlt, und dem Gemisch wurde zum Stoppen von überschüssigem Natriumhydrid langsam Wasser zugesetzt. Nach beendetem Stopp-Prozess wurden zusätzliche 300 ml Wasser zugesetzt. Der resultierenden Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt, mit Wasser gewaschen und in vacuo getrocknet, um 2-Nitrobenzolsulfonsäure-2-[4-(2-nitrobenzolsulfonyloxy)phenyl]ethylester als weißes Pulver (9,13 g, 90%) zu ergeben: MS (ESI) 509 [M+H]⁺.
b) Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure[(S)-3-methyl-1-((S)-1-{2-[4-((S)-pyrrolidin-3-yloxy)phenyl]ethyl}pyrrolidin-3-ylcarbamoyl)butyl]amid
Einem Gemisch von 7,20 g (10,37 mmol, 1,44 mmol/g) 2,6-Dimethoxy-4-polystyrolbenzyloxybenzaldehyd (DMHB-Harz) in 156 ml 1% Essigsäure in wasserfreiem 1-Methyl-2-pyrrolidinon wurden 9,56 g (31,1 mmol) von Beispiel 1a und 9,03 ml (51,84 mmol) Diisopropylethylamin und anschließend 11,0 g (51,84 mmol) Natriumtriacetoxyborhydrid zugesetzt. Nach 72 h Schütteln des resultierenden Gemisches bei RT wurde das Harz mit DMF (3×250 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×250 ml) und MeOH (3×250 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Elementaranalyse N: 4,16, S: 3,12.
Einem Gemisch von 800 mg (0,860 mmol, 1,075 mmol/g) des obigen Harzes in 15 ml wasserfreiem 1-Methyl-2-pyrrolidinon wurden 1,52 g (4,30 mmol) Fmoc-Leu-OH und 117 mg (0,86 mmol) 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol und anschließend 0,82 ml (5,16 mmol) 1,3-Diidopropylcarbodiimid zugesetzt. Nach 24 h Schütteln des resultierenden Gemisches bei RT wurde das Harz mit DMF (3×25 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×25 ml) und MeOH (3×25 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Eine analytische Menge des Harzes wurde 2 h mit 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan bei RT gespalten. Die resultierende Lösung wurde in vacuo konzentriert: MS (ESI) 607 [M+H]⁺.
Das obige Harz (0,860 mmol) wurde mit 15 ml 20% Piperidin in wasserfreier 1-Methyl-2-pyrrolidinon-Lösung behandelt. Nach 15 min Schütteln des Gemisches bei Raumtemperatur wurde die Lösung abgeschüttet, und weitere 15 ml 20% Piperidin in wasserfreier 1-Methyl-2-pyrrolidinon-Lösung wurden zugesetzt. Das Gemisch wurde für weitere 15 min bei RT geschüttelt. Die Lösung wurde abgeschüttet, und das Harz wurde mit DMF (3×25 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×25 ml) und MeOH (3×25 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Eine analytische Menge des Harzes wurde 2 h mit 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan bei RT gespalten. Die resultierende Lösung wurde in vacuo konzentriert: MS (ESI) 385 [M+H]⁺.
Einem Gemisch von 200 mg (0,1918 mmol, 0,959 mmol/g) des obigen trockenen Harzes in 5 ml wasserfreiem 1-Methyl-2-pyrrolidinon wurden 267,3 mg (1,50 mmol) Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure und 41 mg (0,30 mmol) 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol und anschließend 0,28 ml (1,80 mmol) 1,3-Diisopropylcarbodiimid zugesetzt. Nach 24 h Schütteln des resultierenden Gemisches bei RT wurde das Harz mit DMF (3×10 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×10 ml) und MeOH (3×10 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Eine analytische Menge des Harzes wurde mit 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan 2 h bei RT gespalten. Die resultierende Lösung wurde in vacuo konzentriert: MS (ESI) 545 [M+H]⁺.
Einem Gemisch des obigen trockenen Harzes (0,1918 mmol) in 6,4 ml 1-Methyl-2-pyrrolidinon wurden 265 mg (1,918 mmol) K₂CO₃ und 0,0985 ml (0,96 mmol) PhSH zugesetzt. Nach 2 h Schütteln des resultierenden Gemisches bei RT wurde das Harz mit DMF (3×10 ml), H₂O (3×10 ml), DMF (3×10 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×10 ml) und MeOH (3×10 ml) gewaschen.
Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Eine analytische Menge des Harzes wurde 2 h mit 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan bei RT gespalten. Die resultierende Lösung wurde in vacuo konzentriert: MS (ESI) 719 [2M+H]⁺, 360 [M+H]⁺.
Einem Gemisch des obigen trockenen Harzes (0,1918 mmol) in 6,4 ml wasserfreier 1-Methyl-2-pyrrolidinon-Lösung wurden 468 mg (0,959 mmol) 2-Nitrobenzolsulfonsäure-2-[4-(2-nitrobenzolsulfonyloxy)phenyl]ethylester und 708 mg (1,918 mmol) Tetrabutylammoniumiodid zugesetzt. Nach Schütteln des resultierenden Gemisches 8 Tage bei RT und anschließend 20 h bei 65°C wurde das Harz mit DMF (3×10 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×10 ml) und THF (3×10 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Eine analytische Menge des Harzes wurde mit 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan 2 h bei RT gespalten. Die resultierende Lösung wurde in vacuo konzentriert: MS (ESI) 665 [M+H]⁺.
Einem Gemisch des obigen trockenen Harzes (0,1918 mmol) in 5 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wurden 246 mg (1,918 mmol) Kaliumtrimethylsilanolat (90%) zugesetzt. Nach 16 h Schütteln des Gemisches bei RT wurde das Harz mit THF (3×10 ml) und CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 6×10 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Eine analytische Menge des Harzes wurde 2 h mit 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan bei RT gespalten. Die resultierende Lösung wurde in vacuo konzentriert: MS (ESI) 480 [M+H]⁺.
Einem Gemisch des obigen trockenen Harzes (0,1918 mmol) in 10,7 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wurden 359 mg (1,918 mmol) (R)-3-Hydroxypyrroldin-1-carbonsäure-tert.-butylester (Kucznierz, et. al. J. Med. Chem. 1998, 41, 4983–4994) und 503 mg (1,918 mmol) Triphenylphosphin zugesetzt. Nach Abkühlen des Gemisches auf –78°C wurden dem kalten Gemisch 378 μl (1,918 mmol) Diisopropylazodicarboxylat zugesetzt. Das resultierende Gemisch wurde 30 min unter Schütteln bei –70°C gehalten. Anschließend ließ man das Gemisch sich in 1 h auf 0°C aufwärmen und es wurde 16 h bei RT geschüttelt. Das Harz wurde mit DMF (3×10 ml), CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 3×10 l) und MeOH (3×10 ml) gewaschen. Das resultierende Harz wurde 24 h in einem Vakuumofen bei 35°C getrocknet. Das trockene Harz wurde 2 h mit 4 ml 50% Trifluoressigsäure in Dichlorethan bei RT behandelt. Nach Sammeln der Spaltungslösung wurde das Harz 10 min mit weiteren 4 ml 50% Essigsäure in Dichlorethan bei RT behandelt. Die vereinigten Spaltungslösungen wurden in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde unter Verwendung eines halbpräparativen Gilson-HPLC-Systems mit einer YMC-ODS-A (C-18)-Säule, 50 mm auf 20 mm ID, unter Elution mit 10% B bis 90% B in 3,2 min, 1 min Halten, wobei A = H₂O (0,1% Trifluoressigsäure) und B = CH₃CN (0,1% Trifluoressigsäure), gepumpt mit 25 ml/min, unter Herstellung von Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure[(S)-3-methyl-1-((S)-1-{2-[4-((S)-pyrrolidin-3-yloxy)phenyl]ethyl}pyrrolidin-3-ylcarbamoyl)butyl]amid als Bistrifluoressigsäuresalz (klares Öl, 22 mg, 21% über 8 Stufen) gereinigt: MS (ESI) 549 [M+H]⁺.
Verbindungen, die sich von Schema 1 ableiten:
Beispiel 119
Formulierungen zur pharmazeutischen Verwendung, die die erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen, können in verschiedenen Formen mit zahlreichen Exzipientien hergestellt werden.
Beispiele für solche Formulierungen sind nachstehend angegeben.

