[go: up one dir, main page]

CZ167997A3 - Physicologically active peg-ifn alpha conjugate, process of its preparation and pharmaceutical composition containing thereof - Google Patents

Physicologically active peg-ifn alpha conjugate, process of its preparation and pharmaceutical composition containing thereof Download PDF

Info

Publication number
CZ167997A3
CZ167997A3 CZ971679A CZ167997A CZ167997A3 CZ 167997 A3 CZ167997 A3 CZ 167997A3 CZ 971679 A CZ971679 A CZ 971679A CZ 167997 A CZ167997 A CZ 167997A CZ 167997 A3 CZ167997 A3 CZ 167997A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
ifnα
peg
conjugate
formula
physiologically active
Prior art date
Application number
CZ971679A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ292775B6 (cs
Inventor
Pascal Sebastian Bailon
Alicia Vallejo Palleroni
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=21790006&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ167997(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of CZ167997A3 publication Critical patent/CZ167997A3/cs
Publication of CZ292775B6 publication Critical patent/CZ292775B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález se týká fyziologicky aktivního konjugátu PEG-IFNa. Interferon, zejména interferon a2a je farmaceuticky aktivní protein s antivirovým a antiproliferativním účinkem. Interferonu se například používá k léčení vlasových buněk leukemie a sarkomu Kaposi a působí také proti hepatitidě. Ke zlepšení stálosti a rozpustnosti a ke snížení imunogenicity se farmaceuticky aktivní proteiny, jako interferon, mohou konjugovat na polymer polyethylenglykol (PEG).
Dosavadní stav techniky
Biologická dostupnost proteinových léčiv je často omezována jejich krátkým poločasem životnosti v plasmě, což brání dosažení jejich maximální klinické schopnosti. V posledních letech se ukázalo, že biomolekuly konjugované na PEG mají klinicky užitečné vlastnosti [Inada a kol. J.Bioact. and Compatible Polymers 5, str. 343 (1990), Delgado a kol., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9, str. 249 (1992), Katre, Advanced Drug Delivery Systems 10, str. 91 (1993)]. Mezi tyto vlastnosti patří fyzikání tepelná stálost, ochrana proti náchylnosti k enzymatické degradaci, zvýšená rozpustnost, delší cirkulační poločas životnosti in vivo, snížené vymizení a zlepšená potence. Uvádí se, že rozvětvené konjugáty PEG vykazují zvětšenou stálost k hodnotě pH a tepelnou stálost a větší stabilitu vůči proteolytické digesci než lineární PEG konjugáty. (Monfardini a kol., Bioconjugate Chem. 6, str. 62 (1995)). Jinými vlastnostmi proteinů PEG jsou snížená imonogenicita a antigenicita i snížená toxicita. Jiným účinkem PEGylace určitých proteinů může být snížená aktivita in vitro, doprovázená zlepšenou aktivitou in vivo. To bylo pozorová2 no například v přípasdě G-CSF (Satake -Ishikawa a kol., Cell Structure and Function 17, str. 157 až 160 (1992)), IL-2 (Katre a kol. Proc.Nati.Acad.Sci.USA 94, str. 1487 (1987)), TNF-α (Tsutsumi akol, Jpn.J. Cancer. Res. 85, str. 9, (1994)), IL-6 (Inoue a kol. J.Lab.Clin.Med. 124, str. 529 (1994)) a CD4-IgG (Chamow a kol. Bioconj. Chem. 5, str.133 (1994)).
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa obecného vzorce I,
ROCH2CH2(OCH2CH2)n—O—C —NH (CH2)4
R,OCH2CH2(OCH2CH2)n'—O—C—NH
3—X— IFNa
O O kde znamená R a R' na sobě nezávisle nižší alkylovou skupinu, X skupinu NH nebo atom kyslíku (X je nejméně jedna funkční skupina v molekule IFNa volené ze skupiny zahrnující NH2 nebo OH), n a n jsou čísla, jejichž součet je 600 až 1500 a průměrná molekulová hmotnost jednotek pólyethylenglykolu v konjugátu je přibližně 26000 až přibližně 66000 Daltonů. Konjugát obecného vzorce I má rozvětvenou strukturu, přičemždva podíly PEG jsou vázány na protein jednoduchou vazbou.
S překvapením se totiž zjistilo, že v případě interferonu snižuje PEGylace protivirovou aktivitu in vitro, avšak zvyšuje antiproliferativní aktivitu v lidských tumorových buňkách. Avšak nový konjugát PEG interferonu podle vynálezu má překvapivé vlastnosti v tom, že antiproliferativní aktivita PEG interferonu je značně vyšší než nejenom samotného interferonu, ale i jiných PEG interferonových konjugátů. Ačkoli je antiproliferativní aktivita konjugátu značně zvýšená oproti jiným PEG interferon-R konjugátům, je přesto snížení protivil'ové aktivity podobné. Kromě toho PEG interferon-H konjugát podle vynálezu je neimunogenický, nevyvolává domněle žádné tvoření protilátek. Na rozdíl od toho jiné PEG interferon-R konjugáty vyvolávají omezené tvoření protilátek.
Vynález se tedy týká nové třídy PEG derivátů interferonu κ (IFNoc). Konjugát podle vynálezu má rozvětvenou strukturu PEG, jak dále uvedeno. Rozvětvený PEG má tu přednost, že dovoluje připojení dvou lineárních molekul PEG na osamoceném místě, čímž zdvojnásobuje hmotu připojeného PEG bez několikanásobných míst PEGylace .
Ve srovnání s nemodifikovaným IFNr (tedy IFNR bez připojeného PEG) má konjugát zvýšený cirkulační poločas životnosti a dobu prodlevy v plasmě, sníženou imonogenicitu, snížené vymizení a zvýšenou antiproliferativní aktivitu s průvodní sníženou protivirovou aktivitou in vitro. Ve srovnání s jinými konjugáty PEG-IFNr má konjugát podle vynálezu značně větší antiproliferativní aktivitu, neúměrnou se zlepšením nebo snížením, které se vyskytuje v jeho jiných vlastnostech a domněle žádnou imunogenicitu.
Druhy fyziologicky aktivního konjugátu PEG-IFNr podle vynálezu má shora uvedený obecný vzorec.
Konjugát podle vynálezu má stejné použití jako IFNR, například antiproliferativní užití. Konjugáty PEG interferon-α podle vynálezu se hodí k léčení imunomodulatorních onemocnění, jako jsou neoplastická onemocnění, například leukemie vlasových buněk, CML a sarkom Kaposi a infekční onemocnění; stejně se používá IFNR (obzvláště INFa2a) k léčeni těchto nemocí. Avšak konjugát podle vynálezu má zlepšené vlastnosti včetně vynikající stálosti, větší rozpustnosti, zvýšený cirkulační poločas životnosti a dobu residence v plasmě. Kromě toho mají tyto konjugáty antipro 1 iferativní aktivitu daleko větší než IFNa. Také jak už bylo uvedeno, vykazuje konjugát překvapující disociaci protivirových a antipro1 iferativnich jevů. Tato vlastnost se přídavně hodí ke zvýšení žádoucí aktivity konjugátu při snižování nebo eliminování nežádoucí aktivity. Je-li například nežádoucí vedlejší účinek spojen s protivirovým působením, eliminace tohoto působení by eliminovala vedlejší účinek při zachování antiproliferativní aktivity. Vynález tedy proto zahrnuje také farmaceutické prostředky na bázi sloučenin obecného vzorce I nebo jejich solí a způsoby jejich výroby .
Farmaceutické prostředky podle vynálezu, používané ke zvládnutí nebo prevenci nemocí, zahrnují interferonový konjugát obecného vzorce I a terapeuticky inertní, netoxický a terapeuticky přijatelný nosič. Používané farmaceutické prostředky mohou být formulovány a dávkovány způsobem konsistentním s dobrou lékařskou praxí při uvážení léčeného onemocnění, stavu individuálního pacienta, místa podání proteinového konjugátu, způsobu podání a jiných činitelů známých z praxe.
Navrhovaným konjugátem je fyziologicky aktivní konjugát PEG IFNa obecného vzorce I, shora definovaný.
Čísla n a n' jsou volena tak, že výsledný konjugát obecného vzorce I má fyziologickou aktivitu IFNa, která může představovat stejnou, větší nebo zlomek odpovídající aktivity nemodifikovaného IFNa. Čísla n a n' mohou být stejná nebo rozdílná a představují počet jednotek ethylenglykolu v PEG. Samotná jednotka PEG OCH2CH2 má molekulovou hmotnost přibližně 44 Daltonů. Molekulová hmotnost konjugátu (s vyloučením molekulové hmotnosti IFNa) závisí na číslech n a n'. Součet čísel n a n' pro konjugát obecného vzorce I jc 600 až 1 500, což produkuje konjugát s celkovou střední molekulovou hmotností jednotek PEG 26000 až 66000, s výhodou přibližně 35000 až 45000 a obzvláště přibližně 39000 až 45000 Daltonů, přičemž obzvlášť výhodná je
