DE19711707C1

DE19711707C1 - Preparation of cells for chromosome analysis

Info

Publication number: DE19711707C1
Application number: DE1997111707
Authority: DE
Inventors: Uwe Prof Dr Med Claussen
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1997-03-20
Filing date: 1997-03-20
Publication date: 1998-08-27
Anticipated expiration: 2017-03-21

Abstract

Preparation of mitotic cells for microscopic chromosome analysis, comprises: (a) applying a hypotonic solution to swell the cells; (b) fixing the cells on carrier for microscopy, and (c) drying the cells. The novelty of the process is that after the hypotonic solution and fixative is applied to the cells, and before the drying process, an acid is applied which is not in solution with another mixture and which has a lower boiling point than water. The acid swells the cells for a second time and is activated by adding water or from the surrounding moisture in the air. Also claimed is an apparatus with a holder for the vessels (2) containing the cell samples for chromosome analysis. A supply vessel (10) has the hypotonic solution for the first cell swelling before fixing. A further container (12) holds acid and a container (13) has water for the second cell swelling. A pipette assembly (3) transfers the contents of the containers to the sample vessels, and also extracts them from the sample vessels by suction.

Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Präparati on von in Teilung befindlichen Zellen für die mikroskopi sche Chromosomenanalyse nach dem Oberbegriff des Anspruchs 1 sowie eine Vorrichtung zur Durchführung dieses Verfah rens.The invention relates to a method for preparation on cells in division for microscopy chromosome analysis according to the preamble of the claim 1 and an apparatus for performing this procedure rens.

Die Präparation von in Teilung befindlichen Zellen zur Chromosomenanalyse findet in der Medizin vielfältige Anwen dung, und zwar von kultivierten Zellen, beispielsweise im Pränatalbereich von kindlichen Zellen, die durch Amniozen tese, Chorionbiopsie oder Nabelschnurpunktion oder aus dem Venenblut der Mutter erhalten werden, oder von Lymphozyten, Fibroplasten oder Tumorzellen, wie von nicht kultivierten Zellen, also durch Direktpräparation.The preparation of cells in division for Chromosome analysis has many uses in medicine dung, and that of cultured cells, for example in Prenatal area of child cells caused by amniocenes tes, chorionic biopsy or umbilical cord puncture or from the Venous blood obtained from the mother, or from lymphocytes, Fibroblasts or tumor cells, such as from uncultivated ones Cells, that is, by direct preparation.

Um die Chromosomen getrennt voneinander beurteilen zu kön nen, ist es bekannt, die Zellen einem hypotonen Schock aus zusetzen. Dazu läßt man auf die Zellen eine hypotone Lösung einwirken, was nach Fixation zu einer besseren Separierung der Chromosomen führt, das auch als Spreiten bezeichnet wird.In order to be able to assess the chromosomes separately NEN, it is known to give cells a hypotonic shock clog. To do this, a hypotonic solution is left on the cells act, resulting in better separation after fixation of the chromosomes, also called spreading becomes.

Bei den bekannten Präparationsverfahren werden die Zellen, die sich im Teilungsstadium befinden entweder direkt oder nach enzymatischer Ablösung vom Untergrund (z. B. kultivier te Amnionzellen) nach Einwirkung einer hypotonen Lösung fi xiert, d. h. mit einem Fixativ, beispielsweise einem Gemisch aus 3 Gew.-Teilen Methanol und 1 Gew.-Teil Eisessig ver setzt. In the known preparation methods, the cells which are in the division stage either directly or after enzymatic detachment from the substrate (e.g. cultivated te amniotic cells) after exposure to a hypotonic solution fi xiert, d. H. with a fixative, for example a mixture from 3 parts by weight of methanol and 1 part by weight of glacial acetic acid ver puts.

Alsdann werden die fixierten Zellen mit oder ohne Vorschal ten von Waschschritten, meist ebenfalls mit einem Fixativ, entweder, wie beispielsweise bei Lymphozyten, auf einen Ob jektträger, Deckgläschen oder dgl. für die Mikroskopie ge eignete Unterlage aufgetropft, oder, wie bei der in situ Präparation von kultiviertem Zellmaterial direkt auf einer solchhen Unterlage trocknen gelassen und dann zur mikrosko pischen Analyse vorbereitet. Beim Trocknen geht die Mitose, d. h. die Zelle in der Teilungsphase vom dreidimensionalen in einen zweidimensionalen Zustand über, wodurch die Meta phasen gespreitet werden, so dass die Chromosomen nach vollständiger Trocknung als in sogenannten Metaphasenplat ten fertig für nachfolgende Untersuchungen, z. B. Färbungen, vorliegen (Spurbeck et al, 1996, "Am. J. Med. Genet" 61, 387-393).Then the fixed cells with or without a formwork washing steps, usually also with a fixative, either, as with lymphocytes, to an ob slides, coverslips or the like for microscopy suitable pad dripped on, or, as with the in situ Preparation of cultivated cell material directly on a let such a pad dry and then go to the mikrosko prepared for analysis. When drying, the mitosis goes, d. H. the cell in the division phase from the three-dimensional into a two-dimensional state, causing the meta phases are spread so that the chromosomes after complete drying than in so-called metaphase plate ready for subsequent examinations, e.g. B. coloring, are available (Spurbeck et al, 1996, "Am. J. Med. Genet" 61, 387-393).

