DE2952815C1 - Verfahren zur Konservierung von immobilisierten Eiweissstoffen - Google Patents
Verfahren zur Konservierung von immobilisierten EiweissstoffenInfo
- Publication number
- DE2952815C1 DE2952815C1 DE19792952815 DE2952815A DE2952815C1 DE 2952815 C1 DE2952815 C1 DE 2952815C1 DE 19792952815 DE19792952815 DE 19792952815 DE 2952815 A DE2952815 A DE 2952815A DE 2952815 C1 DE2952815 C1 DE 2952815C1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- activity
- filler
- immobilized
- preservation
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 238000004321 preservation Methods 0.000 title claims description 24
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 title claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 35
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 26
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 46
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 34
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 4
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 4
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 4
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 108010027350 protosubtilin Proteins 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Crystals, And After-Treatments Of Crystals (AREA)
Description
Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Konservierung von immobilisierten Eiweißstoffen
durch lyophile Trocknung ihrer Gusperrstrom in Wasser oder in einer Pufferlösung.
In der Festphasenbiochemie werden die Fragen behandelt, die mit der Ausnutzung funktioneller Eigenschaften
der Eiweißstoffe unter Bedingungen der heterogenen Systeme durch Überführung der Eiweißstoffe
in den unlöslichen Zustand, hauptsächlich durch Bildung von beständigen Bindungen mit unlöslichen (festen)
Trägern, verbunden sind. Die Immobilisierung (die Überführung in den unlöslichen Zustand) der Eiweißstoffe
ermöglicht, diese als heterogne Katalysatoren (Fermenttechnologie), biospezifische Sorptionsmittel
(Affinationschromatographie) und für die immunochemische Analyse (immobilisierte Antikörper und Antigene)
zu verwenden. Für die praktische Anwendung der immobilisierten Proteine spielt die Frage ihrer Aufbewahrung
und des Transports ohne wesentlichen Verlust an Aktivität vom Zeitpunkt der Herstellung bis zum
Zeitpunkt der Verwendung eine wichtige Rolle.
Verfahren zur Konservierung können bei der Herstellung von Präparaten von immobilisierten Fermenten,
Inhibitoren, Immunoglobulinen, zur Bereitstellung von Affinationssorptionsmitteln, Präparaten für eine
schnelle und bequeme biochemische Analyse eine breite Verwendung finden und sind daher für die chemische,
medizinische, mikrobiologische Industrie sowie in der medizinischen und Laborpraxis von hoher Bedeutung.
Die lyophile Trocknung ist bekannt und wird in der Industrie- und Laborpraxis der Eiweißstoffe bereits
breit angewandt; sie ermöglicht es, in den meisten Fällen
die negativen Eigenschaften und die funktioneile Aktivität von Eiweißstoffen voll zu erhalten. Wenn sich
bei der lyophilen Trocknung die Aktivität freier Eiweißstoffe teilweise oder vollständig verliert, wurden bereits
Verfahren zur Stabilisierung durch Zugabe verschiedener inerter fester löslicher Füllmittel in die Lösung vor
der Trocknung vorgeschlagen (siehe beispielsweise die US-Patentschrift 31 33 001).
Immobilisierte Eiweißstoffe unterscheiden sich von den gemäß der US-PS 31 33 001 eingesetzten freien Eiweißstoffen
in einer Reihe von Eigenschaften. So sind sie unlöslich und können nur in Suspensionsform erhalten
werden, und die Eigenschaften dieser immobilisierten Eiweißstoffe unterscheiden sich von den Ausgangs-Eiweißstoffen
häufig in quantitativer wie auch in qualitativer Hinsicht sehr stark. Während bei löslichen Eiweißstoffen
in zahlreichen Fällen eine lyophile Trocknung ohne Aktivitätsverlust möglich ist, wurden bei immobilisierten
Eiweißstoffen bei Versuchen einer lyophilen Trocknung in der Regel drastische Aktivitätsverluste
beobachtet. Die lyophile Trocknung immobilisierter Eiweißstoffe zu Konservierungszwecken und Transportzwecken
wurde daher in der Fachliteratur bis in die jüngste Zeit als ungeeignete Maßnahme angesehen.
