DE2040841A1

DE2040841A1 - Verfahren zur Hemmung von Mikrobenwachstum

Info

Publication number: DE2040841A1
Application number: DE19702040841
Authority: DE
Inventors: Kumiko Jono; Michio Nakanishi; Shigehiko Sato; Togo Yamano
Original assignee: TADEDA CHEMICAL IND Ltd; Yoshitomi Pharmaceutical Industries Ltd
Current assignee: TADEDA CHEMICAL IND Ltd; Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1969-08-20
Filing date: 1970-08-18
Publication date: 1971-03-11
Also published as: FR2058409A1; FR2058409B1; GB1302933A; US3784699A

Description

Köln, den 15.8.1970 Kl/Ax

271 Doshomachi 2-chome, Higashi-ku, Osaka (Japan)

und

Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd..

;S5, Hiranomachi 3-chome, Higashi-ku, Osaka (Japan)

Verfahren zur Hemmung von Mikrobenwachstum

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Hemmung des Mikrobenwachstums durch Verwendung von 2,6~Dihydroxy-3,5"-di-tert.-butylbenzoe8äure oder ihrer Salze.

Verderbliche Substrate, z.B. verschiedene lebensmittel, Textilien, Kosmetika und die Haut von Menschen usw., sind dem Angriff von Mikroorganismen ausgesetzt, wobei häufig Fäulniserscheinungen, nachteilige Veränderungen, Verfärbungen oder ein unerwünschter Geruch auftreten.

Bisher wurden verschiedene antimikrobielle Stoffe zur Hemmung oder Verzögerung der Entwicklung verschiedener Gruppen von Mikroorganismen einschließlich Hefen, Pilze und Bakterien verwendet. Von diesen Stoffen werden Sorbinsäure, p-Hydroxybenzoesäureester, Salicylsäure, Dehydroessigsäure, Propionsäure und ihre Alkali- und Erdalkalisalze am meisten in Nahrungsmitteln verwendet. Ferner werden Nitrofuranderivate, wässrige Wasserstoffperoxydlöeungen usw. in verschiedenen Produkten verwendet. In neuerer Zeit haben die Dialkylpyrocarbonate die eamkflit auf eich gesogen«

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Biese bekannten antimikrobiellen Stoffe sind in verhältnismäßig niedrigen Konzentrationen gegen einige Mikroorganismen wirksam, aber wesentlich höhere Konzentrationen dieser Stoffe können erforderlich sein« bevor eine befriedigende Wachstumshemmung anderer Mikroorganismen erzielt wird.

Es ist ferner bekannt, daß keiner der bekannten antimikrobiellen Stoffe Anforderungen wie niedrige Toxizität gegenüber Warmblütern, Stärke der antimikrobiellen Wirkung, Dauerhaftigkeit der konservierenden Wirkung und leichte und sichere Anwendung völlig erfüllt. Beispielsweise wird bei Verwendung von organischen Säuren wie Salicylsäure, Sorbinsäure, Dehydroessigsäure, Propionsäure und Benzoesäure die antimikrobiell Wirkung durch Änderungen des Pjj-Wertes erheblich beeinflußt. So ist bei einem pg-Wert oberhalb von 6,0 die Wirksamkeit dieser Säuren immer gering. p-Hydrozybenzoesäureester werden durch Esterasen zersetzt, so daß ihre Wirksamkeit in Gegenwart von Esterasen verringert wird. Daher muß bei Verwendung dieser Ester gleichzeitig eine Deaktivierung der Esterasen durch Erhitzen vorgenommen werden. Ferner ist es bekannt, daß diese Ester Addukte mit verschiedenen Proteinen bildet, wodurch ihre Wirksamkeit verschlechtert wird. Wenn ein antimikrobieller Stoff für Lebensmittel verwendet wird, muß er eine niedrige Toxizität gegenüber Menschen und/oder Tierenhaben, und er darf in den Konzentrationen, in denen er verwendet wird, keine nachteilige Wirkung auf den Geschmack der Lebensmittel haben. Wenn antimikrobielle Stoffe beispielsweise in Toilettenseife, Kosmetika und Haarwaschmitteln verwendet werden, müssen sie unsohädlieh für die Haut, d.h. hautfreundlicb sein.

