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DE2605789A1 - Chromatografisches trennverfahren - Google Patents

Chromatografisches trennverfahren

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DE2605789A1
DE2605789A1 DE19762605789 DE2605789A DE2605789A1 DE 2605789 A1 DE2605789 A1 DE 2605789A1 DE 19762605789 DE19762605789 DE 19762605789 DE 2605789 A DE2605789 A DE 2605789A DE 2605789 A1 DE2605789 A1 DE 2605789A1
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Shandon Southern Products Ltd
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Description

SHANDON SOUTHERN PRODUCTS LIMITED, 95/9 6 Chadwick Road, Astmoor Industrial Estate, Runcorn, Cheshire WA7 1PR, England
Chromatografisches Trennverfahren
Die Erfindung betrifft ein chromatografisches Trennverfahren. Insbesondere handelt es sich dabei um ein flüssigchromatografisches Verfahren und noch spezieller um ein rückhaltendes Füllmaterial zur Verwendung bei chromatografischen Trennverfahren.
In der Chromatografie ist die Nützlichkeit von Füllmaterialien auf der Basis von Silika oder Siliziumdioxid und anderen Oxiden (beispielsweise Silikagel, Tonerde) seit langem bekannt. Insbesondere werden siliziumdioxidhaltige und andere Stoffe oder Zusammensetzungen auf Oxidbasis, deren Oberflächen OH-Gruppen weitgehend durch organische Komponenten ersetzt worden sind, sowohl bei der Gaschromatografie als auch bei der Flussigchromatografie in weitem Umfang verwendet worden.
411
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BOEHMERT & FOEHMFRT
Die Anwendung derartiger Stoffe, die nachfolgend als "oberflächenmodifizierte Träger" bezeichnet werden, läßt sich in zwei verschiedene Kategorien unterteilen.
Zunächst einmal führt die Wechselwirkung der gelösten Stoffe mit den leicht sauren Oberflächenhydroxylgruppen bei der Gas- oder Flüssigchromatografie, bei der die zu trennenden gelösten Stoffe polar sind oder polarfunktionelle Gruppen aufweisen, zu Stoffpeaks, die unsymmetrisch und unscharf sind, wobei der Wirkungsgrad der Säulen nur schlecht ist. Die Bildung hydrophober AlkylsiIy!derivate der Oberflächenhydroxylgruppen wurde bereits vor längerer Zeit als nützliches Mittel zur starken Herabsetzung der Adsorptionseigenschaften von siliziumdioxidhaltigen Materialien erkannt. Beispielsweise haben 1962 J.H. Purnell und R.H. Perrett in J. Chromatography, 455, T_t über die Verwendung oberflächenmodifizierter siliziumdioxidhaltiger Träger in der Gaschromatografie berichtet, die mit Hexamethyldisilazan (HMDS) oder Dimethyldichlorosilan behandelt worden waren, von denen man annahm, daß sie Oberflächen-Silanolgruppen in Me-.Si- bzw. Me2Si-Gruppen umwandeln. Die oberflächenmodifizierten Träger, die so hergestellt worden waren, hatten nachweislich eine sehr stark reduzierte oder vernachlässigbare Adsorptionskraft.
In allen Fällen, in denen Me_Si- oder Me_Si-Gruppen an die Oberfläche von siliziumdioxidhaltigen Stoffen angebunden wurden, wurde die Modifizierung zu dem speziellen Zweck ausgeführt, die Adsorptionsfähigkeit der Oberflächensilanolgruppen oder anderer Hydroxylgruppen zu reduzieren oder zu beseitigen. Allgemeiner handelte es sich um die Erzeugung einer hydrophoben Oberfläche, die als geeignete Unterlage zum Beschichten des Trägers mit nicht-polaren organischen
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BOEHMERT & BCEHMcRT
• 3.
