DE1617510A1 - Verfahren zur Gewinnung wachstums- und stoffwechselfoerdernder niedermolekularer Substanzen - Google Patents
Verfahren zur Gewinnung wachstums- und stoffwechselfoerdernder niedermolekularer SubstanzenInfo
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Description
Verfahren zur Gewinnung Wachstums- und Stoffwechselfördernder
niedermolekularer Substanzen. .; ;
In der deutschen Patentschrift; 107688$ wird ein Verfahren zur
Gewinnung injizierbarer atöiungsfOrdernder Wirkstoffe aus Blut
beschrieben. Wach diesem Verfahren wird aus defibriniertem
Blut oder FrA&onen hieraus, wie z.B, Blutzellen oder Blutplasma
von Schlachttieren, insbesondere junger im RES.aktiver Kälber
oder solcher Schlachttiere, die nach dent deutschen Patent
1017744 in einen Zustand veränderter iüctivität übergeführt
wurden, ein Extrakt hergestellt, dessen atanungsfordernde Wirkung
in der Warburg-Apparatur an Mitochondrien oder Leber-Komogenaten
nachgewiesen werden kann» Eine fraktionierte Enteiweißung des Extraktes wird mit aliphatischen Alkoholen der Reihe 'C-. bis C4
oder mit Säuren durchgeführt. Die Abtrennung der höher molekularen
Bestandteile geschieht mittels Öialyse gegen Wasser bzw.
verdünnten Alkohol. Das so erhaltene Öialysat wird gegebenenfalls
von den verwendeten organischen Lösungsmitteln befreit und auf eine Konzentration von 30-60 mg Trockensubstanz pro ml
gebracht.
Es wurde gefunden, daß die Ultrafiltration von hämolysierten
Blutkörperechen von Blut junger Tiere, z.B. von Kälbern, Jüngschafen
oder Jungziegen, aber auch von Blut menschlicher Neugeborener, wie es bei der Austauschtransfusion anfallt, zu einem
Produkt führt, das nach Abtrennung unwirksamer Begleitstoffe
(z.B. Salze, freie. Aminosäuren, ete.) mittels lonenaustauscher-
oder Abeorptionssäulen, z.B. Ionenaustauscher auf Zellulose-,
Dextranr oder Harzbasis sowie Hydroxyl-Apatit und/oder präparativar
Hochspannungselektrophorese chemisch reine Substanzen mit hoher StoffwechselaktivitätssteigeEung zu isolieren gestattet.
Auen aus dan Blutkörperchen erwachsener Tl era f £■. D. Rinder,
la«aar. »ich eindeutig Charakteriele/ifc^xa. mit den oben genannten
nahe verwandte Substanzen isolieren« die offenbar alterungsbedingtG
^kömmliffig© der vorgenannten Substanzen
Absorptiönsmaximä im Bereich von 290 *· 298 aufweisen und
aus denen durch geeignete chemische oder biochemische'Verfahren
die ursprüngliche Substanz halbsynthetisch dargestellt
werden Kann*
Die genannten Substanzen sind charakterisiert durch ihr W-Absorptionsbzw.
infrarot-Spektrum, durch Röntgenspsktrograrran
sowie durch andere physikalisch-chemische Sigfeasehaften,
wie sie mit Elektrophorese, Chromatographie oder Analyse in der Ultrazentrifuge , etc. bestimmbar sind«
Die Messung der Aktivität der erfindungsgemäß isolierten Produkte
erfolgt mittels der Warburg-Apparatur an einfachen Atmungs~
modellen, vorzugsweise an obligat aeroben Bakterien bzw. an
der Wachstumsrate obligat aerober Mikroorganismen {Bakterien^
Hefen, etc.) oder an der Wachstumsrate von Pflanzenkeimlingen.
Die erfingdungsgemäß erhaltenen Produkte sollen industrieller
Auswertung zugeführt werden, z.B. zur Förderung ^on Hydroponikkulturen,
Ermöglichung des Getreideanbaues unter klimatisch ungünstigen Verhältnissen, Erhöhung der Ertragsrate von Nutzpflanzen
und in der Tierzucht sowie therapeutische Anwendung
bei schweren katabolisehen Erkrankungen bei Mensch und Tier;
ferner zur Steuerung des Abbaues oral oder parenteral verabreichter Stoffe für Ernährungs- oder therapeutische Zwecke.
Die Substanzen sollen- weiterhin Verwendung finden zur Verbessessigi
des Wachstums von Zellen tierischer und pflanzlicher Herkunft
in Kulturen sowie zur Verbesserung der Uber-lßbenszeit isolierter,
- zur Transplantation bestimmter Gewebe und Organe oder
auch Einzelzellen, z.B. Sperma.
AusfUhrungsbeispiele:
* Aus 1 Liter frischen Kälberblutes wird durch mehrmaliges
Waschen mit iso- oder hypertonischer Kochsalzlösung ein Blut körperchensediment
hergestellt. Die hierbei im Durchschnitt anfallenden 400 ml Blutkörperchensediment werden mit wenigstens
800 ml destilliertem Wasser versetzt und dar Ultrafiltration
in einem Hochdruckmembranfilter mit einer Durch-
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!Lässigkeit für Moleküle bis zu IO GOO Molekulargewicht unterworfen.
Filtriert wird bei einem Druck bis zu 30 Atü, das Filtergut muß dabei kräftig gerührt werden.
Der Filterrückstand enthält noch aktive Substanzen, er wird
jedoch aus Ökonomischen Gründen nicht weiter zur Gewinnung
der erfindungsgemäßen Produkte verwendetι er kann aber als
Aüsgangsmaterial für andere Produkte dienen, z.B. zur Gewinnung
spezifischer Antigene.
Das so gewonnene Ultrafiltration etwa 1000 ml wird auf l/lO
seines Volumens durch Vakuumdestillation bei max. +1O0C konzentriert und anschließend der trägerfreien präparativen
Hochspannungselektrop"horese unter Verwendung vorzugsweise
flüchtiger organischer Puffer vom pH-Bereich 4,0 - 10,0,
z.B. Triäthylamin-Essigsäure oder-Ameisensäure bzw. Äthylen-Diamin-Ameisensäure
oder -Essigsäure unterworfen, unter Zusatz von gleichen Teilen Puffer/f zum Filtrat. Die elektrophoretische
Auftrennung des Filtrates erfolgt unter den angegebenen Bedingungen bei einer Spannung von vorzugsweise 2300 V und
200 mAmp. Die während der Trennung einzuhaltende Temperatur
hängt u.a. von der Belastbarkeit der Trennkammer ab, kann sich jedoch im Bereiche von -§-2 bis +40° C bewegen.
Die erhaltenen Elektrophoserefraktionen werden vorzugsweise
nach ihrem UV-Absorptionsspektrum bestimmt. Je nach verwendetem Puffer und pH-^Jert während der Trennung (spezifische
Salzbildungen) v/erden Substanzen mit Absqprtionsmaxima im
Bereich von 232-248, 252-262 und 275-29erhalten. Primär
erfindungsgemäß aktive Substanzen finden sich unter geeigneten Bedingungen vor allem im kurzwelligen Bereich.Eine typische,
schnellwandernde aktive Fraktion hat z.B. ein Absorptionsmaximum bei pH 7,0 von 246, im stark sauren Bereich bei
und im stark alkalischen Bereich bei 290^,*,
Durch Einengen mittels Gefriertrocknung oder durch Vakuumdestillation
bei Temperaturen unter 20° C werden die Substanzen angereichert und die flüchtigen Puffer substanzen entfernt. Nach
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Einstellen geeigneter Konzentrationen und gegebenenfalls
nach Sterilfiltration sind die so gewonnenen Substanzen für die erfindungsgemäßen Anwendungen geeignet.
2.) Eine automatische Herstellungsmethode der erfindungsgemäßen Substanzen'ergibt sich in folgender Weise unter Ausnutzung
der oben genannten Grundprinzipien der elektrophoretischen
Auftrennung und der Trennung nach Molekülgröße durch Membranfilters
Das unter 1) beschriebene Blutkörperchenlysat wird durch eine mehrkammrige'Hochspannungselektrodialyse-Anlage umgepumpt.
Die Außenzellen der Anlage enthalten das Dialysiergut sowie
je eine Kathode; sie werden durch zwei Membranen von der Innenzelle
abgeschlossen, welche die Anode enthält und von destilliertem
Wasser durchspült wird. Als Membranen dienen vorzugsweise Ultrafilter mit einer Moleküldurchlässigkeitfür Molekulargewichte
bis zu Io ooo.
Wird die Elektrodialysieranlage nicht mit Hämolysat sondern
mit einem Ultrafiltrat aus einem Lysat beschickt, so können
statt der Ultrafiltermembranen in der Dialysekammer auch
Ionenaustauscher-membranen verwendet werden.
In den Kreislauf der Innenzelle der Elektrodialyseänlage kann eine Vakuumdestillationsanlage eingeschaltet und im Destillier
kolben die gewonnenen Substanzen angereichert werden, während das Kondensat wieder durch die Innenzelle der Elektrodialyseänlage
fließt und neue Substanzen aufnimmt.
Eine automatische Steuerung der Gesamtanlage kann mittels eines Durchflußphotometers erfolgen, das in den Auslauf der
Innenzelle der Hochspannungsdialysieranlage geschaltet ist. Damit kann automatisch die Absorption im Absorptionsmaximum
im UV-Bereich der kritischen Substanzen kontrolliert werden und als Signal zur automatischen Steuerung von Durchlaufgeschwindigkeit
etc. dienen, um zu einer maximalen bzw. wirtschaftlichen Ausnutzung des Ausgangsmaterials zu gelangen.
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Das in der Innenzelle der Hochspannungs-Elektrodialyseanlage
bzw« im nachgeschalteten Vakuuradestillationskolben angereicherte eiweißfreie Rohmaterial wird, bezogen auf das Ausgangsmaterial
(Blutkörperchenlysat oder Ultrafiltratdavon), auf
mindestens 1/30 des Volumens in der Vakuumdestillation eingeengt, so daß ein dickflüssiges, gelbweißes Produkt entsteht.
Die. erfindungsgemäßen Substanzen werden aus diesem Rohkonzentrat
in Äthanol aufgenommen*indem das Rohkonzentrat mit dem
5-fachen Volumen Äthanol verrührt wird. Dabei gehen die erfindungsgemäßen
Substanzen im Äthanol in £*b' Lösung, während
zunächst nicht verwendete Begleitsubstanzen einschließlich
anorganischer Salze etc. sich absetzen bzw. abgeschleudert
werden. Die erhaltene wasserklare, gelbliche alkoholische
Lösung ist das gereinigte Rohprodukt, das nur noch wenige,
definierbare Substanzen enthält.
Zur erfindungsgemäßen Anwendung wird das Produkt vorzugsweise
in Wasser Übergeführt, indem der Alkohol durch Vakuumdestillation
bei Temperaturen möglichst unter 2O0C entfernt wird,
bis ein sirupartiges Produkt entsteht, das voll wasserlöslich ist. Die Konzentration der wässrigen Lösung an den
wesentlichen Produkten wird UV-spektrophotoraetrisch bei einer
Wellenlänge von, 246 ψφ eingestellt. Für die meisten erfindungsgemäßen
Anwendungen reicht der so erhaltene Reinheitsgrad der Substanzen aus. Eine weitere Aufarbeitung bringt
für die meisten kommerziellen Anwendungsgebiete keine Vorteile,
während die exakte, quantitative Bestimmbarkeit der aktiven
Substanzen bereits gewährleistet ist.
Eine für therapeutische Zwecke verwendbare Präparation der
erfinrfdungsgemäßen Substanzen muß eine Konzentration aufweisen,
die bei 20-facher Verdünnung mit destilliertem Wasser, gemessen gegen destilliertes Wasser, mindestens eine Extinktion
von 0,6 bei einer Schichtdicke von 5 mm ergibt, gemessen
bei 246
für spezielle Zwecke können die in dem oben genahnten Produkt
enthaltenen Einaelsubstanzen isoliert werden. Dies erfolgt
vorzugsweise durch Verwendung von niederen Alkoholen, wie
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z.B. iso-Butanol. Das wässrige Konzentrat wird mit dem
doppelten Volumen iso-Butanol kräftig gemischt und bei tiefen
Temperaturen oder in der präparativen Ultrazentrifuge bei
-20 - -30° G in die wässrige und die alkoholische Phase getrennt.
Die untere» gelbliche wässrige phase enthält eine erfindungsgemäße Substanz mit einem Absorptionsmaxiittum bei
245 wj*f eine zweite erf indungsgemäSö Substanz wird erhalten*
wenn der iso-Butanolüberstand bei -80° C ausgefroren und die
entstehende weiße Trübung abzentrifugiert wird. Dieses weiße
Sediment wird im Vakuum vom iso-Butanol befreit und ist dann
voll wasserlöslich. Das Absorptionsmaximum dieser Substanz
liegt bei 247
Eine dritte Substanz wird erhalten indem die genannte:ieo-Butanolfraktion
nach Entfernung der 247-Fraktion im Vakuum eingedampft wird. Es verbleibt eine walße, wasserlösliche
Substanz mit einem Absorptionsmaximum bei 256 mß* Zwei weitere,
optisch inaktive Verunreinigungen warden nicht weiter verwertet.
3.) Eine besonders hohe Konzentration der erfindungsgemäSen Produkte
wird dadurch erhalten, daß das Ausgangsbiut in einer
starken Verdünnung mit destilliertem Wasser hämolysiert wird,
wobei ein Teil Blut mit mindestens 20 Teilen Wasser versetzt
wird. Dieses sehr dünne Hämolysat wird einem geeigneten Sprühtrocknungsverfahren
(z.B. im Sprühtrocknungsturm) unterworfen; dabei entsteht ein Trockenpulver mit außerordentlich
großer Oberfläche und feinster Teilchengröße, das anschlieeiend
der spezifischen patentgerechten Extraktion mit Alkoholen unterworfen werden kann. Dazu wird das Trockenpulver
direkt in wasserfreies Äthanol verrührt» wobei die erfindungsgemäßen
Substanzen im Äthanol in Lösung gehen. Nach Abschleudern und/oder Abfiltrieren der unlöslichen Bestandteile
wird ein eiweißfreies Konzentrat der @rflndungsgemäßen
' Substanzen gewonnen» aus dem nach Abdampfen de* Alkohols dia
lösung der Wirkstoffe mit photometriach eingestellter
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Claims (1)
- !Belegexemplar• . , - ' } Darf nicht geändert werden Patentansprüche? »— -—Verfahren zur Herstellung niedermolekularer Substanzen aus Blut zur Förderung von Wachstum und Stoffwechsel bei Pflanzen und Tieren sowie zur therapeutischen Anwendung bei schweren katabolischen Erkrankungen bei Menschen und Tieren, dadurch gekennzeichnet, daß Blut junger Tiere einer Ultrafiltration unterworfen wird, das Ultrafiltrat mittels Ionenaustauscher- oder Absorptionssäulen und/oder präparativer Hochspannungselektrophorese in Ein zelfcakt ionen aufgetrennt wird und die durch verschiedene physikalisch-chemische Eigenschaften, wie z.B. üV-Sbsorptioris^ bzw. Infrarot Spektrum, durch Röntgenspektrografie durch Elektrophorese, Chromatographie oder Ultrazentrifugenanalyse charakterisierte Substanzen isoliert werden .Unteranspruch 1) ·Verfahren, dadurch gekennzeichnet, daß ein Blutkörperchen— sediment aus frischem Kälberblut mit mindestens der doppelten Menge destillierten Wassers versetzt und der Ultrafiltration bei mindestens 30 Ätü unterworfen wird.Unteranspruch 2)Verfahren nach Unteranspruch 1), dadurch gekennzeichnet, daß das Ultrafiltrat zur weiteren Reinigung mit vorzugsweise flüchtigen organischen Puffern im pH-Bereich zwischen 4,0 und 10,0 versetzt und elektrophoretisch aufgetrennt wird.Verfahren nach 2), dadurch gekennzeichnet, daß die elektrophoretische Auftrennung bei einer Spannung von vorzugsweise 2300 V und 200 mAmpr in einem Temperaturbereich von 2-40° C erfolgt.Verfahren nach Hauptanspruch, dadurch gekennzeichnet, daß ein Blutkörperchenhämolysat oder ein Ultrafiltrat daraus diner Hoehspannungselektrodialyse tinterworfen >lrd, wobei als Membranen vorzugsweise Ultrafilter oder Ionenaustauschermembranen verwendet werden und eine automatische Steuerung '10 9 81 Vi 18 8 3 ^««»jal » ^ _der Anlage mittels Durchflußphotometer erfolgen kann.Verfahren nach Hauptanspruch, dadurch gekennzeichnet, daß das Blut junger Tiere einer starken Verdünnung unterworfen und in einem Sprühtrocknungsturm in ein Produkt sehr kleiner Korngröße und damit außerordentlich großer Oberfläche übergeführt wird, das dem Verfahren nach 2) bzw. der direkten Extraktion im wasserfreien Alkohol unterworfen wird.Verfahren, dadurch gekennzeichnet, daß die Erythrozyten von erwachsenen Tieren und Menschen dem erfindungsgemäßen Verfahren unterworfen w.erden und das hierbei anfallende Rohprodukt einer weiteren biologischen oder sonstigen synthetischen Veränderung unterworfen werden kann.Verfahren, dadurch gekennzeichnet, daß die erfindungsgemäßen Substanzen für therapeutische Zwecke in einer Konzentration ampulliert werden, die bei den gegebenen Bedingungen eine Extinktion von mindestens 0,6 ergibt.In Betracht gezogene Druckschriften:Deutsche Patentschriften Nr. 1076888, 1017744.20. April 1966 Wolfgang Helmbold, Heidelberg10 98 i 1/18 8 3
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK211867A DK122854B (da) | 1966-04-20 | 1967-04-19 | Fremgangsmåde til udvinding af et lavmolekylært vækst- og stofskiftefremmende stof fra blod. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DEH0059173 | 1966-04-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE1617510A1 true DE1617510A1 (de) | 1971-03-11 |
Family
ID=7160436
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19661617510 Ceased DE1617510A1 (de) | 1966-04-20 | 1966-04-20 | Verfahren zur Gewinnung wachstums- und stoffwechselfoerdernder niedermolekularer Substanzen |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | AT274240B (de) |
| BE (1) | BE697283A (de) |
| DE (1) | DE1617510A1 (de) |
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| GB (1) | GB1188656A (de) |
| NL (1) | NL6705559A (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0036514A3 (en) * | 1980-03-15 | 1982-06-09 | Hoechst Aktiengesellschaft | Prostaglandin stabilizing substance, composition containing prostaglandin and such a stabilizing substance, and process for preparing the substance and the composition |
-
1966
- 1966-04-20 DE DE19661617510 patent/DE1617510A1/de not_active Ceased
-
1967
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- 1967-04-20 BE BE697283D patent/BE697283A/xx unknown
- 1967-04-20 GB GB08146/67A patent/GB1188656A/en not_active Expired
- 1967-04-20 NL NL6705559A patent/NL6705559A/xx unknown
- 1967-04-20 FI FI671170A patent/FI50835C/fi active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0036514A3 (en) * | 1980-03-15 | 1982-06-09 | Hoechst Aktiengesellschaft | Prostaglandin stabilizing substance, composition containing prostaglandin and such a stabilizing substance, and process for preparing the substance and the composition |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB1188656A (en) | 1970-04-22 |
| FI50835C (fi) | 1976-08-10 |
| NL6705559A (de) | 1967-10-23 |
| FI50835B (de) | 1976-04-30 |
| BE697283A (de) | 1967-10-20 |
| AT274240B (de) | 1969-09-10 |
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