CZ102499A3 - Heterocyklické sloučeniny a farmaceutický prostředek - Google Patents

Description

Oblast techniky

Vynález se týká heterocyklických derivátů s protinádorovým účinkem a farmaceutického prostředků, který tyto látky obsahuje.

Dosavadní stav techniky

DNA-topoisomerázy jsou enzymy, přítomné v jádrech buněk, kde katalyzují štěpení a opětné navazování sekvencí DNA, řídících topologický stav DNA. V poslední době převládají názory, že se topoisomerázy účastní také nadšroubovicého vinutí matrice v průběhu transkripce RNA. Existují dvě skupiny topoisomeráz savců. DNA-topoisomeráza-I katalyzuje změny topologického stavu DNA s dvojitým řetězcem vytvářením přechodných cyklů, při nichž štěpením vznikají části jednoduchých řetězců, které se pak opět na sebe navazují. Topoisomáraza-II mění topologii DNA tak, že vyvolává přechodné štěpení dvojitého řetězce, který se pak opět spojuje. Topoisomeráza-II savců byla dále klasifikována jako typ II-alfa a typ II-beta. Protinádorová účinnost látek, které jsou inhibitory topoisomerázy je pravděpodobně spojeno se schopností těchto látek stabilizovat enzymatický komplex, štěpící DNA. Tatochemickými látkami vyvolaná stabilizace enzymatického komplexu mění enzym na buněčný jed.

Některé protinádorové látky, které se v současné době klinicky používají jsou jedy vzhledem k topoisomeráze II savců. Jde například o adriamycin, aktinomycin D, daunomycin, VT-16 a VM-26. Na rozdíl od celé řady klinicky užívaných i prozatím pouze experimentálně zkoušených látek, které působí jako jedy vzhledem k topoisomeráze-II existuje prozatím • · • ·

jen omezený počet látek, identifikovaných jako jedy topoisomerázy-I. Z nejznámějších látek tohoto typu je možno uvést camptothecin a jeho strukturně příbuzné analogy. V poslední době byly identifikovány další látky s uvedeným účinkem, a to bi- a terbenzimidazoly podle publikace Chen a další,

Cancer Res., 1993, 53, 1332 až 1335, Sun a další, J. Med. Chem., 1995, 38, 3638 až 3644, Kim a další, J. Med. Chem., 1996, 39, 992 až 998, dále některé benzo/c/fenanthridiny a protoběrberiny a syntetické analogy těchto alkaloidů, popsané v publikacích Makhey a další, Med. Chem. Res., 1995, 5, 1 až 12, Janin a další, J. Med. Chem., 1975, 18, 708 až 713, Makhey a další, Bioorg. and Med. Chem., 1996, 4, 781 až 791 a také některé metabolity hub, jako bulgarein, popsaný v publikaci Fujíi a další, J. Biol. Chem., 1993, 268, 13160 až 13165 a saintopin podle publikace Yamashita a další, Biochemistry, 1991, 30, 5838 až 5845 a indolkarbazoly podle publikace Yamashita a další, Biochemistry, 1992, 31, 12069 až 12075.

Výjimečně vysoký účinek na topoisomerázu, pozorovaný u coralynu, nitidinu, 5,6-dihydro-8-desmethylcoralynu a příbuzných látek urychlil pokusy, týkající se poznání struktury, spojené s látkami, které jsou účinnými jedy, specifickými pro topoisomerázu I nebo topoisomerázu II, jak bylo popsáno v publikacích Gatto a další, Cancer res., 1996, 56, 2795 až 2800, Wang a další, Chem. Res. Toxicol., 1996, 9, 75 až 83, Wanf a další, Chem. Res, Toxicol., 1993, 6, 813 až 818. Společná vlastnost, kterou mají všechny tři uvedené látky, je přítomnost 3-fenylisochinoliniové skupiny ve struktuře těchto sloučenin.

I když řada uvedených látek měla stejný účinek na topoisomerázu I jako camptothecin nebo obdobný účinek na topoisomerázu II jako VM-26, mají tyto látky jen mírný cytotoxický účinek. Skutečnost, že jejich účinnost jako jedů pro topoisomerázy není v souladu s cytotoxickým účinkem, je pravdě• · podobně způsobena tím, že tyto látky nejsou tak snadno přijímány do buněk jako camptothecin nebo VM-26. Přítomnost kvarterní amoniové skupiny patrně brání vstupu sloučeniny do buněk. Je pravděpodobné, že látky typu coralynu a nitidinu musí být hydrolyzovány pro účinný transport s následnou dehydratací nebo cyklodehydratací za.opětného vzniku původní kvarterní amoniové sloučeniny. Tím by mohl být vysvětlen poměrně nízký protinádorový účinek, pozorovaný in vivo u látek typu coralynu nebo nitidinu.

Z toho co bylo uvedeno je zřejmé, že by bylo zapotřebí nalézt látky se zlepšeným protinádorovým i účinkem.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří heterocyklické sloučeniny obec ného vzorce I

R₄ (I) kde

R^, Rg, Rg, Rg a Rg nezávisle znamenají H, OH, N0_2> NH^, atom halogenu, NHCO-alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku v alkylové části nebo alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku, nebo ^R1 ^{a R}2 ^sP°l^ečně tvoří -0CH₂0- nebo R₂ a R₃ společně tvoří -OCHgO- nebo Rg a Rg společně tvoří -OCHgO-,

R₄ a R₇ nezávisle znamenají atom vodíku, alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku nebo chybí,

W znamená atom uhlíku nebo dusíku,

X znamená atom uhlíku nebo dusíku,

Y znamená -C=, -N= nebo přímou chemickou vazbu za předpokladu, že v případě, že Y znamená -C=, znamená X atom dusíku,

Z znamená -CH=CH-, -(CH₂)₂~ ^nel30 chybí, jakož i farmaceuticky přijatelné soli těchto sloučenin.

Podle jednoho z výhodných provedení vynálezu znamená

W atom .dusíku a Y znamená přímou chemickou vazbu. Podle jiné ho výhodného provedení znamená W atom uhlíku a Y znamená -C= nebo -N=.

Podle dalšího vhodného provedení vynálezu znamená Z skupinu -CH=CH- nebo -(CH₂)₂-. Podle dalšího výhodného provedení znamenají R^ a R_g alkoxyskupiny o 1 až 8 atomech uhlí ku, s výhodou methoxyskupinu nebo společně tvoří skupinu -0CH_o0-. R_q s výhodou znamená atom vodíku. Podle dalšího výhodného provedení znamená alespoň jeden ze symbolů R^ a Rg alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku, s výhodou methoxyskupinu, nebo tvoří tyto symboly společně skupinu -0CH₂0-.

Podle ještě dalšího výhodného provedení tvoří symboly R₂ a R₃ společně skupinu -0CH₂0-.

V případě, že X znamená atom uhlíku, znamená s výhodou R^ atom vodíku, methyl nebo ethyl nebo v případě, že X známe ná atom uhlíku, znamená R? s výhodou atom vodíku. V případě, že X znamená atom dusíku, R? s výhodou chybí nebo znamená methylovou skupinu. Obdobně v případě, že Y znamená -C=, znamená R^ s výhodou atom vodíku a v případě, že Y znamená • to • to

-N=, s výhodou chybí nebo znamená methylovou skupinu. Je zřejmé, že v případě, že X nebo Y znamená substituovaný atom dusíku, nese tento dusíkový atom kladný náboj.

Výhodnou skupinu heterocyklických sloučenin obecného vzorce I tvoří sloučeniny obecného zorce II

kde R^, Rg, Rg, Rg, Rg a R? mají některý ze svrchu uvedených výhodných významů pro tyto symboly, nebo farmaceuticky přijatelné soli těchto sloučenin.

Bylo prokázáno, že sloučeniny obecného vzorce I jsou účinnými cytotoxickými látkami proti nádorovým buňkám včetně takových, které již jsou proti různým účinným látkám odolné. Mimoto mohou některé sloučeniny obecného vzorce I vyvolat in· hibici topoisomerázy I. Působením sloučeniny obecného vzorce I je tedy možno vyvolat inhibici růstu nádorových buněk in vitro i in vivo podáním účinného množství této látky nebo její soli, popřípadě v kombinaci s farmaceutickým nosičem.

Součást podstaty vynálezu tvoří rovněž farmaceutický prostředek s protinádorovým účinkem, obsahující jako svou účinnou složku heterocyklickou sloučeninu obecného vzorce I v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem.

Vynález bude podrobněji popsán v souvislosti s přiloženými výkresy.

Přehled obrázků na výkresech

Na obr. 1 je znázorněna syntéza representativních benz/c/akridinů obecného vzorce I.

Na obr. 2 je znázorněna syntéza representativních benz/a/akridinů obecného vzorce I.

Na obr. 3 je obecně znázorněna syntéze representativních sloučenin podle vynálezu.

Na obr. 4 je znázorněna syntéza meziproduktů, které je možno použít pro výrobu sloučenin obecného vzorce I.

Podle vynálezu je možno vyvolat inhibici růstu nádorových buněk in vitro nebo in vivo tak, že se podá účinné množství sloučeniny obecného vzorce I. Pod pojmem účinné množství se rozumí takové množství, které vyvolá inhibici růstu cílových nádorových buněk. Vhodná dávka se obecně bude pohybo vat v rozmezí 0,5 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti za den.

Heterocyklické sloučeniny podle vynálezu a farmaceutické prostředky, které tyto látky obsahují je možno použít k léčení pevných nádorů u savců nebo krevních .nádorů. Z pevných nádorů je možno uvést zhoubné nádory hlavy a šíje, plic, mesotheliom, nádory mediastina, jícnu, žaludku, slinivky břišní, jater a žlučových cest, tenkého a tlustého střeva, rekta, konečníku, ledvin, močovodů, močového měchýře, prostaty, močové roury, penisu, varlat, gynekologických orgánů, vaječníků, mléčné žlázy, endokrinního systému, kůže a centrálního nervového systému, sarkomů měkkých tkání a kostí a melanomů kožního a nitrooČního původu. Z krevních nádorů může jít o leukémii a lymfomy u dětí, Hodgkinovu chorobu, lymfomy lymfocytárního a kožního původu, akutní a chronickou leukémii,

• to nádory z plasmatických buněk a nádory, spojené s AIDS. V úvahu padá léčení člověka a domácích zvířat.

Benz/c/akridlny vzorce I, v nichž X je atom dusíku a Y znamená -C=, je možno snadno připravit způsobem, uvedeným na obr. 1. Reakcí 2-amino-4,5-dimethoxyacetofenonu vzorce 4, s 6,7-dimethoxy-l-tetralonem vzorce 5 se získá 5,6-dihydro-2,3,9,10-tetramethoxybenz/c/akridin vzorce 6, který při zahřátí v suspenzi dekalinu na 190 °C v přítomnosti paladia na aktivním uhlí může být převeden na 2,3,9,10-tetramethoxybenz /c/akridin vzorce 7. Sloučeniny vzorce 6 a 7 mohou být převe děny na své 12-methylderiváty reakcí s dimethyl sulfátem za vzniku kvarterních amoniových solí vzorce 8 a 9.

Analogy benz/a/akridinu, v nichž X znamená atom uhlíku a Y atom dusíku,, je možno snadno připravit způsobem, znázorněným na obr. 2. Knoevenagelovou kondenzací příslušného o-nitrobenzaldehydu s 5,6- nebo 6,7-disubstituovaným beta-tetralonem se získají l-(2*-nitrobenzyliden)-2-tetralony 12a až f a j. Redukcí zinkem v kyselině octové se získají požadované 5,6-dihydrobenz/a/akridinové deriváty 13a až f a j. Zahřátím v dekalinu na 190 °C v přítomnost paladia na aktivním uhlí dojde k přeměně těchto dihydrosloučenin na jejich benz/a/akridinové deriváty vzorce 14a až d a j. V přípa dě, že se na sloučeninu vzorce 13a nebo 14a působí bromidem boritým v methylenchloridu, získají se tetrahydroxyanalogy vzorce 13g až 14g. Reakcí sloučenin vzorce 13a nebo 14a s dimethylsulfátem vznikají jejich 7-methylderiváty vzorce 15a a 16a.

Výchozí látky, 2-nitro-4,5-dimethoxybenzaldehyd a 2-nitro-4,5-methylendioxybenzaldehyd se běžně dodávají. Příprava 6-chlor-beta-tetralonu je popsána v publikaci Rosowsky a další, J. org. Chem., 1968, 33, 4288 až 4290.

·* ·· • · 4 4 • · 4 • · 4 • · * ·· 4444 «· »· • 4 * 444 • 4 44 • · 4 4

4 4 4 * * 444 444 • ·4 ·· ·4

7-nitro-beta-tetralon byl připraven ze 7-nitro-alfatetralonu způsobem podle publikace Nichols a další, Organic Preparations and Procedures, 1977, 277 až 280, jak je znázorněno na obr. 3. 7-nitro-betatetralon je meziproduktem pro výrobu sloučenin vzorce 20, 21, 22 a 23, jak je rovněž znázorněno na obr. 3.