Oeg§ne\and der Erfindung ist ein Verfahrtη cor Hemaunf j des Rikrobenwachsturns durch Verwendung von 2,6-Dihydroxy- j 3,5-di-tert.-butylbenjsoeeäure oder ihrer Saite, dl« über } •Ine' lange Zeit, wirksam das Mikrobenwactaeturn in Verderb- ■

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lichen=,Substraten bei niedrigen.Konzentrationen hemmen oder zerstören, eine verhältnismäßig niedrige Toxizität haben und unschädlich für die Haut sind.

Die als Wirkstoff verwendete 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert_ebutylbenzoesäure kann durch Umsetzung von 4,6-Di-tert»- butylresorcin mit Kohlendioxyd unter Erhitzen hergestellt werden-. Salze dieser Verbindung sowie die freie Säure haben eine hohe antimikrobielle Wirkung» Bevorzugt als Salze werden die Alkalisalze, ζοB. das Natriumsalz und Kaliumsalz, oder die Erdalkalisalze, z.B. das Calciumsalz, Bariumsalz und Ammoniumsalz.

Die antimikrobielle Verbindung kann für die verschiedensten Substrate verwendet werden. Sie ist sehr wirksam in den verschiedenen Arten von Wasch- und Reinigungsmitteln wie Waschpulver, Toilettenseife, Haarwaschmitteln und anderen Detergentien, da 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-butylbenzoesäure und ihre Salze auf Textilien, die Haut oder das Haar aufziehen und sie gegen Mikroorganismen widerstandsfähig machen, ohne das Substrat nachteilig zu beeinflussen.

Der gemäß der Erfindung verwendete antimikrobielle Stoff eignet sich ferner für die verschiedensten Lebens- und Genußmittel, z.B. für alkoholische Getränke, beispielsweise raffiniertes Sake, gemischtes Sake, Bier und Wein, Essig, Soy, Soßen, Ketchup, Marmelade, Maische, Trockengemüse und Frischgemüse, Trockenobst und Frischobst, gepökelte und eingelegte Produkte, Milch und Milchprodukte, Joghurt, Butter, Margarine, Käse, Eiscreme, Fruchtsäfte wie Apfelsaft, Orangensaft und Tomatensaft, weiche Getränke einschließlich synthetischem Saft, zu Pulver getrocknetem Saft, Maissirup, Ahornsirup, Tofu (gesäuerte Bohnen = bean curd), Brot, Kuchen, Süßwaren, Räucherwaren, Fleisch und Fleischprodukte wie Speck, Schinken und Wurst, Fisch und Fischprodukte wie Fischfleischwurst, Kamaboko (Fischpaste) und Ghikuwa (Fischpasteten), tierische Öle,

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fette, Fadennudeln und verwandte Lebensmittel wie getrocknete und rohe Nudeln, Reiskuchen und ähnliche Lebensmittel. Außer den vorstehend genannten Nahrungs- und Genußmitteln können alle verderblichen lebensmittel durch die antimikrobiellen Stoffe gemäß der Erfindung geschützt werden.

Ferner eignen sich die antimikrobiellen Verbindungen gemäß der Erfindung für die Verhinderung der Gärung und des Abbaues von Stärke während der Lagerung und zur Verhinderung der Fäule bei Obst, Früchten und Gemüse„

Die erfindungsgemäß verwendeten antimikrobiellen Stoffe können auch für alle Substrate wie Textilien, Kosmetika U.dgl. verwendet werden, die mit den üblichen Konservierungsmitteln geschützt werden.

