DE1492113A1 - Herstellung und Gewinnung eines neuen Antibioticums - Google Patents

Description

Herstellung und Gewinnung eines neuen Antibiotikums

Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines neuen Antlbiotloums.

Die vorliegende Erfindung betrifft daher die QewInnung eines neuen Antibioticum«, daa im folgenden mit der Nummer 8 036 R.P. bezeiohnot wird. Dieses neue Produkt 1st insbesondere aufgrund seiner erhöhten antibakteriellen Wirksamkeit gegen die Orana-positiven Keine wirkeaa». Ba kann aus künstlichen ZUohtungsmedlen eines In nachfolgenden vollständiger identifizierten Mikroorganismus erhalten werden, der den Genus Streptomyoes angehört und mit "Streptonyoea oanadlensls" beselohnet wird·

Daa Antlblotloun 8 036 R.P. lat In Wasser sehr löslich, in DlBethylformamld, Pyridln und Bssigstture luslloh und in Xthanol, Aoeton, Chlorofom und η-Hexan wenig oder nicht lualloh.

In wässriger 1 Jfiger Lösung 1st das Antlblotloun 8 036 R. P.

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von pH 6 bis pH 10 stabil ι Lösungen behalten zumindest 90 % ihrer Aktivität nach 1 Woche bei 25*C und zumindest 70 JS nach 1 Woche bei 37⁰C bei.

Das Antibioticum 8 Ο36 R*P. ergibt negative Prüfungen bei don folgenden Reaktionen! Biuretreaktlon, Reaktionen naoh MiHon, Pauly, Adaraklewicz und Ehrlioh-Salkowsky, Reaktion mit Perrichlorid, Xanthoproteln-Reaktion, Reaktion mit Sisenalaun naoh allcallsoher Hydrolyse, Reaktionen naoh To Hens, MÖrner, Zimmermann und Bitto, Diazotierungsreaktion. Es ergibt positive Prüfungen In den folgenden Reaktionen: Reaktion mit NInhydrln (vor Hydrolyse aohwach positiv, nach saurer Hydrolyse sehr stark positiv). Reaktion naoh Mollsh, Reaktion naoh Polin-Denis, Reaktion naoh Sakaguohl naoh saurer Hydrolyse, Kallumpermanganatreaktlon vor Hydrolyse (negative Prüfung nach Hydrolyse), Reaktion mit 2,4-Dinitrophenylhydrazln naoh saurer Hydrolyse , Reaktion nach Fehling nach saurer Hydrolyse, Reaktion nach Blal, Tauber, Eleon-Morgan nach saurer Hydrolyse, Dlsone und Borenfreund, Seliwanoff-Roe, Peohmann, Reaktion mit IndolSchwefelsäure, Reaktion mit Cystein-Carbazol, Reaktion mit Kaliumferrloyanle* und Ferriohlorld · Es gibt keine Farbreaktion mit konzentrierter Natronlauge, konzentrierter Schwefelsäure, konzentrierter Salzsäure und konzentrierter Phosphorsäure·

Das Antibioticum 8 036 R.P. 1st eine starke Säure, deren duroh potent iome tr i sehe Titration alt Natronlauge gemessenes Neutral-

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äquivalent 775 beträgt (pKa « 4,45). Sein Molekulargewicht scheint über 5000 zu liegen, da es duroh eine Membrane aus regenerierter Cellulose (Art Cellophan) nicht dialysiert.

Da β Antibioticum 8 036 R. P. enthält Kohlenstoff, Viasseretoff, Sauerstoff, Stickstoff und Phosphor. Seine Elementarzusammensetzung 1st die folgende! C - 47,9 %, H - 7,1 %, 0 - 38,3 % (duroh Differenz), N - 4,5 %, P - 2,2 %.

Es besitzt die nachfolgend angegebenen physikalischen Eigenschaften ι

Aussehen: weißes amorphes Pulver

Schmelzpunkt ι 235 bis 236⁰C unter Zersetzung (Braunwerden ab i80^eC)

Ultraviolett-Spektrum: (bestimmt mit einer Lösung mit 50 mg/1 in Wasser, bei 1 om Dicke)! kein charakteristisches Maximum, der Absorptionskoeffizient B \ _Qn steigt von 0 auf 40 im Intervall von 400 bis 210 nm.

Infrarot-Spektrums (Die Bestimmung wurde an mit Kaliumbromid verprefitem Produkt vorgenommen)!

Dieses Spektrum ist in der beigefügten Figur 1 wiedergegeben, in der als Abszisse einerseits die Wellenlängen in Mikron (unterer MaOstab) und andererseits die Wellenzahlen in cm. (oberer MaBstab) und als Ordinate die optischen Diohten aufge*

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tragen sind.

In der naohrolgenden Tabelle I sind die Hauptbanden der Infrarotabeorption für dieses Produkt wiedergegeben.

Tabelle I

3400	88t	1380	8t	945	Sch
2930	8t	1.335	St ι	880	Bt
1725	8t	1225	St	855	Soh
I66O	8t	1150	Sch	815	m
1650	8t	1100	Soh	775	Sch
1550	at	1070	88t	755	Soh
1445	Son	1032	Soh
1400	Sch	970	8t
		set	« sehr stark
		St	- stark
		m	η mittel
		Soh
- Sohulter

Das Natriumsalz des Antlbiotioume 8 036 R. P. hat die folgende Elementarzusammeneetzung t

C m 45,3 %, H - 6,7 %. 0 - 38,55 % (durch Differenz), N - 4,2 %, P - 2,1 *, Na - 3.15 *.

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Ba zeichnet eich durch die folgenden physikalischen Eigenschaften au« ι

Aussehenι weißeß amorphes Pulver Ultraviolett-Spektrum (bestimmt mit einer Lösung mit 50 mg/l In Wasser bei einer Dicke von 1 cm)» kein charakteristisches Maximum, der Absorptlonakoofflzient B-J_0n, steigt von 0 auf 60 Im Intervall von 400 bis 210 mn. Infrarot-Spektrum: (die Bestimmung wurde an mit Kaliumbromid

verprefitem Produkt vorgenommen)!

Dieses Spektrum 1st in der beigefügten Figur 2 wiedergegeben« In der als Abszisse einerseits die Wellenlängen in Mikron (unterer Maßstab) und andererseits die Wellenzahlen in om* (oberer Maßstab) und als Ordinate die optisohen Dichten aufgetragen sind.

In der nachfolgenden Tabelle II alnd die Hauptbanden der , Infrarotabaorptlon für dieses Produkt angegeben.

