CZ20032837A3

CZ20032837A3 - Pyrazolpyrimidiny jako terapeutické prostředky

Info

Publication number: CZ20032837A3
Application number: CZ20032837A
Authority: CZ
Inventors: Lee D. Arnold; Michael M. Friedman
Original assignee: Abbott Gmbh & Co. Kg
Priority date: 2001-03-22
Filing date: 2002-03-22
Publication date: 2004-01-14
Also published as: NO20034177D0; IL157640A0; JP2005501811A; NO20034177L; PL363946A1; ZA200306887B; CN101426792A; EP1379528A1; EP1379528A4; ECSP034773A; US20040006083A1; SK13122003A3; WO2002076986A1; UY27222A1; CO5570669A2; CA2440714C; JP4319412B2; US7332497B2; CA2440714A1; BG108268A

Description

. Pyrazolopyrimidiny jako terapeutické prostředky

Oblast techniky

Vynález se týká pyrazolopyrimidinů jako terapeutických prostředků.

Dosavadní stav techniky

Existuje alespoň 400 enzymů identifikovaných jako proteinkinázy. Tyto enzymy katalyzují fosforylaci cílových proteinových substrátů. Fosforylace je obvykle reakce přenosu fosfátové skupiny z ATP na proteinový substrát. Specifická struktura v cílovém substrátu, na kterou se fosfát přenáší, je tyrosinový, serinový nebo threoninový zbytek. Protože jsou tyto aminokyselinové zbytky cílovými strukturami pro přenos fosforylu, označují se tyto proteinkinázy obvykle jako tyrosinkinázy nebo serin/threoninkinázy.

Fosforylační reakce a proti nim působící fosfatázové reakce na tyrosirióvých, šeřinových a threoninových zbytcích se účastní nesčetných buněčných procesů, které jsou základem odpovědí na různé mezibuněčné signály (typicky zprostředkovávané buněčnými receptory), regulace buněčných funkcí a aktivace nebo desaktivace buněčných procesů. Kaskáda proteinkináz se obvykle účastní přenosu mezibuněčného signálu a je nezbytná pro realizaci těchto buněčných procesů. Vzhledem k jejich četnosti výskytu v těchto procesech mohou být proteinkinázy nacházeny jako integrální součást plasmatické membrány nebo jako cytoplasmatické enzymy nebo lokalizované v jádře, často jako složky enzymových komplexů. V mnoha případech jsou tyto proteinkinázy nezbytným prvkem enzymu a strukturálních proteinových komplexů, které určují, kde a kdy v buňce probíhá určitý buněčný proces.

Proteinové tyrosinkinázy. Proteinové tyrosin kinázy (PTK) jsou enzymy, které katalyzují fosforylaci specifických tyrosinových zbytků v buněčných proteinech. Tato post-translační modifikace těchto substrátových proteinů, které jsou často samy enzymy, působí jako proliferace, aktivace nebo diferenciace buněk, regulující molekulární přesmyk (přehled viz Schlessinger a Ulrich, 1992, Neuron 9\ 383-391). Aberantní nebo nadbytečná aktivita PTK byla pozorována u mnoha chorobných stavů zahrnujících benigní a maligní proliferativní poruchy, jakož i onemocnění, která jsou důsledkem nevhodné aktivace imunitního systému (například autoimunitních poruch), odmítání transplantátu a • · · · · ·

4, .

onemocnění hostitele proti štěpu. PTK, specifické pro endotelové buňky, jako je KDR a Tie-2, navíc zprostředkovávají angiogenní proces, a tudíž se účastní podpory progrese nádorů a dalších onemocnění zahrnujících nevhodnou vaskularizaci (například diabetické retinopatie, choroidální neovaskularizace v důsledku makulámí degenerace související s věkem, psoriázy, arthritidy, retinopatie nedonošených, infantilních hemangiomů).

Tyrosinkinázy mohou být receptorového typu (s extracelulámí, transmembránovou a intracelulámí doménou) nebo non-receptorového typu (jsou plně intracelulámí).

Receptorové tyrosinkinázy (RTK). RTK zahrnují velkou skupinu transmembránových receptorů s různými biologickými aktivitami. Dosud bylo identifikováno alespoň 19 různých podskupin RTK. Skupina receptorových tyrosinkináz (RTK) zahrnuje receptory, které jsou rozhodující pro růst a diferenciaci různých buněčných typů (Yarden a Ullrich, Ann. Rev. Biochem. 57: 433-478,1988; Ullrich a Schlessinger, Cell 61: 243-254,1990). Vlastní funkce RTK je aktivována po navázání ligandu, což vede k fosforylaci receptoru a několika buněčných substrátů a následně k různým buněčným odpovědím (Ullrich & Schlessinger, 1990, Cell 61: 203-212). Přenos signálu zprostředkovaný receptorovou tyrosinkinázou je přitom zahájen extracelulámí interakcí se specifickým růstovým faktorem (ligandem), po níž typicky následuje dimerizace receptoru, stimulace vlastní aktivity proteinové tyrosinové kinázy a transfosforylace receptoru. Vytvoří se tak vazebná místa pro přenosové molekuly intracelulámího signálu a vedou k vytvoření komplexů se spektrem cytoplasmatických signálních molekul, které usnadňují adekvátní buněčnou odpověď (například buněčné dělení, diferenciaci, metabolické efekty, změny extracelulámího mikroprostředí), viz Schlessinger a Ullrich, 1992, Neuron 9: 1-20.

Proteiny s SH2 (src homologie-2) nebo fosfotyrosinovými vazebnými (PTB) doménami vážou aktivované receptory tyrosinkináz a jejich substráty s vysokou afinitou k propagaci signálů do buňky. Obě domény rozpoznávají fosfotyrosin. (Fantl et al., 1992, Cell 69: 413-423; Songyang et al., 1994, Mol.Cell. Biol. 14: 2777-2785; Songyang et al., 1993, Cell 72: 767-778; a Koch et al., 1991, Science 252: 668-678; Shoelson, Curr. Opin. Chem. Biol. (1997), 1 (2), 227234; Cowbum, Curr. Opin. Struct. Biol. (1997), 7 (6), 835838). Bylo identifikováno několik intracelulámích substrátových proteinů, které asociují s receptorovými tyrosinkinázami (RTK). Mohou být rozděleny do dvou hlavních skupin: (1) substráty, které mají katalytickou doménu, a (2) substráty, které takovou doménu nemají, ale slouží jako adaptéry a asociují s katalyticky aktivními molekulami (Songyang et al., 1993, Cell 72: 767-778). Specificita interakcí mezi receptory nebo proteiny a doménami SH2 nebo PTB jejich substrátů je určována aminokyselinovými zbytky, bezprostředně obklopujícími fosforylovaný tyrosinový zbytek. Například rozdíly ve vazebné afinitě mezi SH2 doménami a aminokyselinovými sekvencemi obklopujícími fosfotyrosinové zbytky na konkrétních receptorech korelují s pozorovanými rozdíly ve fosforylačním profilu jejich substrátů (Songyang et al., 1993, Cell 72: 767-778). Zpozorování vyplývá, že funkce každé receptorové tyrosinkinázy je určována nejen profilem její exprese a dostupností ligandů, ale i souborem transdukčních drah signálu po směru exprese, které jsou aktivovány konkrétním receptorem, jakož i načasováním a trváním těchto stimulů. Fosforylace tedy poskytuje významný regulační stupeň, který určuje selektivitu signálních drah, vyvolávaných specifickými receptory růstového faktoru, jakož i receptory diferenciačního faktoru.

Uvádí se, že několik receptorových tyrosinkináz, jako je FGFR-1, PDGFR, TIE-2 a c-Met, a růstové faktory, které se na ně váží, hrají roli v angiogenesi, i když některé z nich mohou podporovat angiogenesi nepřímo (Mustonen a Alitaío, J. Cell Biol. 129: 895898,1995). Jedna taková receptorová tyrosinkináza, známá jako fetální jatemí kináza 1 (FLK-1), je členem podskupiny RTK typu ΠΙ. Alternativní označení pro lidskou FLK-1 je receptor obsahující doménu kinázového insertu (KDR) (Terman et al., Oncogene 6: 1677-83,1991). Další alternativní označení pro FLK-l/KDR je receptor 2 růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk (VEGFR-2), protože s vysokou afinitou váže VEGF. Myší verze FLK1/VEGFR-2 se označuje také NYK (Oelrichs et al., Oncogene 8 (1): 11-15,1993). Byly izolovány DNA kódující myší, krysí a lidskou FLK-1 a byly popsány nukleotidové a kódované aminokyselinové sekvence (Matthews et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 88: 9026-30,1991; Terman et al., 1991, viz výše; Terman et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 187: 1579-86,1992; Sarzani et al., viz výše; a Millauer eZ al., Cell 72: 835-846,1993). Četné studie, například uvedené v Millauer et al., n'yí výše, naznačují, že VEGF a FLK-1 ZKDRNEGFR-2 tvoří dvojici ligand-receptor, která hraje významnou úlohu při proliferaci vaskulámích endotelových buněk, resp. při tvorbě a rašení eév, což se označuje jako vaskulogenese, resp. angiogenese.

Jiná RTK podskupiny typu ΙΠ, označovaná tyrosin kináza-1 typu fms (Fit- 1) je příbuzná FLK-l/KDR (DeVries et al. Science 255; 989-991,1992; Shibuya et al., Oncogene 5: 519-524,1990). Alternativní označení pro Flt-1 je receptor 1 růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk (VEGFR-1). Dosud byla exprese členů

podskupin FLK-l/KDR/VEGFR-2 a Flt-l/VEGFR-1 zjišťována primárně na endotelových buňkách. Členové těchto podskupin jsou specificky stimulováni členy skupiny ligandů růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk (VEGF) (Klagsbum a D'Amore, Cytokine & Growth Factor Reviews Ί\ 259-270, 1996). Růstový faktor vaskulámích endotelových buněk (VEGF) se váže na Flt-1 s vyšší afinitou než na FLK-l/KDR a je mitogenní vůči vaskulámím endotelovým buňkám (Terman et al., 1992, viz výše; Mustonen et al. viz výše; DeVries et al., viz výše). Má se za to, že Flt-1 je nezbytný pro organizaci endotelu během vaskulámího vývoje. Exprese Flt-1 je spojena s Časným vaskulámím vývojem u myších embryí a s neovaskularizací v průběhu hojení ran (Mustonen a Alitalo, viz výše). Exprese Flt-1 v monocytech, osteoklastech a osteóblastech, stejně jako v dospělých tkáních, jako jsou glomeruly v ledvinách, naznačuje pro tento receptor další funkci, která nesouvisí s růstem buněk (Mustonen a Alitalo, viz výše).

Jak je uvedeno výše, nedávné důkazy naznačují, že VEGF hraje úlohu jak při normální, tak při patologické angiogenesi (Jakeman et al., Endocrinology 133: 848859,1993; Kolch et al., Breast Cancer Řesearch and Ťreatment 36: 139-155,1995; Ferrara et al., Endocrine Reviews 18 (1); 4-25,1997; Ferrara et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg a E. M. Rosen), 209-232,1997). Navíc se uvádí, že VEGF se účastní regulace a zvyšování vaskulámí permeability (Connolly, et al.,J. Biol. Chem. 264 2001720017-20024, 1989; Brown et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg a E. M. Rosen), 233-269, 1997). Byly popsány různé formy VEGF, vznikající alternativním sestřihem mRNA, včetně čtyř forem, popsaných v Ferrara et al. (J. Cell. Biochem. 47: 211218,1991). Obě vylučované a převážně s buňkou související formy VEGF identifikoval Ferrara et al. viz výše, a u proteinu se ukázalo, že existuje ve formě disulfidicky spojených dimerů.

V poslední době bylo identifikováno několik příbuzných homologů VEGF. Nebyla však ještě osvětlena jejich role v normálních a chorobných fyziologických procesech. Členové rodiny VEGF jsou navíc často koexprimováni v četných tkáních spolu s VEGF a jsou obecně schopni tvořit s VEGF heterodimery. Tato schopnost pravděpodobně mění receptorovou specifitu a biologické účinky heterodimerů a dále komplikuje osvětlení jejich specifických funkcí, jak je ilustrováno dále (Korpelainen a Alitalo, Curr. Opin. Cell Biol., 159164,1998 a tam citované odkazy).

Růstový faktor placenty (P1GF) má aminokyselinovou sekvenci, která vykazuje významnou homologii se sekvencí VEGF (Park et al., J. Biol. Chem. 269: 25646-54,1994;

Maglione et al. Oncogene 8: 925-31,1993). Jako u VEGF vznikají z alternativního sestřihu mRNA různé typy P1GF a protein existuje v dimemí formě (Park et al., viz výše). PIGF-1 a P1GF-2 se vážou s vysokou afinitou na Flt-1 a P1GF-2 se rovněž ochotně váže na neuropilin-1 (Migdal et al., J. Biol. Chem. 273 (35): 22272-22278), ale žádný z nich se neváže na FLK-l/KDR (Park et al., viz výše). Uvádí se, že P1GF potencuje jak vaskulámí permeabilitu, tak mitogenní účinek VEGF na endotelové buňky, je-li VEGF přítomen v nízkých koncentracích (pravděpodobně v důsledku tvorby heterodimeru) (Park et al., viz výše).

VEGF-B je produkován ve dvou isoformách (167 a 185 zbytků), které také zjevně vážou Flt-l/VEGFR-1. Může hrát roli při regulaci degradace extracelulámí matrice, buněčné adhesi a migraci prostřednictvím modulace exprese a aktivity plasminogenaktivátoru urokinázového typu a inhibitoru 1 plasminogen-aktivátoru (Pepper et al., Proč. Nati. Acad. Sci. U. S. A. (1998), 95 (20): 11709-11714).

VEGF-C byl původně klonován jako ligand pro VEGFR-3/Flt-4, který je primárně exprimován lymfatickýmiendotelovými buňkami. Ve své plně zralé formě může VEGF-C také vázat KDR/VEGFR-2 a stimulovat proliferaci a migraci endotelových buněk in vitro a angiogenesi v in vivo modelech (Lymboussaki et al., Am. J. Pathol. (1998), 153 (2): 395403; Witzenbichler et al., Am. J. Pathol. (1998), 153 (2), 381-394). Transgenní hyperexprese VEGF-C vyvolává proliferaci a zvětšení pouze u lymfatických cév, zatímco krevní cévy ovlivněny nejsou. Na rozdíl od VEGF není exprese VEGF-C vyvolávána hypoxií (Ristimaki et al., J. Biol. Chem. (1998), 273 (14), 8413-8418).

Nejnověji objevený VEGF-D je strukturně velmi podobný VEGF-C. Uvádí se, že VEGF-D váže a aktivuje alespoň dva VEGFR, VEGFR-3/Flt-4 a KDR/VEGFR-2. Původně byl klonován jako c-fos indukovatelný mitogen pro fíbroblasty a přednostně je exprimován v mesenchymálních buňkách plic a kůže (Achen et al., Proč. Nati. Acad. Sci. U. S. A. (1998), 95 (2), 548-553 a tam uvedené odkazy).

Co se týče VEGF, pro VEGF-C a VEGF-D bylo nárokováno, že v Milesově testu indukují vzrůst vaskulámí permeability in vivo, jestliže se vstříknou do kutánní tkáně (PCT/US97/14696; W098/07832, Witzenbichler et al., viz výše). Fyziologická role a význam těchto ligandů při modulaci vaskulámí hyperpermeability a endotelových odpovědí ve tkáních, ve kterých nejsou exprimovány, zůstává nejistá.

Nedávno byl popsán virově kódovaný nový typ růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk, VEGF-E (NZ-7 VEGF), který přednostně využívá receptor KDR/Flk4 · receptor a má silnou mitotickou aktivitu bez vazebné oblasti heparinu (Meyer et al., EMBOJ. (1999), 18 (2), 363-374; Ogawa et al., J. Biol. Chem. (1998), 273 (47), 3127331282.). Sekvence VEGF-E mají 25% homologii se savčím VEGF a jsou kódovány virem Orf parapoxviru (OV). Tento parapoxvirus napadá ovce a kozy a příležitostně člověka a vytváří léze s angiogenesí. VEGF-E je dimer o velikosti asi 20 kDa bez bázické domény nebo afinity k heparinu, ale má charakteristickou cysteinovou uzlovou jednotku, přítomnou ve všech savčích VEGF, a bylo překvapivě zjištěno, že má účinnost a bioaktivity podobné jako heparin vázající isoforma VEGF165 od VEGF-A, tj. oba faktory Stimulují uvolňování tkáňového faktoru (TF), proliferaci, chemotaxi a rašení kultivovaných vaskulámích endotelových buněk in vitro a angiogenesí in vivo. Podobně jako u VEGF165, bylo u VEGF-E zjištěno, že se váže s vysokou afinitou na receptor-2 VEGF (KDR), což vede k autofosforylaci receptorů a dvoufázovému vzrůstu koncentrací volného nitrobuněčného Ca²⁺, zatímco se VEFG-E, na rozdíl od VEGF165, nevázal na receptor-1 VEGF (Flt-1).

Na základě objevujících se nálezů dalších homologů VEGF a VEGFR a precedentů heterodimerizace ligandu a receptorů může působení takových homologů VEGF zahrnovat vznik heterodimerů ligandu VEGF a/nebo heterodimerizaci receptorů, nebo vazbu na ještě neobjevený VEGFR (Witzenbichler et al., vrz. výše). Nedávné zprávy také naznačují, že indukce vaskulámí permeability se může účastnit neuropilin-1 (Migdal et al., viz výše) nebo VEGFR-3/Flt-4 (Witzenbichler et al., viz výše), nebo receptory jiné než KDR/VEGFR-2 (Stacker, S. A., Vítali, A., Domagala, T., Nice, E., a Wilks, A. Έ .Angiogenesis and QzncerConference, Amer. Assoc. Cancer Res., Jan. 1998, Orlando, FL; Williams, Diabetelogia 40: S 118-120 (1997)).

Tie-2 (TEK) je člen nedávno objevené rodiny specifických receptorových tyrosinkináz endotelových buněk, který se účastní kritických angiogenních procesů, jako je větvení, rašení, remodelování, maturace a stabilita cév. Tie-2 je první savčí receptorová tyrosinkináza, u níž byl identifikován jak agonistní ligand(y) (například Angiopoietinl (Angl), který stimuluje autofosforylaci receptorů a transdukci signálu), tak antagonistní ligand(y) (například Angiopoietin2 (Ang2)). Knoek-out a transgenní manipulace exprese Tie-2 a jeho ligandů ukazuje, že přísná prostorová a časová kontrola signalizace Tie-2 je nezbytná pro správný vývoj nové vaskulatury. Současný model naznačuje, že stimulace Tie-2 kinázy ligandem Angl je přímo účastna větvení, rašení a vyrůstání nových cév, a získávání a interakce periendotelových podpůrných buněk je významná při zachovávání integrity cév a zavádění klidu. Absence Angl stimulace Tie-2 nebo inhibice

	• ·	• · · ·	4	•	44		4 4 4 4
4	•	•	•	4	4	4	4 ,
•	•	• ·		«	4 ·	*	4
•	•	• 4	4	4	•	4	4 4
	• ·	4' ·	4 44	4 4 4	4 4		··

autofosforylace Tie-2 pomocí Ang2, který vzniká ve vysokých hladinách v místech vaskulámí regrese, může vyvolat ztrátu vaskulámí struktury a matricových kontaktů vedoucí k odumření endotelových buněk, zejména při absenci stimulů pro růst nebo přežití. Situace je však složitější, protože byly nedávno objeveny alespoň dva další ligandy Tie-2 (Ang3 a Ang4), a byla prokázána schopnost heterooligomerizace různých agonistních a antagonistních angiopoetinů, modifikující jejich aktivitu. Zaměření angiogenního terapeutického přístupu na interakce Tie-2 ligand-receptor má tedy menší přednost a preferuje se kinázová inhibiční strategie.

Rozpustná extracelulámí doména Tie-2 (ExTek) může působit ve prospěch narušování ustavování nádorové vaskulatury v modelech xenotransplantátu nádoru prsu a plicní metastasy a při oční neovaskularizaci zprostředkované nádorovými buňkami. Infekcí adenoviru je možno dosáhnout mg/ml hladin produkce ExTek in vivo u hlodavců za 7 až 10 dní bez vedlejších účinků. Tyto výsledky naznačují, že narušování signálních drah Tie-2 může být u normálních zdravých zvířat dobře tolerováno. Tyto inhibiční odpovědi Tie-2 na ExTek mohou být důsledkem sekvestrace ligandu(ů) a/nebo tvorby neproduktivního heterodimeru s pinou délkou Tie-2.

V nedávné době bylo zjištěno významné posílení exprese Tie-2 ve vaskulárním synoviálním panu lidských artritických kloubů, což je konzistentní srolí při nežádoucí neovaskularizaci. Tento objev naznačuje, že Tie-2 má určitou roli při progresi revmatoidní artritidy. Ve spojení s poruchami lidské venózní malformace byly objeveny bodové mutace produkující konstitutivně aktivované formy Tie-2. Inhibitory Tie-2 se proto používají při léčbě těchto poruch a v dalších situacích nežádoucí neovaskularizace.

Nereceptorové tyrosinkinázy. Nereceptorové tyrosinkinázy představují soubor buněčných enzymů, jimž chybějí extracelulámí a transmembránové sekvence. Do současnosti byly identifikovány dvacet čtyři jednotlivé nereceptorové tyrosinkinázy, zahrnující jedenáct (11) podrodin (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack a LIMK). Podrodina Src nereceptorových tyrosinkináz je v současnosti tvořena největším počtem PTK a zahrnuje Src, Yes, Fyn, Lyn, Lek, Blk, Hek, Fgr a Yrk. Podrodina Src enzymů se spojuje s onkogenesí a imunitní odpovědí. Podrobnější diskusi nereceptorových tyrosinkináz poskytuje Bohlen, 1993, Oncogene 8: 2025-2031, na kteroužto práci se zde odkazuje.

Bylo zjištěno, že mnohé tyrosinkinázy, ať RTK nebo nereceptorové tyrosinkinázy, se účastní buněčných signálních drah podílejících se na četných patogenních stavech • · · ·

včetně rakoviny, psoriázy a dalších hyperproliferativních poruch nebo hyperimunitních odpovědí.

Vývoj sloučenin pro modulaci PTK.

Vzhledem k tušenému významu PTK pro kontrolu, regulaci a modulaci buněčné proliferace, onemocnění a poruchy spojené s abnormální buněčnou proliferaci byly činěny četné snahy identifikovat receptorové a nereceptorové tyrosinkinázové inhibitory pomocí různých přístupů, včetně použití mutantních ligandů (US patentová přihláška č. 4,966,849), rozpustných receptorů a protilátek (přihláška ě. WO 94/10202; Kendall & Thomas, 1994, Proč. Nati. Acad. Sci 90: 10705-09; Kim et al., 1993, Nátuře 362: 841-844), RNA ligandů (Jellinek, et al., Biochemistry 33: 10450-56; Takano, et al., 1993, Mol. Bio. Cell 4: 358A; Kinsella, et al. 1992, Exp. CellRes. 199: 56-62; Wright, et al., 1992, J. Cellular Phys. 152: 448-57) a tyrosinkinázových inhibitorů (WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; US patent ě. 5,330,992; Mariani, et al., 1994, Proč. Am. Assoc. Cancer Res. 35: 2268).

V poslední době byly činěny pokusy identifikovat malé molekuly, které působí jako inhibitory tyrosinkinázy. Například bismonocyklické, bicyklické nebo heterocyklické arylové sloučeniny (PCT WO 92/20642) a vinylen-azaindolové deriváty (PCT WO 94/14808) se obecně popisují jako tyrosinkinázové inhibitory. Styrylové sloučeniny (US patent č. 5,217,999), styryl-substituované pyridylové sloučeniny (US patent č. 5,302,606), některé chinazolinové deriváty (EP č. 0 566 266 Al; Expert Opin. Ther. Pat. (1998), 8 (4): 475-478), selenoindoly a selenidy (PCT WO 94/03427), tricyklické polyhydroxylické sloučeniny (PCT WO 92/21660) a sloučeniny benzylfosfonové kyseliny (PCT WO 91/15495) se popisují jako sloučeniny pro použití jako tyrosinkinázové inhibitory pro použití při léčbě rakoviny. Anilinocinnoliny (PCT WO 97/34876) a sloučeniny chinazolinových derivátů (PCT WO 97/22596; PCT WO 97/42187) byly popsány jako inhibitory angiogenese a vaskulámí permeability.

Dále byly činěny pokusy identifikovat malé molekuly, které působí jako inhibitory serin/threoninkináz. Například bylo uvedeno, že bis(indolylmaleinimidové) sloučeniny inhibují konkrétní isoformy PKC serin/threoninkináz, jejichž funkce při transdukci signálu souvisí se změněnou vaskulámí permeabilitou při onemocněních souvisejících s VEGF (PCT WO 97/40830; PCT WO 97/40831).

Inhibitory Plk-1 kinázy

Plk-1 je serin/threoninkináza, která je významným regulátorem průběhu buněčného cyklu. Má kritickou roli při výstavbě a dynamické funkci aparátu mitotického vřeténka. Ukázalo se rovněž, že Plk-1 a příbuzné kinázy jsou úzce zapojeny do aktivace a inaktivace jiných regulátorů buněčného cyklu, jako jsou na cyklinu závisející kinázy. Vysoké hladiny exprese Plk-1 jsou spojeny s proliferačními aktivitami buněk, často se nachází v maligních nádorech různého původu. Předpokládá se, že inhibitory Plk-1 blokují proliferaci rakovinných buněk narušením procesů zahrnujících mitotická vřeténka a nesprávně aktivované na cyklinu závisející kinázy.

Inhibitory Cdc2/Cyklin B kinázy (Cdc2 je známa rovněž jako cdkl)

Cdc2/cyklin B je další serin/threonin kináza, která náleží ke skupině na cyklinu závislých kináz (cdk). Tyto enzymy se účastní kritického přechodu mezi různými fázemi průběhu buněčného cyklu. Má se za to, že nekontrolovaná proliferace buněk, která je známkou rakoviny, je závislá na zvýšené aktivitě cdk v těchto buňkách. Inhibice zvýšené aktivity cdk v rakovinných buňkách prostřednictvím inhibitorů cdc2/cyklin B kinázy by mohla proliferaci potlačit a nastolit normální kontrolu průběhu buněčného cyklu.

Regulace aktivace CDK je složitá, ale vyžaduje asociaci CDK se členem cyklinové skupiny regulačních podjednotek (Draetta, Trends in Cell Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Nátuře, 339: 275-280 (1989); Solomon et aí, Molecular Biology of the Cell, 3: 13-27 (1992)). Další úroveň regulace nastává jak aktivací, tak inaktivací fosforylace CDK podjednotky (Draetta, Trends in Cell Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Nátuře, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Cell, 3: 13-27 (1992); Ducommun et al., EMBO Journal, 10: 3311-3319 (1991); Gautier et al., Nátuře 339: 626-629 (1989); Gould a Nurse, Nátuře, 342: 39-45 (1989); Krek a Nigg, EMBO Journal, 10: 3331-3341 (1991); Solomon et al., Cell, 63: 1013-1024 (1990)). Koordinovaná aktivace a inaktivace různých komplexů cyklin/CDK je nezbytná pro normální průběh buněčným cyklem (Pines, Trends in Biochemical Sciences, 18: 195197 (1993); Sherr, Cell, 73: 1059-1065 (1993)). Oba kritické přechody Gl-S a G2-M jsou kontrolovány různými aktivitami cyklin/CDK. U G1 se má za to, že nástup S-fáze zprostředkuje jak cyklin D/CDK4, tak cyklin E/CDK2 (Matsushima et al., Molecular & Cellular Biology, 14: 2066-2076 (1994); Ohtsubo a Roberts, Science, 259: 1908-1912

•	·· • •	• · · · • 9	9 9 9 ' •	9 9 9	9 •	9 9 9	·· · · • •
•	•	• ·' .	9	9	•	•	• 9
	• *	• ·	9 99	99 9		• ·	9 9

(1993); Quelle et al., Genes & Development, 7: 1559-1571 (1993); Resnitzky et al., Molecular & Cellular Biology, 14: 1669-1679 (1994)). Průchod S-fází vyžaduje aktivitu cyklinu A/CDK2 (Girard et al., Cell, 67: 1169-1179 (1991); Pagano et al., EMBO Journal, 11: 961-971 (1992); Rosenblatt et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 89: 2824-2828 (1992); Walker a Maller, Nátuře, 354: 314-317 (1991); Zindy et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 182: 1144-1154 (1992)), zatímco aktivace cyklinu A/cdc2 (CDK1) a cyklin B/cdc2 je nutná pro nástup metafáze (Draetta, Trends in Cell Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Nátuře, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Cell, 3: 13-27 (1992); Girard et al., Cell, 6T. 1169-1179 (1991); Pagano et al., EMBO Journal, 11: 961-971 (1992); Rosenblatt et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 89: 2824-2828 (1992); Walker a Maller, Nátuře, 354: 314-317 (1991); Zindy et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 182: 1144-1154 (1992)). Není tedy překvapující, že ztráta kontroly regulace CDK je častým případem u hyperproliferativních onemocnění a rakoviny. (Pines, Current Opinion in Cell Biology, 4: 144-148 (1992); Lees, Current Opinion in Cell Biology, Ί: 773-780 (1995); Hunter a Pines, Cell, 79: 573-582 (1994)).

Inhibitory kináz účastnící se zprostředkování nebo udržování chorobných stavů reprezentují nové terapie pro tyto poruchy. Příklady takových kináz zahrnují, ale nejsou na ně omezeny: (1) inhibici c-Src (Brickell, Critical Reviews in Oncogenesis, 3: 401-406 (1992); Courtneidge, Seminars in Cancer Biology, 5: 236-246 (1994), raf (Powis, Pharmacology & Therapeutics, 62: 57-95 (1994)) a na cyklinu závisejících kináz (CDK) 1, 2 a 4 u rakoviny (Pines, Current Opinion in Cell Biology, 4: 144-148 (1992); Lees, Current Opinion in Cell Biology, 7: 773-780 (1995); Hunter a Pines, Cell, 79: 573-582 (1994)), (2) inhibici CDK2 nebo PDGF-R kinázy při restenóze (Buchdunger et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 92: 2258-2262 (1995)), (3) inhibici CDK5 a GSK3 kináz u Alzheimera (Hosoi et al., Journal of Biochemistry (Tokyo), 117: 741-749 (1995); Aplin et al., Journal of Neurochemistry, 67: 699-707 (1996), (4) inhibici c-Src kinázy při osteoporóze (Tanaka et al., Nátuře, 383: 528-531 (1996), (5) inhibici GSK-3 kinázy při diabetů 2. typu (Borthwick et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 210: 738-745 (1995), (6) inhibici p38 kinázy při zánětech (Badger et al., The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 279: 1453-1461 (1996)), (7) inhibici VEGF-R 1-3 a TEE-l a 2 kináz při onemocněních zahrnujících angiogenesi (Shawver et al., Drug Discovery Today, 2: 50-63 (1997)), (8) inhibici UL97 kinázy při virových

infekcích (He et al., Journal of Virology, 71: 405-411 (1997)), (9) inhibici CSF-1R kinázy při kostních a hematopoetických onemocněních (Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7: 421-424 (1997) a (10) inhibici Lek kinázy při auto imunitních onemocněních a odhojování transplantátů (Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7: 417420 (1997)).

Navíc je možné, že inhibitory některých kináz mohou být použitelné při léčbě onemocnění, není-li kináza špatně regulována, nicméně je nezbytná pro udržování chorobného stavu. V tomto případě by inhibice kinázové aktivity působila buď jako léčba nebo paliativum pro tato onemocnění. Například četné viry, jako je lidský papilomavirus, narušují buněčný cyklus a ženou buňky do S-fáze buněčného cyklu (Vousden, FASEB Journal, 7: 8720879 (1993)). To, že se buňkám po virové infekci zabrání vstoupit do syntézy DNA inhibici aktivit iniciujících S-fázi, jako je CDK2, může přerušit životní cyklus viru zamezením virové replikace. Tentýž princip může být použit k ochraně normálních buněk těla před toxicitou cyklově specifických chemoterapeutik (Stone et al., Cancer Research, 56: 3199-3202 (1996); Kohn et al., Journal of Cellular Biochemisiry, 54: 44-452 (1994)). Inhibice CDK 2 nebo 4 zabrání u normálních buněk přechodu do cyklu a omezí toxicitu cytotoxik, která působí v S-fázi, G2 nebo mitose. Dále se ukázalo, že také aktivita CDK2/cyklin E reguluje NF-kB. Inhibice aktivity CDK2 stimuluje NF-kBzávislou expresi genu, jev zprostředkovaný interakcemi s p300 koaktivátorem (Perkins et al., Science, 275: 523-527 (1997)). NF-kB reguluje geny účastnící se zánětlivých odpovědí (jako hematopoetické růstové faktory, chemokiny a leukocytové adhesní molekuly) (Baeuerle a Henkel, Annual Review of Immunology, 12: 141-179 (1994)) a může se účastnit suprese apoptotických signálů v buňce (Beg a Baltimore, Science, 274: 782-784 (1996); Wang et al., Science, 274: 784-787 (1996); Van Antwerp et al., Science, 274: 787789 (1996)). Inhibice CDK2 tedy může potlačovat apoptózu indukovanou cytotoxickými léčivy mechanismem, který zahrnuje NF-kB. Z toho tedy vyplývá, že inhibice aktivity CDK2 může být použitelná v případech, kde má NF-kB určitou roli v etiologii onemocnění. Další příklad může být vzat z fungálních infekcí: Aspergillóza je běžné onemocnění imunokompromitovaných pacientů (Armstrong, Clinical Infectious Diseases, 16: 1-7 (1993)). Inhibice kináz Aspergillus Cdc2/CDC28 nebo Nim A (Osmani et al., EMBO Journal, 10: 2669-2679 (1991); Osmani et al., Cell, 67: 283-291 (1991)) může způsobit inaktivaci nebo smrt hub, a tak zlepšit terapeutický výsledek u pacientů s těmito infekcemi.

····

Μ) ······««·'· > '4 44 44 44

4 4 '4 4 '4 4 • · «· * 4 4 9 4 ·

4 4 9 4 4. 4 · · ·

44 ·»· 444 '4'4 49

Identifikace efektivních malých sloučenin, které specificky inhibují přenos signálu a buněčnou proliferaci modulací aktivity receptorových a nereceptorových tyrosin a serin/threoninkináz, a tak reguluj ích a moduluj ích abnormální nebo nesprávnou buněčnou proliferaci, diferenciaci nebo metabolismus, je tedy žádoucí. Zvláště by byla přínosnou identifikace metod a sloučenin, které specificky inhibují funkci tyrosinkinázy, která je nezbytná pro antigenní procesy nebo vznik vaskulámí hyperpermeability vedoucí k edemům, ascitům, efuzím, exudátům a makromolekulámí extravasaci a matricové depozici, jakož i k souvisejícím poruchám.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká sloučenin obecného vzorce (I)

jejich racemických-diastereomemích směsí, optických izomerů, farmaceuticky přijatelných solí, proléčiv nebo biologicky aktivních metabolitů, kde:

Gje ^(J?^a < ‘λ..

uioo

M, Z—A—Z—Z

D₂4g, // \ J

M^L2 ,(J₂>_b kde Z¹⁰⁰ je nebo skupina případně substituovaná substituentem R] vybraná ze skupiny sestávající z alkylu; cykloalkylu; pyrrolidinylu; bicyklického aromatického heterocyklu obsahujícího dusík, ve kterém každý kruh má šest atomů, např. chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinyl a ftalazinyl; bicyklického aromatického heterocyklu obsahujícího dusík, ve kterém se dusík podílí na vytvoření můstku a jeden aromatický kruh má pět členů a druhý aromatický kruh má šest členů, např.

·· ···· imidazo[l,2-fl]pyrimidinyl; l//-imidazo[l,2-<3]imidazolyl; imidazo[2,l-ů][l,3]thiazolyl; naftyl; tetrahydronaftyl; benzothienyl; furanyl; thienyl; benzoxazolyl; benzoizoxazolyl;

benzothiazolyl thiazolyl; benzofuranyl

2,3-dihydrobenzofuranyl; indolyl; izoxazolyl; tetrahydropyranyl; tetrahydrofuranyl; piperidinyl; pyrazolyl; pyrrolyl; pyrrolopyridinyl; H-pyridinon; oxazolyl; izothiazolyl; oxadiazolyl; thiadiazolyl; indolinyl; indazolyl; imidazo[l,2-a]pyridinyl; benzoizothiazolyl; 1,1-dioxybenzoizo thiazolyl; pyrido-oxazolyl; pyrido-thiazolyl; pyrimido-oxazolyl; pyrimido-thiazolyl; a benzimidazolyl;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Cý), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

Ž¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný Čj-Cď nebo případně substituovaný -(CH₂)n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

každý ze substituentů R_a a R] představuje jeden nebo více substituentů při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z átom vodíku, halogenu, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluormethylkarbonylaminoskupiny, trifluormethylsulfonamidoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkenylu, substituované nebo nesubstituované aryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroaryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroarylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované arylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované alkyl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované alkyl-S-, substituované nebo nesubstituované aryl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované heteroaryl-S(O)_p-,

substituovaného nebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroaryl alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkynylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných nebo nesubstituovaných amidoskupin, substituované nebo nesubstituované heteroarylthioskupiny, substituované nebo nesubstituované arylthioskupiny, -Z^W5-C(O)N(R)2, -Z^,05-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Rc a CH₂ORc;

substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRdRe, -W-(CH₂),-NR<,Re, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂),-S-alkyl nebo -W-(CH₂), -OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Cé);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituované nebo nesubstituované (Ci-Cé), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)fenyl;

substituenty Rj a Re při každém výskytu jsou nezávisle H, alkylu, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Rd, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí a 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂ nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

substituent R₃ při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl a substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

A je-(Ci-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH2O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-;-CH₂N (C(O)R))-; -CH₂N(C(O)OR)-;

-CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-;

-CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)C(O)-(CH₂)_n15 ·· ···· · · '·· ···· • · '· ·· ·· · · '· • · ♦ · · · · * • ··· · · · · · · ·· ·· ··· ··· ·· ··

N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)_n+1-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)„₊₁-C(O)-, -O-(CR₂)_n+i0-, -N(C(0)R)S(0)_ps -N(R)S(0)_pN(R)-; -N(R)-C(0)(CH₂)_n-0-, -C(0)N(R)C(0)-; -S(0)_pN(R)C(0)-; -0S(0)_pN(R)-; -N(R)S(0)_p0-; -N(R)S(0)_PC(0)-; -S0_pN(C(0)R)-; -N(R)S0_pN(R)-; -G(O)O-; -N(R)P(0R_b)0-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-;

-N(R)P(0)(0Rb)-; -N(C(0)R)P(0R_b)0-; -N(C(0)R)P(0R_b)-; -N(C(0)R)P(0)(0R_b)0nebo-N(C(0)R)P(0R_b)-;

substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor vytvářejí dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a R_b společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRS0₂ a substituenty R, R_a a atom dusíku společně vytvářejí a substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z¹ ’θ-Α-Ζ¹¹¹ dohromady vytvářejí kovalentní vazbu; a substituent R₂ j e H nebo skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹ -Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-Có)-, -(Cj-Có)- -0-, -(Ci-Có)- -C(O)-, -(Ci-Cé)C(0)0-, -(Ci-C6)-C(0)-NH-, -(C_r-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heíerocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heíerocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více substituentů každý nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogenu, substituované nebo nesubstituované (Cj-Có), substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -C(O)-alkylu, substituované nebo

			'·· ···· · · '·· ···· • · · '·· '·· 9 9 · • · · · · « · 9 • · · * * · « · » ·
		16	·· ·· ··· ··· ·· ··
nesubstituované	alkoxyskupiny,	substituované	nebo nesubstituované

-N(R)-(C]-C6)-0R, substituované nebo nesubstituované -N((Ci-C6)-OR)2, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C₆)-C(O)2R, substituované nebo nesubstituované -(CiC6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C₆)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituované nebo nesubstituované sulfonamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované ureidoskupiny, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-Cé)OR, oxoskupiny, nasycené, nenasycené nebo aromatické, substituované nebo nesubstituované heterocyklické skupiny obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z N, O, a S; kde atomy dusíku uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)N(R)2, substituovanou nebo nesubstituovánou -C(O)-(Ci-C6)N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo >

substituent R2 je skupina obecného vzorce -B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxy skupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cbj-azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Cj-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-

' A · • '·	···· · ·	A A A A	AAA A Ά A
• · • A	A A	Ά ·	A A
A	A A A			A	A	A A
• A	A A	A A A	A A A		A ·	• A

(Ci-Cé)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C₆)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(C_rC6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly Di, Gi, Jj, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s podmínkou, že pokud A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo a 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl , pak Z¹⁰⁰ není alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl nebo pyrrolidinyl;

s podmínkou, že pokud Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je

3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo a 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-ylu, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, pak A není alkyl, -0-, -C(O)-, -NHC(O)- nebo

-C(0)0-;

·· ···· • 9 9 · 9 9

9 9 ,.9-99 .999

99 s podmínkou, že pokud Ζ^11θ-Α-Ζ”' jsou dohromady kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰není alkyl;

s podmínkou, že pokud Z^1,O-A-Z^U1 jsou dohromady Cj-Cé alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl; a s podmínkou, že pokud R₂ je substituovaný nebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba, pak A není-0-,-C(O)O-nebo-N(R)-.

V prvním provedení je substituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I) a) atom vodíku; b) substituovaný nebo nesubstituovaný trityl; c) substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl; d) azaheteroaryl substituovaný substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem; e) azacykloalkylu, který je substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze substituovaného nebo nesubstituovaného -(Ci-Cój-alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného-Ci-Ce-alkyl-OR, substituované nebo nesubstituované -C(O)-Ci-C(,-alkyl-N(R)₂, substituované nebo nesubstituované Ci-C6-alkyl-N(R)₂, substituovaného nebo nesubstituovaného -Ci-Ce-alkyl-cykloalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného tetrahydrothienylu a substituovaného nebo nesubstituovaného tetrahydrothiopyranylu; nebo f) skupina obecného vzorce (a)

\

E, (a) kde Ei je piperidinyl, piperazinyl, imidazolyl, morfolinyl, pyrrolidinyl, aminoskupina, amidoskupina nebo tetrahydrothiazolyl, a kde E je případně substituováno jedním nebo více substituenty vybranými z -Co-C6-alkyl-OR, -Ci-C6-alkyl-C(0)0R, -Ci-Cé-alkylheteroarylu,-Ci-Có-alkyl-heterocykloalkylu a-C]-C6-alkyl-N(R)₂.

V druhém provedení je substituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I) skupina reprezentovaná obecným vzorcem (a), ve kterém Ei je vybráno ze skupiny sestávající z amino-Ci-Có-alkyl-morfolinoskupiny, -piperidino-Ci-Có-alkyl-OR, -imidazolyl-CiCéalkyl-CfOjOR, -piperazino-Ci-Cé-alkyl-OR, -amino-Cj-Cé-alkyl-OR, -pyrrolidino-OR, -amino-Cj-C6-alkyl-imidazoloskupiny, -amino-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, -amido-Ci-Cg-alkylN(R)₂, tetrahydrothiazolylu, A,A-di-(hydroxy-Ci-C6-alkyl)amino- a -piperizino-OR.

• 9 ····

Ve třetím provedení je substituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I) skupina reprezentovaná obecným vzorcem (a), ve kterém E] je vybráno ze skupiny sestávající z 4-(2-hydroxyethyl)morfolinoskupiny, 3 -hydroxyniethylpiperidinoskupiny,

2-[3-(methylkarboxy)propyl]imidizol-4-ylu, 4-(2-hydroxyethyl)piperazinoskupiny,

2-hydroxy-ethylaminoskupiny, 3-hydroxypyrrolidinoskupiny, 3-imidazolopropylaminoskupiny, 4-hydroxybutylaminoskupiny, 3-methoxypropylaminoskupiny, 3-(N,Ndimethylaminojpropylaminoskupiny, 7V-[2-(W-dimethyl)ethyl]amidoskupiny, tetrahydrothiazolylu, N,7V-di-(2-hydroxyethyl)aminoskupiny, 4-hydroxypiperizinoskupiny, a 4-hydroxymethylpiperizinoskupiny.

Ve čtvrtém provedení má Z^11O-A-Z^1U význam -NHC(O)- ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo ve kterémkoliv z provedení 1-3.

V pátém provedení je G ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo ve kterémkoliv z provedení 1-4 skupina reprezentovaná následujícím obecným vzorcem

V šestém provedení je G ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo ve kterémkoliv z provedení 1-5 skupina reprezentovaná strukturou s následujícím vzorcem

F

V sedmém provedení je substituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I) azaheteroaryl substituovaný s Cj-Cď alkylem, kde alkyl je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými z RO-, -C(O)OR, -C(O)N(R)₂ a -N(R)₂.

V osmém provedení je substituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I) 4-(2-hydroxyethyl)pyridin-2-yl, 3-aminomethylpyridin-4-yl nebo 2-methylimidazol-4-yl.

V devátém provedení je G ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo v provedeních 7 nebo 8 skupina reprezentovaná následujícím vzorcem ' ·φ φφφ· · φ φφ ···· φ φ φ φφ · · φ · φ φφφ φ ' φ φ φ φ

V desátém provedení je substituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I) pyrrolidinyl, který je substituovaný 2-methoxyethylem, AA-dimethylaminomethylem, TV, V-dimethyl amino-1 -oxoethylem nebo 2-(V-methylamino)-1 -oxopropylem.

V jedenáctém provedení je G ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo v provedení 10 skupina reprezentovaná následujícím vzorcem

Ve dvanáctém provedení je substituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I) piperidinyl, který je substituovaný tetrahydrothiopyranylem, tetrahydrothienylem, 2-(7V-methylamino)-2-methyl-l-oxopropylem, 2-methoxyethylem nebo cyklopropylmethylem.

Ve třináctém provedení je Z¹⁰⁰ ve sloučeninách obecného vzorce (I) pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-<2]pyrimidinyl, 17/-imidazo[l,2-a]imidazolyl, imidazo[2,l-6][l,3]thiazolyl, //-pyridinon,

1,1-dioxybenzoizothiazolyl, benzoizoxazolyl, alkyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl,

pyrrolopyridinyl nebo ^s , kde všechny shora uvedené skupiny Ζ^,θθ mohou být případně substituovány substituentem Ri.

Ve čtrnáctém provedení je Z¹⁰⁰ ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo v provedení 13 2-pyrrolidinyl, l,2-dihydro-2-oxopyridin-3-yl, benzoizoxazol-3-yl,

l,l-dioxybenzoizothiazol-3-yl, imidazo[l,2-a]pyridin-2-yl nebo substituent R₂ je 4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl.

V patnáctém provedení je Z¹¹⁰-A-Zⁱⁿ ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo v provedení 13 nebo 14 -NH-.

·· 9999 9 9 99 9999

9 99 99 99 9 « 9 .9 9 99 · · · 9 9 9 9 9 · 9

9· 99 999 9*9 99 99

V šestnáctém provedení je Z¹⁰⁰ v obecném vzorci (I) nebo v provedení 13 pyrrolopyridinyl vybraný z

V sedmnáctém provedení je Ζ^,,θ-Α-Ζ^ιη v provedení 13 nebo 16 -NHC(O)-.

V osmnáctém provedení je substituent R₂ v obecném vzorci (I) nebo v provedeních 13, 16 nebo 17 piperidin-4-yl, 7V-methylpiperidin-4-yl, V-(prop-2-yl)piperidin-4-yl, 7V-(imidazol-4-yl-methýl)piperidin-4-yl, /V-(2-methylimidazol-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, V-(pyrazol-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, V-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl, 7V-(fur-3 -ylmethyl)piperidin-4-yl, 7V-(tetrahydropyran-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, 7V-(pyrrol-2ylmethyl)piperidin-4-yl nebo 7V-(2-difluorethyl)piperidin-4-yl.

V devatenáctém provedení každý ze substituentů R_a a Ri ve sloučeninách obecného vzorce (I) reprezentuje jeden nebo více substituentů při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z atom vodíku, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylu, substituované nebo nesubstituované heteroarylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované arylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované alkyl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované alkyl-S-, substituované nebo nesubstituované aryl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované heteroaryl -S(O)_P-, a kde alespoň jeden ze substituentů R_a a R] není atom vodíku.

Ve dvacátém provedení je A ve sloučeninách obecného vzorce (I) -(Ci-Có)-.

Ve dvacátém prvním provedení je Ζ^1Ιθ-Α-Ζ^ηι dohromady kovalentní vazba ve sloučeninách reprezentovaných obecným vzorcem (I).

Ve dvacátém druhém provedení je substituent R₃ při každém výskytu ve sloučeninách reprezentovaných obecným vzorcem (I) je, nezávisle, substituovaný nebo ·· ···· ·· ···· • · · ·· ·· <· · · ··· · · · · · ·· ·· · ···· · • ·· · · · · · · · ·· ·· ··· ··· ·· ·· nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)heteroaryl.

Ve dvacátérnjtřetím provedení je substituent R2 skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰², kde Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(C,-C₆)-, -(C,-C₆)- -0-, -(C,-C₆)- -C(0)-, -(C,-C₆)-C(O)O-, -(Cj-C6)-C(0)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N((Ci'C6))- nebo substituovaná nebo nesubstituované fenylová skupina; a kde Z je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, kde uvedený substituovaný cykloalkenyl má jeden nebo více substituentů každý nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogenu, substituované nebo nesubstituované (Ci-Cé), substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -C(O)-alkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(C]-C6)-0R, substituované nebo nesubstituované -N((Ci-Cé)-0R)2, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-C(O)2R, substituované nebo nesubstituované -(C]-C6)-N(R)-(C]-C6)-OR, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(C]-C6)-N(R)2, substituované nebo nesubstituované -(CřC6)-C(O)N(Ř)-(Ci-C6)-N(R)2, substituované nebo nesubstituované sulfonamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované ureidoskupiny, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(C]-C6)-0R, oxoskupiny a nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z N, O, a S; kde atomy dusíku uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(0)N(R)2, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-Cé)N(R)₂, -C(O)alkylem, -C(0)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroary laiky lem.

Ve dvacátém čtvrtém provedení je substituent R2 skupina obecného vzorce -Ζ^,θ1-Ζ¹⁰²; Z'⁰¹ je kovalentní vazba, -(C,-C₆)-, -(C,-C₆)- -0-, -(C,-C₆)- -C(0)-, -(C,-C₆)-C(0)0-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(C,-C₆)-C(O)-N((C,-C₆))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina; Z¹⁰² je substituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická • · skupina; kde uvedená substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více substituentů každý nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z nitroskupiny, halogenu, substituované nebo nesubstituované (Cj-Có), substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -C(O)-alkylu, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-Cg)-OR, substituované nebo nesubstituované -N((Ci-C6)-OR)2, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)C(0)2R, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Cé)-N(R)2, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-Cé)-N(R)2, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)OR, a substituované nebo nesubstituované heterocyklické skupiny obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z O a S; kde atomy dusíku uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)N(R)2, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)-(C]-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem.

Výhodná je sloučenina obecného vzorce (I), ve které substituent R3 je H, substituent Ri při každém výskytu je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, -CIUNRdRe, /-butyl, pyridyl, substituovaný nebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzensulfonyl, substituovaná nebo nesubstituované fenoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná nebo nesubstituované aminoskupina, karboxyl, substituovaný nebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný nebo nesubstituovaný styryl.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H; substituent R_a při každém výskytu je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, Z-butyl, pyridyl, substituovaný nebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzensulfonyl, substituovaná nebo nesubstituované fenoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná nebo nesubstituované • · aminoskupina, karboxyl, substituovaný nebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný nebo nesubstituovaný styryl.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H; substituent R₂ je skupina vzorce kde n je 1, 2 nebo 3.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorce

kde m je 0, 1, 2 nebo 3 a substituent R_g je H nebo -(CH2)_PN(R4)R5, kde p je celé číslo od 2 do 6 a substituenty R4 a R5 jsou každý nezávisle H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CtFjq, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CkhjqO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH2)_qS(O)_r-, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaná nebo nesubstituovaná část, vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl a heterocykloalkylová skupina, nebo R4, R5 a dusíkový atom, ke kterému jsou připojeny, tvoří společně 3-, 4-, 5-, 6- nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu.

Y (CH₂YX^X(CH₂)b I I

Q NR4R5 • · kde m je O, 1, 2 nebo 3, každé z a a b znamená nezávisle celé číslo od 0 do 6,

Q je -ORg nebo -NR4R5;

každý ze substituentů R4 a R5 znamená nezávisle H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl nebo heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R4, R5 a dusíkový atom, ke kterému jsou připojeny, společně vytvářejí 3, 4, 5, 6 nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu; a substituent Ró je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H; substituent R₂ je skupina obecného vzorce

kde n je 1, 2 nebo 3; a substituent R4 je H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H;

substituent R₂ je skupina obecného vzorce

kde m je O, 1, 2 nebo 3;

substituent R5 je H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří kovalentní vazba, -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH-, -(CH₂)_qC(O)-, -C(O)(CH₂)_q- a -(CH₂)_qS(O)_r-, kde alkylová část skupiny -(CH₂)_q-, -(CH₂)_q0-, -(CH₂)_qNH-, -(CH₂)_qC(O)-, -C(O)(CH₂)_q- a -(CH₂)_qS(O)_r je případně substituována halogenem, hydroxyskupinou nebo alkylskupinou; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituované aminoskupina, substituovaná nebo nesubstituované alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituované heterocykloalkylová skupina;

nebo Y a Z jsou společně přirozená nebo nepřirozená aminokyselina, která může být na aminovém dusíku mono- nebo di-alkylována; a substituent Ró představuje jeden nebo více substituentů, z nichž každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří vodík, hydroxyskupina, oxoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocyklyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocyklylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl a substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; s podmínkou, že uhlíkové atomy sousedící s dusíkovým atomem nejsou substituovány hydroxyskupinou.

substituent R₂ je skupina obecného vzorce ·· ····

kde substituent R4 je H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán zé skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituované aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R₃ je H; substituent R₂ je skupina obecného vzorce

kde m je celé číslo od 1 do 6; a substituenty R4 a R5 jsou každý nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituované aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R4, R5 a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, společně vytvářejí 3, 4, 5, 6 nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo substituovanou nebo nesubstituovanou heterobicyklickou skupinu.

kde n je celé číslo od 0 do 4;

r je 0 a m je celé číslo od 1 do 6; nebo r je 1 a m je celé číslo odO do 6;

Q je-NR4R5 nebo-ORó;

každý ze substituentů R4 a R5 je nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstitUovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, (CH₂)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina;

nebo substituenty R4, R5 a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, společně vytvářejí 3, 4, 5 nebo 6-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; a substituent Ró je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.

kde n je celé číslo od O do 4;

m je celé číslo od 0 do 6;

substituent R4 je substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)q, -S(O)2-,

-C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; a substituent Ré je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin vytvářejí substituenty R4, R₅ a atom dusíku společně heterocyklickou skupinu obecného vzorce

kde substituenty R₇, Rg, R9, R10, Ru, R12, R13 a R]₄ jsou každý nezávisle nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R7 a Rg; R9 a R10; R11 a R12; nebo R13 a R]₄jsou dohromady atom kyslíku; nebo alespoň jeden ze substituentů R₇ a Rg je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2OR15 nebo CH₂NRi₅(Ri6), kde substituenty R15 a R₎₆ jsou každý nezávisle vodík, azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající z -C(O)-, -(CH₂)_p-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a 30 (CH₂)qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty Ris, Ri6 a atom dusíku společně vytvářejí 3, 4, 5, 6 nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo substituovanou nebo nesubstituovanou heterobicyklickou skupinu;

X je O, S, SO, SO₂, CH₂, CHORnnebo NRp, kde substituent Ri7 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH₂, -C(O)Ri7 nebo -C(O)ORis, kde substituent Ri8 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 nebo 1.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin vytvářejí substituenty R4, R5 a atom dusíku společně heterocykl obecného vzorce

kde substituenty R19 a R₂o jsou každý nezávisle vodík nebo nižší alkyl; nebo substituenty Ri9 a R20 jsou dohromady atom kyslíku;

substituenty R₂i a R₂₂ jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající z -C(O)-, -(CH₂)_P-, S(O)₂-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CGNH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo

substituenty R₂i, R22 a atom dusíku společně vytvářejí 3, 4, 5 nebo 6-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; m je celé Číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin vytvářejí substituenty R4, R5 a atom dusíku společně heterocyklickou skupinu obecného vzorce

I

N |-M_m

R23 kde m je celé číslo od 1 do 6; a substituent R23 je CH2OH, NRR', C(O)NRR' nebo COOR, kde substituenty R a R' jsou každý nezávisle vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.

kde substituent R24 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR25, CH2OR25, CH2NR26R27 nebo C(O)NHR26, kde substituent R25 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloaryl; a substituenty R26 a R27 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající z -C(O)-, -(Cl-hjp-, -S(O)2-,

-C(0)0-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R₂6, R27 a atom dusíku společně vytvářejí 3, 4, 5 nebo 6-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec /~\

kde

T je C(O), S, SO, SO₂, CHOŘ nebo NR, kde substituent R je vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a n je 0, 1 nebo 2.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec -N(R₂₈)R₂₉, kde každý ze substituentů R₂₈ a R₂9 je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsuifonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný kyanoalkyl; nebo substituenty R₂₈a R₂9 společně s atomem dusíku vytvářejí 5 nebo 6-Člennou substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin vytvářejí společně substituenty R4, R₅ a atom dusíku heterocykl obecného vzorce

• · / Ri. \R« Rl2

Rn X

R?

'Re

-Rs

R10 kde substituenty R7, Rg, R9, R10, Ri 1, R12, R13 a R14 jsou každý nezávisle nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R7 a Rg; R9 a Rjo; R11 a Ri₂; nebo Rt3 a Rh jsou dohromady atom kyslíku; nebo alespoň jeden ze substituentů R7 a R9 je kyanoskupina,

CONHR15, COOR15, CH2OR15 nebo CH₂NR₁₅(R₁₆), kde substituenty Rj₅ a R^ jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-,

-SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R15, Ri6 a atom dusíku společně vytvářejí 3, 4, 5, 6 nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu;

X je O, S, SO, SO2, CH₂, CHORj7 nebo NR17, kde substituent Rn je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH₂, -C(O)Rig nebo -C(O)ORi8, kde substituent Rig je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 nebo 1.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin vytvářejí substituenty R4, R5 a atom dusíku společně heterocykl obecného vzorce ·· ··<

kde substituenty R19 a R₂o jsou každý nezávisle vodík nebo nižší alkyl; nebo substituenty R19 a R₂o jsou dohromady atom kyslíku;

substituenty R₂i a R₂₂ jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající z -C(O)-, -(CH₂)_p-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R₂i, R₂₂ a atom dusíku společně vytvářejí 3, 4, 5 nebo 6-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé Číslo od 0 do 6.

m

R23 kde m je celé číslo od 1 do 6; a substituent R₂₃ je CH₂OH, NRR', C(O)NRR' nebo COOR, kde substituent R je vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

·· ···· ³⁵

kde substituent R₂₄ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR₂5, CH₂OR₂s, CH2NR26R27 nebo C(O)NHR₂6, kde substituent R25 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloarylová skupina; a substituenty R₂6 a R27 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající z -C(O)-, -(CH2)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, (CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R₂6, R27 a atom dusíku společně vytvářejí 3, 4, 5 nebo 6-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a R₅obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec λΛ

-Ν T vxq

R32 kde gjeO nebol;

·· ····

T je C(0), O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 nebo NR17, kde substituent Rp je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)R|₈ nebo -C(O)OR|₈, kde substituent Ri₈ je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec -N(R2₈)R29, kde substituenty R2₈ a R29 jsou každý nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný kyanoalkyl; nebo substituenty R2₈ a R29 společně s atomem dusíku tvoří 5-ti nebo 6-ti člennou substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec N(R3o)R3i, kde substituenty R30 a R3J jsou každý nezávisle vodík, alkyl, alkoxykarbonyl, alkoxyalkyl, hydroxyalkyl, aminokarbonyl, kyanoskupina, alkylkarbonyl nebo arylalkyl.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má substituent Rs obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec kde

X-N

R32

Π každé X je nezávisle CH nebo N; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituováná arylalkylová skupina.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec γγ

R32 kde g je 0 nebo l;

T je O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 nebo NR₎₇, kde substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, C(0)NH2, - C(NH)NH2, - C(O)Ri₇ nebo -C(O)ORig, kde substituent Rig je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec

R32 • ·

ve kterém g je O, 1 nebo 2; a substituent R₃₂ je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

.kde

T je C(O), O, S, SO, SO₂, CH₂, CHORi7 nebo NR17, kde substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl, arylalkyl, -C(NH)NH₂, -C(O)Ri8 nebo -C(O)ORi8, kde substituent Ris je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl;

g je 0 nebo 1; a substituent R₃₂ je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

R33

kde substituent R32 je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, alkylkarbonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná thioalkoxyskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R33 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, perhalogenalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.

Výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je ta, ve které substituent R3 je atom vodíku; substituent R₂ má obecný vzorec

kde m je 0 nebol;

substituenty R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40 a R41 jsou každý nezávisle methyl nebo atom vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R34 a R35; R36 a R37; R38 a R39; nebo R40 a R41 společně jsou atom kyslíku;

substituent R42 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny sestávající z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituent R4₂ má obecný vzorec • · • · · • · · ·

kde uje 0 nebo 1;

substituenty R43, R44, R45, R46, R47, R48, R49 a R50 jsou každý nezávisle metbyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R43 a R44; R45 a R46; R47 a R48 ; nebo R49 a R50 společně jsou atom kyslíku; a substituent R_5] je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂ŇH-, CONH-, (CH₂)qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je ta, ve které substituent R3 je vodík; •substituent R₂ má obecný vzorec

substituenty Rs₂, R53, R54, R55, R56, R57, R58, R59, R_g a Rh jsou každý nezávisle methyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R52 a R53; R54 a R55 ; R56 a R57; nebo R58 a R59 společně jsou atom kyslíku; a substituent Rgo je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny sestávající z -C(O)-, -(CH₂)_p-, -S(O)₂-, -C(O)O-, 41

SO₂NH-, -C0NH-, (CH₂)qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)qS(O)_r; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo

kde vjeO nebol;

substituenty í%i, Ró₂, R03, Ró4, Rós, Róó, Ró7 a jsou každý nezávisle nižší alkýl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů I%i a Re₂; Rď3 a Ré₄; ί%₅ a Róó; a R^ a Rčs společně jsou atom kyslíku;

substituent Ró9 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající ž -C(O)-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)qNH-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂- a -(CH₂)qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Další výhodnou sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které je substituent R3 vodík; substituent R₂ -Z^10]-Z¹⁰², kde Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-Có)-, -(Ci-Céj-O-, -(CjC₆)-G(O)-, -(C,-C₆)-C(O)O-, -(C,-C₆-C(O)-NH-, -(Cj-Có-CCOj-NaCrCé))- nebo substituovaný fenyl; a

Z je vodík, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je Z¹⁰¹ vybráno ze skupiny sestávající z • · ^řiý

CH₂-C(O)O-, -CH₂-C(O)-, -CH₂-C(O)-NH-, -CH₂-C(O)-N(Me), -CH(Me)-C(O)O-, -(CH₂)₃-C(O)O-, -CH(Me)-C(O)-NH- a -(CH₂)₃-C(O)-NH-; a

Z je vybráno ze skupiny sestávající z vodíku, methylu, ethylu, 7V,jV-dimethylaminoethylu, A/jV-diethylaminoethylu, 2-fenyl-2-hydroxyethylu, morfolinoskupiny, piperazinylu, A-methylpiperazinylu a 2-hydroxymethylpyrrolidinylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec

benzoxazolyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný benzothiazolyl.

ve kterém se vyskytuje pouze jeden substituent R_a a je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku nebo F.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je Z¹⁰¹ kovalentní vazba; a Z¹⁰² je případně substituovaný pyridyl.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které je substituent R₃vodík; substituent R₂ je cyklopentyl; a G má obecný vzorec

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je Z¹¹⁰ vodík;

A je O; a Z¹⁰⁰ je případně substituovaný fenyl, furanýl nebo thienyl, přičemž Z¹⁰⁰ je případně substituované jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z F, COOH, NO₂, OMe, -COOMe, OCF₃ a CF₃.

A je -0-, -O-(CR₂)_n-C(O)- nebo -O-(CR₂)_n-O-; n v každém případě je O až 3;

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající z cyklohexylu, fenylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, izoxazolylu a piperidinylu; přičemž Z¹⁰⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, alkoxyskupiny, halogenu, hydroxyskupiny a alkoxykarbonylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je substituent R případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající z čyklobutylu a cyklohexylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je substituent R případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z hydroxyskupiny, alkylu, hydroxyalkylu, karboxyalkylu a fenylalkoxyalkylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je G 4-fenoxyfenyl.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je m 2; a je 0; substituent 1% je H; b je 1 nebo 2; a substituenty R4 a R$ jsou každý H.

• ·

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je m 0, 1 nebo 2; substitutent 1% je vodík; substituent R5 je vodík nebo Y-Z;

kde Y je kovalentní vazba, -C(O)-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_q, -(CH2)_qC(O)- nebo

-C(O)(CH₂)q-, kde alkylová část skupin -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_P-, -(CH₂)_qC(O)- a

-C(O)(CH₂)_q- je případně substituovaná halogenem, hydroxyskupinou nebo alkylovou skupinou; a

Z je vodík, alkyl, případně substituovaný alkyl, alkoxyalkyl, případně substituovaný heterocykloalkyl, případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaná aminoskupina.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je Z atom vodíku, methyl, ethyl, hydroxymethyl, methoxyethyl, A-methyl-piperidinyl, (ř-butoxykarbonyl)(hydroxyjpiperidinyl, hydroxypiperidinyl, (hydroxymethyl)piperidinyl, (hydroxy)(methyl)piperidinyl, mořfolinoskupina, (methoxyethyl)piperizinyl, methylpiperizinyl, 4-piperidinylpiperidinyl, imidazolyl, methylimidazolyl, Y-methylaminoskupina, Λζτν-dimethylaminoskupina, TV-izopropyl-aminoskupina, ΛζΑ-diethylaminoskupina, 2,3-dihydroxypropylaminoskupina, 2-hydroxyethylaminoskupina, 3-hydroxypropylaminoskupina, methoxyethyl-aminoskupina, ethoxykarbonylmethylaminoskupina,

TTNJ fenylmethylaminoskupina, TV-methyl-jV-methoxyaminoskupina, furanylmethylaminoskupina, piperidinylethylaminoskupina, N-(2-N,Ndimethylaminoethyl)-7V-methyl-aminoskupina, 2-7V,A-dimethyl-aminoethylaminoskupina, 7V-methyl-A^ř-(?V-methyl-piperidin-4-yl)aminoskupina, 2-morfolino-ethylaminoskupina, 3-morfolino-propylaminoskupina, 3-imidazolyl-propylaminoskupiny nebo 3-(2-oxopyrrolidinýljpropylaminoskupiny.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je m rovno 2; substituent R₅ je Y-Z; Y je (Pn

Y

C(O)-; a Z má obecný vzorec R , ve kterém n je 0, 1,2 nebo 3.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je substituent R4 vodík nebo methyl;

A je vybráno ze skupiny sestávající z O, -N(R)- a -N(R)C(O)-;

Z¹¹¹ je -(CH2)n-cykloalkyl-(CH2)_n-; substituent R je vodík nebo alkyl; n je 0 až 5;

substituent R_a je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z H, OH, F, Cl, methylu a methoxyskupiny; substituent R| je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z H, CN, F, CF₃, OCF₃, methylu, methoxyskupiny a případně substituované aminoskupiny; a kde uvedená aminoskupina je případně substituovaná jednou nebo více skupinami, přičemž každá je nezávisle vybrána ze skupiny sestávající z alkylu, alkoxyalkylu, fenylu, substituovaného fenylu a případně substituovaného heteroarylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je substituent Ri 4-methylfenylthioskupina nebo 2-pyridinylthioskupina.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má

-A—AČ,)-Z^,o°

G obecný vzorec kde Z¹⁰⁰ je vybráno ze skupiny sestávající z benzo[ů]thiofenu, furanylu a thiofenu. Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je substituent R_a alkoxyskupina;

A je NH-C(O)-; a mezi A a Z¹⁰⁰ je kovalentní vazba.

G obecný vzorec

-(C₀-C₆>-z

100 ·· ···· • · · • · ·

A je vybráno ze skupiny sestávající z -N(R)-C(O)-N(R)-, -(CH2)_n-N(R)C(0)N(R)-, -N(R)- a -N(R)-SO2-; substituent R je vodík nebo alkyl;

Z¹⁰⁰ je //

-R,

pyridinyl, thiazolyl, furanyl, benzofuranyl nebo oxazolyl;

X je S, O nebo NR¹, kde substituent R¹ v každém případě je nezávisle vodík nebo Me;

substituent R_a je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z H a F; a substituent Rj je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z H, F, Cl, Br, NO₂, CF₃, alkylu, alkoxyskupiny a alkoxykarbonylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; m je 1, 2 nebo 3;

substituent R5 je Y-Z, kde Y je -C(O)O-, -C(O)- nebo -C(O)-(CH2)_P-; a Z je aminoalkyl, jV-alkylaminoskupina, N, Y-dialkylaminoskupina nebo hydroxyalkylaminoalkyl.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; G má obecný

(CH₂v-z

100 vzorec ' , kde n je 0 až 3; Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající z indolylu, indenylu, methylindenylu, methylindolylu, dimethylaminofenylu, fenylu, cyklohexylu a benzofuranylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec R„

X z^A-Z^Z¹⁰⁰

• ·

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající z fenylu, imidazolylu, indolylu, íuranylu, benzoíuranylu a 2,3-dihydrobenzofuranylu;

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z F, Cl, CN, případně substituovaného alkylu, -O- (případně substituovaného alkylu), -COOH, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰ a-Z^!05-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰;

Z¹⁰⁵ je kovalentní vazba nebo (Ci-Có);

Z²⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se ze skupiny (Cf-Có), fenylu a-(Ci-Cój-fenylu;

Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý nezávisle kovalentní vazba nebo skupina (C1-C3) případně substituovaná alkylem, hydroxyskupinou, COOH, CN nebo fenylem; a A je O, -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)- nebo -N(R)-C(O)-, kde substituent R je H nebo alkyl.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl.

XÁ-z'“ / , kde Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající z benzoxazolylu, benzothiazolylu a benzimidazolylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; A je -NH- ; v tomto případě je zde pouze jeden substituent R_a vybraný z H nebo F; a Z¹⁰⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z alkylu, halogenu, CF3 a alkoxyskupiny.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec ^/^Z—°A—Z—Z¹⁰⁰

·· ····

Ζ^ιθθ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající z fenylu, pyrrolylu, pyridylu, benzimidazolylu, naftylu a

S kde Z¹⁰⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z F, Cl, Br, NO2, aminoskupiny, zV-aJkylaminoskupiny, ΛζΑ-dialky lamino skupiny, CN, případně substituovaného alkylu, -O- (případně substituovaného alkylu) a fenylu;

Z^)W a Z¹¹¹ v každém případě je nezávisle (C0-C3) případně substituovaná případně substituovaným fenylem; a

A je -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-S(O)₂-, -N(R)-C(O)-, -N(R)- nebo -N(R)-C(O)-O-.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl a v tomto případě je zde pouZe jeden substituent R_a vybraný z atomu floru.

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající z fenylu, izoxazolylu, tetrahydronaíthylu, furanylu, benzofuranylu, pyridylu a indolylu; kde Z¹⁰⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z F, CN, NO₂, C(O)H, -CONH2, -NHSO2CF3, případně substituovaného alkylu, případně substituovaného heteroarylu a -O- (případně substituované alkylové skupiny);

Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý nezávisle případně substituovaná skupina (C0-C3); a

A je O, -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-N(R)-, -C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)-C(O) nebo

-N(R)-.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; substituent R_a je

H nebo methoxyskupina; a Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý nesubstituovaný.

O

kde substituent R je H nebo nižší alkyl a n v každém případě je nezávisle 1 až 6. Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je Z¹⁰⁰ substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl.

Τλ-.

/ , kde Ζ^1θθ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající z benzoxazolylu, benzothiazolylu a benzimidazolylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, použitelných, výhodných sloučenin je n 2; substituent R$ je H; m je 1; r je 1; a substituenty R4 a R5 jsou každý vodík.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob inhibice aktivity jedné nebo více proteinkináz u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky aktivní soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi. Výhodný způsob je takový, ve kterém je proteinkináza vybrána ze skupiny sestávající z KDR, FGFR-1, PDGFRp, PDGFRa, IGF-1R, c-Met, Flt-1, Flt-4, TIE-2, TIE-1, Lek, Src, fyn, Lyn, Bik, hek, fgr a yes. Další výhodný způsob je takový, ve kterém je proteinkináza proteinová serin/threoninkináza nebo proteinová tyrosinkináza. Výhodnější způsob je takový, ve kterém je proteinkináza TIE-2 a další výhodnější způsob je takový, ve kterém aktivita proteinkinázy se účastní aktivace T-buněk, B-buněk, degranulaci žímých buněk, aktivace monocytů, potenciaci zánětlivé odpovědi nebo jejich kombinace.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob ovlivnění hyperproliferačních poruch u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob ovlivnění angiogeneze u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi. Výhodný způsob je takový, ve kterém sloučenina nebo její fyziologicky přijatelná sůl, proléčivo nebo biologicky aktivní metabolit je podán v množství, které je schopné podporovat angiogenezi nebo vaskulogenezi. Výhodnější způsob je takový, ve kterém pacient trpí anémií, ischémií, infarktem, rejekcí transplantátu, zraněním, gangrénou nebo nekrózou.

·· ····

·· ···· • · · • · · • · · · • · · · ·· ·»

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob léčení jednoho nebo více ulkusů u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi. Výhodný způsob je takový, ve kterém jsou ulkus nebo ulkusy způsobeny bakteriální nebo fungální infekcí; nebo ulkus nebo ulkusy jsou Moorenovy ulkusy; nebo ulkus nebo ulkusy jsou symptomy ulcerativní kolitidy.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob léčení onemocnění pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi, kde dané onemocnění je oční onemocnění, kardiovaskulární onemocnění, rakovina, syndrom Crow-Fukase (POEMS), diabetické onemocnění, srpkovitá anémie, chronický zánět, systémový lupus, glomerulonefritida, synovitida, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnova nemoc, glomerulonefřitida, revmatoidní artritida, osteoartritida, roztroušená skleróza, rejekce štěpu, Lymeská nemoc, sepse, von Hippelův-Lindauův syndrom, pemfigoid, psoriáza, Pagetova nemoc, polycystické onemocnění ledvin, fibróza, sarkoidóza, cirhóza, tyreoiditida, hyperviskózní syndrom, Osler-Weber-Renduova nemoc, chronické okluzivní onemocnění plic, astma nebo edém po popáleninách, traumatu, radiace, mrtvice, hypoxie nebo ischémie, ovariální hyperstimulační syndrom, preeklampsie, menometroragie, endometrióza nebo infekce viiy Herpes simplex a Herpes zoster, virusem lidské imunodeficience, Parapoxvirusem, protozoem nebo toxoplazmózou.

Výhodný způsob je takový, ve kterém je oční onemocnění:

Okulámí nebo makulámí edém, okulámí neovaskulámí onemocnění, skleritida, radiální keratotomie, uveitida, vitritida, myopie, fyziologická exkavace papily, chronické odchlípení sítnice, komplikace po léčení laserem, konjunktivitida, Stargardtova nemoc a Ealesova nemoc, retinopatie nebo makulámí degenerace; kardiovaskulární onemocnění:

ateroskleróza, restenóza, ichémie/reperfuzní poškození, vaskulární okluze nebo karotické obstruktivní onemocnění;

rakovina:

···· pevný nádor, sarkom, fíbrosarkom, osteom, melanom, retinoblastom, rabdomyosarkom, glioblastom, neuroblastom, teratokarcinom, hematopoézní zhoubné bujení, Kaposiho sarkom, Hodgkinsova nemoc, lymfom, myelom, leukémie nebo maligní ascites; a diabetické onemocnění:

na inzulínu závisející diebetes mellitus se zeleným zákalem očí, diabetická retinopatie nebo mikroangiopatie.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob snížení fertility u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivního metabolitu pacientovi.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob, vyznačující se tím, že sloučenina obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelná sůl, proléčivo nebo biologicky aktivní metabolit je podávána v kombinaci s proangiogenním růstovým faktorem. Výhodný způsob je takový, ve kterém proangiogenní růstový faktor je vybrán ze skupiny sestávající z VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF2, jejich deriváty a antijodtypické protilátky.

Detailní popis vynálezu

V rámci jednoho provedení poskytuje předložený vynález sloučeniny obecného vzorce (I) uvedené výše. Specifikace substituentů ve výhodných skupinách sloučenin obecného vzorce (I) jsou uvedeny níže.

Výhodně je substituent Ri vybrán ze skupiny sestávající z F, Cl, Br, I, CH₃, NO₂, OCF₃, OCH₃, CN, CO₂CH₃, CF₃, t-butylu, pyridylu, substituovaného nebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzensulfonylu, substituované nebo nesubstituované fenoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu, substituovaného a usubstituovaného styrylu, substituované a nesubstituované arylthioskupiny, substituované nebo nesubstituované thioalkoxyskupiny, substituované a nesubstituované heteroarylthioskupiny; CH₂ORc, kde substituent Rc je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku nebo substituovaného nebo nesubstituovaného alkylu nebo arylu; a -W-(CH₂)_t-NR<jRe, kde t je celé číslo od 1 do 6; W

je přímá vazba, O, S, S(O), S(O)2 nebo NRf, kde substituent Rf je vodík nebo alkyl a substituenty Rj a Rj jsou nezávisle vodík, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Rj, R^ a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh.

Výhodně je substituent R_a vybrán ze skupiny sestávající z F, Cl, Br, I, CH3, NO₂, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, Z-butylu, pyridylu, substituovaného nebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzensulfonylu, substituované nebo nesubstituované fenoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované thioalkoxyskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu, substituovaného a usubstituovaného styrylu, substituované a nesubstituované arylthioskupiny, substituované a nesubstituované heteroarylthioskupiny; CH2OR0 kde substituent Rc je vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl nebo aryl; a -W(CH₂)_t-NRdRe, kde t je celé číslo od 1 do 6; W je přímá vazba, O, S, S(O), S(Ó)2 nebo NRf, kde substituent Rf je vodík nebo alkyl a substituenty R<j a Re jsou nezávisle vodík, alkyl, alkanoyl nebo SC>2-alkyl; nebo substituenty R<i, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat jako soli s farmaceuticky přijatelnými kyselinami. Předložený vynález zahrnuje také tyto soli. Příklady těchto solí zahrnují hydrochloridy, hydrobromidy, sulfáty, methansulfonáty, nitráty, maleáty, acetáty, citráty, íumaráty, tartráty [např. (+)-tartráty, (-)-tartráty nebo jejich směsi, včetně racemických směsí], sukcináty, benzoáty a soli s aminokyselinami, např. glutamová kyselina. Tyto soli mohou být připraveny standardními způsoby dle stavu techniky.

Některé sloučeniny obecného vzorce (I), které mají kyselé substituenty, mohou existovat jako soli s farmaceuticky přijatelnými bázemi. Předložený vynález zahrnuje tyto soli. Příklady takových solí zahrnují sodné, draselné, lysinové a argininové soli. Tyto soli mohou být připraveny standardními způsoby dle stavu techniky.

Některé sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich soli mohou existovat ve více než jedné krystalické formě a předložený vynález zahrnuje každou tuto krystalickou formu a jejich směsi.

Některé sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich soli mohou také existovat ve formě solvátů, např. hydrátů, a předložený vynález zahrnuje každý tento solvát a jejich směsi.

Některé sloučeniny obecného vzorce (I) mohou obsahovat jedno nebo více chirálních center, a tudíž existují v různých opticky aktivních formách. Pokud sloučeniny obecného vzorce (I) obsahují jedno chirální centrum, pak sloučeniny existují ve dvou enantiomemích formách a předložený vynález zahrnuje oba enantiomery a směsi enantiomerů, např. racemické směsi. Enantiomery mohou být rozděleny standardními způsoby, např. tvorbou diastereoizomemích solí, které mohou být separovány, např. krystalizací; tvorbou diastereoizomemích derivátů nebo komplexů, které mohou být separovány, např. krystalizací, GLC nebo LC; selektivní reakcí jednoho enantiomerů s enantiomemě selektivním činidlem, např. enzymatická esterifikace; nebo GLC nebo EC vchirálním prostředí, např. na chirálním pomocném médiu, např. silikagel svázaným chirálním ligandem nebo za přítomnosti chirálního rozpouštědla. Tam, kde požadovaný enantiomer je konvertován na jinou chemickou entitu jedním z výše uvedených způsobů, je potřeba další krok k uvolnění požadované enantiomemí formy.

Nebo specifické enantiomery mohou být syntetizovány asymetrickou syntézou pomocí opticky aktivních činidel, substrátů, katalyzátorů nebo rozpouštědel nebo konvertováním jednoho enantiomerů na druhý asymetrickou transformací.

Pokud sloučenina obecného vzorce (I) obsahuje více než jedno chirální centrum, může existovat v diastereoizomemích formách. Diastereoizomerní páry mohou být separovány standardními způsoby dle stavu techniky, např. chromatografií nebo krystalizací a jednotlivé enantiomery v každém páru mohou být separovány výše uvedenými způsoby. Předložený vynález zahrnuje každý diastereoizomer sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsi.

Některé sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v různých tautomemích formách nebo jako různé geometrické izomery a předložený vynález zahrnuje každý tento tautomer a/nebo geometrický izomer sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsi.

Některé sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v různých stabilních konformačních formách, které mohou být separovatelné. Torzní asymetrie díky omezené rotaci okolo asymetrické jednoduché vazby, např. díky sférickému bránění nebo napětí kruhu, mohou usnadnit separaci různých konformerů. Předložený vynález zahrnuje každý tento konformační izomer sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsí.

Některé sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat ve formě zwitterionu a předložený vynález zahrnuje každou formu zwitterionu sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsí.

φ · • · φ ·

Heteroaromatické skupiny používané v předloženém vynálezu zahrnují heteroarylové kruhové systémy (např. pro názornost, nikoliv však limitující: thienyl, pyridyl, pyrazol, izoxazolyl, thiadiazolyl, oxadiazolyl, indazolyl, furany, pyrroly, imidazoly, pyrazoly, triazoly, pyrimidiny, pyraziny, thiazoly, izothiazoly, oxazolyl nebo tetrazoly) a heteroarylové kruhové systémy, ve kterých karbocyklický aromatický kruh, karbocyklický nearomatický kruh nebo heteroarylový kruh je kondenzován k jednomu nebo více dalších heteroarylových kruhů (např. pro názornost, nikoliv však limitující: benzo[ó]thienyl, benzimidazolyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, benzothiadiazolyl, benzoxadiazolyl, indol, tetrahydroindol, azaindol, indazol, chinolin, imidazopyridin, chinazolin, purin, pyrrolo[2,3-<f|pyrimidin, pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin) a jejich V-oxidy. Substituované heteroarylové skupiny jsou výhodně substituovány jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxyskupiny, alkylu, alkoxyskupiny, alkyl-O-C(O)-, alkoxyalkylu, heterocykloalkylu, případně substituovaného fenylu, nitroskupiny, aminoskupiny, monosubstituované aminoskupiny nebo disubstituované aminoskupiny.

Termín heterocyklická (heterocyklyl)skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na heteroarylovou i heterocykloalkylovou skupinu.

Termín heterobicyklická skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na bicyklickou skupinu mající jeden nebo více heteroatomů, které jsou nasyceny, částečně nasyceny nebo nenasyceny.

Termín arylalkylová skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na aromatický substituent, který je připojen ke sloučenině alifatickou skupinou mající jeden až asi šest atomů uhlíku. Výhodná arylalkylová skupina je benzylová skupina.

Termín heteroaralkylová skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, je heteroaromatický substituent, který je připojen na sloučeninu alifatickou skupinou mající jeden až šest atomů uhlíku.

Termín heterocykloalkylová skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na nearomatický kruhový systém, jenž má 3 až 8 atomů a zahrnuje alespoň jeden heteroatom, např. atom dusíku, kyslíku nebo síry.

Zde použité alifatické skupiny nebo označení, např. „Co-Cď“, zahrnují lineární, rozvětvené nebo cyklické uhlovodíky, které je zcela nasyceny nebo obsahují jedmu nebo více jednotek nenasycenosti. Pokud je skupinou Co, znamená to, že zde není žádná část nebo jinými slovy znamená vazbu.

Zde použitý termín aromatické skupiny (nebo arylové skupiny) zahrnují aromatický karbocyklické kruhové systémy (např. fenyl) a kondenzované polycyklické aromatické kruhy (např. naftyl a 1,2,3,4-tetrahydronaftyl).

Zde použitý termín „přirozená aminokyselina“ se vztahuje na 23 známých přirozených aminokyselin, které jsou (označeny svými zkratkami): Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Cys-Cys, Glu, Gin, Gly, His, Hyl, Hyp, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val. Termín nepřirozené aminokyseliny se vztahuje na sloučeniny obecného vzorce NH₂-(C(X)₂)_n-COOH, které jsou a-(pokud n je 1) nebo β-(pokud n je 2) aminokyseliny, přičemž X v každém případě je nezávisle jakákoliv část postranního řetězce; příklady nepřirozených aminokyselin zahrnují, ale není to nikterak limitováno; hydroxyprolin, homoprolin, 4-amino-fenylalanin, p-(2-naftyl)alanin, norleucin, cyklohexylalanin, β-(3pyridinyl)alanin, β-(4-ργτ^^1)ηΐ3ηΐη, α-aminoizobutyrovou kyselinu, urokanovou kyselinu, V/V-tetramethylamidino-histidin, A-methyl-alanin, N-methyl-glycin, TV-methylglutamovou kyselinu, Zerc-butylglycin, α-aminobutyrovou kyselinu, Zerc-butylalanin, omithin, α-aminoizobutyrovou kyselinu, β-alanin, γ-aminobutyrovou kyselinu, 5-amino valero vou kyselinu, 12-aminododekanovou kyselinu, 2-aminoindan-2karboxylovou kyselinu, atd. a jejich deriváty, zejména ty, ve kterých je dusík aminové skupiny mono- nebo di-alkylovaný.

Bylo uvedeno, že mnoho částí nebo substituentů je buď „substituovaných nebo nesubstituovaných“ nebo „případně substituovaných“. Pokud je část modifikována jedním z těchto termínů, znamená to, že jakákoliv část mající schopnost být substituována může být substituována, což zahrnuje jeden nebo více substituentů, přičemž pokud je substituována více než jedním substítuentem, je tento substituent nezávisle vybrán. Způsoby substutituce jsou dobře známy a/nebo mohou být využity podle předloženého popisu. Pro názornost, nikoliv však limitující, zahrnují některé příklady skupin, které jsou substituenty, následující: alkylové skupiny (která může být sama substituována, např. -Ci-Có-alkyl-OR, -Ci-Có-alkyl-N(R)₂ a CF3), alkoxyskupinu (které mohou být sami substituovány, např. -O-Cj-Có-alkyl-OR, -O-Ci-C6-alkyl-N(R)₂ a OCF3), halogen nebo halogenové skupiny (F, Cl, Br, I), hydroxyskupinu, nitroskupinu, oxoskupinu, CN, COOH, COH, aminoskupinu, TV-alkylaminoskupinu nebo Α,Α-dialkylaminoskupinu (ve které mohou být alkylové skupiny substituovány), estery (-C(O)-OR, kde substituent R zahrnuje např. skupiny vybrané z alkylové skupiny, arylové skupiny, atd., které mohou být

substituovány), aryl (nejvýhodněji fenyl, který může být substituován) a arylalkylovou skupinu (která může být substituována).

Vhodné způsoby syntézy sloučenin obecného vzorce (I) jsou uvedeny ve schématech I-XII. Ve schématu I je uvedena konverze 3-halogen-4chlorpyrazolopyrimidinu na VI-substituovaný 3-ary 1-4-aminopyrazolopyrimidin. Ve schématu II je uvedena substituce v poloze V-l 3-halogenu-4-aminopyrazolopyrimidinu a nahrazení halogenu arylovou skupinou. Ve schématu III je uvedena substituce na V-l

3- aryl-4-aminopyrazolopyrimidinu. Ve schématu IV je uvedena konverze

4- hydroxypyrazolopyrimidinu na 1-substituovaný 3-brom-4-chlorpyrazolopyrimidin. Ve schématu V je uvedena tvorba pyrazolopyrimidinového jádra. Ve schématu VI je uvedena tvorba 3-aryl-4-aminopyrazolopyrimidinu. Ve schématu VII je uvedeno další zpracování V-l substituentu. P znamená vhodnou amino-chránicí skupinu. Ve schématu VIII je uvedena příprava arylboronátů používaných podle schématu I. Ve schématech IX a X je uvedena modifikace V-l substituentu. Ve schématu XI je uvedena funkcionalizace 3-arylové skupiny. Ve schématech I-XI může být při provádění reakcí třeba vhodného chránění/odstranění chrámcích skupin z neparticipujících funkčních skupin podle standardních postupů.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mají antiangiogenní vlastnosti. Tyto antiangiogenní vlastnosti jsou způsobeny alespoň částečně inhibici proteinových tyrosinkináz esenciálních pro angiogénní procesy. Z tohoto důvodu mohou být tyto sloučeniny používány jako aktivní agens proti onemocněním, např. artritidě, ateroskléroze, restenóze, psoriáze, hemangiomům, angiogenezi myokardu, koronárním a cerebrálním koraterálům, ischémické limbické angiogenezi, ischémii/reperfuznímu poškození, hojení ran, peptickému vředu souvisejícímu s Helicobacter, virově indukovaným angiogenním poruchám, fraktuře, syndromu Crow-Fukase (POEMS), preeklampsii, menometroragii, horečce kočičího škrábání, rubeóze, neovaskulámímu glaukomu a retinopatiím, např. těm, které souvisejí s diabetickou retinopatii, retinopatii nedonošených nebo makulámí degeneraci související s věkem. Dále mohou být některé z těchto sloučenin používány jako aktiviní agens proti pevným nádorům, malignímu ascites, von Hippel-Lindauově nemoci, hematopoetickým rakovinám a hypeproliferačním poruchám, např. tyreotropní hyperplazii (zejména Gravesova nemoc) a cystám (např. hypervaskularita ovariální trámčina příznačná pro polycystický ovariální syndrom (Steinův-Leventhalův syndrom).

Dále mohou být některé z těchto sloučenin používány jako aktivní agens proti popáleninám, chronickému plicnímu onemocnění, mrtvici, polypům, anafylaxi, chronickému a alergickému zánětu, zpožděnému typu hypersenzitivity, ovariálnímu hyperstimulačnímu syndromu, cerebrálnímu edému souvisejícímu s mozkovým nádorem, výškové nemoci, traumatu nebo cerebrálnímu nebo pulmonámímu edému vyvolaného hypoxií nebo traumatem, očnímu nebo makulámímu edému, ascites, glomerulonefntidě a dalším onemocněním, ve kterých je projevem onemocnění vaskulámí hyperpermeabilita, efuze, exsudáty, proteinový extravazát nebo edém. Sloučeniny budou také účinné při léčení poruch, ve kterých proteinová extravazace povede k ukládání fibrinu a extracelulámí matrix, podpoře stromální proliferace (např. keloid, fibróza, cirhóza a syndrom karpálního tunelu). Zvýšená produkce VEGF potenciuje zánětlivé procesy, např. posilnění a aktivaci monocytu. Sloučeniny podle předloženého vynálezu budou také účinné při léčení zánětlivých poruch, např. zánětlivého střevního onemocnění (IBD) a Crohnovy nemoci.

Syntéza

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být připraveny způsoby uvedenými na schématech I-XI.

Schéma I

Schéma II

Ph-,Ρ, DEAD

N —²--⁵ ' ROH, THF

Schéma III

Schéma IV

Schéma V

Schéma VI

Ar>

'COOH

1) SOCI_?, reflux

2) CH₂(CN)₂, iPr₂NEt Toluen

CN

Ar

CN

TMSCHN_g, THF _r Ar MeOH, iPr₂NEt

CN

MeO

CN

Schéma VIII

Ar-Br

1) n-BuLi, THF

2) B(OiPr)₃

3) HCI

Ar-B(OH)₂

Ar-Br (dppf)PdCI₂

DMF, KOAc 80°C

-Ar-B

Schéma IX

Schéma X

N

Schéma XI

^NH2 AY^NH(^SO2’^C°)^R

Br, I

S Pd°, ArB(OH)_g nebo AřB(OR)_g H ( DME, H_ZO, reflujT

Výhodný způsob přípravy sloučenin podle předloženého vynálezu zahrnuje přípravu 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového meziproduktu (IV) (viz schéma XII). Způsob zahrnuje reakci chloridu kyseliny (II) s (4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)anilinem (E) v přítomnosti aprotické báze. Typicky se chlorid kyseliny a (4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilin (III) rozpustí v organickém

rozpouštědle v přibližně ekvimolámích množstvích. Do roztoku se přidá asi 1 ekviv. na asi 2 ekviv. aprotické báze. Výhodně se roztok ochladí na teplotu -10°C až asi 10°C před přidáním báze, přičemž báze se do roztoku přidává po kapkách. Po přidání báze se roztok míchá při pokojové teplotě, dokud není reakce hotová (podle TLC, HPLC nebo jiných standardních analytických technik). Typicky je reakce hotová po asi 10 hodinách až asi 26 hodinách.

Schéma XII

Způsob přípravy 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového meziproduktu

4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový meziprodukt (IV) může být používán k přípravě sloučenin obecného vzorce (I) svojí reakcí s 3-jod-l//-pyrazolo[3,4óQpyrimidinem (V) v přítomnosti tetrakis(trifenylfosfín)palladia a uhličitanu sodného (viz schéma XIII). 3-Jod-lH-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin (V) v polárním organickém rozpouštědle, např. etheru, se nechá reagovat s vodnou směsí 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-ylového meziproduktu (IV), tetrakis(trifenylfosfm)palladia a uhličitanu

sodného. Typicky je 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový meziprodukt (IV) přítomen v roztoku v množství od asi 1 ekviv. do asi 1,5 ekviv., tetrakis(trifenylfosfin)palladium v množství od asi 0,01 ekviv. do asi 0,1 ekviv. a uhličitan sodný v množství od asi 1,5 ekviv. do asi 3 ekviv. vzhledem k 3-jod-l//-pyrazolo[3,4í/jpyrimidinu (V). Roztok se zahřívá při teplotě do asi 50°C do asi 100°C. Reakce se sleduje na TLC, HPLC nebo jinou standardní technikou. Typicky je reakce hotova po asi 16 hodinách až asi 30 hodinách.

Schéma XIII

Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce (I), ve kterém Z¹ ’θ-Α-Ζ¹¹¹ je -NHC(O)-.

Sloučeniny obecného vzorce (II) mohou být připraveny reakcí karboxylové kyseliny reprezentované obecným vzorcem (VI) s oxalylchloridem v přítomnosti aprotické báze.

substituentem Ri ve způsobech ze schémat XII a XIII a ve způsobu přípravy chloridu kyseliny (II). Ve výhodném provedení je Z¹⁰⁰ l-methyl-indol-2-yl nebo l-methyl-indol-3yl ve způsobech ze schémat XII a XIII a ve způsobu přípravy chloridu kyseliny (II).

V dalším výhodném provedení, ve způsobech ze schémat XII a XIII a ve způsobu přípravy chloridu kyseliny (II), je Z¹⁰⁰ indolyl, který je případně substituován substituentem Rj; (4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilin je reprezentován obecným vzorcem (VII)

NH₂

vn.

a 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový meziprodukt je reprezentován obecným vzorcem (VIII) • 4 · 44 44 4 4 « · · · · · 4

vm.

a připravené sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být reprezentovány obecným vzorcem (IX)

IX.

Ve výhodnějším provedení, ve způsobech ze schémat XII a XIII a ve způsobu přípravy chloridu kyseliny (Π), je Z¹⁰⁰ l-methyl-indol-2-yl nebo l-methyl-indol-3-yl; (4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)ánilin je reprezentován obecným vzorcem (VII); a 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový meziprodukt je reprezentován vzorcem (X) ···· ·* 44 4444 • 4 4 44 ·· 4 4 4

4 4 · 444

4444 4 4 444

44 444 444 44 44 o

X.

a připravené sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být reprezentovány obecným vzorcem (XI)

XI.

Ve výhodnějším provedení je substituent R2 4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl v kterémkoliv z výše popsaných způsobů.

VEGF jsou pouze angiogenními růstovými faktory a přispívají k vaskulámí hyperpermeabilitě a tvorbě edému, čímž jsou unikátní. Zdá se, že vaskulámí hyperpermeabilita a edém, který souvisí s expresí nebo aplikací mnoha dalších růstových faktorů, mohou být zprostředkovány produkcí VEGF. Zánětlivé cytokiny stimulují tvorbu VEGF. Hypoxie vede ke značnému posílení VEGF v mnoha tkáních, a tudíž stavy zahrnující infarkt, okluzi, ischémii, anémii nebo poruchu krevního oběhu typicky využívají odpovědi zprostředkované VEGF/VPF, Vaskulámí hyperpermeabilita, související edém, změní transendotheliální výměnu a makromolekulám! extravazát, který je často

6Ί doprovázen diapedézí, může mít za výsledek nadbytek depozice matrix, aberantní stromální proliferaci, fibrózu, atd. Tudíž hyperpermeabilita zprostředkovaná VEGF může výrazně přispívat k poruchám s těmito etiologickými rysy.

Protože implantace blastocytů, vývoj placenty a embryogeneze jsou závislé na angiogenezi, jsou některé sloučeniny podle předloženého vynálezu účinné jako kontraceptiva a antifertilita.

Předpokládá se, že výše uvedené poruchy jsou zprostředkovány výrazným nadbytkem aktivity proteinové tyrosinkinázy zahrnující KDR/VEGFR-2 a/nebo Flt1/VEGFR-l a/nebo TIE-2 tyrosinkináz. Inhibici aktivity těchto tyrosinkináz je inhibována progrese uvedených poruch, protože angiogenní nebo vaskulámí složka hyperpermeability chorobného stavu je kriticky snížena. Účinek některých sloučenin podle předloženého vynálezu daný jejich selektivitou pro specifické tyrosinkinázy vede k minimalizaci vedlejších účinků, které by se mohly vyskytovat, pokud by byly používány inhibitory tyrosinkináz s menší selektivitou. Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinnými inhibitory FGFR, PDGFR, c-Met a IGF-l-R. Tyto receptorové kinázy mohou přímo nebo nepřímo potenciovat angiogenní a hyperproliferační odpovědi při různých poruchách, a tudíž jejich inhibice může bránit progresi onemocnění.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mají inhibiční aktivitu proti proteinkinázam, což znamená, že tyto sloučeniny modulují přenos signálu proteinkináz. Sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují proteinkinázy z rodiny serin/threoninkináz a tyrosinkináz. Zejména tyto sloučeniny selektivně inhibují aktivitu KDR/FLK-l/VEGFR-2 tyrosinkináz. Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu také inhibují aktivitu dalších tyrosinkináz, např. Flt-l/VEGFR-1, Flt-4, Tie-1, Tie-2, FGFR, PDGFR, IGF-IR, c-Met, Src-podrodinu kináz, např. Lek, hek, fgr, Src, fyn, yes, etc. Dále některé sloučeniny podle předloženého vynálezu signifikantně inhibují serin/threoninkinázy, např. PKC, MAP kinázy, erk, CDK, Plk-1 nebo Raf-1, které hrají významnou roli při buněčné proliferaci a progresi buněčného cyklu. Účinnost a specifita generických sloučenin tohoto vynálezu zejména vůči konkrétním proteinkinázam může být často změněna a optimalizována obměnami v charakteru, počtu a uspořádání substituentů (tzn. Ri, R₂, R3, A a kruh 1) a konformačními restrikcemi. Navíc metabolity některých sloučenin mohou mít také signifikantní inhibiční aktivitu proti proteinkinázam.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu, pokud jsou podávány recipientům při potřebě takové sloučeniny, inhibují vaskulámí hyperpermeabilitu a tvorbu edému u těchto ······ · · e· ···· • · ·- ·· · · ·· · • · · 4 · · · · ····- · · · · · · *· ·· ··· ··· ·· «· recipientů. Předpokládá se, že tyto sloučeniny působí inhibicí aktivity KDR tyrosinkinázy, která se zúčastňuje procesu vaskulární hyperpermeability a tvorby edému. KDR tyrosinkináza může být také označována jako FLK-1 tyrosinkináza, NYK tyrosinkináza nebo VEGFR-2 tyrosinkináza. KDR tyrosinkináza je aktivována navázáním růstového faktoru vaskulámích endotheliálních buněk (VEGFR) nebo další aktivační ligand (např. VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E nebo HIV Tat protein) se váže na receptor KDR tyrosinkinázy, který se nachází na povrchu vaskulámích endotheliálních buněk. Po aktivaci KDR tyrosinkinázy nastane hyperpermeabilita krevních cév a tekutina putuje z krevního řečiště přes stěny krevních cév do intersticiálních prostorů, a tím vytváří oblast edému.

Tuto formu odpovědi také často doprovází diapedéze. Podobně, nadbytek vaskulární hyperpermeability může narušit normální molekulární výměnu přes endothel v kritických tkáních a orgánech (např. plíce a ledviny), čímž způsobuje makromolekulámí extravazát a depozici. Po této akutní odpovědi na stimulaci KDR, o které se předpokládá, že podporuje následující angiogenní proces, vede prodloužená stimulace KDR tyrosinkinázy k proliferaci a chemotaxi vaskulámích endotheliálních buněk a tvorbě nových cév. Inhibicí aktivity KDR tyrosinkinázy provedenou buď blokováním produkce aktivovaného ligandu, blokováním vazby aktivovaného ligandu na receptor KDR tyrosinkinázy, zabráněním dimerizace a transfosforylace receptoru, inhibicí enzymové aktivity KDR tyrosinkinázy (inhibicí fosforylaění funkce enzymu) anebo některým jiným mechanismem, který přeruší danou signální dráhu po proudu (D. Mukhopedhyay et al., Cancer Res. 55:1278-1284 (1998) a související odkazy), může být inhibována a minimalizována hyperpermeabilita, jakož i stím související extravazace, následná tvorba edému a depozice matrix a angiogenní odpovědi.

Jedna skupina výhodných sloučenin podle předloženého vynálezu má schopnost inhibovat aktivitu KDR tyrosinkinázy bez signifikantní inhibice aktivity Flt-1 tyrosinkinázy (Flt-1 tyrosinkináza je také označována jako VEGFR-1 tyrosinkináza). Jak KDR tyrosinkináza, tak i Flt-1 tyrosinkináza jsou aktivovány vazbou VEGF na receptory KDR tyrosinkinázy, respektive na receptory Flt-1 tyrosinkinázy. Některé výhodné sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou jedinečné v tom smyslu, že inhibuji aktivitu jedné VEGF-receptorové tyrosinkinázy (KDR), která je aktivována aktivovanými ligandy, ale neinhibují další receptorové tyrosinkinázy, např. Flt-1, které jsou také aktivovány některými aktivovanými ligandy. Proto jsou výhodné sloučeniny podle předloženého vynálezu selektivními inhibitory aktivity tyrosinkinázy.

V rámci jednoho provedení poskytuje předložený vynález způsob léčení stavů u pacienta, které jsou zprostředkovány proteinkinázou, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky nebo profylakticky účinného množství jedné nebo více sloučenin obecného vzorce (I) pacientovi.

Termín „stav zprostředkovaný proteinkinázou“ nebo „stav zprostředkovaný aktivitou proteinkinázy“ zahrnuje nemoc, např. onemocnění nebo další nežádoucí fyzické stavy, ve kterých geneze nebo progrese závisí alespoň částečně na aktivitě alespoň jedné proteinkinázy. Proteinkináza může být např. proteinová tyrosinkináza nebo proteinová serin/threoninkináza.

Pacient, který má být ošetřován, může být jakýkoliv živočišný subjekt, výhodně savec, např. zdomácnělá či hospodářská zvířata. Výhodněji je pacientem lidský subjekt.

Termín „terapeuticky účinné množství“ je množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo kombinace dvou nebo více takových sloučenin, které inhibuje zcela nebo částečně progresi stavu nebo zlepšuje alespoň částečně jeden nebo více symptomů stavu. Terapeuticky účinné množství může být také množství, které je profylakticky účinné. Množství, které je terapeuticky aktivní bude záviset na pacientově váze, pohlaví, nemoci, která má být ošetřována, závažnosti stavu a požadovaném výsledku. Pro jednotlivé pacienty bude terapeuticky účinné množství stanoveno standardním způsobem dle stavu techniky.

Způsob podle předloženého vynálezu je účinný při léčení stavů zprostředkovaných proteinkinázou, např. jakýkoliv výše uvedený stav. V rámci jednoho provedení je stav zprostředkovaný proteinkinázou charakterizován nežádoucí angiogenezí, edémem nebo stromální depozicí. Například může být jeden nebo více ulkusů, např. ulkusy způsobené bakteriálními nebo plísňovými infekcemi, Moorenovy ulkusy a ulcerativní kolitida. Onemocnění může být také způsobeno mikrobiální infekcí, např. Lymskou nemocí, sepsí, septickým šokem nebo infekcí Herpes simplex, Herpes Zoster, virem způsobujícím syndrom získaného selhání imunity, protozoem, toxoplazmózou nebo parapoxvirusem; angiogenními poruchami, např. Hippel-Lindauovou nemocí, polycystickou nemocí ledvin, pemfigoidem, Pagetovou nemocí a psoriázou; reprodukčním onemocněním, např. endometrióza, syndrom ovariální hyperstimulace, preeklampsie nebo menometroragie; fibrotickým a edémickým stavem, např. sarkoidóza, fibróza, cirhóza, tyreoiditida, systémový hyperviskózní syndrom, Osler-Weber-Renduova nemoc, chronická okluzní onemocnění plic, astma a edém po traumatu, popáleniny, radiace, mrtvice, hypoxie nebo ischémie; nebo zánětlivým/imunologickým stavem, např. systémový lupus, chronický zánět, glomerulonefritida, synovitida, zánětlivé onemocnění střev, Crohnova nemoc, revmatoidní artritida, osteoartritida, roztroušená skleróza a rejekce štěpu. Příslušné stavy zprostředkované proteinkinázou také zahrnují srpkovitou anémii, osteoporózu, osteopetrózu, hyperkalcemii indukovanou nádorem a kostní metastází. Další stavy zprostředkované proteinkinázou, které mohou být ošetřeny způsobem podle předloženého vynálezu, zahrnují onemocnění očí, např. okulámí nebo makulámí edém, okulámí neovaskulámí onemocnění, skleritida, radiální keratotomie, uveitida, vitritida, myopie, fyziologická exkavace papily, chronické odchlípení sítnice, komplikace po léčení laserem, konjunktivitida, Stargardtova nemoc a Ealesoya nemoc, kromě retinopatie a makulámí degenerace.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinné při léčení kardiovaskulárních stavů, např. aterosklerózy, restenózy, vaskulámí okluze a karotického obstruktivního onemocnění.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinné při léčení indikací souvisejících s rakovinou, např. pevné nádory, sarkom (zejména Ewingův sarkom a osteosarkom), retinoblastom, rabdomyosarkom, neuroblastom, hematopoézní zhoubná bujení, včetně leukémie a lymfomu, pleurální nebo perikardiální efuze indukované nádorem a maligní ascites.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinné při léčení syndromu Crow-Fukase (POEMS) a diabetických stavů, např. glaukomu, diabetické retinopatie a mikroangiopatie.

Rodiny Src, Tec, Jak, Map, Csk, NFkB i Syk kináz hrají stěžejní role při regulaci imunitních funkcí. Rodina Src běžně zahrnuje Fyn, Lek, Fgř, Fes, Lyn, Src, Yrk, Fyk, Yes, Hek a Blk. Rodina Syk obecně zahrnuje pouze Zap a Syk. Rodina Tec zahrnuje Tec, Btk, Rlk a Itk. Rodina Janus kináz se účastní transdukce růstového faktoru a prozánětlivých signálů cytokinů za účasti mnoha receptorů. Ačkoliv role BTK a ITK, členů rodiny Tec kináz, jsou z hlediska imunobiologie menší, jejich modulace inhibitorem může mít terapeutický prospěch. Rodina Csk v současné době zahrnuje Csk a Chk. Kinázy RJP, IRAK-1, IRAK-2, NIK, p38 MAPkináz, Jnk, IKK-1 a IKK-2 se podílejí na drahách signální transdukce klíčových prozánětlivých cytokinů, např. TNF a IL-1. Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou, díky schopnosti účinně inhibovat jednu nebo více z těchto kináz, působit jako imunomodulační agens, které jsou účinné ke stabilizaci aloštěpu, léčení

autoimunních poruch a sepse a septického šoku. Díky své schopnosti regulovat migraci nebo aktivaci T-buněk, B-buněk, žímých buněk, monocytů a neutrofilů, by mohly být tyto sloučeniny používány k léčení těchto autoimunních chorob a sepse. Prevence rejekce transplantátu, ať už reakce hostitele proti štěpu u pevných orgánů nebo reakce štěpu proti hostiteli u kostní dřeně, jsou limitovány toxicitou běžně dostupných imunosupresiv, a tudíž účinné léčivo se zlepšeným terapeutickým indexem by bylo velmi prospěšné. Experimenty zaměřené na geny ukázaly na významnou roli Src v biologii osteoklastů, což jsou buňky odpovědné za resorpci kosti. Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být díky schopnosti regulace Src také účinné při léčení osteoporózy, osteopetrózy, Pagetova onemocnění, hyperkalcemie indukované nádorem a při léčení kostních metastází.

Ukázalo se, že mnoho proteinkináz funguje jako protoonkogeny. Přerušení chromozómu (v bodě přerušení ltk kinázy na chromozómu 5), translokace jako v případě Abl genu sBCR (Philadelphia chromosome), zkrácení v případech jako třeba c-Kit nebo EGFR, nebo mutace (např. Met) má za následek vytvoření dysregulačních proteinů, které zapříčiňují přeměnu protoonkogenních produktů na onkogenní produkty. V případě dalších nádorů je onkogeneze řízena autokrinními nebo parakrinními interakcemi mezi ligandem a receptorem růstového faktoru. Členové rodiny src kináz se typicky účastní signální transdukce ve směru toku, čímž potenciují onkogenezi a samotní se mohou stát onkogenními díky nadměrné expresi nebo mutaci. Inhibicí aktivity proteinkináz těchto proteinů mohou být léčeny příslušné nemoci. Vaskulámí restenóza může zahrnovat proliferaci hladkého svalstva propagovanou PDGF a/nebo PDGF a proliferaci endotheliálních buněk. Stimulace ligandu FGFR, PDGFR, IGF1-R a c-Met in vivo je proangiogenní a potenciuje poruchy závislé na angiogenezi. Inhibice aktivity buď jednotlivých kináz FGFr, PDGFr, c-Met nebo IGF1-R nebo v kombinaci může být účinnou strategií inhibice tohoto fenoménu. Tudíž sloučeniny obecného vzorce (I), které inhibují aktivitu kinázy normálních nebo aberantních c-kit, c-met, c-fms, členů rodiny src, EGFr, erbB2, erbB4, BCR-Abl, PDGFr, FGFr, IGF1-R a dalších receptorových nebo cytosolových tyrosinkináz, mohou hrát důležitou roli při léčení benigních a neoplastických proliferačních onemocnění.

V mnoha patologických stavech (např. pevné primární nádory a metastáze, Kaposiho sarkom, revmatická artritida, slepota způsobená nepřiměřenou oční neovaskularizací, psoriáza a ateroskleróza) je progrese onemocnění po perzistentní angiogenezi kontingentní. Polypeptidové růstové faktory často produkované nemocnou tkání nebo doprovodnými zánětlivými buňkami a jejich odpovídající specifické receptorové tyrosinkinázy endoteliálních buněk (např. KDR/VEGFR-2, Flt-l/VEGFR-1, Flt-4, Tie-2/Tek a Tie) jsou důležité pro stimulaci endoteliálního buněčného růstu, migrace, organizace, diferenciace a sestavení nových funkčních vaskulátorů. Předpokládá se, že v důsledku aktivity „faktoru vaskulámí permeability“ VEGF při zprostředkování vaskulámí hyperpermeability má VEGF-stimulace VEGFR kinázy důležitou roli při tvorbě nádorových ascites, cerebrálního a pulmonámího edému, pleurální a perikardiální efúze, hypersensitivních reakcí opožděného typu, tkáňového edému a orgánové dysfunkce po traumatu, popáleninách, ischémie, diabetických komplikací, endometrióze, syndromu respirační tísně dospělých (ARDS), hypotenzi a hyperpermeabilitě související spost kardiopulmonámím bypassem a očním edémem majícím za následek glaukom nebo oslepnutí v důsledku nepřiměřené neovaskularizace. Kromě VEGF, také v poslední době identifikované VEGF-C a VEGF-D a virově kódovaný VEGF-E nebo HIV-Tat protein mohou způsobovat vaskulámí hyperpermeabilní odpověď zprostředkovanou stimulací VEGFR kinázy. KDR/VEGFR-2 a/nebo Tie-2 jsou exprimovány také v selektivní populaci buněk hematopoietického kmenu. V přírodě jsou někteří z členů této populace multifunkční a mohou být stimulovány růstovými faktory k rozlišení endotheliálních buněk a participaci při vaskulogenetických angiogenních procesech. Z tohoto důvodu byly pojmenovány endotheliální progenitomími buňkami (EPC)(J. Clin. Investig. 103: 12311236 (1999)). V některých progenitorech může Tie-2 být důležitý při jejich posilnění, adhezi, regulaci a diferenciaci (Blood, 4317-4326 (1997)). Některé sloučeniny reprezentované obecným vzorcem (I) schopné blokovat kinázovou aktivitu specifických kináz endotheliálních buněk by proto mohly inhibovat progresi onemocnění zahrnující tyto stavy.

Předpokládá se, že vaskulámí destabilizace antagonistického ligandu Tie-2 (Ang2) indukuje nestabilní „plastický“ stav v endotheliu. Vysoké hladiny VEGF mohou způsobit silné angiogenní odpovědi, nicméně bez VEGF nebo VEGF-souvisejícího stimulu může docházet k zřetelné regresi cév a endotheliální apoptóze (Genes and Devel. 13: 1055-1066 (1999)). Analogicky mohou inhibitory Tie-2 kinázy být proangiogenní nebo antiangiogenní v přítomnosti, respektive bez VEGF-souvisejícího stimulu. Tudíž inhibitory Tie-2 mohou být používány s příslušným proangiogenním stimulem, např. VEGF, k podpoře terapeutické angiogeneze při takových stavech jako např. léčba zranění, infarkt nebo ischémie.

·· ···· · · ·· ····

Sloučeniny obecného vzorce (I) nebo jejich soli nebo farmaceutické přípravky obsahující jejich terapeuticky účinné množství mohou být používány při léčení stavů zprostředkovaných proteinkinázou, např. při výše uvedených benigních a neoplastických proliferačních onemocněních a poruch imunitního systému. Tato onemocnění zahrnují autoimunní choroby, např. revmatickou artritidu, tyreoiditidu, diabetes l.typu, roztroušenou sklerózu, sarkoidózu, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnovu chorobu, myastenii gravis a systémový lupus erythematosus; psoriázu, rejekci transplantovaného orgánu (např. rejekci ledvin, štěp proti hostiteli), benigní a neoplastická proliferační onemocnění, lidské rakoviny, např. rakoviny plic, prsu, žaludku, měchýře, tlustého střeva, pankreatu, vaječníku, prostaty a konečníku a hematopoietická zhoubná bujení (leukémie a lymfom) a onemocnění zahrnující nepřiměřenou vaskularizaci, např. diabetickou retinopatii, retinopatii nedonošených, choroidální neovaskularizaci v důsledku degenerace makuly související s věkem a infantilní hemangiomy u lidských subjektů. Navíc tyto inhibitory mohou být účinné při léčení poruch zahrnujících edém zprostředkovaný VEGF, ascites, efuze a exsudáty, včetně např. makulámího edému, cerebrálního edému, akutního plicního poranění a syndromu respirační tísně dospělých (ARDS).

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také účinné při léčení profylaxe výše uvedených onemocnění.

Předpokládá se, že výše uvedené poruchy jsou významně zprostředkovány aktivitou proteinových tyrosinkináz zahrnujících receptory VEGF (např. KDR, Flt-1 a/nebo Tie-2). Inhibici aktivity těchto receptorových tyrosinkináz je inhibována progrese uvedených poruch, protože angiogenní komponenta onemocnění je silně potlačena. Účinek sloučenin podle předloženého vynálezu díky jejich selektivitě vůči specifickým tyrosinkinázám vede k minimalizaci vedlejších účinků, které by se mohly vyskytovat, pokud by byly používány méně selektivní inhibitory tyrosinkináz.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález sloučeniny obecného vzorce (I), které jsou definovány výše, pro použití jako léčivých přípravků, zejména jako inhibitorů aktivity proteinkináz, např. aktivity tyrosinkinázy, serinkinázy a threoninkinázy. V ještě dalším aspektu poskytuje předložený vynález použití výše definovaných sloučenin obecného vzorce (I) při výrobě léčivého přípravku určeného k inhibici aktivity proteinkinázy.

V předloženém vynálezu jsou používány následující termíny:

Termín „fyziologicky přijatelné soli“ se vztahuje na ty soli, které si ponechávají biologickou účinnost a vlastnosti volných bází, a které jsou připraveny reakcí anorganických kyselin, např. kyseliny chlorovodíkové, bromovodíkové, sírové, dusičné, fosforečné nebo organických kyselin, např. sulfonové, karboxylové nebo organické fosforečné, methansulfonové, ethansulfonové, p-toluensulfonové, salicylové, mléčné, vinné kyseliny, atd.

Farmaceutické formulace

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být podávány lidským nebo subjektům jako takové nebo ve farmaceutických přípravcích, ve kterých jsou smíchány s vhodnými nosiči nebo excipienty(tem) v dávkách, které jsou dostačující kléčení nebo zlepšení vaskulámí hyperpermeability, edému a souvisejících poruch. Směsi těchto sloučenin mohou být také podávány pacientům jako jednoduchá směs nebo ve vhodných připravených farmaceutických přípravcích. Terapeuticky účinná dávka dále označuje množství sloučeniny nebo sloučenin, které je dostačující k prevenci nebo atenuaci nepřiměřené neovaskularižace, progrese hyperproliferativních poruch, edému, hyperpermeability související s VEGF a/nebo hypotenze spojené s VEGF. Techniky přípravy a podání sloučenin mohou být nalezeny v „Remington's Pharmaceutical Sciences“, Mack Publishing Co., Easton, PA, poslední vydání.

Způsoby podání

Vhodné způsoby podání mohou být například perorální, ve formě očních kapek, rektální, transmukózní, místní nebo intestinální; parenterální dodání zahrnující intramuskulámí, subkutánní podání, intramedulámí injekce, jakož i intratekální, přímé intraventrikulámí, intravenózní, intraperitoneální, intranazální nebo intraokulámí injekce.

Nebo lze podávat sloučeninu spíše místním než systémovým způsobem, např. injekcí sloučeniny přímo do místa edému, často v depotní nebo trvale uvolňující se formulaci.

Dále lze léčivo podávat jako cílově specifické podání, např. v lipozómu potaženém endotheliální, buněčně-specifickou protilátkou.

• 9

999 ··· ·· ·· ·

Přípravky/Formulace

Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu mohou být vyráběny standardním způsobem, např. standardními mícháním, rozpuštěním, granulací, přípravou dražé, rozmělňováním, emulgací, zapouzdřením, uzavřením nebo lyofilizací.

Farmaceutické přípravky pro použití podle předloženého vynálezu tak mohou být připraveny standardním způsobem za použití jednoho nebo více fyziologicky přijatelných nosičů obsahujících excipienty a pomocné látky, které usnadňují zapracování aktivních sloučenin do preparátů používaných farmaceutickým způsobem. Vlastní příprava je závislá na vybraném způsobu podání.....

Pro injekce mohou být agens podle předloženého vynálezu připraveny ve vodných roztocích, výhodně ve fyziologicky kompatibilních pufrech, např. Hanksův roztok, Ringerův roztok nebo pufru na bázi fyziologického roztoku. Pro transmukózní podání jsou ve formulaci používány takové penetrátory, které jsou vhodné pro překonání dané bariéry. Tyto penetrátory jsou obecně známy.

Pro perorální podání mohou být sloučeniny snadno připraveny spojením aktivních sloučenin s farmaceuticky přijatelnými nosiči dobře známými v oboru. Tyto nosiče umožňují připravit sloučeniny podle předloženého vynálezu ve formě tablet, pilulek, dražé, kapslí, roztoků, gelů, sirupů, injekčních směsí, suspenzí, atd., pro perorální požití léku pacientem, který má být ošetřován. Farmaceutické preparáty pro perorální použití mohou být připraveny smícháním aktivní sloučeniny s pevným excipientem, případně rozemletím výsledné směsi, a po přidání vhodných pomocných látek, pokud je třeba, zpracováním směsi granulí za vzniku tablet nebo dražé. Vhodné excipienty jsou zejména fillery, např. cukry, včetně laktosy, sacharosy, mannitolu nebo sorbitolu; celulosové přípravky, např. kukuřičný škrob, pšeničný škrob, rýžový škrob, bramborový škrob, želatina, tragant, methyl-celulosa, hydroXypropylmethyl-celulosa, sodná sůl karboxymethylcelulosy a/nebo polyvinylpyrrolidon (PVP). Pokud je třeba, mohou být přidány agens zajišťující rozpad tablety po požití, např. zesítěný polyvinylpyrrolidon, agar nebo kyselina alginová nebo její soli, např. alginát sodný.

Jádra dražé jsou opatřeny vhodnými povrchovými vrstvami. Pro tento účel mohou být používány koncentrované roztoky cukrů, které mohou případně obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidon, karbopolový gel, polyethylenglykol a/nebo oxid titaničitý, roztoky šelaku a vhodná organická rozpouštědla nebo směsi rozpouštědel.

·· ···» ···· · · « · ♦ · ·· 4· «·· ··· ·· ·· .

Organická barviva nebo pigmenty mohou být přidány do tablet nebo potahových vrstev dražé k identifikaci nebo charakterizaci rozdílných kombinací dávek aktivní sloučeniny.

Farmaceutické preparáty, které mohou být používány perorálně, zahrnují zasunovací kapsle vyrobené ze želatiny, jakož i měkké, uzavřené kapsle vyrobené ze želatiny a změkěovadla, např. glycerol nebo sorbitol. Zasunovací kapsle mohou obsahovat aktivní složky v příměsi s plnidly, např. laktosou, pojivý, např. škroby, a/nebo lubrikanty, např. talek nebo stearát hořečnatý, a případně stabilizátory. V měkkých kapslích mohou být aktivní sloučeniny rozpuštěny nebo suspendovány ve vhodných roztocích, např. mastných olejích, minerálním oleji nebo tekutých polyethylenglykolech. Navíc mohou být přidávány stabilizátory. Veškeré formulace pro perorální podání by měly být v dávkách vhodných pro takový způsob podání.

Pro bukkální podání mohou být přípravky ve formě tablet nebo pastilek připravených standardním způsobem.

Pro podání inhalací jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu standardně dodávány ve formě aerosolového spreje v rozprašovači nebo v balení se stlačeným obsahem s vhodným propelantem, např. dichlordifluormethanem, trichlorfluormethanem, dichlortetrafluorethanem, oxidem uhličitým nebo jinými vhodnými plyny. V případě stlačeného aerosolu může být dávkovači jednotka poskytnuta prostřednictvím ventilu, který umožní uvolnění přesného množství látky. Kapsle a kazety, např. želatina, pro použití v inhalačním přístroji nebo insuflatoru mohou být připraveny společně s práškovou směsí sloučeniny a vhodné práškové báze, např. laktosy nebo škrobu.

Sloučeniny mohou být připraveny pro parenterální podání injekcí, např. bolusová injekce nebo kontinuální infuze. Formulace pro injekce mohou být v jednotkových dávkovačích formách, např. v ampulích nebo v obalech pro více dávek, s přidanou konzervační látkou. Přípravky mohou být také ve formách suspenze, roztoků nebo emulzí v olejových nebo vodných nosičích a mohou obsahovat pomocné agens, např. suspendační, stabilizační a/nebo dispergační prostředky.

Farmaceutické formulace pro parenterální podání zahrnují vodné roztoky aktivních sloučenin ve formě, která je rozpustná ve vodě. Dále mohou být suspenze aktivních sloučenin připraveny jako příslušné olejovité injekční supenze. Vhodná lipofilní rozpouštědla nebo přenašeče zahrnují mastné oleje, např. sezamový olej, nebo estery syntetických mastných kyselin, např. ethyl-oleát nebo triglyceridy, nebo lipozómy.

0.

Vodné injekční suspenze mohou obsahovat látky, které zvyšují viskozitu suspenze, např. sodná sůl karboxymethyl-celulosy, sorbitol nebo dextran. Případně mohou suspenze také obsahovat vhodné stabilizátory nebo agens, které zvyšují rozpustnost sloučenin, čímž umožňují připravit vysoce koncentrované roztoky.

Nebo může být aktivní složka před použitím ve formě prášku určeného ke spojení s vhodným nosičem, např. sterilní voda bez pyrogenu.

Sloučeniny mohou být také připraveny jako rektální přípravky, např. čípky nebo retenční klyzma, např. obsahující standardní čípkové báze, např. kakao vé máslo nebo jiné glyceridy.

Kromě výše uvedených formulací mohou být také připraveny sloučeniny ve formě depotního preparátu. Tyto formulace s dlouhou dobou účinku mohou být podávány implantací (např. subkutánní nebo intramuskulámí podání nebo intramuskulámí injekcí). Tímto způsobem mohou být připraveny sloučeniny s vhodnými polymemími nebo hydrofóbními materiály (např. jako emulze v přijatelném oleji) nebo ionexy nebo jako těžko rozpustné deriváty, např. těžko rozpustné soli.

Příklad farmaceutického nosiče pro hydrofóbní sloučeniny podle předloženého vynálezu je systém spolurozpouštědel obsahující benzylalkohol, nepolární surfaktant nebo organický polymer mísitelný s vodou a vodná fáze. Systém spolurozpouštědel může být systém spolurozpouštědel VPD. VPD je roztok 3 obj.% benzylalkoholu, 8 obj.% nepolárního surfaktantového polysorbátu 80 a 65 obj.% polyethylenglykolu 300 doplněný na konečný objem absolutním ethanolem. Systém spolurozpouštědel VPD (VPD:5W) se sestává z VPD zředěného 1:1 5% dextrosou ve vodném roztoku. Tento systém spolurozpouštědel dobře rozpouští hydrofóbní sloučeniny a sám má po systémovém podání nízkou toxicitu. Přirozeně mohou být podíly systému spolurozpouštědel značně měněny, nicméně tak, aby se zachovaly charakteristické rysy jeho rozpustnosti a toxicity. Jednotlivé složky systému spolurozpouštědel mohou být měněny: např. místo polysorbátu 80 mohou být používány další nepolární surfaktanty o nízké toxicitě; velikost částic polyethylenglykolu může být značena; polyethylenglykol mohou nahradit další biokompatibilní polymery, např. polyvinylpyrrolidon; a další cukry nebo polysacharidy mohou nahradit dextrosu.

Nebo pro hydrofóbní farmaceutické sloučeniny může být použit jiný systém dodání. Pro hydrofóbní léčiva jsou dobře známými příklady přenašečů a nosičů využívaných při tomto způsobu lipozómy a emulze. Mohou být používána některá

organická rozpouštědla, např. dimethylsulfoxid, nicméně obvykle na úkor větší toxicity. Navíc sloučeniny mohou být dodávány systémem postupného uvolňování, např. semipermeabilními matricemi pevných hydrofóbních polymerů obsahujících terapeutické agens. V této technice jsou zavedeny různé látky s postupným uvolňováním. Kapsle s postupným uvolňováním mohou v závislosti na svém chemickém charakteru uvolňovat sloučeniny po dobu několika týdnů až 100 dnů. V závislosti na chemickém charakteru a biologické stabilitě terapeutického reagens mohou být používány další strategie stabilizace proteinu.

Farmaceutické přípravky také mohou obsahovat vhodnou pevnou látku nebo nosiče nebo excipienty gelové fáze. Příklady takových nosičů nebo excipientů zahrnují, ale není to nikterak limitováno, uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, různé cukry, škroby, deriváty celulosy, želatinu a polymery, např. polyethylenglykoly.

Mnoho ze sloučenin podle předloženého vynálezu může být ve formě soli s farmaceuticky kompatibilními protiiony. Farmaceuticky kompatibilní soli mohou být připraveny s mnoha kyselinami včetně, ale není to nikterak limitováno, kyseliny chlorovodíkové, sírové, octové, mléčné, tartarové, jablečné, sukcinové, atd. Soli mají tendenci být mnohem rozpustnější ve vodných nebo jiných protonizo váných rozpouštědlech než jejich odpovídající volné báze.

Účinná dávka

Farmaceutické přípravky vhodné pro použití v předloženém vynálezu zahrnují přípravky, ve kterých jsou aktivní složky k dosažení požadovného účinku obsaženy v účinném množství. Zejména terapeuticky účinné množství znamená množství, které je dostatečné k zabránění nebo ke zlepšení stávajících symptomů u subjektu, který je léčen. Stanovení účinných množství se provádí standardním způsobem dle stavu techniky.

Pro jakoukoliv sloučeninu používanou ve způsobu podle předloženého vynálezu může být terapeuticky účinná dávka nejprve stanovena podle testů na buněčných kulturách. Například dávka může být testována na buněčných a zvířecích modelech k získání oběhové koncentrace, která zahrnuje IC50 stanovenou podle testů na buněčných kulturách (tzn. koncentrace testované sloučeniny, která je potřebná k dosažení 50% inhibice aktivity dané proteinkinázy). V některých přípradech je vhodné stanovit hodnotu IC50 v přítomnosti 3 až 5% sérumalbuminu, poněvadž toto stanovení aproximuje vazebné efekty plazmových proteinů na sloučeninu. Tyto informace mohou být používány u lidských subjektů

• ·	444 4 • 4 '	• 4 4 •	4'4 •	4 4 4 4	4 4	44 4 4 4 4
• '·	• •
4	•	• - ·	4	4	•	4	• 4
•	4	• ·	···	···	4 4		4 4

k přesnějšímu stanovení účinných dávek. Nejvýhodnější sloučeniny pro systémové podání účinně inhibují signalizaci proteinkináz v intaktních buňkách v hladinách, které jsou bezpečně dosažitelné v plazmě.

Terapeuticky účinná dávka znamená takové množství sloučeniny, které má za následek zlepšení symptomů u pacienta. Toxicita a terapeutická účinnost takových sloučenin může být stanovena standardními farmaceutickými způsoby na buněčných kulturách nebo experimentálních zvířatech, např. stanovení maximální tolerované dávky (MTD) a ED₅o (koncentrace látky, která vyvolá 50% maximálního účinku dávky). Dávkový poměr mezi toxickými a terapeutickými účinky je určen terapeutickým indexem a může být vyjádřen jako poměr mezi MTD a ED50. Sloučeniny, které mají vysoké terapeutické indexy, jsou výhodné. Data získaná z testů na buněčných kulturách a studie na zvířatech mohou být používány ke stanovení rozpětí dávky pro použití u lidských subjektů. Dávka takových sloučenin se pohybuje výhodně v rozmezí koncentrací v systémové cirkulaci, která zahrnují ED50 s malou nebo žádnou toxicitou. Množství dávky může být v tomto rozmezí různé v závislostí na používané dávkové formě a způsobu podání. Přesná formulace, způsob podání a dávka mohou být vybrány příslušným doktorem v závislosti na stavu pacienta (viz Fingl et al., 1975, v „Pharmacological Basis of Therapeutics“, Ch. 1 pl). V krizi může být k dosažení rychlé odpovědi použito podání akutního bolusu nebo infuze k dosažení MTD.

K dosažení plazmové hladiny aktivního podílu, které je dostatečné k udržení účinků modulujících kinázu nebo minimální účinné koncentrace (MEC) může být množství dávky a interval individuálně upraven. Hodnota MEC bude pro každou sloučeninu jiná, nicméně může být stanovena podle in vitro údajů; např. koncentrace potřebná k dosažení 50-90% inhibice proteinkinázy pomocí stanovení popsaných v předloženém vynálezu. Dávka potřebná k dosažení MEC bude záviset na jednotlivých charakteristickách a způsobu podání. Nicméně ke stanovení plazmových koncentrací může být používána HPLC nebo biotesty.

Intervaly mezi dávkami mohou být také stanoveny pomocí hodnoty MEC. Sloučeniny by měly být podávány podle režimu, kterým se udržují plazmové hladiny nad hodnotou MEC v průběhu 10-90% doby, výhodně mezi 30-90% a nejvýhodněji 50-90%, dokud není dosaženo požadovaného zlepšení daných symptomů. V případech místního podání nebo selektivního vychytávání, nemusí účinná místní koncentrace léčiva odpovídat plazmové koncentraci.

Množství podávaného přípravku bude záviset na ošetřovaném subjektu, jeho váze, závažnosti bolesti, způsobu podání a posouzení lékaře.

Technika balení

Přípravky, pokud je třeba, mohou být ve formě balení nebo zásobníku, který může obsahovat jednu nebo více jednotkových dávkovačích forem obsahujících aktivní složku. Balení může např. obsahovat kovovou nebo plastickou fólii, např. měkké průhledné balení. Balení nebo zásobník může být distribuován společně s návodem k podání. Také mohou být připraveny přípravky obsahující sloučeninu podle předloženého vynálezu společně s kompatibilním farmaceutickým nosičem, který je vpraven do příslušného obalu a označeny pro léčení daného onemocnění.

V některých formulacích může být výhodné používat sloučeniny podle předloženého vynálezu ve formě velmi malých částic získaných např. mletím využívajícím energii tekutiny.

Použití sloučenin podle předloženého vynálezu při výrobě farmaceutických přípravků je uvedeno v následujícím popisu. V této popisné části znamená termín „aktivní sloučenina“ jakoukoliv sloučeninu podle předloženého vynálezu, ale zejména jakoukoliv sloučeninu, j enž j e finálním produktem j ednoho z uvedených příkladů.

a) Kapsle

Při přípravě kapslí může být 10 hmotnostních podílů aktivní sloučeniny a 240 hmotnostních podílu laktosy deagregováno a smícháno. Směs může být plněna do tuhých želatinových kapslí, přičemž každá kapsle obsahuje jednotkovou dávku nebo podíl jednotkové dávky aktivní sloučeniny.

b) Tablety

Tablety mohou být připraveny z následujících složek.

Hmotnostní podíly

Aktivní sloučenina 10

Laktosa 190

Kukuřičný škrob 22

Polyvinylpyrrolidon 10

Stearát hořečnatý 3

Aktivní sloučenina, laktosa a část škrobu mohou být deagregovány, smíchány a výsledná směs může být granulována s roztokem polyvinylpyrrolidonu v ethanolu. Suchý granulát může být smíchán se stearátem hořečnatým a zbytkem škrobu. Směs pak může být lisována v tabletovacím stroji, přičemž každá tableta obsahuje jednotkovou dávku nebo část jednotkové dávky aktivní sloučeniny.

c) Tablety s enterosolventními potahy

Tablety mohou být připraveny způsobem popsavým výše v bodě (b). Tablety pak mohou být enterosolventně potaženy standardním způsobem roztokem 20% acetát-ftalátu celulosy a 3% diethylftalátu ve směsi ethanolu a vody (1:1).

d) Čípky

Pří přípravě čípků může být 100 hmotnostních dílů aktivní sloučeniny inkorporováno do 1300 hmotnostními dílů čípkové matrice na bázi triglyceridů a vzniklá směs se může dávkovat do čípků, přičemž každý obsahuje terapeuticky účinné množství aktivní složky.

V přípravcích podle předloženého vynálezu může být, pokud je třeba, aktivní sloučenina smíchána s dalšími kompatibilními, farmakologicky aktivními složkami. Například sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být podávány v kombinaci s jedním nebo více dalšími farmaceutickými agens, které inhibují nebo zabraňují produkci VEGF nebo angiopoietinů, zmírňují intracelulární odpovědi na VEGF nebo angiopoietiny, blokují intracelulární signální transdukci, inhibují vaskulámí hyperpermeabilitu, zmírňují zánět nebo inhibují nebo zabraňují tvorbě edému nebo neovaskularizace. Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být podávány před, po nebo současně s dalším farmaceutickým agens, kterýmkoliv vhodným způsobem podání. Další farmaceutické agens zahrnují, ale není to nikterak limitováno, antiedemické steroidy, NSAIDS, inhibitory ras, anti-TNF agens, anti-IL-1 agens, antihistaminika, PAF-antagonisty, inhibitory COX-1, inhibitory COX-2, inhibitory NO synthasy, inhibitory Akt/PTB, inhibitory IGF-IR, inhibitory PKC a inhibitory PI3 kinázy. Sloučeniny podle předloženého vynálezu a další farmaceutické agens účinkují buď aditivně nebo synergisticky. Tudíž další takové kombinace látek, která inhibuje angiogenezi, vaskulámí hyperpermeabilitu a/nebo inhibují tvorbu edému, mohou poskytovat podstatně větší zmírnění škodlivých účinků hyperproliferačních onemocnění, angiogeneze, vaskulámí hyperpermeability nebo edému než podání kterékoliv samotné látky. Při léčení maligních poruch jsou předpokládány kombinace s antiproliferačními nebo cytotoxickými chemoterapiemi nebo ozařováním.

Předložený vynález také zahrnuje použití sloučenin obecného vzorce (I) jako léčivého prostředku.

V dalším aspektu předloženého vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce (I) nebo její sůl při výrobě léčivého přípravku pro léčení vaskulámí hyperpermeability, na angiogenezi závisejících poruch, proliferačních onemocnění a/nebo poruch imunitního systému u savců, zejména lidí.

Předložený vynález také poskytuje způsob léčení vaskulámí hyperpermeability, nepřiměřené neovaskularizace, proliferačních onemocnění a/nebo poruch imunitního systému, která zahrnují podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) savci, zejména lidem, při potřebě takového ošetření.

In vitro účinnost sloučenin při inhibici těchto proteinkináz může být stanovena níže uvedenými způsoby.

Účinnost sloučenin může být stanovena množstvím inhibice fosforylace exogenního substrátu (např. syntetický peptid (Z. Songyang et al., Nátuře. 373:536-539) srovnáním testované sloučeniny s kontrolou.

Produkce KDR tyrosinkinázy pomocí bakulovirového systému:

Kódující sekvence pro lidskou KDR intracelulámí doménu (aa789-1354) byla generována pomoci PCR a cDNA izolované z buněk HUVEC. Sekvence poly-His6 byla zavedena na /V-konec tohoto proteinu. Tento fragment byl klonován do transfekčního vektoru pVL1393 v místě Xbal a Not 1. Rekombinantní bakulovirus (BV) byl generován kotransfekcí pomocí reagens BakuloGold Transfection reagent (PharMingen). Rekombinantní BV byl plak purifíkován a verifikován Western blottingem. Za účelem produkce proteinu byly buňky SF-9 pěstovány v médiu SF-900-Π při 2 x 106/ml a infikovány v množství 0,5 jednotek tvořících plak na buňku (MOI). Buňky byly sbírány po 48 hodinách od infekce.

Purifikace KDR

Buňky SF-9 exprimující (His)6KDR(aa789-1354) byly lyžovány přidáním 50 ml lyzovacího pufru Triton X-100 (20 mM Tris, pH 8_z0, 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% Triton X-100, 1 mM PMSF, 10 pg/ml aprotininu, 1 ug/ml leupeptinu) do buněčných pelet z 1 1 buněčné kultury. Lyzát byl centrifugován při 19,000 ot. za min. na přístroji Sorval SS34 rotor po dobu 30 minut při teplotě 4°C. Buněčný lyzát byl aplikován do 5 ml NiCl₂chelatujícího sepharosového sloupce, ekvilibrováného 50 mM HEPES, pH 7^5, 0ý3 M NaCl. KDR byla eluována stejným pufrem obsahujícím 0,25 M imidazolu. Jednotlivé frakce byly analyzovány metodami SDS-PAGE a ELISÁ (viz níže), pomocí nichž se dala změřit aktivita kinázy. Purifikovaná KDR byla nalita do 25mM HEPES, pH 25mM NaCl, 5 mM pufru DTT a skladována při teplotě -80°C.

Produkce a purifikace lidské Tie-2 kinázy

Kódující sekvence pro lidskou intracelulámí doménu Tie-2 (aa775-1124) byla generována pomocí PCR a cDNA izolovaných z lidské placenty jako templátů. Sekvence poly-His6 byla zavedena do V-konce a tento konstrukt byl klonován do transfekčního vektoru pVL 1939 v místě Xba 1 a Not 1. Rekombinantní BV byl generován kotransfekcí pomocí reagens BakuloGold Transfection reagent (PharMingen). Rekombinantní BV byl plak purifikovaný a verifikovaný Western blottingem. Za účelem produkce proteinu byly buňky SF-9 pěstovány v médiu SF-900-II při 2 x 106/ml a infikovány vMOI 0:5. Purifikace používané His-značené kinázy při screeningu byla obdobná jako u KDR.

Produkce a purifikace lidské Flt-1 tyrosinkinázy

Byl používán bakulovirový expresívní vektor pVL1393 (Phar Mingen, Los Angeles, CA). Nukleotidová sekvence kódující poly-Hisó byla umístněna do 5'-konec nukleotidové sekvence kódující celou intracelulámí doménu kinázy lidské Flt-1 (aminoskupinykyseliny 786-1338). Nukleotidová sekvence kódující kinázovou doménu byla generována pomocí PCR a cDNA-knihoven izolovaných z buněk HUVEC. Histidinové zbytky umožnily afinitní purifikaci proteinu obdobným způsobem jako u KDR a ZAP70. Insektované buňky SF-9 byly infikovány s 0,5 multiplicitou a sbírány po 48 hodinách od infekce.

Původ EGFR tyrosinkinázy

EGFR byla zakoupena od firmy Sigma (Cat # E-3641; 500 jednotek/50 μΐ) a ligand EGF byl získán u firmy Oncogen Research Products/Calbiochem (Cat # PF011-100).

Exprese ZAP70

Byl používán bakulovirový expresívní vektor pVL1393 (Phar Mingen, Los Angeles, CA). Nukleotidová sekvence kódující aminoskupinykyseliny M(H)6 LVPR₉S byla umístněna 5'-konec nukleotidové sekvence kódující celou ZAP70 (aminoskupinykyseliny 1-619). Nukleotidová sekvence kódující oblast ZAP70 byla generována pomocí PCR a cDNA-knihoven izolovaných zT-bunék imortalizovaných Jurkatem. Histidinové zbytky umožnily afinitní purifikaci proteinu (vide infra). LVPR9S můstek tvořený rozpoznávací sekvencí pro proteolytické štěpení thrombinem umožňující odstranění afinitního tágu z enzymu. Insektováné buňky SF-9 byly infikovány s 0,5 multiplicitou a sbírány po 48 hodinách od infekce.

Extrakce a purifikace ZAP70

Buňky SF-9 byly lyžovány v pufru sestávajícím se z 20 mM Tris, pH 8,0, 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% Triton X-100, lmM PMSF, 10 pg/ml aprotininu, 1 ug/ml leupeptinu a 1 mM orthovanadátu sodného). Rozpustný lyzát byl aplikován na chelatující sloupec sepharosy HiTrap (Pharmacia) ekvilibrovaném v 50 mM HEPES, pH 7,5, 0,3 M NaCl. Fúzní protein byl eluován s250 mM imidazolu. Enzym byl skladován vpufřu obsahujícím 50 mM HEPES, pH 7,5, 50 mM NaCl, 5 mM pufru DTT.

Původ proteinkinázy

Lek, Fyn, Src, Blk, Csk a Lyn a jejich zkrácené formy mohou být získány z komerčních zdrojů (např. od Upstate Biotechnology lne. (Saranac Lake, Ν. Y.) a Santa Cruz Biotechnology lne. (Santa Cruz, Ca.) nebo purifikovány standardními způsoby ze známých přírodních nebo rekombinantních zdrojů.

Enzymová imunoanalýza na pevné fázi (ELISA) provedená s PTK

K detekci a měření přítomnosti aktivity tyrosinkinázy byla používána enzymová imunoanalýza na pevné fázi (ELISA). ELISA byla prováděna standardním způsobem, který je popsán např. Voliér, et al., 1980, „Enzyme-linked Immunosorbent Assay,“ In: Manual of Clinical Immunology, 2d ed., edited by Rose and Friedman, 359-371 Am.Soc. of A/zcroůzo/ogy, Washington, D.C.

Uvedený způsob byl upraven pro stanovení aktivity s ohledem na specifickou PTK. Například výhodné způsoby provedení ELISA experimentů jsou uvedeny níže. Úprava těchto protokolů pro stanovení aktivit sloučenin u ostatních členů rodiny receptorové PTK, jakož i nereceptorových tyrosinkináz, patří mezí běžné rutinní práce. Pro účely stanovení selektivity inhibitoru byl používán univerzální substrát PTK (např. nepravidelný kopolymer na bázi poly(Glu₄ Tyr) s molekulovou hmotností 20000-50000) společeně s ATP (typicky 5 μΜ) v přibližně dvojnásobných koncentracích oproti Km z testů.

Ke stanovení inhibičního účinku sloučenin podle předloženého vynálezu na aktivitu KDR, Flt-1, Flt-4/VEGFR-3, Tie-1, Tie-2, EGFR, FGFR, PDGFR, IGF-l-R, c-Met, Lek, Blk, Csk, Src, Lyn, Fyn a ZAP70 tyrosinkináz byl používán následující postup:

Puířy a roztoky:

PGTPoly (Glu, Tyr) 4:1

Skladování prášku při teplotě -20°C. Rozpuštění prášku ve fyziologickém roztoku tlumeném fosfátem (PBS) na objem 50 mg/ml. Uchování 1 ml alikvótního podílu při teplotě -20°C. Pokud se připravují pláty, zředění na 250 pg/ml v Gibco PBS.

Reakční pufr: 100 mM Hepes, 20mM MgCl₂, 4 mM MnCl₂, 5mM DTT, 0,02% BSA, 200 μΜ NaVO₄, pH 7,10.

ATP: Uchování alikvótních podílů 100 mM při teplotě -20°C. Zředění na objem 20 μΜ ve vodě.

Promývací pufr: PBS s 0,1% Tween 20

Protilátkový ředící pufr: 0,1% bovinní sérumalbumin (BSA) v PBS

Substrát TMB: smíchání substrátu TMB a Peroxidového roztoku 9:1 těsně před použitím nebo použití substrátu K-Blue od Neogen Blokovací roztok: 1M fosforečná kyselina

Postup • Φ φ·*φ · · ·· ·Φ·Φ

9 9 99 99 φ · ·

1. Příprava destiček

Zředění zásobního roztoku PGT (50 mg/ml, zmrazeného) v PBS na 250 pg/ml. Přidání (125 μΙ/jamka) do ELISA destiček Corning s plochým dnem, majících vysokou afinitu a modifikované ploché dno (Corning # 25805-96). Přidání 125 μΐ PBS do slepých jamek. Potažení těsnicí páskou a inkubace přes noc při teplotě 37°C. lx promytí 250 μΐ promývacího pufřu a sušení po dobu 2 hodin při teplotě 37°C v suchém inkubátoru. Skladování potažených destiček v uzavřené nádobě při teplotě 4°C

2. Reakce s tyrosinkinázou:

-příprava inhibičních roztoků ve čtyřnásobné koncentraci ve 20% DMSO ve vodě.

-příprava reakčního pufřu

-příprava enzymového roztoku tak, aby požadované jednotky byly v 50 μΐ, např. pro KDR 1 ng/μΐ z celkových 50 ng/jamka při reakcích. Skladování v ledu.

-příprava 4xATP roztoku s koncentrací 20 μΜ ze 100 mM zásobního roztoku ve vodě. Skladování v ledu.

-přidání 50 μΐ enzymového roztoku na jamku (typicky 5-50 ng enzymu na jamku v závislosti na specifické aktivitě kinázy)

-přidání 25 μΐ 4 x inhibitoru -přidání 25 μΐ 4 x ATP při stanovení inhibice -inkubace při pokojové teplotě po dobu 10 minut -zastavení reakce přidáním 50 μΐ 0,05N HCl/jamka -promytí destiček **Finální koncentrace při reakci: 5 μΜ ATP, 5% DMSO

3. Navázání protilátek

-zředění 1 mg/ml alikvótního podílu PY20-HRP (Pierce) protilátky (fosfotyrosinová protilátka) na 50 ng/ml v 0,1 % BSA v PBS 2-krokovým zředěním (100 x, pak 200x) -přidání 100 μΐ Ab/jamka. Inkubace při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Inkubace při teplotě 4°C po dobu 1 hodiny.

-4x promytí destiček

4. Značení

-příprava substrátu TMB a přidání 100 μΙ/jamka

-monitoring OD při 650 nm, dokud se nedosáhne hodnoty 0,6

-zastavení reakce pomocí 1M fosforečné kyseliny. Třepání na detektoru destiček.

·· ···· • · · • · · • · · · ♦ · ·· ·'·· • ·· ·· · ···· • · • · • · ··· ·· • · · ··

-okamžité měření OD při 450 nm

Optimální inkubační časy a podmínky enzymové reakce se mohou nepatrně lišit a jsou empiricky stanoveny pro každou šarži.

Pro Lek byl za obdobných podmínek používán reakční pufr o složení 100 mM MOPSO, pH 6,5, 4 mM MnCl₂,20 mM MgCl₂, 5 mM DTT, 0,2% BSA, 200 mM NaVO₄.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být terapeuticky účinné při léčení onemocnění zahrnujících jak dosud identifikované, včetně těch, které zde nejsou uvedeny, tak i dosud neidentifikované proteinové tyrosinkinázy, které jsou inhibovány sloučeninami obecného vzorce (I). Všechny zde uvedené sloučeniny vykazovaly výraznou inhibici buď FGFR, PDGFR, KDR, Tie-2, Lek, Fyn, Blk, Lyn nebo Src při koncentracích 50 mikromol nebo nižších. Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu také výrazně inhibovaly další tyrosin nebo serin/threoninkinázy, např. cdc2 (cdk 1) při koncentracích 50 mikromol nebo nižších.

Původ Cdc2

Lidský rekombinantní enzym a testovací pufr mohou být získány z komerčních zdrojů (New England Biolabs, Beverly, MA. USA) nebo standardními způsoby purifikovány ze známých přírodních nebo rekombinantních zdrojů.

Testy s Cdc2

V postupu byla používána mírně modifikovaná činidla získaná z komerčních zdrojů. Reakce byla prováděna v pufru o složení 50mM Tris pH 7^5, 100 mM NaCl, 1 mM EGTA, 2 mM DTT, 0,01% Brij, 5% DMSO a 10 mM MgCl₂ (komerční pufr) suplementovaný čerstvým 300 μΜ ATP (31 μ(3ί/ιη1) a 30 ^g/ml IIIss typu histon jako finální koncentrace. Reakční objem činil 80 μΐ s obsaženými jednotkami enzymu. Reakce probíhala 20 minut při teplotě 25°C za přítomnosti nebo absence inhibitoru a byla ukončena přidáním 120 μΐ 10% octové kyseliny. Substrát byl separován od neinkorporované značky nanesením směsi na fosfocelulosový papír a 5 minutovým promytím (3 x 75 mM fosforečné kyseliny). Impulsy byly měřeny za přítomnosti kapalného scintilátoru na přístroji měřícím beta-záření. Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu výrazně inhibovaly cdc2 při koncentracích 50 μΜ nebo nižších.

Původ PKC kinázy

Katalytická podjednotka PKC může být získána z komerčních zdrojů (Calbiochem).

Testy s PKC kinázou

Byl použit postup radiochemického stanovení kináz podle Yasuda, I., Kirshimoto, A., Tanaka, S., Tominaga, M., Sakurai, A., Nishizuka, Y. Biochemical and Biophysical Research Communication 3:166, 1220-1227 (1990). Veškeré reakce byly prováděny v kinázovém pufru sestávajícím se z 50 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 2 mM DTT, mM EGTA, 100 μΜ ATP, 8 μΜ peptidu, 5% DMSO and ³³P ATP (8 Ci/mM). Sloučenina a enzym byly smíchány v reakční baňce a reakce byla iniciována přidáni ATP a substrátové směsi. Po terminaei reakce přidáním 10 μΐ pufru zastavujícího reakci (5 mM ATP v 75 mM fosforečné kyseliny), byl určitý podíl směsi nanesen na fosfocelulosový pufr. Nanesené vzorky byly promývány (3x) v 75 mM fosforečné kyseliny při pokojové teplotě po dobu 5 až 15 minut. Inkorporace radioaktivní značky byla stanovena měřením kapalné scintilace.

Původ enzymu Erk2

Rekombinantní myšší enzym a testovací pufr mohou být zakoupeny z komerčních zdrojů (New England Biolabs, Beverly MA. USA) nebo standardními způsoby purifíkovány z přírodních nebo rekombinantních zdrojů.

Testy s enzymem Erk2

Reakce byla prováděna v pufru sestávajícím se z 50 mM Tris pH 7^5,1 mM EGTA, mM DTT, 0,01% Brij, 5% DMSO a 10 mM MgCl₂ (komerční pufr) suplementovaném čerstvým 100 μΜ ATP (31 μΟ/ιηΙ) a 30 μΜ myelinového bazického proteinu za podmínek, které jsou doporučovány dodavatelem. Reakční objemy a způsob testování inkorporované radioaktivní značky jsou popsány u testů s PKC (vide supra).

In vitro modely aktivace T-buněk

Po aktivaci mitogenu nebo antigenu jsou T-buňky indukovány k sekreci IL-2, což je růstový faktor, který podporuje jejich následnou proliferační fázi. Proto lze měřit buď produkci IL-2 nebo buněčnou proliferaci primárních T-buněk nebo příslušných linií

T-buněk jako náhrad za aktivaci T-buněk. Oba tyto testy a jednotlivé parametry jsou dobře popsány v literatuře (v Current Protocols in Immunology, Vol 2, 7.10.1-7.11.2).

T-buňky mohou být aktivovány kokultivací s allogenním stimulátorem buněk, proces, který je označovaný jako nevratná směsná reakce lymfocytu. Respondér a stimulátor pefifemích krevních monocytů jsou purifikovány Ficoll-Hypaque gradientem (Pharmacia) podle návodu dodavatele. Stimulátorové buňky jsou mitoticky inaktivovány reakcí s mitomycinem C (Sigma) nebo zářením gama. Respondérové a stimulátorové buňky jsou kokultivovány v poměru 2:1 za přítomnosti nebo absence testované sloučeniny. Typicky 10⁵ respondérů je smícháno s 5 x 10⁴ stimulátory a naneseno (v objemu 200 μΐ) do mikrotitrační destičky se dnem do U (Costar Scientific). Buňky jsou kultivovány vRPMI 1640 suplementováném buď fetálním bovinním sérem (Hyclone Laboratories) inaktivovaným záhřevem nebo poolovým lidským AB sérem od mužských dárců, 5 x 10'⁵M 2-merkaptoethanol a 0,5% DMSO. Jeden den před odběrem (typicky tři dny) bylo do kultur zabudováno 0,5 pCi ³H thymidinu (amersham). Kultury byly odebírány (Betaplate harvester, Wallac) a uptake izotopu byl vyhodnocen pomocí kapalné scintilace (Betaplate, Wallac).

Stejný kultivační systém byl používán pro stanovení aktivace T-buněk měřením produkce IL-2. Osmnáct až dvacetčtyři hodin po iniciaci kultivace byl odstraněn supematant a koncentrace IL-2 byla měřena metodou ELIS A (R a D systémy) podle návodu dodavatele.

In vivo modely aktivace T-buněk

In vivo účinnost sloučenin může být testována na zvířecích modelech přímým měřením aktivace T-buněk nebo T-buněk, u kterých byly prokázány efektory. T-buňky mohou být aktivovány in vivo ligací konstantní části receptoru T-buněk s monoklonální protilátkou anti-CD3 (Ab). V tomto modelu bylo myším BALB/c 2 hodiny před vykrvácením intraperitoneálně podáno 10 pg anti-CD3 Ab. Zvířata, která měla obdržet

testované léčivo, byla předem ošetřena jednorázovou dávkou sloučeniny jednu hodinu před podáním anti-CD3 Ab. Sérové hladiny protizánětlivých cytokinů interferonu-γ (IFN-γ) a faktoru-α (TNF-a) nádorové nekrózy, indikátorů aktivace T-buněk, byly měřeny metodou ELIS A. Podobný model využívá in vivo aktivaci T-buněk se specifickým antigenem, např. hemokyanin kuželnatky (KLH), a následnou sekundární in vitro expozici drénovaných buněk mízní uzliny stejnému antigenu. Jak je uvedeno výše, ke stanovení stavu aktivace kultivovaných buněk bylo používáno měření produkce cytokinů. V nultý den byly myši C57BL/6 subkutánně imunizovány 100 pg KLH emulzifikovaného v kompletním Freundově adjuvans (CFA). Zvířata byla jeden den před imunizací a následně první, druhý a třetí den po imunizaci předem ošetřena sloučeninou. Drénované mízní uzliny byly čtvrtý den odebírány a jejich buňky kultivovány v množství 6 x 10⁶ na ml v médiu ke kultivaci tkáně (RPMI 1640 suplementované fetálním bovinním sérem inaktivovaným záhřevem (Hyclone Laboratories 5 x 10'⁵ M 2-merkaptoethanolu a 0,5% DMSO) po dobu 24 i 48 hodin. V kultivačních supematantech pak byl stanoven růstový faktor Interleukin-2 (IL-2) autokrinních T-buněk a/nebo hladiny IFN-γ metodou ELIS A.

Sloučeniny mohou být také testovány na zvířecích modelech simulujících lidské onemocnění, např. experimentální autoimunitní encefalomyelitida (EAE) a kolagenem indukovaná artritida (CIA). EAE modely, které mimikují aspekty lidské roztroušené sklerózy byly popsány u myší i potkanů (recenzováno FASEB J. 5:2560-2566, 1991 myšší model: Lab. Invest. 4(3):278, 1981; model na bázi hlodavce: J. Immunol. 146(4):1163-8, 1991). Myši a potkani byly imunizovány emulzí myelinového bazického proteinu (MBP) nebo jeho neurogenními peptidovými deriváty a CFA. Akutní onemocnění může být indukováno přidáním bakteriálních toxinů, např. bordetella pertussis. Relapsující/ustupující onemocnění je indukováno adoptivním přenosem T-buněk ze zvířat imunizovaných MBP/peptidem.

CIA může být indukována u myší DBA/1 imunizací kolagenem typu II (J. Immunol: 142(7):2237-2243), čímž se vyvolají známky artritidy již deset dnů po expozici antigenu, které mohou být evidentní i devadesát dnů po imunizaci. U EAE i CIA modelů může být sloučenina podávána buď proíylakticky nebo v době propuknutí onemocnění. Účinná léčiva by měla redukovat sílu a/nebo rozsah onemocnění.

Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu, které inhibují jednu nebo více angiogenních receptorových PTK a/nebo proteinkinázu, např. lek účastnící se

zprostředkování zánětlivých odpovědí, mohou u těchto modelů redukovat sílu nebo rozsah artritidy.

Sloučeniny mohou být také testovány na myšších modelech aloimplantátu kůže (recenzováno vAnn. Rev. Immunol., 10:333-58, 1992; Transplantation: 57(12):170117D6, 1994) nebo srdce (Am. J. Anat.: 113:273,1963). Kompletní epidermální štěpy byly transplantovány z myší C57BL/6 myším BALB/c. Štěpy mohou být počínaje šestým dnem kvůli rejekci denně sledovány. U myššího modelu neonatálního transplantátu srdce, jsou neonatální srdce ektopicky transplantovány z myší C57BL/6 do ušních boltců dospělých myší CBA/J. Srdce začíná pracovat čtyři až sedm dní po transplantaci a rejekce může být zkoumána vizuálně disekujícím mikroskopem za účelem sledování přerušení činnosti srdce.

Testy s buněčnými receptorovými PTK

Ke stanovení míry aktivity a účinku různých sloučenin podle předloženého vynálezu na KDR/VEGFR2 byl používán následující buněčný test. Podobné testy receptorových PTK využívající stimulaci specifického ligandu mohou být společšně se stejnými buněčnými liniemi využívány u dalších tyrosinkináz.

VEGF-indukovaná fosforylace KDR u lidských endotheliálních buněk pupečníkové žíly (HUVEC) může být měřena Western blottingem:

1. Buňky HUVEC(Od poolových donorů) byly zakoupeny u Clonetics (San Diego, CA) a kultivovány podle návodu dodavatele. Pro tyto testy byly používány pouze časné pasáže (3-8). Buňky byly kultivovány ve 100 mm nádobách (Falcon for tissue culture; Becton Dickinson; Plymouth, England) kompletním EBM médiem (Cionetics).

2. Pro testy inhibiční aktivity sloučenin byly buňky trypsinovány a naočkovány v množství 0,5-1,0 x 10⁵ buněk/jamka do každé jamky klastrovaných destiček (6 jamek každá) (Costar; Cambridge, MA).

3. 3-4 dny po naočkování bylo u 90-100% destiček pozorován souvislý nárůst. Médium bylo ze všech jamek odstraněno, buňky byly promývány 5-10 ml PBS a inkubovány 18-24 hodiny s 5 ml EBM základního média bez žádných přidaných suplementů (tzn. starvace séra).

4. K buňkám bylo přidáno sériové zředění inhibitorů v 1 ml média EBM (25 μΜ, 5 μΜ nebo 1 μΜ konečné koncentrace) a buňky byly inkubovány po dobu 1 hodiny

při teplotě 37°C. Poté byla přidána do všech jamek lidská rekombinantní VEGF 165 (R & D Systems) ve 2 ml média EBM v konečné koncentraci 50 ng/ml a v inkubaci se při teplotě 37°C pokračovalo po dobu 10 minut. Ke stanovení pozadí fosforylace a fosforylačm indukce VEGF byly používány kontrolní buňky ošetřené nebo neošetřené VEGF. Všechny jamky pak byly promývány 5-10 ml studeného PBS obsahujícího 1 mM orthovanadátu sodného (Sigma). Buňky byly lyžovány a setřeny ve 200 μΐ pufru RIPA (50mM Tris-HCl) pH 7, 150 mM NaCI, 1% NP-40, 0,25% deoxycholátu sodného, 1 mM EDTA) obsahujícího inhibitory proteázy (PMSF 1 mM, aprotinin 1 pg/ml, pepstatin 1 μg/ml, leupeptin 1 pg/ml, Na vanadat 1 mM, Na fluorid lmM) a 1 μg/ml Dnase (veškeré chemikálie byly zakoupney u Sigma Chemical Company, St Louis, MO). Lyžát byl kvůli eliminaci jader centrifugován při 14000 ot./min. po dobu 30 minut.

Ekvivalentní množství proteinů pak bylo precipitováno přidáváním studeného (-20°C) ethanolu (2 objemy) po dobu minimálně 1 hodiny nebo maximálně přes noc. Pelety byly rekonstituovány ve vzorkovém pufru Laemli obsahujícím 5% 2-merkaptoethanol (BioRad Hercules, CA) a zahřívány po dobu 5 minut. Proteiny byly znovu chromatografovány gelovou elektroforézou na polyakrylamidoskupinyvém gelu (6%, l,5mm Novex, San Deigo, CA) a přeneseny do nitrocelulosové membrány pomocí systém Novex. Po blokaci bovinním sérumalbuminem (3%) byly proteiny při teplotě 4°C značeny polyklonální protilátkou anti-KDR (C20, Santa Cruz Biotechnology; Santa Cruz, CA) nebo monoklonální protilátkou antifosfotyrosin (4G10, Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY). Po promytí a inkubaci s HRP-konjugováným F(ab)₂ kozí protikráličí nebo kozí protimyší IgG byly jednotlivé pásy vizualizovány emisní chemiluminiscencí (ECL)(Amersham Life Sciences, Arlington Height, IL). Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu výrazně inhibovaly fosforylaci buněčné KDR tyrosinkinázy indukovanou VEGF při koncentracích nižších než 50 μΜ.

In vivo model dělohy edému

Při tomto testu byla měřena schopnost sloučenin inhibovat akutní přírůstek hmotnosti dělohy u myší, který se objevil v prvních několika hodinách po stimulaci estrogenem. Je známo, že tento rychlý přírůstek hmotnosti dělohy je způsobem edémem v důsledku zvýšené permeability uterinní vaskularity. Cullinan-Bove a Koss (Endocrinology (1993), 133; 829-837) ukázali podobný dočasný vztah mezi uterinním edémem stimulovaným estrogenem a zvýšenou expresí VEGF mRNA v děloze. Tyto výsledky bylo potvrzeny použitím neutralizační monoklonálních protilátky vůči VEGF, která výrazně redukovala akutní přírůstek hmotnosti dělohy po stimulaci estrogenem (WO 97/42187). Proto může tento systém sloužit jako model pro in vivo inhibicí VEGF signalizace a související hyperpermeability a edému.

Látky: Všechny hormony byly zakoupeny u firmy Sigma (St. Louis, MO) nebo Cal Biochem (La Jolla, CA) jako lyofilizované prášky a připravené podle návodu dodavatele. Nosičové komponenty (DMSO, Cremaphor EL) byly zakoupeny u firmy Sigma (St. Louis, MO).

Myši (Balb/c, 8-12 týdnů staré) byly zakoupeny u firmy Taconic (Germantown, NY) a přechovávány s vyloučením pathogenů v zařízení k tomu určném a podle „institutional Animal Care and Use Committee Guidelines“

Způsob:

1.den: myším Balb/c byla intraperitoneálně (i.p.) podána injekce 12,5 jednotek gonadotropinu ze séra březích klisen (PMSG),

3. den: myším bylo podáno 15 jednotek lidského chorogonadotropinu (hCG) i.p.

4. den: myši byly náhodně rozděleny do skupin o 5-10 kusech. Testovaná sloučeniny byla podávána i.p., i.v. nebo p.o. způsobem, který závisel na rozpustnosti nosiče v dávkách v rozmezí 1-100 mg/kg. Kontrolní skupina obdržela pouze nosič a dvě skupiny nebyly ošetřovány.

Po 30 minutách experimentu byla kontrolní skupině a jedné z neošetřo váných skupin podána i.p. injekce 17-estradiolu (500 pg/kg). Po 2-3 hodinách byla zvířata usmrcena inhalací CO2. Po incizi vedené ve střední linii byla izolována každá děloha a odstraněna řezem vedeným pod krčkem (cervix) a v místě spojení dělohy a vejcovodů. Tlustá a pojivová tkáň byla opatrně odstraněna tak, aby se před vážením (vlhká váha) neporušila intergrita dělohy. Z děloh byla tlakem mezi dvěma filtračními papíry s jednolitrovou skleněnou láhví naplněnou vodou odstraněna tekutina. Dělohy byly po odstranění tekutiny zváženy (hmotnost po odstranění tekutiny). Rozdíl v hmotnosti před a po odstranění tekutiny byl stanoven jako množství tekutiny v děloze. Průměry obsah vody ošetřovaných skupin byl porovnáván s neošetřovanými nebo kontrolními skupinami. Statistické parametry byly stanoveny podle Studentského testu. Ke sledování odpovědi na estradiol byla používána nestimulovaná kontrolní skupina.

Výsledky demonstrují, že některé sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují tvorbu edému, pokud j sou systematicky podávány různými způsoby.

Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu, které jsou inhibitory angiogenních receptorovýcb tyrosinkináz mohou také vykazovat aktivitu na modelu neovaskularizace Matrigelového implantátu. Model neovaskularizace Matrígelu zahrnuje tvorbu nových krevních cév bez subkutánně implantované „mramorové“ extracelulámí matrix, která je indukována přítomností proangiogenního faktoru produkovaného nádorovými buňkami (viz: Passaniti, A., et al., Lab. Investig. (1992), 67 (4), 519528; Anat. Rec. (1997), 249 (1), 63-73; Int. J. Cancer (1995), 63 (5), 694-701; Vasc. Biol. (1995), 15 (11), 1857-6). Model je výhodně použitelný v průběhu 3-4 dnů a výstupy zahrnují makroskopické optické/obrazové vyhodnocení neovaskularizace, mikroskopické stanovení hustoty mikrocév a stanovení množství hemoglobinu (Drabkinova metoda) a následně odstranění implantátu proti kontrolám na zvířatech neošetřovaných inhibitory. V daném modelu lze jako stimulans alternativně používat bFGF nebo HGF.

Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu, které inhibují jednu nebo více onkogenních, protoonkogenních nebo na proliféraci závisejících proteinkináz nebo angiogenní receptorové PTK také inhibují růst primárních myších, potkaních nebo lidských xenoimplantátových nádorů u myší nebo inhibují metastázy na myšších modelech.

' · ·

Příklady provedení vynálezu

Meziprodukt 1

4-(4-amino-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl)benzaldehyd

Směs 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (3,00 g, 11,5 mmol) a hydridu sodného (60%, 0,506 g, 12,6 mmol) v DMF (50 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny, pak se přidá 4-fluorbenzaldehyd (1,36 ml, 12,6 mmol). Reakční směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 21 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje DMF (30 ml) a etherem (30 ml), suší, čímž se získá 4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)benzaldehyd ve formě hnědé pevné látky (2,80 g, 7,61 mmol): ’H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 10,03 (1H, s), 8,46 (2H, d, J - 8,4 Hz), 8,39 (1H, s), 8,09 (2H, d, J = 8,8 Hz); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 μιη, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 mi/min). R_t 9,71 min. MS: MH⁺ 365,8.

Meziprodukt 2

NI - {4- [4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -y 1]-2-methoxy fenyl} 2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs 4-(4-amino-3-j od-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl)benzaldehydu (0,400 g, 1,09 mmol), Ni -[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluor4-(trifluormethyl)benzamidu (0,735 g, 1,20 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,127 g, 0,110 mmol) a uhličitanu sodného (0,279 g, 2,63 mmol) v DME (10 ml) a vodě (10 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 1 hodiny. Přidá se další NI-[2-methoxy-4-(4,4,5,5tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluor-4-(triíluormethyl)benzamid (0,026 g, 0,059 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 4 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a filtruje. Zbylý pevný podíl se promyje methanolem (50 ml) a DMF (50 ml) a spojené filtráty se koncentrují, čímž se získá yVl-{4-[4-amino-l-(4formylfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2-fluor-4(trifluormethyl)benzamid ve formě béžové pevné látky (0,402 g, 0,730 mmol): ‘H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 10,05 (1H, s), 9,96 (1H, d, J = 4,0 Hz), 8,62 (ΙΉ,-d, J = 8,4 Hz),

8,46 (1H, s), 8,39 (1H, d, J = 6,8 Hz), 8,12 (2H, d, J = 8,8 Hz), 8,02-8,03 (1H, m), 7,848,00 (1H, m), 7,75-7,77 (1H, m), 7,51 (1H, s), 7,43 (1H, d, J = 8,0 Hz), 3,97 (3H, s); RPHPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 12,46 min. MS: MH⁺ 551,2.

Meziprodukt 3

2-(4-amino-3-jod-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1-yl)-1-ethanol

Do roztoku 3-jod-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminu (5,00 g, 19,1 mmol) v DMF (40 ml) se přidá hydrid sodný (60%, 1,53 g, 38,3 mmol) a reakční směs se míchá po dobu 20 min. Přidá se 2-bromethanol (1,50 ml, 21,1 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 50°C po dobu 18 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje, čímž se získá hnědá kaše. Přidá se ledová voda (50 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací, promyje vodou (50 ml) a etherem (50 ml), suší za vakua, čímž se získá 2“(4-amino-3-jod-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yI)-l-ethanol ve formě béžové pevné látky (4,30 g, 14,1 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,19 (1H, s), 4,84 (1H, t, J = 5, 8 Hz), 4,30 (1H, t, J = 5,8 Hz) a 3,77 (2H, app q, J = 5,6 Hz); RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 7,35 min.

Meziprodukt 4

2-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(1-methyl-17/-2-indolyl)karbonyl]amino} fenyl)-1/7pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl]ethyl-methansulfonát

Do směsi 7V2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxyethyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl]2-methoxyfenyl}-l-methyl-177-2-indolkarboxamidu (0,343 g, 0,750 mmol) a pyridinu (7,5 ml) o teplotě 0°C se přidává po kapkách v průběhu 30 sekund methansulfonylchlorid (0,14 ml, 1,8 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 2 hodin, pak se přidá ledová voda (10 ml). Precipitát se spojí filtrací a suší za vakua, čímž se získá 2-[4-amino3 -(3 -methoxy-4- {[(1 -methyl-177-2-indolyl)karbonyl]amino } fenyl)-177-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-l-yl]ethyl-methansulfonát ve formě béžové pevné látky (0,268 g, 0,500 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (1H, s), 8,30 (1H, s), 8,13 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,70 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,31-7,38 (4H, m), 7,15 (1H, t, J =

7,6 Hz), 4,70 (3H, s), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,37 (2H, stíněné píky vody) a 3,12 (2H, s); RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu l 5 min 1 ml/min). R_t 11,22 min. MS: M+ 536,2.

Přikladl

NÍ -(4- {4-amino-1 - [4-(morfolinomethyl)fenyl] -1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs 7/1 -{4-[4-amino-l -(4-formylfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), morfolinu (0,024 ml, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,409 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidají se další podíly morfolinu (0,012 ml, 0,14 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (0,043 g, 0,20 mmol) a octové kyseliny (0,016 ml) a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se filtruje, čímž se získá šedá pevná látka, která se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 1060% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 21-23 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá M-(4-{4-amino-l-[4(morfolinomethyl)fenylj -1 77-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2-fluor-4(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,007 g, 0,011 mmol): *H NMR (cUDMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (1H, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,14-8,18 (2H, m), 7,97-8,02 (1H, m), 7,87-7,91 (1H, m), 7,73-7,76 (1H, m), 7,45-7,51 (2H, m), 7,44 (1H, s), 7,38-7,43 (1H, m), 3,41-3,59 (8H, m) a 3,36 (2H, s); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). Rt 11,72 min. MS: MH’ 622,2.

Příklad 2

Ni -[4-(4-amino-1 - {4-[(4-hydroxypiperidino)methyl]fenyl} -177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-monoacetát

Směs 7/1 - {4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 4-hydroxypiperidinu (0,028 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087

g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidají se další podíly 4-hydroxypiperidinu (0,028 g, 0,27 mmol) a přidá se kyselina octová (0,016 ml) a reakční směs se třepe po dobu 24 hodin. Přidá se další 4-hydroxypiperidin (0,033 g, 0,33 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,040 g, 0,19 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 72 hodin, přidá se 1N NaOH (1,5 ml) a žluto-hnědý precipitát se spojí filtrací a purifikuje preparativní RP HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 21-23 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Vl-[4-(4-amino-l-{4-[(4hydroxypiperidino)methyl]fenyl}-lV-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-monoacetát ve formě bílé pevné látky (0,025 g, 0,039 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): ÓH 9,95 (1H, s), 8,35-8,99 (2H, m), 8,14-8,19 (2H, m), 7,99-8,03 (1H, m), 7,89-7,93 (1H, m), 7,75-7,80 (1H, m), 7,39-7,51 (4H, m), 4,55 (1H, s), 3,96 (3H, s), 3,80 (2H, s), 2,68-2,71 (3H, m), 2,04-2,11 (2H, m), 1,85 (3H, s), 1,71-1,76 (2H, m) a 1,39-1,45 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,56 min. MS: MH⁺ 636,2.

Příklad 3

VI - {4- [4-amino-l-(4- {[4-(2-hydroxyethyl)piperazino]methy 1} fenyl)-1V-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs VI - {4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), V-(2-hydroxyethyl)piperazinu (0,035 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 14 hodin. Přidají se další podíly V-(2-hydroxyethyl)piperazinu (0,010 g, 0,077 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,020 g, 0,094 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 16 hodin, přidá se 1N NaOH (1,5 ml) a precipitát se spojí filtrací a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 21,9-22,9 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Vl-{4-[4-amino-l-(4-{[4-(2-hydroxyethyl)piperazino]methyl}-lfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -2-fluor-4(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,034 g, 0,051 mmol): *H NMR (dó·· ···· · · ······ • · · · · · · ·· · ··· · · · ··

DMSO, 400 MHz): ÓH 9,94 (1H, s), 8,35-8,37 (2H, m), 8,15 (2H, d, J = 8,8 Hz), 8,00 (1H, t, J = 8,0 Hz), 7,90 (1H, d, J=10,4Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,49 (1H, s), 7,46 (2H, d, J = 7,2 Hz), 7,40 (1H, d, J = 8,4 Hz), 3,96 (3 H, s), 3,51 (2H, s), 3,46-3,49 (4H, m) a 2,352,44-(8H, m); RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,92 min. MS: MH⁺ 664,7.

Příklad 4

NI - {4-[4-amino-1 -(4- {[4-(2-hydroxyethyl)piperidino]methyl} fenyl)-17/-pyrazolo[3,4</Jpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fIuor-4-(trifluormethyl)benzamid-diacetát

Směs M-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol),

4-piperidinethanolu (0,035 g, 0,27 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) a dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidají se další podíly 4-piperidinethanolu (0,040 g, 0,31 mmol)) a triacetoxyborohydridu sodného (0,053 g, 0,25 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 4 dnů, přidá se 1N NaOH (1 ml) a precipitát se spojí filtrací a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril - 0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 21,1-23,5 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Nl-{4-[4amino-1 -(4- {[4-(2-hydroxyethyl)piperidino]methyl} fenyl)-1 /7-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyI)benzamid-diacetát ve formě bílé pevné látky. (0,015 g, 0,023 mmol): ^]H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, s), 8,18-8,39 (2H, m), 8,14 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,99-8,02 (1H, m), 7,90 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,39-7,48 (4H, m), 4,31-3,96 (3H, s), 3,37 (2H, s), 3,37-3,50 (3H, m), 2,802,83 (2H, m), 1,91 (6H, m), 1,61-1,64 (2H, m), 1,35-1,37 (3H, m) a 1,15-1,18 (2H, m); RPHPLC (Hypersil Cl 8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% aeetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,71 min. MS: MH⁺ 664,2.

Příklad 5

Nl-{ 4-[4-amino-1 -(4- {[3 -(hydroxymethyl)piperidino]methyl} fenyl)-1 //-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-monoacetát ife.,:

100

Směs VI - {4-[4-amino-l -(4-formylfenyl)-1 V-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 3-piperidinmethanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se další 3-piperidinmethanol (0,045 g, 0,39 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,090 g, 0,42 mmol) a reakční směs se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml) a precipitát se spojí filtrací a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin C 18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 21-23 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá VI - {4-[4-amino-1 -(4- {[3 -(hydroxymethyl)piperidino]methyl} fenyl)-1Hpyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidmonoacetát ve formě bílé pevné látky, (0,007 g, 0,11 mmol): ’H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): ÓH 9,95 (1H, s), 8,35-8,39 (2H, m), 8,14-8,17 (2H, m), 8,01-8,03 (1H, m), 7,897,93 (1H, m), 7,757,78 (1H, m), 7,40-7,50 (4H, m), 4,39-4,42 (1H, m), 3,97 (3H, s), 3,393,53 (3H, m), 3,01-3,21 (1H, m), 2,87-2,89 (1H, m), 2,75-2,77 (1H, m), 1,91 (3H, s), 1,611,65 (4H, m), 1,47-1,52 (1H, m) a 0,89-0,92 (1H, m); RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 A, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,73 min. MS: MIÍ 650,2.

Přikládá

VI - {4-[4-amino-l-(4-{[2-(hydroxymethyl)piperidino]methy 1} fenyl)-1 V-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy feny 1} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-monoacetát

Směs Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lV-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol), 2-piperidinmethanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidají se další podíly 2-piperidinmethanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 3 dnů. Přidá se další 2-piperidinmethanol (0,030 g, 0,26 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,073 g, 0,34 mmol), poté octová kyselina (0,1 ml). Reakční směs se třepe po dobu 5 dnů, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje za vakua k odstranění dichlorethanu. Zbytek se rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes Acrodisc syringe-tip filtr a purifikuje preparativní ·« »»#r » · ·· ···· « « « ·· ·· > · ··· · · · · · ··· · · · · ··»· ·· ·· ··· ·*· ·· ··

101

RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 14,6-17,0 minut se spojí, koncentrují a lyofílizují, čímž se získá 7Vl-{4-[4-amino-l-(4-{[2-(hydroxymethyl)piperidino]methyl} fenyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy fenyl} -2fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-monoacetát ve formě bílé pevné látky, (0,026 g, 0,040 mmol): ’H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,91 (1H, s), 8,33-8,37 (2H, m), 8,09-8,14 (2H, m), 7,96-8,00 (1H, m), 7,86-7,89 (1H, m), 7,717,74 (1H, m), 7,37-7,52 (4H, m), 4,46 (1H, bs), 4,10-4,15 (1H, m), 3,94 (3H, s), 3,64-3,67 (1H, m), 3,44-3,48 (1H, m), 2,64-2,69 (2H, m), 2,00-2,07 (1H, m), 1,94 (3H, s), 1,60-1,89 (2H, m) a 1,20-1,40 (4H, m); RPHPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10, 59 min. MS: MH⁺649,7.

Příklad 7

Ni - {4- [4-amino-1 -(4- {[(2-morfolinoethyl)amino]methyl} fenyl)-1 H-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs Ni - {4- [4-amino-1 -(4-formylfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), N-(2-aminoethyl)morfolinu (0,035 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe po dobu 16 hodin při pokojové teplotě. Přidají se další podíly 1 7V-(2-aminoethyl)morfolinu (0,030 ml, 0,23 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 4 dnů. IN NaOH (1 ml) se přidá a precipitát se spojí filtrací a purifíkuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 16,6-19,0 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá jVl-{4-[4-amino-l-(4-{[(2-morfolinoethyl)amino)methyl}fenyl)17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky, (0,014 g, 0,021 mmol): ^]H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,88 (1H, s), 8,29-8,93 (2H, m), 8,11-8,17 (2H, m), 7,92-7,97 (1H, m), 7,83-7,86 (1H, m), 7,68-7,72 (1H, m), 7,46-7,51 (2H, m), 7,39 (1H, s), 7,34-7,38 (1H, m), 3,90 (3H, s), 3,503,52 (4H, m), 2,61-2,62 (2H, m), 2,40-2,50 (2H, stíněný pikem DMSO) a 2,27-2,40 (6H, m); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amcnný v průběhu 15 min, 1 ml/min). Rt 10, 96 min. MS: MH⁺ 665,2.

102

Příklad 8

TVÍ - {4-[4-amino-l-(4- {[4-(hydroxymethyl)piperidino]methyl} fenyl)- 17/-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-diacetát

Směs /'/l-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-íluor-4-(triíluormethyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol),

4-piperidinmethanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidají se další podíly 4-piperidinmethanolu (0,096 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,085 g, 0,40 mmol), poté octová kyselina (0,1 ml). Reakční směs se třepe po dobu 5 dnů, přidá se 1N NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes Acrodisc syringe-tip filtr, pak purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin 08,8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 17,2-18,3 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá/VI-{4[4-amino-1 -(4- {[4-(hydroxymethyl)piperidino]methyl} fenyl)- lí/-pyrazolo[3,4z/jpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluonnethyl)benzamid-diacetát ve formě bílé pevné látky (0,018 g, 0,028 mmol): *H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, s), 8,35-8,37 (2H, m), 8,14 (2H, d, J=8,4 Hz), 8,00 (1H, t, J = 7,0 Hz), 7,90 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,39-7,64 (4H, m), 4,38-4,41 (1H, m), 3,96 (3H, s), 3,50 (2H, s), 2,83 (2H, d, J = 10,8 Hz), 1,90 (6H, s), 1,63 (2H, d, J = 11,6 Hz), 1,34-1,35 (2H, m) a 1,12-1,19 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5% - 100% acetonitril0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,41 min. MS: MH⁺ 650,2.

Příklad 9 jVl-{4-[4-amino-l-(-{[4-(2-methoxyethyl)piperazino]methyl}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4cř]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs /Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-ltf-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluonnethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), l-(2-methoxyethyl)-piperazinu (0,039 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidají se další podíly l-(2-methoxyethyl)-piperazinu (0,10 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,41 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 16

103 hodin, přidá se 1N NaOH (1 ml) a výsledný roztok se extrahuje dvěma podíly dichlormethanu (2 ml pokaždé). Spojené organické podíly se koncentrují, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 16,9-20,2 minut se spojí, koncentruj i a lyofilizují, čímž se získáAT-{4-[4-amino-l-(4-{[4(2-methoxyethyl)piperazino]methyl} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,021 g, 0,031 mmol): 'H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): ÓH 9,94 (1H, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,148,17 (1H, m), 7,98-8,02 (1H, m), 7,89 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,74-7,76 (1H, m), 7,24-7,64 (6H, m), 3,96 (3H, s), 3,51 (2H, s), 3,31-3,43 (2H, m), 3,22 (3H, s) a 2,41-2,45 (10H, m); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-l00% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 11,24 min. MS: MH⁺ 678,7.

Příklad 10 //l-{4-[4-ammo-l-(4-[[(3/?)-3-hydrox$etrahydro-l//-l-pyrrolyl]methyl}fenyl)-l//pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs M-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol), (S)-3-hydroxypyrrolidinu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidají se další podíly (5j-3-hydroxypyrrolidinu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,084 g, t

0,40 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 3 dnů. Přidá se octová kyselina (0,1 ml) a reakční směs se třepe po dobu 4 dnů, přidá se 1N NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje za vakua. Zbytek se rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes Acrodisc syringe-tip filtr a purifikuje preparativní RP HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 16,518,4 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-(4-{[(37?)-3hydroxytetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyljmethyl} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/|pyrimidin-3 -yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,027 g, 0,043 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,89 (1H, s), 8,30-8,33 (2H, m), 8,138,14 (2H, m), 7,90-7,80 (1H, m), 7,84 (1H, d, J = 10,8 Hz), 7,70 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,357,59 (4H, m), 4,64 (1H, bs), 4,14-4,23 (1H, m), 3,91 (3H, s), 3,62 (2H, s), 2,61-2,62 (2H,

104

m), 2,27-2,28 (2H, m), 2,27-2,28 (2H, m), 2,02 (1H, m) a 1,60 (1H, m); RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,41 min. MS: MH⁺ 622,2.

Příklad 11

NI - {4-[4-amino-l-(4- {[(3R)-3-hydroxytetrahydro- iH-1 -pyrrolyl]methyl} fenyl)- 1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs TVÍ - {4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)-177-pyrazolo[3,4-čř]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), (7?)-(+)-3-pyrrolidinolu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidají se další podíly (/?)-(+)-3-pyrrolidinolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,084 g, 0,40 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 16 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml) a precipitát se spojí filtrací a spojí se zbytkem získaným z extrakce vodné vrstvy s jedním podílem dichlormethanu (20 ml). Surová směs se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min). Příslušná frakce se spojí, koncentruje a lyofilizuje, čímž se získá /Vl-{4-[4-aminol-(4- {[(3/?)-3 -hydroxytetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyljmethyl} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,034 g, 0,055 mmol): 'H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (1H, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,15-8,19 (2H, m), 7,98-8,01 (1H, m), 7,85 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,48-7,54 (2H, m), 7,44 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,4 Hz), 4,70 (1H, bs), 4,22 (1H, s), 3,96 (3H, s), 3,63 (2H, s), 2,49-2,72 (3H, m), 2,13-2,41 (1H, m), 1,91-2,06 (1H, m) a 1,531,61 (1H, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0, 1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,53 min. MS: MH⁺

622,2.

Příklad 12 jVI -(4- {4-amino-1 - [4- {([3 -(1 Η-1 -imidazolyl)propyl]amino} methyl)fenyl] -1Hpyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

105

Směs Al - {4- [4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í(]pyrimidin-3 -y 1]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), l-(3-aminopropyl)imidazolu (0,034 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidají se další podíly l-(3-aminopropyl)imidazolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,086 g, 0,40 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 3 dnů. Přidá se kyselina octová (0,1 ml) a reakční směs se třepe po dobu 4 dnů, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes Acrodisc syringe-tip filtr a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 2080% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 14,0-15,7 minut se spojí, koncentrují a lyofilizujf, čímž se získá Al-(4-{4-amino-l-[4{ ([3-(1//-1 -imidazolyl)propyl] amino } methyl)feny 1] -1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,040 g, 0,061 mmol): ‘H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): 8H 9,94 (1H, s), 8,35-8,40 (2H, m), 8,16 (2H, d, J = 7,6 Hz), 7,99 (1H, t, J = 7,6 Hz), 7,89 (1H, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (1H, d, J =8,4 Hz), 7,59 (1H, s), 7,52 (2H, d, J = 3,8 Hz), 6,45 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,16 (1H, s), 6,87 (1H, s), 4,04 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,77 (2H, s), 2,45-2,46 (2H, m), 1,91 (3H, s) a 1,86-1,90 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min). R_t 10,28 min. MS: MH⁺

660,2.

Příklad 13

Al - {4- [4-amino-1 -(4- {[(4-hydroxybutyl)amino]methyl} fenyl)-1 /7-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy fenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyI)benzamid

Směs Al-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 4-amino-l-butanolu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe po dobu 3 dnů. Přidají se další podíly 4-amino-l-butanolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,42 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 3 dnů, přidá se kyselina octová (0,1 ml) a reakční směs se třepe po dobu 7 dnů. Přidá se další podíl triacetoxyborohydridu sodného (0,098 g, 0,46 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 16 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs

106 se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes Acrodisc syringe-tip filtr a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 12,5-14,8 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Nl-{4-[4-amino-l-(4-{[(4hydroxybutyl)amino]methyl}fenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-<L|pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky, (0,030 g, 0,048 mmol): 'H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, d, J = 4,4 Hz), 8,35-8,40 (2H, m), 8,17 (2H, d, J = 8,0 Hz), 8,00 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,90 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 7,2 Hz), 7,53-7,57 (2H, m), 7,45 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,8 Hz), 3,96 (3H, s), 3,83 (2H, s), 3,39 (2H, t, J = 6,2 Hz), 2,45-2,50 (2H, m) a 1,45-1,51 (4H, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). Rt 9,93 min. MS: MH⁺ 624,3.

Příklad 14

NI - {4-[4-amino-1 -(4- {[(3 -methoxypropyl)amino]methyl} fenyl)- 17f-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs 7Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 3-methoxypropylaminu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidají se další podíly 3-methoxypropylaminu (0,1 ml, 1 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,085 g, 0,40 mmol) a směs se třepe po dobu 3 dnů, octová kyselina (0,1 ml) se přidá a reakční směs se třepe po dobu 4 dnů. Přidá se další podíl triacetoxyborohydridu sodného (0,100 g, 0,470 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 16 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes Acrodisc syringe-tip filtr a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 2080% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 18,0-19,7 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-(4-{((3methoxypropyl)amino]methyl}fenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,009 g, 0,014 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (1H, s), 8,33-8,38 (2H, m), 8,188,20 (2H, m), 7,97-8,01 (1H, m), 7,87-7,91 (1H, m), 7,73-7,76 (1H, m), 7,54-7,64 (5H, m),

107

7,31-7,45 (2H, m), 3,95 (3H, s), 3,85-3,89 (2H, m), 3,38 (2H, s), 2,55-2,68 (2H, m) a 1,701,74 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-Í00% acetonitril 0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,58 min. MS: MH⁺ 624,2.

Příklad 15

NI -(4- {4-amino-1 -[4- {([3 -(dimethylamino)propyl]amino} methyl)fenyl] -1 //-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluonnethyl)benzamid-monoacetát

Směs Ari-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), /V,TV-dimethyl-l,3-propandiaminu (0,028 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidají se další podíly A,A-dimethyl-l,3-propandiaminu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,085 g, 0,40 mmol) a směs se třepe po dobu 3 dnů, přidá se octová kyselina (0,1 ml) a směs se třepe po dobu 4 dnů. Přidá se triaeetoxyborohydrid sodný (0,096 g, 0,45 mmol) a směs se třepe po dobu 16 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpust9 v DMF (2 ml), filtruje přes Acrodisc syringe-tip filtr a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 20-80% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 14,3-14,9 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Al-(4-{4-amino-l-[4-{([3(dimethylamino)propyl]amino} methyl)fenyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-y 1} -2methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-monoacetát ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,031 mmol): ‘Η NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (1H, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,13 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,00 (1H, t, J=7,2Hz), 7,89 (1H, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (1H, d, J=7,6Hz), 7,49 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,44 (1H, s), 7,39 (1H, d, J = 8,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,74 (2H, s), 2,21-2,25 (2H, t, J = 7,0 Hz), 2,09 (6H, s), 2,08 (3H, s), 1,86-1,87 (4H, m) a 1,541,58 (2H, t, J = 7,2 Hz); RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,85 min. MS: MH⁺

637,3.

108

Příklad 16

Methyl-(25)-2-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]benzyl}amino)-3-(4//-4imidazolyl)propanoát

Směs M-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), dihydrochloridu methylesteru L-histidinu (0,046 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0, 087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidají se další podíly dihydrochloridu methylesteru L-histidinu (0,100 g, 0,59 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,085 g, 0,40 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 2 dnů, přidá se IN NaOH (1 ml) a hnědý precipitát se spojí filtrací. Filtrát se extrahuje dichlormethanem (5 ml) a organický extrakt se koncentruje a spojí s výše zmíněnou hnědou pevnou látkou. Surová směs se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M oetan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluující při 18,9-20,5 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá methyl-(25)-2-({4-[4-amino-3-(4- {[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoyl]amino}-3methoxyfenyl)- 177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 -yljbenzyl} amino)-3 -(477-4imidazolyljpropanoát ve formě bílé pevné látky, (0,029 g, 0,041 mmol): *H NMR (cLDMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, s), 8,35-8,38 (2H, m), 8,13 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,99-8,02 (1H, m), 7,90 (1H, d, J = 10,8 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,51 (1H, s), 7,39-7,45 (5H, m), 6,78 (1H, bs), 3,96 (3H, s), 3,82 (1H, d, J = 14,0 Hz), 3,59 (3H, s), 3,47 (1H, t, J = 6,4 Hz), 2,80-2,89 (2H, m) a 1,91 (3H, s); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). Rt 11,15 min. MS: MH⁺ 704,2.

Příklad 17

AI. {4-[4-amino-l -(4- {[(2-methoxyethyl)amino]methyl} fenyl)-177-pyrazolo[3,4Jjpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs JVl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 2-methoxyethylaminu (0,018 g, 0,24 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného

109

(0,106 g, 0,500 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, přidá se 1N NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes Acrodisc syringe-tip filtr a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 rnl/min); frakce eluujíeí při 15,0-16,2 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá NI - {4-[4-amino-l-(4- {[(2-methoxyethyl)amino]methyl} fenyl)-17/-pyrazolo[3,4ňQpyrimidin-3-yl]-2-methoxy fenyl }-2-ťluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,010 g, 0,016 mmol): 'H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, d, J = 4,0 Hz), 8,35-8,37 (2H, m), 8,16 (2H, d, J = 8,0 Hz), 8,01 (1H, t, J 7,4 Hz), 7,90 (1H, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,52 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,45 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,8 Hz), 3,96 (3H, s), 3,80 (2H, s), 3,42-3,45 (2H, m), 3,25 (2H, m) a 2,70-2,71 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,23 min. MS: MH⁺ 610,2.

Příklad 18

M-(4-{4-amino-l-[4-{([2-(dimethylamino)ethyl]amino}methyl)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4ó/jpyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs Al-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2meťnoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 2) (0,080 g, 0,14 mmol), ΛζΑ-dimethylaminoethylaminu (0,03 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,100 g, 0,472 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, přidá se 1N NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes Acrodisc syringe-tip filtr a purifikuje by RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min); frakce eluujíeí při 16,5-17,8 minut se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá NI -(4-{4-amino-l-[4-{([2(dimethy lamino)ethy 1] amino} methy l)fenyl] -177-pyrazolo [ 3,4-<7]py rimidin-3 -y 1} -2methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,032 mmol): 'H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, d, J = 4,4 Hz), 8,35-8,37 (2H, m), 8,15 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,01 (1H, t, J = 7,8 Hz), 7,90 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,50 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,45 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,77 (2H, s), 2,59 (2H, t, J = 6,6 Hz), 2,35 (2H, t, J = 6,6 Hz) a 2,12 (6H, s); RP-HPLC

110 (Hypersil 08, 5 μπι, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 mi/min). R_t 10,85 min. MS: MH⁺623,2.

Příklad 19

NI - {4- [4-amino-1 -(2-hydroxyethyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl] -2-methoxy fenyl} 2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs 2-(4-amino-3-j od-177-pyrazolo [3,4-ňř]pyrimidin-l-yl)-l-ethanolu (meziprodukt 3) (0,120 g, 0,393 mmol), M-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (0,190 g, 0,433 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,045 g, 0,039 mmol) a uhličitanu sodného (0,100 g, 0,943 mmol) v DME (3,9 ml) a vodě (3,9 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a organické rozpouštědlo se odstraní za vakua. Precipitát se spojí filtrací, promyje vodou (20 ml) a etherem (20 ml), suší za vakua, čímž se získá AT-{4-[4-amino-l -(2-hydroxyethyl)- 17/-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě hnědé pevné látky (0,125 g, 0,254 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,89 (ÍH, d, J = 4,0 Hz), 8,31 (ÍH, d, J=8,0Hz), 8,25 (ÍH, s), 7,99 (ÍH, t, J=7,4Hz), 7,89 (ÍH, d, J= 10,4 Hz), 7,75 (ÍH, d, J=8,0Hz), 7,34 (ÍH, s), 7,31 (ÍH, d, J=8,4 Hz), 4,89 (ÍH, s), 4,40 (2H, t, J = 5,6 Hz), 3,94 (3H, s) a 3,86 (2H, t, J = 5,6 Hz); RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%100% acetonitril -0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). Rt 9,85 min. MS: MH⁺491.

Příklad 20

W2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxyethyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Směs 2-(4-amino-3-j od-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-l -ethanolu (meziprodukt 3) (0,364 g, l,19mol),/V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,485 g, 1,19 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,138 g, 0,119 mmol) a uhličitanu sodného (0,303 g, 2,86 mmol) v DME (12 ml) a vodě (12 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 4 hodin, pak ochladí na pokojovou teplotu. DME se odstraní za vakua a výsledný precipitát se spojí

111 filtrací a promyje vodou (50 ml) a etherem (50 ml), čímž se získá /V2-{4-[4-amino-l-(2hydroxyethy 1)-177-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1H-2indolkarboxamid ve formě hnědé pevné látky (0,459 g, 1,00 mmol): ’H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (ÍH, s), 8,26 (ÍH, s), 8,12 (ÍH, d, J = 8,0 Hz), 7,70 (ÍH, d, J = 8,0 Hz),

7,59 (ÍH, d, J = 8,4 Hz), 7,29-7,41 (6H, m), 7,15 (ÍH, t, J = 7,4 Hz), 4,90 (ÍH, t, J = 5,8 Hz), 4,41 (2H, t, J = 5,8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s) a 3,86 (2H, q, J = 5,9 Hz); RPHPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,52 min. MS: MH⁺ 458,2.

Příklad 21 jV2-(4- {4-amino-1 - [2-(4-methylpiperazino)ethyl] -1 //-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3 -yl} -2methoxy fenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamid-trimaleát

Směs 2-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(l-methyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]ethyl-methansulfonátu (meziprodukt 4) (0,265 g, 0,495 mmol), /V-methylpiperazinu (0,065 ml, 0,58 mmol) a triethylaminu (0,10 ml, 0,74 mmol) v DMF (5 ml) se zahřívá při teplotě 70°C po dobu 20 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a rozpouštědlo odstraní za vakua. Přidá se voda (25 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací, promyje vodou (25 ml) a etherem (50 ml), suší za vakua, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí chromatografií na sloupci silikagelu. Příslušné frakce se spojí a koncentrují, čímž se získá 7V2-(4-{4-amino-l-[2-(4methylpiperazino)ethyl] -1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methy 1l//-2-indolkarboxamid ve formě béžové pevné látky (0,084 g, 0,16 mmol): *H NMR (d6DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (ÍH, s), 8,26 (ÍH, s), 8,11 (ÍH, d, J = 8,4 Hz), 7,70 (ÍH, d, J = 8,4 Hz), 7,29-7,35 (4H, m), 7,15 (ÍH, t, J = 7,4 Hz), 4,46 (2H, t, J = 6,8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 2,80 (2H, t, J = 6,6 Hz), 2,49-2,50 (2H, stíněný pikem DMSO), 2,23-2,26 (4H, m), 2,12 (3H, s) a 0,97-0,99 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,24. MS: MH⁺540,3.

Do směsi jV2-(4-{4-amino-l-[2-(4-methylpiperazino)ethyl]-l//-pyrazolo[3,4X]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl- l//-2-indolkarboxamidu (0,082 g, 0,15 mmol) v horkém acetátu (2 ml) se přidá roztok kyseliny maleinové (0,053 g, 0,46 mmol) v horkém acetátu (1 ml), čímž okamžitě vznikne precipitát. Reakční směs se nechá > 9

112 vychladnout na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem (5 ml), suší za vakua, čímž se získá A/2-(4-{4-amino-l-[2-(4-methylpiperazino)ethyl]-l//pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 /7-2-indolkarboxamidtrimaleát ve formě béžové pevné látky (0,090 g, 0,10 mmol): Ή NMR (cU-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,45 (1H, s), 8,27 (1H, s), 8,12 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 8,0 Hz),

7,59 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,29-7,36 (4H, m), 7,15 (1H, t, J = 7,4 Hz), 6,17 (6H, s), 4,50 (2H, t, J = 6,4 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,10-3,20 (4H, m), 2,92-2,95 (4H, m), 2,74 (3H, s) a 2,32-2,37 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,48 min. MS: M⁺540,3.

Příklad 22

N2-{4- [4-amino-1 -(2-morfolinoethyl)-1 H-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2methoxvfeny1}-1 -methyl -l//-2-indolkarboxamid-dimaleát

Do směsi 2-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(l-methyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino} fenyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidm-1 -yl]ethyl-methansulfonátu (meziprodukt 4) (0,200 g, 0,373 mmol), triethylaminu (0,052 ml, 0,37 mmol) a jodidu sodného (0,056 g, 0,37 mmol) v DMF (5 ml) se přidá morfolin (0,039 ml, 0,45 mmol). Reakční směs se zahřívá při teplotě 60°C po dobu 60 hodin. Přidá se morfolin (0,100 ml, 1,15 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 30 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za vakua, Přidá se voda (5 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací, promyje vodou (5 ml) a etherem (10 ml), suší za vakua, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí (2x) chromatografií na silikagelu (elucí s 20% MeOH-CHzCh). Příslušné frakce se spojí a koncentrují, čímž se získá béžová pevná látka, která se trituruje z etheru a suší za vakua, čímž se získá /V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoethyl)-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-l//-2-indolkarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,048 g, 0,054 mmol): *H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (1H, s), 8,26 (1H, s), 8,11 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,70 (IH, d, J = 7,6 Hz), 7,58 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,29-7,35 (4H, m), 7,15 (IH, t, J = 7,6 Hz), 4,48 (2H, t, J = 6,4 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,50-3,53 (4H, m), 2,82 (2H, t, J = 6,2 Hz) a 2,47-2,51 (4H, m); ); RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril -0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,02 min. MS: M^1-527,3.

···· ·· ···· « · · • · · • · · · ·· ··

113

Do směsi 7V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoethyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,048 g, 0,091 mmol) v horkém acetátu (2 ml) se přidá roztok kyseliny maleinové (0,021 g, 0,18 mmol) v horkém acetátu (1 ml), čímž okamžitě vznikne precipitát. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem (5 ml), suší za vakua, čímž se získá N2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoethyl)-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin3-yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-l//-2-indolkarboxamid-dimaleát ve formě světle hnědé pevné látky (0,030 g, 0,039 mmol): ^]H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,45 (1H, s), 8,31 (1H, s), 8,15 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,317,35 (4H, m), 7,16 (1H, t, J = 7,4 Hz), 6,17 (4H, s), 4,72-4,73 (2H, m), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,72-3,79 (4H, m) a 3,10-3,30 (6H, stíněné píky vody); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 11,08 min. MS: M⁺527,3.

Příklad 23

NI-[4-(4-amino-1 - {2 - [(2-hydróxyethyl)amino]ethyl} -1 H-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1)2-methoxy fenyl]-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamid-monomaleát

Směs 2-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{ [(1 -methyl-17/-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-17/-pyrazolo[3,4-čZ]pyrimidin-l-yl]ethyl-methansulfonátu (meziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), ethanolaminu (0,05 ml, 0,82 mmol), triethylaminu (0,021 ml, 0,15 mmol) a jodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) se zahřívá při teplotě 70°C po dobu 15 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje. Přidá se voda (5 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací a promyje vodou (5 ml). Surová pevná látka se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí s 20% MeOH-CH₂Cl₂). Příslušné frakce se spojí a rozpouštědlo odstraní za vakua, čímž se získá yV2-[4-(4-amino-l-{2-[(2hydroxyethyl)amino]ethyl) -17/-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-1 methyl-177-2-indolkarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,009 g, 0,02 mmol). RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). Rt 9,39 min. MS: M⁺ 501,3.

Do horkého roztoku /V2-[4-(4-amino-l-{2-[(2-hydroxyethyl)amino]ethyl}-lf/pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu (0,009 g, 0,02 mmol) v ethylacetátu (2 ml) se přidá roztok kyseliny maleinové (0,005 g, 0,04

114 mmol) v ethylacetátu (0,5 ml). Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací a suší za vakua, čímž se získá V2-[4-(4-amino-l-{2-[(2hydroxyethy l)amino] ethyl} -1 V-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -y l)-2-methoxyfeny 1] -1 methyl-lV-2-indolkarboxamid-monomaleát ve formě bílé pevné látky (0,009 g, 0,014 mmol): ’H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): ÓH 9,45 (1H, s), 8,69-8,74 (2H, bs), 8,31 (1H, s), 8,14 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J=8,4 Hz), 7,32-7,36 (4H, m), 7,15 (1H, t, J = 7,4 Hz), 6,07 (2H, s), 5,28 (1H, t, J = 4,2 Hz), 4,71 (2H, t, J = 5,8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,65-3,67 (2H, m), 3,50-3,60 (2H, m) a 3,10-3,20 (2H, m); RPHPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%- 100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 9,97 min. MS: M⁺ 501,3.

Příklad24

V2-(4- {4-amino-1 - [2-(dimethylamino)ethyl]-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-y 1 }-2methoxyfenyl)-1-methyl-lV-2-indolkarboxamid-monomaleát

Směs 2-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(l-methyl-lV-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-lV-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl]ethyl-methansulfonátu (meziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), dimethylaminu (2,0 M v THF, 0,07 ml, 0,15 mmol), triethylaminu (0,021 ml, 0,15 mmol) a jodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) se zahřívá v utěsněné baňce při teplotě 70°C po dobu 15 hodin. Přidá se další roztok dimethylaminu (0,10 ml) a reakční směs se zahřívá při teplotě 70°C po dobu 20 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za vakua. Přidá se voda (5 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací a purifikuje chromatografií na sloupci silikagelu (elucí s 20% MeOH:CH₂Cl₂až 10:30:60 Et3N:MeOH:CH₂Cl₂). Příslušné frakce se spojí a koncentrují, čímž se získá V2-(4- {4-amino-1 - [2-(dimethylamino)ethyl] -1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)-l-methyl-lV-2-indolkarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,009 g, 0,02 mmol). RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitrilO,l M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,52. MS: M⁺485,2.

Do horkého roztoku V2-(4-{4-amino-l-[2-(dimethylamino)ethyl]-lV-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl} -2-methoxy fenyl)-1 -methyl-lV-2-indolkarboxamidu (0,009 g, 0,02 mmol) v ethylacetátu (2 ml) se přidá roztok kyseliny maleinové (0,005 g, 0,04 mmol) v ethylacetátu (1 ml). Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací a suší za vakua, čímž se získá V2-(4-{4-amino-l-[2-(dimethylamino)ethyl]-

115

177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-177-2-indolkarboxamidmonomaleát ve formě bílé pevné látky (0,005 g, 0,008 mmol): ’H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,46 (1H, s), 8,32 (1H, s), 8,15 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 7,6 Hz),

7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,32-7,35 (4H, m), 7,16 (lH, t, J = 7,4 Hz), 6,06 (2H, s), 4,75 (2H, t, J - 6,0 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,65 (2H, t, J = 5,6 Hz) a 2,88 (6H, s); RPHPLC (Hypersil Č18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,08 min. MS: M⁺ 485,2.

Příklad 25

7/2-(4- {4-amino-1 - [2-(1 Η-1 -imidazolyl)ethyl]-177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-l-methyl-177-2-indolkarboxamid-trimaleát

Směs 2-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{ [(1 -methyl- 177-2-indolyl)karbonyl]amino} fenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]ethyl-methansulfonát (meziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), imidazolu-(0,Ol 1 g, 0,15 mmol), triethylaminu (0,021 ml, 0,15 mmol) á jodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) se zahřívá při teplotě 70°C po dobu 15 hodin. Přidá se imidazol (0,011 g, 0,15 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 70°C po dobu 60 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za vakua. Přidá se voda (5 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací, čímž se získá béžová pevná látka, která se vytřepává v horkém ethylacetátu, pak se nechá pomalu vychladnout na pokojovou teplotu. Filtrát se koncentruje, čímž se získá 7/2-(4-{4-amino-l-[2-(177-limidazoly l)ethy 1] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 77-2indolkarboxamid (0,034 g, 0,067 mmol): RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,45 min. MS: M⁺508,2.

Do horké směsi A'2-(4-{4-amino-l-[2-(177-l-imidazolyl)ethyl]-177-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,034 g, 0,067 mmol) v ethylacetátu (2 ml) se přidá roztok kyseliny maleinové (0,016 g, 0,13 mmol) v ethylacetátu (1 ml), čímž se okamžitě vytvoří bílý precipitát. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací a suší za vakua, čímž se získá 7V2-(4- {4-amino-1 -[2-( 177-1 -imidazolyl)ethyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-l-methyl-1/7-2-indolkarboxamid-trimaleát ve formě žluté pevné látky (0,011 g, 0,011 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (1H, s), 8,90 (1H, s),

116

8,20 (1H, s), 8,12 (1H, d, >8,0 Hz), 7,71 (1H, d, >8,0 Hz), 7,58-7,63 (3H, m), 7,32-7,36 (2H, m), 7,24-7,26 (2H, m), 7,16 (1H, t, J = 7,6 Hz), 6,18 (6H, s), 4,85 (2H, t, J = 6,8 Hz), 4,71 (2H, t, J = 5,2 Hz), 4,04 (3H, s) a 4,00 (3H, s); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 15 min, 1 ml/min). R_t10,35 min. MS: M⁺508,2.

Příklad 26 /VI - {4-[4-Amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 7/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Roztok 2-fluor-4-trifluormethyl-l-benzenkarbonylchloridu (0,87 g, 3,83 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidá do směsi pyridinu (15 ml) a 4-[4-amino-3-(4-amino-3m ethoxy feny l)-l/7-pyrazolo [3,4-<V]pyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanonu (1,00 g, 2,56 mmol) v dichlormethanu (5 ml) při teplotě 0°C v průběhu 5 minut. Směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Dichlormethanová vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (2x) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší nad síranem hořečnatým, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v systému Isco, čímž se získá /71-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,95 g, 1,76 mmol) ve formě bílé pevné látky: *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,99 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 5,27 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,70 (m, 2H), 2,47 (m, 4H), 2,17 (m, 2H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6mm; 25%-100% acetonitril - 0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min). Rt 9,23 min. MS: MH⁺543.

Příklad 27

0/Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid: a

117

Příklad 28

7raHS-M-{4-[4-amino-l-(4-rnorfolinocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Do směsi 7Vl-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (0,42 g, 0,78 mmol) a octové kyseliny (0,11 ml, 1,86 mmol) v dichlorethanu (25 ml) se přidá morfolin (0,08 ml, 0,93 mmol). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 10 minut. Přidá se triacetoxyborohydrid sodný (0,23 g, 1,09 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se voda (6 ml), poté hydrogenuhličitan sodný (0,38 g, 4,53 mmol). Směs se míchá po dobu 1 hodiny a organická vrstva se separuje. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (20 ml). Spojené organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v systému Isco, čímž se získáez5-jVl-{4[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl]'2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,23 g, 0,37 mmol) a řrans-Vl-{4-[4amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,09 g, 0,14 mmol) ve formě bílých pevných látek.

Data pro cis-Nl - {4- [4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexy 1)-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, lH), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,83 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,62 (br, 4H), 1,57-2,55 (m, 10H);MS:MH’ 614.

Data pro trans-Nl - { 4- [4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexy 1)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid: 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,99 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 4,67 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,59 (br, 4H), 1,48-2,69 (m, 10H); MS: ΜΙΓ 614.

Příklad 29

Czs-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)cyklohexyl}amino)propanoát; a

118

Příklad 30

7ra«s-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)- 177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1 -yl]cyklohexyl} amino)propanoát

Podobným způsobem přípravy jako cz's-7Vl-{4-[4-amino-l-(4morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4trifluormethylbenzamidu a trans-N\ - {4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1Hpyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu se získá czs-ethyl-3-( {4-[4-amino-3-(4- {[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino} -3methoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] cyklohexyl} amino)propanoát a transethyl-3 -({4- [4-amino-3 -(4- {[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl] amino } -3 -methoxyfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-J]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát ve formě bílých pevných látek.

Data pro czs-ethyL3-( {4-[4-amino-3-(4- {[2-fluor-4-trifluromethylbenzoyl] amino} 3-methoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát: 'H

NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,37 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,76 (m, 2H), 2,32 (m, 2H), 1,88 (m, 2H), 1,67 (m, 4H), 1,16 (t, 3H); RPHPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 7,92 min. MS: MH⁺ 644.

Data pro Zra«5-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl] amino}-3-methoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-1yl]cyklohexyl}amino)propanoát: *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,68 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,82 (m, 2H), 2,46 (m, 5H), 1,91-2,07 (m, 6H), 1,18 (t, 3H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100Á, 250x4,6mm, 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 7,69 min. MS: MH⁺ 644.

119

Příklad 31

Czs-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3-methoxyfenyl)-l/7pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanová kyselina

Směs czs-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxy-fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoátu (0,23 g, 0,36 mmol), p-dioxanu (15 ml), hydroxidu draselného (0,10 g, 1,81 mmůl) a vody (1,5 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 3 hodin. Rozpouštědla se odpařují a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá czs-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4trifluormethylbenzoyl]amino} -3 -methoxy fenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-1 yl]cyklohexyl}amino)propanová kyselina (0,11 g, 0,18 mmol) ve formě bílé pevné látky: ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9, 91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,89 (br, 2H), 4,79 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 2,46-3,00 (m, 7H), 2,29 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,80 (m, 2H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl 8, 5 pm, 100Á, 250x4,6mm; 25%-LQ0% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 6,06 min. MS: MH⁺ 616.

Příklad 32

2rans-3-({4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[2-methoxy-4trifl uormethylbenzoyljamino} fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-lyl] cyklohexyl} amino)propanová kyselina

Směs tra«5-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát (0,04 g, 0,06 mmol), p-dioxanu (4 ml), hydroxidu draselného (0,02 g, 0,31 mmol) a stopových množství methanolu a vody (0,4 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 1 hodiny. Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc při teplotě 80°C po dobu 4 hodin. Rozpouštědla se odpařují a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá tra/z5-3-({4-[4-amino-3-(3methoxy-4- {[2-methoxy-4-trifluormethy lbenzoyljamino} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanová kyselina (0,04 g, 0,06 mmol) ve formě bílé pevné látky: *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,72 (s, 1H), 8,61 (d, 1H), 8,28 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,20 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 1,44-3,61 (m, 13H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl 8, 5 pm, 100

120

Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 6,36 min. MS: MH⁺ 628.

Příklad 33

NI - [4-(4-Amino-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid

A. Vl-[4-(4-Amino-lV-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidm-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid

Směs 3-jod-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,10 g, 0,19 mmol), VI[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamidu (0,13 g, 0,29 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,01 g, 0,01 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,06 mg, 0,48 mmol) ve vodě (2 ml) a dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) se zahřívá při teplotě 85°C přes noc. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se -přidá voda a směs se extrahuje ethylacetátem (3x). Spojené organické podíly se promyjí nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v systému Isco, čímž se získá VI-[4(4-amino-l-trity 1-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid (0,12 g, 0,17 mmol) ve formě bílé pevné látky: *H NMR (DMSOd₆, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,25 (d, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,24 (m, 15H), 3,90 (s, 3H); MS: MH⁺ 689.

B. Vl-[4-(4-Amino-lV-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid

Směs Vl-[4-(4-amino-l-trityl-lV-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (2,10 g, 1,75 mmol), 6N vodné kyseliny chlorovodíkové (10 ml),/?-dioxanu (10 ml) a ethanolu (8 ml) se zahřívá při teplotě 50°C po dobu 6 hodin. Směs se filtruje a pevný podíl se promyje ethanolem, suší ve vakuové sušárně přes víkend a purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá Vl-[4-(4-amino-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid (0,35 g, 0,78 mmol). Filtrát se koncentruje a purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu a preparativní HPLC, čímž se získá stejný produkt

121

Al -[4-(4-amino-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid (0,67 g, 1,51 mmol) ve formě bílé pevné látky: *H NMR (DMSOd₆, 400 MHz) δ 13,58 (s, 1H), 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,05 (t, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,24 (d, 1H), 3,94 (s, 3H); MS: MH⁺ 447.

Příklad34

Al -(4-(4- Amino-1 -tetrahydro-2A-4-pyranyl- lA-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl)-2methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluonnethylbenzamid

Diethylazodikarboxylát (0,07 ml, 0,45 mmol) se přidá do směsi Al-[4-(4-aminolA-pyrazolo[3,4-fiř]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (0,10 g, 0,22 mmol), trifenylfosfinu (0,12 g, 0,45 mmol) a tetrahydro-4A-pyran-4-olu (0,04 g, 0,34 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se tetrahydro-4A-pyran-4-ol (0,01 g, 0,11 mmol), trifenylfosfm (0,04 g, 0,15 mmol) a diethylazodikarboxylát (0,02 ml, 0,15 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědla se odpařují a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá Al -[4-(4-amino-1 -tetrahydro-2A-4-pyranyl-1 A-pyrazolo[3,4-íZ]pyrimidin-3-yl)-2methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,03 g, 0,06 mmol) ve formě bílé pevné látky: ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,31 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,95 (m, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,56 (t, 2H), 2,22 (m, 2H), 1,89 (m, 2H); MS: MH⁺ 531.

Příklad 35 jVl-{4-[4-Amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-lA-pyrazolo[3,4-6f]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

A. 4-(4-Amino-3-jod-1 A-pyrazolo[3,4-<|pyrimidin-1 -yl)-2-cyklopenten-1 -ol

Směs tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,04 g, 0,03 mmol), 3-jod-lA-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-4-aminu (0,30 g, 1,14 mmol) a dimethylsulfoxidu (3 ml) se míchá při pokojové teplotě za tmy po dobu 2 minut a ochladí na teplotu 0°C. Roztok 2,4a-dihydrokA-cyklopenta[ó]oxirenu (0,14 g, 1,72 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) se přidá do směsi při teplotě 0°C a míchá při teplotě 0°C po dobu 3 hodin. Směs se míchá při pokojové

122 teplotě přes noc a purifikuje preparativní HPLC, čímž se získá 4-(4-amino-3-jod-lApyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl)-2-cyklopenten-l-ol (0,24 g, 0,70 mmol) ve formě bílé pevné látky: RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250x4,6mm; 25%100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 4,23 min. MS: MH⁴ 344. ..........-..................... ................-......................-.............................. ....................... ................................................................. .....

B. Al-{4-[4-Amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl]-2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Směs 4-(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-2-cyklopenten-1 -olu (0,12 g, 0,35 mmol), Al-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (0,23 g, 0,53 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,11 g, 0,88 mmol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (6 ml) a vody (3 ml) při teplotě 85°C po dobu 6 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá NI - {4- [4-amino-1 -(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl]2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,18 g, 0,34 mmol) ve formě bílé pevné látky: Ή NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 6,09 (d, 1H), 5,93 (d, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,31 (m, 1H), 4,74 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,84 (m, 1H), 2,02 (m, 1H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 8,50 min. MS: MH⁺529.

Příklad 36

Al - {4-[4-Amino-1 -(3-hydroxycyklopentyl)-1 //-pyrazolo[3,4-úQpyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Směs Al -{4-[4-amino-l -(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-triťluormethylbenzamidu (0,10 g, 0,19 mmol) a 10% palladia na aktivním uhlí (0,03 g) v ethanolu (10 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou vodíku přes noc. Směs se filtruje a filtrát se čistí preparativní HPLC, čímž se získá Al - {4-[4-amino-1 -(3-hydroxycyklopentyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidin-3-yl]-2-

123 methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,07 g, 0,13 mmol) ve formě bílé pevné látky: ’HNMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, lil), 7,34 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 5,17 (m, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 1,79-2,41 (m, 6H); MS: MH⁺ 531.

Příklad 37

4-(4-Amino-3 - {4-[( 1H-2 -indolylkarbonyl)amino]-3-methoxyfenyl} -17/-pyrazolo[3,4ť/Jpyrimidin-1-yl)hexahydropyridinium-acetát

Oxalylchlorid (0,06 ml, 0,60 mmol) se přidá do roztoku indol-2-karboxylové kyseliny (0,88 g, 0,546 mmol) v dichlormethanu (5 ml) a tetrahydrofuranu (5 ml) při teplotě 0°C, pak se přidá ΛζΑ-dimethylformamid (3 kapky z 0,1 ml stříkačky) a směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Rozpouštědla a přebytek činidel se odpařují za sníženého tlaku. Zbytek se převede do dichlormethanu (2 ml) a výsledný roztok (1,25 ml) se přidá do roztoku /erc-buty 1-4-[4amino-3-(4-amino-3 -methoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-l-yl]-lpiperidinkarboxylátu (0,12 g, 0,27 mmol) a pyridinu (0,4 ml) v dichlormethanu (1 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Přidá se trifluoroctová kyselina (1 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá 4-(4-amino-3-{4-[(l//2-indolylkarbonyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl)hexahydropyridinium-acetát (0,07 g, 0,14 mmol) ve formě bílé pevné látky: ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,85 (br, 1H), 9,45 (s, 1H), 8,24 (d, 1H), 8,12 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,24-(t, 1H), 7,09 (t, 1H), 4,77 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,11 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,84 (m, 2H); MS: MH'483.

Příklad 38-53

Použitím stejného způsobu přípravy jako u 4-(4-amino-3-(4-((1//-2indolylkarbonyl)amino]-3-methoxyfenyl} -1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 yl)hexahydropyridinium-acetátu se připraví následující sloučeniny

124

Struktura	MS: MH⁺	HPLC R_t (min) (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1ml/min)	Příklad č.
	567	6,97	38
,,r °y-ř ° 6? A- 0
rO Λ νΆ oF o A ΛΑ	486	5,89	39
'o Ύγ°	497	6,28	40
z* b	513	5,61	41
o- »< 0^7 °
ó? ΑΧ X*

·· ···· · · ·· ···· • 9 · -φ φ ·· φ 9 · β β 9 β β β 9 · • - · Φ ' Φ Φ Φ Φ 'Φ 9 '9

Φ ΦΦ Φ Φ Φ Φ 9 9 Φ

ΦΦ '· · ··· ··· · · φ9

125

ο χΛ j ⁰ λΧ Δ;........... 0	497	6,39	42
Ý' ο Γ ο Α 7 ο ΝίΡμ JU . I· Χμ^Ν ^ 0 0	512	6,22	43
S-N <γζθ ' ~ « V ° Οχ Α_ο- δ	483	5,73	44
°Ό Ο ,^Ν% Ν \=Υ Ο νΧ?·^Ν Υ'Ό“ Ί5 • Ν	513	7,78	45
F Υ-Ν 1 ν-4 Ο 7 ο I V ⁰ ζΔ Ά 0	501	8,23	46

ÍL, '· · · · · « • · <

β 9 9

126 • · ' 9 9 «

999 99 99

α ό	517	8,7	47
ο 7 ο A? Λ- ..................-...............-........ ................ 0	-...................—-.........^;	............................................................................./........................-......	-.....................;..................
C1 γϊ 00 •Μ Λ- δ	⁵¹⁷	8,73	48
b	513	7,83	49
S-N ο(ζ ° Ó? Λ0
h	511	9,07	50

< Κ. Q
V.N oÍTo Ν Ο νΧ> Α>- %Ν*	497	8,37	51

	127	»· ···· • · · · • · · •. · · · • · · · ·· · · ·	• · ·· · • · • · · • · • ··· ·
			528	7,9	52
	y-N	b-
t Ν'
o. r	o
íl
N		o
nW o JL ^N		Ao-			.............................
0
			559	9,5	53

\—/	Vn
o r	0
ř /
N		o
vy		A-
O

Příklad 54

4-[4-Amino-3 -(4- {[(1 -ethyl-1 //-2-indolyl)karbonyl]amino } -3 -methoxyfenyl)-1 //pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]hexahydropyridinium-acetát

Hydrid sodný, 60% suspenze v minerálním oleji (0,006 g, 0,15 mmol). se přidá do roztoku 7V2- {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-l//-2-indolkarboxamidu (0,08 g, 0,14 mmol) v //.//-dimethylformamidu (1,0 ml) při teplotě 0°C. Směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Přidá se roztok ethyljodidu (0,02 g, 0,14 mmol) v N,//-dimethylformamidu (0,5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se ethyljodid (0,01 g, 0,07 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se trifluoroctová kyselina (3 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Rozpouštědla a přebytek činidel se odpařuje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4-{[(l-ethyl-l//-2indoly l)karbonyl]amino} -3 -methoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-1 yljhexahydropyridinium-acetát (0,05 g, 0,09 mmol) ve formě bílé pevné látky: *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,43 (s, ÍH), 8,27 (s, ÍH), 8,14 (d, ÍH), 7,71 (d, ÍH), 7,61 (d, ÍH),

7,34 (s, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,15 (t, 1H), 4,96 (m, ÍH), 4,62 (q, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,00 (m,

2H), 2,28 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,33 (t, 3H); MS: MH⁺ 511.

«· ···· ·· ·«·· • · » ·· ·· · · · • · · · · ··· ·· · · · ·>·· · • · · · · · ···· ·· ·· ♦·· ··· ·· ··

128

Příklad 55 a 56

Použitím stejného způsobu přípravy jako u 4-[4-amino-3-(4-{[(1-ethyl-177-2indoly ljkarbonyl] amino} -3 -methoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7)pyrimidin-1 yljhexahydropyridinium-acetátu se připraví následující sloučeniny

Struktura	MS: MH⁺	HPLC Rt (min) (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min)	Příklad č.
ó? Λ- Ύ.	523	9,12	⁵⁵
Q
ó r*b ó? Λ-	540	6,03	56

Příklad 57

1-(1-methyl-3-piperidyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát

Racemický roztok 3-jod-l-(l-methyI-3-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4aminu (0,050 g, 0,00014 mol) v dimethoxyethanu (2,5 ml) a vodě (5 ml) se nechá reagovat s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,033 g, 0,00015 mol), uhličitanem sodným (0,037 g, 0,00037 mol) a tetrakis(trifenylfosfm)palladiem (0,016 g, 0,000014 mol) při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní za vakua. Surová látka se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá l-(l-methyl-3piperidyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-amin-acetát ve formě bílé

129 pevné látky (0,040 g, 0,00009 mol). 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,10- 7,22 (m, 5H), 4,74-4,84 (m, IH), 2,94 (dd, IH), 2,79 (d, IH), 2,36 (t, IH), 2,22 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,86-2,01 (m, 3H), 1,76-1,84 (m, IH), 1,60-1,75 (m, IH); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 miň, 1 ml/min) R_t 13,74 min; MS: MU¹ 401.

Příklad 58 l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-3-(4’fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4amin-acetát BSF 4058532F.

Racemický roztok 3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-lH-pyrazólo[3,4<7]pyrimidin-4-aminu (0,050 g, 0,00012 mol) v dimethoxyethanu (2,5 ml) a vodě (5 ml) se nechá reagovat s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,029 g, 0,00014 mol), uhličitanem sodným (0,033 g, 0,00031 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,014 g, 0,00001 mol) při teplotě 80°C po dóbů 20 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní za vakua. Surová látka se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá 1-[1(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminacětát ve formě bílé pevné látky (0,038 g, 0,00007 mol). *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,09- 7,22 (m, 5H), 4,71-4,82 (m, IH), 3,44-(t, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,04 (dd, IH), 2,91 (d, IH), 2,47-2,60 (m, 3H), 1,94-2,09 (m, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,75-1,84 (m, IH), 1,57-1,74 (m, IH); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,26 min; MS: MH⁺ 445.

Příklad 59

Trans-1 - {4-[4-amino-3-(3-chlor-4- {[4-(trifluormethyl)benzoy ljamino} fenyl)-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}-4-methylhexahydropyrazindiium-dimaleát

A. 7erc-butyl-A-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamát

Roztok 4-brom-2-chloranilinu (5,00 g, 0,0242 mol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se nechá reagovat s 1,0 M roztokem bis(trimethylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuranu

130 (53,2 ml, 0,0532 mol). Směs se míchá 15 minut při pokojové teplotě. Přidá se di-fórcbutyl-dikarbonát (6,34 g, 0,0290 mol) a roztok se míchá po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu heptan/ethylacetát (4:1). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá férc-butyl-JV-(4brom-2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (4,214 g, 0,013 7 mol). ¹H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,75 (s, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,50 (dd, 1H), 1,46 (s, 9H); TLC (heptan/ethylacetát 4: 1) Rf 0,54.

B. 7erc-butyl-/V-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát

Směs zerc-butyl-TV-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamátu (2,10 g, 0,00685 mol), diboronpinakolesteru (2,09 g, 0,00822 mol), [l,r-bis-(difenylfosfino)ferrocenjdichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,17 g, 0,00021 mol) a octanu draselného (2,02 g, 0,02055 mol) v Λζ/V-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se trituruje heptanem (70 ml) a výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu (R) 521. Heptan se odstraní za vakua, čímž se získá Zerc-butyl-/V-[2-chlor-4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát ve formě šedé pevné látky (1,93 g, 0,00546 mol): *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,65 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,56 (dd, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,29 (s, 12H).

C. 7ra«s-terc-butyl-7V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pýrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)karbamát

Směs trans-?-] od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu (2,20 g, 0,00498 mol), tórc-butyl-/V-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,93 g, 0,00548 mol), uhličitanu sodného (1,32 g, 0,01245 mol) v 1,2-dimethoxyethanu (50 ml) a vodě (100 ml) se intenzivně míchá a přidá se tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakční směs se míchá 6 hodin při teplotě 80°C, po kterých se přidá další tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakční směs se míchá dalších 16 hodin při teplotě 80°C. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (100 ml) a nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (200 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (3 x 75 ml). Spojené Organické fáze se suší nad síranem hořečnatým a • ·

131 rozpouštědlo se odstraní za vakua. Produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (90:10:0,5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá trans-terc-b\ityl-N-(4-{4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4 - J]pyrimidin-3 -yl} -2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (1,993 g, 0,00368 mol): *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,76 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,57 (dd, 1H), 4,58-4,71 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 1,89-2,61 (m, 15H), 1,49 (s, 9H), 1,40-1,48 (m, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 90: 10) R_f0, 13. MS: M⁺541.

D. rra«ó-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin

Trans-terc-buty\-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)karbamát (1,993 g, 0,00368 mol) se přidá do roztoku 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu. Směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a promyje 1,0 M vodným roztokem hydroxidu sodného (2 x 25 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá traA7S-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-amin (1,564 g, 0,00355 mol) ve formě bílé pevné látky, 'll NMR (DMSOde,400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,31 (dd, 1H), 6,92 (d, 1H), 4,57-4,63 (m, 1H), 2,23-2,55 (m, 9H), 2,14 (s, 3H), 1,89-2,08 (m, 6H), 1, 381,52 (m, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 90:10) Rf 0,08; MS: MH⁺441.

E. 7r<2m’-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,46/]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamid-dimaleát

Do směsi 3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolO[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridinu (5 ml) při teplotě -10°C se po kapkách přidá 4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (0,188 g, 0,00090 mol), přičemž teplota se udržuje pod -5°C. Směs se míchá při teplotě -10°C po dobu 15 minut, pak při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Po přidání IN vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) se směs míchá jednu hodinu. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (15 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad

132 síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá purifikovaná volná báze (0,032 g, 0,000052 mol). Volná baze se rozpustí v absolutním ethanolu (4 ml) a zahřívá k refluxu. Po přidání roztoku kyseliny maleinové (0,018 g, 0,000156mol) v absolutním ethanolu (1 ml) se roztok refluxuje dalších 15 minut. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolu. Precipitát se suší za vakua, čímž se získá /rans-/Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)-4(trifluormethyl)benzamid-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0, 00002 mol): ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,42 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,20 (d, 2H), 7,96 (d, 2H), 7,80-7,83 (m, 2H), 7,46 (dd, 1H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,13 (s, 4H), 4,61-4,73 (m, 1H), 2,522,64 (m, 4H), 2,23-2,46 (m, 5H), 2,16 (s, 3H), 1,902,10 (m, 6H), 1,42-1,56 (m, 2H); RPHPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,97 min; MS: MH⁺ 613.

Příklad 60

Trans-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamid-dimaleát

Do směsi 3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17řpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridinu (5 ml) při teplotě -10°C se po kapkách přidá 4-(trifluormethoxy)-l-benzenkarbonylch!orid (0,203 g, 0,00091 mol), přičemž teplota se udržuje pod -5°C.

Směs se míchá při teplotě -10°C po dobu 15 minut, pak při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Po přidání IN vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) se směs míchá jednu hodinu. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (15 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se

133 získá purifikovaná volná báze (0,034 g, 0,000054 mol). Volná báze se rozpustí v absolutním ethanolu (4 ml) a zahřívá k refluxu. Roztok kyseliny maleinové (0,019 g, 0,000162 mol) v absolutním ethanolu (1 ml) se přidá a roztok se refluxuje po dobu 15 minut. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolur-PreeipitáL se suší za vakua,čímž se získá trans-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4č/]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamid-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,00002 mol): 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 10,29 (s, ÍH), 8,26 (s, ÍH), 8,14 (d, 2H), 7,78-7,87 (m, 2H), 7,68 (dd, ÍH), 7,57 (d, 2H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,11 (s, 4H), 4,65-4,77 (m, ÍH), 2,38-3,60 (m, 12H), 1,95-2,15 (m, 6H), 1,51-1,68 (m, 2H); RPHPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 15,41 min; MS: MH⁺ 629.

Příklad 61

7ratts-3-(3-chlor-4-{[(5-methyl-2-furyl)methyl]amino}fenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminacetát

Směs 3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlorethanu (20 ml) se nechá reagovat s 5-methyl-2-furfuralem (0,052 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,336 g, 0,00159 mol) při pokojové teplotě. Přidají se další 2 ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (0,672 g, 0,00318 mol) ve dvou 24 hodinových intervalech. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi chloroform (25 ml) a nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (2 x 25 ml). Spojené organické fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá trans-3-(3-chlor4- {[(5 -methyl-2-fury l)methyl] amino} fenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin-acetát ve formě bílé pevné látky (0,129 g, 0,00022 mol): ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, ÍH), 7,51 (d, ÍH), 7,39 (dd, ÍH), 6,93 (d, ÍH), 6,20 (d, ÍH), 6,14-(t, ÍH), 5,98 (d, ÍH), 4,55-4,66 (m, ÍH), 4,38 (d, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,18134

2,61 (m, 10 Η), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 5H), 1,37-1,53 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,48 min; MS: MH⁺ 535.

Příklad 62...............

Trans-3-{3-chlor-4-[(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl}-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin-acetát

Směs 3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lVpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlorethanu (20 ml) se nechá reagovat s 2-chlor-6-fluorbenzaldehydem (0,076 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,336 g, 0,00159 mol) při pokojové teplotě. Přidají se další tři ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (1,008 g, 0,00477 mol) ve třech 24 hodinových intervalech, po kterých zreaguje veškerá výchozí látka. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi chloroform (25 ml) a nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (2 x 25 ml). Spojené organické fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní ža vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl 8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitrl - 0,lM octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá rrans-3-{3-chlor-4-[(2-chlor-6fluorbenzyl)amino] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin-acetát ve formě bílé pevné látky (0,074 g, 0,00011 mol): ^]H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,52 (d, 1H), 7,35-7,47 (m, 4H), 6,99 (d, 1H), 5,75 (t, 1H), 4,55-4,66 (m, 1H), 4,57 (d, 2H), 2,25-2,61 (m, 11 H), 2,16 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 4H), 1,37-1,53 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 15,97 min; MS: MH⁺583.

Příklad 63

Trans-N\-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 V-2-imidazolylkarbonyl)-4-piperidyl] -1 V-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(/raHs)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid-maleát

135

Směs Vl-{4-[4-amino-l-(4-pipendyl)-l-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (0,200 g, 0,00041 mol) v toluenu (10 ml) se nechá reagovat s 5//,1077-diimidazo[l,5-a:l,5-ó/]pyrazin-5,10-dionem (0,040 g, 0,00021 mol) refluxuje po dobu 18 hodin. Přidá se další ekvivalent 5//,107/-diimidazo[l,5a:l,5-í/]pyrazin-5,10-dionu a směs se refluxuje dalších 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá volná báze (0,103 g, 0,00017 mol). Volná báze se rozpustí v absolutním ethanolu (10 ml) a zahřívá k refluxu. Po přidání roztoku kyseliny maleinové (0,030 g, 0,00034 mol) v absolutním ethanolu (1 ml) se směs refluxuje po dobu 15 minut, po kterých vznikne precipitát. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolu. Precipitát se suší za vakua, čímž se získá trans-Nl -(4- {4-amino-1 - [l-( 1 //-2-imidazolylkarbónyl)-4-piperidyl] -1 //-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(řranó’)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid-maleát ve formě bílé pevné látky (0,055 g, 0,00008 mol): ^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,63 (s, 1H), 8,26 (s, IH), 8,22 (d, 1H), 8,00 (b, 1H), 7,74-(b, IH), 7,43-7,48 (m, IH), 7,16-7,33 (m, 7H), 6,21 (s, 2H), 4,97-5,13 (m, 1H), 2,91-3,47 (m, 4H), 2,53-2,65 (m, 1H), 2,30-2,45 (m, 1H), 2,07-2,26 (m, 2H), 1,95-2,07 (m, 2H), 1,45-1,50 (m, IH), 1,28-1,32 (m, 1H); RPHPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R, 14,17 min; MS: MH⁺578.

Příklad 64

Cri-jVl-(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-(frans)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid-acetát A. Cis Vl-(4-{4-amino-l-[4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-(/rans)-2-fenyl-1 -cyklopropánkarboxamid

Směs cri-/Vl-{4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-(řraHs)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamidu (0,605 g, 0,0012 mol), chloristanu lithného (0,189 g, 0,0018 mol) a kyanidu draselného (0,116 g, 0,0018 mol) v acetonitrilu (60 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu dvou dnů, ochladí na pokojovou teplotu, zředí vodou (30 ml) a extrahuje diethyletherem (3 x 30 ml). Spojené

136 organické fáze se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu dichlormethan/methanol (95:5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá cz5-Al-(4-{4-amino-l-[4(kyanomethy l)-4-hydroxy cyklohexyl]-1 77-pyrazolo [3,4 -<7|pyrimidin-3 -yl}-2methoxyfenyl)-(zra/?.s)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidve formě -bílé pevné látky (0,602 g, 0,0011 mol): ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H, 8,23 (t, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,25 (s, 1H), 7,17 (m, 4H), 4,61-4,62 (m, 1H), 3,91 (s, 1H), 2,66 (s, 2H), 2,55-2,62 (m, 1H), 2,31-2,45 (m, 3H), 1,58-1,89 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, 1H), 1,28-1,38 (m, 1H); RPHPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 15,21 min; MS: MH⁺538.

B. Cis-Ni -(4- {4-amino-1 - [4-(2-aminoethyl)-4-hydroxy cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(/r<ms')-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid-acetát

Do roztoku cz5-//l-(4-{4-amino-l-[4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(rrízz75)-2-fenyÍ-l-cyklopropankarboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v methanolu (20 ml) a hydroxidu amonného (1 ml) se přidá Raneyův nikl (0,5 ml). Směs se míchá 18 hodin pod atmosférou vodíku (1 atm). Reakční směs se filtruje přes Celit a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cz5-7/l-(4-{4amino-l-[4-(2-aminoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl}-2tnethoxyfenyl)-(/razz5)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid-acetát ve formě bílé pevné látky (0,045 g, 0,000083 mol): ^]H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,65-4,67 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,84-2,91 (m, 1H), 2,53-2,55 (m, 1H), 2,33-2,40 (m, 4H), 1,85 (s, 3H), 1,35-1,80 (m, 9H), 1,30-1,33 (m, 1H); RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 13,29 min; MS: MH⁺ 444.

Příklad 65

Cz'5-//l-(4-{4-amino-l-[4-(2-amino-2-oxoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-(Zmzz5)-2-fenyl-1 -Cyklopropankarboxamid

137

Do intenzivně míchaného roztoku se při pokojové teplotě přidá c/s-/Vl-(4-{4amino-1-[4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-íř|pyrimidm-3-yl}-2methoxyfenyl)-(řrans')-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid (0,200 g, 0,00037 mol) v dimethylsulfoxidu (4 ml) a uhličitan draselný (0,216 g, 0,00156 mol). Po kapkách se přidá 30% vodný roztok peroxidu vodíku (0,6 ml), přičemž teplota se udržuje konstantní. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 32 hodin. Přidá se voda (20 ml), čímž vznikne precipitát, který se filtruje. Precipitát se promyje vodou a suší za vakua. Pevný podíl se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cis-Nl-(4-{4amino-l-[4-(2-amino-2-oxoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl}-2-methoxyfenyl)-(Zran5)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,117 g, 0,00021 mol): ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, ÍH), 8,22 (s, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,05-7,10 (m, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,61-4,71 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,24 (s, 2H), 1,55-1,81 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, 1H), 1,28-1,36 (m, 1H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,05 min; MS: MH⁺ 556.

Příklad 66

Cis-Nl -[4-(4-amino-l- {4-[(dimethylamino)methyl]-4-hydroxycyklohexyl} - 1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-(Zrans)-2-fenyl-l cyklopropankarboxamid-acetát

Do roztoku cis /Vl-{4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-l//-pyrazolo[3,4cř]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-(řra«5)-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamidu (0,190 g, 0,000302 mol) ve 2-propanolu (10 ml) a přidá se 2 M roztok dimethylaminu v methanolu (0,91 ml) a výsledná směs se zahřívá při teplotě 65°C v tlakové nádobě po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl 8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cw-Al-[4-(4-ammo-l-{4-[(dimethylamino)methyl]-4hydroxycyklohexyl}-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-(?ran.s)-2-fenyl'7Γ

138

1-cyklopropankarboxamid-acetát ve formě bílé pevné látky (0,109 g, 0,000177 mol). ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,56-4,68 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,28 (s, 6H)> 2,24 (s, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,63-1,78 (m, 4H), 1,44-1,58 (m, 3H), 1,28-1,36 (m, 1H); RPHPLC(Delta Pak C18,5pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 13, 54 min; MS: MH⁺556.

Příklad 67

7>w2,s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-(2/?)tetrahydro-1V-2-pyrrolkarboxamid-acetát

Roztok /raní-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00046 mol) v V,V-dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s l-hydroxy-7-azabenzotriazolem (0,068 g, 0,00050 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridem (0,132 g, 0,00069 mol), D-Boc-prolinem (0,108 g, 0,00050 mol) a W-diizopropylethylaminem (0,184 g, 0,00142 mol) při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (10 ml) a 5% vodný roztok kyseliny citrónové (20 ml). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 10 ml). Spojené organické fáze se promyjí nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml), suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se míchá v 20% trifluoroctové kyselině v dichlormethanu po dobu 6 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 5% izokraticky po dobu pěti minut, pak 5%-40% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá trans-N2.-(A- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazíno)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny 1)(27?)tetrahydro-l V-2-pyrrolkarboxamid-acetát (0,096 g, 0,00016 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,33 (s, 1H), 8,45 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,21 (d, 1H), 4,58-4,69 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,77 (dd, 1H), 2,96-3,04 (m, 1H), 2,742,84 (m, 1H), 2,47-2,58 (m, 5H), 2,23-2,45 (m, 5H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,88-2,11 (m, 7H), 1,78-1,88 (m, 1H), 1,60-1,69 (m, 2H), 1,39-1,54 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak • · · • · · • · · • · · · ·· ··

139

Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 8,47 min; MS: MH⁺ 534.

Příklad 68

4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1-yl] -1-pyridiniumolát

A. 4-(4-amino-3-jod-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-l -pyridiniumolát

Roztok 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (5,00 g, 0,019 mol) v Α,Α-dimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat s 60% hydridem sodným v oleji (0,92 g, 0,023 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá po dobu 15 minut a přidá se 4-nitropyridin-7V-oxid (5,37 g, 0,038 mol). Směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 18 hodin. Vzniklý precipitát se filtruje, promyje VV-dimethylformamidem a ethylacetátem, čímž se získá 4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl)-l-pyridiniumolát (3,79 ,g, 0,011 mol) ve formě hnědé pevné látky: ^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H),

8,34 (d, 2H), 8,24 (d, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 7,3 6 min; MS: MH⁺ 355.

B. 4-[4-amino-3-(4-fénoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolát

Suspenze 4-(4-amino-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-1 -pyridiniumolátu (0,140 g, 0,00040 mol) v dimethoxyethanu (7 ml) a vodě (15 ml) se nechá reagovat s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,093 g, 0,00043 mol), uhličitanem sodným (0,105 g,

0,00099 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,046 g, 0,00004 mol) při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Pevné látky se filtrují, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolát (0,138 g, 0,00035 mol) ve formě hnědé pevné látky. Tento podíl (0,040 g, 0,00010 mol) se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl 8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky po dobu pěti minut, pak 40%-100% acetonitril0,1 M octan amonný v průběhu 30 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá produkt 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-\Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolát ve formě bílé pevné látky (0,013 g,

0,00003 mol). 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,44 (s, 1H), 8,34-8,41 (m, 4H), 7,77 (d,

2H), 7,45 (t, 2H), 7,13-7,24 (m, 5H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,66 min; MS: MH⁺

397.

·· ···· ·· ····

140

Příklad 69

3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Suspenze 4- [4-amino-3 -(4-fenoxy feny I)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 pyridiniumolátu (0,100 g, 0,00025 mol) a 10% palladia na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) v octové kyselině (3 ml) se nechá reagovat s monohydrátem fosfomanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol) při teplotě 60°C, Po 2 hodinách se přidá další 10% palladium na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol). Směs se míchá 18 hodin, po kterých se přidá další 10% palladium na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) a monohy drátu fosfomanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol). Směs se míchá po dalších 24 hodin. Směs se filtruje přes Celit®521, promyje kyselinou octovou. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky po dobu pěti minut, pak 40%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 30 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá 3-(4fenoxyfenyl)-1 -(4-pyridyl)-1 //-pyrazolo[3,4 Apyrimidin-4-amin (0,020 g, 0,00005 mol) ve formě bílé pevné látky: *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,71 (d, 2H), 8,46 (s, 1H), 8,39 (dd, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,46 (t, 2H), 7,13-7,25 (m, 5H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 17,31 min; MS: MH⁺ 381.

Příklad 70

N2-{4- [4-amino-1 -(4-pyridyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -1 methyl-1//-2-indolkarboxamid

A. 7V2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl}-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Suspenze 4-(4-amino-3-jod-1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-1 -yl)-1 -pyridiniumolátu (0,500 g, 0,0014 mol) v dimethoxyethanu (15 ml) a vodě (30 ml) se nechá reagovat s 7V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-l//-2indolkarboxamidem (0,631 g, 0,00155 mol), uhličitanem sodným (0,374 g, 0,0035 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,163 g, 0,00014 mol) při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Pevné látky se filtrují a promyjí vodou. Pevný podíl se míchá v ethylacetátu po dobu 18 hodin a filtruje, promyje ethylacetátem, suší za vakua, čímž se získá surový 4-[4-amino-3Υ 200 • V · · · · ·

141 (3-methoxy-4-[(l-methyl-17/-2-indolyl)-karbonyl]aminofenyl)-lA-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolát (0,523 g, 0,0010 mol) ve formě hnědé pevné látky: RPHPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 10,92 min; MS: MH⁺507.

B. A2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-!-methyl-l//-2-indolkarboxamid

Suspenze 4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{ [(1 -methyl-17/-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolátu (0,200 g, 0,00039 mol) a

10% palladia na aktivním uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) v octové kyselině (3 ml) se nechá reagovat s monohydrátem fosfomanu sodného (0,063 g, 0,00059 mol) při teplotě 60°C po dobu 2 hodin. Přidá se další 10% palladium na aktivním uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) a fosfoman sodný (0,045 g, 0,00042 mol) a směs se míchá po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a'zbytek se míchá v methanolu po dobu 4 hodin. Směs se filtruje přes

Celit®521 a promyje ^methanolem. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin C 18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 50% izokraticky po dobu pěti minut, pak 50%-100% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min).

Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá A2-{4-[4amino-1 -(4-pyridyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl}-1 -methyl-1H-2indolkarboxamid (0,020 g, 0,00004 mol) ve formě bílé pevné látky: *H NMR (DMSO-dó,

400 MHz) δ 9,48 (s, 1H) 8,72 (d, 2H), 8,47 (s, 1H), 8,42 (d, 2H), 8,20 (d, 1H), 7,72 (d,

1H), 7,60 (d, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,36 (s, 1H) 7,34-(t, 1H), 7,16 (t, 1H), 4,05 (s,

3H), 3,99 (s, 1H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%- 85% acetonitril0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 19,50 min; MS: MH⁺ 491.

-⁵

Příklad 71 l-(6-amino-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin; a

Příklad 72

3-(4-fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin β 9 9 9 9 ' 9 9 β

9 9- 9 9999 9

9 9 9 9 9 9-9 9 9

99 999 999 99 99

142

Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00079 mol) v A-methyl-pyrrolidinonu (10 ml) se nechá reagovat s 60% hydridem sodným v oleji (0,032 g, 0,00079 mol). Po skončení uvolňování plynu se směs míchá při pokojové teplotě po dobu 30 minut a přidá se 5-brom-2-nitropyridin (0,161 g, 0,00079 mol) a směs se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 18 hodin. Přidá se další 60% hydrid sodný v oleji (0,032 g, 0,00079 mol) a směs se míchá další 2 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (15 ml) a vodu (25 ml). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 15 ml). Spojené organické podíly se promyjí solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu heptan/ethylacetát (1: 2) jako mobilní fází, čímž se získají dva produkty. Méně polární sloučenina, l-(6-nitro-3-pyridyl)-3-(4fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin, se suspenduje v absolutním ethanolu (10 ml) a A,A-dimethylformamidu (5 ml) a přidá se 10% palladium na aktivním uhlí (0,007 g). Směs se míchá pod atmosférou vodíku (balónek) po dobu 18 hodin. Směs se filtruje přes vrstvu Celitu®521, promyje absolutním eťhanolem. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá l-(6-amino-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo(3,4ď]pyrimidin-4-amin (0,007 g, 0,00002 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSOde, 400 MHz) δ 8,53 (d, 1H) 8,31 (s, 1H), 7,97 (dd, 1H), 7,73 (d, 2H), 7,44-(t, 2H), 7,12-23 (m, 5H), 6,60 (d, 1H), 6,20 (s, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 15,38 min; MS: MH⁺396.

Polárnější sloučenina, 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(5-brom-2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin, se suspenduje v absolutním ethanolu (10 ml) a A,A-dimethylformamidu (5 ml) a přidá se 10% palladium na aktivním uhlí (0,007 g). Směs se míchá pod tlakem vodíku v balónku po dobu 18 hodin. Směs se filtruje přes vrstvu Celitu®521 a promyje absolutním ethanolem. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-l A-pyrazolo[3,4-6/jpyrimidin-4-amin (0,030 g, 0,00007 mol) ve formě bílé pevné látky. ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,60-8,64 (m, 1H) 8,37 (s, 1H), 8,20 (d, 1H), 8,038,08 (m, 1H), 7,76 (d, 2H), 7,41-7,49 (m, 3H), 7,127,23 (m, 5H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 16,32 min; MS: MH⁺ 381.

Obecný způsob reduktivní aminace za použití trans-3-(4-amino-fenyl)-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu jako výchozí látky a

143 aldehydu je popsán v příkladu 73. 2-Methoxy-3-formyl-pyridin z příkladu 73 může být nahrazen jinými aldehydy za účelem připojení dalších Z¹⁰⁰ skupin.

Příklady 73

Tra«s-3-(4-[(2-methoxy-3-pyridyl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin-diacetát

Směs tran5-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (1 ekviv.), 2-methoxy-3-formyl-pyridinu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, zháší nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty. Následující dvě sloučeniny se připraví podle shora uvedeného způsobu: trans-3(4-[(2-methoxy-3-pyridyl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4-methyl-piperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin-diacetát. ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 8,06 (dd, ÍH), 7,61 (d, ÍH), 7,35 (d, 2H), 6,95 (dd, ÍH), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,60 (m, ÍH), 4,26 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min). R_t 12,07 min. MS: MH⁺ 528.

Příklad 74

7raM5-3-{4-[(l//-2-indolylmethyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát

Trans-3 - {4-[(1 //-2-indolymethyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3.,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát se připraví podle způsobu z příkladu 569 s výjimkou toho, že místo 2-methoxy-3-formyl-pyridinu se použije 2-formyl-indol. 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 11,08 (s, ÍH), 8,19 (s, ÍH), 7,44 (d, ÍH), 7,36 (d, 2H), 7,32 (d, ÍH), 7,01 (t, ÍH), 6,95 (t, ÍH), 6,81 (d, 2H), 6,47 (t, ÍH), 6,35 (s, ÍH), 4,60 (m, ÍH), 4,45 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91

	9 9 · · 9 ·	• 4 4 4 4444
fí	9 9 '·	4 9	4 9	4 4 4
9 4 «	•	4	4 .4 4

	4 9 9 9	9	4	'4 4 9 9
	9·» ' <·	9 99	4 44	99 49

144 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 μιη, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitrilO,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 13,74 min. MS: MH⁺ 536.

Příklad 75

Trans-?»-[(4-{4-amino-1 -[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} anilino)methyl] -1,2-dihydro-2-pyridinon-diacetát

7ran5-3-(4-[(2-methoxy-3-pyridyl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin-diacetát (0,105 g, 0,000199 mol) se rozpustí v 30% HBr v kyselině octové (4 ml) a směs se refluxuje po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá tra«s-3-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}anlino)methyl]-l,2-dihydro-2-pyridinon-diacetát (0,0204 g, 0,0000324 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,29 (m, 4H), 6,68 (d, 2H), 6,40 (t, 1H), 6,15 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,09 (d, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 9,40 min. MS: MH⁺514.

Obecný způsob reduktivní aminace s Zran.s-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminem a aldehydem jako výchozími látkami je popsán v příkladu 76:

Příklad 76

Trans-5- [(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyanilino)methyl]-4-chlor-1,3-thiazol-2-amin-diacetát

Směs /ra«5-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-4-aminu (1 ekviv.), 2-amino-4-chlor-5-formyl-l,3-thiazolu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, zháší nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu

145

koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá požadovaný produkt. ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,19 (s, 2H), 7,06 (m, 3H), 6,68 (d, 1H), 5,76 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,59 min. MS: ΜΙΓ 583.

Sloučeniny podle příkladů 77 a 78 se připraví podle způsobu z příkladu 76:

Příklad 77

7raws-3-(3-methoxy-4-[(5-methyl-3-izoxazolyl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin-acetát ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,04 (m, 2H), 6,68 (d, 1H), 6,16 (s, 1H), 5,86 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,40 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,53 min. MS: ΜΙ Γ 532.

Příklad 78

Trans-3-{3 -methoxy-4- [(1,3 -thiazol-4-ylmethyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,03 (d, 1H), 6,68 (d, 1H), 5,76 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,52 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,17 min.

MS: MH* 534.

Obecný způsob syntézy benzotetrahydrofuran-derivátů s Zra/í5-3-(4-aminofenyl)-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminem a

2-hydroxybenzaldehydem jako výchozími látkami je uveden v příkladu 79.

ίύ

146

Příklad 79

Trans-3-4-[(4,6-dichlor-2,3-dihydrobenzo[b]furan-3-yl)amino]fenyl-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát

7ra«5-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-4-amin (1 ekviv., 0,0001-0,0002 mol) a 2-hydroxy-4,6-dichlorbenzaldehyd (1 ekviv.) se smíchají v absolutním ethanolu (5 ml) a míchají při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá odpovídající imin, který se použije bez další purifikace. Trimethylsulfoxonium-jodid (2,5 ekviv.) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafinu (2,5 ekviv.). Po 10 minutách se přidá roztok iminu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodiny. Roztok se nalije do ledové vody (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (2 x 40 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá finální sloučenina.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,14 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,80 (d, 2H), 6,56 (d, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,80 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,42 (dd, 1H), 2,62,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 16,03 min.

MS: MlU 593.

Příklad 80

Trans-3-{4-[(4-chlor-2,3-dihydrobenzo [6]furan-3 -yl)amino]fenyl} -1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát

7ra«5-3-{4-[(4-chlor-2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin-acetát se připraví způsobem podle příkladu 79 s výjimkou toho, že 2-hydroxy-4,6-dichlorbenzaldehyd se nahradí 2-hydroxy-4-chlorbenzaldehydem.

e é # · · «β · · • · ♦ * · · ' · · ·· ·-· ««· · ·.· ·> ♦·

147 ‘η NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1Η), 7,39 (d, 2H), 7,28 (t, 1H), 6,99 (d, 1H),

6,89 (d, 1H), 6,81 (d, 2H), 6,53 (d, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,74 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,38 (dd, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RPHPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,42 min.

MS:MH⁺559.

Příklad 81

Trans-3 -4-[(4,6-dichlor-2,3 -dihydrobenzo [ů]furan-3-y l)amino]-3 -methoxyfeny 1-1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lH pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát 7rans-3-4-[(4,6-dichlor-2,3-dihydrobenzo[Z>]furan-3-yl)amino]-3-methoxyfenyl-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát se připraví způsobem podle příkladu 79 s výjimkou toho, že /rans-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin se použije místo trans-3 -(4-aminofeny 1)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4í/Jpyrimidin-4-aminu.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,11 (m, 4H), 6,80 (d, 1H), 5,45 (m, 2H), 4,84 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,42 (dd, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 16,85 min.

MS: ΜΙΓ 623.

Meziprodukt 5

7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-lpiperidinkarboxylát

A. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-lA-pyrazolo[3,4Ajpyrimidin-1 -yl]-1 -piperidinkarboxylát

Směs benzyl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (9,54 g, 0,027 mol), /erc-butyl-4-(4-amino-3-jod-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylátu (10,0 g, 0,0225 mol), tetrakis-(trifenylfosfin)palladia (1,56 g, 0,00135 mol) a uhličitanu sodného (5,97 g, 0,0563 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru

148

• · · · · ·		•	• · · · · ·
	•		• · ·
• · * · «· ··	• • « ·	···	. · · * • · · ·

ethylenglykolu (120 ml) a vody (60 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu (150 ml) a dichlormethan (150 ml); organické fáze se promyjí solankou, suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá fórc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (10,1 g, 0,0186 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,00 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,36 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 18,58 min.

B. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl]-lpiperidinkarboxylát

Do roztoku terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-17/pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (5,0 g, 0,0092 mol) v terahydroíuranu (150 ml) se přidá 10% palladium na aktivním uhlí (1,0 g) a reakční směs se hydrogenuje v Parrově třepačce po dobu 96 hodin. Katalyzátor se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v n-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá/erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-177pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (2,51 g, 0,0061 mol) ve formě bělavé pevné látky.

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,42 (s, 2H),

4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,18 min.

Příklad 82-94

Obecný způsob reduktivní aminace a po ní následující odstranění BOC skupiny, které se použije k přípravě sloučenin podle příkladů 82-94, je uveden níže.

Postup:

• · · · · · « ' · · > e <	• · β	* • · 9	• · ' • · 9 »	99 9 9 9 9
9 9 9 '9 ·.· ·»	• · ·	9 • · ·	9 9 9 ·	9 9 99

149

Směs fórc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino fenyl)-1L/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]1-piperidinkarboxylátu (meziprodukt 5) (1 ekviv.), aldehydu (1,2 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, trituruje v ethylacetátu a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové. Výsledná směs se míchá po dobu 1 hodiny, vodná fáze se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se separují. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.

Následující sloučeniny se připraví podle výše uvedeného způsobu:

Příklad 82

3- {4-[(benzo[ů]furan-2-ylmethyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1í/-pyrazolo[3,4z/]pyrimidin-4-amin-diacetát ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,85 (d, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,66 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,51 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0 1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 13,37 min.

MS: MIC 440.

Příklad 83

3-(4-[(2-methoxy-3-pyridyl)methyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4ó/]pyrimidin-4-amin-diacetát *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,96 (dd, 1H), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,27 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,06 min.

MS:MH⁺431.

150

Příklad 84

3-(4-[(5 -methyl-2-thienyl)methyl]aminofenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-amin-diacetát 'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,36 (d, 2H), 6,85 (d, IH), 6,77 (d, 2H), 6,64 (d, IH), 6,54-(t, IH), 4,70 (m, IH), 4,41 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,04 (m,2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,85 min.

MS: MIL 420.

Příklad 85

- {4- [(2-fůry lmethyl)amino] fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amindiacetát ‘HNMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ8,19 (s, IH), 7,59 (s, IH), 7,36 (d, 2H), 6,77 (d, 2H), 6,46 (t, IH), 6,39 (d, IH), 6,34 (d, IH), 4,70 (m, IH), 4,31 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 10,96 min.

MS: MH⁺ 390.

Příklad 86

3-[4-(benzylamino)fenyl]-1 -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin-diacetát 'H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,34 (m, 6H); 7,24-(t, IH), 6,73 (d, 2H), 6,60 (, IH), 4,70 (m, IH), 4,33 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,32 min.

MS:MH⁺400.

151

Příklad 87

- {4-[(2-methoxybenzyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4amin-diacetát 'H NMR (DMSO-d₍₎, 400 MHz) δ 8,19 (s,ÍH), 7,35 (d, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,01 (d, lh),

6,90 (t, ÍH), 6,70 (d, 2H), 6,41 (t, ÍH), 4,70 (m, ÍH), 4,28 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,73 min.

MS:MH⁺430.

Příklad 88

- {4-[(3 -methoxybenzyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4amin-diacetát.......

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, ÍH), 7,35 (d, 2H), 7,25 (t, ÍH), 6,96 (m, 2H), 6,81 (d, ÍH), 6,72 (d, 2H), 6,59 (t, ÍH), 4,70 (m, ÍH), 4,30 (d, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,38 min.

MS: MH⁺430.

Příklad 89

- {4- [(4-methoxybenzyl)amino] fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4amin-diacetát *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, ÍH), 7,35 (m, 4H), 6,90 (d, 2H), 6,72 (d, 2H), 6,51 (t, ÍH), 4,70 (m, ÍH), 4,25 (d, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s,6H), 1,79 (m,2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,37 min.

MS: ΜΙΓ 430.

(Λ • · ···· * · · 99 . » < β

9 9 9 ·

9 9 9 999 *· e

152

Příklad 90 l-(4-piperidyl)-3-(4-[3-(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin4-amin-diacetát 'Η NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,71(m, 2H), 7,58 (m, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitriLO,lM octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,08 min.

MS: MIL* 468.

Příklad 91 l-(4-piperidyl)-3-(4-[4-(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin4-amin-diacetát ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,23 min.

MS: MH⁺ 468.

Příklad 92

3-(4-[(2-methyl-1,3-thiazol-4-yl)methyl]aminofenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4ď]pyrimidin-4-amin-diacetát ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (d, 2H), 7,26 (s, 1H), 6,73 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,36 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,70 (s, 3H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 10,13 min.

MS:MH⁺421.

♦· ····

153

Příklad 93

3- {4-[(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin4- amin-diacetát ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,42 (m, 4H), 7,26 (t, 1H), 6,83 (d, 2H), 6,27 (t, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 211);

MS:MH⁺452.

Příklad 94

3-(4-[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4ó/Jpyrimidin-4-amin-diacetát 'HNMR (DMSO-de, 400 MHz) 1δ 8,19 (s, 1H), 7,61 (m, 3H), 7,38 (d, 2H), 6,73 (d, 2H), 6,68 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,47 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m,2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,83 min.

MS: MH⁺486.

Příklad 95

- {4- [(benzo [ů]furan-2-ylmethyl)amino] -3 -methoxyfeny 1} -l-(4-piperidy 1)-1Hpyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin-diacetát

Směs fórc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (g, mol), benzofuran-2-karbaldehydu (0,046 g, 0,000315 mol), triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,00042 mol) a octové kyseliny (0,024 ml, 0,00042 mol) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, trituruje v ethylacetátu (4 ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1 ml). Výsledná směs se míchá po dobu 1 hodiny, vodná fáze se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se separují. Organické fáze se koncentruje za sníženého tlaku a

•	·· 9999 9 9	9 9	•Λ9	9 9 9 9	9999 9
9	• 9			9 9	9
•
•	• ·' ·			9 9	• ·
	« 9 9 9	.9 9 9	9 9 9	• 9	99

154 zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá 3-{4-[(benzo[ó]furan-2yhnethyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amindiacetát (0,027 g, 0,0000457 mol).

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s,1H), 7,55 (m, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,06 (m, 2H), 6,80 (d, 1H), 6,75 (s, 1H), 5,80 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,57 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,83 min.

MS: MH* 470.

Příklad 96

3-(4-(2,3-dihydrobenzo[ó]furan-3-ylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin-acetát

Salicylaldehyd (0,063 g, 0,000513 mol) a tórc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (0,200 g, 0,000489 mol) se smíchají v absolutním ethanolu (5 ml) a míchají při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá tercbutyl-4-[4-amino-3-(4- {[-1 -(2-hydroxyfenyl)methyliden]amino} fenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát, který se použije bez další purifikace. Trimethylsulfoxonium-jodid (0,269 g, 0,00122 mol) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafinu (0,049 g, 0,00122 mol). Po 10 minutách se přidá roztok férc-butyl-4-[4-amino-3-(4-{[l-(2hydroxyfenyl)methyliden]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-lpiperidinkarboxylátu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodin. Roztok se nalije do ledové vody (70 ml) a extrahuje dichlormethanem (2x50 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá surový fórc-butyl-4-{4-amino-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-l-yl}-l-piperidinkarboxylát, který se použije bez další purifikace. Surová sloučenina se rozpustí v ethylacetátu (5 ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1,5 ml). Výsledná emulze se intenzivně míchá po dobu 1 hodiny;

155 vodná vrstva se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se separují. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá 3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3ylamino)fenylj-1 -(4-piperidyl)-1 /7-pyrazolo [3,4-r/Jpyrimidin-4-amin-acetát (0,03 8 g, 0,000078 mol) ve formě bílé pevné látky *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (m, 3H), 7,25 (t, 1H), 6,89 (m, 4H), 6,51 (t, 1H), 5,35 (m, 1H), 4,79 (m, 2H), 4,27 (m, 1H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,38 min.

MS: ΜΙΓ 428.

Příklad 97

Trans-3 -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo[3,4-rf]pyrimidin3-yl} anilino)-1 Η-1 X⁶-benzo [dlizothiazol-1,1 -dion-acetát

A. 3-chlor-l/7-lZ⁶-benzo[č/]izothiazol-l,l-dion

Sacharin (10,0 g, 0,0546 mol) a chlorid fosforečný (12,6 g, 0, 06Ómol) se zahřívají při teplotě 170°C po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, pak suspenduje v diethyletheru (200 ml). Precipitát se spojí filtrací, promyje diethyletherem a suší, čímž se získá 3-chlor-l//-lX⁶-benzo[</]izothiazol-l,l-dion (3,7 g, 0,0184 mol) ve formě bílé pevné látky, která se použije bez další purifikace.

MS: MH⁺202.

B. 3-(4-bromanilino)-l//-lX⁶-benzo[ď]izothiazol-l,l-dion

Do roztoku 3-chlor-l//-lX⁶-benzo[<7]izothiazol-l,l-dionu (1,0 g, 0,00496 mol) v acetonu (20 ml) se najednou přidá 4-bromanilin (1,71 g, 0,00992 mol) a směs se míchá po dobu 15 minut. Směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se suspenduje ve vodě (100 ml). Precipitát se spojí filtrací, pořádně promyje vodou a suší, čímž se získá 3-(4bromanilino)-177-lk⁶-benzo[í/]izothiazol-l,l-dion (1,57 g, 0,00467 mol) ve formě bílé pevné látky.

‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,93 (s, 1H), 8,47 (d, 1H), 8,09 (d, 1H), 7,93 (m, 4H), 7,69 (d,2H);

·· ·«··

156

C. 3-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l//-lÁ⁶benzo[</]izothiazol-1,1-dion

Směs 3-(4-bromanilino)-l//-lX⁶-benzo[ť/]izothiazol-l,l-dionu (1,57 g, 0,00467 mol), diboronpinakolesteru (1,43 g, 0,00561 mol), [1 ,l'-bis(difenylfosfmo)ferrocen]dichlorpalladnatého (II) komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,114 g, 0,00014 mol) a octanu draselného (1,37 g, 0,014 mol) v ΛζΑ-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu. Filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se trituruje v diethyletheru, čímž se získá 3-[4(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-1 Η-1 X⁶-benzo[ň]izothiazol-1,1 -dion (1,14 g, 0,00297 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,92 (br, 1H), 8,51 (d, 1H), 8,08 (d, 1H), 7,91 (m, 4H), 7,68 (d, 2H), 1,29 (s, 12H).

D. 7rara'-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl} anilino)-1 Η-1 X⁶-benzo[d]izothiazol-1,1 -dion-acetát

Směs 3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l//-lX⁶benzo[J]izothiazol-l,l-dionu (0,09 g, 0,000234 mol), írans-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,08 g, 0,00018 mol), tetrakis-(trifenylfosfin)palladia (0,013 g, 0,000011 mol) a uhličitanu sodného (0,048 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v> průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá Zrans-3-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy lj-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} anilino)-1 Η-1 λ⁶benzo[</]izothiazol-1,1 -dion-acetát (0,075 g, 0,000119 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,29 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 7,66 (d, 2H), 4,65 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m,2H);

.·· ····	• '.· <·	• • · •	·· •	• •	···· • • 1·
• •	• · • ·
«	• * ·	•	'·	•	•	• ·
	·♦ · ·	.···	• · ·	• *		'· ·

157

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,27 min.

MS: MH⁺ 572.

Příklad 98.......

CA-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl} anilino)-1 Η-1 Z⁶-benzo [Jjizothiazol-1,1 -dion-diacetát

Cis-3-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1H-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl}anilino)-l//-lÁ⁶-benzo[í/]izothiazol-l,l-dion-diacetát se připraví z 3 -(4-(4,4,5,5 -tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino] -1 Η-1 L⁶-benzo[z/]izothiazol-1,1dionu (0,09 g, 0,000234 mol) a cA-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu podle podobného způsobu jako je uveden výše.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,42 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (m, 3H), 7,84 (m, 2H), 7,62 (d, 2H), 4,80 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,07 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,59 min.

MS: MI L 572.

Příklad 99

7ra«5-A3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/Jpyrimidin-3-yl}fenyl)benzo[č7]izoxazol-3-amin-acetát

A. Al-(4-bromfenyl)-2-fluorbenzamid

Roztok 2-fluorbenzoylchloridu (5,82 g, 0,0367 mol) a 4-bromanilinu (6,31 g,

0,0367 mol) v bezvodém dichlormethanu (150 ml) se ochladí na teplotu 0°C a pod atmosférou dusíku se po kapkách přidá ΛζΑ-diizopropylethylamin (5,21 g, 0,0407 mol). Výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, koncentruje a zbytek vytřepe mezi ethylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organické fáze se promyjí solankou, suší síranem hořečnatým a koncentrují. Zbytek se suspenduje ve studeném diethyletheru (50 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá Al-(4-bromfenyl)-2fluorbenzamid (9,6 g, 0,0326 mol) ve formě bílé pevné látky.

158 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,54 (s, 1H), 7,66 (m, 3H), 7,56 (m, 3H), 7,34 (m, 2H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 2) Rf 0,37.

B. 7/l-(4-bromfenyl)-2-fluor-1 -benzenkarbothioamid

Směs Ni-(4-bromfenyl)-2-fluorbenzamidu (3,3 g, 0,0112 mol) a 2,4-bis-(4methoxyfenyl)-l,3-dithia-2,4-difosfetan-2,4-disulfidu (2,27 g, 0,00561 mol) se zahřívá v toluenu při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/n-heptan (1: 6) jako mobilní fáze, čímž se získá Ni-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamid (3,1 g, 0,010 mol) ve formě žluté pevné látky.

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 12,13 (s, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,62 (m, 3H), 7,51 (m, 1H), 7,31 (m, 2H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 4) Rf 0,27.

C. 7\T-(4-bromfenyl)-2-fluor-1-benzenamidoxim

Směs 7/l-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamidu (1,56 g, 0,00505 mol), hydroxylamin-hydrochloridu (0,44 g, 0,00631 mol) a hydrogenuhličitanu sodného (0,53 g, 0,00631 mol) se zahřívá v absolutním ethanolu (25 ml) při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetátu (50 ml). Organické fáze se promyjí solankou, suší síranem hořečnatým a koncentrují. Zbytek se suspenduje ve studeném diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá 7/1-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenamidoxim ( 1,21 g, 0,00392 mol) ve formě bělavé pevné látky.

TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,12.

D. 7V-benzo[í/]izoxazol-3-yl-jV-(4-bromfenyl)amin

Do roztoku 7/l-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenamidoximu (1,51 g, 0,00489 mol) v 7/-methylpyrrolidinonu (25 ml) se přidá Zerc-butoxid draselný (0,54 g, 0,00513 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetátu (50 ml). Organické fáze se promyjí solankou, suší síranem hořečnatým a

♦'	'· · « · · · • · · • · ·	• · · •	• * · •	·· ··«· • · * • · ·
	• · · ·	•	•	• · · ·
	• · · ·	···	.···	·· «·

159 koncentrují. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/n-heptanu (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá yV-benzo[c/]izoxazol-3-yl-/V-(4bromfenyl)amin (0,95 g, 0,00329 mol) ve formě bílé pevné látky.

‘fl NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,72 (s, 1H), 8,13 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,61 (m, 2H),

7,54 (d, 2H), 7,37 (dd,1H). ...................................

TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,26.

E. 7V-benzo[J]izoxazol-3-yl-jV-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin

Směs /V-benzo[í/]izoxazol-3-yl-/V-(4-bromfenyl)aminu (1,30 g, 0,0045 mol), dibóronpinakolesteru (1,37 g, 0,0054 mol), [l,r-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,110 g, 0,000135 mol) a octanu draselného (1,32 g, 0,0135 mol) v 7V,N-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo še odstraní za sníženého tlaku. Dichlormetban (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu. Filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/n-heptanu (1: 5) jako mobilní fáze, čímž se ziská/V-benzo[í/]izoxazol-3yl-7V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,40 g, 0,00119 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,74 (s, 1H), 8,16 (d, 1H), 7,70 (m, 4H), 7,61 (d, 2H), 7,37 (dd, 1H), 1,29 (s, 12H).

TLC (ethylacetát/heptan 1: 4) Rf 0,21.

F. 7rans-/V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)benzo[</]izoxazol-3-amin-acetát

Směs /V-benzo [t/]izoxazol-3 -y 1-/7- [4-(4,4,5,5 -tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,10 g, 0,000298 mol), trans-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,101 g, 0,000229 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,016 g, 0,0000137 mol) a uhličitanu sodného (0,061 g, 0,000573 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC ·· ’···· · · ·· ···* • · · ·· ·« ·· 9 # 9 · · · · 9 9 9

9 9 9 « 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 999 99 9 99 9 9

160 (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min, čímž se získá rraHs-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-ťZ]pyrimidin-3-yl}fenyl)benzo[</]izoxazol-3,-amin-acetát (0,102 g, 0,000175 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,81 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,19(d, 1H), 7,88 (d, 211),7,65 (m,4H), 7,40 (m, II I), 4,65 (m, 1H), 2,6-2,2 (br,9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,66 min.

MS: MH⁺52.

Příklad 100

Cis-N? -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-y 1} fenyl)benzo [</] izoxazol-3-amin-diacetát

Cis-N?-(4-{4-amino-1- [4-(4-methylpiperazino)eyklohčxyl]-1//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}fenyl)benzo[č/]izoxazol-3-amin-diacetát se připraví zNbenzo[</]izoxazol-3-yl-/V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu a cz5-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu podle podobného způsobu jako shora uvedený způsob.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,86 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,24 (d, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,67 (m, 4H), 7,43 (m, 1H), 4,83 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,74 (m, 2H), 1,62 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,77 min.

MS: MH⁺ 524.

Příklad 101

N3 - {4- [4-amino-1 -(4-pipéridyl)-1 //-pyrazol o [3,4-z/]pyrimi din-3 yljfenyl} benzo [</]izoxazol-3-amin-acetát

Směs 7V-benzo[í/]izoxazol-3-yl-/V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,087 g, 0,000258 mol), 7erc-butyl-4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazoio[3,4í/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylátu (0,088 g, 0,000198 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,014 g, 0,000012 mol) a uhličitanu sodného (0,053 g, 0,000495 ···· · · ·· ···· • · · ···· · · · • · 9 9 9 9 · 9 • ♦· · · ' « · ·· · ·· ·· ··· ··· 99 99

161 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek Vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Organické fáze se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá surový /erc-butyl-4-{4-amino-3-[4-(benzofídizoxazol-3ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl}-lpiperidinkarboxylát, který se použije bez další purifikace, rozpustí se v ethylacetátu (5 ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1 ml). Výsledná emulze se intenzivně míchá po dobu 1 hodiny, vodná vrstva se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se separují. Organické fáze se koncentrují za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá A3-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl}benzo[í/]izoxazol-3-amin-acetát (0,009 g, 0,0000185 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,82 (s, 1H), 8,20 (m, 2H), 7,89 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,41 (t, 1H), 4,74 (m, 1H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,20 min. MS: MH⁺427.

Příklad 102

Trans-3- [4-( 1H-3 -indazolylamino)fenyl]-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát

A. Al-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamid

Al-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamid (1,50 g, 0,00485 mol) a 1M roztok hydrazinu v tetrahydrofuranu (6,3 ml, 0,0063 mol) se zahřívá v absolutním ethanolu (25 ml) při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Přidá se další 3 ml 1M roztoku hydrazinu v tetrahydrofuranu a v míchání při refluxu se pokračuje dalších 6 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje, čímž se získá Al-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamid (1,54 g, 0,0050 mol) ve formě hnědé pevné látky. TLC (ethylacetát/ heptan 1:3) Rf 0,10.

·· ···· • · · ·· ·· >· · ··· · . · ··· • · · · · ···· · ···· · · · ··· ·· ·· ··* ··· ·· «»

162

Β. /V-(4-bromfenyl)-/V-(l//-3-indazolyl)amin

Do roztoku 7Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamidu (1,2 g,

0,00391 mol) v /V-methylpyrrolidinonu (25 ml) se přidá íerc-butoxid draselný (0,50 g, 0,0041 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/n-heptan (1: 5) jako mobilní fáze, čímž se získá/V-(4-bromfenyl)-/V(l//-3-indazolyl)amin (0,29 g, 0,0010 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSOd₆, 400 MHz) δ 12,06 (s, 1H), 9,03 (s, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,03 (dd, 1H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 3) Rf 0,26.

C. jV-(l/7-3-indazolyl)-/V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin Směs iV-(4-bromfenyl)-jV-(l//-3-indazolyl)aminu (0,29 g, 0,00101 mol), diboronpinakolesteru (0,31 g, 0,00121 mol), [l,T-bis(difenylfosfino)fenOcen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,025 g, 0,00003 mol) a octanu draselného (0,294 g, 0,003 mol) v Λζ/V-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu. Filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/n-heptanu (1:3) jako mobilní fáze, čímž se získá 7V-(l//-3-indazolyI)-/V[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,064 g, 0,000191 mol) ve formě bělavé pevné íátky.

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 12,09 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,94 (d, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,35 (m, 2H), 7,03 (dd, 1H), 1,28 (s, 12H). TLC (ethylacetát/ heptan 1: 3) R_f0,21.

D. Trans-3-[4-(17/-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-\Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-amin-acetát

163

Směs //-(l//-3-indazolyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl] aminu (0,064 g, 0,000191 mol), /ra«5-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,070 g, 0,000159 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,011 g, 0,0000095 mol) a uhličitanu sodného (0,042 g,0,000398 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá řron5-3-[4-(l//-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát (0,035 g, 0,000060 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 12,09 (s, ÍH), 9,14 (s, 1H), 8,21 (s, ÍH), 7,99 (d, ÍH), 7,83 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,06 (t, ÍH), 4,64 (m, ÍH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,49 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,96 min.

MS: MH* 523.

Příklad 103

7ra«,S'-jV3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-6-(trifluormethyl)benzo[</]izoxazol-3-amin-acetát A. Nl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Roztok 2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoylchloridu (5,05 g, 0,0223 mol) a 4-bromanilinu (3,83 g, 0,0223 mol) v bezvodém dichlormethan (150 ml) se ochladí na teplotu 0°C a pod atmosférou dusíku po kapkách se přidá Λζ/V-diizopropylethylamin (4,26 ml, 0,0245 mol). Výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, koncentruje a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném n-heptanu (50 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá //1-(4bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (7,1 g, 0,0196 mol) ve formě bílé pevné látky.

164 ’Η NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,74 (s, 1H), 7,90 (m, 2H), 7,74 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,56 (d, 2H).

B. Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbothioamid

Směs Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)bénzamidu (7,1 g, 0,0196 mol) a 2,4-bis-(4-methoxyfenyl)-l,3-dithia-2,4-difosfetan-2,4-disulfidu (3,97 g, 0,0098 mol) se zahřívá v toluenu při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/n-heptanu (1: 8) jako mobilní fázi, čímž se získá Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-lbenzenkarbothioamid (6,0 g, 0,0159 mol) ve formě žluté pevné látky.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 12,33 (s, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,65 (m, 3H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 4) Rf 0,61.

C. Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenamidoxim

Směs VI -(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-1 -benzenkarbothioamidu (2,50 g, 0,00663 mol), hydroxylamin-hydrochloridu (0,65 g, 0,00928 mol) a hydrogenuhličitanu sodného (0,78 g, 0,00928 mol) se zahřívá v absolutním ethanolu (25 ml) při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síránem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném «-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá VI-(4-bromfenyl)-2fluor-4-(triťluormethyl)-l-benzenamidoxim (2,35 g, 0,00625 mol) ve formě bělavé pevné látky.

TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,12.

D. V-(4-bromfenyl)-V-[6-(trifluormethyl)benzo[í/]izoxazol-3-yl]amin

Do roztoku Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenamidoximu (2,25 g, 0,00598 mol) v V-methylpyrrolidinonu (30 ml) se přidá Zerc-butoxid draselný (0,71 g, 0,00628 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve

165 vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentrují. Zbytek se suspenduje ve studeném n-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá A-(4-bromfenyl)-/V-[6-(trifluormethyl)benzo[</]izoxazol3-yl]amin (1,75 g, 0,0049 mol) ve formě bělavě pevné látky.

‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,95 (s, IH), 8,37 (d, IH), 8,14 (s, IH), 7,78 (d, IH), 7,68 (d, 2H), 7,58 (d, 2H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 5) R_f 0,31.

E. A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-./V-[6(trifluormethy l)benzo [</] izoxazol-3-y 1] amin

Směs A-(4-bromfenyl)-A-[6-(trifluormethyl)benzo[</]izoxazol-3-yl]aminu (1,75 g, 0,0049 mol), diboronpinakolesteru (1,49 g, 0,0059 mol), [l,l’-bis(difenylfosfmo)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,120 g, 0,000147 mol) a octanu draselného (1,44 g, 0,0144 mol) v N,//-dimethylformamidu (10 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu. Filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/n-heptanu (1:6) jako mobilní fáze, čímž se získá 7V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-7V-[6(trifluormethyl)benzo[íZ]izoxazol-3-yl]amin (0,065 g, 0,000161 mol) ve formě bílé pevné látky. 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,97 (s, IH), 8, 39 (d, IH), 8,14 (s, IH), 7,77 (d, IH), 7,71 (s,4H), 1,29 (s, 12H).

F. 7r6zn5-/V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4íZ]pyrimidin-3-yl} fenyl)-6-(trifluormethyl)benzo [</] izoxazol-3-amin-acetát

Směs N-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-JV-[6-(trifluormethyl)benzo[íZ]izoxazol-3-yl]aminu (0,062 g, 0,000153 mol), /ra«ó-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,065 g, 0,000146 mol), tetrakis-(trifenylfosfm)palladia (0,010 g, 0,0000087 mol) a uhličitanu sodného (0,039 g, 0,000365 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-70% acetonitril - 0,lM octan amonný • · · · « .6 ·········

9 9 ·9 β « · « · .··»····<

·· a· ······ ·· · ο

166 v průběhu 30 min, 21 ml/min), čímž se získá /rans-/V3-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy1]-17/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidm-3 -yl} fenyl)-6(trifluormethyl)benzo[í/]izoxazol-3-amin-acetát (0,026 g, 0,0000398 mol) ve formě bílé pevné látky. 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,05 (s, ÍH), 8,44 (d, ÍH), 8,23 (s, ÍH),

8,16 (s, ÍH), 7,88 (d, 2H), 7,79 (d,1H); 7,69 (d, 211), 4,67 (m, ÍH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 16,18 min. MS: MH⁺592.

Příklad 104

A/2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-methoxyethyl)-4-piperidyl] -177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

A. 3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin

Do směsi 3-jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidin-4-amindihydrochloridu (0,4 g, 0,00096 mol) a uhličitanu draselného (0,40 g, 0,0029 mol) v Λζ/V-dimethylformamidu (25 ml) se přidá 2-bromethyl(methyl)ether (0,09 ml, 0,00096 mol) při pokojové teplotě. Heterogenní směs se míchá při teplotě 60°C pod atmosférou dusíku po dobu 7 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a přidá se 2-bromethyl(methyl)ether (0,045 ml, 0,00048 mol). Směs se míchá při teplotě 60°C pod atmosférou dusíku po dobu' 16 hodin. Do směsi o pokojové teplotě se kvůli dotažení reakce přidá 2-bromethyI(methyl)ether (0,019 ml, 0,00019 mol) a jodid draselný (0,008 g, 0,000048 mol). Směs se míchá při teplotě 70°C pod atmosférou dusíku po dobu 7 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (4 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-50% v průběhu 30 min s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-amin (0,2 g, 0,0005 mol). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm;

5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 6,4 min.

MS: ΜΙΓ 403.

· ·

167

Β. Α2-(4- {4-amino-1 - [1 -(2-methoxyethyl)-4-piperidyl] -1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-y 1} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazo 1-2-amin

Směs 3 -j od-1 -[ 1 -(2-methoxyethyl)-4-piperidyl] -177-pyrazolo[3,4-úQpyrimidin-4aminu (0,2 g, 0,0005 mol), A-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5j5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,28 g, 0,00078 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,029 g, 0,000025 mol) a uhličitanu sodného (0,13 g, 0,00125 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (25 ml) a vodě (5 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 5 hodin pod atmosférou dusíku. Přidá se dalšíA-(5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,14 g, 0,00039 mol,) a tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0,015 g, 0,0000125 mol) a směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku za vzniku nahnědlé pevné látky, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 5%-20% methanol/dichlormethan jako mobilní fází, čímž se získá A2-(4-{4-amino-1-[1(2-methoxyethyl)-4-piperidyl] -177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl} feny 1) - 5,7-dimethyl-1,3benzoxazol-2-amin (0,14 g, 0,00027 mol). *H NMR (TFA-d, 400 MHz) δ 8,53 (s, 1H), 7,88 (m, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,14 (s, 2H), 5,40 (br, 1H), 4,05 (m, 2H), 3,98 (m, 2H), 3,66 (m, 2H), 3,56 (s, 3H), 3,47 (m, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,54-(br, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,43 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 9,6 min. MS: MH⁺ 513.

Příklad 105

N2-{4-[4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 -yljfenyl } -5,7dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

A. 3-jod-l-(l-methyl-4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin

Do směsi 3-jod-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-amindihydrochloridu (0,5 g, 0,0012 mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,36 g, 0,00168 mol) v dichlorethanu (40 ml) se přidá roztok formaldehydu (37% ve vodě, 0,037 ml, • · · · · ·

168

0,00132 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 4 hodin. Do směsi se přidá 5 N vodný roztok hydroxidu sodného (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou, Suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku za vzniku pevné látky, která se znovu podrobí stejné reakci a zpracování jako výše, čímž se získá 3-jod-l-(l-methyl-4-piperidyl)-177pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin (0,3 g, 0,00084 mol). TLC (methanol/dichlormethan = 10: 90) R_f 0,63 MS: MH⁺ 359.

B. V2-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-<y]pyrimidin-3yl] fenyl}-5,7-dimethy 1-1,3-benzoxazol-2-amin

Směs 3-jod-l-(l-methyl-4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,2 g, 0,00056 mol), V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,2 g, 0,00056 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,032 g, 0,000028 mol) a uhličitanu sodného (0,15 g, 0,0014 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (20 ml) a vody (5 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 3 hodin pod atmosférou dusíku. Přidá se další V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,2 g, 0,00056 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,032 g, 0,000028 mol) a směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku za vzniku nahnědlé pevné látky, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 5%-25% methanol/dichlormethanem jako mobilní fází, čímž se získá V2-{4-[4-amino-l-(l-methyl4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]fenyl} -5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2amin (0,16 g, 0,00034 mol). *H NMR (TFA-d, 400 MHz) δ 8,50 (s, 1H), 7,85 (m, 2H), 7,80 (m, 2H), 7,10 (s, 2H), 5,45 (br, 1H), 3,95 (br, 2H), 3,75 (br, 1H), 3,45 (br, 1H), 3,10 (s, 3H), 2,85 (br, 1H), 2,65 (br, 1H), 2,49 (br, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,42 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 10,7 min. MS: MH⁺ 469.

• · · · · 1 • ♦ · ·

169

Příklad 106

JV2-{4-[4-amino-l-(l-methyL3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ďlpyrimidm-3-yl]fe:nyl}-5,7dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

A. 3-Jod-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-ylamin

Diethylazodikarboxylát (12 ml, 0,08 mol) se přidá do míchané suspenze 3-jod-l//pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (10,44 g, 0,04 mol), tórc-butyl-3-hydroxy-lpiperidinkarboxylátu (12,0 g, 0,0596 mol) a trifenylfosfinu (20,98 g, 0,08 mol) v tetrahydrofuranu (600 ml) při pokojové teplotě. Po 19 hodinách se přidá další diethylazodikarboxylát (12 ml, 0,08 mol) a pokračuje se další 2 hodiny. Přidá se další tercbutyl-3-hydroxy-1-piperidinkarboxylát (2,0 g) a trifenylfosfin (20,98 g, 0,08 mol) a pokračuje se dalších 72 hodin.

Reakce se koncentruje za vakua, přidá se aceton (200 ml) a vodný roztok 5N chlorovodíku (100 ml) a roztok se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 2 hodin. Aceton se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (3 x 200 ml). Vodná vrstva se pak alkalizuje na pH 11 vodným roztokem hydroxidu sodného (1 N) a produkt se extrahuje do dichlormethanu (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad bezvodým síranem sodným a koncentrují, čímž se získá oranžová pevná látka. Pevné látky se triturují ethylacetátem, čímž se získá 3-jod-1-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4íZjpyrimidin-4-ylamin ve formě žluté pevné látky (3,82 g, 25%); RP-HPLC R_t 4,792 min, 92% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 min při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); 'H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 1,54 (IH, m), 1,71 (IH, m), 2,01 (2H, m), 2,46 (IH, m), 2,81 (2H, m), 3,01 (IH, dd, J 11, 8 a 3,4 Hz), 4,58 (IH, m) a 8,19 (IH, s).

B. 3 -j od-1 -(1 -methyl-3 -piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-amin

Do směsi 3-j od-1-(3-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,4 g,

0,00116 mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,34 g, 0,00162 mol) v dichlorethanu (30 ml) se přidá roztok formaldehydu (37% ve vodě, 0,035 ml, 0,00128 mol, 1,1 ekviv.) při pokojové teplotě. Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Přidá se další roztok formaldehydu (37% ve vodě, 0,035 ml, 0,00128 mol, 1,1 ekviv.) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Do směsi se přidá 5N vodný roztok hydroxidu sodného (5 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se • ·

170 vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku a směs se lyofilizuje, čímž se získá 3-jod-l-(l-methyl-3-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,41 g, 0,0011 mol). RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á,15 cm; 5%-95% acetonitril-0,IM octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 6,0 min. MS: MH⁺ 359.

C. V2-{4-[4-amino-l -(1 -methyl-3-piperidyl)-l V-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3yl] fenyl}-5,7-dimethy 1-1,3-benzoxazol-2-amin

Směs 3-jod-l-(l-methyl-3-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,35 g, 0,001 mol), V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,44 g, 0,0012 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,058 g, 0,00005 mol) a uhličitanu sodného (0,27 g, 0,0025 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (30 ml) a vodě (6 ml) se zahřívá při teplotě 8 0°C po ďobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychládnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku za vzniku nahnědlé pevné látky, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 2%-10% methanol/dichlormethanem jako mobilní fází, čímž se získá V2-{4-[4-amino-l-(l-methyl3-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] fenyl} -5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2amin (0,055 g, 0,00012 mol). ^]H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,80 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,15 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,80 (br, 1H), 2,95 (br, 1H), 2,85 (br, 1H), 2,45 (br, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,00 (br, 3H), 1,80 (br, 1H), 1,70 (br, 1H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 9,7 min. MS: MH⁺ 469.

Příklad 107

V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-l V-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

A. 3-j od-1 -[l-(2-methoxyethyl)-3 -piperidyl] -1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin

171

Do směsi 3-jod-l-(3-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,4 g, 0,00116 mol) a uhličitanu draselného (0,48 g, 0,00348 mol) v T/A^dimethylformamidu (25 ml) se přidá 2-bromethyl(methyl)ether (0,11 ml, 0,00116 mol) a jodid draselný (0,010 g, 0,000058 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá při teplotě 65°C pod atmosférou dusíku po dobu16 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a přidá se další

2- bromethyl(metbyl)ether (0,025 ml, 0,00027 mol). Směs se míchá při teplotě 65°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (4 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep^HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-50% v průběhu 30 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,2 g, 0,0005 mol). TLC (methanol/dichlormethan = 10: 90) Rf 0,5. MS: MH⁺403.

B. V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin3- yl}fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Směs 3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4aminu (0,16 g, 0,0004 mol), V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-7V-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,17 g, 0,00048 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,023 g, 0,00002 mol) a uhličitanu sodného (0,11 g, 0,001 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (25 ml) a vodě (5 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku za vzniku nahnědlé pevné látky, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 2%10% methanol/dichlormethanem jako mobilní fází, čímž se získá7V2-(4-{4-amino-l-[l-(2methoxyethyl)-3-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4-ť7]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-amin (0,17 g, 0,00033 mol). 'H NMR (DMSO-d₆,400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,14 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,79 (br, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,10 (br, 1H), 2,90 (br, 1H), 2,55 (br, 2H), 2,54-(br, 1H), 2,40 (s, 3H), • · a · ' · · » ········· • · · β · e · e • · · · ··· · ·· · ·

172

2,35 (s, 3H), 2,05 (br, 3H), 1,80 (br, 1H), 1,70 (br, 1H). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm,

300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 9,9 min. MS: MH⁺513.

Příklad 108

7V2-{4-[4-amino-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7-dimethyl1,3-benzoxazol-2-amin-acetát

A. /erc-Butyl-3-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylát

Di-Zerc-butyl-dikarbonát (2,093 g, 0,00959 mol) se přidá do roztoku 3-jod-l-(3piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-č/Jpyrimidin-4-ylaminu (3,00 g, 0,00872 mol) a uhličitanu sodnéhó (3,23 g, 0,0305 mol) v 1,4-dioxanu (50 ml) a vodě (50 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin a výsledný bílý precipitát se spojí filtrací. Pevné látky se promyjí vodou (10 ml), suší na vzduchu, čímž se získá terč-butyl-3-(4-amino-3-jod-l//pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát ve formě bílé pevné látky (3,40 g, 88%); RP-HPLC R_t 12,532 min, 98% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufřovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při teplotě 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); *H NMR (400 MHz, de-DMSO) 1,34(9H, br s), 1,50 (2H, m), 2,02 (1H, m), 2,13 (1H, m), 2,97 (2H, m), 3,85 (2H, m), 4,59 (1H, m) a 8,21 (1H, s).

B. terc-Butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l ,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát

Směs fórc-butyl-3-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylátu (0,6 g, 0,00135 mol), 7V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-N-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaboroIan-2-yl)fenyl]aminu (0,59 g, 0,00162 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,078 g, 0,000068 mol) a uhličitanu sodného (0,36 g, 0,00338 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (50 ml) a vodě (10 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Po ochlazení směsi na pokojovou teplotu se přidá další V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,24 g, 0,00066 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,078 g, 0,000068 mol) a směs se míchá při teplotě 80°C ·· ···<

β e c tt e β ce»<

·· ·· ······ ·· ··

173 po dobu 5 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku za vzniku nahnědlého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 5%-25% izopropanol/dichlormethanem jako mobilní fází a produkt se trituruje

Α,Α-dimethylformamidem, čímž se získá /erc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát (0,28 g, 0,00051 mol). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 11,9 min.

MS:MH⁺555.

C. A2-{4-[4-amino-l-(3-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin-acetát

Do směsi /erc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl}-lA-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylátu (0,28 g,

0,00051 mol) v acetonu (10 ml) se přidá 6N vodný roztok chlorovodíku (3 ml) při pokojové teplotě. Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 1 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní a směs se alkalizuje vodným roztokem 5N hydroxidu sodného. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 80 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 5%-100% v průběhu 20 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá A2-{4-[4-amino1 -(3 -piperidy 1) -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yljfenyl} -5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2amin-acetát (0,06 g, 0,00012 mol). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,05 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,75 (br, 1H), 3,15 (br, 2H),

2,95 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,05 (br, 1H), 2,00 (br, 1H), 1,90 (s, 3H), 1,80 (br,

1H), 1,60 (br, 1H). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril 0,lM octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 9,4 min. MS: MH⁺455.

·· ··*<

·» ·······<

· · · · ' · ··· ··· · · · · · · <

·· ·· ··· ··· ·· ··

174

Příklad 109 l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-1 -yl)piperidino]-2-(dimethylamino)-1 -ethanon-acetát

Směs A2-{4-[4-amino-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3-yl]fenyl}5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin-acetátu (0,04 g, 0,000078 mol), dimethylglycinu (0,01 g, 0,000097 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,019 g, 0,000097mol), Α,Α-diizopropylethylaminu (0,033g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7azabenzotriazolu (0,011 g, 0,000078 mol) v bezvodém dichlormethanu (5 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem a spojené organické rozpouštědlo se promyje solankou. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm;

5%-100% v průběhu 35 minut s'0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-[3(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-l-yl)piperidino]-2-(dimethylamino)-l-ethanon-acetát (0,015 g, 0,00003 mol).

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,27 (d, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,67 (d, 2H),

7,11 (s, 1H), 6,51 (s, 1H), 4,81-1,91 (br, 11 H), 2,40 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,26 (s, 3H),

2,22 (s, 3H), 1,91 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 9,7 minut. MS: MH⁺ 540.

Příklad 110

-[3-(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4z/Jpyrimidin-1 -yl)piperidino]-2-methyl-2-(methy lamino)-1 -přopanon

A. 3 -j od-1 -(3 -piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin-dihydrochlorid

Do směsi tórc-butyl-3-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l -yl)-l piperidinkarboxylátu (1,2 g, 0,0027 mol) v acetonu (20 ml) se přidá vodný roztok 6N chlorovodíku (8 ml) při pokojově teplotě. Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 1,5 hodiny, pak při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Precipitát se filtruje a promyje acetonem. Pevný podíl se suší, čímž se získá 3-jod-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin-dihydrochlorid (1 g, 0,0024 mol). TLC (methanol/dichlormethan = 5:95) R_f 0,14 MS: MH⁺ 345.

175

Β. 977-9-fluoreny lmethyl-Ν- {2-[3 -(4-amino-3-j od-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-1 yl)piperidino]-1,1 -dimethyl-2-oxoethy 1} -V-methylkarbamát

Směs 3 -j od-1 -(3 -piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin-dihydrochloridu (0,17 g, 0,00042 mol), 2-[[(9//-9-fluorenylmethoxy)karbonyl](methyl)aminoj-2methylpropanové kyseliny (0,175 g, 0,00052 mol), 1 -(3-dimethylaminopropyl)-3ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,1 g, 0,00052 mol), W-diizopropylethylaminu (0,23 g, 0,0018 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,057 g, 0,00042 mol) v bezvodém dichlormethanu (7 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Přidá se další

2-[[(9//-9-fluorenylmethoxy)karbonyl](methyl)amino]-2-methylpropanová kyselina (0,044 g, 0,00013 mol) a l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid (0,025 g, 0,00013 mol) do reakce a míchá po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi solanku a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem a spojené organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 5%-100% v průběhu 20 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímžsezíská9//-9-fluorenylmethyl-jV-{2[3-(4-amino-3-jod-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1-yl)piperidino]-1,1-dimethyl-2oxoethyl}-V-methylkarbamát (0,030g, 0,00005 mol). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t11,2 min. MS:MH⁺666.

C. 9//-9-fluorenylmethyl-V-2-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l ,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl} -17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl)piperidino]-1,1 -dimethyl-2-oxoethylV-methylkarbamát

Směs 9//-9-fluorenylmethyl-V-f2-[3-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidinl-yl)piperidino]-l,l-dimethyl-2-oxoethyl}-V-methylkarbamátu (0,03 g, 0,000045 mol), V-(5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,02 g, 0,000054 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,003 g, 0,000002 mol) a uhličitanu sodného (0,0126 g, 0,00011 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vodě (1 ml) se zahřívají při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se ·· ·'·'·

176 odpařují za sníženého tlaku za vzniku nahnědlé pevné látky, která se použije v následující reakci. RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 10,4 min.

TLC (methanol/dichlormethan = 5: 95) Rf 0,80.

D. l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l/7pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-1 -y l)piperidino] -2-methyl-2-(methy lamino)-1 -propanon

Surová směs 9A-9-fluorenylmethyl-A-2-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 TL-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-1-yl)piperidino] -1,1 dimethyl-2-oxoethyl-A-methylkarbámátu (0,037 g, 0,00005 mol) v 25% roztoku piperidinu v AA-dimethylformamidu (10 ml) se míchá po dobu 16 hodin při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát a vodu. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 5%-100% v průběhu 30 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lL/pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-l-yl)piperidino]-2-methyl-2-(methylamino)-l-propanon (0,011 g, 0,00002 mol). ’H NMR (Chlorform-d, 400 MHz) δ 8,35 (s, 1H), 7,75 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,10 (s, 1H), 6,78 (s, 1H), 4,981,70 (br, 9 H), 2,49 (s, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,10 (s, 6H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 10,0 min. MS: MH⁺554.

Příkladlll

A2-4-[4-amino-l-(3-azetanyl)-lA-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-yl]fenyl-5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-amin

A. fórc-Butyl-3-(4-amino-3-jod-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-lazetankarboxylát

Směs 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,73 g, 0,0028mol), /erc-butyl[(methylsulfonyl)oxy]-l-azetankarboxylátu (1,05 g, 0,0042 mol) a uhličitanu česného (1,4 g, 0,0042 mol) v A,A-dimethylformamidu (25 ml) se míchá při teplotě 70°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se ochladí na pokojovou teplotu. Přidá se další /erc-butyl-3-[(methylsulfonyl)oxy]-l-azetankarboxylát (0,35 g, 0,0014 mol) a uhličitan ······' 9 9 99 9··<

• · - · 99 99 9 9 • · 9 9-9 9 9 9 • · 9 9 9 9-9 9 9 • · β β e e β β β i • · ·· 999 9 99 ' 9 9 9 9

ΥΠ česný (0,46 g, 0,0014 mol) do směsi. Směs se míchá při teplotě 70°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 70 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje dichlormethanem (2 x 3 ml), čímž se získá Zerc-butyl-3-(4-amino-3-jod-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-l-yl)-lazetankarboxylát (0,57 g, 0,0014 mol). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm;

5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 9,4 min. MS:

MIC 417.

B. /erc-Butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//pyrazolo[3,4-<f]pyrimidin-l-yl)-l-azetankarboxylát

Směs ferc-butyl-3-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)-lazetankarboxylátu (0,15 g, 0,00036 mol), jV-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,16 g, 0,00045 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,021 g, 0,000018 mol) a uhličitanu sodného (0,095 g,

0,0009 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vodě (2 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu.

Přidá se další tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0,021 g, 0,000018 mol) do směsi a reakce se míchá při teplotě 80°C po dobu 3 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhliěitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku za vzniku nahnědlé pevné látky, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 5%-50% methanol/dichlormethanem jako mobilní fází, čímž se získá férc-butyl-3-(4amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-l-yl)-l-azetankarboxylát (0,033 g, 0,00006 mol). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min)

R_t 11,6 min. MS: MH⁺527.

C. jV2-4-[4-amino-l-(3-azetanyl)-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-yl]fenyl-5,7dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin ·· ···· ·· ···<

B.

178

Do směsi řerc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino] fenyl} -177-pyrazolo[3,4-djpyrimidin-1 -yl)-1 -azetankarboxylátu (0,033 g,

0,000063 mol) v acetonu (4 ml) se přidá vodný roztok 6N chlorovodíku (0,3 ml) při pokojové teplotě. Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 2 hodiny, pak při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Pevný podíl z reakce se filtruje a promyje acetonem kvůli odstranění některých nečistot. Pevné látky se vytřepou mezi ethylacetát a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem a organická vrstva se promyje solankou. Rozpouštědlo se odstraní, čímž se získá ŤV2-4-[4-amino-l-(3azetanyl)-1 V-pyrazolo [3,4-íf]pyrimidin-3-yl]fenyl-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin (0,004 g, 0,00001 mol). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,00 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 7,09 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 5,90 (br, 1H), 5,20 (m, 4H), 2,40 (s, 3H), 2,20 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 9,1 min. MS: MH⁺ 427.

• I ' .

Příklad 112

V2-{4-[4-amino-l-(l-methyl-3-azetanyl)-lV-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

A. l-(3-azetanyl)-3-jod-lV-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin-diacetát

Do směsi /erc-butyl-3-(4-amino-3-jod-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-lazetankarboxylátu (0,41 g, 0,00099 mol) v acetonu (5 ml) se při pokojové teplotě přidá 6N vodný roztok chlorovodíku (1 ml). Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 2 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se alkalizuje 5N vodným roztokem hydroxidu sodného při teplotě 0°C. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml) a organická vrstva se promyje solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vodná vrstva a zbytek z organické vrstvy se spojí. Rozpouštědla se odstraní a zbytek se suspenduje v N,V-dimethylformamidu, methanolu a octové kyselině a purifikuje RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%100% v průběhu 30 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min) na l-(3-azetanyl)-3-jod1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin-diacetát (0,165 g, 0,0005 mol).

TLC (methanol/dichlormethan 5: 95) R_f 0,29. MS: MH⁺317.

3-j od-1 -(1 -methyl-3-azetanyl)-1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin ·· ··»· 9 9 99 ···«

-i ···»···«·« • 9 9 9 9 9 9 9 ' · 9 · · · · V · · 4 • · · - · · e e ee 4

99 999 999 99 99

179

Do směsi l-(3-azetanyl)-3-jod-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin-diacetátu (0,165 g, 0,0005 mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,15 g, 0,00073 mol) v dichlorethanu (15 ml) se při pokojové teplotě přidá 37% roztok formaldehydu v 0,016 ml,

0,000572 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Přidá se další formaldehyd (37% roztok ve vodě, 0,016 ml. 0,000572 mol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,15 g, 0,00073 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů. Do směsi se přidá 5N vodný roztok hydroxidu sodného (1 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku. Majoritnímu produkt přejde do vodné vrstvy. Vodná vrstva a zbytek z organické vrstvy se spojí. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se použije v následujícím kroku bez purifikace.

TLC (methanol/dichlormethan = 10: 90) Rf 0,48. MS: MH⁺331.

C. A^?2-{4-[4-amino-l-(l-methyl-3-azetanyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yljfenyl}5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Směs 3-jod-l-(l-methyl-3-azetanyl)-l//-pyrazolo[3,4-úQpyrimidin-4-aminu (0,17 g,

0,00052 mol), V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,23 g, 0,000624 mol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0,030 g, 0,000026 mol) a uhličitanu sodného (0,14 g, 0,0013 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (20 ml) a vodě (15 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku za vzniku nahnědlé pevné látky, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 5%-50% methanol/dichlormethan jako mobilní fází, čímž se získá V2-{4-[4amino-l-(l-methyl-3-azetanyl)-l//-pyrázolo[3,4-£/]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7-dimethyll,3-benzoxazol-2-amin (0,13 g, 0,0003 mol). 'Η NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,85 (s,

1H), 8,15 (s, lH), 7,90 (d, 2H), 7,70 (d, 2H), 7,09 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,40 (br, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,70 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,30 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak C18,

180 pm, 300Á, 15 cm; 5 %9 5% acetonitril-0,1 Μ octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 9,5 min. MS: MH⁺ 441.

Příklad 113

Cis-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 yl}anilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril

A. 3-amino-4-hydroxybenzonitril

Do směsi 4-hydroxy-3-nitrobenzonitrilu (4 g, 0,0244 mol) v ethanolu (180 ml) a vodě (90 ml) se přidá thiosíran sodný (17 g, 0,0976 mol) při pokojové teplotě. Heterogenní směs se míchá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 1 hodiny. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a ethanol se odstraní za sníženého tlaku. Žlutý pevný podíl se filtruje, promyje vodou, suší za sníženého tlaku, čímž se získá 3-amino-4hydroxybenzonitril (1,46 g, 0,011 mol). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 4,5 min. MS: MH⁺ 133.

B. 2-(4-bromanilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril

Do směsi 3-amino-4-hydroxybenzonitrilu (1,84 g, 0,0137 mol) v acetonitrilu (140 ml) se při pokojové teplotě přidá 4-bromfenylizothiokyanát (2,93 g, 0,0137 mol). Směs se míchá po dobu 16 hodin při pokojové teplotě. Do reakční směsi se přidají chlorid měďný (1,36 g, 0,0137 mol) a triethylamin (1,9 ml, 0,0137 mol). Směs se míchá po dobu 16 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a pevný podíl se suspenduje v methanolu. Směs se filtruje přes vrstvu Celitu s methanolem. Nahnědlý filtrát se skladoval po dobu 3 dnů při teplotě 4°C. Precipitát se filtruje a promyje methanolem, čímž se získá 2-(4-bromanilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril (2,4 g, 0,0076 mol). RPHPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 11,1 min. MS: MH⁺ 313.

C. 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l,3-benzoxazol-5karbonitril

Směs 2-(4-bromanilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitrilu (1,8 g, 0,0058mol), diboronpinakolesteru (1,8 g, 0,007 mol), [l,l’-bis(difenylfosfmo)ferrocen]• ·

-v ········ '· ···'·♦;

β β β e · · * ·· ·· ··· ···

181 dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,47g, 0,00058 mol) a octanu draselného (1,7 g, 0,0174 mol) v ΛζΑ-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 0%-40% ethylacetát/«-heptanem jako mobilní fází, čímž se získá 2-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l,3-benzoxazol-5karbonitril (0,80 g, 0,0022 mol). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 16,9 min. MS: MH⁺ 362.

D. ¢/5-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 J7-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl} anilino)-1,3-benzoxazol-5-karbonitril

Směs 3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4aminu (0,15 g, 0,00034 mol), 2-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]l,3-benzoxazol-5-karbonitrilu (0,153 g, 0,000425 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,028 g, 0,0000238 mol) a uhličitanu sodného (0,090g, 0,00085 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (3 ml) a vodě (1 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Přidá se další 2-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l,3-benzoxazol-5karbonitril (0,072 g, 0,0002 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,012 g, 0,000010 mol, 0,03 ekviv.) a směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 2% vodným roztokem hydroxidu amonného 5%-20% methanol/dichlonnethan jako mobilní fází. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-50% v průběhu 30 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá ¢/5-2-(4-{4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-£ř)pyrimidin-3-yl}anilino)-l,3-benzoxazol5-karbonitril (0,15g, 0,00027 mol). 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,25 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,70 (m, 4H), 4,80 (br, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,20 (br, 8H), 2,10 (br, 3H), 1,75 (br, 2H), 1,60 (br, 4H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm;

182

5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 9,2 min. MS: ΜΙ-Γ549.

Příklad 114

CA-V2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin3-yl} fenyl)-5-(trifluormethoxy)-1,3-benzoxazol-2-amin

A. 2-nitro-4-(trifluormethoxy)fenol

Do směsi 4-(trifluormethoxy)fenolu (4 g, 0,0225mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (90 ml) se přidá 0,5 M roztok of nitronium-tetrafluorboritanu v sulfolanu (46 ml, 0,0229 mol) při teplotě -50°C. Směs se míchá při teplotě -50°C pod atmosférou dusíku po dobu 6 hodin. Směs se filtruje přes vrstvu silikagelu a vrstva se promyje 25% ethylacetát/n-heptanem. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát a vodu. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou a solankou. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 0%-50% ethylacetátAz-heptanem jako mobilní fází, čímž se získá 2-nitro-4-(trifluormethoxy)fenol (2,5 g, 0,011 mol). TLC (ethylacetát/«-heptan = 25:75) Rf 0,50 MS: MH⁺222.

B. 2-amino-4-(trifluormethoxy)fenol

Do směsi 2-nitro-4-(trifluormethoxy)fenolu (2 g, 0,0089 mol) v ethanolu (50 ml) a vodě (25 ml) se při pokojové teplotě přidá thiosíran sodný (6,2 g, 0,0356 mol). Heterogenní směs se míchá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 1 hodiny. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a ethanol se odstraní za sníženého tlaku. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 70 ml) a organická vrstva se promyje solankou, suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý pevný podíl 2-amino-4-(trifluormethoxy)fenolu (0,9 g, 0,005 mol). TLC (methanol/dichlormethan = 5: 95) Rf 0,29. MS: MH⁺: 194.

C. V2-(4-bromfenyl)-5-(trifluormethoxy)-l,3-benzoxazol-2-amin

Do směsi 2-amino-4-(trifluormethoxy)fenolu (0,9 g, 0,0047 mol) v tetrahydrofuranu (60 ml) se přidá 4-bromfenyl-izothiokyanát (1 g, 0,0047 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá po dobu 16 hodin při pokojové teplotě. Bezvodý síran .-3.7-.

183 měďný (7,1 g, 0,0443 mol, 9,43 ekviv.), triethylamin (0,67 ml, 0,0047 mol, 1 ekviv.) a silikagel (8,5 g) se přidají do reakční směsi. Směs se míchá po dobu 4 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Směs se filtruje přes vrstvu silikagelu 25% ethylacetát/n-heptanem jako mobilní fází, čímž se získá oranžově zbarvená pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 0%-25% ethylacetát/nheptanem jako mobilní fází. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se trituruje n-heptanem, čímž se získá 7V2-(4-bromfenyl)-5-(trifluormethoxy)-l,3-benzoxazol-2-amin (0,9 g, 0,0024 mol). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 12,2 min. MS: MH⁺: 373.

D. yV2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-(trifluormethoxy )-1,3benzoxazol-2-amin

Směs jV2-(4-bromfenyl)-5-(trifluormethoxy)-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,9 g, 0,0024 mol), diboronpinakolesteru (0,73 g, 0,0029 mol), [1,1'bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,2 g, 0,00024 mol) a octanu draselného (0,71 g, 0,0072 mol) v A/yV-dimethylformamidu (25 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout ná pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se filtruje přes vrstvu silikagelu 25% ethylacetát//7-heptaném jako mobilní fází. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se trituruje n-heptanem, čímž se získá jV2-[4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-(trifluormethoxy)-l,3-benzoxazol-2-amin (0,68 g, 0,0016 mol). RP-HPLC (Delta Pák Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 18,8 min. MS: MH⁺: 421.

E. cis-N2-(4- {4-amino- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,46/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5-(trifluormethoxy)-1,3 -benzoxazol-2-amin

Směs 3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4aminu (0,06 g, 0,00014 mol), 7V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5(trifluormethoxy)-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,071 g, 0,00017 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,011 g, 0,00001 mol) a uhličitanu sodného (0,037, 0,00035 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (3 ml) a vodě (1 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Přidá se další 7V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-5-(trifluormethoxy)-l,3-benzoxazol-2-amin (0,030 g, 0,00007 mol) a

184 tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,005 g, 0,000004 mol) a směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 5 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 2% vodným roztokem hydroxidu amonného/5%-25% methanolem/dichlormethanem jako mobilní fází. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá cis-V2-(4{ 4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl ]-1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl} feny l)-5(trifluormethoxy)-l,3-benzoxazol-2-amin (0,065 g, 0,00011 mol). ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,25 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,65 (m, 3H), 7,50 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 4,80 (br, 1H), 2,60 (br, 9H), 2,49 (s, 3H), 2,20 (br, 3H), 2,10 (br, 1H), 1,75 (br, 2H), 1,60 (br, 2H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 10,7 min. MS: MIL 608.

Příklad 115

Cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin3-yl}fenyl)-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

A. 4-ethyl-2-nitrofenol

Do směsi 4-ethylfenolu (4 g, 0,0328 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (100 ml) se přidá 0,5 M roztok nitronium-tetrafluorboritanu v sulfolanu (67 ml, 0,0335 mol) při teplotě -50°C. Směs se míchá při teplotě -5 0°C pod atmosférou dusíku po dobu 6 hodin. Směs se filtruje přes vrstvu silikagelu a vrstva se promyje 25% ethylacetát/n-heptanem. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát a vodu. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou a solankou. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá asi 10 g surového 4-ethyl-2nitrofenolu. Surová látka se použije v následujícím kroku bez purifikace. 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10, 68 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,07 (d, 1H), 2,60 (q, 2H), 1,20 (t, 3H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 10,2 min.

185

B. 2-amino-4-ethylfenol

Do směsi 4-ethyl-2-nitrofenolu (5,5 g, 0,032 mol) v ethanolu (180 ml) a vodě (90 ml) se přidá thiosíran sodný (23 g, 0,131 mol) při pokojové teplotě. Heterogenní směs se míchá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a ethanol se odstraní za sníženého tlaku. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 100 ml) a organická vrstva se promyje solankou, suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 0%-25% methanolem/dichlormethanem jako mobilní fází (x 2). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá 2-amino-4-ethylfenol (0,89 g, 0,006 mol). ’HNMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,61 (br, 2H), 6,47 (d, IH), 6,37 (s, IH), 6,18 (d, IH), 2,17 (q, 2H), 1,08 (t, 3H). MS: MH': 137.

C. V2-(4-bromfenyl)-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Do směsi 2-amino-4-ethylfenolu (0,89 g, 0,0065 mol) v tetrahydrofuranu (80 ml) se přidá 4-bromfenyl-izothiokyanát (1,4 g, 0,0065mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojové teplotě. Bezvodý síran měďnatý (6,2 g, 0,039 mol), triethylamin (0,9 ml, 0,0065 mol) a silikagel (11,7 g) se přidají do reakční směsi. Směs se míchá po dobu 4 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Směs se filtruje přes vrstvu silikagelu 25% ethylacetát/n-heptanem jako mobilní fází, čímž se získá hnědě zbarvená pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 0%-25% ethylacetát/ n-heptanem jako mobilní fází. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se trituruje n-heptanem, čímž se získá V2-(4-bromfenyl)-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2amin (0,96 g, 0,003 mol). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 12,1 min. MS: MH⁺: 318.

D. 7V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-ethyl-l ,3-benzoxazol2-amin

Směs /V2-(4-bromfenyl)-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,86 g, 0,0027 mol), diboronpinakolesteru (0,84 g, 0,0033 mol), [1 ,l’-bis(difenýlfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,22 g, 0,00027 mol) a octanu draselného (0,8 g, 0,0081 mol) v Λζ/V-dimethylformamidu (30 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi

186 ethylacetát a vodu. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 50 ml) a organická vrstva se promyje solankou. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 0%-25% ethylacetát/n-heptanem jako mobilní fází, čímž se získá /V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5ethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,82 g, 0,002 mol).

TLC (ethylacetát/fl-heptan = 25: 75) Rf 0, 30. MS: MH⁺: 365.

E. cL-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -y 1} feny 1)-5-ethy 1 -1,3 -benzoxazol-2-amin

Směs 3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4aminu (0,06 g, 0,00014 mol), 7V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5ethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,062 g, 0,00017 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,011 g, 0,00001 mol) a uhličitanu sodného (0,037, 0,00035 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (3 ml) a vodě (1 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 25 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 2% vodným roztokem hydroxidu amonného/5%-25% methanolem/dichlormethanem jako mobilní fází. Rozpouštědlo se odstraní Za sníženého tlaku, čímž se získá czT-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,065 g, 0,00012 mol). Ή NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 11,25 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,37 (d, 2H), 8,09 (d, 2H), 7,84 (d, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 5,22 (br, 1H), 3,13 (q, 2H), 2,52 (br, 7H), 2,69 (br, 4H), 2,64 (s, 3H), 2,49 (br, 2H), 2,11 (br, 2H), 2,01 (br, 2H), 1,63 (t, 3H). RPHPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 10,3 min. MS: MH⁺ 552.

Příklad 116

Cis-N2-(4-(4-amino-1 - [4-(dimethylamino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin; a

187

Příklad 117

Cis-N2-{4- {4-amino-1 - [4-(dimethylamino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

A. Cis- a trans-1 - [4-(dimethylamino)cyklohexyl]-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-£/|pyrimidin4-amin

Do roztoku 4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexanonmonohydrochloridu (2,00 g, 5,08 mmol), roztoku dimethylaminu (2 M v tetrahydrofuranu, 7,62 ml, 15,24 mmol) a octové kyseliny (0,87 ml, 15,24 mmol) v 1,2-dichlorethanu (200 ml) při pokojové teplotě se přidá triacetoxyborohydrid sodný (1,40 g, 6,61 mmol). Reakce se míchá po dobu 24 hodin a přidá se další triacetoxyborohydrid sodný (0,40g). Po dalších 24 hodinách se přidá nasycený vodný roztok NaHCCb (50 ml) a CH₂C1₂ (200 ml) a organická vrstva se separuje, suší nad bezvodým Na₂SO₄ a koncentruje za vakua. Produkt se čistí sloupcovou chromatografií za použití gradientu 1:5:94 vodného roztoku hydroxidu amonného:MeOH:CH₂Cl₂ až 1:20:79 94 vodného roztoku hydroxidu amonného:MeOH:CH₂Cl₂ jako mobilní fází, čímž se získá směs cis- a trans-l-[4(dimethylamino)cyklohexyl]-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé krystalické pevné látky (0,87 g, 44%); RP-HPLC R_t 5,458 min, 33% čistota, Zmns-izomer; R_t 5,621 min, 67% čistota, m-izomer (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; δ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9mm sloupec); m/z 387 (MH⁺) byl pozorován pro oba cw-and transizomery.

B. Cis- a Zrař75-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(dimethylamino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dímethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Směs cis- a /říms-l-[4-(dimethylamino)cyklohexyl]-3-jod-1//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-aminu (0,50 g, 1,29 mmol),/V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan2-yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,565 g, 1,55 mmol), uhličitanu sodného (0,34 g, 3,24 mmol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,075 g, 0,06 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (150 ml) a vodě (25 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Přidá se další katalyzátor na bázi palladia (0,075 g) a /V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,40 g) a v reakci se pokračuje při teplotě 80°C po dalších 16 hodin. Přidá se další podíl katalyzátoru na bázi

188 palladia (0,020 g) a 7V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,12 g) a v reakci se pokračuje při teplotě 80°C po dalších 16 hodin. Reakce se koncentruje za vakua a zbytky se rozpustí v dichlormethanu (200 ml) a promyjí vodou (50 ml). Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu za použití 1% vodného roztoku hydroxidu amonného a 10% methanolu v CH2CI2 jako mobilní fáze, čímž še získá czs-/V2-(4-{4-amino-l-[4(dimethylamino)cyklohexyl]-l/Z-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-amin (0,08 g) a směsná frakce (0,24 g) a trans-N2-(4- {4-amino-l-[4(dimethylamino)cyklohexyl] -177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3benzoxazol-2-amin (0,030 g); RP-HPLC R_t 11,326 min, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1 vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 497 (MHYH NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 1,49 (2H, m), 2,01 (6H, m), 2,33 (7H, m), 2,35 (3H, s), 2,40 (3H, s), 4,67 (1H, m), 6,80 (1H, s), 7,11 (1H, s), 7,65 (2H, d, J 8, 5 Hz), 7,92 (2H, d, J 8, 5 Hz), 8,23 (1H, s) a 10,85 (1H, s).

Czs-frakce vyžadovala další purifikaci RP-HPLC, čímž se získal cis-N2-(4- {4amino-1 -[4-(dimethylamino)cyklohexyl] - l/7-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7dimethyl- l,3-benzoxazol-2-amin (0,050 g). RP-HPLC R_t 11,337 min, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; δ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); ’H NMR (400 MHz, dó-DMSO) 1,61 (4H, m), 2,08 (2H, m), 2,27 (9H, m), 2,34 (3H, s), 2,40 (3H, s), 4,81 (1H, m), 6,80 (1H, s), 7,11 (1H, s), 7,65 (2H, d, J 8, 5 Hz), 7,92 (2H, d, J 8, 5 Hz), 8,23 (1H, s) a 10,85 (1H, s).

Příklady 614-620

Obecný způsob syntézy analogů czs-7V2-4-[4-amino-l-(4-aminocyklohexyl)-l//pyrazolo[3,4-ř/]pyrimidin-3-yl]fenyl-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučeniny podle příkladů 118-124 se připraví použitím tohoto způsobu.

A. 7V2-(4-Bromfenyl)-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-amin

189

4-Bromfenyl-izothiokyanát (3,639 g, 17,00 mmol) se přidá do roztoku 2-amino-4chlorfenol (2,441 g, 17,00 mmol) v acetonitrilu (20 ml) a reakce se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Výsledný hnědý roztok se pak přidá po kapkách přikapávačkou do suspenze peroxidu draselného (6,04 g, 85,0 mmol) v acetonitrilu (20 ml) předem ochlazeného na teplotu 0°C v ledové lázni. Po 20 minutách počáteční exotermní reakce ustane a reakce se po dobu 40 minut nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po kapkách se přidá voda (120 ml) a výsledný bělavý pevný podíl se spojí filtrací, promyje další vodou (60 ml), suší přes noc lyofilizátoru, čímž se získá 7V2-(4-bromfenyl)-5-chlor-l,3benzoxazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (4,06 g, 74%); RP-HPLC R_t 17,229 min, 99% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 321 (M-H)' a 323 (Μ-Η)';^ NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 7,17 (1H, dd, J 8, 5 a 1, 9 Hz), 7,53 (4H, m), 7,71 (2H, d, J 8, 8 Hz) a 10,95 (1H, s).

B. V2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlor-l,3-benzoxazol2-amin

Směs obsahující 7V2-(4-bromfenyl)-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-amin (4,00 g, 12,36 mmol), bis(pinakolato)diboron (3,77 g, 14,83 mmol), octan draselný (3,64 g, 37,09 mmol) a [l,r-bis(difenylfosfino)fenOcen]dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (1:1) (0,61 g, 0,74 mmol) v dimethylformamidu (200 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod dusíkem po dobu 16 hodin. Přidá se další katalyzátor na bázi palladia (0,61 g) a v reakci se pokračuje dalších 6 hodin. Přidá se další diboron (3,0 g) a reakce se nechá běžet dalších 16 hodin. Do reakční směsi se přidá silikagel (20 pil) a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Výsledný pevný podíl se pák purifikuje na vrstvě silikagelu gradientem 10% až 20% ethylacetátu v heptanu jako mobilní fází. Výsledný pevný podíl se trituruje heptanem, čímž se získá A/2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlor-l,3benzoxazol-2-amin ve formě krémové pevné látky (2,40 g, 52%); RP-HPLC R_t 18,164 min, 99% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); ^!H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 1,29 (12H, s), 7,17 (1H, dd, J 8, 5 a 2,1 Hz), 7,56 (2H, m), 7,68 (2H, m), 7,75 (2H, m) a 10,96 (1H, s).

C. 7V2-(4-bromfenyl)-5-methyl-l,3-benzoxazol-2-amin

190

2-Amino-4-methylfenol (1,15 g, 9,34 mmol) se přidá do roztoku 4-bromfenylizothiokyanátu (2,00 g, 9,34 mmol) v tetrahydrofuranu (35 ml) a reakce se míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se bezvodý síran měďnatý (14,06 g, 88,10 mmol), silikagel (14, 06 g) a triethylamin (1,3 ml, 9,34 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Reakce se koncentruje za sníženého tlaku a nanese na vrstvu silikagelu a purifikuje 1: 5 ethylacetát:heptanem (2 1), poté diethyletherem jako mobilní fází, čímž se získá 7V2-(4-bromfenyl)-5-methyl-l,3-benzoxazol-2-amin ve formě světle hnědé pevné látky (2,30 g, 81%); RP-HPLC R_t 16,437 min, 94% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); *H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 2,37 (3H, s), 6,94 (1H, d, J8, 1Hz), 7,27 (1H, s), 7,36 (1H, d, J 8,1 Hz), 7,54 (2H, d, J 8, 4 Hz), 7,72 (2H, d, J 8, 4 Hz) a 10, 72 (1H, s).

D. 7V2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-methyl-l,3benzoxazol-2-amin

7V2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-methyl-l,3benzoxazol-2-amin se připraví z V2-(4-bromfenyl)-5-methyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (1,5 g, 4,95 mmol) způsobem popsaným pro přípravu 772-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-aminu. Produkt je ve formě bílých pevných vloček (0,79 g, 46%); RP-HPLC R_t 17,382 min, 98% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); ’H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 1,29 (12 H, s), 2,38 (3H, s), 6,94 (1H, d, J 8, 1 Hz), 7,30 (1H, s), 7,36 (1H, d, J 8,1 Hz), 7,67 (2H, d, J 8, 5 Hz), 7,75 (2H, d, J 8, 5 Hz) a 10,74 (1H, s).

E. Obecný způsob syntézy cyklohexylaminových analogů cis-1 -(4-aminocyklohexyl)3 -jod- 177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu

191

NHRR' (3,0 ekviv) NaBH(OAc), (1,3 ekviv.) HOAc (3,0 ekviv.)

DCE

4-(4-Ammo-3-jod-líApyrazólo[3,4-ď]pyrimidin-l-yl)-l-eyklohexanon-: monohydrochlorid (5,08-7,62 mmol) se suspenduje v dichlorethanu (200-300 ml) pod atmosférou dusíku. Příslušný amin (3,0 ekviv.), ledová kyselina octová (3,0 ekviv.) a triacetoxyborohydrid sodný (1,3 ekviv.) se přidají a reakce se míchá při pokojové teplotě po dobu 1-2 dnů. Kvůli dotáhnutí reakce se přidá další triacetoxyborohydrid sodný (1,3 ekviv.) a v reakci se pokračuje další 1 nebo 2 dny. Reakce se zhášejí nasyceným roztokem uhličitanu sodného (50 - 75 ml) a extrahují dichlormethanem (200-300 ml). Organické fáze se separují, suší nad bezvodým Na₂SO₄ a koncentrují za vakua, čímž se získá směs cis- a írans-produktů ve formě bílé pevné látky. Surové produkty se puriíikují zrychlenou chromatografií gradientem 2% methanolu a 0,2% hydroxidu amonného v dichlormethanu až 5% methanolu a 0,5% hydroxidu amonného v dichlormethanu jako mobilní fází. Frakce obsahující čisté czs-produkty se spojí, koncentrují za Sníženého tlaku, suší v lyofilizátoru, čímž se získají cyklohexylaminové analogy eri-l-(4-aminocyklohexyl)-3-jod-l/7pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (výtěžky a analýza viz tabulka 1).

'· ·	• · · ·	•		··		····
•	• ·	* ·	• ·	•	•	•
•	• ·	•	•	•	•	9
						•
e	« e β	c	6	•	•	• 9
• ·	• ·	···	···	··>		99

192

Tabulka 1

Struktura	Výchozí amin	Mn. výchozího cyklohexanohu (mmol)	m/z (ΜΙΓ)	HPLC RT (min)	Čistota	% Výtěžek izolovaného czs-izomeru
I /	H	5,08	429,0	5,63	95%	8
Λλ	0
o
Ϊ ¹	h₂n^Y	7,62	417,0	5,96	100%	59
w o	h₃c
Λ ''ο''					.....
ΐ '	H„N.	7,62	373,0	5,32	100%	2
	² ch₃
ιι I ,^NΛλ
W /^N

Podmínky RP-HPLC: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec.

F. Obecný způsob syntézy analog cis-A2-4-[4-amino-1 -(4-aminocyklohexy 1)-1//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]feňyl-l,3-benzoxazol-2-aminu

Cyklohexylaminová analoga c/s-1-(4-aminocyklohexy l)-3-jod-l A-pyrazolo [3,4í/jpyrimidin-4-aminu (0,10-0,52 mmol) se rozpustí v dimethyletheru ethylenglykolu (5-10 ml) a vodě (2,5-5 ml). Příslušný substituovaný nebo nesubstituovaný A-(l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (1,25 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,05 ekviv.) a uhličitan sodný (2,5 ekviv.) ···· · · ···· .···· »»···· eee©

193 se přidají a reakce se zahřívá pň teplotě 80°C po dobu 20 hodin. Kvůli dotáhnutí reakce se přidá další boronát (1,25 ekviv.) a katalyzátor ná bázi palladia (0,05 ekviv.). Při precipitaci se do reakce přidá navíc DME/H2O 2:1 (5 ml) a reakce se znovu zahřívají při teplotě 80°C po dalších 22-40 hodin. Do reakce se přidá silikagel (5-8 ml) a směs se koncentruje za sníženého tlaku. Purifikaci zrychlenou chromatografií na silikagelu gradientem 2% až 50% methanolu obsahujícího 0,5M hydroxid amonný v dichlormethanu se získají analogy czs-V2-4-[4-amino-l -(4-aminocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]fenyl-l ,3benzoxazol-2-aminu. U produktů s nedostatečnou čistotou se vzorky dále purifikují na RPHPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: gradient 15% až 35% acetonitril/Ο,ΙΜ vodného octanu amonného v průběhu 40 minut, pak gradient 35% až 90% acetonitril/Ο,ΙΜ vodného octanu amonného v průběhu 150 minut; Deltapak C18, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Frakce obsahující požadované produkty se spojí a koncentrují za vakua, pak suší v lyofilizátoru, čímž se získají produkty ve formě bílých nebo hnědých pevných látek (výtěžky a analýza viz tabulka 2).

Tabulka 2

Př.	Struktura	Výchozí cyklohexylamin	Výchozí boronát	m/z (MH⁺)	HPLC RT (min)	Čistota	% Výt.
Struktura	Množství (mmol)
118	h_N -CQ fS ' NH,	Ϊ ¹	0,24		527,3	11,66	100%	32
	b		NH
	0?“ A	N		Y
				A
119	udo	Y	0,25	5/	499,3	9,72	100%	79
	nh,	A		NH

	u	v.		ifi
	Y/ H			A

• · · · · · » ·

194

120	n-gG ^HNX>Yf	ód	0,33	X Á-χΟ	539,3	11,50	100%	28
	ϊ^Η* νΎ^ li X? G O	Q 0		Γ NH O A
121	-<O NH, ll X' G O ^*0	N , GÓ· X 0	0,12	Γ 9 a	511,3	9,77	100%	60
122	NH, xX ii X z^N Λ	Ó3· <_ν*ύ . y 0	0,10	α O v NH ó	545,2	11,36	97%	27
	o ^*o .			G
123	™-<O nh, γ®' νΎ4 it χ ,^N X H	γ X Z^N	0,13	NH ó a	455,2	9,48	100%	61
124	„-φΧ NH,. íx> G z^N .	G /	0,52	^Νγο G

·' ÍG'· ·.

195

Podmínky RP-HPLC: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufřovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec.

Příklad 125 cis-N2-(4-{4-Amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}fenyl)-4-(2-nitrofenyl)-l,3-thiazol-2-amin

Použije se způsob popsaný pro přípravu cis-N2-(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-ethyl-l,3thiazol-2-aminu se s výjimkou toho, že jako alkylační činidlo se použije 2-brom-2'nitroacetofenon (0,126 g, 0,516 mmol). Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8p Hypersil HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 7,0-8,0 min) se získá cw-7V2-(4-{4áníino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4(2-nitrofenyl)-l,3-thiazol-2-amin ve formě žluté pěny (0,088 g, 0,144 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5p Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 7,72 min; MS (MH)⁺611.

Příklad 126 cis-N2-(4-{4-Amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzothiazol-2-amin

Pyridinium-tribormid (0,894 g, 2,80 mmol) a 3,5-dimethylcyklohexanon (0,180 ml, 1,27 mmol) se suspendují v dichlormethanu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, pak zředí dichlormethanem (60 ml). Organická vrstva se extrahuje postupně vodou (10 ml) a hydrogenuhličitanem sodným (10 ml), suší (síranem hořečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikací produktu zrychlenou sloupcovou chromatografií (7,5% ethylacetát/heptan) se získá 2,6-dibrom-3,5-dimethyl-lcyklohexanon ve formě směsi diastereoizomerů (0,243 g, 0,855 mmol): TLC Rf (20% ethylacetát/heptan): 0,35.

UM ···· • · · · · · · • Φ · · · ···· β β e β ο · β · e *· ·· ··· '··· ··

196

Alkylace 2,6-dibrom-3,5-dimethyl-l-cyklohexanonu (0,243 g, 0,855 mmol) se provede podle alkylačního způsobu popsaného pro přípravum-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyI)-4-ethyl-l,3thiazol-2-aminu s výjimkou toho, že alkylace se provádí při teplotě 75°C, čímž se získá A-(4-bromfenyl)-7V-(5,7-dimethyl-l,3-benzothiazol-2-yl)amin (0,251 g, 0,754 mmol); RPHPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 14,8 min.

A-(4-Bromfenyl)-A-(5,7-dimethyl-l,3-benzothiazol-2-yl)amin (0,251 g, 0,754 mmol) se konvertuje na požadovanou sloučeninu způsobem popsaným pro přípravu czs-jV2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 /7-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin3-yl}fenyl)-4-ethyl-l,3-thiazol-2-aminu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8,8-10,5 min) se získá czs-A2-(4-{4amino-1 - [4-(4-methy lpiperazinojcyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4 -í/]pyrimidin-3 -y 1} feny 1)5,7-dimethyl-l,3-benzothiazol-2-amin ve formě bílého prášku (0,081 g, 0,143 mmol); RPHPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 8,75 min; MS (MH)⁺

568.

Příklad 127 cis-N2-(4-{4-Amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin3-yl}fenyl)-5, 6-dihydro-4//-cyklopenta[ó/][l,3]thiazol-2-amin

Cyklopentanon (200 μΐ, 2,26 mmol) a pyridinium-bromid (0,723 g, 2,26 mmol) se suspendují v dichlormethanu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc, pak zředí ether/petroletherem (1:1, 60 ml). Organická fáze se postupně extrahuje vodou (10 ml) a vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml), pak suší (síranem hořečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikací produktu zrychlenou sloupcovou chromatografií (25% ether/petrolether) se získá 2-bromcyklopentanon (0,220 g, 1,35 mmol) ve formě bezbarvého oleje; TLC (25% ether/petrolether) Rf: 0,35.

2-Bromcyklopentanon (0,220 g, 1,35 mmol) se konvertuje na požadovanou sloučeninu způsobem popsaným pro přípravu czs-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-(2-nitrofenyl)197 l,3-thiažol-2-aminu s výjimkou toho, ze alkylace se provádí při teplotě 60°C. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min pomocí 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, Rt 7,8-8,8 min) se získá m-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4/Y-cyklopenta[íf][l,3]thiazol-2-amin ve formě hnědého prášku (0,009 g, 0,017 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 7,23 min; MS (MH)⁺530.

Příklad 128 cz5-/V2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin3-yl}fenyl)-5-ethyl-4-fenyl-l,3-thiazol-2-amin

Způsob přípravy cri-/'/2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyřazblo[3,4-^]pyrirnidin-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro4//-cyklopenta[</][l,3]thiazoL2-aminu se použije ke konvertování butyrofenonu (436 μΐ, 3,00 mmol) na požadovanou sloučeninu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min pomocí 8μ Hypersil HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8,9-11,1 min) se získá cz5-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-4-fenyll,3-thiazol-2-amin ve formě bílého prášku (0,022 g, 0,037 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,27 min; MS (MH)⁺ 594.

Příklad 129 cri-A2-(4- {4-Amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)eyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin3-yl} fenyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1,3-benzothiazol-2-amin

Způsob přípravy cz5-/V2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4//-cyklopenta[</l[l,3]thiazol-2-aminu se použije ke konvertování cyklohexanonu (310 μΐ, 3,00 mmol) na požadovanou sloučeninu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersil HS

198

08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 6,8-8,6 min) se získá cz5-zV2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4,5,6,7tetrahydro-l,3-benzothiazol-2-amin ve formě oranžového prášku (0,022 g, 0,040 mmol); RP-HPLČ (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 pm Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 7,62 min; MS (MH)⁺544.

Příklad 130 cA-A2-(4- {4-Amino-1 -[4-(4-methyIpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin3-yl}fenyl)-5-izopropyl-4-fenyl-l ,3 thiazol-2-amin

Způsob přípravy cz\-A2-(4-{4-ammo-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lVpyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4V-cyklopenta[ť/][l,3]thiazol-2-aminu se použije ke konvertování izovalerofenon (0,484 g, 2,98 mmol) na požadovanou sloučeninu. Purifikací produktu preparativníHPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8p Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9,5-11,7 min) se získá cA-/V2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-íf|pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-izopropyl-4fenyl-l,3-thiazol-2-amin ve formě růžového prášku (0,060 g, 0,099 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 pm Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,82 min; MS (MH)⁺ 608.

Příklad 131 cis-N2-(4- {4-Amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin3-yl}fenyl)-4-fenyl-5-propyl-l,3-thiazol-2-amin

Způsob přípravy cis-A2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4V-cyklopenta|X][l,3]thiazol-2-aminu se použije ke konvertování val erofenonu (0,488 g, 3,01 mmol) na požadovanou sloučeninu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min pomocí 8p Hypersil HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9,6-11,8 min) se získá czs-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-tíQpyrimidin-3-yl}fenyl)-4-fenyl-5-propyl-

9 9 · 9 9 9	9	•	• ·	• 9 9 9
• · 9	•		• ·	•
• 9 9 9	9	9	• 9 ·	9
« e e e	β	•	• 9	9 9
• 9 9 9	9 9 9	9 99	9 9	9 9

199

1.3- thiazol-2-amin ve formě žluté prášku (0,135 g, 0,222 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v O,1M vodný octan amonný v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 10,08 min; Mg (MH)⁺ 608.

Příklad 132

3-(4-(1,3-Benzoxazol-2-ylmethyl)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-cf)pyrimidin-4-amin

2-Aminofenol (0,257 g, 2,36 mmol) a 4-bromfenyloctová kyselina (0,500 g, 2,36 mmol) se zahřívají v uzavřené nádobě při teplotě 200°C. Po 4 hodinách se reakční směs ochladí na pokojovou teplotu a zředí methanol/dichlormethanem (5%, 60 ml). Organická fáze se extrahuje vodným roztokem uhličitanu sodného (1 M, 10 ml), suší (síranem hořečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikací zbytku zrychlenou sloupcovou chromatografií (15% ethylacetát/heptan) se získá 7V-( 1,3-benzoxazol-2-yl)-?V-[4-(4,4,5,5tětřaniethyl-l,3,2-dioxaborolam2-yl)fenyl]amin‘veTorměLinědé pevné látky (0,347 g, 1,20 mmol); (MH)’ 290.

7V-(1,3-Benzoxazol~2-yl)-/V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin se konvertuje na 2-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzylj1.3- benzoxazol, a pak na požadovanou sloučeninu způsobem popsaným pro přípravu cisN2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-3yl}fenyl)-6-chlor-l,3-benzothiazol-2-aminu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 5,6-7,3 min) se získá 3-(4-(1,3benzoxazol-2-ylmethyl)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin ve formě bílého prášku (0,102 g, 0,195 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití a 5μ Hypersil HS C 18, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 6,83 min; MS (MH)⁺ 523.

Příklad 133

NI -[2-(Dimethylamino)ethyl] -2- {4-amino-3 -(4-(1,3 -benzoxazol-2-ylamino)fenyl]- \Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl}propanamid

200

Použije se způsob popsaný pro přípravu Al-[2-(dimethylamino)ethyl]-2-(4-amino3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl)propanamidu s výjimkou toho, že při Suzukiho kopulaci se použije A-(l,3-benzoxazol2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 5,5-7,0 min) se získá Al-[2-(dimethylamino)ethyl]-2-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-l-yl}propanamid ve formě bělavé pevné látky (0,003 g, 0,006 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 pm Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 6,70 min; MS (MH)⁺ 486.

Příklad 134 cA-A2-(4-{4- Amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)eyklohexy1]-1//-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidin3-yl}fenyl)-5-ethyl-4-(4-methylfenyl)-l,3-thiazol-2-amin p-Tolylboritá kyselina (0,150 g, 1,10 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,064 g, 0,055 mmol) a uhličitan česný (1,80 g, 5,52 mmol) se suspendují v toluenu (25 ml). Reakční směs se proplachuje silným proudem dusíku po dobu 15 minut. Přidá se butyrylchlorid (0,344 ml, 3,31 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 24 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a zředí etherem (100 ml). Organická vrstva se extrahuje postupně vodop (10 ml), vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a vodným roztokem chloridu sodného (10 ml). Organická vrstva se suší (síranem hořečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikací zbytku zrychlenou sloupcovou chromatografií (7,5% ether/petrolether) se získá 1-(4methylfenyl)-l-butanon ve formě bezbarvého oleje (0,134 g, 0,827 mmol): ^]H NMR (CDC13, 400 MHz) 6 7,86 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 2,92 (t, 2H), 2,41 (s, 3H), 1,76 (sx, 2H), 1,00 (t, 3H).

l-(4-Methylfenyl)-l-butanon (0,134 g, 0,827 mmol) se konvertuje na požadovanou sloučeninu způsobem popsaným pro přípravu cA-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4//cyklopenta[í/][l,3]thiazol-2-aminu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití

201

8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 10,0-12,0 min) se získá cw-7V2-(4-{4amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5ethyl-4-(4-methylfenyl)-l,3-thiazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,036 g, 0,059 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 pm Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 10,13 min; MS (MH)⁺608.

Příklad 135 cz£-A2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/|pyrimidin3-y]}fenyl)-5-ethy]-4-(2-methylfenyl)-l,3-thiazol-2-amin

Způsob přípravy cA-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-4-(4-methylfenyl)-l,3-thiazol-2-aminu se použije ke konvertování o-tolylborité kyseliny (0,200 g, 1,47 mmol) na požadovanou sloučeninu. Purifrkací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min pomocí 8p Hypersil HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9,8-11,7 min) se získá cis-N2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-4-(2methylfenyl)-l,3-thiazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,075 g, 0,123 mmol); RPHPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 p Hypersil HS C 18, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,83 min; MS (MH)⁺608.

Příklad 138 cis-N2-(4- {4-Amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin3-yl}fenyl)-5-ethyl-4-(3-methylfenyl)-l ,3-thiazol-2-amin

Způsob přípravy ez5-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-4-(4-methylfenyl)-l,3-thiazol-2-aminu se použije ke konvertování zw-tolylborité kyseliny (0,175 g, 1,29 mmol) na požadovanou sloučeninu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min pomocí 8p Hypersil HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 10,0-12,0 min) se získá cz5-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4202 methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5-ethyl-4-(3 methylfenyl)-l,3-thiazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,051 g, 0,084 mmol); RPHPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 pm Hypersil HS Cl 8,250 x 4,6 mm sloupec) R_t 10,13 min; MS (MH)⁺

608.

Příklad 139

Czs-/V2-{4-(4-amino-1-(4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-1//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin3 -yl)-2-methoxyfeny 1} -1 //-2-indolkarboxamid-bismaleát

Směs cz.s-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl-l//pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (0,50 g, 1,15 mmol) v dichlormethanu (4 ml) a pyridinu (4 ml) se ochladí na teplotu 0°C, pak nechá reagovat s l//-2-indolkarbonylchloridem (0,27 g, 1,49 mmol) v dichlormethanu (4 ml). Směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu jednu hodinu. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku, pak se zbytek vytřepe mezi dichlormethan (50 ml) a 1 N vodný roztok hydroxidu sodného. Vrstvy se separují, pak se organický roztok suší nad síranem hořečnatým, filtruje a filtrát koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá zbytek, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití dichlormethan/methanolu (7: 3) jako mobilní fáze. Pevný podíl (0,53 g) se rozpustí v ethylacetátu (60 ml) a ethanolu (35 ml) zahřátím na teplotu 60°C. Přidá se kyselina maleinová (0,32 g, 2,75 mmol) v ethylacetátu (5 ml) a směs se ochladí na teplotu 0°C. Vzniklý pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá (0,70 g, 0,86 mmol) czs-/V2-{4-(4amino-1 -(4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2methoxyfenyl}-l//-2-indolkarboxamid-bismaleát: *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,82 (s, 1H), 9,46 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,10 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,40 (s, 1H), 7, 33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,24-(t, 1H), 7,09 (t, 1H), 6,14 (s, 4H), 4,88 (m, 1H), 3,97 (s, 3H),

2,3-3,3 (m, 14H), 2,09 (m, 2H), 1,7-1,8 (m, 4H); RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5% až 100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,22 min; MS: MH⁺ 580,3.

203

Příklad 140

Cz5V2-{4-4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin3-yl-2-methoxyfenyl}-l-methyl-lV-2-indolkarboxamid-bismaleát

Požadovaná sloučenina se připraví z cz'.v-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl-l V-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu a 1-methyl-1V-2indolkarbonylchloridu podobným způsobem jako je popsán pro přípravu Cz'sV2-{4-(4amino-l-(4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-lV-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2methoxyfenyl}-lV-2-indolkarboxamid-bismaleát: *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,47 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,09 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,59 (d, 1H), 7,17-7,36 (m, 4H), 7,16 (t, 1H), 6,16 (s, 4H), 4,88 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,3-3,3 (m, 14H), 2,09 (m, 2H), 1,7-1,8 (m, 4H); RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 m, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,98 min;

MS: MH⁺594,3.

Příklad 141

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-yl] -2-methoxy fenyl} -2fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-acetát

A. 2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilin

Směs /erobutylV-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamátu (45,0 g, 129 mol) se rozpustí v dichlormethanu (270 ml), pak se roztok ochladí na teplotu 5°C v ledové lázni. Směs 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu se po kapkách přidá v průběhu jedné hodiny, přičemž teplota se udržuje < 5°C. Reakční směs se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá po dobu 2 hodin. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, pak se výsledný olej rozpustí v dichlormethanu (250 ml) a opatrně extrahuje 2,5 N vodným roztokem hydroxidu sodného (300 ml), pak solankou (100 ml). Organický roztok se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a fitrát koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilin (21,7 g, 67,5%) ve formě světle hnědé pevné látky jako bismaleát: *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,06 (d, 1H), 6,98 (s, 1H), 8,09 (d, 1H), 6,59 (d, 1H), 5,13 (bs, 2H), 3,76 (s, 3H), 1,26 (s, 12H); RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) t_r 10,85 min.

r*'

204

B. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidinl-yl]-l-piperidinkarboxylát

Směs A?rc-butyl-4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylátu (0,50 g, 11,26 mmol), 2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)anilinu (3,10 g, 12,39 mmol), uhličitanu sodného (2,90 g, 27,0 mmol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,78 g, 0,67 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (90 ml) a vody (45 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 18 hodin. Směs se ochladí a odpařuje za sníženého tlaku, pak vytřepe mezi vodu (50 ml) a dichlormethan (150 ml). Vodná vrstva se extrahuje dalším dichlormethanem (2 X 50 ml), pak se spojené organické podíly suší nad síranem hořečnatým a filtrují. Filtrát se koncentruje a purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu dichlormethan/methanolem (96: 4) jako mobilní fází, čímž se získá požadovaná sloučenina (4,51 g, 91%) ve formě hnědé pevné látky: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, ÍH), 7,04 (s, ÍH), 6,98 (d, ÍH), 6,76 (d, ÍH), 5,06 (bs, ÍH), 4,86 (m, ÍH), 4,08 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,15-2,90 (m, 211), 2,03 (m, 2H), 1,90 (m, 2H), 1,43 (s, 9H); RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) t_r 9,70 min.

C. Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfeny 1} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-acetát

Směs z‘erc-butyl-4-[4-aminO-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4z/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (0,10 g, 0,228 mmol) v dichlormethanu (2 ml) a pyridinu (1 ml) se nechá reagovat s 2-fluor-4-trifluormethylbenzoylchloridem (0,057 g, 0,251 mmol), pak míchá po dobu 1 hodiny. Rozpouštědla se odpařují, pak se zbytek nechá reagovat s trifluoroctovou kyselinou (1 ml) v dichlormethanu (2 ml). Směs se míchá po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě, pak se rozpouštědla odpařují za sníženého tlaku a zbytek purifikuje preparativní RP-HPLC na Cl8 za použití acetonitril-0,05 M octanu amonného jako mobilní fáze. Lyofilizací se získá čistá požadovaná sloučenina: *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,90 (d, ÍH), 8,31 (d, 1H), 8,24 (s, ÍH), 7,99 (t, ÍH), 7,89 (d, ÍH), 7,75 (d, ÍH), 7,33 (s, ÍH), 7,30 (d, 1H), 4,78 (m, ÍH), 3,94 (s, 3H), 3,10 (m, 2H), 2,69 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 1,85-2,0 (m, 5H); RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-l 00% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 17,33 min; MS: MH’ 530,2.

• · ι*·'

205

Sloučeniny podle příkladů se 142-216 připraví z terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino3 -methoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -1 -piperidinkarboxylátu a příslušného chloridu kyseliny podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu VI{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor4-(trifluormethyl)benzamid-acetátu. K připravení požadované sloučeniny jsou v některých případech třeba standardní operace s funkčními skupinami. Volné báze se připraví po purifikaci na preparativní HPLC jejich vytřepáním mezi vodný roztok hydroxidu sodného a dichlormethanu; Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, pak filtruje a filtrát koncentruje, čímž se získá požadovaný produkt.

Příklad 143

VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 Z/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy feny 1} -3fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 17,12 min; MS: MH⁺ 530,2.

Příklad 144

Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy feny 1} benzamid-acetát

RP-HPLC. (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 14,20 min; MS: MH^1-444,1.

Příklad 145

Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-3fenylpropanamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 14,97 min; MS: ΜΗ*^- 472,2.

206

Příklad 146

XI-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-3cyklopentylpropanamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-l00% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,95 min; MS: MH+ 464,2.

Příklad 147

N5-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ť7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-l,3dimethyl-177-5-pyrazolkarboxamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 11,62 min; MS: ΜΗ* 462,2.

Příklad 148

Ni - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl }-2(2-thienyl)acetamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS C 18 Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,17 min; MS: MH⁺464,2.

Příklad 149

ΛΤ-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2fenylacetamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,63 min; MS: MH* 458,2.

Příklad 150

7Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2(3,4-dimethoxy fenyl)acetamid

207

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,20 min; MS: MH⁺ 518,3.

Příklad 151

ΛΊ - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2fenoxypropanamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4, 6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,43 min; MS: ΜΗ^4- 488,2.

Příklad 152

7V5-{4-[4-amino-l-(4-piperidyI)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-5izoxazolkarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 10,93 min; MS: MH⁺ 433,1.

Příklad 153

NI- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2pyridinkarboxamid-triacetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,52 min; MS: MH⁺445,2.

Příklad 154

TVl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2,4difluorbenzamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 14,65 min; MS: MH⁺ 480,1.

AA AAAA c;

·· AAAA • · ·

A A · • · A * * A · ·· A A

AA ·Α » » · • · AAA

A « A A A A • · · A A A

AAA AAA AA AA

208

Příklad 155

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2,5difluorbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 14,75 min; MS: MHf 480,2.

Příklad 156

A2- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1A-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -2furamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,40 min; MS: MH⁺434,2.

Příklad 157

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2,2dimethylpropanamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 14,53 min; MS: MH⁺ 424,2.

Příklad 158

AI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl } -4kyanobenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,68 min; MS: MH⁺ 469,2.

7· . ·

Příklad 159

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-lcyklopropankarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 11,05 min; MS: Mff 408,2.

ís λ

209

Příklad 160 /V3 - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2methylenikotinamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 11,53 min; MS: MH* 459,1.

Příklad 161 jVl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4fluor-3-methylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,32 min; MS: MH⁺ 476,2.

Příklad 162

Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-3(dimethylamino)benzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl 8, 5 pm, 100 A, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 14,63 min; MS: MH⁺ 487,2.

Příklad 163

Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yÍ]-2-methoxyfenyl}-2,3diíluor-4-methyIbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 16,03 min; MS: MH⁺ 494,2.

Příklad 164

7V4-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl} izonikotinamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,77 min; MS: MH⁺445,1.

210

Příklad 165

M3-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxy feny 1} nikotinamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS CÍ8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 17,50 min; MS: MH⁺ 445,1.

Příklad 166

N2- {- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 methyl-l//-2-pyrrolkarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-50% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 22,20 min; MS: MH⁺ 447,2.

Příklad 167

N3-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -6methylenikotinamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 17,97 min; MS: MH⁺459,2.

Příklad 168

M2- {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2pyrazinkarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 17,63 min; MS: MH⁺ 446,1.

Příklad 169

Ml -{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</[pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} -4jodbenzamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 16,08 min; MS: MH* 570,1.

ί',

• ·

211

Příklad 170

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyražolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4brombenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,42 min; MS: MH⁺ 524,1.

Příklad 171

Al·-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4fenoxybenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 mih, 1 ml/min) t_r 17,17 min; MS: MH⁺ 536,2.

Příklad 172

Al -4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl-4fluorbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,65 min; MS: MH⁴ 462,1.

Příklad 173

Al - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4chlorbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 mlJmin) t_r 15,57 min; MS: MH⁴478,2.

Příklad 174

Al - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4~č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4methoxybenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 A, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,62 min; MS: MH⁴ 474,2.

• ·

212

Příklad 175

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4(trifluormethoxy)benzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 A, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 16,30 min; MS: MH⁺ 528,2.

Příklad 176

NÍ - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4nitrobenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, l· ml/min) t_r 13,77 min; MS: MH⁺ 489,2.

Příklad 177

A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}benzo[ó]thiofen-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 16,12 min; MS: MH⁺ 500,2.

Příklad 178

A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl} benzo[ó]furan-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,70 min; MS: MH⁺ 484,2.

Příldad 179

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-měthoxyfenyl}-4methylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,47 min; MS: MH⁺ 458,2.

• · · · · · • · ·. 9 · ·	• · β	• ·· e	« · • · ' · ·	9999 • •
• · · ·		•	• ·	• ·
• · · ·	• · ·	·· ·	• 9	• · -

213

Příklad 180

JV1 - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4(Zerc-butyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C 18 Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 17,93 min; MS: MH 500,2.

Příklad 181

Methyl-4-{(4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/y-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyanilino }karbonyl)benzoát-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 14,70 min; MS: MH⁺ 502,1.

Příklad 182

4-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-íf|pyrimidin-3-yl]-2methoxyanilino} karbony l)benzoová kyselina

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 10,02 min; MS: MH’ 478,1.

Příklad 183

M-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2chlorbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) t_r 7,28 min; MS: MH⁺ 478,1.

Příklad 184

NI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidy 1)-1 H-pyrazolo [3,4-ú]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -2brombenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) t_r 7,42 min; MS: MH⁺ 524,1.

214

Příklad 185

Ni - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2methoxybenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) t_r 7,87 min; MS: MH⁺ 474,2.

Příklad 186

XI -{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2fenylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl 8, 5 pm, 100 A, 250 X 4,6 mm; 25%-l 00% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) t_r 8,27 min; MS: MH⁺ 520,2.

Příklad 187

XI-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2(trifluonnethyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 A, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,07 min; MS: MH⁺ 512,2.

Příklad 188

XI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -2(trifluormethoxy)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 A, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,77 min; MS: MH⁺ 528,2.

215

Příklad 189

JVl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-3methoxybenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 14,43 min; MS: MH⁺ 474,2.

Příklad 190

NI - { 4-[4-amino-1 -(4-piperidyl )-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxy fenyl} -3(triíluormethyl)benzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) t_r 8,15 min; MS: MH⁺512,2.

Příklad491

M - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2fluor-3-(trifluormethyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) t_r 8,50 min; MS: MH* 530,2.

Příklad 192

JVI-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)- J//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2fluor-6-(trifluormethyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,30 min; MS: MH⁺ 530,2.

Příklad 193 jVI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2fluor-5-(trifluormethyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 14,68 min; MS: MH* 530,2.

·· ····

216

Příklad 194 jVl-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-l/T-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2fluor-5-methylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,32 min; MS: MH⁺ 476,2.

Příklad 195 jVl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lTT-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4chlor-2-fluorbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 16,50 min; MS: MH⁺ 496,1.

Příklad 196

TVÍ - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 TT-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4benzoylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 16,33 min; MS: MH⁺ 548,2.

Příklad 197

TVÍ - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-17T-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4acetylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,77 min; MS: MH⁺ 486,2.

Příklad 198

TVÍ - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 TT-pyrazolo [3,4-<f]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4izopropylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 17,10 min; MS: MH+ 486,2.

2Y1

Příklad 199

ΛΠ - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl) -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4ethylbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,85 min; MS: MH⁺ 472,2.

Příklad 200

NI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfeny 1} -4propy lbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 17,02 min; MS: MH⁺ 486,2.

Příklad 201 — /Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4cyklohexylbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 19,55 min; MS: MH⁺ 526,2.

Příklad202 /VÍ-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4ethoxybenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,28 min; MS: MH⁺ 488,2.

Příklad 203 //l-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4(methylsulfonyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,01 min; MS: MH⁺ 527,2.

··

218

Příklad 204

Ni - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4izopropoxybenzamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 16,20 min; MS: MH⁺ 502,2.

Příklad 205

Ni - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} -4(1 Η-1 -imidazolyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,02 min; MS: MH⁺ 510,2.

Příklad 206

VI - {4- [4-amino-l-(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2fluorbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 14,60 min; MS: MH⁺ 462,3.

Příklad 207

V2- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl }-5methoxybenzo[6]furan-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,38 min; MS: ΜΗ^1- 514,3.

Příklad 208

V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-5brombenzo[ů]furan-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 17,03 min; MS: MH+ 564,1.

219

Příklad 209

N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-e/Jpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -5methylbenzo [ó] furan-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 16,27 min; MS: MH⁺ 498,3.

Příklad 210

A2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-3methylbenzo [ó] furan-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 16,67 min; MS: MH⁺ 498,3.

Příklad211 jV2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-5nitrobenzo[ó]furan-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 15, 33 min; MS: MH⁺ 529,2.

Příklad 212

A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-5aminobenzo[/>]furan-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 11,93 min; MS: MH⁺ 499,3.

Příklad 213

A2-{4-[4-(acetylamino)-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy feny 1}-5-(acetylamino)benzo [ó]furan-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 12,47 min; MS: MH⁺ 583,2.

-.'Áá '

220

Příklad 214

7V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-5(acetylamino)benzo[Ď]furan-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 A, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 11,95 min; MS: MH⁺ 541,2.

Příklad215

N2-{ 4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 7/-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -7methylbenzo[ů]furan-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100 A, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 14,23 min; MS: MH+ 498,3.

Příklad 216

7V2- {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl }-7methoxybenzo[ů]furan-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 A, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 min, 1 ml/min) t_r 13,03 min; MS: MH⁺ 514,3.

Příklad 217 rac-N2-{4-[4-Amino-1 -(1-methyltetrahydro-1H-3 -pyrrólyl)-1 //-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin3-yl]fenyl}-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

A. rac-terc-butyl-3-hydroxy-l-pyrrolidinkarboxylát

Do roztoku 3-pyrrolidinolu (3,144 g, 3,00 ml, 36,09 mmol) v 1,4-dioxanu (50 ml) a vody (50 ml) se přidá di-Zerc-butyl-dikarbonát (8,664 g, 39,70 mmol) a hydrogenuhličitan sodný (10,612 g, 126,3 mmol). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin, čímž se získá bílá suspenze ve žlutém roztoku. Reakční směs se filtruje a filtrát se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické fáze se promyjí solankou, suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují a koncentrují, čímž se získá rac-/erc-butyl-3hydroxy-l-pyrrolidinkarboxylát ve formě světle žlutého oleje (6,039 g, 89%). ’H NMR

-X

221 (DMSO-dé, 400 MHz) δ 1,51 (s, 9 H), 1,84-2,05 (m, 2 H), 2,28 (d, 1 H), 3,33-3,48 (m, 4

H), 4,43 (s, 1H).

B. rac-3-Jod-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminmonohydrochlorid

Do roztoku 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (5,610 g, 21,49 mmol) v tetrahydrofuranu (200 ml) se přidá rac-ferc-butyl-3-hydroxy-l-pyrrolidinkarboxylát (6,039 g, 32,25 mmol), trifenylfosfin (11,273 g, 42,98 mmol) a diethylazodikarboxylát (7,485 g, 6,77 ml, 42,98 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 dnů, pak koncentruje, čímž se získá oranžovo-hnědý olej. Přidá se aceton (100 ml) a 5 N kyselina chlorovodíková (50 ml) a roztok se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 18 hodin, pak ochladí na pokojovou teplotu. Výsledný žlutý precipitát se filtruje a filtrační koláč se promyje diethyletherem a suší, čímž se získá rac-3 -jod- 1-tetrahydro-1/7-3 -pyrrolyl-1//pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-4-amin-monohydrochlorid ve formě bělavé pevné látky (5,153 g, 65%). ŘP-HPLC R_t 4,079 min, 99% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 331 (MH⁺).

C. rac-3-Jod-1 -(1 -methyltetrahydro-1H-3 -pyrrolyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4amin

Do roztoku rac-3-jod-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4amin-monohydrochloridu (0,400 g, 1,09 mmol) v dichlorethanu (10 ml) se přidá formaldehyd (37% ve vodě, 0,12 ml, 1,63 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (0,578 g, 2,73 mmol) a kyselina octová (0,37 ml, 6,55 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 dnů, pak se přidá další formaldehyd (37% ve vodě, 0,12 ml, 1,63 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (0,578 g, 2,73 mmol) a kyselina octová (0,37 ml, 6,55 mmol). Reakční směs míchá po další 3 hodiny, pak koncentruje, čímž se získá rac-3-jod-1-(1methyltetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin ve formě světle žluté pevné látky (0,639 g), která se použije bez purifikace v následujících reakcích. RPHPLC R_t 4,226 min, 96% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl 8, 300, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 345 (MH⁺)· ·· ···· ······ * «· · · ·····

222

D. V2-(4-Bromfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin l,l'-Thiokarbonyldi-2-(l//)-pyridon (1,418 g, 6,104 mmol) se přidá do roztoku

4-bromanilinu (1,000 g, 5,813 mmol) v dichlormethanu (50 ml). Růžový roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 30 minut, pak promyje vodou (50 ml) a 0,5 N kyselinou chlorovodíkovou (50 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá růžová pevná látka. 6-Amino-2,4-xylenol (0,837 g, 6,104 mmol) a toluen (50 ml) se přidá a směs se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 30 minut. Přidá se

1.3- dicyklohexylkarbodiimid (1,799 g, 8,720 mmol) a roztok se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 48 hodin, pak ochladí na-pokojovou teplotu. Výsledný precipitát se filtruje a filtrační koláč se promyje dichlormethanem (50 ml), čímž se získá V2-(4-bromfenyl)-5,7-dimethy 11.3- benzoxazol-2-amin ve formě světle oranžové pevné látky (1,215 g, 66%). RP-HPLC R_t17,643 min, 86% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 317 (MH⁺).

E. 7V2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-amin

V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-amin se připraví z V2-(4-bromfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (1,215 g, 3,831 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-1,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenin se získá ve formě hnědého prášku (0,880 g, 63%). RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném roztoku octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersil HS Cl 8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t = 14,48 min, 81%; m/z 365 (MH⁺).

F. rác-V2-{4-[4-Amino-l -(l-methyltetrahydro-l//-3-pyrrolyl)-17/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -y 1] fenyl} - 5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol rac-N2.- {4-[4-Amino-l-(I-methyltetrahydro-1 //-3-pyrrolyl)-l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazo]-2-amin se připraví z rac-3-jod-l-(lmethyltetrahydro-l//-3-pyrrolyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,581 mmol) a N2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl] -5,7-dimethyl-1,3benzoxazol-2-aminu (0,265 g, 0,726 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu cis-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//99 9999

9 ·

9 9

9 9 9 • · · · · ·« ···· « · ·.

• · 9

9 9

9 9 9

9 9 ··· ·· ··

223 pyrazolo[3,4-r7]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě bílého prášku (0,062 g, 23%). *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 2,39 (s, 3 H), 2,32-2,40 (m, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,75-2,80 (m, 2 H), 3,08 (t, 1 H), 3,26 (s, 3 H), 5,40 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1H), 10,85 (s, 1 H); RP-HPLC R_t 10,905 min, 96% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 455 (MH⁺).

Příklad 218 rac-A2-(4-{4-Amino-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-Í//-3-pyrrolyl]-l//-pyrazolo[3,4t/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

A. rac-3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-l//-pyrazolo[3,4ďJpyrimidin-4-amin

Do roztoku rac-3-jod-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l.//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4amin-monohydrochloridu (0,350 g, 1,09 mmol) v ΛζΑ-dimethylformamidu (10 ml) se přidá

2-bromethyl(methyl)ether (0,159 g, 0,11 ml, 1,15 mmol), uhličitan draselný (0,462 g, 3,34 mmol) a jodid draselný (0,008 g, 0,05 mmol). Reakční směs míchá při teplotě 65°C po dobu 18 hodin, pak se přidá další 2-bromethyl(methyl)ether (0,066 g, 0,040 ml, 0,48 mmol), uhličitan draselný (0,130 g, 0,940 mmol) a jodid draselný (0,008 g, 0,05 mmol). Reakční směs se míchá dalších 18 hodin a koncentruje. Zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (10 ml) a vodu (10 ml). Organická fáze se separuje, promyje solankou, suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá rac-3-jod-l-[l-(2methoxy ethyl )tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin ve formě žluté pevné látky (0,313 g, 84%), která se použije bez purifikace v následujících reakcích. RP-HPLC R_t 5,089 min, 80% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 389 (MH⁺).

B. rac-A2-(4-{4-Amino-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-l//pyrazolo[3,4-r/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin rac-/V2-(4- {4-Amino-1 - [ 1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 //-3 -pyrrolyl] -1 //pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z

224

rac-3 -j od-1 -[ 1 -(2-methoxy ethyl)tetrahydro-1H-3 -pyrrolyl] -1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin4-aminu (0,250 g, 0,515 mmol) a N2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,235 g, 0,644 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému způsobu pro přípravu cis-N2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl} -2-fluorfenyl)-1,3benzoxazol-2-amin. Sloučenina se získá ve formě žlutého prášku (0,185 g, 72%). ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 2,30-2,49 (m, 2 H), 2,41 (s, 3 H), 2,49 (s, 3 H), 2,66 (m, 2 H), 2,78 (m, 2 H), 3,17 (m, 2 H), 3,24 (s, 3H), 3,45 (t, 2 H), 5,40 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2H), 8,24 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); RP-HPLC R, 11,477 min, 96% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 499 (MH⁺)·

Příklad 219

Cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3- yl}-2-fluorfenyl)-5,7-dimethyl-l ,3-benzoxazol-2-amin

A. A^r2-(4-Brom-2-fluorfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin N2-(4-Broin-2-fluorfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z

4- brom-2-fluoranilinu (2,000 g, 10,53 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu 7V2-(4-bromfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě růžové pevné látky (1,916 g, 54%), RP-HPLC R_t 17,96 min, 95% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; δ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 337 (MH⁺)·

B. N2-[2-Fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimethyl1.3- benzoxazol-2-amin

7V2-[2-Fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimethyl1.3- benzoxazol-2-amin se připraví z 7V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-5,7-dimethy 1-1,3 benzoxazol-2-aminu (6,500 g, 19,39 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu 7V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě růžové pevné látky (3,549

225 g, 48%). RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t - 15,50 min, 78%; wz 383 (MH⁺).

C. CA-M2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4í/jpyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Czs-M2-(4-{4-amino-I-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z cis-3jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,453 mmol) a N2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,216 g, 0,566 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu c/s-M2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-3-yl}-2-fluorfenyl)-1,3 benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě světle žlutého prášku (0,111 g, 43%). 'HNMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 1,56-1,83 (m, 4 H), 2,15 (š/3 H), 2,22-2,55 (m, 12 H), 2,34 (s, 3 H), 2,41 (s, 3 H), 3,22-3,53 (m, 1 H), 4,78-4,83 (m, 1 H), 6,81 (s, 1 H), 7,10 (s, 1 H), 7,45-7,53 (m, 2 H), 8,23 (s, IH), 8,49 (t, 1 H), 10,59 (s, 1 H); RP-HPLC R_t 11,873 min, 95% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v i

průběhu 20 minut při 1 ml/min; δ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 570 (MH⁺)·

Příklad 220

Cis-3 -(4-imidazo [ 1,2-o]pyridin-2-ylfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyI]-1 //pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-amin

A. 2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]imidazo[l,2-tf]pyridin

2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]imidazo[l ,2-a]pyridin se připraví z 2-(4-bromfenyl)imidazo[l,2-a]pyridinu (0,273 g, 1,00 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu M2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě bílé pevné látky (0,250 g, 78%). RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,lN vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t = 11,35 min, 87%; m/z 321 (MH⁺)· σ>

226

Β. Czs-3-(4-imidazo[l,2-íz]pyridin-2-ylfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1//-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-amin

Cz'5-3-(4-imidazo[l ,2-a]pyridin-2-ylfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin se připraví z cA-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,453 mmol) a 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]imidazo[l,2-a]pyridinu (0,250 g, 0,679 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu cz's-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě bílého prášku (0,021 g, 9%). Ή NMR (DMSO-d_ó, 400 MHz) 1,57-1,73 (m, 4 H), 2,08-2,50 (m, 12 H), 2,16 (s, 3 H), 3,37 (m, 1 H), 4,82 (m, 1 H), 6,92 (t, 1 H), 7,27 (t, 1 H), 7,61 (d, 1 H), 7,74 (d, 2 H), 8,15 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 8,56 (d, 1 H); RP-HPLC Rt 8,16 min, 97% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při lmL/min; λ = 254 nm; Deltapak ČI8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 508 (MH⁺).

Příklad 221 rac-1 - [3 -(4-Amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1Hpyrazoio [3,4-í/|pyrimidin-1 -yl)tetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl]-2-(dimethylamino)-1 -ethanon

A. rac-l-[3-(4-Amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)tetrahydro-l//-lpyrrolyl]-2-(dimethy lamino)-1-ethanon

Do roztoku rac-3-jod-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-4amin-monohydrochloridu (0,367 g, 1,00 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se přidá

2-(dimethylaniino)octová kyselina (0,134 g, 1,30 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,150 g, 1,10 mmol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid (0,249 g, 1,30 mmol) a diizopropylethyl-amin (0,65 g, 0,87 ml, 5,0 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin, pak nalije do vody (10 ml). Organická fáze se separuje a promyje solankou (10 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá rac-l-[3-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-lyl)tetrahydro-l//-l-pyrrolyl]-2-(dimethylamino)-!-ethanon ve formě žluto-oranžové pevné

227 látky (0,278 g, 67%), která se použije bez purifikace v následujících reakcích. RP-HPLC Rt 4,881 min, 80% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x

3,9 mm sloupec); m/z 416 (MH⁺)·

B. rac-1-[3-(4-Amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lVpyrazolo[3,4-Jjpyrimidin-1 -yl)tetrahydro-1/7-1 -pyrrolyl]-2-(dimethylamino)-1 -ethanon rac-1 - [3 -(4-Amino-3 - {4-((5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)tetrahydro-l/7-l-pynOlyl]-2-(dimethylamino)-l-ethanon se připraví z rac-\- [3 -(4-amino-3 -jod-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl)tetrahydro-1 V-1 pyrrolyl]-2-(dimethylamino)-l-ethanonu (0,278 g, 0,669 mmol) a V2-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,305 g, 0,837 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu cis-N2-(4{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl} t2fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě bílého prásku (0,219 g, 62%). 'HNMR (DMSO-dé, 400 MHz) 2,17 (s, 3 H), 2,23 (s, 3 H), 2,3-2,50 (m, 4H), 2,34 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,99-4,26 (m, 4 H), 5,44-5,49 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,65 (d, 2 H), 7,92 (d, 2 H), 8,26 (s, 1 H), 10,86 (s, 1 H); RP-HPLC R, 10,765 min, 96% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; δ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 526 (MH⁺).

Příklad 222 rac-1 - [3 -(4-Amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazOl-2-y l)amino]fenyl} -1Vpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 -yl)tetrahydro-1 V-1 -pyrrolyl] -2-methyl-2-(methylamino)-1 propanon

A. rac-9V-9-Fluorenylmethyl-V-f2-[3-(4-amino-3-jod-1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin1 -yl)tetrahydro-1 V-1 -pyrrolyl]-1,1 -dimethy 1-2-oxoethyl} -V-methylkarbamát

Do roztoku rac-3-jod-l-tetrahydro-1 V-3-pyrrolyl-1 V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4amin-monohydrochloridu (0,100 g, 0,273 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidá 2-(((9 V9-fluorenylmethoxy)karbonyl](methyl)amino]-2-methylpropanová kyselina (0,120 g, 0,354 mmol), 1-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,041 g, 0,30 mmol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-

228 ethylkarbodiimid-hydrochlorid (0,068 g, 0,35 mmol) a diizopropylethylamin (0,18 g, 0,24 ml, 1,4 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin, pak nalije do vody (10 ml). Organická fáze se separuje a promyje solankou (10 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá rac-977-9fluorenylmethyl-A-/2[3 -(4-amino-3 -j od-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yljtetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl] -1,1dimethyl-2-oxoethyl}-A-methylkarbamát ve formě žluté pevné látky (0,223 g), která se použije bez purifikace v následujících reakcích. RP-HPLG R_t 13,688 min, 63% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 652 (MI f).

B. rac-l-[3-(4-Amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l/7pyrazolo[3,4-úQpyrimidin-1 -yl)tetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl]-2-methyl-2-(methylaminó)-1 propanon

Do roztoku rac-97/-9-fiuorenylmethyl-A-(2-[3-(4-aminó-3-jod-l //-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-1 -yl)tetrahydro-177-l-pyrrolyl]-l, 1 -dimethyl-2-oxoethyl}-A-methylkarbamátu (0,178 g, 0,273 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (6 ml) a vodě (3 ml) se přidá A2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2amin (0,124 g, 0,341 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,016 g, 0,014 mmol) a uhličitan sodný (0,072 g, 0,683 mmol). Roztok se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin a pak se ochladí na pokojovou teplotu. Reakční směs se vytřepe mezi ethylacetát (10 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva se separuje a promyje solankou (10 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá rac-9H-9fluorenylmethyl-A-2-[3-(4-amino-3-4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yI)amino]fenyl177-pyrazolo [3,4-č/upyrimidin-1 -yl)tetrahydro-177-1-pyrrolyl] -1,1 -dimethyl-2-oxoethy 1-Amethylkarbamát ve formě světle hnědého oleje (0,223 g), který se bez purifikace použije v následujícím kroku.

Roztok rac-97/-9-fluorenylmethyl-A-2-[3-(4-amino-3-4-[(5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-yl)amino]fenyl-177-pyrazolo[3,4-í7|pyrimidin-l-yl)tetrahydro-177-l-pyrrolyl]1,1-dimethyl-2-oxoethyl-A-methylkarbamátu (0,223 g) v

AA-dimethylformamidu (4 ml) se nechá reagovat s piperidinem (0,8 ml) a reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Zelený roztok se vytřepe mezi dichlormethan (10 ml) a vodu (10 ml). Organická fáze se separuje a promyje solankou, suší

229 nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá tmavě zelený olej. Purifikací preparativní RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v O,1N vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 pm Hypersil HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t = 6,7-8,1 min) se získá rac-l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino] fenyl} -1 /7-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-1 -yl)tetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl] -2-methyl-2(methylamino)-l-propanon ve formě bělavé pevné látky (0,085 g, 58%). ’H NMR (DMSOde, 400 MHz) Majoritní rotamer: 1,20 (s, 6 H), 1,96 (s, 3 H), 2,3-2,50 (m, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 3,17-4,44 (m, 4 H), 5,42 (s, 1H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,63 (d, 2 H), 7,91 (d, 2 H), 8,26 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); Minoritní rotamer: 1,15 (s, 6 H), 2,15 (s, 3 H), 2,3-2,50 (m, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 3,17-4,44 (m, 4 H), 5,42 (s, 1 H), 6,80 (s, 1H), 7,11 (s, 1 H), 7,63 (d, 2 H), 7,91 (d, 2H), 8,26 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); RP-HPLC R_t10,994 min, 95% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x .3,9 mm sloupec); m/z 540 (MH⁺).

Příklad 223 rac-/V2-[4-(4-Amino-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl)fenyl]5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Á. rac-/erc-butyl-3-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-lpyrrolidinkarboxylát

Roztok rac-3-jod-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4amin-monohydrochloridu (0,500 g, 1,36 mmol), hydrogenuhličitanu sodného (0,401 g, 4,77 mmol) a di-terc-butyl-dikarbonátu (0,327 g, 1,50 mmol) v 1,4-dioxanu (8 ml) a vodě (8 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Výsledná bělavá suspenze se filtruje a filtrační koláč se promyje vodou (10 ml) a suší, čímž se získá rac-Zerc-butyl-3-(4-amino3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-pyrrolidinkarboxylát ve formě bělavé pevné látky (0,412 g, 70%). RP-HPLC R_t 11,540 min, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 431 (MH⁺).

B. rac-7V2-[4-(4-Amino-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

23θ

Do roztoku rac-Zerc-butyl-3 -(4-amino-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-1 -yl)-1 pyrrolidinkarboxylátu (0,412 g, 0,958 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (6 ml) a vodě (3 ml) se přidá A2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,436 g, 1,20 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,055 g, 0,048 mmol) a uhličitan sodný (0,254 g, 2,39 mmol). Roztok se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin a pak se ochladí na pokojovou teplotu. Reakční směs se vytřepe mezi ethylacetát (10 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva se separuje a promyje solankou (10 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá rac-terc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-pyrrolidinkarboxylát ve formě oranžové pevné látky (1,029 g), která se bez purifikace použije v následujícím kroku.

6N Kyselina chlorovodíková (10 ml) se přidá do roztoku rac-Zerc-butyl-3-(4amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lí/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl)-l-pyrrolidinkarboxylátu (1,029 g) v acetonu (10 ml) a reakční směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 5 hodin. Reakční směs se filtruje a výsledný zakalený filtrát se koncentruje, čímž se získá oranžová pevná látka. Purifikací preparativní RPHPLC (25 až 100% CH3CN v 0,lN vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, t_r = 6,2-7,5 min) se získá rac-7V2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l/7-3-pyrrolyl-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl)fenyl]5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,148 g, 35%). ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 2,15-2,22 (m, 2 H), 2,40 (s, 3 H), 2,50 (s, 3 H), 2,93-4,04 (m, 5 H), 5,31 (m, 1 H), 6,79 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); RP-HPLC R_t 10,603min, 99% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufřovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 441 (MH⁺).

Příklad 224

Czs-A^r2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl} fenyl)-7-izopropyl-l ,3-benzoxazol-2-amin-diacetát A. 2-Amino-6-izopropylfenol

Roztok 6-izopropyl-2-nitrofenolu (3,000 g, 16,56 mmol) a hydrogensiřičitan sodný (11,53 g, 66,23 mmol) v ethanolu (180 ml) a vodě (90 ml) se míchá při teplotě 80°C po

231 dobu 20 hodin a pak ochladí na pokojovou teplotu. Výsledný oranžový roztok se koncentruje a pak vytřepe mezi dichlormethan (50 ml) a vodu (50 ml). Organické fáze se separují a promyjí solankou (25 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují a koncentrují, čímž se získá 2-amino-6-izopropylfenoI ve formě oranžové pevné látky (1,792 g, 72%). RP-HPLC R_t 8,171 min, 92% Čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 150 (M-H)'.

B. X2-(4-Bromfenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Roztok 2-amino-6-izopropylfenolu (0,354 g, 2,34 mmol) a

4-bromfenylizothiokyanátu (0,500 g, 2,34 mmol) v tetrahydrofuranu (35 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Přidá se bezvodý sulfát měďnatý (3,361 g, 21,06 mmol), silikagel (3,361 g) a triethylamin (0,236 g, 0,33 ml, 2, 34 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Reakční směs se filtruje přes vrstvu Celitu a promyje diethyletherem (3 x 50 ml). Filtrát se koncentruje, čímž šě získá hnědá pevná látka, která se smíchá se silikagelem a nanese na vrstvu silikagelu, která se promyje ethylacetátem (3 x 50 ml). Filtrát se koncentruje, čímž se získá X2-(4-bromfenyl)-7izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,702 g, 91%). RP-HPLC R_t 18,066 min, 86% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 333 (MH⁺).

C. X2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-7-izopropyl-l,3benzoxazol-2-amin jV2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-7-izopropyl-l,3benzoxazol-2-amin se připraví z X2-(4-bromfenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,412 g, 1,24 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2aminu. Sloučenina se získá ve formě bělavé pevné látky (0,346 g, 74%). RP-HPLC R_t18,964 min, 79% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x

3,9 mm sloupec); m/z 379 (MH⁺).

232

D. Cis-N2-(4- {4-amino- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3 -y 1} feny l)-7-izopropyl -1,3 -benzoxazol -2 -amin-diacetát

Cz5-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17í-pyrazolo[3,4ó/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amin-diacetát se připraví z cis-3j od-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,250 g, 0,566 mmol) a 7V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-7-izopropyl-l,3benzoxazol-2-aminu (0,339 g, 0,708 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu czs-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l.ř/pyrazolo[3,4-ú]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě bělavé pevné látky (0,205 g, 64%). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,36 (d, 6 H), 1,56-2,50 (m, 16 H), 1,90 (6 H), 2,15 (s, 3 H), 3,23-3,28 (m, 2 H), 4,80 (m, 1 H), 7,04 (d, 1 H), 7,18 (t, 1 H), 7,34 (d, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,96 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H); RP-HPLC R_t12,508 min, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x

3,9 mm sloupec); m/z 566 (MH).

Příklad 225

JV2-(4- {4-Amino-1 -[(35)-1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 //-3-pyrrolyl]-17/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin-monoacetát _JV2-(4-{4-Amino-l-[(3₁S^r)-l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolylJ-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin-monoacetát se připraví z (7?)-(+)-3-pyrrolidinolu způsobem analogickým k přípravě rac-A2-(4-{4-amino1 -[ 1 -(2-methoxyethy l)tetrahydro-1 //-3-pyrrolyl]-1 /7-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě růžové pevné látky (0,103 g, 53%). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 1,89 (s, 3 H), 2,28-2,31 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,65 (t, 2 H), 2,73-2,87 (m, 2 H), 3,17 (t, 2 H), 3,24 (s, 3 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 6,79 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,59 (s, 2 H); RP-HPLC R_t 11,607 min, 95% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; ”k = 254 nm; Deltapak Cl 8/300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 499 (MH⁺).

233

Příklad 226 rac-N2-(4- {4-Amino-1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl)tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl] -1 V-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3-yl} fenyl)-5-ethyl -1,3 -benzoxazol-2-amin-monoacetát rac-7V2-(4-{4-Amino-l -[1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-l V-3-pyrrolyl]-1Vpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-l,3-benzoazol-2-amin-monoacetát še připraví z rac-3 -j od-1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl)tetrahydro-1 V-3 -pyrrolyl]-1 V-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,319 mmol) a jV2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,145 g, 0,399 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu cis-N2-(4-{4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-1,3benzoxazoI-2-amin. Sloučenina se získá ve formě bílé pevné látky (0,082 g, 52%). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 1,23 (t, 3H), 1,90 (s, 3 H), 2,33-3,47 (m, 10 H), 2,66 (q, 2 H), 3,25 (s, 3 H), 5,40 (m, 1 H), 6,99 (d, 1 H), 7,33 (s, 1 H), 7,40 (d, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,25 (s, 1 11), 10,81 (s, 1 H); RP-HPLC R, 11,781 min, 93% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; X = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 499 (MH⁺)·

Příklad 228 rac-V2-(4-{4-Amino-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-lV-3-pyrrolyl]-lV-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-methyl-l,3-benzoxazol-2-amin-monoacetát rac-N2-(4-{4-Amino-1 -[ 1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 V-3 -pyrrolyl]-1Vpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-1,3-benzoxazol-2-amin-monoacetát se připraví z rac-3-jod-1 -[1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-l V-3-pyrrolyl]-l V-pyrazolo[3,4ť^pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,319 mmol) a V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-methyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,145 g, 0,399 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu cis-N2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-1,3benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě bělavé pevné látky (0,038 g, 16%). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,91 (s, 3 H), 2,33 (m, 2 H), 2,39 (s, 3 H), 2,66 (m, 2 H), 2,75-2,83 (m, 3 H), 3,17 (t, 1 H), 3, 29 (s, 3 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 6,96 (d, 1 H), 7,30 (s, 1 H), 7,38 (d, 1 H), 7,67 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,80 (s, 1 H); RPHPLC R_t 10,756 min, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný,

234 pufřovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 485 (MH⁺).

Příklad 229 //2-(4- {4-Amino-1 - [(37?)-1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-177-3 -pyrrolyl]-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin-diacetát

A2-(4-{4-Amino-l-[(37?)-l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l ,3-benzoxazol-2-amin-diacetát se připraví z (S)-(-)-3-pyrrolidinolu způsobem analogickým k přípravě rac-A^r2-(4-{4-amino1 - [l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-1/7-3-pyrrolyl] -1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl} fenyl)5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě bělavé pevné látky (0,214 g, 39%). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 1,89 (s, 6 H), 2,28-2,31 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,65 (t, 2 H), 2,73-2,87 (m, 2 H), 3,17 (t, 2 H), 3,24 (s, 3 H), 3,45 (t, 2 11), 5,37 (m, 1Ή), 6,79 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H); RP-HPLC R_t 11,674 min, 97% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufřovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 499 (ΜΙ Γ).

Příklad 230

Rac-N2-(4- {4-Amino-1 -[ 1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 //-3-pyrrolyl]- l/7-pyrazolo[3,4</]pyriniidin-3-yl} fenyl)-5-chlor-1,3-benzoxazol-2-amin-monoacetát rac-N2-(4- {4-Amino-1 -[ 1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1H-3 -pyrrolyl]-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-amin-monoacetát se připraví z rao3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-l//-pyrazolo[3,46/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,319 mmol) a A2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,148 g, 0,399 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu cri-A^A2-(4-{ 4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-1,3benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě bělavé pevné látky (0,080 g, 50%). ^]H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 1,91 (s, 3 H), 2,33 (m, 2 H), 2,66 (m, 2 H), 2,75-2,85 (m, 3 H), 3,17 (t, 1 H), 3,24 (s, 3 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 7,18 (d, 1 Hj, 7,55 (d, 2 H),

235

7,68 (d, 2 Η), 7,92 (d, 2 Η), 8,24 (s, 1 Η), 9,80 (s, 1 H); RP-HPLC R_t 11,337 min, 97% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 505 (MH⁺).

Příklad 231 trans-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-3-fenylpropanamid

Roztok rrans-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-4-aminu (0,700 g, 1,6 mmol) v pyridinu (11 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s hydrocinnamoylchloridem (0,324 g, 1,92 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 20 minut a ledová lázeň se odstraní kvůli míchání při pokojové teplotě. Reakce doběhne za 5,5 hodiny. Přidá se roztok hydroxidu sodného (1 N, 20 ml) a směs semíchá po dobu 30 minut. Organická vrstva-se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (20 ml) se přidá a vrstvy se rozdělí. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (80 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu gradientem 5% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu na 35 g ISCO silikagelovém sloupci, čímž se získá 0,569 g (63%) rran5-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamidu. Trans-Nl -(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3fenylpropanamid (0,569 g, 1 mmol) v horkém ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,384 g, 3 mmol) v ethylacetátu. Vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku, suší za vysokého vakua, čímž se získá tri-maleátová sůl. ’H NMR (dé-DMSO) δ 9,238 (s, 1H), 8,2216 (s, 1H), 8,1991-8,1786 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,3147-7,2664 (m, 4H), 7,2366-7,2330 (m, 1H), 7,2026-7,1732 (dd, 2H), 6,171 (s, 6H), 4,6649-4,6083 (m, 1H), 4,0948-4,0697 (m, 1H), 3,8916 (s, 3H), 3,1750-3,1632 (d, 2H, J = 4,72 Hz), 2,9364-2,8984 (m, 2H), 2,7885-2,7506 (m, 2H), 2,5290 (s, 2H), 2,3905-2,3231 (m, 4H), 2,1489 (s, 3H), 2,0549-1,9243 (m, 6H), 1,4821-1,4457 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA singl-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x

236

4,6mm; 70% 50 mM amonium-acetát ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 1,75 min (100%), M⁺569,4.

Příklad 232 rrans-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4ďJpyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamid

Suspenze trans-N2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamid-dimaleátu (0,200 g, 0,242 mmol) v dichlormethanu (15 ml) se nechá reagovat s IN hydroxidem sodným. Reakční směs se míchá po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Vrstvy se rozdělí pomocí extrakční patrony Empore. Organická vrstva se odstraní probubláváním dusíku na povrchu rozpouštědla, čímž se získá 0,072 g (50%) trans-N2-(4{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-1-methyl-E/Z^-indolkarboxamidu. *H NMR (de-DMSQ) δ 9,4355 (s,. 1H), 8,2464 (s, ÍH), 8,1241-8,1037 (d, ÍH, J = 8,16 Hz), 7,7186-7,6987 (d, ÍH, J = 7,96 Hz), 7,6005-7,5795 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,3532-7,2795 (m, 4H), 7,1717-7,1343 (t, ÍH), 4,6833 (m, ÍH), 4,0560 (s, 3H), 3,9573 (s, 3H), 2,6704 (m, 6H), 2,4404 (m, 2H), 2,2953 (s, 6H), 2,1282-1,9889 (m, 5H), 1,5124 (m, 2H). Sloučenina se bez purifikace použije přímo v následující reakci.

Příklad 233 trans-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4t/jpyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamid-di-mesylát

Horký roztok trans-N2-(4- {4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu (0,072 g, 0,12 mmol) v ethylacetátu (20 ml) se nechá reagovat s methansulfonovou kyselinou (0,012 g, 0,12 mmol). Pomalu vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku, čímž se získá 0,051 g trans-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj- 1Hpyrazolo [3,4-</]pyri midin-3-y 1} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamiddimesylátu. Teplota tání se pohybuje mezi 345,5 až 348,1°C. 'H NMR (dé-DMSO) δ 9,

4353 (s, ÍH), 8,2461 (s, ÍH), 8,1239-8,1035 (d, ÍH, J = 8,16 Hz), 7,7182-7,6985 (d, ÍH, J • · .· · • ·

237 = 7,88 Hz), 7,6004-7,5792 (d, 1H, J = 8,48 Hz), 7,34427,2794 (m, 4H), 7,1718-7,1349 (t, 1H), 4,6829 (m, 1H), 4,0396 (s, 3H), 3,9570 (s, 3H), 2,6703 (m, 6H), 2,5 (s, 3H), 2,2949 (s, 6H), 2,0891-2,9086 (m, 7 H), 1,5179 (m, 2H).

Příklad234

-(4-Amino-3 -methoxy fenyl)-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4amin

A. 3-Jod-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

3-Jod-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin (500 mg, 1,45 mmol), formaldehyd (30% roztok ve vodě, 0,16 ml, 1,60 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (430 mg, 2,03 mmol) se smíchají v 1,2-dichlorethanu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Přidá se nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného k upravení pH na asi 8. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCU, filtruje a odpařuje, čímž se získá 3-jod-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-amin (275 mg, 53%). 'H NMR (DMSO-dé) δ 1,85 (m, 2H), 2,09 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,88 (m, 2H), 4,75 (m, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺359,0, R_t = 0,46 minut.

B. /erc-Butyl-V-/4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-<Z]pyrimidin3-yl]-2-methoxyfenyl] karbamát

3-Jod- l-(l-methyl-4-piperidyl)-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin (270 mg, 0,754 mmol), terc-butyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát (290 mg, 0,829 mmol), tetrakistrifenylfosfin-palladium (52 mg, 0,045 mmol) a uhličitan sodný (192 mg, 1,81 mmol) se smíchají v dimethyletheru ethylenglykolu (8 ml) a vodě (4 ml). Reakční směs se zahřívá při refluxu přes noc pod atmosférou dusíku.

Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtrují a odpařují. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití dichlormethan/methanolu (90:10 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá Zerc-butyl-V·* .····> · · ·· ···· • « · >· ·· 9 9 9

9 9 9-9 9 9 9

9 9 9 9' 9 9 9 9 9

99 999 999 99 99

238 {4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2m ethoxy fenyl} kar bamát (250 mg, 73%). ’H NMR (DMSO-d₆) δ 1,48 (s, 9H), 1,88 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,24 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 4,64 (m, lHj, 7,21 (m, 2H), 7,91 (d, J=8,16 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 8,23 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr óctanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺= 454,2, R_t = 1,67 minut.

C. 3-(4-Amino-3-methoxyfenyl)-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin

Směs trifluoroctové kyseliny/dichlormethanu (20:80,7 ml) se přidá do roztoku tercbutyl-A-f4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}karbamátu (240 mg, 0,529 mmol) v dichlormethanu (4 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Rozpouštědla se odpařují a zbytek sě rozpustí v dichlormethanu.'K upravení pH na asi 10 se přidá hydroxid sodný (1,ON). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (4x). Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCU, filtruje a odpařuje, čímž se získá 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-(l-methyl-4piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin (178 mg, 95%). HPLC (Waters 486Sloupec: Delta Pak, C18, 5 pm, 300 Á, 150x3,9 mm, Eluenty: 5% B/A až 95% B/A v 10 min, (B: acetonitril, A; 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 1,0 ml/min.) R_t = 6,45 min.

Příklad 235

Al - {4- [4-Amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3 -yl] -2methoxy fenyl} -Zra/7.s-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid

7ríZ»5-2-fenyl-l-cyklopropankarbonylchlorid (31 mg, 0,170 mmol) v dichlormethanu (0,3 ml) se přidá do roztoku 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-(l-methyl-4piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-4-aminu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridinu (1,2 ml) při teplotě 0°C. Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny, pak se přidá další trans-2-fenyl-1cyklopropankarbonylchlorid (15 mg, 0,083 mmol). Po 2 hodinách se rozpouštědlo odpařuje a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití

239 dichlormethan/methanolu (95: 5 až 70: 30) jako mobilní fáze, čímž se získá Al-{4-[4amino-1 -(l-methyl-4-piperidyl)-1A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl} trans-2-fenyl-1 -cyklopropánkarboxamid (75 mg, 89%). ’H NMR (CDCI3) δ 1,42 (m, IH), 1,77 (m, IH), 1,85 (m, IH), 2,03 (m, IH), 2,24 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,46 (m, 2H), 2,62 (m, IH), 3,05 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,77 (m, IH), 5,69 (s, 2H), 7,24 (m, 7H), 8,11 (s, IH), 8,35 (m, IH), 8,45 (d, J=8,38 Hz, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, C18, 3 um, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 498,3, R_t = 1,84 minut.

Příklad 236

Al - {4-[4-amino-1-(1-methyl-4-piperidyl)-l-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl} -4-(trifluormethyl)benzamid

4-(Třifluorměthyl)-l-beňZenkarbonylchlorid (3 5 mg, 0,170 mmol) v dichlormethanu (0,3 ml) se přidá do roztoku 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lApyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridinu (1,2 ml) při teplotě 0°C. Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny, pak se přidá další 4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (18 mg, 0,086 mmol), po 2 hodinách se rozpouštědlo odpařuje a zbytek čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití dichlormethan/methanolu (95:5 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4-(trifluormethyl)benzamid (85 mg, 95%). ’H NMR (CDCI3) δ 2,10 (m, 2H), 2,37-2,59 (m, 7H), 3,15 (m, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,83 (m, IH), 5,68 (s, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,80 (d, J=8,21 Hz, 2H), 8,04 (d, J=8,10 Hz, 2H), 8,38 (s, IH), 8,67 (m, 2H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Sloupec: Genesis, C18,3 um, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ ·= 526,3, R_t = 1,93 minut.

Příklad 237

Al - {4-[4-amino-l -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy feny 1} -4-(trifluormethoxy)benzamid β β β β e e φ β β e β e β e · · · · • · · · · · · ·· · ·· ·· ··· ··· ·· 99

240

4-(Trifluormethoxy)-l-benzenkarbonylchlorid (38 mg, 0,170 mmol) v dichlormethanu (0,3 ml) se přidá do roztoku 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-(l-methyl-4piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridinu (1,2 ml) při teplotě 0°C. Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny, pak se přidá další 4-(trifluormethyl)-lbenzenkarbonylchlorid (19 mg, 0,085 mmol). Po 2 hodinách se rozpouštědlo odpařuje a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití dichlormethan/methanolu (95: 5 až 70: 30) jako mobilní fáze, čímž se získá Vl-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3-yl]-2-methoxy fenyl}-4(trifhiormethoxy)benzamid (70 mg, 76%). *H NMR (CDCfi) δ 2,06 (d, J=11,79 Hz, 2H),

2,28 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,50 (m, 2H), 3,07 (d, J=10,8 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,80 (m,

1H), 5,71 (s, 2H), 7,27 (m, 2H), 7,36 (d, J=8,20 Hz, 2H), 7,98 (d, J=6,20Hz, 2H), 8,37 (s,

1H), 8,59 (s, 1), 8,67 (d, J=8,55 Hz, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS,

Finnigan HPLC Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ =

542,3, R_t = 1,98 minut.

Příklad 238

Cis-1 - [4-(4-Methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-( 1,3-oxazol-5 -yl)fenyl] -1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin

A. 4- {4-Amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidin3- yl} benzaldehyd .

Cz'.s-3-Methyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin4- amin (3,0 g, 6,80 mmol), 4-formylfenylboritá kyselina (1,22 g, 8,16 mmol), tetrakistrifenylfosfin-palladium (0,47 g, 0,41 mmol) a uhličitan sodný (1,73 g, 16,31 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (70 ml) a vodou (35 ml). Reakční směs se zahřívá při refluxu přes noc pod atmosférou dusíku. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se filtruje a promyje vodou. Po sušení na lyofilizátoru se zbytek čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití dichlormethan/methanolu (90:10 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá 4-{4-amino-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} benzaldehyd (1,5 5 g, 54%). ^!H NMR (DMSO-d₆) δ 1,60 (m, 2H), 1,72 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), ······ · · · · ···· • · · e β · · · © · β e β '« e β β # • · · · · · ···· ··' ·· ··· ··· ·· ··

241

2,22-2,46 (m, 11Η), 4,83 (m, ÍH), 7,88 (d, J=8,l 3 Hz, 2H), 8,07 (d, J=8,10 Hz, 2H), 8,21 (s, ÍH), 10,11 (s, ÍH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLCSloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ - 420,2, R_t =

0,70 minut.

B. CA-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(l,3-oxazol-5-yl)fenyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

Methoxid sodný (130 mg, 2,41 mmol) se přidá po částech do směsi 4-{4-amino-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} benzaldehydu (3 00 mg, 0,715 mmol) v methanolu (20 ml). Po 5 minutách se po částech přidá (p-tolylsulfonyl)methylizokyanid (tosmic) (167 mg, 0,858 mmol). Roztok se zahřívá při refluxu po dobu 5 hodin. Přidá se voda (10 ml), přičemž roztok zůstává stále horký. Po 5 minutovém chlazení ledem se pevné látky filtrují a promyjí směsí methanol/voda (50/50, 2 mT) a suší. Filtrát se odpařuje k odstranění organického rozpouštědla á pevné látky se spojí a promyjí vodou. Spojené pevné látky se nejprve purifikují zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití dichlormethan/methanolu (90:10 až 70:30) jako mobilní fáze, pak rekrystalizují (2x) z DMF, čímž se získá czó-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3[4-(l,3-oxazol-5-yl)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (90 mg, 27%). ^]H NMR (DMSO-dó) δ 1,61 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,44 (m, 1 ÍH), 4,82 (m, ÍH), 7,78 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 8,24 (s, ÍH), 8,51 (s, ÍH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30%

B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH⁺= 459,2, R_t - 0,72 minut.

Příklad 239

Trans-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} -5 -fluor-2-methoxyfeny l)-2,2-dimethyl-3 -fenylpropanamid

2,2-Dimethyl-3-fenylpropanoylchlorid (52 mg, 0,264 mmol) se přidá do roztoku Zr<3n5'-3-(4-amino-2-fluor-5-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (80 mg, 0,176 mmol) v pyridinu (1,5 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo odpařuje a zbytek se nejprve purifikuje zrychlenou sloupcovou

242 chromatografií za použití dichlormethan/methanolu (95: 5 až 85: 15) jako mobilní fáze, pak preparativní LC/MS, čímž sě získá /r<ms-Xl-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2methoxyfenyl)-2,2-dimethyl-3-fenylpropanamid (22 mg, 19%). ^]H NMR (CDCf-ťT) δ 1,33 (s, 6H), 1,57 (m, 2H), 1,92 (m, 2H), 2,15 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,49 (m, 4H), 2,66 (m, 3H), 2,95 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 4,76 (m, 1H), 5,51 (bs, 2H), 6,98 (d, J=6,86Hz, 1H), 7,15 (m, 2H), 7,23 (m, 3H), 8,01 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,47 (d, J=ll, 88,1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ = 615,3, R_t = 2,18 minut.

Příklad 240

Cz5-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 yl}fenyl)(177-benzo[í71imidazoL2-yl)metbanol - *

A. l/7-Benzo[c/] imidazol- 1-ylmethanol

Formaldehyd (37% ve vodě, 1 ml, 13,3 mmol) se přidá do roztoku l//-benzo[d]imidazolu (1,57 g, 13,3 mmol) v THF (60 ml). Po 10 minutách se rozpouštědlo odstraní, suší, čímž se získá l//-benzo[ó/]imidazol-l-ylmethanol ve formě hnědé pevné látky, která se použije dále bez jakékoliv purifikace. ’H NMR (DMSO-dó) δ 5,60 (d, J=7,09Hz, 2H), 6,70 (m, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,65 (d, J=9,13Hz, 2H), 8,26 (s, 1H).

B. CA-(4-{4-Amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3-yl} fenyl)( 17/-benzo[í/]imidazol-2-yl)methanol n-Butylithium (1,34M, 3,0 ml, 4 mmol) se pomalu přidá do směsi 177-benzo[d]imidazol-l-ylmethanolu (296 mg, 2,0 mmol) v THF (9,0 ml) při teplotě -78°C. Reakční směs se nechá ohřát až na teplotu -20°C a udržuje při teplotě -20°C po dobu 30 minut, pak ochladí zpět na -78°C. Pomalu se přidá cA-4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}benzaldehyd (420 mg, 1 mmol) v THF (5 ml). Po 20 minutách se odstraní suchá ledová lázeň a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se nasycený roztok chloridu amonného a poté ether. Vrstvy se separují a vodná vrstva se neutralizuje hydroxidem sodným (l,0N) a extrahuje dichlormethanem. Organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, ······ · . · ······ • · · · · ·· ·· '·

Φ Φ ♦ i Φ Φφφ .99 ·«> ·'·.··· ·

9 9-9 9 9 9 9 9 9 ·· 99 '999 999 99 99

243 filtruje a odpařuje. Zbytek se nejprve purifikuje zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití dichlormethan/methanolu (95:5 až 85:15) jako mobilní fáze, pak preparativní HPLC s reverzní fází (Rainin HPLC, sloupec: Thermoquest, hyperprep HS 08, 8 pm,

250x21, 2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 minut. (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min.), čímž se získá cží-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)( 1Hbenzo[J]imidazol-2-yl)methanol (2 mg, 0,4%). ’HNMR (CDCI3) δ 1,68 (m, 2H), 1,81 (m,

2H), 2,01 (m, 2H), 2,13 (m, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,42 (m, 2H), 2,64 (m, 7H), 4,68 (bs, 3H),

4,93 (m, 1H), 5,77 (bs, 2H), 6,06 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 7,52 (m, 2H), 7,58 (m, 4H), 8,32 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis,

08, 3 pm, 33x4,6 mm. Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ - 538,3, R_t = 3,80 minut.

Příklady 241-252

Příklady 241-252 se připraví z 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-l-yl]benzaldehydu za použití následujícího způsobu: 4-[4-Amino-3-(4fenoxyfenylj-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl]benzaldehyd (50 mg, 0,123 mmol), příslušný amin (0,246 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (78 mg, 0,368 mmol) a ledová kyselina octová (32 mg, 0,540 mmol) se smíchají v THF (3 ml). Po třepání při pokojové teplotě přes noc na třepačce J-Kem se přidá další množství aminu (0,246 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (78 mg, 0,368 mmol) a ledové kyseliny octové (32 mg,

0,540 mmol) a reakční směs se třepe při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odpařuje a přidá se dichlormethan, poté hydroxid sodný (1,ON). Vrstvy se separují na patrone Empore. Organická vrstva se odpařuje a zbytek čistí preparativní LC/MS s reverzní fází (Sloupec Micromass: Hypersil BDS, Cl8, 5 pm, 100x21,2 mm, Eluenty: 15%

B/A až 100% B/A v 7 min, ( B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 25 ml/min.). Po odstranění rozpouštědla se výsledné pevné látky rozpustí ve směsi dichlormethanu a hydroxidu sodného (1,ON) a vrstvy se separují. Organická vrstva se odpařuje, čímž se získá odpovídající produkt. Detaily jsou uvedeny v následující tabulce.

244

Př.	Struktura	Název sloučeniny	MH⁺	Rt (min)	Qty (mg)
241	o	2-({4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//- pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l- yljbenzyl} amino)-1-ethanol	453,2	2,05	10
242	.6° Y o	2-( {4-[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1//- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 - yljbenzyl} amino)-2-methyl-l-propanol	481,2	2,12	12
243	ó? ti' i..................	4-({4-[4-amiňo-3-(4-fenoxyfenyl)-l//- pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l- yljbenzyl} amino)-1 -butanol	481,2	2,05	10
244	H	Al-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)- 1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 - yljbenzyl} -N2, A2-dimethyl-1,2- ethandiamin	480,2	2,03	2
245	ó? 9 ) * ·	1 -(4- {[(3 -methoxypropyl)amino] - methyl} fenyl)-3 -(4-fenoxy fenyl)-1H- pyrazolo [3,4-c/Jpyrinndin-4-amin	481,2	2,3	2
246	H $	1 -(4- {[(2-methoxy ethyl)- aminojmethyl} fenyl)-3-(4- fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4- <7]pyrimidin-4-amin	467,2	2,22	10
247	ÍlJL ^m 1	3-(4-fenoxyfenyl)-l-[4-(l,3-thiazolan- 3-ylmethyl)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4- í/]pyrimidin-4-amin	481,2	4,2	3

• · · ·

245

248	0	2-[{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//- pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-1- yljbenzyl} (2-hydroxyethyl)aminoj-1 - ethanol	497,2	2,02	2
249	X t» s -N i	NI - {4-[4-amino-3-(4-fenoxy feny 1)- 1 //-pyrazolo [3,4-úQpyrimidin-1 - yljbenzyl} ^N1,N2,7/2-trimethyl-1,2- ethandiamin	494,3	2,47	8
250	4 $ o o	1 - {4-[4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1H- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l- yljbenzyl}-4-piperidinol	493,3	2,13	2
251	Ο-Ό J	7Vl-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)- 1 //-pyrazolo [3,4-t/Jpyrimidin-1 - yljbenzyl} -NI, N3, ΛΟ-trimethyl-1,3 - propandiamin	508,3	1,78	9
252	P	(1 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1H- pyrazolo[3,4-</Jpyrimidin-1 - yljbenzyl}-4-piperidyl)methanol	507,3	2,12	9

Příklad 253 dimaleátová sůl 7V'l-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazoIo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu

NI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (380 mg, 0,717 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (70 ml) a přidá se kyselina maleinová (167 mg, 1,435 mmol) v horkém ethylacetátu (3 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá dimaleátová sůl 7/l-{4-[4-amino-l-(4piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-z/Jpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4(triťluormethyl)benzamidu (489 mg, 90%). ’H NMR (DMSO-de) δ 2,15 (m, 2H), 2,41 (m,

246

2H), 3,23 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 5,09 (m, 1H), 6,14 (m, s, 4H), 7,33 (m, 2H), 7,76 (m, 1H), 7,88 (m, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,33 (m, 2H), 8,70 (bs, 1H), 9,92 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 mlJmin.): MH⁺= 530,2, R_t = 2,03 minut.

Meziprodukt 6

Al -4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl-2fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

A. fórc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoyl]amino-3methoxy fenyl)-177-pyrazolo [3,4-e/Jpyrimidin-1-yl] -1-piperidinkarboxylát

2-Fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (3,05 ml, 20,2 mmol) v dichlormethanu - (25 ml ) se přidá do roztoku Zerc-butyl-4- [4-amino-3 -(4-amino-3 methoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (8,77 g, 20,0 mmol) v pyridinu (50 ml) při teplotě 0°C. Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Přidá se 2-fluor-4-(trifluormethyl)-lbenzenkarbonylchlorid (0,5 ml, 3,31 mmol) a reakční směs se míchá dalších 30 minut. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. Organická vrstva se promyje vodou, solankou, pak suší nad MgSO₄. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se Čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití ethylacetát/dichlormethanu (80:20 až 100:0) jako mobilní fáze, čímž se získá fórc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[2-fluor-4(trifluormethy l)benzoyl]amino-3 -methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl] -1 piperidinkarboxylát (11,2 g, 89%). 'H NMR (CDCl₃-d) δ 1,48 (s, 9H), 2,04 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 4,05 (s, 3H), 4,32 (m, 2H), 4,95 (m, 1H), 5,89 (bs, 2H), 7,33 (m, 2H), 7,51 (d, J=11,62 Hz, 1H), 7,61 (d, J=8,21Hz, 1H), 8,36 (m, 2H), 8,72 (d, J=8,18 Hz, 1H), 9,32 (d, J=14,39 Hz, 1H).

B. Al-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-i7]pyrimidm-3-yl]-2methoxyfenyl-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 100 ml) se přidá do roztoku fórc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoyl]amino-3-methoxyfenyl)-l//²⁴⁷ γ

pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (11,2,17,79 mmol) v · λ dichlormethanu (50 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Rozpouštědla se odpařují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. K upravení pH na asi 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Suspenze se lyofilizuje. Přidá se voda (100 ml) a vodná fáze se opakovaně extrahuje dichlormethanem, čímž se získá VI-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (9,12 g, 97%). 'H NMR (DMSO-d₆) 1,85 (m, 2H), 2,12 (m, 2H), 2,70 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,77 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,75 (d, J=8,02 Hz, 1H), 7,89 (d, J=10,31Hz, 1H), 8,00(m, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,31 (d, J=8,16 Hz, 1H), 9,90 (s, 1H).

Příklady 254-293

Sloučeniny podle příkladů 254-293 se připraví z VI -4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-ΪΗpyrazoIo[“3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (meziprodukt 6) podle způsobu A nebo způsobu B:

Způsob A: VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (100 mg, 0,189 mmol). Příslušný aldehyd (0,378 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (120 mg, 0,567 mmol) a ledová kyselina octová (48 mg, 0, 378 mmol) se smíchají v 1,2-dichlorethanu (4 ml). Po třepání při pokojové teplotě přes noc se přidá další množství aldehydu (0,378 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (120 mg, 0,567) a ledové kyseliny octová (48 mg, 0,378 mmol) a reakční směs se třepe při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se čistí buď zrychlenou sloupcovou chromatografií za použiti dichlormethan/methanolu (95: 5 až 70: 30) nebo preparativní HPLC s reverzní fází (Rainin HPLC, Sloupec: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250x21, 2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min.), čímž se získá odpovídající produkt. Detaily jsou uvedeny v tabulce níže.

Způsob Β: VI -{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (100 mg, 0,189 mmol), příslušný keton nebo nějaký méně reaktivní aldehyd (0,378 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (120 mg, 0,567 mmol) a ledová kyselina octová (48 mg, 0,378 mmol) se smíchají v

248

1,2-dichlorethanu (4 ml). Reakční směs se třepe při teplotě 70°C po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se čistí buď zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití dichlormethan/methanolu (95: 5 až 70: 30) nebo preparativní HPLC s reverzní fází (Rainin HPLC, Sloupec: Thermoquest, hyperprep HS Cl8, 8 pm, 250x21, 2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min. (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min.), čímž se získá odpovídající produkt. Detaily jsou uvedeny v tabulce níže.

Př.	Struktura	Název sloučeniny	MH⁺	Rt (min)	Qty (mg	Způsob
254	O ó )	Vl-{4-[4-amino-l-(l-ethyl- 4-piperidyl)-lV- pyrazolo[3,4-J]pyrimidin- 3 -yl] -2-methoxy feny 1} -2- fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 556.1	2,07	56	A
í 255	%	Vl-(4-{4-amino-l-[l- (cyklopropylmethyl)-4- piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4- </]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 582,1	2,22	80	A
256	f	VI -(4- {4-amino-l-[l-( 1V-2- pyrrolylmethyl)-4- piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4- <7]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid- acetát	MH' 607,0	2,45	60	A
257	X o	Vl-(4-{4-amino-l-[l-(lV-2- imidazolylmethyl)-4- piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4- ď]pyrimidin-3 -yl} -2- methóxvfenvl)-2-fluor-4- \|	MH⁺ 610,2	2,17	68	B

249

		methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid
258		acetát Al-[4-(4-amino-l-{l- [(l-methyl-lA-2- imidazoly l)methyl] -4- piperidyl} -177-pyrazolo [3,4 </]pyrimidin-3-yl)-2- methoxy feny 1] -2 -fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 622	2,23	56	A
259	.'V	acetát Al-[4-(4-amino-l- {l-[(2-methyl-177-4- imidazoly l)methyl]-4- piperidyl}-177- pyrazolo[3,4-d]pyrimidin- 3-yí)-2-methoxyfenyr]-2- fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 622,0	2,05	32	A
260	WH vá^N ó	acetát AT-[4-(4-amino-ΙΟ-[(4-methyl-177-5- imidazolyl)methyl]-4- piperidyl}-177- pyrazolo [3,4-<7jpyrimidin- 3-yl)-2-methoxyfenyl]-2- íluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 622	2,08	84	A
261	PrŮ T	Al-(4-{4-amino-l-[l-(l,3- thiazol-2-ylmethyl)-4- piperidyl] -17/-pyrazolo[3,4- <7]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 625,1	3_;15	73	A

i..

250

262	ó y	Al-{4-[4-amino-l-(l-{[5- (hydroxymethyl)-2- furyl]methyl}-4-piperidyl)- 1//-pyrazolo [3,4- </]pyrimidin-3-yl]-2- methoxy fenyl} -2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 638,1	2,20	36	A
263	ch, Ff i⁴ / *7	NI - {4-[4-amino-1 -(1 - methy 1-4-piperidy 1)-1 //- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin- 3 -yl] -2-methoxyfenyl·} -2- fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 542,2	2,03	67	A
264	V’ nř	7Vl-{4-[4-amino-l-(l- izopropyl-4-piperidyl)-l//- pyrazolo[3,4-</]pyrimidin- 3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2- fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 570,1	2,08	58	B
265	% ’	acetát ŤVl-{4-[4-amino-l-(l- izobuty 1-4-piperidy 1)-1H- pyrazolo[3,4-</]pyrimidin- 3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2 - fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 584,0	2,43	54	A
266	Ώ 4	M-(4-{4-amino-l-[l-(2- fury lmethyl)-4-piperidyl] - 1//-pyrazolo [3,4- fiQpyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 608,1	2,63	82	A,

i -xf&r

251

267		Al-(4-{4-amino-l-[l-(3- furylmethyl)-4-piperidyl]- 1 A-pyrazolo [3,4- fiQpyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzainid	MH⁺ 610.2	2,43	54	A
268	w <3	Acetát Al-(4-{4-amino-l- [1(177-4- imidazolylmethyl)-4- piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4- </]pyrimidin-3-yl} -2- methoxyfeňyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 608,0	1,90	55	A
269	γ ό	Al - {4-[4-amino-l-(1 - tetrahydro-2A-4-pyranyl-4- piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4- 7]pyrimidin-3-yl]-2- methoxy fenyl} -2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 614,2	2,13	91	B
270	v	terc-buty 1-4- {4- [4-amino-3 - (4-{[2-fluor-4- (trifluormethyl)benzoyl]- amino}-3-methoxyfenyl)- 1 A-pyrazolo [3,4- </]pyrimi din-1 -yl] -1 - piperidyl}-l- piperidinkarboxylát	MH⁺ 713.3	2,57	74	B
271	ó ó	Al -{4-[4-amino-l-(Ítetrahydro-3-thiofenyl-4- piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4- í/]pyrimidin-3-yl]-2- methoxyfenyl}-2-fluor-4-	MH⁺ 616,2	2,53	102	B

β 9

252

	(trifluormethyl)benzamid
272	w	Al-{4-[4-amino-l-(l- benzyl-4-piperidyl)-1H- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin- 3 -yl] -2-methoxy feny 1} -2- fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 618,0	2,67	69	A
273		acetát Al-(4-{4-amino-l-[l- (2-pyridylmethyl)-4- piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4- <7]pyrimidin-3 -yl} -2 - methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 619,1	2,32	84	A
274	v d	Al-(4-{4-amino-l-[l-(3- pyridylmethyl)-4- piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4- í/]pyrimidin-3 -yl} -2 - methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluomiethyl)benzamid	MH' 619,1	2,32	77	A
275	v d	Al-(4-{4-amino-l-[l-(4- pyridylmethyl)-4- piperidyl]-1 A-pyrazolo [3,4- tíOpyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 619,1	2,63	81	A
276		acetát Al-[4-(4-amino-l-{l- [(l-methyl-lA-2- pyrrolyl)methyl] -4- piperidyl}-l A- pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin- 3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-	MH' 621,2	2,52	35	B

253

		fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu
277	Γ* 'z- Ji	acetát M-[4-(4-amino-l- {l-[(5-methyl-2- fury l)methyl]-4-piperidyl} - 1 //-pyrazolo [3,4 - í/]pyrimidin-3-yl)-2- methoxyfenyl]-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 622,1	2,65	78	A
278	m	NI -(4- {4-amino- l-[l-(2- thienylmethyl)-4- piperidyl]-1//-pyrazolo [3,4- </]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormétbyl)benzamid	MH' 624,0	3,00	57	B
279	M 0Φ e¥j	acetát /Vl-(4-{4-amino-l- [l-(3-thienylmethyl)-4- piperidyl]-1//-pyrazolo [3,4- í/]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH⁺ 626,2	2,55	87	A
280	X ot	diacetát 4Vl-[4-(4-amino-l- {1 - [(1 -methylpiperidin-4- yl]-4-piperidyl} -1 //- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin- 3 -yl)-2-methoxyfenyl]-2- fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH⁺ 627,2	1,80	72	B
281		7/1 -{4-[4-amino-1-(1 - tetrahydro-2//-4- thiopyranyl-4-piperidyl)- 1//-pyrazolo [3,4- </]pyrimidin-3 -yl] -2-	MH⁺ 630,2	2,37	20	B

254

		J]pyrimidin-3-yl]-2- methoxyfenyl}-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid
282	1 o’	4-( {4- [4-amino-3 -(4- {[2- fluor-4- (trifluormethyl)benzoyl] - amino } -3 -methoxy feny 1) - lM-pyrazolo[3,4- č/]pyrimidin-l- yl]piperidino} -1 -pyridin-M- oxid	MH⁺ 637,2	2,13	93	A
283	TO	Ml-(4-{4-amino-1-[1-(2- fluorbenzyl)-4-piperidyl] - lM-pyrazolo[3,4- č/]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 638,2	3,13	84	A
284	TO	Ml-(4-{4-amino-l-[l-(3- fluorbenzyl)-4-piperidyI]- lM-pyrazolo[3,4- <Y]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 638,2	3,25	77	A
285	% 3	Ml -(4-{4-amino-1 - [ 1 -(4- fluorbenzyl)-4-piperidyl] - lM-pyrazolo[3,4- </]pyrimidi n-3 -yl} -2 - methoxy fenyl)-2-fl uór-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 638,2	2,87	88	A

255

286	Ť %	Al-[4-(4-amino-l-{l-[3- (methylsulfanyl)propyl]-4- piperidyl}-lA- pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin- 3-yl)-2-methoxyfenyl]-2- fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 618,2	2,42	76	A
287	Y	Al - [4-(4-amino-1 - {1 -[(5 - methyl-2-thienyl)methyl]- 4-piperidyl}-lA- pyrazolo[3,4-</]pyrimidin- 3-yl)-2-methoxyfenyl]-2- íluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 640,2	3,23	73	A
288	f	Al -(4-{4-ámino-l-[l-(3- ~ kyanobenzyl)-4-piperidyl ] - 1 A-pyrazolo [3,4- </]pyrimidin-3-yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 645,2	3,28	57	A ~
289	d ic	Al-(4-{4-amino-l-[l-(4- kyanobenzyl)-4-piperidyl]- 1 A-pyrazolo [3,4- ďjpyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 645,2	3,32	62	A
290		Al-(4-{4-amino-l-[l-(2- kyanobenzyl) -4-piperidyl] - 1 A-pyrazólo[3,4-d]- pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzainid	MH⁺ 645,2	3,78	62	A

256

291	%	NI -(4- {4-amino-l-[l-(4- methoxybenzyl)-4- piperidyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 650,2	2,63	45	A
292	o 0	Al -[4-(4-amino-1- {1 -[(1- acetyl-piperidin-4-yl]-4- piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4- í/]pyrimidin-3-yl)-2- methoxyfenyl] -2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 655,2	2,02	71	B
293		acetát Al-[4-(4-amino-l-	MH⁺	2,07	109	A
		{1 -[(3-methyl-l//-4- pyrazolyl)methyl]-4- piperidyl}-l//- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin- 3 -yl)-2-methoxy-fenyl] -2- fluor-4-(trifluor- methyl)benzamidu	624,2

Příklad 294

Methyl-2-4- [4-amino-3-(4- [2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoyl] amino-3 -methoxyfenyl)-1 Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]piperidino-acetát

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (122 g, 0,230 mmol), methyl-2-brom-acetát (33 pl, 0,346 mmol) a uhličitan česný (150 mg, 0,461 mmol) se smíchají s DMF (2 ml). Směs se zahřívá na teplotu 85°C po dobu 2 hodin. Podle LC/MS jde o dva nové píky, z nichž jeden je bis-alkylovaný produkt a druhý požadovaný produkt. Surová směs se čistí preparativní HPLC s reverzní fází (Rainin HPLC, Sloupec: Thermoquest, hyperprep HS 08, 8 pm, 250x21, 2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril, A: 50

257 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min.), čímž se získá methyl-2-4-[4-amino-3-(4[2-fluor-4-(trifluormethy!)benzoyl]amino-3-methoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin1-yljpiperidino-acetát (60 mg, 43%). ^]H NMR (DMSO-d6) δ 1,91 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 3,32 (s, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,75 (d, J=7,96Hz, 1H), 7,89 (d, J=10,35 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,30 (d, J=8,13 Hz, 1H), 9,89 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ = 602,2. Rt = 2,80 minut.

Příklad 295

TraHS-3-[4-(l//-benzo[í/]imidazol-l-ylrnethyl)-3-rnethoxyfenyl]-l-[4-(4methylpiperazíno)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin A: l-(4-Brombenzyl)-l//-benzo[</]imidazoI l-Brom-4-(brommethyl)benzen (2,50 g, 10 mmol), l//-benzo[</]imidazol (1,181 g, 10,0 mmol), hydroxid draselný (0,561 g, 10,0 mmol), uhličitan draselný (1,382 g, 10,0 mmol) a tetrabutylamonium-bromid (0,161 g, 0,5 mmol) se smíchají v xylenu (60 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 139°C přes noc. Horká reakční směs se filtruje a promyje horkým xylenem. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití dichlormethan/methanolu (95:5 až 80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá l-(4-brombenzyl)-l//-benzo[</]imidazol (1,193 g, 42%). ’H NMR (CDC1₃) δ 5,3.1 (s, 2H), 7,05 (m, 2H), 7,28 (m, 3H), 7,46 (m, 2H), 7,82 (m, 1H), 7,95 (s,lU).

B. l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl‘]-l//-benzo[</|imidazol

Směs l-(4-Brombenzyl)-l//-benzo[í/]imidazolu (1,193 mg, 4,15 mmol), diboronpinakolesteru (1,27 g, 4,98 mmol), [l,T-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,10 g, 0,12 mol) a octanem draselným (1,22 g, 12,46 mol) v W-dimethylformamidu (25 ml) se zahřívá při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (20 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu. Filtrát se koncentruje a zbytek

258 se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití dichlormethan/methanolu (98:2 až 95:5) jako mobilní fáze, čímž se získá 1-(4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl]-l//-benzo[dlimidazol (1,38 g, 100%): *H NMR (CDC1₃) δ 1,27 (s, 12H), 5,33 (s, 2H), 7,06 (d, >8,24Hz, 2H), 7,28 (d, J=8,34 Hz, 2H), 7,84 (d, J=7,701 Iz, 1H), 8,01 (s, lil).

C. 7'ra«5'-3-[4-(l//-benzo[čZ]imidazol-l-ylmethyl)-3-methoxyfenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-4-amin

Trans-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4amin (200 mg, 0,453 mmol), l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl]l//-benzo[</]imidazol (303 mg, 0,906 mmol), tetrakistrifenylfosfin-palladium (0,31 mg, 0,027 mmol) a uhličitan sodný (155 mg, 1,09 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (5 ml) a vodou (2,5 ml). Reakční směs se zahřívá při refluxu přes noc pod atmosférou dusíku. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se čistí preparativní HPLC s reverzní fází (Rainin HPLC, Sloupec: Thermoquest, hyperprep HS 08, 8 pm, 250x21,2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril. A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min.), čímž se získá /ram-3-[4-(l//-benzo[č/]imidazol-lylmethyl)-3-methoxyfenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin (35 mg, 15%).

’H NMR (DMSO-d₆) δ 1,46 (m, 2H), 1,95 (m, 10H), 2,13 (s, (3H), 2,32 (m, 5H), 4,62 (m, 1H), 5,78 (s, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,49 (m, 2H), 7,62 (m, 4H), 8,22 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Sloupec: Genesis, Cl8,3 um, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufř octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ = 522,3, R_t = 0,82 minut.

Příklad 296 acetát NI -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-methoxyethy l)-4-piperidyl] -1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2-bromethyl(ínethyl)ether (20 pl, 0,208 mmol) a uhličitan draselný (52 mg, 0,378 mmol) se Smíchají v DMF (2 ml). Směs se zahřívá při teplotě 65°C přes noc. Surová směs se čistí .a -

259 preparativní HPLC s reverzní fází (Rainin HPLC, Sloupec: Thermoquest, hyperprep HS 08, 8 pm, 250x21, 2 mm Eluenty: 5% B/A áž 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min.), čímž se získá acetát Al-(4-{4-amino-1[ 1 -(2-methoxy ethyl)-4-piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxy fenyl)-2fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (75 mg, 68%). 'Η NMR (DMSO-dó) δ 1,90 (m, 2H), 2,22 (m, 4H), 2,54 (m, 2H), 3,02 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 3,46 (m, 2H), 3,94 (m, s, 3H), 4,66 (m, 1H), 7,30 (d, J=8,19Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,74 (d, J=7,84Hz, 1H), 7,90 (d, J=10,33Hz, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,30 (d, J=8,23 Hz, 1H), 9,89 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mMpufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺=587,2, R_t = 2,17 minut.

Příklad 297

Al -(4-{4-amino-1 - [1 -(kyanomethyl)-4-piperidyl]- 1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin=3-yl·} -2methpxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Al - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-l-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2-bromacetonitril (14 pl, 0,208 mmol) a uhličitan česný (52 mg, 0,378 mmol) se smíchají v DMF (2 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Surová směs se čistí preparativní HPLC s reverzní fází (Rainin HPLC, Sloupec: Thermoquest, hyperprep HS 08, 8 pm, 250x21,2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min.), čímž se získá Al -(4-{4-amino-1-[1 -(kyanomethyl)-4piperidyl]-l A-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fluor-4(trifluormethyl)benzamid (68 mg, 64%). 'H NMR (DMSO-dó) δ 1,99 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,45 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,68 (m, 1H), 7,30 (d, J=8,21Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,75 (d, J=8,26Hz, 1H), 7,90 (d, J=10,51Hz, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,30 (d, J=8,l 8 Hz, 1H), 9,90 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 mllmin.): MH⁺ =569,2, R_t =3,03 minut.

260

Příklad 298 acetát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(2-amino-2-oxoethyl)-4-piperidyl]-lV-pyrazolo[3,4ó/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxy fenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu

VI - {4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2-bromacetamid (28 mg, 0,208 mmol) a uhličitan česný (123 mg, 0,378 mmol) se smíchají v DMF (2 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Surová směs se čistí preparativní HPLC s reverzní fází (Rainin HPLC, Sloupec: Thermoquest, hyperprep HS Cl8, 8 pm, 250x21,2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufř octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min.), čímž se získá acetát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(2-amino-2-oxoethyl)-4piperidyl]-1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-2-fluor-4(trifhiormethyl)benzamidu (70 mg, 63%). *H NMR (DMSO-dó) δ 1,90 (m, 5H), 2,34 (m, 4H), 2,93 (s, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,69 (m, lH), 7,12 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,30 (d, Ι=8,1-5Ηζ,ΗΗ),7,34-(8,4Η), ν,75 <ά, J=8,15Hz, 1H), 7,87 (d, J=10,30Hz, l i l), 7,99 (m, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,31 (d, J=8,14 Hz, 1H), 9,90 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺-587,2. Rt =2,17 min.

Příklad 299 l-(l-methyl-3-piperidyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin-acetát

Racemický roztok 3 -jod-l-(l-methyl-3 -piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-4aminu (0,050 g, 0,00014 mol) v dimethoxyethanu (2,5 ml) a vodě (5 ml) se nechá reagovat s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,033 g, 0,00015 mol), uhličitanem sodným (0,037 g, 0,00037 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,016 g, 0,000014 mol) při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní za vakua. Surová látka se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá l-(l-methyl-3piperidyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lV-pyrazolo[3,4-čf]pyrimidin-4-amin-acetát ve formě bílé pevné látky (0,040 g, 0,00009 mol).

i

- íl

261 ’Η NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,24 (s, ÍH), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,10- 7,22 (m, 5H), 4,74-4,84 (m, ÍH), 2,94 (dd, ÍH), 2,79 (d, ÍH), 2,36 (t, ÍH), 2,22 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,86-2,01 (m, 3H), 1,76-1,84 (m, ÍH), 1,60-1,75 (m, ÍH); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 m, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t13,74 min; MS: MIL 401.

Příklad 300

-[ 1 -(2-methoxyethy l)-3 -piperidy 1 ] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-4amin-acetát

Racemický roztok 3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-aminu (0,050 g, 0,00012 mol) v dimethoxyethanu (2,5 ml) a vodě (5 ml) se nechá reagovat s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,029 g, 0,00014 mol), uhličitanem sodným (0,033 g, 0,00031 mol) a tetrakis(trifenylfosíin)palladiem (0,014 g, 0,00001 mol) při teplotě -80^pG po dobu 20 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní-za-vakua.-Surová látka se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá 1-[1(2-methoxyethyl)-3 -piperidyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminacetát ve formě bílé pevné látky (0,038 g, 0,00007 mol).

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,24 (s, ÍH), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,09- 7,22 (m, 5H), 4,71-4,82 (m, ÍH), 3,44-(t, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,04 (dd, 1H), 2,91 (d, ÍH), 2,47-2,60 (m, 3H), 1,94-2,09 (m, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,75-1,84 (m, 1H), 1,57-1,74 (m, ÍH); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,26 min; MS: Mlť 445.

Příklad301

Trans-1 - {4- [4-amino-3 -(3 -chlor-4- {[4-(trifluormethyl)benzoy ljamino} fenyl)-1 //pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}-4-methylhexahydropyrazindiium-dimaleát

A. 7erc-butyl-/V-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamát

Roztok 4-brom-2-chloranilinu (5,00 g, 0,0242 mol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se nechá reagovat s 1,0 M roztokem bis(trimethylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuranu ·· ····

262 (53,2 ml, 0,0532 mol). Směs se míchá 15 minut při pokojové teplotě. Přidá se di-tercbutyl-dikarbonát (6,34 g, 0,0290 mol) a roztok se míchá po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu heptan/ethylacetát (4:1). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá tórc-butyl-X-(4brom-2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (4,214 g, 0,0137 mol). ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,75 (s, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,50 (dd, 1H), 1,46 (s, 9H); TLC (heptan/ethylacetát 4:1) Rf 0,54.

B. 7erc-butyl-X-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát

Směs fórc-butyl-X-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamátu (2,10 g, 0,00685 mol), diboronpinakolesteru (2,09 g, 0,00822 mol), [l,T-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,17 g, 0,00021 mol) a octanu draselného (2,02 g, 0,02055 mol) v XX-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se trituruje heptanem (70 ml) á výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu®521. Heptan se odstraní za vakua, čímž se získá řerc-butyl-X-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl1.3.2- dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát ve formě šedé pevné látky (1,93 g, 0,00546 mol): ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,65 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,56 (dd, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,29 (s, 12H).

C. Trans-terc-\>uXy\-N-{A-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177pyrazolo[3,4-ť7]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)karbamát

Směs Zraz75-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-aminu (2,20 g, 0,00498 mol), z‘erc-butyl-X-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl1.3.2- dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,93 g, 0,00548 mol), uhličitanu sodného (1,32 g, 0,01245 mol) v 1,2-dimethoxyethanu (50 ml) a vodě (100 ml) se intenzivně míchá a přidá se tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakční směs se míchá 6 hodin při teplotě 80°C, po kterých se přidá další tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakční směs se míchá dalších 16 hodin při teplotě 80°C. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (100 ml) a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (200 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (3 x 75 ml). Spojené organické fáze se suší nad síranem hořečnatým a

·· ···· » · ·· ···· • · · ·· ·· · · · • · · · · · · · ···· · · · · · · ·· . ··» ··· ·· ··

263 rozpouštědlo se odstraní za vakua. Produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu mobilní fází ve složení dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (90:10:0,5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, Čímž se získá tra«s-terc-butyl-A-(4-{4-arnino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-3-yl} -2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (1,993 g, 0,00368 mol): 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,76 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,57 (dd, 1H), 4,58-4,71 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 1,89-2,61 (m, 15H), 1,49 (s, 9H), 1,401,48 (m, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 90: 10) R_f 0,13. MS: M⁺ 541.

D. 7ran5-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-amin

Trans-terc-buty\-N-(4- {4-amino-1-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-ÍHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)karbamát (1,993 g, 0,00368 mol) se přidá do roztoku 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu. Směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojově teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a promyje 1,0 M vodným roztokem hydroxidu sodného (2 x 25 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá /rans-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4úQpyrimidin-4-amin (1,564 g, 0,00355 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSOdé, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,31 (dd, .lH), 6,92 (d, 1H), 4,57-4,63 (m, 1H), 2,23-2,55 (m, 9H), 2,14 (s, 3H), 1,89-2,08 (m, 6H), 1,38-1,52 (m, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 90:10) Rf 0,08; MS: MH⁺441.

E. 7raus'-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</|pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)-4-(trifluonnethyl)benzamid-dimaleát

Do směsi 3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-é/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridinu (5 ml) při teplotě -10°C se po kapkách přidá 4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (0,188 g, 0,00090 mol), přičemž teplota se udržuje pod -5°C. Směs se míchá při teplotě -10°C po dobu 15 minut, a pak při pokojové teplotě pó dobu 18 hodin. Po přidání IN vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) se směs míchá jednu hodinu. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (15 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad

264 síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RPHPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30?/o izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá purifikovaná volná báze (0,032 g, 0,000052 mol). Volná báze se rozpustí v absolutním ethanolu (4 ml) a zahřívá k řefluxu. Po přidání roztoku kyseliny maleinové (0,018 g, 0,000156mol) v absolutním ethanolu (1 ml) se roztok refluxuje dalších 15 minut. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolu. Precipitát se suší za vakua, čímž sezíská/ra/M'-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamid-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,00002 mol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,42 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,20 (d, 2H), 7,96 (d, 2H), 7,80-7,83 (m, 2H), 7,46 (dd, 1H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,13 (s, 4H), 4,61-4,73 (m, 1H), 2,52-2,64 (m, 4H), 2,23-2,46 (m, 5H), 2,16 (s, 3H), 1,90-2,10 (m, 6H), 1,42-1,56 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 3ÓÓÁ, 15 čm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,97 min;

MS: MIL 613.

Příklad 302

Trans-NI -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4ůQpyrimidin-3 -yl} -2 -chlorfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamid-dimaleát

Do směsi 3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lVpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridinu (5 ml) při teplotě -10°C se po kapkách přidá 4-(trifluormethoxy)-l-benzenkarbonylchlorid (0,203 g, 0,00091 mol), přičemž teplota se udržuje pod -5°C. Směs se míchá při teplotě -10°C po dobu 15 minut, a pak při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Po přidání 1N vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) se směs míchá jednu hodinu. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (15 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RPHPLC (Rainin Cl8, 5 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní

• · · ·

265 za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá purifikovaná volná báze (0,034 g, 0,000054 mol). Volná báze se rozpustí v absolutním ethanolu (4 ml) a zahřívá k refluxu. Roztok kyseliny maleinové (0,019 g, 0,000162 mol) v absolutním ethanolu (1 ml) se přidá a roztok se refluxuje po dobu 15 minut. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolu. Precipitát se suší za vakua, čímž se získá trans-N\-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-tí0pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamid-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,00002 mol): 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,29 (s, IH), 8, 26 (s, IH), 8, 14 (d, 2H), 7,78-7,87 (m, 2H), 7,68 (dd, IH), 7,57 (d, 2H), 6,807.20 (b, 2H), 6,11 (s, 4H), 4,65-4,77 (m, IH), 2,38-3,60 (m, 12H), 1,95-2,15 (m, 6H), 1,511,68 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 15,41 min; MS: MH⁺ 629.

Příklad 303

7ríz«5-3-(3-chlor-4-{[(5-methyl-2-furyl)methyl]amino}fenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 M-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin-acetát

Směs 3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlorethanu (20 ml) se při pokojové teplotě nechá reagovat s 5-methyl-2-furfuralem (0,052 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,336 g, 0,00159 mol). Přidají se další dva ekviv. triacetoxyborohydridu sodného (0,672 g, 0,00318 mol) ve dvou 24 hodinových intervalech. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi chloroform (25 ml) a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (2 x 25 ml). Spojené organické fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá /ra«.v-3-(3-chlor4-{ [(5-methyl-2-fůry l)methyl] amino} feny 1)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amin-acetát ve formě bílé pevné látky (0,129 g, 0,00022 mol): ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,51 (d, IH), 7,39 (dd, IH), 6,93 (d, IH),

6.20 (d, IH), 6,14-(t, IH), 5,98 (d, IH), 4,55-4,66 (m, IH), 4,38 (d, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,18266

2,61 (m, 10 Η), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 5H), 1,37-1,53 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08,51 lm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R, 14, 48 min;

MS: MH* 535.

Příklad 304 rra«s-3-{3-chlor-4-[(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-4-amin-acetát

Směs 3 -(4-amino-3 -chlorfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlorethanu (20 ml) se nechá reagovat s 2-chlor-6-fluorbenzaldehydem (0,076 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,336 g, 0,00159 mol) pň pokojové teplotě. Přidají se další tři ekviv. triacetoxyborohydridu sodného (1,008 g, 0,00477 mol) ve třech 24 hodinových intervalech, po kterých zreaguje veškerá výchozí látka. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi chloroform (25 ml) a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (2x25 ml). Spojené organické fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá /raws-3-{3-chlor-4-[(2-chlor-6fluorbenzyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4č/Jpyrimidin-4-amin-acetát ve formě bílé pevné látky (0,074 g, 0,00011 mol): ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8, 20 (s, 1H), 7,52 (d, 1H), 7,35-7,47 (m, 4H), 6,99 (d, 1H), 5,75 (t, 1H), 4,55-4,66 (m, 1H), 4,57 (d, 2H), 2,25-2,61 (m, 11 H), 2,16 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 4H), 1,37-1,53 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 15, 97 min;

MS: MH* 583.

>	• · • · • ·	• · · · •z •	• • ·	• • · •	• · « · • ·	• · · · •
	• - e	• ·	•	•	• ·	• ·
	• ·	• ·	• · ·	.· · «	• ·	• ·

267

Příklad 305

Trans-Nl -(4- {4-amino-1 -[1~( 1//-2-imidazolylkarbonyl)-4-piperidyl] -1 //-pyrazolo[3,4ďJpyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(//vm)~2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid-maleát

Směs NI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</jpyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (0,200 g, 0,00041 mol) v toluenu (10 ml) se nechá reagovat s 5//,10//-diimidazo[l,5-«:l,5-í/]pyrazin-5,10-dionem (0,040 g, 0,00021 mol) refluxuje po dobu 18 hodin. Přidá se další ekviv. 5//,10//-diimidazo[l,5«:l,5-í/|pyrazin-5,10-dionu a směs se refluxuje dalších 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá volná báze (0,103 g, 0,00017 mol). Volná báze se rozpustí v absolutním ethanolu (10 ml) a zahřívá k refluxu. Po přidání roztoku kyseliny maleinové (0,030 g, 0,00034 mol) v absolutním ethanolu (1 ml) se roztok refluxuje po dobu 15 minut, po kterých vznikne precipitát. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolu. Precipitát se suší za vakua, čímž se získá trans-Nl -(4- {4-amino-1 -[l-( 1 //-2-imidazolylkarbonyl)-4-piperidyl]-1 //-pyrazolo[3,4</Jpyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(/ríz/M)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid-maleát ve formě bílé pevné látky (0,055 g, 0,00008 mol): ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,63 (s, 1H), 8,26 (s, IH), 8,22 (d, 1H), 8,00 (b, 1H), 7,74-(b, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,16-7,33 (m, 7H), 6,21 (s, 2H), 4,97-5,13 (m, 1H), 2,91-3,47 (m, 4H), 2,53-2,65 (m, 1H), 2,30-2,45 (m, 1H), 2,07-2,26 (m, 2H), 1,95-2,07 (m, 2H), 1,45-1,50 (m, 1H), 1,28-1,32 (m, IH); RPHPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,17 min;

MS: MH’ 578.

Příklad306

Cis-Nl -(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(/ra«.y)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid-acetát A. Cz5-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy ÍQnyl)-(trans)-2-knyl-1 -cyklopropankarboxamid

268

Směs cis~N\ - {4-[4-amino-l -(1 -oxaspiro[2.5 ] okt-6-y 1)-1 A-pyrazolo [3,4d]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl }-(/ra/7s)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamidu (0,605 g, 0,0012 mol), chloristanu lithného (0,189 g, 0,0018 mol) a kyanidu draselného (0,116 g, 0,0018 mol) v acetonitrilu (60 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu dvou dnů, ochladí na pokojovou teplotu, zředí vodou (30 ml) a extrahuje diethyletherem (3x 30 ml). Spojené organické fáze se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu dichlormethan/methanolem (95: 5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá cisAl-(4-{4-amino-l-[4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-(/ra»5)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,602 g, 0,0011 mol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (t, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,25 (s, 1H), 7,17 (m, 4H), 4,61-4,62 (m, 1H), 3,91 (s, 1H), 2,66 (s, 2H), 2,552,62 (m, 1H), 2,312,45 (m, 3H), 1,58-1,89 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, 1H), 1,28-1,38 (m, 1H); RP-HPLC (Delta Pak C18,5pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 15,21 min;

MS: MIL 538.

B. CL-A^řl-(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl} -2-methoxy fenyl)-(íra«s)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid-acetát

Do roztoku cz'5'-Al-(4-{4-amino-l-[4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(řraHs)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v methanolu (20 ml) a hydroxidu amonného (1 ml) se přidá Raneyův nikl (0,5 ml). Směs se míchá 18 hodin pod atmosférou vodíku (1 atm). Reakční směs se filtruje přes Celit a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získáczs-Nl-(4-{4amino-l-[4-(2-aminoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-(rrazz5)-2-fertyl-lcyklopropankarboxamid-acetát ve formě bílé pevné látky (0,045 g, 0,000083 mol),: ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,65-4,67 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,84-2,91 (m, 1H), 2,53-2,55 (m, 1H), 2,33-2,40 (m, 4H), 1,85 (s, 3H), 1,35-1,80 (m, 9H), 1,30-1, 33 (m, 1H);

269

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 13,29 min;

MS: MH¹ 444.

Příklad 308

Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(2-amino-2-oxoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4í/Jpyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(rran5)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid

Do intenzivně míchaného roztoku cis-Nl -(4-{4-amino-1- [4-(kyanomethyl)-4hydroxy cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl}-2-methoxyfenyl)-(/razzs)-2-fenyl1-cyklopropankarboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v dimethylsulfoxidu (4 ml) se při pokojové teplotě přidá uhličitan draselný (0,216 g, 0,00156 mol). Po kapkách se přidá 30% vodný roztok peroxidu vodíku (0,6 ml), přičemž teplota se udržuje konstantní. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 32 hodin. Přidá se voda (20 ml) do směsi a vzniklý precipitát-se filtruje. Precipitát se promyje vodou, suší za vakua. Pevné látky se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cA-tV1-(4-{4amino-l-[4-(2-amino-2-oxoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl}-2-methoxyfenyl)-(/raH5)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,117 g, 0,00021 mol): ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,05-7,10 (m, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,61-4,71 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,24 (s, 2H), 1,55-1,81 (m, 6H), 1,451,53 (m, 1H), 1,28-1,36 (m, 1H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,05 min;

MS: MH⁴ 556.

Příklad 308

Cis-Nl -[4-(4-amino-1 - {4-[(dimethylamino)methyl] -4-hydroxycyklohexyl} -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-(íra«ó)-2-fenyl-lcyklopropankarboxyamid-acetát

270

Do roztoku ó7'.s’-Al-{4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-177-pyrazolo[3,4íZ]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-(/rau5')-2-fenylcyklopropan-l-karboxainidu (0,190 g, 0,000302 mol) v 2-propanolu (10 ml) se přidá 2 M roztok dimethylaminu V methanolu (0,91 ml) a výsledná směs se zahřívá při teplotě 65°C v tlakové nádobě po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu pěti minut, pak 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá czs-Al-[4-(4-amino-l-{4-[(dimethylamino)methyl]-4hydroxycyklohexyl} -17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -y l)-2-methoxyfenyl] -(/ro«s)-2-fenyl1-cyklopropankarboxamid-acetát ve formě bílé pevné látky (0,109 g, 0,000177 mol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,177,33 (m, 7H), 4,56-4,68 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,28 (s, 6H), 2,24 (s, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,63-1,78 (m, 4H), 1,44-1,58 (m, 3H), 1,28-1,36 (m, 1H); RPHPLC (Delta Pak Cl8, 5 m, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 13,54 min;

MS: MH⁺ 556.

Příklad310

Trans-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4íTJpyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-(2Á)-tetrahydro-1 //-2-pyrrolkarboxamid-acetát

Roztok řra«5-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1-[4-(4-methylpiperazino)cykl ohexyl]l//-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00046 mol) v ΑζΑ-dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s l-hydroxy-7-azabenzotriazolem (0,068 g, 0,00050 mol), l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridem (0,132 g, 0,00069 mol), D-Boc-prolinem (0,108 g, 0,00050 mol) a AA-diizopropylethylaminem (0,184 g, 0,00142 mol) při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (10 ml) a 5% vodný roztok kyseliny citrónové (20 ml). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 10 ml). Spojené organické fáze se promyjí nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml), suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se míchá v 20% trifluoroctové kyselině v dichlormethanu po dobu 6 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8

271 pm, 300 Á, 25 cm; 5% izokraticky po dobu pěti minut, pak 5%-40% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, ěímž se získá trans-N2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(2R)tetrahydro-ltf-2-pyrrolkarboxamid-acetát (0,096 g, 0,00016 mol) ve formě bílé pevné látky. ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,33 (s, 1H), 8,45 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,21 (d, 1H), 4,58-4,69 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,77 (dd, 1H), 2,96-3,04 (m, 1H), 2,742,84 (m, 1H), 2,47-2,58 (m, 5H), 2,23-2,45 (m, 5H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,88-2,11 (m, 7H), 1,78-1,88 (m, 1H), 1,60-1,69 (m, 2H), 1,39-1,54 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 8,47 min;

MS:MH⁺534;

Příklad 311

4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)- l/7-pyrazo!o[3,4-d]pyrimidin-1 -yl]-1 -pyridiniumolát

A. 4-(4-amino-3-jod-177-pyrazolo[3,4-íf|pyrimidin-l-yl)-l-pyridiniumolát

Roztok 3-jod-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (5,00 g, 0,019 mol) v AA-dimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat s 60% hydridem sodným v oleji (0,92 g, 0,023 mol) při pokojové teplotě, Směs se míchá po dobu 15 minut a přidá se 4-nitropyridin-A-oxid (5,37 g, 0,038 mol). Směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 18 hodin. Vzniklý precipitát se filtruje, promyje N,A-dimethylformamidem a ethylacetátem, ěímž se získá 4-(4-amino-3-jod-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-pyridinium-molát (3,79 g, 0,011 mol) ve formě hnědé pevné látky: *H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 8,34 (d, 2H), 8,24 (d, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 7,36 min;

MS:MH⁺355.

B. 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-1 -yl]-1 -pyridiniumolát

Suspenze 4-(4-amino-3-jod-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-pyridiniumolátu (0,140 g, 0,00040 mol) v dimethoxyethanu (7 ml) a vodě (15 ml) se nechá reagovat s

4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,093 g, 0,00043 mol), uhličitanem sodným (0,105 g,

0,00099 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,046 g, 0,00004 mol) při teplotě 80°C po

272 dobu 18 hodin. Pevný podíl se filtruje, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazólo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolát (0,138 g, 0,00035 mol) ve formě hnědé pevné látky. Podíl (0,040 g, 0,00010 mol) se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl 8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky po dobu pěti minut, pak 40%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 30 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá produkt 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazol o [3,4ť/]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolát ve formě bílé pevné látky (0,013 g, 0,00003 mol). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,44 (s, 1H), 8,34-8,41 (m, 4H), 7,77 (d, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,13-7,24 (mi, 5H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,66 min;

MS: MH⁺397.

Příklad 312

3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-pyridyl·)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin»4-amin

Suspenze 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-l-yl]-lpyridiniumolátu (0,100 g, 0,00025 mol) a 10% palladia na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) v kyselině octové (3 ml) se nechá reagovat s monohydrátem hypofosfitu sodného (0,033 g, 0,00038 mol) při teplotě 60°C. Po 2 hodinách se přidá další 10% palladium na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol). Směs se míchá 18 hodin, po kterých se přidá další 10% palladium na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) a monohydrát hypofosfitu sodného (0,033 g, 0,00038 mol). Směs se míchá dalších 24 hodin, filtruje přes Celit®521 a promyje kyselinou octovou. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RPHPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky po dobu pěti minut, pak 40%100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 30 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-amin (0,020 g, 0,00005 mol) ve formě bílé pevné látky: ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,71 (d, 2H), 8,46 (s, 1H), 8,39 (dd, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,46 (t, 2H), 7,13-7,25 (m, 5H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 17,31 min;

MS:MH⁺381.

273

Příklad 313

A2-{4-[4-amino-l -(4-pyridyl)-l A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenýl}-lmethyl-1 A-2-indolkarboxamid

A. A2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2methoxy feny 1}-1-methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Suspenze 4-(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidin-1 -yl)-1 -pyridiniumolátu (0,500 g, 0,0014 mol) v dimethoxyethanu (15 ml) a vodě (30 ml) se nechá reagovat s A2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-1A-2indolkarboxamidem (0,631 g, 0,00155 mol), uhličitanem sodným (0,374 g, 0,0035 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,163 g, 0,00014 mol) při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Pevný podíl se filtruje a promyje vodou, míchá v ethylacetátu po dobu 18 hodin, filtruje a promyje ethylacetátem. Pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá surový 4-[4-amino-3(3-methoxy-4-[( 1-methyl -1A-2-indoly l)-karbonyl] aminofenyl)-1 A-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-l-ylJ-l-pyridiniumolát (0,523 g, 0,0010 mol) ve formě hnědé pevné látky: RPHPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 10,92 min;

MS: MH* 507.

B. A2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl} -1-methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Suspenze 4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(l-methyl-lA-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolátu (0,200 g, 0,00039 mol) a 10% palladia na aktivním uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) v kyselině octové (3 ml) se nechá reagovat s monohydrátem hypofosfitu sodného (0,063 g, 0,00059 mol) při teplotě 60°C po dobu 2 hodin. Přidá se další 10% palladium na aktivním uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) a hypofosfit sodný (0,045 g, 0,00042 mol ) a směs se míchá po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se míchá v methanolu po dobu 4 hodin. Směs se filtruje přes Celite®521 a promyje methanolem. Rozpouštědlo se odstraní za .vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 50% izokraticky po dobu pěti minut, pak 50%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá A2-{4[4-amino-1 -(4-pyridyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-

274

2-indolkarboxamid (0,020 g, 0,00004 mol) ve formě bílé pevné látky: *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,48 (s, ÍH) 8,72 (d, 2H), 8,47 (s, ÍH), 8,42 (d, 2H), 8,20 (d, ÍH), 7,72 (d, ÍH), 7,60 (d, ÍH), 7,48 (s, ÍH), 7,42 (d, ÍH), 7,36 (s, ÍH) 7,34-(t, ÍH), 7,16 (t, ÍH), 4,05 (s, 3H), 3,99 (s, ÍH); RP-HPLC (Delta Pak C18,.5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 mumin) Rt 19, 50 min;

MS:MH⁺491.

Příklad 314

-(6-amino-3 -pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin; a

Příklad 315

3-(4-fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Roztok 3-(4rfenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00079 mol) v jV-methyl-pyrrolidinonu (10 ml) se nechá reagovat s 60% hydridem sodným v oleji (0,032 g, 0,00079 mol). Po skončení uvolňování plynu se směs míchá při pokojové teplotě po dobu 30 minut a přidá se 5-brom-2-nitropyridin (0,161 g, 0,00079 mol) a směs se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 18 hodin. Přidá se další 60% hydrid sodný v oleji (0,032 g, 0,00079 mol) a směs se míchá další 2 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (15 ml) a vodu (25 ml). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 15 ml). Spojené organické podíly se promyjí solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu heptan/ethylacetátem (1: 2) jako mobilní fází, čímž se získají dva produkty. Méně polární sloučenina, l-(6-nitro-3-pyridyl)3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-amin, se suspenduje v absolutním ethanolu (10 ml) a přidá se A/V-dimethylformamid (5 ml) a 10% palladium na aktivním uhlí (0,007 g). Směs se míchá pod tlakem vodíku v balónku po dobu 18 hodin. Směs se filtruje přes vrstvu Celitu®521, promyje absolutním ethanolem. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá l-(6-amino-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/jpyrimidin-4-amin (0,007 g, 0,00002 mol) ve formě bílé pevné látky. ’H NMR (DMSOde, 400 MHz) δ 8,53 (d, ÍH) 8,31 (s, ÍH), 7,97 (dd, ÍH), 7,73 (d, 2H), 7,44-(t, 2H), 7,12-23 (m, 5H), 6,60 (d, ÍH), 6,20 (s, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%• 9

9

275

85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 15,38 min; MS: MH⁺

396.

Polárnější sloučenina, 3-(4-fenoxyfeny 1)-1-(5-brom-2-pyridyl)-l//-pyrazolo [3,4</]pyrímidin-4-amin, se suspenduje v absolutním ethanolu (10 ml) a přidá se VV-dimethylformamid (5 ml) a 10% palladium na aktivním uhlí (0,007 g). Směs se míchá pod tlakem vodíku v balónku po dobu 18 hodin. Směs se filtruje přes vrstvu Celitu®521 a promyje absolutním ethanolem. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 3-(4fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-l/í-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-amin (0,030 g, 0,00007 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,60-8,64 (m, 1H) 8,37 (s, 1H), 8,20 (d, 1H), 8,038,08 (m, 1H), 7,76 (d, 2H), 7,41-7,49 (m, 3H), 7,12-7,23 (m, 5H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t í 6,32 min;

MS:MH⁺381.

Obecný způsob reduktivní aminace s trans-3-(4-amino-fenyl)-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminem a aldehydem jako výchozími látkami je uveden níže. Sloučeniny podle příkladů 316 a 317 se připraví pomocí tohoto způsobu.

Postup:

Směs trans-3-(4-amino-fenyl)- l-[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-1/7-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-4-aminu (1 ekviv.), odpovídajícího aldehydu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, zháší nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty. Sloučenina podle příkladu 316 se připraví podle tohoto způsobu z aldehydu 2methoxy-3-formyl-pyridinu a sloučenina podle příkladu 317 se připraví pomocí z aldehydu 2-formy-indolu.

276

Příklad 316

Zrans-3-(4-[(2-methoxy-3-pyridyl)methyl]aminofenyl)’l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-úQpyrimidin-4-amin-diacetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 8,06 (dd, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,95 (dd, 1H), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,26 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,07 min.

MS: MH' 528.

Příklad 317

Trans-3 - {4- [(1 A-2-indolylmethyl)amino] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl] 1 A-pyrazolo [3,4-čf]pyrimidin-4-amin-acetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,08 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,36 (d, 2H), 7,32 (d, 1H), 7,01 (t, 1H), 6,95 (t, 1H), 6,81 (d, 2H), 6,47 (t, 1H), 6,35 (s, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,45 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 13,74 min.

MS: MH⁺536.

Příklad318

7razw-3-[(4-{4-ámino-l -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}anilino)methyl]-l,2-dihydro-2-pyridinon-diacetát Trans-3-(4-[(2 -methoxy-3 -pyridyl)methyl] aminofenyl)-1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexy lj-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin-diacetát (0,105 g,

0,000199 mol) se rozpustí v 30% HBr v kyselině octové (4 ml) a směs se refluxuje po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá Zm«5-3-[(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}anilino)methyl]-l,2dihydro-2-pyridinon-diacetát (0,0204 g, 0,0000324 mol) ve formě bílé pevné látky.

• ·

277 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,29 (m, 4H), 6,68 (d, 2H), 6,40 (t, ÍH), 6,15 (m, ÍH), 4,60 (m, ÍH), 4,09 (d, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 9,40 min. MS: MH⁺514.

Obecný způsob reduktivní aminace s /rtm-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminem a aldehydem jako výchozími látkami je uveden níže.

Sloučeniny podle příkladů 319-321se připraví podle tohoto způsobu.

Postup:

Směs trans-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1- [4-(4-methylpiperazino)cykl ohexyl]l//-pyrazolo[3,4-<yjpyrimidin-4-(l ekviv.), odpovídajícího aldehydu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, zháší nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.

Sloučenina podle příkladu 319 se připraví z aldehydu 2-amino-4-chlor-5-formyl1,3-thiazolu. Sloučenina podle příkladu 320 se připraví z aldehydu 5-methyl-3formylizoxazolu. Sloučenina podle příkladu 321 se připraví z aldehydu 4-formy-l,3thiazolu.

Příklad 319

7ranó'-5-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,46/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyanilino)methyl]-4-chlor-l,3-thiazol-2-amin-diacetát ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8, 19 (s, ÍH), 7,19 (s, 2H), 7,06 (m, 3H), 6,68 (d, ÍH), 5,76 (t, ÍH), 4,60 (m, ÍH), 4,30 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 ·· ··«·

278 · · (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,59 min.

MS: MH“ 583.

Příklad 320

7ra»5-3-(3-methoxy-4-[(5-methyl-3-izoxazolyl)methyl]aminofenyl)-l -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-4-amin-acetát 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,04 (m, 2H), 6,68 (d, 1H), 6,16 (s, 1H), 5,86 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,40 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), l,46(m, 2H); RP-HPLC (DeltaPak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,53 min. MS: MI1⁺ 532.

Příklad 321

7r«n5-3-{3-methoxy-4-[(l,3-thiazol-4-ylmethyl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-4-amin-acetát ‘HNMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,06 (s, 1H),

7,03 (d, 1H), 6,68 (d, 1H), 5,76 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,52 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s. 311), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,17 min.

MS: Μ1Γ 534.

Obecný způsob syntézy benzo tetrahydrofuran-derivátů s trans-3-(4-aminofenyl)-1[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminem a příslušným

2-hydroxy-benzaldehydem jako výchozími látkami je uveden níže. Sloučeniny podle příkladů 322 a 323 se připraví podle tohoto způsobu.

Postup:

7raMS-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-4-amin (1 ekviv., 0,0001-0,0002 mol) a odpovídající 2-hydroxy-benzaldehyd ··. ···* • * ·

• ι>£ Λ'·

I*»

279 (1 ekviv.) se spojí v absolutním ethanolu (5 ml) a míchají při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá odpovídající imin, který se použije bez další purifikace. Trimethylsulfoxonium-jodid (2,5 ekviv.) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafinu (2,5 ekviv.). Po 10 minutách se se přidá roztok iminu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodiny. Roztok se nalije do ledové vody (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (2x40 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá finální sloučenina.

Sloučenina podle příkladu 322 se připraví z 2-hydroxy-4,6-dichlorbenzaldehydu a sloučenina podle příkladu 323 se připraví z 2-hydroxy-4-chlorbenzaldehydu.

Příklad 322

7ra/í5-3-4-[(4,6-dichlor-2,3-dihydrobenzo[á]furan-3-yl)amino]fenyl-l -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin-acetát 'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,14 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,80 (d, 2H), 6,56 (d, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,80 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,42 (dd, ÍH), 2,62,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 16,03 min.

MS: MIL 593.

Příklad 323

7ra«5-3-{4-[(4-chlor-2,3-dihydrobenzo[Z>]furan-3-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidin-4-amin-acetát *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,28 (t, 1H), 6,99 (d, 1H),

6,89 (d, 1H), 6,81 (d, 2H), 6,53 (d, 1H), 5, 34 (m, 1H), 4,74 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,38 (dd, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

·· 9999

9999

9 . '9 99 99 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

9.9 ·· · ···« « • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 ·· ··. ··· 999 99 99

280

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R, 14,42 min.

MS: MIL 559.

Příklad 324 rrans-3-4-[(4,6-dichlor-2,3-dihydrobenzo[&]furan-3-yl)amino]-3-methoxyfenyl-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-amin-acetát

7ran5'-3-4-[(4,6-dichlor-2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)amino]-3-methoxyfenyl-1 [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-4-amin-acetát se připraví způsobem podle příkladů 322 a 323 z/ran5'-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu a 2-hydroxy-4,6dichlorbenzaldehydu jako výchozích látek.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,11 (m, 4H), 6,80 (d, 1H), 5,45 (m, 2H),

4,84 (dd, 1H), 4,60 (m, lH), 4,42 (dd, 1H), 3,82 (s, 3I I), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 311), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 16,85 min.

MS: ΜΙΓ 623.

Meziprodukt 7

7crc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-lpiperidinkarboxylát

A. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-l A-pyrazolo[3,4ý/]pyrimidin-1-yl]-1-piperidinkarboxylát

Směs benzyl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (9,54 g, 0,027 mol), /erc-butyl-4-(4-amino-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylátu (10,0 g, 0,0225 mol), tetrakis-(trifenylfosfin)palladia (1,56 g, 0,00135 mol) a uhličitanu sodného (5,97 g, 0,0563 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (120 ml) a vody (60 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu (150 ml) a dichlormethan (150 ml); organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého

999 9

281

·’ · tlaku. Zbytek se trituruje v diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá íerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-lV-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (10,1 g, 0,0186 mol) ve formě bílé pevné látky, ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,00 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,36 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 18,58 min.

B. Terc-butyl-4- [4 -amino-3 -(4-aminofeny 1)-1 V-pyrazolo [3,4-ri]py rimidin-1 -yl] -1 piperidinkarboxylát

Do roztoku terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-lVpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-lpiperidinkarboxylátu (5,0 g, 0,0092 mol) v terahydrofuranu (150 ml) se přidá 10% palladium na aktivním uhlí (1,0 g) a reakční směs se hydrogenuje v Parrově třepačce po dobu 96 hodin. Katalyzátor se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v n-heptanech a precipitát se spojí filtrací, suší, čímž se získá Zerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lVpyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (2,51 g, 0,0061 mol) ve formě bělavé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,42 (s, 2H),

4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,18 min.

Sloučeniny podle příkladů 325-337 se připraví podle následujícího způsobu pro reduktivní aminaci, poté odstraněním BOC chránící skupiny. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4aminofenyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát a příslušný aldehyd se používají jako výchozí látky.

Postup:

Směs terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]1-piperidinkarboxylátu (1 ekviv.), aldehydu (1,2 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, trituruje v ethylacetátu a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové. Výsledná směs se míchá po

282 dobu 1 hodiny, vodná fáze se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se separují. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/miň), čímž se získají požadované produkty.

Následující sloučeniny se připraví podle výše uvedeného způsobu:

Příklad 325

3-{4-[(benzo[ů]furan-2-ylmethyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4ó/jpyrimidin-4-amin-diacetát 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,85 (d, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,66 (t, 111), 4,70 (m, 1H), 4,51 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 211); RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 13,37 min.

MS: Mil'440.

Příklad326

3-(4-[(2-methoxy-3-pyridyl)methyljaminofenyl)-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin-diacetát ‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,61 (d, lH), 7,36 (d, 2H), 6,96 (dd, 1H), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,27 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, albumin) R_t 11,06 min.

MS: MH⁺431.

Příklad 327

3-(4-[(5-methyl-2-thienyl)methyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-amin-diacetát

283 ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,85 (d, 1H), 6,77 (d, 2H), 6,64 (d, 1H), 6,54-(t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,41 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,04 (m, 211), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,85 min.

MS:MH⁺420.

Příklad 328

3-{4-[(2-furylmethyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-4-amindiacetát *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,77 (d, 2H), 6,46 (t, 1H), 6,39 (d, 1H), 6,34 (d, 1H), 4,70 (m, ÍH), 4,31 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 211), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 10,96 min.

MS:MH⁺390.

Příklad 329

3-[4-(benzylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-l/f-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin-diacetát ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,34 (m, 6H), 7,24-(t, 1H), 6,73 (d, 2H), 6,60 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,33 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m,2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,32 min.

MS: MH 400.

Příklad 330

3- {4-[(2-methoxybenzyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4amin-diacetát • ·'

284 ‘H NMR (DMSO-d₅, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,01 (d, 1H),

6,90 (t, 1H), 6,70 (d, 2H), 6,41 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,28 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,73 min.

MS:MH⁺430.

Příklad 331

3- {4-[(3-methoxybenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4amin-diacetát ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,25 (t, 1H), 6,96 (m, 2H), 6,81 (d, 1H), 6,72 (d, 2H), 6,59 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,38 min.

MS: MH 430.

Příklad 332

- {4-[(4-methoxybenzyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4amin-diacetát ^lH NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,35 (m, 4H), 6,90 (d, 2H), 6,72 (d, 2H),

6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 3,73 <s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s,6H), 1,79 (m,2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,37 min.

MS: MH⁺ 430.

Příklad 333

-(4-piperidyl)-3-(4-[3-(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin4- amin-diacetát • ·

285 *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,71 (m, 2H), 7,58 (m, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s,6H), 1,79 (m,2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,08 min.

MS: MíC 468.

Příklad 334 l-(4-piperidyl)-3-(4-[4-(trifíuormethyl)benzyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-é/]pyrimidin4-amin-diacetát ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,23 min.

MS: ΜΙΓ 468.

Příklad 335

3- (4-[(2-methyl-l,3-thiazol-4-yl)methyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin-diacetát *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (d, 2H), 7,26 (s, 1H), 6,73 (d, 2H),

6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,36 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,70 (s, 3H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 211);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 10,13 min.

MS:MH⁺421.

Příklad 336

- {4- [(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-e/]pyrimidin4- arnin-diacetát • ·

286 'Η NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,42 (m, 4H), 7,26 (t, IH), 6,83 (d, 2H), 6,27 (t, IH), 4,72 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

MS: MH' 452.

Příklad 337

3-(4-[2-fluor-4-(trifluonnethyl)benzyl]aminofenyl)-l -(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin-diacetát *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,61 (m, 3H), 7,38 (d, 2H), 6,73 (d, 2H), 6,68 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,47 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 611), 1,79 (m,2H);

RP-HPLC (Delta Pak°C 18, 5 pm, 300 Á, 15, cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 12,83 min.

MS: MU* 486.

Příklad 338

3-{4-[(benzo[ů]furan-2-ylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l-(4-piperidyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin-diacetát

Směs /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l//-pyrazoIo[3,4</]pyrimidin-l-y]]-l-piperidmkarboxylátu (g, mol), benzofuran-2-karbaldehydu (0,046 g, 0,000315 mol); triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,00042 mol,) a octové kyseliny (0,024 ml, 0,00042 mol) se míchá v bezvodém 1,2dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, trituruje v ethylacetátu (4 ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1 ml). Výsledná směs se míchá po dobu 1 hodiny, vodná fáze se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se separují. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl 8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá 3-{4-[(benzo[ů]furan-2-

287 ylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl} -1 -(4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amindiacetát (0,027 g, 0,0000457 mol).

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, ÍH), 7,55 (m, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,06 (m, 2H), 6,80 (d, ÍH), 6,75 (s, ÍH), 5,80 (t, ÍH), 4,70 (m, ÍH), 4,57 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,83 min.

MS:MH⁺470.

Příklad 339

- [ 4-(2,3 -dihydrobenzo [6] furan-3 -ylamino)fenyl] -l-(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-amin-acetát

Salicylaldehyd (0,063 g, 0,000513 mol) a terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (0,200 g, 0,000489 mol) se spojí v absolutním ethanolu (5 ml) a míchají při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá tórc-butyl-4[4-amino-3-(4- {[-1 -(2-hydroxyfenyl)methyliden] amino} fenyl)- l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát, který se použije bez další purifikace. Trimethylsulfoxonium-jodid (0,269 g, 0,00122 mol) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafinu (0,049 g, 0,00122 mol). Po 10 minutách se přidá roztok fórc-butyl-4-[4-amino-3-(4-{[-l(2-hydroxyfenyl)methyliden]amino] fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l -yl]-1 piperidinkarboxylátu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodin. Roztok se nalije do ledové vody (70 ml) a extrahuje dichlormethanem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá surový terc-butyl-4{4-amino-3 - [4-(2,3 -dihydrobenzo [ά] furan-3 -ylamino)fenyl] -1 Z/-pyrazolo[ 3,4-í/]pyrimidinl-yl}-l-piperidinkarboxylát, který se použije bez další purifikace. Surová sloučenina se rozpustí v ethylacetátu (5 ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1,5 ml). Výsledná emulze se intenzivně míchá po dobu 1 hodiny, vodná vrstva se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se separují. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní

288

HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá 3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-ylamino)fenyl]-l-(4piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin-acetát (0,038 g, 0,000078 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, ÍH), 7,41 (m, 3H), 7,25 (t, ÍH), 6,89 (m, 4H),

6,51 (t, ÍH), 5,35 (m, ÍH), 4,79 (m, 2H), 4,27 (m, ÍH), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m,2H), 1,90 (s,3H), 1,79 (m,2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5, pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,38 min.

MS: MH 428.

Příklad 340

Trans-3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin3 -yl} anilino)-1 Η-1 X⁶-benzo[</] izothiazol-1,1 -dion-acetát

A. 3-chlor-l//-lZ⁶-benzo[Xlizothiazol-l,l-dion

Sacharin (10,0 g, 0,0546 mol) a chlorid fosforečný (12,6 g, 0,060 mol) se zahřívají při teplotě 170°C po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a suspenduje v diethyletheru (200 ml). Precipitát se spojí filtrací, pořádně promyje diethyletherem, suší, čímž se získá 3-chlor-l//-lX⁶-benzo[</]izothiazol-l,l-dion (3,7 g, 0,0184 mol) ve formě bílé pevné látky, která se použije bez další purifikace.

MS: MH 202.

B. 3-(4-bromanilino)-l//-lX⁶-benzo[X]izothiazol-l,l-dion

Do roztoku 3-chlor- l//-^⁶-benzo[</] izothiazol- 1,1-dionu (1,0 g, 0,00496 mol) v acetonu (20 ml) se najednou přidá 4-bromanilin (1,71 g, 0,00992 mol) a směs se míchá po dobu 15 min. Směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se suspenduje ve vodě (100 ml). Precipitát se spojí filtrací, pořádně promyje vodou a suší, čímž se získá 3-(4bromanilino)-l//-X⁶-benzo[č/]izothiazol-l,l-dion (1,57 g, 0,00467 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,93 (s, ÍH), 8,47 (d, ÍH), 8,09 (d, ÍH), 7,93 (m, 4H), 7,69 (d, 2H);

289

C. 3-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-177-lX⁶benzo[d]izothiazol-1,1 -dion

Směs 3-(4-bromanilino)-177-lZ⁶-benzo[<71izothiazol-l,l-dionu (1,57 g, 0,00467 mol), diboronpinakolesteru (1,43 g, 0,00561 mol), [l,r-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého (v komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,114 g, 0,00014 mol) a octanu draselného (1,37 g, 0,014 mol) v ΛζΑ-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu. Filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se trituruje v diethyletheru, čímž se získá 3-[4-(4,4,5,5tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-1 H-\k⁶-benzo[t/]izothiazol-1,1 -dion (1,14 g, 0,00297 mol) ve formě bílé pevné látky.

^lH NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,92 (br, 1H), 8,51 (d, 1H), 8,08 (d, 1H), 7,91 (m, 4H), 7,68 (d,2H), 1,29 (s, 12H).

D. Trans-3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -17/-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3 -yl} anilino)-1 Η-1 X⁶-benzo [t/jizothiazol-1,1 -dion-acetát

Směs 3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-17/-lX⁶benzo[í/]izothiazol-l,l-dionu (0,09 g, 0,000234 mol), tra/w-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidin-4-aminu (0,08 g, 0,00018 mol), tetrakis-(trifenylfosfin)palladia (0,013 g, 0,000011 mol) a uhličitanu sodného (0,048 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá Zra«.s^,-3-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 /7-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} anilino)-1 Η-1 λ⁶benzo[í/]izothiazol-1,1 -dion-acetát (0,075 g, 0,000119 mol) ve formě bílé pevné látky *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,29 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 7,66 (d, 2H), 4,65 (m, lH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,27 min.

290

MS: ΜΗ' 572.

Příklad 341

Cis-3 -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3yl}anilino)-1//-1 Z⁶-benzo[í/Jizothiazol-1,1-dion-diacetát

Cis-3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}anilino)-l//-lZ⁶-benzo[</]izothiazol-l,l-dion-diacetát se připraví z 3-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l//-lZ⁶-benzo[</]izothiazol-l,l-dionu (0,09 g, 0,000234 mol) a c/s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cykiohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu podle podobného způsobu jako je uveden výše.

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,42 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (m, 3H), 7,84 (m, 2H), 7,62 (d, 2H), 4,80 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,07 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300 Á,T5 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,59 min MS: MH' 572.

Příklad 342

Trans-N3-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)benzo[í/]izoxazol-3-amin-acetát

A. Ní -(4-bromfenyl)-2-fluorbenzamid

Roztok 2-fluorbenzoylchloridu (5,82 g, 0,0367 mol) a 4-bromanilinu (6,31 g, 0,0367 mol) v bezvodém dichlormethanu (150 ml) se ochladí na teplotu 0°C a pod atmosférou dusíku se po kapkách přidá W-diizopropylethylamin (5,21 g, 0,0407 mol). Výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, koncentruje a zbytek vytřepe mezi ethylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentrují. Zbytek se suspenduje ve studeném diethyletheru (50 ml) a precipitát se spojí filtrací, suší, čímž se získá Vl-(4-bromfenyl)-2-fluorbenzamid (9,6 g, 0,0326 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,54 (s, 1H), 7,66 (m, 3H), 7,56 (m, 3H), 7,34 (m, 2H). TLC (ethylacetát/heptan 1:2) Rf 0,37

291

B. M-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamid

Směs /Vl-(4-bromfenyl)-2-fluorbenzamidu (3,3 g, 0,0112 mol) a 2,4-bis-(4methoxyfenyl)-l,3-dithia-2,4-difosfetan-2,4-disulfidu (2,27 g, 0,00561 mol) se zahřívá v toluenu při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/n-heptanu (1:6) jako mobilní fáze, čímž se získá jVl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamid (3,1 g, 0,010 mol) ve formě žluté pevné látky.

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 12,13 (s, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,62 (m, 3H), 7,51 (m, 1H), 7,31 (m,2H),

TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,27.

C. M-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenamidoxim

Směs /Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamidu (1,56 g, 0,00505 mol), hydroxylamin-hydrochloridu (0,44 g, 0,00631 mol) a hydrogenuhličitanu sodného (0,53 g, 0,00631 mol) se zahřívá v absolutním ethanolu (25 ml) při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá 7VI-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenamidoxim (1,21 g, 0,00392 mol) ve formě bělavé pevné látky.

TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,12.

D. JV-benzo[ď]izoxazoI-3-yl-/V-(4-bromfenyl)amin

Do roztoku /Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenamidoximu (1,51 g, 0,00489 mol) v A-methylpyrrolidinonu (25 ml) se přidá řerc-butoxid draselný (0,54 g, 0,00513 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organické fáze se promyjí solankou, suší síranem hořečnatým a koncentrují. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití

292 ·· ···· ♦ · ···· · · · • · · • · · · ·· ·· ethylacetát/tt-heptanu (1: 5) jako mobilní fáze, čímž se získá X-benzo[ď]izoxazol-3-yl-X(4-bromfenyl)amin (0,95 g, 0,00329 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,72 (s, 1H), 8,13 (d, III), 7,68 (d, 2H), 7,61 (m, 2H), 7,54 (d, 211), 7,37 (dd, 1H).

TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,26.

E. X-benzo[<7]izoxazol-3-yl-X-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin

Směs X-benzo[<7]izoxazoJ-3-yl-X-(4-bromfenyl)aminu (1,30 g, 0,0045 mol), diboronpinakolesteru (1,37 g, 0,0054 mol), [l,l’-bis-(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,110 g, 0,000135 mol) a octanu draselného (1,32 g, 0,0135 mol) v Λ/X-dimeíhylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu. Filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/tt-heptanu (1: 5) jako mobilní fáze, čímž se získáX-benzo[ó/]izoxazol-3yl-X-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,40 g, 0,00119 mol) ve formě bílé pevné látky. ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,74 (s, 1H), 8,16 (d, 1H), 7,70 (m, 4H), 7,61 (d, 2H), 7,37 (dd, 1H), 1,29 (s, 12H).

TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,21.

F. Trans-N3-(4~ {4-amino- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4fiQpyrimidin-3 -yl} fenyl)benzo[<7]izoxazol-3-amin-acetát

Směs X-benzo[í7]izoxazol-3-yl-X-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,10 g, 0,000298 mol), /r«H5-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminu (0,101 g, 0,000229 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,016 g, 0,0000137 mol) a uhličitanu sodného (0,061 g, 0,000573 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá trans-N3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177293 pyrazolo[3,4-z/Jpyrimidin-3-yI}fenyl)běnzo[z/]izoxazoI-3-amin-acetát (0,102 g, 0,000175 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,81 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,19 (d, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,40 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,66 min.

MS: MH⁺ 524.

Příklad 343

Cz5'-A3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3 -yl} fenyl)benzo[úQizoxazol-3-amin-diacetát

Cis-N3-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3-yl}fenyl)benzo[í/]izoxazol-3-amin-diacetát se připraví z A-benzo[z/]izoxazol-3-yl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljaminu a cis-3-j od-1 -[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-z/|pyrimidin-4-aminu podle podobného způsobu jako shora uvedený způsob.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,86 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,24 (d, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,67 (m, 4H), 7,43 (m, 1H), 4,83 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,74 (m, 2H), 1,62 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 13,77 min.

MS: MíL 524.

Příklad 344

A3-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-3yl] fenyl} benzo [d] izoxazol-3-amin-acetát

Směs A-benzo[z/Jizoxazol-3-yl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yljfenyljaminu (0,087 g, 0,000258 mol), terc-butyl-4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4í/|pyrimidin-l-yl)-l-piperidÍnkarboxylátu (0,088 g, 0,000198 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,014 g, 0,000012 mol) a uhličitanu sodného (0,053 g, 0,000495 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou

294 teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Organick8 fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový férc-butyl-4-{4-amino-3-[4-(benzo[<7]izoxazol-3ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl}-l-piperidinkarboxylát, který se použije bez další purifikace, rozpustí se v ethylacetátu (5 ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1 ml). Výsledná emulze se intenzivně míchá po dobu 1 hodiny, vodná vrstva se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se separují. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá N3-{4-[4-amino-l-(4-piperidy 1)-1//pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-3-yl]fenyl}benzo[í/]izoxazol-3-amin-acetát (0,009 g, 0,0000185 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,82 (s, IH), 8,20 (m, 2H), 7,89 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,41 (t, IH), 4,74 (m, IH), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rf 11,20 min.

MS:MH⁺427.

Příklad 345

Trans-3-(4-(1//-3-indazolylaminojfeny 1]-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1//pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát

A. Al-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamid

Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamid (1,50 g, 0,00485 mol) a 1M roztok hydrazinu v tetrahydrofuranu (6,3 mk 0,0063 mol) se zahřívá v absolutním ethanolu (25 ml) při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Přidají se další 3 ml lM roztok hydrazinu v tetrahydrofuranu a v refluxu pokračuje dalších 6 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje, čímž se získá Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamid (1,54 g, 0,0050 mol) ve formě hnědé pevné látky.

295

TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf 0,10.

B. A-(4-bromfenyl)-A-(lA-3-indazolyl)amin

Do roztoku Al-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamidu (1,2 g, 0,00391 mol) v A-methyl-pyrrolidinonu (25 ml) se přidá /erc-butoxid draselný (0,50 g, 0,0041 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí rta pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek sé čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethyl acetát/n-heptanu (1: 5) jako mobilní fáze, čímž se získá A-(4-bromfenyl)-A(1H-3 -indazolyl)amin (0,29 g, 0,0010 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 12,06 (s, 1H), 9,03 (s, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,03 (dd, 1H).

TLC (ěthylacětát/heptan 1:3) Rf 0,26.

C. A-(/A-3-indazolyl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin

Směs A-(4-bromfenyl)-A-(lA-3-indazolyl)aminu (0,29 g, 0,00101 mol), diboronpinakolesteru (0,31 g, 0,00121 mol), [l,l'-bis(difenylfosfmo)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,025 g, 0,00003 mol)) a octanu draselného (0,294 g, 0,003 mol) v AA-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes a vrstvu Celitu. Filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/n-heptanu (1: 3) jako mobilní fáze, čímž se získá A-(lA-3indazolyl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,064 g, 0,000191 mol) ve formě bělavé pevné látky.

'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 12,09 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,94 (d, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,35 (m, 2H), 7,03 (dd, 1H), 1,28 (s, 12H).

TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf 0,21.

296

D. 7rara-3-[4-(l//-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrirnidin-4-arnin-acetát

Směs /V-(l//-3-indazolyl)-7V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl] aminu (0,064 g, 0,000191 mol), Zrauó-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,070 g, 0,000159 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,011 g, 0,0000095 mol) a uhličitanu sodného (0,042 g, 0,000398 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl 8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 min, 21 ml/min), čímž se získá trmM-3-[4-(l//-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát (0,03 5 g, 0,000060 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 12,09 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,99 (d, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,06 (t, 1H), 4,64 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2j3 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,49 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,96 min.

MS:MH⁺523.

Příklad 346

7’ra«5^,-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-6-(trifluormethyl)benzo [</]izoxazol-3 -amin-acetát

A. Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Roztok 2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoylchloridu (5,05 g, 0,0223 mol) a 4-bromanilinů (3,83 g, 0,0223 mol) v bezvodém dichlormethanu (150 ml) se ochladí na teplotu 0°C a pod atmosférou dusíku se po kapkách přidá Λζ/V-diizopropylethylamin (4,26 ml, 0,0245 mol). Výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, koncentruje a zbytek vytřepe mezi ethylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organické fáze se promyjí solankou, suší síranem hořečnatým a koncentrují. Zbytek se suspenduje ve studeném «-heptanu (50 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá NI-(4297 bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (7,1 g, 0,0196 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,74 (s, 1H), 7,90 (m, 2H), 7,74 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,56 (d,2H).

B. Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbothioamid

Směs Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (7,1 g, 0,0196 mol) a 2,4-bis-(4-methoxyfenyl)-l,3-dithia-2,4-difosfetan-2,4-disulfídu (3,97 g, 0,0098 mol) se zahřívá v toluenu při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/n-heptanu (1:8) jako mobilní fáze, čímž se získá Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-lbenzenkarbothioamid (6,0 g, 0,0159 mol) ve formě žluté pevné látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 12,33 (s, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,65 (m, 3H). TLC (ethylacetát/heptan 1:4) R_f 0,61

C. Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyÍ)-l-benzenamidoxim

Směs Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbothioamidu (2,50 g, 0,00663 mol), hydroxylamin-hydrochloridu (0,65 g, 0,00928 mol) a hydrogenuhličitanu sodného (0,78 g, 0,00928 mol) se zahřívá v absolutním ethanolu (25 ml) při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organické fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném n-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá VI-(4-bromfenyl)-2fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenamidoxim (2,35 g, 0,00625 mol) ve formě bělavé pevné látky.

TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,12.

D. V-(4-bromfenyl)-V-[6-(trifluormethyl)benzo[ó/]izoxazol-3-yl]amin

Do roztoku Vl-(4-brornfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenamidoximu (2,25 g, 0,00598 mol) v V-methylpyrrolidinonu (30 ml) se přidá férc-butoxid draselný (0,71 g, 0,00628 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po

298 dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném n-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá A-(4-bromfenyl)-A-[6-(trifluormethyl)benzo[</]izoxazol3-yl]amin (1,75 g, 0,0049 mol) ve formě bělavé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,95 (s, 1H), 8,37 (d, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,78 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,58 (d, 2H).

TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,31.

E. A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-A-[6(trifluormethy l)benzo [<Y] izoxazol-3 -yl] amin

Směs A-(4-brornfenyl)-A-[6-(trifluormethyl)benzo[í/]izoxazol-3-yl]aminu (1,75 g, 0,0049 mol), diboronpinakolesteru (1,49 g, 0,0059 mol), [l,l’-bis(difenylfosfmo)ferrocen]-dichlorpairadnatěho komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,120 g, 0,000147 mol) a octanu draselného (1,44 g, 0,0144 mol) v ΛζΑ-dimethylformamidu (10 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Ceiitu. Filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/n-heptanu (1: 6) jako mobilní fáze, čímž se získá A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-A-[6(trifluormethyl)benzo[í/]izoxazol-3-yl]amin (0,065 g, 0,000161 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,97 (s, 1H), 8,39 (d, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,71 (s,4H), 1,29 (s, 12H).

F. rrara-A3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4<Y]pyrimidin-3-yl}fenyl)-6 (triíluormethyl)benzo[č/]izoxazol-3-amin-acetát

Směs A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-jV-[6-(trifluormethyl)benzo[č/]izoxazol-3-yl]aminu (0,062 g, 0,000153 mol), Zra«5-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-lZ/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,065 g, 0,000146 mol), tetrakis-(trifenylfosfm)palladia (0,010 g, 0,0000087 mol) a uhličitanu sodného (0,039

299 g, 0,000365 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-70% acetonitrilO,lM octan amonný v průběhu 30 min, 21 ml/min), čímž se získá Zran5-A3-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-6(trifluormethyl)benzo[ri]izoxazol-3-amin-acetát (0,026 g, 0,0000398 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,05 (s, 1H), 8, 44 (d, 1H), 8, 23 (s, 1H), 8, 16 (s, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,79 (d, 1H), 7,69 (d, 2H), 4,67 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 16,18 min.

MS: MH⁺592.

Příklad 347 dimaleátová sůl A2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(2-methyl-lA-4-imidazolyl)methyl]-4-piperidyl}lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-ΙΑ-2-indolkarboxamidu

A. A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-1-methyl-1 A-2-indolkarboxamid

3-Jod-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin-hydrochlorid (6,75 g,

17,73 mmol), A2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-1 methyl-ΙΑ-2-indolkarboxamid (7,571 g, 18,63 mmol), tetrakistrifenylfosfinpalladium (1,23 g, 1,06 mmol) a uhličitan sodný (8,27 g, 78,03 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (180 ml) a vodou (90 ml). Reakční směs se zahřívá při refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná suspenze se extrahuje s velkým množstvím dichlormethanu. Spojená organické vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití dichlormethanu/methanolu/hydroxidu amonného (90:10:0,5 až 60:40:0,5) jako mobilní fáze, čímž se získá 7V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-ΪΗpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-lA-2-indolkarboxamid (4,38 g). Vodná suspenze se filtruje, promyje vodou a suší, čímž se získá A2-{4-[4-amino-l-(4-

300 piperidy 1) -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy fenyl} -1 -methyl-177-2indolkarboxamid {2/Π g). Spojený pevný podíl (7,15 g, 81%). *H NMR (DMSO-de) 1,85 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,64 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,77 (m, 1H), 7,13 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J=8,45 Hz, 1H), 7,71 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,12 (d, J=8,15 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t=1,97 min. MH⁺= 497,3.

B. A2-[4-(4-amino-l-{ l-[(2-methyl-l/7-4-imidazolyl)methyl]-4-piperidyl}-177pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l -methyl- 177-2-indolkarboxamid

A2- {4- [4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-l -methyl- 177-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), 2-methyl-177-4imidazolkarbaldehyd (83 mg, 0,755 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (159 mg, 0,755 mmol) a ledová kyselina octová (30 mg, 0,554 mmol) se smíchají v 1,2-dichlorethanu (6 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. K upravení pH na asi 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje s dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSOz), filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (95: 5: 0,5 až 80: 20: 05) jako mobilní fáze, čímž se získá V2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-methyl-177-4-imidazolyl)methyl]-4piperidyl} -177-pyrazolo [3,4-ť7|pyrimidin-3 -yl)-2-methoxy fenyl]-1 -methyl-1H-2indolkarboxamid (215 mg, 72%). *H NMR (DMSO-d₆) δ 1,91 (m, 2H), 2,23 (m, 7H), 3,00 (m, 2H), 3,41 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,78 (m, 1H), 6,72 (s, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,32 (m, 4H), 7,78 (d, J=8,43 Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,92 Hz, 1H), 8,11 (d, J=7,92 Ηζ,ΤΗ), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLCSloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t =2, 00 min, MH⁺ = 591,3.

C. dimaleátová sůl V2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-methyl-177-4-imidazolyl)methyl]-4piperidyl} -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -y l)-2-methoxy fenyl]-1 -methyl-177-2indolkarboxamidu

- - isLft'·

301

V2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-methyl-l//-4-imidazolyl)rnethyl]-4-piperidyl}-l/7pyrazolo [3,4-ri]pyrimidin-3-yl)-2-methoxy fenyl]-1-methyl-177-2-indolkarboxamid (210 mg, 0,355 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (25 ml) a pár kapkách ethanolu. Přidá se kyselina maleinová (83 mg, 0,711 mmol) v horkém ethylacetátu (3 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá dimaleátová sůl V2- [4-(4-amino-1 - {1 - [(2-methyl-1 77-4-imidazolyl)methyl] -4-piperidyl} 1 7/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxyfertyl] -1 -methyl-1 77-2-indolkarboxamidu (255 mg, 87%).

’H NMR (DMSO-dé) δ 2,12 (m, 2H), 2,43 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,38 (m, 2H), 3,96 (s, 3 H), 3,99 (s, 2H), 4,04 (s, 3H), 4,93 (m, 1H), 6,13 (s, 4H), 7,16 (m, 1H), 7,34 (m, 5H), 7,60 (d, J=8,43 Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,92 Hz, 1H), 7,72 (d, J=8,15 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQÁ single Quad MS, Finnigan HPLC Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.):

R_t =1,98 min, MH⁺ = 591,3.

Příklad 348 dimaleátová sůl V2-(4-{4-amino-l-[l-(lV-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-17/pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxyfeny 1)-1 -methyl-177-2-indolkarboxamidu

A. diacetátová sůl V2-(4-[4-amino-l-[l-(177-4-imidazolylmethyl)-4-pipéridyl]-177pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1 -methyl-177-2-indolkarboxamidu

V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-l-methyl-177-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), 177-4imidazolkarbaldehyd (73 mg, 0,755 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (159 mg, 0,755 mmol) a ledová kyselina octová (30 mg, 0,554 mmol) se smíchají v 1,2-dichlorethanu (6 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. K upravení pH na asi 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO4, filtruje a odpařuje. Zbytek se nejprve purifikuje zrychlenou sloupcovou chromatografií za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (95: 5: 0,5 až 80: 20: 05) jako mobilní fáze, pak purifikuje znovu preparativní HPLC s reverzní fází za

302 použití směsi acetonitril/voda (50mM pufr octanu amonného) jako mobilní fáze, čímž se získá diacetátová sůl A2-(4-{4-amino-l-[l-(lH-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-l//pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-l//-2-indolkarboxamidu (170 mg, 49%). 'H NMR (DMSO-d₆) δ 1,90 (m, 8H), 2,20 (m, 4H), 2,99 (m, 2H), 3,47 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,31 (m, 5H), 7,54 (s, 1H), 7,58 (d, J=8,43 Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,95 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,14 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B; acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t =1,97 min, MH⁺ ~ 577,3.

B. dimaleátová sůl A2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4-irnidazolylmethyl)-4-piperidyl]-l//pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu

Diacetátová sůl A2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-l//pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1//-2-indolkarboxamidu (170 mg, 0,244 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (25 ml) a pár kapkách ethanolu. Přidá se kyselina maleinová (103 mg, 0,884 mmol) v horkém ethylacetátu (3 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá dimaleátová sůl A2-(4- (4-amino-1-(1-(17/-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl] -1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu (153 mg, 76%). *H NMR (DMSO-dó) δ 2,19 (m, 2H), 2,49 (m, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,52 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,21 (s, 2H), 5,02 (m, 1H), 6,15 (s, 4H), 7,16 (m, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,40 (s, 1H), 7,59 (d, J=8,45 Hz, 1H), 7,71 (d, J=7,95 Hz, 1H), 7,98 (bs, 1H), 8,13 (d, J=8,16 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t=1,98 min, MH⁺= 577,3.

Příklad 349 dimaleátová sůl A2-(4-(4-amino-1-[1 -(2-fluorethyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4úQpyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu ····

303

A. M2-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluorethyl)-4-piperidyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 M-2-indolkarboxamid

7V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/f-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-l-methyl- 1/7-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), l-brom-2fluorethan (47 pl, 0,629 mmol), uhličitan draselný (87 mg, 0,629 mmol) a jodid sodný (10 mg, 0,066 mmol) se smíchají v DMF (3 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 80°C přes noc. Surová reakční směs se čistí preparativní HPLC s reverzní fází za použití směsi acetonitril/voda (50mM pufr octanu amonného) jako mobilní fáze, čímž se získá M2-(4-{4amino-1 - [ 1 -(2-fluorethyl)-4-piperidyl] -1 M-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-1 -methyl-ΙΜ-2-mdolkarboxamid (221 mg, 81%). 'H NMR (DMSO-dé) δ

1.91 (m, 2H), 2,26 (m, 4H), 2,66 (m, IH), 2,73 (m, IH), 3,05 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,61 (m, IH), 4,61 (m, IH), 4,64 (m, IH), 7,15 (m, IH), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J=8,46 Hz, IH), 7,70 (d, J=7,95 Hz, IH), 8,11 (d, J=8,14 Hz, IH), 8,25 (s, IH), 9,44 (s, IH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Éluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50mMpufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t =2,17 min, MH⁺ = 543,3.

B. dimaleátová sůl M2-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluorethyl)-4-piperidyl]-IZ/-pyrazolo[3,4Apyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1-methyl-ΙΜ-2-indolkarboxamidu

M2-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluorethyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3yl}-2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 H-2-indolkarboxamid (221 mg, 0,407 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (25 ml) a pár kapkách ethanolu. Přidá se kyselina maleinová (94 mg, 0,814 mmol) v horkém ethylacetátu (3 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc, čímž se vytvoří precipitát. Organické rozpouštědlo se odstraní a pevný podíl se trituruje ethylacetátem. Pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá dimaleátová sůl M2-(4{4-amino-l-[l-(2-fluorethyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-3-yl}-2methoxy feny 1)-1 -methyl- l//-2-indolkarboxamidu (252 mg, 80%). 'HNMR (DMSO-dé) δ 2,34 (m, 2H), 2,54 (m, 2H), 3,49-3,67 (m, 6H), 3,96 (s, 3 H), 4,04 (s, 3H), 4,81 (m, IH),

4.92 (m, IH), 5,06 (m, IH), 6,14 (s, 4H), 7,16 (m, IH), 7,34 (m, 4H), 7,60 (d, J=8,32 Hz, IH), 7,70 (d, J=7,95 Hz, IH), 8,14 (d, J=8,15 Hz, IH), 8,29 (s, IH), 9,45 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, _ 33x4,6 mm, Lluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min,): R_t =2,17 min, MH⁺= 543,3.

• ο» • · ··

304

Příklad 350 dimaleátová sůl A2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluorethyl)-4-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamidu

A. A2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluorethyl)-4-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-íZ]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

A2-{4-{4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-l-methyl-l A-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), 2-brom-l,ldifluorethan (91 mg, 0,629 mmol), uhličitan draselný (87 mg, 0,629 mmol) a jodid sodný (10 mg, 0,066 mmol) se smíchají v DMF (3 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 80°C přes noc (podle HPLC došlo jen k 50% konverzi, proto se teplota lázně snížila na 55°C a přidal se další 2-brom-l,l-difluorethan (0,1 ml), po míchání přes noc při teplotě 55°C se přidá další 2-brom-l,l-difluorethan (0,1 ml) a reakční směs se míchá při teplotě 55°C přes noc, podle HPLC většina výchozí látka zkonvertovala na produkt). Surová reakční směs se čistí preparativní HPLC s reverzní fází za použití směsi acetonitril/voda (50 mM pufr octanu amonného) jako mobilní fáze, čímž se získá A2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2difluorethyl)-4-piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl}-2-methoxyfenyl)-1 -methylΙΑ-2-indolkarboxamid (227 mg, 81%). ’H NMR (DMSO-dé) δ 1,89 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,80 (m, IH), 3,05 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,69 (m, IH), 6,17 (t t, J=55,81 Hz, J=4,35 Hz, IH), 7,15 (m, IH), 7,33 (m, 4H), 7,78 (d, J=7,94 Hz, IH), 7,70 (d, J=7,94 Hz, IH), 8,11 (d, J=8,19 Hz, IH), 8,25 (s, IH), 9,44 (s, IH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t =3,32 min, MH⁺ = 561,3.

B. dimaleátová sůl A2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluorethyl)-4-piperidyl]-lApyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamidu

A2-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(2,2-difluorethyl)-4-piperidyl]-1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-1-methyl-ΙΑ-2-indolkarboxamid (227 mg, 0,405 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (25 ml). Přidá se kyselina maleinová (94 mg, 0,810 mmol) v horkém ethylacetátu (3 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Precipitát nevznikne. Po míchání při pokojové teplotě po dobu 4 dnů vznikne na dně baňky • · · ·· ·· ···:

• · · ·· :. :· ·· ·· ·· ··

305 precipitát. Rozpouštědlo se dekantuje. Pevné látky se promyjí ethylacetátem a suší, čímž se získá dimaleátová sůl jV2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluorethyl)-4-piperidyl]-l//pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-3-y 1} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu (220 mg, 68%).

’H NMR (DMSO-dó) δ 2,05 (m, 2H), 2,40 (m, 2H), 2,84-3,32 (bm, 6H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,85 (m, ÍH), 6,22 (s, 4H), 6,34-(t, >56,07 Hz, ÍH), 7,15 (m, ÍH), 7,33 (m, 4H), 7,59 (d, >8,45 Hz, ÍH), 7,70 (d, >7,94 Hz, ÍH), 8,12 (d, >8,19 Hz, ÍH), 8,28 (s, ÍH), 9,45 (s, ÍH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t =3, 32 min, MH⁺ = 561,3.

Příklad 351 /V2-{4-[4-amino-l-(l-ethyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy feny 1}-1 -methyl-1 //-2-indolkařboxamiď /V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl }-l-methyl-l//-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), acetaldehyd (44 mg, 1,007 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (212 mg, 1,007 mmol) se smíchají v 1,2-dichlorethanu (6 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se čistí preparativní HPLC s reverzní fází za použití směsi acetonitril/voda (50mM pufr octanu amonného) jako mobilní fáze, čímž se získá 7V2-{4-[4-amino-l -(1 -ethyl-4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-1 -methyl-1//-2-indolkarboxamid (247 mg, 93%). ^lH NMR (DMSO-dó) δ 1,04-( (t, >7,15 Hz, 3H), 1,92 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,40 (q, >7,15 Hz, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,68 (m, ÍH), 7,13 (m, ÍH), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, >8,00Hz, ÍH), 7,70 (d, >7,95 Hz, ÍH), 8,11 (d, >8,15 Hz, ÍH), 8,25 (s, ÍH), 9,44 (s, ÍH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4, 5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t =2,08 min, MH⁺ = 525,3.

Sloučeniny podle příkladů 352-356 se připraví podle způsobů popsaných v příkladu

351.

• · ··

306

Příklad 352

Acetát /V2-[4-(4-amino-l-{ l-[(3-methyl-l//-4-pyrazolyl)methyl]-4-piperidyl}-l//pyrazolo[3,4-</jpyrimidin-3 -yl)-2-methoxyfenyl] -1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu Výtěžek: 187 mg, 63%.

’H NMR (DMSO-de) δ 1,91 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 2,19 (m, SH), 2,96 (m, 2H), 3,35 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 7,17 (m, 1H), 7,31 (m, 5H), 7,58 (d, J=8,46 Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,15 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t =2, 03 min, MH⁺ = 591,3.

Příklad353 jV2-(4r{4-amino-l-[l-(3-furylmethyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxy feny 1)-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid Výtěžek 233 mg, 80%.

‘H NMR (DMSO-d₆) δ 1,91 (m, 2H), 2,13-2,23 (m, 4H), 3,00 (m, 2H), 3,39 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,68 (m, 1H), 6,47 (s, 1H), 7,31 (m, 4H), 7,60 (m, 3H), 7,70 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,11 (d, J=8,05 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t =2, 37 min, MH⁺ = 577,3.

Příklad354

7V2-{4-[4-amino-l-(l-tetrahydro-2//-4-pyranyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin3 -yl] -2-methoxyfeny 1} -1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamid

Reakce se provádí při teplotě 70°C přes noc místo při pokojové teplotě přes noc podle způsobu popsaného v příkladu 351.

Výtěžek 176 mg, 71%.

*H NMR (DMSO-de) δ 1,46 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 3,07 (m, 3H), 3,27 (m, 2H), 3,91 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J=8,44 Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,10 (d,

-·' +¹¾ • · · · · ·

307

J=8,04 Hz, ÍH), 8,24 (s, ÍH), 9,44 (s, ÍH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =2,08 min, MH⁺ = 581,3.

Příklad 355

7/2-(4-{4-amino-l-[(l-acetylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-JJpyrimidin3-yl}-2-methoxy fenyl)-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Výtěžek 223 mg, 71%.

*HNMR (DMSO-d₆) δ 1,28 (m, ÍH), 1,43 (m, ÍH), 1,75 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,99 (s, 3H), 2,19 (m, 2H), 2,34 (m, 2H), 2,54 (m, 2H), 3,01 (m, 3H), 3,83 (m, ÍH), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,38 (m, ÍH), 4,66 (m, ÍH), 7,15 (m, ÍH), 7,31 (m, 4H), 7,78 (d, J=7,94 Hz, ÍH), 7,70 (d, J=7,94 Hz, ÍH), 8,11 (d, J=8,15 Hž, ÍH), 8,24 (s, ÍH), 9,44 (s, ÍH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =1,97 min, MH⁺ = 622,3.

Příklad 356 //2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(4-pyridylmethyl)-4-piperidyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} 2-methoxyfenyl)-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid Výtěžek 57 mg, 18%.

’H NMR (DMSO-de) δ 1,91 (m, 2H), 2,28 (m, 4H), 3,95 (m, 2H), 3,59 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,71 (m, ÍH), 7,17 (m, ÍH), 7,34 (m, 6H), 7,59 (d, J=8,O3Hz, ÍH), 7,71 (d, J=7,94 Hz, ÍH), 8,11 (d, J=8,14 Hz, ÍH), 8,25 (s, ÍH), 8,52 (d, J=5,78 Hz, 2H), 9,44 (s, ÍH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08,3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t =2,50 min, MH⁺ = 588,3.

308

Příklad 357 /72-(4- {4-amino-1 -[3-(4-methylpiperazino)propyl]- lA-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-1 -methyl- ΙΑ-2-indolkarboxamid

A. l-(3-brompropyl)-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Suspenze 3-jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (10,00 g, 38,31 mmol) v tetrahydrofuranu (150 ml) se nechá reagovat s 3-brom-l-propanolem (15,98 g, 114,93 mmol) a trifenylfosfinem (20,1 g, 76,62 mmol). Do reakční směsi se pomalu přidá diethylazodikarboxylát (13,34 g, 76,62 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 30 minut, po kterých se ledová lázeň odstraní a míchá po dobu 30 minut při pokojové teplotě. Reakční směs se částečně koncentruje a přidá se ethylacetát (200 ml). Precipitát se filtruje a filtrát koncentruje do sucha. Surová sloučenina se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití 100% ethylacetátu jako mobilní fáze, čímž se získá 7,8 g (53%) l-(3-brompropyl)-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-óf]pyrimidin-4-aminu. ’H NMR (DMSOde,400 MHz) δ 8,230 (s, 1H), 4,419-4,385 (t, 2H), 3,530-3,498 (t, 2H), 2,370-2,304-(q, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, velikost částic 3 μπι, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,05 min (100%), MH⁺ = 422,9.

B. 3-jod-l-[3-(4-methylpiperazino)propyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Suspenze l-(3-brompropyl)-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,500 g,

1,31 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s 1-methylpiperazinem (0,157 g, 1,572 mmol) a triethylaminem (0,133 g, 1,31 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 70°C po dobu 66,25 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se dichlormethan (15 ml) a 1N kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (100 ml). Vodná vrstva se neutralizuje na pH 13, a pak extrahuje dichlormethanem (250 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití přerušovaného gradientu; 20% methanol v dichlormethanu až 50% methanol v dichlormethanu v průběhu 55 minut na 35 g ISCO sloupce, čímž se získá 0,238 g (45%) čistého 3-jod-l-[3-(4-methylpiperazino)propyl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu. ’H NMR (DMSO-d₆,400 MHz) δ 8,191 (s, 1H), 4,308-4,273 (t, 2H), • · .. · · · ·

309

2,262-2,228 (m, 10H), 1,944-1,877 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 0,75 min (100%), MH⁺ = 402,1.

C. A2-(4-{4-amino-l-[3-(4-methylpiperazino)propyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl- l//-2-indolkarboxamid

Roztok 3-jod-l-[3-(4-methylpiperazino)propyl]-l//-pyrazoIo[3,4-</]pyrimidin-4aminu (0,188 g, 0,469 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (16 ml) se nechá reagovat s /V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-1-methyl-1//-2indolkarboxamidem (0,209 g, 0,516 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,033 g, 0,028 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,119 g, 1,13 mmol) ve vodě (8 ml). Reakční směs se míchá po dobu 4,5 hodiny při teplotě 80°C. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se ethylacetát (200 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (400 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu pomocí přerušovaného gradientu 20% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu, čímž se získá 0,078 g (30%) čistého A2-(4- {4-amino- l-[3-(4-methylpiperazino)propyl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-l-methyl-l//-2-indolkarboxamidu. *H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 9,442 (s, 1H), 8,258 (s, 1H), 8,122-8,1076 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,719-7,6991 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,6005-7,5793 (d, 1H, J = 8,48 Hz), 7,349-7,294 (m, 4H), 7,172-7,135 (t, 1H), 4,4054,371 (m, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,958 (s, 3H), 3,291 (m, 2H), 2,5 (m, 3H), 2,452,337 (m, 5H), 2,30-2,10 (m, 3H), 2,022-2,005 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,05 min (100%), MH⁺ = 554,3.

Příklad 358

A2- {4-[4-amino-1 -(3-morfolinopropyl)- l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-1 -methyl-l//-2-indolkarboxamid

310

A. 3-jod-l-(3-morfolinopropyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

Suspenze l-(3-brompropyl)-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,500 g,

1,31 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s morfolinem (0,137 g, 1,572 mmol) a triethylaminem (0,133 g, 1,31 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 70°C po dobu 66,25 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se dichlormethan (15 ml) a IN kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (100 ml). Vodná vrstva se neutralizuje na pH 14, a pak extrahuje dichlormethanem (250 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití přerušovaného gradientu 10% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu v průběhu 58 minut na 35 g ISCO sloupce, čímž se získá 0,244 g (48%) Čistého 3-jod-l-(3-morfolinopropyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidin-4-aminu. ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,194 (s, IH), 4,327-4,293 (t, 2H), 3,485-3,364 (m, 4H), 2,253-2,238 (m, 6H), 1,963-1,895 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 0,71 min (100%), MH⁺ = 389,0.

B. 7V2-{4-[4-amino-l-(3-morfolinopropyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Roztok 3-jod-l-(3-morfolinopropyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (0,244 g, 0,629 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (16 ml) se nechá reagovat s V2-[2methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-1//-2indolkarboxamidem (0,281 g, 0,692 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,044 g, 0,038 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,160 g, 1,51 mmol) ve vodě (8 ml). Reakční směs se míchá po dobu 4,5 hodiny při teplotě 80°C. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se ethylacetát (200 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (400 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu pomocí přerušovaného gradientu 10% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fází, čímž se získá 0,191 g (56%) čistého yV2-{4-[4-amino-l-(3-morfolinopropyl)-l//-pyrazolo[3,4</Jpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-l//-2-indolkarboxamidu. 'H NMR (DMSO··

311 d₆, 400 MHz) δ 9,440 (s, 1H), 8,260 (s, 1H), 8,1229-8,1026 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,71847,6986 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,5983-7,578 (d, 1H, J = 8,08 Hz), 7,345-7,290 (m, 4H), 7,172-7,133 (m, 1H), 4,421-4386 (m, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,958 (s, 3H), 3,521-3,500 (m, 4H), 2, 349-2, 314 (m, 6H), 2,035-2,001 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt = 2,05 min (100%), MH⁺541,3.

Příklad 359

A2-(4-{4-amino-l -[3-(lA-l-imidazolyl)propyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxy feny 1)-1-methyl-1 A-2-indolkarboxamid

A. 1 - [3 -(1 Η-1 -imidazolyl)propyl] -3 -j od-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin Suspenze 1 -(3-brompropyl)-3-jod-1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,500 g,

1,31 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s imidazolem (0,107 g, 1,572 mmol) a triethylaminem (0,133 g, 1,31 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 70°C po dobu 25,5 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se dichlormethan (15 ml) a 1N kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (100 ml). Vodná vrstva se neutralizuje na pH 14, a pak extrahuje dichlormethanem (250 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu pomocí 10% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fází, čímž se získá 0,086 g (18%) čistého l-[3-(lA-l-imidazolyl)propyl]-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-íf|pyrimidin-4aminu. ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,211 (s, 1H), 7,896 (s, 1H), 7,264 (s, 1H), 6,96 (s, 1H), 4,32-4,227 (m, 2H), 4,011-3,977 (m, 2H), 2,329-2,215 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t = 0,46 min (100%), MH⁺= 370,0.

B. 7V2-(4- {4-amino-1 -[3 -(1 A-1 -imidazolyl)propyl] -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 yl}-2-methoxy fenyl)-1-methyl-1 A-2-indolkarboxamid «'· ·· ·

312

Suspenze 1 -[3-(177-l -imidazolyl)propyl]-3-jod-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4aminu (0,086 g, 0,233 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) se nechá reagovat s A2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-177-2indolkarboxamidem (0,104 g, 0,256 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,016 g, 0,014 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,059 g, 0,56 mmol) ve vodě (2 ml). Reakční směs se míchá po dobu 24 hodin při teplotě 80°C. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (25 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (100 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití přerušovaného gradientu 5% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu na 10 g ISCO sloupce, čímž se získá 0,06 g (49%) čistého A2-(4-{4-amino-l-[3-(177-l-imidazolyl)propyl]-177-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl)-l-methyl-177-2-indolkarboxamidu.

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,443 (s, 1H), 8,278 (s, 1H), 8,1324-8,1121 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,7447,699 (m, 2H), 7,6-7,579 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,365-7,283 (m, 5H), 7,1727,135 (m, 1H), 6,939 (s, 1H), 4,36-4,326 (m, 2H), 4,079-4,019 (m, 5H), 3,964 (s, 3H), 2,3242,309 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,25 min (100%), MH⁺ 522,3.

Příklad 360

7V2-[4-(4-amino-1 -tetrahydro-177-3 -pyrrolyl-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -y 1)-2 methoxyfenyl]-1 -methyl-177-2-indolkarboxamid

A. ter c-buty 1-3-(4-amino-3 -jod-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-l-yl)-lpyrrolidinkarboxylát

Suspenze 3-jod-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (5,0 g, 19,15 mmol) v tetrahydrofuranu (100 ml) se nechá reagovat s Zcrc-butyl-3-hydroxy-lpyrrolidinkarboxylátem (5,38 g, 28,73 mmol) a trifenylfosfinem (7,53 g, 28,73 mmol). Reakční směs se ochladí na teplotu 0°C v ledové lázni. Pomalu se do reakční směsi přidá diethylazodikarboxyát (5,0 g, 28,73 mmol). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku po 6 dnech. Surový olej se bez další analýzy použije přímo v následující reakci.

•· ···· • · « ·

313

B. 3-jod-l-tetrahydro-l/í-3-pyiTolyl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminhydrochlorid

Suspenze surového férc-butyl-3-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-íi]pyrimidin-lyl)-l-pyrrolidinkarboxylátu v acetonu (100 ml) se nechá reagovat s 6N kyselinou chlorovodíkovou (50 ml). Reakční směs se míchá při teplotě 40°C po dobu 15 hodin. Precipitát se filtruje a podle LCMS obsahuje nečistoty. Reakční směs se nechá stát při pokojové teplotě, čímž v průběhu dne vznikne precipitát, který se filtruje a promyje diethyletherem. Filtrací se získá 2,186 g (31%) čistého 3-jod-l-tetrahydro-lH-3-pyrrolyll/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin-hydrochloridu. *H NMR (DMSO-d_ó, 400 MHz) δ 9,8815 (s, 1H), 8,9923 (br, s, 1H), 8,4803 (s, 1H), 7,82 (br, s, 1H), 5,5908-5,5295 (m, 1H), 3,7131-3,6706 (m, 1H), 3,5590-3,5003 (m, 1H), 3,4466-3,4174 (m, 2H), 2,45922,4255 (m, 1H), 2,4064-2,3146 (m, 1H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 1,09 min (100%), MH⁺331,0.

C. JV2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl)-2methoxyfenyl]-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Suspenze 3-jod-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminhydrochloridu (2,186 g, 5,96 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (50 ml) se nechá reagovat s V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-1 -methylI//-2-indolkarboxamidem (2,66 g, 6,56 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,413 g, 0,358 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (2,65 g, 25,03 mmol) ve vodě (25 ml). Reakční směs se míchá po dobu 24 hodin při teplotě 80°C. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se dichlormethan (100 ml) a 1N hydroxid sodný (50 ml). Produkt vyprecipituje z vodné vrstvy. Vodná vrstva se odpařuje za sníženého tlaku. Výsledné pevné látky se promyjí velkým množstvím dichlormethanu a ethylacetátu. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá 2,218 g (77%) čistého V2-[4-(4-ammo-l-tetrahydro-l//-3-pyrroIyl-l//-pyrazoIo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2methoxyfenyl]-1 -methyl-l//-2-indolkarboxamidu. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,443 (s, 1H), 8,256 (s, 1H), 8,1168-8,0965 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,7181-7,6983 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,5987,5778 (d, 1H, J = 8,08 Hz), 7,349-7,291 (m, 4H), 7,171-7,132 (m, 1H), 5,3325,313 (m, 1H), 4,041 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,224-3,058 (m, 3H), 2,926-2,910 (m, 1H),

314

2,213-2,158 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,09 min (100%), MH⁺483,3.

Příklad 361

7V2-[4-(4-amino-1 - {1 - [(1 -methyl-17/-2-imidazolyl)methyl] tetrahydro-1H-3 -pyrrolyl} -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l -methyl- 1/7-2-indolkarboxamid

Suspenze N2-[4-(4-amino-1 -tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dichlorethanu (5 ml) se nechá reagovat s l-methyl-2-imidazolkarboxaldehydem (0,115 g, 1,04 mmol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,220 g, 1,04 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá hydroxid sodný (1N, 15 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan. Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití 10% methanolu v dichlormethanu (15 min), 15% methanolu v dichlormethanu (15 min), 20% methanolu v dichlormethanu (20 min) a 50% methanolu v dichlormethanu (5 min) jako mobilní fáze, čímž se získá 0,060 g (20%) čistého N2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(1-methyl-1 //-2-imidazolyl)methyl]tetrahydro-1H-3pyrrolyl}- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxy fenyl]-1 -methyl-1//-2indolkarboxamidu. ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,446 (s, 1H), 8,249 (s, 1H), 8,13128,1108 (d, 1H, J- 8,16 Hz), 7,72077,7008 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,6023-7,5812 (d, 1H, J = 8,44 Hz), 7,356-7,293 (m, 4H), 7,174-7,120 (m, 2H), 6,822 (s, 1H), 5,425-5,391 (m, 1H), 4,044 (s, 3H), 3,962 (s, 3H), 3,693 (m, 2H), 3,651 (s, 3H), 2,86-2,797 (m, 3H), 2, 368-2, 323 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,34 min (100%), MH⁺577,3.

·· «·«·

315

Příklad 362

N2-{4-[4-amino-1 -(1 -izopropyltetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl)-1 V-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 yl]-2-methoxyfenyl}-1-methyl-1 V-2-indolkarboxamid

Suspenze V2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l V-3-pyrroiyl-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-lV-2-indolkarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dichlorethanu (5 ml) se nechá reagovat s acetonem (1,96 g, 33,15 mmol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,220 g, 1,04 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan. Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití 10% methanolu v dichlormethanu (15 min), 15% methanolu v dichlormethanu (15 min), 20% methanolu v dichlormethanu (20 min) a 50% methanolu v dichlormethanu (5 min) jako mobilní fází, čímž se získá 0,123 g (44%) čistého V2-{4-[4-amino-l-(l-izopropyltetrahydro-lV-3-pyrrolyl)-l V-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-lV-2-indolkarboxamidu. 'H NMR (DMSOdó, 400 MHz) δ 9,449 (s, 1H), 8,265 (s, 1H), 8,127-8,1068 (d, 1H, J = 8,08 Hz), 7,71967,6999 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,60137,5803 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,351-7,299 (m, 4H), 7,1737,135 (m, 1H), 5,394 (m, 1H), 4,042 (s, 3H), 3,961 (s, 3H), 2,793 (m, 3H), 2,337 (m, 3H), 1,068 (br, s, 6H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,38 min (100%), MH⁺ = 525,3.

Příklad 363

V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-l V-3-pyrrolyl]-l V-pyrazolo[3,4tí]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyI)-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

Suspenze V2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l V-3-pyrrolyl-1 V-pyrazolo [3,4-ú/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-lV-2-indoikarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dimethylformamidu (5 ml) se nechá reagovat s 2-bromethyl(methyl)etherem (0,079 g, 0,569 mmol) a uhličitanem draselným (0,143 g, 1,04 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 65°C po dobu 18 hodin pod atmosférou dusíku. Přidá se voda (25 ml) do reakční

316 směsi. Vzniklý precipitát se filtruje a suší lyofilizátoru. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití 10% methanolu v dichlormethanu (15 min), 15% methanolu v dichlormethanu (15 min), 20% methanolu v dichlormethanu (20 min) a 50% methanolu v dichlormethanu (5 min) jako mobilní fáze, čímž se získá 0,082 g (29%) čistého X2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-177-3-pynOlyl]-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-177-2-indolkarboxamidu. ^!H NMR (DMSOde, 400 MHz) δ 9,447 (s, 1H), 8,265 (s, 1H), 8,1278-8,1075 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,71927,6993 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,5996-7,5799 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,349-7,295 (m, 4H), 7,172-7,133 (m, 1H), 5,42 (m, 1H), 4,042 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,479 (m, 2H), 3,2663,258 (m, 3H), 2,95-2,60 (m, 4H), 2,332 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,34 min (100%), MH⁺541,3.

Příklad 364

7V2-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(177-4-imidazolylmethyl)tetrahydro-177-3 -pyrrolyl] -1 77-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-y)} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-177-2-indolkarboxamid

Suspenze X2-[4-(4-amino-1 -tetrahydro-177-3 -pyrrolyl-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-177-2-indolkarboxamidu (0,200 g, 0,415 mmol) v dichlorethanu (5 ml) se nechá reagovat s 4-formylimidazolem (0,08 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,176 g, 0,83 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan. Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití 10% methanolu v dichlormethanu (20 min), 15% methanolu v dichlormethanu (10 min), 20% methanolu v dichlormethanu (10 min) a 50% methanolu v dichlormethanu (8 min) jako mobilní fáze, čímž se získá 0,074 g (25%) čistého X2-(4- {4-amino-1 -[l-( 177-4-imidazolylmethyl)tetrahydro-177-3-pyrrolyl] -177pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1 -methyl-177-2-indolkarboxamid. 'H

NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 9,446 (s, 1H), 8,252 (s, IH), 8,126-8,1082 (d, 1H, J = 8,16 • ♦ · · · ·

317

Hz), 7,7198-7,7 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,6-7,569 (m, 2H), 7,35-7,298 (m, 4H), 7,171-7,134 (m, ÍH), 6,946 (s, IH), 5,422-5,385 (m, 1H), 4,043 (s, 3H), 3,961 (s, 3H), 3,691 (s, 2H), 3,175-3,162 (m, 2H), 2,9-2,883 (m, 3H), 2,385-2,332 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA singl-quad MS, Genesis Cl 8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,13 min (100%), MH⁺563,3.

Příklad 365

A2-[4-(4-amino-l-{1 -[(3 -methyl-1 //-4-pyrazolyl)methyl]tetrahydro-1 //-3-pyrrolyl} - IH. pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-l//-2-indolkarboxamid

Suspenze A2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l H-3 -pyrrolyl-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-l/7-2-indolkarboxamidu (0,200 g, 0,415 mmol) v dichlorethanu (5 ml) se nechá reagovat s 3-methyl-l//-pyrazol-4-karboxaldehydem (0,091 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydridem sodným (0, 176 g, 0,83 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan. Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (100 ml) a ethylacetátem (100 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití 10% methanolu v dichlormethanu (15 min), 15% methanolu v dichlormethanu (10 min), 20% methanolu v dichlormethanu (10 min) a 50% methanolu v dichlormethanu (8 min) jako mobilní fáze, čímž se získá 0,106 g (44%) čistého A2-[4-(4-amino-l-{l-[(3-methyl-l//-4pyrazolyl)methyl]tetrahydro-1//-3-pyrrolyl}-1//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3-yl)-2methoxyfenyl]-l-methyl-l//-2-indolkarboxamidu. 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,446 (s, 1H), 8,247 (s, 1H), 8,1275-8,1071 (d, 1H, J= 8,16 Hz), 7,72-7,7003 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,6004-7,5793 (d, 1H, J = 8,44 Hz), 7,3987,286 (m, 5H), 7,172-7,134 (m, 1H), 5,379 (m, 1H), 4,0443 (s, 3H), 3,962 (s, 3H), 3,492 (m, 2H), 3,1 (m, 1H), 2,75 (m, 3H), 2,3522,335 (m, 2H), 1,909 (s, 3H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,17 min (100%), MH⁺ 577,3.

318

Příklad 366 //2-(4- {4-amino-1 - [(37?)-1 -methyltetrahydro-1H-3 -pyrrolyl]-1//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin //2-(4-{4-amino-l-[(37?)-l-methyltetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl} fenyl )-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin se připraví z (5)-(-)-3pyrrolidinolu způsobem analogickým k přípravě rac-N2- {4-[4-amino-1-(1methyltetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl)-1//-pyrazolo[3,4-úQpyrimidin-3 -y l]fenyl} -5,7-dimethyll,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě bílé pevné látky (0,195 g, 53%). ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 2,31-2,35 (m, 2 H), 2,32 (s, 3 H), 2,35 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,70-2,77 (m, 3 H), 3,05 (t, 1 H), 5,40 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); RP-HPLC R_t 11,090 min, 99% Čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 455 (MH⁺).

Příklad 367 //2-(4- {4-amino-1 -[(35)-1 -methyltetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl]-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

7V2-{4-amino-l-[(35)-l-methyltetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin se připraví z (2ř)-(-)-3pyrrolidinolu způsobem analogickým k přípravě rac-7V2-{4-[4-amino-l-(lmethyltetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] fenyl} -5,7-dimethyll,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě bílé pevné látky (0,126 g, 20%). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 2,31-2,35 (m, 2 H), 2,31 (s, 3 H), 2,35 (s, 3H), 2,40 (s, 3 H), 2,67-2,76 (m, 3 H), 3,05 (t, 1 H), 5,40 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 I I), 8,24 (s, 1 H), 10,84 (s, 1 H); RP-HPLC R_t 11,129 min, 100% čistota (5% až 85% acetóriitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 455 (MH⁺).

Příklad 368 rac-/V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}řenyl)-7-izopropyl-5-methy]-l,3-benzoxazol-2-amin ····

319

Az7c-A'^r2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z rac-3 -jod-1 - [l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 H-3-pyrrolyl]-1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4aminu (0,200 g, 0,515 mmol) a A2-[4-(4,4,5,5-tetramethyi-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,244 g, 0,644 mmol) podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu cw-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazinojcyklohexy 1]-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3-yl} -2-fluorfenyl)-1,3benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se získá ve formě bělavé pevné látky (0,067 g, 25%). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,361 (d, 6 H), 2,30 (m, 2 H), 2,66 (m, 2 H), 2,76-2,83 (m, 3 H), 3,17 (t, 1H), 3,24 (s, 3 H), 3,38 (m, 1 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 7,04 (d, 1 H), 7,18 (t, 1 H), 7,32 (d, 2 H), 7,67 (d, 2 H), 7,95 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,88 (s, 1 H); RPHPLC R_t 12,337 min, 94% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 513 (MH⁺).

Příklad 369

C/s-ethyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l ,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1-yl)-1-cyklohexankarboxylát

3-Jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,52 g, 2,0 mmol), ethyl-4hydroxycyklohexankarboxylát (0,806 ml, 5,0 mmol, trifenylfosfm (1,05 g, 4,0 mmol), diethylazodikarboxylát (0,628 ml, 4,0 mmol) se suspendují v tetrahydrofuranu (15 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě pod mírným tlakem dusíku po dobu 48 hodin. Směs se zředí vodou (50 ml) a extrahuje ethylacetátem (3 x 50 ml). Organické frakce se spojí, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a koncentrují. Zbytek se částečně purifikuje zrychlenou sloupcovou chromatografií (100% ethylacetát), čímž se získá ethyl-4-(4-amino-5-jod-7//pyrrolo[3,4-í/]pyrimidin-7-yI)-l-cyklohexankarboxylát ve formě směsi cis- a transdiastereomerů společně s trifenylfosfm-oxidem. Opětovnou purifikací směsi zrychlenou sloupcovou chromatografií na silikagelu deaktivovaném triethylaminem (0,5% methanol/dichlormethan jako mobilní fáze) se získá požadovaný cz5^,-ethyl-4-(4-amino-5jod-7//-pynOlo[3,4-í/]pyrimidin-7-yl)-í cyklohexankarboxylát ve formě žluté pevné látky (0,260 g, 0,625 mmol): RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu

320 amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersil HS Cl 8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,55 min; MS (MH)⁺ 416.

Cz'5'-ethyl-4-(4-amino-5-jod-7//-pyrrolo[3,4-í/]pyrimidin-7-yl)-l-cyklohexankarboxylát (0,10 g, 0,24 mmol) se smíchá s A-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminem (0,088 g, 0,24 mmol), uhličitanem sodným (0,064 g, 0,60 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladiem (0,014 g, 0,012 mmol), dimethyletherem ethylenglykolu (2 ml) a vodou (1 ml) a směs se zahřívá při teplotě 85°C v uzavíratelné Schlenkově baňce po dobu 14 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, zředí vodou (10 ml) a extrahuje 10% methanolu v dichlormethanu (3 x 20 ml). Organické frakce se spojí, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a koncentrují. Purifikací produktu zrychlenou sloupcovou chromatografií na silikagelu deaktivovaném triethylaminem (2,5% methanol/dichlormethan jako mobilní fáze) se získá czX-ethyl-4-(4amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-l-yl)-lcyklohexankarboxylát ve formě bílé pevné látky (0,040 g, 0,076 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 pm Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 12,63 min; ’H NMR (DMSO-d₆,400 MHz) δ 10, 85 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,92 (d, 2H), 7,64 (d, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,66 (m, 1H), 4,10 (qt, 2H), 3,27 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,08 (m, 6H), 1,61 (m, 2H), 1,20 (t, 3H).

Příklad 370

CA-methyl-4-(4-amino~3-{4-[(5,7-dimethyl-l ,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-17/pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1-y 1)-1-cyklohexankarboxylát

Cz.s-ethyl-4-(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1Hpyrazolo[3,4-z/jpyrimidin-l-yl)-l-cyklohexankarboxylát (0,030 g, 0,057 mmol), methoxid sodný (0,0033 g, 0,063 mmol) a methanol (2 ml) se smíchají a zahřívá v uzavíratelné Schlenkově baňce po dobu 48 hodin při teplotě 75°C. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8p Hypersil HS C18, 250 x 21 mm sloupec, R_t 15,6-16,5 min) se získá m-methyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-1.3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-17/pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexankarboxylát ve formě bílého prášku (0,010 g, 0,020 mmol): RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v

321 .

průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 μ Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t11,82 min; 'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10, 85 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,92 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,12 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,67 (m, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,27 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s,3H), 2,07 (m, 6H), 1,61 (m,2H).

Příklad 371

Czs-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lA-pyrazolo[3,4cOpyrimidin-1-yl)-1-cyklohexankarboxylová kyselina

Cz£-ethyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lApyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l -yl)-l-cyklohexankarboxylát (0,10 g, 0,19 mmol), vodný roztok hydroxidu sodného (1 M, 2 ml, 2 mmol) a methanol (2 ml) se smíchají a zahřívají pod chladičem při teplotě 70°C po dobu 14 hodin. Zbytek se okyselí vodnou kyselinou chlorovodíkovou (3 M, 2 ml, 6 mmol) a extrahuje směsí 10% methanol/dichlormethan (3 x 20 ml). Spojené organické frakce se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a koncentrují. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min pomocí 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8,8-10,9 min) se získá cz.s-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-1 cyklohexankarboxylová kyselina ve formě krémově-zbarveného prášku (0,026 g, 0,052 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,03 min; MS (MH)⁺ 498.

Příklad 372

CA-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinylamino)fenyl]-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

4-Bromanilin (0,300 g, 1,74 mmol) a 2-chlorpyrimidin (0,200 g, 1,74 mmol) se zahřívá při teplotě 150°C v 25 ml baňce po dobu 2 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a purifikací zbytku preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min pomocí 8μ Hypersil HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 13,8-15,9 min) se získá A-(4-bromfenyl)-A-(2-pyrimidinyl)amin ve formě žluté pevné látky (0,135 g, 0,54 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 • '·*· ·· ·»«· » » ·

322

M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 μ Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 11,08 min;’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,78 (s, ÍH), 8,50 (d, 2H), 7,76 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 6,87 (t, ÍH).

7V-(4-Bromfenyl)-N-(2-pyrimidinyl)amin se konvertuje na požadovanou sloučeninu podle způsobu, který je podobný postupu popsanému pro přípravu cN-N2-(4-{4-amino-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-ethyl-l,3thiazol-2-aminu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 4,0-5,0 min) se získá c/s-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin ve formě bílého prášku (0,095 g, 0,196 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ hypersil HS C18, 250 x 4, 6 mm sloupec) R_t 5,38 min; MS (MH)⁺ 485.

(

Příklad 373

JV2-(4-{4-amino-l-[2-(4-methylpiperazino)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-3-yl}2-methoxyfenyl)-1/7-2-indolkarboxamid-acetát

A. 1 -(2-chlor-4-pyridyl)-3-jod-1//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

Roztok 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (4,12 g, 0,016 mol) v

N,jV-dimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat s 60% hydridem sodným v oleji (0,75 g, 0,019 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá po dobu 15 minut a přidá se 2-chlor-4nitropyridin (3,00 g, 0,019 mol). Směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 18 hodin. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se filtruje, promyje NY-dimethylformamidem (20 ml), a pak míchá s ethylacetátem (50 ml) po dobu 4 hodin. Pevný podíl se filtruje a suší za vakua, čímž se získá l-(2-chlor-4-pyridyl)-3-jod-l//pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin (2,39 g, 0,009 mol) ve formě hnědé pevné látky: ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,52 (d, ÍH), 8,43 (s, ÍH), 8,40 (d, ÍH), 8,25 (dd, ÍH); RPHPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 10,29 min; MS: MH⁺ 373.

B. JV2-{4-[4-amino-l-(2-chíor-4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl} -1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamid

• · ··<

···:

» · · ·· ···· • « • · • · • · · ·· ·*

323

Suspenze 1 -(2-chlor-4-pyridyl)-3-jod-l //-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,95 g, 0,00256 mol) v dimethoxyethanu (30 ml) a vodě (60 ml) se nechá reagovat s N2-[2methoxy-4-(4,4,5,5-tetrametby]-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-l-methyl-l//-2indolkarboxamidem (1,14 g, 0,00281 mol), uhličitanem sodným (0,68 g, 0,00640 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,30 g, 0,00026 mol) při teplotě 80°C po dobu 3 dnů. Pevný podíl se filtruje a promyje vodou, trituruje ethylacetátem (75 ml) po dobu 6 hodin a filtruje, promyje ethylacetátem (20 ml). Pevný podíl se pak trituruje methanolem (75 ml) po dobu 6 hodin a filtruje, promyje methanolem (20 ml). Pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá surový A/2-{4-[4-amino-l-(2-chlor-4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin3-yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-l//-2-indolkarboxamid (0,672 g, 0, 00128 mol) ve formě hnědé pevné látky.

Ή NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,48 (s, 1H) 8,55-8,58 (m, 2H), 8,50 (s, 1H), 8,44 (dd, 1H), 8,21 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,49 (d, 1H), 7,43 (dd, 1H), 7,31-7,38 (m, 2H), 7,16 (t, lil), 4,05 (s, 3H), 4,00 (s, lil);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 em; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, izokraticky při 95% po dobu 3 min, 1 ml/min) R_t 12,70 min; MS: MH⁺525.

C. /V2-(4-{4-amino-l-[2-(4-methylpiperazino)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l//-2-indolkarboxamid-acetát

Suspenze A2-{4-[4-amino-l-(2-chlor-4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl]-2-methoxyfenyl}-l -methyl-1//-2-indolkarboxamidu (0,120 g, 0,00023 mol) v 1-methylpiperazinu (5 ml) zahřívá při teplotě 120°C po dobu 5 dnů. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se míchá v diethyletheru (25 ml) po dobu 4 hodin. Směs se filtruje, promyje diethyletherem (105 ml) á suší za vakua. Surová látka se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky po dobu pěti minut, pak 40%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 30 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá A2-(4-{4-amino-1-[2-(4methylpiperazino)-4-pyridyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-1H-2indolkarboxamid-acetát (0,030 g, 0,00005 mol) ve formě bílé pevné látky.

H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 947 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,12 (d, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,30-7,37 (m, 3H), 7,26 (d, 1H), 7,15 (t, 1H), 4,06 (s,

3H), 3,50-3,58 (m, 4H), 2,38-2,46 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,91 (s, 3H);

·· ···· ♦ ♦ ·

324

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 15,33 min; MS: MH⁺ 575.

Příklad 374

V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-4-pyridyl)-lV-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl} -1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

Suspenze V2-{4-[4-amino-l-(2-chlor-4-pyridyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl]-2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamidu (0,120 g, 0,00023 mol) a morfolinu (10 ml) se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 6 dnů. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se míchá ve vodě (25 ml) po dobu 4 hodin. Směs se filtruje a surový pevný podíl se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 35%-80% acetonitril-0,050 M octan amonný v průběhu 20 min, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní zá vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-4pyridyl)-1 V-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidm-3-yl]-2-methoxy fenyl}-1-methyl-1V-2indolkarboxamid (0,048 g, 0,00008 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 5 948 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,27 (d, 1H), 8,18 (d, 1H), 7,82 (d, 1H), 7,74 (dd, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,46 (d, 1H), 7,41 (dd, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,34-(t, 1H), 7,16 (t, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 3,72-3,78 (m, 4H), 3,493,56 (m, 4H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min, 1 ml/min) R_t 17,89 min; MS: MH⁺ 576.

Příklad 375 (S)-V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

A. (R)-fórc-buíyl-3-hydroxy-l-piperidinkarboxylát

Směs (/?)-3-hydroxy-piperidin-hydrochloridu (10 g, 0,073 mol), di-fóra-butyldikarbonátu (20 g, 0,091 mol) a uhličitanu sodného (19 g, 0,182 mol) v dioxanu (80 ml) a vodě (80 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vodná vrstva se extrahuje diethyletherem (2 x 200 ml). Organická vrstva se promyje solankou, suší nad síranem

e ·· ··

325 hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá čirý olej (R)-řercbutyl-3-hydroxy-1-piperidinkarboxy lát (17,6 g, 0,087 mol). Surový produkt se použije v následující reakci.

’H NMR (Chlorform-d, 400 MHz) δ 3,76 (m, IH), 3,67 (br, IH), 3,55 (br, IH), 2,92 (m, 2H), 2,75 (s, IH), 1,85 (br, IH), 1,72 (br, IH), 1,46 (br, 1 IH)

GC-MS: MH⁺ 202.

B. (S)-7erc-butyl-3-(4-amino-3 -jod-1 A-pyrazolo [3,4-ďjpyrimidin-1 -yl)-lpiperi dinkarboxylát

Do směsi 3-jod-lA-pyrazolo[3,4-ťY]pynmidin-4-aminu (2 g, 0,0077 mol), (R)-tercbutyl-3-hydroxy-1-piperidinkarboxylátu (2,3 g, 0,012 mol) a trifenylfosfinu (3 g, 0,012 mol) v tetrahydrofuranu (70 ml) se přidá při teplotě 0°C diethylazodikarboxylát (2 g, 0,012 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2 dnů. Do směsi se přidá další (J?)-Zerc-butyl-3-hydroxy-1-piperidinkarboxylát (0,62 g, 0,003 mol) a trifenylfosfin (0,81 g, 0,012 mol) a diethylazodikarboxylát (0,6 g, 0,003 mol) kvůli dokončení reakce. Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku dalších 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá surový (S)-fórc-butyl-3(4-amino-3-jod-l A-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát, který se v následující reakci použije surový. RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 10,0 min. MS:MH⁺445.

C. (S)-3 -j od-l-(3 -piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin-acetát

Do směsi (S)-/erc-butyl-3-(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-1 -yl)-1 piperidinkarboxylátu (3,4 g, 0,0077 mol) v acetonu (80 ml) se přidá vodný 6N roztok chlorovodíku (20 ml) při pokojové teplotě. Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 4 hodin, pak při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Aceton se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se promyje toluenem (2 x 20 ml) a dichlormethanem (2 x 20 ml). Vodná vrstva se alkalizuje vodným roztokem 5N hydroxidu sodného (25 ml) při teplotě 0°C. Vodná vrstva se koncentruje do sucha a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 2%-30% v průběhu 15 min s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá (Vj-S-jod-l-Q-piperidyij-lA-pyrazolopA-ďjpyrimidinYamin-acetát (0,75

326 g, 0,0019 mol). RP-HPLC (Hypersil Cl 8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 8,2 min.

MS: MIL 345.

D. (5)-3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-l/f-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Do směsi (S)-3-jod-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-4-amin-acetátu (0,75 g, 0,0019 mol) a uhličitanu draselného (0,77 g, 0,00568 mol) v A,A-dimethylformamidu (30 ml) se přidá 2-bromethyl(methyl)ether (0,27 g, 0,0019 mol) a jodid draselný (0,0016 g, 0,000095 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá při teplotě 65°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a přidá se 2-bromethyl(methyl)ether (0,27 g, 0,0019 mol) a jodid draselný (0,0016 g, 0,000095 mol). Směs se míchá při teplotě 65°C pod atmosférou dusíku po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (25 ml) a dichlormethan (50 ml). Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (4 x 50 ml). Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 2%-30% v průběhu 15 min s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min) až (iS)-3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-lApyrazolo[3,4-tíQpyrimidin-4-amin-acetát (0,64 g, 0,0014 mol). RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 8,9 min. MS: MH⁺403

E. (S)-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-yl}fenyl-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Směs (5)-3 -j od-1 - [ 1 -(2-methoxyethyl)-3 -piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin4-amin-acetátu (0,64 g, 0,0014 mol), A-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,64 g, 0,00175 mol, 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,081 g, 0,00007 mol) a uhličitanu sodného (0,37 g, 0,0035 mol) v AA-dimethylformamidu (15 ml) a vodě (7 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu (25 ml) a dichlormethan (50 ml). Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí solankou, suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku za vzniku nahnědlého oleje, který se čistí zrychlenou • ·

327 chromatografií na sloupci silikagelu směsí 2%-10% methanol/dichlormethan jako mobilní fází, čímž se získá (5)-V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-l.ř/pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,60 g, 0,0012 mol).

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,85 (s, IH), 8,25 (s, IH), 7,93 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,11 (s, IH), 6,80 (s, IH), 4,77 (br, IH), 3,36 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,04-(br, IH), 2,90 (br, IH), 2,55 (br, 2H), 2,54-(br, IH), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,02 (br, 3H), 1,80 (br, IH),

1.70 (br, IH).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 11,9 min.

MS:MH⁺513.

Příklad 376

Triacetát cis-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4t/Jpyrimidin-3-yi} anilino)-1,3-benzoxazol-5-karboxamidu

Do směsi triacetátu cis-2-(4- {4-amino- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-\Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}anilino)-l,3-benzoxazo]-5-karbonitriIu (0,18 g, 0,00025 mol) v dioxanu (2 ml) se přidá 2N vodný roztok hydroxidu sodného (1,25 ml, 0,0025 mol) a voda (0,75 ml). Před přidáním 30% roztoku peroxidu vodíku (0,2 ml) se směs míchá při pokojové teplotě po dobu 2 minut pod atmosférou dusíku. Směs se refluxuje po dobu 5 hodin, pak míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Do směsi se přidá další množství 30% roztoku peroxidu vodíku (0,2 ml) a směs se refluxuje dalších 6 hodin, pak míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a k udržení pH = 7 se přidá roztok 5% kyseliny citrónové. Vodná vrstva se odstraní za sníženého tlaku a surová látka se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 25 min s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá triacetát cz.s’-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4ó/]pyrimidin-3-yl}anilino)-l,3-benzoxazol-5-karboxamidu (0,11 g, 0,00015 mol).

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,30 (s, IH), 8,15 (s, IH), 8,00 (m, 3H), 7,75 (m, IH),

7.70 (m, 2H), 7,60 (d, IH), 7,35 (br, 1H), 4,80 (br, IH), 2,50 (br, 2H), 2,40 (br, 4H), 2,25 (br, 4H), 2,15 (s, 3H), 2,10 (br, 3H), 1,90 (s, 9H), 1,70 (br, 2H), 1,60 (br, 2H).

328

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 8,2 min.

MS: MIL 567.

Příklad 377

Al - {4- [4-Amino-1 -(4-oxocyklohexy 1)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Roztok 2-fluor-4-trifluormethyl-l-benzenkarbonylchloridu (0,87 g, 3,83 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidá do směsi pyridinu (15 ml) a 4-[4-amino-3-(4-amino-3methoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yI]-I-cyklohexanonu (1,00 g, 2,56 mmol) v dichlormethanu (5 ml) při teplotě 0°C v průběhu 5 minut. Směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Dichlormethanová vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (2x) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší nad síranem hořečnatým, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v systému Isco, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-lApyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,95 g, 1,76 mmol) ve formě bílé pevné látky: ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,99 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 5,27 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,70 (m, 2H), 2,47 (m, 4H), 2,17 (m, 2H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 9,23 min. MS: MH⁺ 543.

329

Příklad 378

Cis-Nl -{4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1 A-pyrazolo[3,4-aQpyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid; a

Příklad 379

Trans-Nl - {4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1 A-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Morfolin (0,08 ml, 0,93 mmol) se přidá do směsi Al-{4-[4-amino-l-(4oxocyklohexy 1)-1 A-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -2-fluor-4trifhiormethylbenzamidu (0,42 g, 0,78 mmol) a octové kyseliny (0,11 ml, 1,86 mmol) v dichlorethanu (25 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 10 minut. Přidá se triacetoxyborohydrid sodný (0,23 g, 1,09 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se voda (6 ml), poté hydrogenuhličitan sodný (0,38 g, 4,53 mmol). Směs se míchá po dobu 1 hodiny a organická vrstva se separuje. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (20 ml). Spojené organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v systému Isco, čímž se získá cis-Nl-{4[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,23 g, 0,37 mmol) a trans-Nl-{4-[4amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -2fluor-4-trifluormeíhylbenzamid (0,09 g, 0,14 mmol) ve formě bílých pevných látek.

330

Data pro cis-Nl - {4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4ú/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid:

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H),

7,89 (d, IH), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,83 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,62 (br, 4H), 1,57-2,55 (m, 10H); MS: MH⁺614.

Data pro trans-Ni - {4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid: *H NMR (DMSOdó 400 MHz) δ 9,90 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,24 (s, IH), 7,99 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,32 (s, IH), 7,29 (s, IH), 4,67 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 3,59 (br, 4H), 1,48-2,69 (m, 10H); MS: MH⁺614.

Příklad 380

CzXethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yljcyklohexyl} amino)propanoát; a

Příklad 381

7ra«5-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fiuor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxy feny 1)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1-yl] cyklohexyl }amino)propanoát

Podobným způsobem jako příprava czs-Xl-{4-[4-amino-l-(4morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4-z7}pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2-fluor-4trifluormethylbenzamidu a Z;Ozi5-Xl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-177331 pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu se získá czs-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát a transethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3-methoxyfenyl)-177pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-1-yl] cyklohexyl} amino)propanoát ve formě bílých pevných látek.

Data pro czs-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}3 -methoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-1 -yl] cyklohexyl} amino jpropanoát:

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,90 (dd, lH), 8,30 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,00 (t, 1H),

7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,37 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,76 (m, 2H), 2,32 (m, 2H), 1,88 (m, 2H), 1,67 (m, 4H), 1,16 (t, 3H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 7,92 min. MS: MH⁺ 644.

Data pro řra«s-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino} i-3-methoxyfenyl)- 177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] cyklohexyl} amino)propanoát: 'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,68 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,82 (m, 2H), 2,46 (m, 5H), 1,91-2,07 (m, 6H), 1,18 (t, 3H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm, 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 7,69 min. MS: MH⁺ 644.

Příklad 382

Al-[4-(4-Amino-l-trityl-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid

332

Směs 3-jod-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,10 g, 0,19 mmol), Á^rl-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-2-fluor-4trifluormethylbenzamidu (0,13 g, 0,29 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0,01 g, 0,01 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,06 mg, 0,48 mmol) ve vodě (2 ml) a dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) se zahřívá při teplotě 85°C přes noc. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá voda a směs se extrahuje ethylacetátem (3x). Spojené organické podíly se promyjí nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v systému Isco, čímž se získá Vl-[4(4-amino-l-trityl-1//-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid (0,12 g, 0,17 mmol) ve formě bílé pevné látky: *11 NMR (DMSOdé, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,25 (d, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,24 (m, 15H), 3,90 (s, 3H); MS: MH⁺ 689.

Příklad 383

Cz's-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3-methoxyfenyl)-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l -yljcyklohexyl }amino)propanová kyselina

333

Směs cA-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyrjamino}-3methoxyfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ňQpyrimidin-1 -yljcyklohexyl} amino)propanoátu (0,23 g, 0,36 mmol), p-dioxanu (15 ml), hydroxidu draselného (0,10 g, 1,81 mmol) a vody (1,5 ml) se zahřívá při teplotě 80^oC po dobu 3 hodin. Rozpouštědla se odpařují a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá c/.s-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4trifluormethylbenzoyljamino}-3-methoxy fenyl)-1//-pyrazolo[3,4-fiQpyrimidin-1 yljcyklohexyl }amino)propanová kyselina (0,11 g, 0,18 mmol) ve formě bílé pevné látky: Ή NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,00 (t, IH),

7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,35 (s, IH), 7,32 (s, IH), 6,89 (br, 2H), 4,79 (m, III), 3,95 (s, 3H), 2,46-3,00 (m, 7H), 2,29 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,80 (m, 2H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 6,06 min. MS: MH⁺616.

Příklad 384

7rans-3-({4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{ [2-methoxy-4trifluormethylbenzoy ljamino} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 yljcyklohexyl }amino)propanová kyselina ·· ··

334

Směs /ra/7,s'-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-1 M-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-1 -yljcyklohexyl} amino)propanoátu (0,04 g, 0,06 mmol), 7?-dioxanu (4 ml), hydroxidu draselného (0,02 g, 0,31 mmol) a stopových množství methanolu a vody (0,4 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 1 hodiny. Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc při teplotě 80°C po dobu 4 hodin. Rozpouštědla se odpařují a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá /ram-3-({4-[4-amino-3-(3methoxy-4- {[2-methoxy-4-trifluormethylbenzoyl]ammo} fenyl)-1 M-pyrazolo[3,4cQpyrimidin-l -yljcyklohexyl }amino)propanová kyselina (0,04 g, 0,06 mmol) ve formě bílé pevné látky: ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,72 (s, IH), 8,61 (d, IH), 8,28 (d, IH), 8,24 (s, IH), 7,61 (s, IH), 7,53 (d, IH), 7,33 (s, IH), 7,29 (d, !H), 4,72 (m, IH), 4,20 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 1,44-3,61 (m, 13H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250x4, 6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 6,36 min. MS: MH⁺628.

Příklad 385

Ml-[4-(4-Amino-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid

·· ··

335

Směs NI -[4-(4-amino-1 -trityl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (2,10 g, 1,75 mmol), 6N vodné kyseliny chlorovodíkové (10 ml), p-dioxanu (10 ml) a ethanolu (8 ml) se zahřívá při teplotě 50°C po dobu 6 hodin. Směs se filtruje a pevný podíl se promyje ethanolem, suší ve vakuové sušárně přes víkend a purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá Al-[4-(4-amino-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid (0,35 g, 0,78 mmol). Filtrát se koncentruje a purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu a preparativní HPLC, čímž se získá stejný produkt //l-[4-(4-amino-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid (0,67 g, 1,51 mmol) ve formě bílé pevné látky:

*H NMR (DMSÓ-dé, 400 MHz) δ 13,58 (s, 1H), 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,05 (t, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,24 (d, 1H), 3,94 (s, 3H); MS: MH⁺447.

Příklad 386

Ní-[4-(4-Amino-l-tetrahydro-2//-4-pyranyl- l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl)-2methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Diethylazodikarboxylát (0,07 ml, 0,45 mmol) se přidá do směsi 7Vl-[4-(4-aminol//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifIuormethylbenzamidu (0,10 g, 0,22 mmol), trifenylfosfinu (0,12 g, 0,45 mmol) a tetrahydro-4//-pyran-4-olu (0,04 g, 0,34 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se tetrahydro-4//-pyran-4-ol (0,01 g, 0,11 mmol), trifenylfosfin (0,04 g, 0,15 mmol) a diethylazodikarboxylát (0,02 ml, 0,15 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědla se odpařují a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá jVI -[4-(4-amino-1 -tetrahydro-2//-4-pyranyl-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl)-2methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,03 g, 0,06 mmol) ve formě bílé pevné látky: ‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,31 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,95 (m, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,56 (t, 2H), 2,22 (m, 2H), 1,89 (m, 2H); MS: MH⁺ 531.

Příklad 387

Vl-{4-[4-Amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ďlpyrimidin-3-yl]-2methoxyíěnyl)-2-fluor-4-trifluprmethylbenzamid

A. 4-(4-Amino-3-jod-lV-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl)-2-cyklopenten-l-ol

Směs fetrakis(trifenylfosfin)palíadia (0,04 g, 0,03 mmol), 3-jod-1 V-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu (0,30 g, 1,14 mmol) a dimethylsulfoxidu (3 ml) se míchá při pokojové teplotě za tmy po dobu 2 minut a ochladí na teplotu 0°C. Roztok 2,4a-dihydrolaV-cyklopenta[ů]oxirenu (0,14 g, 1,72 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) se přidá do směsi při teplotě 0°C a míchá při teplotě 0°C po dobu 3 hodin. Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc a purifikuje preparativní HPLC, čímž se získá 4-(4-amino-3-jod-lVpyrazolo[3,4-í7Jpyrirnidin-l-yl)-2-cyklopenten-l-ol (0,24 g, 0,70 mmol) ve formě bílé pevné látky: RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 4,23 min. MS: Mří 344.

B. VI -{4-[4-Amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-6/]pyrimidin-3yl]-2-methoxy fenyl} -2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Směs 4-(4-amino-3 -j od-1 V-pyrazolo[3,4-6/Jpyrimidin-1 -yl)-2-cyklopenten-1 -olu (0,12 g, 0,35 mmol), Vl-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (0,23 g, 0,53 mmol), tetrakis(trifenyl-

·* ··

337 fosfin)palladia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,11 g, 0,88 mmol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (6 ml) a vody (3 ml) při teplotě 85°C po dobu 6 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá NI - {4- [4-amino-1 -(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl] 2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,18 g, 0,34 mmol) ve formě bílé pevné látky:

'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, lH), 6,90 (br, 2H), 6,09 (d, 1H), 5,93 (d, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,31 (m, 1H), 4,74 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,84 (m, 1H), 2,02 (m, 1H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 8,50 min. MS: MH⁺ 529.

Příklad 388

Al - {4- [4-Amino-1 -(3 -hydroxycyklopentyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3 -y 1 ] -2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Směs Al -{4- [4-amino-1 -(4-bydroxy-2-cyklopentenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (0,10 g, 0,19 mmol) a 10% palladia na aktivním uhlí (0,03 g) v ethanolu (10 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou vodíku přes noc. Směs se filtruje a filtrát se čistí preparativní HPLC, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-(3-hydroxycyklopentyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluonnethylbenzamid (0,07 g, 0,13 mmol) ve formě bílé pevné látky: 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 5,17 (m, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 1,79-2,41 (m, 6H); MS: MH⁺ 531.

·· ··· • ® • · · • · · • · · ·· ·· » · · · · *

Příklad 389 ·· ··

338

4-(4-Amino-3- {4- [(1 V-2-indolylkarbonyl)amino] -3 -methoxyfenyl} -1 V-pyrazolo[3,4í/Jpyrimidin-1-yl)hexahydropyridinium-acetát

Oxalylchlorid (0,06 ml, 0,60 mmol) se přidá do roztoku indol-2-karboxylové kyseliny (0,88 g, 0,546 mmol) v dichlormethanu (5 ml) a tetrahydrofuranu (5 ml) při teplotě 0°C. Pak se přidá W-dimethylformamid (3 kapky přes 0,1 ml stříkačku) a směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Rozpouštědla a přebytek činidel se odpařuje za sníženého tlaku. Zbytek se převede do dichlormethanu (2 ml) a výsledný roztok (1,25 ml) se přidá do roztoku řerc-butyl-4-[4amino-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -y 1]-1 piperidinkarboxylátu (0,12 g, 0,27 mmol) a pyridinu (0,4 ml) v dichlormethanu; (1 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Přidá se trifluoroctová kyselina (1 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá 4-(4-amino-3-{4-[(lV2-indolylkarbonyl)amino]-3-methoxyfenyl}-4 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-lyl)hexahydropyridinium-acetát (0,07 g, 0,14 mmol) ve fonně bílé pevné látky: ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,85 (br, 1H), 9,45 (s, 1H), 8,24 (d, 1H), 8,12 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,24-(t, 1H), 7,09 (t, 1H), 4,77 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,11 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,84 (m, 2H); MS: MH' 483.

• ·

• ♦ · ·

339

Příklad 390-410

Pro přípravu sloučenin podle příkladů 390-410 se použije stejný postup jako pro přípravu 4-(4-amino-3 - {4- [(1 A-2-indolylkarbonyl)amino]-3 -methoxy fenyl} -1Hpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 -yl)hexahydropyridinium-acetátu (příklad 881).

Struktura	MS: MH⁺	HPLC Rt (min) (Hypersil 08, 5μηι, 100Á, 250x4,6mm;25%100% acetonítríl-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min)	Příklad č.
		567	6,97	390
	σ
f n-	Z o
N \s=J 'Ócy b	A-
	AJ	486	5,89	391
o'Y	0
	fl
“A’' 0	A_o-
	é)	497	6,28	392
	a
ýr	%
“ b	A-
	θ'	513	5,61	393
	o
1	r ^N
o,. F	o
N Y* * y	A-

• · · ·

340

o ro n yY o ÚÓ A0	497	6,39	394
X	512	6,22	395
o Ao A- l> Xw^N A N 0
o	483	5,73. ¹	396
Vn °y_X ° Jl J ° N N Q
\ - °O	513	7,78	397
Cn <cx ° N \=7 O W ^Λ°0
----'-'-p	501	8,23	398
Z=^z. yX^z θ, Gz \|A Á y° o t

« · · · · · • · · ·

341

ΟΝ S—' U Λ ^Ν 0	α	ο Α>-	517	8,7	399
		,α	517	8,73	400
ο- Ν γΑ ^νΧΧ U Α ^Ν Υ	ý-N 0	X-
		δ	513	7,83	401
t Μ- °.f Z?	y-Ň ο
ν y/ ΥΥΝ <·_νΎν		Α-
Q
	0		511	9,07	402
°?Λ Ν ^Ν Ίκι ϋ ± ^Ν X	Ο	Α-
			497	8,37	403
ο',τ Λχ ^Νγ	Υν 0	Λ-

ώίΐΐ.

• · · · · ·

342

/ tr o r KS	G-^ CÍ o Ό O A-	528	7,9	404
N nS V	' N N 0
		/i	⁵⁵⁹	9,5	405
< s?	ó- O N Ax	Vn 0 o A-		•
	\-N*
		ťA	589	7,45	406
	Ar	o
N _na %	A A	A
	q
		0.-7 X? ťft	561	4,52	407
o rs n Ú5 A	C.N Ό A·
	Sf
			483	6,35	408
N' IL	! _NX o Γ* o rs N Mn A
		N

Příklad 411

4-[4-Amino-3-(4-{ [(1 -ethyl-1 A-2-indolyl)karbonyl]amino} -3-methoxyfenyl)-1Hpyrazolo [3,4-</] pyrimidin-l-y 1] hexahydropyridinium-acetát

Hydrid sodný, 60% suspenze v minerálním oleji (0,006 g, 0,15 mmol), se přidá do roztoku N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<7|pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-lA-2-indolkarboxamidu (0,08 g, 0.14 mmol) v N,A-dimethylformamidu (1,0 ml) při teplotě 0°C. Směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Přidá se roztok ethyljodidu (0,02 g, 0,14 mmol) v A, A-dimethylformamidu (0,5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se ethyljodid (0,01 g, 0,07 ³⁴⁴ mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Trifluoroctová kyselina (3 ml) se přidá a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Rozpouštědla a přebytek činidel se odpařuje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4- {[(1 -ethyl-1 7/-2-indolyl)karbonyl]amino} -3 -methoxyfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]hexahydropyridinium-acetát (0,05 g, 0,09 mmol) ve formě bílé pevné látky: ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,43 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,14 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,34 (s, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,15 (t, 1H), 4,96 (m, 1H), 4,62 (q, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,00 (m, 2H), 2,28 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,33 (t, 3H); MS: ΜΙ-Γ511.

Příklad 412 až 416

Pro přípravu sloučenin podle příkladů 412-416 se použije stejný postup jako pro přípravu 4- [4-amino-3 -(4- {[(1 -ethyl-177-2-indolyl)karbonyl] amino} -3 -methoxyfenyl)-1IIpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]hexahydropyridinium-acetátu (příklad 903),

Struktura	MS: ΜΙΓ	HPLC Rt (min) (Hypersil Ci8, 5μηι, I00Á, 250x4,6mm;25%100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min)	Příklad č.
		523	9,12	412
	A

N SA nXA \|T JL N A	A

	O	540	6,03	413
ó F ν	Q
A
Q

'fj

345

Vň o\y° Μ Λ- Y	555	5,30	414
O	627	6,55	415

o\ φ v
Λ
Q
o	568	7,33	416
oC? A? X Ύ ^°'
0

Příklad 417 acetát A2-4-[4-Amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl5-hydroxy-1 A-2-indolkarboxamidu

346

HO

Směs 7V2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxy-fenyl-5-(benzyloxy)-l//-2-indolkarboxamidu (0,08 g, 0,14 mmol), 10% palladia na aktivním uhlí (0,03 g) a trifluroctové kyseliny (kapka) v ethanolu (12 ml) a tetrahydrofuranu (12 ml) se hydrogenuje pod atmosférou vodíku přes noc. Směs se filtruje a filtrát čistí preparativní HPLC, čímž se získá acetát N2-4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)- 1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl-5-hydroxy-l//-2-indolkarboxamidu (0,02 g, 0,03 mmol) ve formě bílé pevné látky: 'H NMR (DMSO-d6 400 MHz) δ 11,55 (s, ÍH), 9,29 (s, ÍH), 8,88 (s, ÍH), 8,28 (s, ÍH), 8,18 (d, ÍH), 7,31 (m, 3H), 7,18 (s, ÍH), 6,94 (s, ÍH), 6,78 (dd, ÍH), 5,06 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,44 (m, 2H), 3,17 (m, 2H), 2,39 (m, 2H), 2,11 (m, 2H), 1,91 (s, 3H); MS: MH⁺ 499.

Příklad 418 acetát 7V2-4-[4-Amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl4-hydroxy-l//-2-indolkarboxamidu • ·

K připravení acetátu M2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl]-2-methoxyfenyl-4-hydroxy-l//-2-indolkarboxamidu se použije stejný postup jako byl použit pro přípravu acetátu 7V2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl]-2-methoxyfenyl-5-hydroxy-l//-2-indolkarboxamidu. RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) R_t 4,60 min. MS: MH⁺499.

Příklad 419 acetát M2-4-[4-Amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl7-amino-1//-2-indolkarboxamidu

Do horkého roztoku acetátu M2-4-[4-amino-l -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl-7-nitro-l//-2-indolkarboxamidu (0,04 g, 0,07 mmol) ve vodě (2 ml) a ethanolu (2 ml) se přidá dithioničitan sodný (0,07 g, 0,41 mmol). Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, přidá se jedna kapka koncentrované kyseliny

348 chlorovodíkové a směs se čistí preparativní HPLC, čímž se získá acetátA2-4-[4-amino-l(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl-7-amino-lA-2indolkarboxamidu (0,004 g, 0,01 mmol) ve formě bílé pevné látky: RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 pm, 100Á, 250x4, 6mm; 25%-100% acetonitril-O,OSM octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 6,60 min. MS: MH* 498.

Příklad 420 acetát A3-4-[4-Amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl1H-3-indolkarboxamidu

A. A3-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l A-3indolkarboxamid - - - ------------ .... ...... —

Oxalylchlorid (0,07 ml, 0,79 mmol) se přidá do roztoku indol-3-karboxylové kyseliny (0,12 g, 0,72 mmol) v dichlormethanu (4 ml) a tetrahydrofuranu (3 ml) při teplotě 0°C dále se přidá AA-dimethylformamid (3 kapky přes 0,1 ml stříkačku) a směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Rozpouštědla a přebytek činidel se odpařují za sníženého tlaku. Zbytek se převede do dichlormethanu (2 ml) a výsledný roztok (1,5 ml) se přidá do roztoku 2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)anilinu (0,09 g, 0,36 mmol) a pyridinu (1 ml) v dichlormethanu (2 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se roztok chloridu kyseliny v dichlormethanu (0,3 ml) a směs se míchá přes noc. Přidá se voda (kapka) a těkavé složky se odpařují za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se separuje a extrahuje ethylacetátem. Organické extrakty se spojí a promyjí nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší nad síranem hořečnatým. Směs se filtruje a rozpouštědlo z filtrátu odpařuje, čímž se získá surový podíl, který se čistí zrychlenou ·· *· ³⁴⁹ chromatografií na sloupci silikagelu směsí n-heptamethylacetát (2/1) jako mobilní fází, čímž se získá A3-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l//-3indolkarboxamid (0,11 g, 0,28 mmol) ve formě bílé pevné látky: ^!H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8,65 (m, 3H), 8,13 (d, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,33 (m, 3H), 4,02 (s, 3H), l,36(s, 12H); MS: MH⁺393.

B. A3-4-[4-Amino-l-(4-piperidyl)-lZ/-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfeny 1-1 H-3-indolkarboxamid-acetát

Směs N3-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-1H-3indolkarboxamidu (0,11 g, 0,28 mmol), 3-jod-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin-hydrochloridu (0,10 g, 0,27 mmol), tetrakis(trifenyl-fosfin)palladia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,13 g, 1,07 mmol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 85°C přes noc pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá acetát A3-4[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl-1 H-3 indolkarboxamidu (0,09 g, 0,16 mmol) ve formě bílé pevné látky: ^JH NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,83 (br, 1H), 8,92 (s, lH), 8,31 (m, 3H), 8,14 (dd, 1H), 7,50 (dd, 1H), 7,31 (m, 2H), 7,20 (m, 2H), 4,82 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 2,73 (m, 2H), 2,15 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,88 (m, 2H); MS: MH⁺483. .................................;_________

Příklad 421 acetát A4-4-[4-Amino-l-(4-piperidy])-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl1 //-4-indolkarboxamidu

·· ···

350

K připravení acetátu A4-4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin3-yl]-2-methoxyfenyl-l//-4-indolkarboxamidu se použije stejný postup jako byl použit pro acetát N3-4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyll//-3-indolkarboxamidu. RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min) Rt 4,80 min. MS: MH⁺483.

Příklad 422

Trans-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxy fenyl)-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

A. 1-methyl-1//-2-indolkarbonylchlorid

Suspenze l-methylindol-2-karboxylové kyseliny (9,87 g, 56,4 mmol) v dichlormethanu (150 ml) se nCchá reagovat s oxalylchloridem (8,58 g, 67,63 mmol), přidá se DMF (0,2 ml), čímž dojde ke zpěnění. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu čtyř hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá l-methyl-1/7-2indolkarbonylchlorid (10,69 g, 98%) ve formě světle žluté pevné látky.

*H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7, 70 (d, IH), 7,66 (s, IH), 7,44 (t, IH), 7,35 (d, IH), 7,18 (t, IH), 3,98 (s, 3H). _

B. 7V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl1//-2-indolkarboxamid

Do roztoku obsahujícího 1-methyl-1//-2-indolkarbonylchlorid (5,44 g, 0,0281 mol) a 2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilin (7,00 g, 0,0281 mol) v bezvodém dichlormethanu (150 ml) se po kapkách při teplotě 0°C přidá A-ethyl-A/TVdiizopropylamin (4,9 ml, 0,0309 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi vodu (150 ml) a ethylacetát (150 ml). Organické fáze se promyjí solankou, suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetát/«-heptanu (1: 6)) jako mobilní fáze, čímž se získá 7V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,299 ···· • · » · 9 « ·· ·· • 9 ··

351 dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-177-2-indolkarboxamid (8,0 g, 0,0197 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,35 (s, IH), 8,03 (d, IH), 7,69 (d, IH), 7,57 (d, IH), 7,33 (m, 3H), 7,29 (s, IH), 7,14-(t, IH), 4,02 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 1,31 (s, 12H).

TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf 0,44.

C. Trans-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4í7]pyrimidin-3 -yl} -2 -methoxy fenyl)-1 -methyl-177-2-indolkarboxamid

Suspenze řrara^,-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (8 ml) se nechá reagovat s 7V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolanT2-yl)fenyl]-lmethyl-177-2-indolkarboxamidem (0,097 g, 0,238 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,016 g, 0,014 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,057 g, 0,538 mmol) ve vodě (4 ml). Reakční směs se míchá po dobu 21,5 hodin při teplotě 80°C. Precipitát se filtruje a organický vrstva se odpařuje za sníženého tlaku. Dichlormethan (15 ml) se přidá a vrstvy se rozdělí. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití 10% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu krokovým gradientem na Sq 16x ISCO CombiFlash, čímž se získá 0,083 g (68%) trans-Ni-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazinojcyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-1 methyl-177-2-indolkarboxamid. ^JH NMR (d₆-DMSO) δ 9,4316 (s, IH), 8,2427 (s, IH), 8,1207-8,1003 (d, IH, J= 8,16 Hz), 7,717-37,6974 (d, IH, J = 7,96 Hz), 7,5979-7,5769 (d, IH, J = 8,4 Hz), 7,3507-7,2758 (m, 4H), 7,1695-7,1321 (t, IH), 4,6893-4,6324 (m, IH), 4,0400 (s, 3H), 3,9571 (s, 3H), 2,5 (m, 3H), 2,4055-2,3279 (m, 5H), 2,1606 (s, 3H), 2,1094-1,9367 (m, 6H), 1,52141,4624 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, velikost částic 3 pm, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM amonium-acetát ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,12 min (100%), M⁺594,3.

352

Příklad 423

7V2- {4-[4-amino-1 -(2-amino-4-pyridy 1)-1 A-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl-} 1-methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 424

7V2-(4-{4-amino-l-[2-(methylamino)-4-pyridyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxy fenyl)-1-methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 425

A2-(4- { 4-amino-1 - [2 -(dimethylamino)-4-pyridyl] -1 A-pyrazolo [3,4 -</]pyrimidin-3 -yl }-2methoxy feny 1)-1-methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 426

A2-(4- {4-amino-1 -[2-(4-methylpiperazino)-4-pyridyl] -1 A-pyrazolo [3,4-tf]pyrimidin-3-yl} 2-methoxyfenyl)-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 427 ...... ...... ..... ..... . ..........._

A2-(4- {4-amino-1 - [2-(4-methylpiperazino)-4-pyridyl]-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} 2-methoxyfenyl)-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 428

N2- {4- [4-aminó-1 -(2-morfolino-4-pyridyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl}-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 429

A2- [4-(4-amino-1 - {2- [(2-hydroxyethyl)amino] -4-pyridyl} -1 A-pyrazolo [3,4 -d] pyrimidin-3 yl)-2-methoxyfenyl]-1-methyl-1 A-2-indolkarboxamid

353

Příklad 430

A2-(4-{4-amino-l-[2-(aminomethyl)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Příklad 431

A2-(4- {4-amino-1 -[2-(aminokarbonyl)-4-pyridyl]-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-!-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Příklad 432

3-morfolino-l-(2-morfolino-4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

Příklad 433

A2- {4- [4-amino-1 -(4-amino-2-pyridy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1] -2 methoxyfenyl}-!-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Příklad 434

7V2-{4-[4-amino-l-(2-oxo-l,2-diliydro-4-pyridinyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3-ýl]-2methoxyfenyl}-!-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Příklad 435

7V2- {4- [4-amino-1 -(4-morfolino-2-pyridyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3 -y 1] -2 methoxyfenyl}-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Příklad 436

A2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)-2-pyridyl]- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamid

354

Příklad 437 jV2-[4-(4-amino-l-{4-[(2-hydroxyethyl)amino]-2-pyridyl}-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl)-2-methoxyfenyl] -1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Příklad 438

JV2- {4- [4-amino-1 -(6-amino-3 -pyridyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl]-2methoxy fenyl}-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Příklad 439

JV2-{4-[4-amino-l-(6-morfolino-3-pyridyl)-!//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Příklad440

JV2-(4- {4-amino-1 - [6-(4-methylpiperazino)-3 -pyridyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl}2-methoxyfenyl)-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Příklad 441

Czs-4-[4-(4-ammo-3-{3-fluor-4-[(5-methyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//pyrazolo[3,4-áQpyrimidin-1 -yl)cyklohexyl]-2-piperazinon

Příklad 442

7ra«5-4-[4-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(5-methyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//pyrazolo[3,4-z/Jpyrimidin-1 -y l)cyklohexyl] -2-piperazinon

Příklad 443

Cis-4-[4-(4-amino-3- {4- [(5 -methyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-1 -yl)cyklohexyl]-2-piperazinon

355

Příklad 444

7rans-4- [4-(4-amino-3- {4- [(5-methyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-l-yl)cyklohexyl]-2-piperazinon

Příklad 445

R- A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 - (1 -methoxy-1 -methylethyl)-3 -piperidy 1] -177-pyrazolo [3,4 t/]pyrimidin-3-yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 446

Š-A2-(4-{ 4-amino-1-[ 1-(1-methoxy-1-methylethyl)-3-piperidyl] -177-pyrazolo [3,4<7Ipyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 447

R/S-zV2-(4-{4-amino-1 -[1 -(1 -methoxy-1 -methylethyl)-3-piperidyl]-177-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 448 ________________,____________________:_______r__________._____________i.._____________________·. ,

R-A2-(4- { 4-amino-1 - [ 1 -(3 -methoxypropy l)-3 -piperidyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 yl} feny l)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 449

S-A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(3 -methoxypropy l)-3 -piperidyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 yl} fenyl)-5,7-dimethy 1-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 450

R/S-A2-(4-{4-amino-l-[l-(3-methoxypropyl)-3-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin • · · · · · • · · • ι · • 9 · > · · ·

·.» ·» fc . ···

356

Příklad 451

R-7V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-hydroxyethyl)-3 -piperidyl] -1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 452

S-7V2-(4-{4-amino-1-[ 1-(2-hydroxyethyl)-3-piperidyl] -1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 453

R/S-/V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-hydroxyethyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 454

R-7V2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2- {1,3 -dihydroxypropyl} )-3-piperidyl] -1//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 455_______

S-7V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-{l,3-dihydroxypropyl})-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 456

R/S-7V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2- {1,3-dihydroxypropyl} )-3-piperidyl]-1 //-pyrazolo [3,4r/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 457

R-2-[3 -(4-amino-3 - {4-[(5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-1 -yl)piperidino]acetonitril • · ³⁵⁷

Příklad 458

S-2-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-177-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-1 -yl)piperidino] acetonitril

Příklad 459 ^/5-2-[3 -(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} - 1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl)piperidino]acetonitril

Příklad 460

R-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-(methylsulfanyl)ethyl)-3-piperidyl]-l/7-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 461

S-A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-(methylsulfanyl)ethyl)-3 -piperidyl]-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 462

R/S-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-(methylsulfanyl)ethyl)-3-piperidyl]-l/7-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 463

R-A-methoxy-3 -(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol -2-y l)amino] fenyl} -177pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboximidamid

Příklad 464

S-A-methoxy-3 -(4-amino-3- {4-[(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -177pyrazolo [3,4 -<7]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboximidamid ³⁵⁸

Příklad 465

R/S-V-methoxy-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lVpyrazolo [3,4-ůQpyrimidin-1-y 1)-1-piperidinkarboximidamid

Příklad 466

R-V2-(4-4-amino-1 -[ 1 -(1 -2,2,2-trifluorethyl)-3 -piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3ylfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 467

S-V2-(4-4-amino-1 -[ 1 -(1 -2,2,2-trifluorethyl)-3 -piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 ylfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 960

R/S-V2-(4-4-amino-1 -[ 1 -(1 -2,2,2-trifluorethyl)-3 -piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin3-ylfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 468 ...... ........._________... ____________ ______

V2-{4-[4-amino-1 -(1 V-4-imidazolylmethyl)-1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]fenyl} -5,7dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad469

V2-(4-{4-amino-1-[ 1 V-4-(2-methyl-imidazolyl)methyl]-lV-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 470

V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 V-4-(2-amino-imidazolyl)methyl] -1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

359

Příklad 471

A2-4- [4-amino-l-( 1 A-4-imidazolyl)-1 A-pyrazolo [3,4-A]pyrimidin-3 -yl]fenyl-5,7-dimethyl1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 472

A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 A-4-(2-amino-imidazolyl)] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 473

A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 A-4-(2-amino-imidazolyl)] -1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3-yl} fenyl)5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 474 l-(4- { 4-amino-3 -[4-( 1,3 -benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-1 yl}piperidino)-2-methyl-2-(methylamino)-l-propanon

Příklad 475 ₄ ...........

- [4-(4-amino-3 - {4- [(5 -methyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-1 -yl)piperidino] -2-methyl-2-(methy lamino)-1 -propanon

Příklad 476

-[4-(4-amino-3-{4- [(5 -ethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-1 -yl)piperidino] -2-methyl-2-(methylamino)-1 -propanon

Příklad 477 _ [4-(4-amino-3 - { 4- [(5 -chlor-1,3 -benzoxazol -2-y l)amino] fenyl} -1 A-pyrazolo[3,4ť/Jpyrimidin-l-yl)piperidino]-2-methyl-2-(methy lamino)-1-propanon • · • · · « « ·

360

Příklad 478 {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 -yl] fenyl} (1A-4pyrazolyl)methanon

Příklad 479

-(4- {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)- lA-pyrazoIo[3,4-cZ]pyrimidin-3-yl]benzoyl} -1 A-1 pyrazolyl)-1-ethanon

Příklad 480 {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-ťí|pyrimidin-3-yl]fenyl}(l-methyl-lA-4pyrazolyl)methanon

Příklad 481 {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl] fenyl} (1 -benzyl-1A-4pyrazolyl)methanon

Příklad482 „ „ ..........

{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl] fenyl} (1 -benzoyl-1 A-4pyrazolyl)methanon

Příklad 483 {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl}(5izoxazolyl)methanon

Příklad 484 {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl]fenyl}(3-methyl-5izoxazolyl)methanon

361

Příklad 485 {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl} (3-fenyl-5izoxazolyl)methanon

Příklad 486 jV5.{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3-yl]fenyl}-3-fenyl-5izoxazolamin

Příklad 487 jV5-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-6f]pyrimidin-3-yl]fenyl}-3(trifluormethyl)-5-izoxazolamin

Další příklady zahrnují následující sloučeniny:

Struktura	Název
	A2- {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)- 1H- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2- ' - methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-pyrrolo[2,3- ó]pyridin-2-karboxamid
	Λ2- {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1H- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2- methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-pyrrolo[2,3- ú]pyridin-2-karboxamid

• · · · · · • · . · • · · • ·’ ♦ • · « '· <e * ·

363

o G			V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV- pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3-yl]-2-
Ί0		methoxy feny 1} -1 -methyl-1 V-pyrrolo [3,2- c]pyridin-2-karboxamid

			N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-
a	Cl		pyrazolo[3,4-ťZ]pyrimidin-3-yl]-2-

		methoxy feny 1} -1 -methyl-1 V-pyrrolo [3,2-
			Z?]pyridin-2-karboxamid
			V2- {4-[4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-
fr	X>		lV-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-3-yl]-2-
y⁵'			methoxy fenyl} -1 -methyl-1 V-pyrrolo[2,3 - b]pyridin-2-karboxamid
	Π		2V2- {4-[4-amino-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)-
Tr	Ό		1 V-pyrazolo [3,4 -í/]pyrimidin-3 -yl] -2-
			methoxy feny 1} -1-methyl-1 V-pyrrolo [2,3 - c]pyridin-2-karboxamid
			V2-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-
Cr	O		1 V-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-3-yl]-2- methoxyfenyl} -1 -methyl-1 V-pyrrolo[3,2- c]pyridin-2-karboxamid

• · ··

364

	//2-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl] -2- methoxy feny 1} -1 -methyl-1 //-pyrrolo [3,2- ó]pyridin-2-karboxamid
	/V2-{4-[4-amino-l-(l-izopropyl-4-piperidyl)- 1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -y 1] -2-
HP	methoxy fenyl} -1 -methyl-1 //-pyrrolo [2,3 - Z>]pyridin-2-karboxamid
	/V2-{4-[4-amino-l-(l-izopropyl-4-piperidyl)- 1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-
«JP**	methoxyfenyl} -1 -methyl-1 //-pyrrolo[2,3 - c]pyridin-2-karboxamid
. ¥V. ...... .. . ........	/V2- {4-[4-amino-1 -(1 -izopropyl-4- piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -
·*	pyrrolo[3,2-c]pyridin-2-karboxamid
	N2- {4-[4-amino-l-(l-izopropyl-4-piperidyl)- 1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3-yl]-2-
	methoxyfenyl}-1 -methyl-1 //-pyrrolo [3,2- ó]pyridin-2-karboxamid

• 9 «' ' 9 * *!	···· • •	9 9	• 9	9 9 • •	9 9’	9999 9 9
• ·	• ·			9	9	9 9
• ·	• 9	999	·♦·	99		' 9 9

365

	7V2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4- imidazoly lmethy l)-4-piperidyl] -1H- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-1 -methyl- l//-pyrrolo[2,3- Z>]pyridin-2-karboxamid
/ v*	A2-(4-{4-amino-l-[l-(177-4- imidazoly lmethy l)-4-piperidyl] -177- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1} -2- methoxy feny 1)-1 -methyl-177-pyrrolo [2,3- c]pyridin-2-karboxamid
	A2-(4-{4-amino-l-[1 -(177-4imidazoly lmethy l)-4-piperidyl] -177- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-1 -methyl-177-pyrrolo[3,2- c]pyridin-2-karboxamid
i“ 1	A2-(4-{4-amino-l-[l-(1/7-4- imidazoly lmethy l)-4-piperidyll -177pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxy fenyl)-1 -methyl-177-pyrrolo[3,2- 6]pyridin-2-karboxamid
Wi	A2-[4-(4-amino-1-{1-[(2-methyl-1/7-4- imidazoly l)methyl] -4-piperidyl} -1H- pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2- methoxy feny l]-l-methyl-177-pyrrolo[2,3 - Ď]pyridin-2-karboxamid

366

	7V2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-methyl-l//-4- imidazolyl)methyl] -4-piperidyl}-1H- pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3-y l)-2- methoxy fenyl]-1 -methyl- l//-pyrrolo[2,3 - c]pyridin-2-karboxamid
rY	A2’[4-(4-amino-l-{1-[(2-methyl-1/7-4- imidazoly l)methyl]-4-piperidyl} -1//- pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl)-2- methoxy feny 1]-1 -methyl-1 //-pyrrolo [3,2- c]pyridin-2-karboxamid
T τ'	A2-[4-(4-amino-l-{1 - [(2-methyl-17/-4- imidazolyl)methyl] -4-piperidyll-1H- pyrazolo [3,4 -</]pyrimidin-3 -y l)-2 - methoxy fenyl]-1 -methyl-1 //-pyrrolo [3,2- /]pyridin-2-karboxamid
	7V2- [4-(4-amino-1 - {1- [(3 -methyl-1H-4- pyrazolyl)methyl]-4-piperidyl} -1H-
*4 'i	methoxy fenyl]-1-methyl-l//-pyrrolo[2,3- ů]pyridin-2-karboxamid
n P r^ iř Jj	/V2-[4-(4-amino-l-{l-[(3-methyl-l//-4pyrazolyl)methyl] -4-piperidyl}-1H- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl)-2- methoxy fenyl]-1 -methyl-1 //-pyrrolo[2,3 - c]pyridin-2-karboxamid

367

	N2-[4-(4-amino-1 - {1 - [(3 -methyl-1 77-4- pyrazolyl)methyl] -4-piperidyl} -1H- pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -y l)-2- methoxyfenyl]-1 -methyl-1 /7-pyrrolo [3,2- c]pyridin-2-karboxamid
	JV2- [4-(4-amino-1 - {1 - [(3 -methyl-177-4- pyrazolyl)methyl] -4-piperidyl} -1H- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y l)-2 - methoxyfenyl]-1 -methyl-177-pyrrolo [3,2- 6]pyridin-2-karboxamid
CrV' Γ / a*	2V2-(4- {4-amino-1 -[1 -(2-methoxy ethyl)-4- piperidyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 - yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-177- pyrrolo [2,3-6]pyridin-2-karboxamid
	//2-(4-{4-amino-1 -[1 -(2-methoxyethyl)-4- piperidyl] -177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 - yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 /7- pyrrolo[2,3-c]pyridin-2-karboxamid
*n yJ	V2-(4- {4-amino-l-[1 -(2-methoxyethyl)-4- piperidyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 - yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-177- pyrrolo [3,2-c]pyridin-2-karboxamid

··:

368

T γ*	M2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-methoxyethyl)-4piperidyl]-l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3- yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl- \H- pyrrolo(3,2-/]pyridin-2-karboxamid
	M2-(4- {4-amino-1-(1-(3 -furylmethyl)-4- piperidyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1Hpyrrolo(2,3-Z»]pyridin-2-karboxamid
	M2-(4- {4-amino-1-(1-(3 -furylmethyl)-4- piperidyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 - yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1Hpyrrolo (2,3 -c]pyridin-2-karboxamid
	ŤV2-(4- {4-amino-1 -(1 -(3 -ťurylmethyl)-4- piperidyl]- l//-pyrazolo(3,4-ó/]pyrimidin-3- yl}-2-methoxyfenyl)-1-methyl-1//--------------- pyrrolo[3,2-c]pyridin-2-karboxamid
	M2-(4- {4-amino-1 - [1 -(3-fury lmethyl)-4piperidyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 - yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1H- pyrrolo [3,2-Z?]pyridin-2-karboxamid

♦· ····

369

/MY %	N2-{4-[4-amino-l -(1 -tetrahydro^AA- pyranyM-piperidylj-lA-pyrazoloPA- í/Jpyrimidin-S -yl] -2-methoxyfenyl} -1 - methyl-1 A-pyrrolo [2,3 -Z?]pyridin-2- karboxamid
<	A2-{4-[4-amino-l-(l-tetrahydro-2 A-4- pyrany 1-4-piperidy 1)-1 A-pyrazolo [3,4- </]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 - methyl-1 A-pyrrolo [2,3 -c]pyridin-2- karboxamid
Τ'*/	A2- {4-[4-amino-l -(1 -tetrahydro-2A-4- pyranyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4- <7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 - methyl-1 A-pyrrolo [3,2-c]pyridin-2- karboxamid
s γ	N2- {4- [4-amino-1 -(1 -tetrahydro-2A-4- pyranyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4- í/Jpyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl}-1- methyl-1 A-pyrrolo[3,2-Z>]pyridin-2- karboxamid
ryy «Κ V⁹' HP	A2-{4-[4-amino-l -(1 -izopropyl-4- piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3- yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1H-2- indolkarboxamid

370

	A2- {4-[4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)- 1 //-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-3 -yl]-2- methoxyfenyl}-1-methyl-1H-2- indolkarboxamid
.p	A2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-2- pyrrolylmethyl)-4-piperidyl] -IH- pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxy feny 1)-1 -methyl-1H-2- indolkarboxamid
	A2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2,2-difluorethyl)-4- piperidyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 - yl}-2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1H-2- indolkarboxamid
Wl XG	A2-(4-{4-amino-1-[1 -(1//-4- imidazolylmethyl)tetrahydro-1 H-3 - pyrrolyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 - yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1H-2- indolkarboxamid
p Vs/ Η/:	N2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(2-methyl-1H-4- imidazoly l)methyl]tetrahydro-1 H-3 - pyrrolyl} -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 - yl)-2-methoxyfenyl] -1 -methyl-1H-2- indolkarboxamid

371

	7V2-[4-(4-amino-1 - {1 - [(3 -methyl-177-4- pyrazoly l)methyl]tetrahydro-177-3- pyrrolyl} -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3- yl)-2-methoxyfenyl]-1 -methyl-177-2- indolkarboxamid
í	7V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(177-4-imidazolyl)-4- piperidyl] -177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3 - yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-177-2- indolkarboxamid
	7V2-(4-{ 4-amino-1 - [ 1 -(1,3-oxazol-4-yl)-4- piperidyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 - yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-177-2- indolkarboxamid
T i?	X2-(4- {4-amino-1-(1-(1,3-thiazol-4-yl)-4piperidyl] -177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 - yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-177-2- indolkarboxamid
i	7V2-(4- { 4-amino-l- [l-( 177-2-imidazolyl)-4- piperidyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3- yl}-2-methoxyfenyl)-1-methyl-177-2- indolkarboxamid

·*· ····			99
• · ·	• · ''	'· 9	9 ·
• · ·			• ·
• · · ·			« ·
• * · ·	• · ·	• 9 9	• ·

372

	Α2-(4-{ 4-amino-l -[1 -(1,3-oxazol-2-yl)-4- piperidy 1] -1 A-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-3 - yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1A-2- indolkarboxamid
	A2-(4-{ 4-amino-l -[1 -(1,3-thiazol-2-yl)-4- piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl}-2-methoxyfényl)-1-methyl-1A-2- indolkarboxamid
	2V2-(4-{4-amino-l-(2-hydroxy-3-(4- methylpiperazino)propyl]-1 A-pyrazolo[3,4- <7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 - methyl-1 A-2-indolkarboxamid
<	A2- {4- [4-amino-l-(2-hydroxy-3 - piperidinopropyl)-1 A-pyrazolo [3,4- úQpyrimidin-3-yl]-2-methoxy feny 1}-1- methyl-1 A-2-indolkarboxamid
r- Η ⁰⁴ o. Γ χ>	A2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxy-3- morfolinopropyl)-1 A-pyrazolo [3,4- d]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl·} -1 - methyl-1 A-2-indolkarboxamid

r.

·· ···· • » · · • · · • · · · ·· ·· • · « · · • · • · ·

373

Π	A2-(4- {4-amino-1 - [2 -hydroxy-3 -(177-1-
«TrV'	imidazoly l)propyl]-1 //-pyrazolo [3,4-
	í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1 -
	methyl-1//-2-indolkarboxamid

374

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY ·€ ···< • 4

1. Sloučenina obecného vzorce (I) její racemické-diastereomemí směsi, optické izomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

Gje

Ά -M/^Z—A—Z—Z^lw kde Z¹⁰⁰ je nebo skupina případně substituovaná substituentem R i vybraná ze skupiny sestávající z alkylu, cykloalkylu, pyrrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu a ftalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinýlu, lA-imidazo[l,2-a]imidazolylu, imidazo^jl-bjfipjthiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzothienylu, furanylu, thienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzothiazolylu, thiazolylu, benzofuranylu, 2,3-dihydrobenzofuranylu, indolylu, izoxazolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrazolylu, pyrrolylu, pyrrolopyridinylu, A-pyridinonu, oxazolylu, izothiazolylu, oxadiazolylu, thiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l,2ajpyridinylu, benzoizothiazolylu, 1,1-dioxybenzoizothiazolylu, pyrido-oxazolylu, pyridothiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-thiazolylu a benzimidazolylu,

375

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Có), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO2, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný Cj-Có nebo případně substituovaný -(CH2)_n-cykloalkyl-(CH2)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo vice substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO2, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z atom^vodíku, halogenu, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyIu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluormethylkarbonylaminoskupiny, trifluormethylsulfonamidoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkenylu, substituované nebo nesubstituované aryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroaryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroarylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované arylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované alkyl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované alkyl-S-, substituované nebo nesubstituované aryl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného nebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkynylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných nebo nesubstituovaných amidoskupin, substituované nebo heteroarylthioskupiny, substituované nebo nesubstituované nesubstituované arylthioskupiny,

-Z¹⁰⁵-C(O)N(R)₂, 200

-Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z

200

-Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰,

-Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z^z% R_c a CH2OFY

376 kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRdRe, -W(CHzjt-NRdRe, -W-(CH₂),-O-alkyl , -W-(CH₂)_rS-alkyl nebo -W-(CH₂), -OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-C₆);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituované nebo nesubstituované (Cj-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)fenyl;

substituenty Rd a R« při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Rd, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí a 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂ nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Rj je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

substituent R₃ při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)alkyl a substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina; _

A je -(C_rC₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; CH₂N(C(O)OR)-;

-CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-;

-CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)C(O)-(CH₂)„N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)_n+1-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+1-C(O)-, -O(CR₂)_n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)_n-O-, -C(O)N(R)C(O); -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(0R_b)0-;

-N(R)P(O)(OR„)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)Onebo -N(C(O)R)P(OR_b)-;

• · ΦΦΦΦ • * · · · • 4 ® · · · · •φφ* φ · • · · · φφφ.φ··

377 substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor vytvářejí společně dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a R_b 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a atom dusíku společně vytvářejí substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z^no-A-Z^nl dohromady vytvářejí kovalentm vazbu; a substituent R₂ je a) atom vodíku; b) substituovaný nebo nesubstituovaný trityl; c) substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl; d) azaheteroaryl substituovaný substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem; e) azacykloalkyl, který je substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze substituovaného nebo nesubstituovaného -(Ci-Có)-alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -Ci-C6-alkyl-OR, substituované nebo nesubstituované -C(O)-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, substituované nebo nesubstituované Ci-C6-alkyl-N(R)₂, substituovaného nebo nesubstituovaného -Ci-C₆-alkyl-cykloalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného tetrahydrothienylu a substituovaného nebo nesubstituovaného tetrahydrothiopyranylu; nebo f) skupina obecného vzorce (a) kde Ei je piperidinyl, piperazinyl, imidazolyl, morfolinyl, pyrrolidinyl, aminoskupina, amidoskupina nebo tetrahydrothiazolyl, a kde E je případně substituováno jedním nebo více substituenty vybranými z -Co-Có-alkyl-OR, -Ci-C6-alkyl-C(O)OR, -Ci-Có-alkylheteroarylu, -Ci-Cé-alkyl-heterocykloalkylu a -Ci-C6-alkyl-N(R)₂.

a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, G_b J,, Li a M] jsou CR_a; nebo

378 a je O a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle cele číslo od 0 do 6;

s podmínkou, že pokud Ζ’^-Α-Ζ¹¹¹ jsou dohromady kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰není alkyl; a s podmínkou, že pokud Ζ’^-Α-Ζ¹¹¹ jsou dohromady Ci-Ce alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrólyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl.
2. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R₂ je skupina reprezentovaná následujícím obecným vzorcem:

kde:

Ei je vybráno ze skupiny sestávající z amino-Ci-Cé-alkyl-morfolinoskupiny, -piperidino-Ci-Cé-alkyl-OR, -imidazoIyl-Ci-C6alkyl-C(O)OR, -piperazino-Ci-Céalkyl-OR, -amino-Ci-Cé-alkyl-OR, -pyrrolidino-OR, - amino-Ci-Cé-alkylimidazoloskupiny, -amino-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, -amido-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, tetrahydrothiazolylu, N, A-di-(hydroxy-Ci-C6-alkyl)amino- a -piperizino-OR.
3. Sloučenina podle nároku 2, kde:

Ei je vybráno ze skupiny sestávající z
4-(2-hydroxyethyl)morfolinoskupiny, 3 -hydroxymethylpiperidinoskupiny,

2-[3-(methylkarboxy)propyl]imidizol-4-ylu, 4-(2-hydroxyethyl)piperazinoskupiny, 2-hydroxy-ethylaminoskupiny, 3-hydroxypyrrolidinoskupiny, 3-imidazolopropyl......

• · • · ·

379 aminoskupiny, 4-hydroxybutylaminoskupiny, 3-methoxypropylaminoskupiny,

3- (7V,/V-dimethylamino)propylaminoskupiny, 7V-[2-(/V,/V-dimethyl)ethyl]amidoskupiny, tetrahydrothiazolylu, A/V-di-(2-hydroxyethyl) aminoskupiny,

4- hydroxypiperizinoskupiny a 4-hydroxymethylpiperizinoskupiny.

4. Sloučenina podle nároku 2, ve které Z¹¹⁰-A-Z’ je -NHC(O)-.
5. Sloučenina podle nároku 2, ve které G je skupina reprezentovaná strukturou s následujícím obecným vzorcem
6. Sloučenina podle nároku 5, ve které G je skupina reprezentovaná strukturou s následujícím vzorcem
7. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R₂ je azaheteroaryl substituovaný s Ci-C₆ alkylem, kde alkyl je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými z RO-, -C(O)OR, -C(O)N(R)₂ a -N(R)₂.
8. Sloučenina podle nároku 7, ve které substituent R₂ je 4-(2-hydroxyethyl)pyridin-2yl, 3-aminomethylpyridin-4-yl nebo 2-methylimidazol-4-yl.
9. Sloučenina podle nároku 8, ve které G je skupina reprezentovaná strukturou s následujícím vzorcem • · · ·
10. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R₂ je pyrrolidinyl, který je substituovaný 2-methoxyethylem, W-dimethylaminomethylem, VV-dimethylamino-loxoethylem nebo 2-(V-methylamino)-l-oxopropylem.
11. Sloučenina podle nároku 10, ve které G je skupina reprezentovaná strukturou s následujícím vzorcem
12. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R₂ je piperidinyl, který je substituovaný tetrahydrothiopyranylem, tetrahydrothienylem, 2-(V-methylamino)-2methyl-l-oxopropylem, 2-methoxyethylem nebo cyklopropylmethylem.
13. Sloučenina obecného vzorce (I) její racemické-diastereomemí směsi, optické izomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

• · · ·

381 \ ¹ xh·

-K^Z—A-Z—Z¹⁰⁰

Dí

Gje kde Z¹⁰⁰ je pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-íz]pyrimidinyl, l//-imidazo[l,2-a]imidazolyl, imidazo[2,l-ů][l,3]thiazolyl, Hpyridinon, 1,1-dioxybenzoizothiazolyl, benzoizoxazolyl, alkyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, pyrrolopyridinyl nebo ^s , kde všechny shora uvedené Z¹⁰⁰ skupiny jsou případně substituovány substituentem Rj;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Cj-Có), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný Ci-C₆ nebo případně substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

__r --------každý-ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém_ výskytu nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z atom/vodíku, halogenu, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluormethylkarbonylaminoskupiny, trifluormethylsulfonamidoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkenylu, substituované nebo nesubstituované aryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroaryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroarylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované arylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované alkyl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované alkyl-S-, substituované nebo nesubstituované aryl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované heteroaryl-S(O)_p-,

382 substituovaného nebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkynylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných nebo nesubstituovaných amidoskupin, substituované nebo nesubstituované heteroarylthioskupiny, substituované nebo nesubstituované arylthioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Rc a CH₂ORc;

kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NR_<jR_e, -W(CH₂)_t-NRdRe, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_rS-alkyl nebo -W-(CH₂), -OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Cé);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituované nebo nesubstituované (Ci-Cój, substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)fenyl;

substituenty Rd a Re při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty R<j, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí a 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

_ ________W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂ nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

substituent R₃ při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)alkyl a substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

A je-(C,-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; -CH₂N(C(O)OR)-;

-CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHS0₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-;

-CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)C(O)-(CH₂)_n383

N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)„₊₁-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)„_+I-C(O)-, -O-(CR₂)_n+i0-, -N(C(O)R)S(O)p-; -N(R)S(0)_pN(R)-; -N(R)-C(0)(CH₂)„-0-, -C(0)N(R)C(0)-;

-S(0)_pN(R)C(0)-; -0S(0)_pN(R)-; -N(R)S(0)_p0-; -N(R)S(0)_pC(0)-; -S0_pN(C(0)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR„)O-; -N(R)P(0R_b)-; -N(R)P(0)(0R_b)0-;

-N(R)P(0)(0R_b)-; -N(C(0)R)P(0R_b)0-; -N(C(0)R)P(0R_b)-; -N(C(0)R)P(0)(0Rb)0nebo-NCCCOjRjPCORb)-;

substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor vytvářejí dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a Rb společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a atom dusíku společně vytvářejí substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z¹¹ °-A-Z¹¹¹ dohromady vytvářej i kovalentní vazbu; a substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce-Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-Có)-, -(Ci-Cé)- -0-, -(Ci-Cé)- -C(0)-, -(Ci-Cé)C(O)O-, -(Ci-C₆)-C(0)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N(Ci-C6)- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná eykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaný nebo nesubstituovaný, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více substituentů každý nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogenu, substituované nebo nesubstituované (Cj-Cé), substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -C(O)-alkylu, substituované nebo • · ·

384 nesubstituovaná alkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-OR, substituované nebo nesubstituované -N((Ci-C6)-OR)₂, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Ce)-OR, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)N(R)₂, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituované nebo nesubstituované sulfonamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované ureidoskupiny, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované N(R)-(Ci-C6)-0R, oxoskupiny a nasycené, nenasycené nebo aromatické, substituované nebo nesubstituované heterocyklické skupiny obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z N, O, a S; kde atomy dusíku uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroaryl em, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-C6)-N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo substituent R₂je skupina obecného vzorce -B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aikyien, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cój-azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo ·· ····

385 nesubstituovaný aryl-N(R)~(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(CiCď)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná nesubstituovaná nesubstituovaná nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly D_b Gj, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Dj, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent Ra má shora defino vaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s podmínkou, že pokud A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, pak Z¹⁰⁰ není alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl nebo pyrrolidinyl;

s podmínkou, že pokud Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, pak A není alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- nebo C(0)0-;

• · · • · e · · «· ··

386 s podmínkou, že pokud Z¹’θ-Α-Ζ¹¹¹ jsou dohromady kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰není alkyl;

s podmínkou, že pokud Z^il0-A-Z’” jsou dohromady Cj-Có alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl; a s podmínkou, že pokud R₂ je substituovaný nebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba, pak A není -0-, -C(0)0- nebo -N(R)-.
14. Sloučenina podle nároku 13, ve které Z¹⁰⁰ je 2-pyrrolidinyl, l,2-dihydro-2oxopyridin-3-yl, benzoizoxazol-3-yl, l,l-dioxybenzoizothiazol-3-yl, imidazo[l,2íz]pyridin-2-yl nebo cyklohexyl.

a substituent R₂ je 4-(4-methylpiperazino)
15. Sloučenina podle nároku 14, ve které Z”°-A-Z’” je-NH-.
16. Sloučenina podle nároku 13, ve které Z¹⁰⁰ je pyrrolopyridinyl vybraný z
17. Sloučenina podle nároku 16, ve které Z¹ ’θ-Α-Ζ¹¹¹ je NHC(O)-.
18. Sloučenina podle nároku 17, ve které substituent R₂ je piperdin-4-yl, V-methylpiperidin-4-yl, V-(prop-2-yl)piperidin-4-yl, V-(imidazol-4-yl-methyl)piperidin-4• ·

387 yl, A-(2-methylimidazol-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, 7V-(pyrazol-4-yl-methyl)piperidin-4yl, 7V-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl, 7V-(fur-3-yl-methyl)piperidin-4-yl,

A-(tetrahydropyran-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, 7V-(pyrrol-2-yl-methyl)piperidin-4-yl nebo jV-(2-difluorethyl)piperidin-4-yl.
19. Sloučenina obecného vzorce (I) (D její racemické-diastereomemí směsi, optické izomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

•Gí=q.)_a

Gje ^{x a} ^DC¹ /£ \\ 10_A _lll„100

M, Z—A—Z—Z //' . .....” -- ^f/ 2 _z(J₂)_b nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny sestávající z alkylu, cykloalkylu, pyrrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinylu, 1//imidazo[l,2-a]imidazolylu, imidazo[2,l-Z?][1.3]thiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzothienylu, furanylu, thienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzothiazolylu, kde Z¹⁰⁰ je , N ₅ ^s , thiazolylu, benzofuranylu,

2,3-dihydrobenzofuranylu, indolylu, izoxazolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrazolylu, pyrrolylu, pyrrolopyridinylu, //-pyridinonu, oxazolylu, izothiazolylu, oxadiazolylu, thiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l,2-

388

a]pyridinylu, benzoizothiazolylu, 1,1-dioxybenzoizothiazolylu, pyrido-oxazolylu, pyridothiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-thiazolylu a benzimidazolylu;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Cé), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Ci-Cé) nebo případně substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

každý ze substituentů substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z atomu vodíku, C(O)0arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)heteroarylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylu, substituované nebo nesubstituované , beteroarylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované arylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované alkyl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované alkyl-S-, substituované nebo nesubstituované arylS(O)_P-, substituované nebo nesubstituované heteroaryl-S(O)_p-, a kde alespoň jeden ze ___substituentů R_? a Ri není atom vodíku;

substituent R3 při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aíkoxyskupina;

A je-(Ci-C₆)-,-O-;-S-;-S(O)_P-;-N(R)-;-N(C(O)OR)-;-N(C(O)R)-;-N(SO₂R)-; -CH2O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R)); -CH₂N(C(O)OR)-;

-CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)_n-N(R)-,

-N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)_n+r-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+1-C(O)-, -O-(CR₂)„₊i-O-, -N(C(O)R)S(O)p-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)„-O-, -C(O)N(R)C(O)-;

-S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-;

·· ···· • ·

389

-N(R)SO_PN(R)-; -C(0)0-; -N(R)P(ORb)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-;

-N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)Onebo - N(C(O)R)P(OR„)-;

kde substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2;

nebo ve skupině obsahující fosfor vytvářejí dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a Rt, společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO2 a substituenty R, R_a a atom dusíku společně vytvářejí substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z¹ ’θ-Α-Ζ¹¹¹ dohromady vytvářejí kovalentní vazbu; a substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-Cé)-, -(Ci-Có)- -0-, -(Ci-Cé)- -C(0)-, -(Ci-Cé)*C(0)0-, -(C]-C6)-C(0)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N(Ci-C6)- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více substituentů každý nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogenu, substituované nebo nesubstituované (Ci-Có), substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -C(O)alkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituované nebo nesubstituované -N((Ci-C6)-OR)₂, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(C]-C6)-C(O)₂R, substituované nebo nesubstituované ·· ···· • · · ·· ··

390

-(Ci-Cé)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituované nebo nesubstituovaná -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Cé)N(R)₂, substituované nebo nesubstituovaná -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituované nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované ureidoskupiny, substituované nebo nesubstituovaná karboxamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-Ce)-OR, oxoskupiny a nasycené, nenasycené nebo aromatické, substituované nebo nesubstituované heterocyklické skupiny obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z N, O a S; kde atomy dusíku uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-C6)-N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem,

-C(O)heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylóvou skupinou nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo

R₂ je skupina obecného vzorce -B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Céj-azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(C]-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(CiCé)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C₆)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cé)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)·· »··· » · · » » · » · · *

391

N(R)^:, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, L,i a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Dj, Gj, L,i a Mi je NRa, jeden ze symbolů Dj, Gi, Li a Mi je CRa a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_amá shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou CRa; nebo ___________b je 0 a jeden ze symbolů D?, G?, L? a M? je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ nesubstituovaná nesubstituovaná je CRg a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent Ra má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s podmínkou, že pokud A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyioxytetrahydroíur-2-yl, pak Z¹⁰⁰ není alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl nebo pyrrolidinyl;

s podmínkou, že pokud Z¹⁰⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, pak A není alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- nebo -C(0)0-;

s podmínkou, že pokud Z¹¹⁰-A-Zⁿⁱ jsou dohromady kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰není alkyl;

·· ··· • · • · · • · · · • · · · ·· ··

392 s podmínkou, že pokud Z¹¹⁰-A-Zⁱⁿ jsou dohromady Ci-Céalkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridirtyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl; a s podmínkou, že pokud substituent R₂ je substituovaný nebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba, pak A není-0-,-C(O)O-nebo-N(R)-.
20. Sloučenina obecného vzorce (I)

Φ její racemické-diastereomemí směsi, optické izomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléěiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

Gje

D,<?1 /,^L>

λ

M, Z—A—Z—Z

1 ll„100 kde Z¹⁰⁰ je

A ^U 2 _z(J₂)_bMFY nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny sestávající z alkylu, cykloalkylu, pyrrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinylu, l//-imidazo[l,2-«]imidazolylu, imidazo[2,l-6][1.3]thiazolylu, nafitylu, tetrahydronafíylu, benzothienylu, furanylu, thienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzothiazolylu,

N , TT N , S — , thiazolylu, benzofuranylu,

2,3-dihydrobenzofiiranylu, indolylu, izoxazolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydroíuranylu, piperidinylu, pyrazolylu, pyrrolylu, pyrrolopyridinylu, M-pyridinonu, oxazolylu,

9 9

393 izothiazolylu, oxadiazolylu, thiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l,2ajpyridinylu, benzoizothiazolylu, 1,1-dioxybenzoizothiazolylu, pyrido-oxazolylu, pyridothiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-thiazolylu a benzimidazolylu;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Có), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituovaná aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Ci-C₆) nebo případně substituovaný -(CH₂)n-cykloalkyl-(CH₂)_n; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituovaná aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

každý ze substituentů Ra a Ri představuje jeden nebo více substituentů při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluormethylkarbonylaminoskupiny, trifluormetbylsulfonamidoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkenylu, substituované nebo nesubstituované aryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroaryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroarylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované arylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované aikyi-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované alkyl-S-, substituované nebo nesubstituované aryl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného nebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkynylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných nebo nesubstituovaných amidoskupin, substituované · nebo nesubstituované heteroarylthioskupiny, substituované nebo nesubstituované • « .«

394 arylthioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰,

-Z^10S-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Rc a CHzORc;

kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný, nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRdRe, -W-(CH₂)tNR_dR_e, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_rS-alkyl nebo -W-(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Cé);

Z²⁰⁰ je při každém výskytu nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný

-(C|-C₆)-fenyl;

substituenty Rd a R« jsou při každém výskytu nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Ra, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, společně vytvářejí 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂ nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

substituent R3 při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituované alkoxyskupina;

A je-(Ci-Cé)-;

substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl; pjelnebo2;

substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C₆)-, -(C_rC₆)- -0-, -(Ci-C₆)- -C(0)-, -(Ci-C₆)- C(0)0-, -(Ci-C6)-C(0)-NH-, -(Ci-C6)-C(Ó)-N(Ci-C6)- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo

395 nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více substituentů každý nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogenu, substituované nebo nesubstituované (Ci-Có), substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -C(O)-alkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-Cé)-OR, substituované nebo nesubstituované -N((Ci-C6)-OR)₂, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-Ci)-C(O)₂R, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)N(R)₂, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituované nebo nesubstituované sulfonamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované ureidoskupiny, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-OR, oxoskupiny a nasycené, nenasycené nebo aromatické, substituované nebo nesubstituované heterocyklické skupiny obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z N, O a S; kde atomy dusíku uvedené heterocyklické . skupiny _ nebo. heterobicyklické skupiny j sou nezávisle ..případně, .substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-C6)-N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo substituent R₂ je skupina obecného vzorce-B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný

396 aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Céj-azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(CiCé)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný ary lkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná _ nebo nebo nebo nesubstituovaná nesubstituovaná nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly Di, Gi, Jj, Lj a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Dj, Gi, Ji, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CRa a N, kde substituent Ra má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ je CRg a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a

397 n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od O do 6;

s podmínkou, že pokud Z¹’θ-Α-Ζ¹¹¹ jsou dohromady Ci-Cóalkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl.
21. Sloučenina obecného vzorce (I) (I) její racemické-diastereomemí směsi, optické izomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

Gje

D'* 1

A Y4Q

M, Z—A

-z—z¹⁰⁰ ~ ............/r $.....~.........-..........—¹.........................~

A ² /^(J^ kde Z¹⁰⁰ je Y nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny sestávající z pyrrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l,2-íz]pyrimidinylu, lV-imidazo[l,2-a]imidazolylu, imidazo[2,l-b][1.3]thiazolylu, naftylu, tetrahydronafitylu, benzothienylu, furanylu, thienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzothiazolylu,

W CO cx>

N , N _# S _s thiazolylu, benzofuranylu,

2,3-dihydrobenzofuranylu, indolylu, izoxazolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydroíuranylu, piperidinylu, pyrazolylu, pyrrolylu, pyrrolopyridinylu, V-pyridinonu, oxazolylu, izothiazolylu, oxadiazolylu, thiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l,2-

398 ajpyridinylu, benzoizothiazolylu, 1,1-dioxybenzoizothiazolylu, pyrido-oxazolylu, pyridothiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-thiazolylu a benzimidazolylu;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, -CŇ, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluormethylkarbonylaminoskupiny, trifluormethylsulfonamidoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkenylu, substituované nebo nesubstituované aryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroaryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroarylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované arylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované alkyl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované alkyl-S-, substituované nebo nesubstituované aryl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného nebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného Cykloalkylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkynylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných nebo nesubstituovaných amidoskupin, substituované nebo nesubstituované heteroarylthioskupiny, substituované nebo nesubstituované arylthioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Rc a CH₂OR_ť;

kde substituent R« při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRdRe, -W(CH₂)_t-NRdRe,-W-(CH₂),-O-alkyl,-W-(CH₂),-S-alkyl nebo-W(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Ce);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cé), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)-fenyl;

• · • · * · ···« · · · ···· tt «.· ··*' ··· · 9 ··

399 substituenty Rj a Ιζ jsou při každém výskytu nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty R<j, R^ a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, společně vytvářejí 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂ nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Rj je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

substituent R₃ při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)alkyl a substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2;

Z¹¹⁰-A-Zⁿⁱ dohromady vytvářejí kovalentní vazbu; a substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce-Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)- -0-, -(Ci-Ce)- -C(0)-, -(Ci-C₆)C(O)O-, -(Ci-C6)-C(0)-NH-, -(Ci-Cé)-C(0)-N(Ci-C6)- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více substituentů každý nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogenu, substituované nebo nesubstituované (Ci-Cé), substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -C(O)alkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované • ·

400

-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituované nebo nesubstituované -N((Ci-C6)-OR)2, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituované nebo unsubstituované -(CiC6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituované nebo nesubstituované sulfonamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované ureidoskupiny, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)OR, oxoskupiny a nasycené, nenasycené nebo aromatické, substituované nebo nesubstituované heterocyklické skupiny obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z N, O a S; kde atomy dusíku uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-C6)N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou ary laiky lovou skupinou nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo substituent R₂ je skupina obecného vzorce-B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alky len, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cój-azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(C]-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci401

Có)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C₆)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-Có)N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná nesubstituovaná nesubstituovaná nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, L_r a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D_b Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů D_r, Gi,Li aMi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CRa a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou

CR_a;nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NRa, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CRa a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6,
22. Sloučenina obecného vzorce (I)

402 její racemické-diastereomemí směsi, optické izomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

Gje

100 kde Z¹⁰⁰ je nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny sestávající z alkylu, cykloalkylu, pyrrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, fitalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinylu, 177imidazo[l,2-a]imidazolylu, imidazo[2,l-7][l,3]thiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu,

- benzothienylu, furanylu, thienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazol ylu, benzothiazolylu,-----------

2,3-dihydrobenzofuranylu, indolylu, izoxazolylu, tetrahydropýranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrazolylu, pyrrolylu, pyrrolopyridinylu, 77-pyridinonu, oxazolylu, izothiazolylu, oxadiazolylu, thiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l,2tfjpyridinylu, benzoizothiazolylu, 1,1-dioxybenzoizothiazolylu, pyrido-oxazolylu, pyridothiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-thiazolylu a benzimidazolylu;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Có), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

403 ··· «··

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Ci-Có) nebo případně substituovaný -(CH₂)n-cykloalkyl-(CH₂)n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluormethylkarbonylaminoskupiny, trifluormethylsulfonamidoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkenylu, substituované nebo nesubstituované aryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroaryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované hetefoarylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované arylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované alkyl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované alkyl-S-, substituované nebo nesubstituované aryl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného nebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkynylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných nebo nesubstituo váných amidoskupin, substituované nebo nesuosuiuovane i--.*.________ixi_:~_i____ ne icruoi y i unu sKupniy, substituováno

UObv ♦5 aci jiriT roná ilVdUUOlilUV VtUlV r!05

105 z200 arylthioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z^iU5-N(R)-C(0)-Z, -Z^1U3-N(R)-S(O)2-Z^2UU, -Z^1W-N(R)C(O)-N(R)-Z²⁰⁽⁾, Rc a CH₂0Rc;

kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRdRe, -W(CH₂)_t-NRdRe, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl nebo -W-(CH₂)_t-0H; Z¹⁰⁵ při každém výskytu j e nezávisle kovalentní vazba nebo (C i -Cé);

• · · · · · ♦· · • · · · · · • · · • · ♦ • · · · ·· · • · · ··· • · · · • · · ·.

404

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cé), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(C]-C₆)-fenyl;

substituenty Rd a Re jsou při každém výskytu nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Rd, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, společně vytvářejí společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂ nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

substituent R3 při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný-C(O)-heteroaryl,

A je -(Ci-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R)); -CH₂N(C(O)OR)-;

-CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -ČH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-;

-C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)_n-N(R)-,

-N(R)C(O)-O-; -N(R)-(CH₂)_nn-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+i-C(O)-, -O-(CR₂)_n+i-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(ORb)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-;

-N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(ORb)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)Onebo -N(C(O)R)P(OR_b)-;

kde substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2;

405 nebo ve skupině obsahující fosfor vytvářejí dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a substituent Rb společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO2 a substituenty R, R_a a atom dusíku společně vytvářejí substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z¹’θ-Α-Ζ¹¹¹ dohromady vytvářejí kovalentní vazbu; a substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-Có)- -0-, -(Ci-Cé)- -C(O)-, -(Ci-Có)C(O)O-, -(C|-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N(Ci-C6)- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více substituentů každý nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogenu, substituované nebo nesubstituované (Cj-Có), substituovaného nebo nesubstituováného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -C(O)alkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituované nebo nesubstituované -N((Ci-C6)-OR)₂, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)κ τζη\ substituované nebo nesubstituované .(C--f'' wnwn?ur. _r v ^07 ^07 ‘'V* substituované nebo nesubstituované sulfonamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované ureidoskupiny, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-OR, oxoskupiny a nasycené, nenasycené nebo aromatické, substituované nebo nesubstituované heterocyklické skupiny obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z N, O a S; kde atomy dusíku uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo ⁴⁰⁶ nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)-(C]-C6)-N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo substituent R₂ je skupina obecného vzorce-B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cé)-azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný ažacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(C]-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(CiCó)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heíeroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná nesubstituovaná nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

407 a je 1 a symboly D_b G_b J_b Lj a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D_b G_b J_b Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů D_b G_b Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů D_b G_b Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou CR_a; nebo b j e 0 a j eden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ j e NRa, j eden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s podmínkou, že pokud A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, pak Z¹⁰⁰ není alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl nebo pyrrolidinyl;

s podmínkou, že pokud Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, pak A není alkyl, -0-, -C(O), -NHC(O)- nebo -c(0)0-;...........................li................. . _.....

s podmínkou, že pokud Z¹¹⁰-A-Z^HI jsou dohromady kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰není alkyl;

s podmínkou, že pokud Z¹¹⁰-A-Zⁱⁿ jsou dohromady Ci-C₆ alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl; a s podmínkou, že pokud substituent R₂ je substituovaný nebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba, pak A není -0-, -C(0)0- nebo -N(R)-.
23. Sloučenina obecného vzorce (I) její racemické-diastereomemí směsi, optické izomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

Gje ^DZ? 1 X,

-M/^z—^A~^z—z¹⁰⁰

Dr+G, #²

Λ ² /^JA kde Z¹⁰⁰ je nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny sestávající z alkylu, cykloalkylu, pyrrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l,2-íz]pyrimidinylu, l#-imidazo[l,2-a]imidazolylu, imidazo[2,l-b][l,3]thiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzothienylu, furanylu, thienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazoly lu, benzothiazolylu,-------------thiazolylu, benzofuranylu,

2,3-dihydrobenzofuranylu, indolylu, izoxazolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrazolylu, pyrrolylu, pyrrólopyridinylu, 77-pyridinonu, oxazolylu, izothiazolylu, oxadiazolylu, thiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l,2ajpyridinylu, benzoizothiazolylu, 1,1-dioxybenzoizothiazolylu, pyrido-oxazolylu, pyridothiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-thiazolylu a benzimidazolylu;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Có), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu,

CN, OH, halogenu, NO₂, CÓOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

409

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Cj-Có) nebo případně substituovaný -(CH2)_n-cykloalkyl-(CH2)„-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluormethylkarbonylaminoskupiny, trifluormethylsulfonamidoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkenylu, substituované nebo nesubstituované aryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroaryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroarylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované arylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované alkyl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované alkyl-S-, substituované nebo nesubstituované aryl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného nebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkynylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných nebo nesubstituovaných amidoskupin, substituované nebo nesubstituované heteroaryithioskupiny, substituované nebo nesubstituované arylthioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Rc a CH2OR_c;

kde substituent R<; při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NR<iRe, -W-(CH₂)_rNR_dR_e, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl nebo -W(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Có);

410

Ζ^2θθ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Cj-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný

-(Ci-C₆)-fenyl;

substituenty R<j a Re jsou při každém výskytu nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty 1%, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, společně vytvářejí společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂ nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

substituent R₃ při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo ‘ substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxy skupina;

A je -(Ci-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R)); -CH₂N(C(O)OR)-;

-CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CI1=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-;

-C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)„-N(R)-,

-N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)_n+i-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+1-C(O)-, -O-(CR₂)_n+i-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)„-O-, -C(O)N(R)C(O)-; S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(ORb)O-; -N(R)P(ORb)-; -N(R)r(G)(OR_b)O-;

-N(R)P(O)(QRb)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(ORb)Onebo -N(C(O)R)P(ORb)-;

kde substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent Ri, při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

·· ···· 9 9

9 9 9 99 99 • 9 9 9 · • · 9 9 9 9

9 9 9 9 .9 ·

99 99 999 999

411 p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor vytvářejí dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a substituent Rb společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a atom dusíku společně vytvářejí substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z¹¹⁰-A-Zⁱⁿ dohromady vytvářejí kovalentní vazbu; a substituent R₂ je skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-Có)-, -(Ci-Có)- -Q-, -(Ci-Có)- -C(O)-,

-(Ci-Có)- -C(O)O-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N(Ci-C6)- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, kde uvedený substituovaný cykloalkenyl má jeden nebo více substituentů každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogenu, substituované nebo nesubstituované (Cj-Ce), substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -C(O)-alkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituované nebo nesubstituované -N((Ci-C6)-OR)₂, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C₆)-C(O)₂R, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituované nebo nesubstituované sulfonamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované ureidoskupiny, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-Có)-OR, oxoskupiny a nasycené, nenasycené nebo aromatické, substituované nebo nesubstituované heterocyklické skupiny obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z N, O a S; kde atomy dusíku uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituováným ary lem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-Có)N(R)₂, -C(O)alkylem, -C(0)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo

ΦΦ φφφφ • · · φφφ φφ ···· φ φφφ φφ φ φ φ φ φ φ φφ φφ

412 nesubstituovanou arylalkylovou skupinou nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem;

a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů D,, Gi, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NRa, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CRg a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent Ra má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6.
24. Sloučenina obecného vzorce (I)

Ν' \

r₂ (D její racemické-diastereomemi směsi, optické izomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

R.

Gje

413' kde Ζ^1θθ je dAg

2 ,σ₂)„ nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny sestávající z alkylu, cykloalkylu, pyrrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, fitalazinylu, imidazo[l,2-fl]pyrimidinylu, l//-imidazo[l,2-a]imidazolylu, imidazoPJ-ůjflYjthiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzothienylu, furanylu, thienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzothiazolylu,

N- thiazolylu, benzofuranylu, 2,3-dihy drobenzofuranylu, indolylu, izoxazolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrazolylu, pyrrolylu, pyrrolopyridinylu, //-pyridinonu, oxazolylu, izothiazolylu, oxadiazolylu, thiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l,2ajpyridinylu, benzoizothiazolylu, 1,1-dioxybenzoizothiazolylu, pyrido-oxazolylu, pyridothiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-thiazolylu a benzimidazolylu;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Có), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Ci-Cď) nebo případně substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající z alkylu, CN, OH, halogenu, NO₂, COOH, substituované nebo nesubstituované aminosKupiny a substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluormethylkarbonylaminoskupiny, trifluormethylsulfonamidoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo

414 nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkenylu, substituované nebo nesubstituované aryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroaryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroarylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované arylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované alkyl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované alkyl-S-, substituované nebo nesubstituované aryl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného nebo nesubstituovaného. arylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkynylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných nebo nesubstituovaných amidoskupin, substituované nebo heteroarylthioskupiny, substituované nebo nesubstituované nesubstituované arylthioskupiny,

-Z¹⁰⁵-C(O)N(R)₂,

-Z¹⁰⁵-N(R)-C(0)-Z²⁰⁰,

-Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)₂-Z

200

-Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Re a CH₂ORe;

kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRdRe, -W-(CH₂)_rNRdRe, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl nebo -W(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Có);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)-fenyl;

substituenty Rd a Re jsou při každém výskytu nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Rd, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, společně vytvářejí společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂ nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Rj je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

substituent R₃ při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl nebo substituovaný nebo

415 nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

A je -(C_rC₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R)); -CH₂N(C(O)OR)-;

-CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; •C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)„-N(R)-,

-N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)_n+1-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; O-(CR₂)_n+i-C(O)-, -O-(CR₂)„_+rO-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)„-O-, -C(O)N(R)C(O)-;

-S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(ORb)O-;

-N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(ORb)Onebo - N(C(O)R)P(OR_b)-;

kde substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor vytvářejí dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a substituent R_b společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a atom dusíku společně vytvářejí substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z¹¹ °-A-Z¹¹¹ dohromady vytvářej i kovalentní vazbu; a substituent R₂ je skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-Có)-, -(Gj-Cé)- -0-, -(Ci-C₆)- -C(O)-, -(Ci-Có)C(G)O-, -(Ci-C6)-C(0)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N(Ci-C6)- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je substituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedená substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více

416 substituentů každý nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z nitroskupiny, halogenu, substituované nebo nesubstituované (Ci-Cé), substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -C(O)alkylu, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(C]-C6)-0R, substituované nebo nesubstituované -N((Cj-C6)-OR)₂, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(C]-C6)-C(O)₂R, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituované nebo nesubstituované -(Ci-Có)N(R)-(Ci-C₆)-N(R)₂, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C₆)-C(O)N(R)-(Ci-C6)N(R)₂, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-Ce)-OR a substituované nebo nesubstituované heterocyklické skupiny obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z O a S; kde atomy dusíku uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-Có)N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem;

a je 1 a symboly Di, Gi, J_t, L_r a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Dj, Gi, Ji, Li a Mi jsou CRa; nebo_______________________ ____ _______ ______ ______ ___ aje 0 a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů D], Gj, Li aM] je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, C₂, J₂, L₂ a M₂ jsou CR_a;nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent Ra má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s podmínkou, že pokud A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, pak Z¹⁰⁰ není alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl nebo pyrrolidinyl;

• · · · · · ··· ·· ·· · · > · · · · ·

417 s podmínkou, že pokud Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, pak A není alkyl, -0-, -C(O)-, -NHC(O)- nebo -C(0)0'-;

s podmínkou, že pokud Z¹’θ-Α-Ζ¹¹¹ jsou dohromady kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰není alkyl; a s podmínkou, že pokud Ζ’^-Α-Ζ¹” jsou dohromady Ci-Có-alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl.
25. Způsob inhibice jedné nebo více aktivit proteinkináz u pacienta, vyznačuj ící se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1, 13, 19, 20, 21, 22, 23 nebo 24 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
26. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že daná proteinkináza je vybrána ze skupiny sestávající z KDR, FGFR-1, PDGFRft, PDGFRa, IGF-1R, cMet, Fit-1, Flt-4, TIE-2, TIE-1, Lek, Src, fyn, Lyn, Blk, hek, fgr a yes.
27. Způsob ovlivnění hyperproliferačních poruch u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1, 13, 19, 20, 21, 22, 23 nebo 24 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
28. Způsob ovlivnění angiogeneze u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny poule nároku 1, 13, 19, 20, 21, 22, 23 nebo 24 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nébo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
29. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že proteinkináza je proteinová serin/threonin-kináza nebo proteinová tyrosinkináza.
30. Způsob léčení jednoho nebo více ulkusů u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1, 13, 19,

418

20, 21, 22, 23 nebo 24 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
31. Způsob podle nároku 30, vyznačující se tím, že ulkus nebo ulkusy jsou způsobeny bakteriální nebo plísňovou infekcí; nebo ulkus nebo ulkusy jsou Moorenovy ulkusy; nebo ulkus nebo ulkusy jsou symptomy ulcerativní kolitidy.
32. Způsob léčení onemocnění u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podáni terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1, 13, 19, 20, 21, 22, 23 nebo 24 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi, přičemž dané onemocnění je onemocnění očí, kardiovaskulární onemocnění, rakovina, syndrom Crow-Fukase (POEMS), diabetické onemocnění, srpkovitá anémie, chronický zánět, systémový lupus, glomerulonefritida, synovitida, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnova nemoc, glomerulonefritida, revmatoidní artritida, osteoartritida, roztroušená skleróza, rejekce štěpu, Lymská nemoc, sepse, von Hippel-Lindauova nemoc, pemfigoid, psoriáza, Pagetova nemoc, polycystické ledvinové onemocnění, fibróza, sarkoidóza, cirhóza, tyreoiditida, hyperviskózní syndrom, Osler-Weber-Renduova nemoc, chronické okluzní onemocnění plic, astma nebo edém po popáleninách, ________ traumatu, ozáření, mrtvice,_hypoxie nebo —ischémie,- syndrom ovariální hyperstimulace, preeklampsie, menometroragie, endometrióza nebo infekce Herpes simplex, Herpes Zoster, virusem způsobujícím syndrom získaného selhání imunity, Parapoxvirusem, protozoem nebo toxoplazmózou.
33. Způsob podle nároku 32, vyznačující se tím, že onemocnění očí je okulámí nebo makulámí edém, okulámí neovaskulámí onemocnění, skleritida, radiální keratotomie, uveitida, vitritida, myopie, fyziologická exkavace papily, chronické odchlípení sítnice, komplikace po léčení laserem, konjunktivitida, Stargardtova nemoc a Ealesova nemoc, retinopatie a makulámí degenerace.
34. Způsob podle nároku 32, vyznačující se tím, že kardiovaskulární onemocnění je ateroskleróza, restenóza, ischémie/reperfuzní poškození, vaskulámí okluze nebo karotické obstruktivní onemocnění.

419
35. Způsob podle nároku 32, vyznačující se tím, že rakovina je pevný nádor, sarkom, fibrosarkom, osteom, melanom, retinoblastom, rabdomyosarkom, glioblastom, neuroblastom, teratokarcinom, hematopoetické zhoubné bujení, Kaposiho sarkom, Hodgkinova nemoc, lymfom, myelom, leukémie nebo maligní ascites.
36. Způsob podle nároku 32, vyznačující se tím, že diabetické onemocnění je na inzulínu závisející diabetes mellitus s glaukomem, diabetická retinopatie nebo mikroangiopatie.
37. Způsob snížení fertility u pacienta, vyznačující se tím, že daný způsob zahrnuje krok, ve kterém dochází k podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1, 13, 19, 20, 21, 22, 23 nebo 24 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivního metabolitů pacientovi.
38. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že sloučenina nebo její fyziologicky přijatelná sůl, proléčivo nebo biologicky aktivní metabolit je podávána v množství, které má na angiogenezi nebo vaskulogenezi podpůrný účinek.
39. Způsob podle nároku 26, vyznačující se tím, že proteinkinázaje Tie-2.
40. Způsob podle nároku 38, vyznačující se tím, že sloučenina obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelná sůl, proléčivo nebo biologicky aktivní metabolit je podávána v kombinaci s proangiogenním růstovým faktorem.
41. Způsob podle nároku 40, vyznačující se tím, že proangiogenní růstový faktor je vybrán ze skupiny sestávající z VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF-2, jejich deriváty a antijodotypické protilátky.
42. Způsob podle nároku 38, vyznačující se tím, že pacient trpí anémií, ischémií, infarktem, rejekcí transplantátu, zraněním, gangrénou nebo nekrózou.

• · · ·

420
43. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že aktivita proteinkinázy se podílí na aktivaci T-buněk, aktivaci B-buněk, degranulaci žímých buněk, aktivaci monocytu, potenciaci zánětlivé odpovědi nebo jejich kombinaci.
44. Způsob přípravy 4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-ylového meziproduktu reprezentovaného následujícím obecným vzorcem:

kde:

d₂4g

J/ \ ² /

Z¹⁰⁰ je

2 ,(J₂)_b nebo skupina případně substituovaná substítuentem Ri vybraná ze skupiny sestávající z alkylu, cykloalkylu, pyrrolidinylu, chinolinylu, chinoxaíinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinylu, 177-imidazo[l,2-a]imidazolylu, imidazo[2,l-ů][l_z3]thiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzothienylu, íuranylu, thienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzothiazolylu, ^N , S' _s thiazolylu, benzofuranylu,

2,3-dihydrobenzofuranylu, indolylu, izoxazolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrazolylu, pyrrolylu, pyrrolopyridinylu, //-pyridinonu, oxazolylu, izothiazolylu, oxadiazolylu, thiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l,2-

421 rz]pyridinylu, benzoizothiazolylu, 1,1-dioxybenzo izothiazoly lu, pyrido-oxazolylu, pyridothiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-thiazolylu a benzimidazolylu;

substituenty Rg a Ri představují jeden nebo více substituentů při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituované nebo nesubstituovaná karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluormethylkarbonylaminoskupiny, trifluormethylsulfonamidoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkenylu, substituované nebo nesubstituované aryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroaryloxyskupiny, substituované nebo nesubstituované heteroarylalkoxy skupiny, substituované nebo nesubstituované arylalkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované alkyl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované alkyl-S-, substituované nebo nesubstituované aryl-S(O)_p-, substituované nebo nesubstituované heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného nebo nesubstituovaného ary laiky lu, substituovaného nebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného alkynylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných nebo nesubstituováných amidoskupin, substituované nebo nesubstituované heteřoarylthioskupiny, substituované nebo nesubstituované aryfthioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Rc a CH₂OR_c;

kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NR_dR_í, -W-(CH₂)_t-NR_dRc, -W-(CH₂),-O-alkyl, -W-(CH₂)_rS-alkyl nebo -W-(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Cí-Cé);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (C]-Cé), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)-fenyl;

substituenty R<j a Re jsou při každém výskytu nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty R<i, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, společně vytvářejí společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

422 t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂ nebo NRf, kde substituent R_fpři každém vyskytuje nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Rj je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2; a substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; a b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou CRa; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je ČR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

vyznačující se tím, že zahrnuje krok, ve kterém dochází kreakci v přítomnosti aprotické báze a chloridu kyseliny následujícího obecného vzorce:

O s (4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolanyl)anilinem reprezentovaným následujícím obecným vzorcem:

za vzniku 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového meziproduktu.

423
45. Způsob podle nároku 44, vyznačující se tím, že dále zahrnuje krok, ve kterém dochází k reakci 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového meziproduktu v přítomnosti tetrakis(trifenylfosfin)palladia a uhličitanu sodného s 3 jod-lA-pyrazolo[3,4č/]pyrimidinem reprezentovaným následujícím obecným vzorcem:

kde:

substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce-Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-Ce)-, -(Ci-Có)- -0-, -(Ci-Có)- -C(0)-, -(Ci-Có)C(0)0-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N(Ci-C6)- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo — nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená----- nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloaikyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více substituentů každý nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogenu, substituované nebo nesubstituované (Ci-Ce), substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného -C(O)alkylu, substituované nebo nesubstituované alkoxyskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituované nebo nesubstituované -N((Ci-Cé)-OR)₂, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)N(R)₂, substituované nebo nesubstituované -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituované nebo nesubstituované sulfonamidoskupiny, substituované nebo nesubstituované ureidoskupiny, substituované nebo nesubstituované karboxamidoskupiny, ·· ····

424 substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované -N(R)-(Ci-C6)-0R, oxoskupiny a nasycené, nenasycené nebo aromatické, substituované nebo nesubstituované heterocyklické skupiny obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z N, O a S; kde atomy dusíku uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou nebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroary laiky lem; nebo substituent R₂ je skupina obecného vzorce-B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cój-azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykioalkylsuifonyi, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(CiCe)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-Có)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(C]-Có)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo heteroarylalkyl, nesubstituovaná nesubstituovaná nesubstituovaná nesubstituovaná ·· ···· · · ·· ···· . · · · · · · · · · · ·· · * · · · ♦ ··' ·· · · · · · · • · · · • · . · ·

425 nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl; a substituent R₃ při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

za vzniku sloučeniny reprezentované následujícím obecným vzorcem:
46. Způsob podle nároku 45, vyznačující se tím, že dále zahrnuje krok, ve kterém dochází k reakci karboxylové kyseliny reprezentované následujícím obecným vzorcem:

O s oxalylchloridem a aprotickou bází za vzniku chloridu kyseliny reprezentované následujícím obecným vzorcem:

426
47. Způsob podle nároku 44, 45 nebo 46, vyznačující se tím, že Z¹⁰⁰ je indoly 1, který je případně substituovaný substituentem R_b
48. Způsob podle nároku 47, vyznačuj ící se tím, že Z¹⁰⁰ jel -methyl-indol-2yl nebo l-methyl-indol-3-yl.
49. Způsob podle nároku 48, vyznačující se tím, že (4,4,5,5-tetramethyl1,3,2-dioxaborolanyl)anilin j e reprezentován následujícím obecným vzorcem:

a 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový meziprodukt je reprezentován následujícím obecným vzorcem:
50. Způsob podle nároku 49, vyznačující 4-(4-methylpiperazino) cyklohexyl.

se tím, že substituent R₂ je