DE19751575A1

DE19751575A1 - Treatment agent for damaged tendons in horses

Info

Publication number: DE19751575A1
Application number: DE19751575A
Authority: DE
Inventors: Hans Dr Dr Rapp
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1997-11-20
Filing date: 1997-11-20
Publication date: 1999-05-27

Abstract

A treatment agent (I) for treating damaged tendons in horses comprises living tendon cells in injectable form. Independent claims are also included for: (1) use of (I) as local injection for the treatment of tendon damage in horses; and (2) preparation of (I) comprising: (a) obtaining a fresh piece of tendon; (b) cutting the tendon along the direction of the fibers 3 mm thick; (c) placing the slices in cell culture medium in culture flasks; (d) obtaining and multiplying of the cell suspensions; (e) concentrating the cell cultures in multiple washing and centrifugation steps to obtain a cell density of 10<5> cells/ml; and (f) exchanging the cell culture medium for a sterile isotonic solution.

Description

Die Erfindung betrifft ein Mittel zur Behandlung von Sehnen schäden bei Pferden sowie die Verwendung dieses Mittels und ein Verfahren zu dessen Herstellung.The invention relates to an agent for the treatment of tendons damage to horses and the use of this product and a process for its manufacture.

Tendinitiden, also Sehnenschäden (Entzündungen, Faserrisse, u. a.), sind eine der häufigsten Ursachen von Lahmheiten bei Pferden. Die empfohlenen und in der Praxis auch eingesetzten Therapien sind so mannigfaltig wie bei keiner anderen Er krankung. Dies zeugt wiederum davon, daß es keine allgemein anerkannte Behandlungsform gibt. Das angestrebte Ziel der Therapie akuter Sehnenschäden ist die Wiederherstellung der Stabilität der defekten Sehnenstruktur und der Erhalt der Gleitfähigkeit der Sehne gegenüber den benachbarten anatomi schen Strukturen. In der Praxis findet sich als Endresultat eines ausgeheilten Sehnenschadens aber meist nur eine Über brückung des Defekts mit einem Narbengewebe, das sowohl quantitativ als auch qualitativ von gesundem Sehnengewebe abweichende Sehnenzellen und Kollagenfasern mit verminderter Belastbarkeit aufweist.Tendinitis, i.e. tendon damage (inflammation, fiber tears, u. a.), are one of the most common causes of lameness in Horses. The recommended and also used in practice Therapies are more varied than with any other Er illness. This in turn shows that there is no general recognized form of treatment. The desired goal of Therapy for acute tendon damage is the restoration of the Stability of the defective tendon structure and the preservation of the The tendon slides against the neighboring anatomi structures. In practice there is the end result a healed tendon damage but usually only an over bridging the defect with a scar tissue that both quantitatively and qualitatively of healthy tendon tissue deviating tendon cells and collagen fibers with reduced Resilience.

Ziel der Erfindung ist es, ein Mittel zur verbesserten Therapie von Sehnenschäden bei Pferden bereitzustellen.The aim of the invention is to provide a means of improving Provide therapy for tendon damage in horses.

Erfindungsgemäß besteht dieses Mittel aus lebenden Sehnen zellen in injizierbarer Form. Dies erlaubt die direkte, minimalinvasive Implantation lebender Sehnenzellen in einen Sehnendefekt. Die in günstigen Fällen selbst nach nur ein maliger Verabreichung festgestellte positive Wirkung auf den Defekt kann auf einem Anwachsen und Vermehren der injizier ten Sehnenzellen beruhen, so daß anstelle eines undifferen zierten, narbigen Bindegewebes ein stärker differenziertes Sehnenersatzgewebe entsteht. Ein alternativer oder zusätz licher Mechanismus könnte darin bestehen, daß die injizier ten Sehnenzellen dem Körper einen Anreiz bieten, vermehrt eigene Tendozyten zu bilden. Über den genauen Wirkungsmecha nismus liegen noch keine gesicherten Erkenntnisse vor.According to the invention, this agent consists of living tendons cells in injectable form. This allows direct, minimally invasive implantation of living tendon cells into one Tendon defect. The in favorable cases even after only one Once administered, positive effects on the Defect can result from an ingrowth and multiplication of the injected ten tendon cells are based, so that instead of an undifferent graced, pitted connective tissue a more differentiated Tendon replacement tissue is created. An alternative or additional The mechanism could be that the injecting tendon cells provide the body with an incentive to form own Tendozyten. About the exact impact mechanism There is no reliable knowledge available yet.

