DE10228090A1

DE10228090A1 - Ausgewählte Anthranylamidpyridinamide und deren Verwendung als Arzneimittel

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Publication number: DE10228090A1
Application number: DE2002128090
Authority: DE
Inventors: Andreas Dr. Huth; Martin Dr. Krüger; Ludwig Dr. Zorn; Stuart Dr. Ince; Karl-Heinz Dr. Thierauch; Andreas Dr. Menrad; Martin Dr. Haberey; Holger Dr. Hess-Stumpp
Original assignee: Schering AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 2002-06-19
Filing date: 2002-06-19
Publication date: 2004-01-15

Abstract

Es werden ausgewählte Anthranylamidpyridinamine der allgemeinen Formel I DOLLAR F1 in der R·1· und R·2· die in der Beschreibung angegebenen Bedeutungen haben, als VEGFR-2 und VEGFR-3 Inhibitoren, deren Herstellung und Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung von verschiedenen Erkrankungen, die durch persistente Angiogenese ausgelöst werden, beschrieben.

Description

Die Erfindung betrifft ausgewählte Anthranylamidpyridinamine als VEGFR-2 und VEGFR-3 Inhibitoren, deren Herstellung und Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung von Erkrankungen, die durch persistente Angiogenese ausgelöst werden.
Persistente Angiogenese kann die Ursache für verschiedene Erkrankungen wie Psoriasis, Arthritis, wie rheumatoide Arthritis, Hämangioma, Angiofribroma, Augenerkrankungen, wie diabetische Retinopathie, Neovaskulares Glaukom, Nierenerkrankungen, wie Glomerulonephritis, diabetische Nephropathie, maligne Nephrosklerose, thrombische mikroangiopatische Syndrome, Transplantationsabstoßungen und Glomerulopathie, fibrotische Erkrankungen, wie Leberzirrhose, mesangialzellproliferative Erkrankungen und Artheriosklerose sein oder zu einer Verschlimmerung dieser Erkrankungen führen.
Die persistente Angiogenese wird durch den Faktor VEGF über seinen Rezeptor induziert. Damit VEGF diese Wirkung entfalten kann ist es nötig, daß VEGF am Rezeptor bindet und eine Tyrosinphosphorylierung hervorgerufen wird.
Eine direkte oder indirekte Inhibition des VEGF-Rezeptors (VEGF = vaskulärer endothelialer Wachstumsfaktor) kann zur Behandlung derartiger Erkrankungen und anderer VEGF-induzierter pathologischer Angiogenese und vaskularer permeabiler Bedingungen, wie Tumor-Vaskularisierung, verwendet werden. Beispielsweise ist bekannt, daß durch lösliche Rezeptoren und Antikörper gegen VEGF das Wachstum von Tumoren gehemmt werden kann.
Aus der WO 00/27819 sind Anthranylsäureamide bekannt, die als Arzneimittel zur Behandlung von Psoriasis, Arthritis, wie rheumatoide Arthritis, Hämangioma, Angiofribroma, Augenerkrankungen, wie diabetische Retinopathie, Neovaskulares Glaukom, Nierenerkrankungen, wie Glomerulonephritis, diabetische Nephropatie, maligne Nephrosklerose, thrombische mikroangiopatische Syndrome, Transplantationsabstoßungen und Glomerulopathie, fibrotische Erkrankungen, wie Leberzirrhose, mesangialzellproliferative Erkrankungen, Artheriosklerose, Verletzungen des Nervengewebes und zur Hemmung der Reocclusion von Gefäßen nach Ballonkatheterbehandlung, bei der Gefäßprothetik oder nach dem Einsetzen von mechanischen Vorrichtungen zum Offenhalten von Gefäßen, wie z. B. Stents, zum Einsatz kommen.
Die bekannten Verbindungen sind in den angegebenen Indikationen zwar allgemein wirksam, aber ihre Wirksamkeit geht in der Regel einher mit einer Toxizität und einer schlechteren Verträglichkeit des Medikaments.
Es besteht daher nach wie vor ein Bedarf nach einerseits wirksameren und andererseits toxikologisch unbedenklicheren Verbindungen, die darüberhinaus auch noch besser verträglich sein sollten.