Daltonů. Výhodným součtem čísel na n molekulová hmotnost 40000 je přibližně 800 až 1200, přičemž střední součet je přibližně 850 až 1000 a výhodným součtem je 910. Každé čísel n a může být jednotlivě 420 nebo
520, nebo mohou být obě 420 nebo 520, nebo mohou být obě 455. Výhodný poměr čísel n ku n' je hodný je poměr přibližně 0,8 Jižně 11 r č i t é přibližně 0,5 až 1,5 a obzvlášť výaž 1,2. Molekulární hmotnost přibčíslo znamená, že je v rozumném rozmezí takového čísla určeného obvyklými analytickými technikami.
Výhodným konjugátem obecného vzorce I, kde IFNa je IFNa2a, je konjugát kde symboly R a R' znamenají methylovou skupinu, konjugát, kde X je NH a konjugát kde čísla n a n' jsou každé zvlášť nebo obě buď 420 nebo 520. Takový konjugát mající všechny uvedené vlastnosti je obzvlášť výhodný.
Symboly R a R' mohou znamenat kteroukoli nižší alkylovou skupinu, čímž se míní alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, jako je například skupina methyloá, ethylová a isopropylová. Zahrnuty jsou rozvětvené alkyly. Výhodnou alkylovou skupinou je skupina methylová. Pokud jde o dvě skupiny PEG ve vzorci I mohou být symboly R a R ' stejné nebo rozdílné.
IFNa ( interferoněm a) a jeho druhem IFNa2a je míněn přírodní rekombinantní protein, s výhodou lidský, jak je získán z běžného zdroje jako jsou tkáně, syntesy proteinů, kultivace buněk s přírodními nebo rekombinantními buňkami. Zahrnut je každý protein mající aktivitu IFNa, jako jsou muteiny nebo jinak modifikované proteiny. Získávání a izolování IFNot z přírodních nebo rekombidobře známo (Pestka, Arch.Biochem.Biophys.
nantních 221 , str.
zdrojů je ( 1983 )). Výhodným IFNct je IFNa2a, který, jak shora uvedeno, se získává známými způsoby (Pestka, Sci.Am. 249, str. 36 (1983), evropský patentový spis číslo 43980)).
Fyziologicky aktivní konjugát obecného vzorce I má aktivitu I FNot, kterou se míní zlomek nebo násobek kterékoli známé aktivity IFNa, jak je zjištěna různými zkouškami známými v oboru. Zejména mají konjugáty podle vynálezu aktivitu IFNa, jak je ukázána antiproliferativním působením proti tumorovým buňkám a proti vírovým působením proti buňkám infikovaným virem. To jsou známé aktivity IFNa. Taková aktivita v konjugátu může být zjištěna zkouškami dobře v oboru známými, například dále popsanými zkouškami (například Rubinstein a kol. J.Virol. 37, str. 755 (1981), Borden a kol., Canc. Res. 42, str. 4948 (1982)). Vynález se týká konjugátu obecného vzorce I, který má větší antipro 1 iferativni působení a menší protivirové působení než nemodifikovaný IFNa.
Konjugát obecného vzorce I je vytvořen kovalentní vazbou IFNa na PEG, který byl aktivován nahrazením hydroxylu PEG vazební skupinou, tvořící reakční činidlo, kterým je derivát PEG esteru N-hydroxysuke inimidu (zejména monomethoxy PEG) obecného vzorce II. Reakční Činidlo lze získat běžnými způsoby (Montfardini a kol.). Vazbou je amidová nebo esterová vazba. U výhodného konjugátu je vazbou amidová vazba (X je NH). Součástí vynálezu je způsob zvyšování antiproliferativní aktivity IFNa při snižování protivirové aktivity IFNa vázáním IFNa, jak shora popsáno, na reakční činidlo obecného vzorce II k vytvoření konjugátu PEG-IFN.
X znamená místo připojení na IFNa, ve kterém je reakční činidlo PEG obecného vzorce II kovalentně vázáno na IFNa. Reakční činidla se připojují k primárním aminovým skupinám (XH = NH2) například na lysin nebo na N-zakončení IFNa. Reakční činidla se mohou připojovat také na hydroxylovou skupinu (XH = OH) například na ser in.
O
ROCHzCH^OCHaCH^n—O—C—NH (CH2)4
CH
R'OCH2CH2(OCH2CH2)n—O—C—NH O —O—N
+ XH-IFNa
ROCH2CH2(OCH2CH2)n —O —C —NH (CH2)4
H
o.
+ HON o
R'OCH2CH2(OCH2CH2)n O—C—Ν H
O :—χ— iFNa
Reakční činidlo obecného vzorce II (PEG2-NHS), kde celkem dva řetězce monomethoxy PEG (m-PEG) jsou vázány na lysin, jeden na α-aminoskupinu a druhý na epsilon-aminoskupinu karbamátovými (urethanovými) vazbami a mající 1 ysinkarboxy1ovou skupinu aktivovanou na sukcinimidylester, lze získat běžnými způsoby, podle známých postupů (Montfardini a kol.) aplikovatelnými na reakční činidlo s R jako nižší alkylovou skupinou a s požadovaným číslem
n. Reakční činidlo je obchodním produktem společnosti Shearwater Polymers, lne. (Huntsville, Alabama). Získaná výhodná střední molekulová hmotnost PEG je přibližně 40000 Daltonů v PEG2-NHS (jiné molekulové hmotnosti lze získat měněním čísla n u výchozích materiálů PEG-alkoholu pro reakční činidlo obecného vzorce II, běžnými způsoby).
Reakční činidlo obecného vzorce II může být konjugováno na
IFNoc běžnými způsoby. Specificky reaguje reakční činidlo obecného vzorce II předně s alespoň jednou primární aminoskupinou IFNa (například N-zakončení a lysinové postranní řetězce) (například IFNa2a) k vytvoření amidové vazby mezi IFNa a polymerovou kostrou PEG. PEGylační reakce může také proběhnout mezi PEG2-NHS a případnými volnými hydroxylovými skupinami (například serinein) IFNa k vytvoření esterové vazby. Reakční mechanismus je uveden shora. Podmínky reakce jsou pro pracovníka v oboru běžné a podrobně jsou vypsány dále. Reakční činidlo PEG se kombinuje s IFNa za mírně zásaditých podmínek při nízké teplotě za podmínek vhodných k nukleofilní substituci, která vytvoří konjugát obecného vzorce I, jak objasňuje shora uvedený reakční mechanismus.
Připojování reakčních činidel k IFNa 1 ze provádět obvyklými způsoby. Použít lze PEG jakékoli zvolené molekulové hmotnosti podle vynálezu. Podmínky reakce je možno volit k zajištění navrhovaného konjugátu s jedním připojeným reakčním činidlem. Konjugát obecného vzorce I, který má připojeno jedno reakční činidlo obecného vzorce II, se oddělí od nemodifikovaného IFNa a konjugáty mající připojeno více než jednu molekulu reakčního činidla se oddělí běžnými způsoby. K oddělování konjugátů rozdílem nábojů lze použít čisticích metod, jako je katexová chromatografie, která účinně odděluje konjugáty na základě jejich různé molekulové hmotnosti. Obsah frakcí, získaných katexovou chromatografii, může být identifikován molekulovou hmotností pomocí obvyklých metod, například hmotovou spektroskopií, SDS-PAGE, nebo jinými známými metodami k oddělování molekulových entit podle molekulové hmotnosti. Podle toho je pak identifikována frakce, která obsahuje konjugát obecného vzorce I vyčištěný od nemodifikovaného IFNa a od konjugátů majících připojených více než jedno reakční činidlo. Kromě toho reakční činidla obecného vzorce II uvolňují jeden lysin na reakční činidlo při kyselinové hydrolyse, takže počet lysinu v hydrolyse indikuje počet PEG připojených k proteinu, takže lze ověřit počet molekul reakčního činidla připojených ke konjugátu.
Vynález blíže objasňují, nijak však neomezují, následující příklady praktického provedení pomocí přiložených obrázků.
Přehlad obrázků
Na obr. 1 je znázorněno prot i tumorové působení PEG~IFNoc2a u myší, kterým byly implantovány subkutánně lidské ledvinové buňky A498. Všechna zvířata dostala subkutánní implant 2xlO6 lidských ledvinových buněk A498 ve studijním dnu -33. Ve studijním dnu 0 se započalo s ošetřováním PEG-IFNa2a. Vyznačené množství (30, 60, 120 nebo 300 pg) PEG-IFNa2a se aplikovalo subkutánně pod protilehlý bok tumoru jednou týdně po dobu 4 týdnů.
Na ose x je počet dní a na ose y objem tunoru v cm3.
A neošetřená kontrola
B ošetření 30 pg PEG-IFNa2a
C ošetření 60 pg PEG-IFN0f2a
D ošetření 120 pg PEG-IFNa2a
E ošetření 300 pg PEG-IFNa2a
Na obr. 2 je znázorněno protitumorové působení PEG-IFNa2a u myší, kterým byly implantovány subkutánně lidské ledvinové buňky A498. Všechna zvířata dostala subkutánní implant 2x106 lidských ledvinových buněk A498 ve studijním dnu -33. Ve studijním dnu 0 se započalo s ošetřováním PEG-IFNcc2a. Vyznačené množství (10, 20, 40 nebo 100 pg) PEG-IFNa2a se aplikovalo subkutánně pod protilehlý bok tumoru třikrát týdně po dobu 4 týdnů.