Die Aufbringung der antimikrobiellen Stoffe gemäß der Erfindung kann in Abhängigkeit von der Art des Substrata, dem Zweck der Behandlung und der Stufe und Art der Verarbeitung in verschiedener Weise aufgebracht werden, z.B. durch Zumischen, Auflösen, Tauchen, Aufsprühen, Einträufeln und Imprägnieren.

Die erfindungsgeraäß verwendeten antimikrobiellen Stoffe können in Pulverform oder als Lösung, die in situ oder vorher mit einem geeigneten Lösungsmittel hergestellt wurde, verwendet werden. Es ist lediglich notwendig, daß der antimikrobiell Stoff gleichmäßig eingearbeitet und verteilt wird, um den Zweck der Erfindung zu erreichen. Zur Erzielung einer gleichmäßigen Dispersion kann der antimikrobielle Stoff mit einem geeigneten Träger oder Dispergiermittel zur Zeit des Gebrauchs oder vorher gemischt und verdünnt werden. Als Träger oder Dispergiermittel eignen sich beispielsweise Natriumchlorid, Polyphosphate, chemische Würzen, Fettsäureester und andere oberflächenaktive Mittel, Lactose und Glucose.

Für die Zwecke der Erfindung können die 2,6-Dihydroxy-5,5-di-tert_o-butylbenzoe3äure und ihre Salze als Gemisch ver-

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wendet werden. Es ist auch möglich, diese antimikrobiellen Stoffe in Kombination mit anderen Desinfektionsmitteln oder Konservierungsmitteln wie Sorbinsäure und ihren Derivaten, Nitrofuranderivaten, p-Hydroxybenzoesäureestern, Dialkylpyrocarbonaten, Dehydroessigsäure und ihren Derivaten und Wasserstoffperoxyd zu verwenden«

Bezüglich des Zeitpunktes der Zugabe des antimikrobiellen Stoffs ist zu sagen, daß es bei fermentierten Lebensmitteln zweckmäßig ist, diesen Stoff dem Substrat gegen Ende des Herstellungsverfahrens gleichmäßig zuzusetzen. Es git keine feste Regel bezüglich des Zeitpunktes der Zugabe. Es ist lediglich erforderlich, eine ausreichende antimikrobielle Wirkung ohne Beeinträchtigung der Qualität des Substrats zu erreichen.

Wenn die 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert_e-butylbenzoesäure oder ihre Salze für die Konservierung und Keimfreimachung von Lebensmitteln verwendet werden, ist eine Konzentration von 0,00001 bis 0,1 Gew.-$ zweckmäßig. Zweckmäßiger ist eine Konzentration von 0,0005 bis 0,05$»

Bei anderen Substraten, z.B«, Waschmitteln und Kosmetika, kann der Zweck der Erfindung mit einer Konzentration von 0,01 bis 20 Gewo-$, zweckmäßig 0,1 bis 5 Gew_e-$ des Wirkstoffs völlig erreicht werden. Die genaue Menge des antimikrobiellen Stoffs hängt jedoch von der Art der verwendeten Ausgangsmaterialien und anderen Faktoren ab. Es ist auch möglich, Mengen zu verwenden, die über der obengenannten oberen Grenze oder unter der genannten unteren Grenze liegen.

2,6-Dihydroxy-3»5-di-tert«-butylbenzoesäure und ihre Salze haben die 1000-fache antimikrobielle Wirkung von Salicylsäure und die gleiche Toxizität wie Salicylsäure»

Im folgenden Herstellungsbeispiel und in den Beispielen verhalten sich Gewichtsteile zu Raumteilen wie Gramm zu Kubikzentimeter.

