CN1679866A - 知母总皂苷在制备治疗或预防糖尿病的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了知母总皂苷在制备治疗或预防糖尿病的药物中应用，具体地提供了知母总皂苷在抑制α－葡萄糖苷酶，降低餐后血糖；促进糖代谢，平衡血糖，降低血脂，促进胰岛素分泌，保持血糖长期稳定方面的应用。
Description
技术领域
本发明涉及知母总皂苷的新的医药用途，具体地涉及知母总皂苷在制备治疗或预防糖尿病的药物中的应用。
背景技术
知母是百禾科(liliaceae)植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的干燥根茎。大量研究证明，知母总皂苷是其主要活性成分，17种单体皂苷已见报道，但尚未见有关知母总皂苷抑制α-葡萄糖苷酶活性，降低餐后血糖；促进糖代谢，平衡血糖，降低血脂，促进胰岛素分泌，保持血糖长期稳定的药物的报道。
发明内容
本发明提供了知母总皂苷在制备治疗或预防糖尿病的药物中的应用。
本发明提供了知母总皂苷在抑制α-葡萄糖苷酶，降低餐后血糖；促进糖代谢，平衡血糖，降低血脂，促进胰岛素分泌，保持血糖长期稳定方面的应用。
本发明所述的知母总皂苷，其中100％＞知母总皂苷的含量≥50％，100％＞菝蓣皂苷元的含量≥30％，其可以通过如下方法制备：知母药材粉碎成粗粉，加乙醇浸泡，然后常温超声提取，提取液合并过滤，滤液浓缩，浓缩液上大孔吸附树脂，不同醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩至浓膏，干燥得知母总皂苷；但不限于此。
具体实施方式
制备例1：制备知母总皂苷
知母药材粉碎成粗粉，加70％乙醇先浸泡4小时，然后常温超声提取三次，溶剂倍数为4∶4∶3，提取时间每次3小时，提取液合并过滤，滤液减压浓缩至乙醇含量30％左右，浓缩液上处理好的AB-8大孔吸附树脂，上样后的AB-8大孔吸附树脂分别用30％乙醇洗脱2个柱体积，50％乙醇洗脱1个柱体积，95％乙醇洗脱2个柱体积，95％乙醇洗脱液减压浓缩至浓膏，将浓膏真空干燥得知母总皂苷；其总皂苷含量54％，菝蓣皂苷元的含量32.3％。
制备例2：制备知母总皂苷
知母药材粉碎成粗粉，加70％乙醇先浸泡4小时，然后常温超声提取三次，溶剂倍数为4∶4∶3，提取时间每次3小时，提取液合并过滤，滤液减压浓缩至乙醇含量30％左右，浓缩液上处理好的AB-8大孔吸附树脂，上样后的AB-8大孔吸附树脂分别用30％乙醇洗脱2个柱体积，50％乙醇洗脱1个柱体积，95％乙醇洗脱2个柱体积，95％乙醇洗脱液减压浓缩至浓膏，将浓膏真空干燥得知母总皂苷；其总皂苷含量84％，菝蓣皂苷元的含量52.3％。
试验例一：对α-葡萄糖苷酶的体外抑制实验
1.材料：
知母总皂苷：按制备例1制备；
大鼠：山东省天然药物工程技术研究中心提供
拜糖苹：德国拜耳医药保健有限公司，批号：101181
2.方法：
取大白鼠上端小肠20g，加4℃预冷的PH6.8磷酸缓冲液60ml，匀浆，4℃、4000rpm离心20min，取上清分装入试管中，-20℃冷冻保存备用；取酶液(小肠匀浆液)0.2ml加PH6.8磷酸缓冲液0.7ml，37℃水浴10min，加入0.5mol/L蔗糖0.1ml，反应20min后，加入1ml0.1mol/LNaCO3终止反应；酶法测定葡萄糖浓度，分3组，空白对照组，知母总皂苷组和拜糖苹组，每组三管，平行测定；将在37℃，每分钟1L溶液中生成0.01mmol葡萄糖定义为一个酶活力单位，见表1。
表1知母总皂苷对α-葡萄糖苷酶活性的体外抑制
| 组别 | 吸光值(平均数±标准差) | 抑制率(％) |
| 空白对照组知母总皂苷组拜糖苹组 | 0.253±0.040.118±0.020.099±0.03 | 73.0992.99 |
试验例二：对正常小鼠血糖的影响实验
1.材料：
小白鼠：山东省天然药物工程技术研究中心提供；
知母总皂苷：按制备例2方法制备；
2.方法：
