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DE574579T1 - Dna kodierend für den menschlichen 5-ht if? rezeptor und seine verwendung. - Google Patents

Dna kodierend für den menschlichen 5-ht if? rezeptor und seine verwendung.

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Publication number
DE574579T1
DE574579T1 DE0574579T DE93903021T DE574579T1 DE 574579 T1 DE574579 T1 DE 574579T1 DE 0574579 T DE0574579 T DE 0574579T DE 93903021 T DE93903021 T DE 93903021T DE 574579 T1 DE574579 T1 DE 574579T1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
receptor
human
cell
nucleic acid
expression
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
DE0574579T
Other languages
English (en)
Inventor
Theresa Branchek
Paul Hartig
Richard Weinshank
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lundbeck Research USA Inc
Original Assignee
Synaptic Pharmaceutical Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=25224205&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=DE574579(T1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Synaptic Pharmaceutical Corp filed Critical Synaptic Pharmaceutical Corp
Publication of DE574579T1 publication Critical patent/DE574579T1/de
Pending legal-status Critical Current

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Claims (62)

VOSSlUS & PARTNER SiEBEFTiTP,, 4 81675 MÜNCHEN EP 93 90 3021.9 ] 4 , ' £ SYNAPTIC PHARMACEUTICAL CORPORATION ' Jcil!' LJ MACEUTICAL CORPORATION U.Z. F 144 EP cPatentansprüche
1. Isoliertes Nucleinsäuremolekül, das einen menschlichen 5-HT1F-Rezeptor codiert.
,Q 2. Isoliertes Nucleinsäuremolekül nach Anspruch 1, wobei das Nucleinsäuremolekül ein DNA-Molekül ist.
3. Isoliertes DNA-Molekül nach Anspruch 2, wobei das DNA-Molekül ein cDNA-Molekül ist, das einen menschlichen 5-
jg HT1F-Rezeptor codiert.
4. Isoliertes menschliches 5-HTlp-Rezeptorprotein.
5. Vektor, umfassend das Nucleinsäuremolekül nach Anspruch 1^
6. Plasmid, umfassend den Vektor nach Anspruch 5.
7. Vektor nach Anspruch 5, angepaßt für die Expression in einer Zelle, der die für die Expression der DNA in der Zelle notwendigen regulatorischen Elemente enthält, die so zu der DNA, die den 5-HT1F-Rezeptor codiert, angeordnet sind, daß deren Expression gewährleistet ist.
oQ 8. Vektor nach Anspruch 7, wobei die Zelle eine Bakterien-, Hefe- oder Säugerzelle ist.
9. Plasmid nach Anspruch 6, angepaßt für die Expression in einer Säugerzelle, das die für die Expression der gc Nucleinsäure in der Säugerzelle notwendigen regulatorischen Elemente enthält, die so zu der Nucleinsäure, die den 5-HT-^p-Rezeptor codiert, angeordnet sind, daß deren Expression gewährleistet ist.
10. Plasmid pMO5-hll6a (ATCC-Hinterlegungsnummer 75175), umfassend das cDNA-Molekül nach Anspruch 3, angepaßt für die Expression in einer Säugerzelle, das die für die Expression der DNA in der Säugerzelle notwendigen regulatorischen Elemente umfaßt, die so zu dem cDNA-Molekül angeordnet sind, daß deren Expression gewährleistet ist.
11. Säugerzelle, umfassend das Plasmid nach einem der Ansprüche 6, 9 oder 10.
12. Membranpräparat ion, die aus der Säugerzelle nach Anspruch 11 isoliert wurde.
13. Säugerzelle nach Anspruch 11, die eine Ltk~-Zelle oder eine NIH-3T3-Zelle ist.
14. Ltk~-Zelle L-5-HT1F (ATCC-Hinterlegungsnummer CRL
10957), umfassend das Plasmid nach Anspruch 10. 20
15. NIH-3T3-Zelle N-5-HTlp (ATCC-Hinterlegungsnummer CRL 10956), umfassend das Plasmid nach Anspruch 10.
16. Nucleinsäuresonde, umfassend ein Nucleinsäuremolekül von
mindestens 15 Nucleotiden, das in der Lage ist, spezifisch mit einer Sequenz zu hybridisieren, die in der Sequenz eines Nucleinsäuremoleküls enthalten ist, das einen menschlichen 5-HT1F-Rezeptor codiert.
17. Nucleinsäuresonde nach Anspruch 16, wobei die Nuclein-
säure DNA ist.
18. Antisense-Oligonucleotid mit einer Sequenz, die spezifisch an ein mRNA-Molekül binden kann, das einen menschlichen S-HT-^p-Rezeptor codiert, um so die Translation des mRNA-Moleküls zu verhindern.
3 °574 S79
19. Antisense-Oligonucleotid mit einer Sequenz, die spezifisch an das cDNA-Molekül nach Anspruch 3 binden kann.
20. Antisense-Oligonucleotid nach Anspruch 18, umfassend chemische Nucleotidanaloge.
21. Antikörper, der gegen einen menschlichen 5-HT1F-Rezeptor gerichtet ist.
22. Monoclonaler Antikörper, wobei der Antikörper gegen ein Epitop eines menschlichen an der Zelloberfläche lokalisierten 5-HT1F-Rezeptors gerichtet ist, das eine Aminosäuresequenz besitzt, die im wesentlichen identisch ist mit einer Aminosäuresequenz eines Zelloberflächen-Epitops des menschlichen 5-HT1F-Rezeptors.
23. Arzneimittel, umfassend eine Menge des Oligonucleotids nach Anspruch 18, die wirksam ist zur Verminderung der Expression eines menschlichen 5-HT1F-Rezeptors, indem es
eine Zellwandmembran durchdringt und in der Zelle spezifisch an rtiRNA bindet, die einen menschlichen 5-HT-j_p-R.ezeptor codiert, so daß ihre Translation verhindert wird, und einen pharmazeutisch verträglichen Träger, der eine
Zellmembran durchdringen kann.
25
24. Arzneimittel nach Anspruch 23, wobei das Oligonucleotid an einen Stoff gekoppelt ist, der mRNA inaktiviert.
25. Arzneimittel nach Anspruch 24, wobei der Stoff, der die
mRNA inaktiviert, ein Ribozym ist.
26. Arzneimittel nach Anspruch 23, wobei der pharmazeutisch verträgliche Träger, der eine Zellmembran durchdringen kann, eine Struktur aufweist, die an einen Rezeptor bindet, der spezifisch für einen ausgewählten Zelltyp ist, und dadurch von den Zellen des ausgewählten Zelltyps aufgenommen wird.
27. Arzneimittel, umfassend eine Menge des Antikörpers nach Anspruch 21 oder 22, die wirksam ist zur Blockierung der Bindung von natürlich vorkommenden Liganden an den 5-HT-, p-Rezeptor, und einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
28. Transgener nicht-menschlicher Säuger, der DNA exprimiert, die einen menschlichen 5-HT1F-Rezeptor codiert.
29. Transgener nicht-menschlicher Säuger, der DNA exprimiert, die einen in einer Weise mutierten menschlichen 5-HT-j_p-Rezeptor codiert, daß dieser zu einer normalen Rezeptoraktivität nicht fähig ist, und der nativen 5-HT-^-Rezeptor nicht exprimiert.
30. Transgener nicht-menschlicher Säuger, dessen Genom Antisense-DNA umfaßt, die komplemtär zu DNA ist, die einen menschlichen 5-HT1F-Rezeptor codiert, die so angeordnet
ist, daß sie in Antisense-mRNA transkribiert wird, die komplementär ist zu mRNA, die einen S-HT-^p-Rezeptor codiert, und die mit mRNA hybridisiert, die einen 5-HT-j_p-Rezeptor codiert, wobei deren Translation vermindert
wird.
25
31. Transgener nicht-menschlicher Säuger nach einem der Ansprüche 28 bis 30, wobei die DNA, die einen menschlichen 5-HT-^p-Rezeptor codiert, zusätzlich einen induzierbaren
Promotor umfaßt.
30
32. Transgener nicht-menschlicher Säuger nach einem der Ansprüche 28 bis 31, wobei die DNA, die einen menschlichen 5 -HT -j_p -Rezeptor codiert, zusätzlich gewebespezifische
regulatorische Elemente umfaßt.
35
33. Transgener nicht-menschlicher Säuger nach einem der Ansprüche 28 bis 32, wobei der transgene nicht-menschliche Säuger eine Maus ist.
