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DE2500579A1 - Zwischenprodukte und derivate von secretin - Google Patents

Zwischenprodukte und derivate von secretin

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Publication number
DE2500579A1
DE2500579A1 DE19752500579 DE2500579A DE2500579A1 DE 2500579 A1 DE2500579 A1 DE 2500579A1 DE 19752500579 DE19752500579 DE 19752500579 DE 2500579 A DE2500579 A DE 2500579A DE 2500579 A1 DE2500579 A1 DE 2500579A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
leu
arg
ser
gln
gly
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
DE19752500579
Other languages
English (en)
Inventor
Mariano Guiducci
Roger Piasio
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Becton Dickinson and Co
Original Assignee
Becton Dickinson and Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Becton Dickinson and Co filed Critical Becton Dickinson and Co
Publication of DE2500579A1 publication Critical patent/DE2500579A1/de
Pending legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/645—Secretins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/28—Bound to a nonpeptide drug, nonpeptide label, nonpeptide carrier, or a nonpeptide resin

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  • Biochemistry (AREA)
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  • Medicinal Chemistry (AREA)
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  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

BEOTOW, DICKINSON & Company Rutherford, New Jersey/USA
Zwischenprodukte und Derivate von Secretin.
Die Erfindung betrifft Peptide und im besonderen das Peptid (6-TYR)-Secretin und Aufbau- Peptide, die bei der Herstellung von (6-TYR)-Secretin und Porcin-Secretin verwendet werden.
1 2 3 4- 567 8 9 10 11 HIS - SER - ASP - GLY - THR - PHE - THR - SER - GLU - LEU - SER
12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 ARG - LEU - ARG - ASP - SER - ALA- ARG - LEU - GLN - ARG - LEU
23 24 25 26 27
LEU - GLN - GLY - LEU - VAL - NHp ist die Formel von Porcin-Secretin.
Dementsprechend ist Porcin-Secretin ein Peptid, das 27 Aminosäure-Reste enthält, von L-Histidin, L-Asparaginsäure, L-Ser.in, Glycin, L-Threonin, L-Phenylalanin, L-Glutaminsäure, L-Glutamin, L—Leucin, L-Arginin, L -Alanin und L- Valin.
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Gemäß der Erfindung wird ein neues Analoges von Porcin-Secretin vorgeschlagen, in welchem-Phenylalanin (PHE) durch Tyrosin (TYR) ersetzt wird; in der Folge wird dieses als (6-TYR)-Secretin bezeichnet.
Ggenstand einer anderen Ausführungsform der Erfindung ist ein radioaktiviodiertes (6-TYR)-Secretin.
Gegenstand einer weiteren Ausführungsform der Erfindung sind neue Zwischenprodukte für die Herstellung sowohl von Porcinals auch (6-TYR)-Secretin; sie umfassen die Aminosäure-Anteile, die bei der Erzeugung sowohl von Porcin-Secretin, als auch von (6-TYR)-Secretin verwendet werden. Sie sind an einen Benzhydrylaminharz-Träger gebunden und durch die folgende Strukturformel gekennzeichnet:
- CH - NH - X
in welcher bedeuten:
R. ein festes Polymeres aus Polystyrol oder mit Divinylbenzol vernetztem Polystyrol, in welchem das Polymere über eine Phenylgruppe gebunden ist, d.h. R, ist -£- GH-CHp
Y entweder Wasserstoff oder niederes Alkoxy (1-5 C-Atome), vornehmlich. Wasserstoff.,
5 09829/0961
Z entweder Wasserstoff, niederes Alkoxy oder Nitro, und X die geschützten oder nicht geschützten Peptide oder deren Salze, die aus 1 bis 27 Aminosäure-Resten in der Reihenfolge "bestehen, wie sie im Peptid Porcin-Secretin oder '·
(6-TTR)-Secretin auftreten.