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Herstellungsbeispiel

In 12 Raumteilen Dimethylformamid werden 5 Gew.-Teile 4,6-Di-tert.-butylresorcin gelöst. Zur Lösung werden 1,56 Gew.-Teile wasserfreies Kaliumcarbonat gegeben. In das Gemisch wird auf dem ölbad 7 Stunden Kohlendioxyd geleitet, während bei 180⁰C gerührt wird. Zum erhaltenen Gemisch werden 50 Raumteile Wasser gegeben, worauf einige Zeit gerührt wird. Das Gemisch wird filtriert und der Rückstand mit Wasser gewaschen. Die Waschflüssigkeit.wird mit dem Filtrat vereinigt und das Gemisch mit konzentrierter Salzsäure auf p_H 1 bis 1,5 eingestellt, wobei eich eine gelbliche Fällung bildet. Die Fällung wird aus wässrigem Alkohol umkristallisiert, wobei 1,5 Gew^-Teile^, 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-butylbenzoesäure als blaßgelbliche Kristalle vom Schmelzpunkt 173,5⁰C (Zers.) erhalten werden.

Beispiel 1 Wirkung, gegen Hiochi-Bakterien |

Proben von raffiniertem Sake wurden mit Lactobacillus homohiochii, Lactobacillus heterohiochii, Lactobacillus fermentum α und Lactobacillus acidophilus geimpft, worauf 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-buty!benzoesäure zugesetzt wurde. Die Sakeproben wurden in einem Inkubator 60 Tage bei 32⁰C stehen gelassen. Das Wachstum der einzelnen Hiochi-Bakterien wurde beobachtet. Die Ergebnisse in Tabelle 1 zeigen, daß der erfindungsgemäß verwendet antimikrobielle Stoff das Wachstum der Hiochi-Bakterien stärker hemmt als Salicylsäure. Eine Geschmacksprüfung wurde vorgenommen, um den Einfluß von 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-butylbenzoesäure auf den Geschmack des raffinierten Sake zu ermitteln. Die Feststellungen von 8 Geschmacksprüfern wurden analysiert. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 genannt. Sie zeigen, daß der erfindungsgemäß verwendete antimikrobielle Stoff in der Praxis vorteilhaft ist.

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Tabelle,.J . .

Hemmende Mindeötkönzentratiön gegen HiQchirBakterien .(mg/ml)

Salicyl- 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert, säure buty!benzoesäure ;

Iiaot»homohiochii 0,25

Lacteheterohiöchil 0,25

Lact.fermentum α 0,5

Laot· acidophilus 0,5 ·

0,00015 0,00015 0,0003
0,00015

tabelle 2
Einfluß auf den Geschmack von raffiniertem Sake

Erfindungsgemäß

verwendeter

Wirkstoff

Hemmende Mindestkonzen tration (mg/ml) (A)

Zusetzte Menge AxO A χ 1 A χ 2

Kontrolle

(Sailieylsäure) 0,5 +

2,6-2>lhydroxy~
3,5-ai-tert·-
butylbenzoesäure 0,0003

-i nicht unterscheidbar von "nicht zugesetzt" +t unterscheidbar

Beispiel 2

2,6-2)ihydroxy-3,5-di~tert.-butylben2oesäure und Salicylsäure als Kontrolle wurden zu einem flüssigen 1#igen Glucose-Pepton-Medium (p_H 6,0) gegeben, um eine Verdünnungsreihe herzustellen. Die Verdünnungen wurden mit den festmikroorganismen geimpft. Die geimpften Medien wurden 48 Stunden bei 33°O bebrütet, worauf die hemmende Mindestkonzentration (yug/ml) berechnet wurde. Die Ergebnisse in Tabelle 3 zeigen, daß der erfindungsgemäß verwendete antimikrobielle Stoff eine weit höhere bakteriostatische Wirkung hat als Salicylsäure. Außerdem zeigt die Zusammensetzung der Testmedien, daß die Aktivität in Gegenwart von Protein nicht geringer wurde.

