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DE3250073C2 - Antibiotic LL-C23024 prodn. from Actinomadura yumaense - Google Patents

Antibiotic LL-C23024 prodn. from Actinomadura yumaense

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Publication number
DE3250073C2
DE3250073C2 DE3250073A DE3250073A DE3250073C2 DE 3250073 C2 DE3250073 C2 DE 3250073C2 DE 3250073 A DE3250073 A DE 3250073A DE 3250073 A DE3250073 A DE 3250073A DE 3250073 C2 DE3250073 C2 DE 3250073C2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
antibiotic
antibiotics
beta
jota
mhz
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
DE3250073A
Other languages
German (de)
Inventor
Sidney Kantor
Jun Robert L Kennett
Irwin B Wood
John Henry Edward James Martin
David Paul Labeda
Joseph Jacob Goodman
Donald Bruce Borders
Ronald Thomas Testa
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Alpharma Luxembourg SARL
Original Assignee
American Cyanamid Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US06/313,849 external-priority patent/US4407946A/en
Application filed by American Cyanamid Co filed Critical American Cyanamid Co
Priority claimed from DE19823238316 external-priority patent/DE3238316A1/en
Application granted granted Critical
Publication of DE3250073C2 publication Critical patent/DE3250073C2/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Abstract

Biologically pure cultures of Actinomadura yumaense, esp.the strain NRRL 12515, are new. Spontaneous and induced mutants are included and, when grown on a nutrient medium, these cultures produce antibiotics LL-C23024 (I) alpha,beta and iota. (I) beta and iota, and their pharmaceutically acceptable salts are new. (I) beta, mol.wt.902, probably has the formula (I) (where one of R1 and R2 is methyl, the other H). (I) iota has mol.wt. 930 and formula C48.H82.O17.Spectral data for both cpds. are reproduced in the specification.(I) beta and iota are effective against Gram positive (but not negative) bacteria, so can be used as disinfectants. They are also useful as antiprotozal agents, esp. anticoccidiosis agents for poultry, esp. by incorporation into the feed or drinking water at 2.5-120 ppm. (I) alpha and beta are useful for controlling nematodes in animals and in the soil

Description

Die Erfindung betrifft den Gegenstand der Patentansprüche.The invention relates to the subject matter of the claims.

Die Erfindung betrifft insbesondere neue Verwendungen von antibiotischen LL-C23024α, β und jota, die durch Fermentierung des Mikroorganismus Actinomadura yumaense sp. nov. NRRL 12515 unter kontrollierten Bedingungen erhalten werden (nach Stammpatent DE 32 38 316 C2). The invention particularly relates to new uses of antibiotic LL-C23024α, β and jota produced by fermentation of the microorganism Actinomadura yumaense sp. nov. NRRL 12515 be obtained under controlled conditions (according to Parent patent DE 32 38 316 C2).  

Das Antibiotikum LL-C23024α hat folgende StrukturThe antibiotic LL-C23024α has the following structure

Das Antibiotikum LL-C23024β unterscheidet sich von bekannten Verbindungen aufgrund seiner physikalischen und chemischen Eigenschaften, u.a. durch seine Mikroanalyse, seine optische Rotation, sein IR-Spektrum, sein ¹³C-NMR-Spektrum und sein ¹H-NMR- Spektrum.Antibiotic LL-C23024β differs from known compounds due to its physical and chemical properties, et al through its microanalysis, its optical rotation, its IR spectrum, its 13 C-NMR spectrum and its 1 H-NMR Spectrum.

Das Antibiotikum LL-C23024β hat die folgende postulierte StrukturThe antibiotic LL-C23024β has the following postulated structure

wobei R₁ und R₂ verschieden sind und jeweils ausgewählt sind unter H und CH₃. wherein R₁ and R₂ are different and each selected are H and CH₃.  

Die obige, postulierte Struktur beruht auf der Elementaranalyse, der optischen Drehung, dem mittels Felddesorptionsmassenspektroskopie ermittelten Molekulargewicht, dem Schmelzpunkt, dem Infrarot(IR)-Spektrum, dem ¹³C-kernmagnetischen Resonanz(¹³C-NMR)-Spektrum und dem protonenmagnetischen Resonanz(¹H-NMR)-Spektrum. Die Ergebnisse dieser Untersuchungen sind in den Beispielen genauer angegeben und sind in den Zeichnungen dargestellt; es zeigen:The above postulated structure is based on elemental analysis, the optical rotation, by means of field desorption mass spectroscopy determined molecular weight, the melting point, the infrared (IR) spectrum, the 13 C nuclear magnetic resonance (13 C-NMR) spectrum and proton magnetic resonance (1 H-NMR) spectrum. The results These investigations are more accurate in the examples and are shown in the drawings; show it:

Fig. I das IR-Spektrum von LL-C23024β in KBr; Fig. I shows the IR spectrum of LL-C23024β in KBr;

Fig. II das ¹³C-NMR-Spektrum von LL-C23024β; 20 MHz in CDCl₃, TMS als interner Standard; Fig. II shows the 13 C-NMR spectrum of LL-C23024β; 20 MHz in CDCl₃, TMS as internal standard;

Fig. III das ¹H-NMR-Spektrum von LL-C23024β; 80 MHz in CDCl₃, TMS als interner Standard. Fig. III shows the 1 H-NMR spectrum of LL-C23024β; 80 MHz in CDCl₃, TMS as an internal standard.

