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CN1406124A - 鼻给药的环肽组合物 - Google Patents

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CN1406124A
CN1406124A CN01803950A CN01803950A CN1406124A CN 1406124 A CN1406124 A CN 1406124A CN 01803950 A CN01803950 A CN 01803950A CN 01803950 A CN01803950 A CN 01803950A CN 1406124 A CN1406124 A CN 1406124A
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CN
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amino
aerothricin
nasal administration
calcium
administration compositions
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CN01803950A
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崛井征雄
小林和子
真间信雄
柳川辉
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Basilea Pharmaceutica AG
Original Assignee
Basilea Pharmaceutica AG
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Abstract

本发明涉及鼻给药组合物，其包含生理学活性的环肽和其可药用盐，其是通过在吸收增强剂存在或不存在下，将生理学活性的环肽如杀真菌环肽(气丝菌素，棘白菌素类似物，肺念定类似物和金担子素)，杀细菌环肽(如万古霉素，达托霉素)，环孢菌素A，兰瑞肽，伐普肽，后叶加压素拮抗剂(U.S.专利号5,095,003)和eptifibatide均匀分散在独特的载体中，即，生理可接受的粉末状或结晶状载体，其包含水不溶性多价金属载体或有机载体，其平均粒径为20－500μm，并将其均匀地吸附于载体上，本发明还涉及该组合物通过鼻给药治疗诸如系统性真菌感染的疾病的用途。该组合物可以粉末形式鼻给药。

Description

鼻给药的环肽组合物
本发明涉及包含具有生理学活性的环肽或其可药用盐的鼻给药组合物，当其鼻给药时，所述环肽进入人体的吸收性得到改善。
目前，已有许多具有生理学活性的来自天然来源的环肽(例如杀真菌的环肽如金担子素，棘白菌素，肺念定和气丝菌素；免疫抑制剂如环孢菌素A；抗生素如万古霉素和达托霉素)以及设计和合成的环肽，以模拟哺乳动物生理学活性肽结构的一部分(例如生长激素释放抑制因子/促生长素抑制素类似物如兰瑞肽和伐普肽；后叶加压素拮抗剂(USP 5,095,003)和血纤蛋白原gpIIb/IIIa受体拮抗剂如eptifibatid)。虽然这些生理学活性环肽具有显著的治疗效力，但其临床应用常常受到限制，因其口服生物利用度较差。
例如，杀真菌的环肽如气丝菌素(EP申请号98113744.1和99107637.3)，棘白菌素类似物(LY303366：EP 0 736 541；FK463和其类似物：WO98/723637，WO99/740108)和肺念定类似物(MK0991：WO94/721677)在静脉给药时显示出很有效的杀真菌活性。FK463和MK0991目前是通过体内输注进行临床实验。但是，它们的临床应用相当有限，特别是对于由于缺乏口服制剂的非住院患者。也就是说，因为存在于消化系统中的蛋白酶的分解和/或其相对较高的分子量和极性，这些杀真菌的环肽仅仅通过肠的粘膜很少量的完整吸收。
因此，非常希望能够开发出一种经非注射路径给药具有生理学活性的环肽的方法，更优选地，该方法能够使患者由其自己安全给药这种具有生理学活性的环肽，具有简单的给药方法以及较低的频率。当考虑到患者的顺应性时，鼻施用可以是口服给药之外的另一种给药方式。
近年来，已提出了一些具有改善吸收性的鼻给药粉末制剂。它们的制备过程是，将具有生理学活性的直链多肽激素如胰岛素和降钙素(carcitonin)吸附于多价金属上如羟磷灰石或碳酸钙(EP 0 681 833 A2)。但是，在这些情形下，生理学活性肽所能达到的血浆浓度仍然非常低(微微克至纳微克/毫升)并且其血浆半寿命期非常短。虽然如此，由于其非常高效，仍然足以赋予其生物学活性。
另一方面，在化学治疗时需要更高血浆浓度的生物活性肽和更长的半寿命期，例如治疗系统性真菌感染。据报导，肽化合物可通过位于鼻粘膜处的肽酶进行代谢(A.Husain等，Biochem.Biophys.Res.Commun.(1985)133，923-928)。迄今为止，还未开发出鼻制剂在实现肽类药物的高血浆浓度而用于化学治疗。目前提出的鼻给药制剂还不能令人满意，这是因为活性成分的吸收性或局部刺激较差，从而目前还未见商业使用。
经过对具有生理学活性的肽的鼻制剂深入研究，本发明人发现了一种具有生理学活性环肽或其可药用盐的鼻给药组合物，这种组合物不可以口服给药，与目前提出的对直链肽的鼻给药的其它鼻给药制剂相比，具有更高的生物利用度和更小的刺激，从而完成了本发明。
具体而言，本发明涉及一种鼻给药组合物，其包含(i)具有生理学活性的环肽和(ii)一种包含多价金属的生理学上可接受的粉末状或结晶状载体或有机载体，其中，将生理学有效量的所述具有生理学活性的环肽均匀分散于和均匀吸收至所述生理学上可接受的粉末状或结晶状多价金属载体或有机载体上，其平均粒径范围是20-500μm。此外，该组合物可选择性地包含一种吸收增强剂。
进而，本发明涉及上述鼻给药组合物在通过鼻内给药治疗诸如系统性真菌和细菌感染、心血管疾病、肢端肥大症和癌症或用于控制免疫系统的用途。
用于本发明中具有生理学活性的环肽可为任一种具有生理学活性的环肽，如杀真菌活性的环肽。这些具有生理学活性的环肽的几个实例将在后面更详细地描述。
作为用于本发明中的生理学上可接受的粉末状或结晶状载体组分之一的多价金属可为具有高于2价的金属化合物，例如包括铝化合物，钙化合物，镁化合物，硅化合物，铁化合物和锌化合物。这种金属化合物通常用作药物制剂的赋形剂、稳定剂、填料、崩解剂、润滑剂、吸附剂和包衣剂。
用于本发明中的铝化合物的实例包括干铝羟基凝胶、羟基氯化铝、合成硅酸铝、轻质氧化铝、胶态硅酸铝水合物、氢氧化铝镁、氢氧化铝、氢氧化铝凝胶、硫酸铝、氨基乙酸二羧基铝、硬脂酸铝、天然硅酸铝、单硬脂酸铝和硫酸铝钾。其中，优选的铝化合物为氢氧化铝。
钙化合物的实例可包括磷灰石、羟基磷灰石、碳酸钙、EDTA钙二钠、氯化钙、柠檬酸钙、甘油磷酸钙、葡萄糖酸钙、硅酸钙、氧化钙、氢氧化钙、硬脂酸钙、三价磷酸钙、乳酸钙、泛酸钙、油酸钙、棕榈酸钙、D-泛酸钙、藻酸钙、磷酸钙脱水物(calcium phosphate anhydride)、磷酸氢钙、磷酸二氢钙、乙酸钙、蔗糖酸钙、硫酸钙、磷酸一氢钙、对氨基水杨酸钙和生物-灰泥岩化合物。生物-灰泥岩化合物例如结晶焦磷酸钙(Ca2(P2O7)2H2O)、磷酸氢钙(CaHPO4·2H2O)，磷酸八钙(Ca8H2(PO4)5H2O)，磷酸三钙(Ca3-(PO4)2)和结晶草酸钙(CaC2O4H2O)均与羟基磷灰石(Ca10(PO4)6(OH)2)类似，也可用作本发明生理学可接受的粉末状或结晶状载体。优选的钙化合物为羟基磷灰石、碳酸钙或乳酸钙。
进而，作为本发明生理学可接受的粉末状或结晶状载体组分之一的镁化合物的实例包括，L-天冬氨酸镁、氯化镁、葡萄糖酸镁、硅酸镁铝、硅酸镁、氧化镁、氢氧化镁、硬脂酸镁、碳酸镁、铝酸硅酸镁、硫酸镁、硅酸镁钠和合成硅酸镁钠。其中，优选的镁化合物为硬脂酸镁。
其它具有超过2价的金属化合物为硅化合物，如硅氧化物水合物、轻硅酸酐(light silicic anhydride)、合成水滑石、硅藻土和二氧化硅；铁化合物如硫酸亚铁；和锌化合物如氯化锌、硬脂酸锌和硫酸锌。
上述金属化合物可以单独使用或以两种或多种组合使用。
优选本发明的生理学上可接受的粉末状或结晶状载体的平均粒径范围是20-250μm，更优选20-100μm，首选20-60μm。
优选作为用于本发明的生理学上可接受的粉末状载体组分之一的有机载体可为稻米、小麦、荞麦、大麦、大豆、玉米、小米、粟米等的细谷粒粉末。
优选地，有机载体的平均粒径不超过300μm，更优选为20-180μm。
优选可成为本发明鼻给药组合物的成分之一的吸收增强剂为可药用的天然物质(如纤维素、淀粉和其衍生物)或非天然聚合物。这些化合物通常是用作粘合剂，但迄今并未看出可作为吸收增强剂用于鼻给药制剂。
纤维素和其衍生物的优选实施方案为微晶纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基邻苯二甲酸纤维素、醋酸纤维素、醋酸邻苯二甲酸纤维素、羧甲基纤维素、低羧甲基纤维素钠、羧甲基乙基纤维素等。
淀粉和其衍生物的优选实施方案为玉米淀粉、马铃薯淀粉、大米淀粉、糯米淀粉、小麦淀粉、预糊化淀粉、糊精、羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、支链淀粉等。
也可采用其它天然聚合物作为吸收增强剂，如琼脂、藻酸钠、壳多糖、脱乙酰壳多糖、蛋黄卵磷脂、阿拉伯胶、黄芪胶、明胶、胶原、酪蛋白、白蛋白、血纤蛋白原和血纤蛋白。
非天然聚合物的优选实例为聚丙烯酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮等。
优选的吸收增强剂为以下成分的细粉末：大米、糯米、淀粉、明胶、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、蛋黄卵磷脂、阿拉伯胶、黄芪胶或其混合物。更优选的吸收增强剂为糯米、淀粉、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、黄芪胶或其混合物的细粉末。甚至更优选的吸收增强剂是糯米或羟丙基纤维素的细粉末。首选的吸收增强剂为糯米的细粉末。
吸收增强剂的平均粒径优选不超过250μm，更优选20-180μm。
上述吸收增强剂可以在本发明的生理学上可接受的粉末状或结晶状载体中单独使用或以两种或多种吸收增强剂组合使用。
对于鼻给药制剂来说，目前认为水溶性载体将有助于实现活性物质在身体内的良好吸收。但是，业已发现，通过在水不溶性载体如羟基磷灰石、碳酸钙、乳酸钙、氢氧化铝或硬脂酸镁中均匀地分散活性物质，优选在吸收增强剂存在下，并在其上均匀地吸收所述环肽的情形下，可以获得优异的活性物质吸收性能。
在本发明中采用的羟基磷灰石包括合成的羟基磷灰石和由生物体中获得的羟基磷灰石(生物-羟基磷灰石)。这种生物羟基磷灰石可采用已除去有机物质的动物的骨或牙齿制备。
碳酸钙、乳酸钙、氢氧化铝或硬脂酸镁通常用作用于药物制剂的稳定剂、润滑剂、增加光泽的试剂、赋形剂、分散剂或包衣剂；但是，业已发现，平均粒径不超过500μm的这些物质可用作本发明组合物的载体，并提供通过鼻给药促进生理学活性物质在身体内吸收的作用。
本发明中优选的具有生理学活性的环肽为杀真菌的环肽[例如气丝菌素(如本文以后描述)，棘白菌素和肺念定类似物(典型的类似物以下描述：Current Pharmaceutical Design，1996，2，209-224)和金担子素(JP03044398)]，抗菌环肽[例如万古霉素，达托霉素(GB 2,120,257)，等]，环孢菌素A，兰瑞肽(WO 9504752：生长激素释放抑制因子)，伐普肽(US4,650,787：生长激素释放抑制因子)，拮叶加压素拮抗剂(US 5,095,003)，eptifibatide(US 3,67,509：血纤蛋白原gpIIb/IIIa受体拮抗剂)等。
上述杀真菌环肽的实例为下式(I)的气丝菌素：
其中
R1为胍基、三低级烷基铵基、-N(R10)-R11、-N(R15)-CO-R14、-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13、-NHCOCH(R13)-NHCOCH(NH2)-R13、
Figure A0180395000142
或
Figure A0180395000152
R10和R11彼此独立地选自氢；被一个或两个氨基取代的杂芳基；被一个或多个、优选一个或两个下述取代基取代的低级烷基：氨基、氨基-低级烷基、氰基、胍基、含氮杂环基或包含氨基、脒基或胍基的苯基；
R13为得自天然或非天然氨基酸的残基；
R14为被一个或多个、优选一个或两个下述取代基取代的低级烷基：氨基、胍基、含氮杂环基或包含氨基、脒基或胍基的苯基；
R15为氢，被一个或多个、优选一个或两个下述取代基取代的低级烷基：氨基、胍基、含氮杂环基或包含氨基、脒基或胍基的苯基；
R2为氢，羟基磺酰基、低级烷基或低级链烯基，其中，低级烷基和低级链烯基可任选地被下述基团取代：酰基、氨基甲酰基、氨基、单-低级烷基氨基或二-低级烷基氨基；
R3为氢、羟基、硝基、氨基、酰基氨基、(低级烷基氨基甲酰基)氨基、羧基、低级烷氧基、低级烷氧基羰基、低级烷基、低级链烯基或低级链炔基，其中，低级烷基、低级链烯基和低级链炔基可任选地被下述基团取代：羟基、氨基、单-低级烷基氨基、二-低级烷基氨基、低级烷氧基羰基或氨基甲酰基；
R4为烷基、链烯基、烷氧基或链烯基氧基，其可任选地被下述基团取代：低级烷基、芳基、环烷基或氟原子；
R5为-CONH2、-CN或-CH2NH2；
X为单键，或芳基、联苯基或三苯基，它们选择性地包含一个或多个杂原子和/或被卤原子或低级烷基取代；
Y为单键、-CH2-、-CH(低级烷基)-、-CONH-或-CON(低级烷基)-；
Z为-O-、-NH-或-N(低级烷基)-；
m为整数0-4；和
n为整数2-5；
和其可药用盐。
上述式(I)的化合物是新的，条件是，当-Y-(CH2)m-X-R4为未取代的烷基或芳烷基时，同时R1不为氨基，R2和R3不为氢，R5不为-CONH2和Z不为-O-或-NH-。
在本说明书中，除非另有说明，术语“低级”是指包含1-6个、优选1-4个碳原子的基团。
术语“烷基”是指直链或支链一价饱和脂族烃基，具有1-20个碳原子，优选1-16个碳原子。术语“低级烷基”是指具有1-6个碳原子、优选1-4个碳原子的直链或支链一价烷基。该术语的进一步实例为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等。
术语“链烯基”是指在亚烷基链中包含一个或多个双键的烷基。
术语“链炔基”是指在亚烷基链中包含一个或多个三键的烷基。
术语“烷氧基”是指基团-O-R′，其中，R′为烷基。术语“低级烷氧基”是指基团-O-R′，其中，R′为低级烷基。
术语“链烯基氧基”是指在亚烷基链中包含一个或多个双键的烷氧基。
术语“酰基”是指基团-C(O)-R′，其中，R′为低级烷基。术语“酰基氨基”是指与亚氨基即-NH-连接的酰基。
术语“单-低级烷基氨基”是指与亚氨基即-NH-连接的低级烷基。术语“二-低级烷基氨基”是指连接至氮原子上的两个彼此独立选择的低级烷基，即-N(-低级烷基)-低级烷基。术语“三低级烷基铵基”是指包含三个彼此独立选择的C1-3烷基的三低级烷基铵基。
术语“低级烷氧基羰基”是指基团-C(O)OR′，其中，R′为低级烷基。
术语“(低级烷基氨基甲酰基)氨基”是指基团-NHCONH-R′，其中，R′为低级烷基。
术语“卤原子”是指氟、氯、溴和碘。
术语“芳基”是指一价碳环芳族基团(例如苯基)，或两个稠合的碳环(例如萘基)，它们可任选地被低级烷基、三氟甲基、卤素等彼此独立地单取代、二取代或三取代。
术语“含氮杂环”是指包含至少一个氮原子的饱和、不饱和或芳族一价环状基团。
术语“杂芳基”是指包含至少一个杂原子即氮、硫或氧的芳族一价单或多碳环基团。具有一个或多个氮原子的杂芳基残基的实例为吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基和咪唑基。
术语“环烷基”是指具有3-10个碳原子、优选3-6个碳原子的一价碳环基团。
术语“可药用盐”包括式(I)的气丝菌素(Aerothricis)与无机酸或有机酸形成的盐，这些酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、甲酸、马来酸、乙酸、三氟乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、对甲苯磺酸等，它们应对现存生物无毒。
在以上式(I)中的每一取代基在下面将更详细地描述。
在R′的定义中，术语“三低级烷基铵基”优选是指三甲基铵基和三乙基铵基。
在R10和R11的定义中，术语“杂芳基”优选是指2-吡啶基、2-吡嗪基、2-嘧啶基、2-哒嗪基、2-三嗪基、2-咪唑基等，更优选2-吡啶基和2-咪唑基，最优选2-吡啶基。术语“低级烷基”优选是指包含1-6个碳原子的烷基如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异-丁基、仲丁基、正戊基、新戊基、叔戊基和正己基；优选甲基、乙基、正丙基或正丁基，首选甲基、乙基或正丙基。术语“含氮杂环”优选是指吗啉基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑烷基、吡唑烷基、咪唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基、吡嗪基等，更优选哌嗪基和吗啉基，首选哌嗪基。术语“含氨基、脒基或胍基的苯基”优选是指4-氨基苯基、4-脒基苯基、4-胍基苯基等。
在R13的定义中，术语“得自天然或非天然氨基酸的残基”优选是指氢或低级烷基，其可被下述基团取代：羟基、氨基、胍基、甲硫基、巯基、氨基甲酰基、羧基、苯基、羟基苯基、氨基苯基、咪唑基或吲哚基等。R13的优选实例为被氨基或胍基取代的低级烷基，如氨基甲基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、4-胍基丁基。
在R14的定义中，术语“低级烷基”是指与对R10和R11相同的定义。优选地，其是指包含2-5个碳原子的烷基链，如乙基、丙基、丁基和戊基。术语“含氮杂环”是指与对R10和R11相同的定义。优选地，其是指吗啉基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑烷基、吡唑烷基、咪唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基、吡嗪基等，更优选哌嗪基和吗啉基。术语“含氨基、脒基或胍基的苯基”优选是指4-氨基苯基、4-脒基苯基、4-胍基苯基等。R14的优选实例为2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、2-胍基乙基、3-胍基丙基、2-哌嗪基乙基、2-吗啉基乙基、4-氨基苯乙基等。
在R15的定义中，术语“低级烷基”、“含氮杂环”和“含氨基、脒基或胍基的苯基”与对R14的定义相同。R15的优选实例为2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、2-胍基乙基、3-胍基丙基、2-哌嗪基乙基、2-吗啉基乙基、4-氨基苯乙基等。
-N(R10))-R11[其中，R10和R11如前定义]的优选实例为氨基、5-氨基吡啶-2-基氨基、甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、(2-氨基乙基)氨基、(3-氨基丙基)氨基、[3-[(3-氨基丙基)氨基]丙基]氨基、(2-哌嗪基乙基)氨基、(2-吗啉基乙基)氨基、N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基、N，N-二丙基氨基、N，N-乙基甲基氨基、N，N-双(2-氨基乙基)氨基、N，N-双(3-氨基丙基)氨基、N，N-双(4-氨基丁基)氨基、N，N-双(2-哌嗪基乙基)氨基、N，N-双(2-吗啉基乙基)氨基、N，N-双(2-胍基乙基)氨基、N，N-双(3-胍基丙基)氨基、N，N-双(2-吡啶-2-基乙基)氨基、N，N-双(咪唑-2-基甲基)氨基、N-(2-氨基乙基)-N-(3-氨基丙基)氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2-哌嗪基乙基)氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2-吡啶-2-基乙基)氨基等。更优选的实例为氨基、5-氨基吡啶-2-基氨基、N，N-二甲基氨基、(2-氨基乙基)氨基、(3-氨基丙基)氨基、[3-[(3-氨基丙基)氨基]丙基]氨基、(2-哌嗪基乙基)氨基、N，N-双(2-氨基乙基)氨基、N，N-双(3-氨基丙基)氨基、N，N-双(4-氨基丁基)氨基、N，N-双(2-哌嗪基乙基)氨基、N，N-双(2-胍基乙基)氨基、N，N-双(3-胍基丙基)氨基、N-(2-氨基乙基)-N-(3-氨基丙基)氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2-哌嗪基乙基)氨基等。首选的实例为(3-氨基丙基)氨基、N，N-双(2-氨基乙基)氨基、N，N-双(3-氨基丙基)氨基和N，N-双(2-哌嗪基乙基)氨基。
在-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13的定义中，基团-CO-CH[N(R10)R11]-R13[其中，R10和R11为氢；R13为得自天然或非天然氨基酸的残基]优选是指肌氨酰基、甘氨酰基、丙氨酰基、鸟尿酰基(ornitinyl)、赖氨酰基、缬氨酰基、亮氨酰基、异亮氨酰基、色氨酰基、苯基丙氨酰基、甲硫氨酰基、丝氨酰基、酪氨酰基、苏氨酰基、半胱氨酰基、天冬氨酰基、谷氨酰基、门冬氨酰基、谷氨二酰基、胍基戊氨酰基、组氨酰基、2，3-二氨基丙酰基、2，4-二氨基丁酰基、2-氨基-4-三唑基-1-基丁酰基等。