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Tabelle 3

Testmikroorganismus Hemmende Mindestkonzentration

gegen Bakterien (ug/ml)

Salicylsäure 2,6-Dihydroxy-

3,5-di-tert„-butylbenzoesäure

Staphylococcus aureus	250	VJI
Staphylococcus flavus	250	1
Bacillus subtilis	250	1
Bacillus cereus	250	5
Sarcina lutea	500	VJl
Proteus vulgaris	1000	500
Pseudomonas aerugi nosa	1000	500
Micrococcus roseus	250	1
Corynebacterium sepedonicum	250	1
Saccharomyces cerevisiae	500	500
	Beispiel 3

Beim üblichen Verfahren zur Herstellung von Kamaboko wurde 0,00005 Gew,-$ 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-butylbenzoesäure als Konservierungsmittel zu einer gemahlenen Paste gegeben, worauf gleichmäßig gemischt und gedämpft wurde. Das erhaltene Kamaboko wurde in einem Behälter aufbewahrt, der bei 90$ relativer Feuchtigkeit und 3O⁰C gehalten wurde, Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 genannt. Sie zeigen, daß der erfindungsgemäß verwendete antimikrobielle Stoff der Sorbinsäure (Kontrolle, 0,2$) hinsichtlich der Konservierungswirkung überlegen ist«

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Antimikrobielle
Verbindung

Vers"tricliene Zeit, Std, 18 24 48 72

Kontrolle neto

(ohne Konservierungs- (Kolonie _

mittel) auf der

Oberfläche von Kamaboko)

schlechter Geruch durch Zersetzung -

-Wert 6,4 + 6,5

6,8 7,2

Sorbinsäure
(0,25t)

neto

schlechter Geruch durch Zersetzung

p-rj

-Wert

6,2 6,2 6,4 6,9

2-(2-Puryl)-3-(5·
nitro-2-furyl)-acrylamid
(0,0002550

neto

schlechter Geruch durch Zersetzung

Pjj

-Wert

- Schimmelbil dung

6,4 6,4 6,6 6,6

2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-butylbenzoesäure
(0,00005/*)

neto

schlechter Geruch durch Zersetzung

•Wert

6,4 6,4 6,4 6,4

-: keine Veränderung

+: fast unbeachtliche Veränderung

-fs leichte Veränderung

hl·: merkliche Veränderung

-H-t-: starke Veränderung

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Beispiel 4

Ein Gemisch von 9,2 Gew.-Teilen Cetylalkohol, 9,2 Gew,-Teilen Stearylalkohol, 1,5 Gew.-Teilen Natriumlaurylsulfat, 30 Raumteilen weißem Petrolatum, 10 Raumteilen Propylenglykol und 1,0 Gew.-Teil 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-butylbenzoesäure wurde mit Wasser auf 100 Gew.-Teile aufgefüllt. Die erhaltene Creme wurde örtlich aufgebracht, wobei ausgezeichnete antimikrobielle Wirkungen erzielt wurden. Beispielsweise verhindert die Creme das Reißen der Haut nach dem Rasieren.

Beispiel 5

Einem handelsüblichen Haarwaschmittel wurde eine alkoholische Lösung von 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-butylbenzoesäure in einer Konzentration von 0,35^ zugesetzt. Durcn Waschen mit diesem Produkt wurde das Auftreten eines Schweißgeruchs und von Kopfjucken im Vergleich zum handelsüblichen Haarwaschmittel verzögert»

Zum weiteren Nachweis dieser Wirkung wurden das normale Haarwaschmittel ohne Zusatz und das Haarwaschmittel, das 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-butylbenzoesäure enthielt, in einer Menge von 100>ug/ml zu Teilen eines flüssigen Glucose-Pepton-Mediums (p„ 6,0) gegeben. Die Medien wurden dann mit einem Gemisch von Bacillus subtilis PCI 219 und Staphylococcus aureus PDA 209p geimpft und in einem Inkubator bei 37⁰C stehen gelassen. Nach 24 Stunden wurde üppiges Wachstum von Bakterien in dem Medium festgestellt, das das Haarwaschmittel ohne Zusatz enthielt. Im Gegensatz dazu zeigte da3 Medium, das das Haarwaschmittel mit Zusatz von 2,6-Dihydroxy-3»5-di-terto-butylbenzoesäure enthielt, kein Bakterienwachstum.