Die Peptid-Salze umfassen beispielsweise Hydrochloride, Hydrobromide, Acetate, Trifluoracetate, Hydrofluoride, Chloracetate und dergl.
Das neue Peptid (6-TYR)-Secretin und die neuen Peptid-Zwischenprodukte, die bei der Erzeugung des neuen Peptids oder des Peptids" Porcin-.Secretin verwendet werden, gewinnt man nach der Pest-Phasen-Technik, die ganz allgemein von Merrifield, JACS 8^>, 2149 (1963) offenbart wurdey unter Verwendung*des oben beschriebenen Benzhydrylaminharzes als festem Träger. Das im Rahmen der Erfindung benutzte Benzhydrylamxnharz wurde von Pieta et al., Chem. Comm., 6^0 (1970), und Rivier et al., J. Med. Chem., 1j5, 545 (1973), beschrieben. Nach der Merrifield-Technik wird die erste*Aminosäure der Reihe (L-Valin), deren Aminogruppe geschützt ist, an den Harzträger über die Carboxylgruppe gebunden. Danach wird die Aminogruppe der ersten Aminosäure freigesetzt und die geschützte zweite Aminosäure an diese gebunden. Die Reihenfolge des Freisetzens und Verbindens der Aminosäure wird wiederholt, bis das gewünschte Peptid gebildet ist. An die~sem Punkt wird das Peptid freigesetzt und vom polymeren Träger als Amid der C-terminalen Säure (das Amid von L-Valin) entfernt.
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Bei der Bildung der Aminosäure-Reihen "können die Aminogruppen durch die allgemein bekannten Schutzgruppen geschützt werden, wie Benzyloxycarbonyl, Bisphenylisopropyloxycarboxyl, tert,-Amyloxycarbonyl, tert.- Butyloxycarbonyl, Phthalyl, o-Nitrophenylsulfenyl, Diisopropyloxycarbonyl, Trityl, Trifluoracetyl, Acetyl, Tosyl und dergl.. Ebenso kann auch die Carboxylgruppe durch die bekannten Schutzgruppen abgeschirmt werden, wie Diphenylmethoxy, p-Nitrophenoxy, Cyanomethoxy, Methoxy, Äthoxy, tert.-Butoxy, Benzyloxy und dergl..
Nach einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird die Peptid-Synthese mit einer Verknüpfung des C-terminalen Valin-Anteils an das Benzhydrylaminharz durch übliche Kuppelungsmethoden begonnen. Die Peptid-Kette wird danach' durch Kuppelung der Aminosäuren in der gewünschten Reihenfolge nach den normalen Kuppelungsverfahren verlängert. Die Schutzgruppen für die verschiedenen Aminosäuren sind: Nitro für das Guanidin von Arginin, Benzylester für die Asparagin- und Glutaminsäure, Benzyläther für die Serin-, Threonin- und Tyrosin-Hydroxylgruppen, Benzyl und Dinitrophenyl für das Imidazol von Histidin, während Glutamin ungeschützt bleibt und als der aktive p-Nitrophenylester angekuppelt wird. Die Kuppelung wird mit Hilfe von Dicyclohexylcarbodiimid als Kuppelungsmittel, die !Freisetzung mit Trifluoressigsäure in Methylenchlorid vorgenommen. Wenn die Synthese beendet ist, wird das Peptid vom Harzträger mittels Fluorwasserstoff entfernt, wobei gleichzeitig die blockierenden Gruppen abgespalten werden.
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Seeretin und das 6-Tyrosyl-Analoge werden durch Ionenaustausch-Chromatographie auf SP Sephadex durch graduelle und stufenweise Elution gereinigt, wie von E. Wunsch et al-, Chem. Ber., 105« 2515, (1972), beschrieben wurde.