Immobilisierte Proteine wurden daher bisher nur in Form von Suspensionen in Wasser und in wäßrigen Lösungen
aufbewahrt und transportiert, was jedoch eine Reihe von Nachteilen mit sich bringt, die sich aus der
Notwendigkeit, tiefe Temperaturen eines engen Temperaturbereiches aufrechtzuerhalten, aus der Gefahr einer
mikrobiologischen Infizierung und einer begrenzten Aufbewahrungsfrist wegen der geringen Stabilität der
Eiweißstoffe bei deren Aufbewahrung im feuchten Zustand ergeben. Die bequemeren lyophil getrockneten
Präparate standen jedoch für immobilisierte Proteine bisher nicht zur Verfügung. Bei der lyophilen Trocknung
büßen die am unlöslichen Träger immobilisierten Eiweißstoffe oft einen bedeutenden Teil ihrer negativen
Eigenschaften und funktioneilen Aktivität ein; dabei hängt der Grad des Aktivitätsverlustes nicht primär von
der Natur des Eiweißstoffes ab, sondern vom Charakter des benutzten Trägers. So verliert beispielsweise das
Ferment Pepsin, welches bei der lyophilen Trocknung 100% Aktivität aufrechterhält, bei der lyophilen Trocknung
nach der Immobilisierung am Silochrom bis zu 90% Aktivität (Ju. I. Krylowa, L. W. Koslow, W. K. Antonow,
B. S. Gaina, E. N. Datunaschwili, N. M. Pawlenko (1976), Bioorganische Chemie 2, 273-278). Somit stellt
zur Zeit die Aufbewahrung und der Transport immobilisierter Eiweißpräparate ein Problem dar.
Der Erfindung wurde die Aufgabe zugrundegelegt, ein neues Verfahren zur Konservierung immobilisierter
Eiweißstoffe durch deren lyophile Trocknung anzugeben, bei welcher die Aktivität der Präparate aufrechterhalten
wird.
Die gestellte Aufgabe wurde durch ein Verfahren zur Konservierung immobilisierter Eiweißstoffe durch
lyophile Trocknung ihrer Suspensionen in Wasser oder in einer Pufferlösung gelöst, das erfindungsgemäß dadurch
gekennzeichnet wird, daß die lyophile Trocknung in Gegenwart eines inerten wasserlöslichen festen Füllmittels
durchgeführt wird.
Das Gewichtsverhältnis des Füllmittels und des immobilisierten Eiweißstoffes wird in jedem konkreten
Fall ausgewählt und hängt vom gewählten Füllmittel, Eiweißstoff und Träger ab, auf welchem der Eiweißstoff
immobilisiert worden ist, und kann von 1:1 bis 20 :1 betragen.
Als inertes wasserlösliches festes Füllmittel können anorganische Salze, beispielsweise Natriumchlorid,
Aminosäuren, beispielsweise Glycin, Kohlenhydrate, beispielsweise Glukose, synthetische Polymere, beispielsweise
Polyvinylpyrrolidon sowie beliebige andere Füllmittel, die wasserlöslich und gegenüber Eiweißstoff
inert sind, in Frage kommen.
Weitere Beispiele für geeignete Füllstoffe sind GIycylglycin,
Ochsenserumalbumin, Saccharose, Polysaccharide wie Dextran oder Polyalkohole wie Polyäthylenglykol.