34. Verfahren zur Bestimmung, ob eine chemische Verbindung, von der man nicht weiß, ob sie an einen menschlichen 5-HT1F-Rezeptor binden kann, an den menschlichen 5-HT1F-Rezeptor bindet, umfassend
(a) das Inkontaktbringen
(aa) einer Vielzahl von Säugerzellen nach einem der Ansprüche 11 oder 13 bis 15, oder
(ab) einer Membranfraktion, die aus einem davon hergestellten Zellextrakt isoliert wurde,-
mit der Verbindung unter Bedingungen, die eine Bindung
von Verbindungen erlauben, von denen bekannt ist, daß sie an einen 5-HT1F-Rezeptor binden, den Nachweis der Gegenwart irgendeiner Verbindung, die an den menschlichen 5-HT1F-Rezeptor gebunden ist, und dadurch Bestimmung, ob die Verbindung an den menschlichen 5-HT1F-Re-
zeptor bindet.
35. Verfahren zur Bestimmung, ob eine chemische Verbindung, von der man nicht weiß, ob sie an einen menschlichen 5-&EEgr;&Tgr;-,&rgr;-Rezeptor binden kann, an den menschlichen 5-HT1 r--Rezeptor binden und diesen aktivieren oder die Aktivierung verhindern kann, umfassend
(a) das Inkontaktbringen
(aa) einer Vielzahl von Säugerzellen nach einem der
Ansprüche 11 oder 13 bis 15, oder
(ab) einer Membranfraktion, die aus einem davon hergestellten Zellextrakt isoliert wurde;
mit der Verbindung unter Bedingungen, die die Aktivierung oder Hemmung einer funktioneilen Antwort erlauben, den Nachweis der funktioneilen Antwort unter Verwendung eines "second-messenger"-Tests, und dadurch Bestimmung, ob die Verbindung an den menschlichen 5-HT1F-Rezeptor
bindet und ihn aktiviert oder die Aktivierung verhindert.
36. Verbindung, die nach dem Verfahren nach Anspruch 34 oder 35 nachgewiesen wird.
37. Verfahren zum Durchmustern chemischer Verbindungen zur Identifizierung von Wirkstoffkandidaten, die spezifisch an einen menschlichen 5-HT1F-Rezeptor auf der Zelloberfläche binden, umfassend
(a) das Inkontaktbringen
(aa) einer Vielzahl von Säugerzellen nach Ansprüchen 11 oder 13 bis 15, oder
{ab) einer Membranfraktion, die aus einem davon her-
gestellten Zellextrakt isoliert wurde;
mit einer Vielzahl von Verbindungen, und die Bestimmung jener Verbindungen, die an den menschlichen 5-HT1F-Rezeptor, der auf der Oberfläche einer jeden solchen Zelle exprimiert wird, oder an die Membranfraktion binden, wo-
bei die Wirkstoffkandidaten identifiziert werden, die spezifisch an den menschlichen 5-HT-^-Rezeptor binden.
38. Verfahren zum Durchmustern chemischer Verbindungen zur
Identifizierung von Wirkstoffkandidaten, die an einen
menschlichen 5-HT1F-Rezeptor auf der Zelloberfläche binden und ihn aktivieren oder die Aktivierung blockieren, umfassend
(a) das Inkontaktbringen
{aa) einer Vielzahl von Säugerzellen nach einem der
Ansprüche 11 oder 13 bis 15, oder
(ab) einer Membranfraktion, die aus einem davon hergestellten Zellextrakt isoliert wurde;
mit einer Vielzahl von Verbindungen, und die Bestimmung jener Verbindungen, die an den menschlichen 5-HT1T?-Rezeptor in der Säugerzelle binden und ihn aktivieren oder die Aktivierung blockieren, unter Verwendung eines "second-messenger"-Tests, wobei Wirkstoffkandidaten
identifiziert werden, die an den menschlichen 5-HT-^p-Rezeptor binden und ihn aktivieren oder die Aktivierung blockieren.