Die bekannten Verfahren führen jedoch zu erheblichen Schwankungen der Qualität der Chromosomenpräparate, je nach Umgebungstemperatur, Luftfeuchtigkeit, auf den Objektträger aufgetropfter Flüssigkeitsmenge und dgl. Zwar ist versucht worden, zumindest einen Teil der Parameter beispielsweise durch spezielle Klimakammern mit großem Aufwand konstant zu halten. Die erheblichen Schwankungen der Qualität der Chro mosomenpräparate konnten jedoch auch dadurch nicht wesent lich herabgesetzt werden, jedenfalls nicht in einem solchen Ausmaß, dass eine automatische Chromosomenpräparation zu qualitativ stabilen Ergebnissen führt.However, the known methods lead to considerable ones Variations in the quality of the chromosome preparations, depending on Ambient temperature, humidity, on the slide dripped amount of liquid and the like. Tried at least some of the parameters, for example through constant climatic chambers with great effort hold. The significant fluctuations in the quality of the chro however, mosquito preparations could not do so either be reduced, at least not in one Extent that automatic chromosome preparation too leads to qualitatively stable results.

Aufgabe der Erfindung ist es, ein Verfahren zur Präparation von in Teilung befindlichen Zellen für die Chromosomenana lyse bereitzustellen, das durch schwankende Umweltbedingun gen, sich ändernde Flüssigkeitsmengen und dgl. kaum kon stant zu haltende Parameter praktisch nicht beeinflußt wird. The object of the invention is a method for preparation of dividing cells for the Chromosomenana to provide lysis caused by fluctuating environmental conditions conditions, changing amounts of liquid and the like parameters to be kept constant are practically unaffected becomes.

Dies wird erfindungsgemäß mit dem im Anspruch 1 gekenn zeichneten Verfahren erreicht. In den Ansprüchen 2 bis 4 sind vorteilhafte Ausgestaltungen des erfindungsgemäßen Verfahrens wiedergegeben. Im Anspruch 5 ist eine bevorzugte Vorrichtung zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfah rens angegeben, welche halb- oder vollautomatisch ausgebil det und entsprechend den Ansprüchen 6 bis 12 weiter ausge staltet sein kann.This is known according to the invention with that in claim 1 recorded procedures achieved. In claims 2 to 4 are advantageous embodiments of the invention Procedure reproduced. In claim 5 is a preferred one Device for performing the method according to the invention rens indicated which semi- or fully automatic training det and according to claims 6 to 12 further out can be designed.

Wie festgestellt werden konnte, sind die Schwankungen in der Qualität der Chromosomenpräparate bei dem herkömmlichen Verfahren darauf zurückzuführen, dass von dem zur Fixierung verwendeten Fixativ der Alkohol, meist Methanol, auf dem Objektträger bzw. Deckglas verdunstet, wodurch der Säurean teil in der verbleibenden Flüssigkeit, also die Konzentra tion der Essigsäure, steigt. Die Essigsäure nimmt dann aus der Luft und/oder von dem entsprechend vorbehandelten Ob jektträger bzw. Deckglas Wasser auf, wodurch die fixierten Zellen eine weitere, unvollständige Quellung erfahren. Die se unvollständige Quellung der fixierten Zellen verläuft jedoch unkontrolliert und nahezu zeitgleich mit der Sprei tung, so dass nicht reproduzierbare und nicht steuerbare Verhältnisse vorliegen.As could be seen, the fluctuations are in the quality of the chromosome preparations in the conventional Procedure attributed to that of fixation fixative used the alcohol, mostly methanol, on the Slides or coverslips evaporate, causing the acid to part in the remaining liquid, i.e. the concentra tion of acetic acid, increases. The acetic acid then takes off the air and / or from the appropriately pretreated ob slide or coverslip of water, causing the fixed Cells experience another, incomplete swelling. The The incomplete swelling of the fixed cells takes place however uncontrolled and almost at the same time as the chaff tion, so that not reproducible and not controllable Conditions exist.

Hierzu trägt auch die gegenüber Wasser wesentlich schnelle re Verdunstung des Methanols bzw. Alkohols bei, die zu ei ner nicht kontrollierbaren Abkühlung der auf dem Objektträ ger oder Deckglas verbleibenden Restflüssigkeit führt.This is also due to the fact that it is much faster than water re evaporation of the methanol or alcohol contribute to egg a not controllable cooling of the on the slide residual liquid or cover slip.

Die Erfindung beruht auf der Erkenntnis, zwar auch eine solche zusätzliche Quellung der fixierten Zellen durchzu führen, jedoch unter kontrollierten Bedingungen, und zwar dadurch, dass man entweder (A) vor dem Trocknen auf die Zellen eine Säure und dann Wasser einwirken läßt oder (B) nach Hinzufügen einer Säure zu den Zellen ohne weitere Was ser-Zugabe direkt trocknet. Bei der Alternative (B) wird das zum Quellen erforderliche Wasser dann wie beim herkömm lichen Vorgeben aus der Luft aufgenommen. Aufgrund des Feh lens von Methanol läßt sich die Trocknung jedoch so verzö gern, dass eine vollständige Quellung vor der Spreitung stattfinden kann.The invention is based on the knowledge, indeed one such additional swelling of the fixed cells lead, but under controlled conditions, namely by either (A) drying on the Cells are exposed to an acid and then water or (B) after adding an acid to the cells without further what Adding water dries directly. The alternative (B) is the water required for swelling as with conventional taken from the air. Due to the lack However, drying of methanol can be delayed like having a full swell before spreading can take place.

Nach dem erfindungsgemäßen Verfahren stellt also die Ein wirkung der Säure in Verbindung mit der Einwirkung des Was sers entweder durch Wasser-Zugabe und der Alternative (A) oder durch Wasseraufnahme aus der Luft nach der Alternative (B) zur optimierten, vollständigen Quellung der fixierten Zellen einen separaten, kontrollierbaren Schritt vor der Trocknung der Präparate dar.According to the method according to the invention, the one effect of the acid in connection with the action of the what sers either by adding water and the alternative (A) or by absorbing water from the air according to the alternative (B) for optimized, complete swelling of the fixed Cells a separate, controllable step before Drying of the preparations.

Im Gegensatz zu den bekannten Verfahren zur Präparation von Zellen zur Chromosomenanalyse liegt also nach dem erfin dungsgemäßen Verfahren kein Methanol bzw. Alkohol in der Flüssigkeit auf dem Objekträger oder dem Deckglas vor.In contrast to the known methods for the preparation of Cells for chromosome analysis are therefore invented method according to the invention no methanol or alcohol in the Liquid on the slide or cover slip.

Dadurch, dass die Quellung erfindungsgemäß zeitlich kon trolliert und optimiert vorgenommen werden kann, ist die Qualität der erfindungsgemäß hergestellten Chromosomenprä parate deutlich besser. Das erfindungsgemäße Verfahren kann daher weitgehend standardisiert durchgeführt werden.Because the swelling according to the invention con trolled and optimized can be done Quality of the chromosome preparation produced according to the invention ready much better. The method according to the invention can are therefore largely standardized.

Es führt zu einer verbesserten Dehnung der Chromosomen mit deutlich höherer Bandenzahl nach Darstellung der Feinstruk tur, z. B. nach G-banding. Nach gezielter Quellung der Zel len kann dann abschließend die Spreitung eingeleitet wer den. Sie besteht im wesentlichen im Absaugen der Flüssig keit, in der die (zweite) Quellung der fixierten Zellen vorgenommen wurde, mit anschließendem Trocknen der Präpara te. Damit wird zugleich die Möglichkeit für eine automati sierte zytogenetische Aufarbeitung der Zellen eröffnet. It leads to an improved stretching of the chromosomes significantly higher number of bands after presentation of the fine structure tur, z. B. after G-banding. After targeted swelling of the cell len can then finally initiate the spread the. It essentially consists in sucking off the liquid in which the (second) swelling of the fixed cells was carried out, followed by drying of the preparation te. This also makes the possibility for an automatic cytogenetic processing of the cells opened.

Für die zweite Quellung der fixierten Zellen vor dem Trock nen wird nach dem erfindungsgemäßen Verfahren (neben der Säure) reines Wasser verwendet, oder eine wäßrige Lösung, wie z. B. eine verdünnte Säure.For the second swelling of the fixed cells before drying NEN is according to the inventive method (in addition to the Acid) pure water, or an aqueous solution, such as B. a dilute acid.

Erfindungsgemäß kann die Fixierung der Zellen mit einem Fixativ vorgenommen werden, beispielsweise mit einem Ge misch aus z. B. etwa 3 Gew.-Teilen Methanol und z. B. 1 Gew.- Teil Eisessig.According to the invention, the cells can be fixed with a Fixative, for example with a Ge mix from z. B. about 3 parts by weight of methanol and z. B. 1 wt. Part of glacial acetic acid.

Die zweite Quellung der fixierten Zellen kann erfindungsge mäß in zwei Schritten durchgeführt werden, nämlich durch Einwirken einer Säure, beispielsweise Essigsäure, insbeson dere Eisessig, als erstem Schritt und Einwirkung des Wasser als zweitem Schritt.The second swelling of the fixed cells can be according to the invention be carried out in two steps, namely by Exposure to an acid, for example acetic acid, in particular glacial acetic acid, as the first step and exposure to water as a second step.

Die verwendete Säure kann also eine reine Säure, wie Eises sig, oder ein Gemisch aus einer Säure und Wasser sein. Die verwendete wäßrige Säure sollte dabei vorzugsweise einen pH-Wert < 4, insbesondere < 2 aufweisen. Wesentlich ist, dass die Säure nicht im Gemisch mit einer Flüssigkeit vor liegt, insbesondere nicht mit einem Alkohol, welche einen niedrigeren Siedepunkt als Wasser und damit eine höhere Flüchtigkeit als Wasser besitzt. Die gilt insbesondere bei Variante (B) des erfindungsgemäßen Verfahrens, bei dem kei ne gesonderte Wasserzugabe erfolgt.The acid used can therefore be a pure acid, such as ice sig, or a mixture of an acid and water. The The aqueous acid used should preferably be one Have pH <4, in particular <2. It is essential that the acid is not pre-mixed with a liquid is, especially not with an alcohol, which one lower boiling point than water and therefore a higher one Has volatility as water. This applies in particular to Variant (B) of the method according to the invention, in which no ne separate water is added.

Die Einwirkungsdauer der Säure kann z. B. 1 Sekunde bis 1 Stunde betragen. Die Einwirkungsdauer des Wassers beträgt normalerweise 1 Sekunde bis 20 min. Die Temperatur bei der Einwirkung der Säure bzw. des Wassers oder der hypotonen Lösung ist im allgemeinen Raumtemperatur. Sie kann jedoch z. B. zwischen 5°C und 30°C auch schwanken. Beim Einwirken sind die Zellen z. B. in einem Kulturgefäß oder auf einem Objektträger oder einer sonstigen für die Mikroskopie ge eigneten Unterlage in die Säure bzw. das Wasser einge taucht. Das Einwirken der Säure bzw. des Wassers kann auch in mehreren Einzelschritten erfolgen. D. h., es kann z. B. erst Wasser, dann Säure, dann Säure mit einer anderen Kon zentration und dann wieder Wasser einwirken gelassen wer den. Wichtig ist nur, dass der letzte Schritt oder Einzel schritt in der Einwirkung des Wassers auf die Zellen be steht. Dabei kann das Wasser zugegeben oder aus der Luft aufgenommen werden.The exposure time of the acid can e.g. B. 1 second to 1 Hour. The exposure time of the water is usually 1 second to 20 min. The temperature at the Exposure to acid, water or hypotonic Solution is generally room temperature. However, it can e.g. B. also fluctuate between 5 ° C and 30 ° C. When acting are the cells z. B. in a culture vessel or on a Slides or other ge for microscopy suitable base in the acid or water dives. The action of the acid or water can also done in several individual steps. That is, it can e.g. B. first water, then acid, then acid with another con concentration and then let water take effect again the. It is only important that the last step or single step in the action of water on the cells stands. The water can be added or from the air be included.

Das Fixieren der Zellen mit einem gesonderten Fixativ, wie einem Methanol/Eisessig-Gemisch, kann auch entfallen, so dass die Zellen durch die Säure beim zweiten Quellvorgang zugleich fixiert werden.Fixing the cells with a separate fixative, such as a methanol / glacial acetic acid mixture, can also be omitted, so that the cells go through the acid during the second swelling process be fixed at the same time.

Ferner ist es möglich, die Fixierung mit dem gesonderten Fixativ im Anschluß an die Fixierung und Quellung mit der Säure und vor dem Einwirken des Wassers auf die Zellen durchzuführen.It is also possible to fix with the separate Fixative after fixation and swelling with the Acid and before exposure to water on the cells perform.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren erfolgt das Einwirken der Säure und das Einwirken des Wassers auf die Zellen beim zweiten Quellvorgang entweder durch gesonderte Zugabe (Variante A) oder aus der Luft aufgenommen (Variante B) un abhängig vom Verdunstungsprozeß. Dadurch wird eine hohe Re produzierbarkeit des erfindungsgemäßen Verfahrens gewähr leistet.The action takes place in the method according to the invention the acidity and the effect of the water on the cells second swelling process either by separate addition (Variant A) or taken from the air (variant B) un depending on the evaporation process. This creates a high re producibility of the method according to the invention accomplishes.

In der Variante (B) wird im Gegensatz zum herkömmlichen Verfahren erst Methanol durch eine Säure ersetzt und an schließend die Trocknung eingeleitet, die dann verzögert abläuft und über eine Wasseraufnahme aus der Luft zu der vollständigen Quellung vor der Spreitung führt.In contrast to the conventional one, variant (B) Process first replaced methanol by an acid and on finally initiated the drying, which is then delayed expires and via a water absorption from the air to the complete swelling before spreading results.

Dabei ist es bei dem erfindungsgemäßen Verfahren wichtig, dass das Einwirken des Wassers auf die Zellen nach dem Ein wirken der Säure erfolgt. It is important in the method according to the invention that the action of water on the cells after entering the acid acts.

Bei einer bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens werden also folgende Schritte 1 bis 6 durchge führt:
In a preferred embodiment of the method according to the invention, the following steps 1 to 6 are carried out:

1. Expose the hypotonic solution to the cells of an er subject to swelling;
2. Fix the cells with a fixative;
3. action of an acid on the fixed cells;
4. action of water on the cells;
5. Aspirate the fluid in which the cells swelled are; and
6. Dry the cells on the slide, the cover slip Chen or another suitable for microscopy Document.

Dem 2. Schritt kann dabei eine Präfixierung, beispielsweise mit einer kleineren Menge des Fixativs, vorgeschaltet wer den. Auch ist es möglich, dass der 2. Schritt entfällt oder nach dem 3. Schritt eingeschoben wird. Der 4. Schritt kann auch zeitverschoben vorgenommen werden, muß aber auf jedem Fall nach dem 3. Schritt erfolgen. Dabei kann das Wasser beim 4. Schritt gemäß der Variante (A) hinzugegeben werden oder gemäß der Variante (B) aus der Luft aufgenommen wer den. Die Kombination des 3. Schritts, also der Einwirkung der Säure auf die Zellen, in Verbindung mit dem 4. Schritt führt zu der zweiten Quellung der fixierten Zellen, die von der vor dem Fixieren durchgeführten ersten Quellung unab hängig ist. Das Absaugen der Flüssigkeit beim 5. Schritt kann beispielsweise durch langsames Absaugen mit einer Pipette erfolgen. The 2nd step can be prefixed, for example with a smaller amount of the fixative, upstream who the. It is also possible that the 2nd step is omitted or after the 3rd step. The 4th step can can also be done at different times, but must be done on everyone Fall after step 3. The water can in step 4 according to variant (A) or who is taken up from the air according to variant (B) the. The combination of the 3rd step, i.e. the action the acid on the cells, in connection with the 4th step leads to the second swelling of the fixed cells by the first swelling carried out before fixing is pending. Sucking off the liquid in step 5 can for example by slow suction with a Pipette done.

Die Vorrichtung zur Durchführung des erfindungsgemäßen Ver fahrens weist eine Aufnahme für die Gefäße auf, die die Proben mit den Zellen enthalten, deren Chromosomen analy siert werden sollen. Ferner ist ein Vorratsgefäß für die hypotone Lösung zur ersten Quellung der Zellen vor dem Fi xieren, ein Vorratsgefäß für die Säure und ein Vorratsgefäß für das Wasser für die zweite Quellung der Zellen nach dem Fixieren vorgesehen, sowie eine Pipettiereinrichtung, zur Zufuhr der hypotonen Lösung von deren Vorratsgefäß, zur Zu fuhr der Säure von deren Vorratsgefäß und zur Zufuhr des Wassers von dessen Vorratsgefäß in das Gefäß, in dem sich die Zellen befinden, deren Chromosomen analysiert werden sollen, wobei die Pipettiereinrichtung zugleich dazu dient, die hypotone Lösung, die Säure und das Wasser abzusaugen.The device for performing the Ver fahrens has a receptacle for the vessels that the Contain samples with the cells whose chromosomes analy should be settled. There is also a storage container for the hypotonic solution for the first swelling of the cells before Fi xieren, a storage vessel for the acid and a storage vessel for the water for the second swelling of the cells after the Fixing provided, as well as a pipetting device for Feed the hypotonic solution from its storage vessel to the Zu drove the acid from their storage vessel and to the feed of the Water from its storage vessel into the vessel in which the cells are located whose chromosomes are analyzed the pipetting device also serves to to aspirate the hypotonic solution, the acid and the water.

Falls ein Fixationsschritt mit einem gesonderten Fixativ durchgeführt wird, weist die erfindungsgemäße Vorrichtung ferner ein Vorratsgefäß für das Fixativ auf, wobei die Pipettiereinrichtung so ausgebildet ist, dass sie das Fixa tiv dem Gefäß zuführt, in dem sich die Zellen befinden, de ren Chromosomen analysiert werden sollen, ferner derart, dass mit ihr das Fixativ nach dem Fixierschritt abgesaugt werden kann.If a fixation step with a separate fixative is carried out, the device according to the invention also a storage vessel for the fixative, the Pipetting device is designed so that it fixa tiv feeds into the vessel in which the cells are located, de chromosomes are to be analyzed, further such that the fixative is suctioned with it after the fixing step can be.

Weiterhin kann die Pipettiereinrichtung derart ausgebildet sein, dass mit ihr das Kulturmedium der Zellen in dem je weiligen Gefäß vor Zugabe der isotonen Lösung abgesaugt werden kann. Schließlich kann ein Abfallbehälter vorgesehen sein, der die von der Pipettiereinrichtung abgesaugte Flüs sigkeit aufnimmt.Furthermore, the pipetting device can be designed in this way be that with it the culture medium of the cells in each aspirated vessel before adding the isotonic solution can be. Finally, a waste container can be provided be the river sucked off by the pipetting device absorbs liquid.

Die Zufuhr der verschiedenen Flüssigkeiten zu den Gefäßen, die die Zellen enthalten, deren Chromosomen analysiert wer den sollen, und das Absaugen der einzelnen Flüssigkeiten aus diesen Gefäßen erfolgt mit wenigstens einer Pumpe, die an die Pipettiereinrichtung angeschlossen ist. Damit kann die Geschwindigkeit, Zeit und Menge der jeweils zuzuführen den Lind abzusaugenden Flüssigkeit genau eingestellt werden können. Die Pumpe kann auch durch eine andere Flüssigkeits fordereinrichtung, z. B. Perfusoren, gebildet sein.The supply of the various liquids to the vessels, that contain the cells whose chromosomes are analyzed and the suction of the individual liquids from these vessels is carried out with at least one pump is connected to the pipetting device. So that can the speed, time and amount of each feed the liquid to be aspirated can be set precisely can. The pump can also run through another liquid demand facility, e.g. B. perfusors.

Die erfindungsgemäße Vorrichtung weist ferner eine Steuer einheit auf, die entsprechend der Zahl der aufzuarbeitenden Proben die Zufuhr und die Absaugung der Flüssigkeiten mit der Pipettiereinrichtung zeitlich getaktet steuert. Die Steuereinheit bestimmt zugleich, ob die Aufarbeitung bei spielsweise bereits mit dem Absaugen des Kulturmediums oder erst später mit dem Absaugen z. B. des Fixativs beginnen soll. Damit wird ein Einstieg in der Aufarbeitung auf un terschiedlichen Ebenen gewährleistet.The device according to the invention also has a tax unit based on the number of refurbished items Samples the supply and suction of the liquids controls the pipetting device timed. The Control unit also determines whether the refurbishment at for example with the aspiration of the culture medium or only later with the suction z. B. the fixative should. This is an entry into the processing on un different levels guaranteed.

Die Steuereinheit kann eine z. B. optische oder akustische Anzeige betätigen. Durch diese Anzeige kann angezeigt wer den, welche Probe fertig aufgearbeitet ist, gegebenenfalls können auch die einzelnen Schritte bei der Aufarbeitung der jeweiligen Probe angezeigt werden.The control unit can e.g. B. optical or acoustic Press the display. This display shows who which sample has been processed, if necessary can also take the individual steps in working up the respective sample are displayed.

Die Aufnahme für die Gefäße für die einzelnen Proben kann durch eine tablettartige Platte gebildet sein. Die Gefäße können beispielsweise durch Kulturgefäße, wie Petrischalen, gebildet sein oder durch den Objektträger, das Deckgläschen oder eine sonstige Unterlage, die für die mikroskopische Chromosomenanalyse verwendet wird. Im letzteren Fall kann die tablettartige Platte entsprechende Halter oder Vertie fungen zur Befestigung dieser Unterlagen aufweisen.The receptacle for the vessels for the individual samples can be formed by a tray-like plate. The vessels can, for example, by culture vessels such as petri dishes, be formed or by the slide, the cover slip or any other surface that is suitable for microscopic Chromosome analysis is used. In the latter case the tray-like plate corresponding holder or recess have instructions for attaching these documents.

Ferner kann eine Einrichtung vorgesehen sein, mit der das Gefäß, in der sich die Probe mit den Zellen befindet, deren Chromosomen analysiert werden sollen, also z. B. die Petri schale oder der Objektträger schräg positioniert gehalten werden kann, um die Restflüssigkeit besser ablaufen zu las sen, insbesondere die Restflüssigkeit auf dem Objektträger oder der sonstigen für die Mikroskopie geeigneten Unterlage zur Trocknung der Zellen.Furthermore, a device can be provided with which the Vessel in which the sample with the cells whose Chromosomes should be analyzed, e.g. B. Petri dish or the slide is held at an angle can be read to allow the residual liquid to drain better sen, especially the residual liquid on the slide or any other surface suitable for microscopy for drying the cells.

Die Steilheit der Schrägstellung kann je nach Luftfeuchte und -temperatur entsprechend durch die Steuereinheit ge zielt gewählt werden, so oft die Zeit für die Trocknung gleichgehalten werden kann, was zu qualitativ einheitlichen Metaphasenplatten führt.The slope of the incline can vary depending on the air humidity and temperature accordingly by the control unit ge aims to be chosen as often as the time for drying can be kept equal, resulting in qualitatively uniform Leads metaphase plates.

Die erfindungsgemäße Vorrichtung kann halbautomatisch oder vollautomatisch ausgebildet sein. Bei der halbautomatischen Ausführungsform wird die Pipettiereinrichtung von einem Ge fäß zum anderen per Hand bewegt und entsprechend fixiert; bei der vollautomatischen Ausführungsform erfolgt die Bewe gung der Pipettiereinrichtung von einem Gefäß zum anderen durch die Steuereinheit dreidimensional gesteuert automa tisch.The device according to the invention can be semi-automatic or be fully automated. With the semi-automatic Embodiment is the pipetting device from a Ge barrel moved to the other by hand and fixed accordingly; in the fully automatic embodiment, the movement takes place transfer of the pipetting device from one vessel to another Automa. three-dimensionally controlled by the control unit table.

Nachstehend ist die erfindungsgemäße Vorrichtung anhand der Zeichnung näher erläutert, deren einzige Figur schematisch eine Ausführungsform der Vorrichtung in teilweise perspek tivischer Wiedergabe zeigt.The device according to the invention is described below with reference to FIG Drawing explained in more detail, the only figure schematically an embodiment of the device in partial perspective tivic playback shows.

Danach ist auf einer tablettartigen Platte 1 eine Vielzahl von Gefäßen 2 angeordnet, die die Proben mit den Zellen enthalten, deren Chromosomen analysiert werden sollen.Then a plurality of vessels 2 are arranged on a tray-like plate 1 , which contain the samples with the cells whose chromosomes are to be analyzed.

Die Vorrichtung weist eine Pipettiereinrichtung 3 auf, von der in der Zeichnung der Pipettierkopf 4 und die Pipette 5 zu sehen sind. Der Pipettierkopf 4 mit der Pipette 5 ist, wie durch das Achsenkreuz dargestellt, dreidimensional be wegbar, und zwar gesteuert von der Steuereinheit 6. Die Pipette 5 ist über einen Schlauch 7 an eine Pumpe 8 ange schlossen, die mit einer Ventil- oder Umschalteinrichtung 9 verbunden ist, durch die die Pipette 5 mit dem Vorratsbe hälter 10 für die erste isotonische Lösung, den Vorratsbe hälter 11 für das Fixativ, den Vorratsbehälter 12 für die Säure und den Vorratsbehälter 13 für das Wasser oder die zweite isotone Losung zur Zufuhr der entsprechenden Flüs sigkeit zu dem Jeweiligen Gefäß 2 verbindbar ist, und zwar gesteuert von der Steuereinheit 6.The device has a pipetting device 3 , of which the pipetting head 4 and the pipette 5 can be seen in the drawing. The pipetting head 4 with the pipette 5 is, as shown by the axis cross, three-dimensionally be movable, namely controlled by the control unit 6 . The pipette 5 is connected via a hose 7 to a pump 8 , which is connected to a valve or switching device 9 , through which the pipette 5 with the reservoir 10 for the first isotonic solution, the reservoir 11 for the fixative, the reservoir 12 for the acid and the reservoir 13 for the water or the second isotonic solution for supplying the corresponding liquid to the respective vessel 2 can be connected, specifically controlled by the control unit 6 .

Die Ventileinrichtung 9 ist so ausgebildet, dass bei Saug betrieb der Pumpe 8 die von der Pipette 5 aus dem jeweili gen Gefäß 2 abgesaugte Flüssigkeit einem Abfallbehälter 14 zugeführt wird. Mit 15 ist eine Anzeigeeinrichtung bezeich net, die an die Steuereinheit 6 angeschlossen ist. Die Steuereinheit 6 steuert zugleich die Pumpe 8 und die Um schalteinrichtung 9. Die Anzeigeeinrichtung 15 kann z. B. eine optische Anzeige aufweisen, die anzeigt, welche Proben fertig präpariert sind. Die Pumpe 8 kann auch durch eine andere Flüssigkeitsfördereinrichtung, z. B. Perfusoren, er setzt sein.The valve device 9 is designed such that, when the pump 8 is in suction operation, the liquid drawn off by the pipette 5 from the respective vessel 2 is fed to a waste container 14 . With 15 a display device is referred to, which is connected to the control unit 6 . The control unit 6 simultaneously controls the pump 8 and the switching device 9 . The display device 15 may e.g. B. have an optical display that shows which samples are ready prepared. The pump 8 can also by another liquid delivery device, for. B. Perfusors, he sets his.

Claims

1. A process for the preparation of cells in division for microscopic chromosome analysis, in which a hypotonic solution is allowed to act on the cells in order to swell the cells, the cells are fixed and the fixed cells are dried on a surface suitable for microscopy, characterized in that that after the action of the hypotonic solution and the fixative before drying and regardless of the drying process, the cells are treated with an acid that is not mixed with a liquid that has a lower boiling point than water, and water (A) either by adding water or (B) is allowed to act by absorbing water from the air in order to subject the cells to a second swelling which is independent of the first swelling before fixation.

2. The method according to claim 1, characterized in that the cells at the same time fi by the action of the acid be fixed.

3. The method according to claim 1, characterized in that after the first swelling and before exposure to the acid right or after exposure to acid and before exposure the water fixes the cells with a Fixative.

4. The method according to any one of the preceding claims characterized by that after the second swelling and the liquid before drying the cells is removed.

5. Device for performing the method according to one of the preceding claims, characterized by a receptacle for vessels ( 2 ) containing the samples with the cells with the chromosomes to be analyzed, a storage vessel ( 10 ) for the hypotonic solution for the first swelling of the cells before fixing, a storage vessel ( 12 ) for the acid and a storage vessel ( 13 ) for the water for the second swelling of the cells and a pipetting device ( 3 ) which can be moved into the vessel ( 2 ) with the respective sample and for supplying the isotonic Solution from the storage container ( 10 ), the acid from the storage container ( 12 ) and the water from the storage container ( 13 ) to the respective vessel ( 2 ) and for sucking off the hypotonic solution, the acid and the water from the respective vessel ( 2 ) is formed.

6. The device according to claim 5, characterized in that a storage vessel ( 11 ) is provided for a fixative and the pipetting device ( 3 ) for supplying the fixative from the storage vessel ( 11 ) to the respective vessel ( 2 ) and for sucking off the fixative and / or the culture medium of the cells and / or the liquid is formed from the respective vessel ( 2 ) before drying.

7. The device according to claim 5 or 6, characterized in that a waste container ( 14 ) is provided for receiving the aspirated liquid.

8. Device according to one of claims 5 to 7, characterized in that a control unit ( 6 ) is provided for the temporally clocked supply and suction of the respective liquid.

9. The device according to claim 8, characterized in that the control unit ( 6 ) actuates a display ( 15 ).

10. Device according to one of claims 5 to 9, characterized in that the receptacle for the vessels ( 2 ) has a tray-shaped plate ( 1 ).

11. The device according to one of claims 5 to 10, characterized in that the pipetting device ( 3 ) is designed such that it is carried out by the control unit ( 6 ) after the preparation of the cells of a vessel ( 2 ) to the next vessel ( 2 ) can be moved automatically.

12. The device according to one of claims 5 to 11, characterized characterized that a facility is provided with which the vessels can be tilted to to drain the fluid from the vessels where with the slope of the inclination according to the Humidity and / or temperature by the control unit is adjustable.