[go: up one dir, main page]

DE3627063A1 - Verfahren zur abtrennung und reinigung von biopolymeren durch affinitaetschromatographie - Google Patents

Verfahren zur abtrennung und reinigung von biopolymeren durch affinitaetschromatographie

Info

Publication number
DE3627063A1
DE3627063A1 DE19863627063 DE3627063A DE3627063A1 DE 3627063 A1 DE3627063 A1 DE 3627063A1 DE 19863627063 DE19863627063 DE 19863627063 DE 3627063 A DE3627063 A DE 3627063A DE 3627063 A1 DE3627063 A1 DE 3627063A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
silica gel
cleaned
biopolymers
affinity
pore size
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE19863627063
Other languages
English (en)
Other versions
DE3627063C2 (de
Inventor
Metin Dr Colpan
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DIAGEN INST MOLEKULARBIO
Original Assignee
DIAGEN INST MOLEKULARBIO
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by DIAGEN INST MOLEKULARBIO filed Critical DIAGEN INST MOLEKULARBIO
Priority to DE19863627063 priority Critical patent/DE3627063A1/de
Priority to EP87111312A priority patent/EP0263934A1/de
Priority to JP62197991A priority patent/JPS6372699A/ja
Publication of DE3627063A1 publication Critical patent/DE3627063A1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE3627063C2 publication Critical patent/DE3627063C2/de
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/02—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material
    • B01J20/10—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate
    • B01J20/103—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate comprising silica
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28002—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their physical properties
    • B01J20/28004—Sorbent size or size distribution, e.g. particle size
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28078—Pore diameter
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/291—Gel sorbents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3092—Packing of a container, e.g. packing a cartridge or column
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3204—Inorganic carriers, supports or substrates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B01J20/3219—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond involving a particular spacer or linking group, e.g. for attaching an active group
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
    • B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
    • B01J20/3257—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
    • B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
    • B01J20/3257—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such
    • B01J20/3259—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such comprising at least two different types of heteroatoms selected from nitrogen, oxygen or sulfur with at least one silicon atom
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
    • B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
    • B01J20/3257—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such
    • B01J20/3261—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such comprising a cyclic structure not containing any of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur, e.g. aromatic structures
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
    • B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
    • B01J20/3257—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such
    • B01J20/3263—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such comprising a cyclic structure containing at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur, e.g. an heterocyclic or heteroaromatic structure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • C07K16/065—Purification, fragmentation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • B01D15/3809—Affinity chromatography of the antigen-antibody type, e.g. protein A, G or L chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/58—Use in a single column

