DE1106275B

DE1106275B - Method for removing transglucosidase from fungal amylase preparations

Info

Publication number: DE1106275B
Application number: DEC15237A
Authority: DE
Inventors: Earl Robert Kooi; Clarence Frank Harjes; John Stewart Gilkison
Original assignee: Unilever Bestfoods North America
Current assignee: Unilever Bestfoods North America
Priority date: 1957-06-18
Filing date: 1957-07-27
Publication date: 1961-05-10

Description

Verfahren zum Entfernen der Transglucosidase aus Pilzamylase-Zubereitungen Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zum Entfernen der Transglucosidase aus Pilzamylase-Zubereitungen für die Verzuckerung von Stärke, stärkehaltigen Stoffen und Abbauprodukten. Die mit den erfindungsgemäß behandelten Amylasezubereitungen gewonnenen Stärkehydrolysate enthalten eine außergewöhnlich hohe Konzentration an Dextrose.Method for removing transglucosidase from fungal amylase preparations The invention relates to a method for removing the transglucosidase from fungal amylase preparations for the saccharification of starch and starchy substances and degradation products. The with the amylase preparations treated according to the invention obtained starch hydrolysates contain an exceptionally high concentration of Dextrose.

Amylasezubereitungen, welche aus Organismen der Aspergillus-niger- und Aspergillus-flavus-oryzae-Gruppen stammen, werden bereits in großem Umfange von der Industrie, z. B. bei der enzymatischen Verzuckerung von teilhydrolysierter Stärke zur Bildung von dextrosehaltigen Sirupen, verwendet. Jedoch hat die Erfahrung gezeigt, daß die Bildung von unfermentierbaren Dextrosepolymeren dazu führt, die Brauchbarkeit solcher Zubereitungen besonders bei Verfahren zur Gewinnung von reiner kristalliner Dextrose zu beschränken.Amylase preparations obtained from organisms of the Aspergillus niger and Aspergillus flavus oryzae groups are already widely derived from industry, e.g. B. in the enzymatic saccharification of partially hydrolyzed Starch used to make syrups containing dextrose. However, experience has has shown that the formation of unfermentable dextrose polymers leads to the Usefulness of such preparations especially in processes for the production of pure limit crystalline dextrose.

Amylasezubereitungen von mikrobiologischem Ursprung, insbesondere solche, welche aus Organismen der .A spergillus-niger- und A spergillus-flavus-oryzae-Gruppen der Aspergillusart stammen, enthalten drei Hauptarten von Enzymaktivität, welche sich mit der Hydrolyse von c@-1,4-gebundenen Glucosepolymeren befassen. Diese drei Gruppen von Aktivität können bezeichnet werden als x-Amylaseal,.tivität, Glucamylase- (Maltase-) Aktivität und Transglucosidaseaktivität.Amylase preparations of microbiological origin, in particular those from organisms of the .A spergillus-niger and A spergillus-flavus-oryzae groups derived from the Aspergillus species contain three main types of enzyme activity, which deal with the hydrolysis of c @ -1,4-linked glucose polymers. These three Groups of activity can be referred to as x-amylaseal, activity, glucamylase (Maltase) activity and transglucosidase activity.

a Amylasewirkung auf Stärkepasten verursacht beträchtliche Verringerung der Viskosität. Beim Fehlen merklicher ?Mengen von Glucamylase- (Maltase-) Aktivität werden beträchtliche Mengen von Maltose durch x Amylasewirkung erzeugt.a Amylase effect on starch pastes causes considerable reductions the viscosity. In the absence of appreciable amounts of glucamylase (maltase) activity Considerable amounts of maltose are produced by the action of amylase.

Glucamylasewirkung auf Stärke und/oder Maltose führt zur Bildung von Dextrose. Diese Art von Einwirkung ist auch als Maltase-, Amyloglucosidase-, glucogenische oder Stärkegluconaseaktivität bezeichnet worden.Glucamylase action on starch and / or maltose leads to the formation of Dextrose. This type of exposure is also called maltase, amyloglucosidase, glucogenic or starch gluconase activity.

Transglucosidaseaktivität führt dagegen zur Bildung, insbesondere aus '.L#faltose, von unfermentierbaren Dextrosepolymeren, welche a-1,6-glucosidische Bindungen enthalten und nicht zu Dextrose hydrolysierbar sind.In contrast, transglucosidase activity leads to formation, in particular from '.L # foldose, from unfermentable dextrose polymers, which a-1,6-glucosidic Contain bonds and are not hydrolyzable to dextrose.

Ein Ziel der Erfindung ist daher, Transglucosidaseaktivität aus Amylasezubereitungen zu entfernen, um die Wirksamkeit und Brauchbarkeit solcher Zubereitungen insbesondere für die Hydrolyse von Stärke oder ihren Isonvertierungsprodukten zu dextrosehaltigen Flüssigkeiten mit ungewöhnlich hoher Dextrosekonzentration zu vergrößern.An object of the invention is therefore to obtain transglucosidase activity from amylase preparations to remove the effectiveness and usefulness of such preparations in particular for the hydrolysis of starch or its isonversion products to dextrose To enlarge liquids with unusually high concentrations of dextrose.

Die Erfindung schafft ein Verfahren zum Entfernen der Transglucosidase aus Pilzamylase-Zubereitungen für die Verzuckerung von Stärke, stärkehaltigen Stoffen und Abbauprodukten und ist dadurch gekennzeichnet, daß die Zubereitung in wäßrigem Medium mit einem Tonmineral behandelt und das Medium von dem Tonmineral abgetrennt wird. Vorzugsweise wird die Amylasezubereitimg mittels Aspergillusarten, wie Aspergillus niger oder Aspergillus flavus-oryzae, gewonnen. Die Hauptverwendung der erfindungsgemäß erhaltenen Zubereitungen besteht im Hydrolysieren von Stärke zu Dextrose.The invention provides a method for removing the transglucosidase from fungal amylase preparations for the saccharification of starch and starchy substances and degradation products and is characterized in that the preparation in aqueous Medium treated with a clay mineral and the medium separated from the clay mineral will. The amylase preparation is preferably made using Aspergillus species such as Aspergillus niger or Aspergillus flavus-oryzae. The main use of the invention The resulting preparations consists in hydrolyzing starch to dextrose.

Alle geprüften Pilzamylase-Zubereitungen enthielten merkliche Mengen an Transglucosidaseaktivität, gemesden durch das Ausmaß der Synthese von unfermentierbaren Zuckern aus Maltose. Es wurde ferner gefunden, daß das Verhältnis von Transglucosidase zu Glucamylase in der Enzymzubereitung, gemessen, wie noch beschrieben wird, in erheblicher Weise die Dextrosemenge beeinträchtigt, welche aus teilhydrolysierter Stärke bei der Hydrolyse mittels der Enzymzubereitung erhalten werden kann.All of the fungal amylase preparations tested contained appreciable amounts of transglucosidase activity, measured by the extent of the synthesis of unfermentable substances Sugars made from maltose. It was also found that the ratio of transglucosidase to glucamylase in the enzyme preparation, measured as will be described in significantly affects the amount of dextrose, which from partially hydrolyzed Starch can be obtained in the hydrolysis by means of the enzyme preparation.

Bestimmung der Glucamylaseaktivität Das Substrat ist ein 15 bis 18 D.E. sprühgetrocknetes saures Hydrolysat von Maisstärke. Dieses Material wird in Wasser gelöst und auf 4,0 g Trockensubstanz pro 100 ccm Lösung verdünnt. Genau 50 ccm der Lösung werden in einem 100-ccm-Kolben pipettiert. Zu dem Kolben werden 5,0 ccm eines 1,Omolaren Natriumacetat-Essigsäure-Puffers vom pH 4,3 zugesetzt. Der Kolben wird dann in ein Wasserbad von 60°C gebracht, und nach 101Iinuten wird die richtige Menge an Enzymzubereitung zugefügt. Genau 120 Minuten nach Zusatz der Enzymzubereitung wird die Lösung auf einen Phenolphthaleinendpunkt mit 1 n-Natriumhydroxydlösung eingestellt. Die Lösung wird dann auf Raumtemperatur gekühlt und auf das Volumen verdünnt. Ein reduzierender Zuckerwert, berechnet als Dextrose, wird an dem verdünnten :duster und an einem Kontrollmuster ohne Zusatz einer Enzymzubereitung bestimmt. Glucamylaseaktivität wird berechnet wie folgt: worin _-1 = Glucamylaseaktivität in Einheiten pro Kubikzentimeter oder pro Gramm Enzymzubereitung, S = reduzierende Zucker im enzv urkonvertierten Muster, Gramm pro 100 ccm, B =reduzierende Zucker beim Kontrollversuch, Gramm pro 100 ccm, E = Menge an verwendeter Enzymzubereitung, Kubikzentimeter oder Gramm bedeutet. Die reduzierende Zuckerkonzentration in dem enzymkonvertierten Muster sollte nicht mehr als 1,0 g pro 100 ccm sein.Determination of Glucamylase Activity The substrate is a 15 to 18 DE spray-dried acid hydrolyzate of corn starch. This material is dissolved in water and diluted to 4.0 g of dry matter per 100 cc of solution. Exactly 50 cc of the solution are pipetted into a 100 cc flask. 5.0 cc of a 1.0 molar sodium acetate-acetic acid buffer, pH 4.3, is added to the flask. The flask is then placed in a 60 ° C water bath and after 101 minutes the correct amount of enzyme preparation is added. Exactly 120 minutes after adding the enzyme preparation, the solution is adjusted to a phenolphthalein end point with 1N sodium hydroxide solution. The solution is then cooled to room temperature and diluted to volume. A reducing sugar value, calculated as dextrose, is determined on the diluted: duster and on a control sample without the addition of an enzyme preparation. Glucamylase activity is calculated as follows: where _-1 = glucamylase activity in units per cubic centimeter or per gram of enzyme preparation, S = reducing sugars in the enzv original converted pattern, grams per 100 ccm, B = reducing sugars in the control experiment, grams per 100 ccm, E = amount of enzyme preparation used, cubic centimeter or Gram means. The reducing sugar concentration in the enzyme converted sample should not be more than 1.0 g per 100 cc.

Bestimmung von Tranbglucosidaseaktivität Eine Maltoselösung wird durch Lösen von 200 g von Pfanstiehl C. P. 3laltose in Wasser und Verdünnen auf 500 ccm hergestellt. Genau 50 ccm werden in einen 100-ccm-Kolben pipettiert. Zu dem Kolben werden 5 ccm eines 1,Omolaren Natriumacetat-Essigsäure-Puffers vom pA 4,3 zugesetzt. Nach dem Vermischen wird eine Menge an Enzymzubereitung, welche 2,8 Einheiten Glucamylaseaktivität enthält, zugesetzt. Der Kolben wird in ein 60'C-Wasserbad gebracht. Nach 72 Stunden wird der Kolben in ein siedendes Wasserbad für 15 Minuten gebracht, dann gekühlt und der Inhalt quantitativ in einen 150-ccm-Becher übergeführt. Die Lösung wird auf pA 4,8 mit 1 n-\ atriumhydroxy dlösung eingestellt, in einen 500-ccm-Erlenmeyerkolben übergeführt und auf etwa 200 ccm verdünnt. 10 g Fleischmanns-Aktivtrockenhefe werden zugesetzt und der Kolben 5 Stunden bei 30-C stetig geschüttelt. Der Inhalt wird dann in einen 250 ccm-Kolben übergeführt und auf dieses Volumen verdünnt. 200 ccm werden dann mit 2000 Umdrehungen pro Minute während 15 Minuten zentrifugiert und die überstehende Flüssigkeit in einen trockenen Kolben dekantiert. 50 ccm dieser Flüssigkeit werden in ein 70-ccm-Prüfrohr übergeführt, 5 ccm 3,0 n-Salzsäure zugegeben, das Prüfrohr locker zugestopft, dann in einem siedenden Wasserbad 3 Stunden erwärmt und schließlich in einem Eisbad gekühlt. Der Inhalt des Rohrs wird in einen 100-ccm-Kolben übertragen und mit 1 n-Natriumhvdroxyd auf den Phenolphthaleinendpunkt eingestellt. Ein reduzierender Zucker, berechnet als Dextrose, wird mit einem aliquoten Teil der schließlichen Lösung bestimmt. Uni eine Korrektur für den durch die Hefe eingeführten reduzierenden Zucker zu erhalten, wird ein Kontrollmuster eingeschlossen, in welchem 20 g reine Dextrose an Stelle von Maltose ohne Enzymzusatz verwendet werden. Der reduzierende Zuckerwert de: enzymkonvertierten Musters, korrigiert um den durch die Hefe zugeführten reduzierenden Zucker, stellt das unfermentierbare durch die F-nzymzubereitung synthetisierte Material dar. Die Ergebnisse werden als Gramm unfermentierbare Zucker, svnthetisiert pro 100 g zugesetztes Maltosebydrat, berechnet.Determination of Tranbglucosidase Activity A maltose solution is made by Dissolve 200 g of Pfanstiehl C. P. 3laltose in water and dilute to 500 ccm manufactured. Exactly 50 cc are pipetted into a 100 cc flask. To the piston 5 cc of a 1, omolar sodium acetate-acetic acid buffer of pA 4.3 are added. After mixing, an amount of enzyme preparation containing 2.8 units of glucamylase activity contains, added. The flask is placed in a 60 ° C water bath. After 72 hours the flask is placed in a boiling water bath for 15 minutes, then cooled and the contents quantitatively transferred into a 150 cc beaker. The solution will be adjusted to pA 4.8 with 1N sodium hydroxide solution, in a 500 ccm Erlenmeyer flask transferred and diluted to about 200 cc. 10 g of Fleischmanns active dry yeast added and the flask was shaken steadily at 30 ° C. for 5 hours. The content will then transferred to a 250 cc flask and diluted to that volume. 200 cc are then centrifuged at 2000 revolutions per minute for 15 minutes and decanted the supernatant liquid into a dry flask. 50 cc of this Liquid is transferred into a 70 ccm test tube, 5 ccm 3.0 N hydrochloric acid is added, the test tube is loosely plugged, then heated in a boiling water bath for 3 hours and finally chilled in an ice bath. The contents of the tube are placed in a 100 cc flask transferred and adjusted to the phenolphthalein endpoint with 1N sodium hydroxide. A reducing sugar, calculated as dextrose, is made with an aliquot the ultimate solution. Uni a correction for that introduced by the yeast To obtain reducing sugars, a control sample is included in which 20 g of pure dextrose can be used instead of maltose without added enzymes. Of the reducing sugar value de: enzyme-converted pattern, corrected for the by The reducing sugar added to the yeast, represents the unfermentable by the F-enzyme preparation represents synthesized material. The results are expressed as grams of unfermentable Sugar, synthesized per 100 g of maltose hydrate added, calculated.

Weil die zwei Enzyme, Glucamylase und Transglucosidase, ihre Wirkung auf das gleiche Substrat (Maltose) erstrecken, können die obigen Ergebnisse als das `Verhältnis von Glucamylaseaktivität zu Transglucosidaseaktivität ausgedrückt werden. Dieses Verhältnis wird erhalten durch Teilen der Gramm von unfermentierbaren, pro 100 g Maltosehydrat synthetisierten Zuckern durch 100 minus diesem Wert.Because the two enzymes, glucamylase and transglucosidase, have their effects to the same substrate (maltose), the above results can be considered as the ratio of glucamylase activity to transglucosidase activity is expressed will. This ratio is obtained by dividing the grams of unfermentable, per 100 g of maltose hydrate synthesized sugars by 100 minus this value.

Es wurde gefunden, daß bei der enzymatischen Umwandlung von stärkehaltigen Materialien unter praktischen Bedingungen die Menge an schließlich gebildeter Dextrose durch dieses Verhältnis von Transglucosidaseaktivität zu Glucamvlaseaktivität bestimmt wird. Es wurde weiter gefunden, daß alle geprüften Pilzenzymzubereitungen Transglucosidase-zu-Glucamy lase-Verhältnisse zwischen etwa 0,2 und 0,1 entfalten. Diese Pilzenzymzubereitungen, verwendet unter praktischen Bedingungen der Substratkonzentration,Menge an Enzym und Konvertierungszeit, führen Teilhydrolysate von Stärke in Hy drolysate über, welche zwischen 84 bis 900/, Dextrose enthalten, bezogen auf Trockensubstanzgehalt des Hydrolysats.It has been found that in the enzymatic conversion of starchy materials under practical conditions, the amount of dextrose ultimately formed is determined by this ratio of transglucosidase activity to glucamvase activity. It was further found that all fungal enzyme preparations tested develop transglucosidase-to-glucamylase ratios between about 0.2 and 0.1. These fungal enzyme preparations, used under practical conditions of substrate concentration, amount of enzyme and conversion time, lead partial hydrolysates of starch to hydrolysates, which contain between 84 and 900 % of dextrose, based on the dry matter content of the hydrolyzate.

Die Nachteile bekannter Verfahren zur Herstellung von Dextrose unter enzymatischer Hydrolyse von stärkehaltigen Stoffen sind vielfach. Um einen hohen Konvertierungsgrad des stärkehaltigen Materials zu Dextrose zu erhalten, wurden solche verdünnten Konzentrationen des stärkehaltigen Materials angewendet, daß die Eindampfungskosten solche Verfahren unwirtschaftlich machten. Andere Verfahren verwendeten hochgereinigte Enzymzubereitungen. In diesem Falle führten der Preis des Reinigens der Enzymzubereitung und der Verlust an Enzymaktivität während der Reinigung zu prohibitiven Kosten für die Enzymzubereitung.The disadvantages of known processes for the production of dextrose under enzymatic hydrolysis of starchy substances are common. To a high The degree of conversion of the starchy material to dextrose was obtained such dilute concentrations of the starchy material applied that the Evaporation costs made such processes uneconomical. Other methods used highly purified enzyme preparations. In this case the price of cleaning led the enzyme preparation and the loss of enzyme activity during cleaning prohibitive cost for enzyme preparation.

Durch die Erfindung werden diese Nachteile überwunden, weil dadurch Transglucosidaseaktivität im wesentlichen vollständig aus Pilzamylase-Zubereitungen entfernt werden kann, wodurch in beträchtlicher Weise das Transglucosidase-Glucamylase-Verhältnis erniedrigt wird. Infolgedessen werden mit in dieser Weise behandelten Amylasezubereitungen unerwartet hohe Ausbeuten an Dextrose erzielt, wenn sie zum Hydrolysieren von stärkehaltigem Material unter praktischen Bedingungen benutzt werden. Enzymzubereitungen, welche Stärkematerialien zu Hydrolysaten konvertieren, welche nur 85 bis 86 °/, Dextrose (Trockenbasis) enthalten, werden nach der Behandlung mit einem Tonmaterial stärkehaltige Materialien zu Hydrolysaten mit bis 93 bis 940J, Dextrose (Trockenbasis) konvertieren.The invention overcomes these disadvantages, because thereby Transglucosidase activity essentially entirely from fungal amylase preparations can be removed, thereby considerably reducing the transglucosidase-glucamylase ratio is humiliated. As a result, amylase preparations treated in this way are unexpectedly high yields of dextrose obtained when used to hydrolyze starchy Material can be used under practical conditions. Enzyme preparations, which Starch materials convert to hydrolyzates, which only 85 to 86%, dextrose (Dry basis) will become starchy after treatment with a clay material Convert materials to hydrolysates with up to 93 to 940J, dextrose (dry basis).

Die Praxis des Behandelns von Enzymzubereitungen mit Tonmineralien oder des Versuchs, Enzyme durch die Verwendung von Tonmineralien zu trennen, ist nicht neu. Jedoch ist keins der bekannten Verfahren überhaupt auf das vorliegende Problem, geschweige denn auf das Verfahren, es zu lösen, gerichtet gewesen. Die bisherige Technik ist bei der Verwendung von Tonmineralien darauf gerichtet, fremdes Protein zu entfernen, oder besteht in der Verwendung von Tonmineralien in Laborversuchen, welche auf die Isolierung von reinen einzelnen Enzymen gerichtet sind. Keines der bekannten Verfahren ist auf die Entfernung von Transglucosidase aus Amylasezubereitung durch die Verwendung von Tonmineral gerichtet gewesen, noch enthält der Stand der Technik einen Hinweis, daß Transglucosidase aus Amylasezubereitungen durch Behandlung mit einem Tonmineral entfernt werden kann. Keins der bisherigen Verfahren ist auf die Entfernung von Transglucosidase aus Enzymzubereitungen als ein Mittel des Vergrößerns der Dextroseausbeuten gerichtet, welche unter Verwendung der Enzymzubereitung für die Hydrolyse von stärkehaltigem Material erhalten werden. Jedenfalls ist kein früherer Fall bekannt, wobei Trausglucosidaseaktivität im wesentlichen quantitativ aus Enzymzubereitungen ohne Verlust der gewünschten Enzymaktivität, wie der Gluc .Amylase- oder x-Amylaseaktivität, entfernt worden wäre.The practice of treating enzyme preparations with clay minerals or attempting to separate enzymes through the use of clay minerals not new. However, none of the known methods are at all applicable to the present Problem, let alone the method of solving it. the previous technology is aimed at the use of clay minerals to unfamiliar Remove protein, or use clay minerals in laboratory tests, which are directed to the isolation of pure single enzymes. None of the known method is to remove transglucosidase from amylase preparation had been addressed by the use of clay mineral, nor does the state of the art contain it Technique an indication that transglucosidase from amylase preparations by treatment can be removed with a clay mineral. None of the previous procedures are on the removal of transglucosidase from enzyme preparations as a Means of increasing the dextrose yields directed using the enzyme preparation for hydrolysis of starchy material. In any event, no previous case is known where traus glucosidase activity is essentially quantitatively from enzyme preparations without loss of the desired enzyme activity, how the Gluc amylase or x-amylase activity would have been removed.

Bei der Durchführung der Erfindung wird die Enzymzubereitung zuerst durch Zusatz eines Tonminerals zu einer Lösunoder Suspension der Enzymzubereitung behandelt. Vorzugsweise, jedoch nicht notwendigerweise wird zuerst jeglicher unlösliche feste, in der Suspension der Enzymzubereitung vorhandene Stoff entfernt. Die Enzymzubereitung kann aus der ganzen Kulturflüssigkeit, wie sie aus der untergetauchten Kultur eines Amylase erzeugenden Mikroorganismus erhalten wird, oder aus einer aus der untergetauchten Kultur erhaltenen geklärten Flüssigkeit oder aus einer Suspension von einer getrockneten oder teilgetrockneten Zubereitung, welche Kleie, Stärke oder verschiedene andere beim Standardisieren der Amylasezubereitung verwendete Zusätze enthalten kann, oder aus einer Lösung einer völlig löslichen Enzymzubereitung bestehen. Nach dem Zusatz des Tonmaterials zu der Lösung oder Suspension der Enzymzubereitung wird die Mischung gerührt und dann die feste und die flüssige Phase getrennt. Die Transglucosidaseaktivität wird in der festen Phase zurückgehalten, während die gewünschten Carbohydrasen einschließlich beispielsweise Gluc Amylase und .x-Amylase in der flüssigen Phase verbleiben.In practicing the invention, the enzyme preparation is used first by adding a clay mineral to a solution or suspension of the enzyme preparation treated. Preferably, but not necessarily, all are insoluble first solid substance present in the suspension of the enzyme preparation is removed. The enzyme preparation can be made from the whole culture liquid, just as it can from the submerged culture of a Amylase-producing microorganism is obtained, or from one of the submerged ones Clarified liquid obtained or from a suspension of a dried culture or partially dried preparation, which bran, starch or various others may contain additives used in standardizing the amylase preparation, or consist of a solution of a completely soluble enzyme preparation. After the addition the clay material to the solution or suspension of the enzyme preparation becomes the mixture stirred and then the solid and the liquid phase separated. The transglucosidase activity is retained in the solid phase while including the desired carbohydrases for example Gluc Amylase and .x-Amylase remain in the liquid phase.

Die erhaltene flüssige Enzymzubereitung, in welcher die ursprüngliche Aktivität der erwünschten Gluc-Amylase und x-Amylase verblieben ist, kann dann unmittelbar für die Hydrolyse von stärkehaltigen Stoffen verwendet oder in bekannter Weise behandelt werden, um eine feste Enzymzubereitung zu erhalten.The liquid enzyme preparation obtained, in which the original Activity of the desired Gluc-amylase and x-amylase can then be immediate used for the hydrolysis of starchy substances or treated in a known manner to obtain a solid enzyme preparation.

Im allgemeinen kann jedes Tonmaterial für die Entfernung der Trans glucosidaseaktivität verwendet «-erden. Die Tonmineralien als Gruppe werden als »Tonerdesilikate« bezeichnet. Die Haupttonmineralien werden als Montmorillonit, Attapulgit, Kaolinit, Illit, klassifiziert. Die Tonmineralien sind im wesentlichen wasserhaltige Aluminiumsilikate, wobei Magnesium oder Eisen ganz oder teilweise das Aluminium in einigen Mineralien vertreten und Alkalien oder Erdalkalien als wesentliche Bestandteile in manchen anwesend sind. Einige werden ferner als Fullererde, Floridin, Subbentonite, Feuerton, Porzellanerde und Kugelton bezeichnet. Sie können in ihrer Zusammensetzung zwischen fast reinem Magnesiumsilikat bis fast reinem Aluminiumsilikat liegen. Einzelheiten sind ersichtlich aus Blatt 204 American Colloid Company (1945); Industrial Minerals and Rocks, Amer. Inst. Mining and Met. Eng. (1949 ed), und Clay Mineralogy (R. E. Grim, McGra-,v-Hill (1953), S. 18, 19.In general, any clay material can be used for the removal of the trans glucosidase activity uses «earth. The clay minerals as a group are called "Alumina silicates" called. The main clay minerals are called montmorillonite, Attapulgite, kaolinite, illite, classified. The clay minerals are essential water-containing aluminum silicates, with magnesium or iron in whole or in part the aluminum represented in some minerals and as alkalis or alkaline earths essential components are present in some. Some are also called Fuller's earth, Floridin, Subbentonite, Fire Clay, China Clay and Ball Clay. You can in their composition between almost pure magnesium silicate to almost pure aluminum silicate lie. Details can be found on Sheet 204 American Colloid Company (1945); Industrial Minerals and Rocks, Amer. Inst. Mining and Met. Eng. (1949 ed), and Clay Mineralogy (R. E. Grim, McGra-, v-Hill (1953), pp. 18, 19.

Die Menge an bei der Behandlung des Enzyms verwendeten Tonminerals hängt in gewissem Grad von der Art des verwendeten Minerals, der Menge an vorhandener Transglucosidase und der Menge an vorhandenen Fremdstoffen ab. Für die meisten Enzymzubereitungen sollte die Menge mindestens 0,5 g pro 100 ccm Enzymzubereitung betragen. Es besteht keine obere Grenze, aber Verwendung von mehr als 5 g auf 100 ccm Enzymzubereitung ist nicht vorteilhaft.The amount of clay mineral used in treating the enzyme depends to some extent on the type of mineral used, the amount of it present Transglucosidase and the amount of foreign matter present. For most enzyme preparations the amount should be at least 0.5 g per 100 ccm enzyme preparation. It exists no upper limit, but use of more than 5 g per 100 cc enzyme preparation is not beneficial.

Im allgemeinen sollte die Behandlung der Enzymzubereitung gemäß der Erfindung bei einem pH-Wert ausgeführt werden, bei welchem das gewünschte Enzym bL-ständig ist. Da einige der Tonmineralien den pH-Wert ändern können, kann eine Einstellung des pH-Wertes notwendig werden. Bei Aspergillus-nigar-Kulturfiltraten, wie sie noch in den Beispielen 1 bis 6 erwähnt werden, wird die Tonmineralbehandlung vorzugsweise bei einem pH-Wert zwischen 3,5 und 4,5 ausgeführt.In general, the treatment of the enzyme preparation should be according to Invention can be carried out at a pH at which the desired enzyme bL is permanent. Since some of the clay minerals can change pH, a Adjustment of the pH value may be necessary. In the case of Aspergillus nigar culture filtrates, as will be mentioned in Examples 1 to 6, the clay mineral treatment is used preferably carried out at a pH between 3.5 and 4.5.

Die Zeit der Behandlung mit dem Tonmineral ist nicht wesentlich, solange der Ton in der Enzymzubereitung gut dispergiert ist.The time of treatment with the clay mineral is not essential as long as it is the clay is well dispersed in the enzyme preparation.

Bei der Ausführung der Stärkehydrolyse mit der erhaltenen Enzymzubereitung wird gewöhnlich vorzugsweise zuerst die Stärke in bekannter Weise verdünnt, beispielsweise durch saure Teilhydrolyse oder durch Verwendung eines flüssig machenden Enzyms, wie z. B. einer Bakterien-.x-amylase. Die Konvertierung der verdünnten Stärke durch die behandelte Enzymzubereitung sollte unter Bedingungen des p11-Werts und der Temperatur ausgeführt werden, welche zur Bildung der gewünschten Produkte führen. Bei der Konvertierung der verdünnten Stärke zu Dextrose sind pH-Werte zwischen 3,5 und 5,5 zufriedenstellend. Wenn die Konvertierung vollständig ist, kann die Dextroseflüssigkeit in üblicher Weise raffiniert, konzentriert und kristallisiert werden.When performing starch hydrolysis with the obtained enzyme preparation it is usually preferred to first dilute the starch in a known manner, for example by acidic partial hydrolysis or by using a liquefying enzyme, such as B. a bacterial .x-amylase. The conversion of the diluted starch through the treated enzyme preparation should be under conditions of p11 and temperature which lead to the formation of the desired products. When converting of the diluted starch to dextrose, pH values between 3.5 and 5.5 are satisfactory. When the conversion is complete, the dextrose liquid can be used in the usual way Way to be refined, concentrated and crystallized.

Die Behandlung des Enzyms ist insbesondere vorteilhaft, wenn sie auf ganze Kulturflüssikeiten oder Kulturflüssigkeitsfiltrate angewendet wird,' welche au' untergetauchten aerobischen Kulturen mit Mikroorganismen der Asperbillusart stammen. Diese Kulturflüssigkeiten sind eine sehr wirtschaftliche Quelle der gewünschten Enzyme und können nach der Tonmineralbehandlunz unmittelbar benutzt werden, um stärkehaltige Stoffe mit hohen Ausbeuten an Dextrose zu konvertieren, ohne daß umständliche oder kostspielige Enzyrnreinigungsverfahren oder dünne Stärkekonzentrationen angewendet werden müssen. Insbesondere ist es vorteilhaft, daß die Auswahl des Organismusstammes, der Bestandteile des Mediums und der Wachstumsbedingungen auf der Basis von größter Gluc-Amylaseerzeugung getroffen werden kann, unabhängig davon, wieviel Transglucosidaseaktivität erzeugt wird.Treatment of the enzyme is particularly beneficial when it comes to whole culture liquids or culture liquid filtrates are used, 'which au 'submerged aerobic cultures with microorganisms of the Asperbillus species come. These culture fluids are a very economical source of the desired ones Enzymes and can be used immediately after clay mineral treatment to make starchy Convert substances with high yields of dextrose without the hassle or expensive enzyme purification processes or thin concentrations of starch used Need to become. In particular, it is advantageous that the selection of the organism strain, the components of the medium and the growth conditions on the basis of greatest Gluc-amylase production can be made regardless of how much transglucosidase activity is produced.

Aus der vorhergehenden Beschreibung und den nachfolgenden Beispielen ergibt sich, daß eine erhebliche Verbesserung der Technik durch ein einfaches, wohlfeiles und doch sehr wirksames Mittel gemacht wurde. Die Dextroseausbeute wird wesentlich ohne zusätzliche Kosten und ohne komplizierte Arbeitsweisen erhöht.From the preceding description and the following examples it turns out that a considerable improvement in the technology by a simple, inexpensive and yet a very effective means was made. The dextrose yield becomes essential increased without additional costs and without complicated working methods.

Die Erfindung soll noch durch die Beispiele weiter erläutert werden. Beispiel 1 Eine Kultur von Aspergillus niger der Corn Products Refining Company, Research and Development Department, Kultur-Nr. M-370, isoliert aus einem Bodenmuster von Louisiana, wurde in einem Fermentor unter untergetauchten aerobischen Bedingungen auf einem Medium gezüchtet, welches aus 14 °/o gemahlenem Mais und 10/, Trockensubstanz aus Maiseinweichwasser bestand. Nach Vollendung der Fermentation wurde die Flüssigkeit zur Entfernung des Myzels und anderer suspendierter Stoffe filtriert. Das Filtrat wurde in mehrere Teile eingeteilt.The invention is to be further illustrated by the examples. Example 1 A culture of Aspergillus niger from Corn Products Refining Company, Research and Development Department, Culture No. M-370, isolated from a Louisiana soil sample, was grown in a fermentor under submerged aerobic conditions on medium consisting of 14 % ground corn and 10 % dry matter corn steep water. After the fermentation was completed, the liquid was filtered to remove the mycelium and other suspended matter. The filtrate was divided into several parts.

Zu 100 ccm Teilen des Kulturfiltrats wurden unter Rühren 5 g feinverteiltes Tonmineral zugesetzt. Nach 30 Minuten Rühren wurde das Tonmineral abfiltriert. Die erhaltenen Filtrate wurden auf Gluc .Amylase-, x-Amylase- und Transglucosidaseaktivität geprüft. Es war keine Abnahme an Gluc-Amylaseaktivität vorhanden.5 g of finely divided material were added to 100 cc parts of the culture filtrate with stirring Clay mineral added. After stirring for 30 minutes, the clay mineral was filtered off. the The filtrates obtained were determined for Gluc. Amylase, x-amylase and transglucosidase activity checked. There was no decrease in Gluc-amylase activity.

Dieses Beispiel zeigt, daß Tonmineralien als eine Gruppe zur selektiven Entfernung von Transglucosidaseaktivität ohne Entfernung merklicher Mengen an Gluc-Amylaseaktivität wirksam sind. Obwohl die tonbehandelte Zubereitung einen geringeren Betra; an Transglucosidaseaktivität je nach dem angewendeten Verfahren zeigt, kann dieser Betrag oder ein Teil davon eher auf unfermentierbaren Verunreinigungen in der Maltose als auf wirklicher Transglucosidaseaktivität beruhen. Tabelle I Enzymaktivität im Filtrat Tonmineralien, am Tage der Hauptmineral- Behandlung Gluc-Amylase Transglucosidase- Anmeldung unter folgenden bestandteil Type von Ton Ehefiten pro Gluc-Amylase- \amen bekannt Kubikzentimeter Verhältnis vor 1 nach vor ; nach der Behandlung der Behandlung 1. Volclay Bentonite Montmorillonit Quellbentonit keine 2,08 2,04 0,16 0,05 2. Panther Creek Montmorillonit nichtquellender keine 2,08 2,01 0,16 j 0,05 Bentonit 3. Adsorbol A-565 Montmorillonit - calciniert 2,08 2,04 0,16 0,05 4. Adsorbol A-46 Montmorillonit - imprägniert 2,08 i 1,89 0,16 I 0,03 5. Filtrol 105 Montmorillonit Subbentonit säureaktiviert 2,08 2,04 0,16 0,06 6. Pik-es Peak 9S77 Montmorillonit Fuller-Erde keine 2,08 1,91 0,16 0,05 7. Pikes Peak 9T77 Montmorillonit Fuller-Erde calciniert 2,08 1,93 0,16 i 0,07 B. Florex XXF Floridin - keine 2,08 1,96 0,16 0,05 9. Calcined Floren XYF Floridin - calciniert 2,08 j 1,89 0,16 0,05 10. Attapulgus Clay Attapulgit Fuller-Erde keine 2,08 1,91 0,16 0,05 11. Bandy Tan Kaolinit Kugelton - 2,08 1,97 0,16 0,05 12. Illinois Fire Clay Kaolinit - - 2,08 1,98 0,16 0,13 13. Grundfite Illit - - 2,08 , 1,92 0,16 0,07 Beispiel 2 Die behandelten Filtrate von Beispiel 1 wurden benutzt, um ein Teilhy drolysat von Stärke wie folgt zu konvertieren: Eine 35gewichtsprozentige Suspension von Maisstärke wurde sauer auf ein Dextroseäquivalent (D. E.) von 16 hydrolysiert (Dextroseäquivalent bezieht sich auf den reduzierenden Zuckergehalt des Hydrolysats, berechnet als Dextrose und ausgedrückt als Gewichtsprozent vorhandener Trockensubstanz). Die verdünnte Stärke wurde auf pH 4,5 eingestellt, auf 60°C gebracht und eine so berechnete Menge an Enzymzubereitung zugesetzt, daß sie 14 Einheiten von Gluc-AmyIaseaktivität pro 100 g verdünnter Stärke, Trockensiibstanz, enthielt. lach 72 Stunden Brutzeit bei 60°C wurden die Flüssigkeiten auf D. E. und Dextrosegehalt analysiert mit dem nachstehenden Ergebnis.This example shows that clay minerals are effective as a group for selectively removing transglucosidase activity without removing appreciable amounts of gluc-amylase activity. Although the clay-treated preparation has a lower amount; of transglucosidase activity depending on the process used, this amount or part thereof may be due to unfermentable impurities in the maltose rather than actual transglucosidase activity. Table I. Enzyme activity in the filtrate Clay minerals, on the day of the main mineral treatment Gluc-Amylase Transglucosidase- Registration under the following component type of clay Ehefiten per Gluc-Amylase- \ amen known cubic centimeter ratio before 1 after before; after the treatment of the treatment 1. Volclay Bentonite Montmorillonite Swell Bentonite none 2.08 2.04 0.16 0.05 2. Panther Creek Montmorillonite non-swelling none 2.08 2.01 0.16 j 0.05 Bentonite 3. Adsorbol A-565 montmorillonite - calcined 2.08 2.04 0.16 0.05 4. Adsorbol A-46 Montmorillonite - Impregnated 2.08-1 1.89 0.16 I 0.03 5. Filtrol 105 montmorillonite subbentonite acid activated 2.08 2.04 0.16 0.06 6. Peak of Spades 9S77 Montmorillonite Fuller's Earth None 2.08 1.91 0.16 0.05 7. Pikes Peak 9T77 montmorillonite Fuller's earth calcined 2.08 1.93 0.16 i 0.07 B. Florex XXF Floridin - none 2.08 1.96 0.16 0.05 9. Calcined Floren XYF Floridin - calcined 2.08 j 1.89 0.16 0.05 10. Attapulgus Clay Attapulgite Fuller's Earth none 2.08 1.91 0.16 0.05 11. Bandy Tan Kaolinite Ball Clay - 2.08 1.97 0.16 0.05 12. Illinois Fire Clay Kaolinite - - 2.08 1.98 0.16 0.13 13. Grundfite Illit - - 2.08, 1.92 0.16 0.07 Example 2 The treated filtrates from Example 1 were used to convert a partial hydrolyzate of starch as follows: A 35 weight percent suspension of corn starch was acidic hydrolyzed to a dextrose equivalent (DE) of 16 (dextrose equivalent refers to the reducing sugar content of the hydrolyzate, calculated as dextrose and expressed as percent by weight of dry matter present). The diluted starch was adjusted to pH 4.5, brought to 60 ° C. and an amount of enzyme preparation calculated in such a way that it contained 14 units of gluc-amylase activity per 100 g of diluted starch, dry matter. After 72 hours of incubation at 60 ° C, the liquids were analyzed for DE and dextrose content with the following result.

Dieses Deispiel erläutert die Verbesserung, welche in Grad der Konvertierung verdünnter Stärke zu Dextrose mit Aspergillus-niger-Kulturfiltraten nach Entfernur.- dr Transglucosidaseaktivität durch Behandlung des Kulturfiltrats mit einem Tonmineral erhalten werden. Tabelle II Zusammensetzung der mit Enzym Tonmineralien konvertierten Flüssigkeit ' Dextrose, D.E. ° ja Trocken- 1 Substanz 4 Nicht verwendet .......... 92,0 i 86,4 Volcla-- Bentonite ......... 95,5 93,0 Panther Creek ............ 95,7 93,3 Adsorbol A-565 ........... 95,5 i 93,0 Adsorbol A-46 ............ 96,2 94,2 Filtrol 105................ 95,0 ! 92,1 Pik-es Peak 9S77 . . . . . . . . . . 95,6 93,1 Piken Peak 9T77 ......... 94,8 91,8 Florex XXF .............. 95,5 93,0 Calcined Florex XXF ...... 95,7 93,3 Attapulgus Clay ........... 95,7 93,3 Bands- Tau ............... 95,6 I 93,1 Illinois Fire Clay .......... 92,9 88,7 Grundfite ................. 94,9 92,0 Beispiel 3 Eine Kultur von Aspergillus niger M-370 wurde in einem Fermentor, wie im Beispiel 1 beschrieben, gezüchtet. Nach Vollendung der Fermentation wurde die gesamte Kulturflüssigkeit aus dem Fermentor entfernt und in vier 100-ccm-Teile aufgeteilt. Der erste Teil wurde in keiner Weise behandelt. Der zweite T eil wurde gerührt und 2,0 g Tonmineral »Volclay Bentonite« zugesetzt. Die das Pilzmyzel und Tonmineral enthaltende Mischung wurde filtriert und der Filterkuchen verworfen. Der dritte Teil wurde filtriert ohne Tonmineralbehandlung. Der vierte Teil wurde filtriert, das Filtrat gerührt und 2,0g Tonmineral Wolclay Bentonite« zugesetzt. Die Suspension wurde dann filtriert. Konvertierung einer 16-D.E.-verdünnten Stärke wurde, wie im Beispie12 beschrieben, mit den vier Zubereitungen durchgeführt. Dieses Beispiel erläutert die Anwendung der Erfindung auf unfiltrierte Kulturflüssigkeit. Tabelle III Gluc- Zusammensetzung Ton- Amylase- der enzym- mineral- aktivität konvertierten Filtration der behand- Einheiten Flüssigkeit Kulturflüssigkeit Jung pro 'Dextrose, Kubik- D.E. '° zentimeter ! Trocken- basis Unfiltriert ...... 0 2,30 91,1 84,7 2 2,24 95,3 92,3 Filtriert ...... l 0 2,30 92,1 86,1 2 2,33 95,5 92,8 Beispiel 4 Dieses Beispiel erläutert die Wirkung der Verwendung verschiedener Mengen von Tonmineral. Die verwendete Enzymzubereitung war ein Kulturfiltrat von einer untergetauchten Kultur von Aspergillus niger 111-370. Die Tonmineralbehandlung des Filtrats wurde, wie im Beispiel 1 beschrieben, ausgeführt. Tabelle IV Menge des verwendeten Tonminerals, Gramm pro 100 ccm Enzymzubereitung Tonmineralien 5,0 1 2,0 J 1,0 1 0,5 1 0,2 1 0,0 Dextrosegehalt der enzymkonvertierten Flüssigkeit, °/a Trockenbasis Volclay Bentonite 94,0 93,3 93,1 93,0 88,5 86,5 Attapulgus Clay 93,3 92,0 92,1 - - - Florex XXF ... 93,0 93,6 91,6 - - - Panther Creek .. 93,3 93,6 89,1. 86,9. - - Beispiel 5 Dieses Beispiel zeigt die Wirkung des pH auf die Behandlung von Enzymen mit Tonmineralien. Getrennte Teile eines Kulturfiltrats aus einer untergetauchten Kultur von Aspergillus niger wurden mit Salzsäure oder mit Natriumhydroxyd auf die unten angegebenen PH-Werte eingestellt. Zu jedem 100-ccm-Teil wurden 2,0 g Wolclay Bentonite« zugesetzt. Die Gemische wurden 30 Minuten gerührt und filtriert. Die Ergebnisse von mit den behandelten Enzymzubereitungen durchgeführten Konvertierungen folgen: Tabelle V pH-Wert vor dem Tonzusatz . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5,0 4,5 i 4,0 3,0 ` 2,4 2,0 pH-Wert des Filtrats nach der Behandlung . . . . . . . . . . . 5,2 4,6 4,0 3,1 2,5 2,2 Gluc-Amylaseaktivität des Filtrats, Einheit pro Kubik- zentimeter ... . .................................. 2,17 2,24 2,33 1,76 1,03 0,62 Zusammensetzung der enzymkonvertierten Flüssigkeit D.E. ........................................... 92,5 95,0 95,5 95,6 95,3 94,8 Dextrose,O/o Trockenbasis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87,9 92,1 93,0 93,2 , 92,7 91,9 Die Zusammensetzung von verdünnter Stärke nach der Hydrolyse mit der unbehandelten Enzymzubereitung war 91,4 D.E., 85,9 °/o Dextrose, Trockenbasis.This example explains the improvement that is obtained in the degree of conversion of diluted starch to dextrose with Aspergillus niger culture filtrates after removal of the transglucosidase activity by treating the culture filtrate with a clay mineral. Table II Composition of with enzyme Clay minerals converted liquid '' Dextrose, DE ° yes dry 1 substance 4th Not used .......... 92.0 i 86.4 Volcla-- Bentonite ......... 95.5 93.0 Panther Creek ............ 95.7 93.3 Adsorbol A-565 ........... 95.5 i 93.0 Adsorbol A-46 ............ 96.2 94.2 Filtrol 105 ................ 95.0! 92.1 Peak of Spades 9S77 . . . . . . . . . . 95.6 93.1 Piken Peak 9T77 ......... 94.8 91.8 Florex XXF .............. 95.5 93.0 Calcined Florex XXF ...... 95.7 93.3 Attapulgus Clay ........... 95.7 93.3 Bands- rope ............... 95.6 I 93.1 Illinois Fire Clay .......... 92.9 88.7 Basic fit ................. 94.9 92.0 Example 3 A culture of Aspergillus niger M-370 was grown in a fermentor as described in Example 1. After the fermentation was completed, all of the culture liquid was removed from the fermentor and divided into four 100 cc portions. The first part was not covered in any way. The second part was stirred and 2.0 g of the clay mineral "Volclay Bentonite" was added. The mixture containing the mushroom mycelium and clay mineral was filtered and the filter cake discarded. The third part was filtered without clay mineral treatment. The fourth part was filtered, the filtrate was stirred and 2.0 g of Wolclay Bentonite clay mineral was added. The suspension was then filtered. Conversion of a 16-DE-diluted starch was, as described in Beispie12, carried out with the four preparations. This example illustrates the application of the invention to unfiltered culture fluid. Table III Gluc composition Clay amylase- the enzyme- mineral activity converted Filtration of the treatment units liquid Culture liquid Jung pro 'dextrose, Cubic DE '° centimeter! Dry- Base Unfiltered ...... 0 2.30 91.1 84.7 2 2.24 95.3 92.3 Filtered ...... l 0 2.30 92.1 86.1 2 2.33 95.5 92.8 Example 4 This example illustrates the effect of using different amounts of clay mineral. The enzyme preparation used was a culture filtrate from a submerged culture of Aspergillus niger 111-370. The clay mineral treatment of the filtrate was carried out as described in Example 1. Table IV Amount of clay mineral used, Grams per 100 cc of enzyme preparation Clay minerals 5.0 1 2.0 J 1.0 1 0.5 1 0.2 1 0.0 Dextrose content of the enzyme-converted Liquid, ° / a dry basis Volclay Bentonite 94.0 93.3 93.1 93.0 88.5 86.5 Attapulgus Clay 93.3 92.0 92.1 - - - Florex XXF ... 93.0 93.6 91.6 - - - Panther Creek .. 93.3 93.6 89.1. 86.9. - - Example 5 This example shows the effect of pH on the treatment of enzymes with clay minerals. Separate portions of a culture filtrate from a submerged culture of Aspergillus niger were adjusted to pH values as shown below with hydrochloric acid or sodium hydroxide. 2.0 g Wolclay Bentonite® was added to each 100 cc part. The mixtures were stirred for 30 minutes and filtered. The results of conversions made on the treated enzyme preparations are as follows: Table V pH before the addition of clay. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5.0 4.5 i 4.0 3.0 `2.4 2.0 pH of the filtrate after treatment. . . . . . . . . . . 5.2 4.6 4.0 3.1 2.5 2.2 Gluc amylase activity of the filtrate, unit per cubic centimeters .... .................................. 2.17 2.24 2.33 1.76 1.03 0 , 62 Composition of the enzyme-converted liquid DE ........................................... 92.5 95.0 95.5 95.6 95.3 94.8 Dextrose, O / o dry basis. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87.9 92.1 93.0 93.2 , 92.7 91.9 The composition of diluted starch after hydrolysis with the untreated enzyme preparation was 91.4 DE, 85.9% dextrose, dry basis.

Beispiel 6 Dieses Beispiel zeigt die Anwendung der Erfindung auf andere Stämme von Aspergillus niger und auf andere Vertreter der Aspergillus-niger-Gruppe. Die verwendeten Enzymzubereitungen waren Kulturfiltrate, hergestellt durch untergetauchte Fermentation, wie im Beispiel 1 beschrieben. Ein Teil jeder Kulturfiltratflüssigkeit wurde mit 2,00/, »Volclay Bentonite«, wie im Beispiel 1 beschrieben, behandelt. Konvertierung der verdünnten Stärke wurde, wie im Beispiel 2 beschrieben, durchgeführt.Example 6 This example shows the application of the invention to others Strains of Aspergillus niger and other representatives of the Aspergillus niger group. The enzyme preparations used were culture filtrates produced by submerged Fermentation as described in Example 1. A portion of each culture filtrate liquid was treated with 2.00 /, "Volclay Bentonite" as described in Example 1. Conversion of the diluted starch was carried out as described in Example 2.

