DE102004053164B4 - Beschichtete Mikroträger, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung - Google Patents
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Abstract
Beschichteter
Mikroträger
zur Zellkultivierung bestehend aus einem partikulären anorganischen porösen oder
nicht-porösen
Matrixmaterial, das zu einem Stück
verfestigt ist, und einer Zellkultur-kompatiblen, hydrolysestabilen
Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung,
die diesem Stück
aufgelagert ist, hergestellt durch ein Verfahren, umfassend folgende
Schritte:
– Benetzung des anorganischen Matrixmaterials mit einer Mischung aus Epoxid- und Aminkomponenten und einem konventionellen organischen Lösungsmittel
– und anschließende Beschichtung durch Einbringen des benetzten Matrixmaterials in ein auf 80 bis 100°C erhitztes Fällungsmittel zur Bildung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung.
– Benetzung des anorganischen Matrixmaterials mit einer Mischung aus Epoxid- und Aminkomponenten und einem konventionellen organischen Lösungsmittel
– und anschließende Beschichtung durch Einbringen des benetzten Matrixmaterials in ein auf 80 bis 100°C erhitztes Fällungsmittel zur Bildung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung.
Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft beschichtete Mikroträger, die insbesondere zur Kultivierung von tierischen, humanen oder mikrobiellen Zellen, vorwiegend für den Einsatz in mit Nährmedium gefüllten durchmischten Gefäßen, wie bspw. Festbettreaktorsystemen oder Wirbelbettreaktoren, Verwendung finden sowie ein Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung.
- Biotechnologische Produktionsverfahren, die auf der Kultivierung von tierischen, humanen oder mikrobiellen Zellen beruhen, werden zur Herstellung von Impfstoffen, Antikörpern, Pharmaka und anderen Wirkstoffen eingesetzt. Für die Herstellung dieser Produkte sind große Zellmengen erforderlich, die in geeigneten Reaktorsystemen herangezogen werden.
- Die meisten der für die Produktion eingesetzten Zelllinien benötigen für ihr Wachstum und ihre Vermehrung eine geeignete Oberfläche, auf der sie adhärieren können. Die Verfügbarkeit geeigneter Carriermaterialien für die betreffenden biotechnologischen Verfahren ist daher von entscheidender Bedeutung für die Effizienz des jeweiligen Verfahrens, insbesondere für die Erzielung hoher Raum-Zeit-Ausbeuten.
- Ein geeignetes Carriermaterial für die Zellkultivierung muß zahlreiche Anforderungen erfüllen. Zunächst müssen solche Materialien biokompatibel sein, d. h. sie dürfen keine toxischen Effekte auf die zu kultivierenden Zellen ausüben und keine toxischen Stoffe in das Zellkulturmedium abgeben.
- Wünschenswert sind preiswerte, einfach herzustellende Träger, die eine hinreichende Anbindung der Zellen gewährleisten und gegebenenfalls auch eine leichte Wiederablösung der Zellen vom Träger erlauben.
- Desweiteren müssen die Träger eine ausreichende mechanische Stabilität besitzen, um die adhärierenden Zellen gegen mechanische Belastungen, beispielsweise Scherbelastungen im Reaktorbett, zu schützen.
- Ferner müssen die Trägermaterialien über eine ausreichende chemische Stabilität verfügen, die es erlaubt, dass solche Materialien mit üblichen Sterilisationsverfahren, bspw. Dampfsterilisation, gegebenenfalls auch wiederholt sterilisiert werden können, ohne daß eine Beeinträchtigung der Carriereigenschaften eintritt.
- Darüber hinaus müssen die Träger über den gesamten Kultivierungszeitraum hydrolysestabil sein.
- Größe und Gestalt der Trägermaterialien sollten so einstellbar sein, dass im Reaktor eine optimale Durchströmung des Festbetts mit dem jeweiligen Nährmedium gegeben ist.
- Es ist bekannt, dass für eine Besiedlung mit Mikroorganismen oder Zellen runde oder annähernd runde Körper, die keine spitzen Kanten oder Ecken aufweisen und über eine poröse Oberfläche verfügen, vorteilhaft sind.
- Auf Grund des günstigen Oberflächen-Volumen-Verhältnisses ist die Verwendung von Mikroträger nach heutigem Erkenntnisstand besonders wünschenswert.
- Derzeit werden je nach Anforderungen hinsichtlich zu immobilisierendem Zellmaterial und Reaktortyp unterschiedliche Arten von Mikroträgern eingesetzt.
- Die Entwicklung von Mikroträgern begann bereits 1967, als durch van Wezel gezeigt wurde, dass Diethylaminoethyl (DEAE)-Dextran-Kugeln für die Züchtung adhärierender Zellen in Suspensionskultur geeignet sind (A. L. VAN WEZEL, Nature 216 (1967), 65). In der Folgezeit wurden sowohl kompakte poröse als auch nicht poröse Träger mit und ohne Beschichtung für die Kultivierung tierischer Zellen beschrieben, deren Form teilweise dem Reaktor angepasst ist.
- Es sind auch Schichtaufbauten oder „Mattengeflechte" von Fasern (natürliche Fasern, Glas) mit organischem oder anorganischem Binder bekannt, die ebenfalls porös sein können. Dabei liegen die Porengrößen für die Zellimmobilisierung im Bereich von 250 μm oder darüber.
- Bekannt sind poröse/nichtporöse Mikroträger auf organischer oder anorganischer Basis. So wurden als Matrixmaterialien natürliche Polymere (z. B. Dextran, Cellulose, Chitosan, Gelatine und deren Derivate), synthetische Polymere wie Polystyrol, High-Density (HD)-Polyethylen, Polyurethane, Polytetrafluorethylen, Polyamide (bspw. Nylon), Silicone, und davon abgeleitet Copolymere sowie anorganische Stoffe (bspw. Glas, Silikate, Aragonit, Oxide des Aluminium, Zirkonium oder Titan) vorgeschlagen.
- Kommerzielle Produkte sind gegenwärtig verfügbar insbesondere auf der Basis von Polystyrol (Hillex), HD-Polyethylen (Cytoline), Dextran (Cytodex 1), Cellulose (Cytopore) und Gelatine (Cytodex 3).
- Teilweise sind diese Materialien mit Beschichtungen zur Verbesserung der Zelladhäsion oder zum Aufbau chemischer Bindungen und der nachfolgenden Ankopplung biologisch aktiver Substanzen versehen. Als Beschichtungen sind u. a. Kollagen, rekombinantes Fibronektin oder DEAE-Dextran bekannt.
- Problematisch ist dabei, dass diese Beschichtungsmaterialien in ihrer Herstellung kostenaufwendig sind und die Autoklavierbarkeit der auf diese Weise beschichteten Träger oft nicht gegeben ist.
- Darüber hinaus besteht ein Problem bei der Beschichtung von Trägern mit Proteinen oder nicht vernetzten Dextranderivaten darin, dass die Beschichtung im Zellkulturmedium gelöst bzw. abgebaut werden kann und in der Regel eine kovalente Fixierung dieser Beschichtungsmaterialien auf dem Träger erforderlich ist.
- Der Einsatz von makroporösen Mikroträgern aus Glas ist seit einiger Zeit bekannt.
- Auch die Herstellung solcher makroporöser Mikroträger aus Glas ist bspw. aus der Schrift
DE 33 058 54 A1 bekannt. - Die Herstellung solcher makroporöser Glasträger ist allerdings mit einem relativ hohen Aufwand verbunden:
Kompakte nicht beschichtete Glaskugeln sind auf Grund der mangelnden Zelladhäsionseigenschaften nicht als Träger geeignet. Es werden daher von den Fachkreisen derzeit vielfältige Anstrengungen unternommen, diese einfach zugänglichen Trägermaterialien durch geeignete Beschichtungen so zu modifizieren, dass sie als Träger für Zellkultivierungen eingesetzt werden können. - Die Schrift WO 9310162 A1 offenbart bspw. durch Silanisierung mit amino- oder epoxyfunktionellen Silanen aktivierte Glasoberflächen.
- Die Schrift
EP 03 032 62 A1 offenbart beschichteten Glasoberflächen mit unvernetztem Dialkylaminoalkyldextran. - Aus der Schrift
US 6,277,628 ist bekannt, dass Glas mit Aminosilan oder Polylysin zur Erzeugung einer positiv geladenen Oberfläche beschichtet wird oder dass reaktive Gruppen eingebracht werden, um eine chemische Kopplung von Polynucleotidsequenzen zu ermöglichen. - Die Schrift
DE 28 395 80 A1 offenbart Beschichtungen aus Polyisocyanaten und Silankopplern. - Aus der Schrift WO 8702703 A1 ist bekannt, dass Schichten verschiedener Polymere mit Amino- oder Hydroxylgruppen auf gesinterten SiO2-Kugeln erzeugt werden.
- Poröse Träger aus Oxiden des Silicium, Aluminium oder Zirkonium und deren Mischoxide, in situ nacheinander mit einem Polyamin und einem bifunktionellen Reagens (bspw. Glutaraldehyd oder Toluendiisocyanat) beschichtet, sind aus
US 4141857 bekannt. - Weitere Beschichtungen auf Glas durch das Aufbringen und das Vernetzen von Polyelektrolyten (wie bspw. Gelatine) sind aus
US 4,287,305 bekannt. - Die Schrift
EP 0079595 A1 offenbart Beschichtungen auf Glas durch das Aufbringen von Chitosan mit einem bifunktionellen Reagens (bspw. Glutaraldehyd). - Die Schrift
DD 229 140 A1 - Aus der Schrift Z. Chem., 22. Jg. 1982, Heft 5, Seiten 166 bis 176 sind ebenfalls Epoxid-Amin-Additionspolymere bekannt. Diese werden jedoch nur zur Adhäsion an glatten Metall- oder Glasoberflächen verwenden.
- Trotz vielfältiger Bemühungen haben diese bekannten Methoden der Trägerbeschichtung nicht zur Bereitstellung einfach zugänglicher Trägermaterialien auf Basis anorganischer Matrixmaterialien geführt, mit denen in der Zellkultivierung hohe Produktausbeuten erzielt werden können.
- Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es somit, einen mit einem einfachen und preiswerten Herstellungsverfahren fertigbaren Mikroträger in geeigneter Form und Abmessungen für die Kultivierung tierischer und humaner Zellen vorwiegend in mit Nährmedium gefüllten durchmischten Gefäßen, wie bspw. Festbett- oder Wirbelbettreaktoren, zur Verfügung zu stellen.
- Die anzugebenden Mikroträger sollen durch Autoklavieren sterilisierbar sein und in der Zellkultivierung hohe Raum-Zeit-Ausbeuten ermöglichen.
- Diese Aufgabe wird durch einen Mikroträger gemäß Anspruch 1 und einem Verfahren gemäß Anspruch 9 gelöst. Vorteilhafte Ausgestaltungen sind den Ansprüchern 2 bis 8 sowie 10 bis 20 entnehmbar.
- Das Wesen der Erfindung besteht darin, dass die erfindungsgemäßen Mikroträger aus einem mikropartikulären, vorzugsweise runden oder abgerundeten, porösen oder nicht porösen anorganischen Matrixmaterial bestehen, das zu einem Stück verfestigt und das mit einer dünnen Beschichtung aus einem vernetztem Epoxid-Amin-Polymer versehen ist, die hydrolysestabil ist.
- Die Größe der Partikel liegt in einem Bereich von 100 bis 1000 μm, vorzugsweise in einem Bereich von 180 bis 590 μm.
- Geeignete Matrixmaterialien für die erfindungsgemäßen Mikroträger sind beispielsweise Glas, Keramiken, Silicagel, Gips, Metalloxide, Metallsilicate oder Tricalciumphosphate.
- Besonders vorteilhaft als Trägermaterial ist ein Glas aus dem System SiO2-CaO-Na2O-MgO-K2O-Al2O3-Fe2O3.
- Es ist erfindungsgemäß, dass das als Beschichtung des anorganischen Matrixmaterials verwendete vernetzte Epoxid-Amin-Polymer aus einer oder mehreren Epoxidkomponenten und einem oder mehreren Aminkomponenten hergestellt wird.
- Es ist weiterhin erfindungsgemäß, dass als Epoxidkomponenten Verbindungen mit 2, 3 oder mehr Epoxidfunktionen sowie Mischungen solcher Verbindungen untereinander als auch Mischungen der genannten Verbindungen mit Verbindungen, die über eine Epoxidgruppe im Molekül verfügen, eingesetzt werden.