Vorzugsweise stammen die Sehnenzellen von Equiden, da dies Unverträglichkeitsreaktionen minimiert. Die Sehnenzellen können insbesondere aus einer Sehne eines getöteten Pferdes oder eines toten Pferdefetus gewonnen werden. Auch die Ge winnung aus einem autologen Sehnenzellgewebe ist möglich und hat den Vorteil, daß Unverträglichkeitsreaktionen ausge schlossen sind.The tendon cells are preferably derived from equidae, because of this Intolerance reactions minimized. The tendon cells can in particular from a tendon of a killed horse or a dead horse fetus. Even the Ge Recovery from an autologous tendon cell tissue is possible and has the advantage that intolerance reactions are closed.

Am besten geeignet sind Sehnenzellen, die als für die Injek tion zubereitete Zellsuspension vorliegen.Best suited are tendon cells that are considered for injec cell suspension prepared.

Diese Zellsuspension sollte eine Zelldichte von mindestens etwa 10⁵ Zellen/ml aufweisen. Eine obere Konzentrations grenze wird nur durch die Herstelltechnik gesetzt. Daß die Zellsuspension steril sein muß, liegt auf der Hand. Die Zellsuspension sollte aber auch frei von Eiweiß sein, einer seits um einer Abwehrreaktion des Empfängerorganismus gegen Fremdeiweiß vorzubeugen, andererseits um ein unkontrollier tes Vermehren der Zellen in der für die Injektion zubereite ten Suspension zu verhindern.This cell suspension should have a cell density of at least about 10 ⁵ cells / ml. An upper concentration limit is only set by the manufacturing technology. It is obvious that the cell suspension must be sterile. The cell suspension should also be free of protein, on the one hand to prevent a defense reaction of the recipient organism against foreign protein, and on the other hand to prevent uncontrolled multiplication of the cells in the suspension prepared for injection.

Bewährt hat sich eine Zubereitung, in der die Zellen in einer sterilen, isotonischen Lösung suspendiert sind. In Betracht kommt insbesondere isotonische Kochsalz- oder Ringerlösung. Der Lösung kann als Vorsichtsmaßnahme ein Antibiotikum zugesetzt werden. A preparation in which the cells in a sterile, isotonic solution. In In particular, isotonic saline or Wrestler solution. The solution can be a precaution Antibiotic can be added.

Die Erfindung hat weiter die Verwendung lebender Sehnen zellen zur Therapie von Sehnenschäden bei Pferden in Form einer Suspension der Sehnenzellen zur lokalen Injektion zum Gegenstand.The invention further uses living tendons Form cells for therapy of tendon damage in horses a suspension of the tendon cells for local injection for Object.

Bewährt hat sich weiterhin, ca. 1 bis 10 ml der Zellsuspen sion (mit der angegebenen Mindestkonzentration) zu injizie ren. Es kann von Vorteil sein, mehrere kleine Volumina, z. B. 0,2 ml, in unterschiedliche Stellen des Defektes zu inji zieren, statt die Gesamtmenge in Form einer einzigen Injek tion in eine Stelle zu verabreichen.Approx. 1 to 10 ml of the cell suspensions have also proven effective sion (with the specified minimum concentration) to inject ren. It may be advantageous to use several small volumes, eg. B. 0.2 ml, to be injected into different places of the defect adorn instead of the total amount in the form of a single injection tion in one place.