Der auf Aerosil (pulverartiges Silikagel) immobilisierte Eiweißstoff, beispielsweise Schweinepepsin, wird in
Wasser suspendiert, das eine Lösung von Polyäthylenglykol (Mol. Masse 3000) in derselben Gewichtsmenge
wie das Eiweißpräparat enthält, eingefroren und lyophil getrocknet. Das getrocknete Präparat wird in 0,01 MoI
Azetatpuffer bei einem pH-Wert von 4,5 suspendiert,
ORIGINAL INSPECTED
das Füllmittel wird durch aufeinanderfolgende Auswaschungen
mit Pufferlösung unter Abtrennung des Eiweißpräparats durch Zentrifugieren entfernt. Man
nimmt die Einwaage des feuchten Präparats des immobilisierten Ferments und bestimmt dessen Aktivität
nach der Hämoglobinhydrolyse. Man bestimmt auch die Aktivität des Ausgangspräparats des immobilisierten
Pepsins und die Aktivität des ohne Zugabe des Füllmittels (Polyäthylenglyko!) lyophil getrockneten Präparats.
Die Aktivität des Ausgangspräparats wird gleich 100% gesetzt; dann beträgt die Aktivität des ohne Füllstoff
lyophil getrockneten Präparats 9% und die Aktivität des in Gegenwart von Polyäthylenglykol lyophil getrockneten
Präparats 78%. Dadurch wird es möglich, durch das gegebene Verfahren zur lyophilen Trocknung
trockene Fermentpräparate zu erhalten, deren Aktivität um das 8,7fache höher ist als bisher bekannt.
Die Erfindung gestattet, die Verluste an Aktivität und nativen Eigenschaften der immobilisierten Eiweißstoffe
bei deren lyophiler Trocknung zu vermeiden und diese Präparate in einer für eine längere Aufbewahrung und
den Transport bequemen Form zu erhalten. Recht bequeme Träger für die Immobilisierung der Eiweißstoffe
stellen anorganische Träger, insbesondere Kieselerden (Silikagele, Glas) dar. Bei der lyophilen Trocknung ver-Heren
jedoch die auf solchen Trägern immobilisierten Eiweißstoffe ihre nativen Eigenschaften und funktioneile
Aktivität fast vollständig. Im Zusammenhang damit werden diese Träger zur Herstllung von Präparaten, die
der Aufbewahrung unterliegen, nicht verwendet, und die darauf immobilisierten Eiweißpräparate werden industriemäßig
für den Verkauf nicht hergestellt, sondern unmittelbar vor dem Gebrauch erzeugt. Die Verwendung
der Erfindung gestattetes, auf anorganischen Trägern immobilisierte Industriemuster der Eiweißpräparate
herzustellen, welche in bequemer Form — in der lyophil getrockneten Form — aufbewahrt werden können.
Nachfolgend wird die Erfindung anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert.
Man suspendiert 20 mg auf Aerosil immobilisierte Schweinepepsin in 1 ml Wasser, das 200 mg Glycin enthält.
Man trocknet das Gemisch lyophil. Vor dem Gebrauch suspendiert man das Präparat in 0,01 Mol Azetatpuffer
beim pH-Wert von 4,5 und entfernt das Füllmittel durch aufeinanderfolgende Auswaschungen mit
derselben Pufferlösung unter Abtrennung des Eiweiß-Präparats durchs Zentrifugieren. Man entnimmt die Einwaage
des feuchten Präparats des immobilisierten Ferments und bestimmt dessen Aktivität nach der Hämoglobinhydrolyse.
Die Aktivität beträgt 16%, bezogen auf die Aktivität des Ausgangspräparats bis zur lyophilen
Trocknung. Die lyophile Trocknung ohne Füllmittel ergibt ein Präparat mit einer Aktivität von 9%, bezogen
auf den Ausgangswert.
B e i s ρ i e 1 2
Die Konservierung wird wie in Beispiel 1 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 400 mg Glycin hinzugesetzt.
Die Aktivität des Präparats beträgt 25%.
65
Beispiel 3 Die Konservierung wird wie in Beispiel 1 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 200 mg Glycylglycin hinzugesetzt.
Die Aktivität des Präparats beträgt 20%.
Die Konservierung wird wie in Beispiel 1 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 20 g Ochsenserumalbumin
hinzugesetzt. Die Aktivität des Präparats beträgt 63%.
Die Konservierung wird wie in Beispiel 1 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 20 mg Glukose hinzugesetzt.
Die Aktivität beträgt 50%.
Die Konservierung wird wie in Beispiel 5 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 200 mg Glukose hinzugesetzt.
Die Aktivität beträgt 53%.
Die Konservierung wird wie in Beispiel 1 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 20 mg Saccharose hinzugesetzt.
Die Aktivität beträgt 44%.
Die Konservierung wird wie in Beispiel 7 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 400 mg Saccharose hinzugesetzt.
Die Aktivität beträgt 63%.
Die Konservierung wird wie in Beispiel 1 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 20 mg Polyvinylpyrrolidon
(mit der Mol. Masse von 25 000) hinzugesetzt. Die Aktivität beträgt 67%.
Beispiel 10
Die Konservierung wird wie in Beispiel 9 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 200 mg Polyvinylpyrolidon
hinzugesetzt. Die Aktivität beträgt 75%.
Beispiel 11
Die Konservierung wird wie in Beispiel 1 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 20 mg Dextran (mit der
Mol. Masse von 50 000) hinzugesetzt. Die Aktivität beträgt 25%.
Beispiel 12
Die Konservierung wird wie in Beispiel 1 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 20 mg Polyäthylenglykol
(mit der Mol. Masse von 3000) hinzugesetzt. Die Aktivität beträgt 78%.
Beispiel 13
Die Konservierung wird wie in Beispiel 1 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 20 mg Natriumchlorid
hinzugesetzt. Die Aktivität beträgt 21 %.
5
mittel wird durch Auswaschungen entfernt Man be-
Die Konservierung wird wie in Beispiel 13 durchge- stimmt die Aktivität nach der Bindung (125/) von Ovalführt, nur werden als Füllmittel 200 mg Natriumchlorid bumin im Vergleich zur Ausgangsaktivität. Die Aktivihinzugesetzt. Die Aktivität beträgt 31%. 5 tat beträgt 73%. Die Aktivität des ohne Füllmittel ge
trockneten Präparats beträgt 12%. Beispiel 15
Die Konservierung wird wie in Beispiel 13 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 400 mg Natriumchlorid
hinzugesetzt. Die Aktivität beträgt 35%.
Beispiel 16
20 mg auf Diatomeenerde immobilisiertes Huhnpepsin werden analog dem Beispiel 1 konserviert. Als Füllmittel verwendet man 20 mg Glycin. Die Präparataktivität, bezogen auf das Hämoglobin, beträgt nach der Iyophilen Trocknung mit dem Füllmittel 60%. Die Aktivität des lyophil getrockneten Präparats ohne Füllmittel
beträgt 50%.
Beispiel 17
Die Konservierung wird wie in Beispiel 16 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 200 mg Glycin hinzugesetzt Die Aktivität beträgt 67%.
Beispiel 18 ;
-
20 mg auf Sphären Ar A 1000 Handelsprodukt immobilisiertes Protosubtilin werden in 1 ml 0,01 Mol
Phosphatpuffer bei einem pH-Wert von 8,0 suspendiert, der 20 mg Glukose enthält Weiter wird die Konservierung wie in Beispiel 1 durchgeführt Die Präparataktivi-
tat nach Hämoglobin beträgt nach der lyophilen Trocknung 93%. Die Aktivität des ohne Füllmittel lyophil getrockneten Präparats beträgt 80%.
Beispiel 19
Die Konservierung wird wie in Beispiel 18 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 20 mg Polyäthylenglykol
(mit der Mol. Masse von 3000) hinzugesetzt Die Aktivität beträgt 86%.
20 mg auf Enzakryl AA Handelsprodukt immobilisiertes Protosubtilin werden analog dem Beispiel 18
konserviert Die Präparataktivität beträgt 100%. Die Aktivität des ohne Füllmittel lyophil getrockneten Präparats beträgt 74%.
Die Konservierung wird wie in Beispiel 20 durchgeführt, nur werden als Füllmittel 20 mg Polyäthylenglykol
(mit der Mol. Masse von 3000) hinzugesetzt Die Aktivität beträgt 93%.
20 mg auf Aerosil immobilisiertes Ovalbuminantiserum des Kaninchens werden in 0,01 Mol Tris-HCl-puf-
fer, der 20 mg Polyäthylenglykol (MoL Masse 3000) enthält, bei einem pH-Wert von 7,6 suspendiert, eingefroren und lyophil getrocknet Vor dem Gebrauch wird das
Claims (2)
1. Verfahren zur Konservierung von immobilisierten Eiweißstoffen durch lyophile Trocknung ihrer
Suspensionen in Wasser oder in einer Pufferlösung, dadurch gekennzeichnet, daß die lyophile
Trocknung in Gegenwart eines inerten wasserlöslichen festen Füllmittels durchgeführt wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Füllmittel zur Suspension des immobilisierten
Eiweißstoffes in Gewichtsverhältnissen zum letzteren von 1:1 bis 20: 1 hinzugesetzt
wird.
15
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU782620877A SU943280A1 (ru) | 1978-05-29 | 1978-05-29 | Способ консервации иммобилизованных ферментов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2952815C1 true DE2952815C1 (de) | 1985-05-30 |
Family
ID=20766846
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19792952815 Expired DE2952815C1 (de) | 1978-05-29 | 1979-04-13 | Verfahren zur Konservierung von immobilisierten Eiweissstoffen |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| CH (1) | CH633560A5 (de) |
| CS (1) | CS222968B1 (de) |
| DE (1) | DE2952815C1 (de) |
| GB (1) | GB2049700B (de) |
| SE (1) | SE8000648L (de) |
| SU (1) | SU943280A1 (de) |
| WO (1) | WO1979001137A1 (de) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10323901A1 (de) * | 2003-05-26 | 2005-01-05 | Institut Virion/Serion Gmbh | Verfahren und Testmittel zur Untersuchung und/oder zum Nachweis von Biomolekülen und/oder Wirkstoffen in Flüssigkeitsproben |
| US7507528B2 (en) | 2001-09-06 | 2009-03-24 | Adnagen Ag | Method and diagnosis kit for selecting and or qualitative and/or quantitative detection of cells |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60258125A (ja) * | 1984-06-06 | 1985-12-20 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 蛋白性生理活性物質を含有する水溶性乾燥物 |
| GB8500698D0 (en) * | 1985-01-11 | 1985-02-13 | Unilever Plc | Preparation of reagents |
| US4931385A (en) * | 1985-06-24 | 1990-06-05 | Hygeia Sciences, Incorporated | Enzyme immunoassays and immunologic reagents |
| US5102788A (en) * | 1988-11-21 | 1992-04-07 | Hygeia Sciences, Inc. | Immunoassay including lyophilized reactant mixture |
| RU2172170C2 (ru) * | 1999-10-07 | 2001-08-20 | Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова | Лекарственное средство для улучшения пищеварения |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3133001A (en) * | 1959-11-26 | 1964-05-12 | Muset Pedro Puig | Stabilization of enzymes |
-
1978
- 1978-05-29 SU SU782620877A patent/SU943280A1/ru active
-
1979
- 1979-04-13 GB GB8002346A patent/GB2049700B/en not_active Expired
- 1979-04-13 CH CH80480A patent/CH633560A5/de not_active IP Right Cessation
- 1979-04-13 WO PCT/SU1979/000017 patent/WO1979001137A1/ru not_active Ceased
- 1979-04-13 DE DE19792952815 patent/DE2952815C1/de not_active Expired
- 1979-05-29 CS CS371079A patent/CS222968B1/cs unknown
-
1980
- 1980-01-28 SE SE8000648A patent/SE8000648L/xx unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3133001A (en) * | 1959-11-26 | 1964-05-12 | Muset Pedro Puig | Stabilization of enzymes |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7507528B2 (en) | 2001-09-06 | 2009-03-24 | Adnagen Ag | Method and diagnosis kit for selecting and or qualitative and/or quantitative detection of cells |
| DE10323901A1 (de) * | 2003-05-26 | 2005-01-05 | Institut Virion/Serion Gmbh | Verfahren und Testmittel zur Untersuchung und/oder zum Nachweis von Biomolekülen und/oder Wirkstoffen in Flüssigkeitsproben |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2049700A (en) | 1980-12-31 |
| SE8000648L (sv) | 1980-01-28 |
| WO1979001137A1 (fr) | 1979-12-27 |
| GB2049700B (en) | 1982-08-25 |
| CH633560A5 (de) | 1982-12-15 |
| CS222968B1 (en) | 1983-08-26 |
| SU943280A1 (ru) | 1982-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE2548427A1 (de) | Als einheit ausgebildete immunoanalysenausruestung in fester phase und verfahren zu ihrer herstellung | |
| DE4219149C2 (de) | Verfahren zur Haltbarmachung einer immobilisierten immunologisch reaktiven Substanz | |
| DE1816712A1 (de) | Reaktive Teilchen fuer biologische Untersuchungen und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| EP0374778A2 (de) | Verfahren zur Proteinimmobilisierung an einer Festphase, so hergestellte Protein tragende Festphase sowie deren Verwendung | |
| EP0131864B1 (de) | Gegen Denaturierung beständige, wässrige Proteinlösungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung | |
| DE3136579A1 (de) | Analyse fuer thyroxin und 3, 5, 3'-trijodthyronin | |
| DE2608667A1 (de) | Diagnostisches feststoffreagens und verfahren zu dessen herstellung | |
| DE2840768A1 (de) | Immunologisches reagenz | |
| DE2952815C1 (de) | Verfahren zur Konservierung von immobilisierten Eiweissstoffen | |
| EP0032204B1 (de) | Verfahren und Mittel zur immunologischen Bestimmung von Enzymen | |
| DE3100076C2 (de) | Verfahren zum Stabilisieren von Peroxidase in einem Medium auf der Basis von Serumprotein und ein Reagens zur Durchführung von immunochemischen Bestimmungen, enthaltend so stabilisierte Peroxidase | |
| DE2651139B2 (de) | Reagens zur Durchführung eines Direktagglutinationstests zum Schwangerschaftsnachweis und Verfahren zu seiner Herstellung | |
| DE3623846C2 (de) | Zusammensetzung zur selektiven Bestimmung einer biologisch aktiven Substanz | |
| DE2740008A1 (de) | Verfahren zur immobilisierung biologisch aktiver proteine | |
| EP0402796A2 (de) | Verfahren zur Stabilisierung von auf Festphasen immobilisierten biologisch aktiven Substanzen | |
| DE10029705A1 (de) | Herstellung von IgY(AFc)-Antikörpern und deren Verwendung | |
| US4218335A (en) | Stabilizer for an immunochemical measuring reagent | |
| DE3888437T2 (de) | Immobilisierte Antikörper. | |
| DE2533701A1 (de) | Immunologische diagnoseprodukte | |
| EP0030363B1 (de) | Verfahren zur Gewinnung von alpha-2-SB-Glykoprotein | |
| DE3022278A1 (de) | An ein polymer gebundene erythrozyten oder stroma und ihre verwendung zum spezifischen abtrennen und nachweis von antikoerpern | |
| CH636449A5 (de) | Verfahren zur gewinnung eines neuen, spezifischen alpha-l-antikoerpers. | |
| DE2857506A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines stabilen praeparats mit immunoglobulin-bindungseigenschaften | |
| DE3811659C1 (de) | ||
| DE2952815T5 (de) | Process of conservation of immobilized proteins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8100 | Publication of the examined application without publication of unexamined application | ||
| D1 | Grant (no unexamined application published) patent law 81 | ||
| 8364 | No opposition during term of opposition | ||
| 8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |