CN1330511A - 除草剂抗性稻 - Google Patents
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Abstract
所公开的稻植物具有针对通常抑制植物乙酰羟酸合酶(AHAS)的除草剂的多种来源的抗性。除了控制红稻以外,许多抑制AHAS的除草剂还有效地控制其它稻田常见杂草。这些除草剂中数种具有残留活性,以致一次处理既能控制已有杂草又能控制以后萌发的杂草。由于有了抵抗红稻和其它杂草的有效残留活性,稻生产者现在拥有一种优越于商业上现在可以获取的那些系统的杂草控制系统。
Description
根据35 U.S.C.§119(e)和可用的条约和公约,分别在美国国内和国外要求1998年11月5日提交的美国临时申请系列号60/107,255的优先权。
技术领域
本发明涉及除草剂抗性稻,特别涉及通常干扰植物乙酰羟酸合酶(AHAS)的除草剂例如咪唑啉酮除草剂和磺酰脲类除草剂抗性稻。
背景技术
在植物中开发新型除草剂抗性提供显著的生产和经济优势。稻生产经常受限于一种与稻近缘的在商业稻田中生长茂盛的杂草的优势。该杂草通常称为“红稻:与栽培稻属于相同的属(Oryza sariva L.)。红稻和商业稻的遗传相似性使红稻的除草控制变得困难。除草剂OrdramTM(草达灭:S-乙基六氢-1氢-氮杂硫赶氨基甲酸酯)和BoleroTM(杀草丹:S-[(4-氯苯基)甲基]二乙基氮杂硫赶氨基甲酸酯)提供对红稻的部分抑制,但是现在还没有实际控制红稻的除草剂用于商品化稻田,因为稻已有的商品化栽培品种对这些除草剂同时具有敏感性。开发对红稻有效的除草剂抗性的突变商品化稻品系会大大地增强控制红稻侵染的能力。
为控制红稻蔓延,美国南方的稻生产者通常交替耕种稻和大豆。这种轮作尽管在经济上通常是经济上不值得的,然而常常还是必要的,因为现在还没有能在商业稻田上选择性地控制红稻蔓延的除草剂。在大豆耕作期间,生产者有大量可以获取的除草剂能被用于红稻,因此下一年又可以种植稻。美国的稻生产者如果种植大豆代替稻,每年每英亩的损失可达200-300美国,这个潜在的损失每年影响大约250万英亩土地。在美国,另外有估计为5千万美圆的损失是因为磨米厂支付更低的价格购买受红稻污染货物。在美国南方的红稻生产中,由红稻引起的总损失估计在每年5千-7千5百万美圆。在其它稻生产国,由红稻引起的经济损失更大。
在稻生产中,稻生产者通常使用除草剂敌稗(propanil)(商品名StamTM)或草达灭(molihate)(商品名OrdramTM)控制杂草。敌稗没有残留活性。草达灭对鱼类有毒性。这些除草剂没有一种能够控制红稻。咪草烟(Imazathapyr)((±)-2-[4,5-二氢-4-甲基-4-(1-甲基乙基)-5-氧代-1氢-咪唑-2-基]-5-乙基-3-吡啶羧酸)提供一种环境可以接受的草达灭替代品,它具有敌稗所缺乏的残留杂草控制活性,是一种对红稻非常有效的除草剂。对于稻生产上重要的其它杂草,包括谷仓院地杂草,咪草烟也提供卓为有效的控制。谷仓院地杂草是稻生产中一种主要的杂草,当前用敌稗或草达灭来控制。然而,有报道说谷仓院地杂草正在形成敌稗抗性。
在美国,对于能控制红稻的除草剂具有抗性的稻品种,其总潜在市场是大约530万英亩,美国之外的潜在市场更大。世界稻生产占地约35000万亩。在美国、巴西、澳大利亚、西班牙、意大利、巴基斯坦、北朝鲜、南朝鲜、菲律宾、越南、中国、巴西、阿根廷、哥伦比亚、印度、巴基斯坦、孟加拉、日本、厄瓜多尔、墨西哥、古巴、马来西亚、泰国、印度尼西亚、斯里兰卡、委内瑞拉、缅甸、尼日利亚、乌拉圭、秘鲁和其他稻米生产国,红稻是稻生产的杂草害。
抑制乙酰羟酸合酶的除草剂,如果能够用于商业稻生产,将提供许多超过现有除草剂的优势。潜在的优势包括长效的残留抗杂草活性,有效控制稻生产中更为重要的杂草,包括红稻,以及相对的环境接受性。即使在红稻现在还不构成问题的地区,获取除草剂抗性稻将给农民提供一个适于在稻田中使用的新除草剂“军火库”,对稻生产实践产生一个重要的影响。
美国专利4,761,373描述了通过将组织培养暴露于除草剂来开发突变的除草剂抗性玉米植物。据说突变的玉米植物具有一种改变的酶,即乙酰羟酸合酶,它给予抗特定咪唑啉酮和磺胺类除草剂的抗性。请参阅美国专利5,304,732,5,331,107和5,718,079号;以及欧洲专利申请0 154 204 A2号。
Lee等,“番茄中磺酰脲除草剂抗性的分子基础”,欧洲分子生物学组织杂志(The EMBO J.)7卷5期,1241-1248页(1988),描述了从Nicotiana tabacum分离和鉴定具有指定除草剂抗性形式的乙酰乳酸合酶(又称为乙酰羟酸合酶),并将那些基因再次引入番茄的敏感品系。
Saxena等,“Datura innoxia中的除草剂抗性:植物生理学.85卷863-867页(1998)描述了数种抗磺酰脲除草剂的Datura innoxia品系,还发现其中某些对咪唑啉酮除草剂有交叉抗性。
Mezur等,植物乙酰乳酸合酶编码基因的分离和鉴定,两类除草剂的靶酶:植物生理学.85卷,1110-1117页(1987),讨论来自不同物种的乙酰乳酸合酶之间同源程度的研究。
美国专利5,767,366号公开利用从植物例如突变拟南芥(Arabidopsis thaliana)中克隆的基因所给予咪唑啉酮抗性以遗传工程的方式所转化的植物。参见一篇相关文章,Sathasivan等,“咪唑啉酮抗性的拟南芥哥伦比亚变种中突变的乙酰乳酸合酶的核苷酸序列:核酸研究(Nucleic Acids Research)18卷8期2188页(1990)。
除红稻之外其它植物的除草剂抗性AHAS酶的实例,公开于以下文献:美国专利5,013,659号;K.Newhouse等,“玉米(Zea mays L.)的咪唑啉酮除草剂抗性突变”,理论应用遗传学(Theor.Appl.Genet.)83卷65-77页(1991);K.Sathasivan等,“拟南芥哥伦比亚变体咪唑啉酮抗性的分子基础:植物生理学(Plant Physiol.)97卷1044-1059页(1991);B.Miki等,“用拟南芥乙酰羟酸合酶基因转化Brassica napus低芥酸菜子栽培品种及除草剂抗性分析”,理论应用遗传学(Theor.Appl.Genet.)80卷449-458页(1990);P.Wiersma等,“Brassica napus乙酰乳酸合酶基因的分离、表达和系统遗传学”,分子基因遗传学(Mol.Gen.Genet.)219卷413-420页(1989);以及野生型和转基因植物中除草剂抗性乙酰乳酸合酶基因表达增加的比较以及酶活性转录后限制的表现”,植物生理学(Plant Physiol.)94期1647-1654页(1990)。
S.Sebastian等“磺酰脲除草剂耐受性增加的大豆突变体”,植物科学(Crop Sci.)27卷948-952页(1987)公开了抗磺酰脲除草剂的大豆突变体。请参阅美国专利5,084,082号。
K.Shimamoto等,“从转化的原生质体再生的转基因不育稻植物:自然(Nature)338卷274-276页(1989)公开一种遗传转化程序,其中利用原生质体电穿孔将一种编码葡萄糖苷酸酶的基因转化进稻。T.Terakawa等,“利用体外筛选方法获得的抗BensulfuronMethyl(BSM)除草剂的稻突变体”,日本育种杂志(Japan.J.Breed.)42卷267-275页(1992)公开通过给逾伤组织培养施加选择压力所产生的抗璜酰脲除草剂的稻突变体。抗性归因于突变的AHAS酶。
以下是本发明人(或本发明人与其他的作者)已经发表的有关除草剂抗性稻变种研究的文章。这些文章是T.Croughan等,“利用生物技术改良稻和小麦:第84次年度研究报告(84th annual researchreport),稻研究站(Rice Research Station),1992,100-103页(1993);T.Croughan等,“利用生物技术改良稻和小麦”,第85次年度研究报告(85th Annual Research Report),稻研究站(Rice ResearchStation),1993,116-156页(1994);T.Croughan,“组织培养技术在开发除草剂抗性稻中的应用”,路易斯安那农业(LouisianaAgriculture)37卷3期25-26页(1994);T.Croughan等,“利用生物技术改良稻_第86次年度研究报告(86th Annual ResearchReport),稻研究站(Rice Research Station),1994,461-482页(1995);T.Croughan等,“咪唑啉酮抗性稻的评价:第87次年度研究报告(87th Annual Research Report),稻研究站(Rice ResearchStation),1995,491-525页(1996年9月);T.Croughan等,“IMI-稻评价:第88次年度研究报告(88th Annual Research Report),稻研究站(Rice Research Staion),1996,603-629页(1997年9月);T.Croughan等,“咪唑啉酮抗性稻”,第89次年度研究报告(89th AnnualResearch Report),稻研究站(Rice Research Staion),1997,464页(1998年9月);T.Croughan等,“利用生物技术改良稻和小麦”,USDA CRIS报告保藏号01500120(1994会计年度-实际出版日期现在尚不知道);T.Croughan等,“利用生物技术改良稻赖氨酸含量和除草剂抗性”,USDA CRIS报告保藏号0168634(1997会计年度-实际出版日期现在尚不知道);T.Croughan等,“生物技术在稻改良中的应用:第25次稻技术工作组进展(Proc.25th Rice Tech.Work.Groups),62-63页(1994);T.Croughan,“抗AHAS抑制性除草剂的稻的生产”,细胞与组织培养大会(Congress on Cell and Tissue Culture),体外组织培养协会(Tissue Culture Association,In Vitro)30A卷,60页,摘要P-1009(1994年6月4-7日)。(请注意,稻研究站的年度研究在活动被报道的历年以后的年度出版。例如,第84次年度研究报告(84th Annual Research Report),稻研究站(Rice ResearchStation),1992,总结了1992年所做的研究,出版于1993年)。稻研究站第87次和第88次年度研究报告(分别于1996年9月和1997年9月出版)在显示特定除草剂抗性试验数据表单中,提到了栽培品系93AS3510。这些报告没有给出有关如何开发该品系的信息。在这些报告公开时尚不能公开地获得该品系。品系93AS3510与ATCC 97523稻相同,后者在本发明人以后将要公开的国际专利申请Wo97/41218(1997)和美国专利5,736,629,5,773,704和5,952,553以及1999年7月13日递交的美国专利申请序列号09/351,889中有更详细的描述。
请参阅E.Webster等,“Imi-稻的杂草控制系统”,第27次稻技术工作组会议安排33页(1998年3月);L.Hipple等“咪唑啉酮抗性稻的AHAS鉴定:第27次稻技术工作组会议安排45-45页(1998年3月);W.Rice等,“利用除草剂抗性种质延迟稻像甲漫灌”,第27次稻技术工作组会议安排61页(1998年3月);E.Webster等,“咪唑啉酮-稻的杂草控制系统”,第27次稻技术工作组会议进展(1999)(Proceedings of the 27th Rice Technical Working GroupMeeting(1999))215页(1998年3月);L.Hipple等,“咪唑啉酮抗性稻的AHAS鉴定”,第27次稻技术工作组会议进展(1999年)(Proceedings of 27th Rice Technical Working Group Meeting(1999))68-69页;以及W.Rice等,“利用除草剂抗性种质延迟稻像甲漫灌:第27次稻技术工作组会议进展(1999年)(Proceedings of27th Rice Technical Working Group Meeting(1999))134页。
本发明人在美国专利5,545,822号中公开一种具有以代谢为基础,对干扰植物乙酰羟酸合酶的除草剂抗性的稻植物品系;也就是说,这些稻植物的除草剂抗性不是由一种抗性AHAS酶引起的。(请参阅已经公开的国际申请WO 97/41218,6-9页)。请参阅本发明人的美国专利5,773,703号。
本发明人已经公开的国际专利申请WO 97/41218公开一种具有突变AHAS酶的稻植物品系,该酶对干扰野生型植物乙酰羟酸合酶的除草剂具有抗性。通过将稻种子暴露于突变剂甲磺酸乙酯(EMS)并筛选数以百万计后代的除草剂抗性,开发该稻植物品系。请参阅本发明人1999年6月13日递交的美国专利申请序列号09/351,889。
美国专利4,443,971号公开一种利用在存在除草剂的条件下通过组织培养制备除草剂抗性植物的方法。美国专利4,774,381公开以这种方法制备的磺酰脲除草剂抗性烟草植物。
美国专利5,773,702号公开在存在除草剂的条件下利用细胞培养所产生的具有抗性突变AHAS酶的甜菜。
美国专利5,633,437号公开一种从苍耳草属植物分离出的除草剂抗性AHAS酶和基因。
美国专利5,767,361号公开一种玉米突变抗性AHAS酶。美国专利5,767,361之定义作为参考资料并入本发明,只要那些定义不与当前公开矛盾。请参阅美国专利5,731,180号和欧洲专利申请0525384A2号。
美国专利5,605,011号;欧洲专利申请0 257 993 A2号;以及欧洲专利申请0 730 030 A1公开抗性乙酰乳酸合酶(ALS是AHAS的另外一个名称),该酶建立在如下来源的酶的基础上:在存在除草剂的条件下来自于烟草细胞的愈伤组织培养,来自酵母ALS基因自发突变;EMS-诱导的拟南芥种子突变;那些酶的特定修饰以及用编码抗性酶的基因所转化的各种植物。这些专利公开数种修饰AHAS酶从而产生除草剂抗性AHAS酶,以及用那些基因转化植物的技术。
美国专利Re 35,661号(由美国专利5,198,599号再颁发)公开具有增强的抗以乙酰乳酸合酶为靶的除草剂的莴苣植物。起初的除草剂抗性来源是在种植者的田地里侵染的一种多刺的莴苣杂草,这种侵染不被商品磺酰脲除草剂控制。
发明内容
本人在稻植物中发现若干新除草剂抗性品系,并在稻植物中一般性产生除草剂抗性的改进的方法。新型除草剂抗性稻对有效抗红稻的除草剂具有出芽前、出芽后抗性或者同时具有出芽前、出苗后抗性。到目前为止,所分离的新型稻品系对下列除草剂表现出抗性:咪草烟(imazethapyr),imazapic,灭草烟(imazapyr),咪草啶酸(imazamox),嘧黄隆(sulfometuron metyl),灭草喹(imazaquin),氯嘧黄隆(chlorimuron ethyl),甲黄隆(metsulfuron methyl),玉嘧黄隆(rimsulfuron),噻黄隆(thifensulfuron methyl),嘧硫苯甲酸钠(pyrithyiobac sodium),苯黄隆(tribenuron methyl),和烟嘧黄隆(nicosulfuron)。这些新型稻被期望能抗这些除草剂的衍生物,且至少要能抗一些其它通常抑制乙酰羟酸合酶(AHAS)的除草剂,特别是咪唑啉酮和磺酰脲除草剂。已知上述各种除草剂的除草剂活性是由其对乙酰羟酸合酶(AHAS)的效应所引起的。该酶催化亮氨酸、缬氨酸以及异亮氨酸合成的第一步。AHAS酶的抑制对植物通常是致死性的。
除控制红稻之外,许多抑制AHAS的除草剂还有效地控制其它稻田常见杂草。这些除草剂中数种具有残留活性,因而一种处理能够对已有的杂草和以后长出的杂草都能控制--稻生产的一个显著益处。目前标明用于稻的除草剂都没有广谱的抗杂草残留活性,包括红稻在内。由于有了有效抵抗红稻以及其它杂草的残留活性,稻生产者现在拥有一种远远优越于目前所使用(系统)的杂草控制系统。
稻生产中水的一种作用在于杂草控制--稻田里有一层静止水可以抑制杂草的生长。如果有具有残留杂草控制特性的除草剂,生产者在水管理方面的灵活性将大得多。现在可以延迟农田的漫灌,这又有助于控制稻水像
,这是一种主要的稻虫害。备选地,或者联合地,通过延迟漫灌可以降低泵水费用,直至有足够降雨漫灌农田而不花费生产者的任何费用。
虽然新稻品系的抗性机制还不完全确定,但是相信新稻品系的除草剂抗性很可能归因于不同的AHAS酶突变,即导致酶对通常抑制野生型AHAS酶的除草剂水平显示直接抗性的突变。将利用体外实验来确定这种抗性是由突变的AHAS酶所引起的(而不是另外一条途径,例如基因拷贝数,启动子活性增强,代谢性的降解,等等)。用于分析乙酰羟酸合酶活性的程序,除非特别注明,基本上和B.K.Singh等“乙酰羟酸合酶分析”,分析生物化学(Analytical Biochemistry),171卷,173-179页(1998)一样。在Singh‘材料与方法”的第一段中,使用来自温室培养的处于发育四叶期的稻苗的茎组织,而不使用玉米悬浮培养细胞。除去叶片,以同样的方式抽提各栽培品系409(鲜重)组织。在第一作者B.K.Singh的建议下(个人通讯),在Singh“材料与方法”下第一栏底部提到的脱盐步骤将被取消。以各种浓度将PursuitTM除草剂(imazethapyr)包括在AHAS酶分析的标准反应混合物冲。在520nm下测量吸光度。将利用酶分析期间直接生成的3-羟基丁酮进行核对。每一种处理都将进行两个平行试验。
一种备择的AHAS酶分析方法公布在美国专利5,605,011,53栏61行到54栏37行。
实施本发明的方式
将稻种子暴露于突变剂甲磺酸乙酯(EMS)之后,总共鉴定了27种表现出AHAS抑制性除草剂抗性的新稻品系。额外的抗性稻品系,可利用相似的突变和筛选技术来开发和鉴定。本技术领域中的其它强突变剂可以代替EMS产生这些突变,例如,亚硝基胍、乙基亚硝基脲、电离辐射(例如X-射线、γ-射线或紫外线),或拟辐射化合物例如博来霉素、etoposide和teniposide。(例如,博来霉素是从Streptomycesverticillus菌株分离出的糖肽类抗生素。Bristol实验室公司,Syracuse,NY在商标Blenoxane下销售一种博来霉素。)
实施例1-15
大约筛选了5200万粒突变的(M2)稻种子。通过将总共340磅稻栽培品种“Cypress”或“Bengal”种子(M1)浸泡在0.175%(按重量)EMS水溶液中,开发突变种子。大约170 lbs稻种子暴露于EMS16小时;大约85 lbs暴露24小时;以及大约85 lbs暴露35小时。收集来自三种暴露方案的种子,用于下述筛选实验。
EMS处理之后,用水彻底漂洗M1种子,在用播撒方式播种到浅水中之前抽干,24小时以后抽干水。三天以后再次漫灌农田,农田维持漫灌直到抽干用于收获。收获的M2种子贮存过冬,下一年筛选除草剂抗性。打孔播种大约5200万粒M2种子之后,于第一次冲洗之前按0.125lb ai/A(每英亩活性成分磅数)的比率在种子出芽前应用咪草烟。种子出芽后,稻达到3-叶期时按0.063 lb ai/A比率实施咪草烟处理。收集应用除草剂后存活下来的15株M2植物,转入温室。
通过在种子出芽后的3-叶期,按0.125 lb ai/A的比率在温室中应用咪草烟,来确认这些植物后代(M3)的除草剂抗性。总共5200万株M2植物产生15株抗性植物,成功率大约是每筛选350万突变种子确定一株咪唑啉酮抗性突变植物。
从抗性M3植物收集M4后代种子,用于田间试验。田间试验包括8个平行组。各组都含有100行,长度为4英尺。各组有74行M4抗性品系。15个抗性品系中每一种品系,每组含有多行;因为当时每种品系可用的种子数量不同,每种品系的行数也不同。每一平行组还含有16行非抗性栽培品种“Cypress”作为阴性对照,和10行提早发育的除草剂抗性稻作为阳性对照。(阳性对照是ATCC 97523或ATCC 97523与ATCC 75295的杂交品种)。
在稻生长到出芽后3-叶期时,对8个平行组中各组出苗后实施一种不同的除草剂处理。对照组用4夸脱/英亩ArrosoloTM处理。ArrosoloTM是一种目前已经商业化使用于传统稻品种的除草剂。其余7组用咪唑啉酮除草剂如下处理:(1)0.125 lb ai/A咪草烟(商品名PursuitTM);(2)0.188 lb ai/A imazethapyr;(3)0.063 lb ai/Aimazapic(商品名CardreTM);(4)0.125 lb ai/A imazapic;(5)0.05lb ai/A imazapyr(商品名ArsenalTM);(6)0.09 lb ai/A imazapyr;以及(7)0.052 lb ai/A 75%imazapyr和25%imazapyr(商品名LightningTM)混合物。
请注意所有受试除草剂的应用率等于或大于相同除草剂用在其它植物上的推荐应用率。
在播撒后3周和成熟时都测定了除草剂抗性的水平。没有一行受到传统稻除草剂ArrosoloTM对照处理的明显损害。相反的,7种咪唑啉酮处理中各种处理对非抗性的Cypress稻行产生100%的控制,在112个处理行中没有任何存活植物。每一组中各除草剂抗性M4后代行,以及每一组中各除草剂抗性阳性对照,由各种咪唑啉酮处理所引起的损害表现不显著或没有损害。用咪唑啉酮处理过的抗性M4后代的各行,和用咪唑啉酮处理过的除草剂抗性阳性对照各行,与用ArrosoloTM处理过的各行(比较)在株高、活力、成熟时间方面没有可见的差别,并且没有可见的除草剂损害。
从15个M4后代品系中各品系所收获的种子样本,也就是说,15个独立品系中各品系的M5种子样本;这些品系被本发明人命名为SSC01,SSC02,SSC03,SSC04,SSC05,SSC06,SSC07,SSC08,SSC09,SSC10,SSC11,SSC12,SSC13,SSC14和SSC15,于1998年11月5日分别保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC),10801 University Boulevard,Manassas,Virginia 20110-2209;所分配的ATCC保藏号分别是203419,203420,203421,203422,203423,203424,203425,203426,203427,203428,203429,203430,203431,203432和203433。各保藏物按照ATCC与本专利申请的受让方,路易丝安娜州立大学督学委员会(Board of Supervisors of Louisana State University)与农业和机械学院(Agricultural and Mechanical College)之间的合同保藏。与ATCC之间签定各项合同都约定,一旦描述和确定本保藏物或本公开的美国专利被颁发,或向公众公开的任何美国或外国专利申请,无论那一种先发生,公众即可永久和不受限制地获取这些种子或其后代,而且美国专利及商标局局长(或其它任何国家任何专利局中的相应的人)据有关法令和法规所确定的有资格的人可获取这些种子。本申请的受让人同意,如果被保藏的任何种子在适宜条件下种植时变得无生存活力或被丢失或毁坏时,一旦获得通知,将立即用相同种子的一个可存活的样本替换这些种子。
实施例16-27
额外有大约6000万粒突变的M2稻种子被筛选。通过将总共300磅稻栽培品种℃ypress”的种子(M1)在0.175%(按重量)突变剂EMS水溶液中浸泡23小时,产生突变种子。