Die Injektion der Zellsuspension in eine oder mehrere Stel len des Defektes kann zur weiteren Förderung und Beschleuni gung der Heilung in Abständen von ca. einer Woche wiederholt werden.Injection of the cell suspension into one or more steles The defect can be used for further promotion and acceleration healing is repeated at intervals of approximately one week become.

Die Erfindung betrifft des weiteren ein Verfahren zur Her stellung eines auslebenden Sehnenzellen in injizierbarer Form bestehenden Mittels. Das Verfahren umfaßt die folgenden Schritte
The invention further relates to a method for the manufacture of a living tendon cells existing in injectable form. The process comprises the following steps

- sterile removal of a fresh piece of one Tendon, preferably a horse's tendon,
- Cutting the piece of tendon transverse to the grain in approx. 3 mm thick preparations,
- Prepare the preparations with cell culture medium in Culture bottles,
- Obtaining and multiplying a cell culture in shape a suspension,
Concentrating the cell suspension by washing and centrifuging several times until a cell density of at least about 10 5 cells / ml is reached as the preparation to be injected,
- Exchange the cell culture medium for a ste rile, isotonic solution,
- Spend the injectable tendon cells pension in a übli for transport and removal ch vessel.

Es wurde festgestellt, daß die nach diesem Verfahren herge stellte, gebrauchsfertige Zellsuspension in einem sterilen Gefäß wenigstens sieben Tage bei Zimmertemperatur verwen dungsfähig bleibt. Über längere Zeiträume ist die gebrauchs fertige Zellsuspension nur dann lagerfähig, wenn sie unmit telbar nach der Herstellung tiefgefroren wird.It has been found that the result of this procedure prepared, ready-to-use cell suspension in a sterile Use the container for at least seven days at room temperature remains capable. It is used for longer periods The finished cell suspension can only be stored if it is frozen after production.

Das Herstellverfahren nach der Erfindung wird nachfolgend anhand eines konkreten Beispiels erläutert.The manufacturing method according to the invention is as follows explained using a concrete example.

Unmittelbar nach der Tötung eines Pferdes wurde unter steri len Bedingungen ein etwa 5 cm langes Stück der Achillessehne entnommen und vollständig in einer sterilen und isotonischen Kochsalzlösung (hier Dulbecco's phosphate buffered saline (PBS), Sigma/Deisenhofen, Nr. D-5652) aufgenommen. Die in dieser PBS gründlich gespülte und von allen anhängenden Ge weberesten sorgfältig befreite Sehne wurde quer zur Faser richtung in 2 bis 3 mm dünne aber noch stabile Stücke ge schnitten. Diese Präparate wurden in kontaminationssicher verschließbare Kulturflaschen (25 cm³ Costar Nr. 3050) ein gebracht.Immediately after the killing of a horse, an approximately 5 cm long piece of the Achilles tendon was removed under sterile conditions and completely taken up in a sterile and isotonic saline solution (here Dulbecco's phosphate buffered saline (PBS), Sigma / Deisenhofen, No. D-5652). The tendon, which was thoroughly rinsed in this PBS and carefully freed from all attached tissue remnants, was cut into 2 to 3 mm thin but still stable pieces across the fiber direction. These preparations were placed in contamination-proof, closable culture bottles (25 cm ³ Costar No. 3050).