Die als NRRL 330 und NRRL 337 beschriebenen Kulturen waren erschöpfend für die Gewinnung von Amylase untersucht worden (Tsuchiya u. a., Cereal Chem., 27, S. 322 [1959]). Tabelle VI Dextrosegehalt der Gluc-Amylaseaktivität enzymkonvertierten Einheiten pro Flüssigkeit, Kultur Kubikzentimeter °/o Trockenbaiss mit unbe- mit be- vor nach handeltem I handeltem Tonbehandlung Enzym Aspergillus niger M-370 . . . . . . . . . . . . . . . 2,30 2,33 86,1 92,8 Aspergillus niger NRRL 330 . . . . . . . . . . 1,85 2,20 86,3 92,7 Aspergillus niger NRRL 337 . . . . . . . . . . 2,04 2,27 87,3 92,0 Aspergillus phoenicis M-381 . . . . . . . . . . . 1,70 I 2,03 88,8 I 91,5 Beispiel 7 Technische Schimmelpilzenzymzubereitungen zur Verwendung bei der Verzuckerung von Stärke werden üblicherweise erhalten durch Züchten eines Vertreters der Aspergillus-flavus-oryzae-Gruppe der Aspergillusart auf feuchter Kleie. Die Kultur wird dann mit Wasser oder einer wäßrigen Salzlösung ausgezogen. Das enzymaktive Material wird aus dem Extrakt durch Zusatz eines wassermischbaren Lösungsmittels aus gefällt, der Niederschlag getrocknet und dann mit einem inerten Bestandteil vermischt, um eine Standardaktivitätszubereitung zu erhalten. Die Zubereitung wird in dieser Form vertrieben oder verwendet. Solche Enzymzubereitungen wurden getrennt in Wasser suspendiert, auf pg 4,0 eingestellt und filtriert. Zu 100 ccm jedes Filtrats wurden 5 g von Wolclay Bentonite« zugesetzt, und nach 30 Minuten Rühren wurden die Suspensionen filtriert. Konvertierung verdünnter Stärke wurde bei 50°C, p$ 4,6 bis 4,8, während 72 Stunden durchgeführt. Getrennte Konvertierungen wurden mit behandelten und unbehandelten Enzymzubereitungen durchgeführt unter Verwendung einer Menge an Enzymzubereitung äquivalent 14 -Gluc-Amylaseeinheiten pro 100 g verdünnte Stärke, Trockensubstanz. Tabelle VII zeigt die Ergebnisse derAnwendung der Erfindung auf verschiedene gereinigte feste Enzymzubereitungen. Die ursprünglichen Zubereitungen wurden in Wasser vor der Verwendung wieder suspendiert. Tabelle VII Gluc-Amylaseaktivität bei 50° C Dextrosegehalt der Einheiten pro Gramm enzymkonvertierten Enzymzubereitung Quelle der Enzymzubereitung Flüssigkeit, /o Trockenbasis mit mit ursprüngliche nach der ursprünglicher tonbehandelter Tonbehandlung Zubereitung . Zubereitung AW Enzyme Ba) ..... - 4,54 3,34 80,1 86,9 Shozyme Sb) . .. . . . . . . Aspergillus flavus-oryzae 11,8 11,8 86,6 92,1 Dextrinasea) . . . . . . . . . Aspergillus flavus-oryzae 15,0 14,7 87,7 91,3 Diastase 32b) ......... - 53,3 51,4 90,8 91,9 Mylase°) . . . . . . . . . . . . . Aspergillus flavus-oryzae 13,5 13,2 91,5 92,8 a) Warenzeichen eines von der Firma Takamine Laboratories am Tage der Anmeldung hergestellten Produkts. b) Warenzeichen eines von der Firma Röhm & Haas Company am Tage der Anmeldung hergestellten Produkts. e) Warenzeichen eines von der Firma Wallerstein Company am Tage der Anmeldung hergestellten Produkts. The cultures described as NRRL 330 and NRRL 337 had been exhaustively investigated for the production of amylase (Tsuchiya et al., Cereal Chem., 27, p. 322 [1959]). Table VI Dextrose content of the Gluc amylase activity enzyme converted Units per liquid, Culture cubic centimeter ° / o drybait with unconcerned before after act I acted Clay treatment enzyme Aspergillus niger M-370. . . . . . . . . . . . . . . 2.30 2.33 86.1 92.8 Aspergillus niger NRRL 330. . . . . . . . . . 1.85 2.20 86.3 92.7 Aspergillus niger NRRL 337. . . . . . . . . . 2.04 2.27 87.3 92.0 Aspergillus phoenicis M-381. . . . . . . . . . . 1.70 I 2.03 88.8 I 91.5 Example 7 Technical mold enzyme preparations for use in the saccharification of starch are usually obtained by growing a member of the Aspergillus flavus oryzae group of the Aspergillus species on moist bran. The culture is then grown up with water or an aqueous salt solution. The enzyme-active material is precipitated from the extract by adding a water-miscible solvent, the precipitate is dried and then mixed with an inert component to obtain a standard activity preparation. The preparation is sold or used in this form. Such enzyme preparations were separately suspended in water, adjusted to pg 4.0 and filtered. To 100 cc of each filtrate, 5 g of Wolclay Bentonite® was added and, after stirring for 30 minutes, the suspensions were filtered. Conversion of diluted starch was carried out at 50 ° C, p $ 4.6 to 4.8, for 72 hours. Separate conversions were carried out on treated and untreated enzyme preparations using an amount of enzyme preparation equivalent to 14 -Gluc amylase units per 100 g of diluted starch, dry matter. Table VII shows the results of applying the invention to various purified solid enzyme preparations. The original formulations were resuspended in water before use. Table VII Gluc amylase activity at 50 ° C dextrose content of the Units per gram of enzyme converted Enzyme preparation Source of the enzyme preparation Liquid, / o dry basis with with original after the original clay-treated Clay treatment preparation . preparation AW Enzyme Ba) ..... - 4.54 3.34 80.1 86.9 Shozyme Sb). ... . . . . . Aspergillus flavus oryzae 11.8 11.8 86.6 92.1 Dextrinasea). . . . . . . . . Aspergillus flavus oryzae 15.0 14.7 87.7 91.3 Diastase 32b) ......... - 53.3 51.4 90.8 91.9 Mylase °). . . . . . . . . . . . . Aspergillus flavus oryzae 13.5 13.2 91.5 92.8 a) Trademark of a product manufactured by Takamine Laboratories on the day of filing. b) Trademark of a product manufactured by Röhm & Haas Company on the day of registration. e) Trademark of a product manufactured by Wallerstein Company on the day of registration.

Claims

PATENT CLAIMS: 1. A method for removing the transglucosidase from fungal amylase preparations for the saccharification of starch, starchy substances and degradation products, characterized in that the preparation is treated in an aqueous medium with a clay mineral and the medium is separated from the clay mineral.

2. The method according to claim 1, characterized in that the amylase preparation by means of Aspergillus species such as Aspergillus niger or Aspergillus flavus-oryzae, is won. Considered publications: "Enzymatic Catalysis" by K. Chyrbäch, Berlin, 1953, p. 97, para. 3; »Enzymology« by O. Hoffmann-Ostenhof, Vienna, 1954, p. 35; "Chemisches Centralblatt", 1951, 11, p. 2672, L. A. Underhofler and D. K. Roy; "The practice of distilleries" by Foth-Duws, Berlin, 1951, p. 95 to 98.