DE102007022161A1

DE102007022161A1 - neue Cyclohexenonverbindungen aus Antrodia camphorata und deren Anwendung

Info

Publication number: DE102007022161A1
Application number: DE102007022161A
Authority: DE
Inventors: Sheng-Yun Liu; Wu-Che Wen; Wan-Ling Tsou; Mao-Tien Kuo; Chun-Hung Huang; Ka-Hang Fok; Ya-Ying Li; Chun-Chou Chang
Original assignee: Golden Biotechnology Corp
Current assignee: Golden Biotechnology Corp
Priority date: 2007-01-08
Filing date: 2007-05-11
Publication date: 2008-07-10
Also published as: KR101011616B1; FR2911133A1; GB0709171D0; JP2008169194A; SI1942093T1; ZA200800150B; JP5085186B2; BRPI0800401A; EP1942093B1; DK1942093T3; NZ564913A; GB2445430A; CY1111722T1; PL1942093T3; DK1942093T5; TW200829234A; MY144944A; CA2618271A1; KR20080065218A; SG144815A1

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft eine neue Verbindung und deren Verwendungen, wobei es sich um einen aus Antrodia camphorata isolierten und gereinigten Extrakt, insbesondere um 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10- trienyl)-cyclohex-2-enon, und dessen Verwendung bei der Inhibierung des Tumorwachstums handelt. Die erfindungsgemäße Verbindung, die in Antrodia camphorata noch nicht gefunden worden war, kann zum Inhibieren des Wachstums von Krebszellen, wie z. B. Brustkrebs, Leberkrebs und Prostatakrebs, sowie als pharmazeutische Zusammensetzung zum Inhibieren des Tumorwachstums verwendet werden, oder sie kann ferner aufgrund ihrer Antioxidationsmittelaktivität zur Verhinderung von Herz- und Blutgefäßerkrankungen oder als Nahrungsergänzung für Gesundheitszwecke verwendet werden.

Description

Hintergrund der Erfindung
1. Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft eine neue Verbindung, insbesondere einen Extrakt, der aus Antrodia camphorata isoliert und gereinigt worden ist, und deren bzw. dessen Verwendung bei der Inhibierung des Tumorwachstums.
2. Stand der Technik
Antrodia camphorata (Niu Chang-Zhi) wird auch als „Chang-Zhi", „Niu Chang-ku", „Red-Chang", „Red Chang-Chih", „Chang-Ku", Kampferkammerpilz, usw., bezeichnet, wobei es sich um eine in Taiwan endemische Art handelt, die auf der inneren, morschen Kernholzwand von Cinnamomum kanehirae Hay in einer Höhe von 450 m bis 2000 m in den Bergen von Taiwan wächst. Die Fruchtkörper von Antrodia camphorata wachsen innerhalb des Baumstamms. Cinnamoum kanehirai Hay ist vorwiegend in den Bergregionen von Tao-Yuan, Nan-Tou verbreitet und wurde aufgrund des seltenen Vorkommens und des illegalen übermäßigen Aberntens auf die Liste der seltenen und wertvollen Arten gesetzt. Die wild vorkommende Antrodia camphorata ist deshalb sogar selten geworden. Da die Wachstumsgeschwindigkeit von natürlicher Antrodia camphorata extrem gering ist und deren Wachstumssaison von Juni bis Oktober ist, ist der Preis von Antrodia camphorata sehr hoch.
Die Fruchtkörper von Antrodia camphorata sind mehrjährig, ungestielt, korkartig oder holzig und weisen ein verschiedenartiges Aussehen auf, wie z. B. plattenartige, glockenartige, hufartige oder turmartige Formen. Sie liegen zu Beginn des Wachstums flach auf der Oberfläche von Holz vor. Dann richtet sich der Rand der Vorderkante auf und rollt sich zu einer Plattenform oder zu Stalaktiten. Die oberen Flächen von Antrodia camphorata sind glänzend, weisen eine braune bis dunkelbraune Farbe und nicht offensichtliche Falten, flache und stumpfe Kanten auf. Die Unterseiten sind orangerot oder teilweise gelb mit überall angeordneten Ostiolen.
Darüber hinaus gibt Antrodia camphorata einen starken Geruch von Sassafras (Kampferaroma) ab, wird nach dem Trocknen in der Sonne blass gelblich-braun und weist einen stark bitteren Geschmack auf. In der traditionellen taiwanesischen Medizin wird Antrodia camphorata gebräuchlich für eine Entgiftung, als Leberschutzmittel und Antikrebsmittel verwendet. Antrodia camphorata ist wie allgemein essbare und medizinische Pilze reich an zahlreichen Nährstoffen, einschließlich Polysacchariden (wie z. B. β-Glukosan), Triterpenoiden, Superoxiddismutase (SOD), Adenosin, Proteinen (Immunglobuline), Vitaminen (wie z. B. Vitamin B, Nikotinsäure), Spurenelementen (wie z. B. Calcium, Phosphor und Germanium, usw.), Nukleinsäuren, Agglutinin, Aminosäuren, Steroiden, Ligninen und Blutdruckstabilisatoren (wie z. B. Antodia-Säure) und dergleichen. Es wird davon ausgegangen, dass diese bioaktiven Bestandteile vorteilhafte Effekte aufweisen, wie z. B.: Antitumor, Immunverstärkung, Antiallergie, Inhibierung der Plättchenagglutination, Antivirus, Antibakterien, Blutdrucksenkung, Blutglukosesenkung, Cholesterinsenkung, Leberschutz und dergleichen.
Bei den Triterpenoiden handelt es sich um die am intensivsten untersuchte Komponente von den zahlreichen Zusammensetzungen von Antrodia camphorata. Triterpenoide ist der Sammelbegriff für natürliche Verbindungen, die 30 Kohlenstoffatome mit pentacyclischen oder hexacyclischen Strukturen enthalten. Der bittere Geschmack von Antrodia camphorata ist auf die Triterpenoidkomponente zurückzuführen. Drei neue Triterpenoide des Ergostan-Typs (Antcin A, Antcin B, Antcin C) wurden von Cherng et al. aus den Fruchtkörpern von Antrodia camphorata isoliert (I. H. Cherng und H. C. Chiang, 1995, Three new triterpenoids from Antrodia cinnamomea, J. Nat. Prod., 58, 365–371). Drei neue Verbindungen, die als „Zhankuic"-Säure A, „Zhankuic"-Säure B und „Zhankuic"-Säure bezeichnet werden, wurden von Chen et al. aus den Fruchtkörpern von Antrodia camphorata mit Ethanol extrahiert (C. H. Chen und S. W. Yang, 1995, New steroid acids from Antrodia cinnamomea – a fungus parasitic an Cinnamomum micranthum, J. Nat. Prod. 58, 1655–1661). Darüber hinaus haben Cherng et al. auch drei andere neue Triterpenoide aus den Fruchtkörpern von Antrodia camphorata gefunden, bei denen es sich um von Sesquiterpenlacton und 2-Biphenyl abgeleitete Verbindungen handelt, 4,7-Dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxol und 2,2',5,5'-Tetramethoxy-3,4,3',4'-bi-methylendioxy-6,6'-dimethylbiphenyl (H. C. Chiang, D. P. Wu, I. W. Cherng und C. H. Ueng, 1995, A sesquiterpene lactone, phenyl and biphenyl compounds from Antrodia cinnamomea, Phytochemistry, 39, 613–616). 1996 wurden vier neue Triterpenoide des Ergostan-Typs (Antcine E und F und Methylantcinate G und H) von Cherng et al. mit den gleichen analytischen Verfahren isoliert (I. H. Cherng, D. P. Wu und H. C. Chiang, 1996, Triterpenoids from Antrodia cinnamomea, Phytochemistry 41, 263–267). Zwei mit Ergostan verwandte Steroide, „Zhankuic"-Säuren D und E wurden zusammen mit drei mit Lanostan verwandten Triterpenen, 15-alpha-Acetyldehydrosulfurensäure, Dehydroeburicosäure, Dehydrosulfurensäure, von Yang et al. isoliert (S. W. Yang, Y. C. Shen und C. H. Chen, 1996, Steroids and triterpenoids of Antrodia cinnamomea – a fungus parasitic an Cinnamomum micranthum, Phytochemistry 41, 1389–1392). Die Suche nach den genauen aktiven Bestandteilen des Antitumoreffekts befindet sich immer noch auf der experimentellen Stufe und die genauen aktiven Bestandteile müssen noch ermittelt werden, obwohl die Antitumoreffekte von Antrodia camphorata-Extrakten beschrieben worden sind (wie z. B. in der vorstehend genannten Literatur). Wenn die genaue Antitumorzusammensetzung vorliegt, wird dies stark zu vorteilhaften Effekten bei der Antitumorbehandlung beitragen.