-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13的优选实例为得自碱性氨基酸的酰基氨基。这种酰基氨基的实例为鸟尿酰基氨基、赖氨酰基氨基、胍基戊氨酰基氨基、组氨酰基氨基、3-氨基脯氨酰基氨基、2，3-二氨基丙酰基氨基、2，4-二氨基丁酰基氨基、2-氨基-4-三唑基-1-基丁酰基氨基、[3-氨基-2-[双(2-氨基乙基)氨基]丙酰基]氨基、[4-氨基-2-[双(2-氨基乙基)氨基]丁酰基]氨基、[5-氨基-2-[双(2-氨基乙基)氨基]戊酰基]氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2，3-二氨基丙酰基)氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2，4-二氨基丁酰基)氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2，5-二氨基戊酰基)氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2，6-二氨基己酰基)氨基等；更优选鸟尿酰基氨基、赖氨酰基氨基、胍基戊氨酰基氨基、组氨酰基氨基、2，3-二氨基丙酰基氨基、2，4-二氨基丁酰基氨基、[3-氨基-2-[双(2-氨基乙基)氨基]丙酰基]氨基、[4-氨基-2-[双(2-氨基乙基)氨基]丁酰基]氨基、[5-氨基-2-[双(2-氨基乙基)氨基]戊酰基]氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2，3-二氨基丙酰基)氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2，4-二氨基丁酰基)氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2，5-二氨基戊酰基)氨基和N-(3-氨基丙基)-N-(2，6-二氨基己酰基)氨基，首选鸟尿酰基氨基、赖氨酰基氨基、2，4-二氨基丁酰基氨基、[4-氨基-2-[双(2-氨基乙基)氨基]丁酰基]氨基、[5-氨基-2-[双(2-氨基乙基)氨基]戊酰基]氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2，4-二氨基丁酰基)氨基、N-(3-氨基丙基)-N-(2，6-二氨基己酰基)氨基、N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊酰基]氨基、N-(3-氨基丙基)-N-[(2R)-2，5-二氨基戊酰基]氨基、N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰基]氨基、N-(3-氨基丙基)-N-[(2R)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰基]氨基、N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰基]氨基、N-(2-氨基乙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰基]氨基和N-(2-氨基乙基)-N-[(2R)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰基]氨基。
在R1的定义中，下式的优选实例为双[2-(鸟氨酰基氨基)乙基]氨基、双-[3-(鸟氨酰基氨基)丙基]氨基、[2-(赖氨酰基氨基)乙基]氨基、双-[3-(赖氨酰基氨基)丙基]氨基等。
在R1的定义中，下式的优选实例
Figure A0180395000202
为N-鸟氨酰基-N-[2-(鸟氨酰基氨基)乙基]-氨基、N-鸟氨酰基-N-[3-(鸟氨酰基氨基)丙基]氨基、N-鸟氨酰基-N-[3-(赖氨酰基氮基)丙基]氨基、N-鸟氨酰基-N-[3-(赖氨酰基氨基)丙基]氨基、N-赖氨酰基-N-[2-(鸟氨酰基氨基)乙基]氨基、N-赖氨酰基-N-[3-(鸟氨酰基氨基)丙基]氨基、N-赖氨酰基-N-[2-(赖氨酰基氨基)乙基]氨基、N-赖氨酰基-N-[3-(赖氨酰基氨基)丙基]氨基等。
在R1的定义中，下式的优选实例
Figure A0180395000203
为脯氨酰基氨基、3-氨基脯氨酰基氨基、4-氨基脯氨酰基氨基、N-(3-氨基丙基)-N-脯氨酰基氨基、(2-氨基乙基)脯氨酰基氨基等。
术语“-NHCOCH(R13)-NHCOCH(NH2)-R13″[其中，R13如前定义]优选是指鸟氨酰基-鸟氨酰基氨基、赖氨酰基-鸟氨酰基氨基、鸟氨酰基-赖氨酰基氨基、赖氨酰基-赖氨酰基氨基等。
术语“-N(R15)-CO-R14”[其中，R14和R15如前定义]中，术语“含氮杂环”和术语“含氨基、脒基或胍基的苯基”如前定义。
-N(R15)-CO-R14的优选实例为3-氨基丙酰基氨基、3-胍基丙酰基氨基、3-哌嗪基丙酰基氨基、(3-吡啶-3-基丙酰基)氨基、[3-(4-氨基苯基)丙酰基]氨基、N-(3-氨基丙酰基)-N-(3-氨基丙基)氨基等。
在优选的方面，R1为-N(R10)-R11，其中，R10和R11如前定义。在另一个优选的方面，R1为-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13，其中R10、R11、R13和R15如前定义。在另一个优选的方面，R1为-N(R15)-CO-R4，其中R14和R15如前定义。在另一个优选的方面，R1为
Figure A0180395000211
其中，R10和R15如前定义。在另一个优选的方面，R1为-NHCOCH(R13)-NHCOCH(NH2)-R13，其中，R13如前定义。在另一个优选的方面，R1为三低级烷基铵基。在另一个优选的方面，R1为氨基或胍基。
在R2的定义中，术语“任选地被酰基、羧基、氨基甲酰基、氨基、单-低级烷基氨基或二-低级烷基氨基取代的低级烷基”优选是指甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、氧代-低级烷基、羧基-低级烷基、氨基甲酰基-低级烷基、氨基-低级烷基等，更优选甲基、乙基、正丙基、正丁基、2-氧代丙基、羧基甲基、氨基甲酰基甲基、3-氨基丙基等。术语“任选地被酰基、羧基、氨基甲酰基、氨基、单-低级烷基氨基或二-低级烷基氨基取代低级链烯基”优选是指烯丙基、2-丁烯基、3-丁烯基等，更优选烯丙基。
在优选的方面，R2为氢、羟基磺酰基或低级烷基，如甲基或乙基。
在R3的定义中，术语“酰基氨基”优选是指低级烷基羰基氨基，如乙酰基氨基、丙酰基氨基或异丁酰基氨基，或得自天然或非天然氨基酸的酰基氨基，如肌氨酰基氨基、甘氨酰基氨基、丙氨酰基氨基、鸟氨酰基氨基、赖氨酰基氨基、脯氨酰基氨基、缬氨酰基氨基、亮氨酰基氨基、异亮氨酰基氨基、色氨酰基氨基、苯基丙氨酰基氨基、甲硫氨酰基氨基、丝氨酰基氨基、酪氨酰基氨基、苏氨酰基氨基、半胱氨酰基氨基、天冬酰基氨基、谷氨二酰基氨基、天冬氨酰基氨基、戊二酰基氨基、胍基戊氨酰基氨基、组氨酰基氨基等；优选肌氨酰基氨基、甘氨酰基氨基、丙氨酰基氨基、赖氨酰基氨基、脯氨酰基氨基等。术语“(低级-烷基氨基甲酰基)氨基”优选是指甲基氨基甲酰基氨基、乙基氨基甲酰基氨基、丙基氨基甲酰基氨基、丁基氨基甲酰基氨基等，更优选甲基氨基甲酰基氨基或乙基氨基甲酰基氨基。术语“低级烷氧基”优选是指甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等，更优选甲氧基和乙氧基。术语“低级烷氧基羰基”优选是指甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、丁氧基羰基等，更优选甲氧基羰基和乙氧基羰基。术语“可任选地被下述基团取代的低级烷基：羟基、氨基、单-低级烷基氨基、二-低级烷基氨基、低级烷氧基羰基或氨基甲酰基”优选是指甲基、乙基、丙基、氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、羟基甲基、羟基乙基、甲基氨基甲基、2-(甲基氨基)乙基、3-(甲基氨基)丙基、二甲基氨基甲基、2-(二甲基氨基)乙基、3-(二甲基氨基)丙基、2-(甲氧基羰基)乙基、2-(氨基甲酰基)乙基等。术语“可任选地被下述基团取代的低级链烯基：羟基、氨基、单-低级烷基氨基、二-低级烷基氨基、低级烷氧基羰基或氨基甲酰基”优选是指乙烯基、2-(甲氧基羰基)乙烯基、2-(氨基甲酰基)乙烯基等。术语“可任选地被下述基团取代的低级链炔基：羟基、氨基、单-低级烷基氨基、二-低级烷基氨基、低级烷氧基羰基或氨基甲酰基”优选是指乙炔基、丙炔基、羟基丙炔基、氨基丙炔基、二乙基氨基丙炔基等。
在优选的方面，R3为氢、羟基、硝基、氨基或酰基氨基。在另一个优选的方面，R3为(低级烷基氨基甲酰基)氨基、羧基、低级烷氧基或低级烷氧基羰基。
在R4的定义中，术语“烷基、链烯基、烷氧基或链烯基氧基”优选是指包含3-16个碳原子的烷基、链烯基、烷氧基或链烯基氧基，如丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、辛-4-烯基、辛-6-烯基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、丙氧基，丁氧基，戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、辛-4-烯氧基、辛-6-烯氧基、壬氧基、壬-5-烯氧基、癸氧基等。术语“低级烷基”优选是指甲基、乙基、丙基、丁基、戊基，更优选甲基或乙基。术语“芳基”是指可任选地被下述基团取代的芳基：低级烷基、三氟甲基或卤原子，如苯基、萘基、3-氟苯基、3-溴苯基、3-氯苯基、4-氟苯基、4-溴苯基、4-氯苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、4-三氟甲基苯基。术语“环烷基”优选是指环丙基、环丁基、环戊基、环己基、金刚烷基等。术语“可任选地被下述基团取代的烷基、链烯基、烷氧基或链烯基氧基：低级烷基、芳基、环烷基或氟原子”优选是指5-甲基己基、1-甲基十三烷基、2-乙基丁氧基、4-甲基戊氧基、2-丙基戊氧基、2-乙基己氧基、3，7-二甲基辛氧基、2-苯基乙氧基、2-(4-氟苯基)乙氧基、2-(4-氯苯基)乙氧基、2-(3-氟苯基)乙氧基、2-(4-三氟苯基)乙氧基、3-苯基丙氧基、2-萘基乙氧基、3-萘基丙氧基、2-环丙基乙氧基、2-环丁基乙氧基、2-环戊基乙氧基、3-环戊基丙氧基、2-环己基乙氧基、3-环己基丙氧基、3，3-二苯基丙氧基、3，3，3-三氟丙氧基、4，4，4-三氟丁氧基、5，5，5-三氟戊氧基等。
在优选的方面，R4为可任选地被下述基团取代的烷基或烷氧基：低级烷基、芳基、环烷基或氟原子。
R5的优选实例为-CONH2或-CH2NH2。
在X的定义中，术语“杂原子”优选是指氮、硫和氧。术语“选择性地包含一个或多个杂原子的芳基、联苯基或三苯基”优选是指或等，它们可进一步被卤原子或低级烷基取代。在上式中的开端线是指在相应位置的优选键。
X的首选实例为单键，或
Figure A0180395000242
它们可进一步被卤原子或低级烷基取代，优选甲基。
在Y的定义中，术语“低级烷基”优选是指具有1-3个碳原子的烷基，例如甲基、乙基或丙基。Y的优选实例为单键、-CH2-、-CH(CH3)-、-CONH-或-CON(CH3)-，更优选单键、-CH(CH3)-或-CONH-。
在Z的定义中，术语“-N(低级烷基)-”优选是指包含1-3个碳原子的N-烷基，例如N-甲基、N-乙基或N-丙基。Z的优选实例为-O-；Z的另一个优选实例为-NH-。
m为整数0-4，优选0-2。
本发明中优选的气丝菌素为在下表1中列举的气丝菌素2和4-137。
                          表1
                          式(I)
Figure A0180395000251
P18
                          式(I)
                          式(1)
Figure A0180395000271
                          式(I)
                          式(I)
                          式(I)
P23
上述杀真菌环肽的其它实例为棘白菌素类似物(例如LY303366：EP736541，FK463和其类似物，如WO 98/23637和WO 99/40108所述)和肺念定类似物(例如MK0991，如WO 94/21677所述)：
Figure A0180395000321
在本发明的鼻给药组合物中使用的更优选的气丝菌素为具有上式(I)的气丝菌素，其中
R1为-N(R10)-R11、-N(R15)-CO-R14、-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13、-NHCOCH(R13)-NHCOCH(NH2)-R13、或
Figure A0180395000323
R10和R11彼此独立地选自氢；任选地被一个或多个、优选一个或两个下述基团取代的低级烷基：氨基、氨基-低级烷基、氰基、胍基或含氮杂环，优选选自吗啉基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑烷基、吡唑烷基、咪唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基、吡嗪基等，更优选选自哌嗪基和N-甲基哌嗪基。
R13为得自天然或非天然氨基酸的残基，优选选自氢或被下述基团取代的低级烷基：羟基、氨基、二甲基氨基、胍基、甲硫基、巯基、氨基甲酰基、羧基、苯基、羟基苯基、氨基苯基、咪唑基或吲哚基等，更优选选自被氨基或胍基取代的低级烷基，如氨基甲基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、3-(二甲基氨基)丙基、4-氨基丁基或4-胍基丁基。
R14为被一个或多个、优选一个或两个下述基团取代的低级烷基：氨基、二甲基氨基、胍基或含氮杂环，其优选选自吗啉基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑烷基、吡唑烷基、咪唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基、吡嗪基等，更优选选自哌嗪基、N-甲基哌嗪基和咪唑基。
R15为氢、被一个或多个、优选一个或两个下述基团取代的低级烷基：氨基、二甲基氨基、胍基或含氮杂环，其优选选自吗啉基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑烷基、吡唑烷基、咪唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基、吡嗪基等，更优选选自哌嗪基和N-甲基哌嗪基。
R2为氢、羟基磺酰基或低级烷基；
R3为氢、羟基或氨基；
R4为烷基；
R5为-CONH2、-CN或-CH2NH2；
X为单键；
Y为单键、-CH2-、-CH(低级烷基)-；
Z为-O-；
m为整数0-4；和
n为整数2-5。
和其可药用盐。
在本发明的鼻给药组合物中使用的更优选的气丝菌素为如表1所列举的气丝菌素1-5、14、15、17、31、32、63、96、101、122、124、126-137。在本发明的鼻给药组合物中首选使用的气丝菌素为气丝菌素132-137。
式(I)表示的气丝菌素可按照下述方法制备：
方法A
式(II)的气丝菌素可这样生产：在需氧条件下，在含水培养基或固体培养基中培养能够产生气丝菌素1、2和3[气丝菌素3(＝WF11243)如参考例1所述]的属于半知菌亚门的微生物，然后由培养基中分离气丝菌素1、2和3。
[其中，R3为氢或羟基，Y为-CH(CH3)-或-CH2-]
方法B
式(I)的气丝菌素[其中，R1为氨基；Y为-CONH-、-CON(低级烷基)-、-CH2-或单键；Z为-NH-或-N(低级烷基)-；R2、R3、R4、R5、X和m如前定义]可这样制备：使式(III)的化合物与式(IV)的化合物进行缩合，
Figure A0180395000342
[其中，R为氨基保护基；R2、R3和R5如前定义]，
Figure A0180395000351
[其中，R7为氨基保护基；R8为氢或低级烷基；R4、X、Y和m如前定义]，采用羧基活化剂用于肽合成，随后选择性地除去所得的直链肽的氨基保护基R7，采用用于肽合成的羧基活化剂进行连续环化，并除去氨基保护基R6。
方法C
式(I)的气丝菌素[其中，R3为硝基；R1、R2、R5、R5、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：将式(I)的气丝菌素[其中，R3为氢；R1、R2、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]硝化。
方法D
式(I)的气丝菌素[基中，R3为氨基；R1、R2、R5、R5、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：还原式(I)的气丝菌素的硝基[其中，R3为硝基；R1、R2、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]。
方法E
式(I)的气丝菌素[其中，R3为酰基氨基或(低级烷基氨基甲酰基)氨基；R1、R2、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：采用下述试剂酰化式(I)的气丝菌素[其中，R3为氨基；R1、R2、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]的氰基：酰氯、酸酐、羧酸/缩合剂或低级烷基氨基甲酰基氯，随后，如果需要的话，除去氨基保护基。
方法F
式(I)的气丝菌素[其中，R1为(3-氨基丙基)氨基、(2-氰基乙基)氨基、3-氨基-2-(氨基甲基)丙基]氨基或-N(R15)-COCH[NH(CH2)3NH2]-R13[其中，R13和R15如前定义]可这样制备：使式(I)[其中，R1为氨基或-N(R15)-COCH(NH2)-R13[其中，R13和R15如前定义]；R2、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]的气丝菌素的氨基与丙烯腈、乙氧基亚甲基丙二腈或(1-乙氧基亚乙基)丙二腈反应，随后将形成的腈基还原成氨基，并且，如果需要的话，除去保护基。
方法G
式(I)的气丝菌素[其中，R1为-N(R10)-R11[其中，R10和R11彼此独立地选自氢、任选地被一个或多个氨基、胍基、含氮杂环或含氨基、脒基或胍基的氰基取代低级烷基]或-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13[其中，R10和R11分别为任选地被一个或多个氨基、氨基低级烷基、胍基、含氮杂环或含氨基、脒基或胍基的苯基取代的低级烷基；R13和R15如前定义]；R2、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：采用式(V)的醛使式(I)的气丝菌素[其中，R1为氨基、(2-氰基乙基)氨基-或N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13[其中，R10和R11彼此独立地为氢原子或(2-氰基乙基)氨基；R13和R15如前定义]；R2、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]的氨基进行还原烷基化，
                R9-CHO               (V)
[其中，R9为氢、可进一步被一个或多个已保护的氨基、含氮杂环或包含保护氨基的苯基取代的低级烷基]，随后，如果需要的话，除去氨基保护基或将氰基还原。
方法H
式(I)的气丝菌素[其中，R1为-N(R10)-R11[其中，R10和R11彼此独立地选自氢或被一个或两个氨基取代的杂芳基]；R2、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：使式(I)的气丝菌素[其中，R1为氨基；R、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]的氨基与式(VI)的化合物反应
                  R12-Q            (VI)
[其中，R12为含氮杂芳基，其可进一步被已保护的氨基或硝基取代，Q为卤原子如氯或溴]，随后，如果需要的话，除去氨基保护基或还原硝基。
方法I-1
式(I)的气丝菌素[其中，R1为
Figure A0180395000361
、-NHCO-CH(NH2)-R13[其中，R13为得自天然或非天然氨基酸的残基]或-NHCO-R14[其中，R14如前定义]；R2、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：用式(VII)或(VII′)的酸酰化式(I)的气丝菌素[其中，R1为氨基；R2、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]的氨基，
                HO(O＝)C-CH(NH-R7)-R13        (VII)
[其中，R13为得自天然或非天然氨基酸的残基，其官能团被适当地保护，R7为氨基保护基]，
或用式(VIII)的酸进行酰化
                HO(O＝)C-R14                (VIII)
[其中，R14为具有一个或多个已护的氨基的低级烷基，包含已保护的氨基的含氮杂环或苯基]；随后，如果需要的话，除去保护基。
方法I-2
式(I)的气丝菌素，其中，R1为
[其中，R10、R11、R13、R15，和m如前定义]，或
[其中，R10、R11、R13、R15和m如前定义]可这样制备：用式(VII)的酸酰化式(I)的气丝菌素的基，其中，R1为-N(R10)-R11[其中，R10和R11均为被氨基取代的低级烷基]或-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13[基中，R15为被氨基取代的低级烷基；R10、R11和R13如权利要求1定义，条件是在R10、R11和R13上存在的氨基是已保护的]，
            HO(O＝)C-CH(NH-R7)-R13           (VII)
[其中，R13为得自天然或非天然氨基酸的残基，其官能团被适当地保护，R7为氨基保护基]；随后除去保护基。
方法I
式(I)的气丝菌素[其中，R1为-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13[其中，R10和R11为氢，R13如前定义和R15为任选地被一个或多个氨基、胍基、含氮杂环或包含氨基、脒基或胍基的苯基取代的低级烷基]，
[其中，R10为氢和R15为任选地被一个或多个氨基、胍基、含氮杂环或包含氨基、脒基或胍基的苯基取代低级烷基]或-N(R15)-CO-R14[其中，R15为任选地被一个或多个氨基、胍基、含氮杂环或包含氨基、脒基或胍基的苯基取代低级烷基，R14如前定义]；R2、R3、R5、R5、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：如方法F中所述，使式(I)的气丝菌素[其中，R1为氨基；R2、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]的氨基进行单N-烷基化，随后如方法I所述采用相应的式(VII)、(VII′)或(VIII)的化合物进行酰化，随后，如果需要的话，除去保护基。
方法K
式(I)的气丝菌素[其中，R1为胍基、-N(R10)-R11[其中，R10和R11彼此独立地选自被胍基或含胍基的苯基取代的低级烷基]、-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13[其中，R10、R11和R13如前定义和R15为任选地被一个或多个胍基、含氮杂环或含胍基的苯基取代的低级烷基]或-N(R15)CO-R14[其中，R14为任选地被一个或多个胍基、含氮杂环或含胍基的苯基取代的低级烷基；R2、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：使式(I)的气丝菌素[其中，R1为氨基；-N(R10)-R11[其中，R10和R11彼此独立地选自被氨基或包含氨基的苯基取代的低级烷基]、-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13[其中，R10、R11和R13如前定义和R15为任选地被一个或多个氨基、含氮杂环或包含氨基的苯基取代的低级烷基]；或-NHCO-R14[其中，R14为任选地被一个或多个氨基、含氮杂环或包含氨基的苯基取代的低级烷基；R2、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]与活化的脒衍生物反应。