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Description

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Abtrennung und Reinigung von Biopolymeren durch Affinitätschromatographie mit Hilfe von porösem Silica­ gel und daran oberflächlich kovalent gebundenen Affini­ tätsliganden.
Für die Affinitätschromatographie werden in erster Li­ nie poröse Träger wie Dextrane, Agarosen, Acrylamid etc. eingesetzt, die Porengrößenverteilungen zwischen 200 und 1000 Å aufweisen. An diese Materialien sind beispielsweise kovalent Antikörper gebunden. Mit derar­ tigen Materialien ist es möglich, Proteine wie Insulin, Interferone etc. im industriellen Maßstab zu reinigen.
In der US-PS 44 15 665 ist eine spezielle Methode zur kovalenten Bindung von biologisch aktiven organischen Substanzen an polymere Träger beschrieben, zu denen unter anderem Agarose, Cellulose und Silicagel zählen. Verwendet wurde in den Beispielen 4 und 5 ein poröses Silicagel unbestimmter Porengröße und unbestimmter Korn­ größe. Kovalent gebunden wurde N6-(6-Aminohexyl)-Adeno­ sin-5′-Monophosphat. Dieses Material ist jedoch nicht für die Affinitätschromatographie geeignet.
Die Erfindung hat sich die Aufgabe gestellt, das Ver­ fahren zur Abtrennung und Reinigung von Biopolymeren durch Affinitätschromatographie mit Hilfe von porösem Silicagel und daran oberflächlich kovalent gebundenen Affinitätsliganden zu verbessern, so daß hiermit eine rasche, zuverlässige und hochspezifische Abtrennung und Reinigung von Biopolymeren möglich ist.
Dabei soll einerseits der meistens sehr teure Affini­ tätsligand, wie zum Beispiel Antikörper, optimal ausge­ nutzt werden, zum anderen auch die Menge des Trägerma­ terials so klein wie möglich gehalten werden, um unnö­ tige Verluste und Verdünnungen zu vermeiden. Intensive Untersuchungen verschiedener poröser Träger, verschie­ dener Affinitätsliganden und verschiedener durch die Affinitätschromatographie zu reinigender Biopolymere haben zu dem überraschenden Ergebnis geführt, daß die oben genannte Aufgabe optimal dadurch gelöst werden kann, daß Silicagele verwendet werden mit definierten engen Porengrößenbereichen, welche jeweils das fünf- bis zwanzigfache der Größe des zu reinigenden Materials aufweisen.
Werden Silicagele verwendet mit undefinierten und brei­ ten Porengrößenbereichen, kann keines der oben genann­ ten Ziele optimal gelöst werden. Werden Silicagele mit definierten engen Porengrößenbereichen eingesetzt, wel­ che zwar größer sind als das zu reinigende Material, jedoch kleiner als das fünffache der Größe des zu rei­ nigenden Materials, werden die teuren und wertvollen Affinitätsliganden nur unvollständig ausgenutzt. Außer­ dem wächst bei kleineren Porengrößenbereichen bereits die Menge an ausgebluteten Affinitätsliganden bzw. ver­ unreinigenden Fragmenten derselben. Werden Silicagele eingesetzt mit Porengrößenbereichen, die größer sind als das zwanzigfache der Größe des zu reinigenden Mate­ rials, so sinkt die Oberfläche des Materials in so er­ heblichem Maße, daß unnötig große Mengen Silicagel ein­ gesetzt werden müssen und ein unnötig großes Volumen von Elutionsflüssigkeit eingesetzt werden muß, um die ursprünglich gebundenen Biopolymeren wieder aus dem Material auszuwaschen.
Dies ist insbesondere bei therapeutisch einzusetzenden Biopolymeren außerordentlich unerwünscht.
Innerhalb des erfindungsgemäßen Bereiches vom fünf- bis zwanzigfachen der Größe des zu reinigenden Materials ist der untere Bereich bevorzugt für praktisch kugel­ förmige Biopolymere und der obere Bereich für langge­ streckte und sperrige Biopolymere.
Weiterhin ist der untere Porengrößenbereich bevorzugt, wenn relativ kleine Affinitätsliganden mit relativ kur­ zen Spacern an die Oberfläche des Silicagels gebunden sind, während der obere Porengrößenbereich bevorzugt ist, wenn größere und sperrige Affinitätsliganden und/ oder längerkettige Spacer zur Bindung der Affinitätsli­ ganden an die Oberfläche des Silicagels zum Einsatz kommen.
Als oberflächlich kovalent gebundene Affinitätsliganden kommen in erster Linie Antikörper in Frage, jedoch auch andere mehr oder weniger große Substanzen mit spezifi­ scher Affinität zu dem zu reinigenden Biopolymeren. Ein typisches Beispiel hierfür ist das Protein A aus Sta­ phylococcus aureus oder rekombinantes Protein A, wel­ ches eine spezifische Affinität zu Immunglobulinen (IgG) aufweist.
Besonders bedeutungsvoll ist das erfindungsgemäße Ver­ fahren für die Abtrennung und Reinigung von Proteinen, Glykoproteinen und/oder Nukleinsäuren, von Viren oder Vaccinen, von Zellorganellen, prokaryontischen oder eukaryontischen Zellen, Micellen oder Vesikeln, von Chylomikronen, VLDL- (very low density), LDL- (low den­ sity) und HDL- (high density) Lipoproteinen sowie Pro­ teinkomplexen.
Es handelt sich somit insbesondere um Biopolymere mit Größen von mindestens 50 bis 100 Å bis hinaus zu Biopo­ lymeren mit Größen von 5000 und mehr Å. Erfindungsge­ mäß werden somit poröse Silicagele eingesetzt mit de­ finierten engen Porengrößenbereichen von mindestens 300 Å, vorzugsweise jedoch zwischen 500 und 10 000 Å. Prin­ zipiell könnten auch Silicagele mit noch größeren Po­ rengrößen eingesetzt werden, jedoch ist es bisher tech­ nisch schwierig, Silicagele mit engen Porengrößenberei­ chen dieser Größenordnung herzustellen.
Einige typische Anwendungsgebiete für das erfindungsge­ mäße Verfahren sind im folgenden zusammengestellt:
Viren und Vaccine zur Impfstoffherstellung
  • - Lebend-Vaccine (Pockenviren, ⌀ca. 2500 Å)
  • - attenuierte Virusstämme (Maul- und Klauenseuche-Vi­ ren, ⌀ca. 2500 Å)