5,6-methylendioxy-2-tetralon vzorce lle byl použit jako meziprodukt pro výrobu 5,6-dihydro-9,10-dimethoxy-3,4-methylendioxybenz/a/akridinu vzorce 13e. Tento tetralon byl připraven v šesti stupních způsobem, znázorněným na obr. 4.

2,3-methylendioxybenzaldehyd se kondenzuje s kyselinou malonovou za vzniku kyseliny 2,3-methylendioxyskořicové podle publikace J. Koo a další, Org. Synthesis Coli, sv. IV, 1963, 327 až 329. Kyselina 2,3-methylendioxyskořicová se hydrogenuje s použitím 10% Pd/C za vzniku derivátu kyseliny dihydroskořicové, který se pak převede na svůj ethylester vzorce 17 podle publikace M. A. Brook, T. N. Chen, Synthesis Comm., 1983 201 až 203. Ethyl-2,3-methylendioxydihydrocinnamát se pak převede na svůj beta-sulfoxid vzorce 18 podle publikace J. G. Cannon a další, J. Med. Chem., 1977, 20, 1111 až 1116. Pak se beta-ketosulfoxidový derivát vzorce 18 podrobí Pummererově přeskupení působením kyseliny trifluoroctové, čímž se získá 1,2,3,4-tetrahydro-l-methylthio-5,6-methylendioxy-2(lH)-naftalenonu vzorce 19 podle publikace Y. Oikawk, Tetrahedron, 1974, 30, 2653 až 2660. Hydrogenolýzou sloučeniny vzorce 19 při použití 10% Pd/C v ledové kyselině octové se získá derivát vzorce lle podle publikace D. E. Nicholes,

J. Med. Chem., 1990, 33m 703 až 710.

Farmaceuticky přijatelné soli sloučenin obecného vzorce I jsou stejně použitelné jako volné látky. Tyto soli je možno vytvořit s organickými nebo anorganickými bázemi, ·♦ ·· • · · ♦ • · · • · · • · * ·· ···· ·· ♦ · • · ♦ • · ··· • · · · • · · · ·· ·· ·· ·» • · · Λ • · · · • ··· *·· • · ·· 91 jako jsou hydroxid sodný, uhličitan sodný, hydrogenuhličitan sodný nebo hydroxid draselný a také s kyselinami, jako kyselinou chlorovodíkovou, sulfooctovou a podobně. Přestože sloučeniny podle vynálezu a/nebo jejich soli je možno podávat v čisté formě, výhodnější je jejich podání ve formě farmaceutického prostředku, obsahujícího alespoň jednu takovou látku a/nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl spolu s nejméně jedním farmaceutickým nosičem a popřípadě dalšími účinnými složkami. Použitý nosič musí být kompatibilní s ostatními složkami prostředku a nesmí mít nepříznivý účinek na organismus příjemce.

Farmaceutické prostředky mohou být určeny pro perorální nebo parenterální podání včetně podání nitrosvalového, podkožního a nitrožilního. Prostředky mohou být ve formě děleného prostředku s obsahem jednotlivé dávky v každé části, a mohou být připraveny obvyklými způsoby. Obvykle se postupuje tak, že se účinná látka mísí s kapalným nosičem, pevnou matricí, polotuhým nosičem, jemně částicovým pevným nosičem nebo s kombinací těchto materiálů, načež se popřípadě produkt zpracovává na požadovaný tvar.

Farmaceutický prostředek pro perorální podání může mít například formu kapslí z tvrdé nebo měkké želatiny, oplatek nebo tablet, z nichž každá obsahuje předem stanovené množství účinné složky. Může také jít o prášky nebo granuláty, roztoky, suspenze nebo emulze. Mimoto může mít účinná složka také formu pasty. Tablety a kapsle pro perorální podání mohou obsahovat běžné pomocné látky, jako pojivá, plniva, kluzné látky, desintegrační činidla nebo smáčedla. Tablety mohou být povlékány, například enterosolventním povlakem.

Kapalné prostředky pro perorální podání mohou být například suspenze, roztoky nebo emulze ve vodě nebo v oleji, sirupy nebo elixíry, nebo může jít o suché prášky, určené • · • ·

- 10 ke smísení s vodou nebo jiným nosným prostředím těsně před použitím. Tyto kapalné prostředky mohou obsahovat běžné přísady, jako suspenzní činidla, emulgátory a prostředí nevodné povahy včetně jedlých olejů a také konzervační činidla.

Sloučeniny mohou být také zpracovány na prostředky pro arenterální podání, například ve formě jednorázové Injekce nebo kontinuální infuze a mohou být připraveny jako ampule s obsahem jednotlivé dávky, jako předem naplněné injekční stříkačky nebo také mohou mít formu malých balení pro infuze nebo větších balení s obsahem většího počtu dávek spolu s konzervačním prostředkem. Prostředky tohoto typu mohou mít formu suspenze, roztoku nebo emulze v olejovém nebo vodném prostředí a mohou obsahovat také pomocné látky, jako suspenzní, stabilizační a/nebo dispergační činidla. Účinná látka může být podávána ve formě prášku, získaného aseptickou izolací nebo lyofilizací z roztoku a určeného pro smísení s vhodným prostředím, například sterilní bezpyrogenní vodou těsně před použitím.

Pro místní podání na pokožku mohou být účinné látky zpracovány na mazání, krémy nebo emulze nebo také na náplasti pro transdermální podání. Vhodné prostředky tohoto typu byly popsány například v US patentových spisech č. 4 788 603 (Fisher a další), 4 931 279, 4 668 504 a 4 713 224 (Bawas a další). Mazání a krémy mohou mít například vodný nebo olejový základ a mohou obsahovat zahuštovadla a/nebo látky, vytvářející gel. Emulze mohou být připraveny rovněž při použití vodné nebo olejové baze a obvykle budou obsahovat emulgátory, stabilizační činidla, dispergační činidla, suspenzní činidla, zahuštovadla nebo barviva. Účinná látka může být podávána také iontoforézou, například podle US patentových spisů č. 4 140 122,

383 529 nebo 4 051 842.

Prostředky, vhodné pro místní podání na ústní sliznici zahrnují například lékové formy, obsahující jednotlivou dávku • · • · • ·

- 11 účinné látky, může jít například o kosočtverečné tablety, obsahující účinnou složku v ochuceném základu, který tvoří obvykle sacharosa a akaciová nebo tragakantová guma, dále může jít o pastilky, obsahující účinnou látku v inertním základu, například může jít o želatinu a glycerol nebo sacharosu a akaciovou gumu. Mimoto může jít také o gely a ústní vody, obsahující účinnou látku v kapalném nosiči.

V případě potřeby je možno svrchu uvedené farmaceutické prostředky upravit tak, aby došlo k řízenému nebo zpomalenému uvolnění účinné látky. K tomuto účelu je například možno použít kombinaci s některými hydrofilními polymerními matricemi, jako jsou přírodní gely, syntetické polymerní gely a směsi těchto látek.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou obsahovat ještě další pomocné látky, jako látky pro úpravu chuti, barviva, antimikrobiální látky nebo konzervační prostředky.

Je zřejmé, že množství účinné látky nebo její soli, jehož je zapotřebí pro léčebné účely, se bude měnit nejen v závislosti na zvolené sloučenině nebo její soli, nýbrž také na dalších faktorech, jako je způsob podání, povaha léčeného onemocnění a věk a celkový stav nemocného, takže konečné rozhodnutí o velikosti použité dávky musí vždy učinit ošetřující lékař.

Obecně je však možno uvést, že se vhodná dávka bude pohybovat v rozmezí 0,5 až 100 mg/kg, například 10 až 75 mg/kg tělesné hmotnosti denně, běžně 3 až 50 mg/kg hmotnosti denně, výhodné rozmezí dávek je 6 až 90 mg/kg denně a zvláště 15 až 60 mg/kg hmotnosti denně.

- 12 Sloučeniny podle vynálezu se obvykle podávají v lékové formě, obsahující jednotlivou dávku, například 5 až 1000 mg, obvykle 10 až 750 mg a zvláště 50 až 500 mg účinné látky pro jednotlivé podání.

V ideálních případech by účinná látka měla být podávána tak, aby bylo dosaženo její nejvyšší koncentrace v krevní plasmě 0,5 až 75 yUM, s výhodou 1 až 50 a zvláště 2 až 30/UM. Toho je možno dosáhnout například nitrožilním injekčním podáním roztoku účinné látky s koncentrací 0,05 až 5 %, popřípadě ve fyziologickém roztoku chloridu sodného nebo perorálním podá ním 1 až 100 mg účinné látky. Žádoucí koncentrace v krevním oběhu může být udržována kontinuální infuzí, dodávající účinnou látku v množství 0,01 až 5,0 mg/kg za hodinu nebo přerušovanou infuzí, obsahující 0,4 až 15 mg/kg účinné látky.

Požadovaná dávka může být podána najednou nebo také rozděleně na několik dávek, které budou podávány ve vhodných intervalech, může jít například o 2, 3, 4 nebo větší počet dílčích dávek v průběhu dne. Dílčí dávka může být ještě dále rozdělena na větší počet podání, například v případě inhalace z tlakové nádobky nebo při podávání očních kapek.

··· ···· · ·· ···· ·· ·· · ·

Dále popssné Příklady, demonstrující různé aspekty předloženého vynálezu,, nejsou chápány tak,, že by jakýmkoliv způsobem limitovaly patentové nároky vynálezu.

Přikladl

Obecné poznámky

Teploty tání byly stanoveny pomocí Thomas-HooverovaJ monotavného kapilárního přístroje!( bodotávku).

Údaje o infračervených spektrech (IR), byly získány na Perkin-Elmerově, 1600} Fourierově transformačním spektrofotometru} a byly vyjádřeny v cm“¹. nukleární

Protonové} ( ¹H-NMR)} a uhlíkové} (¹³C-NMR)^magnetické rezonace byly zaznamenány na transformačním Fourierově spektrometru} ( Varian Gemini-200)} a spektra nukleární magnetické rezonance ( 200 MHz} ¹H} a 50 MHz}¹³C)J byla zaznamenána v CDCl^} ( pokud nebylo uvedeno jinak)} s chemickými posuny vyjádřenými v delta jednotkách}, ve směru klesajícího polej z tetraměthylsilanu. Kuplovací konstanty byly uváděny v hertzech.

Hmotnostní spektra byle získána z pracoviště Washington ' University Resourcesfor.Biomedisal and Bio-Organic Masa Spectrometry.

Sloupcová chromátografie se vztahuje na urychlenou chromatografii, prováděnou na systému SiliTeehJ 32-63 ^um} ( ION Biomedicals} EschweggeJ Německo)} za použití udaných systémů rozpouštědel.

Analysy spalin byly provedeny firmou Atlantic Microlabs} lne.} Norcross} GAJ s rozptylem + 0,4%.- 14 • · * • ♦ ··· · · · • · · • · · · · ·

Přípravě 2_t3,9,10-tetramethpxy-7-methyl-5,6-dihydrobenz-/c/4' akridinu

Sloučenina 6)

Ku roztoku, připravenému rozpuštěním 1,0 gj (5,10 mmolu);

2-amino-4,5-dimethoxyacetofenpnu; v 10,0 ml dichlormethanu, byl za intenzivního míchání přidán při teplotě místnosti; 1,0 M roztok chlorovodíku v bezvodém etheru.

Poté, po vysrážení hydrochloridové sole aminoacetofenonu z reakční směsi, bylo rozpouštědlo za vakua odstraněno; a výsledný pevný zbytek byl sušen po dobu 1,0 hodiny ve vakuu. Vysušená hydrochloridové sůl byla poté mechanicky smíchána se 1,59 gj ( 7,68 mmolu); 6,7-dimethoxy-1-tetralonu; a vzniklá směs byla poté převedena do uzavřené trubice; a zahřívána při teplotě 140,0°G; po dobu 1,0 hodiny.

Výsledný roztavený materiál ve formě zátky byl následně rozpuštěn ve 300,0 ml vroucího methanolu; a vzniklý roztok byl po zahuštění na objem 200,0 ml; ponechán přes noc v klidu,, za vzniku krystalické látky jehličkovítého tvaru. Tyto krystaly byly odfiltrovány; a 3x promyty s 5,0 ml acetónuj a následně byly vysušeny.Byly získány zlatově žlutě zbarvené jehličky derivátu benz/c/-akridinu»hydrochloriduj v 99%ním výtěžku»

Roztok, získaný rozpuštěním výše zmíněné hydrochloridové sole ve 200,0 mlj vroucího methanolu, byl po ochlazení na teplotu místnosti upraven pomocí koncentrovaného roztoku hydroxidu amonného, přidávaného po kapkách, až na pH 10,OJ přičemž se začaly vytvářet slabě žlutě zbarvené krystaly.

Vzniklá suspenze byle poté zředěna se 200,0 ml vody·, a následně byla 3x extrahována se 100,0 ml dichlormethanu.Spojené extrakty byly promyty jednou se 50,0 ml solanky; a po následném vysušení s bezvodým sírahem sodným byly zfi3stroványj rozpouštědlo bylo za vakua odstraněno;, a byla získána volné base. Teplota tání : 24O,O°CJ • · · · · · ♦

9 · · ···· • · · · · · · • · · 99· ·· ··

Infračervená spektrometrie;(nujol): 2922J 1620;

H-NMRJ( spektra nukleární magnetické rezonance):

delta; 2,52; ( 3h; S. ); 2,86; ( 2H; s. ); 3,02; ( 2h; t. ); 3,90; ( 3h; s. ); 3,98; ( 3h; _s. ); 4,03; ( 3h; ₈. ); 4,05 ;

( 3h; s. ); 6,70; ( ih; ₈. ); 7,os; ( ih; ₈. ); 7,43; ( ih ; s. ); 8,04; ( ih; s. ).

¹³C-NMR :

deltaj 16,50; 25,40; 28,00;.56,60; 56,70; 57,80; 58,30; 102,30; 102,70; 110,90; 111,so; 119,50; 123,20; 127,70; 134,70; 135,60; 146,30; 148,50; 149,70; 151,30; 153,50; 155,20.

Hmotnostní spektrometrie a velkým rozlišením :

Údaje propočteny pro sloučeninu sumárního vzorce W* ::

Vypočteno : 365.1630;

Nalezeno : 365.1628;

Příprava 5,6-methylendioxy-2-tetralonu

Sloučenina 11 e)

Ku směsi, připravené smícháním 0,669 gj ( 2,83 mM); Sloučeniny 19; v 10,0 ml ledové kyseliny octové;v hydrogenační nádobě, bylo přidáno 0,46 g; 10%ního palladia na aktivním uhlí; a vzniklá směs byla míchána v Parrově aparatuře, přát tlaku vodíku 275,80 KPaJ po dobu 40 hodin.

Po skončení výše popsané operace, byla reakční směs zfiltrována přes vrstvu infuzóriové hlinky, která byla 3x promyta • · ledové a 5,0 ml ledové kyseliny octové. Po odpařeníYkyseliny octové na rotační odparce,, byl získán surový tetralon; t.j. žádaná surová Sloučenina 11e).

Zmíněný surový tetralon byl poté reagován s bisulfitem sodným, za účelem konverze na mnohem stabilnější bisulfitový addukt. Čistý tetralon byl získán z bisulfitového adduktu smí chánim s 10%ním vodným roztokem uhličitanu sodného; a následnou extrakcí s dichlormethanem.

Teplota táni : 90,0 - 91,0°c;,(lit³⁶;88,0 - 91,0°C);

Infračervená spektrometrie;(nujol): 1715J delta; 2,50; ( 2H; t. ); 2,98; ( 2h; t. ); 3,50; ( 2h; s. ); 5,93; ( 2h; s. ); 6,56; ( ih; a.; j = 6,0 ); 6,65; ( ih; d.; j = 6,00 ).

¹³O~NMR :

delta*, 21,60; 37,90; 45,OO; 101,50; 107,40; 118,50; 121,10; 127,80; 144,10; 146,20; 211,20,

Analytické hodnocení sloučeniny dle sumárního vzorce ^G1 1^H10°3^: c; h;

í k 1 a d II • · • · • · · · · • ·’ ···· ··

Obecný postup pro synthesy derivátů 1-(24nitrobenzyliden)-2tetralonuj ( Obrázek 2 );

Roztok; ( 2,45 mmolu); připravený rozpuštěním příslušného

2-tetralonuJ 2-nitrobenzaldehyduJ a acetátu sodnéhoJ v ledové kyselině octovéJ ( 10,0 ml); byl zahříván za refluxu pod zpětným chladičem*, v atmosféře dusíku, po dobu 3i,0 až 8,0 hodin.

Po skončení výše popsané‘operace, byla reakční směs vytemperována na teplotu místnostiJ a poté byla opatrně nanesena na sloupec, připravený ze 75,0 g silikagelu; a následně byla ahromatografována za použití směsi ethyletheru a hexanůJO : 1)J jako elučního Činidla.

Žlutě zbarvená sloučenina, obvykle eluovaná ze čtvrtiny sloupce,, byla shromážděna; a byly získány příslušné tetralonové deriváty; ve 20 až 25,0%ním výtěžku.

Příprava 1-(2-nitro-4 3“^d^^methoxy^benzy¹i^den^^,^'^d^^me'^thoxy“·²'· tetralonu

Sloučenina 12a)

V nadpise uvedená,, žádaná sloučenina, byla připravena ze

6,7-dimethoxy-2-tetralonuJ a 6-nitroveratralaldehydz.

Teplota tání : 65,0 - 66,0°CJ

Infračervená spektrometrie;(nujol): 2855 J 1720; 1540;

¹H-NMR ::

delta; 2,71; ( 2h; t. ); 2,98; ( 2h; t. ); 3,35; ( 3h; s. ); 3,66; ( 3h; s. ); 3,89; ( 3h; _s. ); 3,97; ( 3h; a.)*, 6,41;

• 9

9 ^!( ih| a. ); 6,62; ( ih; a. ); 6,73; ( ih; _s. ); 7,74; (ih; a. ); 7,91; ( ih; a. ).

¹³C..-NMHř. :

delta; 28,40; 39,70; 56,50; 56,60; 56,80; 56,90J 107,70; 108,60; ni,20; 113,10; 128,10; 12930; 13030; 132,20; 133,30; 148,90; 149,00; 150,00; 153,30; 200,70.

Příprava 1-( 2-nitro-4 5-methylendi oxybenzyliden)-6,7-dimethoxy-2-tetralonu

Sloučenina 12b)

V nadpise uvedená,, žádaná sloučenina, byla připravena z

6,7-dimethoxy-2-tetralonuJ a 6-nitropiperonalu.

Teplota tání : 76,0 - 77,O°c;

Infračervená spektrometrieJ(nujol): 2875J 1723J 1553.

¹H-NMR :

delta; 2,68; ( 2h; t. ); 3,oo; ( 2H; t. ); 3,41; ( 3h; a. ); 3,90; ( 3h; s. ); 6,08; ( 2h; _a. ); 6,37; ( ih; a. ); 6,51;

( ih; a. ); 6,73; ( ih; _s. ); 7,68; ( ih; a. ); 7,83;( ih ;

3. ) · ¹³C.-NMR :

delta; 28,00; 38,00; 56,1OJ 56,40; 103,70; 105,9o; 110,10; π 11,30; 112,60; 124,30; 13030; 131,.10; 13230; 13330;’147,60; 148„40; 149,70; 152,50., • · · «·«· · « ······ ·· ·· ·» «·

Příprava 1 -(2-nitro-4,^z5-dimethoxybenzyliden)-2-te tralonu

Sloučenina 1 2g )

V nadpise uvedená,, žádaná sloučenina, byla_fpřipravena ze 2-tetralonu^ a 2-nitro-4,5-dimethoxybenzaldehydu.

Teplota tání :: 58,0 - 60,0°c;

Infračervená spektrometrie; (nujol):: 1724J, 1540J, delta; 2,71; ( 2h; t, ); 3,_;os;. ( 2H;, t* );, 3,56; ( 3h; _s. );,

4,,02; ( 3h;, s. ); 6,51; ( ih; s. ); 6,92 - 6,96;, (2h; m. ),

7,17 - 7,24; ( 2h; m. ); 7,73; ( ih* s. ); β,,αο; ( ih; s. ).

¹³C-SHR:

delta;, 28,30; 27,80*, 56,70*, 56,90; 108„30*,, 1 12„5O;_; 126,70,

127,60; 128,50*, 128,80*, 129,90*, 132, ,30J_? 133_r40*„ 134,50*, 138_r80*_ř 141„óo; 149„40; 153,50*

Příprava 1 - (2-nitro-benzyliden)-6,7-dime thoxy-2-te tralonu

Sloučeina 12č.)

V nadpise uvedená,, žádsná sloučenina, byla připravena ze 6,7-dimethoxy-2-tetralonu^ a 2-nitrobenzaldehydu* Teplota tání ~ 63,,0 - 64,,0°G.;

• 4

444 4444 4 4 •4 4444 44 44 44 · ·

Infračervená spektrometrie; (nujol): 171 2; 1540;

¹H-NMR:

delta; 2,69; ( 2H; t. ); 3,oi; (, 2h; t. );, 3,25; ( 3h; s«. ); 3„8β; ( 3h; s.. ) ; 6,26; ( ih; s. ); 6,72; ( ih; s> 7,25 7„26;, ( ih* nu );; 7,,44-- 7„50;, ( 2H-; nu ); 7,87; ( ih; s.. ); 8,12 - 8,17; ( 1H; m, )¹³C-NKK::

delta; 28„oo; $7/,9O; 55 „70;. 56,3a; 108,60; 111,30; 112,50; 124„2O; 124,90; 125„4O; 129,30; 130,10' 131,80; 133„5O; 133,:905, 134,70;, 147,50; 149,60; 200,70.,

Příprava 1-(2Aiitro-43ňimethoxybenzyliden)-5,6-methylendioxy2-tetnalonu

Sloučenina l2e)

V nadpise uvedená,, žádaná sloučenina, byla připravena ze 5,6-metbylendiiaxy-2-tetralonn; a 2-nitro-4,5-dimethoxybenzeldehydu*

Teplota tání :: 66,0 - 68,0°c;

Infračervená spektrometrie;(nujol): 1710J 1553J ¹ ffi-MB.::

dteita; 2„98; ( 2H; t*. ); 3,19; ( 2h; t.);_? 4,02; ( 3h; s. ); 4,03;, ( 3h; s., ); 6,03; ( 2h; _s. ); 6,82; ( ih; a.; J = 8,10;

4

4

4444

7„07; ( ih; s. ); 7,29; ( ih; a.; j = 8,10 ); 7,49; ( ih; s. ); 8,20; ( ih; s. k delta; 21,80; 30,80; 56,50*, 56,70; 101,,80; 105,70; 107,60; 117,90;, 119„10*,, 123,-90; 125,90; 126„90; 128,70; 143,40; 145,40; 147,70; 150,,1 o; 152,,90; 156,10; 176,,40,

Analytické hodnocení sloučeniny C₂₀H_1?N0_? x dle sumárního vzorce c; h; n;

Příprava 1 -(2-nitro-43-áimethoxybenzyliden)<-5,6-dimethoxy-2tetralonu

S 1 o u č e n i m a 12f)

V/ nadpise uvedená,, žádaná sloučenina,, byla připravena ze 5,6~dimethoxy-2-tetnalonu; s 2-nitro-4,5-dimethoxybenzaldehydu.

Teplota tání r 70,0 - 72,O°0.;

Infračervená spektrometrie;( nuáol)t 1715; 1550;

¹ HtOTB:

delta; 2,59; ( 2h; t. );, 3,06; ( 2h; t. ); 3,78; ( 3h; _a. ); 3,86;, ( 3h; s» ); 3„se; ( 3h; ₈. ); 3,92;. ( 3h; s. );, 6,47 ;

( ih; s. ); 6,77; ( ih; j = 8,20 ); 7,41; ( ih; a.; j * 8,20 );, 7,67; ( ih; _s< ), • ·

0

0 • 000 •¹³C-NMR .

delta;, 19,70; 32,00’, 56,3O; 56,70; 56,80’, 56,,85; 108,JO’,, 12l_r90;, 1 25,60; 126,10; 128,0; 129,,2O; 132„,io; 132,90*, 133,70’, 140,30*, 14130; 149,30; 152„9O;. 153,>50;, 20QD,_ř904

Analytické hodnocení sloučeniny dle sumárního vzorce C^C^iNO? :

c; h; n;

Příprav® 1 -(2-nitno'-4,^/5'-áimethoxybenzyliden)“6-chlor-2-tetr8lonu

Sloučeni ni a 12j)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena ze

6-chlor~2“tetralonuj a 2-nitro-4,5-dimethoxybenzaldehydu.

Teplota tání :: 56,0 - 58,.Q^P2’

Infračervená spektrometrie; ( nujol):: 2922J. 1730;, 11Q0;

¹H-OTR:

deitaj 2,68; ( 2h; t.. );, 3,05; ( 2h; t..); 3462; ( 3n;_t S. );,. 3,98; ((3H;, s. );, 6,48;, (ih;. );, 6,82;, ( ih; a.; j = 8,40);

6,,90 - 6,96;, ( ih; d.d.; j =·.8,40; 2,10; ); 7,26; ( ih; d.; j = 2,10 );, 7,74; ( ih; s. ); 8,01; < ih; s. h ¹³C-W:

(delta; 28,20; 37,40; 56,80; .56,907,; 108,30; 112,20; 127,00;.. . Ϊ27„20; 128,60; .130,90; 131, ,10; 133,30; 134,20; 134,50; 140,50; 141,50; 149,60; 153,,704 ^? i

• AAA • A A A AAAA

A A A AAA

AA AAAA AA AA

Příprava 1 -^-nitrn-^^-áímethoxybenzylidenJ-^-nitro-^-tetraíonu

Obrázek; 30

W nadpise uvedená,, žádaná sloučenina, byla připravena ze

7-nitro-2-tetralonu; a 2-nitro-4_r5-dimethoxybenzaldehydu.

Teplota tání :: 125,.Ο°0:;

Infračervená spektrometrie;(nujol): 1724£ 154OJ 1545;

¹H-HBffii delta; 2„69; ( 2HJ t. )*„ 3,16; ( 2H; t. )*_r 3,59^#, ( 3H; a. ); 4,01; ( 3h;,'s. );, 6,45; ( ih; _s. ); 7,41; ( ih; a.; j = 8,10); 7,68; ( ih; a.; j = 2,,20)5.7,72; ( ih; _a. ); 7,94 - 7,99*,(ih; aua.; J = 8„4o; 2,20 ); 8„08·„ ( ih;, s. ).

¹ deltaj, 28,40;, 36,90; 56,9O; 57,00'J 10B,70J_; 111,6O;_? 123„2O;

124,,20; 126,10; 129,70; 132,50; 133,90; 135,80; 141,40; 145,®; 146,80;, 150,,1 o;, 154,1O;_? 198,4Q>

Příklad III

Obecný postup pro synthesy derivátů 5,6-dihydrobenz-/a/-akridinu í Obrázek 2 ).

999

9 9 9 9 9

9999 99 ! Příslušný 1-(2-nitrobenzyliden)-2-tetralonový derivát ( 0,30 mmolu)} byl rozpuštěn v 10,0 ml ledové kyseliny octové} a poté byl zahříván za refluxu pod zpětným chladičem; v atmosféře dusíku;, za přítomnosti.1,64 mmolu} zinku v práškové formě; po dobu 1,0- 4,0 hodiny.

Po skončení výše popsané.operace byla reakční směs vytemperována na teplotu místnosti} a následně byla jako taková nanesena opatrně na sloupec naplněný se 100,0 g silikagelu; a po té byla chromátografována nejprve za použití 500,0 ml ethyletheru;, za účelem odstranění kyseliny octové',, a poté byla elu ována se směsí hexanů; a ethylacetátu.

V případě potřeby byla polarita mobilhí fáze snížena smícháním s vhodnými podíly hexanů» Příslušné frakce byly poté shromážděny a za vakua byly zahuštěny.

Byly získány příslušné 5,6-dihyčrobenz-/a/-akridiny}. ve výtěžku 83,0 - 95„0%»

Příprava 2,3„9 ,,1O-tetraměthoxy-5,6-dihydrobenz/a/-akridinu

Sloučenina 13a)

V nadpise uvedená,, žádaná sloučenina, byla připravena ze 1 - (2-ni tro-4,5-dime thoxybenzyliden) -6 ,,7-dime thoxy-2-1e tralonu. Teplota tání :: 182,0 - 183,0^PC}

Infračervená spektrometrie}(nujol): 3210} 1615} ¹H-NMR::

delta; 2,99} ( 2H; t. )} 3,23} ( 2H} t. )} 3,94} (3H} s. )} • ···

4,oo.; ( 3h; s. ); 4,02; ( 3h; _s.);/4»04; ( 3fí·; 9. ); 6,79; 2 '( ih; s. ); 7,10; ( ih; a. ); 7,31; ( ih; a. ); 7,54; (ικ;, a. ); 8,17; ( 1H; a» )* ¹³C-KB:

delta; 28,80; 32»30; 56,50;. 56,70; 1O5„7O; 107„20; 107,50;, 111,80$ 123„9O; 125,BOJ 1 27„1 o; 128„OO; -130,50; 143,.10;. 148,80$ 149„6o;, 152„80;, 156,70$ 176,70. .

Hmotnostní spektrometrie a velkým rožlišením ϊ

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzoree ^G'21^H21^NO4^:

Vypočteno :: 351»1471$

Náležena: t 351.1475y

Příprava 2,_;3-dimethoxy-9,_!10-methylendioxy-5,6-dihydrobenz/a/akridinu

Sloučeni m a 13b)

V nadpiee uvedená, žádaná sloučenina,, byla připravena ze 1 - (2-nitro-4 3~^me thylendioxybenzyliden) -6 ,,7-dime thoxy-2-te tralonu«.

Teplota táni : 218,,0 - 219„O°C$

Infračervená spektrometrie; (nujol):: 2780J 163OJ ¹H-OTR:

delta; 2,97;.. ( 2h; t.. ); 3,17; ( 2h; t. ); 3,93;, ( 3h; a. );, ·

• ·** • · · 9 9 9 9 « · ·· *·»* ·· ·· ·· ··

4,oo; ( 3h;, s. ); 6,07; ( 2H; _a. ); 6,79; ( ih; s. ); 7,07; ^r ( ih; a. );, 7,29; ( ih; _a. ); 7,32; ( ih; _a. ); 8,07; ( ih;

* ) «>

¹³C-WU' delta; 29,00; 33,4O;. 56,50; 56,70; 102,10; 103,-30f 105,70; 107,160;, iii„8o; 125,20; 125,90; 127,00; 128,00; 130,60;, 145,00; 147,90; 148,80; 149,60; 150,,80; 156,90.,

Hmotnostní spektrometrie s velkým rozlišením:

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce ^C20^H17^NQ4^:

Vypočteno : 335*1158;,

Nalezeno :: 335 ♦ 116 2J,

Příprava 9„10-dimethoxy-5„6-dihydrobenz/a/-akridinu

Sloučenina 13u)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina,, byla připravena ze 1 ~(2-nitro-4 ,'5-dimethoxybenzylxden)-2-tetralonu.

Teplota tání 95,0 - 96,,O°c;

Infračervená spektrometrie;(nujol): 1633; 1516;

delta; 3,06;, ( 2H; t. ); 3,24; ( 2h; t. ); 4,02; ( 3h; s. );,

4,03;·' ( 3h; s. ); 7,10; ( ih; s. ); 7,28 - 7,37; ( 3h; m. );.

7,5.0; ( ih;, s. );, 7,82; ( ih; a.; j * 7,00 ); 8,29; ( ih; _a.);

000. 0 • 0 0 0 0 000 0 0 0 0

000 0000 0 0 00 000« 00 00 ·· ·· ¹ delta; 29,20;_s 32,30; 56,50*, . 56,70; 105,90; 1O7„4O; 124,00; 124,30; 127,30; 127,70; 128,50; 128,90; 129,10; 133„8O; 137, ,60; 144,20¼ 150,50;. 153,10..

Hmotnostní spektrometrie a velkým rozlišením:

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce G^IF^NOgt

Vypočteno :: 291 .1259»,

Nalezeno s 291 *1250-J

Přípfiava 2,3~dimethoxy-5,6-dihydrofeenz/a/-akridinu

Sloučeni n\ a 13&)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena ze 1 -(2-nitro-benzyliden)-6,7-dime thoxy-2-te tralonu.

Teplota tání :: 55,0 - 56,O°c;

Infračervené spektrometrie;(nujol)r 2815 J, 1615;

delta; 2,,96¼ ( 2HJ, t., ); 3,23; ( 2HJ t. )J 3,9OJ ( 3HJ s. ); 3,-98· ( 3H; s. )J 6,75; (. 1HJ s. )J J,30J ( 1HJ a. )’, 7,44 *, ( 1H; t. ); 7,60; ( 1H; t. ); 7,so; ( ih; d.; j = 10,20 ); 8,00; ( ih; d.; j = 10,20 ); 8,19; ( ih;, s. );

¹³c,-nmr:

delta; 27,30; 28,90; 56,50; 56,60J 106,20; 110,7o; 125,20;

• to ·· • · · • · • · · · to to · toto· toto toto • ·· to • to · · ·· ·· ··

'136^3.0; 151 „30; 153,60*, 157,80.

Hmotnostní spektrometrie s velkým rozlišením:

Úd a je propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce Ο^Η^γΝΟ^ε Vypočteno :: 291 »1259*,

Náleženo

291♦1246

Příprava 5,6-dihydr.o-9,10-dimethoxy-3,4-me thylendioxybenz/a/akridinu

Sloučenina I3e)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena ze 1 - (2-ni tro-4 5-dime thoxybenzyliden)-5,6-me thylendioxy-2-te trelonu.

W.plota tání ε 220,.0 - 222,0°c;

Infračervená spektrometrie *, (nujol): 1715J 1532J

H-NMR:

¹³H-NMR:;

l • · · · · · · ·· · · · · »· ··

Analytické hodnocení sloučeniny dle sumárního vzorce ^C20^H17^N0 c; h; n;

Příprava 5,6-dihydro-3,4,9,1O-tetraměthoxybenz/a/skridinu

Sloučenina 13®')

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena ze

1-(2-nitro-4 ,'5-dime thoxybenzyliden)-5,6-dimethoxy-2-tetralonu. Teplota tání :: 195,0 - 196,0°c;

Infračervená spektrometrie;(nujol): 173OJ 1515;

¹H-NMR:;

deltaj 2,82; ( 2HJ t. )J 3,2OJ ( 2H; t. ); 3,86; ( 3H; s. );

3,91; ( 3h; s. ); 4,03; . ( 3h; _s.:); 4,04; ( 3h; s. ); 6,935;

( ih; a.; j = 8,60 ); 7,10; ( ih; _s. ); 7,52; ( ih; _a. );

7,56; ( ih; a.; j = 8,60 ); 8,27; ( ih; s. ).

^{1 3}H-NMK::

delta; 21,80; 31,60; 56,40; 56,60J 56,80; 61,10J 105,80; 106,40; 106,50; 107,60; 111,40; 111,90; 120„40; 124„1O; 127 ,,w; 129,30; 131,60; 150,30; 150,40; 153,40; 156,30.

Analytické hodnocení sloučeniny dle sumárního vzorce ^e21^H2l^N°4_: ^: c; h; n;

Příprava 2-amino-9,10~dimethoxy-5,6-dihydrobenz/a/akridinu ý ( Obrázek 3J 20. )

V nadpise uvedená,, žádaná sloučenina,, byla připravena ze

1-(2-nitro-4 ,'5-dime thoxybenzyliden)-7-nitro-2-te tralonu.

Teplota tárjí : 185,0°c;

Infračervená spektrometrieJ(nujol): 3345; 2895\ 1330;, ¹Η-Γβ; (CDJ30)::

delta; 2„9β; (2H; t* ); 3,36; ( 2h; t. ); 3,98; ( 3h; _a. );

4,02; ( 3h; _a, ); 7,24; ( ih; d.; j = 10,00 ); 7,32 - 7,.38;

( 2h; m, ); 7,88;, ( ih; 3» ); 8,17; ( 2h; _a* )» ^{1 3}c-nmr; (cn^OB):

delta;, 24,50; 27,70; 57,00; 57,10;. 99,40; 1O7„9O; 117,70; 121,90; 123„2O; 125„9O* 128„9O; 130_r10;· 133,,20,

Hmotnostní spektrometrie s velkým rozlišením::

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce

Vypočteno : 306*7 369;

Nalezeno :: 306*7369;

Příprava 3-chlor-9,10-dimethoxy-5,6-dihydrobenz/a/-akridinu

Sloučenina 13j)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina,, byla připravena ze • · li -(2-nitro-4,^z5Ú(3imethoxybenzyliden)-6-chlor-2-tetralonu.

Teplota tání í 197,,O°GJ

Infračervená spektrometrie}(nujol): 2895} 1105} ¹H-NMR:

delta} 2,96} ( 2HJ t. )} 3,12}( 2HJ t.)}, 3,97} ( 3H} s. )}

3.. 98} ( 3H} s. )} 7,00} ( 1H} s. )} 7,20 - 7,26}. ( 2HJ m.)}

7,32} ( 1H} a. )* 7,64}, ( 1Η}' d.} J = 8,10 )} 8,11} ( 1H} s.)} delta} 29,10} 32,60} 56,50} . 56,,60} 105,80} 107,80} 123,60}

125,60} 125,80} 127,,70} 128,60} 128,80} 132,30} 133,90} 139,30}

144.. 40} 150,,00} 153*00* 156,,60.

Hmotnostní spektrometrie s velkým rozlišením; ::

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce C^H^CINO^:

Vypočteno z 325.0869}

Nalezeno :: 325.0887},

Příklad

Obecný postup pro synthesy Itez/a/akridinů a benz/c/-akrídinů z jejich 5,6-dihydro derivátů.

( Obrázek z)

Příslušné deriváty 5,6-dihydrobenz/a/akridinu_F nebo 5,6- 32 ··«· • · · · · to ···· ·· to· · · dihydrobenz/c/-akridinu;(O,22 mmolu); byly zahřívány za refluxu pod zpětným chladičem v 15,0 ml dekalinu; v atmosféře dusíku;, za přítomnosti 76,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí; po dobu 2,0 až 9,0 hodinu.