Die Erfindung wird ferner an Hand der folgenden Beispiele näher beschrieben und als ein Verfahren zur Herstellung von (6-TYR)-Secretin und dessen Zwischenprodukten erläutert. Wenn nicht anders angegeben, verstehen sich alle Teile und Prozentgehalte nach Gewicht und alle Temperaturen nach Celsiusgraden.
Beispiel I
Benzhydrylaminharz (20 g) (hergestellt aus zu Λ% vernetzten Divinylbenzol-Polystyrolharz-Perlen) wird in das Peptid-Reaktorgefäß einer automatischen Peptid-Synthesevorrichtung gegeben. Die folgenden Lösungsmittel und Reagentien werden vorbereitet und in die entsprechenden Vorratsbehälter der Synthesevorrichtung eingebracht, Reagens
50-prozentige Trifluoressigsäure (TFA) in Methylenchlorid (V/V) Chloroform
10-prozentiges Triäthylamin (TEA) in Chloroform (V/V) Methylenchlorid,
Bicyclohexylcarbodiimid (DCC)
Dimethylformamid (DI-IF)
Tert.-Butyloxycarbonyl-L-valin
Tert.-Butylorycarbonyl-L-leuc in
Tert.-Butyloxycarbonyl-glycin
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Tert. -Butyl oxy carbonyl-L-glutamin-p-nitr ophenyle st er
Tert.-Butyloxycarbonyl-nitro-L-arginin
Tert.-Butyloxycarbonyl-L-alanin
Tert.-Butyloxycarbonyl-O-benzyl-L-serin
Tert.-Butyloxycarbonyl-ß-benzyl-L-asparaginat
Tert.-Butyloxycarbonyl-f-benzyl-L-glutamat
Tert. -Butyloxy carbonyl-O-benzyl-L-tlireonin
Tert.-Butyloxycarbonyl-O-benzyl-tyrosin
Tert.-Butyloxycarbonyl-imidazol-dinitrophenyl-L-histidin
Tert.-Butyloxycarbonyl-glycin-p-nitrophenylester
Ter.-Butyl oxycarbonyl-O-benzyl-L-serin-p-nitrophenylester:
Tert.-Butyl oxycarbonyl-ß-benzyl-L-asparaginat-p-nitrophenylester.
Eine Lösung von tert.-Butyloxycarbonyl-L-valin (13,02 g, 60
mMol) in Methylenehlorid (400 ml) wird in den vorgesehenen Behälter der Synthesvorrichtung gegeben.
Jede nachfolgende Aminosäure (60 mMol) wird in Methylenchlorid gelöst, mit Ausnahme von p-Nitrophenylestern und Nitroarginin, welche zur vollständigen Auflösung Dimethylformamid erfordern. Die Reaktionsfolge zur Aufnahme einer jeden Aminosäure in die
wachsende Peptidkette umfasst die folgenden Wasch- und Reaktionsstufen:
1. 3 Waschungen mit Methylenchlorid über 3° Sekunden.
2- Eine Waschung mit 50-prozentiger Trifluoressigsäure in
Methylenchlorid über 30 Sekunden.
3. Reaktion mit 50-prozentiger Trifluoressigsäure in Methylenchlorid über 20 Minuten.
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4. 4- Waschungen mit Methylenchlorid über 30 Sekunden.
5. 3 Waschungen mit Chloroform über 30 Sekunden.
6. Eine Waschung mit 10-prozentigem Triäthylamin in Chloroform über 30 Sekunden.
7. Eine Waschung mit 10-prozentigem Triäthylamin in Chloroform über 5 Minuten.
8. 4 Waschungen mit Chloroform über 3O Sekunden.
9. 5 Waschungen mit Methylenchlorid über 3° Sekunden.
10. Boc-Aminosäure in Lösung über 10 Kinuten.
11. DCC in Methylenchlorid über 2 Stunden.
12. 2 Spülungen mit Methylenchlorid über 3O Sekunden.
13. Wiederholungen der Stufen 10, 11 und 12.
Jede Kuppelung wird in Bezug auf ihre Beendigung mit Hilfe des Ninhydrin-Testes überprüft: Kaiser et al., Analytical Biochemistry 24, 395 (197O). Nur wenn der Test negativ ausfällt (alle reaktiven freien Aminogruppen sind gekuppelt), geht die Synthese weiter j andernfalls muß die Kuppelung wiederholt werden.
Die einzigen Änderungen in der Reaktionsfolge treten bei der Kuppelung von p-Nitrophenylester auf, wo die Stufe 11 entfällt.
Die Aminosäuren v/erden in der Reihenfolge verbunden, die zur Erzeugung von (6-TYR)-Secretin notwendig ist.
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Thiolyse:
Entfernung der Dinitrop'henol-(DNP)-Schutzgruppe aus dem Imidazolring des Histidins.
1. Die Thiolyse wird unter dem Abzug durchgeführt. Man gibt 20 g des Peptidharzesters in einen •T-Liter-Erlenmeyerkolben.
2. Man setzt 950 ml DMF und 50 ml TEA unter Rühren zu. Danach fügt man 20 ml ß-Mercaptoäthanol hinzu.
3. Nach einer Minute hört man mit dem Rühren auf. Man nimmt 25 /I des Überstehenden und verdünnt mit 2 ml 5-prozentigem TEA/DMF (V/V). Sobald als möglich beginnt man den Reaktor zu rühren.
4. Man liest die Verdünnung gegen eine 5-prozentige TEA/DMF-Blindprobe.im UV bei 32Q, 340, 35Ο. und 360 mJK. a.b. Ein Maximum der Absorption steht bei 340 m^
5· Man wiederholt Nummer 3 und 4 alle' 5 Minuten. Nach etwa 35 Minuten beginnt das Maximum bei 340 mj,u abzuflachen und praktisch abzunehmen. Wenn dies eintritt, iat die Reaktion beendet. Man filtriert sofort auf einem Sinterglastrichter unter Absaugen.
6. Man wäscht das7 Harz gut mit DMF, Methylenchlorid, 50-prozentigem TFA in Methylenchloridlösung und Methylenchlorid. Über Nacht trocknet man in einem Vakuumofen.
Abspaltung:
1. Man nimmt 5 g des Peptidharzestersr und gibt sie in ein großes KEL-F-Reaktorgefäß, das mit einem Magnetrührer. ausgerüstet ist.
2. Man setzt 10 ml Anisol zu.
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3· Dann überträgt man 5O ml Fluorwasserstoff (HS1) in das:-Eeaktorgefäß und: rührt bei-O°C über 1 Stunde.
4. Mit einer Wasserstrahlpumpe entfernt man HF aus dem Reaktorgefäß;. Ist dies weitgehend geschehen, schließt man eine Hochvakuumpumpe an und treibt die letzten Spuren von HF und* Anisol ab.
5. Man trennt das Reaktorgefäß von der HF-Apparatur ab, füllt sofort mit Äthylacetat und filtriert über einen Sinterglastrichter.
6. Man wäscht gut mit Äthylacetat durch.
7- Man extrahiert das ^eptid mit 0,2 n-Essigsäurelösungf danach unterwirft man es einer Gefriertrocknung.
Vor^Reinigung.
DEAE Sephadex A-25 Säule
1. Man präpariert eine DEAE Sephadex A-25-(Acetat-Form)Säule und hält mit 10-prozentiger wässeriger Essigsäurelösung im Gleichgewicht.
2. Man löst 950 mg rohes (6-TYR)-Secretin in 50 el 10-prozentiger, wässeriger Essigsäurelösung.
3. Man belädt die Säule· mit 10-prozentiger wässeriger Essigsäurelösung, sammelt annähernd 200 ml und unterwirft der Gefriertrocknung.