  • - recombinante Vaccine hergestellt durch gentechnolo­ gische Expressionsverfahren aus höheren Zellkulturen oder Bakterien (z. B. Hepatis B-Virus Hüllproteinkom­ plexe, ⌀ca. 500 Å)
  • - Vaccine auf der Basis von Vesikeln und Micellen (⌀ca. 100-500 Å).
Organellen
  • - Mitochondrien (⌀ca. 5000 Å)
  • - Microbodies
Pro- und eukaryotische Zellen
  • - z. B. Entfernung von Mykoplasmen (⌀ca. 1000Å) und Tumorzellen (⌀ca. 100 000 Å) aus Medien oder Blut
Proteine
  • - kleine Proteine: Lymphokine wie z. B. Interferon und TNF (MW 10 000-20 000)
  • - mittlere Proteine: gewebsspezifische Plasminogenakti­ vatoren (MW ca. 65 000) IgG (MW 150 000, ⌀ca. 150 Å) Urokinase (⌀ca. 90 Å)
  • - große Proteine: IgM (MW ca. 900 000 Å, ⌀ca. 900 Å) Blutfaktoren wie z. B. Faktor VIII (MW<1 Mio., ⌀<500Å)
Proteinkomplexe
  • - Entfernung von Immunkomplexen wie Rheumafaktoren (MW 500 000, ⌀ca.<500 Å) durch Blutwäsche
  • - Enzymkomplexe wie Fettsäuresynthethase (MW ca. 2,3 Mio.)
  • - filamentöse Komplexe wie Microtubulin, Actinkomplexe
  • - Ribosomen
Micellen und Vesikel
  • - Chylomikronen (⌀ca. 1000-10 000 Å)
  • - VLDL (very low density lipoproteins), ⌀ca. 300- 500 Å
  • - LDL (⌀ca. 200-250 Å)
  • - HDL (⌀<100 Å)
Die kovalente Bindung der Affinitätsliganden an die Oberfläche der Poren des Silicagels erfolgt in an sich bekannter Weise, beispielsweise durch Umsetzung eines Silans, welches durch anschließende Reaktionen am orga­ nischen Rest aktiviert werden kann zur Umsetzung mit den Affinitätsliganden.
Eine besonders schonende und deshalb bevorzugte Aktivie­ rung besteht im Aufbau von Alkyl- bzw. Arylsulfonsäure­ estern. Da diese in besonders schonender Weise mit Ami­ nogruppen, Hydroxylgruppen und Sulfhydrylgruppen der Affinitätsliganden reagieren und diese dadurch schonend kovalent an das Silicagel binden. Prinzipiell sind aber auch alle anderen bekannten Kupplungsreagenzien geeig­ net, sofern diese nicht zu einer elektrischen Aufladung des Affinitätsliganden oder einer sonstigen, die Affini­ tät beeinflussenden Denaturierung führen. Prinzipiell können sowohl kürzere als auch längere Spacer zwischen Silicagel und den Affinitätsliganden eingebaut werden. Besonders bevorzugt sind jedoch solche mit nur 2 bis 5 Kohlenstoffatomen. Kürzere Spacer können zu einer unnö­ tigen sterischen Behinderung der Reaktion zwischen Af­ finitätsliganden und zu reinigenden Biopolymeren füh­ ren. Längere Spacer führen zu einer unnötigen Vergeu­ dung des innerhalb der Poren zur Verfügung stehenden freien Raumes, ohne den Wirkungsgrad der Affinitätsli­ ganden zu erhöhen.
In den nachfolgenden Bezugsbeispielen ist die Herstel­ lung von einigen Silicageln beschrieben, die ober­ flächlich so aktiviert sind, daß sie verschiedene Af­ finitätsliganden schonend kovalent binden können. In den anschließenden Beispielen ist beschrieben, wie spe­ zielle Affinitätsliganden oberflächlich kovalent gebun­ den werden und die so entstandenen porösen Silicagele zur effizienten Affinitätschromatographie der entspre­ chenden Biopolymeren eingesetzt werden können.
Bezugsbeispiel 1
Synthese von Diol-Silicagel
50 g poröses Silicagel mit einer Porengröße von 1000 Å und einer Partikelgröße von ca. 60 µm werden in einem 500 ml Dreihalskolben bei einem Druck von <1 mbar 12 Stunden bei einer Temperatur von 150°C getrocknet und aktiviert. Nach dem Abkühlen wird belüftet und mit 50 ml destilliertem γ-Glycidyloxypropyltrimethoxysilan in 200 ml absolutem Toluol und 1 ml absolutem Tributylamin versetzt. Die Umsetzung erfolgt 12 Stunden bei 111°C, der Rückflußtemperatur von Toluol. Nach der Reaktion wird das Produkt Epoxy-Silicagel abgesaugt und zweimal mit 250 ml Toluol, dreimal mit 250 ml Aceton und zwei­ mal mit 0,005 M HCl gewaschen und abgesaugt. Das Epoxy- Silicagel wird in 250 ml 0,005 M HCl suspendiert und in 2 Stunden bei 90°C die Epoxy-Gruppe zur Diol-Gruppe gespalten.
Das Produkt Diol-Silicagel wird abgesaugt, fünfmal mit H2O und zweimal mit Aceton gewaschen und bei 50°C ge­ trocknet.
Bezugsbeispiel 2
Aktivierung von Diol-Silicagel mit Tosylchlorid
50 g trockenes Diol-Silicagel mit 1000 Å Porengröße, synthetisiert nach Bezugsbeispiel 1, wird in einem 500 ml Dreihalskolben bei einem Druck von <1 mbar 2 Stunden bei 70°C getrocknet, um eventuell vorhandene Feuchtig­ keit zu entfernen. Nach der Trocknung wird belüftet und mit 250 ml absolutem Aceton und 1 ml absolutem Pyridin versetzt, die Suspension im Vakuum entgast und an einen Rührer angeschlossen. Zu dieser Suspension werden 10 mmol Tosylchlorid, gelöst in 50 ml absolutem Aceton, unter ständigem Rühren langsam zugetropft. Nach der Reaktion bei Raumtemperatur 20 bis 24°C für 30 Minuten wird das Tosyl-aktivierte Silicagel abgesaugt und mit Aceton, Aceton:2 mM HCl der Zusammensetzungen 75 : 25, 50 : 50, 25 : 75 gewaschen und abschließend mit 1 mM HCl gewaschen, abgesaugt und gefriergetrocknet.
Bezugsbeispiel 3
Aktivierung von Diol-Silicagel mit Trichlormethansul­ fonsäurechlorid
50 g trockenes Diol-Silicagel mit 2500 Å Porengröße, synthetisiert nach Bezugsbeispiel 1, wird in einem 500 ml Dreihalskolben bei einem Druck von <1 mbar 2 Stunden bei 70°C getrocknet, um eventuell vorhandene Feuchtig­ keit zu entfernen. Nach der Trocknung wird belüftet und mit 250 ml absolutem Aceton und 1 ml absolutem Pyridin versetzt und an einen Rührer angeschlossen. Die Suspen­ sion wird unter Vakuum entgast und mit einem Eisbad auf 0°C gekühlt. Zu dieser Suspension werden 10 mmol Tri­ chlormethansulfonsäurechlorid, gelöst in 50 ml absolu­ tem Aceton, unter ständigem Rühren langsam zugetropft. Nach der Reaktion bei 0°C für 30 Minuten wird das Tri­ chlormethansulfonsäurechlorid-aktivierte Silicagel ab­ gesaugt und mit Aceton, Aceton:2 mH HCl der Zusammen­ setzungen 75 : 25, 50 : 50, 25 : 75 gewaschen und abschlie­ ßend mit 1 mM HCl gewaschen und gefriergetrocknet.
Bezugsbeispiel 4
Aktivierung von Dio-Silicagel mit 2,4,6-Trinitroben­ zolsulfonsäurechlorid
50 g trockenes Diol-Silicagel mi5 5000 Å Porengröße, synthetisiert nach Bezugsbeispiel 1, wird in einem 500 ml Dreihalskolben bei einem Druck von <1 mbar 2 Stunden bei 70°C getrocknet, um eventuell vorhandene Feuchtig­ keit zu entfernen.
Nach der Trocknung wird belüftet und mit 250 ml absolu­ tem Aceton und 1 ml absolutem Pyridin versetzt und an einen Rührer angeschlossen. Die Suspension wird unter Vakuum entgast und mit einem Eisbad auf 0°C gekühlt. Zu dieser Suspension werden 10 mmol 2,4,6-Trinitrobenzol­ sulfonsäurechlorid, gelöst in 50 ml absolutem Aceton, unter ständigem Rühren langsam zugetropft. Nach der Reaktion bei 0°C für 30 Minuten wird das 2,4,6-Trini­ trobenzolsulfonsäurechlorid-aktivierte Silicagel abge­ saugt und mit Aceton, Aceton:2 mM HCl der Zusammenset­ zungen 75 : 25, 50 : 50, 25 : 75 gewaschen und abschließend mit 1 mM HCl gewaschen und gefriergetrocknet.
Bezugsbeispiel 5
Aktivierung von Diol-Silicagel mit 2,2,2-Trifluorethan­ sulfonsäurechlorid (Tresylchlorid)
50 g trockenes Diol-Silicagel mit 10 000 Å Porengröße, synthetisiert nach Bezugsbeispiel 1, wird in einem 500 ml Dreihalskolben bei einem Druck von <1 mbar 2 Stunden bei 70°C getrocknet, um eventuell vorhandene Feuchtig­ keit zu entfernen. Nach der Trocknung wird belüftet und mit 250 ml absolutem Aceton und 1 ml absolutem Pyridin versetzt und an einen Rührer angeschlossen. Die Suspen­ sion wird unter Vakuum entgast und mit einem Eisbad auf 0°C gekühlt. Zu dieser Suspension werden 10 mmol Tresyl­ chlorid unter ständigem Rühren langsam zugetropft. Nach der Reaktion bei 0°C für 30 Minuten wird das Tresylchlo­ rid-aktivierte Silicagel abgesaugt und mit Aceton, Ace­ ton:2 mM HCl der Zusammensetzungen 75 : 25, 50 : 50, 25 : 75 gewaschen und abschließend mit 1 mM HCl gewaschen und gefriergetrocknet.
Beispiel 1
Reinigung von Human-Immunglobulinen (IgG) mit Protein A- Affinitätschromatographie
A: 10 g Sulfonylchlorid aktiviertes Silicagel mit ei­ ner Porengröße von 1000 Å werden in 50 ml 0,1 M Na- Phosphatpuffer, pH 8.0, suspendiert und im Vakuum ent­ gast. Zu dieser Suspension werden 300 mg Protein A (aus Staphyloccus aureus oder recombinantes Protein A) gelöst in 15 ml 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 8.0, zuge­ geben. Die Suspension wird 6 Stunden bei 4°C geschüt­ telt, um eine hohe Immobilisierung von Protein A zu gewährleisten. Nach der Reaktion wird das Produkt Pro­ tein A-Silicagel abfiltriert, in 100 ml 0,1 M Mercapto­ ethanol, 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 8.0, suspendiert und 2 Stunden geschüttelt, um nicht abreagierte Sulfo­ nylgruppen zu blockieren. Nach der Blockierungsreaktion wird das Produkt fünfmal mit 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 7.0, gewaschen.
B: 10 g Protein A-Silicagel-1000 Å (1000 Å) werden in eine 1,27 cm × 15 cm Chromatographiesäule mit Einlaß- und Auslaßadapter gepackt und zweimal mit 3 Säulenvolu­ mina 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 7.0, und 2 Säulenvolu­ mina 0,05 M Na-Citratpuffer, pH 3.0, gewaschen und 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 7.0, äquilibriert. Die IgG-Pro­ be, bestehend aus 1000 mg rohem Human-IgG, wurde in 100 ml 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 7.0, gelöst und mit einer Flußgeschwindigkeit von 10 ml/min auf die Säule adsorbiert. Verunreinigungen mit anderen Proteinen und unspezifisch gebundenes IgG werden mit 2 Säulenvolumina 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 7.0, ausgewaschen und das spezifisch gebundene Human-IgG mit 0,05 M Citratpuffer, pH 3,0, und einer Flußgeschwindigkeit von 1 ml/min elu­ iert.
Die Bindekapazität von Protein A-Silicagel (Porengröße 1000 Å+ wurde zu 25 mg IgG/ml Säulenvolumen bestimmt.
Beispiel 2
Reinigung von Human-Immunglobulinen (IgG) mit Anti-Hu­ man-IgG Antikörpern durch Affinitätschromatographie
A: 200 mg Anti-Human-IgG Antikörper werden analog Bei­ spiel 1A an 10 g Sulfonyl aktiviertes Silicagel mit einer Porengröße von 2500 Å immobilisiert.
B: Entsprechend Beispiel 1 B wird das Anti-Human-IgG Silicagel-2500 in eine Chromatograhiesäule gepackt und äquilibriert. Nach der Bindung von rohem Human-IgG wer­ den die unspezifisch gebundenen Proteine mit 0,1 M Na- Phosphatpuffer, pH 7.0, ausgewaschen und das spezifisch gebundene Human-IgG mit 0,05 M Citratpuffer, pH 3.0, und einer Flußgeschwindigkeit von 1 ml/min eluiert. Die Bindekapazität von Anti-Human-IgG Silicagel (Porengröße 2500 Å) wurde zu 10 mg Human IgG/ml Säulenvolumen be­ stimmt.
Beispiel 3
Reinigung von human IgM mit Maus Anti-human-IgM Anti­ körper Affinitätschromatographie
A: 10 mg Anti-human-IgM Antikörper werden analog Bei­ spiel 1 an 10 g Sulfonyl aktiviertes Silicagel mit einer Porengröße von 10 000Å immobilisiert.
B: Entsprechend Beispiel 1 B wird das Anti-human-IgM Antikörper-Silicagel-10 000 in eine Chromatograhiesäule gepackt und äquilibriert.
Nach der Bindung von rohem Human-IgM werden die unspe­ zifisch gebundenen Proteine mit 0,1 M Na-Phosphatpuf­ fer, pH 7.0, ausgewaschen und das spezifisch gebundene Human-IgM mit 0,05 M Citratpuffer, pH 3.0, und einer Flußgeschwindigkeit von 1 ml/min eluiert. Die Bindeka­ pazität von Maus Anti-Human-IgM Silicagel (Porengröße 10 000 Å) wurde zu 0,75 mg IgM/ml Säulenvolumen be­ stimmt.

Claims (9)

1. Verfahren zur Abtrennung und Reinigung von Biopolymeren durch Affinitätschromatographie mit Hilfe von porösem Silicagel und daran oberflächlich kovalent gebundenen Affinitätsliganden, dadurch gekennzeichnet, daß Silica­ gele verwendet werden mit definierten engen Porengrößen­ bereichen, welche jeweils das fünf- bis zwangzigfache der Größe des zu reinigenden Materials aufweisen.
2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Silicagele verwendet werden mit definierten engen Po­ rengrößen im Bereich von 500 bis 10 000 Å.
3. Verfahren gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeich­ net, daß als Affinitätsliganden Antikörper verwendet werden.
4. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß das zu reinigende Material Protei­ ne, Glykoproteine und/oder Nukleinsäuren sind.
5. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß das zu reinigende Material Viren oder Vaccine sind.
6. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß das zu reinigende Material Zellor­ ganellen sind.
7. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß das zu reinigende Material prokaryo­ tische oder eukaryotische Zellen sind.
8. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß das zu reinigende Material Micel­ len, Vesikel, Chylomikronen, VLDL-, LDL- und/oder HDL- Lipoproteine sind.
9. Verwendung von porösem Silicagel definierter enger Po­ rengrößenbereiche mit daran oberflächlich kovalent ge­ bundenen Affinitätsliganden für die Affinitätschromato­ graphie von Biopolymeren mit Größen von 1/5 bis 1/20 der jeweiligen Porengröße des Silicagels.
DE19863627063 1986-08-09 1986-08-09 Verfahren zur abtrennung und reinigung von biopolymeren durch affinitaetschromatographie Granted DE3627063A1 (de)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19863627063 DE3627063A1 (de) 1986-08-09 1986-08-09 Verfahren zur abtrennung und reinigung von biopolymeren durch affinitaetschromatographie
EP87111312A EP0263934A1 (de) 1986-08-09 1987-08-05 Methode zur Trennung und Reinigung von Biopolymeren durch Affinitätschromatographie
JP62197991A JPS6372699A (ja) 1986-08-09 1987-08-07 アフィニティクロマトグラフィ−による生体高分子の分離・精製方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19863627063 DE3627063A1 (de) 1986-08-09 1986-08-09 Verfahren zur abtrennung und reinigung von biopolymeren durch affinitaetschromatographie