39. Wirkstoffkandidat, der nach dem Verfahren nach Anspruch 37 oder 38 identifiziert wird.
40. Verfahren zum Durchmustern chemischer Verbindungen zur Identifizierung von Wirkstoffkandidaten, die an einen menschlichen 5-HT1F-Rezeptor auf der Zelloberfläche binden, umfassend das Inkontaktbringen eines Liganden, von dem man weiß, daß er an den 5-HT1F-Rezeptor bindet, mit
(a) einer Vielzahl von Säugerzellen nach einem der Ansprüche 11 oder 13 bis 15, oder
(b) einer Membranfraktion, die aus einem davon hergestellten Zellextrakt isoliert wurde;
unter Bedingungen, die die Bindung der Liganden an den 5-HT1F-Rezeptor erlauben, anschließendes Inkontaktbringen mit chemischen Verbindungen, von denen nicht bekannt
ist, ob sie an den 5-HT1F-Rezeptor mit dem gebundenen Liganden binden, und das Bestimmen jener Verbindungen, die den gebundenen Liganden verdrängen, so daß dadurch Wirkstoffkandidaten identifiziert werden, die an den
menschlichen 5-HT1F-Rezeptor binden. 25
41. Wirkstoffkandidat, der nach dem Verfahren nach Anspruch 40 identifiziert wird.
42. Verfahren nach einem der Ansprüche 34, 35, 37, 38 oder
40, wobei die Säugerzelle in ihrem Ursprung eine nichtneuronale Zelle ist.
43. Verfahren nach Anspruch 42, wobei die in ihrem Ursprung nicht-neuronale Säugerzelle eine Ltk"-Zelle ist.
44. Verfahren nach Anspruch 42, wobei die in ihrem Ursprung nicht-neuronale Säugerzelle eine NIH-3T3-Zelle ist.
45. Arzneimittel, umfassend eine Verbindung, die nach den Verfahren nach Anspruch 34 oder 3 5 identifiziert wurde, und einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
46. Arzneimittel, umfassend einen Wirkstoffkandidaten, der nach dem Verfahren nach einem der Ansprüche 37, 3 8 oder 40 identifiziert wurde, und einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
47. Verwendung einer Verbindung für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Migräne, wobei die Verbindung selektiv an einen 5-HTlp-Serotonin-Rezeptor bindet und ihn aktiviert, aber nicht an einen 5-HTo-Serotonin-Rezeptor oder einen 5-HT1D-Serotonin-Rezeptor.
48. Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 47, wobei die Verbindung weiterhin dadurch gekennzeichnet ist, daß sie nicht an irgendeinen anderen Serotonin-Rezeptor-Subtyp
bindet oder ihn aktiviert.
49. Arzneimittel, das einen pharmazeutisch verträglichen Träger und eine zur Behandlung von Migränekopfschmerzen wirksame Verbindung umfaßt, wobei die Verbindung selektiv an einen 5-HT-j_p-Serotonin-Rezeptor bindet und ihn aktiviert, aber nicht an einen 5-HT2-Serotonin-Rezeptor oder einen 5-HT^j-j-Serotonin-Rezeptor.
50. Arzneimittel nach Anspruch 49, wobei die Verbindung wei-
terhin dadurch gekennzeichnet ist, daß sie nicht an irgendeinen anderen Serotonin-Rezeptor-Subtyp bindet oder ihn aktiviert.
51. Verfahren zur Identifizierung eines Liganden zur Behandlung von Migräne, das die Bestimmung umfaßt, ob der Ligand selektiv an einen 5-HT1F-Rezeptor binden und ihn
aktivieren kann, aber nicht an einen 5-HT1D~Rezeptor oder einen 5-HT2-Rezeptor.
52. Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 34 oder 3 5 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Anomalie, die durch die Erniedrigung der Aktivität eines menschlichen 5-HTlp-Rezeptors gelindert wird, wobei die Verbindung ein menschlicher 5-HT-j_p-Rezeptorantagonist
ist.
10
53. Verwendung nach Anspruch 52, wobei der anomale Zustand Demenz, Parkinson-Krankheit, eine Ernährungsstörung, pathologischer Angstzustand oder Schizophrenie ist.
54. Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 34 oder 35 für
die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Anomalie, die durch die Erhöhung der Aktivität eines menschlichen 5-HT1F-Rezeptors gelindert wird, wobei die
Verbindung ein menschlicher 5-HT1P-Rezeptoragonist ist.
20
55. Verfahren zum Nachweis der Expression des 5-HT-j_F-Rezeptors in einer Zelle durch den Nachweis der Gegenwart von mRNA, die einen 5-HT-j_p-Rezeptor codiert, umfassend die Gewinnung der Gesamt-mRNA aus der Zelle und das Inkontaktbringen der so gewonnenen mRNA mit der Nucleinsäuresonde nach Anspruch 16 oder 17 unter Hybridisierungsbedingungen, den Nachweis der Gegenwart der mit der Sonde hybridisierten mRNA und so den Nachweis der Expression des 5-HT-^p-Rezeptors in der Zelle.