Reinigung:
Man löst rohes (6-TYR)-Secretin (1OO mg) in 20 inl einer Mischung, die zu gleichen Teilen aus einer Pufferlösung (0,3 η NH21OA , pH-Wert 4,5) und Wasser besteht. Nach Filtration wird der pH-
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Wert des.FiItrats mit Essigsäure auf 4,0 eingestellt·; mit dem FiItrat wird eine Sephadex SP Kolonne (2,4 χ 40 cm), die zuvor mit. der Pufferlösung ins Gleichgewicht gebracht worden ist, beladen. M^n eluiert. mit dieser Pufferlösung bis zu etwa 10 Bett-Volumina; danach fährt man mit einer neuen Pufferlösung mit dem pH-Wert 6,0 fort (0,3 Mol Aramonacetat, IO3 ml Eisessig in 6 Liter Wasser (Gesamtvolumen), mit Ammonhydroxid auf pH 6,0 eingestellt)· Es werden 20-ml-Fraktionen bei einer Geschwindigkeit von 1OO ml/Stde aufgefangen.. .
Ablesung:
Man liest O.D. bei 230 ro/f- an jedem zweiten Röhrchen ab und trägt die Ablesungen auf. Dann nimmt man von Jedem zweiten Röhrchen, wo ein Peak beobachtet wird, aliquote Teile (1 ml) ab und dampft über Nacht in einem Ofen ein. Man fügt 0,15 ^l Natriumhydroxidlösung (13,5 n) zu und stellt für 20 Minuten in einen Autoklaven. Danach setst man 0,25 «1 Eieeseig, 2 «1 Ninhydrin-Fufferlösung und 5^ λ Zinn-II-chloridlösung hinzu. Das Gemisch erhitzt man auf einem Dampfbad über 15 Minuten. Man verdünnt mit 10 ml einer 50-proz ent igen wässerigen Äthanollösung und liest O.D. bei 57Ο mjfi, mit einem Beckmann DBG Spectrometer ab. Man trägt die Ablesungen auf und vereinigt sie entsprechend den beobachteten Peaks" (Röhrchen 19-26 nach Änderung des Eluierungsmittels von pH 4,5 auf 6,0).
Die vereinigten Fraktionen werden gefriergetrocknet und analysiert.
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Das.Peptid wurde als das (6-TYR)-Secretin mittels Aminosäuren-Analyse und UV-Absorption identifiziert.
Eine biologische Aktivität wurde bei (6-TYR)-Secretin auf Grund der Versuche festgestellt, die von Jorpes et al-, Acta- Chem. Scand., 1£, 1970 (1961), Biochem. Biophys. Res. Commun., % 275 (1962), Biochem. 4-, 2358 (1965), und Fourth Int. Symp. Chem. Nat. Prod., Stockholm, (1966), beschrieben wurden.
Die Erfindung wurde mit besonderem Bezug auf die Herstellung von (6-TTR)-Secretin über die bevorzugte Fest-Phasen-Technik unter Verwendung eines Benzhydrylaminharz-Trägers beschrieben; es ist aber-klar, daß die Verbindung auch nach anderen Methoden, wie der stufenweisen Kuppelung aktiver Ester, oder nach irgendeinem anderen bekannten Verfahren erzeugt werden kann.
(6-TYR)-Secretin ist biologisch aktiv und kann für die gleichen Zwecke und in der gleichen Art wie Porein-:Secretin eingesetzt werden, beispielsweise zur Stimulierung des Bicarbonat-ITusses, zur Hemmung von Gastrin, usw., wie in Handbuch at experimentellen, Phatmakoloji Series XXXIV, Sprayer Verlag Editors: Jorpes and Kutt, beschrieben ist.