EMS处理之后,用水彻底漂洗M1种子,在用播撒方式种植到浅水中以前抽干,浅水24小时以后抽干。三天以后再次漫灌农田,农田维持漫灌,直至抽干用于收获。收获的M2种子贮存过冬,来年春季筛选除草剂抗性。在用播撒方式播种和浅土掺入方式播种大约60000万粒M2种子之后,以0.125 lb ai/A(每英亩活性成分的磅数)的速率在一半农田上喷洒imazapic(商品名CardreTM),实施出芽前应用,以0.10lb ai/A在3-叶期给其余一半农田实施imazapyr(商品名ArsenalTM)的出芽后应用。收集应用除草剂之后存活的23株M2植物,转移到温室。以后的试验(描述如下)显示这些植株中12株代表新型除草剂抗性;其它植物或者是“逃逸植物”(没有喷洒到除草剂的植物),或者是上一个季节残留在土壤中的ATCC97533品系的“志愿者种子”。
总共6000万粒M2植物的12株抗性植物代表大约每筛选500万粒突变种子确定1株咪唑啉酮抗性突变体的成功率。
在温室中用如下的除草剂操作确认这些植物(M3)后代的除草剂抗性:出芽前应用0.025 lb ai/A imazethapyr(商品名PursuitTM);出芽后应用0.063 lb ai/A imazethapyr;芽前应用0.010 lb ai/Asu]fometuron methyl(商品名OustTM);出芽后应用0.05 lb ai/Asulfometuron methyl;出芽前应用0.10 lb ai/A nicosulfuron(商品名AccentTM);出芽后应用0.05 lb ai/A nicosulfuron。将23种除草剂抗性品系中各品系的两粒M3种子种植在每种处理的4个平行罐的各个罐中。用(非抗性的)Cypress和Bengal稻种子做对照品系的等价种植。
从这些M4后代品系中数种收获种子样本;即,从被本发明人指定义为PWC16,PWC23,CMC29,CMC31,WDC33,WDC37和WDC38的7个独立品系中各品系收获M5种子的样本;在1999年11月2日分别保藏在美国典型培养物保藏中心,10801 University Boulevard,Manassas,Virginia(ATCC)20110-2209;所分配的ATCC保藏号分别为aaaaa,bbbbb,ccccc,ddddd,eeeee,fffff和ggggg。这些保藏物中每一种按照ATCC和本专利申请的受让人,路易丝安娜州立大学督学委员会(Board of Supervisors of Louisana State University)与农业和机械学院(Agricultural and Mechanical College)之间的合同保藏。与ATCC之间签定各项合同都约定,一旦描述和确定本保藏物或本公开的美国专利被颁发,或向公众公开任何美国或外国专利申请,无论那种先发生,公众可永久和不受限制地获取这些种子或其后代,而且美国专利及商标局局长(或其它任何国家任何专利局中的相应人)据有关法令和法规所确定的有资格的人可获取这些种子。本申请的受让人同意,如果被保藏的任何种子在适宜条件下种植时变得无生存活力或被丢失或毁坏时,一旦获得通知,将立即用相同种子的一个可存活样本替换这些种子。
其它5种品系,被发明人指定义为PWC17,PWC19,PWC21,PWC22和CMC27,表现出较低水平的除草剂抗性。这些品系似乎与现已经被ATCC收藏的品系以及先前的ATCC 97523品系都不同。因为它们的抗性水平较低,因而没有在当前申请国际递交日被ATCC保藏。然而,这些品系具有作为育种物质与其它来源的除草剂抗性杂交或彼此杂交从而提高总抗性水平的潜在价值。如果这5种品系较之ATCC所收藏品系涉及不同的抗性机制,或不同的AHAS同工酶,那么将这些品系之一与ATCC所保藏品系之一杂交能产生总抗性水平提高的杂种。然而,它们的除草剂抗性水平似乎不会使这5种品系中任何一种单独成为培育新除草剂抗性稻品系的适宜候选者。
进一步的田间试验和温室试验
进行进一步的田间试验和温室试验评价抗性稻品系的耐受性。田间试验包括出芽前和出芽后除草剂应用的研究。因为当时缺少足量的种子,品系WDC 37仅被包括在出芽前应用研究中;除此之外,同样的品系都被包括在这两项试验中。
出芽前应用的除草剂是灭草喹,咪草烟和imazapic。每一种处理均应用于两块平行畦中的各畦。各平行畦均含有三英尺长的各除草剂抗性品系的行,以及一个无抗性稻核对行。留两畦不喷洒作为未处理对照。全部除草剂抗性品系都表现出很小的或未表现出除草剂应用损害。相反的,无抗性稻品种Cypress的全部核对行在所有给予除草剂处理的畦中或者被杀死,或者受到严重的损害。
除了品系WDC37没有包括在出芽后大田研究中以外,在相同除草剂抗性品系的50块平行畦中均进行出芽后应用的研究。对于出芽后大田研究,在两块平行畦中各畦上应用每一种处理。留四畦不喷洒,作为未处理对照。进行过出芽后研究的除草剂处理是咪草烟(PursuitTM),imazapic(CardreTM),咪草啶酸(RatorTM),imazapic和灭草烟的1∶1(按重量)混合物,imazapic(CardreTM)和灭草烟(ArsenalTM)的3∶1(按重量)混合物,灭草烟(ArsenalTM),氯嘧黄隆(ClassicTM),甲黄隆(AllyTM),烟嘧黄隆(AccentTM),玉嘧黄隆(MartrixTM),噻黄隆(Harmony ExtraTM)和苯黄隆的2∶1(按重量)混合物,以及嘧硫苯甲酸钠(StapleTM)。
温室试验包括利用与出芽后田间试验相同的除草剂和给药率进行的两个平行研究。温室研究评估了一些品系的出芽后除草剂抗性,这些品系此后可以获得的种子的量不足以使其被包括在田间试验中。将抗性品系的种子种植在2英寸×2英寸的泥炭罐中,然后3-4叶期喷洒幼苗。非抗性核对品系被包括在内用做比较。正如在田间试验中一样,非抗性核对要么被除草剂处理杀死,要么受到除草剂处理的严重损害。
这些田间试验和温室试验的结果概括在表3和表4中。结果和讨论
先前,利用种子暴露于EMS之后筛选来选择咪唑啉酮抗性稻,产生极少的抗性稻品系。例如,M1种子暴露于0.5%EMS 16小时之后筛选大约3500万粒M2种子产生唯一一株除草剂抗性突变抗性植物,成功率是每3500万突变种子一株突变体。相反的,本文所报道的两个系列筛选每一个都有一个显著地更高的产生除草剂抗性突变体的成功率。不愿意局限于本理论地,据信效率的改进是因为突变剂浓度和所使用暴露时间的差异。
该处描述的效率更高的突变操作程序,使用一种相对更长时间地(将种子)暴露于比先前所使用浓度相对更低的突变剂的(方法)。在实施例1-15中平均突变剂暴露时间为22.75小时,而EMS浓度是0.175%。与早期筛选3500万种子的唯一一个成功事件比较,这代表平均暴露时间延长42%,而突变剂浓度减少65%。结果是抗性突变体回收率增加10倍(350万种子之一对3500万种子之一)。
实施例16-27使用与实施例1-15相似的条件,也更有效地产生抗性突变体。使用同样的突变剂浓度(0.175%),而暴露时间仅稍有不同(23小时对平均22.75小时)。在该试验中除草剂抗性突变体生产率是每500万粒种子1株植物。这些结果显示更长时间地暴露于更低浓度除草剂一般似乎是获得更高的除草剂抗性突变体的成功率。
这两个筛选的抗性突变体,每一个都显示对一种或多种咪唑啉酮和磺酰脲除草剂具有抗性。在这些启始抗性筛选中使用的除草剂概括列在表1中。实施例1-15田间试验的结果(从SSC01到SSCl5)列在表2中。实施例16-27田间试验的结果(这些抗性具有名称PWC,CMC或WDC)列在表3和表4中。请注意表1,表2和表3中用药率按每英亩的活性成分的磅数给出,而表4中以每英亩的活性成分的盎司数给出。
表1-筛选除草剂应用
| 筛选除草剂应用(lb ai/A) | |||
| 品系 | 咪草烟0.125出芽前+0.063出芽后 | 灭草烟0.10出芽后 | Imazameth0.125出芽后 |
| SSC01 | X | ||
| SSC02 | X | ||
| SSC03 | X | ||
| SSC04 | X | ||
| SSC05 | X | ||
| SSC06 | X | ||
| SSC07 | X | ||
| SSC08 | X | ||
| SSC09 | X | ||
| SSC10 | X | ||
| SSC11 | X | ||
| SSC12 | X | ||
| SSC13 | X | ||
| SSC14 | X | ||
| SSC15 | X | ||
| PWC16 | X | ||
| PWC17 | X | ||
| PWC18 | X | ||
| PWC19 | X | ||
| PWC20 | X | ||
| PWC21 | X | ||
| PWC22 | X | ||
| PWC23 | X | ||
| PWC24 | X | ||
| CMC25 | X | ||
| CMC26 | X | ||
| CMC27 | X | ||
| CMC28 | X | ||
| CMC29 | X | ||
| CMC30 | X | ||
| CMC31 | X | ||
| WDC32 | X | ||
| WDC33 | X | ||
| WDC34 | X | ||
| WDC35 | X | ||
| WDC36 | X | ||
| WDC37 | X | ||
| WDC38 | X |
表2-筛选后除草剂测试
| 除草剂应用率(lbai/A);&出芽前或出芽后应用 | |||||||||||||
| 咪草烟 | 灭草烟 | Imazameth | 咪草烟(75%)+灭草烟(25%) | 嘧黄隆 | 烟嘧黄隆 | ||||||||
| 品系 | 0.125前 | 0.03后 | 0.125后 | 0.188后 | 0.05后 | 0.09后 | 0.063后 | 0.125后 | 0.052后 | 0.10前 | 0.05后 | 0.10前 | 0.05后 |
| SSC01 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | O | X | X |
| SSC02 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | O | X | X |
| SSC03 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | O | X | X |
| SSC04 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | X | X |
| SSC05 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | O | X | X |
| SSC06 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | X | X |
| SSC07 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | O | X | X |
| SSC08 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | X | X |
| SSC09 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | O | X | X |
| SSC10 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | X | X |
| SSC11 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | O | X | X |
| SSC12 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | O | X | X |