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE3627063A1 true DE3627063A1 (de) 1988-02-11
DE3627063C2 DE3627063C2 (de) 1991-08-29

Family

ID=6307069

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19863627063 Granted DE3627063A1 (de) 1986-08-09 1986-08-09 Verfahren zur abtrennung und reinigung von biopolymeren durch affinitaetschromatographie

Country Status (3)

Country Link
EP (1) EP0263934A1 (de)
JP (1) JPS6372699A (de)
DE (1) DE3627063A1 (de)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0320184A1 (de) * 1987-12-04 1989-06-14 Kuraray Co., Ltd. Mittel zur Entfernung des Virus der menschlichen Immunodefizienz und/oder der verwandten Zusammenstellungen
EP0371636A3 (de) * 1988-11-09 1990-07-18 Chembiomed, Ltd. Affinitätsträger für Hemoperfusion
DE3935098A1 (de) * 1989-10-21 1991-04-25 Macherey Nagel Gmbh & Co Kg Traegermaterial und seine verwendung in einem verfahren zur chromatographischen trennung von nukleinsaeuren
EP0434317A1 (de) * 1989-12-18 1991-06-26 Crosfield Limited Immunadsorbentien
WO1998023645A1 (en) * 1996-11-27 1998-06-04 Genentech, Inc. Affinity purification of polypeptide on protein a matrix
DE102005012639A1 (de) * 2005-03-18 2006-09-21 Süd-Chemie AG Verfahren zur Abtrennung von Biomolekülen aus flüssigen Medien
EP2198901A4 (de) * 2007-09-12 2011-05-11 Rei Medical Co Ltd Adsorptionssäule zur reinigung von körperflüssigkeiten

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5153166A (en) * 1988-08-18 1992-10-06 Trustees Of At Biochem Chromatographic stationary supports
GB8822180D0 (en) * 1988-09-21 1988-10-26 Glaverbel Separation of product of biological process from fluid medium
GB8902770D0 (en) * 1989-02-08 1989-03-30 Bioprocessing Ltd Improvements in or relating to supports for immunoaffinity separations
EP0403700B1 (de) * 1989-06-20 1992-08-05 J.T. Baker Inc. Polyethylenimin-Matrizen für Affinitätschromatographie
EP0514554A4 (en) * 1990-12-06 1993-05-05 Sumitomo Electric Industries, Ltd. Method of separating protein and apparatus therefor
US5660984A (en) * 1994-12-09 1997-08-26 Davis; Thomas E. DNA isolating apparatus comprising a non-porous DNA binding, anion exchange resin and methods of use thereof
JP2008279366A (ja) * 2007-05-10 2008-11-20 Kaneka Corp 多孔質担体、およびそれを用いた精製用吸着体、およびそれらの製造方法、およびそれらを用いた精製方法
SG149759A1 (en) * 2007-07-10 2009-02-27 Millipore Corp Media for affinity chromatography
CN104968403A (zh) 2012-09-17 2015-10-07 格雷斯公司 色谱介质和装置
PL3094390T3 (pl) 2014-01-16 2021-12-06 W.R. Grace & Co. - Conn. Nośniki do chromatografii powinowactwa i urządzenia do chromatografii
ES2929099T3 (es) 2014-05-02 2022-11-24 Grace W R & Co Material de soporte funcionalizado y métodos de fabricación y uso de material de soporte funcionalizado
WO2016163480A1 (ja) * 2015-04-10 2016-10-13 Ａｇｃエスアイテック株式会社 多孔質シリカおよびクロマトグラフィ担体
JP2018517559A (ja) 2015-06-05 2018-07-05 ダブリュー・アール・グレース・アンド・カンパニー−コーンＷ Ｒ Ｇｒａｃｅ ＆ Ｃｏ−Ｃｏｎｎ 吸着性バイオプロセス清澄化剤並びにその製造及び使用方法
US10525376B2 (en) * 2015-07-20 2020-01-07 W. L. Gore & Associates, Inc. Affinity chromatography devices
AU2017246152B2 (en) * 2016-04-08 2020-06-11 W.L. Gore & Associates, Inc. Affinity chromatography devices

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2403556A1 (fr) * 1977-09-19 1979-04-13 Merieux Inst Nouveau materiau poreux pour chromatographie, sa preparation et son application
DE3211309A1 (de) * 1982-03-26 1983-09-29 Metin Dipl.-Ing. 6100 Darmstadt Colpan Chromatographisches verfahren zur isolierung von makromolekuelen

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2403098A1 (fr) * 1977-09-19 1979-04-13 Merieux Inst Nouveau materiau capable de fixer de facon reversible des macromolecules biologiques, sa preparation et son application
US4415665A (en) * 1980-12-12 1983-11-15 Pharmacia Fine Chemicals Ab Method of covalently binding biologically active organic substances to polymeric substances

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2403556A1 (fr) * 1977-09-19 1979-04-13 Merieux Inst Nouveau materiau poreux pour chromatographie, sa preparation et son application
DE3211309A1 (de) * 1982-03-26 1983-09-29 Metin Dipl.-Ing. 6100 Darmstadt Colpan Chromatographisches verfahren zur isolierung von makromolekuelen

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RÖMPP: Chemie-Lexikon, 8. Aufl., 1979, S. 83-84 *