(6-TIR)-Secretin kann zur Gewinnung von radioaktiviodiertem (6-TYR)-Secretin radioaktiviodiert werden; die Radioaktiviodie-
125 131 123 125
rung wird entweder mit I, ι oder I, vornehmlich I,
125
vorgenommen. (6-TYR)-Seeretin wird (unter Verwendung von I
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1 125 als repräsentativem Indikator) zu 6-(3 -Iodo- I-tyrosyl)-secretin und 6-(3 ,5 -Büodö- Ip-tyrosyl)-secretin radioaktiviodiert. Die Radioaktiviodierung wird vornehmlich im wesentlichen nac:h der Hunter-Greewood-Chloramin-T-Methode (Nature 194, 495-96 (1962)), durchgeführt, wenn auch andere Techniken, z.B. unter Verwendung von Lactoperoxidase (Thorell et al., Biochemica et Biophysica Acta 251, 353-69 (1971) zum Ziele führen.
Das radioaktiviodierte Peptid gemäß der Erfindung kann nach der Technik zur Reinigung von radioaktiviodiertem Secretin unter Verwendung von Talk und Cellulose gereinigt v/erden, die von Boden and Chey, Endocrinology 92, 1617-24 (1973), und Boden et al., Hormone, and Metabolic Research ^, 237-40 (1973), beschrieben wurder. Alternativ kann die Reinigung durch Papier-Chromatoelectrophorese, Gel-Filtration oder Dünnschicht-Chromat.ographie erfolgen. Die Talk- und Cellulose-Methode wird bevorzugt, insbesondere dann, wenn merkliche Mengen an beschädigten markierten Verbindungen gebildet wurden.
Radioaktiv'iodiertes (6-TYR)-Secretin kann zur Radio-Immunitäts-Prüfung von Secretin nach allgemein bekannten Verfahren herangezogen v/erden, wie sie z.B. von Boden and Chey, oben, unter Verwendung des radioaktiviodierten Derivats gemäß der Erfindung an Stelle von radioaktiviodiertem Secretin, beschrieben wurden.
Beispiel II
10 ug 6-Tyrosylsecretin in 50 ul Phosphat-Puffer (0,50 Mol,
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pH 7,4) wurden mit 7mG Na I behandelt. Nach Zugabe von 165 ug Chloramin-T in 50 ul Phosphat-Puffer (0,50 Mol, pH 7,4) wurde die Mischung über 3O Sekunden gerührt. Die Iodierung wurde:- durch Zusatz von 5°O ug Natriurametabisulfit in 5° ul Puffer, beendet. Die Reinigung wurde nach der Methode von Boden and Chey, oben, vorgenommen.
Das radioaktiviodierte (6-TYR)-Secretin wurde mittels Papierchromatoelektrophorese' in nicht immunem Serum mit und ohne Zusatz von immunem Serum (Antisecretin Antiserum), wie von Boden and Chey, oben, beschrieben, unter Verwendung des radioaktiviodierten Derivats gemäß der Erfindung an Stelle von
125
Secretin I ausgewertet. Die Immunoreaktivität und die immunochemische Äquivalenz des radioaktiviodierten (6-TYR)-Secretin wurden ferner durch seine völlige Verdrängung aus den Antisecretin-Antikörpern mittels unmarkiertem Secretin oder (6-TYR)-Secretin nachgewiesen; dabei entsprach es den Grundanforderungen für Radioimmunokontrollen von Secretin und (6-TYR)-Secretin.
Darüber hinaus wurden spezifische· Aktivitäten von mehr als 3OO UC/ug erhalten.
Die Möglichkeit, sowohl Porcin-Secretin als auch (6-TYR)-Secretin durch eine Fest-Phasen-Technik zu erhalten, ist insofern völlig überraschend, als frühere Versuche in dieser Richtung nicht zum Ziele führten; siehe: "Secretin, Cholecystokinin, Pancreozymin and Gastrin", Bodansky, Seiten 183-84 (1973). Daüber hinaus ist die Tatsache, daß (6-TYR)-Secretin biologisch
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aktiv ist, vollkommen neu.