C-NMR-Spektrum von LL-C23024β (TpM relativ zu TMS)C-NMR spectrum of LL-C23024β (TpM relative to TMS) Chemische Verschiebung (TpM)Chemical shift (TpM) Anzahl der KohlenstoffatomeNumber of carbon atoms 10,510.5 11 11,011.0 11 12,212.2 11 17,017.0 11 17,717.7 11 17,917.9 11 22,322.3 11 26,126.1 11 26,826.8 11 27,627.6 11 30,230.2 11 32,032.0 11 33,333.3 11 33,733.7 22 33,833.8 22 36,536.5 11 36,836.8 11 39,039.0 11 39,939.9 11 45,545.5 22 57,157.1 11 59,159.1 11 60,760.7 11 66,966.9 11 67,667.6 11 70,270.2 11 71,371.3 11 72,972.9 11 74,974.9 11 75,175.1 11 79,979.9 11 80,880.8 11 82,182.1 22 84,584.5 11 84,784.7 11 85,685.6 11 86,986.9 11 95,895.8 11 96,996.9 11 97,797.7 11 107,5107.5 11 179,2179.2 1 1 Gesamtzahl d. KohlenstoffatomeTotal number d. Carbon atoms 4646

LL-C23024 jota ist ein Polyäther-Antibiotikum mit äußerst starker Wirkung gegen Coccidia. Es ist mindestens um das 10fache potenter als die meisten anderen, bekannten Polyäther. Die Werte des Felddesorptionsmassenspektrums zeigen, daß es ein Molekulargewicht von 930 hat. Dieser Befund in Verbindung mit dem ¹³C-NMR-Spektrum gestattet die Voraussage einer möglichen Summenformel von C₄₈H₈₂O₁₇. LL-C23024 jota scheint vier Methoxygruppen aufzuweisen sowie den gleichen Zucker, der im Polyäther-Antibiotikum X-14868A (US-PS 4 278 663) beobachtet wurde, sowie eine Carboxylgruppe. Bei dem einzigen anderen Polyäther-Antibiotikum mit einem Molekulargewicht von 930, das bisher beschrieben wurde, handelt es sich um das Antibiotikum A28695B (Hedroxyseptamycin) [J. Antibiotics 33(2), 252 (1980)], welches sich hinsichtlich seiner strukturellen und biologischen Eigenschaften signifikant von dem erfindungsgemäßen Antibiotikum unterscheidet. Die obigen Beobachtungen beruhen auf der Elementaranalyse, der optischen Drehung, dem berechneten Molekulargewicht mittels Felddesorptionsmassenspektroskopie, dem IR-Spektrum, dem ¹³C- NMR-Spektrum und dem ¹H-NMR-Spektrum. Die Ergebnisse dieser Messungen sind in den Beispielen im Detail erläutert und in den Zeichnungen dargestellt; es zeigen:LL-C23024 jota is a polyether antibiotic with extremely strong action against coccidia. It is at least 10 times more potent than most, known Polyether. The values of the field desorption mass spectrum show that it has a molecular weight of 930. This Findings in connection with the 13 C NMR spectrum allowed the prediction of a possible molecular formula of C₄₈H₈₂O₁₇. LL-C23024 jota appears to have four methoxy groups as well as the same sugar found in the polyether antibiotic X-14868A (U.S. Patent 4,278,663), as well as U.S. Pat Carboxyl group. At the only other polyether antibiotic with a molecular weight of 930, so far described, it is the antibiotic A28695B (Hedroxyseptamycin) [J. Antibiotics 33 (2), 252 (1980)], which in terms of its structural and biological properties significantly different from the invention Antibiotic distinguishes. The above observations based on elemental analysis, the optical Rotation, the calculated molecular weight by field desorption mass spectroscopy, the IR spectrum, the ¹³C- NMR spectrum and the 1 H NMR spectrum. The results of this Measurements are explained in detail in the examples and shown in the drawings; show it:

Fig. IV das IR-Spektrum von LL-C23024 jota in KBr; Fig. IV shows the IR spectrum of LL-C23024 jota in KBr;

Fig. V das ¹H-NMR-Spektrum von LL-C23024 jota; 80 MHz in CDCl₃, TMS als interner Standard; Fig. V shows the 1 H NMR spectrum of LL-C23024 jota; 80 MHz in CDCl₃, TMS as internal standard;

Fig. VI das ¹³C-NMR-Spektrum von LL-C23024 jota; 20 MHz in CDCl₃, TMS als interner Standard; Fig. VI shows the 13 C-NMR spectrum of LL-C23024 jota; 20 MHz in CDCl₃, TMS as internal standard;

Fig. VII das ¹³C-NMR-Spektrum von LL-C23024 jota; (expandierte Skala: 0-50 TpM), 20 MHz in CDCl₃, TMS als interner Standard; Fig. VII shows the 13 C-NMR spectrum of LL-C23024 jota; (expanded scale: 0-50 ppm), 20 MHz in CDCl₃, TMS as internal standard;

Fig. VIII das ¹³C-NMR-Spektrum von LL-C23024 jota; (expandierte Skala: 50-110 TpM), 20 MHz in CDCl₃, TMS als interner Standard. Figure VIII shows the 13 C-NMR spectrum of LL-C23024 jota; (expanded scale: 50-110 ppm), 20 MHz in CDCl₃, TMS as an internal standard.