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0320184A1 (de) * 1987-12-04 1989-06-14 Kuraray Co., Ltd. Mittel zur Entfernung des Virus der menschlichen Immunodefizienz und/oder der verwandten Zusammenstellungen
EP0371636A3 (de) * 1988-11-09 1990-07-18 Chembiomed, Ltd. Affinitätsträger für Hemoperfusion
DE3935098A1 (de) * 1989-10-21 1991-04-25 Macherey Nagel Gmbh & Co Kg Traegermaterial und seine verwendung in einem verfahren zur chromatographischen trennung von nukleinsaeuren
US5948894A (en) * 1989-12-18 1999-09-07 Unilever Patent Holdings B.V. Immunoadsorbent reagents
EP0434317A1 (de) * 1989-12-18 1991-06-26 Crosfield Limited Immunadsorbentien
US6127526A (en) * 1996-11-27 2000-10-03 Genentech, Inc. Protein purification by Protein A chromatography
WO1998023645A1 (en) * 1996-11-27 1998-06-04 Genentech, Inc. Affinity purification of polypeptide on protein a matrix
US6797814B2 (en) 1996-11-27 2004-09-28 Genentech, Inc. Protein purification
EP1864999A1 (de) * 1996-11-27 2007-12-12 Genentech, Inc. Affinitätsreinigung von Polypeptid-Proteinen auf einer Matrix
EP1897890A1 (de) * 1996-11-27 2008-03-12 Genentech, Inc. Affinitätsreinigung von Polypeptid-Proteinen auf einer Protein A Matrix
EP1900751A1 (de) * 1996-11-27 2008-03-19 Genentech, Inc. Affinitätsreinigung von Polypeptid-Proteinen auf einer Matrix
DE102005012639A1 (de) * 2005-03-18 2006-09-21 Süd-Chemie AG Verfahren zur Abtrennung von Biomolekülen aus flüssigen Medien
EP2198901A4 (de) * 2007-09-12 2011-05-11 Rei Medical Co Ltd Adsorptionssäule zur reinigung von körperflüssigkeiten

Also Published As

Publication number Publication date
JPS6372699A (ja) 1988-04-02
EP0263934A1 (de) 1988-04-20
DE3627063C2 (de) 1991-08-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE3627063C2 (de)
EP2152405B1 (de) Mischpfropfpolymere für die kationenaustauschchromatographie
DE69830999T2 (de) Verfahren zur adsorption/trennung
DE2638764C3 (de) Verwendung eines Austauscherharzes zum Auftrennen von Proteinen
DE60217800T2 (de) Chromatographisches Sorptionsmittel aus Mineraloxidperlen deren Poren Hydroxylapatit enthalten
DE2840503A1 (de) Material zur reversiblen fixierung biologischer makromolekuele, verfahren zu seiner herstellung und seine verwendung
EP0154246B1 (de) Phasenträger für die Verteilungschromatographie von Makromolekülen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
EP0565978A1 (de) Aktivierte Trägermaterialien, ihre Herstellung und Verwendung
DE3130924A1 (de) Oberflaechenreiche systeme zur fixierung von nucleophile gruppen enthaltenden substraten
DE60121999T2 (de) Verfahren zur herstellung von zusammensetzungen mit geringer salzkonzentration
DE3717209C2 (de)
DE2650921A1 (de) Verfahren zur herstellung von mit liganden gekuppelten ultrafiltrationsmembranen
EP1132129B1 (de) Verfahren zum Herstellen eines Adsorbens zum Absenken der Konzentration von Fibrinogen und/oder Fibrin, Adsorbens und Verwendung des Adsorbens zur Herstellung eines Adsorbers
DE2323422A1 (de) Verfahren zur isolierung von biologisch aktiven verbindungen durch affinitaetschromatographie
EP0146107A3 (de) Verfahren zur nacheinanderfolgenden Herstellung von humanem Leukozyteninterferon und humanem Gamma-Interferon
DE2061009A1 (de) Verfahren zur Fixierung von Polymeren
WO1996031549A1 (de) Dendrimere pfropfpolymerisate
EP1457257A1 (de) Trennmaterial, Säule mit diesem Trennmaterial sowie deren Verwendung zur Reinigung von Proteinen
DE19735902A1 (de) Selektives Adsorbens für biologische Materialien
DE4005927A1 (de) Immobilisierung von proteinen an traegern
EP0008656A2 (de) Verfahren zur enzymatischen Umsetzung mittels trägergebundener Enzyme
EP1484106B1 (de) Fibrinogenadsorber III
EP0419446B1 (de) Komplex geeignet zur Durchführung eines Verfahrens zur Reinigung von pre-S-Hepatitis-B-Virus-Oberflächenantigen
JP2008012460A (ja) 糖側鎖型ポリマーを用いたレクチン吸着剤
CH410872A (de) Ionenaustauscher

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
D2 Grant after examination
8363 Opposition against the patent
8339 Ceased/non-payment of the annual fee