Polymeren oder anderen stationären Phasen dienen kann (M. Novotny und K.D. Bartle, Chromatographia, 272, 3^ (
Zum zweiten sind siliziumdioxidhaltige Stoffe und andere Stoffe auf Oxidbasis chemisch so behandelt worden, daß die Oberflächenhydroxylgruppen durch größere organische Komponenten ersetzt wurden, um den Stoffen spezifische Unterteilungs- und Rückhalteeigenschaften bei der Gas- und Flüssigkeitschromatografie zu verleihen, analog denjenigen beispielsweise einer stationären flüssigen Phase. Die Vorteile des chemischen Anbindens einer organischen Komponente, im Gegensatz zum einfachen Ablagern einer organischen Flüssigkeit oder eines Polymeren auf die Oberfläche eines Trägers, wurden durch E.W. Abel, F.H. Pollard, P.C. Öden und G. Nickless in J. Chromatography 23, 2^,(1966), im Falle von polymeren Silikonbeschichtungen und durch J.J. Kirkland und P.C. Yates in der US-PS 3 722 181 im Falle von kohlenwasserstoffähnlichen und anderen Beschichtungen diskutiert.
Das durch Abel et al. beschriebene Material wurde dadurch erhalten, daß Celit ( ein modifiziertes Erdalkalimaterial) mit Hexadekyl-trichlorosilan und anschließend mit HMDS behandelt wurde, um etwaige noch verbleibende Oberflächensilanolgruppen zu beseitigen.
Bei der Verwendung in der Gaschromatografie ergab dieses Material Stoffpeaks, die eine steilere hintere Flanke aufwiesen und zu höheren Säulenwirkungsgraden führten als silikonbeschichtete Materialien. D.C. Locke, J.J. Schmermund und B. Banner (Analytical Chemistry 90, j44 (1972)) haben beschrieben, auf welche Weise organische Gruppen an die Oberfläche von Silika oder Kieseldioxid angebunden wer-
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den können, indem zunächst die Oberflächensilanolgruppen in = Si-CI umgewandelt und anschließend die modifizierte Kieselsäure mit einem Grignard-Reagenz chemisch behandelt wird. Kirkland und Yates erhielten, wie in der US-PS 3 722 181 beschrieben, oberflächenmodifizierte Träger durch Anpolymerisieren von Silanen auf der Oberfläche von siliziumdioxidhaltigen Materialien. Derartige Stoffe sind in weitem Umfang in der Hochleistungs-Flüssigchromatografie verwendet worden. Eine Behandlung der Silanolgruppen mit Alkoholen oder Aminen führt ebenfalls zu oberflächenmodifizierten Trägern, jedoch sind die resultierenden = SiOR oder = SiNHR-Bindungen hydrolytisch unstabil, so daß derartige Stoffe weniger vorteilhaft sind (I. Halasz und I. Sebestian, Angew. Chem. International Ed. 453, J3 (1969), O.-E. Brust, I. Sebestian und I. Halasz/J. Chromatography 15, 8j5 (1973) ) .
Langkettige Alkylsilylsubstituenten, wie beispielsweise C10H0-Si- oder C1 ,H00Si-, die an Siliziumdioxid angebunden wurden, sind ebenfalls in weitem Umfang in der Gaschromatografie und in der sogenannten Umkehrphasen-Flüssigchromatografie verwendet worden. Derartige Stoffe sind gelegentlich mit HMDS oder mit anderen Reagenzien behandelt worden, welche Me3Si-Gruppen einführen, um jedwede restliche Adsorptionskraft des oberflächenmodifizierten Trägers zu reduzieren oder zu beseitigen.
Nach dem Stand der Technik wurde die Umwandlung von Ober-„flächenhydroxylgruppen zu -Si(Me)0 oder.= Si(Me)«-Gruppen stets als Deaktivierungsverfahren mit dem Ziel angewendet, die Adsorptionskraft zu eliminieren oder wenigstens beträchtlich zu vermindern. Niemals findet sich in der Literatur ein Hinweis darauf, daß ein derartiges Material als Rück-
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haltematerial in der Chromatografie verwendet werden könnte, wobei die Reaktion der Hydroxylgruppen zur Erzeugung von -Si(Me)-, oder = Si (Me) „-Gruppen mit dem spezifischen Ziel ausgeführt würde, ein Rückhaltematerial mit besonders wünschenswerten chromatografischen Eigenschaften zu erzeugen. Zur Herstellung oberflächenmodifizierter Träger mit Rückhalteeigenschaften sind stets größere Gruppen als Si(Me)3 als Substituenten für die Oberflächenhydroxylgruppen an siliziumdioxidhaltigen Trägern oder anderen Trägern auf Oxidbasis verwendet worden.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein chromatografisches Trennverfahren zu schaffen, welches einen verbesserten Wirkungsgrad aufweist.
Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe dadurch gelöst, daß die zu trennenden Stoffe in flüssigem Zustand durch eine Zone geleitet werden,, die eine Vielzahl von Partikeln einer siliziumdioxidhaltigen Zusammensetzung auf Oxidbasis als Füllmaterial aufweist, dessen mit der Flüssigkeit in Kontakt kommende Oberflächen einer dahingehenden chemischen Reaktion unterworfen worden sind, daß Silanolgruppen im wesentlichen vollständig durch Trialkylsily!gruppen ersetzt sind, deren Alkylgruppen Methyl und/oder Äthyl sind, so daß die zu trennenden Stoffe selektiv in unterschiedlichem Ausmaß auf dem Füllmaterial festgehalten werden.
Besonders bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung ergeben sich aus den Unteransprüchen.
Der Erfindung liegt die völlig unerwartete und überraschende Erkenntnis zugrunde, daß Trimethylsilylderivate von Adsorbentien und insbesondere Trimethylsilylderivate einer Anzahl
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poröser siliziumdioxidhaltiger Materialien, beispielsweise von Silikagelen, sich besonders als chromatigrafische Füllmaterialien zum Zurückhalten, zur Auflösung und zur Trennung von hochpolaren organischen Stoffen beträchtlichen Molekulargewichtes eignen. Insbesondere haben sich derartige Stoffe zum Zurückhalten, zur Auflösung und zur Trennung eines weiten Bereiches pharmazeutischer, biologischer und biochemischer Stoffe als nützlich erwiesen, einschließlich Tetracyclinen, Antidepressiva, aromatischen Sulfonsäuren, Alkaloiden und Steroiden, ebenso wie bei Feinchemikalien und Farbstoffen.
Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich insbesondere zur Analyse komplexer pharmazeutischer Verbindungen, wie beispielsweise von Tetracyclinen.
Das Füllmaterial, welches erfindungsgemäß verwendet werden kann, läßt sich in der nachfolgend beschriebenen allgemeinen Form herstellen: Eine bestimmte Menge eines geeigneten Adsorbens, beispielsweise ein Silikagel mit kleiner Partikelgröße, wird bei etwa 120C getrocknet, um das adsorbierte Wasser zu entfernen. Dann wird das Adsorbens in einem inerten organischen Lösungsmittel erhitzt, in dem ein Reagenz gelöst ist, welches mit Oberflächenhydroxylgruppen zur Bildung von TrialkylsiIy!derivaten reagieren kann. Geeignete Reagenzien für die Erzeugung von Trimethylsilylderivaten von Siliziumdioxid sind:
(Me0Si)0NH(HMDS), N N-SiMe-., CH0-C'^
XNH SiMe3
Es hat sich gezeigt, daß unter diesen Verbindungen das Trimethylsilylimidazol erfindungsgemäß am besten verwendet werden
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kann, weil es einen der am stärksten reaktionsfähigen Stoffe der oben angegebenen Gruppe darstellt und insbesondere am vollständigsten mit den Oberflächenhydroxylgruppen reagiert. Trialkylsilylderivate von Siliziumdioxid, bei denen einige oder alle Alkylgruppen Äthylgruppen sind, werden in ähnlicher Weise erzeugt, wobei jedoch ein Reagenz verwendet wird, bei dem die geeignete Zahl von Methylgruppen durch Äthylgruppen ersetzt ist, oder aber durch Verwendung einer Mischung entsprechender Reagenzien.
Daß die Erfindung auf der Bildung einer spezifischen Oberfläche beruht, nicht aber darauf, daß einfach die Oberflächensilanolgruppen entfernt werden, ergibt sich aus den folgenden Tatsachen: a) Das Füllmaterial gibt ähnliche, jedoch in manchen Fällen noch bessere Trennergebnisse wie bzw. als in dem Fall, daß dasselbe Siliziumdioxid verwandet wird, jedoch zunächst zum Einführen von -SiC1RH~„-Gruppen behandelt und dann anschließend so zur Reaktion gebracht, daß die verbleibenden OH-Gruppen in SiMe3 umgewandelt werden.
b) Füllmaterialien, die mit weniger aktiven silanisierenden Reagenzien als Trimethylsilylimidazol hergestellt wurden, wobei also die im wesentlichen vollständige Ersetzung der Silanolgruppen, die erforderlich ist, nicht erreicht wird, sind allgemein denjenigen unterlegen, bei denen die stärker reaktionsfähigen Reagenzien verwendet werden.