Po skončení výše popsané operace byla poteVrychle zfiltrována odsátím za horka; přes vrstvu infuzóriové hlinky,, za použití skleněného filtru ze slinutého materiálu.Filtrační koláč byl poté 3 x promyt vždy se 20,0 ml vroucího chloroformu, a poté 2 x vždy se 20,0 ml vroucího ethylacetátu»

Spojené filtráty byly poté za vakua zahuštěny; a za vakua byly vysušeny;, a byly získány příslušné deriváty benz/a/-akridinu»

Příprava 2,,3,,9,10-tetraměthoxy-7-methylbenz/c/akridinu ( Obrázek 1\ 7 )

V nadpise uvedená,, žádaná sloučenina, byla připravena ze Sloučeniny &»

Teplota tání :: ^250,0°c;

Infračervená spektrometrieJ(nujol): 352OJ 1633J 1610;

¹H-NMR:

delta; 2,87; ( 3H; s. ); 4,03$ ( 3HJ s. ); 4,04; ( 3H; s. ); 4,13; ( 3h; s. ); 4,23; ( 3H; s. ); 7,17; ( ih; _a. ); 7,20 ;

( ih; s. ); 7,52; ( ih; a.; j = 9,20 ); 7,59; ( ih; _a. ); 7,80; ( ih;.d.; j = 9,20 ); 8,87; ( ih; _a. ).

¹³C-NMR:

• 4

4

444 4 444 4 • 4 4444 44 44 44 44 ;delta;

Ί 20,8o;

139,:ΟΟ;

14,40; 56,40; 56,70; 101 ,70; 106,00.; 108,,20; 108,30;.!

_; 122„1O; 122,40; 125,50; 125,80; 126,90;, 128,60; 135,70;

145,,20; 149,80; 150,90; 153,,30.

Hmotnostní spektrometrie s velkým rozlišením ::

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce ^22^21

Vypočteno :: 363.1470;

Nalezeno r. 363.1472;

Příprava 2,3 ,_;9,1O-te traměthoxybenz/a/akridinu

Sloučenina 14a)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena ze Sloučeniny 13a); popsané výše»

Teplota tání í: 247,0 - 249,0°C;

Infračervená spektrometrie;(nujol): 2810; 163OJ

delta J	; 3,99		3h;	>	s. ); 4	,01	; ( 3h; s. ); 4,03; ( 3h; s.);
4,08;	( 3h;	s.	);	7	,os; <	ih;.	3. ); 7,-12; ( ih; s. ); 7,12;
( ih;	s. );	7,	41;	(	ih; s.	);	7,74; ( ih; d.; j « 9,3Q));
7,81;	( 2h;	m.	);	8	,82; <	ih;	s. ).

¹³C-NMR:

deltaj 56,30; 56,40; 56,50; 56,60; 103,90; 104,80; 106,80;, 10@„20; 122,80; 123,00; 124 ,,50; 126,20; 126,40; 127,70; 130,70; 145,70; 147,20; 149,80; 149,90; 150,30; 153,90.

- 34 'Hmotnostní spektrometrie s velkým rozlišením :

Úd a je propočteny φ&ο sloučeninu dle sumárního vzorce

Vypočteno: 349*1314}

Nalezeno :: 349*1314}

Příprava 2„3-dimethoxy-9,10-methylendioxybenz/a/akridinu

Sloučenina 14b)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena ze Sloučeniny 13b)} ‘popsané výše*

Teploia tání : 245,0 - 246,0°G}

Infračervená spektrometrie}(nujol): 2790; 1630;

delta} 4,06} ( 3H} s. )} 4,16} ( 3H} s. )} 6,15} ( 2H} s, )}, 7,25} ( 2H} s. )} 7,48} ( 1HJ g. )} 7,84} ( 1H} d.} J « 8,20)} 7,99} ( 1H} s. )} 8,99} ( 1H} s. )»

I ¹³G-NHR:

delta} 56,50} 56,60} 102,30} 102,40} 104,-10} 104,90} 109,40}

112.. 80} 122,90} 124,40} 126,50} 126,70} 128,,50} 130,90} 135,70}.

147.. 00} 148,,40} 150,,10} 152„OO*

Hmotnostní spektrometrie s velkjáým rozlišením::

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce ^20^15^4

Vypočteno :: 333.1002;

Nalezeno :: 333 • · • · • ··· • · · ··>· · «« ···· ·· ·· ·· ··

- 35 'Příprava 9,J 0-dimethoxybenz/a/-akridinu

Sloučenina 14c)

V nadpise uvedená,,, žádaná sloučenina, byla připravena ze Sloučeniny 13c)) popsané výše.

Teplota tání : 181,0 - 182„0°c;

Infračervená spektrometrie) (nujol):: 2883) 1621) ¹H-NMRí:

delta) 4,09) ( 6H) s. )) 7,,26), ( 1H) s. )), 7,54) ( 1H) s. )) 7,60 - 7,71) ( 2H) m. )) 7,89 - 7,96), ( 3H) m. )) 8,69), (1H)

®.) J = 8,10 )) 9,,23) ( 1H) s. )„ ¹³G-NMR:

delta) 56,60) 56,70) 1055,,10) 107,,10) 122,90), 123,30) 123,40* 12§>„5O) 127,,60) 128*50) 128,,70) 129,,30) 130,,40) 131,50) 131 „60)_:

135,,70) 146,40) 148,,00)) 150,60) 154 „30.

Hmotnoatnáapektrometrie s velkým rozlišením :

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce Ο^Η^γΝΟ^ϊ

Vypočteno : 289.1104)

Nalezeno c 289.1104)

Příprava 2,,3-dimethoxy-benz/a/akridinu

Sloučenina 14ái)

V nadpise uvedená,, žádaná sloučenina, byla připravena ze í

Sloučeniny 13d)J popsané výše.

Seplota tání: 190,0 - 192,0°0;

Infračervená spektrometrie;( nujol): 2881J, 1632J delta;, 4,02; ( 3h; s. ); 4,13; ( 3h; s. ); 7,18; ( ih; _a. );

7,51 - 7,59; ( ih; rn. ); 7,72 - 7,81; ( 1H; m. ); 733; ( 1H;

s. ); 739; ( ih; s. ); 7,93 - 8,22; ( 2H; m. ); 8,23; ( ih; d.; J = 8,50 ); 9,13; ( ih; _a. ).

^{1 3}C-HBS:

delta; 56,50; 56,60; 104,40‘, 109,50; 124„20; 124,50; 126,30; 126,40; 126,8; 126,90; 128,50; 129,40;.130,oo; 130,10; 130,20; 132,30; 148„1O; 14930; 15030; 15030.

Hmotnostní spektrometrie s velkým rozlišením:

Úd a je propočteny pro sloučeninu dke sumárního vzorce

Vypočteno : 289.1104J

Nalezeno :: 289.1099;

Příprava 3-chlor-9,10-dimethoxybenz/a/-akridinu

Sloučenina 14j)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla.připravena ze Sloučeniny 13j); popsané výše.

Teplota tání :

241,0 - 243,0°C;

Infračervená spektrometrie;(nujol): 2893; 1108;

¹H-NMR::

delta; 4,04; (3h; s. ); 4,06;.( 3h; s.); 7,09; ( ih; s. );

7,43; < ih; s. ?; 7,51 - 7,57; ( ih; a.a.; j = 8,so; 2,20); 7,68; ( ih; a.; j = 9,10 ); 7,75; ( ih; a. ); j = 2,20); 7,90;

( ih; a.; j - 9,10 ); 8,42; ( ih; a.; j = s,so ); 8,92;(ih; s. );

¹³G-NMR:

delta 56,60; 56,70; 1O4,,9OJ . 1O6,9OJ 122,70; 123,30; 124,30J 127,80; 128,20; 128,30; 128,60; 129,70; 13O„2O; 132,50; 132_ř20J 146,40; 147,40; 150,70; 154,40,

Hmotnostní spektrometrie s velkým rozlišením :

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce C^gH^ClNO^:

Vypočteno : Nalezeno :

323.0713; 323.0713;

Příklad W

Obecný postup pro N-methylaci benz/a/-akridini5; a benz/c/-akridinů

Ku 0,27 mmolům příslušného benz/a/-akridinu;. nebo b§z/c/4· akridinn; byly přidány 4,0 ml dimethylsulf átuj a vzniklá reakční směs byla zahřívána v atmosféře dusíku v olejové láznij při teplotě 150,0°C; po dobu 20,0 minut až 5,0 hodin.

• ···

Po skončení výše popsané operace bylo ku reakční směsipřidáno 10,0 ml bezvodého ethyletheru poté, co byla směs ochlaana na teplotu místnosti; a při přidávání ethyletheru byla intenzivně míchána.

Sraženina kvarterní sole byla poté odsátím zfiltrována, a poté, co byla vysušena trojnásobným promytím s 10,0 ml bezvodého ethyletheru;, byla vysušena..

Kvarterní sol& krystalizovaly z vroucího methanolu v 90%ním výtěžku..

Příprava 2,3,9_r1O-tetramethoxy-7,12-dimethyl-5„6-dihydrobenz/c/akridinium methosulfátu ( Obrázek 1J 8)

V nadpise uvedená sloučenina, byla připravenazae Sloučeniny 6J popsané výše»

Teplota tání :: />25O,,O°CJ

InfraČervenánspektrometrieJ ( nujol):: 3510; 1645; 1613;

¹H-NMR;.( CDýOL):

delta; 2,9O; ( 3H; a.. )*, 2,96; ( 2HJ t. ); 3,08; ( 2HJ t. )J 3„93; ( 3h; s. ); 4,00; ( 3h; _a. ); 4,10; ( 3h; _s. ); 4,is ;

( 3h; s. ); 4,62; ( 3h; s. ); 7,17; ( ih; _s.. ); 7,42; ( ih ;

s. ); 7,61; ( ih; s. ); 7,63; ( ih; _s. )· ¹³C-NMR:

delta; 16,60; 27,20; 29,00; 46,20; 57,00; 57,20; 57,30; 57,40;

• to « · • · to · • 9 • to

100,70; 105,50; 112,_;50; 115,20; 121 „20; 125,10; 133,40; 138,50; 139,70; 149,70; 150,50; 152,70; 152,90; 154,80; 157,40»

Hmotnostní spektrometrie s velkým rozlišením :

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce C^H^NO^::

Vypočteno : 380»1858;

Nelezeno :: 380.1856;

Příprava 2,3,9„1O-tetraměthoxy-7,12-dimethylbenz/c/akridinium? methosulfátu ( Obrázek 1; 9 )

V nadpise uvedená,, žádaná sloučenina, byla připravena ze Sloučeniny 7.

Teplota tání : 240,0°c;

Infračervená spektrometrie’, (nujol): 3495; 1640; 1615J ¹ H-NMEt; ( DMSO-d₆):

delta; 2,53; ( 3H; _a. ); 3,39; ( 3H; s. ); 3,97; ( 3H; s. )·„ 4,03; ( 3H; S. ); 4,16; ( 3h; s. ); 4,17; ( 3h; a.); 7,69;

( ih; s. ); 7,75; ( ih; _g. ); 7,91; ( ih; s. ); 7,99; ( ih; a.; J = 9,50 )_? 8,24; ( ih; a.·, j = 9,50 )..

¹³G.-N®R:

delta; 15,50; 55,40; 56,40; 56,50J 56,7OJ 102„10; 106,30’,, 110,30; 111_r20; 125,80; 123,20; 122,50; 128,80’, 129,00; 130,90; 133,30; 139,00; 141,10; 147,60; 152, JO’, 153,80; 155,30.

• · • ···

Hmotnostní spektrometrie s velikým rozlišením:

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce ^23^H24^N°4⁺

Vypočteno : 378*1698;

Nalezeno :: 378*1695;

Příprava 2,3,:9,1O-te tramě thoxy-7-methy 1-5,6-dihydrobenz/a/-akri dinium methosulfátu

Sloučenina 15®)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena ze Sloučeniny 13®)*, popsané výše.

Teplota tání : 25O,O°CJ

Infračervená spektrometrie;(nujol): 3490; 1620;

¹H-NMP; (DMSO-dg):

delta; 3,06; (2HJ t. ); 3,37*, ( 5H; t. ); 3,8$; ( 3H; s. );

3,93; ( 3h; s* ); 4,02; ( 3h; s. ); 4,05; ( 3h; _s. ); 7,04;

( ih; s. ); 7,45; ( ih; s. ); 7,62; ( ih; s* ); 7,63; ( ih;

s. ); 9,29; ( ih; s. )* ¹³C-NMR:

deltaj 25,9O; 27,80; 53,10; 56,00; 56,10; 56,70; 56,80; 99,60; 106„60;_f 106,70; 107„90; 112„2O; 112„30; 122,00; 124,40; 127,30; 129,10; 148,8o;, 150,30; 151,10; 153,,oo; 155,30*

Hmotnostní spektrometrie s velikým rozlišením ::

• · * · • ·

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce ^θ22^Η24^Νθ4^+:

Vypočteno 366.1706;

Nalezeno 366.1706;

Příprava 2 „3,9 „1 O)-tetraměthoxy-7-methylbenz/a/akridinium methoaulfátu

Sloučenina 16a)

V nadpise uvedená, žádaná sloučenina, byla připravena ze Sloučeniny 14a); popsané výše*

Teplota tání : ^250,0¾

Infračervená spektrometrie;(nujol): 2820J 1620;

¹H-NW;( LMSO-dg):

delta; 2,39; ( 3H; s. ); 3,96; ( 3H; s. ); 3,97; ( 3H; s. );

4,03; ( 3h; _s. ); 4,07; ( 3h; a. ); 7,59; ( ih; a. ); 7,67 ;

( ih; a. ); 7,85; ( ih; d.; j = 9,20 ); 8,25; ( ih; _a. ); 8,31;

( ih; d.; j = 9,20 ); 8,75; ( ih; ₃. ); 10,is; ( ih; a. ).

¹³c-nmr :

delta; 54,40; 56,80; 56,90J.57,50; 57,90; 1O5,7OJ 106,70; 107,90; 110„40; 123,20; 125,30; 125,40; 127,80; 127,90; 128,30; 131,40;. 146,80; 149,30; 152,0; 158,50; 159,9.0*

Hmotnostní apektrometrie s velikým rozlišením;

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce C wr

22ⁿ22 no₄+ • · • · · • · ···

Vypočteno : 364.-1549;

'Nalezeno :: 364.3 542;

Příklad

Obecný postup pro ayntheay 2,3,9,,10-tetrahydroxy-5,6-dihydrobenz/a/akridinu; ( obrázek 2*, 13g)J a 2,3,9,1O-tetrshydroxybenz/a/akridinuj ( obrázeM 2J I4g);

Pňříslušné deriváty benz/a/akričinu;( 0,195 mmolů); byly rozpuštěny ve 2,0 ml dichlormetftanuj a vzniklý roztok byl za použití chladící lázně; sestávanící z isopropanolu a pevného « « / . k Q CX JX, X» Sl Z θ XX oxidu uhličitého ( suchy led),vfra teplotu minus 50,0 <£,Roztok, ( 1,0 M); připravený z 1,95 mmolů boridu bromitého; v dichlormetitanu, byl přidán v atmosféře dusíku kuývýšěCžmíhŽhému, vychlazenému roztoku derivátů benz/a/-akridinu; a vzniklá reakční směs byl míchána při teplotě minus 50,0°C; po dobu 1,0 hodiny.

Po skončení výše popsané operace, byla reakční směs vytém pérována pomalu; během 4,0 hodin; ha teplotu místnosti; a následně, po ochlazení na teplotu 1O,O°G.; byla smíchána s 5,0 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Výsledná směs tiy la odpařena do sucha; a vzniklý zbytek byl 3 x extrahován vždy se 20,0 ml vroucího acetonu·

Výsledná, žlutě zbarvená suspenze, byla vždy zfiltrována,, a nerozpustná sraženina byla rozpuštěna v 5,0 ml vroucího methanolu; a poté byla ponechána přes noc v klidu usadit.

Vznikly krystaly jehličkovitého tvaru, příslušných tetrahydroxyhenz/a/-akridinů_t, Výtěžek 95,0#,.

• · • 0

000 « 0 000 00 00 000 000 000 0000 0 0 00 0000 ·· 00 00 ··

Příprava 2 „3 „9 ,1 O--te trahydroxy-5,6-dihydrobenz/a/-akridinu

Sloučenina 13g)

V nadpise uvedená, Žádaná sloučenina, byla připravena ze Sloučeniny 13a); popsané výše.

Teplota tání >220,0°c;

Infračervená spektrometrie\(nujol): 3361J3164; 2719¼ 1620;

¹H-BI3SER;( GBjGĎ):

delta; 2,97;, ( 2H; t., ); 3,35; ( 2h; t. 6,77; ( ih; s. ); 7,45; ( 3h; m. ); 8,83; ( ih; s. );

¹³c-nmr;( cd₃oh ):, delta; 27,40; 29,20; 102,90; 112,50; 116,60¼ 122,90; 126,50;

128,,50; 129„40; 134,80; 135,60¼ 146, _?60; 148, _:6o; 151, jo; 152,90; 156,00*.

Hmotnostní spektrometrie s velikým rozlišením ε

Údaje propočteny pro sloučeninu dle sumárního vzorce Ο^γΗ^ΝΟ^:

Vypočteno : 295*0845;

Nalezeno :: 295.0842J

Příprava 2,3,9,,10-tetrahydroxybenz/a/akridinu

SloučeZnina I4g)

V nadpise uvedená,, žádaná sloučenina, byla připravena ζθ Sloučeniny 14a)J popsané výše.

• ·

444

444 4444 4 4

4444 44 44 44 44

Teplota tání : 270,0°c;

Infračervená spektrometrieJ(KBr): 3361J3164;1620J1516;

’η-μ; ( CD₃OD0:

delta; 7’,26·;, ( ih; s. ); 7,37; ( ih; s. ); 7,56; ( ih; s. ); 7,61; ( ih; a*; j = 9,20 ); 8,05; ( 2h; m. );, 9,61; ( ih; _s,) ¹³c-nme;( ορ₃οπ):

delta; 101,30; 108,70; 110,30; 114,70; 122,,90; 124,_:40; 126,70 137„6o; 137,80; 138,30; 139,00; 149,40; 150,70; 150,80;159„30

Hmotnostní spektrometrie s velikým rozlišením :

Údaje propočteny pro sloučeniu dle sumárního vzorce C^H^NO^

Vypočteno : 293»0688;

Nelezeno :: 293*0685;

Příklad VII

Synthesa 7-nitro-2-tetralonu ze 7-nitro-1-tetrslonu ( Obrázek 3 ) •Příprava 7-nitro-1,2,3,4-tetrahydro-í-naftalenolu

Ku kaši, připravené rozmícháním 2,88 gj( 15,0 mmolu); 7nitro-1-tetrslonu; v 60,0 mi; abeolutního ethanolu, bylo přidáno 0,58 gj (15,0 mmolu); tetrahydroboritanu sodného; a vzniklá reakční směs byla poté míchána při teplotě místnosti po dobu 2,0 hodin.

• · « » ·*· ··· • · · · · ··· · ♦ ·

Výsledný směs byla odpařena na rotační odperce do sucha; a vzniklý zbytek byl nasuspendován do 100,0 ml} vody; a ku ,¾ této suspenzi bylo přidáno po kapkách 3N roztoku kyseliny chlo rovodíkové v takovém množství, až bylo docíleno pH 7,0.áVzsiklé suspenze byla poté extrahována 5x vždy s 50,0 ml ethyletheru} a spojené etherové vrstvy byly promyty jednou se 100,0 ml vody.

Etherová vrstva byla vysušena s bezvodým síranem sodným} zfiltrována} a po odpaření na rotační odparce byl získán bělavě zbarvený abytek, který byl překrystalizován ze směsi} absolutního ethanolu a vody} ( 1 1 )} a bylo získáno 2,68 gj naftalenolu}, ve výtěžku 92,0%.

Teplota tání : 112,0 - 113,,0^oC}

Infračervená spektrometrie;(KBr): 3300} ^H-NHER;

delta} 1,73 - 2,26} ( 4H} m. )} 2,29} ( 1H} s. )} 2,78 - 2,91} ( 2H} m. )} 4,83} ( 1HJ m. )} 7,24} ( 1H} d.} J = 8,10 )}

8,00 - 8,04} ( 1H} d.d.} J = 8,10} 2,40 )} 8,35} ( 1H} d.J J = 2,40 )} ¹³C-NTO :

delta} 19,20} 29,90} 32,50} 68,30} 122,70} 124,10} 130,30}

140,,90} 145,40.

Příprava 7-nitro-3,4-dihydronaftalenu

Směs, připravená smícháním 2,89 gj ( 14,90 mmolu)} 1naftalenolu} 3,50 g} iontoměnné kationtové pyrskyřice • to • * «* · ··· toto·· · · ·· toto·· ·· »· ·· ··

Amberlyst-15J a 120,0 ml; benzenu; byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem;_: v atmosféře dusíku; po dobu 2,0 hodin.

Vzniklá reakční směs byla poté ochlazena na teplotu místnosti; a poté byla vysušena bezvodým síranem sodným; a zfiltrována. Získaný filtrát byl poté na rotační odparce odpařen do sucha; až na produkt olejovité konzistence; ve výtěžku 92,0%.

Zmíněný produkt byl dostatečně čistý; a byl použit v dalším stupni bez dalšího čištění.

Infračervená spektrometrie;(KBr): 1545J ¹H-NMR:

delta, 2,,25 - 2,36; ( 2H; m. ); 2,77 - 2,86; ( 2HJ t. ); 6,08J - 6,17; ( ih;, m. ); 6,40 - 6,45; ( ih; m. ); 7,14; ( ih_? d.; j = 8,,10 ); 7,72; ( ih; a.; j = 2,30 ); 7,83 - 7,89; ( ih; d. a.; j = 8,10; 2,30 ).

^{1 3}C-NMR:

delta; 23,00; 27,90; 12O„6o; 122*10; 126,70; 128,50; 131,,90; 135,60; 143,,5O; 147,30 .

Příprava 1 „2-epoxy-7-nitro-1, 2,3,,4-tetrahydronaf talenu

Ku roztoku,, připravenému rozpuštěním 0,50 g;( 2,85 mmolu)J7 nitro-3,4-dihydronaftalenu; v 9,0 ml chloroformu, byl přidán v jedné dávce 0,677 gj m-chloperoxybenzoové kyseliny; a výsledný roztok, byl zahříván za refluxu pod zpětným chKÍičem po do'bu 45 minut..

• 4 • 444

4 4 •4 4444

4 4 · · ·· ··

Vzniklá reakční byla poté ochlazena na teplotu 0°C; a (' vysrážená kyselina m-chlorbenzoová byla odstraněna filtrací. Chloroformová vrstva byla poté na rotační odparce odpařena; a byla získána alabě žlutě zbarvená pevná látka, která byla chromátografována přes silikagei;( 50,0 g); a eluována s dichlorme thanem..

Příslušné frakce byly spojeny; a následně byly na rotační odparce odpařeny.

Bylo získáno 0,487 g epoxidu; ve výtěžku 89,50%.

Teplota tání : 73,0 - 74,0°c;

Infračervená spektrometrie$(KBr): 3300,0* ¹H-NMR:

delta; 1 ,70 - 1,86; ( 1HJ m. )$ 2,42 - 2,52; ( 1H$ m. )$ 2,54+2,90;, ( 2h; m. ); 3,75 - 3,77; ( ih; t. );. 3,91 - 3,933; (ih; d.; j = 4,.20 ); 7,22 - 7,26;: ( ih; d.; j = 8,40 ); 8,05 - 8,11; ( ih; d.d.; j = 8,4o;_:. 2,40 ); 8,24; ( ih; d.*, j = 2,40 );.

¹³C-NMR:

delta; 21,,60$, 25,10J, 52„3OJ 55,20$ 123,,80$ 124,80*, 129,90$ 134,90; 145,00»

7-nitro-2-tetralon

K roztoku 0,5 g, 2,6 mmol svrchu získaného epoxidu v 5 ml bezvodého benzenu se přidá 0,37 g, 1,1 mmol bezvodého jodidu zinečnatého. Směs se míchá ve tmě pod dusíkem při teplotě místnosti. Pak se směs zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a výsledný žlutý olej se smísí se 3 ml chladného absolutního ethanolu, čímž dojde ke krystalizaci produktu. Při opakované krystalizaci z koncentrovaného matečného louhu se ve výtěžku 83 % získá 0,415 g produktu s teplotou tání 96 až 97 °C.

·♦

4 4 4

4 4

4«

4 4

4 4 4»

44

4 4 4

4 4 4

44« 4444 4 4

4444 44 44 44 44

- 48 IR-spektrum :(KBr) : 1710, 1330, 1500.

¹H-NMR: 2,59 - 2,66 (2H, t), 3,15 - 3,21 (2H, t) , 3,72 (2H, s), 7,38 - 7,43 (IH, d, J = 8,3), 7,98 (IH, d, J = 2,2),

8,02 - 8,03 (IH, dd, J = 8,3, 2,2).

Příklad VIII

Materiály pro biologické zkoušky

Plasmid pETlla a kmen E. coli BL21(DE3), užitý pro expresi enzymu byly získány od firmy Novagen. IPTG byl získán od firmy Sigma. ECL systém, užitý pro analýzu Western blot bakteriálních lysátů dodala firma Amersham. Restrikční enzymy a polymeráza Vent jsou výrobky New Englaňd Biolabs. Topoisomeráza II savců byla izolována z telecího brzlíku způsobem podle publikace Halligan a další, J. Biol. Chem., 260, 2475 až 2482, 1985. Plasmid YCpGALl kvasinek, v němž dochází k expresi různých genů pro topoisomerázu I v kvasinkách kmene JN2-134 byl získán jako dar od Dr. M. A. Bjornsti (Thomas Jefferson University, Philadelphia, PA). Všechna prostředí pro pěstování bakterií a kvasinek jsou výrobkem Difco (detroit, MI), prostředí pro pěstování tkáňových kultur bylo získáno od Gibco-BRL (Gaithersburg, MD).

Příklad IX

Exprese topoisomerázy I v E. coli

Aby bylo možno získat velké množství lidské topoisomerázy I, byla klonována cDNA lidské topoisomerázy ve vektoru pET-lla, v němž je transkripce cDNA pod řízením indukovatelného promotoru T7 podle publikace Studier a další, Methods in Enzymol., sv. 185, 60 až 89, San Diego: Academie Press,

1990. Postupuje se tak, že se fragment DNA o 3,4 kb, obsahující

Φ· ·< • · ·

• · • 4 ·· celou kódovou sekvenci lidské topoisomerázy I a přibližně 1 kb nepřenesené oblasti směrem po směru translace od stop kodonu izoluje z plasmidu YCpGALl-hTOPl, popsaného v publikaci Bjornsti a další, Cancer Res., 49, 6318 až 6323, 1989 tak, že se plasmid rozštěpí v místě štěpení enzymy BamHI a EcoRI. Vektor pET-lla se rozštěpí týmiž restrikěními enzymy, defosforyluje a naváže na uloženou část v příslušném čtecím rámci od místa klonování ve vektoru po směru exprese. Směs pro vazbu pak byla použita k transformaci E. coli, byl izolován správný klon pETIB a jeho totožnost byla ověřena vytvořením mapy restrikčních enzymů. Vzhledem k tomu, že počátek translace v pET je uložen v místě Ndel po směru exprese, má topoisomeráza I po expresi 15 aminokyselin a N-zakončení.

Pak se pETIB užije k transformaci E. coli BL21 (DE3) a po indukci 0,4 mM IPTG po dobu jedné hodiny se lyzát bakterií analyzuje na 10% SDS-PAGE. Exprese byla potvrzena metodou Western blot při použití králičích protilátek proti lidské topoisomeráze I. Izolace bílkoviny po expresi byla provedena jednoduchým způsobem. Postupuje se tak, že se buňky E. coli rozruší ultrazvukem. Rozrušený materiál se doplní chloridem sodným na koncentraci 1M NaCl a přidá se 6 % polyethylenglykolu PEG k odstranění nukleových kyselin. PEG supernatant se přímo chromatografuje na sloupci hydroxyapatitu. DNA pro lidskou topoisomerázu I po expresi se vymývá 0,6 M fosfátem draselným. Enzym se dialyzuje proti roztoku s obsahem 50 % glycerolu, 30 mM fosfátu draselného o pH 7,0, 1 mM dithiothreito lu DTT a 0,1 mM EDTA a pak se uloží při teplotě -20 °C. Relaxační účinnost čištěného enzymu má specifickou účinnost o dva řády nižší než topoisomeráza I, připravená z telecího brzlíku.

• ·

- 50 Příklad X

Exprese topoisomerázy I, odolné proti camptothecinu (CPT-K5) v Escherichia coli

Byly syntetizovány dva komplementární oligonukleotidy, obsahující bodovou mutaci CAG(Asp533)- >CGG(Gly), zodpovědnou pro fenotyp odolnosti v CPT-K5 a tyto oligonukleotidy byly uloženy do kódové sekvence topoisomerázy I při použití PCR podle publikace Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel a další, (eds.), sv. 1, str. 8.5.7. Boston: Wiley Interscience 1991. Jde o následující dva oligonukleotidy: 5'-CTTCCTCGGGAAGGGCTCCATCAGATAC-3' (priraer XI, řetězec 1 a 5'-GTATCTGATGGAGCCCTTCCCGAGGAAG-3' (primer X2, řetězec 2), v nichž podtržená část sekvence znamená mutovaný kodon.

Každý z oligonukleotidů byl požit v odlišné reakci PCR k amplifikaci dvou segmentů DNA, sousedících s místem mutace při použití oligonukleotidů 5'-ACTGTGATCCTAGGG-3' (A) (řetězec č. 3) a 5'-CTTCATCGACAAGCTTGCTCTGAG-3' (H) (řetězec č. 4) jako relativních párů příměrů pro XI a X2.

Primery A a H” jsou komplementární k sekvenci lidské topoisomerázy I v sousedství jediného místa působení restrikčního enzymu AvrlI a HindlII. Po prvním průběhu PCR byly dva amplifikované produkty Xl-H a X2-A denaturovány a spojeny svými komplementárními sekvencemi o 15 párech baží vzhledem k překrytí oligonukleotidů XI a X2. Tento krátký úsek DNA s dvojitým řetězcem byl pak prodloužen při použití polymerázy Vent při teplotě 72 °C na 2 minuty na plnou délku produktu A-H, 748 párů baží. Dva externí primery A a H pak byly použity k amplifikaci fragmentu DNA s plnou délkou s obsahem mutovaného fragmentu topoisomerázy I. Tato amplifikovaná cDNA pro mutanty topoisomerázy I pak byla rozštěpena enzymy AvrlI a HindlII a klonována v pETIB zařazením odpovídajícího fragmentu AvrlI/HindlII do sekvence cDNA pro topoisomerázu I. Plasmid pETlB-CPTK5, obsahující cDNA pro • · • ·

- 51 mutovanou CPT-K5 topoisomerázy I místo CDNA pro divoký typ lidské topoisomerázy I byl užit k transformaci E. coli BL21 (DE3) k dosažení exprese. Po indukci pomocí IPTG byla přítomnost bílkoviny v lyzátu potvrzena metodou Western blot.

Pak byla topoisomeráza I CPT-K5 čištěna z lyzátu bakterií způsobem popsaným pro divoký enzym.

Příklad XI

Štěpení topoisomerázy I a II

Zkoušky na štěpení rekombinantní topoisomerázy I a topolsomeráz I a II z telecího brzlíku byly provedeny podle publikace Liu a další, J. Biol. Chem., 258, 15365 až 15370, 1983. DNA plasmidu YEpG, užitého pro zkoušky na štěpení byla značena na svém 3*-zakončení při použití uvedeného postupu.

Příklad XII

Zkoušky na cytotoxicitu na kvasinky

Bylo zjištěno, že kvasinky přežívají i po zániku funkce topoisomerázy I a látky, vyvolávající inhibici topoisomerázy I způsobí uhynutí pouze těch buněk, u nichž je funkce topoisomerázy I zachována podle Bjornsti a další, Cancer Res., 49, 6318 až 6323, 1989. To znamená, že při srovnání relativního rozsahu růstu zkoumaných kmenů v přítomnosti různých látek při použití kontrolních ploten bez obsahu jakékoliv látky je možno prokázat 1) zda zkoumaná látka má jakýkoliv cytotoxický účinek na kvasinky, 2) zda cytotoxicita je specifická pro topoisomerázu I a 3) zda existuje specifičnost účinné látky pro kvasinky ve srovnání s účinkem na lidskou topoisomerázu I.

• ·

- 52 Zkouška na specifičnost topoisomerázy I v případě cytotoxicity in vivo byla upravena podle publikace Knab a další, J. Biol. Chem., 268, 22322 až 22330, 1993. V tomto systému dochází k expresi různých genů pro topoisomerázu I, klonovaných v plasmidu jako vektoru, YCpGALl, popsaném v téže publikaci, pod řízením promotoru GAL1 v kmenu JN2-134 S. cerevisiae (MATa, rad52::LEU2, trpí, ade2-l, his7, ura3-52, isel, topl-2, leu2) podle publikace Bjornsti a další,Cancer Res.,

49, 6318 až 6323, 1989. Konstrukce topoisomerázy I ve vektoru jsou konstrukce z kvasinek divokého typu, YCpGAL-ScTOPl, jde o nefunkční topoisomerázu I z kvasinek, v nichž účinné místo tyrosinu v poloze 727 je mutováno na fenylalanin, YCpGALl-SctoplY727F podle publikace Knab a další, J. Biol. Chem., 268, 22322 až 22330, 1993, a konstrukce divokého typu lidské topoisomerázy I YCpGAL-hTOPl podle publikace Bjornsti a další, Cancer Res., 49, 6318 až 6323, 1989. Aby bylo možno kvalitativně zkoušet cytotoxicitu a specifičnost různých látek pro topoisomerázu I, byly kvasinkové buňky s obsahem specifického plasmidu sériově ředěny vždy pětkrát a pak pěstovány v prostředí, doplněném uracilem a 2 % galaktosy. Mimoto obsahovaly plotny s pozitivními a negativními kontrolami následující složky: A: kontrola bez účinné látky na plotnu, B: Camptothecin CPT, 0,5/uM, C: Coralyne, l^uM, D: methylendioxydihydrodemetnylcoralyne, MDD-Coralyne, l^uM, E: Nltidin, l^uM. Plotny byly pěstovány 3 dny při teplotě 30 °C, aby bylo možno stanovit letální účinek různých sloučenin na enzymy, k jejichž expresi dochází v S. cerevisiae.

Příklad XIII

Zkouška na cytotoxicitu

Hodnoty ΙΟ^θ pro zkoumané látky byla stanovena při použití mikrotitrační plotny MTT zkouškou s tetraoliniovými ·· ·· 00 00 • · · · · · • ··· · 0 · 0 • · 0 0 ··· 0 0 0 • · · « 0 ► · · · 0 0 0 0

sloučeninami MTA podle publikace Mosmann T., J. Immunol. Methods, 65, 55 až 63, 1983 a Ďenizot a další, J. Immunol. Methods, 89, 271 až 277, 1986. Buňky RPMI 8402 lidských lymfoblastů a buňky CPT-K5, odolné proti camptothecinu a popsané v Andoh a další, Proč. Nati. Acad. Sci., USA, 84,

5565 až 5569, 1987, byly získány od Dr. Toshiwo Andoh, Aichi Cancer Center Research Institute, Nagoya, Japonsko. Buněčné linie A2780 a její derivát CPT-2000, odolný proti camptothecinu byly získány jako dar od Dr. Jauland Hwang, Institute of Molecular Biology, Academia sinica, Taiwan. Buňky byly pěstovány v množství 2000 buněk/vyhloubení ve 200 mikrolitřech živného prostředí v suspenzi při teplotě 37 °C v přítomnosti 5 % oxidu uhličitého a byly pěstovány běžným pasážováním v prostředí RPMI, doplněné 10 % fetálního telecího séra, inaktivovaného působením tepla, 2 mM L-glutaminu, 1OO jednotek/ml penicilinu a 0,1 mg/ml streptomycinu. Buněčný materiál byl 4 dny kontinuálně vystaven působení koncentrace účinné látky v rozmezí 100 mikrogramů/ml až 1,0 ng/ml v desetinásobném ředění, výsledek zkoušky byl odečítán na konci čtvrtého dne. Každá koncentrace a kontroly bez účinných látek byly opakovány nejméně dvakrát vždy v šesti vyhloubeních. Výsledky byly zaznamenány graficky a byla měřena hodnota IC₅₀· Buněčná linie lidského epidermoidního karcinomu KB-3-1, citlivá na působení chemických látek a varianta KB-V1, odolná proti většině chemických látek a podrobena selekci při použití vinblastinu podle publikace Akiyama a další, Genetics, 11, 117 až 126, 1985, byly získány jako dar od Dr. Michaela Gottesmanna, National Cancer Institute. Buněčný materiál byl pěstován v souvislé vrstvě při teplotě 37 °C v přítomnosti 5 % oxidu uhličitého a udržován pasážováním v Dulbeccově minimálním základním prostředí, doplněném 10 % fetálního telecího séra, inaktivovaného teplem. Buňky KB-V1 byly udržovány v přítomnosti 1 mg/ml vinblastinu.

« · • · · · • · · • · 9 »»»»

• ·

- 54 Tabulka 1

Štěpení DNA deriváty coralynu a příbuznými sloučeninami, zprostředkované topoisomerázami I a II cytotoxicita IC štěp.DNA sloučenina Topo I coralyn Nitídim

MDD-Coniyn

9

13a

13b

13c

13d

13e

13f

13g

13j

14a

14b

14c

14d

14g

14j

15a

16a

CPT

VM-26 (yiiM) pro buň.linie štěp. DNA Topo IIRPMI

CPT-K5

1	>1000	4.9	20
0.1	5	0.4	3.9
0.1		8.1	27
>1000	>1000	>137	>137
>1000	>1000	7.0	5.5
>1000	>1000	6.1	12.2
>1000	>1000	1.2	1.2
100	>1000	7.1	7.1
100	>1000	9.0	14.9
1000	>1000	6.9	6.9
100	>1000	1.0	8.6
1.0	>1000	3.0	22.4
100	>1000	142	14.2
1.0	>1000	20.3	13.6
10	>1000	9.2	15.4
1000	>1000	2.9	2.9
1000	>1000	4.5	7.5
>1000	>1000	10.4	31.1
1000	>1000	10.4	13.8
100	>1000	17.1	>34
1000	>1000	>31	>31
100	>1000	>24	>24
>1000	>1000	25.3	23.2
100	>1000	16.3	>33
1	>1000	0.004	>10d ’
>1000	1	0.3	0.5

a) IC₅q byla vypočítána po 4 dnech kontinuálního působení účinné látky.

b) Hodnoty pro štěpení topoisomerázy I jsou uváděny jako relativní účinná koncentrace REC, to znamená koncentrace relativně k camptothecinu CPT, jehož působení se pokládá za 1, při uvedené hodnotě dochází k témuž štěpení jako v případě camptothecinu.

·· 00 »00 · * 0 0 0 • · · ···

0 • 0 00

č) Hodnoty pro štěpení topoisomerázou II se uvádějí jako relativní účinná koncentrace REC ve srovnání s hodnotou pro VM-26, pokládanou za 1. Při uvedené hodnotě je štěpení DNA plasmidu stejné jako sloučeninou VM-26 v přítomnosti topoisomerázy II z telecího brzlíku.

d) Nebylo možno pozorovat žádné známky cytotoxicity, což znamená IC,-„ ve skutečnosti mnohem vyšší než byla nejvyšší ou zkoumaná hodnota.

Některé sloučeniny vzorce I, zvláště 13e jsou účinnými jedy pro enzym topoisomerázy I. Mimoto jsou sloučeniny vzorce I obecně cytotoxické proti nádorovým buňkám RPMI 8402 i proti buňkám CPT-K5, odolným proti camptothecinu. Tyto látky mohou tedy být použity při léčení zhoubných nádorů, zvláště pevných nádorů nebo krevních nádorů, tak jak byly svrchu popsány.

Skutečnost, že benz/a/akridiny jsou analogy coralynu, prosté náboje podporuje předpoklad, že by tyto látky mohly být snadno vstřebávány do buněk a byly by tedy pomaleji vylučovány in vivo než látky, nesoucí náboj. Mimoto vzhledem k nepřítomnosti benzisochinoliniové skupiny, která je přítomna ve struktuře coralynu by tyto látky mohly mít menší neurotoxicitu.

Vynález byl popsán v souvislosti s řadou svých výhodných provedení, Je však zcela zřejmé, že by bylo možno navrhnout ještě celou řadu změn a modifikací, rovněž spadajících do rozsahu vynálezu.

• · • ·

- 56 Seznam sekvencí:

1) Obecné informace

i) přihlašovatel: Rutgers, The State University of New

Jersey ii) název vynálezu: Heterocyklické sloučeniny a farmaceutický prostředek iii) počet sekvencí: 4 iv) adresa pro korespondenci:

A) adresát: Schwegman, Lundberg, Woessner and Kluth, P.A.

B) ulice: P.O. Box 2938

C) město: Minneapolis

D) stát: MN

E) země: USA

F) ZIP: 55402

v) forma, odečitatelná počítačem:

A) typ prostředí: disketa

B) počítač: IBM-kompatibilní

C) operační systém: DOS

D) Software: FastSEQ verse 2,0 vi) údaje o přihlášce:

A) číslo přihlášky - neznámé

B) den podání: 23. září 1997

C) klasifikace:

vii) údaje o prioritní přihlášce:

A) číslo přihlášky: 60/026 511

B) den podání: 23. září 1996 • · ’·. ·. ·· ·· ·· ·· íí i ϊ · · ♦··· • · » · ···· · . · . • · * ·· ·» ·· ·«···. • · » · · · a . .

·* ···· · · ·· *e Φ _e viii) údaje o zástupci:

A) jméno: Woessner, Warren D

B) číslo registrace: 30 440

C) číslo spisu: 735.036W01 ix) informace o telekomunikacích:

A) telefon: 612-373-6900

B) telefax: 612-339-3061

C) telex:

2) Informace o sekvenci č. 1:

1) vlastnosti sekvence:

A) délka: 28 párů baží

B) typ: nukleová kyselina

C) řetězec: jednoduchý

D) topologie: lineární ii) typ molekuly: cDNA xi) popis sekvence č. 1:

CTTCCTCGGG AAGGGCTCCA TCAGATAC

2) Informace o sekvenci č. 2:

i) vlastnosti sekvence:

A) délka: 28 párů baží

B) typ: nukleová kyselina

C) řetězec: jednoduchý

D) topologie: lineární • 4 • » • ·

44 • 4 4 • · 4 4 · • * 4 » « 4 4 « • 4 «4

- 58 ii) typ molekuly: cDNA xi) popis sekvence č. 2:

GTATCTGATG GAGCCCTTCC CGAGGAAG

2) Informace o sekvenci ě. 3:

1) vlastnosti sekvence:

A) délka: 15 párů baží

B) typ: nukleová kyselina

C) řetězec: jednoduchý

D) topologie: lineární ii) typ molekuly: cDNA xi) popis sekvence č. 3:

ACTGTGATCC TAGGG

2) Informace o sekvenci č. 4:

i) vlastnosti sekvence:

A) délka: 24 párů baží

B) typ: nukleová kyselina

C) řetězec: jednoduchý

D) topologie: lineární ii) typ molekuly: cDNA xi) popis sekvence č. 4:

CTTCATCGAC AAGCTTGCTC TGAG

Zastupuje:

40V<-<U

Claims (26)

1. PATENTOVÉ NÁROKY kde a R₂ nezávisle znamenají OH, N0₂, NH_2> atom halogenu, NHCO-alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku v alkylová části nebo alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku nebo společně tvoří skupinu -0CH₂0-,

   R₃ znamená atom vodíku,

   R_ a R<~ nezávisle znamenají H, OH, N0_, NH„, atom halogenu, b o e ά

   NHCO-alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku v alkylová části nebo alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku nebo společně tvoří skupinu -0CH₂0- a

   R₇ znamená vodík nebo alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku, jakož i farmaceuticky přijatelné soli těchto látek.
2. 2. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce

   - 60 • · * · v · · * · · » · ► · · <

   » » · 1 ·· «♦ ··· *·· kde

   R^ a Rg nezávisle znamenají N0₂, atom halogenu, NHCO-alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku v alkylové části něho alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku nebo společně tvoří skupinu -OCH₂O-,

   R₃ znamená atom vodíku,

   R_ a R„ nezávisle znamenají H, OH, Ν0», NH„, atom halogenu,

   O O ťí z

   NHCO-alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku v alkylové části nebo alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku nebo společně tvoří skupinu -0CH₂0- a

   R? znamená atom vodíku nebo alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku, jakož i farmaceuticky přijatelné soli těchto látek.
3. 3. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce podle nároku 1 nebo 2, v nichž alespoň jeden ze symbolů R^ a R₂ znamená alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku.
4. 4. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce podle nároku 1 nebo 2, v nichž R₁ i R₂ znamenají alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku.
5. 5. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce podle nároku 1 nebo 2, v nichž R^ i R₂ znamenají methoxyskupinu.

   • · ·

   - 61
6. 6. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce podle nároku 1 nebo 2, v nichž nejméně jeden ze symbolů R^ a R₂ znamená methoxyskupinu.
7. 7. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce podle nároku 1 nebo 2, v nichž R.^ a R₂ společně tvoří -OCHgO-.
8. 8. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce podle nároku 1 nebo 2, v nichž Rg a Rg společně tvoří -0CH₂0-.
9. 9. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce podle nároku 1 nebo 2, v nichž Rg a Rg nezávisle znamenají OH nebo alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku nebo společně tvoří skupinu -OCH₂O-.
10. 10. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce podle nároku 1 nebo 2, v nichž R? znamená vodík, methyl nebo ethyl.
11. 11. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce II kde

    R^, R₂, Rg, Rg a Rg nezávisle znamenají H, OH, NOg, NH_2> atom halogenu, NHCO-alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku v alkylové části nebo alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku, nebo R^ a R₂ společně tvoří -OCHgO-, nebo R₂ a Rg společně tvoří -OCHgO- nebo Rg a Rg společně tvoří -OCHgO- a ·· 99 • 9 9 9 •9 9 •99 9 9 9

    99 9 999 ♦ ·· • · • ♦ • · © ·· · © * ·♦ © · • © ·♦·

    R_? znamená atom vodíku nebo alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku, jakož i farmaceuticky přijatelné, soli těchto látek za předpokladu, že jeden ze symbolů R^ a Rg znamená alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku nebo R^ a R₂ společně tvoří -OCHgO-.
12. 12. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce kde

    R^, Rg, Rg, Rg a Rg nezávisle znamenají H, OH, NOg, NHg, atom halogenu, NHCO-alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku v alkylové části nebo alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku nebo R^ a Rg znamenají společně -OCHgO- nebo R₂ a Rg společně znamenají -OCHgO- nebo Rg a R_g společně tvoří -OCHgO- a

    R_? znamená vodík nebo alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku, jakož i farmaceuticky přijatelné soli těchto látek za předpokladu, že nejméně jeden ze symbolů R^ a R₂ znamená alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku nebo R^ a R₂ společně tvoří -OCHgO-.
13. 13. Heterocyklické sloučeniny podle nároku 11 nebo 12, v nichž R^ a R- nezávisle znamenají OH, nebo alkoxyskupinu o o o 1 až 8 atomech uhlíku nebo společně tvoří -OCHgO-.

    • · • · • · ♦ * • · ···» *« «· • ♦

    999

    9 9

    9 9

    9 9

    999

    - 63
14. 14. Heterocyklické sloučeniny podle nároku 11 nebo 12, v nichž Ry znamená atom vodíku, methyl nebo ethyl.
15. 15. Heterocyklické sloučeniny podle nároku 11 nebo 12, v nichž R₂ a R₃ společně tvoří -OCH₂O-.
16. 16. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce II kde

    Ry, Rg a R_g nezávisle znamenají H, OH, NO^, NH₂, atom halogenu, NHCO-alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku v alkylové části nebo alkoxy skup inu o 1 až 8 atomech uhlíku,

    R₂ a Rg společně tvoří -OCHgO- a

    R? znamená vodík nebo alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku, jakož i farmaceuticky přijatelné soli těchto látek.
17. 17. Heterocyklické sloučeniny obecného vzorce

    Ro *· ·· • » · ·

    9 9 9 • 99 • 99

    99 9999

    99 99 • 9 9 • 9 9 99

    9 9 9 9 9

    9 9 9 9

    99 99

    99 99

    9 9 9 9 • 9 9 9

    999 999

    9 9

    99 99 kde

    R^, Rg a Rg nezávisle znamenají H, OH, N0_2> NH^, atom halogenu,

    NHCO-alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku v alkylové části nebo alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku,

    R₂ a R₃ společně tvoří -OCH₂O- a

    R₇ znamená vodík nebo alkyl o 1 až 8 atomech uhlíku, jakož i farmaceuticky přijatelné soli těchto látek.
18. 18. Heterocyklické sloučeniny podle nároku 16 nebo 17, v nichž Rg a R_g nezávisle znamenají OH nebo alkoxyskupinu o 1 až 8 atomech uhlíku.
19. 19. Heterocyklické sloučeniny podle nároku 16 nebo 17, v nichž Rg a Rg znamenají methoxyskupiny.
20. 20. Heterocyklické sloučeniny podle nároku 16 nebo 17, v nichž R₇ znamená vodík, methyl nebo ethyl.
21. 21. Heterocyklické sloučeniny ze skupiny: 2,3,9,10-tetramethoxy-5,6-dihydrobenz/a/akridin, 2,3-dimethoxy-9,10-methylendioxy-5,6-dihydrobenz/a/akridin, 9,10-dimethoxy-5,6-dihydrobenz/a/akridin, 2,3-dimethoxy-5,6-dihydrobenz/a/akridin, 5,6-dihydro-9,10-dimethoxy-3,4-methylendioxybenz/a/akridin, 5,6-dihydro-3,4,9,10-tetranethoxybenz/a/akridin, 2-amino-9,10-dimethoxy-5,6-dihydrobenz/a/akridin,

    3-chlor-9,10-dime thoxy-56-dihydrobenz/a/akridin, 2,3,9,10-tetramethoxybenz/a/akridin, 2,3-dimethoxy-9,10-methylendioxybenz/a/akridin, 9,10-dimethoxybenz/a/akridin, 2,3-dime thoxybenz/ a/akridin, 3-chlor-9,10-dimethoxybenz/a/akridin,

    2.3.9.10- tetramethoxy-7-methyl-5,6-dihydrobenz/a/akridiniummethylsulfát, 2,3,9,10-tetramethoxy-7-methylbenz/a/akridiniummethansulfát, 2,3,9,10-tetrahydroxy-5,6-dihydrobenz/a/akridin,

    2.3.9.10- tet rahydroxybenz/a/akridin nebo farmaceuticky přijatelné soli těchto látek.

    • · ···* ·· • ··* • · · 9 • · « • · * 9 9 • · · ·· ·
22. 22. Heterocyklická sloučenina, 5,6-dihydro-9,10-dimethoxy-3,4-methylendioxybenz/a/akridin a její farmaceuticky přijatelné soli.
23. 23. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m , že jako svou účinnou složku obsahuje heterocyklickou sloučeninu podle některého z nároků 1 až 22 spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.
24. 24. Heterocyklická sloučenina podle některého z nároků 1 až 22 pro použití k léčebným nebo diagnostickým účelům.
25. 25. Heterocyklická sloučenina pro použití podle nároku 24, kde léčebným použitím je léčení nádorů.
26. 26. Použití heterocyklické sloučeniny podle některého z nároků 1 až 22 pro výrobu farmaceutického prostředku, určeného pro léčení nádorů.