取小白鼠50只，雌雄各半，体重24-28g，测空腹血糖，随机分为5组：正常对照组，知母总皂苷4个剂量组(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)。连续灌胃7天，末次给药7h后断尾采血，测血糖浓度；然后断头处死小鼠，取血液离心分离血清，置-20℃冰箱保存，做胰岛素放射免疫测定备用；小鼠剖腹，自肝内门静脉按10ml/只的剂量，用注射器将生理盐水缓慢注入肝脏，将肝脏中残留血液冲洗掉，取出肝脏，称重，按1g肝加入PH7.4等渗磷酸盐缓冲液50ml用组织研磨器制备匀浆，取匀浆液0.5ml，加入4％的磺基水杨酸溶液0.5ml，充分混匀，离心，弃沉淀，蒽酮法测定肝糖原含量，见表2。
表2知母总皂苷对正常小鼠血糖、血胰岛素水平和肝糖原含量的影响
| 组别 | 剂量(mg/Kg) | 血糖(mmol/L) | 血浆胰岛素(103μU/L) | 肝糖原含量(mg/g) |
| 正常对照组知母总皂苷组 | 501504501350 | 6.51±0.415.53±0.12*4.15±0.15**3.44±0.33**3.53±0.15** | 24.24±4.0624.72±2.6827.21±3.04*28.33±2.63**28.25±3.01* | 9.84±1.2310.12±2.0011.94±1.77*12.34±0.99**11.66±1.12* |
与正常对照组相比：*P＜0.05，**P＜0.01
试验例三：对糖尿病模型小鼠血糖的影响实验
1.材料：
小白鼠：山东省天然药物工程技术研究中心提供；
知母总皂苷：按制备例方法制备；
优降糖：天津力生制药厂产品，批号990304
2.方法
取小白鼠150只，雌雄各半，体重24-28g，10只为正常对照组，其余尾静脉注射四氧嘧啶55mg/Kg，72h后测空腹血糖，选取血糖值＞11mmo/L的高血糖小鼠60只，按血糖高低随机分为6组：糖尿病模型对照组、优降糖组和知母总皂苷4个剂量组(50mg/Kg，150mg/Kg，450mg/Kg，1350mg/Kg)，使各组的血糖无显著性差异。灌胃给药10d，于末次给药后7h，断尾采血，测血糖浓度；然后断头处死小鼠，取血液离心分离血清，置-20℃冰箱保存，做胰岛素放射免疫测定备用；小鼠剖腹，自肝内门静脉按10ml/只的剂量，用注射器将生理盐水缓慢注入肝脏，将肝脏中残留血液冲洗掉，取出肝脏，称重，按1g肝加入PH7.4等渗磷酸盐缓冲液50ml用组织研磨器制备匀浆，取匀浆液0.5ml，加入4％的磺基水杨酸溶液0.5ml，充分混匀，离心，弃沉淀，蒽酮法测定肝糖原含量，见表3。
表3知母总皂苷对四氧嘧啶高血糖小鼠血糖、血胰岛素水平和肝糖原含量的影响
| 组别 | 剂量(mg/Kg) | 血糖(mmol/L) | 血浆胰岛素(μIU) | 肝糖原含量(mg/g) |
| 正常对照组模型对照组优降糖组知母总皂苷组 | 501504501350 | 6.14±0.5813.61±2.12△10.47±0.58**9.84±2.33*8.81±2.27**6.42±2.01**6.51±1.98** | 24.15±2.297.41±1.55△9.35±1.87*9.21±2.31*10.18±1.13**11.04±2.01**10.96±1.17** | 9.46±1.412.14±1.51△3.13±1.71*3.27±1.65*4.03±2.07**5.11±2.21**5.32±3.11** |
与正常对照组相比：△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型对照组相比：*P＜0.05，**P＜0.01
试验例四：对正常小鼠糖耐量的影响实验
1.材料：
知母总皂苷：按制备例1制备；
大鼠：山东省天然药物工程技术研究中心提供
拜糖苹：德国拜耳医药保健有限公司，批号：101181
2.方法：
取小白鼠60只，雌雄各半，体重24-28g，测空腹血糖，随机分为6组：正常对照组、拜糖苹组和知母总皂苷4个剂量组(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)，使各组的血糖无显著性差异。给药后，以10g/Kg剂量淀粉灌胃，分别于给淀粉后0.5h、1h、2h测血糖，见表4。
表4知母总皂苷对正常小鼠糖耐量的影响
| 组别 | 剂量(mg/Kg) | 空腹血糖(mmol/L) | 0.5h血糖(mmol/L) | 1h血糖(mmol/L) | 2h血糖(mmol/L) |
| 正常对照组知母总皂苷组拜糖苹组 | 501504501350 | 3.16±0.123.51±0.453.08±0.833.33±0.553.17±0.633.31±0.56 | 15.3±3.089.05±2.01**6.80±2.21**5.34±2.11**5.13±2.43**4.08±0.60** | 16.12±3.589.94±2.42**7.01±2.58**5.99±2.33**5.43±2.01**5.12±1.03** | 9.18±1.516.2±2.11**5.45±1.93**4.22±2.01**4.01±1.99**3.7±0.79** |
与正常对照组相比：*P＜0.05，**P＜0.01
试验例五：对糖尿病小鼠糖耐量的影响实验
1.材料：
知母总皂苷：按制备例1制备；
大鼠：山东省天然药物工程技术研究中心提供
拜糖苹：德国拜耳医药保健有限公司，批号：101181
2.方法：
取小白鼠150只，雌雄各半，体重24-28g，10只作为正常对照组，其余尾静脉注射四氧嘧啶55mg/Kg，72h后测空腹血糖，选取血糖值＞11mmo/L的高血糖小鼠50只，随机分为5组：拜糖苹组和知母总皂苷4个剂量组(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)，使各组的血糖无显著性差异。给药后，以10g/Kg剂量淀粉灌胃，分别于给淀粉后0.5h、1h、2h测血糖，见表5。
表5知母总皂苷对四氧嘧啶模型小鼠糖耐量的影响
| 组别 | 剂量(mg/Kg) | 空腹血糖(mmol/L) | 0.5h血糖(mmol/L) | 1h血糖(mmol/L) | 2h血糖(mmol/L) |
| 模型对照组知母总皂苷组拜糖苹组 | 501504501350 | 13.86±2.3313.51±2.1413.94±2.1713.41±2.2213.64±2.3114.01±2.25 | 29.3±3.1122.7±3.15**18.95±2.08**16.53±2.23**16.23±3.11**14.23±0.46** | 30.12±2.6121.91±2.98**19.22±3.01**17.04±2.57**16.44±2.14**15.3±1.22** | 21.08±2.1718.36±3.24**15.34±2.03**14.96±2.32**14.77±1.97**14.83±0.79** |
与模型对照组相比：*P＜0.05，**P＜0.01
Claims (4)
1.知母总皂苷在制备治疗或预防糖尿病的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，知母总皂苷在抑制α-葡萄糖苷酶，降低餐后血糖；促进糖代谢，平衡血糖，降低血脂，促进胰岛素分泌，保持血糖长期稳定方面的应用。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其中知母总皂苷中100％＞知母总皂苷含量≥50％，100％＞菝蓣皂苷元含量≥30％。
4.一种知母总皂苷的制备方法：将知母药材粉碎，加70％乙醇浸泡4小时，常温超声提取三次，溶剂倍数为4，4，3，提取时间为3小时，合并滤液，过滤后减压浓缩至醇含量为30％，上处理好的AB-8大孔树脂，用30％乙醇洗脱2个柱体积，50％乙醇洗脱1个柱体积，95％乙醇洗脱2个柱体积，收集95％乙醇洗脱液，浓缩至膏，真空干燥即得。
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