Tabelle II

3430 sat 1455 Sch 968 st

2940 st 1330 st 943 et

1725 et 1238 et 890 Soh

I66O 8t 1150 Soh 882 m

1645 st 1100 Soh 855 a

1610 et 1070 sat 820 ■ 1555 Soh Q ₀ ^lg4^8yQh - g 776 et

_BAD

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set m sehr stark st « stark m - mittel Sch « Schulter

Die Analyse durch Chromatographie an Papier bei 25*C unter aufsteigender Arbeitswelse und die anschließende Bewertung der Chromatogramme durch Diffusion mit mit S. aureus beimpften Agarplatten ergibt nur einen einzigen Aktivltätsfleok bei mehreren verwendeten LtSsungsmltteleyetemen. Die erhaltenen Rf-Werte, Verhältnis der Verschiebung des Antibiotikum zur Versohlebung der Lusungsmlttelfront, sind die folgenden»

Leichte Phase des Gemlsohs η-Butanol-Eeftlgeäure-Wasser

(60 ι 40 ι 10 Volumina): Rf - 0,40

Leichte Phase des Gemische Bsslgsäurettthylester-Bsalgsäure-Wasser

(JO ι )0 ι 10 Volumina)ι Rf - 0,45

n-Propanol-Wasser (70 : 30 Volumina)ι Rf - 0,40

Keslgstturettthyleeter-Foroamld-Pyrldln (60 ι 40 : 10 Volumina):

Rf - O

Die bakterioetatlsohe Wirkung von 8 036 R.P. gegenüber einer gewiesen Zahl von Keimen wurde duroh eine der Üblicherweise su diesem Zweck angewendeten VerdUnnungsmethoden bestimmt. Für Jeden Keim wurde die kleinste Konzentration an Substanz, die unter bestimmten Bedingungen Jegllohe sichtbare Entwicklung in einer geeigneten NMhrbouillon verhindert, bestimmt. Die Ergeb-

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niese der verschiedenen Bestimmungen sind in der nachfolgenden Tabelle III zusammengestellt» in der die minimalen bokteriosta· tisohen Konzentrationen in Mikrogramm Substanz Je onr Versuohsmedium ausgedruckt sind.

T a b e 1 1 β III

minimale

Geprüfte Batet er lenorcanisraen bakterlostatisohe- Konzontrationen *) Staphylococcus aureus. Stamm 209 P-ATCC 6538 P 0,95 Staphylococcus aureus. Stamm 133

(Institut Pasteur) 0,50

Staphylococcus aureus. Stamm Smith 1 Saroina lutea - ATCC 93*1 70

Streptococcus faecalls - ATCC 9790 ^>250 Streptococcus virldana (Institut Pasteur) 1,1

" pyoger.'-<s naemolyticue

(Stamm Dig 7« Institut Pasteur) 0,01

Neisneria gonorrhaeas (Λ 50 - Institut Pasteur) 0,6 Nolsserla eenlngltldls (5813 Institut Pasteur) 0,6 Diplooocous pneumonlae (Stern TIl, Institut Pasteur) 0,08

Baoillus subtllls - ATCC 6633 30 , Bacillus oereus - ATCC 6630 0,01

MyoobaoteriUB species - ATCC 607 50 Mycobaoterium para-smegmatis (A 75 - Lausanne) I60 Eaoherlchla coll - ATCC 9637 35 Shigella dysenteriae - Shiga L (Institut Pasteur) 90 Salmonella paratyphi A (Laoasse, Institut Pasteur) I65 Salmonella sohottmuelleri (parathyphl B) Fougenc

(Institut Pasteur) 70

Proteus vulgaris , Ι65 Klebelella pneumonlae - ATCC IO.O31 90 Peeudomonas aeruginosa (Stamn Bass - Institut

Pasteur) 45

Bruce11a bronohieeptloa (CN-387 - Wellcome Institut) 20 Pasteurella multooida (A 125, Institut Pasteur) 2,5 Treponema von Reiter ■■ 10

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Diese verschiedenen Bestimmungen zeigen, daß die Wirksamkeit von 8 0^6 R.P. hauptsächlich bei den Keimen auftritt, die die Färbung nach Oram aufnehmen: Seine Wirksamkeit gegen Streptocooous haemolyticus ist besonders hooh. Es ist verhältnismäßig wenig wirksam gegenüber Qram-negativen Keimen, obgleioh seine

Wirksamkeiten gegenüber Neieseria meningitidls beträchtlioh

ist sind. Es zeigt keine gekreuzte Resistenz mit den folgenden

Antibioticat Penicillin, Streptomycin, Tetracyclin, Chloramphenicol, Spiramycin, Carbomyoin, Erythromycin, Prißtinarnyoin und Novobiocin. Die Ergebnisse verschiedener Bestimmungen der bakteriostatlBchen Konzentrationen von 8 056 R.P. gegenüber verschiedenen Stämmen von Staphylococcus, die gegen eines oder mehrere der oben genannten Antlblotica eine Resistenz zeigen, sind in der Tabelle IV zusammengestellt, in der zu Verglelchszwockcn die relativen bakteriostatischen Konzentrationen ftir drei Stämme von Staphylococcus, die gegen alle diese Antibiotioa empfindlich (e) sind und in Tabelle III angegeben sind, aufgenommen wurden.

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■- 9 -

Tabelle IV

~ nvlniiiials

bnktcrj.outfi tische Geprüfte Stämme (Staphylocoocue aurauo) Konzentrationen

u 209 P-ATCC 65>3 P (β) 0,95

Siamm 209 P gegon Sp.ira~.yoin roais'cent gemacht 0,75 Stamm 209 P gegen CarbomycJ.n resistent iiomacht 0,55 Stamm 209 P gegen Pristinamycin resistent

gemacht 1

Stamm 209 P gegen Nuvobiooin reaietent gomaoht 0,30 Stamm 209 P gegen Chloramphenicol resisUmt

ßomaoht 0,40

Stamm V$} (Institut Paoteur) - (e) 0,50

Stamm Smith (e) 1

•f Stamm B, (gegen Penicillin uncl Stroiitoiuycin

^ resistant y 0,70

•f Stamm Hb (gogen Penicillin und Tetracyclin

reoiaterit ) 0,90

-f Stamm BeauJon JJ (gegen Penicillin, Streptoinyuin,
Tetracyclin und Chloramphenicol

resistant ») 0,95

> Stamm MB 1 (gegen Penicillin und Erythromycin

) 0,55

Stamm Lavault fgegcn Ponloilliä, üärythromyoin

und Spiramycin resistant tfowimht) 0,65

ι- klinisch isolierte Stämme

Die antibakterielle Wirksamkeit von 8 Ο36 R.P. wurde in vivo bei Laboratoriuraatleren bestätigt, die experimentell mit Keimen, wie beispielweise Streptokokken, Pneumokokken, Staphylokokken und Neiseeria (N. meningitidls), infiziert worden waren. Das Antibioticum hat sich als besonders wirksam bei der Maus bei Verabreichung auf suboutanem Wege erwiesen.