Zusammenfassung der Erfindung
Zur Identifizierung der Antitumorverbindungen in den Extrakten von Antrodia camphorata wurde die Verbindung der Formel (1) in dieser Erfindung isoliert und gereinigt,
worin X und Y Sauerstoff oder Schwefel sein können, R₁, R₂ und R₃ jeweils ein Wasserstoffatom, Methyl oder (CH₂)_m-CH₃ ist und m = 1–12; n = 1–12.
Eine bevorzugte Verbindung der allgemeinen Formel (1) ist 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon gemäß der Formel (2) mit der Molekülformel C₂₄H₃₈O₄, das als blassgelbes Pulver vorliegt und ein Molekulargewicht von 390 aufweist.
Verbindungen mit den Strukturen der Formel (1) und der Formel (2) werden durch eine wässrige Extraktion oder eine organische Lösungsmittel-Extraktion von Antrodia camphorata gereinigt. Die verwendeten organischen Lösungsmittel umfassen unter anderem Alkohole, wie z. B. Methanol, Ethanol oder Propanol, Ester, wie z. B. Ethylacetat, Alkane, wie z. B. Hexan, oder Alkylhalogenide, wie z. B. Chlormethan, Chlorethan. Von diesen Lösungsmitteln ist ein Alkohol bevorzugt und Ethanol ist besonders bevorzugt.
Mit den Verbindungen, die erfindungsgemäß verwendet werden können, kann das Wachstum von Tumorzellen inhibiert werden, und sie können ferner als eine medizinische Zusammensetzung zur Behandlung von Krebs und zur Verstärkung der therapeutischen Effekte verwendet werden. Die Verbindungen der Erfindung können auf verschiedene Krebszellen, einschließlich Brustkrebs, Leberkrebs und Prostatakrebs angewandt werden, wobei sie zu einer Verlangsamung des Wachstums von Krebszellen führen, ferner die Proliferation von Krebszellen inhibieren und das Risiko einer Bösartigkeit vermindern. Daher können sie bei der Krebsbehandlung von z. B. Brustkrebs, Leberkrebs, Prostatakrebs und dergleichen verwendet werden.
Andererseits können die Verbindungen der Formel (1) und/oder der Formel (2) in der Erfindung in medizinische Zusammensetzungen zur Behandlung von Brustkrebs, Leberkrebs und Prostatakrebs einbezogen werden, um das Wachstum von Tumorzellen zu inhibieren. Die medizinischen Zusammensetzungen umfassen nicht nur die Verbindungen der Formel (1) und/oder der Formel (2), sondern auch pharmazeutisch verträgliche Träger. Die Träger umfassen unter anderem Vehikel, wie z. B. Wasser, Füllstoffe, wie z. B. Saccharose oder Stärke, Bindemittel, wie z. B. Cellulosederivate, Verdünnungsmittel, Sprengmittel, Absorptionsverstärker oder Süßungsmittel. Die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann durch Mischen der Verbindungen der Formel (1) und/oder der Formel (2) mit mindestens einem der Träger mittels herkömmlicher Verfahren, die in dem technischen Gebiet der Pharmazie bekannt sind, hergestellt werden, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung unter anderem als Pulver, Tablette, Kapsel, Pellets, Granulat oder eine andere, flüssige Formulierung formuliert werden kann.
Darüber hinaus können die erfindungsgemäßen Verbindungen ideale Ergänzungen für Gesundheitsnahrungsmittel, Diäten und Getränke, medizinische Produkte und Kosmetika sein, da die erfindungsgemäßen Verbindungen gleichzeitig auch eine Antioxidationsmittelaktivität aufweisen, und sie sind aufgrund ihres Vermögens zur Verhinderung von kardiovaskulären Erkrankungen oder Zellmutationen für die menschliche Gesundheit vorteilhaft.
Die vorliegende Erfindung wird in der folgenden veranschaulichten Ausführungsform und in Beispielen weiter erläutert. Die nachstehenden Beispiele sollen den Schutzbereich der Erfindung jedoch nicht beschränken und für den Fachmann sind Modifizierungen offensichtlich, wobei die Modifizierungen dem Wesen der Erfindung entsprechen und vom Schutzbereich der beigefügten Ansprüche umfasst sind.
Detaillierte Beschreibung der bevorzugten Ausführungsform
Die Myzelien, Fruchtkörper oder ein Gemisch von beiden von Antrodia camphorata werden zuerst mit Wasser oder organischen Lösungsmitteln extrahiert, um den wässrigen Extrakt oder den organischen Lösungsmittel-Extrakt von Antrodia camphorata unter Verwendung bekannter Verfahren zu erhalten. Die organischen Lösungsmittel umfassen unter anderem Alkohole, wie z. B. Methanol, Ethanol oder Propanol, Ester, wie z. B. Ethylacetat, Alkane, wie z. B. Hexan, oder Alkylhalogenide, wie z. B. Chlormethan und Chlorethan. Von diesen Lösungsmitteln ist ein Alkohol bevorzugt und Ethanol ist besonders bevorzugt.
Die wässrigen oder organischen Lösungsmittel-Extrakte von Antrodia camphorata wurden zur Isolierung und Reinigung einer Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) unterzogen. Jede Fraktion wurde gewonnen und bezüglich Antikrebseffekten getestet. Die wirksamen Fraktionen mit Antikrebseffekten wurden bezüglich der Zusammensetzung analysiert und gegen verschiedene Tumorzellen weiter getestet. Der vorstehend beschriebene Ansatz führte dann zur Identifizierung neuer Verbindungen mit der Formel (1) und der Formel (2), die das Wachstum verschiedener Tumorzellen inhibierten, bisher noch nicht in Antrodia camphorata gefunden worden sind und in keiner der bisherigen Veröffentlichungen beschrieben worden sind.
Die Verbindung 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon gemäß der Formel (2) wird nachstehend als ein Beispiel für die vorliegende Erfindung erläutert. Die Antikrebseffekte von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon wurden durch den 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (MTT)-Test gemäß dem Antitumor-Arzneistoffscreeningmodell des National Cancer Institute (NCI) bezüglich Zellüberlebensraten unter Verwendung von Zelllinien wie z. B. Brustkrebs, Leberkrebs, Prostatakrebs und dergleichen getestet. Die vorstehend genannten Tests haben gezeigt, dass 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon die Überlebensraten von Brustkrebszelllinien (MCF-7 und MDA-MB-231), hepatozellulären Karzinom-Zelllinien (Hep 3B und Hep G2) und Prostatakrebs-Zelllinien (LNCaP und DU-145) senkte und gleichzeitig relativ niedrige Halbinhibierungskonzentrationswerte (IC₅₀-Werte) zeigte. Das Krebszellenwachstum von Brustkrebs, Leberkrebs und Prostatakrebs wurde durch 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon inhibiert und es kann daher für eine Krebsbehandlung von z. B. Brustkrebs, Leberkrebs, Prostatakrebs und dergleichen verwendet werden. Die Details der Beispiele sind nachstehend beschrieben.
Beispiel 1
Isolierung von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon
100 g Myzelien, Fruchtkörper oder ein Gemisch von beiden von Antrodia camphorata wurden in einen Kolben eingebracht. Eine geeignete Menge Wasser und Alkohol (70 bis 100%ige Alkohollösung) wurde dem Kolben zugesetzt und es wurde mindestens 1 Stunde bei 20 bis 25°C gerührt. Die Lösung wurde durch einen Filter und eine 0,45 μm-Membran filtriert und das Filtrat wurde als Extrakt gesammelt.
Das Filtrat von Antrodia camphorata wurde einer Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC)-Analyse unterzogen. Die Trennung wurde auf einer RP18-Säule durchgeführt, wobei die mobile Phase aus Methanol (A) und 0,1 bis 0,5% Essigsäure (B) bestand, wobei die Gradientenbedingungen 0 bis 10 min in 95% bis 20% B, 10 bis 20 min in 20% bis 10% B, 20 bis 35 min in 10% bis 10% B, 35 bis 40 min in 10% bis 95% B bei einer Flussrate von 1 ml/min betrugen. Der Säulenausfluss wurde mit einem UV-VIS-Detektor verfolgt.
Die bei 25 bis 30 min gesammelten Fraktionen wurden gesammelt und konzentriert, wobei 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon erhalten wurde, ein Produkt, das als blassgelbes Pulver vorlag. Die Analyse von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon zeigte die Molekülformel C₂₄H₃₈O₄, ein Molekulargewicht von 390 und einen Schmelzpunkt von 48°C bis 52°C. Die Untersuchung der NMR-Spektren zeigte, dass ¹H-NMR (CDCl₃) δ (ppm) = 1,51, 1,67, 1,71, 1,75, 1,94, 2,03, 2,07, 2,22, 2,25, 3,68, 4,05, 5,07 und 5,14, ¹³C-NMR (CDCl₃) δ (ppm) = 12,31, 16,1, 16,12, 17,67, 25,67, 26,44, 26,74, 27,00, 39,71, 39,81, 40,27, 43,34, 59,22, 60,59, 120,97, 123,84, 124,30, 131,32, 135,35, 135,92, 138,05, 160,45 und 197,12.
Die chemische Struktur von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon wurde mit einer Datenbank chemischer Verbindungen verglichen und keine entsprechende Struktur wurde gefunden. Diese Daten bestätigten, dass 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon eine neue Verbindung ist, die bisher nicht beschrieben worden ist.
Beispiel 2
In vitro-Überlebenstest bezüglich Antibrustkrebseffekte
Das NCI-Antikrebs-Arzneistoffscreeningmodell wurde zum Testen des Antikrebseffekts der Verbindung von Beispiel 1 in der Erfindung verwendet. Die isolierte Verbindung 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon von Beispiel 1 wurde Kulturmedien von menschlichen Brustkrebszellen, MCF-7 oder MDA-MB-231 für einen Tumorzellen-Überlebenstest zugesetzt. Dieser Test kann mit dem 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (MTT)-Test durchgeführt werden, der üblicherweise zur Bestimmung der Zellproliferation, des Prozentsatzes lebensfähiger Zellen und der Cytotoxizität verwendet wird. MTT ist ein gelber Farbstoff, der von den lebenden Zellen absorbiert und durch Succinattetrazoliumreduktase in den Mitochondrien zu violett-blauen Formazankristallen reduziert werden kann. Die Formazanbildung kann daher verwendet werden, um die Überlebensrate von Zellen zu bewerten und zu bestimmen.
Die menschlichen Brustkrebszellen MCF-7 oder MDA-MB-231 wurden in Medien, die fetales Kälberserum enthielten, 24 Stunden getrennt kultiviert. Die proliferierten Zellen wurden einmal mit PBS gewaschen, dann mit 1 × Trypsin-EDTA behandelt und 5 min bei 1200 U/min zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen und das Zellpellet wurde durch vorsichtiges Schütteln in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendiert. Die Zellen wurden in einer 96 Well-Platte angeordnet. Ethanolextrakte von Antrodia camphorata (die Kontrollgruppe, Gesamtextrakte von Antrodia camphorata ohne Reinigung) wurden jedem der 96 Wells bei den folgenden Konzentrationen zugesetzt: 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 bzw. 0,03 μg/ml, während 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon (die Experimentgruppe) jedem der 96 Wells bei den folgenden Konzentrationen zugesetzt wurde: 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 bzw. 0,03 μg/ml. Die Zellen wurden 48 Stunden bei 37°C in einem 5% CO₂-Inkubator inkubiert. MTT wurde in einer Konzentration von 2,5 mg/ml jedem Well im Dunklen zugesetzt und 4 Stunden inkubiert, worauf 100 μl Lysepuffer zugesetzt wurden, um die Reaktion zu stoppen. Die Platten wurden auf einem ELISA-Lesegerät bei einer Wellenlänge von 570 nm gelesen, um die Überlebensraten zu bestimmen. Die Halbinhibierungskonzentrationswerte (IC₅₀-Werte) wurden ebenfalls berechnet und sind in der Tabelle 1 angegeben. Tabelle 1 Ergebnisse eines in vitro-Überlebenstests bezüglich der Inhibierung von Brustkrebszellen

Proben IC₅₀ (μg/ml)

Kontrollgruppe (Extrakt von Antrodia champhorata)

MCF-7 11,132

MDA-MB-231 25,812

Experimentgruppe (Formel 2)

MCF-7 0,852

MDA-MB-231 1,031
Aus dem Ergebnis der Tabelle 1 ist ersichtlich, dass 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon ein starker Inhibitor des Wachstums einer menschlichen Brustkrebszelllinie ist. Die IC₅₀-Werte von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon bezüglich MCF-7 und MDA-MB-231 betragen 0,852 μg/ml bzw. 1,031 μg/ml, wobei diese Werte signifikant niedriger sind als diejenigen von Gesamtextrakten von Antrodia camphorata. Daher kann 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon aus Antrodia camphorata zur Inhibierung des Wachstums von Brustkrebszellen verwendet werden.
Beispiel 3
In vitro-Zusatzstudie bezüglich einer Ergänzungstherapie für Brustkrebszellen

Das Experiment wurde ebenfalls gemäß dem NCI-Antikrebs-Arzneistoffscreening-in vitro-Modell durchgeführt. Die menschlichen Brustkrebszellen MCF-7 und MDA-MB-231 wurden in Medien, die fetales Kälberserum enthielten, 24 Stunden separat kultiviert. Die proliferierten Zellen wurden einmal mit PBS gewaschen, dann mit 1 × Trypsin-EDTA behandelt und 5 min bei 1200 U/min zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen und das Zellpellet wurde durch vorsichtiges Schütteln in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendiert. Die Zellen wurden in einer 96 Well-Platte angeordnet, worauf 0,0017 μg/ml Taxol zugegeben wurde und 72 Stunden behandelt wurde. 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon, das im Beispiel 1 erhalten worden ist, wurde jeweils jedem der 96 Wells bei den folgenden Konzentrationen zugesetzt: 0 μg/ml (die Kontrollgruppe); 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 und 0,03 μg/ml (die Experimentgruppe). Die Zellen wurden 48 Stunden bei 37°C in einem 5% CO₂-Inkubator inkubiert. MTT wurde in einer Konzentration von 2,5 mg/ml jedem Well im Dunklen zugesetzt und 4 Stunden umgesetzt, worauf 100 μl Lysepuffer zugesetzt wurden, um die Reaktion zu beenden. Die Platten wurden auf einem ELISA-Lesegerät bei einer Wellenlänge von 570 nm gelesen, um die Überlebensraten zu bestimmen. Die Halbinhibierungskonzentrationswerte (IC₅₀-Werte) wurden ebenfalls berechnet und sind in der Tabelle 2 angegeben. Tabelle 2 Ergebnisse einer in vitro-Taxolzusatztherapie bezüglich Brustkrebszellen

Proben	Ergebnisse
Kontrollgruppe	Zellüberlebensrate (%)
MCF-7 (0,0017 μg/ml Taxol)	65 ± 1
MDA-MB-231 (0,0017 μg/ml Taxol)	76 ± 3
Experimentgruppe	IC₅₀ (μg/ml)
MCF-7 (0,0017 μg/ml Taxol + Formel 2)	0,009
MDA-MB-231 (0,0017 μg/ml Taxol + Formel 2)	0,011

Aus dem Ergebnis der Tabelle 2 ist ersichtlich, dass die IC₅₀-Werte von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon bezüglich MCF-7 und MDA-MB-231 nach der Zugabe von Taxol auf 0,009 μg/ml bzw. 0,011 μg/ml abnahmen. Daher bestätigen diese Ergebnisse, dass die inhibitorische Aktivität von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon von Antrodia camphorata zur Inhibierung des Wachstums von Brustkrebszellen angewandt werden kann und dass es eine bessere synergistische Antitumoraktivität für Tumore zeigt, wenn es mit Taxol kombiniert wird.
Beispiel 4
In vitro-Überlebenstest bezüglich Antileberkrebseffekte
Zum Testen des Antikrebseffekts der Verbindung, die im Beispiel 1 in der vorliegenden Erfindung isoliert worden ist, wurde ebenfalls das NCI-Antikrebs-Arzneistoffscreeningmodell durchgeführt. Die im Beispiel 1 isolierte Verbindung 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon wurde Kulturmedien von menschlichen Leberkrebszellen, Hep 3B oder Hep G2, für einen Tumorzellenüberlebenstest zugesetzt.
Die menschlichen Leberkrebszellen Hep 3B und Hep G2 wurden in Medien, die fetales Kälberserum enthielten, 24 Stunden separat kultiviert. Die proliferierten Zellen wurden einmal mit PBS gewaschen, dann mit 1 × Trypsin-EDTA behandelt und 5 min bei 1200 U/min zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen und das Zellpellet wurde durch vorsichtiges Schütteln in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendiert. Die Zellen wurden in einer 96 Well-Platte angeordnet. Ethanolextrakte von Antrodia camphorata (die Kontrollgruppe, Gesamtextrakte von Antrodia camphorata ohne Reinigung) wurden jedem der 96 Wells bei den folgenden Konzentrationen zugesetzt: 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 bzw. 0,03 μg/ml, während 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon (die Experimentgruppe) jedem der 96 Wells bei den folgenden Konzentrationen zugesetzt wurde: 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 bzw. 0,03 μg/ml. Die Zellen wurden 48 Stunden bei 37°C in einem 5% CO₂-Inkubator inkubiert. MTT wurde in einer Konzentration von 2,5 mg/ml jedem Well im Dunklen zugesetzt und 4 Stunden inkubiert, worauf 100 μl Lysepuffer zugesetzt wurden, um die Reaktion zu stoppen. Die Platten wurden auf einem ELISA-Lesegerät bei einer Wellenlänge von 570 nm gelesen, um die Überlebensraten zu bestimmen. Die Halbinhibierungskonzentrationswerte (IC₅₀-Werte) wurden ebenfalls berechnet und sind in der Tabelle 3 angegeben. Tabelle 3 Ergebnisse eines in vitro-Überlebenstests bezüglich der Inhibierung von Leberkrebszellen

Proben IC₅₀ (μg/ml)

Kontrollgruppe (Gesamtextrakte von Antrodia champhorata)

Hep 3B 5,121

Hep G2 18,631

Experimentgruppe (Formel 2)

Hep 3B 0,005

Hep G2 1,679
Aus dem Ergebnis der Tabelle 3 ist ersichtlich, dass 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon ein starker Inhibitor des Wachstums einer menschlichen Leberkrebszelllinie ist. Die IC₅₀-Werte von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon bezüglich Hep 3B und Hep G2 betragen 0,005 μg/ml bzw. 1,679 μg/ml, wobei diese Werte signifikant niedriger sind als diejenigen von Gesamtextrakten von Antrodia camphorata. Daher kann 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon aus Antrodia camphorata zur Inhibierung des Wachstums von Leberkrebszellen verwendet werden.
Beispiel 5
In vitro-Zusatzstudie bezüglich einer Ergänzungstherapie für Leberkrebszellen

Das Experiment wurde ebenfalls gemäß dem NCI-Antikrebs-Arzneistoffscreening-in vitro-Modell durchgeführt. Die menschlichen Leberkrebszellen Hep 3B und Hep G2 und MDA-MB-231 wurden in Medien, die fetales Kälberserum enthielten, 24 Stunden separat kultiviert. Die proliferierten Zellen wurden einmal mit PBS gewaschen, dann mit 1 × Trypsin-EDTA behandelt und 5 min bei 1200 U/min zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen und das Zellpellet wurde durch vorsichtiges Schütteln in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendiert. Die Hep 3B-Zellen wurden mit 0,0043 μg/ml Lovastatin für 72 Stunden behandelt und die Hep G2-Zellen wurden mit 0,0017 μg/ml Taxol für 72 Stunden behandelt, bevor sie in einer 96 Well-Platte angeordnet wurden. 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon, das im Beispiel 1 erhalten worden ist, wurde jeweils jedem der 96 Wells bei den folgenden Konzentrationen zugesetzt: 0 μg/ml (die Kontrollgruppe); 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 und 0,03 μg/ml (die Experimentgruppe). Die Zellen wurden 48 Stunden bei 37°C in einem 5% CO₂-Inkubator inkubiert. MTT wurde in einer Konzentration von 2,5 mg/ml jedem Well im Dunklen zugesetzt und 4 Stunden umgesetzt, worauf 100 μl Lysepuffer zugesetzt wurden, um die Reaktion zu stoppen. Die Platten wurden auf einem ELISA-Lesegerät bei einer Wellenlänge von 570 nm gelesen, um die Überlebensraten zu bestimmen. Die Halbinhibierungskonzentrationswerte (IC₅₀-Werte) wurden ebenfalls berechnet und sind in der Tabelle 4 angegeben. Tabelle 4 Ergebnisse einer in vitro-Zusatztherapie bezüglich Leberkrebszellen

Proben	Ergebnisse
Kontrollgruppe	Zellüberlebensrate (%)
Hep 3B (0,0043 μg/ml Lovastatin)	61 ± 3
Hep G2 (0,0017 μg/ml Taxol)	81 ± 2
Experimentgruppe	IC₅₀ (μg/ml)
Hep 3B (0,0043 μg/ml Lovastatin + Formel 2)	0,002
Hep G2 (0,0017 μg/ml Taxol + Formel 2)	0,008

Aus dem Ergebnis der Tabelle 4 ist ersichtlich, dass die IC₅₀-Werte von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon bezüglich Hep 3B und Hep G2 durch die synergistischen Effekte von zugesetztem Lovastatin und Taxol auf 0,002 μg/ml bzw. 0,008 μg/ml abnahmen. Daher bestätigen diese Ergebnisse, dass die inhibitorische Aktivität von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon von Antrodia camphorata zur Inhibierung des Wachstums von Leberkrebszellen angewandt werden kann und dass es eine bessere synergistische Antitumoraktivität für Tumore zeigt, wenn es mit Taxol kombiniert wird.
Beispiel 6
In vitro-Überlebenstest bezüglich Antiprostatakrebseffekte
Zum Testen des Antikrebseffekts der Verbindung, die im Beispiel 1 in der vorliegenden Erfindung isoliert worden ist, wurde ebenfalls das NCI-Antikrebs-Arzneistoffscreeningmodell durchgeführt. Die im Beispiel 1 isolierte Verbindung 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon wurde Kulturmedien von menschlichen Prostatakrebszellen, LNCaP oder DU-145, für einen Tumorzellenüberlebenstest zugesetzt.
Die menschlichen Leberkrebszellen LNCaP und DU-145 wurden in Medien, die fetales Kälberserum enthielten, 24 Stunden separat kultiviert. Die proliferierten Zellen wurden einmal mit PBS gewaschen, dann mit 1 × Trypsin-EDTA behandelt und 5 min bei 1200 U/min zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen und das Zellpellet wurde durch vorsichtiges Schütteln in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendiert. Die Zellen wurden in einer 96 Well-Platte angeordnet. Ethanolextrakte von Antrodia camphorata (die Kontrollgruppe, Gesamtextrakte von Antrodia camphorata ohne Reinigung) oder 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon (die Experimentgruppe) wurden bzw. wurde jedem der 96 Wells bei den folgenden Konzentrationen zugesetzt: 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 bzw. 0,03 μg/ml. Die Zellen wurden 48 Stunden bei 37°C in einem 5% CO₂-Inkubator inkubiert. MTT wurde in einer Konzentration von 2,5 mg/ml jedem Well im Dunklen zugesetzt und 4 Stunden inkubiert, worauf 100 μl Lysepuffer zugesetzt wurden, um die Reaktion zu stoppen. Die Platten wurden auf einem ELISA-Lesegerät bei einer Wellenlänge von 570 nm gelesen, um die Überlebensraten zu bestimmen. Die Halbinhibierungskonzentrationswerte (IC₅₀-Werte) wurden ebenfalls berechnet und sind in der Tabelle 5 angegeben. Tabelle 5 Ergebnisse eines in vitro-Überlebenstests bezüglich der Inhibierung von Prostatakrebszellen

Proben IC₅₀ (μg/ml)

Kontrollgruppe (Gesamtextrakte von Antrodia champhorata)

LNCaP 11,491

DU-145 41,392

Experimentgruppe (Formel 2)

LNCaP 2,378

DU-145 1,812
Aus dem Ergebnis der Tabelle 5 ist ersichtlich, dass 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon ein starker Inhibitor des Wachstums einer menschlichen Leberkrebszelllinie ist. Die IC₅₀-Werte von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon bezüglich LNCaP und DU-145 betragen 2,378 μg/ml bzw. 1,812 μg/ml, wobei diese Werte signifikant niedriger sind als diejenigen von Gesamtextrakten von Antrodia camphorata. Daher kann 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon aus Antrodia camphorata zur Inhibierung des Wachstums von Prostatakrebszellen verwendet werden.
Beispiel 7
In vitro-Zusatzstudie bezüglich einer Ergänzungstherapie für Prostatakrebszellen
Das Experiment wurde ebenfalls gemäß dem NCI-Antikrebs-Arzneistoffscreening-in vitro-Modell durchgeführt. Die menschlichen Prostatakrebszellen LNCaP und DU-145 wurden in Medien, die fetales Kälberserum enthielten, 24 Stunden separat kultiviert.