56. Verfahren zum Nachweis der Gegenwart eines menschlichen 5-HT1F-Rezeptors auf der Zelloberfläche, umfassend das Inkontaktbringen der Zelle mit dem Antikörper nach Anspruch 21 oder 22 unter Bedingungen, die ein Binden des Antikörpers an den Rezeptor erlauben, den Nachweis der Gegenwart des an die Zelle gebundenen Antikörpers, und
0574 S79
so den Nachweis der Gegenwart eines menschlichen 5-HT1F-Rezeptors auf der Zelloberfläche.
57. Verfahren zur Bestimmung physiologischer Wirkungen der Expression variierender Mengen menschlicher 5-HT1F-Rezeptoren, umfassend die Produktion eines transgenen nicht-menschlichen Säugers, dessen Grad an Expression des menschlichen 5-HT1F-Rezeptors durch die Verwendung eines induzierbaren Promotors variiert wird, der die Expression des menschlichen 5-HT1F-Rezeptors reguliert.
58. Verfahren zur Bestimmung physiologischer Wirkungen der Expression variierender Mengen des menschlichen 5-HT1F-Rezeptors, umfassend die Produktion einer Reihe transge-
ner nicht-menschlicher Säuger, wobei jeder eine unterschiedliche Menge an menschlichem 5-HT1F-Rezeptor exprimiert.
59. In vitro-Verfahren zur Diagnose einer Prädisposition für
eine Erkrankung, die mit der Expression eines spezifischen menschlichen 5-HT1F-Rezeptorallels assoziiert ist, umfassend:
a. Gewinnung von DNA von Patienten, die an der Krankheit leiden;
b. Durchführung einer Restriktionsverdauung der DNA mit einer Reihe von Restriktionsenzymen;
c. elektrophoretische Trennung der erhaltenen DNA-Fragmente auf einem nach der Größe trennenden Gel;
d. Inkontaktbringen des erhaltenen Gels mit einer
Nucleinsäuresonde, die spezifisch mit DNA hybridisieren kann, die einen menschlichen 5-HT1F-Rezeptor codiert, und die mit einem nachweisbaren Marker markiert ist;
e. Nachweis der markierten Banden, die mit der DNA hybridisiert haben, die einen menschlichen 5-HT-j_F-Rezeptor codiert, markiert mit einem nachweisbaren Marker, so daß sich ein einzigartiges Bandenmuster
ergibt, das spezifisch ist für die DNA von Patien
ten, die an der Krankheit leiden;
f. Herstellung von DNA, die für die Diagnose gewonnen wurden gemäß den Schritten a bis e; und
g. Vergleich des einzigartigen Bandenmusters, das spezifisch ist für die DNA von Patienten, die an der Krankheit leiden, von Schritt e und von DNA, die zur Diagnose erhalten wurde, von Schritt f zur Bestimmung, ob die Muster gleich oder verschieden sind, und damit zur Diagnose einer Prädisposition für die Krankheit, wenn die Muster gleich sind.
60. Verfahren nach Anspruch 59, wobei eine Krankheit, die mit der Expression eines spezifischen menschlichen 5-HT-j_p-Rezeptorallels assoziiert ist, diagnostiziert wird.
61. Verfahren zur Herstellung des isolierten 5-HT1F-Rezeptors nach Anspruch 4, umfassend:
a. Induktion von Zellen zur Expression des 5-HT1F-Rezeptors;
b. Gewinnung des Rezeptors aus den erhaltenen Zellen; und
c. Reinigung des so gewonnenen Rezeptors.
62. Verfahren zur Herstellung des isolierten 5-HT1F~Rezep-
tors nach Anspruch 4, umfassend:
a. Insertion einer Nucleinsäure, die den S-HT^p-Rezeptor codiert, in einen geeigneten Vektor, der die regulatorischen Elemente umfaßt, die für die Expres-
sion der Nucleinsäure notwendig sind, die operativ mit der Nucleinsäure verbunden sind, so daß deren Expression stattfinden kann;
b. Insertion des erhaltenen Vektors in eine geeignete Wirtszelle, so daß man eine Zelle erhält, die die Nucleinsäure exprimiert und den Rezeptor produziert;
0574 S79
c. Gewinnung des Rezeptors, der von der erhaltenen Zelle produziert wird; und
d. Reinigung des so gewonnenen Rezeptors.
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