方法L
式(I)的气丝菌素[其中，R2为任选地被酰基、羧基、氨基甲酰基、羟基、氨基、单-低级烷基氨基或二-低级烷基氨基取代的低级烷基或低级链烯基；R1、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：用烷基化试剂使式(I)的气丝菌素[其中，R2为氢；R1、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]的酚羟基进行O-烷基化。
方法M
式(I)的气丝菌素[其中，R3为羧基、低级烷氧基羰基、低级烷基、链烯基或链炔基，其可任选地被羟基、氨基、单低级烷基氨基、二-低级烷基氨基、低级烷氧基羰基或氨基甲酰基取代；R2为氢；R1、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：用碘化剂碘化式(I)的气丝菌素[其中，R2和R3为氢；R1、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]，再用一氧化碳、丙烯酸甲酯等对形成的式(I)的碘代衍生物[其中，R3为碘；R1、R2、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]进行钯(0)催化的偶联反应，如果需要的话，除去保护基。
方法N
式(I)的气丝菌素[其中，R5为-CN；R1、R2、R3、R4、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：采用脱水剂使式(I)的气丝菌素[其中，R5为-CONH2；R1、R2、R3、R4、X、Y、Z和m如前定义]的氨基甲酰基脱水，和如果需要的话，除去氨基保护基。
方法O
式(I)的气丝菌素[其中，R5为-CH2NH2；R1、R2、R3、R4、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：用还原剂还原式(I)的气丝菌素[其中，R5为-CONH2或-CN；R1、R2、R3、R4、X、Y、Z和m如前定义]的氨基甲酰基或氰基，如果需要的话，除去氨基保护基。
方法P
式(I)的气丝菌素[其中，R2为羟基磺酰基；R1、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]可这样制备：使式(I)的气丝菌素[其中，R2为氢；R1、R3、R4、R5、X、Y、Z和m如前定义]的酪氨酸残基进行羟基磺化，随后除去保护基。
方法Q
式(I)的气丝菌素[其中，-Y-(CH2)m-X-R4为正十三烷基或1-甲基十三烷基，R5为-CONH2，Z为氧原子和R1、R2和R3如前定义]可按照反应路线1所列出的方法由直链肽制得。
上述式(III)的化合物，其中，R2、R3和R5如前定义和R6为氨基保护基，条件是当R5为-CONH2时，则R2或R3不为氢，和其盐为新的，其也是本发明的主题。进而，在反应路线1中所示出的式(IX)、(X)和(XII)的直链肽和其选择性的盐也是新的，其也是本发明的主题。
                    反应路线1(续下页)
Figure A0180395000411
                    反应路线1方法A至Q按照下述更详细地进行说明：
方法A
用于本发明的微生物可为能够产生气丝菌素1、2和3的包括突变体和变体在内的属于半知菌亚门(Deuteromycotina)的任何菌株。特别优选的是菌株NR 7379，其是在日本的Kagoshima pref.收集的落叶中分离出来的，并确定为属于半知菌亚门的菌株。
菌株NR 7379的培养和形态特征如下：
1.培养的特征
玉米粉琼胶(CMA)：生长并不广泛。菌落在25℃下14天后由接种物(4.5 mm直径琼脂填料)达到直径为11mm。它们为平面和浅乳黄色。而另一侧为浅乳黄色。存在无色和粘液质的渗出物。
Miura′s培养基(LcA)：生长并不广泛。菌落在25℃下14天后由接种物达到直径为11mm。它们为平面和浅乳黄色。而另一侧为浅乳黄色。不存在渗出物。
麦芽提取液琼脂(MEA)：生长并不广泛。菌落在25℃下14天后由接种物达到直径为18mm。菌落的颜色为淡黄褐色。反侧为同一种颜色。渗出物为无色和粘液质的。
马铃薯-葡萄糖琼脂(PDA)：生长并不广泛。菌落是脓疱样的，在25℃下14天后由接种物达到直径为14mm。菌落的颜色和结构与在MEA上的那些类似。渗出物为无色和粘液质的。
在5-30℃对CMA、LCA、MEA和PDA观察发芽情况。
2.形态学特性
菌丝是部分沉浸的，部分表面的，分支的，有隔膜的，为淡褐色至乳黄色的。分生孢子梗由沉浸的菌丝体形成。它们是玻璃样的，有隔的，分支的、不规则的。产孔细胞处于不同的分生孢子梗或不规则的菌丝上。它们是成肠细胞的(enteroblastic)，瓶梗产孢的，终端的或终端下的。终端的或终端下的瓶梗在长度和形状上均是可变化的。它们为圆柱形至瓶形的，它们的长度和宽度分别高达5.5-10μm和2.5-5.5μm。经常形成直接在中隔之下的具有侧面产孢细胞的不规则丝状分生孢子梗。分生孢子是单细胞的，玻璃似的，光滑的，球形至亚球形的，其长度为2.0-5.5μm，宽度为2.0-5.0μm。
基于这些不同的培养和形态学特性，属于半知菌亚门的本发明的菌株被称为半知菌亚门NR 7379。
根据布达佩斯条约，被命名为半知菌亚门NR 7379的菌株以半知菌亚门NR 7379(FERM BP-6391)存放于日本国立生命科学和人体技术研究所(National Institute of Bioscience and Human-Technology，Agency ofIndustrial Science and Technology，日本)，名称，NipponRoche K.K.，日本东京105，港区芝2丁目，6-1，1998年6月16日。
按照由本发明提供的方法进行的培养可在培养基中进行，所述培养基包含微生物培养的常规营养物。作为可提及的碳源，例如可以为葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油、糖蜜、糊精和其混合物。氮源的实例为大豆粉、棉籽粉、肉膏、胨、干酵母、酵母提取物、玉米浸渍液、硫酸铵、硝酸钠和其混合物。进而，可在培养基中加入其它有机或无机物质，以促进微生物的生长，并用于增加气丝菌素1的生产。这些物质的实例为无机盐，如碳酸钙、氯化钠、磷酸盐等。
培养是在需氧条件下进行的，优选在液体介质中进行深层发酵，或者在固体介质中进行静态发酵。适宜培养的温度为20℃至30℃，最佳温度为27℃。培养优选在pH3-9下进行。培养时间取决于培养进行的条件。通常，20-360小时足以进行培养。
为从培养物中获得所需的气丝菌素1、2和3，可适当地采用各种分离方法以用于从这些培养物中分离由微生物产生的代谢物。例如，通过下述过程可有利地回收作为甲醇可提取的两性物质的气丝菌素1。
也就是说，通过固体静态发酵获得的整体培养基固体用适宜的溶剂进行提取以回收所需的产物。可用于由整个培养的固体中提取所需化合物的溶剂包括水溶性有机溶剂或水溶性有机溶剂的含水溶液，如甲醇、乙醇或含水醇。
为从形成的提取物中除去盐、水溶性物质等，有利地可采用在水与不溶性有机溶剂间进行的溶剂分配，所述溶剂例如为正丁醇、乙酸乙酯等。为从提取物中除去有色物质、脂溶性物质等，有利地可通过甲醇、乙醇、乙腈-0.1％三氟乙酸水溶液的混合物等进行溶剂纯化。
为完成对气丝菌素的纯化，有利地采用柱色谱。在该柱色谱中采用的载体例如为YMC-GEL ODS(Yamamura Chemical Laboratories，日本)或Preparative C18(Waters Millipore Corporation)。作为洗脱液，可采用由三氟乙酸与适宜的水溶性有机溶剂的混合物组成的溶剂体系，所述有机溶剂例如为甲醇、乙醇、乙腈等。包含每种组分的纯化后的洗脱级分可进行浓缩或冷冻干燥，以使气丝菌素1、2和3粉碎。
气丝菌素1、2和3以三氟乙酸盐的形式分离，但游离的气丝菌素1、2和3可通过以下的过程制备。即，将气丝菌素1、2和3三氟乙酸盐溶解于水中，向其中加入1当量的氢氧化钠，将混合物用Sephadex LH-20柱色谱处理，随后用含水醇如甲醇-水等进行洗脱，从而分别获得气丝菌素1、2和3(游离形式)。
方法B
式(III)的原料化合物可通过WO96/30399所述类似的方法由式(I)的气丝菌素[其包括气丝菌素1-3以及那些由气丝菌素1-3采用选自方法C-Q的方法可转化成气丝菌素的物质]制备。该方法包括对内酯环进行碱性水解，随后对脂肪酸链进行酶致裂解。优选用于式(III)中R6和式(IV)中R8的氨基保护基分别为叔丁氧基羰基(Boc)和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)。
式(III)的原料化合物也可由经发酵半知菌亚门获得的式(IX)的直链肽制备，采用以后描述的常规肽合成法。
式(IV)的原料化合物[其中，Y为-CONH-；R4、R8和X如前定义]可这样制备：使式(XIV)的化合物
Figure A0180395000441
[其中，R7为氨基保护基，如Fmoc基团，和R8为如前定义]，
与式(XV)的化合物进行缩合，
                R8NH-(CH2)m-X-R4    (XV)
[其中，R4、R8、X和m如前定义]，
随后除去叔丁基。式(XIV)的化合物可商购。
式(XV)的原料化合物[其中，X为单键，芳基、联苯基或三苯基，它们选择性地包含一个或多个杂原子和/或被卤原子或低级烷基取代]是可商购的或可按照与EP 736 541所述类似方法和反应路线2制备：例如，对在以下提到的反应路线2中的羧酸中间体制备的甲酰胺进行LiAlH4还原，随后用Fmoc氯化物等对氨基进行保护。
式(IV)的代表性化合物为[其中，Y为-CONH-或-CON(低级烷基)-；R4、R7、R8和X如前定义]：
    HO2C-CH2CH(NHFmoc)-CONH-(CH2)10CH3，
    HO2C-CH2CH(NHFmoc)-CONH-(CH2)12CH3，
    HO2C-CH2CH(NHFmoc)-CONH-(CH2)14CH3，
    HO2C-CH2CH(NHFmoc)-CONH-(CH2)11CH(CH3)2，
    HO2C-CH2CH(NHFmoc)-CONH-(CH2)10-CH＝CH-CH2CH3，
    HO2C-CH2CH(NHFmoc)-CONH-(CH2)8-CH＝CH-(CH2)3CH3，
    HO2C-CH2CH(NHFmoc)-CON(CH3)-(CH2)12CH3，
    HO2C-CH2CH(NHFmoc)-CON(CH3)-(CH2)14CH3，等。
式(IV)的原料化合物[其中，Y为单键或-CH2-；R4、R8和X如前定义]可这样制备：使(R)-(+)-N-苄基-1-苯基乙基胺与式(XVI)的化合物进行Michael加成
[其中，R4、X和m如前定义]
该反应在强碱如LDA存在下进行[参见Tetrahedron Asymmetry，2(3)，183(1991)]，随后i)通过催化氢化进行N-脱苄基化反应，ii)形成的伯胺用Fmoc氯化物等保护，和iii)除去叔丁基。
式(XVI)的原料化合物可通过在下述反应路线2中列出的方法制备。
         (XVI)                              反应路线2
式(XVI)的化合物，其中，m为4，可这样制备：在最后的wittig反应之前重复进行反应路线2中的步骤1-3。
式(IV)的代表性化合物[其中，Y为单键或-CH2-；R4、R7和X如前定义]为：
HO2C-CH2CH(NHFmoc)-(CH2)12CH3，
HO2C-CH2CH(N(CH3)Fmoc)-(CH2)14CH3等。
第一肽键形成反应以及形成的直链肽的环化反应可按照肽化学中公知的方法进行：[参见肽合成实践(The practice of Peptide Synthesis，M.Bodansky和A.Bodansky/第2版.，1994(Springer-Verlag)]。优选的缩合剂为BOP-HOBt、PyBOPTM-HOBt、PyBroPTM-HOBt等[偶联剂：可商购(参见The Combinatorial Chemistry Catalog，Feb.，1997；Novabiochem.)]。
反应可在溶剂中进行，溶剂例如为甲醇、乙醇、吡啶、N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮等，反应中可存在或不存在碱，如三乙胺、二异丙基乙基胺、吡啶等，反应温度为-20℃至+50℃，优选0℃至+25℃。
方法C
式(I)的气丝菌素的硝化可按照本领域技术人员公知的方法进行；通常采用亚硝酸钠/乙酸、四硝基甲烷/吡啶等。
反应温度为-20℃至0℃，优选0℃。
方法D
硝基的还原可通过本领域技术人员公知的的方法完成；通常通过采用催化剂的催化氢化，催化剂例如钯-C，氧化铂等。
该反应可在室温下在诸如甲醇、乙醇、乙酸等溶剂中进行。
方法E和I
在式(I)中存在于R1或R3中的氨基的N-酰化反应可采用酸酐或氨基甲酰基氯由本领域技术人员公知的方法进行，或者采用羧酸进行N-酰化反应，采用诸如以下的缩合剂，如二环己基碳化二亚胺、BOP、HBTU、TNTU、PyBroPTM、PyBOPTM、TBTU、TSTU、HOBt等，或这两种方法的组合。
该反应可在溶剂中进行，溶剂例如为甲醇、乙醇、吡啶、N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮等，该反应在碱存在或不存在下进行，碱例如为三乙胺、二异丙基乙基胺、吡啶等，反应温度为-20℃至+50℃，优选0℃至+25℃。
当采用N-保护的氨基酸用于缩合反应时，氨基保护基的脱除是通过本领域技术人员公知的方法进行的，例如用三氟乙酸处理Boc基团，或用哌啶对Fmoc基团进行处理。
方法F
存在于式(I)中R1的中的氨基的N-单烷基化反应可采用丙烯腈、乙氧基亚甲基-丙二腈或(1-乙氧基亚乙基)丙二腈完成，采用下述文献所述方法：Organic Synthesis col.Vol.III，93页，再将形成的腈基团还原，可采用催化氢化或用硼氢化钠/氯化钴、硼烷-甲基硫配合物等还原[参见J.Med.Chem.，37，222(1994)]。
方法G
存在于式(I)的R1中的伯或仲氨基的N-烷基化反应可通过采用式(V)的醛衍生物的常规还原胺化反应完成，采用还原剂，如氰基硼氢化钠，该反应在弱酸如乙酸存在或不存在下进行。
反应在室温下在诸如甲醇、乙醇、乙酸等溶剂中进行。
方法H
用于取代反应的式(VI)化合物(R12-Q)的实例为2-溴-5-硝基吡啶、2-氯嘧啶、氯吡嗪等。
取代反应的反应温度为-20℃至+50℃，优选0℃至+25℃，反应在溶剂中进行，例如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺等，反应在酸清除剂如碳酸钾、三乙胺、二异丙基乙基胺等存在或不存在下进行。
方法J
存在于式(I)的R1中的氨基的第一次单-N-烷基化反应可按照方法F所述的方法进行。随后的N-酰化反应可按照方法E和I所述方法进行。
方法K
存在于式(I)的R1中的氨基转化成胍基的反应可通过活化脒衍生物完成，如3，5-二甲基-1H-吡唑-1-甲脒、甲脒磺酸、苯并三唑基-1-甲脒鎓(carboxamidinium)甲苯磺酸盐等。
反应在溶剂中进行，溶剂例如为甲醇、乙醇、水、N，N-二甲基甲酰胺等，反应温度为0℃至约50℃，优选20℃至约30℃。
方法L
在式(I)中的酪氨酸残基的羟基的O-烷基化反应可由本领域技术人员公知的方法完成，该反应在酸清除剂存在下进行，酸清除剂例如为碳酸钠、二异丙基乙基胺等[Org.Synth.，Coll.vol.IV 836(1963)]。
该反应在溶剂中进行，如甲醇、乙醇、丙酮、N，N-二甲基甲酰胺等，反应温度为0℃至+50℃，优选0℃至+25℃。
方法M
在酪氨酸残基的酚基团的邻位处的碘化反应可通过用一氯化碘或碘化钠/次氯酸钠水溶液处理式(I)的气丝菌素(其中R2为氢)来完成，该反应在溶剂如甲醇、乙醇等中在室温下进行。
与一氧化碳、丙烯酸甲酯等的钯(0)催化的偶联反应可采用钯(0)催化剂进行，所述钯催化剂例如为Pd(OAc)2、Pd(OAc)2(dppp)2，反应在溶剂中进行，如甲醇、乙醇、N，N-二甲基甲酰胺、乙腈等，反应在碱如三乙胺存在下进行，反应温度为20℃至+100℃，优选20℃至+70℃[Bioorg.Med.Chem.Lett.，7(22)，2879(1997)]。
方法N
式(I)的氨基甲酰基(R5)的脱水可采用Burgess试剂[商购自Aldrich]、氰尿酰氯、草酰氯等[参见J.Med.Chem.，37，222(1994)]完成。
该反应在诸如N，N-二甲基甲酰胺，N-甲基吡咯烷酮等溶剂中在室温下进行。
方法O
式(I)的氨基甲酰基或氰基(R5)的还原可通过硼氢化钠/氯化钴，硼烷-甲基硫配合物等完成[参见J.Med.Chem.，37，222(1994)]。
该反应可在诸如甲醇、乙醇等溶剂中在室温下进行。
方法P
式(I)的酪氨酸残基的羟基磺化反应可通过三氧化硫-DMF配合物、三氧化硫-吡啶配合物或三氧化硫-三乙胺配合物在诸如N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、1，4-二噁烷、四氢呋喃等溶剂中在-30℃至+70℃下，优选在室温下进行[参见J.Chem.Soc.Perkin Trans，(6)1739(1990)]。
方法Q
在该方法中涉及的反应可通过与方法B-O所述类似的方法完成。
式(IX)的直链肽原料可这样制备：在需氧条件下，在含水或固体培养基中对属于半知菌亚门的微生物进行培养，从培养物中分离出式(IX)的直链肽。
用于本发明的微生物可为能够产生式(IX)的直链肽的包括突变体和变体在内的属于半知菌亚门的任何菌株。特别优选的是菌株NR 7379，其是在日本的Kagoshima pref.收集的落叶中分离出来的，并确定为属于半知菌亚门的菌株。
根据布达佩斯条约，被命名为半知菌亚门NR 7379的菌株以半知菌亚门NR 7379(FERM BP-6391)存放于日本国立生命科学和人体技术研究所(National Institute of Bioscience and Human-Technology，Agency ofIndustrial Science and Technology，日本)。
按照由本发明提供的方法进行的培养可在培养基中进行，所述培养基包含微生物培养的常规营养物。作为可提及的碳源，例如可以为葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油、糖蜜、糊精和其混合物。氮源的实例为大豆粉、棉籽粉、肉膏、胨、干酵母、酵母提取物、玉米浸渍液、硫酸铵、硝酸钠和其混合物。进而，可在培养基中加入其它有机或无机物质，以促进微生物的生长，并用于增加式(IX)的直链肽的生产。这些物质的实例为无机盐，如碳酸钙、氯化钠、磷酸盐等。
培养是在需氧条件下进行的，优选在液体介质中进行深层发酵，或者在固体介质中进行静态发酵。适宜培养的温度为20℃至30℃，最佳温度为27℃。培养优选在pH3-9下进行。培养时间取决于培养进行的条件。通常，120-672小时足以进行培养。
为从培养物中获得所需的式(IX)的直链肽，可适当地采用各种分离方法以用于从这些培养物中分离由微生物产生的代谢物。例如，通过下述过程可有利地回收作为甲醇可提取的两性物质的式(IX)的直链肽。
也就是说，通过液体发酵获得的培养肉汤用适宜的溶剂进行提取以回收所需的产物。可用于由培养肉汤中提取所需化合物的溶剂包括水溶性有机溶剂或水溶性有机溶剂的含水溶液，如甲醇、乙醇和含水醇，或水不混溶性有机溶剂如正丁醇。
为从形成的提取物中除去盐、水溶性物质等，有利地可采用在水与水不混溶性有机溶剂间进行的溶剂分配，所述溶剂例如为正丁醇、乙酸乙酯等。为从提取物中除去有色物质、脂溶性物质等，有利地可通过甲醇、乙醇、乙腈-0.1％三氟乙酸水溶液的混合物等进行溶剂纯化。
为了完全纯化式(IX)的直链肽，有利地采用柱色谱。在该柱色谱中采用的载体例如Capcel Pak C18 UG80(Shiseido Co.LTD，日本)。作为洗脱液，可采用由三氟乙酸与适宜的水溶性有机溶剂的混合物组成的溶剂体系，所述有机溶剂例如为甲醇、乙醇、乙腈等。纯化后的洗脱级分(包含式(IX)的直链肽)可进行浓缩或冷冻干燥，以使式(IX)的直链肽粉碎。
式(IX)的直链肽以三氟乙酸盐的形式分离，但游离的式(IX)的直链肽可通过以下的过程制备。即，将式(IX)的直链肽三氟乙酸盐溶解于水中，向其中加入1当量的氢氧化钠，将混合物用Sephadex LH-20柱色谱处理，随后用含水醇如甲醇-水等进行洗脱，从而获得式(IX)的直链肽。
本发明提供的式(IX)的直链肽并不会显示出针对各种真菌的杀真菌活性，但是，它们可以成为生产潜在的杀真菌剂如气丝菌素的关键中间体。
本发明也涉及气丝菌素的酸加成盐。酸加成盐可在常规分离之后以三氟乙酸盐的形式获得。可将所获得的盐溶解于水中，并使其通过负载所需阴离子的阴离子交换柱。包含所需盐的洗脱液可浓缩而回收作为固体产品的盐。
式(I)的气丝菌素可通过存在的叔氮原子而转化成相应的盐。
式(I)的气丝菌素的酸加成盐可通过用至少化学计算量的适宜的酸处理气丝菌素的游离碱而获得，所述酸例如为无机酸，例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；有机酸，例如，乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。通常，将游离碱溶解于惰性有机溶剂如乙醇、甲醇等中，将酸加至类似的溶剂中。将温度保护在约40℃。形成的盐可自发沉淀或用少量的极性溶剂将其从溶液中带出。
式(I)的气丝菌素的酸加成盐可转化成相应的游离碱，即用至少化学计算量的适宜的碱对其进行处理，所述碱例如为氢氧化钠或氢氧化钾、碳酸钾，碳酸氢钠、氨等。
上述气丝菌素显示出针对各种真菌很宽的杀真菌活性，可用作用于治疗和预防真菌感染性疾病的试剂。以下显示出式(I)的代表性气丝菌素的体外和体内杀真菌活性(参见表2和3)以及对肝细胞的毒性(参见表4)：
1.体外抗真菌活性
通过测定50％抑制浓度(IC50)来评价本研究的代表性气丝菌素的体外抗真菌活性，将其计算为与不含药物的对照组生长相比，将真菌的生长抑制到20％分光光度浊度的最小抗真菌剂浓度。
IC50值通过作以较小改变的基于NCCLS许可标准的肉汤微稀释法测得(国家临床实验标准委员会(1997)用于针对酵母的肉汤稀释抗真菌敏感性试验的参考方法。许可标准。文件M27-A)。将添加1％葡萄糖和0.25％K2HPO4的酵母氮碱(YNB；Difco Lab.)用作酵母测试培养基，将用0.2％低熔点琼脂糖(BRL)固化的相同的培养基用于丝状真菌。接种物大小为1-3×104细胞/ml，且在35℃下孵育1-2天。
表2：体外抗真菌活性，IC50(μg/ml)
          白色假丝酵母    烟曲霉(Aspergillus    瓜类腐皮镰孢
            (Candida          fumigatus)          (Fusarium