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Das Antibioticum booitst cine uoirr lange WlrUuncudauor, wt.u i.\v,\ eine eehr gute präventive Wlrlcür.nikeit verleiht. Diese prüvont.'.vo Wirkung wurcie bei Streptokokkeninfekti.or.en bei ri«r Maus fc;c»:'.ei:jt So wurdo beispielsweise festgestellt, daß 8 G}6 R.P. bul t-'.nar Dosis von 50 mg/kg s.o. alle Mause gegen eine intraperitonualo Infektion durch Streptokokken 1^J* Tage nach einmaliger Verabreichung des Produkte schützt. Bei einer Dosis von 2f>C iii^/lcg cc. schlitzt da3 Bunzathin-Ponicillin G Mäuso nur während 2h Stunden.

Die Toxizität von 8 0}6 R. P. wurde bei der Kaue geprllft. Die

Dosis letalis 50 # oder DLc₀ wurde bei subcutaner Verabreichung bestimmt:

* » 1 g/kg s.c.

Daa Produkt ist daher sehr wonig toxisch.

Der das Antibioticum 8 0^6 R.P. erzeugende Organismus zum Genus Streptomycets und wird mit dem Namen "Screptomyceo W oanadlensls" bezeichnet. Er vmrde im Northern Regional Researc Laboratory, Peoria, Illinois, USA unter der Nr. "HRRL 5155" hinterlegt. Er wurde aus einer in Kanada in der Provinz Quebec bei Sainte Marthe (Grafschaft Vaudreuil) entnommenen Erdprobe isoliert.

Die Isolierung wurde unter Verwendung der folgenden üblichen Methode vorgenommen:

Die entnommene Erdprobe wird in destilliertem, sterilem V/asaor

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suspendiert und die Suspension dann auf verschiedenο Konzentrationen verdUnnt. Kleine Volumina Jeder Verdünnung werden auf die Oberfläche von Petrischalen aufgebracht, die ein geelgnotes Aßar-Nährmcdlum enthalten« Nach einer Inkubation von einigem Tagen bei 26⁰C werden die Kolonien der Mikroorganismen, die man isolieren will, auf SchrHgagar versetzt, um reichlichere Kulturen zu erhalten.

Gemäß der Klassifikation von ⁿ5urgey⁽e Manual of Determinative Bacteriology", 7. Auflage (1957) für den Genus Streptomyces ^ findet man keine Beschreibung einer Species, deren ZUchtungsoharakteristlken und biochemischen Eigenschaften mit denjenißtm des das Antibioticum 8 OJ56 R. P. erzeugenden Stammes Übereinstimmen würden. Deshalb wird dieser Organismus als eine neue Species angesehen, die den Namen Streptomyces canadlensls aufgrund dos Ursprungorts erhalten hat.

Streptomyces canadiensis bildet zylindrisches Sporen mit Abmessungen von 0,4 bis 0,6/0,8 bis 1,2/4. Seine Sporenfäden sind gerade und beschreiben nur gelegentlich eine schwach gebogeno Bewegung an einem Teil ihrer Länge oder an ihrem Ende. Sie sind sehr lang und überschreiten üblicherweise eine Länge von 100//,.

Streptomyoes canadiensis weist einen sporulierten luft- ausgesetzten Teil von grau-rosa Farbe auf. Seine charakteristische Färbung 1st insbesondere auf gewissen Medien mit Stärke gut sichtbar, auf denen die Sporulation gut 1st und durch das

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Vorhandensein von Erde noon begünstigt werden kann.

Die ZUchtungsoharakteristlken und die biochemischen Eigenschaften von S.canadieneis wurden auf üblicherweise zur Prüfung deo Auosehons von Streptomycee-Stämmen verv;endeten Hühragarmedien und Nährbouillono untersucht. Die gernaohten Beobachtungen sind in der Tabelle V angegeben. Ohne besondere Angaben botreffen sie Kulturen von 2 bis 3 Wochen bei 26°C, die ein gutes Entwlclclungsetadium erreicht haben. Der größte Teil der verwendeten ZUohtunßc· medien wurde naoh den in "The Aotinomycetes", S.A. Waksman, Seite 193 bis 197« Chronica Botanica Company« WaItham, Mass., USA, 1950, angoßebenen Hezspturen hergestellt. In diesem Falle sind sie mit dem Buchstaben W, dem die Nummer, die ihnen in "The Aotlnomyoetes" zugeordnet lot, folgt, gekennzeichnet. Die Literaturstellen oder Zusammensetzungen der anderen ZUohtungomedien sind die folgenden:

Anm. A - K.L. Jones - Journal of Baoteriology, JgJ^ 142 {1949)· Anm. B - A.M. Williams und B. Ho Coy - Applied Microbiology, 1,

307 (1953).

Anm. C - W.E. Grundy u. Mitarb.- Antibiotics and Chem., 2,

4oi (19527.

Anm. D - Pepton 0,5 %_t Fleischextrakt 0,3 %, Tyrosin 0,5 Ji,

Agar 2 JG.

Anm. E - W.E. Grundy u. Mitarb.- Antibiotics and Chem. I₁

310 (I95T).

Anm. P - Anorganische Salze-Stärke-Agar - T.O. Pridham u. Mitarb· Antibiotics Annual, 1956-1957, S. 947-953.

Anm. 0 - entspricht der Re2.aptur W-I, wobei 30 g Saccharose durch 15 g Olycerin ersetzt sind.

Anm. H - Vollgelatine hergestellt nach den Angaben in "Manual of Methods for Pure Culture Study of Bacteria" - Society of American Bacteriologists, Geneva, N.Y. - 1Ic₀ - ¹O.

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BAD ORIGINAL

" ¹³ " U9211.3

Anra. I - "Manual of Method3 for Pure Culture Study of Eacteria" Sooiety of American Bacteriologists, Genova, N.Y. H₅₀ - 19. ·

Anra. J - Handelsübliches Kageriuilchpulver, naoh den Angabon des Herstellqrs angemacht.

Anm. IC - H.D. Tresner und P. Danga - Journol of Bacteriology, 26, 239-244 (1958).

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Tabelle V Kulturmedium

(D

Entwicklungsgrad

(2)

Vegetatives Mycel oder Unterseite der Kultur

(3) Luft-ausgesetzter
Teil (umfaßt Gesamtheit von Luft-ausgesetztera Kycel und
Sporulation
(4)

Lösliches Pigment

(5)

Beobachtungen und biochemische Eigenschaften

(6)

ο
ο

CD
OO
O
OO

Oi

Agar nach

Bennett (Anra.A) gut

Agar nach Emerson (W-23) gut

Maltose-Tryp- gut ton-Apcar.