Es wurde nun gefunden, daß Verbindungen der allgemeinen Formel I
in der
R¹ für Indazolyl, Indolinyl, Chinolinyl oder für die Gruppe
steht, welche gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden mit Halogen, Hydroxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, Halo-C₁-C₄-alkyl oder mit der Gruppe =O oder -OR³ oder mit Cyano-C₁-C₃-alkyl substituiert sein kann,
R² für Wasserstoff oder C₁-C₃-Alkyl steht und
R³ für Wasserstoff oder C₁-C₄-Alkyl steht, mit Ausnahme der Verbindungen, in denen R² für Wasserstoff oder Methyl steht und R¹ gleichzeitig für unsubstituiertes Indazolyl oder Chinolinyl steht, bedeuten, sowie deren Enantiomeren, Racemate, Isomeren und Salze, die oben aufgeführten Nachteile überwinden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen verhindern eine Tyrosinphosphorylierung bzw. stoppen die persistente Angiogenese und damit das Wachstum und ein Ausbreiten von Tumoren, wobei sie sich insbesondere durch eine geringere Inhibition von Isoformen des Cytochroms P 450 (2C9 und 2C19) auszeichnen.
Arzneimittel, die über diese Isoformen abgebaut werden, sind im allgemeinen weniger toxisch und besser verträglich.
Unter Alkyl ist jeweils ein geradkettiger oder verzweigter Alkylrest, wie beispielsweise Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sek.Butyl, Pentyl, Isopentyl oder Hexyl zu verstehen, wobei C₁-C₄-Alkylreste bevorzugt werden.
Unter Alkoxy ist jeweils ein geradkettiger oder verzweigter Alkoxyrest, wie beispielsweise Methyloxy, Ethyloxy, Propyloxy, Isopropyloxy, Butyloxy, Isobutyloxy oder sek.Butyloxy, zu verstehen.
Unter Halogen ist jeweils Fluor, Chlor, Brom oder Jod zu verstehen.
Ist eine saure Funktion enthalten, sind als Salze die physiologisch verträglichen Salze organischer und anorganischer Basen geeignet wie beispielsweise die gut löslichen Alkali- und Erdalkalisalze sowie N-Methyl-glukamin, Dimethyl-glukamin, Ethyl-glukamin, Lysin, 1,6-Hexadiamin, Ethanolamin, Glukosamin, Sarkosin, Serinol, Tris-hydroxy-methyl-amino-methan, Aminopropandiol, Sovak-Base, 1-Amino-2,3,4-butantriol.
Ist eine basische Funktion enthalten sind die physiologisch verträglichen Salze organischer und anorganischer Säuren geeignet wie Salzsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Fumarsäue u. a.
Insbesondere wirksam sind solche Verbindungen der allgemeinen Formel I, in der
R¹ für Indazolyl, Indolinyl, Chinolinyl oder für die Gruppe
steht, welche gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden mit Methyl, Methoxy oder mit der Gruppe =O oder mit Cyanoethyl substituiert sein kann und
R² für Wasserstoff steht, mit Ausnahme der Verbindungen, in denen R²für Wasserstoff steht und R¹ gleichzeitig für unsubstituiertes Indazolyl oder Chinolinyl steht, bedeuten, sowie deren Enantiomeren, Racemate, Isomeren und Salze.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel I beinhalten auch die möglichen tautomeren Formen und umfassen die E- oder Z-Isomeren oder, falls ein chirales Zentrum vorhanden ist, auch die Racemate und Enantiomeren.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sowie deren physiologisch verträglichen Salze verhindern eine Tyrosinphosphorylierung bzw. stoppen die persistente Angiogenese und damit das Wachstum und ein Ausbreiten von Tumoren, wobei sie sich insbesondere durch eine geringere Inhibition von Isoformen des Cytochroms P 450 (2C9 und 2C19) auszeichnen. Die Medikation mit den erfindungsgemäßen Verbindungen kann daher auch ohne Rücksicht auf begleitend verabreichte Arzneimittel, die über diese Isoformen abgebaut werden, risikolos erfolgen.
Die Verbindungen der Formel I sowie deren physiologisch verträglichen Salze sind auf Grund ihrer inhibitorischen Aktivität in Bezug auf Phosphorylierung des VEGF-Rezeptors als Arzneimittel verweendbar. Auf Grund ihres Wirkprofils eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von Erkrankungen, die durch eine persistente Angiogenese hervorgerufen oder gefördert werden.