Beispiel 6

1000 Gew.-Teile raffinierter Kristallzucker und eine geringe WasEiornience wurden in eine Pfanne gegeben. Nach dem Kochen wurden 750 Gew.-Toile rohe Dohnenpaste, die in

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üblicherweise hergestellt worden war, zugesetzt und erhitzt. = . .. · :

Nachdem ein großer Teil des Wassers verdampft war, wurde ein inniges Gemisch von 0,02 Gew_e-Teilen 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert„-butylbenzoesäure und 10 Gew_o-Teilen Zucker zugesetzt* Das Gesamtgemisch wurde gut geknetet, worauf 750 Gew.-Teile rohe Bohnenpaste zugesetzt wurden« Das Gemisch wurde weiter erhitzt und geknetet« Die erhaltene fertige Bohnenpaste zeigte kein Anzeichen einer nachteiligen Veränderung nach 15-tägigem Stehen "bei Raumtemperatur. Im Gegensatz hierzu zeigte die Bohnenpaste, der kein Konservierungsmittel zugesetzt worden war, in 3 Tagen Fäulnis.

Beispiel 7

Ein Block der in üblicher Weise hergestellten japanischen festen Bohnenspeise "Tofu" wurde in 12 Teile von gleichem Volumen geschnitten. Zwei Gruppen von je 6 Stück wurden in die nachstehend genannten Quellbäder getaucht, die bei einer konstanten Temperatur von 25°C gehalten wurde. In bestimmten Zeitabständen wurden die Bakterienzahlen in jedem Quellbad ermittelt. Ferner wurde der Zustand jedes Teils der Bohnenspeise beobachtet. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt.

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Queirbad

Stadtwasser

Bakterienzahl/ ml

Zustand der Probe (Tofu) Stadtwasser plus 10 ug 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert»-but;yTbenzoesäure "pro ml

Bakterienzahl/ml

Zustand der Probe (Tofu)

Verstrichene Zeit, Std.

Unmittelbar nach dem Eintauchen

24 30 48 72

96

2,3 x 10'

9,	O	χ	1	O⁵
1,	O	χ	■j	8
1,	6	X	1	O⁸

keine Veränderung

dto.

saurer Geruch Tofu schwimmt 10

2,4 χ 10²
1,7 χ 10³
6,3 x 10⁵

1,1 χ 10'

keine Veränderung

dto.

It

tt

der charakteristik sehe Geruch von Tofu ist schwach

saurer Geruch

Beispiel 8

Aus handelsüblichen Cremeteilchen wurde die Creme entnommen und mit 0,001$ 2,6-Dihydroxy-3»5-di-tert_o-butyl~ benzoesäure gut gemischt. Zusammen mit einer Vergleichs probe, die kein Konservierungsmittel enthielt, wurde die Probe in einem Inkubator bei 30⁰C gehalten. Während sich an der Vergleichsprobe in 18 Stunden Fäulnis zeigte, wurde bei der mit dem antimikrobiellen Stoff gemäß der Erfindung behandelten Probe nach 4 Tagen lediglich eine leichte Veränderung des Geruchs festgestellt.

Beispiel 9

99 Gew.-Teile eines Alkalisalzes einer höheren Fettsäure (Seife) in Elockenform wurden mechanisch mit 1 Gewo-Teil 2,6-Dihydroxy-3,5-di-terto-butyrbenzoesäure gemischt, worauf eine geringe Menge Duftstoff zugesetzt wurde. Das Gemisch wurde zu einer Toilettenseife ge formt, die eine gute desinfizierende Wirkung hatte» Zur Bewertung der antimikrobiellen Wirkung dieser Seife wurde ein quadratisches Stück eines Baumwollstoffs von 3 cm Kantenlänge 10 Minuten in eine 1$ige wässrige Lösung der Seife (Wirkstoff 100 ug/ml) getaucht. Der in dieser V/eise behandelte Stoff wurde aus der Lauge fieriommen und getrocknet. Ein gleicher Baumwollstoff wurde mit einer gleichen Seifenlauge behandelt, die nicht den antimikrobiellen Stoff enthielt_o