Radioaktiviodiertes (6-TYR)-Secretin stellt eine Verbesserung über rapLioaktiviodiertes Secretin als Folge höherer spezifischer Aktivität und verbesserter Lagerstabilität dar. Schließlich kann das radioaktiviodierte Derivat gemäß der Erfindung mit höheren Ausbeuten und unter milderen Iodierungsbedingungen erzeugt werden.
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Claims (1)

  1. Patentansprüche
    1. Zwischenprodukte zur Herstellung von Secretin und dessen Derivate bzw. Abwandlungen gekennzeichnet durch die Formel
    R1-CH-NH
    in welcher bedeuten:
    R1 ein festes Polymeres aus Polystyrol oder aus mit Diviny!benzol vernetzten Polystyrol, in welchem das Polymere über einen Phenylring gebunden ist, Rp eine Phenylgruppe, die in ortho-Stellung durch eine niedere Alkoxygruppe und/oder in para-Stellung durch eine niedere Alkoxy- oder Mtrogruppe substituiert sein kann, und
    X eine Verbindung aus den geschützten, und nicht geschützten folgenden Aminosäure—Resten und deren Salzen:'
    1) Tyr-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    2) Thr-Tyr-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Äla-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    5) GIy-Thr-Tyr-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-) Asp-Gly-Thr-Tyr-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    509829/0961
    ) Ser-Asp-GIy-Thr-Tyr-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-A sp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Ärg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-VaI-
    6) His-Ser-Asp-Gly-Thr-Tyr-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-rSer-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gin-Gly-Leu-VaI-
    7) PHE-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    8) Thr-PHE-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg_Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    9) GIy-Thr-PHE-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    10) Asp-Gly-Thr-PHE-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    11) Sßr-Asp-Gly-Thr-PHE-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    12) His-Ser-Asp-Gly-Thr-PHE-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-AIa-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-GIn-Gly-Leu-VaI-
    13) Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    14) Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    15) Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val- _
    16) Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    17) Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    18) Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    509829/0961
    19 ) Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-VaI-
    20) Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    21) Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    22) Ser-Ala-Arg-Leu-Gin-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-VaI-
    23) Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    24) Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Ieu-Val-
    25) Leu-Gin-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-VaI-
    26) GIn-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-VaI-
    27) Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-VaI-
    28) Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-
    29) Leu-Gln-Gly-Leu-Val-·
    30) Gln-Gly-Leu-Val-
    31) Gly-Leu-Val-
    32) Gly-Leu-Val-
    33) Leu-VaI-
    2. (6-TYR)-Secretin und seine Salze.
    3. Radioiodiertes (6-TXR)-Secr'etin und seine Salze. 4-. 6-(3^-1OdO- ^I-tyrosyl)-secretin.
    5. 6-(31,51-Di
    Iodo-^
    6. 6-(3 -Iodo-^ I2-tyrosyl)-secretin.
    509829/0961
    7. " 6-(31,51-Diiodo-151I2-tyrosyl)-secretin.
    8. Verfahren zur Herstellung von Secretin und seinen Derivaten bzw. Abwandlungen, dadurch gekennzeichnet, dass die das Secretin oder dessen Derivate bzw. dessen Abwandlungen aufbauenden Aminosäuren in der entsprechenden Reihenfolge an Valin gekuppelt werden, das seinerseits an einen festen, polymeren Träger gekuppelt ist, welcher die folgende Strukturformel besitzt:
    fa
    R1-CH-NH-X
    in welcher
    R1 Polystyrol oder mit Divinylbenzol vernetztes Polystyrol, das über seine Phenylgruppe gebunden ist, R2 eine Phenylgruppe, die in ortho-Stellung durch eine niedere Alkoxygruppe und/oder in par ä-Stre llung durch eine niedere Alkoxy- oder Nitrogruppe substituiert sein kann, und
    X Valyl bedeuten, und
    dass die erhaltenen Peptide zur Erzeugung von (6-TYR)- - Secretin vom Träger entfernt werden.
    509829/0961
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