Als Nährmedium wurde Zellkulturmedium (500 ml MEM mit Earles Salzen, Nr. M-5650 + 50 ml fetales Kälberserum, Nr. F-2138 + 10 ml Penicillin/Streptomycin, Nr. P-0781, alle Sigma/Dei senhofen) verwendet. Auch andere Kulturmedien sind ver wendbar. 5 ml Zellkulturmedium reichten in der Regel aus, um das Präparat zu bedecken und ein Austrocknen der Oberfläche zu verhindern. Um bei der Sehnenentnahme eventuell erfolgte Kontaminationen zu unterdrücken und nachträglichen Kontami nationen, insbesondere durch Pilze, vorzubeugen, wurden je dem Ansatz außerdem 100 µl Amphotericin B (Serva/Heidelberg, Nr. 47982) zugefügt.Cell culture medium (500 ml MEM with Earles Salts, No. M-5650 + 50 ml fetal calf serum, No. F-2138 + 10 ml penicillin / streptomycin, No. P-0781, all Sigma / Dei senhofen) used. Other culture media are also ver reversible. 5 ml cell culture medium was usually sufficient to to cover the preparation and dry out the surface to prevent. To take place when the tendon was removed Suppress contamination and subsequent contamination nations, especially by fungi, have been prevented 100 μl amphotericin B (Serva / Heidelberg, No. 47982) added.

Die Präparate wurden in einem Brutschrank bei 37°C inku biert, der, wie für Zellkulturen üblich, gepuffert war (z. B. durch 5%ige CO₂-Begasung). Dabei wurden die Flaschen liegend mit leicht gelösten Deckeln gelagert.The preparations were incubated in an incubator at 37 ° C. which, as is customary for cell cultures, was buffered (for example by 5% CO ₂ gassing). The bottles were stored horizontally with the caps loosened slightly.

Ab dem 6. Tag konnten am Rand der Präparate an der Wand der Kulturflaschen anhaftetende Zellen festgestellt werden. Ge wöhnlich nach ca. 12 Tagen waren so viele Zellen gewachsen, daß die Präparate mit einer sterilen Pinzette in neue Kul turflaschen mit je 5 ml des oben genannten Zellkulturmediums passagiert und vereinzelt werden mußten, um die Versorgung mit Nährmedium zu gewährleisten. Zum Passagieren wurden die in PBS zweimal gewaschenen Zellen mit 0,5 ml 2% Trypsinlö sung (20 ml Trypsin, Boehringer Mannheim GmbH, Nr. 210234 + 200 mg EDTA, + PBS ad 1000 ml) satt getränkt und der Über schuß abgegossen, dann die geschlossenen Kulturflaschen im Brutschrank bei 37°C für einige Minuten inkubiert, bis sich die Zellen von der Flaschenwand lösten. Die Trypsinlösung diente dazu, die Zellen von der Flaschenwand zu lösen und etwaige Zellaggregate aufzulösen. Die Zellen wurden mit 5 ml Kulturmedium je Flasche abgespült und aufgenommen.From the 6th day on the edge of the specimens on the wall of the Cells adhering to culture bottles are found. Ge Usually after 12 days, so many cells had grown, that the preparations with sterile tweezers in new Kul door bottles with 5 ml each of the above cell culture medium had to be passed through and isolated in order to supply to ensure with nutrient medium. They became passengers cells washed twice in PBS with 0.5 ml of 2% trypsin solution solution (20 ml trypsin, Boehringer Mannheim GmbH, No. 210234 + 200 mg EDTA, + PBS ad 1000 ml) saturated and the over poured shot, then the closed culture bottles in the Incubator incubated at 37 ° C for a few minutes until well the cells detached from the bottle wall. The trypsin solution served to detach the cells from the bottle wall and to dissolve any cell aggregates. The cells were washed with 5 ml Culture medium per bottle rinsed and taken up.

Die in den Ansatzkulturflaschen verbliebenen Zellen wurden mit PBS zweimal gewaschen, um tote Zellen und Mediumreste zu entfernen und erhielten wiederum je 5 ml Zellkulturmedium, so daß die Zellen bedeckt waren.The cells remaining in the batch culture bottles were washed twice with PBS to remove dead cells and medium residues remove and again received 5 ml of cell culture medium, so that the cells were covered.

