DE1246745B - Process for the simplified preparation of a mixture of the sodium salts of 5-inosic acid and 5-guanyl acid - Google Patents
Process for the simplified preparation of a mixture of the sodium salts of 5-inosic acid and 5-guanyl acidInfo
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Description
Verfahren zur vereinfachten Gewinnung eines Gemisches der Natriumsalze von 5'-Iiiosinsäure und 5'-Guanylsäure Die Erfindung betrifft ein vereinfachtes Verfahren zur Gewinnung eines Gemisches der Natriumsalze von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure aus einem an Aktivkohle adsorbierten enzymatisch gewonnenen Nucleinsäurehydrolysat.Process for the simplified production of a mixture of the sodium salts of 5'-iiosinic acid and 5'-guanylic acid. The invention relates to a simplified one Process for obtaining a mixture of the sodium salts of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid from an enzymatically obtained nucleic acid hydrolyzate adsorbed on activated carbon.
Bekanntlich kann 5'-Iiiosinsäure als Mittel zu- Verbesserung des Geschmacks bzw. Aromas von Nahrungs- und Genußmitteln, d. h. als chemische Würze, verwendet werden. Ferner hat sich erwiesen, daß 5'-Guanylsäure in dieser Hinsicht ebenfalls sehr vorteilhaft, daß beide Komponenten unmittelbar in Mischung hergestellt werden können, ohne die Komponenten einzeln aus den Purin-nucleotiden abzutrennen.It is known that 5'-iiosinic acid can be used as a taste-improving agent or aromas of foodstuffs and luxury foods, d. H. used as a chemical flavoring will. It has also been found that 5'-guanylic acid is also useful in this regard very advantageous that both components are produced directly in a mixture can without separating the components individually from the purine nucleotides.
5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure gehören ebenso wie 5'-Adenylsäure zu den sogenannten »Purinnucleotiden«, die ein Puringeriist als Grundbestandteil aufweisen, und unterscheiden sich von den sogenannten »Pyrimidin-nucleotiden«, z. B. 5'-Cytidylsäure und 5'-Uridylsäure, die ein Pyrimidingerüst als Grundbestandteil enthalten. Die Wirkung der Pyrimidin-nucleotide als chemische Würze ist gewöhnlich ziemlich gering. Jedoch liegen die Pyrimidinnucleotide im allgemeinen gemeinsam mit Purinnucleotiden als Bestandteile der Nucleinsäuren vor. 5'-Nucleotide beider Typen werden also in gemischter Form im Hydrolysat von natürlicher Nucleinsäure erhalten. Es ist daher sehr erwünscht, aus dem Hydrolysat nach einem einfachen Verfahren eine Mischung zu gewinnen, die nur aus 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure besteht, die beide eine starke Wirkung als chemische Würze aufweisen. Da ferner 5'-Adenylsäure als solche keine Wirksamkeit in bezug auf die Verbesserung des Geschmacks bzw. des Aromas von Nahrungs- und Genußmitteln zeigt, jedoch ohne Beeinträchtigung der anderen Purinnucleotide, d. h. der 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure, mit Hilfe der beispielsweise in gewissen Mikroorganismen vorhandenen 5'-Adenylsäuredesaminase in 5'-Inosinsäure umgewandelt werden kann, ist es erwünscht, ein Gesamtgemisch von Purin-nucleotiden aus einem Purin- und Pyrimidin-nucleotide enthaltenden Hydrolysat von Nucleinsäure zu gewinnen und nicht 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure einzeln abzutrennen.5'-Inosinic acid and 5'-Guanylic acid belong as well as 5'-Adenylic acid to the so-called »purine nucleotides«, which are a purine nucleus as a basic component have, and differ from the so-called "pyrimidine nucleotides", z. B. 5'-cytidylic acid and 5'-uridylic acid, which have a pyrimidine structure as a basic component contain. The action of the pyrimidine nucleotides as a chemical flavoring is common pretty low. However, the pyrimidine nucleotides are generally common with purine nucleotides as components of the nucleic acids. 5 'nucleotides of both So types are mixed in the hydrolyzate of natural nucleic acid obtain. It is therefore very desirable to obtain from the hydrolyzate by a simple process to obtain a mixture that consists only of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid, both of which have a powerful chemical flavoring effect. Since also 5'-adenylic acid as such, no effectiveness in improving the taste or the Shows aromas of food and luxury items, but without affecting the other Purine nucleotides, i.e. H. of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid, with the aid of, for example 5'-adenylic acid deaminase present in certain microorganisms in 5'-inosinic acid can be converted, it is desirable to have a total mixture of purine nucleotides from a hydrolyzate of nucleic acid containing purine and pyrimidine nucleotides to obtain and not to separate 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid individually.
Bei einem bekannten Verfahren zur Gewinnung von Purin-nucleotiden aus Nucleinsäurehydrolysaten wurden die im Hydrolysat enthaltenen Pyrimidin-und Purin-nucleodite zur Abtrennung von ebenfalls im Hydrolysat enthaltenen Verunreinigungen, wie anorganischen Salzen, Proteinen, Aminosäuren u. a., an Aktivkohle adsorbiert und dann gemeinsam mit einem Lösungsmittel eluiert. Die im Eluat enthaltenen Nucleotide wurden dann mit Hilfe eines Ionenaustauschers in die einzelnen Nucleotide aufgetrennt. Durch Vereinigen der die einzelnen Purin-nucleotide enthaltenen Fraktionen konnte dann ein Purinnucleotidgemisch gewonnen werden. Eine solche Trennmethode ist jedoch sehr langwierig und kostspielig, da zwei Adsorptionsstufen durchlaufen und außer der Aktivkohle noch große Mengen an Ionenaustauschermaterial eingesetzt werden müssen.In a known method for obtaining purine nucleotides from nucleic acid hydrolysates were the pyrimidine and pyrimidine contained in the hydrolyzate Purine nucleodite for the separation of impurities also contained in the hydrolyzate, such as inorganic salts, proteins, amino acids, etc., adsorbed on activated carbon and then co-eluted with a solvent. The nucleotides contained in the eluate were then separated into the individual nucleotides with the aid of an ion exchanger. By pooling the fractions contained in the individual purine nucleotides then a purine nucleotide mixture can be obtained. However, one such method of separation is very tedious and expensive, since two stages of adsorption go through and apart the activated carbon, large quantities of ion exchange material still have to be used.
Es ist an sich bekannt, daß durch Adsorptionscliromatographie an Aktivkohle Gemische, deren Komponenten eine unterschiedliche Molekülgröße aufweisen, aufgetrennt werden können. Da diese Trennmethode auf Grund der unpolaren Oberfläche der Aktivkohle wenig selektiv ist, wird sie praktisch nur zur Trennung von unpolaren Verbindungen, für die es keine besseren Trennmöglichkeiten gibt, oder solchen Verbindungen angewendet, bei denen die relative Molekulargewichtsdifferenz so groß ist, daß eine wirkungsvolle Trennung erwartet werden kann. Auch wurde schon versucht, Nucleotide enthaltende Gemische durch Gelfiltrierung mit Hilfe von quervernetztem Dextran in die einzelnen Komponenten aufzutrennen. Hierbei gelang jedoch weder eine Trennung der verschiedenen Nucleotide noch eine gemeinsame Abtrennung der Purin-nucleotide.It is known per se that by adsorption chromatography on activated carbon Mixtures, the components of which have different molecular sizes, separated can be. Because this separation method is due to the non-polar surface of the activated carbon is not very selective, it is practically only used to separate non-polar compounds, for which there are no better ways of separating, or such connections are used, in which the relative molecular weight difference is so great that an effective one Separation can be expected. Attempts have also been made to contain nucleotides Mixtures by gel filtration with the help of cross-linked Dextran to be separated into the individual components. However, no separation was achieved here the various nucleotides still have a common separation of the purine nucleotides.
Es wurde gefunden, daß es trotz der relativ geringen Differenz der Molekülgröße der Purin- und Pyrimidin-nucleotide einerseits und der dabei relativ großen Unterschiede zwischen den einzelnen Purinnucleotiden andererseits möglich ist, die 5'-Purinnucleotide mit Hilfe von Aktivkohle gemeinsam aus einem Gemisch von 5'-Nueleotiden abzutrennen.It was found that, despite the relatively small difference in the Molecular size of the purine and pyrimidine nucleotides on the one hand and the relative size On the other hand, large differences between the individual purine nucleotides are possible is, the 5'-purine nucleotides together from a mixture with the help of activated carbon to separate from 5'-Nueleotiden.
Gegenstand der Erfindung ist daher ein Verfahren zur vereinfachten Gewinnung eines Gemisches der Natriumsalze von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure aus einem an Aktivkohle adsorbierten enzymatisch gewonnenen Nucleinsäurehydrolysat durch Elution und gegebenenfalls Überführung im Eluat vorhandener 5'-Adenylsäure in 5'-Inosinsäure, das dadurch gekennzeichnet ist, daß die Elution mit einem neutralen oder alkalischen wäßrigen Lösungsmittel so vorgenommen wird, daß nach Durchlauf der die 5'-Pyrimidin-nueleotide enthaltenden Fraktion die die 5'-Purin-nucleotide enthaltene Fraktion aufgefangen wird, die 5'-Inosinsäure sowie 5'-Guanylsäure in üblicher Weise in Natriumsalze übergeführt werden und dieses Salzgemisch isoliert wird.The invention is therefore a method for simplified Obtaining a mixture of the sodium salts of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid from an enzymatically obtained nucleic acid hydrolyzate adsorbed on activated carbon by eluting and, if necessary, transferring 5'-adenylic acid present in the eluate in 5'-inosinic acid, which is characterized in that the elution with a neutral or alkaline aqueous solvent is made so that after passage the fraction containing the 5'-pyrimidine nucleotides contains the 5'-purine nucleotides contained fraction is collected, the 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid in The usual way are converted into sodium salts and this salt mixture is isolated will.
Das erfindungsgemäße Verfahren hat gegenüber dem bekannten Verfahren den wesentlichen Vorteil, daß die Abtrennung der 5'-Purin-nueleotide in einer Adsorptionsstufe erreicht wird, wobei als Trennmittel lediglich die leicht zugängliche Aktivkohle erforderlich ist. Ferner wird beim erfindungsgemäßen Verfahren bei der Eluierung der Nucleotide aus der Aktivkohle direkt ein Gemisch der Purin-nucleotide erhalten, das in einfacher Weise als solches oder nach Desaminierung im Eluat gegebenenfalls vorhandener Adenylsäure zu dem gewünschten Salzaemisch weiterverarbeitet werden kann.The method according to the invention has compared to the known method the essential advantage that the 5'-purine nueleotide can be separated off in one adsorption stage is achieved, with the easily accessible activated carbon being the only separating agent is required. Furthermore, in the method according to the invention, during the elution the nucleotides from the activated charcoal receive a mixture of the purine nucleotides directly, this in a simple manner as such or optionally after deamination in the eluate Any adenylic acid present can be further processed into the desired salt mixture can.
Das Ausgangsmaterial für das Verfahren gemäß der Erfindung, d. h. das Hydrolysat der Nucleinsäure, enthält gewöhnlich Nucleotide, Aminosäuren, Proteine, Polysaccharide, anorganische Salze usw. als Verunreinigungen. Diese Verunreinigungen haben jedoch keine nachteiligen Auswirkungen auf das Verfahren gemäß der Erfindung. Das heißt, es ist nicht erforderlich, diese Verunreinigungen vor der Durchführung des Verfahrens zu entfernen.The starting material for the process according to the invention, i. H. the hydrolyzate of nucleic acid, usually contains nucleotides, amino acids, proteins, Polysaccharides, inorganic salts, etc. as impurities. These impurities however, have no adverse effects on the method according to the invention. That said, it is not necessary to carry out these contaminants before of the procedure.
Als Nucleotidgemisch für das Verfahren gemäß der Erfindung dient das Hydrolysat oder Teilhydrolysat von Nucleinsäure, das mit einem Enzymsystem erhalten wurde, das fähig ist, Nucleinsäure in 5'-Nucleotide zu hydrolysieren. Ein Enzymsystem dieser Art ist bekanntlich in der Kultur von bestimmten Mikroorganismen oder in Schlangenserum oder in den Darmschleimhäuten von Rindern enthalten. Ein Enzymsystem, das von einem Mikroorganismus stammt. ist bevorzugt und kann in einigen Fällen auch 5'-Adenylsäuredesaminase enthalten. Ein solches Enzymsystem kann in der Form des lebenden Mikroorganismus selbst oder als extrahiertes oder gereinigtes Enzymsystem od. dgl. verwendet werden. Mikroorganismen, die ein solches Enzymsystem bilden können, sind unter den Klassen Schizomycetes, Ascomycetes usw. verteilt. Genauer gesagt, findet sich das Enzymsystem in der Kultur von Mikroorganismen, die zu folgenden Ordnungen gehören: Fungi Imperfecti (z. B. Gattung Fusarium, Verticillium, Gliomastix, Helminthosporium), Eubacteriales (z. B. Gattung Bacillus), Actinomycetales (z. B. Gattung Streptomyces), Spheriales (z. B. Gattung Anixiella, Botryosphaeria, Chaetomidium, Glomerella, Neurospora, Ophiobolus, Ophistoma, Sordaria, Tilachlidium), Plectascales (z. B. Aspergillus). Insbesondere einige Mikroorganismen, die zu den Ordnungen Actinomycetales, Fungi Imperfecti oder Pleetascales gehören, erzeugen 5'-Adenylsäuredesaminase gleichzeitig mit einem Enzymsystem das Nucleinsäure zu 5'-Nucleotide zu hydrolysieren vermag. Bei Verwendung des gesamten Enzymsystems dieser Mikroorganismen werden also unmittelbar 5'-Nucleotidgemische erhalten, die 5'-Inosinsäure enthalten.The nucleotide mixture for the method according to the invention is used Hydrolyzate or partial hydrolyzate of nucleic acid obtained with an enzyme system capable of hydrolyzing nucleic acid to 5 'nucleotides. An enzyme system this species is known to be found in the culture of certain microorganisms or in Contained in snake serum or in the intestinal mucous membranes of cattle. An enzyme system, that comes from a microorganism. is preferred and may in some cases Contain 5'-adenylic acid deaminase. Such an enzyme system can be in the form of living microorganism itself or as an extracted or purified enzyme system or the like. Can be used. Microorganisms that can form such an enzyme system, are distributed among the classes Schizomycetes, Ascomycetes, etc. More precisely, The enzyme system is found in the culture of microorganisms that lead to the following Orders include: Fungi Imperfecti (e.g. genus Fusarium, Verticillium, Gliomastix, Helminthosporium), Eubacteriales (e.g. genus Bacillus), Actinomycetales (e.g. Genus Streptomyces), Spheriales (e.g. genus Anixiella, Botryosphaeria, Chaetomidium, Glomerella, Neurospora, Ophiobolus, Ophistoma, Sordaria, Tilachlidium), Plectascales (e.g. Aspergillus). In particular, some microorganisms belonging to the Actinomycetales, Fungi imperfecti or pleetascales produce 5'-adenylic acid deaminase at the same time is able to hydrolyze the nucleic acid to 5'-nucleotides with an enzyme system. When using the entire enzyme system of these microorganisms are so immediately Obtained 5'-nucleotide mixtures containing 5'-inosinic acid.
Die zur Herstellung des erfindungsgemäß benötigten Ausgangsmaterials verwendete Nucleinsäure kann als tierisches oder pflanzliches Gewebe oder dessen Extrakt eingesetzt werden. Diese Materialien enthalten Nucleinsäure oder ihr Teilhydrolysat. Am vorteilhaftesten und bequemsten ist es, als Ausgangsmaterial Hefe oder Hefeextrakt mit einem wäßrigen Lösungsmittel zu verwenden.For the production of the starting material required according to the invention nucleic acid used can be animal or vegetable tissue or its Extract can be used. These materials contain nucleic acid or its partial hydrolyzate. It is most advantageous and convenient to use yeast or yeast extract as the starting material to be used with an aqueous solvent.
Die Hydrolyse der Nucleinsäure enthaltenden Stoffe kann in üblicher, hier nicht beanspruchter Weise durchgeführt werden, indem die vorstehend genannten Mikroorganismen in dem Medium, das die Nucleinsäure enthält, bebrütet werden oder indem das Kulturfiltrat, die Zellsuspension oder das extrahierte Enzym zum Extrakt oder zur Suspension des die Nucleinsäure enthaltenden Materials in einer wäßrigen Lösung gegeben wird. Das extrahierte Enzym kann roh oder rein sein. Die Hydrolyse kann in einem wäßrigen Lösungsmittel bei einem pH-Wert von 5 bis 9 und einer Temperatur durchgeführt werden, bei der die Enzymaktivität weder geschädigt noch zerstört wird. Diese Temperatur beträgt gewöhnlich 30 bis 50° C. Die Reaktionszeit wird so gewählt, daß die Ausbeute an 5'-Nucleotiden optimal ist. Gewöhnlich beträgt sie 2 bis 40 Stunden. Gegebenenfalls kann ein Enzymaktivator, z. B. ein zweiwertiges Metall, wie Magnesium, zum Reaktionsmedium gegeben werden.The hydrolysis of the nucleic acid-containing substances can be carried out in the usual Not claimed here can be performed by the above Microorganisms are incubated in the medium containing the nucleic acid or adding the culture filtrate, the cell suspension or the extracted enzyme to the extract or for the suspension of the material containing the nucleic acid in an aqueous Solution is given. The extracted enzyme can be raw or pure. The hydrolysis can in an aqueous solvent at a pH of 5 to 9 and a temperature carried out in which the enzyme activity is neither damaged nor destroyed. This temperature is usually 30 to 50 ° C. The reaction time is chosen so that the yield of 5 'nucleotides is optimal. Usually it is 2 to 40 Hours. Optionally, an enzyme activator, e.g. B. a divalent metal, such as magnesium, can be added to the reaction medium.