| SSC13 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | O | X | X |
| SSC14 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | O | X | X |
| SSC15 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | O | X | x |
| PWC16 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| PWC17 | X | X | X | O | X | X | |||||||
| PWC18 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| PWC19 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| PWC20 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| PWC21 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| PWC22 | X | ||||||||||||
| PWC23 | X | X | X | X | X | X | |||||||
| PWC24 | X | X | X | O | X | X | |||||||
| CMC25 | X | X | X | O | X | X | |||||||
| CMC26 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| CMC27 | |||||||||||||
| CMC28 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| CMC29 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| CMC30 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| CMC31 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| WDC32 | X | X | X | X | X | X | |||||||
| WDC33 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| WDC34 | X | X | X | O | X | X | |||||||
| wDC35 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| WDC36 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| WDC37 | X | X | O | O | X | X | |||||||
| WDC38 | X | X | O | O | X | X |
表2的注释:X=抗性;O=敏感(对除草剂表现野生型反应);空白=还没有测试。
表3-筛选后除草剂测试
| 除草剂应用率(lbai/A);&出芽前或出芽后应用 | ||||||||||||||||
| 咪草烟 | Imazapic | 灭草喹 | 咪草啶酸 | Imazapic0.05+灭草烟0.05 | ||||||||||||
| 品系 | 0.063前 | 0.125前 | 0.188前 | 0.063后 | 0.125后 | 0.037前 | 0.075前 | 0.15前 | 0.075后 | 0.15后 | 0.125前 | 0.25前 | 0.375前 | 0.05后 | 0.10后 | 后 |
| SSC01 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC02 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC03 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC04 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC05 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC06 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC07 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | X |
| SSC08 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC09 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC10 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC11 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC12 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC13 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | X |
| SSC14 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | X |
| SSC15 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | O | X |
| PWC16 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| PWC23 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| CMC29 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| CMC31 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| WDC33 | X | X | X | X | X | X | X | |||||||||
| WDC37 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | |||||||
| WDC38 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
表3的注释:X=抗性;O=敏感(对除草剂表现野生型反应);空白=还没有测试。
表3(续)-筛选后除草剂测试
| 除草剂应用率(lb ai/A);& 出芽前或出芽后应用 | ||||
| Imazapic 0.075+灭草煾0.025 | Imazapic 0.15+灭草烟0.05 | 灭草烟 | ||
| 品系 | 后 | 后 | 0.05后 | 0.10后 |
| SSC01 | X | X | X | X |
| SSC02 | X | X | X | X |
| SSC03 | X | X | X | X |
| SSC04 | X | X | X | X |
| SSC05 | X | X | X | X |
| S5C06 | X | X | X | X |
| SSC07 | X | X | X | X |
| SSC08 | X | X | X | X |
| SSC09 | X | X | X | X |
| SSC10 | X | X | X | X |
| SSC11 | X | X | X | X |
| SSC12 | X | X | X | X |
| SSC13 | X | X | X | X |
| SSC14 | X | X | X | X |
| SSC15 | X | X | X | X |
| PWC16 | X | X | X | X |
| PWC23 | X | X | X | X |
| CMC29 | X | X | X | X |
| CMC31 | X | X | X | X |
| WDC33 | X | X | X | X |
| WDC37 | ||||
| WDC38 | X | X | X | X |
表3的注释:X=抗性;O=敏感(对除草剂表现野生型反应);空白=还没有测试
表4-筛选后除草剂测试
| 除草剂应用率(盎司ai/A);&出芽前或出芽后应用 | ||||||||||||
| 氯嘧黄隆 | 甲黄隆 | 烟嘧黄隆 | 玉嘧黄隆 | 噻黄隆(66.7%)+苯黄隆(33.3%) | 嘧硫苯甲酸钠 | |||||||
| 品系 | 0.125后 | 0.250后 | 0.06后 | 0.12后 | 0.5后 | 1.0后 | 0.20后 | 0.40后 | 0.45后 | 0.90后 | 1.0后 | 2.0后 |
| SSC01 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC02 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC03 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC04 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC05 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC06 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC07 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC08 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC09 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC10 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC11 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC12 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC13 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC14 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| SSC15 | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X | X |
| PWC16 | O | O | X | X | X | O | O | O | X | X | X | X |
| PWC23 | O | O | X | X | X | O | O | O | X | X | X | X |
| CMC29 | O | O | O | X | X | O | O | O | X | X | X | X |
| CMC31 | O | O | O | X | X | X | O | O | X | X | X | X |