Anschließend wurden die Präparate, abhängig von der Dichte des Zellrasens um das jeweilige Präparat, im Durchschnitt wöchentlich (alle 5 bis 12 Tage), weiter umgesetzt, die jeweils verbliebenen Zellen gewaschen, Zellen und Präparat inkubiert, usw.Then the preparations were made depending on the density of the cell lawn around the respective preparation, on average weekly (every 5 to 12 days), further implemented, the each remaining cell washed, cells and preparation incubated, etc.

Sehnenzellen wachsen überwiegend aber nicht ausschließlich als Monolayer, so daß es gelegentlich auch zu Anhäufungen von Zellen kam. Dann wurden diese Zellkolonien vereinzelt, um jeder Zelle eine optimale Versorgung mit Nährmedium zu bieten.Tendon cells predominantly but not exclusively grow as a monolayer, so that there are occasional accumulations came from cells. Then these cell colonies were isolated, to provide each cell with an optimal supply of nutrient medium Offer.

Die Größe der neuen Kulturflaschen und die überimpfte Menge der Zellsuspension richteten sich nach deren Zelldichte. Zum Vereinzeln von Zellanhäufungen wurde die gesamte Menge in eine neue Flasche übertragen. Zum Ausdünnen dicht bewachse ner Kulturflaschen wurde nur ein Teil der Zellsuspension ausgesät und mit frischem Zellkulturmedium zu 5 ml Gesamt volumen ergänzt.The size of the new culture bottles and the vaccinated amount the cell suspension depended on its cell density. To the Separating cell aggregates was the total amount in transferred a new bottle. Densely overgrown for thinning Culture bottles only became part of the cell suspension seeded and with fresh cell culture medium to a total of 5 ml volume added.

Auf diese Weise wurden Zellen über mehrere Monate etwa wö chentlich passagiert und - je nach Bedarf - lediglich erhal ten oder zur therapeutischen Anwendung in großem Umfang ver mehrt.In this way, cells became approximately over several months passaged and - if required - only received or for therapeutic use on a large scale increases.

Für die Herstellung einer gebrauchsfertigen, also zur Injek tion bestimmten Zellsuspension wurden Zellen aus 6 bis 7 dicht bewachsenen, größeren Kulturflaschen (75 cm³, Costar, Nr. 3275) verwendet. Nach zweimaligem Waschen mit PBS wurden die Zellen trypsiniert und die gesamte Menge aus allen Fla schen in 10 ml PBS aufgenommen. Anschließend wurden die Fla schen zweimal mit je 10 ml PSB gespült, um auch die noch zurückgebliebenen Zellen zu gewinnen.Cells from 6 to 7 densely overgrown, larger culture bottles (75 cm ³ , Costar, No. 3275) were used for the production of a ready-to-use cell suspension, that is to say for injection. After washing twice with PBS, the cells were trypsinized and the entire amount from all bottles was taken up in 10 ml of PBS. The bottles were then rinsed twice with 10 ml of PSB in each case in order to also recover the remaining cells.

In autoklavierten Reaktionsgefäßen (1,5 ml, Eppendorf, Nr. 3810) wurden die Zellsuspension und die zum Spülen benutzte PBS für 1,5 Minuten zentrifugiert (Eppendorf Centrifuge 5412, 12000 UpM). Die beim Zentrifugieren entstandenen Zellpellets zerfielen beim nochmaligen Waschen mit PBS wieder weitgehend in Einzelzellen, wurden nach erneutem Zentrifugieren in 1 ml Zellkulturmedium wie oben angegeben, jedoch ohne Zusatz von Kälberserum aufgenommen und in ein steriles, silikonisiertes (Silikonlösung, Serva/Heidelberg, Nr. 35130) Glasgefäß (ca. 3 ml Volumen) überführt. Auf Serum wurde verzichtet, um einer möglichen Abwehrreaktion des Empfängerorganismus gegen Fremdeiweiß vorzubeugen und um ein unkontrolliertes Vermehren der definierten Zellzahl in der gebrauchsfertigen Zellsuspension zu verhindern. Das Siliko nisieren des Glasgefäßes verhindert ein Anhaften der adhä renten Zellen an die Glaswand.In autoclaved reaction vessels (1.5 ml, Eppendorf, no. 3810) the cell suspension and the one used for rinsing PBS centrifuged for 1.5 minutes (Eppendorf centrifuge 5412, 12000 rpm). Those created during centrifugation Cell pellets disintegrated when washed again with PBS again largely in single cells, were again Centrifugation in 1 ml cell culture medium as indicated above, however, added without the addition of calf serum and in one sterile, siliconized (silicone solution, Serva / Heidelberg, No. 35130) glass vial (approx. 3 ml volume) transferred. On serum was waived to prevent a possible defense reaction of the To prevent recipient organism against foreign protein and to uncontrolled multiplication of the defined number of cells in the to prevent ready-to-use cell suspension. The siliko nizing the glass vessel prevents the adherence from sticking pension cells on the glass wall.

