DE60003045T2

DE60003045T2 - Heterozyclische verbindungen als angiogenese inhibitoren

Info

Publication number: DE60003045T2
Application number: DE60003045T
Authority: DE
Inventors: Nándor MAKK; Gábor AMBRUS; Anikη TEGDES; András JENEY; Ferenc Timar
Original assignee: Ivax Drug Research Institute Ltd
Current assignee: Teva Hungary Pharmaceutical Marketing PLC
Priority date: 1999-08-02
Filing date: 2000-08-02
Publication date: 2004-04-01
Anticipated expiration: 2020-08-03
Also published as: HK1048995A1; ZA200200838B; WO2001009113A2; EP1206462A2; HK1048995B; CA2378176A1; MXPA02001117A; HRP20020103B1; PL354281A1; SK1822002A3; OA12004A; BR0012968A; DK1206462T3; RU2247723C2; HU9902628D0; UA74341C2; BG106373A; AP2002002413A0; IS2137B; NO20020485L

Description

Diese Erfindung betrifft neuartige Borrelidinderivate, genauer neuartige Borrelidinderivate, die durch Transformieren der Carboxylgruppe auf dem Cyclopentanring von Borrelidin hergestellt wird. Darüber hinaus betrifft die Erfindung pharmazeutische Zusammensetzungen, die solche Verbindungen enthalten, und die Verwendung dieser Verbindungen zur Herstellung pharmazeutischer Zusammensetzungen.
Die erfindungsgemäßen neuartigen Verbindungen zeichnen sich durch eine wertvolle biologische Effizienz aus, denn sie weisen eine bemerkenswerte angionesehemmende sowie eine antimetastatische Wirkung auf.
Bekanntlich ist die Angiogenese ein Phänomen, bei dem Blutgefäße im Organismus gebildet werden und ein neues Gefäßsystem entsteht. Die Angiogenese kann abhängig vom Wachstum und der Funktion der Endothelzellen sehr unterschiedliche Formen annehmen und kann eigentlich als eine bestimmte Art von Kaskadenreaktionen angesehen werden. Die Angiogenese findet unter normalen physiologischen Umständen als Teil der Evolution und der Reproduktionsprozesse bei Embryonen, Föten, in der Plazenta, im Uterus und ähnlichen Organen statt. Sie kann jedoch auch Teil eines pathologischen Prozesses sein, der mit der Wundheilung, einer Infektion sowie Tumorwachstum einhergeht und außerdem die Bildung von Tumormetastasen fördern kann.
Aus der Literatur und der klinischen Beobachtung ist schon lange bekannt, dass der Großteil der Krebspatienten an Metastasen stirbt. In den letzten Jahren hat sich die Situation dank der Strahlentherapie und der Chemotherapie gebessert, aber die erreichten Ergebnisse sind keineswegs beruhigend.
Aufgrund der Ergebnisse, die durch die Untersuchung der pathobiologischen Merkmale maligner Erkrankungen erhalten wurden, hat sich in den letzten Jahren ein neuer Trend bei der Forschung nach Antitumormedikamenten herausgebildet. Es ist auf diese neue Tendenz zurückzuführen, dass man bei der Planung neuartiger Wirkstoffe nicht nur nach Wirkstoffen forscht, die das Wachstum von Tumorgewebe hemmen, sondern auch andere pathobiologische Vorgänge untersucht (Immortalisierung, Metastasen, programmierter Zelltod, Angiogenese), die für die Aufrechterhaltung der Bösartigkeit verantwortlich sind. Unter diesen Vorgängen verdient die Bildung neuer Blutgefäße besondere Aufmerksamkeit, weil dadurch eine kontinuierliche Blutzufuhr für die wachsenden Tumoren sichergestellt wird. Fehlt diese dagegen, sterben die Tumorzellen ab. Aus tumorbiologischen Untersuchungen kann der Schluss gezogen werden, dass das Fortschreiten maligner Erkrankungen als Funktion der Angiogenese angesehen werden kann, und der Übergang vom prämalignen Zeitraum in den invasiven Zeitraum sowie der Übergang vom ruhenden Zustand der Tumorzellpopulation zur Proliferation kann in engen Zusammenhang mit der Bildung von Blutgefäßen gebracht werden.
Somit zielt die Erforschung von Medikamenten gegen Tumoren heute auf die Planung und Entwicklung von Molekülen ab, die neue Angriffspunkte aufweisen und mit deren Hilfe Krebs effizienter geheilt werden kann als bisher. Bei diesen neuartigen Molekülen liegt die Priorität auf einer Gruppe von Antiangiogenesemitteln, die durch Hemmung der Bildung neuer Gefäße und daher der Bildung von Metastasen ein neues Zeitalter für die Behandlung von Tumorerkrankungen einläuten können.
Von verschiedenen Verbindungen ist bekannt, dass sie die Angiogenese hemmen. Von diesen sind folgende als Beispiele aufzuführen, die jedoch keinen Anspruch auf Vollständigkeit erheben: angiostatische Steroide [Folkman J. et al., Science 221, 719 (1993)] wie Cortison, das die Funktion der Endothelzellen hemmt; Medroxyprogesteronacetat, das die Herstellung des Plasminogenaktivators durch die Endothelzellen hemmt [Nicosia, R. F. und Ottinetti, A., Lab. Invest. 63, 115 (1990]], Fumagillin, das die Bildung von Tubuli hemmt [Ingber, D. et al., Nature 348, 555 (1990)]; ein Polysaccharidsulfat (SD-4152), das die Migration und Multiplikation der Endothelzellen hemmt; und die Retinsäure, die für die Differenzierung und Umwandlung der Endothelzellen verantwortlich ist [Tsutomu Oikawa, Kekkan – Naihi 2,470 (1992)]. Jedoch wirkten diese Substanzen in der klinischen Praxis nicht als Angiogenesehemmer, denn einige riefen starke Nebenwirkungen hervor und bei den anderen war die Zielwirkung unzureichend.
Der erste selbst klinisch wirksame Angiogenesehemmer war α-Interferon [Bronty-Boye, D. und Zetter, B. E., Science 208, 516 (1980); Sidky, Y. A. und Borden, E. C., Cancer Res., 47, 5155 (1987)]. Derzeit laufen klinische Versuche mit verschiedenen angiogenesehemmenden Verbindungen mit unterschiedlichen chemi schen Strukturen. Bei diesen Verbindungen handelt es sich beispielsweise um Derivate von Fumagillin, z. B. AGM-1470 [Kusaka, M. et al., Biophys. Res. Comm. 174, 1070 (1991)]; 3-(2,4-Dimethylpyrrol-5-yl)-indolin-2-on (SU-5416), U.S. 5,792,783; 5-Methylisoxazol-4-carbonsäure-N-[4-trifluoromethyl)-phenyl]-amid (Leflunomide, SU-101), US-A-5,610,173; 2 (R)-Isobutyl-3(S)-dihydroxy-N-[2,2-dimethyl-1(S)-(N-methylcarbamoyl)-propyl]-succinamid (Marimastat); 3β-[{3-[(4-Aminobutyl)-amino]-propyl}-amino]-5α-cholestan-7,24-diol-24-hydrogensulfat (Squalamine), US-A-5,192,756; ZD4190, ein Hemmer des vaskulären Endothelwachstumsfaktors usw.
Vor kurzem haben japanische Autoren beschrieben, dass das bekannte Borrelidin [chemisch: 2'-(7-Cyano-8,16-dihydroxy-9,11,13,15-tetramethyl-l8-oxo-oxacyclooctadeca-4,6-dien-2-yl)-cyclopentan-1'-carbonsäure], bei dem es sich um ein Makrolid-Antibiotikum mit einem 18-gliedrigen Ring handelt [Keller-Schierlein, W., Experientia 22, 476 (1966); Helvetica Chim. Acta 50, 731 (1967); Anderson, B. F. et al., Aust. J. Chem. 42, 717 (1989)] eine angionesehemmende Wirkung hat, und zwar aufgrund der Eigenschaft, dass es den programmierten Zelltod der zellbildenden kapillaren Tubuli auslöst [Wakabayashi, T. et al., J. Antibiot. 50, 671 (1997)]. Darüber hinaus wurde bewiesen, dass es wirksam gegen die Zelllinien WiDr bei Dickdarmkrebs beim Menschen und PC-3 bei Prostatakrebs beim Menschen ist (JP-OS Nr. 8-173,176 und 9-227,549).