| WDC33 | X | X | X | X | O | O | O | O | X | X | X | X |
| WDC37 | ||||||||||||
| WDC38 | O | O | O | X | X | X | O | O | O | X | X | X |
表4的注释:X=抗性;O=敏感(对除草剂表现野生型反应);空白=环没有测试在CMC29,CMC31,和WDC38品系的甲黄隆条目中,以及WDC38(权)的噻黄隆-苯黄隆条目中,按较低的应用率,其反应与野生型相同,都是全部在较低的应用率中存活;然而,在较高的应用率时,野生型植物被严重损伤,而CMC29,CMC31,和WDC38品系表现出明显较低的损伤。
进一步检查这些植物得出结论,即以下除草剂抗性品系似乎与先前的除草剂抗性品系ATCC 97523相同,估计可能是因为先前试验的一些ATCC 97523种子在土壤中于生长季节之间维持休眠状态:PWC18,PWC20,PWC24,CMC25,CMC26,CMC28,CMC30,WDC32,WDC34,WDC35和WDC36。
增强的抗性将产生于新稻品系彼此之间杂交。增强的抗性也产生于一个或多个新稻品系与其抗性AHAS酶、公开在美国专利5,545,822号中的以代谢为基础的抗性稻品系,以ATCC保藏号75295稻为典型代表的杂交的协同。正如本发明人已经公开的国际申请WO 97/41218一样,这些协同效应已经在ATCC保藏号75295稻和ATCC保藏号97523稻的杂交稻中观察到,后者稻中具有突变的抗性AHAS酶。田间突变选择程序的说明
以下程序用于在田间筛选大量突变的具有除草剂抗性的稻种子。
可在不同的生长阶段和不同的培养条件下暴露于突变剂或可以诱导突变的条件,例如将干种子、在水中萌芽24小时的种子,或在水中萌芽48小时的种子等暴露于突变剂;或者以组织培养培养细胞,例如花粉囊培养、使用或不使用除草剂;等等。
为了生产种子而种植的稻一般在收获后清除。一旦清除完成,任何标准种植设备都能够满意地使用。然而,如果种植设备能够忍受通常伴有联合收割的稻稻草和无关物质,那么这个费力费时的清除步骤就能够被回避。消除这个步骤使得要被种植,筛选和增加的种子可以产生。例如,在拖拉机上使用一种微调控制器/延辗机,使得伴有适量无关物质的稻可按播撒方式播种。播撒方式还比钻孔方式更快,节约进一步的时间和劳力。用微调控制器/延辗机播种,(种子)既能够在播撒之后轻轻地掺入土壤,也可以留在土壤表面,在这种情况下如果降雨不足就必须通过灌溉保持足够的湿度。
刚收获的稻种子可能有一定程度的休眠,这防止在其它一些方面有活性的种子快速萌发。这种休眠通常在贮存期间消失。然而,如果为了加快代时,在收获后马上将所收获种子播种用于筛选,那么减少或消除休眠是有益的。消除休眠的一种方法是将种子暴露于大约50℃大约5天。在该处理期间应该允许湿气从种子中逸出,所以应该使用相对小的透湿气物质的容器,例如棉布袋。备选的,可放置仍附着有圆锥花序的茎,以使湿气可以在圆锥花序上循环,例如,可将它们直立于纸袋中。作为进一步的备择(方法),如果放置种子以使湿气不被截留在谷物区周围,那么可以使用强制空气干燥,可在袋中贮存也可不贮存。
在喷洒突变稻种子或植物鉴定抗性个体时,重要的是取得尽可能一致和精确的处理。因为真正的抗性个体将是种子总数的一个很小的分数,甚至小量的“逃逸”(也就是说,假阳性,偶然地没有接受任何除草剂的植物)就能使筛选过程复杂化和并被延缓。因此,喷洒除草剂的设备应该处于好的状态,并且校正得尽可能准确。沿着喷洒吊竿(排列)的各个喷嘴应该按相同的体积速率释放喷雾。喷嘴应该准确排列以避免在喷嘴之间重叠喷雾不足。相对短的拖拉机喷洒吊竿(例如,大约12英尺)有助于减少喷雾期间不期望的吊竿移动。
适当的喷嘴包括如下所列,其中每一个都有一个平的喷洒尖端,以大约平方英寸(标准尺寸)喷洒压力,一个20英寸的喷嘴间距,按所显示的基础速度:8001VS(2mph),80015VS(3mph),8002VS(4mph),8003VS(5mph),每英亩喷洒大约15加仑。(Spraying System Co.,Wheaton,Illinois)为了优化喷洒模式,喷嘴离开靶的高度(植物天篷的顶部,或者土壤)应该进行调整,以使每一喷嘴的喷洒方式与相临喷嘴的喷洒方式重叠大约30%(正如线性测量一样)。使用如上所列的80度喷嘴,按40psi喷洒压力,和一个20英寸的喷嘴间隔时,在靶上方的正确喷洒高度将会是17-19英寸。保持其它参数不变,但是将喷嘴间隔变化到30英寸,正确的喷洒高度将会是26-28英寸。典型的,使用低于40psi的喷洒压力将会,减少喷嘴喷洒角度,而且调整到一个更低的喷洒高度对于在低压下获取合适的重叠是必需的。全部喷洒设备应于使用前精确校正。
正如除了位于农田末端的那些标记以外,更大块农田中场处的标记一样,喷洒时仔细测量记号标记来指导喷洒装置的操作者,常常是有益的。风速应该基本是零,这是一种常见早晨和傍晚的条件。如果预期在大约下6小时之内(该时间可变化,取决于特定的除草剂)会下雨,那就不应该进行喷洒。出芽前喷洒应该应用在干燥土地上。如果除草剂必需湿气活化,那么在种植之后灌溉或雨水是必需的。
喷洒的一致性最好是通过将除草剂平均分开,相继在两个连续喷洒之间平均使用。喷洒溶液按最终处理浓度的一半制备。然后在相反的方向进行两遍以实现所需的总处理浓度。例如,如果在特定的行上的第一个通过是由北到南方向,那么第二个在由北到南方向进行。当用拖拉机喷洒时,这可能通过在相同路线的相反方向上行进进行第二次喷洒来完成。
使用大喷洒体积(也就是说稀释除草剂的浓度)和小喷洒液滴大小来提高完整的覆盖范围。每英亩30-40加仑的喷洒体积已经很有效,特别是对每英亩15-20加仑应用两次。每平方英寸(gauge)30-40磅的喷洒压力在产生能提供彻底覆盖的精细喷洒方面已经很有效。喷嘴应该平均隔开,优选大约20英寸间隔。
筛选所使用的除草剂的总给药率,优选是该除草剂的通常使用率的至少两倍。例如,如果0.063lb ai/A是植物的通常使用率,那么选择抗性个体的适宜浓度将会是以同样比率应用两次,产生0.125lbsai/A的总处理。
两次喷洒联合、大喷洒体积、高喷洒压力和一个增高的处理浓度,有助于将“逃逸”的发生率减少到最小,也就是说,不是真正抗性而是仅仅因为他们受到不充分地喷洒才得以生存过本程序的个体。
用具有土壤及叶活性的除草剂进行筛选具有优势。除草剂的土壤活性能被直接用来筛选出芽前应用但却仍然生长的抗性个体。备择的,出芽前给药可用来消除大百分数的非抗性个体,其后对存活下来的个体实施叶面给药。早期林分密度的稀疏化将极大地减轻喷洒截留的问题,否则就可能在幼苗的厚林分密度中发生这个问题,也就是说,物理上被其它幼苗遮盖从而不能接受喷洒的幼苗的可能性。
使用一种适宜的除草剂同时土壤和叶面给药,还能减少‘逃逸”的问题,因为除草剂的土壤活性常常会消除逃逸叶面喷洒的个体。当使用主要具有或仅仅具有叶面活性的除草剂时,由于两个理由,可能必需两次额外的喷洒。一个理由是消除逃逸叶面喷洒的非抗性个体。还很重要的是消除起源于晚发芽种子的非抗性个体。从喷洒后发芽的种子培育而来的植物将不会被仅仅具有叶面活性的除草剂所控制。在两周内,这样的植物会达到一个似乎是渡过叶面处理的抗性突变体的大小。如果第二次叶面喷洒是所不希望的或是不可能的,那么一种选择是在第一次用药时留一小块面积的农田不喷洒,以提供确定抗性幼苗在干预期所应该获得的大小的一个直接标准。
使用既具有土壤活性有具有叶面活性的除草剂还展现了在相同个体内同时有效筛出芽前抗性和出芽后抗性的机会。这种选择可通过顺序用药完成。存在于顺序应用的个体是对该除草剂既有出苗前又有出苗后处理抗性的可能性是大的。
筛选程序处于进行之中时,应该当心少数存活个体不被鸟类和昆虫食用。这在实施出芽后处理时特别重要,但对于出芽前处理也很重要。发声设备可用来驱散鸟类,例如黑鸟,它们吃稻的种子和小幼苗。昆虫,例如秋粘虫和稻水象
虫,还可能杀死幼小的幸存者,通常期望在预防的基础上应用一种杀虫剂。如果调查人员不选择预防性地使用驱鸟设备或杀虫剂,那么就应该进行每日状态监测。其它
利用本领域中已知的常规的育种实践,用以上所确定的各种抗性母本品系培育后代。一旦确定后代是可证明的抗性的,就用那些后代用来培育用于商业用途的各种品种。通过标准方式将抗性稻和其它稻种质杂交或回交,将会产生除草剂抗性稻品种和具有高产性能以及其它农业经济所期望的性质的杂交种。
因为红稻和商业化稻属于相同的属,种植除草剂抗性的商业化稻植物必然具有一些将抗性转移给红稻的风险。然而,稻是自身传粉的,远交频率低,即使是在同步开花的直接相邻的植物之间。将抗性转移给红稻的可能性,能够通过培育开花明显早于红稻的抗性品种使其减少到最小(例如,使用传统的育种技术,或者利用组织培养例如花药培养)。在抗性品系中维持一个早熟表型,例如,将是减少与红稻的远交可能性所期望的。该外,培育更高水平的抗性(例如,通过将具有不同AHAS同工酶的品系彼此杂交,或者将具有抗性AHAS酶的品系与具有代谢抗性的ATCC 75295号杂交)将可通过应用高于远交红稻所能耐受的除草剂给药率,使远交红稻得到控制。
如果一株红稻仍然产生和抗性商品稻相同的除草剂抗性,总能够用广谱范围的其它可以获得的除草剂来处理植物--特别是如果抗性红稻被发现的早,还没有很多机会繁殖的时候。
因为每一种受试除草剂都抑制乙酰羟酸合酶的活性,又因为在新品系中已经证明出对这些除草剂中各种除草剂的抗性,所以希望新型除草剂抗性稻将对其它通常抑制该酶的除草剂显示抗性。除了以上所讨论的那些,这些除草剂包括其它咪唑啉酮和磺酰脲类除草剂,至少包括下列除草剂:氟嘧黄隆(primisulfuron),绿黄隆(chlorsulfuron),咪草酯(imazamethabenz methyl)和醚苯黄隆(triasulfuron)。在本技术中公知的其它种类的AHAS除草剂包括三唑并嘧啶、氨磺酰脲、磺酰基羧酰胺、磺酰胺、嘧啶基氧苯甲酸酯或盐,2-苯并[c]呋喃酮,嘧啶基水杨酸盐或酯,氨基甲酰基二氢吡啶、磺酰亚氨基-三嗪异唑、N端保护的缬氨酰苯胺、磺酰胺嗪、嘧啶基马来酸、苯磺酰羧酰胺、取代的磺酰二胺,和醌-O。
当在说明书和权利要求书中使用时,术语“锈导突变的条件”指将在植物基因组内以基本高于背景比率的比率引起突变的条件。许多这样的条件对于本技术领域中的人员是公知的。它们包括,例如,如前所述将种子暴露于化学突变剂或电离辐射。这些条件还包括在组织培养(花药培养,愈伤组织培养,悬浮培养,原生质体培养,等)中培育细胞,慎重地将细胞暴露于或不暴露于除组织培养中所固有的诱导突变的条件之外的附加的诱导突变的条件。(已知组织培养本身能够产生遗传变异,包括突变。)根据所使用的特定的诱导突变的条件,可在生活周期的不同阶段最佳地诱导突变,例如,利用干种子,利用发芽前的种子,等等。
当在说明书和权利要求书中使用时,术语“咪唑啉酮”是指一种除草剂组合物,包括一种或多种咪唑啉酮类化合物,作为示例但是不具有限定作用地包括2-(2-咪唑啉-2-基)嘧啶、2-(2-咪唑啉-2-基)喹啉和2-(2-咪唑啉-2-基)苯甲酸酯,或其衍生物,包括它们具有除草剂活性的旋光异构体,非对映体和/或互变异构体,作为例子但是不具有限定作用地包括2-[4,5-二氢-4-甲基-4-(1-甲基乙基)-5-氧代-1氢-咪唑-2-基]-3-喹啉羧酸(普通名为灭草喹(imazaquin));2-[4,5-二氢-4-甲基咪草烟-4-(1-甲基乙基)-5-氧代-1氢-咪唑-2-基]-5-乙基-3-吡啶羧酸(普通名为咪草烟(imazethapyr));以及2-[4,5-二氢-4-甲基-4-(1-甲基乙基)-5-氧代-1氢-咪唑-2-基]-5-(甲氧基甲基)-3-吡啶羧酸(普通名为咪草定酸(imazamox));2-[4,5-二氢-4-甲基-4-(1-甲基乙基)-5-氧代-1氢-咪唑-2-基]-3-吡啶羧酸(普通名为灭草烟(imazapyr));2-[4,5-二氢-4-甲基-4-(1-甲基乙基)-5-氧代-1氢-咪唑-2-基]-5-甲基-3-吡啶羧酸(普通名为imazameth,也称为imazapic);以及说明书中给出的咪唑啉酮的其它例子。