Die Reaktionsgefäße wurden zweimal mit 1 ml serumfreiem Zellkulturmedium wie vor gespült und diese Spüllösung eben falls in das obengenannte Glasgefäß pipettiert.The reaction tubes were washed twice with 1 ml of serum-free Cell culture medium rinsed as before and this rinsing solution if pipetted into the above-mentioned glass jar.

Die mikroskopische Zählung der Zellen in der so erhaltenen Probe von 3 ml Zellsuspension ergab eine Zelldichte von ca. 10⁶ bis 10⁷ Zellen/ml. Diese Zellsuspension erwies sich als gebrauchsfertig.Microscopic counting of the cells in the sample of 3 ml of cell suspension thus obtained showed a cell density of approximately 10 ⁶ to 10 ⁷ cells / ml. This cell suspension turned out to be ready for use.

Als Gefäßverschluß diente ein steriler Gummistopfen, durch den die Zellsuspension mit einer Kanüle und Spritze direkt entnommen werden konnte. Etwaige Zellaggregate ließen sich durch einmaliges Aufziehen und Entleeren der Spritze lösen. Um ein Auslaufen der gebrauchsfertigen Zellsuspension wäh rend des Versandes zu verhindern, wurde der Gummistopfen mit einem Streifen Parafilm "M" (American Can Company) zusätz lich fixiert und abgedichtet. Bis zum klinischen Einsatz innerhalb von drei Tagen wurde die gebrauchsfertige Suspen sion bei Zimmertemperatur aufbewahrt.A sterile rubber stopper served as a vial closure the cell suspension directly with a cannula and syringe could be removed. Any cell aggregates could be release by pulling and emptying the syringe once. To ensure that the ready-to-use cell suspension runs out To prevent shipping, the rubber stopper was included an extra strip of Parafilm "M" (American Can Company) fixed and sealed. Until clinical use within three days the ready-to-use Suspen sion kept at room temperature.

Die gebrauchsfertige Zellsuspension läßt sich durch Tiefge frieren in eine haltbare, jederzeit verfügbare Form über führen. Zu diesem Zweck kann die Zellsuspension beispiels weise nach Zugabe von Glyzerin (7% Endkonzentration) und Dimethylsulfoxid (5% Endkonzentration) als Zellschutz stu fenweise bei -18°C (für 12 Stunden), -70°C (für 12 Stunden) und -193°C (Lagerung in flüssigem Stickstoff) tiefgefroren werden. Eine derart während vier Wochen tiefgefroren aufbe wahrte, gebrauchsfertige Zellsuspension zeigte nach dem Auftauen im Brutschrank bei 37°C und Zugabe von Zellkultur medium weiteres Zellwachstum und Zellvermehrung.The ready-to-use cell suspension can be deep-frozen freeze into a durable, always available form to lead. For this purpose, the cell suspension can, for example after adding glycerin (7% final concentration) and Dimethyl sulfoxide (5% final concentration) as cell protection stu at -18 ° C (for 12 hours), -70 ° C (for 12 hours) and -193 ° C (storage in liquid nitrogen) frozen become. Freeze one of these frozen for four weeks true, ready-to-use cell suspension showed after the Thaw in an incubator at 37 ° C and add cell culture medium further cell growth and proliferation.