            albicans)                               solani)
             CY1002             CF1003              CF1088气丝菌素1         0.03               0.06                0.21气丝菌素5         0.03               0.07                0.19气丝菌素12        0.09               0.10                2.20气丝菌素31        0.07               0.49                0.70气丝菌素36        0.08               0.05                1.00气丝菌素39        0.09               0.17                0.70气丝菌素41        0.08               0.03                2.40气丝菌素43        0.05               0.04                0.70气丝菌素45        0.07               0.08                2.30气丝菌素46        0.09               0.08                1.80气丝菌素47        0.09               0.11               1.40气丝菌素53        0.11               0.09               2.30气丝菌素54        0.15               0.17               0.74气丝菌素55        0.04               0.04               0.39气丝菌素57        0.14               0.05               1.30气丝菌素75        0.15               0.10               1.40气丝菌素77        0.13               0.10               0.67气丝菌素95        0.14               0.10               0.74气丝菌素132       0.30               0.10               0.19气丝菌素134       0.12               0.19               0.03气丝菌素135       0.18               0.20               0.05气丝菌素136       0.20               0.28               0.04
2.体内抗真菌效力 2-1：鼠系统性念珠菌病
本发明气丝菌素对系统性念珠菌病的体内抗真菌效力如下表3-1所示。将具有常规免疫能力的小鼠株的小鼠，Crj：CD-1(ICR)用于系统性念珠菌病的实验感染模型。将4周大的Crj：CD-1(ICR)小鼠用于通过尾静脉注射白色假丝酵母(Candida albicans)5×106分生孢子/小鼠而导致的系统性念珠菌病。对系统性念珠菌病，以静脉内方式(i.v.)第一天治疗2次(感染后0、4小时)，而随后两天每天治疗一次(一天两次治疗1天，然后一天一次治疗2天)。根据在第14天各种剂量的存活数计算50％有效剂量(ED50)值。表3-1：对小鼠系统性念珠菌病的体内抗真菌活性
第14天的ED50(mg/kg)
      气丝菌素5                              0.3
      气丝菌素16                             0.3
      气丝菌素18                             0.6
      气丝菌素36                             0.6
      气丝菌素41                             0.3
      气丝菌素42                             0.6
      气丝菌素45                             0.3
      气丝菌素46                             0.4
      气丝菌素50                             ＜0.3
      气丝菌素55                             ＜0.3
      气丝菌素65                             0.62-2：鼠肺曲霉病
本发明的气丝菌素对肺曲霉病的体内抗真菌效力如下表3-2所示。鼠肺曲霉病是在可的松处理的(250mg/kg，在感染前3天和感染当天两次皮下处理)的ICR雄性小鼠上建立的。用烟曲霉(A.fumigatus)分生孢子(2.5×105分生孢子/小鼠)气管内感染这些小鼠，并进行为期4天的每天一次的治疗。根据存活数确定各药物的效力，并根据在14天的各种剂量的存活数计算50％有效剂量(ED50)。*表3-2：对小鼠肺曲霉病的体内抗真菌活性
14天的ED50(mg/kg)
     气丝菌素132                       5.2
     气丝菌素134                       5.8
     气丝菌素135                       8.6
3.体外肝毒性试验
通过胶原酶消化分离小鼠肝细胞并在微量培养板中培养。肝细胞单层与受试气丝菌素在培养系统中接触1天。在培养期后，在显微镜下观察肝细胞并进行形态学评价。将受试气丝菌素导致的肝细胞形态变化(退化)的程度与WF11243和LY303366进行比较。表4：对肝细胞的细胞毒性(μg/ml)
      气丝菌素14                                ＞100
      气丝菌素15                                ＞100
      气丝菌素21                                ＞100
      气丝菌素34                                ＞100
      气丝菌素38                                ＞100
      气丝菌素45                                ＞100
      气丝菌素47                                ＞100
      气丝菌素48                                ＞100
      气丝菌素53                                ＞100
      气丝菌素65                                ＞100
      气丝菌素67                                ＞100
      气丝菌素72                                ＞100
      气丝菌素81                                ＞100
      气丝菌素132                               ＞100
      气丝菌素134                               ＞100
      气丝菌素135                               100
      WF11243(＝气丝菌素3)                      ＞100
      LY303366                                  10
持续4周用5mg/kg和30mg/kg气丝菌素1对小鼠进行给药表明没有急性毒性。
因此，式(I)的新气丝菌素及其药学上可接受的盐在小鼠身上在宽剂量范围内表现出对各种真菌感染，包括曲霉病的有效的抗真菌活性，并且作为抗真菌剂是有用的。而且，本发明提供的气丝菌素对肝细胞的细胞毒性较已知的环肽衍生物(WF11243和LY303366)小得多。
本发明的气丝菌素还可以用于抑制或缓解免疫受损患者的卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)感染。式(I)的新气丝菌素及其药学上可接受的盐是高活性的杀真菌剂。它们对多种真菌种，包括假丝酵母属种(Candida spp.)、曲霉属种(Aspergillus spp.)、镰孢属种(Fusarium spp.)、毛霉属种(Mucorspp.)和犁头霉属种(Absidia spp.)具有活性。
式(1)的气丝菌素在通过口服或肠道外途径给药时的日剂量水平为0.1-50mg/kg(以均分剂量的形式)。因此可以期望气丝菌素的片剂或胶囊含有约5mg-0.5g活性化合物以酌情一次一粒或两或多粒给药。任何情况下，实际的剂量由医师来确定，且它可能随特定患者的年龄、体重和反应而变。
因此，本发明的组合物的一个优选的实施方案是一种包含生理学活性环肽和生理学可接受的粉状或结晶状多价金属载体的鼻给药组合物，其中，在存在或不存在平均颗粒尺寸不大于250μm、优选为20μm-180μm的吸收增强剂的情况下，将有效量的任何环肽如环孢菌素A(Cyclospoline A)、万古霉素、达托霉素、气丝菌素、棘白菌素和肺念定均匀分散或吸附在多价金属载体上，这些多价金属载体的平均颗粒大小范围为20-250μm，优选范围为20-100μm，更优选范围为20-60μm。
因此，本发明组合物的一个优选的实施方案是粉状形式的生理学活性环肽组合物，将它制成鼻给药制剂，其中，在存在或不存在选自大米、糯米、淀粉、明胶、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、蛋黄卵磷脂、阿拉伯胶、黄芪胶及其混合物的细粉的吸收增强剂的情况下，将生理学有效量的环肽均匀分散或吸附在选自铝化合物、钙化合物、镁化合物、硅化合物、铁化合物和锌化合物的二价金属载体上，这些化合物的平均颗粒尺寸不大于250μm，优选不大于100μm，更优选20μm-60μm。更优选的吸收增强剂为糯米、淀粉、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、黄芪胶及其混合物的细粉。最优选的吸收增强剂为糯米细粉。吸收增强剂的平均颗粒尺寸不大于250μm，优选20μm-180μm。
本发明组合物的另一个优选的实施方案是粉末形式的鼻给药生理学活性组合物，其中，在存在或不存在选自大米、糯米、淀粉、明胶、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、蛋黄卵磷脂、阿拉伯胶、黄芪胶及其混合物的细粉、最优选糯米细粉的吸收增强剂的情况下，将生理学有效量的环肽均匀分散或吸附在载体上，这些载体选自羟基磷灰石、碳酸钙、乳酸钙、硬脂酸镁，优选为平均颗粒大小范围20-100μm的碳酸钙。吸收增强剂的平均颗粒尺寸不大于300μm，优选20μm-180μm。
本发明组合物的另一个优选的实施方案是粉末形式的鼻给药生理学活性组合物，其中，将生理学有效量的环肽均匀分散或吸附在选自米、小麦、荞麦、大麦、大豆、玉米、小米、粟米等的有机载体。有机载体的平均颗粒尺寸不大于300μm，优选20μm-180μm。
而且，本发明组合物的最优选的实施方案是粉末形式的鼻给药抗真菌环肽组合物，其中，在存在选自平均颗粒尺寸不大于250μm的大米、糯米、淀粉、明胶、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、蛋黄卵磷脂、阿拉伯胶、黄芪胶、优选糯米的细粉的吸收增强剂的情况下，将生理学有效量的选自气丝菌素、棘白菌素和肺念定的肽均匀分散或吸附在选自羟基磷灰石、碳酸钙、乳酸钙、硬脂酸镁，优选平均颗粒尺寸范围为20μm-60μm的碳酸钙的载体。
本发明组合物中含有生理学有效量的环肽可以随诸如以下的因素而变：所选择的活性物质、治疗的疾病、期望的给药数，期望的治疗效果等等。当通过鼻腔对本发明组合物进行给药时，可以在其与已知含有相同活性物质的制剂的生物利用度比较的基础上，测定环肽的生理学有效量。
本发明的生理学活性环肽组合物可以包含占制剂总重的大约5％-50％，优选大约为10％-40％，更优选大约为20％-30％的生理学活性环肽。
本发明的生理学活性肽组合物可以在以下情况下实现高度鼻吸收：它含有占制剂总重的大约为50％-95％，优选大约为60％-95％，更优选约为70％-90％的载体(如羟基磷灰石、碳酸钙、乳酸钙、硬脂酸镁作为典型的载体)。
本发明的生理学活性肽组合物可以在以下情况下实现高度鼻吸收：它含有占制剂总重的大约为0.5％-15％，优选大约为1％-10％，更优选大约为1％-5％的吸收增强剂(如大米、糯米、淀粉、羟丙基纤维素-H的细粉作为典型的增强剂)。
本发明的生理学肽组合物可以通过以下方法制备：在存在或不存在平均颗粒尺寸不大于250μm，优选20-180μm的吸收增强剂的情况下，将生理学有效量的环肽均匀地分散在含有多价金属的生理学上可接受的粉末状或结晶状载体或有机载体中，优选分散在平均颗粒大小范围为20-250μm的生理学可接受的粉末状或结晶状水不溶性多价金属载体上；并将该活性物质吸附到此载体上。
例如，为了制备本发明的组合物，将作为活性物质的抗真菌环肽与载体[如羟基磷灰石、碳酸钙或乳酸钙作为钙化合物；硬脂酸镁作为镁化合物；或氢氧化铝作为铝化合物]混合；而且如果需要的话，与吸收增强剂[例如大米、糯米、淀粉、明胶、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、蛋黄卵磷脂、阿拉伯胶、黄芪胶或其混合物的细粉]混合。然后以相对于制剂总重的10％-60％，优选大约10％-40％，更优选大约10％-30％的比率将蒸馏水加到此混合物中，并良好地混合直至混合物变成糊状固体。然后将混合物真空干燥或在-5至-30℃的温度下冷冻干燥。如果需要，将所得的粉末残留物与占制剂总重的0.1％-5％，优选大约为1％-5％的比率的润滑剂如硬脂酸钙混合，并通过直径为180-250、优选180μm的筛目。
用于本发明的载体的平均颗粒大小可以为20-250μm，优选20-100μm，最优选大约20-60μm。另一方面，优选将生理学活性环肽研磨成尽可能最小的颗粒，其平均颗粒尺寸小于20μm，优选小于10μm。
更具体地，当选择气丝菌素作为抗真菌环肽时，将生理学有效量的气丝菌素与碳酸钙混合。然后将占制剂总重的大约10％-30％，优选大约25％的比率的蒸馏水加到此混合物中，并进行良好地混合直至该混合物变成糊状固体。随后将此混合物真空干燥或在-5至-30℃的温度下冷冻干燥。向所得的粉状残留物中加入硬脂酸钙或硬脂酸镁作为润滑剂，占制剂总重的大约0.1％-5％，优选大约1％比率，并通过直径为180-250μm，优选180μm的筛目。
另一实施方案，当选择气丝菌素作为抗真菌环肽，而糯米粉作为吸收增强剂时，将生理学有效量的气丝菌素与碳酸钙和糯米细粉混合。然后将占制剂总重的大约25％的比率的蒸馏水加到此混合物中，并进行良好地混合直至该混合物变成糊状固体。随后将此混合物真空干燥或在-5至-30℃的温度下冷冻干燥。向所得的粉状残留物中加入硬脂酸钙或硬脂酸镁作为润滑剂，占制剂总重的大约0.1％-5％，优选大约1％比率，并通过直径为180-250μm，优选180μm的筛目。
为了防止生理学活性环肽的活性的丧失，随后将鼻给药组合物装填到低油脂类型的胶囊中并包装成适宜的形式，优选为封闭的形式，采用含铝包装的囊泡包装。
在单一鼻内给药后的猴子身上测定本发明的代表性的鼻给药抗真菌环肽组合物的绝对生物利用度(＝AUC(i.n.)/AUC(i.v.))，结果如表5所示。在实施例中描述了各种组合物的制剂。采用鼻用喷雾器，以80mg(含有20mg活性物质的组合物的总重)/身体的剂量将抗真菌环肽的鼻用组合物鼻内给予幼龄猕猴(Cynomolgus)。在给药后10分钟、30分钟、1、2、4、8、12和24小时，以预定的剂量在肝素化注射器中通过四肢静脉收集血样。通过LC-MS法测定药物浓度。为了计算生物利用度，用20mg对应的活性物质对猴进行静脉内给药(i.v)，将曲线下的面积(AUC)值与在鼻内给药(i.n.)给药后得到的曲线下的面积(AUC)值进行比较。
                                   表5
 组合物   活性物质   载体  吸收增强剂   Cmax(μ/ml)   AUC inf.(μg·hr/ml)  生物利用度(％)
实施例32 气丝菌素106   CaCO3   无   5.62     61.7   20.2
实施例33 气丝菌素106   CaCO3   糯米   7.06     97.0   31.8
实施例34 气丝菌素106   米粉   无   4.80     41.6   13.6
实施例35 气丝菌素106   玉米淀粉   无   5.68     53.6   17.6
实施例36 气丝菌素133   CaCO3   无   5.38     53.2   13.5
实施例37 气丝菌素132   CaCO3   无   2.51     55.5   22.6
当使用含有碳酸钙和糯米粉(实施例33)组成的鼻给药抗真菌环肽组合物时，获得最高的绝对生物利用度。在上述的剂量处，活性物质的血浆浓度在24小时内超过治疗浓度。
因此，可以将本发明中的鼻给药生理学活性环肽组合物用于治疗疾病，如系统性真菌感染。
以下的实施例例举了根据本发明使用的某些优选的生理学活性环肽，和用于制备本发明的鼻给药生理学活性环肽组合物的方法，这些实施例不是意图限定本发明的保护范围。
在以下的实施例中，通过HPLC法，采用选自以下所列的逆相柱分析产品。混合溶剂由在各个实施例中所述的适当比例的0.05％三氟乙酸-水：0.005％三氟乙酸-乙腈组成。
HPLC柱：
柱A：CAPCELL PAK18，UG-120，4.6×250nm
柱B：CAPCELL PAK18，UG-120，10×250nm
柱C：CAPCELL PAK18，UG-80，20×250nm
柱D：CAPCELL PAK18，SG-120，4.6×250nm
柱E：CAPCELL PAK18，SG-120，10×250nm
柱F：ODS-80Ts，10×250nm
在以下的实施例中，除非另外指出，所得的气丝菌素为三氟乙酸盐。
                          实施例1
(R)-3-(9-芴基甲氧基羰基氨基)-5-(4′-庚氧基联苯-4-基)-戊酸的制备
a)4-溴-4′-庚氧基联苯的制备
将K2CO3(4.20g，30.4mmol)和1-溴庚烷(4.14ml，26.4mmol)加到搅拌的在DMF(100ml)中的4-溴-4′-羟基联苯(5.05g，20.2mmol)溶液，然后在80℃下加热混合物。80℃下搅拌20小时后，将混合物冷却至室温。用Et2O(250ml)稀释混合物，然后用饱和盐水(150ml×2)洗涤溶液。用无水Na2SO4干燥有机层，并真空浓缩。从CH2Cl2-石油醚中重结晶残余物得到4-溴-4′-庚氧基联苯(6.21g，88％)，为一种白色固体；
FAB-MS：m/z 347[MH+]。
b)4-甲酰基-4′-庚氧基联苯的制备
将n-BuLi(在己烷中的1.66M溶液，32.3ml，53.6mmol)加到冷(0℃)搅拌的在THF(120ml)中的4-溴-4′-庚氧基联苯(6.21g，17.9mmol)溶液。0℃下将混合物搅拌20分钟，然后于-78℃下加入DMF(4.85ml，62.6mmol)。在-78℃下将混合物再搅拌20分钟，然后用饱和NH4Cl水溶液淬灭。用EtOAc(220ml)稀释混合物，然后依次用饱和NH4Cl水溶液(125ml)和饱和盐水(100ml)进行洗涤。用无水Na2SO4干燥有机层并真空浓缩。用硅胶柱色谱法纯化残余物(EtOAc/己烷，1∶20)得到4-甲酰基-4′-庚氧基联苯(2.21g，42％)，为一种白色无定形粉末。
c)3-(4′-庚氧基联苯-4-基)丙烯酸乙酯的制备
将Ph3P＝CHCOOEt(5.19g，14.9mmol)加到搅拌的在苯(40ml)中的4-甲酰基-4′-庚氧基联苯(2.21g，7.46mmol)溶液，然后在60℃下加热此混合物。60℃下搅拌3小时后，将混合物冷却至室温并真空浓缩。用硅胶柱色谱法纯化残余物(CH2Cl2/己烷，1∶2)得到3-(4′-庚氧基联苯-4-基)丙烯酸乙酯(2.66g，97％)，为一种白色无定形粉末。
FAB-MS：m/z 367[MH+]，
1H NMR：δ0.90(t，J＝6.8Hz，3H)，1.25-1.55(m，8H)，1.35(t，J＝7.1Hz，3H)，1.81(五重峰，J＝6.6Hz，2H)，4.00(t，J＝6.4Hz，2H)，4.28(q，J＝7.1Hz，2H)，6.46(d，J＝16.0Hz，1H)，6.94-7.00(m，2H)，7.50-7.60(m，6H)，7.72(d，J＝16.0Hz，1H)。
d)3-(4′-庚氧基联苯-4-基)丙酸乙酯的制备
将在活性碳上的的钯(Pd约10wt％，1.07g)加到在CH2Cl2(60ml)中的搅拌的3-(4′-庚氧基联苯-4-基)丙烯酸乙酯(2.65g，7.23mmol)溶液，然后将此混合物置于H2气氛下。搅拌2小时后，通过硅藻土垫过滤，用CH2Cl2洗条，将滤液和洗液合并，并真空浓缩得到3-(4′-庚氧基联苯-4-基)丙酸乙酯(粗品，2.74g)，将它不经进一步纯化用于下一步骤。
1H NMR：δ0.90(t，J＝6.6Hz，3H)，1.25(t，J＝7.3Hz，3H)，1.29-1.56(m，8H)，1.75-1.86(m，2H)，2.65(t，J＝7.8Hz，2H)，2.98(t，J＝7.8Hz，2H)，3.99(t，J＝6.6Hz，2H)，4.14(q，J＝7.3Hz，2H)，6.93-6.98(m，2H)，7.25(d，J-8.6Hz，2H)，7.43-7.52(m，4H)。
e)3-(4′-庚氧基联苯-4-基)丙-1-醇
将在THF(30ml)中的3-(4′-庚氧基联苯-4-基)丙酸乙酯(粗品，2.74g)加到冷(0℃)搅拌的在THF(20ml)中的LiAlH4(0.47g，12.4mmol)悬浮液。室温下搅拌30分钟后，用0℃的H2O淬灭混合物。通过硅藻土衬垫过滤混合物并用CH2Cl2洗涤。将滤液和洗液合并，并真空浓缩。用硅胶柱色谱法纯化残余物(EtOAc/己烷，2∶3)得到3-(4′-庚氧基-联苯-4-基)丙-1-醇(2.27g，96％，两步)，为一种白色无定形粉末。
EI-MS：m/z 326[M+]，
1H NMR：δ0.90(t，J＝6.8Hz，3H)，1.21-1.55(m，8H)，1.81(五重峰，J＝6.6Hz，2H)，1.86-2.00(m，2H)，2.75(t，J＝7.3Hz，2H)，3.71(t，J＝6.6Hz，2H)，3.99(t，J＝6.6Hz，2H)，6.92-7.00(m，2H)，7.25(d，J＝7.9Hz，2H)，7.44-7.55(m，4H).
f)3-(4′-庚氧基联苯-4-基)丙醛的制备
将分子筛4A粉末(5.17g)和PCC(5.25g，24.4mmol)加到冷的(0℃)搅拌的在CH2Cl2(60ml)中的3-(4′-庚氧基联苯-4-基)丙-1-醇(2.26g，6.92mmol)溶液。室温下搅拌2小时后，将Et2O(20ml)加到此混合物。将反应混合物转移到短硅胶柱并用CH2Cl2洗脱。真空浓缩洗脱剂得到3-(4′-庚氧基联苯-4-基)丙醛(粗品，2.45g)，此物质不经进一步纯化而用于下一步。
g)3-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊-2-烯酸叔丁酯的制备
将Ph3P＝CHCOOt-Bu(5.21g，13.8mmol)加到搅拌的在苯(150ml)中的3-(4′-庚氧基联苯-4-基)丙醛(粗品，2.45g)溶液，然后在60℃下加热此混合物。60℃下搅拌30分钟后，将此混合物冷却至室温，并真空浓缩。用硅胶柱色谱法纯化残余物(EtOAc/己烷，1∶30)，得到3-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊-2-烯酸叔丁酯(1.95g，67％，2步)，为一种白色无定形粉末。
EI-MS：m/z 422[M+]，
1H NMR：δ0.90(t，J＝6.6Hz，3H)，1.21-1.51(m，8H)，1.49(s，9H)，1.74-1.87(m，2H)，2.47-2.58(m，2H)，2.79(t，J＝7.3Hz，2H)，3.99(t，J＝6.6Hz，2H)，5.81(d.t.，J＝1.5Hz，15.5Hz，1H)，6.87-7.01(m，3H)，7.23(d，J＝7.9Hz，2H)，7.44-7.53(m，4H)。
h)(R)-3-[苄基-((R)-l-苯基乙基)氨基]-5-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊酸叔丁酯的制备
将n-BuLi(在己烷中的1.6M溶液，15.0ml，24.2mmol)加到冷(0℃)搅拌的在THF(40ml)中的(R)-N-苄基-l-苯基乙基胺盐酸盐(3.28g，13.2mmol)的悬浮液。0℃下将混合物搅拌25分钟后，在-78℃下加入在THF(30ml)中的3-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊-2-烯酸叔丁酯(1.94g，4.38mmol)溶液。-78℃下将混合物再搅拌20分钟后，用饱和NH4C1水溶液将反应混合物淬灭，并真空浓缩。用饱和NH4Cl水溶液(200ml)稀释残余物，然后用CH2Cl2(200ml×2)萃取。用无水Na2SO4干燥合并的萃取物并真空浓缩。用硅胶柱色谱法纯化残余物(EtOAc/己烷，1∶40)得到(R)-3-[苄基-((R)-1-苯基乙基)氨基]-5-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊酸叔丁酯(2.83g，数量)，为一种无色油。
EI-MS：m/z 633[M+]，
1H NMR：δ0.91(t，J＝6.6Hz，3H)，1.24-1.55(m，13H)，1.38(s，9H)，1.57-2.04(m，6H)，2.52-2.69(m，1H)，2.97-3.10(m，1H)，3.37-3.49(m，1H)，3.55(ABq，J＝15.0Hz，1H)，3.85(ABq，J＝15.0Hz，1H)，3.88(q，J＝6.9Hz，1H)，4.00(t，J＝6.6Hz，1H)，6.96(d，J＝8.6Hz，2H)，7.16(d，J＝8.2Hz，2H)，7.21-7.53(m，16H)。
i)(R)-3-氨基-5-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊酸叔丁酯的制备
将在碳上的Pd(OH)2(Pd(OH)2约20wt％，1.07g)加到搅拌的在EtOAc(50ml)中的(R)-3-[苄基-((R)-1-苯基乙基)氨基]-5-(4′-庚氧基-联苯-4-基)戊酸叔丁酯(2.82g，4.45mmol)的溶液，然后将混合物置于H2气氛下。搅拌15小时后，通过硅藻土垫片过滤混合物，并用MeOH洗涤。合并滤液和洗液，并真空浓缩得到(R)-3-氨基-5-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊酸叔丁酯(粗品，3.14g)，将其不经进一步纯化用于下一步。
j)(R)-3-(9-芴基甲氧基羰基氨基)-5-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊酸叔丁酯的制备
将Na2CO3(1.19g，11.2mmol)和FmocCl(1.28g，4.95mmol)加到在50％1，4-二噁烷(40ml)中的搅拌的(R)-3-氨基-5-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊酸叔丁酯(粗品，3.14g)的悬浮液。搅拌1小时后，用饱和盐水(100ml)稀释混合物，并用CH2Cl2(100ml×3)萃取。用无水Na2SO4干燥合并的萃取物并真空浓缩得到(R)-3-(9-芴基甲氧基羰基氨基)-5-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊酸叔丁酯(粗品，3.34g)，将其不经进一步纯化用于下一步。
FAB-MS：m/z 668[M++Li]，
1H NMR：δ0.81(t，J＝6.6Hz，3H)，1.15-1.44(m，8H)，1.35(s，9H)，1.62-1.93(m，4H)，2.29-2.68(m，4H)，3.84-4.02(m，1H)，3.88(t，J＝6.6Hz，2H)，4.13(t，J＝6.8Hz，1H)，4.25-4.41(m，2H)，5.27(d，J-9.2Hz，1H)，6.85(d，J-8.6Hz，2H)，7.06-7.42(m，10H)，7.5 1(d，J＝7.3Hz，2H)，7.66(d，J＝7.6Hz，2H)。
k)(R)-3-(9-芴基甲氧基羰基氨基)-5-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊酸的制备
将TFA(20ml)滴加到搅拌的在CH2Cl2(20ml)中的(R)-3-(9-芴基甲氧基羰基-氨基)-5-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊酸叔丁酯(粗品，3.34g)溶液。室温下搅拌1小时后，真空浓缩混合物。用硅胶柱色谱法纯化残余物(MeOH/CH2Cl2，1∶20)得到(R)-3-(9-芴基甲氧基羰基氨基)-5-(4′-庚氧基联苯-4-基)戊酸(2.07g，77％，三步)，为一种白色无定形粉末。
FAB-MS：m/z 606[MH+]，
1H NMR：δ0.88(t，J＝6.6Hz，3H)，1.21-1.51(m，8H)，1.64-2.04(m，2H)，1.78(q，J＝6.6Hz，2H)，2.27-2.78(m，4H)，3.91-4.07(m，1H)，3.96(t，J＝6.6Hz，2H)，4.20(t，J＝6.6Hz，1H)，4.34-4.56(m，2H)，5.09-5.28(m，1H)，6.92(d，J＝8.9Hz，2H)，7.10-7.49(m，10H)，7.57(d，J＝7.3Hz，2H)，7.73(d，J＝7.3Hz，2H)。
根据与上述类似的方法制备用于方法B中的式(IV)的起始化合物[其中，Y为单键或-CH2-]。
                             实施例2
(S)-3-(9H-芴基甲氧基羰基氨基)-N-十一烷基琥珀酰胺酸的制备
a)将N，N-二异丙基乙基胺(64μl，0.36mmol)加到在N，N-二甲基甲酰胺(0.2 ml)中的(S)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基-氨基)琥珀酸(150mg，0.36mmol)、BOP试剂(162mg，0.36mmol)和HOBT水合物(56mg，0.36mmol)溶液中。室温下搅拌30分钟后，加入1-氨基十一烷(79μl，0.37mmol)。室温下将混合物搅拌3小时。用水稀释反应混合物并用Et2O萃取。用水洗涤合并的萃取物，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(采用正己烷∶乙酸乙酯＝3∶1作为洗脱剂)得到(S)-3-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-N-十一烷基琥珀酰胺酸叔丁酯(169mg，82％产率)，为一种无色无定形固体。
FAB-MS(m/z)：565[MH+]，
1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(3H，t，J＝7Hz)，1.24(16H，m)，1.45(11H，m)，2.58(1H，dd，J1＝17Hz，J2＝7Hz)，2.91(1H，dd，J1＝17Hz，J2＝4Hz)，3.23(2H，q，J＝7Hz)，4.22(1H，t，J＝7Hz)，4.42-4.45(3H，m)，5.94(1H，宽d，J＝8Hz)，6.43(1H，宽s)，7.31(2H，t，J＝7Hz)，7.41(2H，t，J＝7Hz)，7.58(2H，d，J＝7Hz)，7.77(2H，d，J＝7Hz)。
b)室温下将在TFA(2ml)中的(S)-3-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-N-十一烷基琥珀酰胺酸叔丁酯(113mg，0.2mmol)溶液搅拌30分钟。反应完全后，真空蒸发除去TFA。硅胶柱色谱法纯化残余物(采用二氯甲烷∶甲醇＝9∶1作为洗脱剂)得到(S)-3-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-N-十一烷基琥珀酰胺酸(101mg，99％产率)，为一种无色无定形固体。
FAB-MS(m/z)：507[MH+]，
1H-NMR(CDCl3)δ：0.87(3H，t，J＝7Hz)，1.23(16H，m)，1.46(2H，m)，2.62-2.80(1H，m)，2.90-3.05(1H，m)，3.21(2H，m)，4.20(1H，t，J＝7Hz)，4.44(2H，d，J＝6Hz)，4.53(1H，宽s)，5.98(1H，m)，6.52(1H，宽s)，7.30(2H，t，J＝7Hz)，7.40(2H，t，J＝7Hz)，7.56(2H，d，J＝7Hz)，7.76(2H，d，J＝7Hz)。
根据与上述类似的方法制备用于方法B中的通式(IV)的起始化合物[其中，Y为CONH-或-CON(CH3)-]。
                           实施例3
N-Boc-气丝菌素3(化合物A)的制备
依次将三乙胺(2.54ml，18.2mmol)、二碳酸二叔丁基酯(13.9ml，60.7mmol)加到在MeOH(1500ml)中的气丝菌素3(10.0g，6.07mmol)溶液中。室温下将混合物搅拌18小时后，真空蒸发溶剂。将残余物溶于MeOH(约10ml)，并将溶液加到二乙醚(1500ml)中。将所得的沉淀过滤并用二乙醚洗涤得到9.9g N-Boc-气丝菌素3(化合物A)，为一种浅黄色固体，在不经进一步纯化的情况下，进一步在下述的实施例中对其进行结构修饰。
                           实施例4
气丝菌素1、2和3的制备
a)固体发酵
将在10％(v/v)甘油溶液中的0.1ml份的冷冻的半知菌亚门NR7379(FERM BP6391)培养物解冻，并接种到500ml锥形烧瓶中，所述锥形烧瓶含有100ml由2％葡萄糖、1％马铃薯淀粉、1.5％甘油、1％烤面包黄豆(Nissin Seiyu)、0.35％酵母提取物(日本Seiyaku)、0.25％ Polypepton(日本Seiyaku)、0.3％NaCl、0.5％CaCO3、0.005％ZnSO4·7H2O、0.0005％CuSO4·5H2O和0.0005％MnSO4-4H2O组成的培养基。不调节培养基的pH。27℃和220rpm下在旋转振荡器上种培养种子培养物7天。将2ml种子培养物转移到含有固体培养基的3升锥形烧瓶，所述的固体培养基由200g压榨的大麦、0.12g酵母提取物(Difco)、0.06g酒石酸钠、0.06gKH2PO4，和120ml水组成。在静态条件和27℃下进行发酵。在发酵240小时产量达到最大，将培养物进行气丝菌素1、2和3分离的过程。
向所得的培养的固体(10kg)中加入甲醇(40L)，并搅拌混合物，然后通过清除过滤得到甲醇萃取物(39L)。将如此得到的甲醇萃取物减压浓缩至干，往残留物(64.8g)加入乙酸乙酯(1L)和水(1L)。搅拌混合物，然后除去乙酸乙酯层。
此外，类似地用乙酸乙酯(1L)将含水层洗涤两次。用正丁醇(1L)洗涤含水层两次。用正丁醇(1L)萃取剩余的含水层三次。合并如此得到的萃取物并减压浓缩至干，将残余物(28.5g)溶于乙腈-0.1％三氟乙酸水溶液(1∶1)的混合物(250ml)。离心除去不溶性物质以后，将如此得到的溶液减压蒸发至干，往残余物加入甲醇(300ml)并搅拌混合物，然后通过清除过滤法得到甲醇溶液(280ml)。然后将如此得到的溶于甲醇的物质(9.3g)进行反相硅胶C18(1L)柱色谱处理。分步采用甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液(2∶8、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3和8∶2)的混合物洗脱。将用甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液(7∶3)依次洗脱的气丝菌素1、2和3真空浓缩至干，分别得到白色粉状气丝菌素3三氟乙酸盐(731mg)和气丝菌素1三氟乙酸盐(747mg)。减压浓缩含有气丝菌素2的部分，并进一步在以下条件下用HPLC进行纯化：柱：Capcell Pak C18(i.d.30×250mm，Shiseido公司，LTD.)；流动相：乙腈-0.1％三氟乙酸水溶液(45∶55)；流速：40ml/分；检测：UV 220nm。将在上述条件下得到的适宜的洗脱剂真空浓缩至干，得到白色粉状气丝菌素2三氟乙酸盐(42mg)。
b)烧瓶发酵
将在10％(v/v)甘油溶液中的2ml份的冷冻的半知菌亚门NR7379(FERM BP6391)培养物解冻，并接种到500ml锥形烧瓶中，所述锥形烧瓶含有100ml由1％葡萄糖、1％燕麦粉、4％番茄酱、0.5％玉米浆(Andokasei)、0.001％FeSO4·7H2O、0.001％MnSO4·H2O、0.0001％CaCl2、0.0002％ZnSO4·7H2O、0.00002％(NH4)6MoO2·4H2O和0.00006％H3BO3组成的培养基。在杀菌前调节培养基的pH至6.8。27℃和220rpm下在旋转振荡器上培养种子培养物3天。将2ml第一种子培养物转移到含有100ml相同培养基的500ml锥形烧瓶，并在相同条件下的旋转振荡器上培养3天。将2ml第二部分种子培养物接种到含有100ml培养基的500ml锥形烧瓶中，所述培养基由8.5％甘油、1％来自柑橘类植物的胶质、0.4％花生粉、0.4％来自不含维生素的乳的酪蛋白、0.4％番茄酱、0.4％玉米浆(Ando kasei)、0.2％甘氨酸和0.2％KH2PO4组成。在灭菌前将培养基的pH调节到7.0。27℃下以220rpm的搅拌进行发酵。培养10天后，产量达到最大，将全部培养物进行气丝菌素1、2和3的分离的过程。
c)广口瓶发酵
将在10％(v/v)甘油溶液中的2ml部分冷冻的半知菌亚门NR7379(FERM BP-6391)的培养物解冻，并接种到含有100ml与上述相同的种子培养基的500ml锥形烧瓶中。27℃下以220rpm将烧瓶振荡3天。将2ml的第一种子培养物转移到含有100ml相同的种子培养基的500ml锥形烧瓶中，并在相同的条件下在旋转振荡器上培养3天。将600ml的第二种子培养物接种到含有30升与上述相同的生产培养基和0.4％disfoam(NissanDisfoam CA-123)的50升广口瓶发酵罐中。27℃和30升/分的换气和400rpm的搅拌条件下进行发酵。在发酵约168小时产量达到最大，并将全部培养物进行气丝菌素1、2和3分离的过程。
气丝菌素1
1)外观：
白色固体
2)分子量(FAB-MS法)：
m/z 1547(M+H)+
3)分子式：C72H118N14O23
4)高分辨率质谱(关于M+H)+：
实测值：1547.8568
计算C72H119N14O23：1547.8572
5)UV光谱(图1)：在甲醇中：
λ(ε)最大(在MeOH中)：225±5(10600sh)、270±5(2000)，278±5(2100)
λ(ε)最大(在N/10 NaOH-MeOH中)：240±5(7700)，268±5(1800)，298±5(1800)
6)IR光谱(KBr)(图2)：
主要吸收波数(cm-1)如下：
3379，2927，2855，1740，1660，1535，1453，1203，1139，8377)1H-NMR光谱(图3)：
400MHz，在CD3OD中
8)13C-NMR光谱(图4)：
100MHz，在CD3OD中
9)溶解度：
可溶于：水、甲醇、二甲基亚砜
10)颜色反应：
阳性：茚三酮、茴香醛-硫酸、碘蒸气、香草醛-硫酸、Rydon-Smith试剂、磷钼酸
阴性：Sakaguchi试剂、溴甲酚绿，2，4-二硝基苯基肼-硫酸
11)薄层色谱(TLC)：载体         溶剂                                     Rf硅胶F254*1  n-BuOH∶丙酮∶AcOH∶H2O(4∶5∶1∶1)     0.74
         MeOH∶H2O(95∶5)                        0.12
*1E.Merck AG.，德国
12)高效液相色谱：
载体：Capcell Pak C18凝胶S120A，4.6×250mm(同Shiseido有限公司制造)
流动相：乙腈∶0.05％三氟乙酸水溶液＝1∶1
流速：1ml/分
Rt＝12.1±0.5
13)氨基酸分析：
120℃下在6N HCl中将气丝菌素1加热24小时，然后进行氨基酸分析以检测苏氨酸、3单元的别苏氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、酪氨酸、鸟氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、3-羟基谷酰胺。
气丝菌素2
1)外观：
白色固体
2)分子量(FAB-MS法)：
m/z 1549(M+H)+
3)分子式：C71H116N14O24
4)高分辨率质谱(关于M+H)+：
实测值：1549.8384
计算值C71H117N14O24：1549.8365
5)UV光谱(图5)：在甲醇中：
λ(ε)最大(在MeOH中)：225±5(10200sh)、275±5(1900)、278±5(2000)
λ(ε)最大(在N/10 NaOH-MeOH中)：240±5(7700)、293±5(2000)
6)IR光谱(KBr)(图6)：
主要吸收波数(cm-1)如下：
3323、2928、2856、1740、1670、1531、1450、1203、1137、8377)1H-NMR光谱(图7)：
400MHz，在CD3OD中
8)13C-NMR光谱(图8)：
100MHz，在CD3OD中
9)溶解度：
可溶于：水、甲醇、二甲基亚砜
10)颜色反应：
阳性：茚三酮、茴香醛-硫酸、碘蒸气、香草醛-硫酸、Rydon-Smith试剂、磷钼酸
阴性：Sakaguchi试剂、溴甲酚绿、2，4-二硝基苯基肼-硫酸
11)薄层色谱(TLC)：
载体                      溶剂                        Rf硅胶F254*1  n-BuOH∶丙酮∶AcOH∶H2O(4∶5∶1∶1)         0.29
                 MeOH∶H2O(95∶5)                    0.15
*1E.Merck AG.，德国
12)高效液相色谱：
载体：Capcell Pak C18凝胶S120A，4.6×250mm(由Shiseido有限公司制造)
流动相：乙腈∶0.05％三氟乙酸水溶液＝1∶1
流速：1ml/分
Rt＝9.9±0.5
13)氨基酸分析：
120℃下在6N HCl中将气丝菌素2加热24小时，然后进行氨基酸分析以检测苏氨酸、3单元的别苏氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、3-羟基酪氨酸(DOPA)、鸟氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、3-羟基谷酰胺。
气丝菌素3
1)外观：
白色固体
2)分子量(FAB-MS法)：
m/z 1533(M+H)+
3)分子式：C71H116N14O23
4)UV光谱：在甲醇中：
λ(ε)最大(在MeOH中)：225±5(11000sh)、275±5(2000)、280±5(1900)
λ(ε)最大(在N/10 NaOH-MeOH中)：243±5(7800)、295±5(1800)
5)IR光谱(KBr)：
主要吸收波数(cm-1)如下：
3334、2928、2852、1742、1662、1520、1449、1202、1136、836
6)溶解度：
可溶于：水、甲醇、二甲基亚砜
7)颜色反应：
阳性：茚三酮，茴香醛-硫酸，碘蒸气，香草醛-硫酸、Rydon-Smith试剂、磷钼酸
阴性：Sakaguchi试剂、溴甲酚绿、2，4-二硝基苯基肼-硫酸
8)薄层色谱(TLC)：
载体                       溶剂                        Rf硅胶F254*1   n-BuOH∶丙酮∶AcOH∶H2O(4∶5∶1∶1)         0.26
                  MeOH∶H2O(95∶5)                    0.09
*1E.Merck AG.，德国
9)高效液相色谱：
载体：Capcell Pak C18凝胶S120A，4.6×250mm(由Shiseido有限公司制造)
流动相：乙腈∶0.05％三氟乙酸水溶液＝1∶1
流速：1ml/分
Rt＝9.1±0.5
10)氨基酸分析：
120℃下在6N HCl中将气丝菌素3加热24小时，然后进行氨基酸分析以检测苏氨酸、3单元的别苏氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、酪氨酸、鸟氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、3-羟基谷酰胺。
                          实施例5
化合物(IX)的制备
1)烧瓶发酵
将在10％(v/v)甘油溶液中的2ml份的冷冻的半知菌亚门NR7379(FERM BP6391)培养物解冻，并接种到500ml锥形烧瓶中，所述锥形烧瓶含有100ml由1％葡萄糖、1％燕麦粉、4％番茄酱、0.5％玉米浆(Andokasei)、0.001％FeSO4·7H2O、0.001％MnSO4·4H2O、0.0001％ CaCl2、0.0002％ZnSO4·7H2O、0.00002％(NH4)6MoO2·4H2O和0.00006％H3BO3组成的培养基。在杀菌前将调节培养基的pH至6.8。27℃和220rpm下在旋转振荡器上种培养种子培养物4天。将2ml种子培养物转移到含有100ml培养基的500ml锥形烧瓶，所述培养基由8.5％甘油、1％来自柑橘类植物的胶质、2％花生粉、0.4％来自不含维生素的乳的酪蛋白、0.4％番茄酱、0.4％甘氨酸和0.2％KH2PO4组成。在灭菌前将培养基的pH调节到7.0。27℃下以220rpm的搅拌进行发酵。培养14天后，产量达到最大，将全部培养物进行分离处理。
往得到的全部培养肉汤(1.9L)加入正丁醇(2L)并搅拌混合物。将如此得到的萃取物减压浓缩至干。并向残余物加入己烷(500ml)和甲醇(500ml)，搅拌如此得到的混合物，然后除去己烷层。减压除去甲醇之后，得到的残余物用己烷和乙酸乙酯的混合物进行洗涤(1∶1；200ml，两次)，并减压干燥。
往残余物(3.9g)加入水(20ml)，搅拌混合物，然后离心得到水溶液。将如此得到的溶液进行反相硅胶C18(200L)柱色谱处理。首先用0.1％三氟乙酸水溶液洗脱柱，然后用甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液(1∶9，3∶7，5∶5，6∶4，7∶3，和8∶2)的混合物分步洗脱。将用甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液(7∶3)洗脱的化合物(IX)合并，用1N氢氧化钠水溶液中和该溶液，然后真空浓缩至干。往如此得到的残余物加入水(10ml)和正丁醇(10ml)，并搅拌混合物。将如此得到的萃取物减压浓缩得到化合物(IX)(96.9mg)，为一种白色粉末。再进行纯化得到的化合物(IX)的光谱学由以下条件下的HPLC得到：柱：Capcell Pak C18 UG80(i.d.20×250mm，Shiseido有限公司)；流动相：0.05％三氟乙酸/乙腈-0.05％三氟乙酸/水(38∶62)；流速：22.86ml/分；检测：UV210nm。将上述条件下得到的适宜的洗脱物真空浓缩至干，得到白色粉末状化合物(IX)三氟乙酸盐。
c)广口瓶发酵
将在10％(v/v)甘油溶液中的2ml部分冷冻的半知菌亚门NR7379(FERM BP-6391)的培养物解冻，并接种到含有100ml与上述相同的培养基的500ml锥形烧瓶中。27℃下以220rpm将烧瓶振荡3天。将2ml的第一种子培养物转移到含有100ml相同的种子培养基的500ml锥形烧瓶中，并在相同的条件下在旋转振荡器上培养3天。将600ml的第二种子培养物接种到含有30升与上述相同的生产培养基和0.4％ disfoam(NissanDisfoam CA-123)的50升广口瓶发酵罐中。27℃和30升/分的换气和400rpm的搅拌条件下进行发酵。在发酵大约278小时产量达到最大，并将全部培养物进行化合物(IX)的分离过程。
化合物(IX)
1)外观：
白色固体
2)分子量(FAB-MS法)：
m/z 1317(M+H)+
3)分子式：
C59H104N12O21
4)高分辨率质谱(关于M+H)+：
实测值：1317.7555
计算C59H105N12O21：1317.7517
5)UV光谱：在甲醇中：
λ(ε)最大(在MeOH中)：结束吸收
6)IR光谱(KBr)(图9)：
主要吸收波数(cm-1)如下：
3450、2928、1665、1520、1450、1225、1135
7)1H-NMR光谱(图10)：
500MHz，在DMSO-d6中
8)13C-NMR光谱(图11)：
125MHz，在DMSO-d6中
9)溶解度：
可溶于：水，甲醇、二甲基亚砜
10)颜色反应：
阳性：茚三酮、茴香醛硫酸、碘蒸气、香草醛-硫酸、Rydon-Smith试剂、磷钼酸
阴性：Sakaguchi试剂、溴甲酚绿、2，4-二硝基苯基肼-硫酸
11)高效液相色谱：
载体：Capcell Pak CI8 UG80A，4.6×250mm(由Shiseido有限公司制造LTD.)
流动相：0.05％三氟乙酸/乙腈∶0.05％三氟乙酸/水＝38∶62
流速：1ml/分
Rt＝7.7±0.5
                            实施例6
制备化合物(IX)的鸟氨酸残基的N-Boc衍生物(N(orn)-Boc-IX)：式(XII：R6＝Boc)的化合物
室温下将三乙胺(3μl)和在二噁烷中的0.1M的叔丁基N-琥珀酰亚胺基碳酸酯(0.0073μl，0.0073mmol)溶液加到实施例5中得到的化合物(IX)(10.4mg，0.0073mmol)的溶液中。搅拌1.5小时后，用乙酸酸化混合物，并减压蒸发。通过HPLC纯化残余物得到N(orn)-Boc-IX，为一种无色无定形物(4.8mg，45％产率)；
HPLC(Rt)18.0分(柱：Soken-ODS，20×250mm，流速：9ml/分，洗脱剂：H2O∶CH3CN＝梯度1％乙酸)；FAB-MS[M+Na]+1440。
                           实施例7
制备化合物(IX)的缬氨酸残基的N-Boc衍生物(N(val)-Boc-IX)：式(X：R7＝Boc)的化合物
0℃下将在实施例5中得到的化合物(IX)(15.0mg，0.0105mol)、二碳酸二叔丁基酯(0.073M，在甲醇溶液中，0.20ml，0.015mmol)和三乙胺(7.8μl，在MeOH(3ml)中)的混合物搅拌24小时。用正己烷洗涤混合物，并减压蒸发。通过反相HPLC法纯化残余物得到(N(val)-Boc-IX)，为一种无色无定形物(1.0mg，6％产率)；
HPLC(Rt)16.0分(柱：Soken-ODS，20×250mm，流速：9ml/分，洗脱剂：H2O∶CH3CN＝梯度1％乙酸)；FAB-MS[M+H]+1418。
                           实施例8
制备气丝菌素33
将BOP试剂(21.3mg，0.048mmol)、HOBT水合物(7.5mg，0.049mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.0095ml，0.055mmol)加到在DMF(0.5ml)中的搅拌的(R)-3-(9-芴基甲氧基羰基氨基)-7-(4-戊氧基苯基)庚酸(25.5mg，0.048mmol)溶液中。室温下将混合物搅拌1小时后，将在DMF(0.6ml)中的化合物B[＝式(III)的直链肽，其中，R2和R3为氢，R5为氨基甲酰基，R7为叔丁氧基羰基，它是根据在WO 96/30399中所述的方法由气丝菌素1或3制备的](50.7mg，0.036mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.0095ml，0.055mmol)溶液加到此反应混合物中。室温下将混合物搅拌2.5小时后，加入哌啶(0.20ml)，并在室温下再搅拌混合物2小时。真空蒸发溶剂。用制备反相HPLC(柱C，流速：9ml/分；梯度：洗脱剂：1％ AcOH-H2O∶1％AcOH-CH3CN＝80∶20→2∶98)纯化残余物。合并适宜的级分，冷冻并冻干得到49.5mg直链肽C，一种环化前体，为一种白色无定形固体。
将HOBT；水合物(11.3mg，0.074mmol)、N，N-二异丙基乙胺(0.018ml，0.105mmol)和在DMF(4ml)中的BOP试剂(33.1mg，0.075mmol)溶液加到上述在DMF(27ml)中得到的直链肽C(49.5mg，0.029mmol)的搅拌的溶液中。室温下将混合物搅拌3小时后，真空蒸发溶剂。
将以上得到的残余物溶于TFA(6ml)，并在0℃下搅拌30分钟，然后真空蒸发TFA。用制备反相HPLC法纯化残余物，详细的条件如下所示。合并适宜的级分，冷冻并冻干得到19.4mg气丝菌素33，为一种白色无定形固体。
HPLC(Rt)：12.4分(柱C，流速：9ml/分；洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝61∶39)；FAB-MS(m/z)：1568[MH+]。
根据在实施例8中所述的类似的方法，使用对应的式(IV)表示的构件，制备以下的气丝菌素34-38、40-53、64-73和89-95、97-99和123。
            FAB-MS         HPLC              分析条件化合物名     m/z：[MH+]  保留时间(分)  (柱)(流速；洗脱剂的比率*)气丝菌素34       1568          14.1          (C)(9ml/分；60/40)气丝菌素35       1568          13.2          (C)(9ml/分；57/43)气丝菌素36       1610          21.9          (C)(9ml/分；55/45)气丝菌素37       1638          44.1          (C)(9ml/分；54/46)气丝菌素38       1610          28.1          (C)(9ml/分；58/42)气丝菌素40       1602          16.8          (F)(10ml/分；57/43)气丝菌素41       1616          20.6          (C)(9ml/分；60/40)气丝菌素42       1630          16.8          (F)(10ml/分；62/38)气丝菌素43       1644          29.2          (C)(9ml/分；57/43)气丝菌素44       1658          35.5          (F)(10ml/分；50/50)气丝菌素45       1630          24.7          (C)(9ml/分；59/41)气丝菌素46       1664          18.7          (C)(9ml/分；59/41)气丝菌素47       1594          22.9          (C)(9ml/分；54/46)气丝菌素48       1576          24.4          (F)(10ml/分；58/42)气丝菌素49       1590          24.2          (C)(9ml/分；65/35)气丝菌素50       1604          48.9          (F)(10ml/分；55/45)气丝菌素51       1618          40.4          (F)(9ml/分；60/40)气丝菌素52       1632          32.5          (F)(10ml/分；50/50)气丝菌素53       1646          27.0          (C)(9ml/分；54/46)气丝菌素64       1547          15.5          (B)(4ml/分；65/35)气丝菌素65       1575          15.5          (C)(9ml/分；55/45)气丝菌素66       1603          16.6          (C)(9ml/分；52/48)气丝菌素67       1587          19.9          (C)(9ml/分；59/41)气丝菌素68       1587          19.6          (C)(9ml/分；59/41)气丝菌素69       1589          21.8          (C)(9ml/分；58/42)气丝菌素70       1617          21.6          (C)(9ml/分；53/47)气丝菌素71       1746          30.0          (C)(9ml/分；64/36)气丝菌素72       1673          22.6          (C)(9ml/分；57/43)气丝菌素73       1721          20.2          (C)(9ml/分；55/45)气丝菌素89       1630          22.1          (F)(10ml/分；55/45)气丝菌素90       1658          24.9          (F)(10ml/分；50/50)气丝菌素91       1670          26.7          (F)(10ml/分；50/50)气丝菌素92       1642          26.0          (F)(10ml/分；55/45)气丝菌素93       1650          21.4          (F)(10ml/分；57/43)气丝菌素94       1658          30.8          (F)(10ml/分；52/48)气丝菌素95       1574          28.3          (C)(9ml/分；57/43)气丝菌素97       1740          44.7          (F)(10ml/分；57/43)气丝菌素98       1656          30.0          (F)(10ml/分；62/38)气丝菌素99       1644          16.9          (F)(10ml/分；53/47)气丝菌素123      1630          20.7          (F)(10ml/分；56/44)
*0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈的比率
                             实施例9
制备气丝菌素16
(a)将四硝基甲烷(0.365ml，3.05mmol)加到在吡啶(2.5ml)中的化合物A(在参照实施例3中所述)(1g，0.61mmol)的搅拌溶液中。室温下搅拌4小时后，真空浓缩反应混合物。用反相HPLC(Lobar RP18，10ml/分，0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝50∶50 33：66 0.05％TFA)纯化暗棕色残余物。合并适宜的级分，冷冻并冻干得到711mg粗制的化合物A的硝基衍生物，为一种灰黄色无定形固体。
(b)0℃下将以上得到的粗产物(12mg，0.0071mmol)和TFA(0.5ml)的混合物搅拌30分钟。在无水氮气流下蒸发TFA。采用制备反相HPLC纯化黄色残余物。合并适宜的级分，冷冻并冻干得到8mg气丝菌素16-TFA盐，为灰黄色无定形固体。
HPLC(Rt)：15.5分(柱B，流速：4ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝55∶45)；FAB-MS(m/z).1578[MH+]。
根据在实施例9中所述的类似的方法，使用在实施例8中得到的气丝菌素作为原料，制备以下的气丝菌素39、54、55和77。
            FAB-MS        HPLC              分析条件化合物名     m/z：[MH+] 保留时间(分)  (柱)(流速；洗脱剂的比率*)气丝菌素39       1577         13.2          (C)(9ml/分；55/45)气丝菌素54       1661         14.2          (C)(9ml/分；57/43)气丝菌素55       1689         27.8          (C)(9ml/分；55/45)气丝菌素77       1648         25.0          (C)(9ml/分；53/47)
*0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈的比率
                           实施例10
制备气丝菌素17
(a)将在木炭(20mg)上的10％钯加到在MeOH(5ml)中的在实施例9(a)中得到的粗制的化合物A的硝基衍生物(55mg，0.033mmol)溶液中，用氢气填充反应容器。室温下搅拌13.5小时后，通过膜过滤器(孔尺寸：0.2μm)过滤混合物，并将溶剂蒸发得到52mg粗制的气丝菌素3的氨基衍生物，为棕色无定形物，将其不经进一步纯化用于下一步骤。
(b)0℃下，将上述得到的粗的化合物A的氨基衍生物(在参照实施例3中所述)(3.4mg，0.0021mmol)和TFA(0.2ml)的混合物搅拌30分钟。在无水氮气流下蒸发TFA。用制备反相HPLC纯化棕色残余物。合并适宜的级分、冷冻和冻干得到1.3mg气丝菌素17，为一种无色无定形固体。
HPLC(Rt)：12.8分(柱A，流速：1分/ml，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝59∶41)；FAB-MS(m/z)：1548[MH+]。
根据与实施例10所述的类似方法，使用在实施例9中得到的气丝菌素作为原料制备以下的气丝菌素29、56和78。
          FAB-MS         HPLC              分析条件化合物名   m/z：[MH+]  保留时间(分)  (柱)(流速；洗脱剂的比率*)气丝菌素29     1606          31.0          (C)(9ml/分；60/40)气丝菌素56     1659          15.1          (C)(9ml/分；57/43)气丝菌素78     1618          16.8          (C)(9ml/分；57/43)
*0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈的比率
                          实施例11
制备气丝菌素18
(a)相继将Boc-Gly-OH(18mg，0.10mmol)、WSCI(30mg，0.15mmol)和HOBT水合物(24mg，0.15mmol)加到粗制的在甲醇(0.05ml)中的实施例(10a)中得到的化合物A的氨基衍生物(1.7mg，0.001mmol)和吡啶(0.025ml)的溶液中。室温下将混合物搅拌15小时后，通过无水氮气流除去溶剂。
(b)将以上得到的粗产物溶于TFA(0.1ml)并在0℃下搅拌30分钟。用无水氮气流除去TFA。用制备反相HPLC纯化残余物。合并适宜的级分，冷冻并冻干得到0.54mg气丝菌素18，为一种无色无定形固体。
HPLC(Rt)：8.9分(柱B，流速：4ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝57∶43)；FAB-MS(m/z)：1605[MH+]。
根据与实施例11所述的类似方法，使用相应的酰化剂和在实施例10中得到的气丝菌素作为原料制备以下的气丝菌素19-23、30、57-62、79和81。
          FAB-MS        HPLC              分析条件化合物名   m/z：[MH+] 保留时间(分)  (柱)(流速；洗脱剂的比率*)气丝菌素19     1590         17.5          (A)(1ml/分；57/43)气丝菌素20     1619         6.0           (B)(4ml/分；55/45)气丝菌素21     1663         18.0          (C)(9ml/分；60/40)气丝菌素22     1605         12.5          (A)(1ml/分；55/45)气丝菌素23     1620         23.9          (C)(9ml/分；55/45)气丝菌素30     1676         24.6          (C)(9ml/分；61/39)气丝菌素57     1701         21.2          (C)(9ml/分；56/44)气丝菌素58     1730         23.4          (C)(9ml/分；55/45)气丝菌素59     1716         13.7          (C)(9ml/分；58/42)气丝菌素60     1730         16.3          (C)(9ml/分；55/45)气丝菌素61     1730         39.1          (C)(9ml/分；47/53)气丝菌素62     1730         15.8          (C)(9ml/分；55/45)气丝菌素79     1689         36.1          (C)(9ml/分；57/43)气丝菌素81     1675         24.4          (C)(9ml/分；60/40)
*0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈的比率
实施例12
制备气丝菌素12
室温下将在MeOH(100μl)中的氰基硼氢化钠(7.5mg，0.119mmol)加到在MeOH(1.0ml)中的气丝菌素5(7.5mg，0.0048mmol)、37％福尔马林(150μl)和乙酸(50μl)的溶液中，并在室温下将混合物搅拌7小时。真空蒸发溶剂，将残余物溶于正丁醇，并用稀释的盐酸和水依次洗涤。真空蒸发有机层。用制备反相HPLC法纯化残余物，详细条件如下所示。合并适宜的级分、冷冻并冻干得到5.4mg气丝菌素12，为一种无色无定形固体。
HPLC(Rt)：7.1分(柱B，流速：4ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝50∶50)；FAB-MS(m/z)：1575[MH+].
根据与实施例12所述的类似方法制备以下的气丝菌素13、25、30和75。
           FAB-MS        HPLC              分析条件化合物名    m/z：[MH+] 保留时间(分)  (柱)(流速；洗脱剂的比率*)气丝菌素13      1561         13.7          (B)(4ml/分；55/45)气丝菌素25      1607         23.5          (C)(4ml/分；55/45)气丝菌素30      1676         24.6          (C)(9ml/分；61/39)气丝菌素75      1631         24.2          (C)(9ml/分；55/45)
*0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈的比率
                          实施例13
制备气丝菌素111
(a)室温下将在MeOH(5ml)中的氰基硼氢化钠(410mg，6.52mmol)加到在MeOH(45ml)中的气丝菌素3(500mg，0.326mmol)、(2-氧代乙基)-氨基甲酸叔丁酯*(1.66g，10.4mmol)和乙酸(5ml)的溶液中。室温下将混合物搅拌18小时。然后真空蒸发溶剂，将残余物溶于正丁醇并用稀释的盐酸和水依次洗涤。真空蒸发有机层。
将粗产物不经进一步纯化用于下一步。
*CAS No.89711-08-0
(b)0℃下将在TFA(20ml)中的以上得到的粗产物的溶液搅拌30分钟，真空蒸发TFA。用制备反相HPLC法纯化残余物，详细条件如以下所示。合并适宜的级分，冷冻并冻干得到253mg气丝菌素111，为一种无色无定形固体.
HPLC(Rt)18.6分(柱F，流速：10ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝57∶43)；FAB-MS(m/z)：1619[M+H]+。
根据与实施例13所述的类似方法制备以下的气丝菌素100、112、114和115。
            FAB-MS        HPLC              分析条件化合物名     m/z：[MH+] 保留时间(分)  (柱)(流速；洗脱剂的比率*)气丝菌素100      1730         14.8          (F)(10ml/分；56/44)气丝菌素112      1647         11.8          (F)(10ml/分；57/43)气丝菌素114      1759         23.1          (C)(10ml/分；60/40)气丝菌素115      1633         19.6          (F)(10ml/分；59/41)
*0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈的比率
                          实施例14
制备气丝菌素120
室温下将乙腈(214μl、3.27mmol)加到在MeOH(10ml)中的气丝菌素3(500mg，0.326mmol)和三乙胺(682μl，4.89mmol)的溶液中，并在室温下将混合物搅拌20小时。真空蒸发溶剂后，将残余物溶于正丁醇，并用稀释的盐酸和水依次洗涤。真空蒸发有机层。用制备反相HPLC法纯化残余物，详细条件如下所示。合并适宜的级分，冷冻并冻干得到207mg气丝菌素120，为一种无色无定形固体。
HPLC(Rt)27.5分(柱F，流速：10ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝53∶47)；FAB-MS(m/z)：1586[M+H]+。
                          实施例15
制备气丝菌素113
将在木炭(20mg)上的10％钯加到在MeOH(5ml)中的气丝菌素(100mg，0.063mmol)的混合物中，用氢气填充反应容器。室温下搅拌20小时后，通过膜过滤器(孔尺寸：0.2μm)过滤混合物，并真空蒸发溶剂。用制备反相HPLC法纯化残余物，详细条件如以下所示。合并适宜的级分，冷冻并冻干得到87.2mg气丝菌素113，为一种无色无定形固体。
HPLC(Rt)23.0分(柱F，流速：10ml/分，流动相：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝57∶43)；FAB-MS(m/z)：1590[M+H]+。
根据与在实施例14-15中所述的类似的方法制备气丝菌素129，然后用三氟乙酸除去鸟氨酸残余物的Boc基团。在这种情况下，原料为在与实施例16类似的方法得到的气丝菌素106的(D)鸟氨酸部分的Nδ-Boc衍生物。
           FAB-MS          HPLC              分析条件化合物名    m/z：[MH+]   保留时间(分)  (柱)(流速；洗脱剂的比率*)气丝菌素129     1705           33.8          (F)(10ml/分；62/38)
*0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈的比率
                          实施例16
制备气丝菌素14
将在CH3OH(3ml)中的气丝菌素3(100mg，0.065mmol)的溶液加到在CH3CN(10ml)中的N-Boc-肌氨酸(123mg，0.65mmol)、WSC-HCL(240mg，1.25mmol)和DMAP(150mg，1.23mmol)溶液中。室温下将混合物搅拌15小时，然后真空浓缩。将残余物溶于n-BuOH(10ml)，并用H2O洗涤(5ml×2，用1N HCl调节pH3-4)。真空浓缩n-BuOH层并在0℃下将残余物溶于TFA(5ml)。室温下将溶液搅拌1小时，真空蒸发TFA。用制备反相HPLC纯化残余物得到40.8mg(39％产率)气丝菌素14，为一种白色无定形粉末。
HPLC(Rt)：23.1分(柱C，流速：9ml/分，0.05％三氟乙酸水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝60∶40)；FAB-MS(m/z)：1605[MH+].
根据与实施例16所述的类似方法，使用对应的酸作为构件制备以下的气丝菌素15、21、26-29和101-107、109、110、118、130和131。
           FAB-MS        HPLC               分析条件化合物名    m/z：[MH+] 保留时间(分)  (柱)(流速；洗脱剂的比率*)气丝菌素15      1631         24.0          (C)(9ml/分；57/43)气丝菌素21      1663         18.0          (C)(9ml/分；60/40)气丝菌素26      1650         19.9          (C)(9ml/分；50/50)气丝菌素27      1676         22.5          (C)(9ml/分；55/45)气丝菌素28      1636         20.9          (C)(9ml/分；50/50)气丝菌素29      1606         31.0          (C)(9ml/分；60/40)气丝菌素101     1647         16.5          (F)(10ml/分；56/44)气丝菌素102     1661         16.3          (F)(10ml/分；56/44)气丝菌素103     1689         13.4          (F)(10ml/分；54/46)气丝菌素104     1633         22.6          (F)(10ml/分；58/42)气丝菌素105     1619         29.2          (F)(10ml/分；52/38)气丝菌素106     1647         17.3          (F)(10ml/分；56/44)气丝菌素107     1661         36.5          (F)(10ml/分；60/40)气丝菌素109     1633         26.1          (F)(10ml/分；58/42)气丝菌素110     1619         28.8          (F)(9ml/分；58/42)气丝菌素118     1685         15.2          (F)(10ml/分；51/49)气丝菌素130     1847         16.0          (F)(10ml/分；63/37)气丝菌素131     1818         21.1          (F)(10ml/分；63/37)
*0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈的比率
                          实施例17
制备气丝菌素74
室温下将在MeOH(1ml)中的气丝菌素66(20mg，0.012mmol)、3，5-二甲基吡唑-1-甲脒硝酸酯(13mg，0.064mmol)和三乙胺(18ml，0.13mmol)的混合物搅拌15小时。蒸发溶剂后，用制备反相HPLC法纯化粗残余物，详细条件如以下所示。合并适宜的级分，冷冻并冻干得到10.2mg气丝菌素74，为一种无色无定形固体.
HPLC(Rt)21.2分(柱C，流速：9ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝54∶46)；FAB-MS(m/z)：1645[MH+]。
根据与在实施例17中所述的类似的方法，分别使用气丝菌素3和111作为原料制备以下的气丝菌素4和116。
          FAB-MS        HPLC              分析条件化合物名   m/z：[MH+] 保留时间(分)  (柱)(流速；洗脱剂的比率*)气丝菌素4      1576         7.6           (D)(1ml/分；50/50)气丝菌素116    1703         14.9          (F)(10ml/分；57/43)
*0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈的比率
                              实施例18
制备气丝菌素5
(a)室温下将碘甲烷(8μl，0.129mmol)加到在DMF(1ml)中的在参照实施例3得到的化合物A(10mg，0.0061mmol)和碳酸钾(10mg，0.072mmol)溶液中，并在室温下将混合物搅拌43小时。用硅藻土垫片过滤混合物，然后真空蒸发滤液。将残余物溶于正丁醇并用稀盐酸和水依次洗涤。真空蒸发有机层。将粗残余物不经进一步纯化用于下一步骤。
(b)0℃下将在TFA(1.0ml)中的以上得到的粗残余物的溶液搅拌30分钟。真空蒸发TFA。用制备反相HPLC法纯化残余物，详细条件如以下所示。合并适宜的级分，冷却并冻干得到3.8mg气丝菌素5，为一种无色无定形固体。
HPLC(Rt)：14.5分(柱B，流速：4ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝55∶45)；FAB-MS(m/z)：1547[MH+]。
根据与实施例18所述的类似方法，使用对应的烷基化试剂制备以下的气丝菌素6-10和76。
          FAB-MS        HPLC              分析条件化合物名   m/z：[MH+] 保留时间(分)  (柱)(流速；洗脱剂的比率*)气丝菌素6      1561         16.0          (A)(1ml/分；55/45)气丝菌素7      1573         8.4           (A)(1ml/分；50/50)气丝菌素8      1589         26.1          (B)(4.7ml/分；58/42).气丝菌素9      1591         38.5          (B)(4ml/分；60/40)气丝菌素10     1590         6.7           (A)(1ml/分；53/47)气丝菌素76     1617         26.0          (C)(9ml/分；53/47)
*0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈的比率
                          实施例19
制备气丝菌素24
(a)0℃下将在参照实施例3中得到的化合物A(100mg)、碘化钠(29.5mg，0.197mmol)和在甲醇(2ml)中的次氯酸钠溶液(250ul)的冷混合物搅拌2小时。用饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭反应混合物，用1N HCl酸化，并用正丁醇萃取。真空蒸发合并的有机萃取物。此时仍存在原料。为了完成碘化反应，重复相同的实验过程。相同处理之后，用制备反相HPLC法纯化残余物得到化合物A的碘衍生物，为一种无色固体(54mg，50％产率)。
(b)70℃下将以上得到的化合物A的碘衍生物(23.8mg)、丙烯酸甲酯(16μl)、三乙胺(40μl)和乙酸钯(2.1mg)在乙腈(250μl)和N，N-二甲基甲酰胺(750μl)中的混合物加热28小时。使所得的混合物通过C-18短柱并在0℃下用三氟乙酸(1ml)处理残余物1小时。真空干燥所得的混合物。用制备反相HPLC法纯化残余物得到气丝菌素24，为一种无色固体(8.8mg，40％产率)。
HPLC(Rt)：86.3分(柱F，流速：9ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝58∶42)；FAB-MS(m/z)：1617[MH+]。
                           实施例20
制备气丝菌素96
60℃和一氧化碳气氛下将在实施例19(a)中得到的化合A的碘衍生物(30mg)、乙酸钾(6.9mg)和四(三苯基膦氢)钯(4.6mg)在脱气二甲基亚砜(2ml)中的混合物加热20小时。使所得的混合物通过C-18反相短柱，并在0℃下用三氟乙酸处理残余物1小时。减压蒸发所得的混合物。用制备反相HPLC法纯化残余物得到气丝菌素96，为一种无色固体(2.3mg，8％产率)。
HPLC(Rt)：23.2分(柱F，流速：10ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝52.2∶47.8)；FAB-MS(m/z)：1677[MH+]。
                            实施例21
制备气丝菌素32
(a)室温下将在参照实施例3中得到的化合物A(20mg)和(甲氧基羰基氨磺酰基)三乙基铵氢氧化物(26.5mg，0.108mm0l)在乙腈(3ml)中的混合物搅拌8小时。用1N HCl将反应混合物酸化并真空蒸发。用正丁醇萃取残余物并真空蒸发萃取物。
(b)0℃下用三氟乙酸处理粗产物1小时。真空蒸发TFA。用制备反相HPLC纯化残余物得到气丝菌素32，为一无色固体(2.0mg，10％产率)。
HPLC(Rt)：42.9分(柱B，流速：4ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝55∶45)；FAB-MS(m/z)：1516[MH+]。
                           实施例22
制备气丝菌素31
(a)-10℃下将硼烷-二甲基硫醚配合物(25ml)加到在四氢呋喃(5ml)中的实施例3中得到的化合物A(25.7mg)的冷溶液中。-10℃下搅拌5小时后，用2N HCl淬灭反应混合物，并用正丁醇萃取。真空蒸发合并的萃取物。
(b)0℃下用三氟乙酸将粗产物处理1小时。减压蒸发THF。用制备反相HPLC纯化残余物得到气丝菌素31，为无色固体(3.7mg，15％产率)。
HPLC(Rt)：25.1分(柱B，流速：4ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝62∶38)；FAB-MS(m/z)：1519[MH+]。
                            实施例23
制备气丝菌素121
将碘甲烷(0.010ml)加到气丝菌素3(50mg)在DMF(1ml)和三乙胺(0.025ml)中的溶液中。室温下搅拌16小时后，再往混合物中加入三乙胺(0.025ml)和碘甲烷(0.05ml)，并在室温下搅拌24小时。混合物的LCMS分析表明＞90％转化成目标化合物。用氮气流吹扫溶剂并用制备反相HPLC纯化残余物，详细条件如以下所示。合并适宜的级分，冷却并冻干得到23mg气丝菌素121，为一种无色无定形固体。
HPLC(Rt)：20.5分(柱B，流速：4ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝52∶48)；FAB-MS(m/z)：1576[M+]。
                             实施例24
制备气丝菌素122
将三氧化硫N，N-二甲基甲酰胺配合物(23mg)加到在吡啶(1ml)中的气丝菌素3(50mg)的溶液中。室温下搅拌2小时后，用无水氮气吹扫溶剂。
0℃下将在TFA(1ml)中的以上得到的粗残余物的溶液搅拌30分钟。用无水氮气流吹扫TFA，并用制备反相HPLC纯化残余物，详细条件如以下所示。合并纯级分，冷冻并冻干得到5mg气丝菌素122，为一种无色无定形固体。
HPLC(Rt)：24.6分(柱F，流速：10ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝52∶48)；FAB-MS(m/z)：1613[MH+]。
                            实施例25
制备气丝菌素63
(a)将BOP试剂(355mg，0.80mmol)、HOBT水合物(124mg，0.81mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.174ml，1.00mmol)加到在DMF(10ml)中的Nα-Fmoc-Nβ-Boc-(S)-2，3-二氨基丙酸(343mg，0.80mmol)的搅拌的溶液中。室温下搅拌混合物1.5小时后，将气丝菌素3(1.10g，0.67mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.174ml，1.00mmol)在DMF(9.5ml)中的溶液加到此混合物中。室温下再搅拌1小时以后，真空浓缩混合物。
(b)将哌啶-4-甲酸聚胺树脂(200-400目)、HL(1.50mmol/g，2.66g)加到在DMF(20ml)中的以上得到的残余物的搅拌的溶液中，用超声波辐射反应混合物6小时。通过硅藻土垫片过滤除去树脂，用MeOH洗涤，并将合并的滤液和洗液冷冻和冻干得到1.08g气丝菌素3的粗衍生物，为一种白色无定形固体，将其不经进一步纯化用于下一步。
(c)将(2-氧代-乙基)氨基甲酸叔丁酯(粗品，207mg)、AcOH(0.1ml)和NaBH3CN(19.1mg)加到在MeOH(1ml)中的以上得到的气丝菌素3的粗衍生物(25.6mg，0.015mmol)溶液中。室温下将混合物搅拌2小时后，真空浓缩反应混合物。用n-BuOH(4ml)稀释残余物，并用H2O洗涤( ml×2，用0.1N HCl调节pH至3-4)。真空浓缩n-BuOH层。将粗残余物不经进一步纯化用于下一步。
(d)0℃下将在TFA(2ml)中的以上得到的粗残余物的溶液搅拌2小时。真空蒸发TFA，并用制备反相HPLC法纯化残余物，详细条件如以下所示。合并纯级分，冷冻并冻干得到8.8mg气丝菌素63，为一种白色无定形固体。
HPLC(Rt)：24.8分(柱F，流速：9ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝54∶36)；FAB-MS(m/z)：1706[MH+]。
                       实施例26
制备气丝菌素127
采用与关于气丝菌素63的方法相似的方法，使用Nα-Fmoc-Nβ-Boc-(D)-鸟氨酸制备气丝菌素127。所得的气丝菌素127为一种白色无定形固体。
HPLC(Rt)：23.9分(柱F，流速：9ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝54∶36)；FAB-MS(m/z)：1734[MH+]。
                        实施例27
制备气丝菌素124
(a)将BOP试剂(62mg，0.14mmol)、HOBT水合物(22mg，0.144mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(24μl，0.138mmol)加到搅拌的在DMF(2ml)中的Boc-D-Orn(Boc)-OH(46mg，0.138mmol)溶液中。室温下搅拌30分钟以后，将气丝菌素120(100mg，0.063mmol)和N-二异丙基乙基胺(24μl，0.138mmol)在DMF(2ml)中的溶液加到此反应混合物中。室温下搅拌18小时后，真空蒸发此溶剂。
将残余物溶于TFA(4ml)，并在0℃下将溶液搅拌30分钟。用无水氮气流除去TFA以后，用制备反相HPLC法纯化残余物，详细条件如以下所示。合并纯级分，冷冻并冻干得到48.6mg腈衍生物，为一种白色无定形固体。
HPLC(Rt)：20.2分(柱F，流速：10ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝57∶43)；FAB-MS(m/z)：1700[M+H]+。
(b)将在木炭(10mg)上的10％钯加到在二噁烷(1ml)中的以上所得的腈衍生物(48.6mg，0.0286mmol)和水(1ml)的混合物中，室温下和在氢气氛下将此混合物搅拌14小时。然后通过膜过滤器(孔尺寸：0.2μm)过滤混合物并真空蒸发溶剂。用制备反相HPLC法纯化粗残余物，详细条件如以下所示。合并纯级分，冷却并冻干得到26.5mg气丝菌素124，为一种无色无定形固体。
HPLC(Rt)：18.2分(柱F，流速：10ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝60∶40)；FAB-MS(m/z)：1704[M+H]+。
根据与实施例27中所述类似的方法制备以下的气丝菌素132、134-136。
            FAB-MS         HPLC              分析条件化合物名     m/z：[MH+]  保留时间(分)  (柱)(流速；洗脱剂的比率*)气丝菌素132      1706          18.9          (F)(10ml/分；60/40)气丝菌素134      1790          25.7          (F)(10ml/分；63/37)气丝菌素135      1790          25.5          (F)(10ml/分；63/37)气丝菌素136      1761          25.8          (F)(10ml/分；63/37)
*0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈的比率
                          实施例28
制备气丝菌素125
(a)将2-溴-5-硝基吡啶(185mg)加到在DMF(1ml)和三乙胺(0.126ml)中的气丝菌素3单TFA盐(天然产物：50mg)的溶液中。室温下搅拌25小时后，用无水氮气流吹扫溶剂。用制备反相HPLC纯化残余物。合并适宜的级分，冷冻并冻干得到25mg气丝菌素3的5-硝基吡啶-2-基衍生物，为一种亮黄色无定形固体。
HPLC(Rt)：29.9分(柱F，流速：10ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝47∶53)；FAB-MS(m/z)：1655[M+H]+。
(b)将以上得到的气丝菌素3的5-硝基吡啶-2-基衍生物(10mg)溶于二噁烷-H2O(1ml-5ml)。加入在木炭上的5％钯(20mg)，并用氢气填充反应容器。室温下搅拌3小时后，通过膜过滤器(孔尺寸0.2μm)过滤，并蒸发溶剂得到14mg粗产物，用制备反相HPLC法纯化此产物，详细条件如以下所示。合并纯级分，冷冻并冻干得到2.5mg气丝菌素125，为一种无色无定形固体。
HPLC(Rt)：18.7分(柱F，流速：10ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝52∶48)；FAB-MS(m/z)：1625[M+H]+。
                           实施例29-1
制备气丝菌素128
(a)将BOP试剂(378mg，0.85mmol)、HOBT水合物(131mg，0.86mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(171μl，0.98mmol)加到在DMF(10ml)中的Fmoc-D-Orn(Boc)-OH(389mg，0.86mmol)溶液中。室温下将混合物搅拌40分钟后，将气丝菌素3(1.08g，0.66mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(171μl，0.98mmol)在DMF(10ml)中的溶液加到此混合物中。室温下搅拌2.5小时后，加入哌啶(4ml)，室温下再搅拌混合物1小时。真空浓缩混合物。用n-BuOH(50ml)稀释残余物并用H2O洗涤(25ml×2，用1N HCl调节至pH3)。然后真空浓缩n-BuOH层。
(b)将BOP试剂(13.3mg，0.030mmol)、HOBT水合物(4.6mg，0.030mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(4.8μl、0.028mmol)加到在DMF(1ml)中的Boc-D-Orn(Boc)-OH(9.6mg，0.029mmol)的搅拌的溶液中。室温下将混合物搅拌30分钟后，将以上得到的粗残余物(31.9mg)和N，N-二异丙基乙基胺(4.8μl，0.028mmol)在DMF(1ml)中的溶液加到此混合物中。室温下搅拌4小时后，真空浓缩反应混合物。
(c)将以上得到的粗残余物溶于TFA(1.5ml)并在0℃下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物，并用制备反相HPLC法纯化残余物。合并适宜的级分，冷冻并冻干得到16.6mg气丝菌素128，为一种白色无定形固体：
HPLC(Rt)：27.23分(柱F，流速：9ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝55∶35)；FAB-MS(m/z)：1761[MH+]。
                          实施例29-2
制备气丝菌素133
根据与实施例29-1所述类似的方法制备气丝菌素133。
HPLC(Rt)：19.7分(柱F，流速：10ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝60∶40)；FAB-MS(m/z)：1761[MH+]。
                           实施例30
由化合物(IX)制备气丝菌素106
(a)室温下将Fmoc-Tyr(But)(21mg，0.0457mmol)、HOBt一水合物(6.6mg，0.0431mmol)、BOP试剂(18.8mg，0.0424mmol)和二异丙基乙基胺(DIEA，20μl)在DMF(0.5ml)中的混合物搅拌1小时，然后加到在实施例6中得到的N(orn)-Boc-IX(19.3mg，0.0131mmol)和的DIEA(10μl)在DMF(1ml)中混合物中。室温下搅拌3小时后，用哌啶(0.375ml)将所得的混合物处理1小时，然后真空浓缩。用二氯甲烷和二乙醚洗涤残余物以除去试剂。用HPLC法纯化残余物得到目标直链肽A，为一种白色固体(16.6mg)。
HPLC(Rt)19分(柱：Soken-ODS/20×250mm，流速：9ml/分，洗脱剂H2O∶CH3CN＝梯度，1％AcOH)。(b)室温下将Fmoc-D-Ala一水合物(1.2mg，0.034mmol)、HOBt一水合物(4.7mg，0.031mmol)、BOP试剂(13.6mg，0.031mmol)和DIEA(8μl)在DMF(0.5ml)中的混合物搅拌1小时，然后加到以上得到的直链肽A(16.6mg，0.0098mmol)和DIEA(6μl)在DMF(1ml)中的混合物中。室温下搅拌反应混合物，并加入活化酯直到大部分的原料被消耗。真空浓缩所得的混合物。用二氯甲烷和二乙醚洗涤残余物以除去试剂。0℃下用三氟乙酸处理粗产物1小时。减压浓缩混合物。用HPLC法纯化残余物得到目标直链肽B，为一种白色固体(6.1mg)。
HPLC(Rt)19分(柱：Soken-ODS/20×250mm，流速：9ml/分，洗脱剂：H2O∶CH3CN＝梯度，1％AcOH)。
(c)室温下将Boc-D-Orn(But)(5.7mg，0.017mmol)、HOBt一水合物(2.3mg，0.015mmol)、BOP试剂(5.4mg，0.012mmol)和DIEA(6μl)在DMF(0.5ml)中的混合物搅拌1小时，然后将其加到直链肽B(6.1mg，0.0033mmol)和DIEA(3μl)在DMF(1ml)中的混合物中。室温下搅拌2小时后，用哌啶(0.375ml)将所得的混合物处理1小时，并真空浓缩。用HPLC法纯化残余物得到直链肽C，为一种白色固体(4.1mg)。
HPLC(Rt)16.7分(柱：Soken-ODS/20×250mm，流速：9ml/分，洗脱剂H2O∶CH3CN＝梯度，1％AcOH)。
(d)用0.01N盐酸盐酸化直链肽C并用正丁醇萃取。真空浓缩正丁醇萃取物。将萃取物溶于DMF(2ml)。然后将HOBt一水合物(0.1M，在DMF中，60μl)、BOP试剂(0.1M，在DMF中，60μl)和DIEA(2μl)加到此混合物中。室温下搅拌1小时后，真空浓缩所得的混合物。0℃下用三氟乙酸将残余物处理1小时。减压浓缩混合物。用HPLC法纯化残余物得到气丝菌素106，为一种白色固体(2.2mg，9％来自N(orn)-Boc-IX)。
分析数据如在实施例16的表中所述。
                          实施例31
制备气丝菌素137
(a)将N-Boc-氨基乙醛(120mg)和N-乙基二异丙基胺(0.072ml)加到气丝菌素3单TFA盐(622mg)在二氯甲烷(16ml)和MeOH(4ml)中的溶液中。室温下搅拌1小时后，将氰基氢硼化物(48mg)和硫酸(0.04ml)加到此反应混合物中。室温下将反应混合物搅拌72小时后，真空蒸发溶剂，然后加入0.1NHCl。用nBuOH萃取并浓缩。
(b)将残余物溶于DMF(6ml)，向其加入2-(S)-[双-(2-Boc-氨基乙基)氨基]-5-Boc-氨基戊酸(294mg)、HOAt(77mg)、HBTU(215mg)和N-乙基二异丙基胺(0.148ml)。室温下搅拌48小时后，真空蒸发溶剂，并将残余物溶于二氯甲烷。往此溶液加入醚以得到白色沉淀物。用醚洗涤，并不经进一步纯化而用于下一步。
(c)然后在0℃下将TFA(3ml)加到以上得到的化合物中。0C下搅拌30分钟后，将醚加到此反应混合物以得到白色沉淀。用醚洗涤并用制备反相HPLC法纯化。合并纯级分，冷冻并冻干得到95mg气丝菌素137，为一种无色无定形固体：
HPLC(Rt)：14.6分(柱F，流速：10ml/分，洗脱剂：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝61∶39)；FAB-MS(m/z)：1776[M+H]+。
                          实施例32
用烧杯中的微刮刀良好混合201mg气丝菌素106和599mg碳酸钙(平均颗粒大小：40-60μm)。然后加入200μl的蒸馏水，并继续混合直到混合物变成糊状。-5℃下将所得的糊状固体冷冻干燥过夜，并进一步在30℃下真空干燥3小时。将干燥粉末中的大颗粒破碎成小颗粒后，加入8mg硬脂酸钙。使混合物通过180μm筛目三次。
                          实施例33
用烧杯中的微刮刀良好混合8mg糯米粉和591mg碳酸钙(平均颗粒大小：40-60μm)。加入201mg气丝菌素106并良好地混合。往此混合物中后加入200μl的蒸馏水，并继续混合直到混合物变成糊状。-5℃下将所得的糊状固体冷冻干燥过夜，并进一步在30℃下真空干燥3小时。将干燥粉末中的大颗粒破碎成小颗粒后，加入8mg硬脂酸钙。使混合物通过180μm筛目三次。
                          实施例34
用烧杯中的微刮刀良好混合201mg气丝菌素106和599mg米粉(平均颗粒大小：45-90μm)。然后加入400μl的蒸馏水，并继续混合直到混合物变成糊状。-5℃下将所得的糊状固体冷冻干燥过夜，并进一步在30℃下真空干燥3小时。将干燥粉末中的大颗粒破碎成小颗粒后，加入8mg硬脂酸钙。使混合物通过180μm筛目三次。
                          实施例35
用烧杯中的微刮刀良好混合201mg气丝菌素106和599mg玉米淀粉(平均颗粒大小：20-180μm)。然后加入500μl的蒸馏水，并继续混合直到混合物变成糊状。-5℃下将所得的糊状固体冷冻干燥过夜，并进一步在30℃下真空干燥3小时。将干燥粉末中的大颗粒破碎成小颗粒后，加入8mg硬脂酸钙。使混合物通过180μm筛目三次。
                            实施例36
用烧杯中的微刮刀良好混合201mg气丝菌素133和599mg碳酸钙(平均颗粒大小：40-60μm)。然后加入200μl的蒸馏水，并继续混合直到混合物变成糊状。-5℃下将所得的糊状固体冷冻干燥过夜，并进一步在30℃下真空干燥3小时。将干燥粉末中的大颗粒破碎成小颗粒后，加入8mg硬脂酸钙。使混合物通过180μm筛目三次。
                            实施例37
用烧杯中的微刮刀良好混合201mg气丝菌素132和599mg碳酸钙(平均颗粒大小：40-60μm)。然后加入200μl的蒸馏水，并继续混合直到混合物变成糊状。-5℃将所得的糊状固体冻干过夜，并进一步在30℃下真空干燥3小时。将干燥粉末中的大颗粒破碎成小颗粒后，加入8mg硬脂酸钙。使混合物通过180μm筛目三次。
                            实施例38
用烧杯中的微刮刀良好混合201mg气丝菌素133和599mg碳酸钙(平均颗粒大小：40-60μm)。然后加入在500μl蒸馏水中的2.4mg明胶溶液，并继续混合直到混合物变成糊状。-5℃下将所得的糊状固体冷冻干燥过夜，并进一步在30℃下真空干燥3小时。将干燥粉末中的大颗粒破碎成小颗粒后，加入8mg硬脂酸钙。使混合物通过180μm筛目三次。
                            实施例39
用烧杯中的微刮刀良好混合201mg MK0991和599mg碳酸钙(平均颗粒大小：40-60μm)。然后加入200μl的蒸馏水，并继续混合直到混合物变成糊状。-5℃下将所得的糊状固体冷冻干燥过夜，并进一步在30℃下真空干燥3小时。将干燥粉末中的大颗粒破碎成小颗粒后，加入8mg硬脂酸钙。使混合物通过180μm筛目三次。

Claims (39)

1.一种鼻给药组合物，其包含
(i)具有生理学活性的环肽，和
(ii)一种包含多价金属的生理学上可接受的粉末状或结晶状载体或有机载体，
其中，生理学有效量的所述具有生理学活性的环肽均匀分散于和均匀吸收至所述生理学上可接受的粉末状或结晶状多价金属载体或有机载体上，其平均粒径范围是20-500μm。
2.根据权利要求1的鼻给药组合物，其特征在于，其进一步包含一种吸收增强剂。
3.根据权利要求2的鼻给药组合物，其中，所述吸收增强剂为可药用的天然或非天然聚合物，选自纤维素，淀粉、其它天然聚合物、合成聚合物和其衍生物。
4.根据权利要求3的鼻给药组合物，其中，所述的纤维素和其衍生物选自结晶纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、醋酸纤维素和羧甲基纤维素。
5.根据权利要求3的鼻给药组合物，其中，所述的淀粉和其衍生物选自玉米淀粉、马铃薯淀粉、大米淀粉、糯米淀粉、小麦淀粉、预糊化淀粉、糊精、羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉和支链淀粉。
6.根据权利要求3的鼻给药组合物，其中，所述的其它天然聚合物选自琼脂、藻酸钠、壳多糖、脱乙酰壳多糖、蛋黄卵磷脂、阿拉伯胶、黄芪胶、明胶、胶原、酪蛋白、白蛋白、血纤蛋白原和血纤蛋白。
7.根据权利要求3的鼻给药组合物，其中，所述的合成聚合物选自聚丙烯酸钠和聚乙烯基吡咯烷酮。
8.根据权利要求2的鼻给药组合物，其中，所述的吸收增强剂选自大米、糯米、淀粉、明胶、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、蛋黄卵磷脂、阿拉伯胶、黄芪胶和其混合物。
9.根据权利要求2的鼻给药组合物，其中，所述的吸收增强剂为糯米。
10.根据权利要求1-9任一项的鼻给药组合物，其中，所述的生理学上可接受的粉末状或结晶状载体为有机载体。
11.根据权利要求10的鼻给药组合物，其中，所述的有机载体为细谷物粉末。
12.根据权利要求11的鼻给药组合物，其中，所述的细谷物颗粒粉末选自粉碎的大米、小麦、荞麦、大麦、大豆、玉米、小米和粟米。
13.根据权利要求1-9任一项的鼻给药组合物，其中，所述的生理学上可接受的粉末状或结晶状载体为多价金属载体。
14.根据权利要求13的鼻给药组合物，其中，所述的多价金属载体为二价金属化合物，其选自铝化合物、钙化合物、镁化合物、硅化合物、铁化合物和锌化合物。
15.根据权利要求14的鼻给药组合物，其中，所述的铝化合物选自干铝羟基凝胶、羟基氯化铝、合成硅酸铝、轻质氧化铝、胶态硅酸铝水合物、氢氧化铝镁、氢氧化铝、氢氧化铝凝胶、硫酸铝、氨基乙酸二羟基铝、硬脂酸铝、天然硅酸铝、单硬脂酸铝和硫酸铝钾。
16.根据权利要求14的鼻给药组合物，其中，所述的铝化合物为氢氧化铝。
17.根据权利要求14的鼻给药组合物，其中，所述的钙化合物选自磷灰石、羟基磷灰石、碳酸钙、EDTA钙二钠、氯化钙、柠檬酸钙、甘油磷酸钙、葡萄糖酸钙、硅酸钙、氧化钙、氢氧化钙、硬脂酸钙、三价磷酸钙、乳酸钙、泛酸钙、油酸钙、棕榈酸钙、D-泛酸钙、藻酸钙、磷酸钙脱水物、磷酸氢钙、磷酸二氢钙、乙酸钙、蔗糖酸钙、硫酸钙、磷酸一氢钙、对氨基水杨酸钙和生物-灰泥岩化合物。
18.根据权利要求14的鼻给药组合物，其中，所述的钙化合物为羟基磷灰石、碳酸钙或乳酸钙。
19.根据权利要求14的鼻给药组合物，其中，所述的镁化合物选自L-天冬氨酸镁、氯化镁、葡萄糖酸镁、硅酸镁铝、硅酸镁、氧化镁、氢氧化镁、硬脂酸镁、碳酸镁、铝酸硅酸镁、硫酸镁、硅酸镁钠和合成硅酸镁钠。
20.根据权利要求14的鼻给药组合物，其中，所述的镁化合物为硬脂酸镁。
21.根据权利要求14的鼻给药组合物，其中，所述的硅化合物选自硅氧化物水合物、轻硅酸酐、合成水滑石、硅藻土和二氧化硅。
22.根据权利要求14的鼻给药组合物，其中，所述的铁化合物为硫酸亚铁。
23.根据权利要求14的鼻给药组合物，其中，所述的锌化合物选自氯化锌、硬脂酸锌、氧化锌或硫酸锌。
24.根据权利要求1-9和13-23任一项的鼻给药组合物，其中，所述包含多价金属的的生理学上可接受的粉末状或结晶状载体的平均粒径为20-250μm，优选20-100μm。
25.根据权利要求24的鼻给药组合物，其中，所述包含多价金属的的生理学上可接受的粉末状或结晶状载体的平均粒径为20-60μm。
26.根据权利要求10-12任一项的鼻给药组合物，其中，所述包含有机载体的生理学上可接受的粉末状或结晶状载体的平均粒径为20-300μm。
27.根据权利要求1-26任一项的鼻给药组合物，其中，所述的生理学活性环肽为杀真菌的环肽。
28.根据权利要求27的鼻给药组合物，其中，杀真菌的环肽为由式(I)表示的气丝菌素之一
其中
R1为胍基、三低级烷基铵基、-N(R10)-R11、-N(R15)-CO-R14、-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13、-NHCOCH(R13)-NHCOCH(NH2)-R13、
Figure A0180395000061
Figure A0180395000062
或
Figure A0180395000063
R10和R11彼此独立地选自氢；被一个或两个氨基取代的杂芳基；任选地被一个或多个、优选一个或两个下述取代基取代的低级烷基：氨基、氨基-低级烷基、氰基、胍基、含氮杂环基或包含氨基、脒基或胍基的苯基；
R13为得自天然或非天然氨基酸的残基；
R14为被一个或多个、优选一个或两个下述取代基取代的低级烷基：氨基、胍基、含氮杂环基或包含氨基、脒基或胍基的苯基；
R15为氢、任选地被一个或多个、优选一个或两个下述取代基取代的低级烷基：氨基、胍基、含氮杂环基或包含氨基、脒基或胍基的苯基；
R2为氢、羟基磺酰基、低级烷基或低级链烯基，其中，低级烷基和低级链烯基可任选地被下述基团取代：酰基、氨基甲酰基、氨基、单-低级烷基氨基或二-低级烷基氨基；
R3为氢、羟基、硝基、氨基、酰基氨基、(低级烷基氨基甲酰基)氨基、羧基、低级烷氧基、低级烷氧基羰基、低级烷基、低级链烯基或低级链炔基，其中，低级烷基、低级链烯基和低级链炔基可任选地被下述基团取代：羟基、氨基、单-低级烷基氨基、二-低级烷基氨基、低级烷氧基羰基或氨基甲酰基；
R4为烷基、链烯基、烷氧基或链烯基氧基，其可任选地被下述基团取代：低级烷基、芳基、环烷基或氟原子；
R5为-CONH2、-CN或-CH2NH2；
X为单键，或芳基、联苯基或三苯基，它们选择性地包含一个或多个杂原子和/或被卤原子或低级烷基取代；
Y为单键、-CH2-、-CH(低级烷基)-、-CONH-或-CON(低级烷基)-；
Z为-O-、-NH-或-N(低级烷基)-；
m为整数0-4；和
n为整数2-5；
和其可药用盐。
29.根据权利要求27的鼻给药组合物，其中，杀真菌的环肽为由权利要求28的式(I)表示的气丝菌素中的任一种
其中
R1为-N(R10)-R11、-N(R15)-CO-R14、-N(R15)-CO-CH[N(R10)R11]-R13、-NHCOCH(R13)-NHCOCH(NH2)-R13、
Figure A0180395000071
Figure A0180395000072
或
R10和R11彼此独立地选自氢；任选地被一个或多个、优选一个或两个下述基团取代的低级烷基：氨基、氨基-低级烷基、氰基、胍基或含氮杂环；
R13为得自天然或非天然氨基酸的残基；
R14为被一个或多个、优选一个或两个下述基团取代的低级烷基：氨基、胍基、含氮杂环；
R15为氢、任选地被一个或多个、优选一个或两个下述基团取代的低级烷基：氨基、胍基或含氮杂环；
R2为氢或低级烷基；
R3为氢、羟基或氨基；
R4为烷基；
R5为-CONH2、-CN或-CH2NH2；
X为单键；
Y为单键、-CH2-、-CH(低级烷基)-；
Z为-O-；
m为整数0-4；和
n为整数2-5；
和其可药用盐。
30.根据权利要求27的鼻给药组合物，其中，杀真菌的环肽选自气丝菌素1-5、14、15、17、31、32、63、96、101-122、124、126-137。
31.根据权利要求27的鼻给药组合物，其中，杀真菌的环肽选自气丝菌素132-137。
32.根据权利要求27的鼻给药组合物，其中，杀真菌的环肽为棘白菌素类似物中的任一种。
33.根据权利要求32的鼻给药组合物，其中，所述的棘白菌素类似物为LY303366或FK463。
34.根据权利要求32的鼻给药组合物，其中，所述的棘白菌素类似物为肺念定类似物中的任一种。
35.根据权利要求34的鼻给药组合物，其中，所述的肺念定类似物为MK0991。
36.权利要求1-35任一项定义的鼻给药组合物在治疗疾病中的用途。
37.权利要求27-35任一项定义的鼻给药组合物在治疗或预防海藻糖中的用途。
38.一种制备权利要求1-35任一项的鼻给药组合物的方法，该方法包括在吸收增强剂存在或不存在下，将一种生理学有效量的环肽均匀分散于生理学上可接受的粉末状或结晶载体状中，所述载体包含多价金属或有机载体，将活性物质吸附于载体上。
39.基本上如前所述的本发明。
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