当在说明书和权利要求书中使用时,术语“磺酰脲”是指一种除草剂组合物,包括一种或多种磺酰脲类化合物,它们一般包括一个连接两个芳香环或杂芳香环的磺酰脲桥,-SO2NHCONH-,作为示例但是不具有限定作用地包括2-(((((4,6-二甲氧基嘧啶-2-基)氨基羰基))氨磺酰基))-氮,氮-二甲基-3-吡啶甲酰胺(普通名为烟嘧黄隆(nicosulfuron));3-[4,6-双(二氟甲氧基)-嘧啶-2-基]-1-(2-甲氧基羰基苯磺酰基)脲(普通名为primisulfuron);2-[[[[(4,6-二甲基-2-嘧啶基)氨基]羰基]氨基]磺酰基]苯甲酸甲酯(普通名嘧黄隆(sulfometuron methyl));2-[[[[(4-甲氧基-6甲基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]羰基]氨基]磺酰基]苯甲酸甲酯(普通名甲黄隆(metsulfuron methyl));甲基-2[[[[N-(4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三嗪-2-基)甲氨基]羰基]氨基]磺酰基]苯甲酸酯(普通名为苯黄隆(tribenuron methyl));甲基-3-[[[[(4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]羰基]氨基]磺酰基]-2-噻吩羧酸酯(普通名为噻黄隆(trifensulfuron methyl));2-氯-氮-[(4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基羰基]苯磺酰胺(普通名为chlorsulfuron);2-[[[[(4-氯-6甲氧基嘧啶-2-基)氨基]羰基]氨基]磺酰基]苯甲酸乙酯(普通名为氯嘧黄隆(chlorimuron ethyl));2-[[[[氮-(4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三嗪-2-基)甲氨基]羰基]氨基]磺酰基苯甲酸甲酯(普通名为苯黄隆(tribenuron methyl));3-(6-甲氧基-4-甲基-1,3,5-三嗪-2-基-)-1-[2-(2-氯乙氧基)一苯磺酰基]-脲(普通名为triasulfuron);以及在说明书中给出的其它磺酰脲除草剂。
当在说明书和权利要求书中使用时,除非另外上下文明确说明,术语“植物”定义为包括处于任何成熟时期的植物,以及获取自或来源于任何一种这样植物的细胞、组织或器官,包括但是不限定于任何种子、叶、茎、花、果实、根、块茎、单个细胞、配子、花药培养物、愈伤组织培养物、悬浮培养物、其它组织培养物或原生质体。
除非另外有上下文明确说明,一种植物的“后代”包括其祖先可以追溯到该植物的任何后代植物。
除非有上下文明确说明,一种除草剂抗性植物的“衍生物”既包括该除草剂抗性植物的后代,术语“后代”如上定义;也包括该植物的任何突变体、重组体、或遗传工程衍生物,无论它们是属于同样的种还是属于不同的种;在这里,无论在那一种情形中,原始除草剂抗性植物的除草剂抗性特征已经被转移给衍生的植物。因此,一种具有抗性AHAS酶的稻植物的衍生物将包括,作为示例而不具限定作用地,以下表达相同抗性AHAS酶的植物中任何一种:F1后代稻植物、F2后代稻植物,以及F30后代稻植物。
应该理解如下定义以便在全部说明书和权利要求书中使用。一种“有功能的”或“正常的”AHAS酶是一种能催化必需氨基酸异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸合成途径中第一步反应的酶。一种“野生型”AHAS酶或野生型”AHAS序列分别是出现于一个特定物种的除草剂敏感性成员中的一种AHAS酶或编码AHAS酶的DNA序列。一种“抗性”植物是一种产生有功能的AHAS酶,并且在一种通常抑制AHAS酶的除草剂的通常的抑制性水平上能到达成熟的植物。术语“抗性的”或“抗性:在这里使用时,还定义为包括“耐受的”植物,也就是说,那些在表型上被证明,对一种或多种AHAS除草剂有不利的但并不是致死性反应的植物。一种“抗性的”AHAS酶,当利用各自酶活性的体外试验测量时,是一种在存在通常的抑制性水平的AHAS除草剂的条件下,保留了基本上大于野生型AHAS酶所保留的活性的功能性AHAS酶。一种野生型”或“敏感”植物是一种产生有功能的AHAS酶,并且对通常抑制AHAS酶的除草剂的通常的抑制性水平敏感的植物。请注意,在最后一个定义的构思中,野生型”植物包括栽培变种;名称野生型”是指出现或不出现通常水平的除草剂敏感性,在本说明书和权利要求书,关于一种特定植物是栽培的或人工选择的产物或者是以未栽培过的状态在自然界中发现的,术语野生型”没有做任何暗示。
据此,正如1998年11月5日所递交的美国临时专利申请序列号60/107,255的完整公开一样,本说明书中所引入的全部参考文献的完整公开通过参考文献的方式并入本发明。然而,万一发生了不能协调的矛盾,应以本发明书为准。
请注意除草剂的命名--以下的列出各种除草剂的商品名、普通名和化学名:PursuitTM(咪草烟(imazethapyr):(±)2-[4,5-二氢-4-甲基-4-(1-甲基乙基)-5-氧代-1氢-咪唑-2-基]-5-乙基-3-吡啶羧酸);ScepterTM(灭草喹(imazaquin):2-[4,5-二氢-4-甲基-4-(1-甲基乙基)-5-氧代-1氢-咪唑-2-基]-3-喹啉羧酸);AccentTM(烟嘧黄隆(nicosulfuron):2-(((((4,6-二甲氧基嘧啶-2-基)氨基羰基))氨基磺酰基))-N,N-二甲基-3-吡啶羧酰胺);BeaconTM(primisulfuron:3-[4,6-双(二氟甲氧基)-嘧啶-2-基]-1-(2-甲氧基羰基苯基磺酰基)脲);RaptorTM(咪草啶酸(imazamox):(+)-5-甲氧基甲基-2-(4-异丙基-4-甲基-5-氧代-2-咪唑啉-2-基)尼克酸;CardreTM(imazapic:(±)2-[4,5-二氢-4-甲基-4-(1-甲基-乙基)-5-氧代-1氢-咪唑-2-基]-5-甲基-3-吡啶羧酸;又名(±)2-(4-异丙基-4-甲基-5-氧代-2-咪唑啉-2-基)-5-甲基尼克酸);ArsenalTM(灭草烟(imazapyr):2-[4,5-二氢-4-甲基]-4-(1-甲基乙基)-5-氧代-1氢-咪唑-2-基)-3吡啶羧酸);OustTM(嘧黄隆(sulfometuron methyl):2-[[[[(4,6-二甲基-2-嘧啶基)氨基]羰基]氨基]磺酰基]苯甲酸酯);AllyTM(甲黄隆(metsulfuron methyl):2-[[[[(4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]羰基]氨基]磺酰基]苯甲酸甲酯);HarmonyTM(噻黄隆(thifensulfuron methyl)和苯黄隆(tribenuron methyl)的混合物:甲基-3-[[[[(4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]羰基]氨基]磺酰基]-2-噻吩羧酸酯和甲基-2[[[[N-(4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三嗪-2-基)甲基氨基]羰基]氨基]磺酰基]苯甲酸酯的混合物);PinnacleTM(噻黄隆(thifensulfuron methyl):甲基-3-[[[[(4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]羰基]氨基]磺酰基]-2-噻吩羧酸酯);GleanTM或TelarTM(ehlorsufuron:2-氯-氮-[(4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基羰基]苯磺酰胺);ClassicTM(氯嘧黄隆(chlorimuronethyl):2-[[[[(4-氯-6-甲氧基嘧啶-2-基)氨基]羰基]氨基]磺酰基苯甲酸乙酯];ExpressTM(苯黄隆(tribenuron methyl):2[[[[氮-(4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三嗪-2-基)甲氨基]羰基]氨基]磺酰基苯甲酸甲酯];AssertTM(imazamethabenz methyl:间-甲苯甲酸,6-(4-异丙基-4-甲基-5-氧代-2-咪唑啉-2-基),甲酯;和对-甲苯甲酸,2-(4-异丙基-4-甲基-5-氧代-2-咪唑啉-2-基)-,甲酯);和AmberTM(triasufuron:3-(6-甲氧基-4-甲基-1,3,5-三嗪-2-基)-1-[2-(2-氯乙氧基)-苯磺酰基]-脲);StapleTM(嘧硫苯甲酸钠(pyrithiobac sodium):2-氯-6-[(4,6-二甲氧基嘧啶-2-基)硫代]苯甲酸钠);和MatrixTM(玉嘧黄隆(rimsulfuron):氮-((4,6-二甲氧基嘧啶-2-基)氨基羰基)-3-(乙基磺酰基)-2-吡啶磺酰胺)。
Claims (81)
1.一种稻植物,其中:
(a)所说的植物的生长对于在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上的以下一种或多种下列除草剂的抑制具有抗性:咪草烟,imazapic,灭草烟,烟嘧黄隆,嘧黄隆,灭草喹,咪草啶酸,氯嘧黄隆,甲黄隆,玉嘧黄隆,噻黄隆,苯黄隆,嘧硫苯甲酸钠,或这些除草剂中任何一种除草剂的衍生物;和
(b)所说的植物是选自具有如下ATCC保藏号的植物的至少一种植物的衍生物:ATCC保藏号203419,203420,203421,203422,203423,203424,203425,203426,203427,203428,203429,203430,203431,203432,203433,aaaaa,bbbbb,ccccc,ddddd,eeeee,fffff和ggggg;和
(c)所说的植物有选自具有如下ATCC保藏号的植物的至少一种植物的特征性的除草剂抗性:ATCC保藏号203419,203420,203421,203422,203423,203424,203425,203426,203427,203428,203429,203430,203431,203432,203433,aaaaa,bbbbb,ccccc,ddddd,eeeee,fffff和ggggg。
2.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的咪草烟水平上的咪草烟的抑制具有抗性。
3.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的imazapic水平上的imazapic的抑制具有抗性。
4.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的灭草烟水平上的灭草烟的抑制具有抗性。
5.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的烟嘧黄隆水平上的烟嘧黄隆的抑制具有抗性。
6.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的嘧黄隆水平上的嘧黄隆的抑制具有抗性。
7.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的灭草喹水平上的灭草喹的抑制具有抗性。
8.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长还对在通常会抑制稻植物生长的氟嘧黄隆水平上的氟嘧黄隆的抑制具有抗性。
9.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的咪草啶酸水平上的咪草啶酸的抑制具有抗性。