Das ¹³C-NMR-Spektrum von LL-C23024 jota wurde in deuteriertem Chloroform (CDCl₃) bei einer Feldstärke von 20 MHz erhalten. Die Signale mit ihren relativen chemischen Verschiebungen, in Teilen pro Million (TpM), relativ zu Tetramethylsilan (TMS) und die angenommene Zahl von Kohlenstoffatomen pro Signal sind in Tabelle II zusammengestellt. Für Chloroform wurden Signale bei 75,4, 77,0 und 78,6 beobachtet.The 13 C-NMR spectrum of LL-C23024 jota was deuterated in Chloroform (CDCl₃) at a field strength of 20 MHz receive. The signals with their relative chemical shifts, in parts per million (ppm), relative to Tetramethylsilane (TMS) and the assumed number of carbon atoms per signal are listed in Table II. For chloroform, signals were at 75.4, 77.0 and 78.6 observed.

Tabelle II Table II

Bei den Antibiotika LL-C23024α, β und jota handelt es sich um organische Carbonsäuren. Sie sind somit fähig, Salze mit nichttoxischen, pharmazeutisch akzeptablen Kationen zu bilden. Es können daher Salze gebildet werden, indem man das Antibiotikum in Form der Freien Säure mit stöchiometrischen Mengen von Kationen, zweckentsprechend in einem neutralen Lösungsmittel, vermischt. Als Kationen kommen dabei beispielsweise Natrium, Kalium, Calcium, Magnesium und Ammonium in Frage sowie organische Aminkationen, wie Tri-(niederalkyl)-amin (z. B. Triäthylamin, Triäthanolamin) und Procain. Die kationischen Salze des Antibiotikums LL-C23024β sind im allgemeinen kristalline Feststoffe, relativ unlöslich in Wasser und löslich in den meisten herkömmlichen, organischen Lösungsmitteln, wie Methanol, Äthylacetat, Aceton, Chloroform, Heptan, Äther und Benzol.The antibiotics LL-C23024α, β and jota are to organic carboxylic acids. They are thus able Salts with non-toxic, pharmaceutically acceptable To form cations. It is therefore possible to form salts, by using the antibiotic in the form of the free acid stoichiometric amounts of cations, appropriately in a neutral solvent, mixed. As cations For example, sodium, potassium, calcium, magnesium and ammonium in question as well as organic amine cations, such as tri (lower alkyl) amine (eg triethylamine, triethanolamine) and procaine. The cationic salts of the antibiotic LL-C23024β are generally crystalline Solids, relatively insoluble in water and soluble in most common organic solvents, such as methanol, ethyl acetate, acetone, chloroform, heptane, Ether and benzene.

Das Antibiotikum in Form der freien Säure ist ihren pharmazeutisch annehmbaren, nichttoxischen Salzen äquivalent.The antibiotic in the form of the free acid is their pharmaceutical acceptable, non-toxic salts.

Die Antibiotika LL-C23024β und jota sind in vitro gegen grampositive Bakterien aktiv, wenn sie mittels des Standard-Agarverdünnungsverfahrens untersucht werden. Die als minimale Hemmkonzentration (MIC) in mcg/ml ausgedrückten Ergebnisse sind in den Tabellen III und IV zusammengestellt. Die Antibiotika LL-C23024β und jota sind bei Konzentrationen von 256 mcg/ml oder weniger nicht wirksam gegenüber gramnegativen Organismen.
The antibiotics LL-C23024β and jota are active in vitro against Gram-positive bacteria when examined by the standard agar dilution method. The results expressed as minimum inhibitory concentration (MIC) in mcg / ml are summarized in Tables III and IV. The antibiotics LL-C23024β and jota are not effective against Gram-negative organisms at concentrations of 256 mcg / ml or less.

in vitro antibakterielle Aktivität von LL-C23024βin vitro antibacterial activity of LL-C23024β Organismusorganism MIC (mcg/ml)MIC (mcg / ml) Staphylococcus aureus SmithStaphylococcus aureus Smith 6464 Staphylococcus aureus SSC 80-11Staphylococcus aureus SSC 80-11 6464 Staphylococcus aureus SSC 80-32Staphylococcus aureus SSC 80-32 6464 Staphylococcus aureus SSC 80-38Staphylococcus aureus SSC 80-38 6464 Staphylococcus aureus LL-14Staphylococcus aureus LL-14 6464 Staphylococcus aureus LL-45Staphylococcus aureus LL-45 6464 Staphylococcus aureus LL-27Staphylococcus aureus LL-27 128128 Staphylococcus aureus ATCC 25923Staphylococcus aureus ATCC 25923 6464 Streptococcus pyogenes C203Streptococcus pyogenes C203 11 Streptococcus β-hemolytic Keller T623Streptococcus β-hemolytic cellar T623 88th Streptococcus pneumoniae 78-1Streptococcus pneumoniae 78-1 88th Enterococcus SSC-80-62Enterococcus SSC-80-62 6464 Enterococcus SSC-80-63Enterococcus SSC-80-63 128128

in vitro antibakterielle Aktivität von LL-C23024 jotain vitro antibacterial activity of LL-C23024 jota Organismusorganism MIC (mcg/ml)MIC (mcg / ml) Enterococcus OSU 75-1Enterococcus OSU 75-1 11 Enterococcus SM 77-15Enterococcus SM 77-15 11 Staphylococcus aureus SSC 79-18Staphylococcus aureus SSC 79-18 11 Staphylococcus aureus FU 79-19-2Staphylococcus aureus FU 79-19-2 22 Micrococcus lutea PCI 1001Micrococcus lutea PCI 1001 11 Staphylococcus aureus SmithStaphylococcus aureus Smith 0,50.5 Staphylococcus aureus ATCC 25923Staphylococcus aureus ATCC 25923 0,50.5

Wie aus den obigen Daten hervorgeht, inhibieren die Antibiotika LL-C23024α, β und jota das Wachstum bestimmter grampositiver Bakterien und sind somit als topische oder Oberflächen-Antiseptika in Waschlösungen für die Haut, für Ausrüstungsgegenstände, für Wände, Fußböden und dergl. brauchbar.As can be seen from the above data, the antibiotics inhibit LL-C23024α, β and jota the growth of certain Gram-positive bacteria and are thus considered topical or Surface antiseptics in washing solutions for the skin, for equipment, for walls, floors and the like useful.

Es wurde darüber hinaus festgestellt, daß die antibakteriellen Mittel LL-C23024α, β und jota in vivo wirksam sind, und zwar als Anticoccidia-Mittel bei Geflügel. Das wird durch die nachfolgenden Tests erläutert.It has also been found that the antibacterial Agent LL-C23024α, β and jota effective in vivo as anticoccidial agents in poultry. The is explained by the following tests.

2 Tage vor der Inokulation wird mit Medikamenten behandeltes Futter, welches die Wirkstoffe mit unterschiedlichen Dosisniveaus enthält, verschiedenen Gruppen von 1 Tag alten Testküken angeboten. Das während des gesamten Tests verwendete Geflügelfutter ist folgendermaßen hergestellt worden:2 days before inoculation is treated with medication Feed containing the active ingredients with different Dose levels included, different groups of 1 day old Test chicks offered. That during the entire test used poultry feed is prepared as follows been:

%% Vitamin-Aminosäure-PrämixVitamin-amino acid premix 0,50.5 Spurenmineralientrace minerals 0,10.1 Natriumchloridsodium chloride 0,30.3 Dicalciumphosphatdicalcium 1,21.2 gemahlener Kalksteinground limestone 0,50.5 stabilisiertes Fettstabilized fat 4,04.0 getrocknetes Alfalfa, 17% Proteindried alfalfa, 17% protein 2,02.0 Maisklebermehl, 41% ProteinCorn gluten meal, 41% protein 5,05.0 Menhadenfischmehl, 60% ProteinMenhadenfish flour, 60% protein 5,05.0 Sojabohnenölmehl, 44% ProteinSoybean meal, 44% protein 30,030.0 gemahlener, gelber Mais, fein, zum Auffüllen aufground, yellow corn, fine, to fill up 100100

Das in der obigen Futterzusammensetzung verwendete Vitamin- Aminosäure-Prämix ist aus der folgenden Formulierung hergestellt. Die Quantitätsangaben beziehen sich dabei auf Einheiten/kg der fertigen Futterzusammensetzung.
The vitamin amino acid premix used in the above feed composition is made from the following formulation. The quantity data refer to units / kg of the finished feed composition.

Butyliertes Hydroxytoluol|125,0 mgButylated hydroxytoluene | 125.0 mg dl-Methionindl-methionine 500,0 mg500.0 mg Vitamin AVitamin A 3300,0 IE3300.0 IU Vitamin D₃Vitamin D₃ 1100,0 ICE1100.0 ICE Riboflavinriboflavin 4,4 mg4.4 mg Vitamin EVitamin E 2,2 IE2.2 IU Niacinniacin 27,5 mg27.5 mg Panthothensäurepantothenic 8,8 mg8.8 mg Cholinchloridcholine chloride 500,0 mg500.0 mg Folsäurefolic acid 1,43 mg1.43 mg Menadion-natriumbisulfatMenadione sodium 1,1 mg1.1 mg Vitamin B₁₂Vitamin B₁₂ 11,0 mcg11.0 mcg gemahlener, gelber Mais, fein, zum Auffüllen aufground, yellow corn, fine, to fill up 5,0 g5.0 g

Die Testküken werden dann inokuliert, und zwar durch direkte Inokulation in den Kropf jedes Kükens unter Verwendung eines gemischten Inokulums von 5000 sporenbildenden Oocyten von Eimeria acervulina und einer ausreichenden Anzahl Oocyten von Eimeria tenella zur Erzeugung einer 85 bis 100% Mortalität bei nichtbehandelten Kontrolltieren. Die Küken haben während der gesamten Testdauer freien Zugang zu Futter und Wasser. 7 Tage nach der Inokulation werden die Tests abgebrochen. Die Vögel werden gewogen, getötet und ihr Intestinaltrakt wird hinsichtlich Läsionen untersucht. Die in den folgenden Tabellen V und VI zusammengestellten Ergebnisse zeigen, daß bei den infizierten Küken eine verbesserte Überlebensrate erreicht wird, wenn ihrem Futter 10 TpM oder mehr der Antibiotika LL-C23024β oder jota zugesetzt sind. Die Ergebnisse zeigen ebenso eine signifikante Unterdrückung von intestinalen Läsionen, die durch Eimeria tenella und Eimeria acervulina verursacht sind. The test chicks are then inoculated by direct inoculation into the goiter of each chick using a mixed inoculum of 5000 spore-forming oocytes from Eimeria acervulina and a sufficient number of Eimeria tenella oocytes to produce 85 to 100% mortality in untreated control animals. The chicks have free access to food and water throughout the duration of the test. 7 days after inoculation, the tests are discontinued. The birds are weighed, killed and their intestinal tract is examined for lesions. The results summarized in the following Tables V and VI show that in the infected chicks improved survival is achieved when 10 ppm or more of the antibiotics LL-C23024β or jota are added to their diet. The results also show a significant suppression of intestinal lesions caused by Eimeria tenella and Eimeria acervulina.

Durch die folgenden Tests wird die nematocide Aktivität demonstriert.By the following tests becomes the nematocide activity demonstrated.

Beispiel AExample A Bewertung von Testzusammensetzungen hinsichtlich der nematociden Aktivität unter Verwendung der freilebenden, hermaphroditischen, mikrobivorösen Nematode Caenorhabditis elegans IIEvaluation of test compositions in terms of nematocid activity using the free-living, hermaphroditic, microbivorous nematode Caenorhabditis elegans II

Bei den folgenden Tests werden C. elegans zur Bestimmung der nematociden Aktivität der Fermentationsbrühe und der geernteten Maische verwendet. Dieser Organismus wird ebenfalls zur Bewertung von LL-C23024α und LL-C23024β verwendet, um deren nematocide Aktivität zu bestimmen.C. elegans will be used in the following tests the nematocidal activity of the fermentation broth and the harvested mash used. This organism is also used to evaluate LL-C23024α and LL-C23024β used to increase its nematocidal activity determine.

Bei diesen Tests handelt es sich bei der Fermentationsbrühe um die bei der Fermentation erhaltene Mischung von Flüssigkeit und Feststoffen, die entnommen wird, bevor die Feststoffe, d. h. die geerntete Maische, von der Flüssigkeit abgetrennt wird. Bei der geernteten Maische handelt es sich um die Feststoffe, die nach der Abtrennung zurückbleiben.These tests are the fermentation broth around the mixture obtained from the fermentation of Liquid and solids, which is removed before the Solids, d. H. the harvested mash, from the liquid is separated. When the harvested mash is These are the solids that remain after separation.

Zur Bewertung der geernteten Maische werden die Feststoffe der geernteten Maische in destilliertem Wasser im Verhältnis 1 : 1 dispergiert. Die Fermentationsbrühe wird so, wie sie ist, verwendet und enthält sowohl Flüssigkeit als auch Feststoffe.To evaluate the harvested mash become the solids the harvested mash in distilled water in proportion 1: 1 dispersed. The fermentation broth will be so, as it is, uses and contains both liquid as also solids.

Bei den vorliegenden Bewertungen wird C. elegans in einem C. briggsae Maintenance Medium aufbewahrt. Das Maintenance- Medium ist im Handel erhältlich und weist die folgende Zusammensetzung auf.
In the present evaluations C. elegans is stored in a C. briggsae maintenance medium. The maintenance medium is commercially available and has the following composition.

C. briggsae Maintenance Medium(1) C. briggsae Maintenance Medium (1) Komponentecomponent mg/lmg / l Anorganische SalzeInorganic salts CaCl₂ · 2 H₂OCaCl₂ · 2 H₂O 220,50220.50 CuCl₂ · 2 H₂OCuCl₂ · 2 H₂O 6,506.50 Fe(NH₄)₂(SO₄)₂ · 6 H₂OFe (NH₄) ₂ (SO₄) ₂ · 6 H₂O 58,8058,80 KH₂PO₄KH₂PO₄ 1225,501,225.50 KOHKOH (a)(A) MnCl₂ · 4 H₂OMnCl₂ · 4 H₂O 22,2022.20 ZnCl₂ZnCl₂ 10,2010.20 Andere Komponenten @Other components @ N-AcetylenglucosaminN-Acetylenglucosamin 15,0015.00 Adenosin-3′-(2′)-phosphorsäure · H₂OAdenosine 3 '- (2') - phosphoric acid · H₂O 365,00365.00 Cytidin-3′-(2′)-phosphorsäureCytidine 3 '- (2') - phosphoric acid 323,00323.00 D-GlucoseD-glucose 1315,001,315.00 Glutathion, reduziertGlutathione, reduced 204,00204.00 Guanosin-3′-(2′)-PO₄Na₂ · H₂OGuanosine 3 '- (2') - PO₄Na₂ · H₂O 363,00363.00 Magnesiumcitrat · 5 H₂O (dibasisch)Magnesium citrate · 5 H₂O (dibasic) 915,00915.00 Kaliumcitrat · H₂OPotassium citrate · H₂O 486,00486.00 DL-ThioktsäureDL Thioktsäure 3,753.75 Thyminthymine 126,00126.00 Uridin-3′-(2′)-phosphorsäureUridine-3 '- (2') - phosphoric acid 324,00324.00 Aminosäuren @amino acids @ L-AlaninL-alanine 1395,001,395.00 L-ArgininL-arginine 975,00975.00 L-AsparaginsäureL-aspartic acid 1620,001,620.00 L-Cystein-HCl · H₂OL-cysteine HCl · H₂O 28,0028,00 Gl-Glutamat (Na) · H₂OGl-glutamate (Na) .H₂O 550,00550.00 L-GlutaminL-glutamine 1463,001,463.00 Glycinglycine 722,00722.00 L-HistidinL-histidine 283,00283.00 L-IsoleucinL-isoleucine 861,00861.00 L-LeucinL-leucine 1439,001,439.00 L-Lysin-HClL-lysine HCl 1283,001,283.00 L-MethioninL-methionine 389,00 389.00   L-PhenylalaninL-phenylalanine 803,00803.00 L-ProlinL-proline 653,00653.00 L-SerinL-serine 788,00788.00 L-ThreoninL-threonine 717,00717.00 L-TryptophanL-tryptophan 184,00184.00 L-TyrosinL-tyrosine 272,00272.00 L-ValinL-valine 1020,001,020.00 Vitamine @vitamins @ p-Aminobenzoesäurep-aminobenzoic acid 7,507.50 Biotinbiotin 3,753.75 Cholindihydrogencitratcholine dihydrogen citrate 88,5088,50 Cyanocobalamin (B¹²)Cyanocobalamin (B¹²) 3,753.75 Folinat (Ca)Folinate (Ca) 3,753.75 Myo-inositMyo-inositol 64,5064,50 Niacinniacin 7,507.50 Pantethein (Pantethine)Pantheine (pantethine) 3,753.75 Pantothenat (Ca)Pantothenate (Ca) 7,507.50 PterolyglutaminsäurePterolyglutaminsäure 7,507.50 Pyridoxalphosphatpyridoxal phosphate 3,753.75 Pyridoxamin 2 HClPyridoxamine 2 HCl 3,753.75 Pyridoxin HClPyridoxine HCl 7,507.50 Riboflavin-5′-PO₄(Na) · 2 H₂ORiboflavin-5'-PO₄ (Na) · 2 H₂O 7,507.50 Thiamin HClThiamine HCl 7,507.50

Literatur:
(1) E.L. Hansen, Proc. Soc. Exp. Bio. & Med. 121, 30-393 (1966);
Bemerkungen:
(a) So viel, wie nötig, um den pH auf 5,9 ± 0,1 einzustellen.Literature:
(1) EL Hansen, Proc. Soc. Exp. Bio. & Med. 121, 30-393 (1966);
Remarks:
(a) As much as necessary to adjust the pH to 5.9 ± 0.1.

Für die Bewertungen wird eine Lochplatte mit einer Reihe von kleineren Löchern verwendet. 25 ml der Fermentationsbrühe, der 1 : 1 Wasser/geerntete Maische-Suspension oder einer wäßrigen Acetonlösung von LL-C23024α oder LL-C23024β, enthaltend 31,25 bis 500 TpM der Testverbindung, werden unter aseptischen Bedingungen in gesonderten Schächten deponiert. Jedem Schacht werden dann 25 ml des C.elegans Maintenance Mediums, enthaltend 10 bis 20 adulte Würmer plus Larven verschiedenen Alters plus Eier, zugesetzt. Die Platten werden anschließend in einen Abzug placiert und 48 h nach der Inokulation untersucht, um die Geschwindigkeit und den Grad der nematociden Aktivität der Testzusammensetzungen zu beurteilen. Die erhaltenen Daten sind im folgenden aufgeführt. In den Fällen, in denen bei der Fermentationsbrühe eine Aktivität beobachtet wird, wird die Brühe weiter verdünnt, um ein 1 : 4 Brühe/C.elegans-Verhältnis zu schaffen.For the reviews is a perforated plate with a number used by smaller holes. 25 ml of the fermentation broth, the 1: 1 water / harvested mash suspension or an aqueous acetone solution of LL-C23024α or LL-C23024β, containing 31.25 to 500 ppm of the test compound  under aseptic conditions in separate manholes landfilled. Each well is then 25 ml of C.elegans Maintenance medium containing 10 to 20 adult worms plus larvae of different ages plus eggs, added. The plates are then placed in a fume hood and 48 h after inoculation examined the speed and the degree of nematocidal activity of the test compositions to judge. The data obtained are listed below. In cases where at the Fermentation broth an activity is observed Dilute the broth further to a 1: 4 broth / C.elegans ratio to accomplish.

Tabelle VII Table VII

Die bei diesen Bewertungen verwendete Aktivitätseinteilung ist wie folgt:The activity classification used in these ratings is as follows:

Aktivitätslegende
8 = keine Bewegungsfähigkeit (scheinbar tot)
7 = merklich reduzierte Bewegungsfähigkeit
6 = verringerte Bewegungsfähigkeit
0 = normale Bewegungsfähigkeit der Species activity Legend
8 = no mobility (apparently dead)
7 = noticeably reduced mobility
6 = reduced mobility
0 = normal motility of the species

Beispiel BExample B Bewertung von LL-C23024α als nematocides Mittel gegen infektiöse Larven++ von WiederkäuernematodenEvaluation of LL-C23024α as a nematocidal agent against infectious larvae ++ of ruminant nematodes

Nach dem oben beschriebenen Verfahren wird die Bewertung von LL-C23024α als nematocides Mittel gegen infektiöse Larven von Wiederkäuernematoden durchgeführt, wobei folgende Nematodenspecies anstelle von C.elegans verwendet wurden: Haemonhmus contortus, Ostertagia circumcincta, Trichostrongylus axei, T. colubriformis; sowie der Essigälchenwurm, Turbatrix aceti. Die erhaltenen Daten sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt.
++ Larven im dritten Häutungsstadium.According to the method described above, the evaluation of LL-C23024α as a nematocidal agent against infectious larvae of ruminant nematodes is carried out using the following nematode species instead of C.elegans: Haemonhmus contortus, Ostertagia circumcincta, Trichostrongylus axei, T. colubriformis; and the vinegar worm, Turbatrix aceti. The data obtained are summarized in the following table.
++ Larvae in the third molting stage.

In den folgenden Tabellen bezieht sich die Aktivitätseinteilung auf die zuvor aufgeführte Aktivitätslegende. In the following tables, the activity classification refers to the activity legend listed above.

Beispiel CExample C Bewertung der nematociden Aktivität des Antibiotikums LL-C23024α gegen Nematospiroides dubius und Aspicularis tetraptera bei MäusenEvaluation of the nematocidal activity of the antibiotic LL-C23024α against Nematospiroides dubius and Aspicularis tetraptera in mice

Bei den folgenden Tests werden weibliche, weiße Swiss- Webstermäuse mit Nematospiroides dubius und Aspicularis tetraptera infiziert und 3 Wochen gehalten, um die Infektionen sich entwickeln zu lassen.In the following tests, female, white Swiss Webstermäuse with Nematospiroides dubius and Aspicularis tetraptera infected and kept for 3 weeks to the infections to be developed.

Nach diesem Zeitraum des Haltens werden die Mäuse nach dem Zufallsprinzip in Gruppen von vier aufgeteilt. Die Gruppen werden in getrennte Käfige placiert. Anschließend wird ein mit Medikamenten behandeltes Futter angeboten, welches von etwa 31,25 TpM bis 4000 TpM der Testverbindung enthält. Das Futter wird den Mäusen eine Woche lang ad libitum angeboten. Wasser wird ebenfalls ad libitum während der Testperiode zur Verfügung gestellt. Während der Behandlungsperiode werden die Ausscheidungen der Mäuse untersucht, um zu bestimmen, ob Würmer ausgeschieden werden. Bei allen behandelten Gruppen wurde festgestellt, daß sie Würmer ausscheiden. Dadurch wird eine nematocide Aktivität bei allen Konzentrationen der Verbindung gegenüber beiden Nematoden angezeigt. Am Ende der einwöchigen Behandlung mit medikamentiertem Futter werden die Mäuse getötet und die Inhalte der intestinalen Trakte der Mäuse werden auf Würmer untersucht. Die erhaltenen Werte sind im folgenden als prozentuale Verringerung von Würmern, verglichen mit infizierten, nicht-medikamentierten Kontrolltieren, ausgedrückt.After this period of holding, the mice will become weaker randomly divided into groups of four. The Groups are placed in separate cages. Subsequently will be offered a medicated feed, which is from about 31.25 ppm to 4000 ppm of the test compound contains. The feed is given to the mice for a week offered ad libitum. Water also gets ad libitum provided during the test period. While The treatment period will be the excretions of the mice examined to determine if worms excreted become. All treated groups were found to that they excrete worms. This will be a nematocide Activity at all concentrations of the compound displayed in both nematodes. At the end of the week Treatment with medicated feed will be the mice killed and the contents of the intestinal tracts of the mice are examined for worms. The values obtained are in the following as a percentage reduction of worms, compared to infected, unmedicated control animals, expressed.

Bei diesen Tests wurden rohe Fermentationsbrühen bewertet, welche vor Ernte der Maische erhalten wurden und welche 1000 bis 4000 TpM des nematociden Antibiotikums enthielten. Das Mäusefutter, welches mit 31,25 bis 500 TpM LL- C23024α, gelöst in einem Aceton/Wasser-Gemisch (1 : 1), behandelt war, wurde ebenfalls bewertet. In these tests, raw fermentation broths were evaluated which were obtained before harvest of the mash and which 1000 to 4000 ppm of the nematocidal antibiotic contained. The mouse food, which with 31.25 to 500 ppm C23024α, dissolved in an acetone / water mixture (1: 1), treated was, was also rated.  

Claims (3)

1. Verwendung der Antibiotika LL-C23024α, β und jota zur Bekämpfung von Coccidiosis-Infektionen bei Geflügel, wobei das Antibiotikum LL-C23024α folgende Struktur aufweist: das Antibiotikum LL-C23024 beta durch folgende Parameter definiert ist:(a) eine optische Drehung [α] von +32° ± 2
(0,495%, Methanol) und [α] von +46° ± 2
(0,440%, Chloroform);
(b) eine Elementaranalyse (%) von C 61,55; H 8,79;
(c) einen Schmelzpunkt von 171 bis 173°C;
(d) ein Molekulargewicht gemäß Felddesorptionsmassenspektroskopie von 902;
(e) ein ¹³C-kernmagnetisches Resonanzspektrum in deuteriertem Chloroform bei 80 MHz, welches dem in Fig. II gezeigten entspricht;
(f) ein Infrarot-Absorptionsspektrum in KBr, das dem in Fig. I gezeigten entspricht; und
(g) ein Protonen-kernmagnetisches Resonanzspektrum in deuteriertem Chloroform bei 20 MHz, welches dem in Fig. III gezeigten entspricht,
das Antibiotikum LL-C23024 jota durch folgende Parameter definiert ist:(a) eine optische Drehung [α] = +27° (C 0,724, Methanol);
(b) eine Elementaranalyse (%) von C 61,69; H 8,84;
(c) ein Molekulargewicht gemäß Felddesorptionsmassenspektroskopie von 930;
(d) ein ¹³C-kernmagnetisches Resonanzspektrum in deuteriertem Chloroform bei 80 MHz, welches dem in den Fig. VI, VII und VIII gezeigten entspricht;
(e) ein Infrarot-Adsorptionsspektrum in KBr, welches dem in Fig. IV gezeigten entspricht; und
(f) ein Protonen-kernmagnetisches Resonanzspektrum in deuteriertem Chloroform bei 20 MHz, welches dem in Fig. V gezeigten entspricht,
und wobei die Fig. I bis VIII Bestandteil dieses Anspruchs sind.1. Use of the antibiotics LL-C23024α, β and jota for combating coccidiosis infections in poultry, wherein the antibiotic LL-C23024α has the structure: the antibiotic LL-C23024 beta is defined by the following parameters: (a) an optical rotation [α] of + 32 ° ± 2
(0.495%, methanol) and [α] of + 46 ° ± 2
(0.440%, chloroform);
(b) an elemental analysis (%) of C 61.55; H 8,79;
(c) a melting point of 171 to 173 ° C;
(d) a molecular weight according to field desorption mass spectroscopy of 902;
(e) a 13 C nuclear magnetic resonance spectrum in deuterated chloroform at 80 MHz which corresponds to that shown in Fig. II;
(f) an infrared absorption spectrum in KBr corresponding to that shown in Fig. 1; and
(g) a proton nuclear magnetic resonance spectrum in deuterated chloroform at 20 MHz, which corresponds to that shown in Fig. III,
the antibiotic LL-C23024 jota is defined by the following parameters: (a) an optical rotation [α] = + 27 ° (C 0.724, methanol);
(b) an elemental analysis (%) of C 61.69; H, 8.84;
(c) a molecular weight according to field desorption mass spectroscopy of 930;
(d) a 13 C nuclear magnetic resonance spectrum in deuterated chloroform at 80 MHz which corresponds to that shown in Figures VI, VII and VIII;
(e) an infrared absorption spectrum in KBr corresponding to that shown in Fig. IV; and
(f) a proton nuclear magnetic resonance spectrum in deuterated chloroform at 20 MHz, which corresponds to that shown in Fig. V,
and wherein Figs. I to VIII are part of this claim. 2. Verwendung der in Anspruch 1 definierten Antibiotika LL-C23024α, LL-C23024β oder eines pharmaceutisch akzeptablen Salzes der Verbindungen, Mischungen der Verbindungen oder Salze oder Fermentationsbrühen oder Festkörper der geernteten Maische, aus der die Antibiotika erhalten werden, zur Bekämpfung von Nematoden bei warmblütigen Tieren.2. Use of the antibiotics defined in claim 1 LL-C23024α, LL-C23024β or a pharmaceutically acceptable Salt of the compounds, mixtures of the compounds or salts or fermentation broths or solids of the harvested mash, from which the antibiotics are obtained to combat Nematodes in warm-blooded animals. 3. Verwendung der Antibiotika LL-C23024β, LL-C23024 jota gemäß Anspruch 1 gemeinsam mit einem eßbaren Träger, wobei die Konzentration des Antibiotikums 0,000025 bis etwa 0,06 Gew.-% beträgt.3. Use of the antibiotics LL-C23024β, LL-C23024 jota according to claim 1 together with an edible carrier, the concentration of the Antibiotics 0.000025 to about 0.06 wt .-% is.
DE3250073A 1981-10-22 1982-10-15 Antibiotic LL-C23024 prodn. from Actinomadura yumaense Expired - Lifetime DE3250073C2 (en)

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Non-Patent Citations (1)

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NICHTS ERMITTELT *

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