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DE07008633T1 - Virus des multisystemischen Kümmersyndroms bei Absatzferkeln - Google Patents

Virus des multisystemischen Kümmersyndroms bei Absatzferkeln Download PDF

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Andrew A. Potter
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Boehringer Ingelheim Animal Health France SAS
Queens University of Belfast
Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc
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University of Saskatchewan
Merial SAS
Queens University of Belfast
Merial Inc
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Abstract

Isoliertes Polynucleotid, das fähig ist, selektiv an eine Schweine-Circovirus Typ II (PCVII)-Nucleotidsequenz zu hybridisieren, wobei das Polynucleotid mindestens etwa 8 zusammenhängende Nucleotide umfasst, die von einer der in 4A–4C (SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NOS: 12 & 24) dargestellten PCVII-Sequenzen abgeleitet oder dazu komplementär sind.

Claims (30)

  1. Isoliertes Polynucleotid, das fähig ist, selektiv an eine Schweine-Circovirus Typ II (PCVII)-Nucleotidsequenz zu hybridisieren, wobei das Polynucleotid mindestens etwa 8 zusammenhängende Nucleotide umfasst, die von einer der in 4A–4C (SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NOS: 12 & 24) dargestellten PCVII-Sequenzen abgeleitet oder dazu komplementär sind.
  2. Polynucleotid nach Anspruch 1, wobei das Polynucleotid eine Länge von mindestens 10 Nucleotiden hat.
  3. Polynucleotid nach Anspruch 1, wobei das Polynucleotid eine Länge von mindestens 15 Nucleotiden hat.
  4. Polynucleotid nach Anspruch 1, wobei das Polynucleotid eine Länge von mindestens 20 Nucleotiden hat.
  5. Polynucleotid nach Anspruch 1, wobei das Polynucleotid eine Sequenz umfasst, die mindestens 85% Identität mit einer der in 4A–4C (SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NOS: 12 & 24) dargestellten PCVII-Sequenzen hat, oder ein Fragment davon, das mindestens etwa 75 zusammenhängende Nucleotide umfasst.
  6. Polynucleotid nach Anspruch 5, wobei das Polynucleotid eine PCVII-Sequenz umfasst, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus PCVII 412 (SEQ ID NO: 1), PCVII 9741 (SEQ ID NO: 11) und PCVII B9 (SEQ ID NOS: 12 & 24).
  7. Polynucleotid, das ein immunogenes Schweine-Circovirus Typ II (PCVII)-Polypeptid codiert, das mindestens etwa 85% Identität mit einem Polypeptid hat, das ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem Polypeptid, das abgeleitet ist (a) vom offenen Leserahmen (ORF) 1 (SEQ ID NO: 3), (b) vom ORF 2 (SEQ ID NO: 9), (c) vom ORF 3 (SEQ ID NO: 7), (d) vom ORF 4 (SEQ ID NO: 20), (e) vom ORF 5 (SEQ ID NO: 21), (f) vom ORF 6 (SEQ ID NO: 5) und (g) von immunogenen Fragmenten von (a)–(f), die mindestens etwa 5 Aminosäuren umfassen.
  8. Polynucleotid nach Anspruch 7, wobei das Polynucleotid ein immunogenes PCVII-Polypeptid codiert, das mindestens 85% Identität mit einem Polypeptid aufweist, das vom ORF 6 (SEQ ID NO: 5) oder von immunogenen Fragmenten davon, die mindestens etwa 5 Aminosäuren umfassen, abgeleitet ist.
  9. Polynucleotid nach Anspruch 8, wobei das Polynucleotid das Polypeptid von ORF 6 (SEQ ID NO: 5) codiert.
  10. Rekombinanter Vektor, umfassend: (a) ein Polynucleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 9; und (b) Kontrollelemente, die mit dem Polynucleotid funktionell verknüpft sind, wobei eine codierende Sequenz innerhalb des Polynucleotids in einer Wirtszelle transkribiert und translatiert werden kann, und mindestens eines der Kontrollelemente zu der codierenden Sequenz heterolog ist.
  11. Wirtszelle, die mit dem rekombinanten Vektor nach Anspruch 10 transformiert ist.
  12. Verfahren zur Herstellung eines rekombinanten PCVII-Polypeptids, umfassend: (a) Bereitstellen einer Population von Wirtszellen nach Anspruch 11; und (b) Züchten der Zellpopulation unter Bedingungen, bei denen das von der codierenden Sequenz, die im rekombinanten Vektor vorhanden ist, codierte PCVII-Polypeptid exprimiert wird.
  13. Protein, das durch das Verfahren nach Anspruch 12 hergestellt wird.
  14. Immunogenes Schweine-Circovirus Typ II (PCVII)-Polypeptid, das mindestens etwa 85% Identität mit einem Polypeptid hat, das ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem Polypeptid, das abgeleitet ist (a) vom offenen Leserahmen (ORF) 1 (SEQ ID NO: 3), (b) vom ORF 2 (SEQ ID NO: 9), (c) vom ORF 3 (SEQ ID NO: 7), (d) vom ORF 4 (SEQ ID NO: 20), (e) vom ORF 5 (SEQ ID NO: 21), (f) vom ORF 6 (SEQ ID NO: 5) und (g) immunogenen Fragmenten von (a)–(f), die mindestens etwa 5 Aminosäuren umfassen.
  15. Polypeptid nach Anspruch 14, wobei das Polypeptid mindestens etwa 85% Identität mit einem Polypeptid aufweist, das vom ORF 6 (SEQ ID NO: 5) oder immunogenen Fragmenten davon, die mindestens etwa 5 Aminosäuren umfassen, abgeleitet ist.
  16. Polypeptid nach Anspruch 15, wobei das Polypeptid die Sequenz des Polypeptids hat, das vom ORF 6 (SEQ ID NO: 5) codiert wird.
  17. Antikörper, die von dem Polypeptid nach einem der Ansprüche 14 bis 16 erzeugt werden.
  18. Zusammensetzung, die ein immunogenes PCVII-Polypeptid nach einem der Ansprüche 14 bis 16 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger umfasst.
  19. Zusammensetzung nach Anspruch 18, die des Weiteren ein Adjuvans umfasst.
  20. Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung, umfassend das Bereitstellen eines immunogenen PCVII-Polypeptids nach einem der Ansprüche 14 bis 16 und das Kombinieren des Polypeptids mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger.
  21. Verwendung eines immunogenen PCVII-Polypeptids nach einem der Ansprüche 14 bis 16 für die Herstellung einer Zusammensetzung zur Behandlung oder Prävention einer PCVII-Infektion in einem Wirbeltier- Individuum.
  22. Verwendung eines immunogenen PCVII-Polypeptids nach einem der Ansprüche 14 bis 16 für die Herstellung einer Zusammensetzung zum Nachweis des Vorhandenseins von PCVII-Antikörpern in einer biologischen Probe.
  23. Immundiagnostischer Testkit zum Nachweis einer PCVII-Infektion in einem Wirbeltier-Individuum, wobei der Testkit ein immunogenes PCVII-Polypeptid nach einem der Ansprüche 14 bis 16 und Anweisungen zur Durchführung des immundiagnostischen Tests umfasst.
  24. Verwendung eines Polynucleotids nach einem der Ansprüche 1 bis 6 für die Herstellung einer Zusammensetzung zum Nachweis des Vorhandenseins von zu PCVII homologen Sequenzen in einer biologischen Probe.
  25. Immundiagnostischer Testkit zum Nachweis einer PCVII-Infektion in einem Wirbeltier-Individuum, wobei der Testkit ein Polynucleotid nach Anspruch 1 und Anweisungen zur Durchführung des immundiagnostischen Tests umfasst.
  26. Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer PCVII-Infektion in einem Wirbeltier-Individuum, das die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge einer Zusammensetzung nach Anspruch 18 oder 19 an das Individuum umfasst.
  27. Verfahren zum Nachweis von Schweine-Circovirus Typ II (PCVII)-Antikörpern in einer biologischen Probe, umfassend: (a) Bereitstellen einer biologischen Probe; (b) Reaktion der biologischen Probe mit einem immunogenen PCVII-Polypeptid nach einem der Ansprüche 14 bis 16, unter Bedingungen, die es PCVII-Antikörpern, wenn in der biologischen Probe enthalten, erlauben, an das PCVII-Polypeptid zu binden, unter Bildung eines Antikörper/Antigen- Komplexes; und (c) Nachweis des Vorhandenseins oder der Abwesenheit des Komplexes, und dadurch Nachweis des Vorhandenseins oder der Abwesenheit von PCVII-Antikörpern in der Probe.
  28. Nucleinsäurehybridisierungstest zum Nachweis von zu PCVII homologen Sequenzen in einer biologischen Probe, umfassend: (a) Inkubieren der biologischen Probe mit einem Polynucleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 6 unter Bedingungen, die die Bildung von Nucleinsäurekomplexen zwischen dem Polynucleotid und der in der biologischen Probe vorhandenen PCVII-Nucleinsäure fördern; und (b) Nachweis der Komplexe, die das Polynucleotid enthalten.
  29. Test nach Anspruch 28, wobei das Polynucleotid markiert ist und die Komplexe durch Nachweis des Vorhandenseins der Markierung nachgewiesen werden.
  30. Test nach Anspruch 28, wobei der Nachweis umfasst: die Verwendung zweier für PCVII-Nucleinsäure spezifischer Sonden, wobei die zwei Sonden eine interne Region der PCVII-Nucleinsäure definieren und jede Sonde einen Strang aufweist, der ein zu der Region internes 3'-Ende enthält, die Umwandlung der Nucleinsäure/Sonde-Hybridisierungskomplexe zu die doppelsträngige Sonde enthaltenden Fragmenten durch Primer-Verlängerungsreaktionen, das Amplifizieren der Anzahl der die Sonden enthaltenden Fragmente durch sukzessives Wiederholen der Schritte von (i) Denaturieren der doppelsträngigen Fragmente, um einzelsträngige Fragmente zu produzieren, (ii) Hybridisieren der Einzelstränge mit den Sonden zur Bildung von Strang/Sonde-Komplexen, (iii) Erzeugen doppelsträngiger Fragmente aus den Strang/Sonde-Komplexen in der Anwesenheit von DNA-Polymerase und allen vier Desoxyribonucleotiden, und (iv) Wiederholen der Schritte (i) bis (iii) bis der gewünschte Amplifikationsgrad erreicht ist, Identifizieren der Amplifiaktionsprodukte.
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