Na ose x je počet dní a na ose y objem tunoru v cm3.
A neošetřená kontrola
B ošetření 10 Pg PEG-IFNa2a
C ošetření 20 Pg PEG-IFN0í2a
D ošetření 40 pg PEG-IFNct2a
E ošetření 100 μ£ PEG-IFNa2a
Na obr. 3 je znázorněno proti tumorové působení PEG-IFNtt2a u myší, kterým byly implantovány subkutánně lidské ledvinové buňky ACHN. Všechna zvířata dostala subkutánní implant 2x1 O6 lidských ledvinových buněk ACHN ve studijním dnu -25. Ve studijním dnu 0 se započalo s ošetřováním PEG-IFNc2a. Vyznačené množství (30, 60, 120 nebo 3 00 μζ) PEG-IFNa2a se aplikovalo subkutánně pod protilehlý bok tumoru jednou týdně po dobu 5 týdnů.
Na ose x je počet dní a na ose y objem tunoru v cm3.
A neošetřená kontrola
B ošetření 30 μ g PEG-IFNoí2a
C ošetření 60 μ§ PEG-IFNa2a
D ošetření 120 μ§ PEG-IFNa2a
E ošetření 300 μζ PEG-IFNa2a
Na obr. 4 je znázorněno prot i tumor ové působení PEG-IFNc<2a u myší, kterým byly implantovány subkutánně lidské ledvinové buňky ACHN. Všechna zvířata dostala subkutánní implant 2xl06 lidských ledvinových buněk ACHN ve studijním dnu -25. Ve studijním dnu 0 se započalo s ošetřováním PEG-IFNa2a. Vyznačené množství (10, 20, 40 nebo 100 μ§) PEG-IFNoc2a se aplikovalo subkutánně pod protilehlý bok tumoru třikrát týdně po dobu 5 týdnů.
Na ose x je počet dní a na ose y objem tunoru v cm3.
A neošetřená kontrola
B ošetření 10 μζ PEG-IFNa2a
C ošetření 20 μξ PEG-IFNoc2a
D ošetření 40 μ g PEG-IFNa2a
E ošetření 100 μ§ PEG-IFNa2a
Na obr. 5 je znázorněno prot i tumor ové působení PEG-IFNoc2a u myší, kterým byly implantovány subkutánně lidské ledvinové buňky G402.
Všechna zvířata dostala subkutánní implant 2 x 106 lidských ledví11 nových buněk G4O2 ve studijním dnu -45. Ve studijním dnu 0 se započalo s ošetřováním PEG-IFNtt2a. Vyznačené množství (30, 60, 120 nebo 300 μζ) PEG-IFN0(2a se aplikovalo subkutánně pod protilehlý bok tumoru jednou týdně po dobu 5 týdnů.
Na ose x je počet dní a na ose y objem tunoru v cm3.
A neošetřená kontrola
B ošetření 30 μ§ PEG-IFNa2a
C ošetření 60 μξ PEG-IFNa2a
D ošetření 120 pg PEG-IFN0í2a
E ošetření 300 pg PEG-IFNa2a
Na obr. 6 je znázorněno proti tumorové působení PEG-IFNa2a u myší, kterým byly implantovány subkutánně lidské ledvinové buňky G402. Všechna zvířata dostala subkutánní implant 2x106 lidských ledvinových buněk G402 ve studijním dnu -45. Ve studijním dnu 0 se započalo s ošetřováním PEG-IFNa2a. Vyznačené množství (10, 20, 40 nebo 100 pg) PEG-IFNa2a se aplikovalo subkutánně pod protilehlý bok tumoru třikrát týdně po dobu 5 týdnů.
Na ose x je počet dní a na ose y objem tunoru v cm3.
A neošetřená kontrola
B ošetření 10 pg PEG-IFN0í2a
C ošetření 20 Pg PEG-IFNa2a
D ošetření 40 pg PEG-IFNa2a
E ošetření 100 pg PEG-IFNa2a
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Příprava konjugátu obecného vzorce I
Materiály
Interferon-K2a se připraví známými způsoby (Pestka). Polyethylenglykol (PEG) reakční činidlo II je obchodní produkt společnosti Shearwater Polymers, lne. (Huntsville, Ala). Pryskyřice
FractogelR EMD CM 65O(S) s částicemi o velikosti 25 až 40 μπι je obchodní produkt společnostiá EM Separations (Gibbstown,MA). Solanka (PBS) pufrovaná koncentrovanými fosfátem (10X), pH 7,3 je obchodní produkt společnosti od BioWbittaker (Walkersv i 11e, MD). Předlité elektroforezní gely sodnododecy1(1 aure1)su1fátpolyakrylového gelu (SDS-PAGE) a e1ektroforezní jednotky jsou obchodní produkty společnosti NOVEX (San Diego, CA). Koncentrované rychlé barvivo (Fast Stain) k proteinovému barvení konjugátu PEG na SDSPAGE je obchodní produkt spolčenosti Zoíon Research, lne.(Newton, MA). Testovací soubor endotoxinu LAL je obchodní produkt společnosti Associates of Cápe Cod, lne. (Woods Hole,MA). Všechna ostatní použitá reakční činidla mají nejvyšší dosažitelnou kvalitu. Hrdelně kanylované krysy a myši BDF-1 obdodávají Charles River Laboratories (Wilmington, MA).
Experimentální postupy
A. Příprava konjugátu obecného vzorce I v malém měřítku
Do 50 mg (2,6 μιηοΐ) IFNa v 10 ml lOOmM borátu s hodnotou pH 8,0 se přidá 208 mg (5,2 μηιοί) reakčního činidla obecného vzorce II (se střední molekulovou hmotností 40000 Daltonů). Konečný poměr proteinu k reakčnímu činidlu je 1:2. Reakční směs se míchá po dobu dvou hodin při teplotě 4 *C. Reakce se ukončí nastavením hodnoty pH na 4,5 ledovou kyselinou octovou.
Reakční směs se zředí 50-násobně vodou, zfiltruje se přes filtr 0,2 μπι a aplikuje se na sloupec Amicon naplněný 100 ml (3,2x13 cm) Fractogelu EMD CM 65O(S) nízkou průtočnou rychlostí 20 ml/min. Sloupec se napřed uvede do rovnovážného stavu lOmM amoniumacetátem s hodnotou pH 4,5. Výtok sloupce se monitoruje absorpcí ultrafialového světla při 280 nm. Sloupec se pak promývá vyvažovacím pufrem dokud se absorbance ultrafialového světla nevrátí na základní úroveň. Konjugáty PEG-IFN mající připojeno více než jedno reakční činidlo obecného vzorce II (oligomery PEG-IFN) se zředí 40mM amoniumacetátem s hodnotou pH 4,5 a konjugát obecného vzorce I se eluuje roztokem 0,12M chloridu sodného ve 40mM amoniumacetátovém pufru. Nemodifikovaný IFN zbylý ve sloupci se eluuje roztokem 0,5M chloridu sodného ve stejném pufru. Sloupec se regeneruje proplachem 1,0M NaCl s následným promytím vyvažovači m pufrem. Frakce konjugátu obecného vzorce I se zkoncentrují v koncentrátoru míchaných buněk Amicon opatřeným membránou YM10 na koncentraci přibližně 1 mg/ml.
Katexová pryskyřice Fractogel CM 650(S) použitá k čištění účinně adsorbuje PEG a nemodifikovaný IFN. Adsorpční schopnost závisí na stupni PEGylace. Konjugáty jsou vázány méně pevně než nemodifikovaný IFN. Oligomery PEG-IFN se eluují 40mM amoniumacetátem, zatímco konjugát obecného vzorce I se eluuje roztokem 0,12M chloridu sodného. Nemodifikovaný IFN se eluuje roztokem 0,5M chloridu sodného. Všechny přípravky obsahují <5EU/mg endotoxinň. Výsledný přípravek obsahuje > 99 % konjugátu obecného vzorce I a je prost nemodifikovaného IFN.
B. Příprava konjugátu obecného vzorce I ve velkém měřítku
V 63 ml lmM HCl při teplotě 4 ’C se rozpustí 6240 miligramů (156 μπιοί) reakčního činidla obecného vzorce II (střední molekulová hmotnost 40000 Daltonů) a rychle se přidá do 125 ml roztoku obsahujícího 1000 mg (52 μπιοί) interferonu v 50 mM borátovém pufru, pH 9,0. Konečný poměr proteinu k reakčnímu činidlu je 1:3 a konečná koncentrce proteinu v reakční směsi je 5,3 mg/ml. Reakční směs se míchá po dobu dvou hodin při teplotě 4 ’C. Reakce se ukončí nastavením hodnoty pH na 4,5 ledovou kyselinou octovou,
Reakční směs se zředí 10-násobně vodou a aplikuje se na sloupec naplněný 600 ml Fractogelu EMD CM 65O(M) napřed uvedeným do rovnovážného stavu 20mM acetatem sodným s hodnotou pH 4,5 s lineární průtočnou rychlostí 1,3 cm/min. Sloupec se promyje vyvažovacím pufrem následovaným 10 m M NaCl k odstranění nadbytku reakčního činidla, vedlejších produktů reakce a oligomerů PEG-IFN. Konjugát obecného vzorce I se eluuje vyvažovacím pufrem obsahujícím 200mM NaCl. Nemodifikogvaný interferon ještě adsorbovaný ve sloupci se odstraní promytím 0,75 M NaCl ve vyvažovacím pufru. Konjuugát obecného vzorce I, který byl eluován při 0,3-0,5 mg/ml se dále koncentruje a diafiltruje do pufru konečného prostředku, 20 mM acetátu sodného, pH 5,0, obsahujícího 150mM NaCl. Celkový výtěžek konjugátu obecného vzorce I je 40 až 45 %.
Vyčištěný PEG-IFN z přípravy ve velkém měřítku sestává z >99 % konjugátu obecného vzorce I. Průměrná molekulová hmotnost konjugátu obecného vzorce I v tomto příkladě je 62000 Daltonň včetně molekulové hmotnosti IFNa2a, která je 19241 Daltonů a průměrné molekulové hmotnosti reakčního činidla, která je 40000 až 45000, přibližně 43000 Daltonů.
Příklad 2
Charakterizace konjugátu obecného vzorce I
Stanovení proteinu
Koncentrace proteinu se zjišťují pomocí hodnoty A28O 1,0 pro roztok 1 mg/ml IFNa cr2a.
Analysa ADS-PAGE
Konjugát se analysuje gelovou elektroforézou za použití systému natriumdodecyl(lauryl)sulát/polyakrylamid (8 až 16 %) za redukčních podmínek způsobem, který popsal Laemmli (Nátuře 227, str. 680 (1970)). SDS-PAGE obsahující konjugáty PEG se vybarví na protein barvivém Fast Stain (Zoion Research,lne.) podle výrobcových instrukcí.
Stanovení endotoxinových hladin
Endotoxinové hladiny se stanoví metodou LAL podle výrobcových instrukcí. Všechny prostředky obsahují <5 EU/mg endotoxinů. Příklad 3
Biologické aktivity konjugátu obecného vzorve 1 in vitro
Proti virové působení v buňkách hovězích ledvin
Protiv i rové působení I FNa2a a konjugátu obecného vzorce
I připraveného podle příkladu IA in vitro se určuje biotestem v buněčné kultuře používajícím buněk Madin-Darby hovězích ledvin (MDBK) vyvolávajících reakci vesikulárním virem stomatitis (Rubinstein a kol). Protivirové působení je uvedeno v tabulce I spolu s odpovídajícími zbytkovými aktivitami jako procento výchozího IFN .
Tabulka I
Protivirové působení
Vzorky Typ PEG Celková PEG hmotnost (kDa) # Lys mod i f i k. Specifické působení (J/mg) Zbytková aktivita (%)
IFNa2a - - - 2,ΟΟχΙΟθ 100
Konjugát rozvětvený 40 1 1,40x107 7
ob . v z.I
In vitro antiproliferativní působení v lidských tumorových buňkách
Antiproliferativní působení in vitro se testuje v lidských buňkách Daudi (Burkittova Lymphoma), jak je popsal Borden a kol. Lidské buňky Daudi se získají v podobě kultury stacionární suspense v RPMI 1540 doplněným 10 % telecího zárodečného séra a 2 mM glutaminu (Grand Island Biologicals, Grand Island, NY). Buňky se skrínují a zjistí se, že jsou prosté mycoplasmy. Do důlků mikrotitrových destiček se přidají buňky (2xlO4) (Costar, MA) ve 100 μΐ media. Do důlků se přidají různé koncentrace IFN a konjugátu obecného vzorce I připraveného podle příkladu 1A v objemu 100 μΐ. Destičky se inkubují 72 hodin při teplotě 37 *C v 5% oxidu uhličitém. Před sklizením buněk se buňky 16 hodin pulzují s 0,25 μCi/důlek 3H-thymidinu (New England Nuclear, Boston, MA). Buňky se sklidí na skleněných filtrech a sečtou se v kapalinovém scintilačním čítači. Výsledky se vyjádří jako procento inhibice vypočtené ze vzorce;
% inhibice = [(A-B)/A] x 100, kde
A = cpm v kontrolní kultuře (buňky inkubované v samotném mediu)
B = cpm v experimentální kultuře
Průběh vzorků je čtyřnásobný a střední směrodatná odchylka je ve všech případech méně než 20 % průměru. Pokusy probíhají nejméně dvakrát s porovnatelnými výsledky.
Antiproliferativní působení (IC50) IFN a konjugátu je uvedeno v tabulce II. Data ukazují, že antiproliferativní působení konjugátu obecného vzorce I vykazuje 28-násobné zvýšení oproti IFN.
Tabulka II
In vitro antiproliferativní působení v lidských buněčných řadách Daudi (Burkitova lymphoma)
Vzorek Antiproliferativní IC50 (ng/ml) Zvýšení aktivity
IFNa2a
Konjugát obec.vz.I
0,56
0,02 lx
28x
Příklad 4
Farmakokinetika
Samice krys Sprague Dawley, chirurgicky opatřené hrdelní kanylou o průměrné hmotnosti 240 až 260 g se chovají volně jednotlivě v klecích s neomezeným přístupem k vodě a potravě při 12-hodinovém cyklu světla a tmy. V průběhu 4 až 6 hodin po nástupu se hrdelní kanyly vypláchnou PBS. Následujícího dne po vypláchnutí 0,15 až 0,2 ml PBS, se injektuje 2xlO6 jednotek IFNa v 0,2 až 0,4 ml PBS, s následnou injekcí 0,15 až 0,2 ml PBS k zajištění, že veškerá droga se dostala do zvířete. Tak dostalo každé zvíře dávku 8xlO6 jednotek IFNana kg tělesné hmotnosti.
Vzorky krve se odeberou po 5, 15 a 30 minutách a 1, 3, 5, 12 a 24 hodinách po injekci IFN a konjugátu obecného vzorce I. V každém časovém okamžiku, po odebrání prvních 0,15 až 0,2 ml krve se odebere kanylou 0,5 ml krve pomocí čerstvé injekční stříkačky. Vzorky se vyprázdní do sérum separujících zkumavek při teplotě místnosti. Jakmile se shromáždí všechny vzorky ze všech časových okamžiků, zkumavky se odstřeďují 10 minut při 14000 x g ve chlazené odstředivce Eppendorf. Separované sérum se převede do 1,5 ml mikrozkumavek a zmrazí se na -80 ’C než se připraví k biotestu. Vzorky sera se příslušně zředí a shora popsaným způsobem se stanoví protivirové působení v každém časovém okamžiku. Z vynesené závislosti aktivity na čase se stanoví konečný poločas konjugátu obecného vzorce I a IFNa a jsou sestaveny do tabulky III, která obsahuje také rezidenční doby v plasmě.
Tabulka III
Konečné poločasy (ti/2) a střední rezidenční doba v plasmě
Vzorek ti/2 (hodin) Rezidenční doba v plasmě (hodin)
IFNa2a 2,1 1,0
Konjugát obec. v z.I 15,0 20,0
Konečný ti/2 se určí log lineární regresí.
Příklad 5
Imunogenicita
Normálním myším BDF-1 (deseti na skupinu) se i n jektuj i intraperitoneálně jednou denně pětkrát týdně různé interferonové prostředky mající 300000 jednotek proti virové aktivity. Některým myším se injektuje agregovaná forma IFNot2a, která je více imunogenická než monomerní forma. Krevní vzorky se odeberou 19 dní po poslední injekci a sérum se vyhodnotí na neutralizující protilátky ·
Jak vyplývá z tabulky IV, produkovaly myši s injekcí IFN0(2a neutralizující protilátky a tato odezva je silně zvýrazněna u myší s injekcí interferonových agregátů. U většiny zvířat s injekcí konjugátu podle vynálezu nejsou zjistitelné žádné proti látky.
Tabulka IV
Imunogenicita
Protilátky (INU/ml)*
Ošetření průměr rozsah
IFNa2a 2400 217 až 8533
Agregáty IFNcz2a 42667 8000 až 768000
Konjugát obecného vzorce I 0 0 až 1133
9 * Počet jednotek neutralizujících interferon na ml
Příklad 6
Proti tumorové působení in vivo
Protitumorové působení konjugátu obecného vzorce I (PEG2IFNa2a) a nemodifikovaného IFNa2a in vivo se vyhodnocuje stanovením jejich schopnosti zmenšovat rozměry různých lidských tumorových buněk implantovaných do myší. Výsledky jsou patrné z obr. 1 až 6 .
Postup: Athymickým myším (Harlan) se do levého zadního boku implantuje 2x106 lidských ledvinových buněk A498 (obr. 1 a 2), lidských ledvinových buněk ACHN (obr. 3 a 4) nebo lidských ledvinových buněk G4O2 (obr. 5 a 6). K vyvinutí tumorů jak vyznačeno, se ponechá 3 až 6 týdnů. Kriterium pro převzetí do studie je velikost 0,05 až 0,50 cm3. Myším se dostalo celkových týdenních dávek PEG2-IFNa2a nebo nemodifikovaného IFNC(2a 30,60,120 nebo 300 Dg. V případě PEG2-IFNa2a se myši ošetřovaly jednou týdně (v pondělí) 30, 60, 120 nebo 300 Dg PEG2-IFNC(2a na jedno ošetření.
V případě nemodifikovaného IFNa2a se myši ošetřovaly třikrát týdně (v pondělí, ve středu a v pátek) 10, 20, 40 nebo 100 Dg PEG2-IFNo:2a na jedno ošetření. Ošetřování trvalo 4 až 5 týdnů v závislosti na agresivitě tumoru. Každé pondělí se před ošetřením měřily objemy tumorů.
Výsledky: PEG2-IFNct2a vykazuje výrazné zmenšování velikosti tumoru A498 ve srovnání s nemodifikovaným IFNot2a u všech týdenních testovaných dávek po 7, 14, 21 a 28 dnech od zahájení testu (obr. 1 a 2). Test trval čtyři týdny. 7 dní po ošetření se test přerušil a 3 myši z každé skupiny byly usmrceny. U tří myší, oštřených PEG2-IFNa2a, nebyl pozorován zbylý tumor. U myší, ošetře20 ných nemodifikovaným IFNa2a, vážily tumory A498 1,28 g, 0,62 g a 1,60 g u každé ze tří myší. Hmotnost tumorů A498 tří kontrolních myší byla 2,32 g, 2,37 a 1,94 g. Po 80 dnech na konci čtyřtýdenní periody ošetřování se existence tumorů zjišťovala palpací u sedmi myší. Všech sedm myší bylo prosto tumorové tkáně.
PEG2-IFNC(2a vykazuje výrazné zmenšování velikosti tumoru ACHN ve srovnání s nemodifikovaným I F Ν α 2 a u všech týdenních testovaných dávek 60, 120 a 300 μg po 14, 21 a 28 a 35 dnech od zahájení testu (obr. 3 a 4).
PEG2-IFNa2a vykazuje výrazné zmenšování velikosti tumoru G4O2 ve srovnání s nemodifikovaným IFNtt2a u týdenních testovaných dávek 60 a 120 ^g po 14, 21 a 28 a 35 dnech od zahájení testu (obr. 5 a 6).
Průmyslová využitelnost
Fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa2a má výhodnou kombinaci vlastností, z nichž vyniká potlačování růstu lidských tumorových buněk in vivo a hodí se proto k výrobě farmaceutických prostředků.

Claims (18)

  1. PATENTOVÉ
    NÁROKY
    Fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa obecného vzorce I
    O
    II
    ROCH2CH2(OCH2CH2)n—O-C —NH (CH2)4
    R,OCH2CH2(OCH2CH2)n’—O—C—NH
    O —X— IFNa
    II kde znamená R a R' na sobě nezávisle nižší alkylovou skupinu, X skupinu NH nebo atom kyslíku, n a n' jsou čísla, jejichž součet je 600 až 1500 a průměrná molekulová hmotnost jednotek polyethylenglykolu v konjugátu je přibližně 26000 až přibližně 66000 Daltonů.
  2. 2. Fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 obecného vzorce I s molekulovou hmotností polyethylenglykolových jednotek 35000 až 45000 Daltonů.
  3. 3. Fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 2 obecného vzorce I s molekulovou hmotností polyethylenglykolových jednotek 40000 Daltonů.
  4. 4. Fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená R a R' skupinu methylovou.
  5. 5. Fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená X je NH-skupinu.
  6. 6.
    Fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 o22 becného vzorce I, přičemž IFNa je IFNa2a.
  7. 7 . Fyziologicky aktivní becného vzorce I, kde střední konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 osoučet čísel n a ti' je 850 až 1000.
  8. 8. Fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená R a R' skupinu methylovou, X Ν H skupinu, IF Ν α je IFNa2a a jedno nebo obě čísla n a n' jsou 420.
  9. 9. Fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená R a R' skupinu methylovou, X NHskupinu, IF Ν α je IFNa2a a jedno nebo obě čísla n a n' jsou 520.
  10. 10. Fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 obecného vzorce I mající větší antiproliferativní účinek než IFNa a menší antivirové působení než IFNa.
  11. 11. Způsob přípravy fyziologicky aktivního konjugátu PEG-IFNa podle nároku 1 obecného vzorce I, majícího větší antiproliferativní účinek než IFNa a menší antivirové působení než IFNa, vyznačující se t í m, že se kovalentně váže reakční činidlo obecného vzorce II na IFNa k vytvoření konjugátu PEG-IFNa
  12. 12. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 až 10 obecného vzorce I a terapeuticky inertní nosič.
  13. 13. Farmaceutický prostředek k ošetřování nebo profylaxi imunomodulatorních onemocnění jako jsou neplaplastické nemoci nebo infekční nemoci, vyznačující se tím, že obsahuje fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 až 10 obecného vzorce I a terapeuticky inertní nosič.
  14. 14. Fyziologicky
    10 obecného vzorce I nemocí.
  15. 15. Fyziologicky
    10 obecného vzorce I
  16. 16. Fyziologicky
    10 obecného vzorce I aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 až pro výrobu léčiv k ošetřování a profylaxi vyrobený konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 až způsobem podle nároku 11.
    aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 až jakožto léčiv k ošetřování a profylaxi nemo
  17. 17. Produkty, farmaceutické prostředky, způsoby výroby, podle nároku 1 až 16.
  18. 18. Způsob ošetřování a profylaxe imunomodulatorních onemocnění, vyznaču jící se tím, že se podává fyziologicky aktivní konjugát PEG-IFNa podle nároku 1 až 10 obecného vzorce I.
CZ19971679A 1996-05-31 1997-05-30 Fyziologicky aktivní konjugát polyethylenglykol-interferon alfa, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje CZ292775B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1883496P 1996-05-31 1996-05-31

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ167997A3 true CZ167997A3 (en) 1997-12-17
CZ292775B6 CZ292775B6 (cs) 2003-12-17

Family

ID=21790006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19971679A CZ292775B6 (cs) 1996-05-31 1997-05-30 Fyziologicky aktivní konjugát polyethylenglykol-interferon alfa, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje

Country Status (47)

Country Link
US (1) US7201897B2 (cs)
EP (1) EP0809996B1 (cs)
JP (1) JP2980569B2 (cs)
KR (1) KR100254097B1 (cs)
CN (1) CN1088721C (cs)
AR (1) AR008378A1 (cs)
AT (1) ATE235920T1 (cs)
AU (1) AU725195B2 (cs)
BG (1) BG62273B1 (cs)
BR (1) BR9703421A (cs)
CA (1) CA2203480C (cs)
CO (1) CO4950528A1 (cs)
CY (2) CY2433B1 (cs)
CZ (1) CZ292775B6 (cs)
DE (3) DE809996T1 (cs)
DK (1) DK0809996T3 (cs)
EG (1) EG24292A (cs)
ES (1) ES2110386T3 (cs)
GR (1) GR970300063T1 (cs)
HR (1) HRP970298B1 (cs)
HU (1) HU227992B1 (cs)
IL (1) IL120902A (cs)
IS (1) IS1988B (cs)
LU (1) LU91029I2 (cs)
MA (1) MA24193A1 (cs)
MY (1) MY117909A (cs)
NL (1) NL300127I2 (cs)
NO (1) NO322964B1 (cs)
NZ (1) NZ314903A (cs)
OA (1) OA10488A (cs)
PA (1) PA8431001A1 (cs)
PL (1) PL186949B1 (cs)
PT (1) PT809996E (cs)
RS (1) RS49533B (cs)
RU (1) RU2180595C2 (cs)
SA (1) SA97180030B1 (cs)
SG (1) SG55314A1 (cs)
SI (1) SI0809996T1 (cs)
SK (1) SK284458B6 (cs)
SV (1) SV1997000049A (cs)
TJ (1) TJ328B (cs)
TN (1) TNSN97091A1 (cs)
TR (1) TR199700358A2 (cs)
TW (1) TW517067B (cs)
UA (1) UA56989C2 (cs)
UY (1) UY24572A1 (cs)
ZA (1) ZA974583B (cs)

Families Citing this family (144)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5919455A (en) * 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5951974A (en) * 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
DE69632062T2 (de) 1995-11-02 2004-11-18 Schering Corp. Kontinuierliche, niedrigdosierte zytokine-infusionstherapie
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
US5985263A (en) * 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US5981709A (en) * 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
US6180096B1 (en) 1998-03-26 2001-01-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
CZ302005B6 (cs) * 1998-03-26 2010-09-01 Schering Corporation Vodný prostredek PEG-interferon alfa konjugátu, jeho lyofilizát a výrobek jej obsahující
CA2565375A1 (en) * 1998-04-28 1999-11-04 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Polyol-ifn-beta conjugates
CA2331823A1 (en) 1998-05-15 1999-11-25 Schering Corporation Combination therapy comprising ribavirin and interferon alpha in antiviral treatment naive patients having g chronic hepatitis c infection
RS50144B (sr) * 1998-06-08 2009-03-25 F. Hoffmann-La Roche Ag., Primena peg-inf-alfa 2a i ribavirina za proizvodnju leka za lečenje hroničnog hepatitisa c
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
IL129299A0 (en) * 1999-03-31 2000-02-17 Mor Research Applic Ltd Monoclonal antibodies antigens and diagnosis of malignant diseases
US6605273B2 (en) 1999-04-08 2003-08-12 Schering Corporation Renal cell carcinoma treatment
TWI292320B (en) 1999-04-08 2008-01-11 Schering Corp Melanoma therapy
JP2000309541A (ja) * 1999-04-08 2000-11-07 Schering Plough Corp Ｃｍｌ治療
US6362162B1 (en) 1999-04-08 2002-03-26 Schering Corporation CML Therapy
US6923966B2 (en) 1999-04-08 2005-08-02 Schering Corporation Melanoma therapy
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US6313143B1 (en) * 1999-12-16 2001-11-06 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted pyrroles
AR027509A1 (es) 2000-01-10 2003-04-02 Maxygen Aps Conjugados g-csf
EP1908477A3 (en) * 2000-01-24 2008-06-11 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
WO2001052882A1 (en) * 2000-01-24 2001-07-26 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
CA2397347C (en) 2000-02-11 2011-07-12 Maxygen Aps Factor vii or viia-like molecules
US6476062B2 (en) 2000-03-30 2002-11-05 Schering Corporation Chemokine receptor antagonists
US6777387B2 (en) 2000-03-31 2004-08-17 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Terminally-branched polymeric linkers containing extension moieties and polymeric conjugates containing the same
US6756037B2 (en) 2000-03-31 2004-06-29 Enzon, Inc. Polymer conjugates of biologically active agents and extension moieties for facilitating conjugation of biologically active agents to polymeric terminal groups
AU2001255495A1 (en) 2000-04-20 2001-11-07 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable hcv-rnain patients having chronic hepatitis c infection
CA2413258C (en) 2000-06-30 2012-01-03 Zymogenetics, Inc. Interferon-like protein zcyto21
DE60236796D1 (de) 2001-01-30 2010-08-05 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Verzweigte polyalkylenglykole
IL156059A0 (en) 2001-02-27 2003-12-23 Maxygen Aps NEW INTERFERON beta-LIKE MOLECULES
DE10112825A1 (de) 2001-03-16 2002-10-02 Fresenius Kabi De Gmbh HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung
ATE371680T1 (de) 2002-01-16 2007-09-15 Biocompatibles Uk Ltd Polymerkonjugate
KR100888371B1 (ko) * 2002-01-17 2009-03-13 동아제약주식회사 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
DE10209822A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid
DK1517710T3 (da) 2002-06-21 2011-07-18 Novo Nordisk Healthcare Ag Pegylerede faktor VII-glycoformer
RU2318004C2 (ru) 2002-07-24 2008-02-27 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Добавки в виде полиалкиленгликолевой кислоты
US7087229B2 (en) * 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
EP1681303B1 (en) * 2002-09-11 2013-09-04 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
DE02020425T1 (de) * 2002-09-11 2004-07-15 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Hasylierte Polypeptide, besonders hasyliertes Erythropoietin
MXPA05002594A (es) * 2002-09-11 2005-05-27 Fresenius Kabi Gmbh Derivados de polipeptidos con hidroxialquilalmidon, especialmente derivados de eritropoyetina con hidroxialquilalmidon.
AR041350A1 (es) * 2002-09-20 2005-05-11 Pharmacia Corp Proceso para reducir los niveles de agregados de proteinas tratadas con peg
EP1549350B1 (en) 2002-10-08 2008-09-24 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Pharmaceutically active oligosaccharide conjugates
EP1565205A4 (en) * 2002-11-18 2006-07-05 Maxygen Inc INTERFERON-ALPHA POLYPEPTIDES AND CONJUGATES
US7314613B2 (en) 2002-11-18 2008-01-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
GB0301014D0 (en) * 2003-01-16 2003-02-19 Biocompatibles Ltd Conjugation reactions
US20050176108A1 (en) * 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
CA2458085A1 (en) 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
CN102516386A (zh) 2003-10-10 2012-06-27 诺沃挪第克公司 Il-21衍生物
EP2641611A3 (en) 2003-10-17 2013-12-18 Novo Nordisk A/S Combination therapy
NZ548255A (en) 2004-02-02 2010-10-29 Ambrx Inc Modified human interferon polypeptides and their uses
CN100355784C (zh) * 2004-02-12 2007-12-19 江苏恒瑞医药股份有限公司 聚乙二醇修饰α－干扰素1b的制备方法
EP1725589A1 (en) 2004-03-11 2006-11-29 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination
BRPI0511196A (pt) * 2004-05-19 2007-12-04 Maxygen Inc polipeptìdeo isolado ou recombinante, conjugado, composição, célula hospedeira, vetor, métodos para preparar um polipeptìdeo, para preparar um conjugado, para reduzir o número de cópias de um vìrus em células infectadas com o vìrus, para reduzir o nìvel de rna hcv, dna hbv e rna hiv no soro de um paciente infectado com hcv, hbv e hiv, e, uso do polipeptìdeo, do conjugado ou da composição
CN102603895B (zh) 2004-06-18 2016-09-28 Ambrx公司 新颖抗原结合多肽和其用途
EP1771197A2 (en) * 2004-06-30 2007-04-11 Egen Corporation Pegylated interferon alpha-1b
BRPI0512396A (pt) 2004-07-21 2008-03-11 Ambrx Inc polipeptìdeos biossintéticos utilizando aminoácidos codificados não naturalmente
ES2349472T3 (es) 2004-08-12 2011-01-03 Schering Corporation Formulación estable de interferón pegilado.
KR20070090023A (ko) 2004-12-22 2007-09-04 암브룩스, 인코포레이티드 변형 인간 성장 호르몬
US20060233740A1 (en) * 2005-03-23 2006-10-19 Bossard Mary J Conjugates of an hGH moiety and a polymer
KR20080019619A (ko) 2005-05-18 2008-03-04 맥시겐, 인크. 개량된 인터페론-알파 폴리펩티드
EP1893632B1 (en) 2005-06-17 2015-08-12 Novo Nordisk Health Care AG Selective reduction and derivatization of engineered factor vii proteins comprising at least one non-native cysteine
US7662370B2 (en) * 2005-06-20 2010-02-16 Pepgen Corporation Low-toxicity, long-circulating human interferon-alpha PEGylated mutants
CN103103238B (zh) 2005-08-18 2016-08-10 Ambrx公司 一种在细胞中制造在特定位置处具有所选氨基酸的抗体或抗体片段多肽的方法
JP4261531B2 (ja) 2005-09-06 2009-04-30 株式会社Ｎｒｌファーマ ラクトフェリン複合体及びその製造方法
ES2547554T3 (es) 2005-11-16 2015-10-07 Ambrx, Inc. Métodos y composiciones que comprenden aminoácidos no naturales
CN101002944B (zh) * 2006-01-17 2012-07-25 中国科学院过程工程研究所 支链聚乙二醇-干扰素结合物及其制备方法
CN100475270C (zh) 2006-01-20 2009-04-08 清华大学 一种治疗肿瘤的药物及其应用
CN101002945B (zh) 2006-01-20 2012-09-05 清华大学 一种用于肿瘤治疗的新型复合物
AU2007250739A1 (en) 2006-05-16 2007-11-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Pharmaceutical composition for treating or preventing HCV infection
AU2007253264A1 (en) 2006-05-24 2007-11-29 Novo Nordisk Health Care Ag Factor IX analogues having prolonged in vivo half life
EP2061878B1 (en) 2006-09-08 2014-01-08 Ambrx, Inc. Hybrid suppressor trna for vertebrate cells
MX2009002523A (es) 2006-09-08 2009-03-20 Ambrx Inc Polipeptido de plasma humano modificado o andamios fc y sus usos.
CN1966547B (zh) * 2006-11-06 2011-11-09 中国药科大学 双链结构的聚乙二醇衍生物的制备及其与药物分子的结合
AU2007316875A1 (en) * 2006-11-07 2008-05-15 Dsm Ip Assets B.V. Carbamate, thiocarbamate or carbamide comprising a biomolecular moiety
KR101079993B1 (ko) 2006-11-17 2011-11-04 동아제약주식회사 폴리에틸렌글리콜 과립구 콜로니 자극인자 접합체
CN101219219B (zh) 2007-01-10 2013-02-13 北京普罗吉生物科技发展有限公司 包含血管抑素或其片段的复合物、其制备方法及应用
JP5515224B2 (ja) 2007-02-28 2014-06-11 日油株式会社 多分岐鎖ポリオキシアルキレン誘導体
AU2008232937B2 (en) 2007-03-30 2012-09-27 Ambrx, Inc. Modified FGF-21 polypeptides and their uses
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
PT2196475E (pt) 2007-09-04 2012-09-07 Biosteed Gene Expression Tech Co Ltd Interferão alfa-2a modificado por polietilenoglicol, seu processo de síntese e aplicação
DK2186830T3 (da) 2007-09-04 2012-04-02 Biosteed Gene Expression Tech Co Ltd Polyethylenglycol modificeret interferon alpha 2B og fremstillingsfremgangsmåde og applikationer deraf
EP2217265B1 (en) 2007-11-20 2017-05-10 Ambrx, Inc. Modified insulin polypeptides and their uses
EP2070950A1 (en) 2007-12-14 2009-06-17 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation
AU2009204998B2 (en) * 2008-01-18 2014-03-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Purification of non-glycosylated proteins
RS58948B1 (sr) * 2008-02-01 2019-08-30 Ascendis Pharma As Prolek koji sadrži linker koji se može sam odcepiti
NZ586947A (en) 2008-02-08 2012-11-30 Ambrx Inc Modified leptin polypeptides and their uses
CN101809038B (zh) 2008-04-03 2013-10-30 厦门伯赛基因转录技术有限公司 双链聚乙二醇修饰的生长激素及其制备方法和应用
CN102989001B (zh) * 2008-04-29 2014-12-03 阿森迪斯药物生长障碍股份有限公司 Peg化的重组人生长激素化合物
TW201010692A (en) 2008-06-19 2010-03-16 Public Univ Corp Nagoya City Univ Pharmaceutical composition for treatment or prevention of hbv infection
JP5675606B2 (ja) 2008-07-08 2015-02-25 ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム シグナル伝達性転写因子（ｓｔａｔ）の増殖及び活性化の新規の抑制剤
UA103774C2 (uk) 2008-07-23 2013-11-25 Амбркс, Інк. Модифіковані поліпептиди бичачого гранулоцитарного колонієстимулювального фактора (g-csf) та їх застосування
MX357314B (es) 2008-09-26 2018-07-04 Ambrx Inc Microorganismos y vacunas dependientes de replicacion de aminoacidos no naturales.
BR122012024318A2 (pt) 2008-09-26 2019-07-30 Ambrx, Inc. Polipeptídeos modificados de eritropoetina animal e seus usos
IT1399351B1 (it) 2009-06-16 2013-04-16 Fidia Farmaceutici Procedimento per la sintesi di coniugati di glicosamminoglicani (gag) con molecole biologicamente attive, coniugati polimerici e usi relativi
EP2459211A1 (en) 2009-07-31 2012-06-06 Medtronic, Inc. Continuous subcutaneous administration of interferon- to hepatitis c infected patients
CA2779244A1 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Dosage regimens for hcv combination therapy comprising bi201335, interferon alpha and ribavirin
AU2010332958B2 (en) 2009-12-15 2014-09-18 Ascendis Pharma Endocrinology Division A/S Dry growth hormone composition transiently linked to a polymer carrier
JP2013515080A (ja) 2009-12-21 2013-05-02 アンブルックス，インコーポレイテッド 修飾されているウシのソマトトロピンポリペプチドおよびそれらの使用
EP2805965A1 (en) 2009-12-21 2014-11-26 Ambrx, Inc. Modified porcine somatotropin polypeptides and their uses
EP3815708A1 (en) 2010-03-05 2021-05-05 Omeros Corporation Chimeric inhibitor molecules of complement activation
JP2013528374A (ja) 2010-05-10 2013-07-11 パーシード セラピューティクス リミテッド ライアビリティ カンパニー Ｖｌａ４のポリペプチド阻害剤
CN103096891A (zh) 2010-06-24 2013-05-08 判米德有限公司 利用羟氯喹或羟氯喹和抗病毒剂的组合治疗丙型肝炎病毒相关疾病
RU2447083C1 (ru) * 2010-07-20 2012-04-10 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ
JP2013541937A (ja) 2010-08-05 2013-11-21 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗ｍｈｃ抗体−抗ウイルス性サイトカイン融合タンパク質
SMT201900495T1 (it) 2010-08-17 2019-11-13 Ambrx Inc Polipeptidi di relaxina modificati e loro usi
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
TWI480288B (zh) 2010-09-23 2015-04-11 Lilly Co Eli 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
CN102229667A (zh) * 2011-06-03 2011-11-02 北京伟嘉人生物技术有限公司 一种聚乙二醇修饰的猪α-干扰素及其制备方法和应用
HK1199889A1 (en) 2011-07-01 2015-07-24 Bayer Intellectual Property Gmbh Relaxin fusion polypeptides and uses thereof
US20140377218A1 (en) 2011-08-03 2014-12-25 Cytheris Hcv immunotherapy
WO2013137869A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in an hcv-hiv coinfected patient population
JP2015512900A (ja) 2012-03-28 2015-04-30 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 特別な患者の遺伝子亜型分集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
US9738724B2 (en) 2012-06-08 2017-08-22 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
WO2014004639A1 (en) 2012-06-26 2014-01-03 Sutro Biopharma, Inc. Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
JP6826367B2 (ja) 2012-08-31 2021-02-03 ストロ バイオファーマ インコーポレーテッド アジド基を含む修飾アミノ酸
EA022617B1 (ru) * 2013-03-28 2016-02-29 Илья Александрович МАРКОВ Монопегилированный интерферон-альфа разветвленной структуры и фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа
EA023323B1 (ru) * 2013-03-28 2016-05-31 Илья Александрович МАРКОВ Разветвленный ацилазидный пегилирующий агент, способ его получения и способ получения пегилированного интерферона
EA021610B1 (ru) * 2013-03-28 2015-07-30 Илья Александрович МАРКОВ Жидкое противовирусное лекарственное средство
ES2865473T3 (es) 2013-07-10 2021-10-15 Sutro Biopharma Inc Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
EP3055298B1 (en) 2013-10-11 2020-04-29 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
EP2907512A1 (en) 2014-02-14 2015-08-19 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Inhibitors of MMP-12 as antiviral Agents
RU2554761C1 (ru) * 2014-05-13 2015-06-27 Закрытое акционерное общество "Сибирский центр фармакологии и биотехнологии" Противоэнтеровирусное и иммуностимулирующее средство
CN114805531A (zh) 2014-10-24 2022-07-29 百时美施贵宝公司 修饰的fgf-21多肽及其用途
SI3215193T1 (sl) 2014-11-06 2024-02-29 Pharmaessentia Corporation Dozirna shema za pegiliran interferon
KR20250059541A (ko) 2014-11-18 2025-05-02 아센디스 파마 엔도크리놀로지 디비전 에이/에스 신규한 중합체성 hGH 프로드러그
WO2016079302A1 (en) 2014-11-21 2016-05-26 Ascendis Pharma Growth Disorders Division A/S Long-acting growth hormone dosage forms
MX377531B (es) 2015-11-03 2025-03-10 Hoffmann La Roche Terapia de combinación de un inhibidor del ensamble de la cápside del hbv y un interferón.
CN106749608B (zh) * 2015-11-18 2021-10-15 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 干扰素α缀合物
WO2018087345A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION THERAPY OF AN HBsAg INHIBITOR, A NUCLEOS(T)IDE ANALOGUE AND AN INTERFERON
TW201837051A (zh) 2017-02-08 2018-10-16 美商必治妥美雅史谷比公司 包含藥物動力學增強劑之經修飾之鬆弛素(relaxin)多肽及其用途
RU2678332C1 (ru) 2017-09-08 2019-01-28 Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ") Пегилированный интерферон лямбда, обладающий высокой биодоступностью при пероральном применении, и способ его получения
AU2019337610A1 (en) 2018-09-11 2021-05-06 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and their uses
US20220009986A1 (en) 2018-10-19 2022-01-13 Ambrx, Inc. Interleukin-10 polypeptide conjugates, dimers thereof, and their uses
CN119455003A (zh) 2019-02-12 2025-02-18 Ambrx公司 包含抗体-tlr激动剂缀合物的组合物、方法和用途
SG11202108735QA (en) 2019-03-04 2021-09-29 Ascendis Pharma Endocrinology Div A/S Long-acting growth hormone dosage forms with superior efficacy to daily somatropin
EP4117732A1 (en) 2020-03-11 2023-01-18 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of use thereof
CA3190606A1 (en) 2020-08-20 2022-02-24 Ambrx, Inc. Antibody-tlr agonist conjugates, methods and uses thereof
IL303948A (en) * 2020-12-23 2023-08-01 Jazz Pharmaceuticals Ireland Ltd Methods of purifying charge-shielded fusion proteins
CA3213805A1 (en) 2021-04-03 2022-10-06 Feng Tian Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof
CN120676956A (zh) 2023-02-09 2025-09-19 谢彦晖 聚乙二醇修饰的白介素2、糖皮质激素和透明质酸用于治疗特应性皮炎

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3380726D1 (en) 1982-06-24 1989-11-23 Japan Chem Res Long-acting composition
US4681848A (en) 1982-09-22 1987-07-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel peptide and use thereof
WO1984004745A1 (fr) 1983-05-31 1984-12-06 Takeda Chemical Industries Ltd Nouveaux polypeptides et leur utilisation
GB8430252D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
DE3676670D1 (de) 1985-06-26 1991-02-07 Cetus Corp Solubilisierung von proteinen fuer pharmazeutische zusammensetzungen mittels polymerkonjugierung.
DE3719046A1 (de) 1987-06-06 1988-12-15 Basf Ag Verwendung von salzen von sulfonamidcarbonsaeuren als korrosionsinhibitoren in waessrigen systemen
US5122614A (en) 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5145773A (en) * 1989-05-25 1992-09-08 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method to detect sensitivity to alpha-interferon therapy
EP0400472B1 (en) * 1989-05-27 1996-04-03 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Process for preparing polyethylene glycol derivatives and modified protein.
US5238915A (en) 1991-02-08 1993-08-24 Wakunaga Seiyaku K.K. Aromatic composition and method for controlling aroma
US5595732A (en) * 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
GB9111967D0 (en) 1991-06-04 1991-07-24 Erba Carlo Spa 2,5'-nucleotide analogs as antiviral agents
US5281698A (en) * 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
RU2006036C1 (ru) * 1991-12-27 1994-01-15 Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи РАМН Способ определения антигенов
ZA933926B (en) 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US5382657A (en) * 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
NZ276943A (en) * 1993-11-10 1998-02-26 Schering Corp Substituted For Alpha-interferon conjugated to a non-antigenic polymer (preferably a polyalkylene oxide) and its preparation
DE69534676T2 (de) * 1994-02-08 2006-08-17 Amgen Inc., Thousand Oaks Orale Verabreichung von chemisch modifizierten Proteinen
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) * 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
TW426523B (en) 1995-04-06 2001-03-21 Hoffmann La Roche Interferon solution
CA2458085A1 (en) * 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay

Also Published As

Publication number Publication date
TJ97000465A (en) 1998-12-25
TW517067B (en) 2003-01-11
AR008378A1 (es) 2000-01-19
LU91029I2 (fr) 2004-01-23
YU17597A (sh) 1999-07-28
OA10488A (fr) 2002-04-11
IS1988B (is) 2005-02-15
HUP9700959A3 (en) 1998-03-30
NO972480L (no) 1997-12-01
EG24292A (en) 2009-01-08
EP0809996A2 (en) 1997-12-03
AU2372397A (en) 1997-12-04
PL186949B1 (pl) 2004-04-30
AU725195B2 (en) 2000-10-05
DE809996T1 (de) 1998-04-09
HRP970298A2 (en) 1998-04-30
CN1167777A (zh) 1997-12-17
IL120902A0 (en) 1997-09-30
TR199700358A3 (tr) 1997-12-21
DK0809996T3 (da) 2003-07-21
ATE235920T1 (de) 2003-04-15
CY2005006I2 (el) 2009-11-04
DE69720320T2 (de) 2004-06-03
JP2980569B2 (ja) 1999-11-22
DE69720320D1 (de) 2003-05-08
TJ328B (en) 2001-12-24
DE10399018I1 (de) 2003-10-23
BG101540A (en) 1998-02-27
CY2005006I1 (el) 2009-11-04
KR970074791A (ko) 1997-12-10
SK67397A3 (en) 1997-12-10
PA8431001A1 (es) 2000-05-24
NO322964B1 (no) 2006-12-18
NL300127I2 (nl) 2003-09-01
CY2433B1 (en) 2004-11-12
BG62273B1 (bg) 1999-07-30
NO972480D0 (no) 1997-05-30
SG55314A1 (en) 1998-12-21
CO4950528A1 (es) 2000-09-01
TNSN97091A1 (fr) 2005-03-15
CN1088721C (zh) 2002-08-07
HRP970298B1 (en) 2003-08-31
NL300127I1 (cs) 2003-07-01
HK1005225A1 (en) 1998-12-31
EP0809996B1 (en) 2003-04-02
IL120902A (en) 2004-06-20
HUP9700959A2 (hu) 1998-03-02
KR100254097B1 (ko) 2000-05-01
US20040030101A1 (en) 2004-02-12
UY24572A1 (es) 2000-12-29
EP0809996A3 (en) 1999-04-14
MX9704012A (es) 1997-11-29
NZ314903A (en) 1998-10-28
CA2203480A1 (en) 1997-11-30
JPH1067800A (ja) 1998-03-10
RS49533B (sr) 2006-12-15
IS4491A (is) 1997-12-01
CZ292775B6 (cs) 2003-12-17
GR970300063T1 (en) 1998-01-30
SI0809996T1 (en) 2003-08-31
PT809996E (pt) 2003-06-30
UA56989C2 (uk) 2003-06-16
SA97180030B1 (ar) 2005-11-12
PL320251A1 (en) 1997-12-08
US7201897B2 (en) 2007-04-10
ZA974583B (en) 1998-11-17
ES2110386T1 (es) 1998-02-16
MY117909A (en) 2004-08-30
ES2110386T3 (es) 2003-10-01
BR9703421A (pt) 1998-09-15
CA2203480C (en) 2009-06-30
SK284458B6 (sk) 2005-04-01
MA24193A1 (fr) 1997-12-31
RU2180595C2 (ru) 2002-03-20
HU9700959D0 (en) 1997-07-28
TR199700358A2 (xx) 1997-12-21
HU227992B1 (en) 2012-08-28
SV1997000049A (es) 1998-07-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0809996B1 (en) Interferon conjugates
TWI232882B (en) Poly-IFN-beta conjugates
JP5334347B2 (ja) 化学的に修飾した新規なエリスロポエチン刺激タンパク質組成物および方法
JP3747070B2 (ja) 改良型インターフェロン−ポリマーコンジュゲート
KR100689212B1 (ko) Ｇｃｓｆ 결합체
JP2989002B2 (ja) 化学修飾顆粒球コロニー刺激因子
HUT75533A (en) Improved interferon polymer conjugates
US20060029573A1 (en) Pegylated interferon alpha-1b
HRP931094A2 (en) Peg-interferon conjugates
CN101448525A (zh) 聚乙二醇-干扰素α缀合物
KR100888371B1 (ko) 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
HK1005225B (en) Interferon conjugates
MXPA97004012A (en) Conjugados de interfe
HK1131345A (en) Polyethylene glycol-interferon alpha conjugate

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20170530