In ausgesuchten Fällen von akuter Tendinitis der oberfläch lichen Beugesehne wurde die zubereitete Sehnenzellsuspension klinisch eingesetzt. Nach steriler Vorbereitung des Hautfel des über der geschädigten Sehne wurde am aufgehobenen Bein die Zellsuspension mittels einer Kanüle (0,7 mm) direkt in den zuvor sonographisch identifizierten Sehnendefekt inji ziert. Anschließend wurde ein Schutzverband angelegt und die übliche Nachbehandlung mit nichtsteroidalen Antiphlogistika, Schrittbewegung und regelmäßigen Ultraschallkontrollen durchgeführt. Es zeigten sich keine Unverträglichkeitsreak tionen und die Sehnendefekte heilten komplikationslos aus.In selected cases of acute tendinitis of the surface The prepared tendon cell suspension became the flexor tendon used clinically. After sterile preparation of the skin field the one over the damaged tendon was on the lifted leg the cell suspension directly into a cannula (0.7 mm) the tendon defect inji previously identified sonographically graces. Then a protection association was created and the usual after-treatment with non-steroidal anti-inflammatory drugs, Step movement and regular ultrasound checks carried out. There was no intolerance craze ions and the tendon defects healed without complications.

Die beschriebene Therapie hat folgende Vorteile:
The therapy described has the following advantages:

- The tendon cell suspension is easy to produce;
- the injection is easy to perform (local injection tion, no general anesthesia required);
- Therapy by injection is minimally invasive (In injection with a thin cannula 0.7 mm);
- The tendon cell suspension is locally compatible (none Intolerance reaction).

Claims

1. agents for the treatment of tendon damage in horses, consisting of living tendon cells in injectable Shape.

2. Composition according to claim 1, characterized in that the tendon cells come from equidae.

3. Composition according to claim 1 or 2, characterized in that the living tendon cells as ready to use Cell suspension is present.

4. Composition according to claim 3, characterized in that the ready-to-use cell suspension has a cell density of at least about 10 ⁵ cells / ml.

5. Composition according to claim 3 or 4, characterized in that the ready-to-use cell suspension is free of white protein.

6. Agent according to one of claims 3 to 5, characterized ge indicates that the cells are in a sterile, isoto African solution are suspended.

7. Composition according to one of claims 4 to 6, characterized ge indicates that the cell suspension has at least one Antibiotic is added.

8. Use of living tendon cells to treat vision Damage to horses in the form of a suspension of Tendon cells for local injection.

9. Use according to claim 8, wherein the tendon cells of Equidae come from.

10. Use according to claim 9, characterized in that the tendon cells from fetal or autologous vision cell tissue were obtained.

11. Use according to one of claims 8 to 10, for In injection of approx. 1 to 10 ml of the cell suspension at min at least one point of the defect.

12. Use according to one of claims 8 to 11, for min at least one repetition of the injection at min at least one point of the defect at a distance of about a week.

13. A method for producing an agent according to any one of claims 1 to 7, characterized by the following steps

- removing a fresh piece of a tendon,
- cutting the piece of tendon transversely to the direction of the fiber into approx. 3 mm thick specimens,
Preparation of the preparations with cell culture medium in culture bottles,
Obtaining and multiplying a cell culture in the form of a suspension,
- Concentration of the cell suspension by multiple washing and centrifuging until a cell density of at least about 10 ⁵ cells / ml is reached as the preparation to be injected,
- Replacing the cell culture medium with a sterile, isotonic solution.

14. The method according to claim 13, characterized in that the ready-to-use agent is frozen.