10.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的氯嘧黄隆水平上的氯嘧黄隆的抑制具有抗性。
11.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的甲黄隆水平上的甲黄隆的抑制具有抗性。
12.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的玉嘧黄隆水平上的玉嘧黄隆的抑制具有抗性。
13.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的噻黄隆水平上的噻黄隆的抑制具有抗性。
14.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长还对在通常会抑制稻植物生长的苯黄隆水平上的苯黄隆的抑制具有抗性。
15.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常会抑制稻植物生长的嘧硫苯甲酸钠水平上的嘧硫苯甲酸钠的抑制具有抗性。
16.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203419植物,或者ATCC保藏号203419植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203419植物的特征性的除草剂抗性。
17.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203420植物,或者ATCC保藏号203420植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203420植物的特征性的除草剂抗性。
18.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203421植物,或者ATCC保藏号203421植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203421植物的特征性的除草剂抗性。
19.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203422植物,或者ATCC保藏号203422植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203422植物的特征性的除草剂抗性。
20.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203423植物,或者ATCC保藏号203423植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203423植物的特征性的除草剂抗性。
21.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203424植物,或者ATCC保藏号203424植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203424植物的特征性的除草剂抗性。
22.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203425植物,或者ATCC保藏号203425植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203425植物的特征性的除草剂抗性。
23.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203426植物,或者ATCC保藏号203426植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203426植物的特征性的除草剂抗性。
24.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203427植物,或者ATCC保藏号203427植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203427植物的特征性的除草剂抗性。
25.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203428植物,或者ATCC保藏号203428植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203428植物的特征性的除草剂抗性。
26.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203429植物,或者ATCC保藏号203429植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203429植物的特征性的除草剂抗性。
27.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203430植物,或者ATCC保藏号203430植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203430植物的特征性的除草剂抗性。
28.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203431植物,或者ATCC保藏号203431植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203431植物的特征性的除草剂抗性。
29.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203432植物,或者ATCC保藏号203432植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203432植物的特征性的除草剂抗性。
30.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号203433植物,或者ATCC保藏号203433植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号203433植物的特征性的除草剂抗性。
31.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号aaaaa植物,或者ATCC保藏号aaaaa植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号aaaaa植物的特征性的除草剂抗性。
32.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号bbbbb植物,或者ATCC保藏号bbbbb植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号bbbbb植物的特征性的除草剂抗性。
33.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号ccccc植物,或者ATCC保藏号ccccc植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号ccccc植物的特征性的除草剂抗性。
34.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号ddddd植物,或者ATCC保藏号ddddd植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号ddddd植物的特征性的除草剂抗性。
35.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号eeeee植物,或者ATCC保藏号eeeee植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号eeeee植物的特征性的除草剂抗性。
36.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号fffff植物,或者ATCC保藏号fffff植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号fffff植物的特征性的除草剂抗性。
37.权利要求1中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号ggggg植物,或者ATCC保藏号ggggg植物的任何后代;其中所说的植物具有ATCC保藏号ggggg植物的特征性的除草剂抗性。
38.一种控制权利要求1中所述稻植物附近杂草的方法,所说的方法包括给杂草和稻植物施用除草剂,其中除草剂包括咪草烟,imazapic,灭草烟,烟嘧黄隆,嘧黄隆,灭草喹,氟嘧黄隆,咪草啶酸,氯嘧黄隆,甲黄隆,玉嘧黄隆,噻黄隆,苯黄隆,嘧硫苯甲酸钠,或这些除草剂中任何一种除草剂的衍生物。
39.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203419植物,或者ATCC保藏号203419植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203419植物的特征性的除草剂抗性。
40.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203420植物,或者ATCC保藏号203420植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203420植物的特征性的除草剂抗性。
41.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203421植物,或者ATCC保藏号203421植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203421植物的特征性的除草剂抗性。
42.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203422植物,或者ATCC保藏号203422植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203422植物的特征性的除草剂抗性。
43.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203423植物,或者ATCC保藏号203423植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号20343植物的特征性的除草剂抗性。
44.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203424植物,或者ATCC保藏号203424植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203424植物的特征性的除草剂抗性。
45.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203425植物,或者ATCC保藏号203425植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203425植物的特征性的除草剂抗性。