(Anra.B)

Glucose-Pepton- gut Agar (W-7)

hellbraungelb. Sehr gut entwickelt

he1lbraungeIb. Sehr gut entwickelt

Braungelb,

gut entwickelt, keiner

keiner

hellgrüulieh.

Mäßig entwickelt.

braungelb, wird keinsr stellenweise grauschwSrzlieh. Gut entwickelt.

Nähr-Agar (W-5)

Glucose- gut Asparagin-

Agar (W-2)

Glycerin- gut Asparagin-

Agar (W-3)

Agar mit Calcium- sehr malat nach Krains- mäßig ky (Anm.C)

spärlich gelbgräulich. Spärlich.

Unterseite braungelb

hellgelbbraun bis hellbraungelb. Sehr gut entwickelt keiner

hellgraurosa.
Mäßige Entwicklung.

hellgrau-schwschrosa.
Mäßige Entwicklung

weiß-gra'ulich keiner bis vjöiß-gelblich. Sehr ir.ä£:'.g

hellbraungelb

hellbraungelb

dunke 1 br sxx». gelb

braungolbgräullch

keines

hellbr&ungelb

■hellbraungelb

keines

Löslichr.achung von Calciu-.iü

ο ο <o oo ο oo

Tabelle V, I. PortSetzung 0) (2)

(5)

(6)

Agar mit Tyrosin spärlich ungefärbt bis keiner

g (Anm.D)

Ascar mit Stärico mäßig

Agar- mit Stärke mittel naci* Grundy

{Anm,S)

Agar mit Stärke gut nach FridhciTi Keine stchfc'-r.r» wenig; intensiv Lüclrlchr.schur.;:

Synthetisch©? gut Aggr nach Czapek mit Glycerin

Synthetischer fast Agar ncch Czapek keiner mit, Saccharose ■(W-1).

Kultur auf Kartoffeln (W-27}

gut

Kultur auf Mohr- mäßig rüfren (W-28).

Tyrosin.

hellgraubräunlieh. Sehr mäßig entwickelt«

Unterseite hell- hsllgrUulich.. MäSige hellbraungslb- rlydrclyi-e ν cn braungelb . Entwielclung. gräulich positiv

hell- hellgrnurcca. Sat- fcelXbi-aun^elbwicklung mitt el» srEu:?.ich

S llr!..

gelbbraun. Gut keiner entwickelt..

unssfärrbt-1 SsiiT spärlicA,

gelbgräulich bis weißlich bis gra ti ^-i ross ο M'ißigo Ätet

Gut entwickelt, wicklung;·

bov:siSlich» Zn von Spuren.

braunä2ltgz'^u3.i ffiäSisc Entvjicklung.

braungelb. Senr hellgraur-osa. Mäßige

gut entwicke.jt. F-otivioklurg· lieh

cllun- Kyirolj*c:i ven positiv

Ziemlich inten siv gelb Kclvra bräimlic-h

keines

grau.seIL-Iich k-c scb^Sralich in den iCartoffolctückcr.. Die &ngrerisor.cS a Plüc.ii τ keit ist hallgolo-

;-?52i'Is intensiv

¹^ cc a ansi\-;r.-zende Fr.üssi£!:r.i^ ist gele.

CD

9 L L L / 8 O 8 6 Ü Ü

Tabelle Y» 2. Pcrtggtgri?^; (D

C2)

(3) (4)

(5)

(6)

Reine Gelatine, 12 #ig (Anm.H)

Glucose-ITitrat-Bouillon nach Dimmlck (Anm.I)

Magermilch (Anm. J)
a) bei 26⁰C

g b;) bei 37⁰C ο

Modium nach Sresner und Danga (

gut, Unterseite braun-

KuI tür gut ent- schwärzlich

wickelt an der

Oberfläche an

der Beimpfungs-

stelle grau. Gut ent-braungelb, von Verflüssigung wickelt der Oberfläche von Gelatine

eich erstreckend positiv, jedoch

in die Verflüs-

eigungszone.

mittel

ziemlich gut

spärlich

Ring und weiß-gelblicher bis hellgelber Schleier

gut entwickelter gelbsr Ring keiner

hellgelbj ziemlich reichlich

keiner

spärlich entwickelter braungelber Ring keiner

verbaltni2Eä£i£ langsam, unvollständig in einer Monat.

s von Uitriton pocitlT &b den ersten 24· Stunden der 3üci>tung, wird drrnrx rasch negativ.

PoptouA- elerung, erroicbt; die obere ELHfta . des Rohrs in 2-3 «■> Wochen, unvollständig in 4 Wochen. Keino KOt-su· lation. pH-Ytert: ohne merkliche In derung in 4 V/oc-Ii? _t

Kein© Pcp
tion, keine ^ lation und_# keir-s . merkliche ÄndC'< rung des pE-'fsr «ö in ? Vocäsn.

Produktion von negativ.

Streptomyoes oanadlensis, der einen Luft-ausgesetaten sporullerten Tell von graurosa Färbung aufweist und ein mohr oder weniger dunkles braunes lösliches Pigment auf Gelatine sowie *» den meisten organischen Medien bildet, ähnelt durch diese Eigenschaften den die Gruppe 1, Seite 7^3 von Eergey's Manual of Determinative Bacteriology, 7· Auflage, bildenden Stämmen. Diese Stämme» nämlich drei, sind: Streptomyoes lavendulae, Streptomyces venezuelae und Streptomyces virginiae* Die Charakteristiken von Streptomyces oanadiensis unterscheiden diesen ^ jedoch von den drei vorgenannten Stämmen. Einerseits bildet S. lavendulae im Gegensatz zu S. oanadiensis Spiralen, und sein vegetatives Waohstum auf synthetischem Agar ist ungefärbt. Andererseits erzeugen S. virginiae und S. venezuelae, die beide jeweils gerade Sporophoren wie S. canadiensie bilden, auf den meisten synthetischen Medien ein weißea bis cremefarbenes Wachstum ohne Produktion von löslichem Pigment, während auf diesen Medien S. oanadiensis ein gelbbraun bis braungelb gefärbtes vegetatives Myoel entwickelt und ein braunes lösliches Pigment bildet.

Nach dem Prinzip der Methode von Pridham und Gottlieb (Journal of Bacteriology, %6, 107-114, 1948), verwertet Streptomyces canadlensls als Kohlenstoffquellen die folgenden Elemente gutt Xylose, Arabinose, Rbamnose, Gluoose, Galaotose, Lävulose, Mannose, Laotoao, Maltose, Trehalose, Cellobiose, Raffinose, Dextrin, Stärke, Glycogen, Olyoerin, Mannit, Inosit. Nioht in merklicher Weise werden die folgenden Substanzen verwertet:

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Sorbose, Saccharose, Erythrit, Adonit, Duloit, Sorbit.