Im folgenden werden Ausführungsbeispiele der Erfindung im einzelnen erläutert.
Beispiel 1
In diesem Beispiel wird ein typisches Verfahren beschrieben, welches zur Herstellung des Füllmaterials, das erfindungsge-
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maß beim Chromatografieverfahren verwendet werden kann, dient. 3,5 g eines Silika-Füllmaterials mit dem Handelsnamen " Reeve Angel Partisil 20" wurde durch Erwärmen auf 125°C getrocknet, wobei die Zeitdauer der Erhitzung 4 Stunden betrug, im Vakuumofen. Das so getrocknete Silika wurde in 25 ml trockenen Dekalins suspendiert und in einen dreihalsigen Kolben mit einem Volumen von 100 ml eingebracht. 2 ml Trimethylsilylimidazol wurden der Suspension hinzugefügt. Die Mischung wurde bei etwa 1000C 16 Stunden lang unter Stickstoffatmosphäre, mit leichtem magnetischem Rühren, erwärmt. 50 ml Aceton wurden hinzugefügt, um alles gebildete Imidazol aufzulösen, woraufhin das silanisierte Material durch einen Sinter gefiltert wurde. Das Material wurde intensiv mit 200 ml Aceton gewaschen und dann in einem Vakuumofen bei 125°C für 24 Stunden gewaschen.
Eine Analyse des Produktes ergab einen Kohlenstoffgehalt von 5,4 % und einen Wasserstoffgehalt von 1,6 %.
Das Verfahren von Anspruch 1 wurde auch bei den hiervon abweichenden Ausgangsmaterialien verwendet, die in der nachfolgenden Tabelle aufgeführt sind:
TABELLE
Mittlere Partikelgröße oder Partikelgrößenbereich
Definiertes Porenglas von
Corning 15 - 23 /um
Spherisorb S20 20 /um
Mercksorb SI100 (Kügelchen) 20 pm
Im Labor hergestelle Silikakügelchen 20 /um.
Die.nachfolgenden Beispiele 2 und 3 zeigen die Herstellung eines
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• β.
Silika-Ausgangsmaterials und seine Behandlung zum Herstellen eines Füllmaterials zur Verwendung beim erfindungsgemäßen Verfahren.
Beispiel 2
Im Labor wurde Silika dadurch hergestellt, daß ein angesäuertes kolloidales Silikagel in einem Kohlenwasserstoff-Lösungsmittel emulgiert wurde, wobei das Lösungsmittel ein oberflächenaktives Agens zur Erzeugung kugelförmiger Silikapartikel aufwies. Diese wurden gewaschen und gehärtet, nach einem bekannten Verfahren, und so fraktioniert, daß sich eine 6 /jm-Fraktion ergab, die als Adsorbens und als Grundlage zum Herstellen gebundener Materialien verwendet wurde.
2 — 1
Das Silika hatte eine Oberfläche von 205 m g
Beispiel 3
Eine bestimmte Menge der selbst hergestellten Silikazubereitung mit kugelförmigen Teilchen wurde entsprechend dem Verfahren von Beispiel Ί behandelt, mit der Ausnahme, daß das 6-yum-Material durch wiederholte Sedimentation in Aceton gewaschen wurde. Eine Analyse des Produktes ergab einen Kohlenstoffgehalt von 2,9 % und einen Wasserstoffgehalt von 0,9 %.
Anstelle von Füllmaterialien, die überwiegend aus Silika oder Kieseldioxid, Silikagel oder aus porenhaltigem Glas auf Siliziumdioxidbasis bestehen, kann das Füllmaterial auch überwiegend aus Tonerde oder aus einer Mischung aus Kieseldioxid und Tonerde bestehen.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen das Verfahren nach der Erfindung.