Tablette/Bestandteile pro Tablette

1. Wirkstoff (Verbindung der Formel I) 40 mg

2. Maisstärke 20 mg

3. Alginsäure 20 mg

4. Natriumalginat 20 mg

5. mg-Stearat 1,3 mg

2,3 mg
Verfahren für Tabletten:
Schritt 1: Mischen der Bestandteile Nr. 1, Nr. 2, Nr. 3 und Nr. 4 in einem geeigneten Mischer/Rührer.
Schritt 2: Portionsweise Zugabe von genügend Wasser zu der Mischung aus Schritt 1 mit sorgfältigem Mischen nach jeder Zugabe. Solche Zugaben von Wasser und Mischen, bis die Masse von einer Konsistenz ist, dass sie sich in nasse Granulatkörner überführen lässt.
Schritt 3: Die nasse Masse wird in Granulatkörner übergeführt, indem sie unter Verwendung eines Siebes Nr. 8 Mesh (2,38 mm) einen Schwinggranulator passiert.
Schritt 4: Sodann werden die nassen Granulatkörner bei 140°F (60°C) in einem Ofen getrocknet, bis sie trocken sind.
Schritt 5: Die trockenen Granulatkörner werden mit Bestandteil Nr. 5 geschmiert.
Schritt 6: Die mit Gleitmittel versehenen Granulatkörner werden auf einer geeigneten Tablettenpresse verpresst.
Inhalationsformulierung
Eine Verbindung der Formel I (1 mg bis 100 mg) wird aus einem Dosieraerosol unter Abgabe der gewünschten Menge an Arzneimittel pro Anwendung zerstäubt.
Parenterale Formulierung
Ein Arzneimittel zur parenteralen Verabreichung wird durch Auflösen einer entsprechenden Menge einer Verbindung der Formel I in Polyethylenglycol unter Erhitzen hergestellt. Sodann wird die Lösung mit Wasser zur Injektionen Ph Eur. verdünnt (auf 100 ml). Anschließend wird die Lösung durch Filtration durch ein 0,22 Micron Membranfilter sterilisiert und in sterilen Behältern eingeschlossen.
Die obige Beschreibung und die Beispiele offenbaren vollständig, wie die erfindungsgemäßen Verbindungen hergestellt und verwendet werden. Allerdings ist die vorliegende Erfindung nicht auf die bestimmten, hier zuvor beschriebenen Ausführungsformen beschränkt, sondern umfasst sämtliche Modifikationen davon im Umfang der folgenden Ansprüche.

Claims

Verbindung der Formel (I):
wobei R1 Isobutyl, Isopropyl, Benzyl, Carbamoylmethyl ist; R2 Methyl, Phenyl, Naphthyl, Indolyl, Benzimidazolyl, Chinolinyl, Furanyl, Thiophenyl, Pyridyl, Benzofuranyl oder Benzothiophenyl ist, unsubstituiert oder substituiert mit einem oder zwei Halogenatomen, Methyl-, Methoxy- oder Methylendioxygruppen; R3 Wasserstoff, Halogen, Methyl, Methoxy, Nitro oder 2,3-(1,3-Butadien-1,4-yl) ist; R4 3-Dimethylaminopropyl, 2-(Pyrrolidin-1-yl)ethyl, 2-(1-Morpholin)ethyl, 2-(N-Methylanilin)ethyl, 2-(1-Piperazinyl)ethyl, 2-(1-Pyrrolidinonyl)ethyl, (1-Methylpyrrolidin-2(S)-yl)methyl, 1-Methylpyrrolidin-3-(±)-yl, 1-Benzylpiperidin-4-yl, (6-Methylpyrid-2-yl)methyl, 3-Dimethylaminobenzyl, 2(S)-(Aminocarbonyl)pyrrolidin-4(S)-yl, Pyrrolidin-3(S)-yl, Piperidin-4-yl, Pyrrolidin-3(R)-yl oder cis-4-Aminocyclohexyl ist; und n 1 oder 2 ist; oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon; wobei die Verbindung nicht 1-(4-(3-(N,N-Dimethylamino)propoxy)benzyl)-(3S)-[[N^α-(2-naphthylcarbonyl)-L-leucinyl]amino]-pyrrolidin ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R1 Isobutyl, Isopropyl oder Benzyl ist; R2 Phenyl, Naphthyl, Furanyl, Thiophenyl, Benzofuranyl oder Benzothiophenyl ist, unsubstituiert oder substituiert mit einem oder zwei Halogenatomen, Methyl-, Methoxy- oder Methylendioxygruppen; R3 Wasserstoff, Halogen, Methyl oder Methoxy ist; R4 3-Dimethylaminopropyl, 2-(1-Piperazinyl)ethyl, 2-(1-Pyrrolidinonyl)ethyl, 1-Methylpyrrolidin-3(±)-yl, 1-Benzylpiperidin-4-yl, Pyrrolidin-3(S)-yl, Piperidin-4-yl oder Pyrrolidin-3(R)-yl ist; und n 1 ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder ausgewählt aus: Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-iod-3-(2-piperazin-1-ylethoxy)-benzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid; Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[3-(3-dimethylaminopropoxy)-4-iodbenzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid; Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-(3-dimethylaminopropoxy)-benzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid; Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-(1-benzylpiperidin-4-yloxy)-3-chlorbenzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid; Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[3-brom-4-(3-dimethylaminopropoxy)benzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid; Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[3-brom-4-(1-methylpyrrolidin-3-yloxy)benzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid; Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-(1-benzylpiperidin-4-yloxy)-3-brombenzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid; Benzofuran-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[4-(3-dimethylaminopropoxy)benzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid; Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[3-brom-4-(piperidin-4-yloxy)-benzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid; und Benzo[b]thiophen-2-carbonsäure((S)-1-{(S)-1-[3-brom-4-((R)-pyrrolidin-3-yloxy)benzyl]-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl}-3-methylbutyl)amid.
Arzneimittel umfassend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
Verwendung einer Verbindung der Formel (I):
wobei R1 Isobutyl, Isopropyl, Benzyl, Carbamoylmethyl ist; R2 Methyl, Phenyl, Naphthyl, Indolyl, Benzimidazolyl, Chinolinyl, Furanyl, Thiophenyl, Pyridyl, Benzofuranyl oder Benzothiophenyl ist, unsubstituiert oder substituiert mit einem oder zwei Halogenatomen, Methyl-, Methoxy- oder Methylendioxygruppen; R3 Wasserstoff, Halogen, Methyl, Methoxy, Nitro oder 2,3-(1,3-Butadien-1,4-yl) ist; R4 3-Dimethylaminopropyl, 2-(Pyrrolidin-1-yl)ethyl, 2-(1-Morpholin)ethyl, 2-(N-methylanilin)ethyl, 2-(1-Piperazinyl)ethyl, 2-(1-Pyrrolidinonyl)ethyl, (1-Methylpyrrolidin-2(S)-yl)methyl, 1-Methylpyrrolidin-3(±)-yl, 1-Benzyl-piperidin-4-yl, (6-Methylpyrid-2-yl)methyl, 3-Dimethylaminobenzyl, 2(S)-(Aminocarbonyl)pyrrolidin-4(S)-yl, Pyrrolidin-3(S)-yl, Piperidin-4-yl, Pyrrolidin-3(R)-yl, oder cis-4-Aminocyclohexyl ist; und n 1 oder 2 ist; oder eines pharmakologisch verträglichen Salzes davon zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Zuständen, die mit Urotensin-II-Ungleichgewicht einhergehen.
Verwendung nach Anspruch 5, wobei der Zustand kongesive Herzinsuffizienz, Schlaganfall, ischämische Herzerkrankung, Angina, Myokardischämie, Herzrhythmusstörung, essentielle Hypertonie, pulmonale Hypertonie, COPD, Restenose, Asthma, neurogene Entzündung, metabolische Vaskulopathie, Abhängigkeit, Schizophrenie, Impulsivität, Angst, Stress, Depression, neuromuskuläre Funktion oder Diabetes ist.