Das Herstellungsverfahren des Antibioticums 8 Oj}6 R.P. besteht im wesentlichen darin, Streptomycee Cftnadiansis

auf geeigneten Medien und unter geeigneten Bedingungen zu züchten und anschließend das im Verlaufe der Züchtung gebildete Antibioticum abzutrennen.

Die Züchtung von Streptomyoes canudiensis kann nach Jeder beliebigen aeroben Oberflächenzüchtungsmethode oder ImmersionszUohtungsmethode erfolgen, doch ist letztere aus Gründen der Bequemlichkeit zu bevorzugen. Man verwendet zu diesem Zweck die verschiedenen Apparaturtypen, die Jetzt üblicherweise in der Technik der Fermentationen verwendet worden.

Insbesondere kann man den folgenden Weg für die Durchführung der Arbeitsgänge einschlagen:

Streptomyces canadiensis - Stammanaatz Kultur auf Agar

Kultur im Kolben unter Bewegung Impfkultur Im Fermentaticnsgefäfl

Produktionskultur im Fermentationsgefäfi

Das Fermentationsmedium soll im wesentlichen eine assimilierbare Kohlenstoffquelle und eine assimilierbare Stloketoffquölle, Mineralstoffe und gegebenenfalls Wachstumsfaktoren enthalten,

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wobei alle diese Beetandteile in Form von gut definierten Produkten oder von komplexen Gemischen, wie man sie in biologischen Produkten verschiedenen Ursprungs antrifft, zugefUhrt werden können.

Als assimilierbare Kohlenstoffquelle kann man Kohlehydrate, wie beispielsweise Glucose, Saccharose,* Lactose, Dextrine, Stärke, Melasse, oder andere Kohlehydratderivate, wie beispielsweise Zuckeralkohole, wie Mannit und dgl., oder gewisse μ organische Säuren, wie Milchaüure, Citronensäure, Weinsäure und dgl., verwenden. Gewisse tierische oder pflanzliche Öle, wie beispielsweise SchmalzÖl oder Sojaöl, können diese verschiedenen Kohlehydratquellen mit Vorteil ersetzen oder ihnen beigefügt werden.

Die geeigneten assimilierbaren Stickstoffquellen sind außerordentlich verschiedenartig. Sie können sehr einfache chemische Substanzen, wie beispielsweise Nitrate, anorganische und organische Ammoniumsalze, Harnstoff und Aminosäuren sein. Sie kön- " nen auch in Form von komplexen Substanzen, die den Stickstoff hauptsächlich in proteldisoher Form enthalten, zugeführt werden, wie beispielsweise in Form von Casein, Laotalbumin, Gluten und deren Hydrolysates Sojamehlen, Arachismehlen, Fischmehlen,

solubles Fleischextrakten, Hefeextrakten, Distillers' nolulma und Mais-

quellwasser.

Unter den zugefügten mineralischen Stoffen können gewisse eine

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Pufferwirkung oder eine neutralisierende Wirkung besitzen, wie beispielsweise die Alkali- oder Erdalkaliphosphate oder Caloium- oder Magnesiumcarbonate.

Andere bewirken das zur Entwicklung von Streptomyces canadiensia und zur Erzeugung des Antlbiotlcums erforderliche Ionengleichgewicht, wie beispielsweise die Alkali- und Erclalkalichloride und -sulfate. Schließlich wirken gewisse in spezieller Art als Aktivatoren der Stoffwechselreaktionen von Streptomyoes oanadiensis. Zu diesen gehören Zink-, Xobalt-, Elsen-, Kupfer- und» Mangansalze.

Zu Beginn der Züchtung soll der pH-Wert des Permentationsmediuwa zwischen 6,0 und 7,ß* vorzugsweise zwischen 6,5 und 7#5 liegen. Die zur Züchtung optimale Temperatur beträft 25 - 55⁶C, doch wird auch bei Temperaturen zwischen 23 und 38⁰C eine befriedigende Produktion erhalten. Die Belüftung der Züchtung kann zwischen vielten Grenzwerten schwanken. Es wurde jedoch gefunden, daß BaIUftungen von 0,3 - 2 1 Luft je 1 Bouillon und Minute besonders gut geeignet sind. Die maximale Ausbeute an Antibioticum wird nach 4- bia 9-täglger Züchtung erhalten, wobei diese Zeitspanne hauptsäohlioh von dem verwendeten Medium abhängt.

Aus den vorstehenden Ausführungen 1st ersichtlich, daß die zur Produktion des Antibiotioums 8 036 R.P. angewendeten allgemeinen Bedingungen der Züchtung von Streptomyoes oanadlensis in ziemlich

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weitem MaBe variieren und jedem besonderen Erfordernis ange-, paßt werden können. Das Antibioticum 8 036 R.P, kann aus den Fortnentationsmcisohen naoh verschiedenen Methoden isoliert werden.

Die Fermentationsmaische kann bei einem pH-V/ert Über oder gleich 7 filtriert werden, doch verbleibt unter diesen Bedingungen ein beträchtlicher Teil der Aktivität in dem Filterkuchen, der dann ebenfalls behandelt werden muß, um das wirksame Produkt zu extrahieren. Es ist daher zu bevorzugen, das ' Filtrieren bei einem pH-Wert unterhalb 5 und vorzugsweise in der Nähe von pH 2 vorzunehmen. Unter diesen Bedingungen verbleibt die Aktivität in dem Filterkuchen, aus dem sie bei einem pH-Wert zwiaohon 3 und 7 mit Wasser, das einen Alkohol mit niedrigem Molekulargewicht, wie beispielsweise Methanol, Äthanol oder Propanol enthält, oder mit einem Genii son von niedrigen aliphatischen Alkoholen mit höchstens 5 Kohlenstoffatomen extrahiert werden kann. Die geeignetste Lösung ist ein solches Oemisch, das naoh Bewegen mit dem feuchten Kuchen die Zusammen- ä Setzung 60 % Methanol und 40 % Wasser aufweist.

Man kann die Fermentationsmaische auch durch eine Säule leiten, die ein Ionenaustauscherharz mit stark anionischem Charakter und großer Porosität enthält, und dann die Elution mit einem wässrig-alkoholischen Lösungsmittel, wie beispielsweise wässrigem Methanol, das einen Elektrolyten enthält, vornehmen. Ee IsU auoh möglloh, die Fermentationsmaische bei einem pH-Wert unter-

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halb 4 und vorzugsweise in cic-r IIHhe von 2 direkt rnlt einem Alkohol mit geringem Molekulargewioht, der mit VJascor nicht miochbar ist, wie beispielsvieise Butanol, zu extrahieren.