Da die Verbindungen der Formel I als Inhibitoren der Tyrosinkinase KDR und FLT identifiziert werden, eignen sie sich insbesondere zur Behandlung von solchen Krankheiten, die durch die über den VEGF-Rezeptor ausgelöste persistente Angiogenese oder eine Erhöhung der Gefäßpermeabilität hervorgerufen oder gefördert werden.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen als Inhibitoren der Tyrosinkinase KDR und FLT.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind somit auch Arzneimittel zur Behandlung von Tumoren bzw. deren Verwendung.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können entweder alleine oder in Formulierung als Arzneimittel zur Behandlung von Psoriasis, Kaposis Sarkom, Restenose, wie z. B. Stent-induzierte Restenose, Endometriose, Crohns disease, Hodgkins disease, Leukämie, Arthritis, wie rheumatoide Arthritis, Hämangioma, Angiofribroma, Augenerkrankungen, wie diabetische Retinopathie, Neovaskulares Glaukom, Nierenerkrankungen, wie Glomerulonephritis, diabetische Nephropatie, maligne Nephrosklerose, thrombische mikroangiopatische Syndrome, Transplantationsabstoßungen und Glomerulopathie, fibrotische Erkrankungen, wie Leberzirrhose, mesangialzellproliferative Erkrankungen, Artheriosklerose, Verletzungen des Nervengewebes und zur Hemmung der Reocclusion von Gefäßen nach Ballonkatheterbehandlung, bei der Gefäßprothetik oder nach dem Einsetzen von mechanischen Vorrichtungen zum Offenhalten von Gefäßen, wie z. B. Stents, als Immunsuppressiva, zur Unterstützung der narbenfreien Wundheilung, bei Altersflecken und bei Kontaktdermatitis zum Einsatz kommen.
Bei der Behandlung von Verletzungen des Nervengewebes kann mit den erfindungsgemäßen Verbindungen eine schnelle Narbenbildung an den Verletzungsstellen verhindert werden, d. h. es wird verhindert, daß die Narbenbildung eintritt, bevor die Axone wieder Verbindung miteinander aufnehmen. Damit würde eine Rekonstruktion der Nervenverbindungen erleichtert.
Ferner kann mit den erfindungsgemäßen Verbindungen die Ascites-Bildung bei Patienten unterdrückt werden. Ebenso lassen sich VEGF bedingte Ödeme unterdrücken.
Die Lymphangiogenese spielt eine wichtige Rolle bei der lymphogenen Metastasierung (Karpanen, T. et al., Cancere Res. 2001 Mar 1, 61(5): 1786–90, Veikkola T. et al., EMBO J. 2001, Mar 15; 20 (6): 1223–31).
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen nun ebenfalls hervorragende Wirkung als VEGFR Kinase 3 – Inhibitoren und eignen sich daher auch als wirksame Inhibitoren der Lymphangiogenese.
Durch eine Behandlung mit den erfindungsgemäßen Verbindungen wird nicht nur eine Reduzierung der Größenentwicklung von Metastasen, sondern auch eine Verringerung der Anzahl der Metastasen erreicht.
Derartige Arzneimittel, deren Formulierungen und Verwendungen sind ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
Die Erfindung betrifft somit ferner die Verwendung der Verbindungen der allgemeinen Formel I, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Verwendung als, bzw. zur Behandlung von Psoriasis, Kaposis Sarkom, Restenose, wie z. B. Stent-induzierte Restenose, Endometriose, Crohns disease, Hodgkins disease, Leukämie, Arthritis, wie rheumatoide Arthritis, Hämangioma, Angiofribroma, Augenerkrankungen, wie diabetische Retinopathie, Neovaskulares Glaukom, Nierenerkrankungen, wie Glomerulonephritis, diabetische Nephropatie, maligne Nephrosklerose, thrombische mikroangiopatische Syndrome, Transplantationsabstoßungen und Glomerulopathie, fibrotische Erkrankungen, wie Leberzirrhose, mesangialzellproliferative Erkrankungen, Artheriosklerose, Verletzungen des Nervengewebes und zur Hemmung der Reocclusion von Gefäßen nach Ballonkatheterbehandlung, bei der Gefäßprothetik oder nach dem Einsetzen von mechanischen Vorrichtungen zum Offenhalten von Gefäßen, wie z. B. Stents, als Immunsuppressiva, als Unterstützung bei der narbenfreien Wundheilung, bei Altersflecken und bei Kontaktdermatitis.
Ferner kann mit den erfindungsgemäßen Verbindungen die Ascites-Bildung bei Patienten unterdrückt werden. Ebenso lassen sich VEGF bedingte Ödeme unterdrücken.
Zur Verwendung der Verbindungen der Formel I als Arzneimittel werden diese in die Form eines pharmazeutischen Präparats gebracht, das neben dem Wirkstoff für die enterale oder parenterale Applikation geeignete pharmazeutische, organische oder anorganische inerte Trägermaterialien, wie zum Beispiel, Wasser, Gelatine, Gummi arabicum, Milchzucker, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, pflanzliche Öle, Polyalkylenglykole usw. enthält. Die pharmazeutischen Präparate können in fester Form, zum Beispiel als Tabletten, Dragees, Suppositorien, Kapseln oder in flüssiger Form, zum Beispiel als Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Gegebenenfalls enthalten sie darüber hinaus Hilfsstoffe wie Konservierungs-, Stabilisierungs-, Netzmittel oder Emulgatoren, Salze zur Veränderung des osmotischen Drucks oder Puffer.
Für die parenterale Anwendung sind insbesondere Injektionslösungen oder Suspensionen, insbesondere wäßrige Lösungen der aktiven Verbindungen in polyhydroxyethoxyliertem Rizinusöl, geeignet.
Als Trägersysteme können auch grenzflächenaktive Hilfsstoffe wie Salze der Gallensäuren oder tierische oder pflanzliche Phospholipide, aber auch Mischungen davon sowie Liposome oder deren Bestandteile verwendet werden.
Für die orale Anwendung sind insbesondere Tabletten, Dragees oder Kapseln mit Talkum und/oder Kohlenwasserstoffträger oder -binder, wie zum Beispiel Lactose, Mais- oder Kartoffelstärke, geeignet. Die Anwendung kann auch in flüssiger Form erfolgen, wie zum Beispiel als Saft, dem gegebenenfalls ein Süßstoff oder bei Bedarf ein oder mehrere Geschmacksstoffe beigefügt ist.
Die Dosierung der Wirkstoffe kann je nach Verabfolgungsweg, Alter und Gewicht des Patienten, Art und Schwere der zu behandelnden Erkrankung und ähnlichen Faktoren variieren. Die tägliche Dosis beträgt 0,5–1000 mg, vorzugsweise 50–200 mg, wobei die Dosis als einmal zu verabreichende Einzeldosis oder unterteilt in 2 oder mehreren Tagesdosen gegeben werden kann.
Die oben beschrieben Formulierungen und Darreichungsformen sind ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen
Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen, ohne den Umfang der beanspruchten Verbindungen auf diese Beispiele zu beschränken.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen erfolgt nach an sich bekannten Methoden, indem man ein Amin der allgemeinen Formel II
in der R¹ die in der allgemeinen Formel I angegebene Bedeutung hat, alkyliert, und anschließend das Amin der allgemeinen Formel II einer reduktiven Alkylierung mit Aldehyden oder Ketonen unterwirft, wobei man in Gegenwart eines Reduktionsmittels wie beispielsweise Natriumcyanoborhydrid in einem geeigneten inerten Lösungsmittel wie zum Beispiel Ethanol bei Temperaturen von 0°C bis zum Siedepunkt des Lösungsmittels umsetzt. Eine Zugabe von Säuren wie Eisessig kann sich als vorteilhaft erweisen.
Wenn man von einer primären Aminogruppe ausgeht, so kann man gegebenenfalls nacheinander mit zwei verschiedenen Carbonylverbindungen umsetzen, wobei man gemischte Derivate erhält [Literatur z. B. Verardo et al. Synthesis (1993), 121; Synthesis (1991), 447; Kawaguchi, Synthesis (1985), 701; Micovic et al. Synthesis (1991), 1043].
Es gibt auch die Methode in 1,2-Dichlorethan mit Triacetoxyborhydrid umzusetzen (J. org. Chem. 1996, 3849). Es kann vorteilhaft sein, zunächst die Schiffsche Base durch Umsetzung des Aldehyds mit dem Amin in Lösungsmitteln wie Ethanol oder Methanol, gegebenenfalls unter Zugabe von Hilfsstoffen wie Eisessig zu bilden und dann erst Reduktionsmittel wie z. B. Natriumcyanoborhydrid zuzusetzen. Man kann aber auch die Schiffsche Base isolieren und anschliessend in Lösungsmitteln wie Diethylether oder Tetrahydrofuran mit Reduktionsmitteln wie beispielsweise Lithiumauminiumhydrid zum Amin reduzieren.
Für die Herstellung der Amide geht man von Verbindungen der allgemeinen Formel III
aus, wobei hierfür die aus der Peptidchemie bekannten Verfahren zur Verfügung stehen. Beispielsweise kann die entsprechende Säure in aprotischen polaren Lösungsmitteln wie zum Beispiel Dimethylformamid über eine aktiviertes Säurederivat, zum Beispiel erhältlich mit Hydroxybenzotriazol und einem Carbodiimid wie zum Beispiel Diisopropylcarbodiimid, bei Temperaturen zwischen 0°C und dem Siedepunkt des Lösungsmittels vorzugsweise bei 80°C mit dem Amin umgesetzt werden. Auch die Methode O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluoro-phosphat (HATU) für die Aktivierung einzusetzen, liefert gute Ergebnisse. Man benutzt als Base beispielsweise N-Methylmorpholin und als Lösungsmittel Dimethylformamid. Die Reaktion läuft vorzugsweise bei Raumtemperatur ab. Für die Amidbildung kann auch das Verfahren über das gemischte Säureanhydrid, Imidazolid oder Azid eingesetzt werden. Ein vorheriger Schutz einer zusätzlichen Aminogruppe beispielsweise als Amid ist nicht in allen Fällen erforderlich, kann die Reaktion aber günstig beeinflussen.
Gegenstand der vorliegenden Anmeldung sind somit auch Verbindungen der allgemeinen Formeln II und III
in denen R¹ und R² die in der allgemeinen Formel I angegebenen Bedeutungen haben, als Zwischenprodukte zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel I.
Herstellung von N-(2-Oxo-2,3-dihydro-1H-indol-6-yl)-2-[(6-oxo-1,6-dihydro-pyridin-3-ylmethyl)-amino]-benzamid Beispiel 1.0
4,5 g (16,9 mMol) 2-Amino-N-(2-oxo-2,3-dihydro-1N-indol-6-yl)-benzamid werden in 90 ml absolutem Methanol zusammen mit 2,5 g (20,3 mMol) Pyrid-2-on-5-carboxaldehyd vorgelgt und mit 2,5 ml Eisessig versetzt. Der Ansatz wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Es wird auf 4°C gekühlt und mit zweimal je 750 mg Natriumcyanoborhydrid versetzt und 24 Stunden gerührt. Der Feststoff wird abgesaug und mit Methanol und Wasser gewaschen. Es wird dann mit gesättigter Natriumhydrogenkarbonatlösung ausgerührt und wieder abgesaugt. Der Feststoff wird getrocknet. Man erhält 5,16 g (82% der Theorie) an N-(2-Oxo-2,3-dihydro-1H-indol-6-yl)-2-[(6-oxo-1,6-dihydro-pyridin-3-ylmethyl)-amino]-benzamid.
In analoger Verfahrensweise werden ebenfalls hergestellt:

Herstellung von N-(1-Cyanomethyl-1H-indazol-6-yl)-2-[(6-oxo-1,6-dihydro-pyridin-3-ylmethyl)-amino]-benzamid Beispiel 2.0
317 mg (1,3 mMol) N-(1H-Indazol-6-yl)-2-[(6-oxo-1,6-dihydro-pyridin-3-ylmethyl)-amino]-benzamid werden in 15 ml Dimethylformamid mit 280 mg (1,6 mMol) (6-Amino-indazol-1-yl)-acetonitrile, 330 mg N-Methylmorpholin und 591 mg (1,55 mMol) O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluoro-phosphat (HATU) versetzt und 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der Ansatz wird dann am Vakuum zur Trockene eingeengt und in 30 ml Essigester und 30 ml Wasser verteilt, wobei nochvom Feststoff abgesaugt wird. Die Essigesterphase wird getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wird über eine Flashmaster-Säule mit einem Gradienten von Methylenchlorid : Ethanol = 100 : 0 bis 90 : 10 als Elutionsmittel gereinigt. Man erhält 286 mg/55% der Theorie) an N-(1-Cyanomethyl-1N-indazol-6-yl)-2-[(6-oxo-1,6-dihydro-pyridin-3-ylmethyl)-amino]-benzamid.
Herstellung von N-(2-Cyanomethyl-2N-indazol-6-yl)-2-[(6-oxo-l,6-dihydro-pyridin-3-ylmethyl)-amino]-benzamid Beispiel 2.1
N-(2-Cyanomethyl-2N-indazol-6-yl)-2-[(6-oxo-1,6-dihydro-pyridin-3-ylmethyl)-amino]-benzamid wird analog zu Beispiel 2.0 hergestellt.
Herstellung der Ausgangsmaterialien
Verfahrensvariante A
Soweit die Herstellung der Zwischenverbindungen nicht beschrieben wird, sind diese bekannt oder analog zu bekannten Verbindungen oder den hier beschriebenen Verfahren herstellbar.
i Stufe 1
2-Methoxypyridin-5-carbaldehyd ist Kaufware (Aldrich)
ii
2-Pyridon-5-carbaldehyd wird z. B. nach Hoppe Seylers Zeitschrift für physiologische Chemie Bd. 325, S239, (1961) hergestellt.
Stufe 1 Verfahrensvariante B
5-Nitro-1,3-dihydro-indol-2-on wird nach R. T. Courts, J. Org. Chem. 48, 3747, 1970) hergestellt
22,6 g (100 mMol) 2,4-Dinitrophenylessigsäure werden in einer Mischung von 200 ml Methanol und 830 ml Toluol gelöst und bei Raumtemperatur mit 83 ml Trimethylsilyldiazomethan (2 molar in Toluol; 166 mMol) versetzt und 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach Einengen zur Trockene und Trocknen bei 70°C am Vakuum erhält man 24 g (100% der Theorie) an 2,4-Dinitrophenylessigsäuremethylester.
26,6 g (83 mMol) 2,4-Dinitrophenylessigsäuremethylester werden in 500 ml Ethanol mit 5,4 g Palladium/Kohle (10%) unter 1 bar Wasserstoff 1,5 Stunden bei Raumtemperatur hydriert. Nach Abfiltrieren vom Katalysator wird eingeengt. Man erhält 18,8 g (94% der Theorie) an 2,4-Diaminophenylessigsäuremethylester.
18,8 g (104 mMol) 2,4-Diaminophenylessigsäuremethylester in 500 ml absolutem Toluol werden bei 4°C mit 52 ml einer 2-molaren Lösung von Trimethylaluminium in Toluol versetzt und anschliessend 60 min auf 60°C erwärmt. Nach dem Abkühlen wird mit einer mit 2-N Natronlauge auf pH 7 gestellt, über Kieselgur filtriert und gegen Essigester extrahiert. Die organische Phase wird gewaschen, getrocknet, filtriert und eingeengt. Man erhält 8,7 g (55% der Theorie) 6-Amino-1,3-dihydro-indol-2-on.
Stufe 2
356 mg 5-Nitro-1,3-dihydro-indol-2-on werden in 30 ml Tetrahydrofuran : Ethanol = 1 : 1 mit 400 mg Palladium auf Kohle (10%) bei Raumtemperatur und Normaldruck 1 Stunde hydriert. Nach Absaugen vom Katalysator über Kieselgur und Einengen erhält man 320 mg (100% der Theorie) an 5-Amino-1,3-dihydro-indol-2-on.
Stufe 3
In 1 ml Dimethylacetamid werden 320 mg 5-Amino-1,3-dihydro-indol-2-on gelöst und tropfenweise mit 371 mg (2 mMol) 2-Nitrobenzoylchlorid versetzt, wobei eine leichte Erwärmung eintritt. Nach Rühren über Nacht bei Raumtemperatur wird im Vakuum eingeengt und der Rückstand in Essigester und Wasser aufgenommen. Das Absaugen eines unlöslichen Feststoffs gibt 130 mg (21,9% der Theorie) 2-Nitro-N-(2-oxo-2,3-dihydro-1N-indol-5-yl)-benzamid. Nach Ausschütteln wird die organische Phase gewaschen, filtriert und eingeengt und man erhält nochmals 400 mg (67% der Theorie) 2-Nitro-N-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-5-yl)-benzamid vom Schmelzpunkt 265°C.
In analoger Verfahrensweise wird auch 2-Nitro-N-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-6-yl)-benzamid vom Schmelzpunkt > 300°C hergestellt.
Stufe 4
In analoger Verfahrensweise zur Stufe 2 wird 2-Amino-N-(indol-2-on-5-yl)benzoesäureamid vom Schmelzpunkt 219°C hergestellt
In analoger Verfahrensweise zur Stufe 2 dieses Beispiels wird 2-Amino-N(indol-2-on-6-yl)benzoesäureamid vom Schmelzpunkt 230°C hergestellt.
Herstellung von 2-Amino-N-(7-methoxy-2-oxo-2H-chromen-3-yl)-benzamid Verfahrensvariante C
Stufe 1
13 g (85,4 mMol) 2-Hydroxy-4-methoxybenzaldehyd werden in 300 ml Toluol mit 9,8 g (102,5 mMol) n-Propylaminhydrochlorid und 11,5 ml (102,5 mMol) Nitroessigsäureethylester 15 Stunden am Wasserabscheider erhitzt. Es werden dann nochmals 3 ml Nitroessigsäureethylester zugegeben und weitere 5 Stunden am Wasserabscheider gekocht. Nach dem Abkühlen wird mit Essigester verdünnt und mit Wasser ausgeschüttelt. Die Essigesterphase wird getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wird über Kieselgel mit Methylenchlorid als Elutionsmittel chromatographiert. Man erhält 6,14 g (33% der Theorie) 3-Nitro-7-methoxy-chromen-2-on.
Stufe 2
In analoger Verfahrensweise zu Stufe 2 aus Beispiel B wird aus 3-Nitro-7-methoxy-chromen-2-on in Ethanol 3-Amino-7-methoxy-chromen-2-on hergestellt.
Stufe 3
In analoger Verfahrensweise zu Stufe 3 von Beispiel B wird aus 2-Nitrobenzoylchlorid und 3-Amino-7-methoxy-chromen-2-on 2-Nitro-N-(7-methoxy-2-oxo-2H-chromen-3-yl)-benzamid 2-Nitro-N-(7-methoxybenzopyran-2-on-3-yl)benzoesäureamid hergestellt. 2-Amino-N-(7-methoxy-2-oxo-2Hchromen-3-yl)-benzamid
Stufe 4
In analoger Verfahrensweise zu Stufe 2 Beispiel B wird aus 2-Nitro-N-(7-methoxy-2-oxo-2N-chromen-3-yl)-benzamid in Ethanol : Tetrahydrofuran = 5 : 2 2-Amino-N-(7-methoxy-2-oxo-2H-chromen-3-yl)-benzamid hergestellt.
In analoger Verfahrensweise werden auch folgende Zwischenverbindungen hergestellt:
Verfahrensvariante D
Stufe 1
In Analogie zu Beispiel 1 wird aus Anthranilsäureester und 2-Pyridon-5-carbaldehyd in 72% Ausbeute 2-[(6-Oxo-1,6-dihydro-pyridin-3-ylmethyl)-amino]-benzoesäure methylester hergestellt.
Stufe 2
450 mg (1,74 mMol) 2-[(6-Oxo-1,6-dihydro-pyridin-3-ylmethyl)-amino]-benzoesäure methylester werden in 20 ml Ethanol mit 4 ml 1N-Natronlauge versetzt und 1 Stunde auf 120°C Badtempereatur erwärmt. Nach Abdestillieren des Ethanol am Vakuum wird mit 10 ml Waser verdünnt und mit 2N-Salzsäure auf pH 7 gestellt. Das ausgefallene Produkt wird abgesaugt. Man erhält 242 mg (57% der Theorie) an Ausbeute 2-[(6-Oxo-1,6-dihydro-pyridin-3-ylmethyl)-amino]-benzoesäure.
Die nachfolgenden Anwendungsbeispiele erläutern die biologische Wirkung und Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen ohne diese auf die Beispiele zu beschränken.
Für die Versuche benötigte Lösungen
Stammlösungen
Stammlösung A: 3 mM ATP in Wasser pH 7,0 (–70°C)
Stammlösung B: g-33P-ATP 1 mCi/100 μl
Stammlösung C: poly-(Glu4Tyr) 10 mg/ml in Wasser
Lösung für Verdünnungen
Substratlösemittel: 10 mM DTT, 10 mM Manganchlorid, 100 mM Magnesiumchlorid
Enzymlösung: 120 mM Tris/HCl, pH 7,5, 10 μM Natriumvanadiumoxid
Anwendungsbeispiel 1
Hemmung der KDR- und FLT-1 Kinaseaktivität in Gegenwart der erfindungsgemäßen Verbindungen
In einer spitz zulaufenden Mikrotiterplatte (ohne Proteinbindung) werden 10 μl Substratmix (10 μl Vol ATP Stammlösung A + 25 μCi g-33P-ATP (ca. 2,5 μl der Stammlösung B) + 30 μl poly-(Glu4Tyr) Stammlösung C + 1,21 ml Substratlösemittel), 10 μl Hemmstofflösung (Substanzen entsprechend den Verdünnungen, als Kontrolle 3% DMSO in Substratlösemittel) und 10 μl Enzymlösung (11,25 μg Enzymstammlösung (KDR oder FLT-1 Kinase) werden bei 4°C in 1,25 ml Enzymlösung verdünnt) gegeben. Es wird gründlich durchgemischt und bei 10 Minuten Raumtemperatur inkubiert. Anschließend gibt man 10 μl Stop-Lösung (250 mM EDTA, pH 7,0) zu, mischt und überträgt 10 μl der Lösung auf einen P 81 Phosphozellulosefilter. Anschließend wird mehrfach in 0,1 M Phosphorsäure gewaschen. Das Filterpapier wird getrocknet, mit Meltilex beschichtet und im Microbetazähler gemessen.
Die IC50-Werte bestimmen sich aus der Inhibitorkonzentration, die notwendig ist, um den Phosphateinbau auf 50% des ungehemmten Einbaus nach Abzug des Leerwertes (EDTA gestoppte Reaktion) zu hemmen.
Die Ergebnisse der Kinase-Inhibition IC50 in μM sind in der nachfolgenden Tabelle dargestellt:
Anwendungsbeispiel 2
Cytochrom P450 – Inhibition
Die Cytochrom P450 – Inhibition wurde entsprechend der Veröffentlichung von Crespi et al. (Anal. Biochem., 248, 188–190 (1997)) unter Verwendung von Baculovirus/Insektenzellen-exprimierten, humanen Cytochrom P 450 Isoenzymen (1A2, 2C9, 2C19, 2D6, 3A4) durchgeführt.
Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle dargestellt.
Hemmung der Cytochrom P450 Isoenzyme (IC50, μM)
Aus dem Ergebnis ist deutlich die überlegene Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen gegenüber den bekannten Verbindungen zu erkennen.

Claims

Verbindungen der allgemeinen Formel I
in der R¹ für Indazolyl, Indolinyl, Chinolinyl oder für die Gruppe
steht, welche gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden mit Halogen, Hydroxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, Halo-C₁-C₄-alkyl oder mit der Gruppe =O oder -OR³ oder mit Cyano-C₁-C₃-alkyl substituiert sein kann, R² für Wasserstoff oder C₁-C₃-Alkyl steht und R³ für Wasserstoff oder C₁-C₄-Alkyl steht, mit Ausnahme der Verbindungen, in denen R²für Wasserstoff oder Methyl steht und R¹ gleichzeitig für unsubstituiertes Indazolyl oder Chinolinyl steht, bedeuten, sowie deren Enantiomeren, Racemate, Isomeren und Salze.
Verbindungen der allgemeinen Formel I, in der R¹ für Indazolyl, Indolinyl, Chinolinyl oder für die Gruppe
steht, welche gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden mit Methyl, Methoxy oder mit der Gruppe =O oder mit Cyanoethyl substituiert sein kann und R² für Wasserstoff steht, mit Ausnahme der Verbindungen, in denen R²für Wasserstoff steht und R¹ gleichzeitig für unsubstituiertes Indazolyl oder Chinolinyl steht, bedeuten, sowie deren Enantiomeren, Racemate, Isomeren und Salze.
Arzneimittel, enthaltend mindestens eine Verbindung gemäß den Ansprüchen 1 und 2.
Arzneimittel gemäß Anspruch 3, zur Behandlung von Tumoren, Psoriasis, Kaposis Sarkom, Restenose, Stent-induzierte Restenose, Endometriose, Crohns disease, Hodgkins disease, Leukämie, Arthritis, rheumatoide Arthritis, Hämangioma, Angiofribroma, Augenerkrankungen, diabetische Retinopathie, Neovaskulares Glaukom, Nierenerkrankungen, Glomerulonephritis, diabetische Nephropatie, maligne Nephrosklerose, thrombische mikroangiopatische Syndrome, Transplantationsabstoßungen, Glomerulopathie, fibrotische Erkrankungen, Leberzirrhose, mesangialzellproliferative Erkrankungen, Artheriosklerose, Verletzungen des Nervengewebes und zur Hemmung der Reocclusion von Gefäßen nach Ballonkathetherbehandlung, bei der Gefäßprothetik oder nach dem Einsetzen von Stents zum Offenhalten von Gefäßen, und von Immunerkrankungen als Immunsuppressiva, zur Unterstützung der narbenfreien Wundheilung bei Altersflecken und bei Kontaktdermatitis.
Verbindungen gemäß den Ansprüchen 1 und 2 und Arzneimittel, gemäß den Ansprüchen 3 und 4, mit geeigneten Formulierungs und Trägerstoffen.
Verwendung der Verbindungen der Formel I, gemäß den Ansprüchen 1 und 2, als Inhibitoren der Tyrosinkinase KDR und FLT.
Verwendung der Verbindungen der allgemeinen Formel I, gemäß den Ansprüchen 1 und 2, in Form eines pharmazeutischen Präparats für die enteral, parenterale und orale Applikation.
Verwendung der Verbindungen der allgemeinen Formel I, gemäß den Ansprüchen 1 und 2, als VEGFR-Kinase 3-Inhibitoren bei der Lymphangiogenese.
Verwendung der Verbindungen der allgemeinen Formel I, gemäß den Ansprüchen 1 und 2, zur Unterdrückung der Ascites-Bildung und zur Unterdrückung VEGF bedingter Ödeme.
Verbindungen der allgemeinen Formeln II und III
in denen R¹ und R² die in der allgemeinen Formel I angegebenen Bedeutungen haben, als Zwischenprodukte zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel I.