Ferner ist bekannt, dass das Borrelidin antibakteriell, antiviral, herbizid und Insektizid wirkt und einen mittleren LD₅₀-Wert hat (Glasby, J. S., Encyclopedia of Antibiotics, S. 145, J. Wiley (Herausg.,), 1979).
Aus der Literatur ist bekannt – und wird auch durch unsere eigenen Untersuchungen gestützt -, dass die Wirksamkeit von Borrelidin auf zwei tumorbiologische Vorgänge gerichtet ist: die Proliferation einerseits und die Bildung von Kapillaren durch die Endothelzellen, d. h. die Angiogenese, andererseits. Obwohl die Sensibilität der beiden Zellfunktionen unterschiedlich ist (wobei ein etwa fünffacher Unterschied zugunsten der Kapillarbildung besteht), ist diese Selektivität trotzdem von geringerem Grad, wenn wir die auf anderen Zellarten gerichtete Hemmung der Zellbildung betrachten. Die Erfindung hat das Ziel, die beiden zellbiologischen Wirkungen zu trennen, indem sie die Struktur von Borrelidin modifiziert. Genauer geht es bei der Erfindung um die Herstellung neuartiger Borrelidinderivate, die wesentlich stärker auf die Kapillarbildung durch die Endothelzellen als auf die Zellproliferation wirken, und zwar durch die Umwandlung der Carboxylgruppe auf dem Cyclopentanring des Borrelidinmoleküls. Nach unserer Hypothese wird in der klinischen Praxis nämlich ein angionesehemmender Wirkstoff gebraucht, der die Zellproliferation nur in höheren Dosen hemmt. (Hier ist zu erwähnen, dass die Selektivität der bekannten angiogenesehemmenden Verbindungen insofern überwiegt, als sie die Proliferation von Endothelzellen definitiver hemmen als die Teilung der anderen Zellen des Organismus.) Bei unseren Untersuchungen haben wir überraschend beobachtet, dass die neuartigen Borrelidinderivate der allgemeinen Formel (I)
diese Vorgaben vollständig erfüllen.
Diese Erkenntnis ist für den Fachmann überraschend, weil in der Literatur nur wenige Borrelidinderivate bekannt sind, d. h. sein Methylester und das Diacetat des Methylesters wurden durch Anderson, K., und Rickards, R. W. hergestellt [Nature 206, 269 (1965)]. Außerdem wurden sein Benzylester und das bis-O-(4-Nitrobenzoyl)derivat des Borrelidinmethylesters von Berger, J. et al. [Arch. Biochem. 22, 476 (1949)] beschrieben. Von keinem dieser Autoren wurde jedoch eine biologische Wirkung dieser Verbindungen erwähnt. Andererseits haben laut der Literatur nur diejenigen Borrelidinderivate eine angionesehemmende Wirkung, in denen die auf dem Cyclopentanring befindliche Carboxylgruppe nicht substituiert ist. Solche Verbindungen sind beispielsweise in JP-OS 09 227 549-A (Kokai) beschrieben, die Verbindungen nennt, in denen eine Nitril- oder Carboxylgruppe an der Position 7 des Borrelidingerüsts an das Kohlenstoffatom gebunden ist und ein Wasserstoffatom oder eine niedere Alkylgruppe an der Position 9 an das Kohlenstoffatom gebunden ist.
Auf der Grundlage der vorstehenden Ausführungen betrifft die Erfindung Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in der
R für eine Gruppe der allgemeinen Formel -COOR¹, -CONR²R³ oder -CONR⁴CONR⁴R⁵ steht, wobei:
R¹ für eine C_1-6-Alkylgruppe, die mit einer Hydroxyl-, Amino-, Di(C_1-4-alkyl)aminogruppe oder einer 5-8-gliedrigen gesättigten, stickstoffhaltigen heterocyclischen Gruppe (die neben dem Stickstoffatom sogar ein Sauerstoffatom oder ein oder zwei weitere Stickstoffatome enthalten kann), oder mit einer 5- oder 6-gliedrigen, stickstoffhaltigen aromatischen heterocyclischen Gruppe (die neben dem Stickstoffatom sogar ein Sauerstoffatom oder ein oder zwei weitere Stickstoffatome enthalten kann) substituiert ist; oder eine C_3-6-Cycloalkylgruppe steht;
R² und R³ gleich oder voneinander verschieden sind und unabhängig voneinander für ein Wasserstoffatom oder eine C_1-6-Alkylgruppe, die ggfs. mit einem Halogenatom, einer Hydroxyl-, Amino-, C_2- ₅-Alkoxycarbonyl-, Di(C_1-4-alkyl)aminogruppe oder einer 5-8-gliedrigen gesättigten, stickstoffhaltigen heterocyclischen Gruppe (die neben dem Stickstoffatom sogar ein Sauerstoffatom oder ein oder zwei weitere Stickstoffatome enthalten kann), oder mit einer 5- oder 6-gliedrigen, aromatischen homocyclischen Gruppe oder einer aromatischen heterocyclischen Gruppe, die ein Sauerstoff- und/oder Stickstoffatom enthält, substituiert ist; eine 5- oder 6-gliedrige Cycloalkyl- oder eine Heteroarylgruppe stehen;
R⁴ und R⁵ gleich oder voneinander verschieden sind und unabhängig voneinander für ein Wasserstoffatom oder eine C_1-6-Alkylgruppe, eine C_3- ₆-Cycloalkylgruppe oder eine ggfs. substituierte Phenylgruppe stehen,
sowie ihre Tautomere, Solvate, deren Gemische und die Säureadditionssalze aller dieser Verbindungen.
Hier sei erwähnt, dass die Buchstaben (R) und (S) in der Zeichnung der allgemeinen Formel (I) die absolute Konfiguration der entsprechenden Kohlenstoffatome bezeichnen.
In der Aufzählung der Bedeutungen der Substituenten der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bezieht sich die Bezeichnung "Alkylgruppe" sowohl auf gerad- als auch verzweigtkettige Gruppen. Solche Gruppen sind beispielsweise die Ethyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl-, Isobutyl-, sec-Butyl-, tert-Butyl-, Pentyl-, Isopentyl-, Neopentyl, tert-Pentyl, 1-Ethylpropyl-, Hexyl- und Isohexylgruppen.
Die Cycloalkylgruppe kann eine Cyclopropyl-, Cyclopentyl- oder Cyclohexylgruppe sein.
Das Halogenatom kann ein Chlor- oder Bromatom sein.
In der Bedeutung von R¹, R² und R³ kann die 5-8-gliedrige gesättigte, stickstoffhaltige heterocyclische Gruppe beispielsweise, aber nicht ausschließlich eine 1-Pyrrolidinyl-, 1-Piperidinyl-, Hexahydro-1H-azepin-1-yl-, Octahydroazocin-1-yl-, Piperazinyl- und Morpholinylgruppe sein.
In der Bedeutung von R² und R³ kann die C_2-5-Alkoxycarbonylgruppe beispielsweise, aber nicht ausschließlich eine Carbomethoxymethyl-, Carbo-t-butyloxymethyl-, Carbomethoxyethyl- und Carbomethoxypropylgruppe sein.
In der Bedeutung von R² und R³ kann die 5- oder 6-gliedrige aromatische homocyclische Gruppe beispielsweise, aber nicht ausschließlich eine Phenyl- oder substituierte Phenylgruppe sein.
In der Bedeutung von R¹, R² und R³ bedeuten die Bezeichnungen "5- oder 6-gliedrige aromatische heterocyclische Gruppe, die Sauerstoff und/oder Stickstoff enthält" bzw. "Heteroarylgruppe" beispielsweise, aber nicht ausschließlich die folgenden Gruppen: Furyl-, Pyrrolyl-, Oxazolyl-, Isoxazolyl-, Imidazolyl-, Pyrazolyl-, 1,2,3-Oxadiazolyl-, 1,2,4-Oxadiazolyl-, 1,3,4-Oxadiazolyl-, 1,2,3-Triazolyl-, 1,2,4-Triazolyl-, Pyridazinyl-, Pyrimidinyl-, Pyrazinyl-, 1,3,5-Triazinyl-, 2-Pyridyl-, 3-Pyridyl- und 4-Pyridylgruppen.
Unter dem Begriff "Salze", die mit den Verbindungen der allgemeinen Formel (I) gebildet werden, sind die Salze zu verstehen, die mit physiologisch verträglichen anorganischen und organischen Säuren gebildet werden. Solche Säuren, die für die Salzbildung geeignet sind, sind z. B. Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure oder Schwefelsäure. Als organische Säure können beispielsweise Ameisensäure, Essigsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Bernsteinsäure, Milchsäure, Citronensäure oder Methansulfonsäure verwendet werden.