- Die zur Herstellung des verwendeten Epoxid-Amin-Polymers eingesetzten Aminkomponenten können Verbindungen mit 2, 3 oder mehr Aminogruppen sein oder Mischungen aus solchen Verbindungen sowie Mischungen der genannten Verbindungen mit Verbindungen, die nur eine Aminogruppe enthalten.
- Sowohl die Epoxid- als auch die Aminokomponenten können darüber hinaus über weitere funktionelle Gruppen, beispielsweise Hydroxyl- oder Carboxylgruppen verfügen. In einer bevorzugten Ausführungsvariante der Erfindung kommt als Epoxidkomponente eine Diglycidyl-Verbindung, beispielsweise ein Diglycidylether des Bisphenol A und als Aminkomponente ein Bis(aminoalkyl)amin zur Anwendung.
- Bestandteil der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Aufbringung des Epoxid-Amin-Polymers auf das anorganische Matrixmaterial.
- Das Epoxid-Amin-Polymer wird aufgebracht, indem das anorganische Matrixmaterial mit einem Gemisch aus Epoxid- und Aminkomponente und einem geeigneten Lösungsmittel, beispielsweise Aceton, benetzt wird und das gebildete Produkt – zur raschen Aushärtung der Beschichtung ohne Verklebung der einzelnen Partikel – unter schnellem Rühren in eine heiße Flüssigkeit, in der das Epoxid-Amin-Polymer nicht löslich ist, bspw. Heptan, eingebracht wird.
- Die Temperatur der heissen Flüssigkeit sollte dabei in einem Bereich liegen, der die Bildung des Epoxid-Amin-Polymers aus den verwendeten Epoxid- und Aminkomponenten bewirkt.
- Nach einer vorgegebenen Reaktionszeit von 1 bis 5 h wird der einstückige, beschichtete Träger von der Flüssigkeit abgetrennt und mit destilliertem Wasser gewaschen. Anschließend wird dieser mehrmals mit destilliertem Wasser ausgekocht.
- Die so erhaltenen beschichteten Mikroträger können durch Autoklavieren (20 min, 121°C) sterilisiert werden.
- Das anorganische Matrixmaterial kann vor dem Aufbringen der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung durch bekannte Methoden, bspw. Auskochen mit Säure und/oder Beschichtung mit einem amino- oder epoxyfunktionellen Silan, aktiviert werden.
- Die erfindungsgemäße Verwendung der Mikroträger erfolgt als Trägermaterial für die Kultivierung von tierischen, humanen oder mikrobiellen Zellen in einem dafür geeigneten Kultivierungsbehältnis, beispielsweise einem Festbett- oder Wirbelbettreaktor.
- Dabei wird der Mikroträger in einem mit Nährmedium gefülltem Gefäß gelagert und das Nährmedium kann bei Bedarf in dem Gefäß durchmischt werden, so dass der Mikroträger im Medium schwebt.
- Dieses Schweben hat den Vorteil, dass sich auf der gesamten Oberfläche des Mikroträgers Zellen ansiedeln können, um einen geschlossenen Zellrasen zu bilden.
- Die Erfindung wird nachstehend anhand der Ausführungsbeispiele und der Abbildung näher erläutert.
- Dabei zeigt die
1 : den zeitlichen Verlauf der Glukosekonzentration in 1 ml Nährmedium nach Zugabe von 5 × 105 MDBK-Zellen (Mardin-Darby Bovine Kidney-Zellen). - Ausführungsbeispiel 1
- ZE-01
- 100 g Glasperlen (180–300 μm Durchmesser) werden mit der Menge einer Epoxid-Härter-Lösungsmittel-Mischung (10,0 g Epilox A17-01, 1,5 g Bis-(3-aminopropyl)-amin und 16,2 g Aceton) versetzt, die erforderlich ist, um die gesamte Oberfläche der Perlen gerade benetzen zu können. Das benetzte Glasgranulat wird dann unter schnellem Rühren in 250 ml auf 90°C erhitztes Heptan eingebracht. Es wird noch 2 h bei 90°C gerührt. Die erhaltenen beschichteten Mikroträger werden abfiltriert, getrocknet und viermal mit je 400 ml destilliertem Wasser 20 min lang ausgekocht. Nach der Trocknung wird ein gut rieselfähiges Granulat erhalten.
- Ausführungsbeispiel 2
- (ZE-02)
- 100 g Glasperlen (250–420 μm Durchmesser) werden wie in Ausführungsbeispiel 1 beschrieben mit einer Epoxid-Amin-Polymerschicht versehen, ausgehärtet und nachbehandelt. Die für eine Benetzung der Glasperlen erforderliche Menge an Epoxid-Härter-Lösungsmittel-Mischung ist hier jedoch geringer als im Ausführungsbeispiel 1. Das hergestellte Granulat erweist sich als gut rieselfähig.
- Ausführungsbeispiel 3
- ZE-03
- 100 g Glasperlen (420–590 μm Durchmesser) werden wie in Beispiel 1 beschrieben mit einer Epoxid-Amin-Polymerschicht versehen, ausgehärtet und nachbehandelt. Es wird ein gut rieselfähiges Produkt erhalten.
- Ausführungsbeispiel 4
- 149,5 g einer Mischung aus 44,78 g Epilox A17-01, 6,75 g Bis-(3-aminopropyl)-amin, 12,52 g Polyethylenglycol 400 und 89,97 g Aceton werden zu 100 g Silicagel (60–200 mesh) gegeben und mit diesem vermengt. Das Produkt gibt man unter schnellem Rühren in 250 ml auf 90°C erhitztes Heptan und läßt zwei Stunden bei dieser Temperatur weiterrühren. Das beschichtete Silicagel filtriert man ab, trocknet es und kocht dann viermal mit je 400 ml destilliertem Wasser 20 Minuten lang aus.
- Ausführungsbeispiel 5
- Die gemäß den Ausführungsbeispielen 1 bis 4 hergestellten Mikroträger werden in einem Autoklaven bei 121°C und 2 bar Überdruck 30 min lang in Phosphatpuffer sterilisiert. Anschließend werden sie in sterile Zellkulturschalen überführt. Eine Marvin Darvin Bovine Kindey Zellline (MDBK) wird in Zellsuspension mit Hilfe von Trypsin (Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Deutschland) überführt. Nach den Mikroträgern wird 1 ml Nährmedium (Dulbecco Modified Eagle Medium, Invitrogen, Karlsruhe, Germany) mit 10% fetalem Kälberserum in jede Kulturschale gegeben. Zum Start der Kultivierung werden 5 × 105 Zellen pro Kulturschale ausgesät.
- Als Vergleichsgruppe gegenüber den erfinderischen Mikroträgern wird handelsübliches Cytodex 1 (Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Schweden) verwendet.
- Die MDBK-Zellen, die auf den erfindungsgemäßen Mikroträger kultiviert werden, zeigen im Vergleich zu Zellen, die auf handelsüblichen Cytodex 1-Trägern kultiviert werden, hinsichtlich ihres Glukoseverbrauchs zu Beginn und am Ende der Kultivierungen gleichwertige Verbrauchswerte, d.h. die gleiche Stoffwechselaktivität (siehe
1 ). - Nach erfolgter Kultivierung ist der erfindungsgemäße Träger mit einem gleichmäßigen Zellrasen bedeckt.
- Alle in der Beschreibung, den nachfolgenden Ansprüchen und der Zeichnung dargestellten Merkmale können sowohl einzeln als auch in beliebiger Kombination miteinander erfindungswesentlich sein.
Claims (20)
- Beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung bestehend aus einem partikulären anorganischen porösen oder nicht-porösen Matrixmaterial, das zu einem Stück verfestigt ist, und einer Zellkultur-kompatiblen, hydrolysestabilen Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung, die diesem Stück aufgelagert ist, hergestellt durch ein Verfahren, umfassend folgende Schritte: – Benetzung des anorganischen Matrixmaterials mit einer Mischung aus Epoxid- und Aminkomponenten und einem konventionellen organischen Lösungsmittel – und anschließende Beschichtung durch Einbringen des benetzten Matrixmaterials in ein auf 80 bis 100°C erhitztes Fällungsmittel zur Bildung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung.
- Beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Partikel des Matrixmaterials sphärische oder zumindest abgerundete Gestalt aufweisen.
- Beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Partikel einen Durchmesser von 100 bis 1000 μm besitzen.
- Beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Partikel einen Durchmesser von 180 bis 590 μm besitzen.
- Beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung nach den Ansprüchen 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Matrixmaterial aus einer oder mehreren Komponenten besteht, die der Substanzklasse der Gläser, Keramiken, Calciumphosphate, Calciumsulfate, Metalloxide oder Metallsilikate zuzuordnen ist.
- Beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung nach Anspruch 5 dadurch gekennzeichnet, dass das Matrixmaterial vorwiegend aus einem Glas besteht.
- Beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass das Glas aus dem System SiO2-CaO-Na2O-MgO-K2O-Al2O3-Fe2O3 besteht.
- Beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung nach den Ansprüchen 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung aus einer oder mehreren Epoxidkomponenten und einer oder mehreren Aminkomponenten gebildet wird.
- Verfahren zur Herstellung des beschichteten Mikroträgers zur Zellkultivierung nach einem der voranstehenden Ansprüche umfassend folgende Schritte: – Benetzung des anorganischen Matrixmaterials mit einer Mischung aus Epoxid- und Aminkomponenten und einem konventionellen organischen Lösungsmittel – und anschließende Beschichtung durch Einbringen des benetzten Matrixmaterials in ein auf 80 bis 100°C erhitztes Fällungsmittel zur Bildung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung.
- Verfahren zur Herstellung beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die zur Herstellung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung verwendeten Epoxidkomponenten über 2, 3 oder mehr Epoxidgruppen pro Molekül verfügen und/oder daß diese Epoxidkomponenten im Gemisch mit Verbindungen, die nur über eine Epoxidgruppe verfügen, eingesetzt werden.
- Verfahren zur Herstellung beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die zur Herstellung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung verwendeten Epoxidkomponenten Diglycidylether sind.
- Verfahren zur Herstellung beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die zur Herstellung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung verwendeten Aminkomponenten über 2, 3 oder mehr Aminogruppen pro Molekül verfügen und/oder dass diese Aminkomponenten im Gemisch mit Verbindungen, die nur über eine Aminogruppe verfügen, eingesetzt werden.
- Verfahren zur Herstellung beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die zur Herstellung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung verwendeten Aminkomponenten Substanzen aus der Klasse der Bis(aminoalkyl)amine sind.
- Verfahren zur Herstellung beschichteter Mikroträger zur Zellkultivierung gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die zur Herstellung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung eingesetzten Epoxid- und Amin-Komponenten neben den jeweils vorhandenen Epoxid- bzw. Aminogruppen weitere funktionelle Gruppen im Molekül aufweisen.
- Verfahren zur Herstellung der beschichteten Mikroträger zur Zellkultivierung nach den Ansprüchen 9 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass das anorganische Matrixmaterial vor der Beschichtung einer Oberflächenvorbehandlung unterzogen wird.
- Verfahren zur Herstellung der beschichteten Mikroträger zur Zellkultivierung nach den Ansprüchen 9 bis 15, dadurch gekennzeichnet, dass der Mischung aus Epoxid- und Aminkomponenten ein flüssiges Oligo- oder Polyethylenglycol zugesetzt wird.
- Verfahren zur Herstellung der beschichteten Mikroträger zur Zellkultivierung nach den Ansprüchen 9 bis 16, dadurch gekennzeichnet, dass als erhitztes Fällungsmittel zur Bildung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung ein organisches Lösungsmittel, in dem das Epoxid-Amin-Polymer nicht löslich ist, eingesetzt wird.
- Verwendung des beschichteten Mikroträgers nach einem der voranstehenden Ansprüche, als Trägermaterial für die Kultivierung von tierischen, humanen oder mikrobiellen Zellen.
- Verwendung des beschichteten Mikroträgers gemäß Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, dass er in einem mit Nährmedium gefülltem Gefäß gelagert wird.
- Verwendung der beschichteten Mikroträger gemäß Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass das Nährmedium in dem Gefäß durchmischt wird, so dass der Mikroträger im Medium schwebt.
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