Die proliferierten Zellen wurden einmal mit PBS gewaschen, dann mit 1 × Trypsin-EDTA behandelt und 5 min bei 1200 U/min zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen und das Zellpellet wurde durch vorsichtiges Schütteln in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendiert. Die LNCaP-Zellen wurden mit 0,0017 μg/ml Taxol für 72 Stunden behandelt und DU-145-Zellen wurden mit 0,0043 μg/ml Taxol für 72 Stunden behandelt, bevor sie in einer 96 Well-Platte angeordnet wurden. 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon, das im Beispiel 1 erhalten worden ist, wurde jeweils jedem der 96 Wells bei den folgenden Konzentrationen zugesetzt: 0 μg/ml (die Kontrollgruppe); 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 und 0,03 μg/ml (die Experimentgruppe). Die Zellen wurden 48 Stunden bei 37°C in einem 5% CO₂-Inkubator inkubiert. MTT wurde in einer Konzentration von 2,5 mg/ml jedem Well im Dunklen zugesetzt und 4 Stunden umgesetzt, worauf 100 μl Lysepuffer zugesetzt wurden, um die Reaktion zu stoppen. Die Platten wurden auf einem ELISA-Lesegerät bei einer Wellenlänge von 570 nm gelesen, um die Überlebensraten zu bestimmen. Die Halbinhibierungskonzentrationswerte (IC₅₀-Werte) wurden ebenfalls berechnet und sind in der Tabelle 6 angegeben. Tabelle 6 Ergebnisse einer in vitro-Taxolzusatztherapie bezüglich Leberkrebszellen

Proben	Ergebnisse
Kontrollgruppe	Zellüberlebensrate (%)
Hep 3B (0,0017 μg/ml Taxol)	56 ± 3
Hep G2 (0,0043 μg/ml Taxol)	70 ± 2
Experimentgruppe	IC₅₀ (μg/ml)
Hep 3B (0,0017 μg/ml Taxol + Formel 2)	0,961
Hep G2 (0,0043 μg/ml Taxol + Formel 2)	0,515

Aus dem Ergebnis der Tabelle 6 ist ersichtlich, dass die IC₅₀-Werte von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon bezüglich der menschlichen Prostatakrebszellen MCF-7 und MDA-MB-231 nach der Kombination mit Taxol auf 0,961 μg/ml bzw. 0,515 μg/ml abnahmen. Daher bestäti gen diese Ergebnisse, dass die inhibitorische Aktivität von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon von Antrodia camphorata zur Inhibierung des Wachstums von Prostatakrebszellen angewandt werden kann und dass es eine bessere synergistische Antitumoraktivität für Tumore zeigt, wenn es mit Taxol kombiniert wird.
Beispiel 8
In vitro-Antioxidationsmittelaktivitätsstudie
Menschliches Lipoprotein mit niedriger Dichte (LDL), das mit Kupferionen (Cu²⁺) oxidiert worden ist, wurde zur Bewertung der Antioxidationsmittelaktivitäten von zu testenden Proben verbreitet verwendet. Die Antioxidationsmittelaktivität einer Probe wird durch den Diengehalt von LDL nach der Oxidation bestimmt und in Trolox-Äquivalenten unter Verwendung einer Standardkurve ausgedrückt, die aus den Standards des wasserlöslichen Vitamin E-Analogons Trolox berechnet wird (der Antioxidationsmittelkapazitätswert von 1 wird als 2 μM Trolox ausgedrückt).

Zuerst wurden die folgenden Lösungen hergestellt: doppelt destilliertes Wasser (die negative Kontrollgruppe), 5 mM Natriumphosphatpuffer (SPB), 1 μM und 2 μM Troloxlösung (die positive Kontrollgruppe) und 40 μg/ml 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon, das im Beispiel 1 isoliert worden ist. Die Konzentration von LDL-Cholesterin (LDL-C) wurde unter Verwendung eines Enzymreaktionsverfahrens bestimmt, bei dem mit 5 mM SPB auf 0,1 bis 0,25 mg/ml verdünnt wurde. 100 μl des LDL wurde jedem Well einer 96 Well-Quarzplatte zugesetzt, worauf das vorstehend genannte Trolox und die im Beispiel 1 isolierte Verbindung zugesetzt wurden. Das standardisierte Oxidationsmittel CuSO₄ wurde zur Induzierung der Oxidation bei einer Endkonzentration von 5 μM jedem 250 μl-Well zugesetzt. Die Platte wurde auf einem ELISA-Lesegerät bei einer Wellenlänge von 232 nm bei 37⎕ für 12 Stunden gelesen. Die Probenuntersuchungszeit betrug 15 min. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 7 gezeigt. Tabelle 7 Ergebnisse einer in vitro-Antioxidationsmittelaktivitätsstudie

Proben	TVerzögerung (min)	ΔTVerzögerung (min)	Kapazitätswerte
Negativkontrolle
H₂O (TVerzögerung₀)	185
Positivkontrolle
1 μM Trolox	266	81	0,48
2 μM Trolox	344	159	1,00
Experimentgruppe
40 μg/ml Formel 2	439	208	1,30

Anmerkung 1: Die Verzögerungsphasenzeit (TVerzögerung, min) wurde als der Schnittpunkt der Verzögerungsphase mit der Ausbreitungsphase der Extinktion bei 234 nm definiert. ΔTVerzögerung (min) wurde als die Zeitdifferenz zwischen TVerzögerung und TVerzögerung₀ für jede Probe definiert.
Anmerkung 2: Eine Verbindung weist definitionsgemäß ein Antioxidationsmittelvermögen auf, wenn der Antioxidationsmittelkapazitätswert größer als 0,5 ist.

Gemäß des Ergebnisses der Tabelle 7 beträgt der Antioxidationsmittelkapazitätswert von 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon 1,3, wobei dieser Wert viel höher ist als der Standardwert von 0,5. Daher weisen die erfindungsgemäßen Verbindungen eine Antioxidationsmittelaktivität auf, so dass die Verbindungen als Ergänzungen für Gesundheitsnahrungsmittel, Diäten und Getränke, medizinische Produkte und Kosmetika verwendet werden können und aufgrund ihres Vermögens zur Verhinderung von kardiovaskulären Erkrankungen oder Zellmutationen stark zu vorteilhaften Effekten auf die menschliche Gesundheit beitragen.
ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
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Zitierte Nicht-Patentliteratur

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- H. C. Chiang, D. P. Wu, I. W. Cherng und C. H. Ueng, 1995, A sesquiterpene lactone, phenyl and biphenyl compounds from Antrodia cinnamomea, Phytochemistry, 39, 613–616 [0005]
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Claims

Verbindung der Formel (1)
worin X und Y Sauerstoff oder Schwefel sein können, R₁, R₂ und R₃ jeweils ein Wasserstoffatom, Methyl oder (CH₂)_m-CH₃ ist und m = 1–12; n = 1–12.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung aus Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verbindung nach Anspruch 2, wobei die Verbindung aus organischen Lösungsmittel-Extrakten von Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verbindung nach Anspruch 3, wobei die organischen Lösungsmittel aus der Gruppe, bestehend aus Alkoholen, Estern, Alkanen und Alkylhalogeniden, ausgewählt sind.
Verbindung nach Anspruch 4, wobei der Alkohol Ethanol ist.
Verbindung nach Anspruch 2, wobei die Verbindung aus wässrigen Extrakten von Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung 4-Hydroxy-2,3-dimethoxy-6-methyl-5(3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl)-cyclohex-2-enon ist.
Verfahren zum Inhibieren des Wachstums von Brustkrebszellen, umfassend das Anwenden einer Verbindung nach Anspruch 1 oder Anspruch 7.
Verfahren nach Anspruch 8, bei dem die Verbindung aus Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verfahren nach Anspruch 9, bei dem die Verbindung aus organischen Lösungsmittel-Extrakten von Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verfahren nach Anspruch 10, bei dem die organischen Lösungsmittel aus der Gruppe, bestehend aus Alkoholen, Estern, Alkanen und Alkylhalogeniden, ausgewählt sind.
Verfahren nach Anspruch 11, bei dem das organische Lösungsmittel Ethanol ist.
Verfahren nach Anspruch 9, bei dem die Verbindung aus wässrigen Extrakten von Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verfahren nach Anspruch 8, bei dem die Brustkrebszellen von der MCF-7- oder MDA-MB-231-Zelllinie stammen.
Verfahren zum Inhibieren des Wachstums von Leberkrebszellen, umfassend das Anwenden einer Verbindung nach Anspruch 1 oder Anspruch 7.
Verfahren nach Anspruch 15, bei dem die Verbindung aus Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verfahren nach Anspruch 16, bei dem die Verbindung aus organischen Lösungsmittel-Extrakten von Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verfahren nach Anspruch 17, bei dem die organischen Lösungsmittel aus der Gruppe, bestehend aus Alkoholen, Estern, Alkanen und Alkylhalogeniden, ausgewählt sind.
Verfahren nach Anspruch 18, bei dem das organische Lösungsmittel Ethanol ist.
Verfahren nach Anspruch 16, bei dem die Verbindung aus wässrigen Extrakten von Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verfahren nach Anspruch 15, bei dem die Leberkrebszellen von der Hep 3B- oder Hep G2-Zelllinie stammen.
Verfahren zum Inhibieren des Wachstums von Prostatakrebszellen, umfassend das Anwenden einer Verbindung nach Anspruch 1 oder Anspruch 7.
Verfahren nach Anspruch 22, bei dem die Verbindung aus Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verfahren nach Anspruch 23, bei dem die Verbindung aus organischen Lösungsmittel-Extrakten von Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verfahren nach Anspruch 24, bei dem die organischen Lösungsmittel aus der Gruppe, bestehend aus Alkoholen, Estern, Alkanen und Alkylhalogeniden, ausgewählt sind.
Verfahren nach Anspruch 25, bei dem das organische Lösungsmittel Ethanol ist.
Verfahren nach Anspruch 23, bei dem die Verbindung aus wässrigen Extrakten von Antrodia camphorata isoliert worden ist.
Verfahren nach Anspruch 22, bei dem die Prostatakrebszellen von der LNCaP- oder DU145-Zelllinie stammen.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 7, die eine Antioxidationsmittelaktivität zeigt.
Pharmazeutische Zusammensetzung zum Inhibieren des Wachstums von Tumorzellen, die eine aktive Dosis der Verbindung nach Anspruch 1 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger umfasst, wobei die Tumorzellen aus der Gruppe, bestehend aus Brustkrebs, Leberkrebs und Prostatakrebs, ausgewählt sind.