Eine vorteilhafte Gruppe der erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) umfasst Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in der R für die allgemeine Formel -CONR²R³ steht, in der R² und R³ ein Wasserstoffatom bedeuten oder entweder R² oder R³ ein Wasserstoffatom und der. andere Rest eine C _1-6-Alkylgruppe bedeutet, die durch eine 5- oder 6-gliedrige aromatische heterocyclische Gruppe, welche ein Stickstoffatom enthält, substituiert ist.
Um die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) herzustellen, kann man die aus der Literatur allgemein bekannten Verfahren der Veresterung, Amidierung bzw. Reduktion verwenden, die z. B. in "Synthetic Organic Chemistry" (Wagner, R. B. und Zook, H. D., Wiley, New York, 1956) beschrieben sind.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können durch Anpassen der vorstehenden allgemeinen Verfahren hergestellt werden, z. B. durch Einsatz folgender Prozesse:

a) Reaktion eines Säurechlorids, das aus Borrelidin mit einem geeigneten Alkohol oder Amin gebildet wurde,
b) direkte Veresterung oder Amidierung von Borrelidin in Gegenwart eines Carbodiimids und einer Base,
c) Umesterung eines aus Borrelidin gebildeten Esters mit einem geeigneten Alkohol,
d) Reaktion von Borrelidinmethylester mit einem geeigneten Amin,
e) Bildung eines aktiven Esters aus Borrelidin, z. B. mit N-Hydroxybenztriazol gefolgt von der Reaktion mit einem geeigneten Alkohol oder Amin,
f) Bildung eines gemischten Anhydrids aus Borrelidin, z. B. mit Chlorameisensäureester gefolgt von der Reaktion mit einem geeigneten Amin,
g) Reduktion eines aus Borrelidin gebildeten gemischten Anhydrids mit einem Metallhydrid zu einem Alkohol,
h) Alkylierung bzw. Acylierung eines aus Borrelidin hergestellten Alkohols.

Wir haben herausgefunden, dass die erfindungsgemäßen neuartigen Borrelidinderivate besonders bevorzugt durch Umsetzung eines aktiven Derivats, das in Ge genwart von Carbodiimid aus Borrelidin mit N-Hydroxybenztriazol gebildet wurde, mit einem geeigneten Alkohol hergestellt werden können.
Die Reaktion wird in inerten Lösungsmitteln, am meisten bevorzugt in Tetrahydrofuran durchgeführt. Im Verfahren wird Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) als Carbodiimid und Dimethylaminopyridin (DMAP) als Base verwendet. Geeignet ist die Verwendung eines Überschusses von 10 Mol aus der Alkoholkomponente. Die Reaktion wird bei einer Temperatur zwischen 0 und 50°C, vorzugsweise bei 20°C, unter 1 bis 8 Stunden, vorzugsweise 3 Stunden Rühren durchgeführt.
Die Säureamidderivate von Borrelidin werden bevorzugt z. B. mit dem mit Chlorameisensäureester hergestellten gemischten Anhydridderivat hergestellt. Die Reaktion kann in inerten wasserfreien Lösungsmitteln wie z. B. Tetrahydrofuran, Dichlormethan oder Kohlenstofftetrachlorid durchgeführt werden. Triethylamin, Pyridin und Dimethylaminopyridin können als säurebindendes Mittel verwendet werden. Von dem zu kuppelnden Amin können 1 bis 1 Mol verwendet werden. Die Reaktion wird durch Rühren bei einer Temperatur zwischen –20 und +20°C über 1 bis 8 Stunden durchgeführt. In unserem am meisten bevorzugten Verfahren wird das gemischte Anhydridderivat bei –20°C in wasserfreiem Tetrahydrofuran in Gegenwart von Triethylamin mit Isobutylchlorformiat gebildet. Anschließend wird die Reaktion 3 Stunden lang mit 5 Mol Amin durchgeführt.
Das Alkoholderivat von Borrelidin wird bevorzugt aus einem geeigneten gemischten Anhydridderivat von Borrelidin durch Reduktion mit einem wässrigen Metallhydridkomplex, vorzugsweise Natriumborhydrid, in Tetrahydrofuran bei –20°C hergestellt.
Die Alkylierung bzw. Acylierung des Alkoholderivats von Borrelidin kann auf jede bekannte Weise erfolgen.
Für den Fachmann ist offenkundig, dass bei der Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (I), die Ausgangsverbindungen haben, in denen bestimmte Substituenten eine oder mehrere reaktive Gruppen enthalten, welche in einer bestimmten Reaktion nicht umgewandelt werden sollen, diese Gruppe(n) auf in der organischen Chemie bekannte Weise geschützt werden können. Nach der Reaktion auf eine solche Weise, dass andere Teile des Moleküls die unerwünschte Umwandlung nicht durchlaufen, werden die Schutzgruppe(n) entfernt. Um diese Gruppen zu schützen, verwendet man üblicherweise die bekannten Schutzgruppen. Solche Schutzgruppen sind beispielsweise aus dem Buch "Protective Groups in Organic Synthesis" von Greene, T. W. und Wuts, P. (John Wiley & Sons, New York, 1991) bekannt.
Ein Teil der erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) enthält ein basisches N-Atom, das sich zur Salzbildung eignet. Solche Basen der allgemeinen Formel (I) können auf bekannte Weise zu – vorzugsweise pharmazeutisch verträglichen – Säureadditionssalzen umgewandelt werden, zum Beispiel durch Lösen der Base in einem geeigneten organischen Lösungsmittel und Zugabe der geeigneten Säure oder einer Lösung der Säure, die mit einem geeigneten organischen Lösungsmittel hergestellt wurde. Das auf diese Weise erhaltene Salz wird durch Filtration oder Verdampfen des Lösungsmittels im Vakuum abgetrennt. Auf Wunsch kann es auf bekannte Weise gereinigt werden, z. B. durch Umkristallisation.
Wie bereits erwähnt, haben die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) eine wertvolle biologische Wirkung. Genauer gesagt haben sie eine bemerkenswerte angiogenesehemmende Wirkung, die mit sehr günstiger Selektivität einhergeht.
Der angiogenesehemmende Effekt der erfindungsgemäßen Verbindungen wurde durch Messung der Wirkung auf die Proliferation von und die Kapillarbildung durch die Endothelzellen festgestellt. Die Testverfahren sind im Folgenden aufgeführt.
Prüfung der Zellproliferation
Die Endothelzellen ECV 304 (DSMZ Nr. ACC310) wurden in vitro in einer Einschichtkultur in einem Kulturmedium RPMI 1640 (Sigma, USA), das 10% Kalbsfötusserum enthielt (Protein GMK, Gödöllö, Ungarn), vermehrt. Das Borrelidin und seine erfindungsgemäßen neuartigen Derivate der allgemeinen Formel (I) wurden im exponentiellen Zeitraum der Kultur zugesetzt, um die verschiedenen Endkonzentrationen (0,1 bis 100 μg/ml) zu erreichen. Das Wachstum der Zellkultur wurde in einem Fluoroscan Ascent FL-Apparat auf der Grundlage der Veränderung in der DNA-Menge, die mit Hilfe der Hoechst 33342-Färbung gemessen wurde, verfolgt.
Sogar bei einer aus menschlicher Nabelschnur (HUVEC) hergestellten Zellkultur war ein ähnlicher proliferationshemmender Effekt von Borrelidin und der erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) auf die Endothelproliferation zu beobachten.
Untersuchung der Endothelkapillarbildung
Basalmembranproteingel, das aus die Kapillarbildung induzierendem Maus-EHS-Tumor hergestellt worden war, wurde auf die ECV 304-Endothelzellen aufgebracht. Die Behandlung mit dem Borrelidin und den erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) wurde auf die gleiche Weise durchgeführt wie bei der Untersuchung der Zellproliferation. Der Grad, zu dem die Zellen an der Kapillarbildung beteiligt sind, wurde mikroskopisch und mit Hilfe eines morphometrischen Programms untersucht, und die auf diese Weise gewonnenen Daten wurden in Prozent der unbehandelten Kontrollgruppe ausgedrückt.