In gewissen Fällen ist Phosphatase - ein Enzym, das Nucleotide zu Nucleosiden zu hydrolysieren vermag - im Enzymsystem des Mikroorganismus vorhanden. In einem solchen Fall muß ein Phosphatase-Inhibitor dem Reaktionssystem zugesetzt werden, um den Abbau der gewünschten 5'-Nucleotide in Nucleoside zu verhindern. Geeignet als Inhibitoren sind Phosphate, Arsenate, Cyanate, Aminosäuren (z. B. Cystein und Glutamin), Äthylendiamintetraessigsäure, Metallionen (z. B. Zn++ und Cu++) usw.In certain cases it is phosphatase - an enzyme that makes nucleotides Able to hydrolyze nucleosides - present in the enzyme system of the microorganism. In such a case, a phosphatase inhibitor must be added to the reaction system to prevent the degradation of the desired 5 'nucleotides into nucleosides. Suitable inhibitors are phosphates, arsenates, cyanates, amino acids (e.g. cysteine and glutamine), ethylenediaminetetraacetic acid, metal ions (e.g. Zn ++ and Cu ++) etc.
Durch Wahl der Reaktionsbedingungen kann der Anteil jedes 5'-Nucleotids im Produktgemisch nach Wunsch eingestellt werden. Die Reaktion kann abgebrochen werden, wenn der Gehalt an 5'-Purinnucleotiden am höchsten ist. Dieser Zeitpunkt kann beispielsweise durch Messung der Ultraviolettabsorption festgestellt werden.By choosing the reaction conditions, the proportion of each 5'-nucleotide can be set in the product mix as required. The reaction can be canceled when the 5'-purine nucleotide content is highest. This point in time can be determined, for example, by measuring the ultraviolet absorption.
Das auf diese Weise erhaltene Reaktionsgemisch stellt das Ausgangsmaterial für das Verfahren gemäß der Erfindung dar. Es enthält 5'-Purin-nucleotide (5'-Adenylsäure, 5'-Guanylsäure und 5'-Inosinsäure usw.) und 5'-Pyrimidin-nucleotide (5'-Uridylsäure, 5'-Cytidylsäure usw.). Dieses Gemisch wird beim Verfahren gemäß der Erfindung der Adsorptions-, ehromatographie an Aktivkohle unterworfen, wodurch Verunreinigungen, wie Enzyme, aus der Enzymflüssigkeit stammende anorganische Stoffe, Proteinsubstanzen, Aminosäuren und Polysaccharide, entfernt und gleichzeitig die 5'-Pyrimidin-nucleotide und 5'-Purin-nucleotide vollkommen getrennt werden.The reaction mixture obtained in this way is the starting material for the method according to the invention. It contains 5'-purine nucleotides (5'-adenylic acid, 5'-guanylic acid and 5'-inosinic acid etc.) and 5'-pyrimidine nucleotide (5'-uridylic acid, 5'-cytidylic acid, etc.). This mixture is used in the method according to the invention Subjected to adsorption chromatography on activated carbon, eliminating impurities, like enzymes from which Inorganic substances derived from enzyme liquid, Protein substances, amino acids and polysaccharides, removed and at the same time the 5'-pyrimidine nucleotides and 5'-purine nucleotides are completely separated.
Die zu verwendende Teilchengröße und Menge der Aktivkohle sowie die Beziehung zwischen Durchmesser und Höhe der mit Aktivkohle zu füllenden Kolonne werden experimentell bestimmt oder aus der Durchflußmenge und Trennbarkeit berechnet. Da die Purin-nucleotide gleichzeitig eluiert werden, wird keine besonders große Menge an Aktivkohle benötigt. Ferner ist die zur wirksamen Chromatographie erforderliche Zeit verhältnismäßig kurz.The particle size and amount of activated carbon to be used as well as the Relationship between diameter and height of the column to be filled with activated carbon are determined experimentally or calculated from the flow rate and separability. Since the purine nucleotides are eluted at the same time, none will be particularly large Amount of activated carbon required. Furthermore, that is necessary for effective chromatography Time relatively short.
Die an der Aktivkohleschicht adsorbierten 5'-Nucleotide werden mit einem neutralen oder alkalischen wäßrigen oder organischen Lösungsmittel eluiert. Am vorteilhaftesten als Lösungsmittel ist verdünntes wäßriges Ammoniak. Während der Elution wird die Ultraviolettabsorption des Abflusses ständig mit einem Spektrophotometer gemessen. Art und Gehalt an 5'-Nucleotiden, die eluiert werden, lassen sich in einfacher Weise aus dem Absorptionskoeffizienten und dem Absorptionsverhältnis jeder Fraktion währen der Messung der Ultraviolettabsorption entnehmen. Auf Grund dieser Ermittlung ist es leicht möglich, Fraktionen abzunehmen, die das Gemisch von 5'-Purin-nucleotiden enthalten.The 5'-nucleotides adsorbed on the activated carbon layer are with eluted in a neutral or alkaline aqueous or organic solvent. The most advantageous solvent is dilute aqueous ammonia. While the elution, the ultraviolet absorption of the effluent is continuously monitored with a spectrophotometer measured. The type and content of 5'-nucleotides that are eluted can be easily identified Way from the absorption coefficient and absorption ratio of each fraction during the measurement of the ultraviolet absorption. On the basis of this determination it is easily possible to remove fractions that contain the mixture of 5'-purine nucleotides contain.
Wenn das als Ausgangsmaterial verwendete Hydrolysat der Nucleinsäure keine 5'-Adenylsäure enthält, sind 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure im Abfluß enthalten. Enthält dagegen das Ausgangsmaterial 5'-Adenylsäure, ist auch 5'-Adenylsäure zusammen mit 5'-Guanylsäure und zuweilen 5'-Inosinsäure im Abfluß enthalten. Im letzteren Fall wird die Adenylsäure einer an sich bekannten Desaminierung unterworfen. Diese Desaminierung kann in einfacher Weise mit 5'-Adenylsäuredesaminase durchgeführt werden. Zweckmäßigerweise wird hierzu der Abfluß auf eine geeignete Konzentration eingeengt und nach geeigneter Einstellung des pH-Werts der Wirkung von der 5'-Adenylsäuredesaminase unterworfen, wodurch die 5'-Adenylsäure in 5'-Inosinsäure umgewandelt wird, ohne daß die gleichzeitig vorhandene 5'-Guanylsäure und 5'-Inosinsäure beeinträchtigt werden. 5'-Adenylsäuredesaminase kann im Enzymsystem beispielsweise folgender Mikroorganismen gefunden werden: Gattung Streptomyces, wie Streptomyces aureus, oder Aspergillus, wie Aspergillus elegans, Aspergillus fischen, Aspergillus quercinus und Aspergillus melleus.When the hydrolyzate of nucleic acid used as the starting material does not contain 5'-adenylic acid, 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid are contained in the drain. If, on the other hand, the starting material contains 5'-adenic acid, 5'-adenic acid is also combined with 5'-guanylic acid and sometimes 5'-inosinic acid in the drain. In the latter In this case, the adenylic acid is subjected to a known deamination. These Deamination can be carried out in a simple manner with 5'-adenylic acid deaminase will. For this purpose, the drain is expediently adjusted to a suitable concentration concentrated and after suitable adjustment of the pH the effect of the 5'-adenylic acid deaminase subjected, whereby the 5'-adenic acid is converted into 5'-inosinic acid, without that the simultaneously present 5'-guanylic acid and 5'-inosinic acid impaired will. 5'-Adenyl acid deaminase can, for example, contain the following microorganisms in the enzyme system be found: genus Streptomyces, such as Streptomyces aureus, or Aspergillus, such as Aspergillus elegans, Aspergillus fish, Aspergillus quercinus and Aspergillus melleus.
Wenn zur Herstellung des Ausgangsmaterials ein Enzymsystem eines Mikroorganismus gebraucht worden ist, der 5'-Adenylsäuredesaminase gleichzeitig mit einem Enzymsystem, das Nucleinsäure in 5'-Nucleotide hydrolysieren kann, zu bilden vermag, enthält der Abfluß hauptsächlich 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure. Wenn es erforderlich ist, die restliche 5'-Adenylsäure vollständig in 5'-Inosinsäure umzuwandeln, kann das Produkt erneut der Einwirkung der 5'-Adenylsäuredesaminase unterworfen werden. Zu diesem Zweck läßt man das Enzymsystem, das die 5'-Adenylsäuredesaminase enthält, mit dem die 5'-Adenylsäure enthaltenden Abfluß reagieren. Die Reaktionsbedingungen in dieser Stufe sind etwa folgende: pH-Wert des Mediums 5 bis 8,5, Reaktionstemperatur etwa 37° C, Reaktionsdauer 2 bis 50 Stunden. Die Gewinnung der Natriumsalze wird im folgenden an einem Eluat beschrieben, das mit verdünntem, ammoniakalischem wäßrigem Methanol als bevorzugt an Eluiermittel erhalten wurde. Das erhaltene Eluat wird eingeengt, wobei gleichzeitig das Ammoniak entfernt wird und die Nucleotide als Bariuni-Mischsalz niedergeschlagen werden. Für die Fällung wird beispielsweise Bariumacetat bei einem pH-Wert um 8 und anschließend beispielsweise Methanol oder Äthanol, also ein mit Wasser mischbares organisches Lösungsmittel, dem Abfluß zugegeben.When an enzyme system of a microorganism is used to produce the starting material has been used, the 5'-adenyl acid deaminase simultaneously with an enzyme system, which can hydrolyze nucleic acid into 5'-nucleotides, is able to form, contains the outflow mainly 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid. If necessary is to completely convert the remaining 5'-adenylic acid into 5'-inosinic acid the product can again be subjected to the action of 5'-adenylic acid deaminase. For this purpose, the enzyme system, which contains the 5'-adenylic acid deaminase, is allowed to react with the effluent containing the 5'-adenylic acid. The reaction conditions at this stage there are approximately the following: pH value of the medium 5 to 8.5, reaction temperature about 37 ° C, reaction time 2 to 50 hours. The extraction of the sodium salts is made described below on an eluate that is diluted with dilute ammoniacal aqueous Methanol was obtained as the preferred eluant. The eluate obtained is concentrated, at the same time the ammonia is removed and the nucleotides as Bariuni mixed salt to be knocked down. Barium acetate, for example, is used for the precipitation at a pH around 8 and then, for example, methanol or ethanol, that is a water-miscible organic solvent, added to the drain.
Um dieses Bariumsalz in das Natriumsalz umzuwandeln, wird verdünnte Schwefelsäure einer wäßrigen Suspension des Bariumsalzes zugegeben. Das niedergeschlagene Bariumsulfat wird entfernt, worauf mit Natriumhydroxyd neutralisiert wird. An Stelle der Neutralisation kann die Lösung mit der Natriumform eines stark sauren Sulfonsäure-Ionenaustauschharzes (beispielsweise des unter dem Handelsnamen »Amberlite IR-120« bekannten Austauschers) behandelt und anschließend mit einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, z. B. Methanol, versetzt werden. Als weitere Möglichkeit kann eine doppelte Zersetzung zwischen dem Bariumsalz der Nucleotide und Natriumsulfat durch Schütteln in einer wäßrigen Suspension des Bariumsalzes vorgenommen werden, worauf Bariumsulfat abfiltriert und beispielsweise Methanol oder Äthanol zum Filtrat gegeben wird, wobei sich das Natrium-Mischsalz von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure abscheidet.In order to convert this barium salt into the sodium salt, it is diluted Sulfuric acid was added to an aqueous suspension of the barium salt. The downcast Barium sulfate is removed and neutralized with sodium hydroxide. Instead of the solution can be neutralized with the sodium form of a strongly acidic sulfonic acid ion exchange resin (for example the exchanger known under the trade name »Amberlite IR-120«) treated and then with a water-miscible organic solvent, z. B. methanol, are added. Another possibility is double decomposition between the barium salt of nucleotides and sodium sulfate by shaking in a aqueous suspension of the barium salt are made, whereupon barium sulfate is filtered off and, for example, methanol or ethanol is added to the filtrate, the Sodium mixed salt of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid is deposited.
Gegebenenfalls kann die Mischung der Natriumsalze von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure aus dem mit verdünntem ammoniakalischem wäßrigem Methanol von der Aktivkohle entfernten Eluat ohne Zwischenabscheidung der Mischung als Bariumsalz hergestellt werden. Diese Herstellung kann erfolgen, indem das Eluat eingeengt wird, zwei äquivalente Anteile Natrium, bezogen auf die im Konzentrat enthaltenen Nucleotide, zugegeben werden, das Gemisch eingeengt und anschließend Polethanol zum Konzentrat gegeben wird, um das gewünschte Natriumsalz der Säuremischung niederzuschlagen.Optionally, the mixture of the sodium salts of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid from the dilute ammoniacal aqueous methanol of the eluate removed from the activated carbon without intermediate separation of the mixture as a barium salt getting produced. This production can be done by concentrating the eluate, two equivalent proportions of sodium, based on the nucleotides contained in the concentrate, are added, the mixture is concentrated and then polethanol to the concentrate is added to precipitate the desired sodium salt of the acid mixture.
Das Natriumsalz kann je nach der Art des zugeführten Natriumions als Gemisch von Dinatriumsalzen oder als Gemisch von Mononatriumsalzen der Nucleotide hergestellt werden.The sodium salt can depending on the type of sodium ion supplied as Mixture of disodium salts or as a mixture of monosodium salts of the nucleotides getting produced.
In den folgenden Beispielen beziehen sich die Prozentsätze auf das Gewicht, falls nicht anders angegeben. Die zur Gewinnung des Enzymsystems verwendeten Mikroorganismen Streptomyces griseus und Streptomyces aureus wurden bei der American Type Culture Collection unter den Nummern 10 137 und 13 404 hinterlegt.In the following examples the percentages refer to that Weight unless otherwise stated. Those used to recover the enzyme system Microorganisms Streptomyces griseus and Streptomyces aureus were found in the American Type Culture Collection deposited under numbers 10 137 and 13 404.
Als stark saures Kationenaustauschharz dient in den Beispielen 3 und 5 sulfoniertes Polystyrolharz in Perlform mit einer Teilchengröße von 0,45 bis 0,60 nun, einem ungefähren Gesamtaustauschvermögen von etwa 1,9 Milliäquivalent pro Kubikmeter benetztes Harz und einem Vernetzungsmittelgehalt von 8 bis 10%. Beispiel 1 6 1 eines Abbauprodukts, das durch Abbau von aus Hefe erhaltener Ribonucleinsäure mit einem durch Züchten von Streptomyces aureus erhaltenen Enzymsystem gewonnen worden war (und gemäß enzymatischer Bestimmung 3 g Inosinsäure enthielt), wird in Gegenwart eines Filterhilfsmittels filtriert. Das Filtrat wird auf pH 1,5 eingestellt. Die Lösung wird in einer Menge von 1 1/h durch eine mit 120 g Aktivkohle (für Chromatographie geeignete Sorte) gefüllte Kolonne (4,3 cm Durchmesser, 43 cm Höhe) geleitet.The strongly acidic cation exchange resin used in Examples 3 and 5 sulfonated polystyrene resin in bead form with a particle size of 0.45 to 0.60 well, an approximate total exchange capacity of about 1.9 milliequivalents per cubic meter wetted resin and a crosslinking agent content of 8 to 10%. Example 1 6 1 one Degradation product obtained by breaking down ribonucleic acid obtained from yeast with a enzyme system obtained by culturing Streptomyces aureus (and contained 3 g of inosinic acid according to enzymatic determination), is in the presence a filter aid filtered. The filtrate is adjusted to pH 1.5 set. The solution is in an amount of 1 1 / h through a with 120 g of activated charcoal (grade suitable for chromatography) filled column (4.3 cm diameter, 43 cm Height).
Nach sorgfältigem Waschen mit Wasser wird die Kolonne mit lo,1oigem wäßrigem Ammoniak bei einer Durchlaufmenge von 110 cm3/h eluiert. Das Absorptionsverhältnis jeder Fraktion wird fortlaufend durch Messung der Ultraviolettabsorption ermittelt. Hierdurch wird festgestellt, daß sowohl 5'-Uridylsäure als auch 5'-Cytidylsäure in den ersten 160 cm,' des Ablaufs enthalten sind. Die Elution wird mit dem gleichen Eluiermittel fortgesetzt, wobei mit den folgenden 16 1 Ablauf eine Fraktion erhalten wird, die 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure enthält. Diese Fraktion wird unter vermindertem Druck auf 160 cm-9 eingeengt und dann durch Zusatz einer geringen Menge wäßrigen Ammoniaks auf pH 8,5 eingestellt. Zum Konzentrat werden zuerst 30 cm3 25o/oige Bariumacetatlösung und dann 100 cms Methanol gegeben. Die Mischung wird in einem Kühlschrank aufbewahrt. Der sich hierbei abscheidende Niederschlag wird mit etwas Methanol gewaschen, wobei 15,2 g einer Mischung erhalten werden, die aus den Bariumsalzen von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure besteht.After careful washing with water, the column is filled with 10, 10 aqueous ammonia eluted at a flow rate of 110 cm3 / h. The absorption ratio each fraction is continuously determined by measuring the ultraviolet absorption. It is thereby determined that both 5'-uridylic acid and 5'-cytidylic acid are included in the first 160 cm, 'of the drain. The elution is the same Eluent continued, a fraction being obtained with the following 16 l expiration which contains 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid. This fraction is reduced under Pressure reduced to 160 cm-9 and then by adding a small amount of aqueous Ammonia adjusted to pH 8.5. First 30 cm3 of 25% barium acetate solution are added to the concentrate and then added 100 cms of methanol. The mixture is kept in a refrigerator. The precipitate which separates out is washed with a little methanol, with 15.2 g of a mixture obtained from the barium salts of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid.
Zu einer Suspension der Bariumsalzmischung der Nucleotide in Wasser wird eine Lösung von 5 g Natriumsulfat in 50 cm3 Wasser gegeben. Nach Umrühren wird die Mischung filtriert, um das abgeschiedene Bariumsulfat zu entfernen. Das Filtrat wird eingeengt und mit Methanol versetzt, wobei 6,3 g einer Mischung erhalten werden, die aus den Natriumsalzen von 5'-Guanylsäure und 5'-Inosinsäure besteht. Beispiel 2 Zu 6 1 einer Flüssigkeit, die eine Mischung von 5'-Nucleotiden enthält, durch Abbau von Hefe-Ribonucleinsäure mit Hilfe einer Enzymlösung von Streptomyces griseus erhalten wurde und laut enzymatischer Bestimmung 3 g 5'-Adenylsäure enthält, werden 40 cm3 konzentrierte Salzsäure gegeben, um den pH-Wert auf 2 einzustellen. Die Lösung wird in einer Menge von 1,21/h durch eine mit 120 g Aktivkohle (für Chromatographie geeignete Sorte) gefüllte Kolonne von 4 cm Durchmesser und 45 cm Höhe geleitet.To a suspension of the barium salt mixture of the nucleotides in water a solution of 5 g of sodium sulfate in 50 cm3 of water is added. After stirring it becomes the mixture is filtered to remove the deposited barium sulfate. The filtrate is concentrated and mixed with methanol, 6.3 g of a mixture being obtained, which consists of the sodium salts of 5'-guanylic acid and 5'-inosinic acid. example 2 to 6 1 of a liquid containing a mixture of 5 'nucleotides through Breakdown of yeast ribonucleic acid with the help of an enzyme solution from Streptomyces griseus was obtained and, according to enzymatic determination, contains 3 g of 5'-adenylic acid 40 cm3 of concentrated hydrochloric acid was added to adjust the pH to 2. The solution is fed at a rate of 1.21 / h through a 120 g of activated charcoal (for chromatography suitable variety) filled column with a diameter of 4 cm and a height of 45 cm.
Nach sorgfältigem Waschen mit Wasser wird die Aktivkohleschicht mit 1,5o,'oigem wäßrigem Ammoniak bei einer Durchlaufmenge von 120 cm3/h eluiert. Das Absorptionsverhältnis jeder Fraktion wird fortlaufend durch Messung der Ultraviolettabsorption ermittelt. Es wird festgestellt, daß die Pyrimidinnucleotide 5'-Uridylsäure und 5'-Cytidylsäure in den ersten 360 cm3 des Abflusses enthalten. In den folgenden 3,5 1 des Abflusses werden 5'-Adenylsäure und 5'-Guanylsäure in Mischung miteinander eluiert. Diese 3,5 1 werden unter vermindertem Druck auf 350 cm3 eingeengt, in denen durch enzymatische Bestimmung 2,85 g 5'-Adenylsäure festgestellt werden.After careful washing with water, the activated carbon layer will come with 1.5% aqueous ammonia eluted at a flow rate of 120 cm3 / h. That The absorption ratio of each fraction is continuously determined by measuring the ultraviolet absorption determined. It is found that the pyrimidine nucleotides 5'-uridylic acid and 5'-cytidylic acid contained in the first 360 cm3 of the drain. In the following 3.5 l of the outflow are 5'-adenylic acid and 5'-guanylic acid in a mixture with one another eluted. These 3.5 1 are concentrated under reduced pressure to 350 cm3, in which 2.85 g of 5'-adenylic acid can be determined by enzymatic determination.
Zu einer Kultur von Streptomyces aureus wird Natriummonohydrogenphosphat bis zu einer Konzentration von 1,0 Millimol pro Liter gegeben. Zu dem obengenannten, 5'-Adenylsäure und 5'-Guanylsäure enthaltenden Konzentrat werden 45 ems des Kulturfiltrats gegeben, und die Mischung wird durch Zugabe von Essigsäure auf pH 5 eingestellt. Man läßt die Mischung 30 Stunden bei 37°C stehen. Nach dieser Zeit enthält sie keine 5'-Adenylsäure mehr, sondern 2,4 g 5'-Inosinsäure.Sodium monohydrogen phosphate becomes a culture of Streptomyces aureus given up to a concentration of 1.0 millimole per liter. To the above, Concentrate containing 5'-adenic acid and 5'-guanylic acid are 45 ems of the culture filtrate and the mixture is adjusted to pH 5 by adding acetic acid. The mixture is left to stand at 37 ° C. for 30 hours. After this time it does not contain any 5'-adenylic acid more, but 2.4 g of 5'-inosinic acid.
Die Lösung wird auf pH 1,5 eingestellt und durch eine Schicht aus 45 g Aktivkohle geleitet. Die Schicht wird zuerst mit Wasser gewaschen und dann mit 21 20%igem Methanol, das 0,5% Ammoniak enthält, eluiert. Der Abfluß wird unter vermindertem Druck auf 100 cm3 eingeengt und das Konzentrat auf pH 8,5 eingestellt. Zur Mischung werden nacheinander 20 cm3 30o/oige Bariumacetatlösung und 180 cm3 Methanol gegeben, wobei sich 9,3 g einer Mischung abscheiden, die aus dem Bariumsalz von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure besteht. Zu einer Suspension des Bariumsalzes in 450 cm3 Wasser werden 21 cin3 10o/oige Natriumsulfatlösung gegeben, wobei sich Bariumsulfat abscheidet.The solution is adjusted to pH 1.5 and covered by a layer 45 g of activated charcoal passed. The layer is washed first and then with water eluted with 21 20% methanol containing 0.5% ammonia. The drain is under reduced pressure to 100 cm3 and the concentrate adjusted to pH 8.5. 20 cm3 of 30% barium acetate solution and 180 cm3 are added successively to the mixture Added methanol, with 9.3 g of a mixture separating out, which consists of the barium salt of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid. To a suspension of the barium salt 21 cc 10% sodium sulfate solution are added to 450 cm3 of water, whereby Barium sulfate separates.
Nach Entfernung des Bariumsulfats durch Filtration wird die Lösung auf 45 cm3 eingeengt. Zum Konzentrat werden 100 cm3 Methanol gegeben, wobei sich ein Natriumsalz abscheidet. Das Natriumsalz wird mit Methanol und dann mit Äther gewaschen und 30 Minuten bei 60° C unter einem Druck von 20 mm Quecksilbersäule gewaschen, wobei 4,5 g einer Mischung der Natriumsalze von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure in Form eines farblosen, kristallinen Pulvers erhalten werden.After removing the barium sulfate by filtration, the solution becomes narrowed to 45 cm3. 100 cm3 of methanol are added to the concentrate, whereby a sodium salt separates. The sodium salt is made with methanol and then with ether washed and 30 minutes at 60 ° C under a pressure of 20 mm of mercury washed, 4.5 g of a mixture of the sodium salts of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid can be obtained in the form of a colorless, crystalline powder.
Durch Papierteilungschromatographie und Messung der Ultraviolettabsorption wird festgestellt, daß das Produkt 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure in einem Verhältnis von 4,16: 2,22 enthält. Beispiel 3 Die auf die in Beispiel l erläuterte Weise erhaltene Suspension der Mischung von Bariumsalzen von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure wird mit 30 cm3 der Natriumform eines stark sauren Sulfonsäure-Kationenaustauschharzes (»Amberlite IR-120«) geschüttelt, um das Bariumsalz zu lösen und in das Natriumsalz umzuwandeln. Nach Entfernung des Harzes durch Filtration wird die Lösung unter vermindertem Druck eingeengt und dann mit Methanol versetzt, wobei 6,1 g einer Mischung der Natriumsalze von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure erhalten werden. Beispiel 4 Das auf die in Beispiel 1 erläuterte Weise erhaltene Eluat (durch Elution der Aktivkohle mit lo/oigem wäßrigem Ammoniak) wird unter vermindertem Druck eingeengt, wobei gleichzeitig das Ammoniak abdestilliert wird. Zum Konzentrat werden zwei äquivalente Anteile (bezogen auf die im Konzentrat enthaltenen Nucleotide) Natriumhydroxydlösung gegeben. Die Mischung wird unter vermindertem Druck eingeengt und das Konzentrat mit Methanol versetzt, wobei sich 6,8 g der gewünschten Mischung von Natriumsalzen abscheiden. Beispiel 5 Die auf die in Beispiel l erläuterte Weise erhaltene Suspension der Bariumsalzmischung von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure wird mit 20 cm3 der Natriumform eines stark sauren Sulfonsäure-Kationenaustauschharzes (»Amberlite IR-120«) ge, schüttelt, um das Bariumsalz löslich zu machen und in das Natriumsalz umzuwandeln. Nach Entfernung des Harzes durch Filtration wird die Lösung unter vermindertem Druck eingeengt und mit Methanol versetzt, wobei 4,6 g der gewünschten Mischung von Natriumsalzen von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure erhalten werden.By paper division chromatography and measurement of ultraviolet absorption it is found that the product is 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid in a ratio of 4.16: 2.22. Example 3 The one obtained in the manner explained in Example l Suspension of the mixture of barium salts of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid is made with 30 cm3 of the sodium form of a strongly acidic sulfonic acid cation exchange resin ("Amberlite IR-120") shaken to dissolve the barium salt and into the sodium salt to convert. After removing the resin by filtration, the solution is reduced under reduced pressure The pressure was concentrated and methanol was then added, with 6.1 g of a mixture of the sodium salts from 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid. Example 4 The in Example 1 explained eluate obtained (by eluting the activated charcoal with 10 / oigem aqueous ammonia) is concentrated under reduced pressure, at the same time the Ammonia is distilled off. Two equivalent portions ( sodium hydroxide solution is added to the nucleotides contained in the concentrate). the The mixture is concentrated under reduced pressure and the concentrate with methanol added, whereby 6.8 g of the desired mixture of sodium salts separate out. Example 5 The suspension of the barium salt mixture obtained in the manner explained in Example 1 of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid becomes strong with 20 cm3 of the sodium form of a acidic sulfonic acid cation exchange resin (»Amberlite IR-120«), shaken to Solubilize the barium salt and convert it to the sodium salt. After removal of Resin by filtration, the solution is concentrated under reduced pressure and with Methanol is added, with 4.6 g of the desired mixture of sodium salts of 5'-inosinic acid and 5'-guanylic acid.
Beispiel 6 Das auf die in Beispiel 2 erläuterte Weise mit verdünntem ammoniakalischem Methanol von der Aktivkohle abgetrennte Eluat wird unter vermindertem Druck eingeengt, um das Ammoniak und Methanol zu entfernen. Zum Rückstand werden 2 Äquivalente Natriumhydroxyd (bezogen auf die im Konzentrat enthaltenen Nucleotide) gegeben. Die Mischung wird unter vermindertem Druck weiter eingeengt und dann mit Methanol versetzt. Erhalten werden 4,8 g einer Mischung der Natriumsalze von 5'-Inosinsäure und 5'-Guanylsäure.Example 6 The in the manner explained in Example 2 with diluted ammoniacal methanol separated from the activated carbon eluate is under reduced Pressure was reduced to remove the ammonia and methanol. Becoming a residue 2 equivalents of sodium hydroxide (based on the nucleotides contained in the concentrate) given. The mixture is further concentrated under reduced pressure and then with Methanol added. 4.8 g of a mixture of the sodium salts of 5'-inosinic acid are obtained and 5'-guanylic acid.
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DET20718A DE1246745B (en) | 1961-09-06 | 1961-09-06 | Process for the simplified preparation of a mixture of the sodium salts of 5-inosic acid and 5-guanyl acid |
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| DET20718A DE1246745B (en) | 1961-09-06 | 1961-09-06 | Process for the simplified preparation of a mixture of the sodium salts of 5-inosic acid and 5-guanyl acid |
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| Publication Number | Publication Date |
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| DE1246745B true DE1246745B (en) | 1967-08-10 |
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ID=7549823
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| DET20718A Pending DE1246745B (en) | 1961-09-06 | 1961-09-06 | Process for the simplified preparation of a mixture of the sodium salts of 5-inosic acid and 5-guanyl acid |
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| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE1246745B (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1470340B1 (en) * | 1962-03-08 | 1972-06-29 | Takeda Chemical Industries Ltd | Process for the production of mixed crystals from the disodium salts of 5-guanyl acid and 5-inosic acid |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2844514A (en) * | 1953-11-04 | 1958-07-22 | Pabst Brewing Co | Process for the production of nucleotides |
-
1961
- 1961-09-06 DE DET20718A patent/DE1246745B/en active Pending
Patent Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| US2844514A (en) * | 1953-11-04 | 1958-07-22 | Pabst Brewing Co | Process for the production of nucleotides |
Cited By (1)
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| DE1470340B1 (en) * | 1962-03-08 | 1972-06-29 | Takeda Chemical Industries Ltd | Process for the production of mixed crystals from the disodium salts of 5-guanyl acid and 5-inosic acid |
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