DE60005493T2

DE60005493T2 - Pyrimido[6,1-a]isochinolinonderivate

Info

Publication number: DE60005493T2
Application number: DE60005493T
Authority: DE
Inventors: Alexander William Royston OXFORD; David Wheathampstead JACK
Original assignee: Vernalis PLC
Current assignee: Ligand UK Ltd
Priority date: 1999-03-31
Filing date: 2000-03-29
Publication date: 2004-07-01
Anticipated expiration: 2020-03-30
Also published as: BRPI0009446B8; US7378424B2; CA2368413A1; US8242127B2; EP1165558B1; ATE250602T1; NZ514158A; US20120302533A1; NO20014728L; JP2002540207A; PT1165558E; US7105663B2; BRPI0009446B1; MXPA01009846A; AU4127400A; US20030036542A1; WO2000058308A1; US20040176353A1; US20040171828A1; NO20014728D0

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Derivate von Pyrimido[6,1-a]isochonolin-4-on und ihre Anwendungen als Inhibitoren von Phosphodiesterase(PDE)-Isoenzymen. Insbesondere bezieht sich die Erfindung auf Derivate von Pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on und ihre Anwendung in der Medizin, zu Beispiel als Bronchodilatoren mit entzündungshemmenden Eigenschaften.
In allen Zellen, in denen cyclisches-AMP (cAMP) als Sekundär messenger vorhanden ist, werden die intrazellulären Konzentrationen von cAMP durch die zwei Prozesse reguliert, die an seiner Bildung und seinem Abbau beteiligt sind. Die Stimulation der membrangebundenen Rezeptoren auf der Außenseite der Zellen (z.B. durch β-Adrenozeptoragonisten) führt zur Aktivierung der Adenylcyclase, die cAMP aus ATP erzeugt. Die in der Zelle vorhandenen Phosphodiesterasen dienen dazu, die Konzentration von cAMP zu reduzieren, indem sie es zu Adenosinmonophosphat (AMP) hydrolysieren.
Bei einer Krankheit, wie z.B. Asthma, unterliegen die Hauptzellen, die an bronchokonstriktorischen und inflammatorischen Prozessen beteiligt sind, der inhibitorischen Wirkung von cAMP. Inhibitoren von Typ III Phosphodiesterasen heben die intrazellulären Pegel von cAMP an, was zu einer Entspannung der glatten Bronchialmuskeln führt, wogegen Inhibitoren von Typ N Phosphodiesterasen die Freisetzung von schädlichen Mediatoren aus entzündungsfördernden Zellen hemmen. Daher müsste im Prinzip ein kombinierter PDE-III/IV-Inhibitor die gewünschten Wirkungen eines β-Adrenozeptoragonisten sowie zusätzlich die eines inhalierten entzündungshemmenden Steroids haben, das gegenwärtig die wichtigste Stütze der Behandlung von schwerem Asthma darstellt. Darüber hinaus müsste ein kombinierter, durch Inhalation verabreichter PDE-III/IV-Inhibitor positive Effekte ähnlich einem β-Agonisten sowie zusätzlich die eines inhalierten Steroids besitzen und sollte eine außergewöhnlich wirksame Behandlungsmöglichkeit von Asthma und anderen Atemwegserkrankungen, ohne die unerwünschten Glukokortikoidwirkungen der Steroide, wie z.B. Osteoporose und die Wachstumshemmung, darstellen.
Die potentiellen nachteiligen Wirkungen eines PDE-III/IV-Inhibitors (z.B. Übelkeit und Erbrechen, Magensäureproduktion, kardiovaskuläre Effekte, wie z.B. erhöhte kardiale Kontraktilität, Gefäßerweiterung und potentielle arrhythmieerzeugende Aktivität) müssten sich mit einer Verbindung vermeiden lassen, die den Lungen direkt durch Inhalation zugeführt wird. Es ist wünschenswert, dass die Substanz eine lange Wirkungsdauer besitzt, nicht reizt und einen nicht so unangenehmen Geschmack besitzt, dass dies negative Auswirkungen auf die Patienteneinhaltung hat.
Ein Beispiel eines Derivates von Pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on mit PDE-III/IV-Inhibitoraktivität, von dem bekannt ist, dass es antihypertensive vasodilatorische Aktivität besitzt, ist Trequinsin (9,10-Dimethoxy-3-methyl-2-mesitylimino-2,3,6,7-tetrahydro-4H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on), das von De Souza et al., J. Med. Chem 27 1470-1480 (1984) und in GB-A-1597717 beschrieben ist.
Wie von De Souza et al. und in GB-A-1597717 beschrieben, besitzt Trequinsin wertvolle pharmakologische Eigenschaften und kann an Menschen verabreicht werden, die z.B. an Atemwegserkrankungen leiden. Es ist jedoch zur Verabreichung durch Inhalation wegen seines bitteren Geschmacks ungeeignet, und die in vitro-Daten zeigen, dass seine Wirkungsdauer kürzer als erwünscht ist.
Es ist jetzt gefunden worden, dass es möglich ist, bestimmte Derivate von Pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on zu entwerfen, die PDE-Inhibitoren sind und eine im Vergleich zu Trequinsin längere Wirkungsdauer sowie andere nützliche Eigenschaften, z.B. einen besseren Geschmack, besitzen.
Entsprechend dem ersten Gesichtspunkt der vorliegenden Erfindung wird eine Verbindung der allgemeinen Formel I bereitgestellt:
wobei
jedes R¹ und R² unabhängig eine C_1- ₆-Alkyl- oder C_2- ₇-Acylgruppe repräsentiert,
R⁵ ein Wasserstoffatom oder eine C_1- ₃-Alkyl-, C_2- ₃-Alkenyl- oder C_2- ₃-Alkinylgruppe repräsentiert,
R⁶ ein Wasserstoffatom oder eine C_1-6-Alkyl-, C_2-6-Alkenyl-, C_2-6-Alkinyl-, Amino-, C_1-6-Alkylamino-, Di(C_1-6)-Alkylamino- oder C_2-7-Acylaminogruppe repräsentiert,
jedes R⁷ und R⁸ unabhängig ein Wasserstoff- oder Halogenatom oder eine Hydroxy-, Trifluormethyl-, C_1-6-Alkyl-, C_2-6-Alkenyl-, C_2-6-Alkinyl-, C_2-7-Acyl-, C_1-6-Alkylthio-, C_1-6-Alkoxy-, C_3-6-Cycloalkylgruppe repräsentiert, und
R⁹ ein Wasserstoff- oder Halogenatom oder eine Hydroxy-, Trifluormethyl-, C_1-6-Alkyl-, C_2-6-Alkenyl-, C_2-6-Alkinyl-, C_2-7-Acyl-, C_1-6-Alkylthio-, C_1-6-Alkoxy-, C_3-6-Cycloalkylgruppe repräsentiert,
X eine Gruppe CR³R⁴ repräsentiert, wobei jedes R³ und R⁴ unabhängig ein Wasserstoffatom oder eine C_1- ₃-Alkylgruppe repräsentiert,
jedes R¹⁰ und R¹¹ unabhängig ein Wasserstoffatom, eine C_1- ₃-Alkyl-, C_3-6-Cyclalkyl- oder Phenylgruppe repräsentiert,
Y ein Sauerstoffatom oder eine CHNO₂-, NCN-, NH- oder NNO₂-Gruppe repräsentiert,
n eine ganze Zahl von 2 bis 4 ist;
oder ein Salz der Verbindung.
Der hier benutzte Begriff „Halogen" oder seine Abkürzung „Halo" bedeuten Fluor, Chlor, Brom oder Jod.
Der hier benutzte Begriff „C_1-6-Alkyl" bezieht sich auf geradkettige oder verzweigtkettige Alkylgruppen, die ein bis sechs Kohlenstoffatome besitzen. Solche Alkylgruppen werden durch Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl-, Isobutyl-, sec-Butyl-tert-Butyl-, Pentyl-, Neopentyl- und Hexylgruppen veranschaulicht. C_1- ₄-Alkylgruppen werden bevorzugt.
Der hier benutzte Begriff „C_2- ₃-Alkenyl" bezieht sich auf geradkettige oder verzweigtkettige Kohlenwasserstoffgruppen, die zwei bis drei Kohlenstoffatome und zusätzlich eine Doppelbindung besitzen, entweder aus der E- oder der Z-Stereochemie, wo zutreffend. Dieser Begriff würde z.B. Vinyl oder 1-Propenyl einschließen.
Der hier benutzte Begriff „C_2-3-Alkinyl" bezieht sich auf geradkettige Kohlenwasserstoffgruppen, die zwei bis drei Kohlenstoffatome und zusätzlich eine Dreifachbindung besitzen. Dieser Begriff würde z.B. Ethinyl und 1-Propinyl einschließen.
Der hier benutzte Begriff „C_2-6-Alkenyl" bezieht sich auf geradkettige oder verzweigtkettige Kohlenwasserstoffgruppen, die zwei bis sechs Kohlenstoffatome und zusätzlich eine Doppelbindung besitzen, entweder aus der E- oder der Z-Stereochemie, wo zutreffend. Dieser Begriff würde z.B. Vinyl, 1-Propenyl, 1- und 2-Butenyl und 2-Methyl-2-propenyl einschließen. C_2-3-Alkylgruppen werden bevorzugt.
Der hier benutzte Begriff „C_2-6-Alkinyl" bezieht sich auf geradkettige oder verzweigtkettige Kohlenwasserstoffgruppen, die zwei bis sechs Kohlenstoffatome und zusätzlich eine Dreifachbindung besitzen. Dieser Begriff würde z.B. Ethinyl, 1-Propinyl, 1- und 2-Butinyl, 2-Methyl-2-propinyl, 2-Pentanyl, 3-Pentanyl, 4-Pentanyl, 2-Hexanyl, 3-Hexanyl, 4-Hexanyl und 5-Hexanyl einschließen. C_2- ₃-Alkinylgruppen werden bevorzugt.
Der hier benutzte Begriff „C_1-6-Alkoxy" bezieht sich auf geradkettige oder verzweigtkettige Alkoxygruppen, die ein bis sechs Kohlenstoffatome besitzen. Beispiele solcher Alkoxygruppen sind Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Isopropoxy, Butoxy, Isobutoxy, sec-Butoxy, tert-Butoxy, Pentoxy, Neopentoxy und Hexoxy. C_1-4-Alkoxygruppen werden bevorzugt.
Der hier benutzte Begriff „C_2-7-Acyl" bezieht sich auf geradkettige oder verzweigtkettige Acylgruppen, die zwei bis sieben Kohlenstoffatome besitzen. Beispiele solcher Acylgruppen sind Acetyl, Propionyl (oder Propanoyl), Isopropionyl (oder Isopropanoyl), Butyryl (oder Butanoyl), Isobutyryl (oder Isobutanoyl), Pentanoyl (oder Valeryl), Hexanoyl (oder Capronoyl) und Heptanoyl.
Der hier benutzte Begriff „C_2-7-Acyloxy" bezieht sich auf geradkettige oder verzweigtkettige Acyloxygruppen, die zwei bis sieben Kohlenstoffatome besitzen. Beispiele solcher Acyloxygruppen sind Acetyloxy, Propionyl- (oder Propiono oder Propanoyl)oxy, Isopropionyl- (oder Isopropiono oder Isopropanoyl)oxy, Butyryl- (oder Butanoyl)oxy, Isobutyryl- (oder Isobutanoyl)oxy, Pentanoyl- (oder Valeryl)oxy, Hexanoyl- (oder Capronyl)oxy und Heptanoyloxy. C_2- ₄-Acyloxygruppen werden bevorzugt.
Der hier benutzte Begriff „C₃_₆-Cycloalkyl" bezieht sich auf eine alicyclische Gruppe, die drei bis sechs Kohlenstoffatome besitzt. Beispiele solcher Cycloalkylgruppen sind Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl. Cyclopentyl- und Cyclohexylgruppen werden bevorzugt.
Der hier benutzte Begriff „C_1-6-Alkylthio" bezieht sich auf geradkettige oder verzweigtkettige Alkylthiogruppen, die ein bis sechs Kohlenstoffatome besitzen. Beispiele solcher Alkylthiogruppen sind Methylthio, Ethylthio, Propylthio, Isopropylthio, Butylthio, Isobutylthio, sec-Butylthio, tert-Butylthio, Pentylthio, Neopenthylthio und Hexylthio. C_1-4-Alkylthiogruppen werden bevorzugt.
Der hier benutzte Begriff „C_1-6-Alkylamino" bezieht sich auf geradkettige oder verzweigtkettige Alkylaminogruppen, die ein bis sechs Kohlenstoffatome in jeder Alkylgruppe besitzen. Beispiele solcher Alkylaminogruppen sind Methylamino, Ethylamino, Propylamino, Isopropylamino, Butylamino, Isobutylamino, sec-Butylamino, tert-Butylamino, Pentylamino, Neopentylamino und Hexylamino. C_1- ₄ Alkylaminogruppen sind bevorzugt.
Der hierin benützte Begriff „Di(C_1-6)Alkylamino" bezieht sich auf geradekettige oder verzweigtkettige Di-Alkylaminogruppen, die ein bis sechs Kohlenstoffatome in jeder der Alkylgruppen besitzen. Beispiele solcher Di-Alkylaminogruppen sind Dimethylamino, Diethylamino, Dipropylamino, Diisopropylamino, Dibutylamino, Diisobutylamino, Di-sec-butylamino, Di-tert-butylamino, Dipentylamino, Dineopentylamino und Dihexylamino. Di(C_1- ₄)-Alkylaminogruppen werden bevorzugt.
Der hier benutzte Begriff „C_2- ₇-Acylamino" bezieht sich auf geradkettige oder verzweigtkettige Acylaminogruppen, die zwei bis sieben Kohlenstoffatome besitzen. Beispiele solcher Acylaminogruppen sind Acetylamino, Proprionyl- (oder Propiono oder Propanoyl)amino, Isopropionyl- (oder Isopropiono oder Isopropanoyl)amino, Butyryl- (oder Butanoyl)amino, Isobutyryl. (oder Isobutanoyl)amino, Pentanoyl- (oder Valeryl)amino, Hexanoyl- (oder Capronyl)amino und Heptanoylamino. C_2-4-Acylaminogruppen werden bevorzugt.
Wenn es einen Substituenten gibt, der eine Verbindung basisch macht, zum Beispiel wenn R⁶ eine Amino-, Alkylamino- oder Dialkylaminogruppe ist, ergibt das Hinzufügen einer Säure ein Salz. Die Säure kann eine beliebige geeignete Säure und kann organisch oder anorganisch sein.
Zu den bevorzugten Verbindungen der allgemeinen Formel I gehören auch diejenigen, bei denen unabhängig oder in einer kompatiblen Kombination:
jedes R¹ und R³ ein C_1- ₆-Alkyl, vorzugsweise eine C_1-4-Gruppe, darstellt,
R¹ und R² einander gleich sind,
jedes R³ und R⁴ ein Wasserstoffatom repräsentiert,
R⁵ ein Wasserstoffatom repräsentiert,
R⁶ ein Wasserstoffatom repräsentiert,
jedes R⁷ und R⁸ eine C_1- ₆-Alkylgruppe, vorzugsweise Methyl-, Ethyl- oder Isopropylgruppe, repräsentiert,
R⁷ und R⁸ einander gleich sind,
R⁹ ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine Methyl- oder Acetylgruppe repräsentiert,
Y ein Sauerstoffatom oder eine CHNO₂-Gruppe repräsentiert, und
n gleich 2 ist.
Zu den beispielhaften Verbindungen gehören:

1. 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(N-carbamoyl-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on,
2. 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-(N'-isopropylcarbamoyl)-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on,
3. 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N'-methyl-2-nitroethenamin)]-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on,
4. 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N'-isopropyl-2-nitroethenamin)]-2-aminoethyl]-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on,
5. 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N',N'-dimethyl-2-nitroethenamin)]-2-aminoethyl]-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on,
6. 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-(N'-phenylcarbamoyl)-2-aminoethyl]-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on,
7. 9,10-Dimethoxy-3-[2-guanidinethyl]-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a] isochinolin-4-on,
8. 9,10-Dimethoxy-3-[N-(N'-nitro)-2-guanidinethyl]-2-(2,4,6-trimethyl-phenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on,
9. 3-[N-(N'-Cyclohexylcarbamoyl)-2-aminoethyl]-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethyl-phenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on,
10. 3-(N-Carbamoyl-2-aminoethyl)-9,10-dimethoxy-2-(2-methylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on,
11. 3-[N-Carbamoyl-2-aminoethyl)-2-(2,6-düsopropylphenylimino)-9,10-dimethoxy-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on,
12. 3-(N-Carbamoyl-4-aminobutyl)-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on,
13. 3-[N-(N'-Cyano-N''-methyl)-2-guanidinethyl]-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.

Die Verbindung 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(N-Carbamoyl-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on wird besonders bevorzugt.
Verbindungen der allgemeinen Formel I können mit einer geeigneten Methode, die im Fachgebiet bekannt ist, oder mit dem folgenden Verfahren hergestellt werden, das selbst einen Teil der Erfindung bildet.
Nach einem zweiten Gesichtspunkt der Erfindung wird ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel I, wie oben definiert, bereitgestellt, wobei das Verfahren folgendes umfasst:

a) Derivatisieren einer Verbindung der allgemeinen Formel II:
wobei R¹, R², R⁵, R⁶, R⁷, R⁸, R⁹, X und n so wie für die allgemeine Formel I definiert sind und wobei eine oder mehrere Verbindungen in der Lage sind, an der primären Amingruppe des Aminoalkylteils (-(CH₂)_n-NH₂) zu reagieren und so eine Verbindung der allgemeinen Formel bilden, oder
b) wenn X in der allgemeinen Formel I eine Gruppe CR³R⁴ repräsentiert, wobei R³ ein Wasserstoffatom darstellt, R⁴ ein Wasserstoffatom oder eine C_1- ₃-Alkylgruppe darstellt und R⁵ ein Wasserstoffatom oder eine C_1- ₃-Alkylgruppe darstellt, wodurch eine Verbindung der allgemeinen Formel III hydriert wird:
Dabei sind R¹, R², R⁶, R⁷, R⁸, R⁹, R¹⁰, R¹¹, Y und n so wie für die allgemeine Formel I definiert, und
c) optionale Umwandlung einer so gebildeten Verbindung der allgemeinen Formel I in eine andere Verbindung der allgemeinen Formel I.

Die Reaktionsbedingungen von Schritt a) sind im allgemeinen derart, dass sie die Reaktion, die eine nucleophile Verdrängung oder Addition sein kann und in einem für die spezielle Reaktion geeigneten Lösungsmittel erfolgt, begünstigen.
Verbindungen, die für die Reaktion mit einer Verbindung der allgemeinen Formel II gewählt werden, sind in der Lage, eine Reaktion an der primären Amingruppe des Alkylaminoteils in der Verbindung der allgemeinen Formel II einzugehen, um so eine Verbindung der allgemeinen Formel I zu bilden. Zum Beispiel:
wenn Y ein Sauerstoffatom ist und jedes R¹⁰ und R" ein Wasserstoffatom repräsentiert, kann eine Verbindung der allgemeinen Formel II mit Natriumcyanat derivatisiert werden;
wenn Y ein Sauerstoffatom ist, R¹⁰ ein Wasserstoffatom und R¹¹ eine C_1-3-Alkyl- oder C_3-6-Cycloalkyl- oder Phenylgruppe repräsentiert, kann eine Verbindung der allgemeinen Formel II mit einem Isocyanat der allgemeinen Formel R¹¹NCO derivatisiert werden;
wenn Y CHNO₂ ist, R¹⁰ ein Wasserstoffatom und R¹¹ eine C_1-3-Alkyl- oder C_3-6-Cycloalkylgruppe repräsentiert, kann eine Verbindung der allgemeinen Formel II mit einem N-C_1-3-Alkyl- oder N-C_3-6-Cycloalkyl-1-(methylthio)-2-nitroethenamin der allgemeinen Formel CH₃SC(=CHNO₂)NR¹⁰R¹¹ derivatisiert werden;
wenn Y CHNO₂ ist, kann eine Verbindung der allgemeinen Formel II zuerst mit 1,1-Bis(methylthio)-2-nitroethylen umgesetzt werden, und die sich ergebende Verbindung kann dann mit einem Amin der allgemeinen Formel R¹⁰R¹¹NH umgesetzt werden, wobei R¹⁰ und R¹¹ so wie für die allgemeine Formel I definiert sind;
wenn Y NH ist, kann eine Verbindung der allgemeinen Formel II mit einer Verbindung der allgemeinen Formel CH₃SC(=NH)NR¹⁰R¹¹ oder einem Salz dieser Verbindung derivatisiert werden, wobei R¹⁰ und R¹¹ so wie für die allgemeine Formel I definiert sind.
wenn Y NCN ist, kann eine Verbindung der allgemeinen Formel II mit einer Verbindung der allgemeinen Formel CH₃SC(=NH)NR¹⁰R¹¹ oder einem Salz dieser Verbindung derivatisiert werden, wobei R¹⁰ und R¹¹ so wie für die allgemeine Formel I definiert sind.
In speziellen Fällen:
kann für 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(N-carbamoyl-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on Natriumcyanat gewählt werden,
kann für 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-(N'-isopropylcarbamoyl)-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on Isopropylisocyanat gewählt werden,
kann für 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N'-methyl-2-nitroethenamin)]-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on N-Methyl-1-(methylthio)-2-nitroethenamin gewählt werden,
können für 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N'-isopropyl-2-nitroethenamin)]-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido(6,1-a]isochinolin-4-on 1,1-Bis(methylthio)-2-nitroethylen und Isopropylamin gewählt werden,
können für 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N',N'-dimethyl-2-nitroethenamin)]-2-aminoethyl]-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on 1,1-Bis(methylthio)-2-nitroethylen und Dimethylamin gewählt werden,
und
kann für 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(N-(N'-phenylcarbamoyl)-2-aminoethyl)]-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on Phenylisocyanat gewählt werden.
Verbindungen der allgemeinen Formel II können durch Reaktion einer Verbindung der allgemeinen Formel IV:
wobei R¹, R², R⁵, R⁶, R⁷, R⁸, R⁹ und X wie für die allgemeine Formel I definiert sind, mit einer Verbindung der allgemeinen Formel V:
wobei n so wie für die die allgemeine Formel I definiert ist, LG eine abgehende Gruppe und PG eine Schutzgruppe darstellt, und durch anschließendes Entfernen der Schutzgruppe hergestellt werden.
Eine Reaktion einer Verbindung der allgemeinen Formel IV mit einer Verbindung der allgemeinen Formel V wird allgemein unter für die Reaktion, einer nucleophilen Substitution, geeigneten Bedingungen ausgeführt. Eine Base, wie z.B. K₂CO₃, kann in Gegenwart von NaI verwendet werden, und die Reaktion wird in einem geeigneten Lösungsmittel, wie z.B. 2-Butanon, durchgeführt.
Die abgehende Gruppe LG in der allgemeinen Formel V kann eine beliebige geeignete abgehende Gruppe sein, ist aber vorzugsweise ein Halogenatom, wie z.B. Brom. Die Schutzgruppe PG in der allgemeinen Formel V kann eine beliebige geeignete Schutzgruppe sein, wie z.B. eine Phthaloylgruppe. Wenn die Reaktion zwischen Verbindungen der allgemeinen Formel IV und V in einer Base, wie z.B. K₂CO₃, ausgeführt wird, sollte die Schutzgruppe basenstabil sein. Eine geeignete Verbindung der allgemeinen Formel V ist N-(2-bromethyl)phthalimid:
Die Schutzgruppe kann dann mit Standardmethoden zum Abbau des Schutzes entfernt werden. Zum Beispiel kann Hydrazinhydrat verwendet werden. Die Reaktionsbedingungen sollen allgemein die Reaktion begünstigen, zum Beispiel in einem geeigneten Lösungsmittel, wie z.B. Ethanol und/oder Chloroform bei Raumtemperatur.
Verbindungen der allgemeinen Formel IV können durch Reaktion einer Verbindung der allgemeinen Formel VI:
wobei R¹, R², R⁵, R⁶ und X so wie für die allgemeine Formel I definiert sind und LG eine abgehende Gruppe repräsentiert,
mit einer Verbindung der allgemeinen Formel VII hergestellt werden:
wobei R⁷, R⁸ und R⁹ so wie für die allgemeine Formel I definiert sind.
Verbindungen der allgemeinen Formel VII sind substituierte Aniline, die entweder im Fachgebiet bekannt und handelsüblich sind oder leicht mit an sich bekannten Methoden hergestellt werden können.
Die abgehende Gruppe LG in Verbindungen der allgemeinen Formel VI kann Chlor, eine Thioalkylgruppe, vorzugsweise Thiomethyl, oder eine Alkylsulfonylgruppe, vorzugsweise Methylsulfonyl, sein. Chlor wird bevorzugt.
Die Reaktionsbedingungen sollen allgemein die Reaktion, eine nucleophile Verdrängung, begünstigen, welche vorzugsweise in einem geeigneten Lösungsmittel, wie z.B. Dimethylformamid oder Isopropanol, in Gegenwart einer Base, wie z.B. Kaliumcarbonat, ausgeführt wird. Geeignete Reaktionsbedingungen kann man in GB-A-1597717 und EP-A-0124893 finden, welche die Herstellung verwandter Verbindungen offen legen.
Die Reaktion ist allgemein zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I anwendbar, wo R⁶ ein Wasserstoffatom oder eine C_1-6-Alkyl-, C₂_₄-Akenyl-, C₂_₆-Alkynyl-, Amino-, C_1-6-Alkylamino- oder C_2-7-Acylaminogruppe repräsentiert und R¹ bis R⁵ und R⁷ bis R⁹, X, Y und n die oben angeführten Bedeutungen besitzen.
Verbindungen der allgemeinen Formel VI, wo LG ein Chloratom repräsentiert, können durch Reaktion einer Verbindung der allgemeinen Formel VIII oder einer Verbindung der allgemeinen Formel IX mit Phosphoroxidchlorid oder durch Erhitzen einer Verbindung der allgemeinen Formel VIII mit Phosphorpentachlorid hergestellt werden:
wobei R¹, R², R⁵ und R⁶ sowie X so wie für die allgemeine Formel I definiert sind.
Verbindungen der allgemeinen Formel VI, wo LG eine Thioalkylgruppe repräsentiert, können aus Verbindungen der Formel VIII durch Erhitzen mit Phosphorpentasulfid in einem Lösungsmittel, wie z.B. Dioxan oder Pyridin, hergestellt werden, wobei sich zu Anfang das intermediäre Thioderivat von VIII ergibt, welches bei Behandlung mit einem alkylierenden Mittel, wie z.B. einem Alkyliodid, z.B. Methyliodid, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie z.B. Tetrahydrofuran oder Ethylacetat, die Thioalkylverbindung ergibt. Die Oxidation der Thioalkylverbindung mit z.B. 3-Chlorperbenzoesäure in einem Lösungsmittel, wie z.B. Methylenchlorid, ergibt das Alkylsulfonderivat.
Verbindungen der allgemeinen Formel VIII können durch Reaktion einer Verbindung der allgemeinen Formel IX, wobei R¹, R², R⁵ und R⁶ so wie für die allgemeine Formel I definiert sind, mit einem cyclodehydrierenden Mittel, wie z.B. Phosphoroxychlorid, unter weniger heftigen Bedingungen, d.h. niedrigeren Temperaturen, als denen, die für die Darstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel VI erforderlich sind, hergestellt werden, wo LG ein Chloratom repräsentiert. Eine alternative Methode wurde in NL-A-6,401,827 (Hoffmann-La Roche) beschrieben, die mit der Reaktion des Carbamoylmethylentetrahydroisochinolin, allgemeine Formel XI (wobei R¹, R², R⁵ und X die oben angeführten Bedeutungen besitzen), mit Diethylcarbonat in ethanolischem Natriumethoxid verbunden ist:
Verbindungen der allgemeinen Formel IX können durch Reaktion einer Verbindung der allgemeinen Formel XII
wobei R¹, R², R⁵ und R⁶ sowie X so wie für die allgemeine Formel I definiert sind,
mit R⁶CH(CO₂Et)₂, wobei R⁶ wie für die allgemeine Formel I definiert ist, und einer starken Base, wie z.B. Natriumethoxid, in einer heißen ethanolischen Lösung hergestellt werden. Alternativ kann der entsprechende Dimethylester in Gegenwart von heißem methanolischem Natriummethoxid eingesetzt werden.
Verbindungen der allgemeinen Formel XII können durch Reaktion einer Verbindung der allgemeinen Formel XIII:
wobei R¹, R², R⁵ und X so wie für die allgemeine Formel I definiert sind, mit Harnstoff durch Erhitzen auf 160 °C hergestellt werden. Alternativ können Verbindungen der allgemeinen Formel XIII mit Kaliumcyanat in Gegenwart von Essigsäure in einem geeigneten Lösungsmittel, wie z.B. Ethanol, umgesetzt werden.
Verbindungen der allgemeinen Formel XIII sind entweder im Fachgebiet bekannt oder können leicht mit an sich bekannten Methoden hergestellt werden. Zum Beispiel wurde die Herstellung von 1-(3,4-Dimethoxy-phenetyl)barbitursäure von B. Lal et al. im J.Med.Chem. 271470-1480 (1984) beschrieben.
Wendet man sich Schritt b) zu, so sollen die Reaktionsbedingungen von Schritt b) allgemein die Hydrierungsreaktion begünstigen; die Reaktion wird im allgemeinen in einem geeigneten Lösungsmittel, wie z.B. einem Alkohol, z.B. Ethanol, mit einem Edelmetallkatalysator, wie z.B. Palladium, Platin, Rhodium oder Nickel, bei Raumtemperatur ausgeführt. Der Katalysator kann z.B. auf Holzkohle oder Tonerde getragen sein.
Verbindungen der allgemeinen Formel III können aus einer Verbindung der allgemeinen Formel XN hergestellt werden:
wobei R¹, R² und R⁶ so wie für die allgemeine Formel I definiert sind und R⁴ und R⁵ unabhängig ein Wasserstoffatom oder eine C_1-3-Alkylgruppe repräsentieren. Die Reaktionen werden wie oben beschrieben zur Umwandlung einer Verbindung der allgemeinen Formel VIII in eine Verbindung der allgemeinen Formel II durch Verbindungen der allgemeinen Formel VI und der allgemeinen Formel IV ausgeführt; die bevorzugten Reaktionsbedingungen stehen dementsprechend in Einklang damit.
Verbindungen der allgemeinen Formel XIV können aus Verbindungen der allgemeinen Formel VIII (wobei X eine CH₂-Gruppe und R⁵ ein Wasserstoffatom oder eine C_1-3-Alkylgruppe repräsentiert) durch Erhitzen mit einem Edelmetallkatalysator, wie z.B. Palladium, Platin, Rhodium oder Nickel, bei einer Temperatur von 300 bis 350 °C hergestellt werden. Der Katalysator kann z.B. auf Holzkohle oder Tonerde getragen sein, und die Reaktion kann in einem inerten Lösungsmittel, wie z.B. einem aromatischen Kohlenwasserstoff, z.B. p-Cymen, ausgeführt werden.
Im optionalen Schritt c) kann eine Verbindung der allgemeinen Formel I in eine andere Verbindung der allgemeinen Formel I umgewandelt werden. Zum Beispiel können Verbindungen der allgemeinen Formel I, wo R⁶ NH2 repräsentiert, in Verbindungen der allgemeinen Formel I, wo R⁶ eine C_1-6-Alkylaminogruppe repräsentiert, mit Hilfe von chemischen Standardverfahren, wie z.B. der Alkylierung eines geschützten Derivats, wie z.B. eines Acyl- oder eines p-Toluolsulfonylderivats, umgewandelt werden, gefolgt von der Entfernung der Schutzgruppe, wie z.B. durch saure Hydrolyse. Verbindungen der allgemeinen Formel I, wo R⁶ eine Di(C_1-6)-alkylaminogruppe repräsentiert, können durch direkte Alkylierung des Alkylaminoderivats hergestellt werden. Verbindungen der allgemeinen Formel I, wobei R⁵, R⁶, R⁷, R⁸ und/oder R⁹ eine C_2-3-Alkenyl-, C₂_₆-Alkenyl-, C_2-4-Alkinyl- oder C₂_₆-Alkinylgruppe repräsentieren, können hydriert werden und ergeben so die entsprechende Verbindung mit gesättigten Bindungen. Die Reaktionsbedingungen für die Hydrierung entsprechen den für Schritt b) beschriebenen.
Entsprechend einem dritten Gesichtspunkt stellt die Erfindung eine Zusammensetzung bereit, die eine Verbindung der allgemeinen Formel I und einen aus veterinärmedizinischer oder pharmazeutischer Sicht akzeptablen Träger oder akzeptables Verdünnungsmittel umfasst. Die Zusammensetzung ist vorzugsweise eine pharmazeutische Zusammensetzung für die Humanmedizin.
Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind PDE-Inhibitoren und besitzen daher wertvolle pharmakologische Eigenschaften, wie z.B. bronchodilatorische Aktivität, die durch die Hemmung der feldstimulierten Kontraktion von isolierter Meerschweinchentrachea nachgewiesen wird, und die entzündungshemmende Aktivität, die in Untersuchungen an menschlichen einkernigen, durch PHA (Phythaemagglutinin) stimulierten Zellen veranschaulicht wurde. In vitro- und in vivo-Daten zeigen, dass die Verbindungen eine lange Wirkungsdauer besitzen, die durch ihre anhaltenden Schutzwirkungen gegen histamininduzierte Bronchospasmen beim Meerschweinchen gezeigt wurde, wenn sie als Trockenpulver durch Inhalation direkt in die Lunge gebracht wurden. Die Erfindung bezieht sich daher auch auf die akute, chronische oder prophylaktische Behandlung von Patienten, die an Atemwegserkrankungen. leiden, einschließlich besonders Asthma, allergisches Asthma, Heuschnupfen, allergische Rhinitis, Bronchitis, chronische obstruktive Lungenerkrankung (COPD), akute respiratorische Insuffizienz ARDS (Schocklunge) und zystische Fibrose. Sie können auch topisch bei Hautkrankheiten, wie z.B. der atopischen Dermatitis und Psoriasis, oder bei Augenentzündungen oder bei anderen Krankheiten, einschließlich zerebraler Ischämie oder Autoimmunkrankheiten, bei denen die Erhöhung der intrazellulären Konzentration von cAMP für nützlich gehalten wird, angewendet werden.
Eine oder mehrere Verbindungen, wie sie zum ersten Gesichtspunkt der Erfindung umrissen wurden, können in Verbindung mit einem oder mehreren nichttoxischen pharmazeutisch und/oder veterinärmedizinisch akzeptablen Trägern und/oder Verdünnungsmitteln und/oder Zusatzstoffen und/oder Treibstoffen und, falls gewünscht, anderen aktiven Inhaltsstoffen vorliegen. Geeignete Träger oder Verdünnungsmittel sind im Fachgebiet bekannt (z.B. Handbook of Pharmaceutical Excipients [Handbuch der Pharmazeutischen Trägerstoffe], 2. Ausgabe, Hrsg. A. Wade/P.J. Weller, The Pharmaceutical Press, American Pharmaceutical Association).
Die Verbindungen und die Mischungen der vorliegenden Erfindung werden vorzugsweise durch Inhalation verabreicht, z.B. durch Aerosole oder Sprays, die den pharmakologisch aktiven Inhaltsstoff in Form eines Pulvers oder in der Form einer Lösung oder Suspension fein verteilen. Pharmazeutische Mischungen mit Pulver verteilenden Eigenschaften enthalten neben dem aktiven Inhaltsstoff gewöhnlich ein flüssiges Treibmittel mit einem Siedepunkt unterhalb der Raumtemperatur, und, falls gewünscht, Zusätze, wie z.B. flüssige oder feste anionische oberflächenaktive Substanzen und/oder Befeuchtungsmittel zur Bildung einer stabilen Dispersion. Pharmazeutische Mischungen, bei denen sich das pharmakologisch aktive Mittel in Lösung befindet, enthalten zusätzlich dazu ein geeignetes Treibmittel und weiterhin, falls erforderlich, ein zusätzliches Lösungsmittel und/oder einen Stabilisator. An Stelle des Treibmittels kann auch komprimierte Luft verwendet werden, wobei es möglich ist, diese nach Bedarf mit einer geeigneten Kompressions- und Ausdehnungsvorrichtung zu erzeugen. Pharmazeutische Mischungen können auch durch atembetätigte Inhalationsgeräte zugeführt werden. Trockene Pulvermischungen werden für die Verabreichung durch Inhalation bevorzugt.
Entsprechend einem vierten Gesichtspunkt stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der allgemeinen Formel I oder eine Zusammensetzung bereit, die eine Verbindung der allgemeinen Formel I zur Anwendung in der Medizin enthält.
Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind als Inhibitoren von Phosphodiesterase-Isoenzymen nützlich. Die Verbindungen oder Mischungen der vorliegenden Erfindung können dazu verwendet werden, Krankheiten zu verhüten oder zu behandeln, bei denen die Verbindungen oder Mischungen nutzbringend sind, besonders aber bei einer Krankheit, bei der das Erhöhen der intrazellulären Konzentration von cAMP wünschenswert ist. Beispiele solcher Krankheiten, gegen die die Verbindungen angewendet werden können, sind Atemwegserkrankungen, einschließlich besonders Asthma, Bronchitis, chronische obstruktive Lungenerkrankung (COPD), akute respiratorische Insuffizienz ARDS, allergisches Asthma, Heuschnupfen, allergische Rhinitis und zystische Fibrose. Sie können auch topisch bei Hautkrankheiten, wie z.B. bei atopischer Dermatitis oder Psoriasis, Augenentzündung oder anderen Krankheiten angewendet werden, einschließlich der zerebralen Ischämie oder Autoimmunkrankheiten, bei denen das Erhöhen der intrazellulären Konzentrationen von cAMP für vorteilhaft gehalten wird.
Dieser Gesichtspunkt der Erfindung ist besonders relevant für die Behandlung von Menschen, ist aber auch anwendbar für die allgemeine Veterinärmedizin, insbesondere für Haustiere, wie Hunde und Katzen, und landwirtschaftliche Nutztiere, wie Pferde, Schweine, Rinder, Schafe usw.
Die Dosierungswerte in der Größenordnung von etwa 0,02 mg bis etwa 200 mg, die dreimal am Tag eingenommen werden sollen, sind für die Behandlung der oben genannten Leiden zweckmäßig. Genauer gesagt, ist ein Dosisbereich von etwa 0,2 mg bis etwa 20 mg wirksam, was dreimal am Tag einzunehmen ist. Der spezielle Dosierungsplan wird jedoch letzten Endes vom behandelnden Arzt festgelegt und berücksichtigt solche Faktoren, wie verwendete Medikation, Alter, Gewicht, Schwere der Symptome und/oder Stärke der angewendeten oder anzuwendenden Behandlung, Verabreichungsmethode der Medikation, Nebenwirkungen und/oder Kontraindikationen.
Die Medikation entsprechend diesem Gesichtspunkt der Erfindung kann einem Patienten zusammen mit anderen Wirkstoffen gegeben werden, die zum Beispiel eine andere Verbindung der vorliegenden Erfindung oder andere Verbindungen sein können. Beispiele sind (β₂-Adrenorezeptoragonisten, topisch angewendete Glucocorticoidsteroide, Xanthinderivate, Antihistaminika, Leukotrien-Antagonisten, Inhibitoren der Leukotriensynthese und/oder Kombinationen dieser Verbindungen.
Entsprechend einem fünften Gesichtspunkt stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Verbindung der allgemeinen Formel I bei der Herstellung eines Inhibitors eines Typ III/IV-Phosphodiesterase-Isoenzyms bereit. Die Erfindung schließt die Verwendung einer Verbindung der allgemeinen Formel I bei der Herstellung eines Bronchodilators und/oder einer Medikation gegen Asthma und/oder eines Medikamentes zur Verhütung oder Behandlung der chronischen obstruktiven Lungenerkrankung (COPD) ein.
Die Erfindung bezieht sich auch auf eine Methode zur Behandlung oder Verhütung einer Krankheit in einem Säugetier, bei der man erwartet, dass ein Inhibitor der Phosphodiesterase-Isoenzyme und/oder ein Bronchodilator nützlich wäre, wobei diese Methode die Verabreichung einer Menge einer wirksamen, nicht giftigen Verbindung der allgemeinen Formel I an das genannte Säugetier umfasst. Die Erfindung schließt eine Methode zur Behandlung oder Verhütung von Asthma und/oder der chronischen obstruktiven Lungenerkrankung (COPD) in einem Säugetier ein.
Die bevorzugten Merkmale jedes Gesichtspunktes der Erfindung gelten mutatis mutandis für jeden anderen Gesichtspunkt der Erfindung.
1, auf die in den Zubereitungen 1 bis 4 unten verwiesen wird, zeigt den Weg, auf dem die Verbindungen in den Zubereitungen 1 bis 4 synthetisiert wurden.
2, auf die in Beispiel A unten Bezug genommen wird, ist ein Diagramm, das den Effekt von DMSO auf die cholinerge Kontraktionsreaktion in durchströmter Meerschweinchentrachea zeigt, wobei „n" die Anzahl der Experimente ist.
3, auf die in Beispiel A unten Bezug genommen wird, ist ein Diagramm, das die Wirkung von 10 μM der Verbindung von Beispiel 1 der vorliegenden Erfindung auf die Kontraktion von Meerschweinchentrachea bei Stimulation durch ein elektrisches Feld als Funktion der Zeit zeigt (n=3), wobei der Pfeil den Beginn der Ausspülperiode anzeigt.
4, auf die in Beispiel A unten Bezug genommen wird, ist ein Diagramm, das die Wirkung von 10 μM der Verbindung von Beispiel 9 auf die Kontraktion von Meerschweinchentrachea bei Stimulation durch ein elektrisches Feld als Funktion der Zeit zeigt (n=3).
5, auf die in Beispiel A unten Bezug genommen wird, ist ein Diagramm, das die Wirkung von 10 μM der Verbindung von Beispiel 10 auf die Kontraktion von Meerschweinchentrachea bei Stimulation durch ein elektrisches Feld als Funktion der Zeit zeigt (n=3).
6, auf die in Beispiel A unten Bezug genommen wird, ist ein Diagramm, das die Wirkung von 10 μM der Verbindung von Beispiel 11 auf die Kontraktion von Meerschweinchentrachea bei Stimulation durch ein elektrisches Feld als Funktion der Zeit zeigt (n=3).
7, auf die in Beispiel A unten Bezug genommen wird, ist ein Diagramm, das die Wirkung von 10 μM der Verbindung von Beispiel 13 auf die Kontraktion von Meerschweinchentrachea bei Stimulation durch ein elektrisches Feld als Funktion der Zeit zeigt (n=3).
8, auf die in Beispiel A unten Bezug genommen wird, ist ein Diagramm, das die Wirkung von 10 μM der Verbindung von Beispiel 8 auf die Kontraktion von Meerschweinchentrachea bei Stimulation durch ein elektrisches Feld als Funktion der Zeit zeigt (n=3).
9, auf die in Beispiel B unten Bezug genommen wird, ist ein Diagramm, das die Wirkung der Verbindung von Beispiel 1 der vorliegenden Erfindung auf die Proliferation menschlicher einkerniger Zellen zeigt, die durch PHA stimuliert wurden, wobei jeder Punkt den Mittelwert von sechs Experimenten repräsentiert und senkrechte Linien den Standardfehler des Mittelwertes darstellen.
Zubereitung 1
Synthese von 2-Chlor-6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-4H-uyrimido(6,1-alisochinolin-4-on (in Figur 1 als (1) angezeigt)
Eine Mischung von 1-(3,4-Dimethoxyphenyl)barbitursäure (70 g, 0,24 mol), hergestellt gemäß der Methode, die von B. Lal et al. im J.Med.Chem 27 1470-1480 (1984) beschrieben wurde, und Phosphoroxidchlorid (300 ml, 3,22 mol) wurde 2,5 Stunden lang unter Rückfluss erhitzt. Das überschüssige Phosphoroxidchlorid wurde durch Destillieren (20 mmHg) beim Erwärmen entfernt. Nach dem Abkühlen wurde der Rückstand in Dioxan (100 ml) aufgeschlämmt und vorsichtig einer kräftig gerührten Eis-Wasser-Lösung (1 1) hinzugesetzt. Chloroform (1 1) wurde hinzugefügt, und die sich ergebende Mischung wurde mit 30 %iger Natriumhydroxidlösung alkalisch eingestellt. Die organische Schicht wurde abgetrennt und die wässerige Phase weiter mit Chloroform (2×750 ml) extrahiert. Die zusammengeführten organischen Extrakte wurden mit Wasser (1,5 1) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum konzentriert, wobei ein gummiartiges Material (90 g) übrig blieb. Dieses wurde einige Minuten lang in Methanol gerührt, gefiltert und mit Methanol (200 ml), Diethylether (2×200 ml) gewaschen und unter Vakuum bei 40 °C getrocknet, was die Verbindung aus der Überschrift als gelb-orangen Feststoff (47 g, 62 %) ergab.

(300 MHz, CDCl₃) 2,96 (2H, t, C₍₇₎ H₂); 3,96 (6H, s, 2×OCH₃; 4,20 (2H, t, C₍₆₎ H₂); 6,61 (1H, s, C₍₁₎ H); 6,76 (1H, s, Ar-H); 7,10 (1 H, s, Ar-H).

Zubereitung 2
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (in 1 als (2) gezeigt)
2-Chlor-9,10-dimethoxy-6,7-dihydro-4H-pyrimido[6,1-a)isochinolin-4-on, gemäß Zubereitung 1 hergestellt, (38,5 g, 0,13 mol) und 2,4,6-Trimethylanilin (52,7 g, 0,39 mol) wurden in Propan-2-ol (3 l) gerührt und unter Stickstoff 24 h lang unter Rückfluss erhitzt. Nach der Abkühlung auf Raumtemperatur wurde die Lösung im Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel gereinigt, wobei das Eluieren mit CH₂Cl₂ / McOH durchgeführt wurde, zu Anfang 98:2, dann Wechsel zu 96:4, sobald das Produkt anfing, aus der Säule zu eluieren. Die Verbindung aus der Überschrift wurde mit einer leichten Verunreinigung (direkt oberhalb des Produktes auf tlc) gewonnen. Ausbeute 34,6 g, 67 %.
Zubereitung 3
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(2-N-phthalimidoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (in 1 als (3) gezeigt)
Eine Mischung aus 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (das nach Zubereitung 2 hergestellt wurde) (60,0 g, 0,153 mol), Kaliumcarbonat (191 g, 1,38 mol), Natriumiodid (137 g, 0,92 mol) und N-(2-Bromethyl)phthalimid (234 g, 0,92 mol) in 2-Butanon (1500 ml) wurde gerührt und unter Stickstoff 4 Tage lang unter Rückfluss erhitzt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die Mischung gefiltert, und das Filtrat wurde im Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde mit Methanol (1000 ml) behandelt und der Feststoff abgefiltert, mit Methanol gewaschen und aus Ethylacetat auskristallisiert, was die Verbindung aus der Überschrift als blassgelben Feststoff mit einer Ausbeute von 40,0 g, 46 % ergab. Durch die Verdampfung der Mutterlösung und die Säulenchromatographie des Rückstandes auf Silicagel (CH₂Cl₂ / McOH 95:5) wurde weiteres Produkt in einer Menge von 11,7 g, 13,5 %, gewonnen.
Zubereitung 4
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (in 1 als (4) gezeigt)
Eine Mischung von 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(2-N-phthalimidoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (22,0 g, 0,039 mol), das gemäß Zubereitung 3 hergestellt wurde, und Hydrazinhydrat (11,3 g, 0,195 mol) in Chloroform (300 ml) und Ethanol (460 ml) wurde bei Raumtemperatur 18 Stunden lang unter Stickstoff gerührt. Weiteres Hydrazinhydrat (2,9 g, 0,05 mol) wurde hinzugefügt, und die Mischung wurde weitere 4 Stunden lang gerührt. Nach dem Abkühlen in Eis / Wasser wurde der Feststoff durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde im Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde in Dichlormethan aufgelöst, und das unlösliche Material wurde durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wurde getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum verdampft, was die Verbindung aus der Überschrift als gelben Schaum mit einer Ausbeute von 16,2 g, 96 % ergab.
Beispiel 1
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(N-carbamoyl-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimidol6,1-alisochinolin-4-on
Natriumcyanat (6,0 g, 0,092 mol) in Wasser (100 ml) wurde einer gerührten Lösung von 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on, das nach Zubereitung 4 oben hergestellt wurde, (20,0 g, 0,046 mol) in Wasser (600 ml), und 1N HCl (92 ml) bei 80 °C tropfenweise zugesetzt. Nach zweistündigem Rühren bei 80 °C wurde die Mischung in einem Eisbad abgekühlt und mit 2N NaOH alkalisch gemacht. Die Mischung wurde mit Dichlormethan (3 × 200 ml) extrahiert, und der gesamte Extrakt wurde getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum verdampft. Der sich ergebende gelbe Schaum wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel mit CH₂Cl₂/-McOH (97:3) gereinigt und mit Ether zerrieben, was die Verbindung aus der Überschrift als gelben Feststoff ergab, 11,9 g, 54 %.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 1,92 (1H, br s, NH), 2,06 (6H, s, 2×CH₃), 2,29 (3H, s, CH₃), 2,92 (2H, t, CH₂), 3,53 (2H, m, CH₂), 3,77 (3H, s, OCH₃), 3,91 (3H, s, OCH₃), 4,05 (2H, t, CH₂), 4,40 (2H, t, CH₂), 5,35 (2H, br s, NH₂), 5,45 (1H, s, C=CH), 6,68 (1H, s, ArH), 6,70 (1H, s, ArH), 6,89 (2H, s, 2×ArH).

Beispiel 2
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-TN-(N'-(isopropylcarbamoyl)-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
Isopropylisocyanat (0,15 g, 1,77 mmol) wurde einer gerührten Lösung von 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (nach Zubereitung 4 oben hergestellt) (0,7 g, 1,61 mmol) in Toluol(6 ml) bei Raumtemperatur unter Stickstoff tropfenweise hinzugefügt. Nach 2 Stunden wurde die Lösung im Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel (CH₂Cl₂ / McOH, 97:3) gereinigt und mit Ether zerrieben, was einen gebrochen-weißen Feststoff ergab, 0,42 g, 50 %.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 0,89 (6H, d, 2×CH₃), 2,05 (6H, s, 2×CH₃), 2,29 (3H, s, CH₃), 1,94 (1H, br s, NH), 2,90 (2H, t, CH₂), 3,49 (2H, m, CH₂), 3,77 (3H, s, OCH₃), 3,91 (3H, s, OCH₃), 4,05 (2H, t, CH₂), 4,37 (2H, t, CH₂), 5,02 (1H, br s, NH), 5,46 (1H, s, C=CH), 6,67 (1H, s, ArH), 6,69 (1H, s, ArH), 6,87 (2H, s, 2×ArH).

Beispiel 3
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N'-methyl-2-nitroethenamin)1-2-aminoethyll-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
Eine Mischung aus 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on, nach Zubereitung 4 oben hergestellt, (0,8 g, 1,84 mmol) und N-Methyl-1-(methylthio)-2-nitroethenamin (0,30 g, 2,03 mmol) in Toluol (20 ml) wurde gerührt und unter Rückfluss 3 Stunden lang unter Stickstoff erhitzt. Nach der Abkühlung auf Raumtemperatur wurde das Lösungsmittel im Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel (CH₂Cl₂/-McOH, 97:3) gereinigt. Die Verbindung aus der Überschrift wurde als gelber Schaum mit einer Ausbeute von 0,61 g, 62 %, gewonnen, der beim Zerreiben mit Ether einen gelben Feststoff ergab, 0,40 g, 41 %.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 2,07 (6H, s, 2×CH₃), 2,29 (3H, s, CH₃), 2,45 (3H, d, NHCH₃), 2,92 (2H, t, CH₂), 3,65 (2H, m, CH₂), 3,77 (3H, s, OCH₃), 3,90 (3H, s, OCH₃), 4,08 (2H, t, CH₂), 4,32 (2H, m, CH₂), 5,46 (1H, s, =CH), 6,51 (1H, s, CHNO₂), 6,70 (2H, s, 2×ArH), 6,90 (2H, s, 2×ArH), 8,78 (1H, m, NH), 10,35 (1H, m, NH).

Beispiel 4
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N'-isopropyl-2-nitroethenamin)1-2-aminoethyl]]-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
1,1-Bis(methylthio)-2-nitroethylen (5,3 g, 32,2 mmol) und 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on, das nach Zubereitung 4 oben hergestellt wurde, (1,4 g, 3,22 mmol) in Toluol (20 ml) wurden gerührt und 2 Stunden lang unter Stickstoff unter Rückfluss erhitzt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde das Lösungsmittel im Vakuum verdampft, und der Rückstand wurden durch Säulenchromatographie auf Silicagel (CH₂Cl₂ / McOH, 99:1) gereinigt. Dies ergab eine intermediäre Verbindung (unten als Verbindung A gezeigt) als Öl, die beim Zerreiben mit Ether zu einem hellbeigen Feststoff wurde. Ausbeute 0,95 g, 53 %.
Isopropylamin (5 ml) wurde einer gerührten Lösung von (A) (0,7 g, 1,27 mmol) in Dichlormethan (10 ml) hinzugefügt und unter Rückfluss 20 Stunden lang unter Stickstoff erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde die Lösung im Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel (CH₂Cl₂ / McOH, 98:2) gereinigt. Die Verbindung aus der Überschrift (unten als Verbindung B gezeigt) wurde als Schaum mit einer Ausbeute von 0,64 g, 89 %, gewonnen. Beim Zerreiben mit Ether wurde daraus ein blassgelber Feststoff (0,38 g).

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 0,87 (6H, d, CH(CH₃)₂), 2,05 (6H, s, 2×CH₃), 2,29 (3H, s, CH₃), 2,93 (2H, m, CH₂), 3,48 (1H, m, CH(CH₃)₂), 3,68 (2H, m, CH₂), 3,78 (3H, s, OCH₃), 3,91 (3H, s, OCH₃), 4,09 (2H, t, CH₂), 4,34 (2H, m, CH₂), 5,48 (1H, s, C=CH), 6,68 (1H, s, CHNO₂), 6,69 (2H, s, 2×ArH), 6,90 (2H, s, 2×ArH), 7,04 (1H, d, NH), 10,75 (1H, m, NH).

Beispiel 5
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N', N'-dimethyl-2-nitroethenamin)1-2-aminoethyll-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-alisochinolin-4-on
Eine Lösung von Verbindung A, die in Beispiel 4 oben gezeigt ist (1,0 g, 1,81 mmol), und Dimethylamin (33 % in EtOH, 5,0 ml, 28 mmol) in Dichlormethan (10 ml) wurde 18 Stunden lang bei 35 °C unter Stickstoff gerührt. Die Lösung wurde dann unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel (CH₂Cl₂/-McOH, 97:3) gereinigt, wobei die Verbindung aus der Überschrift als gelber Schaum mit einer Ausbeute von 0,73 g, 73 %, erhalten wurde. Dieser wurde beim Zerreiben mit Ether zu einem blassgelben Feststoff (0,60 g).

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 2,02 (6H, s, 2×CH₃), 2,28 (3H, s, CH₃), 2,95 (2H, m, CH₂), 2,95 (6H, s, N(CH₃)₂), 3,78 (3H, s, OCH₃), 3,81 (2H, t, CH₂), 3,90 (3H, s, OCH₃), 4,05 (2H, t, CH₂), 4,55 (2H, t, CH₂), 5,43 (1 H, s, C=CH), 6,47 (1 H, s, ArH), 6,67 (1H, s, CHNO₂), 6,70 (1H, s, ArH), 6,89 (2H, s, 2×ArH), 9,35 (1H, m, NH).

Beispiel 6
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[N'-phenylcarbamoyl)-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
Phenylisocyanat (0,16 g, 1,38 mmol) wurde einer gerührten Lösung von 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on, das nach Zubereitung 4 oben hergestellt wurde (0,6 g, 1,38 mmol), in Toluol (5 ml) bei Raumtemperatur unter Stickstoff tropfenweise zugesetzt. Nach 1 Stunde wurde das Lösungsmittel unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel (CH₂Cl₂ / McOH, 95:5) gereinigt. Nach Zerreiben mit Ether wurde die Verbindung aus der Überschrift als blassgelber Feststoff gewonnen, 0,61 g, 80 %.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 2,05 (6H, s, 2×CH₃), 2,30 (3H, s, CH₃), 2,92 (2H, t, CH₂), 3,67 (2H, m, CH₂), 3,78 (3H, s, OCH₃), 3,91 (3H, s, OCH₃), 4,06 (2H, t, CH₂), 4,47 (2H, t, CH₂), 5,51 (1H, s, C=CH), 5,60 (1H, s br, NH), 6,69 (1H, s, ArH), 6,72 (1H, s, ArH), 6,89 (2H, s, 2×ArH), 6,90-7,23 (5H, m, 5×ArH), 7,62 (1H, br s, NH).

Beispiel 7
9,10-Dimethoxy-3-[2-guanidinethyl]-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
1,3-Di-tert-butoxycarbonxl)thioharnstoff (I)
Natriumhydrid (60 % in Öl, 4,7 g, 0,117 mmol) wurde mit Petrolether gewaschen, um das Öl zu entfernen, dann portionsweise einer gerührten Lösung von Thioharnstoff (2,0 g, 0,026 mol) in Tetrahydrofuran (400 ml) bei 0 °C unter Stickstoff hinzugefügt. Die Mischung wurde 5 Minuten lang bei 0 °C gerührt, dann 10 Minuten lang auf Raumtemperatur erwärmt. Nach der erneuten Abkühlung auf 0 °C wurde Di-tert-butyldicarbonat (16,1 g, 0,0585 mol) in Tetrahydrofuran (100 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Mischung wurde 30 Minuten lang bei 0 °C gerührt. Nach weiteren 2 Stunden beim Raumtemperatur wurde die Reaktion durch tropfenweises Hinzufügen von gesättigtem Natriumhydrogencarbonat (40 ml) abgebrochen und in Wasser (1 l) gegossen. Die Lösung wurde mit Ethylacetat (3 × 200 ml) extrahiert, und der gesamte Extrakt wurde mit Salzwasser gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum verdampft. Der rückständige Feststoff wurde mit Petrolether zerrieben, durch Filtration entfernt und im Vakuum getrocknet. Die Verbindung in der Überschrift (4,3 g, 60 %) wurde als gebrochen-weißer Feststoff gewonnen. Schmelzpunkt 124-127 °C.
3-[N-(N',N''-Di-(tert-butoxycarbonxl)-2-guanidinethyl]-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (3)
1-Methyl-2-chlorpyridiniodid (0,77 g, 3,03 mmol) in N,N-Dimethylformamid (4 ml) wurde einer gerührten Mischung von N,N'-Di-(tert-butoxycarbonyl)thioharnstoff (0,84 g, 3,03 mmol), 3-(2-amonoethyl)-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (2) (1,1 g, 2,53 mmol) und Triethylamin (0,56 g, 5,57 mmol) in N,N-Dimethylformamid (8 ml) tropfenweise zugesetzt. Nach 18 Stunden wurde die Reaktion durch Hinzufügen von Wasser (40 ml) abgebrochen und mit Ethylacetat (3 × 25 ml) extrahiert. Der gesamte Extrakt wurde mit Salzwasser gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum verdampft. Das verbleibende Öl wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel (Petrolether / Ethylacetat, 2:1) gereinigt, um die Verbindung der Überschrift als gelben Schaum zu gewinnen.

Molekülmasse [ES]+677

9,10-Dimethoxy-3-[2-guanidinethyl]-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
Trifluoressigsäure (0,35 g, 3,1 mmol) wurde einer gerührten Lösung von 3 (0,95 g, 1,4 mmol) in Dichlormethan (5 ml) bei Raumtemperatur tropfenweise zugesetzt. Nach 3 Stunden wurde weitere Trifluoressigsäure (0,35 g) hinzugefügt, und die Mischung wurde dann weitere 16 Stunden lang gerührt. Das Lösungsmittel wurde dann im Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde mit Dichlormethan (20 ml) behandelt und mit gesättigtem Natriumhydrogencarbonat auf pH 10 alkalisch gemacht. Die organische Phase wurde abgetrennt, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum verdampft. Das verbleibende Öl wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel (CH₂Cl₂/McOH, 98:2 → 90:10) gereinigt, um die Verbindung der Überschrift nach Zerreiben mit Diethylether als gebrochen-weißen Feststoff zu gewinnen, 0,27 g, 40 %.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃, 70 °C): δ 2,03 (6H, s, 2×CH₃), 2,26 (3H, s, CH₃), 2,95 (2H, t, CH₃), 3,57 (2H, m, CH₂), 3,67 (3H, s, OCH₃), 3,85 (3H, s, OCH₃), 3,98 (2H, t, CH₂), 4,33 (2H, t, CH₂), 5,40 (1H, s, C=CH), 6,73 (1H, s, ArH), 6,91 (2H, s, 2×ArH), 6,98 (1H, s, ArH), 7,25 (2H, br s, NH₂), 7,73 (1H, m, NH).

Die ¹H-NMR-Untersuchungen wurden bei 70 °C durchgeführt, um eine bessere Auflösung zu erhalten, weil einige Signale bei Raumtemperatur schlecht aufgelöst wurden.
Beispiel 8
9,10-Dimethoxy-3-[N-(N'-nitro)-2-guanidinethyll-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-alisochinolin-4-on
2-Methyl-1-nitro-2-isothioharnstoff (1)
S-Methylisothiouroniumsulfat (3,0 g, 10,8 mmol) wurde portionsweise einer gerührten Lösung von rauchender Salpetersäure (3 ml) und konzentrierter Schwefelsäure (9 ml) bei -10 °C bis +5 °C zugesetzt. Nach Rühren für weitere 30 min bei 5 °C wurde die Lösung unter Rühren auf Eis (120 g) gegossen. Der weiße Feststoff wurde durch Filtration entfernt, mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet, wobei 2-Methyl-1-nitro-2-isothioharnstoff (2,0 g, 69 %) gewonnen wurde.
9,10-Dimethoxy-3-[N-(N'-nitro)-2-guanidinethyl]-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
2-Methyl-1-nitro-2-isothioharnstoff (0,405 g, 3,0 mmol) wurde einer gerührten Lösung von 3-(2-aminoethyl)-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (1,29 g, 3,0 mmol) in Ethanol (12 ml) zugesetzt und 30 min lang auf 70 °C erhitzt. Das Lösungsmittel wurde dann im Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel (CH₂Cl2 / McOH, 97:3) gereinigt, was die Verbindung in der Überschrift als blassgelben Feststoff ergab (0,76 g, 49 %).

¹H NMR (250 MHz, d₆-DMSO, 70 °C): δ 2,02 (6H, s, 2×CH₃), 2,25 (3H, s, CH₃), 2,94 (2H, t, CH₂), 3,63 (2H, m, CH₂), 3,66 (3H, s, OCH₃), 3,84 (3H, s, OCH₃), 3,96 (2H, t, CH₂), 4,37 (2H, t, CH₂), 5,38 (1H, s, C=CH), 6,72 (1H, s, ArH), 6,88 (2H, s, 2×ArH), 6,96 (1H, s, ArH), 7,89 (1H, br s, NH).

Die ¹H-NMR-Untersuchungen wurden bei 70 °C durchgeführt, um eine bessere Auflösung zu erhalten, weil einige Signale bei Raumtemperatur schlecht aufgelöst wurden.
Beispiel 9
3-[N-(N'-Cyclohexylcarbamoyl)-2-aminoethyll-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
Cyclohexylisocyanat (0,38 g, 3,04 mmol) in Toluol (2 ml) wurde einer gerührten Lösung von 3-(2-Aminoethyl)-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (1,2 g, 2,76 mmol) in Toluol (8 ml) bei Raumtemperatur unter Stickstoff tropfenweise zugesetzt. Nach Rühren über 16 Stunden wurde die Lösung im Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel [Dichlormethan / Methanol(97:3)] gereinigt. Das Produkt wurde mit Ether zerrieben, was die Verbindung der Überschrift (0,61 g, 40 %) als blassgelben Feststoff ergab.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 0,7-1,8 (11H, m, Cyclohexyl), 2,05 (6H, s, 2×CH₃), 2,27 (3H, s, CH₃), 2,93 (2H, t, CH₂), 3,49 (2H, m, CH₂), 3,78 (3H, s, OCH₃), 3,91 (3H, s, OCH₃), 4,05 (2H, t, CH₂), 4,37 (2H, t, CH₂), 5,49 (1H, s, C=CH), 5,80 (1H, br s, NH), 6,69 (1H, s, ArH), 6,70 (1H, s, ArH), 6,90 (2H, s, 2×ArH).

Beispiel 10
3-(N-(Carbamoyl-2-aminoethyl)-9,10-dimethoxy-2-(2-methylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimidof[6,1-a]isochinolin-4-on
9,10-dimethoxy-2-(2-methylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (1)
2-Methylanilin (5,44 ml, 51 mmol) und 2-Chlor-9,10-dimethoxy-6,7-dihydro-4H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (5 g, 17 mmol) wurden in Propan-2-ol (400 ml) suspendiert und unter Rückfluss 24 Stunden lang unter Stickstoff erhitzt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die Lösung im Vakuum konzentriert, und der Rückstand wurde durch Flash-Säulenchromatographie [Dichlormethan/Methanol (98:2 – 96:4)] gereinigt, was die Verbindung in der Überschrift (6,2 g, quantitative Ausbeute) als gelb/orangefarbenen Feststoff ergab.
9,10-Dimethoxy-2-(2-methylphenylimino)-3-(N-phthalimidoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (2)
Eine Mischung aus Isochinolin 1 (6,2 g, 17 mmol), Kaliumcarbonat (21,1 g, 153 mmol), Natriumiodid (15,3 g, 102 mmol) und N-(2-Bromethyl)phthalimid (25,9 g, 102 mmol) in 2-Butanon (170 ml) wurde unter Stickstoff 7 Tage lang unter Rückfluss gerührt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die Mischung gefiltert, und der Rückstand wurde mit Methanol (150 ml) gewaschen. Das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert, der sich bildende Rückstand wurde mit Methanol (100 ml) behandelt und der Feststoff abgefiltert und mit Methanol gewaschen. Dieser Feststoff wurde mit Ether gewaschen und ergab die blassgelbe Verbindung der Überschrift (2,67 g, 30 %).
3-(2-Aminoethyl)-9,10-dimethoxy-2-(2-methylphenylimido)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-alisochinolin-4-on (3)
Eine Mischung aus Phthalimid 2 (2,66 g, 4,96 mmol) und Hydrazinmonohydrat (1,24 g, 24,8 mmol) in Chloroform (35 ml) und Ethanol (60 ml) wurde bei Raumtemperatur unter Stickstoff 18 Stunden lang gerührt. Zusätzliches Hydrazinhydrat (0,25 g, 5 mmol) wurde zugesetzt, und die Mischung wurde weitere 5 Stunden lang gerührt. Nach dem Abkühlen auf 0 °C in einem Eis/Wasserbad wurde der Feststoff durch Filtrieren entfernt, der Rückstand wurde mit etwas kaltem Chloroform gewaschen und das Filtrat im Vakuum konzentriert. Dieser Rückstand wurde in Dichlormethan aufgenommen und das unlösliche Material durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wurde getrocknet (MgSO₄), gefiltert und im Vakuum konzentriert und ergab die Verbindung der Überschrift (2,05 g, quantitative Ausbeute) als gelben Schaum.
3-(N-Carbamoyl-2-aminoethyl)-9,10-dimethoxy-2-(2-methylphenylimido)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-imido[6,1-a]isochinolin-4-on
Natriumcyanat (0,64 g, 9,8 mmol) in Wasser (13 ml) wurde einer gerührten Lösung von Amin 3 (2 g, 4,9 mmol) in Wasser (63 ml) und 1 M HCl (9,8 ml) bei 80 °C tropfenweise zugesetzt. Nach Rühren über 3 Stunden bei 80 °C wurde die Mischung gekühlt und mit 2 M NaOH alkalisch gemacht. Aus der Mischung wurde mit CH₂Cl₂ ein Extrakt gewonnen, bis kein Produkt mehr in der organischen Phase blieb. Die organischen Phasen wurden zusammengeführt, getrocknet (MgSO₄), gefiltert und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie [Dichlormethan / Methanol (97:3)] gereinigt und das Produkt mit Ether zerrieben, was die Verbindung der Überschrift (1,0 g, 45 %) als blassgelben Feststoff ergab.

¹H NMR (300 MHz, d₆-DMSO): δ 2,08 (3H, s, CH₃), 2,89 (2H, t, CH₂), 3,60 (3H, s, OMe), 3,79 (3H, s, OMe), 3,91 (2H, t, CH₂), 4,14 (2H, t, CH₂), 5,44 (2H, br s, NH₂), 5,64 (1H, s, Vinyl-H), 6,07 (1 H, t, NH), 6,71 (1 H, s, ArH), 6,73 (1H, d, ArH), 6,92 (1H, t, ArH), 6,95 (1H, s, ArH), 7,13 (1H, t, ArH), 7,19 (1H, d, ArH).

Bitte beachten: Das Protonen-NMR-Spektrum oben zeigt für eine CH₂-Gruppe keine chemische Verschiebung, man nimmt an, dass dieses Signal durch das in db-DMSO bei 3,31-3,35 vorhandene Wassersignal verdeckt wird.
Beispiel 11
3-(N-Carbamoyl-2-aminoethyl)-2-(2,6-diisopropylphenylimino)-9,10-dimethoxy-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
2-(2,6-Diisopropylphenylimino)-9,10-dimethoxy-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (1)
2,6-Diisopropylanilin (9,62 ml, 51 mmol) und 2-Chlor-9,10-dimethoxy-6,7-dihydro-4H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (5 g, 17 mmol) wurden in Propan-2-ol (400 ml) suspendiert und unter Rückfluss unter Stickstoff 4 Tage lang gerührt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die Lösung im Vakuum konzentriert und der Rückstand durch Flash-Säulenchromatographie [Dichlormethan / Methanol (98:2 – 96:4)] gereinigt, was die Verbindung der Überschrift (5,8 g, 79 %) als gelb-orangefarbenen Feststoff ergab.
2-(2,6-Diisopropylphenylimino)-9,10-dimethoxy-3-(N-phthalimidoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-Qyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (2)
Eine Mischung aus Isochinolin 1 (5,8 g, 13,4 mmol), Kaliumcarbonat (16,7 g, 121 mmol), Natriumiodid (12,1 g, 80 mmol) und N-(2-Bromethyl)phthalimid (25,9 g, 80 mmol) in 2-Butanon (150 ml) wurde unter Rückfluss unter Stickstoff 5 ½ Tage lang gerührt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die Mischung gefiltert und der Rückstand mit Methanol (150 ml) gewaschen. Das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert und der sich ergebende Rückstand mit Methanol (100 ml) behandelt und der Feststoff abfiltriert und sorgfältig mit Methanol gewaschen. Der resultierende Feststoff wurde getrocknet, was die Verbindung der Überschrift (4,9 g, 60 %) als blassgelbes Material ergab.
3-(2-Aminoethyl)-2-(2,6-diisopropylphenylimino)-9,10-dimethoxy-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (3)
Eine Mischung aus Phthalimid 2 (4,9 g, 8,08 mmol) und Hydrazinmonohydrat (2,01 g, 40,4 mmol) in Chloroform (70 ml) und Ethanol (105 ml) wurde bei Raumtemperatur unter Stickstoff 18 Stunden lang gerührt. Zusätzliches Hydrazinhydrat (0,5 g, 10 mmol) wurde zugesetzt und die Mischung weitere 3 Stunden lang gerührt. Nach dem Abkühlen auf 0 °C in einem Eis/Wasserbad wurde der Feststoff durch Filtrieren entfernt, der Rückstand wurde mit etwas kaltem Chloroform gewaschen und das Filtrat im Vakuum konzentriert. Dieser Rückstand wurde in Dichlormethan aufgenommen und das unlösliche Material durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wurde getrocknet (MgSO₄), gefiltert und im Vakuum konzentriert, was die Verbindung in der Überschrift (3,24 g, 84 %) als gelben Schaum ergab.
3-(N-Carbamoyl-2-aminoethyl)-2-(2 6-düsopropylphenylimino)-9,10-dimethoxy-3,4,6,7-tetrahydro-2H-imido[6,1-a]isochinolin-4-on
Natriumcyanat (0,87 g, 13,4 mmol) in Wasser (20 ml) wurde einer gerührten Lösung von Amin 3 (3,2 g, 6,7 mmol) in Wasser (100 ml) und 1 M HCl (13,4 ml) bei 80 °C tropfenweise zugesetzt. Nach 4 Stunden langem Rühren bei 80 °C wurde die Mischung gekühlt und mit 2 M NaOH alkalisch gemacht. Aus der Mischung wurde mit CH₂Cl₂ ein Extrakt gewonnen, bis kein Produkt mehr in der organischen Phase blieb. Die organischen Phasen wurden zusammengeführt, getrocknet (MgSO₄), gefiltert und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie [Dichlormethan/Methanol (97:3)] gereinigt und das isolierte Produkt in einer Mischung von Dichlormethan und Ether aufgenommen, was nach Konzentrieren die Verbindung der Überschrift (0,6 g, 17 %) als blassgelben Schaum ergab.

¹H NMR (300 MHz, DMSO): δ1,07 (12H, dd, 4 CH₃), 2,82 – 2,94 (4H, m, CH₂ und 2 CH(CH₃)₂), 3,55 (3H, s, OMe), 3,78 (3H, s, OMe), 3,91 (2H, t, CH₂), 4,17 (2H, t, CH₂), 5,32 (1H, s, Vinyl-H), 5,45 (2H, br s, NH₂), 6,13 (1H, t, NH), 6,56 (1H, s, ArH), 6,95 (1H, s, ArH), 7,00 (1H, m, ArH), 7,10 (1H, s, ArH), 7,12 (1H, br s, ArH).

Bitte beachten: Das Protonen-NMR-Spektrum oben zeigt für eine CH₂-Gruppe keine chemische Verschiebung, man nimmt an, dass dieses Signal durch das in d₆-DMSO bei 3,30-3,33 vorhandene Wassersignal verdeckt wird.
Beispiel 12
3-(N-Carbamoyl-4-aminobutyl)-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
9,10-Dimethoxy-3-(4-N-phthalimidobutyl)-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (1)
Eine Mischung aus 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (4,0 g, 10,2 mmol), N-(4-Brombutyl)phthalimid (8,6 g, 30,6 mmol), Kaliumcarbonat (12,7 g, 91,8 mmol) und Natriumiodid (4,6 g, 30,6 mmol) in 2-Butanon (100 ml) wurde unter Rückfluss unter Stickstoff 4 Tage lang gerührt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wurde der Feststoff durch Filtrieren entfernt und das Filtrat im Vakuum verdampft. Der Rückstandsfeststoff wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel [Petrolether / Ethylacetat (2:1) – (1:1)] gereinigt. Die Verbindung der Überschrift (1,45 g, 24 %) wurde als gelber Feststoff gewonnen.
3-(4-Aminobutyl)-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (2)
Eine Lösung von 1 (1,4 g, 2,36 mmol) in Ethanol (30 ml) und Chloroform (20 ml) wurde mit Hydrazinhydrat (0,42 g, 7,09 mmol) behandelt und bei Raumtemperatur unter Stickstoff gerührt. Nach 18 Stunden wurde weiteres Hydrazinhydrat (0,42 g) zugesetzt und die Mischung weitere 5 Stunden lang gerührt. Die Reaktionsmischung wurde dann auf 0 °C abgekühlt und der Feststoff durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wurde getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum getrocknet, was die Verbindung der Überschrift (1,0 g, 92 %) als gelben Feststoff ergab.
3-(N-Carbamoyl-2-aminobutyl)-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
Natriumcyanat (0,28 g, 4,32 mmol) in Wasser (6 ml) wurde einer gerührten Lösung von 2 (1,0 g, 2,16 mmol) in Wasser (30 ml) und 1 N HCl (4,3 ml) bei 80 °C tropfenweise zugesetzt. Nach 2 Stunden bei 80 °C wurde die Mischung gekühlt und ein Extrakt mit Dichlormethan (3×20 ml) gewonnen und der Extrakt getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel [Dichlormethan-/Methanol (97:3)] gereinigt, was die Verbindung der Überschrift (0,70 g, 64 %) als gelben Feststoff ergab.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 1,64 (2H, m, CH₂), 1,90 (2H, m, CH₂), 2,07 (6H, s, 2×CH₃), 2,26 (3H, s, CH₃), 2,92 (2H, t, CH₂), 3,30 (2H, m, CH₃), 3,73 (3H, s, OCH₃), 3,88 (3H, s, OCH₃), 4,06 (2H, t, CH₂), 4,27 (4H, m, CH₂+NH₂), 5,44 (1H, s, C=CH), 6,65 (1H, s, ArH), 6,67 (1H, s, ArH), 6,89 (2H, s, 2×ArH).

Beispiel 13
3-[N-(N'-Cyano-N''-methyl)-2-guanidinethyl]-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethyl-phenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
3-[N-(N'-Cyano-S-methyl)-2-isothioureidoethyl]-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenyimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (1)
Dimethyl-N-cyanodithioiminocarbonat (7,45 g, 46,1 mmol) wurde einer Lösung von 3-(2-Aminoethyl)-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethyl-phenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on (2,0 g, 4,61 mmol) in Toluol (50 ml) zugesetzt und bei 90 °C unter Stickstoff gerührt. Nach 2 Stunden wurde das Lösungsmittel im Vakuum verdampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie auf Silicagel [Dichlormethan / Methanol (100:0)- (95:5)] gereinigt. Die Verbindung der Überschrift (2,30 g, 94 %) wurde als gelber Feststoff erhalten.
3-[N-(N'-Cyano-N''-methyl)-2-guanidinethyl]-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethyl-phenyliminol-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on
Eine Lösung von 1 (2,0 g, 3,76 mmol) in Dichlormethan (30 ml) wurde mit 2 M Methylamin/THF (9,4 ml, 18,8 mmol) behandelt und unter Rückfluss unter Stickstoff gerührt. Nach 16 Stunden wurde weiteres 2 M Methylamin/THF (9,4 ml) zugesetzt, gefolgt von weiteren zwei Portionen 2 M Methylamin/THF (9,4 ml) im Abstand von 2 Stunden. Nach 24 Stunden unter Rückfluss wurde die Reaktionsmischung gekühlt und im Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel [Dichlormethan / Methanol (98:2)] gereinigt, um nach Zerreiben mit Ether die Verbindung der Überschrift (1,20 g, 62 %) als blassgelben Feststoff zu erhalten.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 1,99 (6H, s, 2×CH₃), 2,22 (3H, s, CH₃), 2,43 (3H, d, NHCH₃), 2,86 (2H, t, CH₂), 3,52 (2H, m, CH₂), 3,69 (3H, s, OCH₃), 3,83 (3H, s, OCH₃), 4,02 (2H, t, CH₂), 4,28 (2H, m, CH₂), 5,39 (1H, s, C=CH), 6,61 (1H, s, ArH), 6,63 (1H, s, ArH), 6,82 (2H, s, 2×ArH).

Der pharmakologische Nutzen der Verbindungen der vorliegenden Erfindung wurde in Untersuchungen demonstriert, wobei vorher synthetisierte Verbindungen aus den obigen Beispielen verwendet wurden. Die Ergebnisse unten dienen dazu, die allgemeine Anwendung der Verbindungen der vorliegenden Erfindung zu erläutern.
Beispiel A
Wirksamkeit einer erfindungsgemäßen Verbindungen gegen die elektrisch induzierte Kontraktion von isolierter Meerschweinchentrachea
Die Wirksamkeit der Verbindungen von Beispiel 1, 8, 9, 10, 11 und 13 wurden gegen die elektrisch induzierte Kontraktion von isolierter Meerschweinchentrachea geprüft. Die Ergebnisse demonstrieren, dass die Verbindungen der vorliegenden Erfindung die kontraktile Reaktion bei lang anhaltender Wirkungsdauer hemmen.
Methode
Die Durchströmung von Meerschweinchen-Trachearingen wurde nach einer vorher beschriebenen Methode (Coleman et al. 1996; Pulmonary Pharmacology, 9, 107-117) durchgeführt. Kurz gesagt, wurden die Tracheapräparate vom Meerschweinchen in Ringe geschnitten, dann durch Aufschneiden des Rings gegenüber dem glatten Muskel geöffnet und zwischen zwei Platinelektroden unter 1 g Spannung aufgehängt. Die Gewebe wurden mit einer Rate von 3,25 ml/min mit Krebs-Henseleit-Lösung bei 37 °C durchströmt, die den Cyclooxygenase-Inhibitor, Indomethacin (5 μM) enthielt und von Blasen aus 95 % O₂ und 5 % CO₂ durchströmt wurden. Die Tracheapräparate hatten 40 min äquilibrieren gelassen, bevor die elektrische Stimulation begann, welche in Form einer 10 s-Folge von Rechteckimpulsen von 3 Hz, 0,1 ms Dauer und 20 V (ca. 400 mA) bestand, die alle 100 s mittels eines physiologischen Rechteckimpulsstimulators erzeugt wurden.
Die Verbindung von Beispiel 1 wurde in DMSO aufgelöst, das Tween 80 (10 %) und destilliertes Wasser (0,01 M) enthielt, und wurde dann dem Organbad zugesetzt, was eine Endkonzentration von 10 μM ergab. Die anderen Verbindungen wurden in DMSO hergestellt und in Krebs-Henseleit-Lösung verdünnt, was eine Enddurchströmungskonzentration von 0,05 % DMSO ergab, und wurden mit einer Rate von 0,3 ml/min perfundiert; die kontraktilen Reaktionen auf die elektrische Feldstimulation wurden auf einem Macintosh-Computer mittels MacLab-Software aufgezeichnet.
Ergebnisse
Die Trägersubstanz, DMSO, hemmte die kontraktile Reaktion auf elektrische Feldstimulation nicht signifikant (2). Die Ergebnisse für die Verbindungen werden in den Figuren gezeigt: 3 für die Verbindung von Beispiel 1; 4 für die Verbindung von Beispiel 9; 5 für die Verbindung von Beispiel 10; 6 für die Verbindung von Beispiel 11; 7 für die Verbindung von Beispiel 13 und 8 für die Verbindung von Beispiel B.
Die Verbindungen verursachten die vollständige Hemmung der kontraktilen Reaktion auf elektrische Feldstimulation, und der Effekt hielt für mehr als 2-4 Stunden an.
Beispiel B
Wirksamkeit einer erfindungsgemäßen Verbindung gegen die Proliferation von menschlichen einkernigen Zellen, die durch PHA stimuliert wurden
Die hemmende Wirkung der Verbindung von Beispiel 1, 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(N-carbamoyl-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on, auf die Proliferation von menschlichen einkernigen durch PHA stimulierten Zellen wurde untersucht. Die Proliferation wurde durch die Verbindung signifikant gehemmt, was anzeigt, dass sie entzündungshemmende Aktivität besitzt. Das Ergebnis unten illustriert die allgemeine Anwendung der neuartigen Verbindungen der vorliegenden Erfindung.
Methode
Normale gesunde Freiwillige unterzogen sich der Phlebotomie, und 25 ml Blut wurden gesammelt. Einkernige Zellen wurden abgetrennt und nach der Methode von Banner et al. (Banner et al. Br. J. Pharmacol. 116 3169-3174 (1995)) gereinigt. Menschliche periphere einkernige Zellen (100.000 pro Vertiefung) wurden 24 Stunden lang mit Phythaemagglutinin (PHA, 2μg/ml) in Abwesenheit oder Gegenwart der Verbindung von Beispiel 1 (0,001-100 μM) bei 37 °C in einer Atmosphäre aus 95 % Luft, 5 % CO₂ stimuliert. Vierundzwanzig Stunden später wurde jeder Vertiefung [³H]-Thymidin (0,1 μCi) zugesetzt, und die Zellen wurden für eine weitere 24-Stunden-Periode inkubiert. Die Zellen wurden dann mit Hilfe eines Zellsammlers (ICN Flow, Buckinghamshire) auf Glasfaserfilter gebracht und in einem Szintillationszähler gezählt.
Ergebnisse
Die getestete Verbindung verursachte eine konzentrationsabhängige Hemmung oder Proliferation von menschlichen einkernigen Zellen, die mit PHA stimuliert wurden (die Zahl der Experimente beträgt 6; Tabelle 1). Die IC₅₀-Werte und 95 %-Vertrauensgrenzen für diese Verbindungen sind in Tabelle 1 angegeben. Das Ergebnis wird auch in der graphischen Darstellung von 8 angeführt.
Tabelle 1 IC₅₀-Wert für die Verbindung von Beispiel 1 gegen die Proliferation von menschlichen einkernigen Zellen, die mit PHA stimuliert wurden
Beispiel C
Hemmung der Phosphodiesterase (PDE) Typ3 und 4 Isoenzyme
Es wurde gezeigt, dass die Verbindung von Beispiel 1, 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(N-carbamoyl-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on, ein leistungsfähiger Inhibitor der Phosphodiesterase (PDE) Typ3 und 4 Isoenzyme ist. Die IC₅₀-Werte werden unten angegeben.
Rolipram ist als PDE 4-Inhibitor bekannt, und Cilostamide ist als PDE 3-Inhibitor bekannt.
Beispiel D
Wirkung der Verbindung von Beispiel 1, 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(N-carbamoyl-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on, auf die LPS-induzierte TNF-α-Freisetzung aus menschlichen Monozyten
Beispiel E
in vitro-Tests
1. Die Verbindung von Beispiel 1, 9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(N-carbamoyl-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido [6,1-a]isochinolin-4-on, wurde in einem Modell für histamin-induzierten Bronchospasmus getestet. Meerschweinchen, die bei Bewusstsein waren, wurden einer (feinst zerkleinerten) Trockenpulververbindung ausgesetzt. Das Medikament wurde mit Lactose gemischt, so dass die Endkonzentration 0,25, 2,5 und 25 % betrug. Zu verschiedenen Zeiten nach der Medikamenteneinwirkung wurden die Tiere narkotisiert und mit verschiedenen Histamindosen gereizt. Der Gesamtatemwegswiderstand und der mittlere arterielle Blutdruck wurden aufgezeichnet.
Die Einwirkung von Trockenpulver (2,5 und 25 %) bot signifikanten Schutz vor dem histamin-induzierten Bronchospasmus über eine Dauer von 5,5 Stunden und verringerte den mittleren Blutdruck für diese Dauer.
2. Die intravenöse Verabreichung von Verbindung 1 (1 bis 100 μg/kg) an Meerschweinchen, die mit Urethan narkotisiert wurden, erzeugte eine dosisabhängige Verringerung des mittleren arteriellen Blutdrucks. Die Verbindung wurde in DMSO aufgelöst, dann mit Salzwasser verdünnt (es gab Anzeichen dafür, dass die Verbindung aus der Lösung ausgeschieden wurde).
3. In einem Modell für antigeninduzierte Eosinophilie im Meerschweinchen, das mit Ovalbumin sensibilisiert wurde, hemmte die Verbindung (10 mg/kg), die oral 1 Stunde vor der Antigenbelastung verabreicht wurde, signifikant die Anziehung von Eosinophilen in der Lunge nach Antigenbelastung (Aerosol) in sensibilisierten Meerschweinchen. Die Einwirkung von Trockenpulver (25 %), 1,5 Stunden vor der Antigenbelastung, hemmte signifikant das Recruitment von Eosinophilen in der Lunge (die Messungen wurden 24 Stunden nach der Belastung durchgeführt).
Weitere Experimente wurden durchgeführt, um die Wirkungsdauer in diesem Modell zu bestimmen. Die Verabreichung der Verbindung (25 %) 5,5 Stunden vor der Antigenbelastung hemmte die Anziehung von Eosinophilen in der Lunge nicht signifikant.
Beispiel F
Geschmack der Verbindungen
Bei pharmazeutischen Verbindungen, die oral verabreicht werden, ist es sehr wichtig, die Patientenakzeptanz zu sichern. Anders als erwartet, sind die Verbindungen der vorliegenden Erfindung im wesentlichen geschmacklos. Sie sind daher besonders für die orale Verabreichung geeignet, zum Beispiel als zu inhalierendes Trockenpulver.
Methode
Kleinmengen der Verbindung von Beispiel 1, Trequinsin (9,10-Dimethoxy-3-methyl-2-mesitylimino-2,3,6,7-tetrahydro-4H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on) und Desmethyltrequinsin (9,10-Dimethoxy-2-mesitylimino-2,3,6,7-tetrahydro-4H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on) wurden auf die Zungenspitze eines informierten, gesunden männlichen Freiwilligen gebracht, und der Geschmack jeder einzelnen Verbindung wurde bewertet.
Ergebnisse
Die in Tabelle 3 unten angeführten Ergebnisse zeigen, dass die Verbindung von Beispiel 1 den Geschmack im Vergleich mit Trequinsin und Desmethyltrequinsin signifikant verbessert hat.

Claims

Verbindung der allgemeinen Formel I:
wobei jedes von R¹ und R² unabhängig eine C_1-6Alkyl- oder C_2-7Alkylgruppe bedeuten; R⁵ ein Wasserstoffatom oder eine C_1- ₃-Alkyl-, C_2- ₃-Alkenyl- oder C_2- ₃-Alkinylgruppe ist; R⁶ ein Wasserstoffatom oder eine C_1-6-Alkyl-, C_2-6-Alkenyl-, C_2-6-Alkinyl-, Amino-, C_1-6-Alkylamino-, di(C_1-6)-Alkylamino- oder C_2-7-Acylaminogruppe bedeutet; jedes von R⁷ und R⁸ unabhängig ein Wasserstoff- oder Halogenatom oder ein Hydroxy, Trifluormethyl, C_1- ₆Alkyl, C_2-6Alkenyl, C₂_₆Alkenyl, C₂_₆Alkynyl, C_2-7Azyl, C_1-6-Alkylthio, C_1-6Alkoxi oder C_3-6Cykloalkyl ist; und R⁹ ein Wasserstoff- oder Halogenatom oder eine Hydroxy-, Trifluormethyl-, C_1-6-Alkyl-, C_2-6Alkenyl-, C_2-6Alkynyl-, C_2-7Azyl-, C_1-6Alkylthio-, C_1-6Alkoxi- oder C_3-6-Cykloalkylgruppe bedeutet; X eine CR³R⁴-Gruppe ist, wobei jedes von R³ und R⁴ unabhängig ein Wasserstoffatom oder eine C_1- ₃Alkylgruppe darstellt; jedes von R¹⁰ und R¹¹ unabhängig ein Wasserstoffatom, eine C_1-3Alkyl-, C_3-6-Cykloalkyl- oder Phenylgruppe bedeutet; Y ein Sauerstoffatom oder eine Gruppe CHNO₂, NCN, NH oder NNO₂ ist; n eine ganze Zahl von 2 bis 4 ist; oder ein Salz der Verbindung.
Verbindung der allgemeinen Formel I, wobei, unabhängig oder in einer beliebigen kompatiblen Kombination: jedes von R¹ und R² eine C_1- ₆Alkyl-, vorzugsweise eine C_1- ₄Alkylgruppe bedeutet; R¹ und R² einander gleich sind; jedes von R³ und R⁴ ein Wasserstoffatom ist; R⁵ ein Wasserstoffatom darstellt; R⁶ ein Wasserstoffatom bedeutet; jedes von R⁷ und R⁸ eine C_1- ₆Alkyl-, vorzugsweise Methyl-, Ethyl- oder Isopropylgruppe bedeutet; R⁷ und R⁸ einander gleich sind; R⁹ ein Halogenatom oder eine Methyl- oder Azetylgruppe darstellt; Y ein Sauerstoffatom oder eine CHNO₂-Gruppe bedeutet, und n gleich 2 ist.
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-(N-carbamoyl-2-aminoethyl)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-(N'-isopropylcarbamoyl)-2-aminoethyl]-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N'-methyl-2-nitroethenamin)]-2-aminoethyl]-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N'-isopropyl-2-nitroethenamin)]-2-aminoethyl]-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-[1-(N',N'-dimethyl-2-nitroethenamin)]-2-aminoethyl]-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
9,10-Dimethoxy-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3-[N-(N'-phenylcarbamoyl)-2-aminoethyl]-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-2-on.
9,10-Dimethoxy-3-[2-guanidinoethyl]-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
9,10-Dimethoxy-3-[N-(N'-nitro)-2-guanidinoethyl]-2-(2,4,6-trimethylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
3-[N-(N'-Cyklohexylcarbamoyl)-2-aminoethyl]-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethyl-phenylimino-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
3-(N-Carbamoyl-2-aminoethyl)-9,10-dimethoxy-2-(2-methylphenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
3-(N-Carbamoyl-2-aminoethyl)-2-(2,6-düsopropylphenylimino)-9,10-dimethoxy-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
3-(N-Carbamoyl-4-aminobutyl)-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethyl-phertylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
3-[N-(N'-cyano-N''-methyl)-2-guanidinoethyl]-9,10-dimethoxy-2-(2,4,6-trimethyl-phenylimino)-3,4,6,7-tetrahydro-2H-pyrimido[6,1-a]isochinolin-4-on.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel (I), wie in Anspruch 1 definiert, wobei das Verfahren beinhaltet: (a) Überführen einer Verbindung der allgemeinen Formel (II):
in der R¹,R²,R⁵,R⁶,R⁷,R⁸,R⁹,X und n die gleiche Bedeutung wie in der allgemeinen Formel (I) besitzen in ein Derivat, mit einer oder mehreren Verbindungen, die an der primären Aminogruppe der (-(CH₂)_n-NH₂)-Komponente reagieren, um eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) zu bilden; oder (b) wenn X in der allgemeinen Formel (I) eine CR³R⁴-Gruppe darstellt, in der R³ ein Wasserstoffatom ist, R⁴ ein Wasserstoffatom oder eine C_1- ₃Alkylgruppe bedeutet, und R⁵ ein Wasserstoffatom oder eine C_1- ₃Alkylgruppe darstellt, Hydrieren einer Verbindung der allgemeinen Formel (III):
in der R¹,R²,R⁶,R⁷,R⁸,R⁹,R¹⁰,R¹¹,Y und n die gleiche Bedeutung wie in der allgemeinen Formel (I) besitzen; und (c) optional Umwandeln einer so gebildeten Verbindung der allgemeinen Formel (I) in eine andere Verbindung der allgemeinen Formel (I).
Verfahren nach Anspruch 16, wobei in der allgemeinen Formel (I), wenn Y ein Sauerstoffatom darstellt und jedes von R¹⁰ und R¹¹ ein Wasserstoffatom ist, eine Verbindung der allgemeinen Formel (II) mit Natriumcyanat in ein Derivat übergeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 16, wobei in der allgemeinen Formel (I), wenn Y ein Sauerstoffatom, R¹⁰ ein Wasserstoffatom und R¹¹ eine C_1- ₃Alkyl-, C_3- ₆Cykloalkyl- oder Phenylgruppe bedeutet, eine Verbindung der allgemeinen Formel (II) mit einem Isocyanat der allgemeinen Formel R¹¹NCO in ein Derivat übergeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 18, wobei das Isocyanat Isopropylisocyanat oder Phenylisocyanat ist.
Verfahren nach Anspruch 16, wobei in der allgemeinen Formel (I), wenn Y CHNO₂ bedeutet, R¹⁰ ein Wasserstoffatom und R¹¹ eine C_1- ₃Alkyl- oder C_3- ₆-Cykloalkylgruppe ist, eine Verbindung der allgemeinen Formel (II) mit einem N-C_1- ₃Alkyl- oder N-C₃_₆Cykloalkyl-1-(methylthio)-2-nitroethenamin der allgemeinen Formel CH₃SC(=CHNO₂)NR¹⁰R¹¹ in ein Derivat übergeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 20, wobei die Verbindung der allgemeinen Formel (II) mit N-methyl-1-(methylthio)-2-nitroethenamin in ein Derivat übergeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 16, wobei in der allgemeinen Formel (I), wenn Y CHNO₂ bedeutet, eine Verbindung der allgemeinen Formel (II) zuerst mit 1,1-bis(methylthio)-2-nitroethylen zur Reaktion gebracht wird und dann die entstandene Verbindung mit einem Amin der allgemeinen Formel R¹⁰R¹¹NH, in der R¹⁰ und R¹¹ die gleiche Bedeutung wie in Formel (I) besitzen zur Reaktion gebracht wird.
Verfahren nach Anspruch 22, wobei das Amin Isopropylamin oder Dimethylamin ist.
Verfahren nach Anspruch 16, wobei, wenn in der allgemeinen Formel (n Y NH bedeutet, eine Verbindung der allgemeinen Formel (II) mit einer Verbindung der allgemeinen Formel CH₃SC(=NH)NR¹⁰R¹¹ oder einem Salz dieser Verbindung, in der R¹⁰ und R¹¹ die gleiche Bedeutung wie in der allgemeinen Formel (I) besitzen, in ein Derivat übergeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 16, wobei, wenn in der allgemeinen Formel (I) Y NCN bedeutet, eine Verbindung der allgemeinen Formel (II) mit einer Verbindung der allgemeinen Formel CH₃SC(=NCN)NR¹⁰R¹¹ oder ein Salz dieser Verbindung, in der R¹⁰ und R¹¹ die gleiche Bedeutung wie in der allgemeinen Formel (n besitzen, in ein Derivat übergeführt wird.
Verfahren nach einem der Ansprüche 16 bis 25, wobei die Verbindung der allgemeinen Formel (I) eine solche wie in einem der Ansprüche 1 bis 15 definiert, ist.
Zusammensetzung, die eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) und einen veterinärmedizinisch oder pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünner enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 27, die weiterhin einen aktiven Wirkstoff, wie einen β₂-adrenozeptor Agonisten oder ein glucocorticoides Steroid enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 27 oder 28, wobei die Zusammensetzung eine pharmazeutische Zusammensetzung für humanmedizinische Zwecke ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 27, 28 oder 29, zur Verabreichung als Aerosol.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 27 bis 30, wobei die Verbindung eine solche, wie in einem der Ansprüche 1 bis 15 definiert, ist
Verbindung der allgemeinen Formel (I) zum Gebrauch in der Medizin.
Verbindung der allgemeinen Formel (I) zur Verwendung als Inhibitor eines Phosphodiesterase-Isoenzyms.
Verbindung der allgemeinen Formel (n zur Verwendung bei der Verhütung oder der Behandlung einer Krankheit, bei der die Steigerung der intrazellularen Konzentration von cAMP erwünscht ist.
Verbindung der allgemeinen Formel (n zur Verwendung bei der Verhütung oder Behandlung von Asthma.
Verbindung der allgemeinen Formel (I) zur Verwendung bei der Verhütung oder Behandlung von chronischer obstruktiver Lungenerkrankung (COPD).
Verbindung nach einem der Ansprüche 32 bis 36, wobei die Verbindung eine solche ist wie sie in einem der Ansprüche 1 bis 15 definiert ist.
Verwendung einer Verbindung der allgemeinen Formel (n bei der Herstellung eines Inhibitors vom Typ eines III/IV Phosphodiesterase-Isoenzyms.
Verwendung einer Verbindung der allgemeinen Formel (n bei der Herstellung eines Bronchodilators.
Verwendung einer Verbindung der allgemeinen Formel (n bei der Herstellung eines Antiasthmaticums.
Verwendung einer Verbindung der allgemeinen Formel (n in der Herstellung eines Medikamentes zur Verhütung oder zur Behandlung von chronischer obstruktiver Lungenerkrankung (COPD).
Verwendung nach einem der Ansprüche 38 bis 41, wobei die Verbindung eine solche wie in einem der Ansprüche 1 bis 15 definiert ist.