Das Rohprodukt kann aue den oben angegebenen alkoholischen oder wa'ssrig-alkoholischen Lösungen durch Einengen dor Lösung auf ein kleines Volumen Isoliert werden. Dieses Einengon Hißt sich bsquem bei einer Temperatur unterhalb 40^eC unter vermindertem Druok vornehmen. Durch Abkühlen und/oder durch Zugabe eines schlechten Lösungsmittels für 8 Ojjö K.P., wie beispielsweise durch Zugabe von wasserfreiem Äthanol, einem Keton, eine.» Ester, einem chlorierten Lösungsmittel, Benzol oder Hexan, fällt das rohe Antibioticum aus.

Das Antibioticum 8 0j}6 R. P. kann dann durch Binden an ein Ionenaustausoherharz mit stark anionischem Charakter und großer Porosität und anschließende Elation mit einer was sr ig -alkoholischen Lösung , die einen Elektrolyten, wie beispielsweise» Natrium-, Ammonium-, Kalium-, Calcium- oder Magnesiumchlorid in einer Menge von 5 bis 50 g/l Elutionsmittel, enthält, gereinigt werden. Das Eluat wird dann auf ein geringes Volucen bei einer Temperatur unterhalb 40⁹C untar vermindertem Druck eingeengt, und das Konzentrat wird einer Gegenstromdialyse gegen einen Strom destillierten V/assers mittels einer Membran aus regenerierter Cellulose unterworfen. Die Mineralsalze und verschiedene Verunreinigungen werden von dem Wasser mitgeführt, und das Antibioticum 8 0J6 R. P. verbleibt in seiner Gesamtheit

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in der dialysierten Lüsung. Dieso letztere Lösung wird azeotrop durch Zugabe von Butanol unter verhindertem Druck auf ein sehr kleines Volumen eingeengt. Das gereinigte» Antibioticum wird aus dem wüs&rigen Konzentrat mit einem Gor.iisoh von Lösungsmitteln, wie beispielsweise Aceton und Isopropanol, gegebenenfalls unter Zusatz von Athor oder Isopropyläther in solchen Menstmanteilon,' daß keine Entmischung während des Mischens mit der wässrigen Phase auftritt, ausgefüllt.

Es ist ersichtlich, daß die verschiedenen angegebenen Methoden ™ nacheinander in verschiedener Reihenfolge oder mehrere Kalo wiederholt angewendet werden können, Je naoh dem Herstellungserfordernis, um dna Antibioticum 8 0j$5 R.?. in für die vorgesehenen Anwendungszwecke geeigneter Form zu erhalten.

Die folgenden Baispiele erläutern die Erfindung, ohne sie zu beschränken. Im folgenden wird die Aktivität stets durch blologisohe Bestimmung naoh dor Diffusionsmethode unter Verwendung von Staphylococcus aureue als empfindlichem Keim und bezogen auf | eine reine Probe von 8 0^6 R.P. als Elchmaß bestimmt. Diese Aktivität ist in Einheiten (E) Je mg für die festen Produkte und in Einheiten Je ecm für Lösungen ausgedrückt (die Einheit ist als kleinste Menge des Produkts definiert, die, gelöst in 1 ocm eines geeigneten Kulturmediums, das Wachstum von Staphylococcus aureus 209 P unter bestimmten Bedingungen inhibiert).

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In ein 1/0 1 I'Oi'inentao ion Hg sfUÜ	bzsingv ils η
Bestandteile oini
HZ AmIn Typ E »)	1 200 ti
Fleischextrakt	72?o a
hydratißlerce Glucose	1 2CO ζ
Co.jntfl	6oo)
/igar	120 g
Wasser ο	d 105 i

Kaoh EtuefceUung de« pH-W&rfcee <iee ci««Miucho auf 7.05 wit 90 10n-Natronlauge aterilielerh irs» das Medium duindj Uurohleiten von Dampf von 122^eC. Kaoh Abkühlen Volumen der Br^ilie 120 1 und der pH-Wert 6,90 . Hau bnlnpft dunt nii; 200 oom einor govUbJrtsn tew« ueaaliüttelten Srlenueyer* Kulüm>' de« Stammes Streptoatyues onu/idic-nEia» Cio Züchtung wird ys. 3tvr.~ den boi 27 ^CC unter iiewe^en und unfc&r Belüftung Mit β ce rl ler !41ft entwickelt. Sie ißt dann 2ur Bsiaipfung der Produktionokultür geeignet·

Die Produktionskultur wird in einem 800 1 Permtntatlone£eftti3 durchgeführt, ciae^mit folgenden Substensen beschickt istj .

*) « Pankreasnydrolioat von Caeein (verkauft von der amerikanischen Piroa Sheffields)

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	U92113	8 kg
Malsquellwasser	4 kg
hydratiaierte Glucose	8 1
Sojaöl	4 kg
CaXoiumoarbonat	0,400 kg
AuaoniJmsulfnt	6g
Cobaltohlorid-hexahydrot	370 1
Wasser ad

Das Medium, dessen pH-Wert 6,20 betragt, wird durch 40-minUtlgee Durchleiten von Dampf von 122⁰C sterilisiert. Naoh Abkühlen be- ' trugt das Volumen der Bouillon 400 1 und der pH-Wert 7*10. Man beimpft mit 40 1 der obigen Impfkultür aus dem 170 1 Fermentetlonsgefäö . Die Züchtung wird während 156* Stunden bei 27⁰C unter Bewegen mit einer Turbine, die mit 260 UpM betrieben wird, und unter Belüftung mit steriler Luft in einer Menge von 15 nP/h durchgeführt. Der pH-Wert des Mediums betragt dann 7*25 und das Volumen der Maisohe 400 1. Die in der Fenuentationsmalsohe vorhandene Antibiotloummenge beträgt 1 625 E/oom.

Beispiel 2

In «inem 800 1 Fermentationsgase führt man unter den gleichen Bedingungen wie oben angesetzte und mit der gleichen Impfkultür beimpfte Züchtung I56 Stunden bei 33⁰C unter Bewegen mit Hilfe einer Turbine, die bei I60 UpM betrieben wird, und unter Belüften mit steriler Luft in einer Menge von 25 rn-Vh durch. Der pH-Wert des Mediums beträgt dann 7,45 und das Volumen der Maisohe 340 1. Die in der FenQentationsmaiaohe vorhandene Anti-

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bioticummenge betrügt 3 215 E/com. Beispiel 3

Die gemäß den Beispielen 1 und 2 erhaltenen ZUohtungsraaisohen werden gemischt. 740 1 Maische mit einem Gehalt von 2 420 E/ocra und einem pH-Wert von 7,3 werden durch Zugabe einer 10n-Schwefelsäurelösung in einem mit einer Vorrichtung zum Bewegen ausgastet· toten Bottich auf pH 2 eingestellt. Dann setzt man 18 leg Filterhilfe zu. Das Gemisch wird auf einer Filterpresse filtriert und der Filterkuchen mit 250 1 Leitungswasser gewaschen. Das FIltrat und die Waschflüssigkeit, die praktisch inaktiv sind, werden verworfen. Der Filterkuchen wird unter Bewegen in 388 1 eines Gemisohs von Methanol (268 1) und Wasser (120 l) suspendiert. Der scheinbare pH-Wert der Suspension wird mit 1On-Natronlauge auf 7 eingestellt, das Bewegen wird 1 Stunde fortgesetzt, und der Brei wird dann auf einer Filterpresse filtriert.

Das Fj. 1 trat wird gesammelt und der Filterkuchen mit 150 1 70 Völligen Methanol gewasohen. Die Gesamtheit von Filtrat und Waschflüssigkeit (530 1) weist einen Gehalt von 3440 S/o cm auf. Der Filterkuchen wird verworfen. Das alkoholische Filtrat wird unter vermindertem Druck (20 mm Hg) bei 35"C auf ein Volumen von 5*2 1 eingeengt.Das Antibioticum wird durch Zugabe von 40 1 Äthanol ausgefällt. Der Niederschlag wird abgesaugt, mit Äthanol gewaschen und dann in einem Trockenschrank unter vermindertem Druck ( 5 mm Hg) getrocknet. Man erhält so 885 g eines hellgrauen Produkts mit einem Gehalt von 1 790 E/mg.

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BAD ORIGINAL Beispiel 4

880 g gemäß Beispiel 3 hergestelltes rohes Antibioticum werden in 20 1 Wasser bei pH 7 gelöst.

Die wässrige Lösung wird filtriert und dann duroh eine 35 1 Ionenaustausoherharz Dowex 1 X 2 in der Chloridform enthaltende Säule geleitet. Der Abfluß wird verworfen. Das Harz wird mit 50 1 Wasser, dann mit 80 1 eines Wasser-Ameisensäure-Gemische (90 t 10] Volumina), dann mit 80 1 eines Methanol-Wasser-Ameisen- M säure-Gemischa (80 : 10 ι 10 Volumina) und schließlich mit 80 1 Methanol-Wasser-Gemisoh (80 t 20 Volumina) gewaschen. Das Antibioticum wird dann mit 300 1 eines Gemische von Methanol und Wasser (80 : 20 Volumina), das 10 g Kaliumchlorid je 1 enthält, eluiert.

Die Hauptfraktion, deren Volumen 120 1 beträgt, wird unter vermindertem Druck (20 mm Hg) bei einer Temperatur unterhalb 4o°C auf 5 1 eingeengt. Das Konzentrat wird 24 Stunden lang gegen strömendos destilliertes Wasser duroh eine Membran aus regenerierter Cellulose dlalyslert, um die Mineralsalze und versohledene organische Verunreinigungen zu entfernen.

(6,81V Die dlalysierte Losung/TTiie die gesamte Aktivität des Eluats enthält, se^^f wird unter vermindertem Druck (20 mm Hg) auf 0,8 1 eingeengt.

Das so erhaltene Konzentrat wird mit 5 Volumina Aceton versetzt,

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was aur Ausfällung des Kaliamsalzes des Antibioticums führt. Nach Filtrieren, Waschen mit Aceton und Trocknen bei j>5°C unter 2 mm Hg Über Nacht gewinnt man 195 β einea hellbraunen Pulvers mit einem Gehalt von 5 68° B/mg·

Beispiel 5

10 g Antibioticum in Form des Kaliumsalzes mit einem Gehalt von 5 000 E/rag, das wie in Beispiel 4 beschrieben erhalten ist, werden in 100 ecm eines Gemische von\ Propanol und Wasser (50 t 50 Volumina) gelöst.

Die erhaltene Lösung wird durch eine 20 g Aluminiumoxyd mit pH 4 enthaltende Säule geleitet, und das Antibioticum wird mit dem glelohen Löaungsmittelgeraisch eluiert.

Die 400 ersten ecm Eluat werden unter verhindertem Druck (20 mm Hg) bei einer Temperatur unterhalb 4o*C auf 10 ecm eingeengt, und das erhaltene Konzentrat wird dann 24 ötundan lang gegen die 20-fache Menge seines Volucens an destilliertem Wasser durch eine Membran aus regenerierter Cellulose dialysiert um die anorganischen Salze und verschiedene organische Verunreinigungen zu entfernen ·

Die dialysierte Lösung wird durch Zugabe von 10 Volumina Aceton ausgefällt. Das Kaliumsalz des Antibioticums wird abfiltriert, mit Aoeton gewasohen und über Nacht bei 35 "C unter 2 mm Hg getrooknet. Man gewinnt so 2 g eines praktisch farblosen Pulvers

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mit einem Oehalt von 8 800 E/rag. Beispiel 6

175 g des in Beispiel 4 erhaltenen Produkts werden In 5,5 1 Wasser bei pH 7 gelöst.

Die wässrige Lösung wird durch eine 15 1 Harz, Dowex 1 X 2, In der Chloridform enthaltende Säule geleitet. Der Abfluß wird verworfen. Das Harz wird nacheinander mit 15 1 destilliertem Wasser, ™ 20 1 eines Wasser-Ameisensäure-Gemische (90 : 10 Volumina), 40 1 eines Methanol-Wasser-Ameisensäure-Gemische (80 ι 10 : 10 Volumina) und 20 1 eines Methanol-Wasser-Geraischs (80 : 20 Volumina) gewasohen. Dae Antibioticum wird mit 75 1 oines Gemlschs von Methanol und Wasser (80 t 20 Volumina), das 10 g Kaliumchlorid je 1 enthält, eluiert.

Die Hauptfraktion des Eluats, dia 40 1 ausmacht, wird unter vermindertem Druok (20 rom Hg) bei einer Temperatur unterhalb 40°C ä auf 1,1 1 eingeengt. Das Konzentrat wird 24 Stunden gegen messendes destilliertes Wasser durch eine Membran aus regenerierter Cellulose dialysiert.

Die dialysierte Lösung/; die die gesamte Aktivität der Hauptfraktion des Eluats enthält, wird unter vermindertem Druck (20 mm Hg) auf 200 oom eingeengt.

Das so erhaltene Konzentrat wird mit 5 Volumina Aceton versetzt,

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woduroh das Kaliurnsalz des Antibloticiuna ausfällt.

Der Niederschlag wird abgesaugt, mit Aceton gewaschen und Über Nacht bei 35 ⁰C unter 2 ram Hg getrocknet. Man erhält 98 g des Kaliumsalzes in Form eines praktieoh weißen Pulvere mit einem Gehalt von 8 000 E/mg.

Beispiel 7

9,25 g des gemäß Beispiel 5 erhaltenen Kaliumsalzes werden in 0,5 1 Wasser gelöst. Die Lösung wird mit Amberlite IR 120 in der sauren Form,zugesetzt in Anteilen (32 g insgesamt), bis zur pH-Konstanz (1,5) bewegt. Das Harz wird abfiltriert und durch Bewegen in 100 ocm Wasser gewaschen. Das Piltrat und die WaschflUasigkeiten werden vereinigt.

Die erhaltene Lösung wird lyophilislert. Man erhält 7,2 g gereinigtes Antibioticum in Form der freien Säure mit einem Gehalt von β 600 B/mg. Die Elementarzusammenaetzung 1st die folgendet C - 47,85 - 48 Ji, H - 7,10 %, N - 4,45 - 4,50 %_t P - 2,20 #, 0 - 38,20 - 38,40 % (durch Differenz)

Beispiel 8

f.- wie in Beispiel 5 beschrieben 27*75 S des) 4? erhaltenen Kaliumsalzes werden in 1,5 Wasser gelöst und mit 100 g Amberlite Z R 120 in der sauren Form wie in Beispiel 7 behandelt.

009808/1776 BADORIG.NAI.

- .51 -

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Die erhaltene Lösung der Säure wird durch Zugabe von 24,6 com 1n-Natronlauge auf pH 7 eingestellt.

Die wässrige neutrale Lösung wird lyophllisiert. Man erhält so 19*6 g Natriumsalz des Antibiotioums. Seine Elementarzusammensetzung ist die folgendet C - 45,25 - 45,5 %. H = 6,55 - 6,90 %, 0 « 38,3 - 38,8 % (durch

4,15 -r 4,25 £

Differenz), N - Ü, P- 2,10 #, Na - 3,15 #

Beispiel 9 Λ

5 g des Kaliumsalzes mit einem Gehalt von 8 000 E/mg, das gemäß Beispiel 6 hergestellt ist, werden in 50 ecm eines Gemischs von n-Propanol und Wasser (50 t 50 Volumina) gelöst.

Die Lösung wird durch eine Säule mit Aluminiumoxyd in Suspension bei pH 4 in einem Gemisch von n-Propanol und Wasser (75 : 25 Volumina) geleitet.

Das Antibioticum wird mit 200 com eines n-Propanol-Wasser-Gemische (50 : 50 Volumina) und dann mit 200 com eines Gemische von n-Propanol, Wasser und konzentrierter Ammoniaklösung (d * 0,925) (50 : 49,5 ϊ 0,5 Volumina) eluiert.

Das Eluat wird in Fraktionen von 10 ecm gesammelt, und die Aktivität Jeder Fraktion wird durch biologische Prüfung bestimmt.

Die reichen Fraktionen des Eluats n-Propanol-Wasser (50 : 50 Vo-

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lumina), Fraktionen 3 bie 11, werden vereinigt und unter vermindertem Druck (20 mm Hg), ohne 4O⁰C zu überschreiten, auf 10 ocm eingeengt. Das Konzentrat wird mit 10 ocm n-Propanol und 10 ecm Aceton verdünnt, was zur Ausfüllung des Antibiotioums führt. Naoh Filtrieren, Waschen mit Aceton und Trooknen bei 55*C unter 2 min Hg über Nacht gewinnt man 2,4 g farbloses Kaliumsalz des Antibiotioume mit einem Gehalt von 9 150 E/mg.

Die reichen Fraktionen des Eluata n-Propanol-Waceer-Vonz-Ainmoniak P (50 t 49,5 * 0,5 Volumina), Fraktionen 2} bis 40, werden vereinigt und wie oben aufgearbeitet. Man gewinnt so 1,5 S eines wenig gefärbten Pulvera mit einem Gehalt von 8 500 B/mg.

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Claims (2)

-33- U92113 Patentansprüche

1. Verfahren zur Herstellung des Antibioticums 8 0j5o R. P., dadurch gekennzeichnet, daß man den neuen Sta».m Streptomyces canadiensls (NRRL 2155) 2öi^iÄäA»ÄäÄäÄiiaäa;ASuSüöiiiitiK aerob in einem für diese Art von Züchtung üblichen Nährmedium unter Ubliohen ZUohtungsbedingungen züchtet und das gebildete Antibioticum durch Anwendung an eich bekannter Abtronnungs- und Reinigungsmethoden abtrennt und reinigt und gegebenenfalls die 8 0^6 R.P.-Säurο in ein Salz Überführt.

2. Als neue Verbindung das mit 8 036 H.P. bezeichne ίο Ar*tioioticum, dao ein woißeo amorphes Pulver darstellt, das ferner ui;;c Säure vom pKa =4,45 mit einem Neutral!sationsaquivalent von etwa 77b ist» das in Wasser, Jlmethylf ormnni.iά, Pyridin und üssifc,cäurc löslich und in Äthanol, Aceton, Chloroform und η-Hexan wcni_o oder nicht löslich ist, das bei 235 - 236⁰C unter Zersetzung schmilzt und daß sich aufgrund der Elementaranalysc aus 47,9^ Kohlcnstoii", T₁I'/* Wasserstoff, 38,3^ Sauerstoff, 4,5^ Stickstoff und 2,2^ Phospho zusammensetzt, das in seinem Ultraviolettspc-ktrum bei Busti^uon^ in einer 0,005ji-igen (GdK/VoI)' wässrigem Lösung kein charakteristisches Maximum aufweist und bei dem der Abaorptionakoeffcüient •^lcm ^von ° ^{aui 40 im} Intervall von 400 bis 210 na stellt und daa in seinem Infrarotspektrum bei Bestimmung an einem mit Kaliumbromid vermischten Pressling folgende Maxima aufweist: 3400 sohr stark, 2930 stark, 172D stark, 1660 stark, I65O stark, I55O star.c, 1445 Sohulter, 1400 Schulter, 1330 stark, 1335 stark, 1225 atark, II50 Schulter, 1100 Schulter, 1070 sehr stark, 1032 Schulter, 970 stark, 945 Schulter, 880 stark, 855 Schulter, 815 mittel, 775 Schulter, 755 Schulter, sowie Salze dieses Antibioticiaas mit nicht toxischen KationeÄ* -^^enaötn Vä;j . *** ..r. 1

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