Ergebnisse
Die beiden Verfahren erwiesen sich als geeignet für den Nachweis, dass die erfindungsgemäßen neuartigen Borrelidinderivate die Erfordernis erfüllen, die Kapillarbildung selektiv zu hemmen. Es wurde nämlich festgestellt, dass die die Zellproliferation hemmende Wirkung der neuartigen Derivate der allgemeinen Formel (I) in Bezug auf Borrelidin eindeutig abnimmt, während sich die die Kapillarbildung hemmende Wirkung nur geringfügig oder gar nicht ändert. Der relative Selektivitätsgrad wurde für jede Verbindung dadurch bestimmt, dass man die Verhältnisse der Wirkstoffkonzentrationen, die die Zellproliferation bei 50% und die Kapillarbildung hemmen, multiplizierte. (Die Verhältnisse wurden dadurch ermittelt, dass man die geeignete hemmende Konzentration der neuartigen erfindungsgemäßen Verbindung mit der geeigneten hemmenden Konzentration von Borrelidin multiplizierte.) Auf der Basis des auf diese Weise berechneten Selektivitätsindex hemmt die Verbindung von Beispiel 1 bezogen auf Borrelidin die Kapillarbildung 60 mal, die Verbindung von Beispiel 3 37 mal, die Verbindung von Beispiel 2 7,5 mal und die Verbindung von Beispiel 4 6 mal besser als die Zellproliferation.
Die Testdaten, die die Hemmung der Bildung von Kapillartubuli betreffen, wurden bestätigt, wenn man das Verfahren der "Bildung von Mikrogefäßen" [Parish et al., Cancer Res. 59, 3433 (1999)] anwendete. Dieses Verfahren versetzte uns in die Lage, die Bildung neuer Gefäße in einer Gewebekultur zu studieren, die aus der Arterie menschlicher Plazenta gebildet worden war. Wir konnten feststellen, dass die erfindungsgemäßen Borrelidinderivate die Vermehrung von Endothelzellen erheblich und die Bildung von Tubuli noch besser hemmen.
Auf der Grundlage unserer Testergebnisse konnten wir den Schluss ziehen, dass die neuartigen erfindungsgemäßen Borrelidinderivate hauptsächlich auf einen Zellmechanismus wirken, der die Kapillarbildung von Endothelzellen unterbrechen kann und die Proliferation solcher Zellen nur in einer höheren Konzentration beeinflusst. Unsere Erkenntnis, dass die erfindungsgemäßen neuartigen Borrelidinderivate in der gleichen Endothelzellkultur die Bildung von Tubuli in einer geringeren Konzentration hemmen als die Proliferation der Endothelzellen ist nicht nur neu, sondern auch überraschend. Folglich zeigt sich die Selektivität nicht an der unterschiedlichen Sensibilität verschiedener Zellen, sondern kann an den Bindungen zwischen den Zellen, die die Kapillarbildung steuern, und an der Zellproliferation beobachtet werden.
Untersuchung des Antitumoreffekts an Metastasemodellen

1. Bei einem Lewis-Lungenadenokarzinom-Modell [Holmgren et al., Nature Medicine 1, 149 (1995)] hemmte das Borrelidin die Vermehrung der Metastaseknötchen, die sich nach Entfernung des Primärtumors in der Lunge bildeten, in sehr geringem Grad. Dagegen hemmte die Verbindung gemäß Beispiel 15 die Zunahme von Mikrometastasen nicht nur bei intraperitonealer, sondern auch bei oraler Verabreichung erheblich, wenn man ein Fünftel der toxischen Dosis zusetzte.
2. Bei einem Kolon-38-Milz-Leber Modell [Dong, Z. et al., J. Natl. Cancer Inst. 86, 913 (1994); Shaheen, R. M. et al., Cancer Research 89, 5412 (1999)] als Testsystem nahm die Fähigkeit von Mauskolonadenokarzinomzellen, die in die Milz transplantiert worden waren, zur Bildung von Metastasen nach der Verabreichung einer subtoxischen Menge der Verbindung von Beispiel 15 erheblich ab.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können entweder allein oder – vorzugsweise – in Form pharmazeutischer Zubereitungen für therapeutische Zwecke verwendet werden. Solche Zubereitungen fallen in den Rahmen der Erfindung.
Diese pharmazeutischen Zusammensetzungen enthalten eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) in der Menge, die für das Erreichen des gewünschten Effekts notwendig ist, zusammen mit Trägern, Füllstoffen, Verdünnungsmitteln und/oder anderen pharmazeutischen Hilfsstoffen, die per se bekannt sind und in der pharmazeutischen Industrie üblicherweise verwendet werden.
Beispielsweise können Wasser, Alkohole, Gelatine, Lactose, Saccharose, Stärke, Pektin, Magnesiumstearat, Stearinsäure, Talkum, verschiedene tierische oder pflanzliche Öle sowie Glycole wie Propylenglycol oder Polyethylenglycol als die vorstehend erwähnten Träger, Verdünnungsmittel oder Füllstoffe verwendet werden. Als pharmazeutische Hilfsstoffe können z. B. Konservierungsmittel, Antioxidantien, unterschiedliche natürliche oder synthetische Emulgatoren, Dispersionsmittel oder Benetzungsmittel, farbgebende Mittel, Aromastoffe, Puffermittel, Aufschlussmittel und andere Materialien, die die biologische Nutzung des Wirkstoffs verbessern, verwendet werden.
Die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zubereitungen können in den üblichen Formen vorliegen, z. B. als orale Zubereitungen, die unter Verwendung der vorstehend aufgeführten pharmazeutischen Hilfsmittel hergestellt werden können. Diese oralen Zusammensetzungen können in fester pharmazeutischer Form, z. B. als Tabletten, Kapseln, Pulvern, Pillen, Dragees oder Granulat, oder in flüssigen pharmazeutischen Formen, z. B. als Sirup, Lösung, Emulsion oder Suspension, vorliegen. Die rektalen Zubereitungen können Zäpfchen sein. Die parenteralen Zubereitungen, die unter Umgehung des Magentrakts verabreicht werden, können Injektions- oder Infusionslösungen sein. Darüber hinaus können die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zubereitungen externe Zubereitungen sein, wie z. B. Salben, Cremes, Wasser für Kompressen, Augenspüllösungen, Augentropfen usw.
Obwohl die zum Erreichen des erforderlichen pharmazeutischen Effekts erforderliche Dosis der erfindungsgemäßen Verbindungen unter anderem vom jeweiligen Zustand und dem Alter des Patienten abhängt und letztendlich vom Arzt bestimmt wird, kann man zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Krankheiten, bei denen die im Zusammenhang mit der Krankheit auftretende Angiogenese gehemmt wer den soll, eine Dosis zwischen etwa 0,5 mg und etwa 100 mg pro 1 kg Körpergewicht einsetzen. Diese Dosis kann täglich in verschiedenen Portionen verabreicht werden, wobei man auch die Bedingungen der Absorption in Erwägung ziehen sollte.
Die erfindungsgemäße Verbindungen der allgemeinen Formel (I) enthaltenden pharmazeutischen Zubereitungen können neben chirurgischen Eingriffen und der Strahlentherapie als Hilfsmittel eingesetzt werden, um in erster Linie das Wachstum von Tumoren zu behandeln oder zu verhindern und die Bildung von Krebsmetastasen einzuschränken. Außerdem können sie zur Behandlung anderer Krankheiten und Zustände eingesetzt werden, bei denen die Hemmung und Steuerung der Gefäßbildung bzw. die Rückbildung solcher Gefäße eine vorteilhafte Wirkung hat. Als Beispiele seien hier nur Arthritis, verschiedene Augenerkrankungen (z. B. subretinalis neovascularisatio) sowie Psoriasis aufgeführt.
Auf der Grundlage der vorstehenden Ausführungen betrifft die Erfindung auch die Verwendung einer Verbindung der allgemeinen Formel (I) bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung angiogener Erkrankungen bei Säugern, die durch übermäßige, unangemessene Angiogenese hervorgerufen werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen und das Verfahren zu ihrer Herstellung werden in den folgenden Beispielen näher erläutert, die die Erfindung nicht einschränken sollen.
Beispiel 1
Borrelidin-2-morpholinoethylester [(I), R = COO(CH₂)₂C₄H₈NO]
120 mg (0.245 mMol) Borrelidin wurden bei 20°C unter Rühren in 5 ml abs. Tetrahydrofuran gelöst, dann wurden 38 mg (0,245 mMol) 1-Hydroxybenztriazol, 30 mg (0,245 mMol) Dimethylaminopyridin und 65 mg (0,31 mMol) Dicyclohexylcarbodiimide zugesetzt. Nach 30 Minuten Rühren gab man 0,3 ml (0,32 g, 2,45 mMol) 4-(2-Hydroxyethyl)-morpholin zu.
Nach 3 Stunden Rühren bei 20°C verschwand die Ausgangsverbindung (R_f = 0,43) und das Produkt (R_f = 0,51) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Methanol 95 : 5) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 50 ml Chloroform gelöst, mit 2 × 50 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 65 : 35 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen öligen Produkts (133 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
(Es wird darauf hingewiesen, dass die Bezeichnungen 1'', 2'', 3'', 5'' und 6'' in den Spektraldaten sich auf den Morpholinring beziehen.)
Charakteristische Spektraldaten
¹H-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,93, d, t; H 4: 6,20 ddd; H-5: 6,36, dd; H-6: 6,82, d; H-8: 4,10; H-16: 3,84, m; -O-CH,-CH₂-: 4,12, m und 4,30, m ; -CH₂-CH₂-1'': ~2,50; H₂-2'' und H₂-6'': ~2,50; H₂-3'' und H₂-5'': 3,68, t.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0 ; Multiplizität): C-2: 76,4, d; C-4: 138,5, d; C-5: 126,9, d; C-6: 143,9, d; C-7: 116,0, s; 7-CN: 118,2, s; C-8: 73,1, d; C-16: 70,0, d; C-18: 172,4, s; 1'-CO-O: 176,0, s; O-CH₂-CH₂: 61,8, t; CH₂-CH₂-1'': 57,0, t ; C-2'', 6'': 53,8, t; C-3'', 5'': 66,9, d.
TS (El, 70 eV; m/z): 602, [M]^+*; 113, [CH₂=CH-Morpholinyl]^+*; 100, [CH₂=Morpholinyl]^+*.
Beispiel 2
Borrelidin-2-(2-pyridyl)-ethylester [(I), R = COO(CH₂)₂C₅H₄N]
Zu 1-Hydroxybenztriazoleaktivester, den man gemäß Beispiel 1 aus 150 mg (0,306 mMol) Borrelidin hergestellt hatte, gab man 0,35 ml (0,38 g, 3,06 mMol) 2-(2-Hydroxyethyl)-pyridin. Nach 3 Stunden Rühren bei 20°C verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,43) und das Produkt (R_f = 0,58) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Methanol 95 : 5) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 3 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Tro ckenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 1 : 1 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen, sich verfestigenden öligen Produkts (171 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
(Es wird darauf hingewiesen, dass die Bezeichnungen 1", 2", 3", 5" und 6" in den Spektraldaten sich auf den Morpholinring beziehen.)
Charakteristische Spektraldaten
¹H-NHMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,90, d, t; H 4: 6,15 ddd; H-5: 6,36, dd; H-6: 6,80, d; H-8: 4,12; H-16: 3,85, m; -O-CH₂-CH₂-: m; -CH₂-CH₂-2'': 3,10, t; H-3'': 7,17, d; H-4'': 7,62, m; H-5'': 7,15, m; H-6'': 6,52, d.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,2, d; C-4: 138,6, d; C-5: 126,8, d; C-6: 144,0, d; C-7: 115,9, s; 7-CN: 118,2, s; C-8: 73,1, d; C-16: 70,1, d; C-18: 172,4, s; 1'-CO-O-: 176,0, s; -O-CH₂-CH₂-: 63,8, t; -CH₂-CH₂-2'': 37,3, t; C-2'': 157,9, s; C-3'': 123,3, d; C-4'': 136,4, d; C-5'': 126,9, d; C-6'': 149,4, d.
TS (El, 70 eV; m/z): 594, [M]^+*.
Beispiel 3
Borrelidinamid [(I), R = CONH₂]
150 mg (0.306 mMol) Borrelidin wurden unter Rühren in 10 ml abs. Tetrahydro-Euran gelöst, dann wurden bei –20°C 47 μl (0,33 mMol) Triethylamin und 44 μl (0,33 mMol) Isobutylchlorformiat zugesetzt. Nach 30 Minuten Rühren bei –20°C filtrierte man das Triethylamin·HCl-Salz aus und gab 100 μl (1,5 mMol) einer 25%igen wässrigen Ammoniumhydroxidlösung zu der Lösung.
Nach 3 Stunden Rühren des Reaktionsgemischs verschwand die Ausgangsverbindung (R_f = 0,43) und das Produkt (R_f = 0,33) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Methanol 95 5) belegt wurde. Der pH des Reaktionsgemischs wurde mit 1 bis 2 Tropfen Essigsäure auf 7 eingestellt, dann wurde das Reaktionsgemisch bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 2 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 55 : 45 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen sich verfestigenden öligen Produkts (109 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten:
¹H-NMR CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,90, d, t; H-4: 6,16 ddd; H-5: 6,30, dd; H-6: 6,75, d; H-8: 4,04; 8-OH: 2,95; H-16: 3,75, m; NH₂: 5,55 és 5,72.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,6, d; C-4: 138,8, d; C-5: 126,8, d; C-6: 144,0, d; C-7: 115,9, s; 7-CN: 118,3, s; C-8: 73,0, d; C-16: 69,8, d; C-18: 172,4, s; 1'-CONH₂: 178,1, s.
TS (El, 70 eV; m/z, 488, [M]^+*; 470, [M-H₂O]]^+*; 452, [M-2H₂O]]^+*; 435, [M-H₂O-NH₃]]^+*; 417, [M-2H₂O-NH₃]]^+*;
TS (Cl, i-Butan; m/z): 489, [M+H]]⁺; 471, [M+H-H₂O]]⁺.
Beispiel 4
Borrelidin-2-morpholinoethylamid [ (I), R = CONH(CH₂)₂C₄H₈NO]
Zu einer gemäß Beispiel 3 hergestellten gemischten Anhydridlösung aus 150 mg (0,306 mMol) Borrelidin gab man 0,25 ml (1,9 mMol, 0,25 g) 4-(2-Aminoethyl)morpholin. Nach 3 Stunden Rühren verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,43) und das Produkt (R_f = 0,22) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Methanol 95 : 5) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 3 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 95 : 5 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen, sich verfestigenden öligen Produkts (172 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
(Es wird darauf hingewiesen, dass die Bezeichnungen 2'', 3'', 5'' und 6'' in den Spektraldaten sich auf den Morpholinring beziehen.)
Charakteristische Spektraldaten:
¹H-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 5,00, d, t; H 4: 6,20 ddd; H-5: 6,35, dd; H-6: 6,80, d; H-8: 4,10; H-16: 3,82, m; NH: 6,15, t; NH-CH₂-CH₂-N: 3,20–3,45, m; NH-CH₂-CH₂-N: 2,32, m; H-2''-6''; 2,45, m; H-3''-5'': 3,70, m.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,5, d; C-4: 139,1, d; C-5: 126,5, d; C-6: 144,1, d; C-7: 115,8, s; 7-CN: 118,3, s; C-8: 73,1, d; C-16: 69,2, d; C-18: 172,2, s; 1'-CO-N: 175,5, s; NH-CH₂-CH₂-N: 57,1, t es 36,3, t; C-2'', 6'': 53,3, t ; C-3'', 5'': 66,8 t.
TS (El, 70 eV; m/z, 601 [M]^+*; 585 [M-H₂O]]^+*, 113, [CH₂=CH-Morpholinyl]]^+*; 100, [CH₂=Morpholinyl]]⁺.
Beispiel 5
Borrelidinalkohol [ (I), R₁ = CH₂OH]
Eine gemäß Beispiel 3 hergestellte gemischte Anhydridlösung aus 150 mg (0,306 mMol) Borrelidin wurde in eine Lösung aus 60 mg (1,5 mMol) NaBH₄ in 2 ml Wasser getropft und auf –20°C gekühlt. Nach 5 Stunden Rühren verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,43) und das Produkt (R_f = 0,52) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Methanol 95 : 5) belegt wurde. Anschließend wurden dem Reaktionsgemisch 1 bis 2 Tropfen Essigsäure zugesetzt, um das überschüssige NaBH₄ zu zersetzen. Dann wurde das Reaktionsgemisch bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 2 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand (185 mg) wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 3 : 1 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen, sich verfestigenden öligen Produkts (117 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten
¹H-NMR (CDCl₃; δ_[ppm] , δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,92, d, t; H-4: 6,20 ddd; H-5: 6,35, dd; H-6: 6,80, d; H-8: 4,10; H-16: 3,87, m; 1'-CH₂-OH: 3,45, m.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,7, d ; C-4: 139,1, d; C-5: 126,7, d; C-6: 144,1, d; C-7: 115,8, s; 7-CN: 118,3, s; C-8: 73,0, d; C-16: 70,5, d; C-18: 172,3, s; 1'-CH₂-OH: 66,4, t.
TS (El, 70 eV; m/z, 475 [M]^+*; 457 [M-H₂O]]^+*, 439, [M-2H₂O]]^+*.
TS (Cl, i-Butan; m/z): 476, [M+H]]^+*; 458, [M+H-H₂O]]^+*; 440, [M+H-2H₂O]]^+*.
Beispiel 6
Borrelidin-N,N'-dicyclohexylcarbamidoamid [(I), R = CON(C₆H₁₁CONHC₆H₁₁]
98 mg (0,2 mMol) Borrelidin wurden bei 20°C unter Rühren in 2 ml abs. Tetrahydrofuran gelöst, dann wurden der Lösung 124 mg (0,6 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bei der gleichen Temperatur gerührt, und das Fortschreiten der Reaktion durch Dünnschichtchromatographie verfolgt. Auf einer Kieselgelplatte in einem Chloroform/Methanol Elutionssystem (95 : 5) verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,43) nach 5 Stunden und das Produkt (R_f = 0,74) erschien. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch bis zur Trockenheit verdampft und das Rohprodukt auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 8 : 2 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen öligen Produkts (105 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten
¹H-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,93, d, t; H-4: 6,28 ddd; H-5: 6,36, dd; H-6: 6,84, d; H-8: ~4,10; H-16: 3,85, m; Cyclohexylgruppen: 3,65, m, 1H; 4,05, m, 1H ; 1,4–2,1, m, 20H.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0 ; Multiplizität): C-2: 77,0, d; C-4: 139,0, d; C-5: 126,7, d; C-6: 144,1, d; C-7: 115,7, s; 7-CN: 118,2, s; C-8: 73,1, d; C-16: 69,1, d; C-18: 172,7, s; 1'-CO-N: breiter werdendes Signal, das nicht von der Grundlinie stammt; N-CO-N: 153,6, s; Cyclohexylgruppen: 50,1, d; 40,9, d (breiter werdendes Signal); 32,7, t (2C); 32,6, t (2C); 24,7, t; 25,9, t (2C); 26,0, t (2C).
TS (El, 70 eV; m/z): 695, [M]^+*; 570 [M+H-O=C=N-C₆H₁₁]⁺; 552 [570-H₂O]^+*.
TS (Cl, i-Butan; m/z): 696, [M+H]^+*; 571, [M+H-O=C=N-C₆H₁₁]⁺; 553, [571-H₂O]⁺; 83, [C₆H₁₁]⁺.
Beispiel 7
Borrelidinbenzylamid [(I), R = CONHCH₂-C₆H₅]
Zu einer gemäß Beispiel 3 hergestellten gemischten Anhydridlösung aus 200 mg (0,41 mMol) Borrelidin gab man 220 μl (2 mMol, 2,14 mg) Benzylamid. Nach 3 Stunden Rühren verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,52) und das Produkt (R_f = 0,69) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Methanol 3 : 7) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 3 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 8 : 2 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen, sich verfestigenden öligen Produkts (135 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten:
¹H-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,95, d, t; H-4: 6,24, ddd; H-5: 6,35, dd; H-6: 6,79, d; H-8: 4,10, m; H-16: 3,80, m; 1'-CONH- 5,98, t; NH-CH₂-Ph: 4,26, dd, und 4,44, dd; Ph: 7,15–7,35, m, 5H.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,7, d; C-4: 138,8, d; C-5: 126,7, d; C-6: 144,0, d; C-7: 115,8, s; 7-CN: 118,3, s; C-8: 73,0, d; C-16: 69,8, d; C-18: 172,4, s; 1'-CO NH-: 175,4, s; NH-CH₂-Ph: 43,8, t; Ph: 138,2, s; 128,7, d; 127,7, d; 127,6, d.
TS (El, 70 eV; m/z, 578, [M]^+*; 560 [M-H₂O]]^+*, 542, [M-2H₂O]]^+*, 435 [M-2H₂O-C₆H₅CH₂NH₂]^+*; 106[C₇H₉N]⁺; 91, [C₇H₇]⁺.
TS (Cl, i-Butan; m/z): 579, [M+H]⁺; 561, [M+H-H₂O]⁺; 106, [C₇H₇]⁺, CH₈N]⁺; 91, [CH]⁺.
Beispiel 8
Borrelidin-2-picolyamid [ (I), R = CONHCH₂-C₅H₄N]
Zu einer gemäß Beispiel 3 hergestellten gemischten Anhydridlösung aus 200 mg (0,41 mMol) Borrelidin gab man 206 μl (2 mMol, 216 mg) 2-Picolylamin. Nach 3 Stunden Rühren verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,52) und das Produkt (R_f = 0,29) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Methanol 3 : 7) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 3 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 1 : 1 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen, sich verfestigenden öligen Produkts (188 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten:
¹H-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 5,00, dt; H-4: 6,20, ddd; H-5: 6,40, dd; H-6 : 6,80, d; H-8: 4,15, m; H-16: 3,82, m; 1'-CONH-: 7,14, t; NH-CH₂-2Py: 4,55, d; Py: 7,20-7,36, m, 2H; 7,70, td, 1H und 8,50, d, 1H.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,7, d; C-4: 139,2, d; C-5: 126,5, d; C-6: 144,2, d; C-7: 115,7, s; 7-CN: 118,2, s; C-8: 73,1, d; C-16: 69,3, d; C-18: 172,3, s; 1'-CO-NH-: 175,6, s; NH-CH₂-2Py: 44,3, t; Py: 156,3, s; 122,8, d; 137,2, d; 122,5, d; 148,8, d.
TS (El, 70 eV; m/z, 579, [M]^+*; 561, [M-H₂O]]^+*, 336, [C₂₀H₂₂N₃O₃]⁺; 109, [C₅H₄NCH₂NH₃]⁺; 107, [C₆H₇N₂]⁺, 92, [C₆H₆N]⁺.
TS (Cl, i-Butan; m/z): 580, [M+H]⁺.
Beispiel 9
Borrelidin-4-picolyamid [ (I), R = CONHCH₂-C₅H₄N]
Zu einer gemäß Beispiel 3 hergestellten gemischten Anhydridlösung aus 200 mg (0,41 mMol) Borrelidin gab man 206 μl (2 mMol, 216 mg) 4-Picolylamin. Nach 3 Stunden Rühren verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,43) und das Produkt (R_f = 0,24) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Methanol 95 : 5) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 3 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Dichlormethan und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 15 : 85 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen, sich verfestigenden öligen Produkts (201 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten:
¹H-NMR CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,98, dt; H-4: 6,22, m; H-5: 6,36, dd; H-6: 6,78, d; H-8: 4,10, m; H-16: 3,78, m; 1'-CONH-: 6,55, t; NH-CH₂-4Py: 4,18, dd und 4,62, dd; Py: 7,15, d, 2H und 8,48, d, 2H.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], 6_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,6, d; C-4: 138,7, d; C-5: 126,7, d; C-6: 143,9, d; C-7: 116,0, s; 7-CN: 118,4, s; C-8: 72,9, d; C-16: 69,5, d; C-18: 172,2, s; 1'-CO-NH-: 176,0, s; NH-CH₂-4Py : 42,3, t; Py: 149,7, d; 122,2, d und 147,7, s.
TS (El, 70 eV; m/z, 579, [M]^+*; 561 [M-H₂O]]^+*, 336 [C₂₀H₂₂N₃O₂]⁺; 107, [C₆H₇N₂]⁺, 93 [C₆H₇N]⁺; 92 [C₆H₆N]⁺.
TS (Cl, i-Butan; m/z): 580, [M+H]⁺; 562 [M+H₂O]⁺.
Beispiel 10
Borrelidin-2-furfurylamid [(I), R = CONHCH₂-C₄H₃O]
Zu einer gemäß Beispiel 3 hergestellten gemischten Anhydridlösung aus 200 mg (0,41 mMol) Borrelidin gab man 177 μl (2 mMol, 194 mg) 2-Furfurylamin. Nach 3 Stunden Rühren verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,52) und das Produkt (R_f = 0,70) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Ethylacetat 3 : 7) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 3 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Dichlormethan und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 65 : 35 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen, sich verfestigenden öligen Produkts (105 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten:
¹H-NMR CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,88, dt; H-4: 6,15, m; H-5: 6,30, dd; H-6: 6,75, d; H-8: 4,03, m; H-16: 3,76, m; 1'-CONH-: 5,86, t; NH-CH₂-2Fu: 4,28, dd und 4,48, dd; Fu: 6,13, dd; 6,25, d und 7,27, d.
¹³C-NMR CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,7, d; C-4: 138,8, d; C-5: 126,7, d; C-6: 144,1, d; C-7: 115,7, s; 7-CN: 118,2, s; C-8: 73,1, d; C-16: 69,6, d; C-18: 172,5, s; 1'-CO-NH-: 175,2, s; NH-CH₂-2Fu: 36,8, t; Fu: 151,0, s; 110,5, d; 107,5, d; 142,2, d.
TS (El, 70 eV; m/z, 568, [M]^+*; 550 [M-H₂O]]^+*, 96, [C₅H₆NO]⁺; 81, [C₅H₅O]⁺.
TS (Cl, i-Butan; m/z): 569, [M+H]⁺; 551 [M+H-H₂O]⁺. 96, [C₅H₆NO]⁺; 81, [C₅H₅O]⁺.
Beispiel 11
Borrelidin-3-pyridylamid [(I), R = CONH-C₅H₄N]
Zu einer gemäß Beispiel 3 hergestellten gemischten Anhydridlösung aus 200 mg (0,41 mMol) Borrelidin gab man 188 mg (2 mMol) 3-Aminopyridin. Nach 3 Stunden Rühren verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,43) und das Produkt (R_f = 0,25) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Methanol 95 : 5) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 3 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Dichlormethan und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 1 9 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen, sich verfestigenden öligen Produkts (144 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten: IR: 3318, 2958, 2212, 1730, 1542 cm^–1
¹H-NMR CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,92, dt; H-4: 6,20, m; H-5: 6,35, dd; H-6: 6,76, d; H-8: 4,08; H-16: 3,76, m; CO-NH-3Py: 7,70, s; Py: 8,53, d; 8,22–8,36, m, 2H und 7,25, t.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,5, d; C-4: 138,5, d; C-5: 126,9, d; C-6: 143,9, d; C-7: 115,9, s; 7-CN: 118,2, s; C-8: 73,1, d; C-16: 70,6, d; C-18: 172,4, s; 1'-CO-NH-: 174,6, s; Py: 145,1, d; 126,9, s; 140,6, d; 123,7, d; 135, 1, d.
TS (El, 70 eV; m/z): 565, [M+H]^+*; 547 [M-H₂O]^+*, 322, [C₂OH₂₂N₃O₂]⁺, 121, [C₆H₅N₂O]⁺; 95 [C₅H₇N₂]⁺.
TS (Cl, i-Butan; m/z): 566, [M+H]⁺; 548, [M+H-H₂O]⁺; 95, [C₅H₇N₂]⁺.
Beispiel 12
Borrelidinylglycin-tert-butylester [(I), R = CONHCH₂COOC₄H₉]
Zu einer gemäß Beispiel 3 hergestellten gemischten Anhydridlösung aus 200 mg (0,41 mMol) Borrelidin gab man 280 mg (1,67 mMol) Glycin-tert-butylesterhydrochlorid und 235 μl (1,69 mMol, 170 mg) Triethylamin. Nach 3 Stunden Rühren verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,52) und das Produkt (R_f = 0,73) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Ethylacetat) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 3 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Methanol von steigendem Methanolgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 96 : 4 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen, sich verfestigenden öligen Produkts (129 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten:
¹H-NMR CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,92, dt; H-4: 6,22, m; H-5: 6,38, dd; H-6: 6,82, d; H-8: 4,10, dd; H-16: 3,85, m; CO-NH-CH₂: 6,15, t; NH-CH₂-CO-: 3,88, dd und 3,99, dd; tBu: 1,48, s, 3H.
¹³C-NMR CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,7, d; C-4: 139,0, d; C-5: 126,7, d; C-6: 144,2, d; C-7: 115,7, s; 7-CN: 118,2, s; C-8: 73,1, d; C-16: 69,5, d; C-18: 172,5, s; 1'-CO-NH-: 175,5, s; NH-CH₂-CO: 42,2, t; CH₂-C-O: 169,5, s, O-C-(CH₃)₃: 82,5, s; O-C-(CH₃)₃: 28,0, q.
TS (El, 70 eV; m/z): 602, [M]⁺; 528 [M-C₄H₉OH]^+*, 435, [M-2H₂O-C₅H₁₃NO₂]^+*.
TS (Cl, i-Butan; m/z): 603, [M+H]⁺; 547, [M+H-₄H₈]⁺; 529 [M+H-C₄H₉OH]⁺.
Beispiel 13
Borrelidincyclohexylamid [(I), R = CONH-C₆H₁₁]
Zu einer gemäß Beispiel 3 hergestellten gemischten Anhydridlösung aus 200 mg (0,41 mMol) Borrelidin gab man 324 μl (2 mMol, 203 mg) Cyclohexylamin. Nach 3 Stunden Rühren verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,52) und das Produkt (R_f = 0,68) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Ethylacetat) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 3 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Methanol von steigendem Methanolgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 96 : 4 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen, sich verfestigenden öligen Produkts (205 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten: IR: 3344, 2931, 1717, 1647, 1541 cm^–1.
¹H-NMR (CDCl₃; δ_[ _ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,94, dt; H-4: 6,25, m; H-5: 6,35, dd; H-6: 6,83, d; H-8: 4,10, dd; H-16: 3,88, m; CO-NH-: 5,35, d; Cyclohexyl-CH: 3,75, m, 1H.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,8, d; C-4: 139,0, d; C-5: 126,7, d; C-6: 144,1, d; C-7: 115,7, s; 7-CN: 118,2, s; C-8: 73,2, d; C-16: 69,7, d; C-18: 172,5, s; 1'-CO-NH-: 174,3, s; Cyclohexyl: 50,47, d; 33,3, t; 33,4, t; 25,3, t; 24,7, t; 24,8, t.
TS (El, 70 eV; m/z): 570, [M]^+*; 552 [M-H₂O]^+*; 534 [M-2H₂O]; 327, [C₂₀H₂N₂O₂]; 224, [C₁₃H₂₂NO₂]⁺.
TS (Cl, i-Butan; m/z): 571, [M+H]⁺; 553, [M+H-H₂O]⁺.
Beispiel 14
Borrelidin-1-ethanolamid [ (I), R = CONH-CH₂CH₂OH]
Zu einer gemäß Beispiel 3 hergestellten gemischten Anhydridlösung aus 200 mg (0,41 mMol) Borrelidin gab man 124 μl (2 mMol, 125 mg) Ethanolamin. Nach 3 Stunden Rühren verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,43) und das Produkt (R_f = 0,26) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Methanol 95 : 5) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 100 ml Chloroform gelöst, mit 3 × 30 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 3 : 7 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Die Struktur des auf diese Weise erhaltenen, sich verfestigenden öligen Produkts (198 mg) wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten: IR: 3350, 2958, 2212, 1719 1646 cm^–1
¹H-NMR CDCl₃; δ_[ppm], 6_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,98, dt; H-4: 6,28, m; H-5: 6,38, dd; H-6: 6,83, d; H-8: 4,10, d; H-16: 3,82, m; CO-NH-CH₂: 6,32, t; NH-CH₂-CH₂-: 3,38, m; CH₂-CH₂-OH: 3,70, m.
¹³C-NMR CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,7, d; C-4: 139,0, d; C-5: 126,6, d; C-6: 144,1, d; C-7: 115,8, s; 7-CN: 118,4, s; C-8: 73,1, d; C-16: 69,4, d; C-18: 172,3, s; 1'-CO-NH-: 176,7, s; NH-CH₂-CH₂: 42,3, t; CH₂-CH₂-OH: 61,7, t.
TS (El, 70 eV; m/z): 532, [M]^+*; 514 [M-H₂O]^+*; 596 [M-2H₂O]^+*; 478 [M-3H₂O]^+*; 298, [C₁₆H₂₁N₂O₃]⁺; 271, [C₁₆H₁₉N₂O₂]⁺; 186, [C₉H₁₆NO₃]⁺.
TS (Cl, i-Butan; m/z): 533, [M+H]⁺; 515, [M+H-H₂O]⁺.
Beispiel 15
Borrelidin-3-picolylamid [(I), R = CONHCH₂-C₅H₄N]
Zu einer gemäß Beispiel 3 hergestellten gemischten Anhydridlösung aus 4,0 g (8,2 mMol) Borrelidin gab man 4,2 ml (41,2 mMol, 4,46 mg) 3 Picolylamin. Nach 3 Stunden Rühren verschwand das Ausgangsborrelidin (R_f = 0,43) und das Produkt (R_f = 0,24) erschien, was durch Dünnschichtchromatographie (Kieselgelplatte, Elutionsmittelsystem: Chloroform/Methanol 95 : 5) belegt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde in 500 ml Chloroform gelöst, mit 3 × 1500 ml Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockenheit verdampft. Der trockene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule mit Gemischen aus Chloroform und Ethylacetat von steigendem Ethylacetatgehalt chromatographiert. Die Fraktionen, die das mit einem 2 : 8 Elutionsgemisch eluierende Produkt enthielten, wurden kombiniert und bis zur Trockenheit verdampft. Zu der auf diese Weise erhaltenen sich verfestigende öligen Substanz (3,62 g) gab man 4 ml Ethylacetat und 20 ml n-Hexan. Anschließend wurde das feste Material pulverisiert und filtriert. Auf diese Weise erhielt man 3,04 g Produkt mit einem Schmelzpunkt von 99 bis 105°C.
Elementaranalyse für C₃₄H₄₉N₃O₅ (M: 579.785):
Berechnet: C = 70,43%, H = 8,52%, N = 7,25
Gefunden: C = 70,45%, H = 8,88%, N = 6,91%
UV: λ_max (EtOH) = 256 nm (ε = 29166).
Die Struktur des Produkts wurde durch spektroskopische Daten (PMR, CMR, TS) bestätigt.
Charakteristische Spektraldaten: IR: 3325, 2958, 2212, 1732, 1651, 1251 cm^–1
¹H-NMR CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,98, dt; H-4: 6,22, m; H-5: 6,39, dd; H-6: 6,81, d; H-8: 4,10, d; H-16: 3,80, m; 1'-CONH-: 6,50, t; NH-CH₂-3Py: 4,25, dd und 4,60, dd; Py: 7,25, dd; 7,63, d und 8,43–8,53, m, 2H.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 76,5, d; C-4: 138,7, d; C-5: 126,7, d; C-6: 144,0, d; C-7: 116,0, s; 7-CN: 118,5, s; C-8: 73,0, d; C-16: 69,7, d; C-18: 172,2, s; 1'-CO-NH-: 175,8, s; NH-CH₂-3Py: 41,1, t; y: 148,8, d; 134,2, s; 135,7, d; 123,6, d; 148,6, d.
TS (El, 70 eV; m/z): 579, [M]^+*; 561 [M-H₂O]^+*; 336, [C₂₀H₂₂N₃O₂]⁺; 107, [C₆H₈₇N₂]⁺; 93, [C₆H₇N]⁺; 92 [C₆H₆N]⁺.
TS (Cl, i-Butan; m/z): 580, [M+H]⁺.
Herstellung des Hydrochloridsalzes
350 mg (0,6 mMol) des vorstehenden Produkts wurden in 5 ml Tetrahydrofuran gelöst und unter Rühren dann bei 0°C mit 70 μl einer 37%igen wässrigen Salzsäurelösung versetzt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft und das Wasser durch azeotrope Destillation mit Benzol entfernt. Der trockene Rückstand wurde mit absolutem Ether pulverisiert. Das feste Material wurde filtriert und mit Ether gewaschen. Auf diese Weise erhielt man 330 mg des Produkts mit einem Schmelzpunkt von 114 bis 119°C.
Elementaranalyse für C₃₄H₄₉N₃O₅·HCl·2H₂O (M: 652,246):
Berechnet: C = 62,61%, H = 3,35%, N = 6,44%, Cl= 5,44%, H₂O = 5,52%
Gefunden: C = 64,16%, H = 8,22%, N = 6,44%, Cl= 5,67%, H₂O = 5,57%
UV: λ_max (EtOH) = 256 nm (ε = 30170).
Charakteristische Spektraldaten:
¹H-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): H-2: 4,85, dt; H-4: 6,30, m; H-5: 6,48, dd; H-6: 6,95, d; H-8: 4,08, d; H-16: 3,70, m; 1'-CONH-: 8,60, t; NH-CH₂-3Py: 4,26, dd und 4,54, dd; Py: 7,92, dd; 8,30, d und 8,68–8,82, m, 2H.
¹³C-NMR (CDCl₃; δ_[ppm], δ_TMS = 0; Multiplizität): C-2: 75,6, d; C-4: 139,1, d; C-5: 127,5, d; C-6: 143,4, d; C-7: 116,6, s; 7-CN: 119,4, s; C-8: 70,8, d; C-16: 70,0, d; C-18: 171,1, s; 1'CO-NH-: 175,9 s; NH-CH₂-3Py: 38,2, t; Py: 143,4, d; 141,5, d; 141,3, d; 139,3, s; 126,6 d.

Claims

Verbindungen der Formel (I)
in der R für eine Gruppe der allgemeinen Formel -COOR¹, -CONR²R³ oder -CONR⁴CONR⁴R⁵ steht, wobei: R¹ für eine C_1- ₆-Alkylgruppe, die mit einer Hydroxyl-, Amino-, Di(C_1- ₄-alkyl)aminogruppe oder einer 5-8-gliedrigen gesättigten, stickstoffhaltigen heterocyclischen Gruppe (die neben dem Stickstoffatom sogar ein Sauerstoffatom oder ein oder zwei weitere Stickstoffatome enthalten kann, oder mit einer 5- oder 6-gliedrigen, stickstoffhaltigen aromatischen heterocyclischen Gruppe (die neben dem Stickstoffatom sogar ein Sauerstoffatom oder ein oder zwei weitere Stickstoffatome enthalten kann) substituiert ist; oder eine C_3-6-Cycloalkylgruppe steht; R² und R³ gleich oder voneinander verschieden sind und unabhängig voneinander für ein Wasserstoffatom oder eine C_1-6-Alkylgruppe, die ggfs. mit einem Halogenatom, einer Hydroxyl-, Amino-, C_2- ₅-Alkoxycarbonyl-, Di(C_1- ₄-alkyl)aminogruppe oder einer 5-8-gliedrigen gesättigten, stickstoffhaltigen heterocyclischen Gruppe (die neben dem Stickstoffatom sogar ein Sauerstoffatom oder ein oder zwei weitere Stickstoffatome enthalten kann, oder mit einer 5- oder 6-gliedrigen, aromatischen homocyclischen Gruppe oder einer aromatischen heterocyclischen Gruppe, die ein Sauerstoff- und/oder Stickstoffatom enthält, substituiert ist; eine 5- oder 6-gliedrige Cycloalkyl- oder eine Heteroarylgruppe stehen; R⁴ und R⁵ gleich oder voneinander verschieden sind und unabhängig voneinander für ein Wasserstoffatom oder eine C_1-6-Alkylgruppe, eine C_3-6-Cycloalkylgruppe oder eine Phenylgruppe und ihre Tautomere, Solvate, deren Gemische und die Säureadditionssalze aller dieser Verbindungen stehen.
Verbindung nach Anspruch 1, ausgewählt aus der aus Borrelidin-3-picolylamid und dessen Säureadditionssalzen, Borrelidin-2-picolylamid und dessen Säureadditionssalzen, Borrelidin-N,N-dicyclohexylcarbamidoamid bestehenden Gruppe.
Verbindung der allgemeinen Formel (I) nach Anspruch 1, bei der es sich um Borrelidin-3-picolylamid oder dessen Hydrochloridsalz handelt.
Pharmazeutische Zubereitungen, die als Wirkstoff eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), in der R, R¹, R², R³, R⁴ und R⁵ der Definition in Anspruch 1 entsprechen, oder ein Tautomer oder ein therapeutisch verträgliches Salz davon zusammen mit einem pharmazeutisch brauchbaren Träger, Lösungsmittel, Verdünnungsmittel und oder Füllstoff enthalten.
Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung als Medikament.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung zur therapeutischen Hemmung, Bekämpfung und/oder Rückbildung der Angiogenese.
Verwendung nach Anspruch 6 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung zur Behandlung von Tumoren.
Verwendung nach Anspruch 6 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung zur Verhinderung der Bildung von Tumormetastasen.
Verwendung nach Anspruch 6 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung zur Ergänzung der Krebstherapie.
Verwendung nach Anspruch 6 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung zur Behandlung von Arthritis oder Pannus.
Verwendung nach Anspruch 6 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung zur Behandlung von Psoriasis.
Verwendung einer Verbindung wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Gefäßbildungskrankheit bei einem Säuger, die durch übermäßige unangemessene Angiogenese verursacht wird.