Me beiden BaumwoJ.lü üoffe wurden auf eine Agarplatte !-.«legt, die mit i'>Laphylococcus aureus PDA 209p geimpft war und dann 24 Stunden bei 37°C bebrütet,wurde, Es fofitgesteJ l fe, daß. tiur Mikroorganismus auf dem

fjtoff, düi-¹ -mit der Seifenlösung behandelt war., «He den Zusatz ^«:Hß der iiri'indung enthielt, nicht wuchs und sogtu^v >iiAia llemmzono auf dem Gewebe und um das gebildet wuräo. Auf der gesamten Yergleichsproue der Mikroorganismus dagegen gutes Wachstum«, ίβ98 Π/7229 BAD

Beispiel 10

Bei der üblichen Brauereipraxis für die Herstellung von raffiniertem Sake wurden unmittelbar nach der Pasteurisierung 2 Raumteile einer äthanolischen Lösung, die 0,02$ 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-b-utylbenzoesäure enthielt, zu 1000 Raumteilen raffiniertem Sake gegeben, von dem das rohe Sediment abgezogen worden war. Dann wurde 0,01 Teil raffiniertes Sake, das mit Hiochi-Bakterien geimpft worden war, zugesetzt. Das Gemisch wurde in einem Inkubator bei 30⁰O gehalten. Nach 60 Tagen wurde keine auf die Hiochi-Bakterien zurückzuführende Trübung beobachtet.

Bei Verwendung von Natrium-2,6-dihydroxy-3,5-di-tert_obutylbenzoat an Stelle von 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-butylbenzoeaäure wurde ebenfalls keine Trübung festgestellt.

Beinpiel 11

Eine Probe eines in üblicher Weise hergestellten Mischsake (compound sake) wurde pasteurisiert. Unmittelbar anschließend wurden je 0,0003 Gew.-Teile 2,6-Mhydrr y-3,5-Qi-tert„-butylbenzoeüäure zu Proben von 1000 Raumteilen des pasteurisierten Liake gegeben. Dieses Gemisch wurde mit 0,01 Teil Mischsake goraischt, das rait Hi ο chi Bak terie11 ge Lrnρf t wοrdon war,, Dn.s Gemisοh wsιrde 60 Tage in einem Inkubator bei 30 C gehalten. Nach die ti er Bebrütungüi;c.;it wurde keine auf die Hiochi-Bok terien zurückz uf ühr (; η 111> 'Γ νίi b ι.ι η <; b c ο ha <Ί11 e ti.

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tige Bier zeigte kein Anzeichen einer Qualitätsverschlechterung nach langem Stehenlassen bei Raumtemperatur. Im Gegensatz hierzu war das Vergleichsbier, dem keine 2,6-Dihydroxy-3,5-di-terto-butyTbenzoesäure zugesetzt worden war, in einem Monat verdorben.

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Claims

Patentansprüche

1) Verfahren zur Hemmung des Mikrobenwachstums, dadurch gekennzeichnet, daß man Substraten 0,00001$ bis 20 Gew.-^ 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-butylbenzoesäure oder eines ihrer Salze zusetzt.

2) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ein Alkalisalz verwendet wird.

3) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Substrat Waschmittel oder Kosmetika -ge-schützt werden, denen 2,6-Dihydroxy-3,5-di-tert.-butylbenaoesäure oder ihre Salze in einer Menge von 0,01 bis 20 Gew.-φ zugesetzt werden.

4) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Substrate Lebensmittel-gesohürt-at werden, denen 2,6-Dihydroxy-3,5-di-rtert₆-butylbenzoesäure oder ihre Salze in einer Menge von 0,00001 bis

0,1 GeWc.-^ zugesetzt werden.

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