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BOEHMERT & BOEHMERT
Beispiel 4
Eine 125 mm lange Säule mit einem Durchmesser von 5 mm wurde in Anwendung eines bekannten Verfahrens trocken mit einer bestimmten Menge des bereits genannten Silikas mit dem Handelsnamen " Reeve Angel Partisil 20" (18/um mittlere Partikelgröße) gefüllt. Das Kieseldioxid war in der in Beispiel 1 beschriebenen Weise gefüllt worden. Die Säule wurde als Teil eines Hochdruck-Flüssigchromatografen (HPLC) zur Trennung von Tetracyclinen verwendet. Im übrigen war die Vorrichtung von herkömmlichem Aufbau, bestehend aus einer Hochdruck-Kolbenpumpe (Orlita Type DMP, 1515 Giessen,BRD ), einem Scheideinjektor, einem UV-Fotometer (Cecil Instruments Ltd., Type 212, Cambridge) mit einer Strömungszelle von 10yul und einer Nachweisextinktion bei 280 nm.
Typische Trennkurven sind in Fig. 1 dargestellt, in der die Schreiberdiagramme des Detektor-(Fotometer-)-Ausganges für die Trennungen bei zwei Proben, A und B, wiedergegeben sind, wobei 0,1i4 wässrige Perchlorsäure mit einem Gehalt von 25 % Acetonitril als Eluent unter einem Druck von 500 psi verwendet wurde. Die Proben A und B hatten die folgenden Zusammensetzungen:
A B
ETC (4-Epitetracyclin) 225ng 200ng
TC (Tetracyclin) lOOOng 35Ong
CITC (7-Chlorotetracyclin) 180ng 72Ong
EATC (4-Epianhydrotetra- 135ng 400ng
cyclin)
ATC (Anhydrotetracyelin) 26Ong 45Ong
Die Analyse von Tetracyclin und seinen Derivaten ist häufig von großer Bedeutung. Die Tetracycline bilden eine charakteristische Klasse von Antibiotika mit vier kondensierten Ringen,
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ROEiIMERT Ä. BOEHMhRT
bei denen einige der Ring-Kohlenstoffatome mit hochpolaren funktioneilen Gruppen substituiert sind:
jvie NMe2
HO / H '
>' ^JJ ,0H
OH 0 OH
CONH2
0
OH
Das Vorliegen dieser Gruppen macht die Analyse mittels herkömmlicher chromatografischer Verfahren schwierig. So haben P.P. Ascione, J.B. Zagar und G.P. Chrekian in J. Chromatography 377, 6j> (1972) ein chromatografisches Verfahren für die Analyse von Tetracyclinen beschrieben, jedoch ist das Verfahren langwierig. Außerdem sind die berichteten Nachweisgrenzen kritisiert worden (K. Tsuji, J.H. Robertson und W.F. Beyer, Analytical Chemistry, 599, 4j5 (1974)). Ein gaschromatografie ches Verfahren zur Tetracyclinanalyse erforderte eine vorherige Silylierung der Hydroxylgruppen unter sorgfältig zu beachtenden Bedingungen (K. Tsuji und J.H. Robertson, Analytical'Chemistry, 2136, 4J5 (1973)). In einem neuerlichen chromatografischen Verfahren (Flüssigverfahren), welches durch Tsuji,Robertson und Beyer in der obengenannten Veröffentlichung beschrieben wurde, werden die Tetracycline auf einem Zipax-HCP-Träger in etwa 30 Minuten getrennt, jedoch ist die Auflösung noch schlecht und die Quantifizierung schwierig.
Weiterhin sind Tetracyclin und seine Derivate unstabil (beispielsweise führt eine verlängerte Behandlung mit saurer Lösung zu einer Epimerisation am C^-Atom). Deshalb ist eine
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sehr rasche chromatografische Analyse wünschenswert.
Erfindungsgemäß werden all diese Anforderungen erfüllt. Nach dem Verfahren nach der Erfindung ergibt sich, wie Fig. 1 zeigt, eine rasche quantitative Trennung von fünf Tetracyclinen, die interessieren, in weniger als zehn Minuten.
Die hohe Elutionsgeschwindigkeit reduziert in weitem Ausmaß jedwede Möglichkeit einer Umordnung oder Zersetzung der Proben. Eine Veränderung der in der beweglichen Phase vorhandenen Acetonitrilmenge läßt sich dazu benutzen, das Rückhaltevolumen der Tetracycline zu variieren und die Analyse spezifischer Mischungen von Tetracyclinen zu optimieren. Werden beispielsweise nur 15 % Acetonitril in der beweglichen Phase benutzt, so läßt sich nahezu eine Basislinienauflösung zwischen 4-Epitetracyclin (ETC) und Tetracyclin (TC) selbst erhalten.
Beispiel 5
Eine Säule mit einer Länge von,125 mm und einem Durchmesser von 5 mm wurde mit einer Aufschlämmung gefüllt, wobei eine abgeglichene Dichtetechnik verwendet wurde, wie sie in der chromatografischen Praxis wohl bekannt ist. Dabei wurde eine Probe des im Labor hergestellten Silikas, gemäß. Beispiel 2, verwendet, behandelt nach dem Verfahren von Beispiel 3. Die Säule wurde als Teil eines Hochdruck-Flüssigchromatografen zum Trennen einer Gruppe von B-Vitaminen verwendet. Der Rest der Anordnung war wie in Anspruch 4, mit der Ausnahme, daß bei 270 nm Extinktion nachgewiesen und aufgezeichnet wurde. Wie in Fig. 2 gezeigt, werden die Vitamine Bp, B-. und Bc voneinander sowie von Koffein getrennt, indem
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die trimethylsily!.gebundene Siliziumdioxidzubereitung verwendet wird. Dabei wird eine bewegliche Phase verwendet, die wasser-methanol-konzentrierte schweflige Säure (85:15: 0,25 v/v) aufweist, mit 0,1 % w/w Natriumlaury!sulfat.
Beispiel 6
Die relativen ehromatografisehen Wirkungsgrade der Füllmaterialien, die entsprechend den Beispielen 2 bzw. 3 hergestellt worden waren, wurden durch Experimente in einer Säule mit einer Länge von 125 mm und einem Durchmesser von 5 mm untersucht, um die Abhängigkeit der reduzierten Plattenhöhe von der reduzierten Geschwindigkeit festzustellen. Die Resultate zeigten, daß die Kurven der reduzierten Plattenhöhe für alle Füllmaterialien niedrig sind, wie es für hochleistungsfähige HPLC-Materialien erforderlich istr daß jedoch das gebundene Material,welches nach Beispiel 3 hergestellt worden war, etwas niedriger lag als dasjenige aus dem Silikagel (Beispiel 2), von dem es hergestellt worden war.
Die ausgezeichnete Wirkungsweise der Stoffe ergibt sich aus der Tatsache, daß minimale reduzierte Plattenhöhen von 3 oder weniger erreicht werden, wobei die allgemeine Erkenntnis zu beachten ist, daß ein derartiger Wirkungsgrad nahe an den reproduzierbar erhältlichen Grenwerten liegt.
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Claims (4)

  1. BOEHxViERT & BCEiIMERT
    Ansprüche
    Chromatografisches Trennverfahren, dadurch gekennzeichnet, daß die zu trennenden Stoffe in flüssigem Zustand durch eine Zone geleitet werden, die eine Vielzahl von Partikeln einer siliziumdioxidhaltigen Zusammensetzung auf Oxidbasis als Füllmaterial aufweist, dessen mit der Flüssigkeit in Kontakt kommende Oberflächen einer dahingehenden chemischen Reaktion unterworfen worden sind, daß Silanolgruppen im wesentlichen vollständig durch Trialkylsilylgruppen ersetzt sind, deren Älkylgruppen Methyl und/oder Äthyl sind, so daß die zu trennenden Stoffe selektiv in unterschiedlichem Ausmaß auf dem Füllmaterial festgehalten werden.
  2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ein Füllmaterial verwendet wird, welches kleine Silikapartikel aufweist, deren Silanolgruppen durch Trialkylsilylgruppen ersetzt worden sind.
  3. 3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß als Füllmaterial Silikapartikel verwendet werden, deren Silanolgruppen durch Trxmethylsilylgruppen ersetzt worden sind.
  4. 4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß ein Füllmaterial verwendet wird, welches durch Reaktion von getrockneter Silikamasse mit Trimethylsilylimidazol hergestellt worden ist.
    609835/093 5
    Λ*
    Leerseite
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