46.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203426植物,或者ATCC保藏号203426植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203426植物的特征性的除草剂抗性。
47.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203427植物,或者ATCC保藏号203427植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203427植物的特征性的除草剂抗性。
48.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203428植物,或者ATCC保藏号203428植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203428植物的特征性的除草剂抗性。
49.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203429植物,或者ATCC保藏号203429植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203429植物的特征性的除草剂抗性。
50.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203430植物,或者ATCC保藏号203430植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203430植物的特征性的除草剂抗性。
51.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203431植物,或者ATCC保藏号203431植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203431植物的特征性的除草剂抗性。
52.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203432植物,或者ATCC保藏号203432植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203432植物的特征性的除草剂抗性。
53.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号203433植物,或者ATCC保藏号203433植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号203433植物的特征性的除草剂抗性。
54.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号aaaaa植物,或者ATCC保藏号aaaaa植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号aaaaa植物的除草剂抗性特征。
55.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号bbbbb植物,或者ATCC保藏号bbbbb植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号bbbbb植物的特征性的除草剂抗性。
56.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号ccccc植物,或者ATCC保藏号ccccc植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号ccccc植物的特征性的除草剂抗性。
57.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号ddddd植物,或者ATCC保藏号ddddd植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号ddddd植物的特征性的除草剂抗性。
58.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号eeeee植物,或者ATCC保藏号eeeee植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号eeeee植物的特征性的除草剂抗性。
59.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号fffff植物,或者ATCC保藏号fffff植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号fffff植物的特征性的除草剂抗性。
60.权利要求38中所述的一种方法,其中的植物是ATCC保藏号ggggg植物,或者ATCC保藏号ggggg植物的任何后代;其中的植物具有ATCC保藏号ggggg植物的特征性的除草剂抗性。
61.一种控制权利要求1中所述植物附近杂草的方法,所说的方法包括给杂草和稻植物应用一种除草剂,其中的除草剂包括氟嘧黄隆,醚苯黄隆,绿黄隆,咪草酯,或这些除草剂中任何一种除草剂的衍生物。
62.一种除草剂抗性稻植物,其中
(a)所说的除草剂抗性植物的生长对于在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上的至少一种通常抑制乙酰羟酸合酶的除草剂的抑制具有抗性;以及
(b)所说的除草剂抗性植物是通过将稻植物暴露于突变诱导条件;在至少存在在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上的一种通常抑制乙酰羟酸合酶的除草剂的条件下,从接受暴露的植物或者接受暴露植物的后代生长出稻植物;以及选择在除草剂存在下生长没有显著损害的用于进一步繁育的稻植物而获取的稻植物的衍生物;以及
(c)所说的除草剂抗性稻植物表达一种对在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上的至少一种通常抑制乙酰羟酸合酶的除草剂的抑制具有抗性的功能性的乙酰羟酸合酶。
条件是,排除在本权利要求范围之外的是:
(d)一种植物,其是ATCC保藏号97523植物;以及ATCC保藏号97523植物或ATCC保藏号97523植物任一后代的任何突变体,重组体,或者遗传工程衍生物;其中被排除在本权利要求之外的ATCC保藏号97523植物的这些衍生物是保留ATCC保藏号97523植物的特征性除草剂抗性的那些植物。
63.一种控制权利要求62中所述稻植物附近杂草的方法,所说的方法包括给杂草和稻植物应用一中除草剂,其中的除草剂在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上通常抑制乙酰羟酸合酶。
64.权利要求62中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上的至少一种通常抑制乙酰羟酸合酶的咪唑啉酮除草剂具有抗性。
65.一种控制权利要求64所述稻植物附近杂草的方法,所说的方法包括给杂草和稻植物应用一种咪唑啉酮除草剂,其中的除草剂在通常抑制稻植物生长的水平上通常抑制稻乙酰羟酸合酶。
66.权利要求62中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上的至少一种通常抑制乙酰羟酸合酶的磺酰脲除草剂具有抗性。
67.一种控制权利要求66中所述稻植物附近杂草的方法,所说的方法包括给杂草和稻植物应用一种磺酰脲除草剂,其中的除草剂在通常抑制稻植物生长的水平上通常抑制稻乙酰羟酸合酶。
68.权利要求62中所述的一种稻植物,其中所说的植物的生长对于在通常会抑制稻植物生长的除草剂水平上的选自下列的至少一种除草剂的抑制具有抗性:咪草烟,imazapic,灭草烟,烟嘧黄隆,嘧黄隆,灭草喹,氟嘧黄隆,嘧草啶酸,氯嘧黄隆,甲黄隆,玉嘧黄隆,噻黄隆,苯黄隆和嘧硫苯甲酸钠。
69.一种控制权利要求68中所述稻植物附近杂草的方法,所说的方法包括给杂草和稻植物应用至少一种在通常会抑制稻植物生长的除草剂水平上的选自下列的除草剂:咪草烟,imazapic,灭草烟,烟嘧黄隆,嘧黄隆,灭草喹,氟嘧黄隆,嘧草啶酸,氯嘧黄隆,甲黄隆,玉嘧黄隆,噻黄隆,苯黄隆和嘧硫苯甲酸钠。
70.权利要求62中所述的一种稻植物,其中突变诱导条件包括将稻种子暴露于诱变剂。
71.一种赋予稻植物除草剂抗性的方法,所说的方法包括如下步骤:
(a)将稻植物暴露于突变诱导条件;
(b)在通常抑制稻植物生长的水平上存在至少一种通常抑制乙酰羟酸合酶的除草剂的条件下,从接受暴露的植物生长稻植物或从接受暴露的植物的后代生长稻植物;以及
(c)筛选在存在除草剂的条件下生长没有受到显著损害的用于进一步繁殖的稻植物。
72.权利要求71中所述的一种方法,其中除草剂选自咪草烟,imazapic和灭草烟。
73.权利要求71中所述的一种方法,其中所说的暴露步骤包括将稻暴露于一种诱变剂。
74.权利要求71中所述的一种方法,其中选择用于进一步繁殖的植物表达一种对于在通常抑制稻生长的除草剂水平上的至少一种通常抑制乙酰羟酸合酶的除草剂的抑制具有抗性的功能性的乙酰羟酸合酶。
75.一种除草剂抗性稻植物,其中
(a)所说的除草剂抗性植物的生长对于在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上的至少一种通常抑制乙酰羟酸合酶活性的除草剂的抑制具有抗性;
(b)所说的抗性植物是表达功能性第一种和第二种抗性的乙酰羟酸合酶,所说的每一种抗性乙酰羟酸合酶对于在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上的至少一种通常抑制乙酰羟酸合酶的除草剂的抑制具有抗性。
(c)所说的第一种和第二种抗性的乙酰羟酸合酶不相同,以及
(d)所说的第一种抗性乙酰羟酸合酶是第一种野生型稻乙酰羟酸合酶的一种突变形式;而所说的第二种抗性乙酰羟酸合酶是第二种野生型稻乙酰羟酸合酶的一种突变形式;其中,第一种和第二种野生型稻乙酰羟酸合酶是通常由野生型稻植物的不同基因编码的不同酶。
76.一种控制权利要求75中所述稻植物附近杂草的方法,所说的方法包括给杂草和稻植物应用一种除草剂,其中的除草剂在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上,通常抑制乙酰羟酸合酶。
77.权利要求75中的一种稻植物,其中所说的植物的生长对于在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上的至少一种通常抑制乙酰羟酸合酶的咪唑啉酮除草剂的抑制具有抗性。
78.一种控制权利要求77中所述稻植物附近杂草的方法,所说的方法包括给杂草和稻植物应用一种咪唑啉酮除草剂,其中的除草剂在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上,通常抑制乙酰羟酸合酶。
79.权利要求75中所述的一种稻植物,其中所说的稻植物的生长对于在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上的至少一种通常抑制乙酰羟酸合酶的磺酰脲除草剂的抑制具有抗性。
80.一种控制权利要求79中所述稻植物附近杂草的方法,所说的达到包括给杂草和稻植物应用一种除草剂,其中的除草剂在通常抑制稻植物生长的除草剂水平上,通常抑制乙酰羟酸合酶。
81.权利要求75中所述的一种稻植物,其中所说的植物是ATCC保藏号75295植物的衍生物,而且还具有ATCC保藏号75295植物的特征性的除草剂抗性。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |