CN1234038A - 作为ICE/ced－3类半胱氨酸蛋白酶抑制剂的C－末端修饰的(N－取代)－2－吲哚基二肽 - Google Patents

Abstract

本发明涉及新颖(N－取代的)吲哚ICE/ced－3－抑制剂化合物。本发明还涉及这些吲哚化合物的药物组合物,以及这些组合物在治疗炎性疾病、自身免疫疾病和神经变性疾病和用于防止局部缺血损伤的患者的应用。

Description

作为ICE/ced-3类半胱氨酸蛋白酶抑制剂 的C-末端修饰的(N-取代)-2-吲哚基二肽

                         发明背景

                         发明领域

本发明涉及一类新颖化合物，它们是白介素-1β转化酶和相关的蛋白酶(“ICE/ced-3类的半胱氨酸蛋白酶”)的抑制剂。本发明还涉及包含这些化合物的药用组合物和使用这些药用组合物的方法。本发明的这些化合物、药用组合物和方法特别适合用于抑制ICE/ced-3类的蛋白酶活性，且因此，可以有利地用作对抗白介素-1(“IL-1”)介导的疾病的药物，这些疾病包括炎性疾病、自身免疫疾病和神经变性疾病和用于抑制在各种疾病症状中的不良的编程性细胞坏死如心脏的局部缺血损伤(例如，心肌梗塞形成)、脑的局部缺血损伤(例如，中风)和肾的局部缺血损伤(例如，缺血性肾病)。

                         背景信息

白介素1(“IL-1”)是主要的前炎性和免疫调节蛋白，它刺激成纤维细胞的分化和增生，刺激由滑液细胞和软骨细胞产生前列腺素、胶原酶和磷脂酶，刺激嗜碱和嗜酸脱粒和中性白细胞活化。Oppenheim,J.H.等，《现代免疫学》[Immunology Today]7:45-56(1986)。照此，它涉及慢性和急性炎性和自身免疫疾病的发病机理。IL-1作为炎性应答的一部分，主要是由外周血单核细胞产生。Mosely,B.S.等，Proc.Nat.Acad.Sci.,84:4572-4576(1987)；Lonnemann,G.等，《欧洲免疫学杂志》[Eur.J.Immunol.]19:1531-1536(1989)。

IL-1β作为无生物活性的前体-proIL-1β被合成。ProIL-1β在Asp-116与Ala-117间被称作白介素-1β转化酶的半胱氨酸蛋白酶酶切，产生在人血清和滑液中可见的生物活性C-末端片断。Sleath,P.R.等，《生物化学杂志》[J.Bio.Chem.],265:14526-14528(1992)；A.D.Howard等，《免疫学杂志》[J.Immunol.],147:2964-2969(1991)。

ICE是主要位于单核细胞的半胱氨酸蛋白酶。除了促进IL-1β的前炎性和免疫调节性能外，ICE，和特别是其类似物，也表现出与细胞死亡或编程性细胞死亡的调节有关。Yuan,J.等，《细胞》[Cell]75:641-652(1993)；Miura,M.等，《细胞》[Cell]75:653-660(1993)；Nett-Giodalisi,M.A.等，《细胞生物化学杂志》[J.CellBiochem.],17B:117(1993)。具体地说，ICE或ICE/ced-3类似物被认为与神经变性疾病如阿尔茨海默氏病和帕金森氏病中的编程性细胞死亡的调节有关联。Marx,J.和M.Baringa，《科学》[Science]259:760-762(1993)；Gagliardini,V.等，《科学》[Science]263:826-828(1994)。

因此，其中ICE/ced-3类半胱氨酸蛋白酶的抑制剂可以用作治疗剂的疾病状态包括：感染性疾病，如半月板炎和输卵管炎；脓毒性休克、呼吸疾病；炎性状态，如关节炎、胆小管炎、结肠炎、脑炎、子宫颈内膜炎、肝炎、胰腺炎和再灌注损伤、局部缺血性疾病如心肌梗塞、中风和局部缺血肾病；以免疫为基础的疾病，如过敏；自免疫疾病，如多发性硬化；骨病；和某些神经变性疾病，如阿尔茨海默氏病和帕金森氏病。

ICE/ced-3抑制剂代表一类用于控制上述疾病状态的化合物。ICE的肽和肽基抑制剂业已有过描述。然而，这些抑制剂典型地具有不良的药物学性能，如差的口服吸收，差的稳定性和快速代射。Plattner,J.J.和D.W.Norbeck，于C.R.Clark和W.H.Moos编辑的《药剂发现技术》[Drug Discovery Technologies],(Ellis Horwood,Chichester,英国，1990)，第92-116页。这些不良的性能阻碍了将其开发成有效的药剂。

因此，需要这样的化合物，这类化合物可以有效地抑制ICE/ced-3类的蛋白酶的作用，用作防止不良的编程性细胞死亡和用于处理慢性和急性类型的IL-1介导的疾病，如炎性、自身免疫或神经变性疾病。

本发明满足这一需要，并且提供相关的优点。

                      发明概述

本发明的一方面是下文中给出的式1化合物。

本发明的另一方面是包含上述式1化合物和其可药用载体的药物组合物。

本发明的其它方面涉及处理自身免疫疾病、炎性疾病或神经变性疾病的方法，所述的方法包含向需要这种处理的患者施用有效量的所讨论的药物组合物。

本发明的另一方面是防止患有与局部缺血损伤有关的疾病的患者局部缺血的方法，所述的方法包含向需要这种处理的患者施用有效量的药用组合物。

                     附图简述

图1给出式A中的化合物抑制ICE和CPP32酶的活性。

图2说明式B中的化合物对重组ICE、CPP32、Mch2和Mch5酶的活性。

图3说明式C中的化合物对重组ICE、CPP32、Mch2和Mch5酶的活性。

                    发明详述

本发明化合物把N-取代的吲哚环掺入作为肽模拟结构片断。尽管缺少与已知的ICE肽抑制剂的P₃酰胺氮等同的氢键给体，本发明的N-取代吲哚化合物作为ICE/ced-3蛋白酶类酶的抑制剂具有高的活性。这些化合物还显示出与已知肽抑制剂有关的其它优点。

本发明的一方面是式1化合物或其可药用的盐：

          式1

其中

n是1或2；

R¹是烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基、(取代的)苯基、苯基烷基、(取代的)苯基烷基、杂芳基、(杂芳基)烷基或(CH₂)_mCO₂R⁴，其中m=1-4，且R⁴如下文所定义；

R²是氢原子、氯、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基、(取代的)苯基、苯基烷基、(取代的)苯基烷基、杂芳基、(杂芳基)烷基或(CH₂)_pCO₂R⁵，其中p=0-4，而R⁵如下文所定义；

R³是氢原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基烷基或(取代的)苯基烷基；

R⁴是氢原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基烷基或(取代的)苯基烷基；

R⁵是氢原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基烷基或(取代的)苯基烷基；

A是天然或非天然氨基酸；

B是氢原子、氘原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基、(取代的)苯基、苯基烷基、(取代的)苯基烷基、杂芳基、(杂芳基)烷基、卤代甲基、CH₂ZR⁶、CH₂OCO(芳基)、CH₂OCO(杂芳基)或CH₂OPO(R⁷)R⁸，其中Z是氧或硫原子；

R⁶是苯基、取代的苯基、苯基烷基、(取代的苯基)烷基、杂芳基或(杂芳基)烷基；

R⁷和R⁸独立地选自烷基、环烷基、苯基、取代苯基、苯基烷基、(取代的苯基)烷基和(环烷基)烷基；而

X和Y独立地选自氢、卤素、三卤代甲基、氨基、保护的氨基、氨基盐、单取代的氨基、二取代的氨基、羧基、保护的羧基、羧酸盐、羟基、保护的羟基、羧基的盐、低级烷氧基、低级烷硫基、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、(环烷基)烷基、取代的(环烷基)烷基、苯基、取代的苯基、苯基烷基和(取代的苯基)烷基。

如上述化学式中所用，术语“烷基”指直链或支链C₁-C₈-碳链，如甲基、乙基、叔丁基、异丙基、正辛基等。

术语“环烷基”指单-、二-或三环状环，它是完全饱和或部分不饱和的。这样的环的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基、环辛基、顺-或反式萘烷、二环[2.2.1]庚-2-烯、环己-1-烯基、环戊-1-烯基、1,4-环辛二烯基等。

术语“(环烷基)烷基”指由上述环烷基环之一取代的上面定义的烷基。这样的基团的实例包括(环己基)甲基、3-(环丙基)-正丙基、5-(环戊基)己基、6-(金刚烷基)己基等。

术语“取代的苯基”指由一或多个，且优选一或二个选自下列的部分取代的苯基：卤素、羟基、保护的羟基、氰基、硝基、三氟甲基、C₁-C₇-烷基、C₁-C₇-烷氧基、C₁-C₇-酰基、C₁-C₇-酰氧基、羧基、保护的羧基、羧基甲基、保护的羧基甲基、羟基甲基、保护的羟基甲基、氨基、保护的氨基、(单取代的)氨基、保护的(单取代的)氨基、(二取代的)氨基、羧酰胺、保护的羧酰胺、N-(C₁-C₆-烷基)羧酰胺、保护的N-(C₁-C₆-烷基)羧酰胺、N,N-二(C₁-C₆-烷基)羧酰胺、N-((C₁-C₆-烷基)磺酰基)氨基、N-(苯磺酰基)氨基；或由取代或未取代的苯基取代苯基，在这种情况下，产生联苯基或萘基。

术语“取代的苯基”的实例包括单-或二(卤代)苯基，如2-、3-或4-氯苯基、2,6-二氯苯基、2,5-二氯苯基、3,4-二氯苯基、2-、3-或4-溴苯基、3,4-二溴苯基、3-氯-4-氟苯基、2-、3-或4-氟苯基等；单或二(羟基)苯基，如2-、3-或4-羟基苯基、2,4-二羟基苯基和其保护的羟基衍生物等；硝基苯基，如2-、3-或4-硝基苯基；氰基苯基，例如2-、3-或4-氰基苯基；单-或二(烷基)苯基，如2-、3-或4-甲基苯基、2,4-二甲基苯基、2-、3-或4-(异丙基)苯基、2-、3-或4-乙基苯基、2-、3-或4-(正丙基)苯基等；单或二(烷氧基)苯基，例如，2,6-二甲氧基苯基、2-、3-或4-(异丙氧基)苯基、2-、3-或4-(叔丁氧基)苯基、3-乙氧基-4-甲氧基苯基等；2-、3-或4-三氟甲基苯基；单-或二羧基苯基或(保护的羧基)苯基基团如2-、3-或4-羧基苯基或2,4-二(保护的羧基)苯基；单-或二(羟基甲基)苯基或(保护的羟基甲基)苯基如2-、3-或4-(保护的羟基甲基)苯基或3,4-二(羟基甲基)苯基；单-或二(氨基甲基)苯基或(保护的氨基甲基)苯基如2-、3-或4-(氨基甲基)苯基或2,4-(保护的氨基甲基)苯基；或单-或二(N-甲基磺酰基氨基))苯基如2-、3-或4-(N-(甲基磺酰基氨基)苯基。同样，术语“取代的苯基”代表二取代的苯基，其中取代基不同，例如，3-甲基-4-羟基苯基、3-氯-4-羟基苯基、2-甲氧基-4-溴苯基、4-乙基-2-羟基苯基、3-羟基-4-硝基苯基、2-羟基-4-氯苯基等。

术语“(取代的苯基)烷基”指连接于上面描述的烷基基团的上面的取代的苯基基团。这些基团的实例包括2-苯基-1-氯乙基、2-(4’-甲氧基苯基)乙基、4-(2’,6’-二羟基苯基)-正己基、2-(5’-氰基-3'-甲氧基苯基)正戊基、3-(2’,6'-二甲基苯基)正丙基、4-氯-3-氨基苄基、6-(4’-甲氧基苯基)-3-羧基(正己基)、5-(4’-氨基甲基苯基)-3-(氨基甲基)正戊基、5-苯基-3-氧代-正戊-1-基、(4-羟基萘-2-基)甲基等。

术语“卤代”和“卤素”指氟、氯、溴或碘基。可以是一或多个卤素，它们相同或不同。优选的卤素是氯和氟。

术语“芳基”指芳族五和六元碳环状环。优选的是六元环。

术语“杂芳基”指任选取代的五元或六元环，它们具有1至4个杂原子，如氧、硫和/或氮原子，特别是单独的或与氧或硫环原子混合的氮。这些五元或六元环是完全不饱和的。

下列环系是由术语“杂芳基”表示的杂环状(取代或未取代)基团的实例：噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡咯烷基、咪唑基、异噁唑基、三唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、噻三唑基、噁三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、噁嗪基、三嗪基、噻二嗪基、四唑并、1,5-[b]哒嗪基和嘌呤基，以及苯并稠合的衍生物，例如，苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基和吲哚基。

上述任选取代的杂芳基环的取代基选自一至三个卤素、三卤代甲基、氨基、保护的氨基、氨基盐、单取代的氨基、二取代的氨基、羧基、保护的羧基、羧酸盐、羟基、保护的羟基、羟基的盐、低级烷氧基、低级烷硫基、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、(环烷基)烷基、取代的(环烷基)烷基、苯基、取代的苯基、苯基烷基和(取代的苯基)烷基。杂芳基的取代基是如前文或如下文所定义。当用于与杂芳基环的上述取代基组合时，“三卤代甲基”可以是三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基或三碘甲基，“低级烷氧基”指C₁-C₄-烷氧基，同样，“低级烷硫基”指C₁-C₄-烷硫基。术语“取代的烷基”指上面定义的由一至三个选自下列的基团取代一至三次的烷基：羟基、保护的羟基、氨基、保护的氨基、氰基、卤素、三氟甲基、单取代的氨基、二取代的氨基、低级烷氧基、低级烷硫基、羧基、保护的羧基或羧基、氨基、和/或羟基的盐。当用于与杂芳基环的取代基组合时，术语“取代的(环烷基)烷基”和“取代的环烷基”如上所定义，由针对“取代的烷基”基团所列的那些基团取代。术语“(单取代的)氨基”是指带有一个选自下列的取代基的氨基：苯基、取代的苯基、烷基、取代的烷基、C₁-C₇-酰基、C₂-C₇-链烯基、C₂-C₇-取代的链烯基、C₂-C₇-炔基、C₇-C₁₆-烷基芳基、C₇-C₁₆-取代的烷基芳基和杂芳基。(单取代的)氨基可以另外具有一个由术语“保护的(单取代的氨基)”包括的氨基保护基。术语“(二取代的)氨基”指带有二个选自下列的取代基的氨基：苯基、烷基、取代的烷基、C₁-C₇-酰基、C₂-C₇-链烯基、C₂-C₇-炔基、C₇-C₁₆-烷基芳基、C₇-C₁₆-取代的烷基芳基和杂芳基。二个取代基可以相同或不同。术语“杂芳基(烷基)”指如上所定义的烷基，在任一位置由一个如上所定义的杂芳基取代。

再者，上述任选取代的五元或六元杂环状环可以任选稠合到芳族5-元或6-元芳基或杂芳基环系上。例如，这些环可以任选稠合到芳族5-或6元环系如吡啶或三唑环系，且优选稠合到苯环上。

术语“可药用的盐”包括那些与羧酸根阴离子形成的盐，且包括与有机或无机阳离子形成的盐，如上述阳离子选自碱金属或碱土金属，(例如，锂、钠、钾、镁、钡和钙)；和铵离子；和有机阳离子(例如，二苄基铵、苄基铵、2-羟基乙基铵、双(2-羟基乙基)铵、苯基乙基苄基铵、二苄基乙二铵等阳离子。)。其它由上述术语包括的阳离子包括质子化形式的普鲁卡因、喹啉和N-甲基葡糖胺，质子化形式的碱性氨基酸如甘氨酸、鸟氨酸、组氨酸、苯基甘氨酸、赖氨酸和精氨酸。再者，上述术语还涉及由羧酸和氨基形成的本化合物的任一两性离子形式。羧酸根阴离子的优选阳离子是钠离子。再者，该术语包括通常标准的酸-碱反应与碱性基团(如氨基)形成的盐且包括有机或无机酸。这些酸包括盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸、马来酸、富马酸、棕榈酸、胆酸、pamoic acid、粘酸、D-谷氨酸、D-樟脑酸、谷氨酸、邻苯二甲酸、酒石酸、月桂酸、硬脂酸、水杨酸、甲磺酸、苯磺酸、抗坏血酸、苦味酸、苯甲酸、肉桂酸等酸。

式1化合物还可以以溶剂化物或水合物存在。因此，这些化合物可以(例如)与水合的水，或与母液溶剂的分子之一或多种或其任一组分结晶。这些化合物的溶剂化物和水合物包括在本发明范围之内。

本文中所用的术语“保护羧基的基团”是指通常当反应在化合物的其它官能基团进行时，采用来封闭或保护羧酸基团的羧酸基团的酯衍生物之一。这些羧酸保护基团的实施例包括叔丁基、4-硝基苄基、4-甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、2,4-二甲氧基苄基、2,4,6-三甲氧基苄基、2,4,6-三甲基苄基、五甲基苄基、3,4-亚甲基二氧基苄基、二苯甲基、4,4’-二甲氧基三苯甲游基、4,4’,4”-三甲氧基三苯甲游基、2-苯丙基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苯甲酰甲基、2,2,2-三氯乙基、β-(三甲基甲硅烷基)乙基、β-(二(正丁基)甲基甲硅烷基)乙基、对甲苯基磺酰基乙基、4-硝基苄基磺酰基乙基、烯丙基、肉桂基、1-(三甲基甲硅烷基甲基)-丙烯基等部分。对于所采用具体的保护羧基的基团无限制，只要衍生的羧酸对随后的一或多个反应的条件稳定，且可以在适合的时间点，在不破坏该分子的其它部分的前提下可以适宜的除去即可。这些基团的其它实例可分别见于C.B.Resse和E.Haslam，“有机化学中的保护性基团”，J.G.W.McOmie编辑，Plenum Press，纽约，NY,1973，第5章；T.W.Greene和P.G.M.Wuts,“有机化学中的保护性基团”，第二版，John Wiley and Sons，纽约，NY,1991，第5章；上述文献均并入本文作为参考。相关的术语“保护的羧基”，是指由上述保护羧基的基团之一取代的羧基。

术语“保护羟基的基团”是指键合于羟基的易于裂解开的基团，如四氢吡喃基、2-甲氧基丙-2-基、1-乙氧基乙-1-基、甲氧基甲基、β-甲氧基乙氧基甲基、甲硫基甲基、叔丁基、叔戊基、三苯甲游基、4-甲氧基三苯甲游基、4,4’-二甲氧基三苯甲游基、4,4’,4”-三甲氧基三苯甲游基、苄基、烯丙基、三甲基甲硅烷基、(叔丁基)二甲基甲硅烷基、2,2,2-三氯乙氧基羰基等。

保护羟基的基团的其它实例分别描述于C.B.Reese和E.Haslam,“有机化学中的保护性基团”，J.G.W.McOmie编辑，Plenum Press，纽约，1973，第3和4章；T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“有机化学中的保护性基团”，第二版，John Wiley and Sons，纽约，1991，第2和3章。优选的保护羟基的基团是叔丁基基团。相关的术语“保护的羟基”指键合于上述保护羟基的基团之一的羟基。

本文中所用的术语“保护氨基的基团”指当与分子中的其它官能团反应时通常用来封闭或保护氨基官能团的氨基的取代基。术语“保护的(单取代的)氨基”指在单取代的氨基氮原子上的保护氨基的基团。

这些保护氨基的基团的实例包括甲酰基(“For”)、三苯甲游基、邻苯二甲酰亚氨基、三氯乙酰基、三氟乙酰基、氯乙酰基、溴乙酰基和碘乙酰基，尿烷型保护基团，如叔丁氧基羰基(“Boc”)、2-(4-联苯基)丙基-2-氧基羰基(“Bpoc”)、2-苯丙基-2-氧基羰基(“Poc”)、2-(4-联苯基)异丙氧基羰基、1,1-二苯基乙基-1-氧基羰基、1,1-二苯丙基-1-氧基羰基、2-(3,5-二甲氧基苯基)丙基-2-氧基羰基(“Ddz”)、2-(对甲苯甲酰基)丙基-2-氧基羰基、环戊烷基氧基羰基、1-甲基环戊烷基氧基羰基、环己烷基氧基羰基、1-甲基环己烷基氧基羰基、2-甲基环己烷基氧基羰基、2-(4-甲苯甲酰基磺酰基)乙氧基羰基、2-(甲基磺酰基)乙氧基羰基、2-(三苯基膦基)乙氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基(“Fmoc”)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧基羰基、1-(三甲基甲硅烷基)丙-1-烯基氧基羰基、5-苯并异草酰基(5-benzisoxalyl)甲氧基羰基、4-乙酰氧基苄基氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-乙炔基-2-丙氧基羰基、环丙基甲氧基羰基、异冰片基氧基羰基、1-哌啶基氧基羰基、苄氧基羰基(“Cbz”)、4-苯基苄氧基羰基、2-甲基苄氧基羰基、α-2,4,5，-四甲基苄氧基羰基(“Tmz”)、4-甲氧基苄氧基羰基、4-氟苄氧基羰基、4-氯苄氧基羰基、3-氯苄氧基羰基、2-氯苄氧基羰基、2,4-二氯苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、3-溴苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-氰基苄氧基羰基、4-(癸氧基)苄氧基羰基等；苯甲酰基甲基磺酰基、2,2,5,7,8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基(“PMC”)、二噻琥珀酰基(“Dts”),2-(硝基)苯基亚磺酰基(“Nps”)、二苯基氧膦基(diphenylphosphine oxide)等保护氨基的基团。所采用的保护氨基的种类无严格限制，只要衍生的氨基基团对随后的一或多个反应的条件稳定，且可以在适宜的时间点，在不破坏分子的其它部分的情况下除去。优选的保护氨基的基团是Boc、Cbz和Fmoc。由上述术语包括的氨基保护基团的其它实例是有机合成和肽技术领域上熟知的那些，并描述于，例如，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“有机合成上的保护基团”，第二版，John Wiley and Sons，纽约，1991，第7章，M.Bodanzsky，“肽合成原理”，第1和第2修订版，Springer-Verlag，纽约，1984和1993，和J.M.Stewart和J.D.Young，“固相肽合成”，第2版，Pierce Chemical Co.,Rockford,IL,1984,E.Atherton和R.C.Shephard，“固相肽合成-实际进展”IRL Press，牛津，英国(1989)，上述文献均并入本文作为参考。相关的术语“保护的氨基”是定义为用上面讨论的氨基保护基取代的氨基。

术语“天然和非天然氨基酸”指天然出现的氨基酸和其它在制备天然出现的肽的合成类似物时，通常由肽化学领域的技术人员使用的非蛋白源α-氨基酸，包括D和L型。天然出现的氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、胱氨酸、脯氨酸、组氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、γ-羧基谷氨酸、精氨酸、鸟氨酸和赖氨酸。非天然α-氨基酸的实例包括羟基赖氨酸、瓜氨酸、犬尿氨酸、(4-氨基苯基)丙氨酸、3-(2’-萘基)丙氨酸、3-(1’-萘基)丙氨酸、甲硫氨酸砜、(叔丁基)丙氨酸、(叔丁基)甘氨酸、4-羟基苯基-甘氨酸、氨基丙氨酸、苯基甘氨酸、乙烯基丙氨酸、丙炔基-甘氨酸、1,2,4-三唑并-3-丙氨酸、甲状腺原氨酸、6-羟基色氨酸、5-羟基色氨酸、3-羟基-犬尿氨酸、3-氨基酪氨酸、三氟甲基丙氨酸、2-噻吩丙氨酸、(2-(4-吡啶基)乙基)半胱氨酸、3,4-二甲氧基-苯丙氨酸、3-(2’-噻唑基)丙氨酸、鹅膏蕈氨酸、1-氨基-1环戊烷-羧酸、1-氨基-1-环己烷羧酸、使君子酸(quisqualic acid)、3-(三氟甲基苯基)丙氨酸、(环己基)甘氨酸、硫组氨酸、3-甲氧基酪氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、别异亮氨酸、高精氨酸、硫脯氨酸、脱氢脯氨酸、羟基脯氨酸、高脯氨酸、二氢吲哚-2-羧酸、1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸、1,2,3,4-四氢喹啉-2-羧酸、α-氨基-正丁酸、环己基丙氨酸、2-氨基-3-苯基丁酸、在苯基部分的邻、间或对位上由一或二个下列基团取代的苯丙氨酸：(C₁-C₄)烷基、(C₁-C₄)烷氧基、卤素或硝基、或由亚甲二氧基取代一次；β-2和3-噻吩丙氨酸；β-2-和3-呋喃丙氨酸；β-2-、3-和4-吡啶基丙氨酸；β-(苯并噻吩基-2-和3-基)丙氨酸；β-(1-和2-萘基)丙氨酸；丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的O-烷基化衍生物；S-烷基化的半胱氨酸、S-烷基化的高半胱氨酸、酪氨酸的O-硫酸酯、O-磷酸酯和O-羧酸酯；3-(磺基)酪氨酸、3-(羧基)酪氨酸、3-(磷酸)酪氨酸、酪氨酸的4-甲磺酸酯、酪氨酸的4-甲磷酸酯、3,5-二碘代酪氨酸、3-硝基酪氨酸、ε-烷基赖氨酸、和δ-烷基鸟氨酸。这些α-氨基酸之任-均可在α-位上由甲基取代，在α-氨基侧链的芳族残基的任一位置上由卤素取代，或该侧链残基的O、N或S原子上由适宜的保护基取代。适合的保护基是上文讨论那些。

取决于所选择的溶剂和其它本领域技术人员已知的条件，本发明化合物还可以采用其半缩酮、半缩醛、缩酮或缩醛形式，这些形式包括在本发明中。

此外，应当知道，本发明化合物的等同形式可以包括互变异构体。这些化合物的所有这些形式均表达地包括在本发明中。

同样，本领域技术人员应当知道，当式1中的B是氢原子时，可以与所得的醛形成缩氨基脲形式。这些缩氨基脲同样也作为式1化合物以及含有这些化合物的药用组合物被包括。这些缩氨基脲同样包括例如下文给出的最佳的一组化合物和式1化合物的4-氧代-丁酸衍生物具体实例的缩氨基脲衍生物。

本发明化合物可以通过适宜的官能修饰来提高选择性生物性能。这些修饰法是本领域已知的，且包括那些增加生物渗透进入给定生物系统(例如，血液、淋巴系统、中枢神经系统)，增加口服有效性，增加溶解性以使得可以用注射法给药，改变代谢或改变发挥药效的速率方面的修饰。此外，本发明化合物可以改变成前药的形式，这样，由于对前药的代谢或其它生化过程的作用，在患者体内产生所需的化合物。前药物形式的实例包括含有酮或醛基团，特别是当这些基团出现在式1中标为“A”的基团上或连接于标为“A”的修饰过的天冬氨酸或谷氨酸残基上的化合物的缩酮、缩醛、肟和腙形式。

在上述式1中，在下列情况下出现一组最佳化合物，当n是1，当G是羰基且B是氢原子则更佳，而当R³是氢原子或叔丁基则尤其佳。值得一提的是那些当A是天然存在的氨基酸的那些化合物。后一组化合物在本文中称作“4-氧代丁酸化合物”。

在这组4-氧代丁酸化合物中，一种最佳的化合物是其中R¹是甲基的化合物，即，N-甲基吲哚化合物。这组N-甲基吲哚化合物的具体实例出现在当A是丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸或脯氨酸时。在这些天然氨基酸组之每一组中的值得提到的化合物是，当N-甲基吲哚是未取代时出现的化合物，即，化合物中X、Y和R²各是氢原子，且最佳的是当R³是氢原子时。

另一组最佳的4-氧代丁酸化合物由N-苄基吲哚化合物组成。例如，当A是丙氨酸残基时出现的一组N-苄基吲哚化合物。在这组丙氨酸化合物中，值得提到的是那些其中X、Y和R²各是氢原子，且特别是其中R³是氢原子的化合物。

另一组最佳的4-氧代丁酸化合物出现在当吲哚的N-取代基是1-丁烯基时。这组N-(1-丁烯基)吲哚化合物的具体实例出现在当A是缬氨酸残基时，且特别是当X、Y和R²均是氢原子时，尤其是其中R³是氢原子时。

再一组最佳的4-氧代丁酸化合物出现在吲哚环的N-取代基是2’-乙酸残基时。示范的一组N-(2’-乙酸化合物)出现在当A是丙氨酸残基时。这些特定的一组丙氨酸化合物的具体实例出现在当X、Y和R²均是氢原子时，且特别是当R³是氢原子时。

当吲哚基在氮上由3’-丙酸残基取代时的一组4-氧代丁酸化合物是本发明的另一实例。最佳的一组这样的N-(丙酸)吲哚化合物出现在当A是丙氨酸残基时。这组丙氨酸化合物中值得一提的是那些当X、Y和R²各是氢原子，特别是当R³是氢原子的化合物。

另一组最佳的式1化合物出现在当n是1时，当B是单氟甲基时更是如此。这些单氟甲基化合物的具体实例出现在当R³是氢原子或叔丁基，且当A是天然氨基酸时尤其如此。这些当A是天然氨基酸的化合物的实例出现在当A是缬氨酸残基时。后一组缬氨酸化合物在本文中称作“4-氧代-5-(氟戊酸)化合物”。

一组最佳的4-氧代-5-(氟戊酸)化合物出现在当R¹是甲基时，换句话说，是N-甲基吲哚化合物。这些N-甲基吲哚化合物的一组实例出现在当R²是甲基和X和Y均为氢原子，特别是当R³是氢原子时。这些N-甲基吲哚化合物的另一组实例出现在当R²是氯原子且X和Y均为氢原子，且特别是当R³是氢原子时。第三组N-甲基吲哚化合物的实例出现在当R²是氯原子，X是5-氟，和Y是氢原子，且特别是当R³是氢原子时。第四组N-甲基吲哚化合物出现在当R²是异丁基且x和Y均是氢原子，且特别是当R³是氢原子时。

另一组最佳的4-氧代-5-(氟戊酸)化合物由N-(3’-苯基丙-1-基)吲哚化合物组成。在此后一类化合物中值得一提的一组出现在当R²、X和Y均是氢原子，且特别是当R³是氢原子时。

第三组最佳的4-氧代-5-(氟戊酸)化合物具有N-(羧基甲基或保护的羧基甲基)吲哚部分。这组化合物的具体实例出现在当R²、X和Y均是氢原子，且特别是当R³是氢原子和吲哚环的氮原子由羧基甲基取代时。

第四组最佳的4-氧代-5-(氟戊酸)化合物具有N-(高烯丙基)吲哚部分。在这组中值得提到的具体实例出现在当R²、X和Y均是氢原子，且特别是当R³是氢原子时。

再一组最佳的式1化合物出现在当n是1时，尤其是当B是(2,6-二氯苄氧基)甲基时。这些(2,6-二氯苄氧基)甲基化合物的具体实例出现在当R³是氢原子或叔丁基时，且尤其是当A是天然氨基酸时。当A是天然氨基酸的这些化合物的一实例出现在当A是缬氨酸残基时。后一组缬氨酸化合物在下文中称作“(二氯苄氧基)甲基”化合物。

一组最佳的(二氯苄氧基)甲基化合物出现在当R¹是甲基时，换句话说，是N-甲基吲哚化合物。一组这样的N-甲基吲哚化合物的实例出现在当R²是甲基且X和Y均是氢原子，且尤其是当R³是氢原子时。

另一组最佳的式1化合物出现在当n是1时，尤其是当B是式CH₂OPO(R⁷)R⁸时。这些氧膦基氧基取代的化合物的具体实例出现在当R³是氢原子或叔丁基，尤其是当A是天然氨基酸时。这些其中A是天然氨基酸的化合物的一实例出现在当A是缬氨酸时。这后一组缬氨酸化合物在本文中称作“氧膦基氧基甲基”化合物。

一组最佳的氧膦基氧基甲基化合物出现在当R⁷和R⁸均是苯基，尤其是当R¹是甲基时，换句话说，是N-甲基吲哚化合物。这样的N-甲基吲哚化合物的一实例出现在当R²是甲基且X和Y均是氢原子，且特别是当R³是氢原子时。

再一组最佳的式1化合物出现在当n是1，且尤其是当B是CH₂ZR⁶时。最佳的具体实例还出现在当R⁶是杂芳基，尤其是当Z是氧原子时。这些(杂芳基)氧基甲基化合物的具体实例出现在当R³是氢原子或叔丁基，尤其是当A是天然氨基酸时。这些当A是天然氨基酸的化合物的一实例出现在当A是缬氨酸残基时。后一组缬氨酸化合物在本文中称作“杂芳氧基”化合物。

一组最佳的杂芳氧基化合物出现在当杂芳氧基是取代的或未取代的吡唑-5-基氧基甲基，特别是当此基团(1-苯基-3-(三氟甲基)吡唑-5-基)氧基甲基，尤其是当R¹是甲基时，换句话说，是N-甲基吲哚化合物。一组这样的N-甲基吲哚化合物的实例出现在当R²是甲基且X和Y均是氢原子，且特别是当R³是氢原子时。

式1化合物可以用如下讨论的常规技术合成。有利的是，这些化合物由易于得到的起始原料方便地合成。

用于合成本发明化合物的一种合成途径用下列反应方案1说明：

在上述反应方案1中，式(2)，即，H₂N-Z，是式2a至式2d的修饰过的天冬氨酸或谷氨酸残基：

                

 式2a                                          式2b；

                

 式2c或                                      式2d.

在上在的反应方案Ⅰ中，“PG”代表保护氨基的基团，且“A”代表如上在讨论的天然或非天然氨基酸。

式2a-d的修饰过的天冬氨酸或谷氨酸可以用本领域熟知的方法制备。参见，例如，欧洲专利申请EP519,748；PCT专利申请PCT/EP92/02472；PCT专利申请PCT/US91/06595；PCT专利申请PCT/US91/02339；欧洲专利申请EP 623,592；PCT专利申请WO93/09135；PCT专利申请PCT/US94/08868；欧洲专利申请EP623,606；欧洲专利申请EP 618,223；欧洲专利申请EP 533,226；欧洲专利申请EP528,487；欧洲专利申请EP618,233；PCT专利申请PCT/EP92/02472；国际专利申请WO93/09135；PCT专利申请PCT/US93/03589；和PCT专利申请PCT/US93/00481，这些文献均并入本文作为参考。

在步骤A中进行的偶合反应是在标准的肽偶合剂存在下进行的，肽偶合剂如二环己基碳化二亚胺(DCC)和1-羟基-苯并三唑(HOBt)的组合，以及BOP(苯并三唑基氧基-三-(二甲基氨基)磷六氟磷酸酯)试剂、pyBOP(苯并三唑基氧基-三(N-吡咯烷基)磷六氟磷酸酯)、HBTU(O-苯并三唑基-四甲基异尿鎓六氟磷酸酯)和EEDQ(1-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉)试剂，1-乙基(3,3’-二甲基-1’-氨基丙基)碳化二亚胺(EDAC)和HOBt的组合等，如在J.Jones，“氨基酸和肽合成”，StevenG.Davis编辑，牛津大学出版社，牛津，第25-41页(1992)；M.Bodanzky，“肽合成原理”，Hafner等编辑，Springer-Verlag,BerlinHeidelberg，第9-52页和第202-251页(1984)；M.Bodanzky，“肽化学，实践教科书”(“Peptide Chemistry,A Practical Textbook”，Springer-Verlag,Berlin Heidelberg，第55-73页和第129-180页；和Stewart和Young，“固相肽合成”，Pierce Chemical Company,(1984)，所有的这些文献均并入本文作为参考。之后将保护氨基的基团除去，并将所得的胺偶合到式4的2-(羧基)吲哚上(步骤B)。此偶合反应同样使用上面提到的标准的肽偶合反应。式4的吲哚环可以在步骤B或下面的反应之前被取代。这样的吲哚环的合成和取代反应是熟知的，如描述于下文中的方法：Brown,R.T.和Joule,J.A.在“杂环化学”(P.G.Sammes编辑)(综合有机化学，第4卷，D.Barton和W.D.Ollis编辑)，(1979),Pergamon Press，牛津；Houlihan,W.J.，(编辑)，“吲哚(杂环化合物化学)[A.Weissburger和E.C.Taylor编辑]，第25卷，第1-3部)，Wiley Interscienee，纽约(1972)；和Saxton,J.E.(编辑)，“吲哚(杂环化合物化学)，”[A.Weissburger和E.C.Taylor编辑]，第25卷，第4部)，Wiley Interscience，纽约(1979)；所有这些文献均并入本文作为参考。

在偶合反应是用式2c的氨基醇进行的情况下，在除去保护基团前，醇部分必须氧化成相应的羰基化合物。该氧化反应的优选方法包括Swern氧化法(草酰氯-二甲基亚砜，二氯甲烷在-78℃下，接着用三乙胺)；和Dess-Martin氧化法(Dess-Martin periodinane，叔丁醇和二氯甲烷)。含在式2a-d和A亚结构中的保护基团通过本领域已熟知的方法除去。这些反应和一些或全部保护基团的除去在上述反应方案中的步骤C中涉及到。

本发明的药物组合物包含任一种本发明式1化合物及其可药用的盐，和任一种可药用的载体、辅助剂或赋形剂(下文通称作“可药用载体”)。这些组合物还包括上面讨论的那些化合物组和具体实例，以及下面讨论的实施例中的化合物。可以用在本发明药物组合物中的可药用载体、辅助剂和赋形剂包括，但不限于，离子交换、矾土、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白，如人血清白蛋白；缓冲物质如各种磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油混合物；水、盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠和锌盐；胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、多芳基化合物、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂等。

应当知道，这些药物组合物包括上文给出的最佳组的式1化合物及其具体实例。

本发明的药用组合物可以经口、经非肠道、通过喷雾吸入、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或植入贮药器给药。优选的是经口和非肠道给药。本文中的所用术语“非肠道”包括皮下、皮内、静脉、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、伤口内和颅内注射或输注技术。

药物组合物可以是消毒的可注射制剂，例如，作为消毒的可注射水或油悬浮液。此悬浮液可以用本领域已知的技术，使用适合的分散或润湿剂(例如，吐温80)和悬浮剂来配制。消毒可注射制剂还可以是用非毒性非肠道可接受稀释液或溶剂的消毒可注射溶液或悬浮液，例如，1,3-丁二醇的溶液。可以采用的可接受载体和溶剂是甘露醇、水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，消毒的固定油可以被用来作为溶剂或悬浮介质。对于此目的，任一种牌号的不挥发油均可被采用，包括合成单或二甘油酯。脂肪酸，如油酸和其甘油酸酯衍生物可用在制备可注射剂中，如天然的可药用油，如橄榄油或蓖麻油，特别是其聚氧乙基化衍生物。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂。

本发明的药物组合物可以以任一种可口服的形式口服给药，这些口服形式包括，但不限于，胶囊、片剂和水悬浮液和溶液。在用于口服的片剂的情况下，通常采用的载体包括乳糖和玉米淀粉。典型的情况下也可以加入润滑剂，如硬脂酸镁。以胶囊形式口服给药时可用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当水悬浮液口服给药时，活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果需要，可以加入某些甜味剂和/或风味剂和/或着色剂。

本发明药物组合物还可以以用于直肠给药的栓剂形式给药。这些组合物可以通过将本发明化合物与适合的非刺激性的在室温下是固体而在直肠温度下是液体的赋形剂混合而制备。这些材料包括，但不限于，可可脂、蜂蜡和聚乙二醇类。

当所需的处理涉及易于进行局部涂敷的区域或器官时，本发明药物组合物的局部给药特别有用。对于皮肤的局部施用，药物组合物应当用含有悬浮或溶解于载体中的活性组分的适合的软膏配制。用于本发明化合物局部给药的载体包括，但不限于，矿物油、液体石油、白石油、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。此外，药用组合物可以用含有悬浮或溶解于载体的适合的洗剂或霜配制。适合的载体包括，但不限于，矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡基酯蜡、鲸蜡醇(cetearyl alcohol)、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。本发明药物组合物还可以通过直肠栓剂或以适合的灌肠剂局部施用于下部肠道。局部施用的经皮药膏也包括在本发明中。

本发明的药物组合物可以通过鼻气雾剂或吸入给药。这些组合物可以用药物制剂领域已知的技术制备，且可以制备成盐溶液，采用苄醇或其它适合的防腐剂、增加生物利用率的吸收促进剂、本领域已知的碳氟化合物和/或其它增溶或分散剂。

本发明化合物可以用来与常规消炎剂或与基质金属蛋白酶抑制剂、脂肪氧合酶抑制剂和非IL-1β细胞因子拮抗剂联合使用。

本发明化合物还可以与免疫调节剂(例如，溴匹利明，抗人α-干扰素抗体、IL-2、GM-CSF、蛋氨酸脑菲肽、干扰素-α、二乙基二硫代氨基甲酸酯、肿瘤坏死因子、纳曲酮和rEPO)或与前列腺素组合给药，以防止或治疗IL-1-介导的疾病综合症如炎症。

当本发明化合物与其它药剂组合治疗给药时，它们可以随后或同时给药于患者。此外，本发明药物组合物可以包含如上提到的式1和其它治疗或预防剂组合。

可以被本药物组合物治疗或防止的疾病状态包括，但不限于，炎性疾病、自身免疫疾病或神经变性疾病，和用于抑制涉及例如下列局部缺血性损害的不良的编程性细胞死亡，如心脏局部缺血(例如，心肌梗塞形成)、脑的局部缺血损伤(例如，中风)和肾的局部缺血损伤(例如，缺血性肾病)。本发明的另一方面是将有效量的上述药物组合物给药于需要这种处理(即，患有炎性疾病、自身免疫疾病和神经变性疾病)的哺乳动物(本文称作患者)的方法。

本发明的另一方面是防止患有与局部缺血损害有关的疾病的患者局部缺血损害的方法，包括将有效量的上述讨论的药物组合物给药于需要这些治疗的患者方法。

同样，每一种涉及用于治疗炎性疾病、自身免疫疾病、神经变性疾病和防止局部缺血损害的方法包括使用任何前面给出的最佳组药物组合物和具体实例。

可以治疗或防止的炎性疾病包括，例如、脓毒性休克、败血症、和成人呼吸窘迫综合症。靶体自身免疫疾病包括，例如、风湿病、关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病、慢性甲状腺炎、格雷夫斯氏病、自身免疫胃炎、胰岛素依赖糖尿病、自身免疫溶血性贫血、自身免疫中性白细胞减少症、血小板减少症、慢性活性肝炎、重症肌无力和多发性硬化症。靶体神经变性疾病包括，但不限于，肌萎缩侧脊硬化症、早老性痴呆、帕金森病和原发性脊髓侧索硬化。本发明的药物组合物还可以用来促进伤口愈合。与有害的编程性细胞坏死有关的靶体疾病，换句话说，是那些与局部缺血损害有关的疾病，包括心肌梗塞、中风和局部缺血肾病。本发明的药物组合物还可以用来处理感染性疾病，特别是那些与病毒感染有关的疾病。

术语“有效量”是指从在治疗上面指出的病症时使用大约0.05毫克至大约140毫克/公斤体重/日的剂量水平(典型的是大约2.5毫克至大约7毫克/患者/日)。例如，炎症可以通过施用大约0.01至50毫克本化合物/公斤体重/日(大约0.5毫克至大约3.5毫克/患者/日)，而得到有效地治疗。

可以与载体材料组合而产生单剂量形式的式1化合物的量将取决于治疗的宿主和具体的给药类型。例如，人的口服制剂可以含有0.5毫克至5毫克的式1化合物和与之组合的适宜和常规量的可药用载体，载体的量可以是组合物总量的大约5至大约95％。剂量单位形式通常含有大约1毫克至大约500毫克的式1活性化合物。

然而，应当知道，对于任一特定的患者而言，特定的“有效量”将取决于各种各样的因素，包括所采用特定的化合物的活性、年龄、体重、总的健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药剂组合和要防止或治疗的具体疾病的严重程度。

虽然本发明关注的是本文公开的化合物用于预防和治疗IL-1介导的疾病的应用，但本发明化合物也可以用作其它半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。

本发明化合物还可以用作与ICE/ced-3类半胱氨酸蛋白酶或其它半胱氨酸蛋白酶有效结合的商品化试剂。作为商品化试剂，本发明化合物及其衍生物可以用来阻断靶肽的蛋白酶解或可以衍生，从而结合于稳定的作为用于亲合性色谱应用的粘连底物的树脂。这些或其它特征在于商品化半胱氨酸蛋白酶抑制剂的用途对本领域技术人员而言是显而易见的。

下列实施例旨在说明而非限制本发明。

在下列实施例中，质子NMR谱是在300MHz下获得的；化学位移引证的是内标四甲基甲硅烷的低磁场的化学位移值。

                    实施例1

         抑制ICE/ced-3蛋白酶的活性试验

A.IC₅₀值的确定

利用重组ICE和CPP32酶检测式1化合物的活性的荧光酶试验基本上分别根据Thornberry等(《自然》[Nature],356:768-774(1992)和Nicholson等(《自然》[Nature],376:37-43(1995))(并入本文作为参考)的方法在96孔微量滴定板上进行。用于这些试验的底物是用于ICE试验的乙酰基-Tyr-Val-Ala-Asp-氨基-4-甲基香豆素(AMC)和用于CPP32、Mch2和Mch5试验的乙酰基-Asp-Glu-Val-Asp-氨基-4-甲基香豆素。酶反应是在含有2mM DTT的ICE缓冲液(25mM HEPES、1mMEDTA、0.1％CHAPS、10％蔗糖，pH7.5)中在室温下一式二份进行的。这些试验通过将下列组分混合而进行：

50μl在含有或是8.0(ICE、Mch2、CPP32)或20(Mch5)mM DTT的ICE缓冲液中的或是ICE、Mch2、Mch5，或是CPP32(浓度分别为18.8、38、8.1和0.153nM)的酶

50μl或是式1化合物或是ICE缓冲液(对照)；和

10μl的20mM底物。

在加入底物开始反应前，将意欲试验的酶和式1化合物在微量滴定板孔中在室温下预温育30分钟。使用360nm的激发波长，在460nm下测定荧光发射，在室温下监测荧光AMC产物形式一小时。将在一式二份的(对照)孔中的荧光变化进行平均，将平均值作为抑制剂浓度的函数作曲线图，确定产生50％制的抑制剂浓度(IC₅₀)。此试验的参考化合物是Cbz-ValAlaAsp-H，其对ICE的IC₅₀值是0.064μM而对于CPP32为47μM。结果给于表1(图1)中。

B.解离常数K_i和不可逆抑制剂的不可逆速率常数K₃的确定

对于ICE/ced-3类蛋白酶与竞争性不可逆抑制剂的不可逆抑制；使用由下列公式代表的模型：

在t时间点的产物形式可以用下列等式表达： $[P{]}_t=[E{]}^T\left(\frac{\left[S\right]K_i}{\left[I\right]K_s}\right)\left(\frac{k_s}{k_3}\right)[1-e^{-k_{3}t/(1+\frac{K_i}{\left[I\right]}(1+\frac{\left[S\right]}{K_s}))}]$

                            方程1其中E、I、EI和E-I分别指活性酶、抑制剂、非共价酶-抑制剂配合物和共价酶-抑制剂加合物。K_i值是不可逆结合步骤的总的解离常数，k₃是不可逆速率常数。[S]和K_s值分别是底物浓度和结合到酶上的底物的解离常数。[E]^T是总的酶浓度。

上述等式用来确定给定的结合于ICE/ced-3类蛋白酶的抑制剂的K_i和k₃值。因此，在各种浓度的抑制剂和底物下进行连续60分钟的试验。除了反应是通过将酶加入到底物-抑制剂混合物来起始外，试验基本上是按照上文描述的用来产生表1中的数据相同方式制定的。根据等式Ⅰ，通过刺激产物AMC的形成，作为时间的函数，获得K_i和k₃值。此第二项试验的结果给于下文的表2和3中(图2和3)。

此试验的参考化合物是Cbz-ValAlaAsp-CH₂F，其值在表2和3中标明为“参考”。

                         实施例2(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲

1-甲基吲哚-2-羧酸(107mg,0.6mmol)和(3S)-3-(丙氨酰基)-氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(188mg,96％,0.6mmol)溶解于DMF(2mL)中，之后在氮气氛0℃下，将1-羟基苯并三唑水合物(96mg，0.63mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸酸(EDAC)(161mg,0.84mmol)加入所得的混合物。在0℃下继续搅拌1小时，在室温下再搅拌20小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出黄色固体。用乙醚研磨固体，给出标题产物，为微黄色粉末(213mg,77％)。TLC：(甲醇/二氯甲烷：1/9，硅胶)：                          R_f=0.47；¹H-NMR(CDCl₃+CD₃OD):δ7.96(d,J=8.0,1H),7.57-7.67(m,2H),7.31-7.42(m,2H),7.13-7.19(m,2H),7.06(s,1H),4.91(m,1H),4.65(q,J=7.1,1H),4.01(s,3H),2.59-2.78(m,J=5.6,15.7,2H),1.49(d,J=7.1,3H),1.39s,9H).

                         实施例3(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(127mg,0.28mmol)悬浮于苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)中，并将悬浮液用三氟乙酸(TFA)(1mL)处理。所得的溶液在氮气氛室温下搅拌2小时。之后将反应混合物浓缩，追加二氯甲烷，给出紫色泡沫。将泡沫用乙醚研磨，给出标题产物，为紫色粉末(108mg,97％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：

         R_f=0.27；¹H-NMR(CD₃OD):δ7.62(d,J=8.0,1H),7.44(d,J=8.2,1H),7.2 4-7.32(m,2H),7.07-7.13(m,2H),4.91(m,1H),4.56(q,J=7.1,1H),3.98(s,3H),2.78(d,J=6.5,2H),1.49(d,J=7.3,3H).

                         实施例4(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲(87mg,0.22mmol)溶解于甲醇(3mL)、甲醛(1mL,37％重量水溶液)和乙酸(1mL)中，并将所得的混合物在氮气氛室温下搅拌4小时。反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯提取二次。乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出玻璃状物质，将之用乙醚研磨，给出标题产物，为灰色粉末(24mg,32％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：R_f=0.44；¹H-NMR(CD₃OD):δ7.62(d,J=8.0,1H),7.44(dd,J=0.8,8.4,1H),7.26-7.32(m,1H),7.08-7.13(m,2H),4.63-4.53(m,2H),4.31(m,1H),3.99(s,3H),2.48-2.73(m,2H),1.46(7.1,3H).

                         实施例5(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)脯氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲

1-甲基吲哚-2-羧酸(102mg,0.58mmol)和(3S)-3-(脯氨酰基)-氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(189mg,0.58mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)和DMF(1mL)中，之后在氮气氛0℃下，将4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(71mg,0.58mmol)和EDAC(155mg,0.81mmol)加入混合物中。在0℃下继续搅拌1小时，在室温下再搅拌2小时。反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄溶液间分配。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出153mg棕色泡沫。将泡沫通过在硅胶上使用2％甲醇-二氯甲烷作洗脱液快速色谱，给出标题产物，为浅棕色泡沫(50mg)。TLC：(甲醇/二氯甲烷：5/95，硅胶)：R_f=0.27；¹H-NMR(CDCl₃+CD₃OD):δ8.87(bs,1H),7.63(d,J=7.7,1H),7.38-7.50(m,2H),7.17-7.13(m,1H),6.85(bs,1H),4.90-4.81(m,2H),3.92-3.74(m,5H),2.78-1.93(m,6H),1.37(s,9H).

                         实施例6(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)脯氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)脯氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(50mg,0.1mmol)溶解于苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)中，并将所得的溶液用TFA(1mL)处理。所得的混合液在氮气氛室温下搅拌1小时。之后将反应混合物真空下浓缩，追加二氯甲烷，给出紫色膜。将膜用乙醚研磨，给出标题产物，为紫色粉末(47mg)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：R_f=0.18；¹H-NMR(CD₃OD):δ7.63-6.93(m,6H),6.67(bs,1H),4.89-4.50(m,2H),3.8 6-3,74(m,5H),2.82-2.74(m,2H),2.40-2.30(m,1H),2.15-1.90(m,3H).

                         实施例7(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)脯氨酰基]氨基-4-氧代丁酸

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)脯氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲(87mg,0.22mmol)溶解于甲醇(3mL)、甲醛(1mL,37％重量水溶液)和乙酸(1mL)中，并将所得的混合物在氮气氛室温下搅拌4小时。将反应混合物真空浓缩，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取二次。乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩，给出棕色油状物(22mg)，将之用乙醚研磨，给出标题产物，为淡棕色粉末(8mg)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：R_f=0.28；MS:C₁₉H₂₁N₃O₅+H⁺=372；C₁₉H₂₁N₃O_5GH⁺=370。

                         实施例8(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲

1-甲基吲哚-2-羧酸(88mg,0.5mmol)和(3S)-3-(缬氨酰基)-氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(163mg,0.5mmol)溶解于DMF(1mL)和二氯甲烷(2mL)中，之后在氮气氛0℃下，将DMAP(61mg,0.50mmol)和EDAC(134mg,0.7mmol)加入溶液中。在0℃下继续搅拌1小时，在室温下再搅拌4小时。反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄溶液间分配。乙酸乙酯溶液用5％KHSO₄溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出黄色泡沫。将泡沫用乙醚研磨，给出标题产物，为淡黄色泡沫(203mg,86％)。TLC：(甲醇/二氯甲烷：5/95，硅胶)：R_f=0.17。

                          实施例9(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(170mg,0.36mmol)溶解于苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)中，并将所得的溶液用TFA(1mL)处理。所得的溶液在氮气氛室温下搅拌3.5小时。之后将反应混合物真空下浓缩，追加二氯甲烷，给出紫色泡沫。将泡沫用乙醚研磨，给出标题产物，为固体紫色粉末(133mg,89％)。

                         实施例10(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]氨基-4-氧代丁酸

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲(136mg,0.33mmol)溶解于甲醇(3mL)、甲醛(1mL,37％wt水溶液)和乙酸(1mL)中，并将所得的混合物在氮气氛室温下搅拌5小时。将反应混合物真空浓缩，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取二次。合并的乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩，给出紫色泡沫，将之用乙醚研磨，给出标题产物，为淡紫色粉末(40mg,33％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：R_f=0.36；MS:C₁₉H₂₃N₃O₅+H⁺=374；C₁₉H₂₃N₃O_5GH⁺=372.

                         实施例11(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)亮氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲

1-甲基吲哚-2-羧酸(70mg,0.4mmol)和(3S)-(亮氨酰基)氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(131mg,0.4mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)中，之后在氮气氛0℃下，将DMAP(49mg,0.40mmol)和EDAC(107mg,0.56mmol)加入溶液中。在0℃下继续搅拌1小时，在室温下再搅拌3小时。反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄间分配。乙酸乙酯溶液依次用5％KHSO₄溶液、饱和碳酸氢钠(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩，给出粗制的固体。将此固体用乙醚研磨，给出标题产物，为白色粉末(156mg,80％)。TLC：(甲醇/二氯甲烷：5/95，硅胶)：  R_f=0.42；¹H-NMR(CDCl₃+CD₃OD):δ8.18(s,1H),7.66-7.11(m,6H),6.97(s,1H),6.32(d,J=7.7,1 H),4.95-4.88(m,1H),4.70-4.62(m,1H),4.03(s,3H),2.82-2.56(m,2H),1.87-1.58(m,3H),1.38(9H),1.00(t,J-6.3,6H).

                         实施例12(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)亮氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)亮氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(132mg,0.27mmol)溶解于苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)中，并将所得的溶液用TFA(1mL)处理。所得的溶液在氮气氛室温下搅拌3小时。之后将反应混合物真空下浓缩，追加二氯甲烷，给出粉色泡沫。将泡沫用乙醚研磨，给出标题产物，为粉色粉末(108mg，92％)。TLC(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：

        R_f=0.22；¹H-NMR(CD₃OD):δ7.62(dt,J=8.0,1.1,1H),7.45(dd,J=8.5,0.8,1H),7.32-7.23(m,2H),7.13-7.08(m,2H),4.94-4.89(m,1H),4.64-4.59(m,1H),3.98(s,3H),2.78(d,J=6.2,2H),1.82-1.70(m,3H),1.02(d,J=6.0,3H),0.99(d,J=6.3,3H).

                         实施例13(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)亮氨酰基]氨基-4-氧代丁酸

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2羰基)亮氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲(90mg,0.21mmol)溶解于甲醇(3mL)、甲醛(1mL,37％wt水溶液)和乙酸(1mL)中，并将所得的混合物在氮气氛室温下搅拌7小时。将反应混合物真空浓缩，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取二次。乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩，给出紫色泡沫，将之用乙醚研磨，给出标题产物，为紫色粉末(35mg,43％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：R_f=0.45；MS:C₂₀H₂₅N₃O₅；M+H⁺=388；M-H⁺=386.

                        实施例14(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)苯丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲

1-甲基吲哚-2-羧酸(72mg,0.41mmol)和(3S)-3-(苯丙氨酰基)-氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(154mg,0.41mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)中，之后在氮气氛0℃下，将DMAP(53mg,0.43mmol)和EDAC(109mg,0.57mmol)加入溶液中。在0℃下继续搅拌1小时，在室温下再搅拌4小时。反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄间分配，依次地，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出白色固体。将固体用乙醚研磨，给出标题产物，为白色粉末(179mg,82％)。TLC：(甲醇/二氯甲烷：5/95，硅胶)：R_f=0.44。

                         实施例15(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)苯丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)苯丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(154mg,0.30mmol)溶解于苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)中，并将所得的溶液用TFA(1mL)处理。所得的溶液在氮气氛室温下搅拌4小时。之后将反应混合物真空下浓缩，并用二氯甲烷共沸，给出紫色固体。将固体用乙醚研磨，给出标题产物，为固体紫色粉末(141mg,100％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：R_f=0.25。

                         实施例16(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)苯丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)苯丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲(116mg,0.25mmol)溶解于甲醇(3mL)、甲醛(1mL,37％wt水溶液)和乙酸(1mL)中，并将所得的溶液在氮气氛室温下搅拌9小时。将反应混合物真空浓缩，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取二次。合并的乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出粗制产物，将之用乙醚研磨，给出标题产物，为棕色粉末(26mg,25％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：R_f=0.33；C₂₃H₂₁N₃O₅的MS；M+H⁺=422；M-H⁺=420。

                      实施例17

           (1-甲基吲哚-2-羰基)甘氨酸甲酯

在氮气氛0℃下，将DMAP(1.222g,0.01mol)和EDAC(2.680g,0.014mol)以固体形式加入到1-甲基吲哚-2-羧酸(1.752g,0.01mol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(1.256g,0.01mol)的二氯甲烷(30ml)和DMF(5mL)溶液中。在0℃下搅拌1小时，之后在室温下搅拌3小时。反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄溶液间分配，水层用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯溶液用5％KHSO₄溶液、饱和碳酸氢钠溶液(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出紫色粉末，为粗制产物。将粉末用乙醚研磨，给出标题产物(1.734mg,70％)。TLC：(甲醇/二氯甲烷1∶9)                             R_f=0.61；¹H-NMR(CDCl₃):δ7.65(dt,J=8.0,1.1,1H),7.41-7.31(m,2H),7.16(dd,J=6.6,1.4,1H)6.96(d,J=0.5,1H),6.67(bs,1H),4.25(d,J=5.2,2H),4.05(S,3H),3.82(s,3H).

                      实施例18

                (1-甲基吲哚-2-羰基)甘氨酸

将(1-甲基吲哚-2-羰基)甘氨酸甲酯(1.687g,6.85mmol)溶解于1,4-二噁烷(10mL)中，并用1N氢氧化锂(0.7mL，水溶液)搅拌下处理。反应混合物即刻变清，并用1N盐酸酸化，浓缩除去1,4-二噁烷，产生紫色沉淀。滤出沉淀物，用水洗涤，并真空干燥，给出标题产物，为紫色粉末(1.482g,93％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)∶R_f=0.28；¹H-NMR(CD₃OD):δ7.61(dt,J=8.2,1H).7.44(dd,J=8.5,0.8,1H),7.32-7.26(m,1H),7.13-7.09(m,1H),7.04(s,1H),4.08(s,2H),3.99(s,3H).

                        实施例19(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)甘氨酸]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲

(1-甲基吲哚-2-羰基)甘氨酸(186mg,0.8mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)和DMF(1mL)中，之后在氮气氛0℃下，将所得的溶液用1-羟基苯并三唑水合物(129mg,0.84mmol)和EDAC(215mg,1.12mmol)处理。反应混合物在0℃下继续搅拌10分钟。向反应混合物中加入(3S)-氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲对甲苯硫酸酯(312mg,0.8mmol)，接着加入N-甲基吗啉(0.09mL,0.8mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌1小时和在室温下再搅拌4小时。反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄间分配。产物在收集时沉淀出来。由水层部分得的白色沉淀物通过过滤获得，并用水和乙醚洗涤。另一部分白色沉淀物通常由浓缩有机层获得，并将残留物用乙醚研磨。合并的沉淀物为标题产物(297mg,66％)。TLC：(甲醇/二氯甲烷：1/9，硅胶)：

     R_f=0.42；¹H-NMR(CDCl₃)δ7.65(d,J=8.0,1H),7.41-7.34(m,2H),7.19-7.13(m,2H),7.05(d,J=0.5,1H),4.95-4.93(m,1H),4.08(s,2H),4.03(s,3H),2.79-2.59(m,2H),1.41(s,9H).

                         实施例20(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)甘氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)甘氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(118mg,0.26mmol)溶解于苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)中，并将所得的溶液用TFA(1mL)处理。所得的溶液在氮气氛室温下搅拌3小时。之后将反应混合物真空下浓缩，追加二氯甲烷，给出绿色固体。将固体用乙醚研磨，给出标题产物，为绿色粉末(88mg，87％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：

R_f=0.47；¹H-NMR(CD₃OD):δ7.63-7.08(m,6H),4.95(m,1H),4.05(s,2H),4.01(s,3H),3.77(d,J=5.8,2H).

                         实施例21(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)甘氨酰基]氨基-4-氧代丁酸

将(3S)-3-[(1-甲基吲哚-2-羰基)甘氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲(76mg,0.20mmol)溶解于甲醇(3mL)、甲醛(1mL,37％wt水溶液)和乙酸(1mL)的混合物中，并将混合物在氮气氛室温下搅拌6小时。将反应混合物真空浓缩，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取二次。合并的乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出粗制的产物，将之用乙醚研磨，给出标题产物，为淡黄色粉末(29mg,44％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，8∶1∶1，硅胶)：R_f=0.61；MS:C₁₆H₁₇N₃O₅:M+H⁺,330.¹H-NMR(CD₃OD):δ7.73-7.08(m,5H),4.90-3.8(m,7H),2.72-2.47(m,2H).

                         实施例22(3S)-3-[(1-苄基吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲

1-苄基吲哚-2-羧酸(477mg,1.9mmol)和(3S)-(丙氨酰基)氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(581mg,1.9mmol)溶解于二氯甲烷(8mL)中，之后在氮气氛0℃下，将DMAP(232mg,1.9mmol)和EDAC(498mg,2.6mmol)加入溶液。所得的溶液在0℃下继续搅拌1小时，在室温下再搅拌2小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出黄色泡沫。将泡沫用快速色谱(硅胶，甲醇/二氯甲烷2-5％)纯化，给出标题产物，为白色泡沫(570mg,56％)。TLC：(甲醇/二氯甲烷：1/9，硅胶)：

                  R_f=0.38；¹H-NMR(CDCl₃):δ8.60(bs,1H),7.67(dd,J=8.0,1.1,1H),7.50(d,J=8.0,1H),7.33-7.01(m,8H),6.79(d,J=7.4,1H),5.78(s,2H),4.87-4.83(m,1H),4.67-4.62(m,1H),2.73-2.43(m,2H),1.46(d,J=7.1,3H),1.39(s,9H).

                        实施例23(3S)-3-[(1-苄基吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲

将(3S)-3-[(1-苄基吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(247mg,0.46mmol)溶解于苯甲醚(0.5mL)和二氯甲烷(2mL)中，并将所得的混合物用TFA(1mL)处理。所得的溶液在氮气氛室温下搅拌3.5小时。之后将反应混合物真空下浓缩，追加二氯甲烷，给出淡绿色固体。将固体用乙醚研磨，给出标题产物，为绿色粉末(215mg,98％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，8∶1∶1，硅胶)：

         R_f=0.50；¹H-NMR(CD₃OD):δ8.26(d,J=8.0,1H),7.65(d,J=8.0,1H),7.39(dd,J=8.5,0.8,1H),7.26-7.01(m,8H),5.79(d,J=7.4,2H),4.56-4.49(m,1H),2.77-2.62(m,2H),1.43(d,J=7.4,3H).

                         实施例24(3S)-3-[(1-苄基吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸

将(3S)-3-[(1-苄基吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲(176mg,0.37mmol)溶解于甲醇(4.5mL)、甲醛(1.5mL,37％wt水溶液)和乙酸(1.5mL)中，并将所得的混合物在氮气氛室温下搅拌4小时。将反应混合物真空浓缩，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取二次。合并的乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩，给出粗制的产物，将之用乙醚研磨，给出标题产物，为淡绿色粉末(113mg,72％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：

    R_f=0.38；MS:C₂₃H₂₃N₃O₅；M+H⁺=422；M-H⁺=420.¹H-NMR(CD₃OD):δ7.65(d,J=8.0,1H),7.37(dd,J=8.2,0.8,1H),7.2 4-7.04(m,8H),5.87-5.73(m,2H),4.60-4.49(m,2H),4.32-4.23(m,1H),2.69-2.44(m,2H),1.41(d,J=7.1,2sets,3H).

                         实施例25(3S)-3-[(1-(4’-丁烯基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲

[1-(4’-丁烯基)吲哚]-2-羧酸(108mg,0.5mmol)和(3S)-(缬氨酰基)-氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(163mg,0.5mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)中。之后在氮气氛0℃下，向此溶液中加入DMAP(61mg,0.50mmol)和EDAC(134mg,0.7mmol)。所得的反应混合物在0℃下继续搅拌1小时，在室温下再搅拌5小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出黄色泡沫。将泡沫用乙醚研磨，给出标题产物，为淡黄色粉末(146mg，55％)。TLC：(甲醇/二氯甲烷：1/9，硅胶)：

                   R_f=0.23；¹H-NMR(CDCl₃):δ8.69(bs,1H),7.64(d,J=8.0,1H)7.41-7.13(m,3H),6.99(5,1H),6.91(d,J=8.8,1H),5.85-5.71(m,1H),5.04-4.94(m,3H),4.65-4.45(m,3H),3.52-2.50(m,4H),2.33-2.26(m,1H),1.41(s,9H),1.05-1.02(m,6H).

                          实施例26(3S)-3-[(1-(4’-丁烯基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲

将(3S)-3-[(1-(4’-丁烯基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(126mg,0.24mmol)溶解于苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)中，并将所得的溶液用TFA(1mL)处理。酸化的反应混合物在氮气氛室温下搅拌4小时。将反应混合物浓缩，追加二氯甲烷，给出粗制的固体。将固体用乙醚研磨，给出标题产物，为固体紫色粉末(99mg,88％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：

                   R_f=0.36；¹H-NMR(CD₃OD):δ8,46(d,J=8.0,1H)8.12(d,J=8.2,1H),7.62(d,J=8.0,1H),7.46(dd,J=8.5,0.8,1H),7.31-7.21(m,2H),7.31-7.05(m,2H),5.84-5.70(m,1H),4.99-4.78(m,3H),4.62-4.57(m,2H),4.39-4.33(m,1H),2.88-2.69(m,2H),2.52-2.45(m,2H),2.24-2.15(m,1H),1.07-1.02(m,6H).

                         实施例27(3S)-3-[(1-(4'-丁烯基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]氨基-4-氧代丁酸

将(3S)-3-[(1-(4’-丁烯基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲(79mg,0.17mmol)溶解于甲醇(3mL)、甲醛(1mL,37％wt水溶液)和乙酸(1mL)中，并将所得的混合物在氮气氛室温下搅拌7小时。将反应混合物真空浓缩，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取二次。合并的乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出粗制产物，将之用乙醚研磨，给出标题产物，为淡紫色粉末(24mg,34％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，20∶1∶1，硅胶)：

           R_f=0.60；MS:C₂₂H₂₇N₃O₅:M+H⁺=414；M-H⁺=412.¹H-NMR(CD₃OD):δ8.09-8.05(m,1H),7.62(d,J=8.0,1H),7.46(dd,J=8.5,0.8,1H),7.31-7.25(m,1H),7.13-7.07(m,2H),5.8 5-5.71(m,1H),4.99-4.90(m,3H),4.62-4.54(m,3H),4.41-4.30(m,2H),2.75-2.46(m,4H),2.22-2.14(m,1H),1.06-1.02(m,6H).

                           实施例28(3S)-3-[(1-(2’-(1’-叔丁氧基-1’-氧代)乙基)吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲

1-[2’-(1’-叔丁氧基-1’-氧代)乙基]吲哚-2-羧酸(220mg,0.8mmol)和(3S)-(丙氨酰基)-氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(241mg,0.8mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)和DMF(1mL)中，并将所得的溶液用DMAP(98mg,0.8mmol)和EDAC(211mg,1.1mmol)处理。所得的反应混合物在0℃下继续搅拌1小时，在室温下再搅拌3小时，给出白色沉淀。将反应混合物浓缩，除去二氯甲烷，并用5％KHSO₄将反应猝灭。过滤收集白色固体，用水和乙醚洗涤，并真空干燥，给出标题产物，为白色粉末(297mg,66％)。TLC：(甲醇/二氯甲烷：1/9，硅胶)：

                                       R_f=0.27.¹H-NNR(CD₃OD):δ7.65(d,J=8.0,1H),7.41(d,J=8.0,1H),7.26(s,1H),7.22(d,J=3.0,1H),7.16-7.11(m,1H),5.32(d,J=2.2,2H),4.94-4.89(m,1H),4.54(q,J=7.1,1H),2.76(d,2H),1.48(d,J=7.4,3H).

                         实施例29(3S)-3-[(1-(羧甲基)吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲

将含(3S)-3-[(1-(2’-(1’-叔丁氧基-1’-氧基)乙基吲哚-2-羰基)]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(274mg,0.51mmol)的二氯甲烷(2mL)用TFA(1mL)处理。所得的溶液在氮气氛室温下搅拌2小时。之后将反应混合物浓缩，追加二氯甲烷，给出固体。将固体用乙醚研磨，给出标题产物，为浅灰色粉末(262mg)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，8∶1∶1，硅胶)：    R_f=0.08.¹H-NMR(CD₃OD):δ7.65(d,J=8.0,1H),7.41(d,J=8.0,1H),7.2 6(s,1H),7.22(d,J=3.0,1H),7.16-7.11(m,1H),5.32(d,J=2.2,2H),4.94-4.89(m,1H),4.54(q,J=7.1,1H),2.76(d,2H),1.48(d,J=7.4,3H).

                        实施例30(3S)-3-[(1-(羧甲基)吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸

将(3S)-3-[(1-(羧甲基)吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲(241mg,0.47mmol)溶解于甲醇(3mL)、甲醛(1mL,37％wt水溶液)和乙酸(1mL)中，并将所得的混合物在氮气氛室温下搅拌3小时。将反应混合物真空浓缩，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取二次。合并的乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出玻璃状物质，将之用乙醚研磨，给出标题产物，为淡黄色粉末(114mg,63％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，8∶1∶1，硅胶)：

           R_f=0.16.¹H-NMR(CD₃OD):δ7.65(d,J=8.0,1H),7.40(d,J=8.2,1H),7.33-7.27(m,1H),7.24(s,1H),7.16-7.10(m,1H),5.36和5.26(AB,J=17.9,2H),4.64-4.50(m,2H),4.34-4.20(m,1H),2.72-2.48(m,2H),1.45(d,J=7.14,3H,2sets).

                        实施例31(3S)-3-[(1-(3’-(1’-叔丁氧基-1’-氧代)丙基)吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲

1-[3’-(1’-叔丁氧基-1’-氧代)丙基]吲哚-2-羧酸(147mg,0.51mmol)溶解于DMF(3mL)中，并向所得的溶液中加入DMAP(68mg,0.56mmol)和EDAC(140mg,0.73mmol)。在氮气氛0℃下继续搅拌10分钟。向反应混合物中加入(3S)-3-(丙氨酰基)-氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(154mg,0.51mmol)，将混合物在0℃下继续搅拌1小时，在室温下再搅拌4小时。反应混合物在5％KHSO₄溶液和乙酸乙酯间分配。乙酸乙酯溶液依次用5％KHSO₄、饱和碳酸氢钠溶液(2x)和盐水洗涤,用硫酸钠干燥，并浓缩，给出泡沫，为粗制产物。将泡沫用乙醚研磨，给出标题产物，为白色粉末(161mg,55％)。TLC：(甲醇/二氯甲烷：1/9，硅胶)：R_f=0.36；¹H-NMR(CD₃OD):δ7.62(d,J=8.0,1H),7.50(d,J=8.2,1H),7.29(t,J-8.2,1H),7.22(d,J=3.0,1H),7.16(s,1H),7.11(t,J=7.4,1H),4.96-4.90(m,1H),4.82-4.72(m,2H),4.56(q,J=7.1,1H),2.78-2.66(m,4H),1.49(d,J=7.4,3H),1.40(s,9H),1.28(s,9H).

                          实施例32(3S)-3-[(1-(2’-羧乙基)吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸缩氨基脲

将(3S)-3-[(1-(3’-(1’-叔丁氧基-1’-氧基)丙基吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸叔丁基酯缩氨基脲(140mg,0.24mmol)溶解于苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)中，并将悬浮液用TFA(1mL)处理。所得的溶液在氮气氛室温下搅拌2小时。之后将反应混合物浓缩，追加二氯甲烷，给出固体。将固体用乙醚研磨，给出标题产物，为无色粉末(107mg,95％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，8∶1∶1，硅胶)：

                R_f=0.17；¹H-NMR(CD₃OD):δ7.62(d,J=8.0,1H),7.50(d,J=8.2,1H),7.32-7.27(m,1H),7.23(d,J=3.0,1H),7.13-7.08(m,2H),4.97-4.90(m,1H),4.80-4.69(m,1H),4.54(q,J=7.1,1H),2.82-2.73(m,4H),1.49(d,J=7.1,3H).

                          实施例33(3S)-3-[(1-(2’-羧乙基)吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基-4-氧代丁酸

将(3S)-3-[(1-(2’-羧乙基)吲哚-2-羰基)丙氨酰基]氨基=4-氧代丁酸缩氨基脲(95mg,0.21mmol)溶解于甲醇(3mL)、甲醛(1mL,37％Wt水溶液)和乙酸(1mL)中，并将所得的混合物在氮气氛室温下搅拌4小时。将反应混合物浓缩，除去甲醇，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取二次。合并的乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出玻璃状物质，将之用乙醚研磨，给出标题产物，为淡黄色粉末(20mg，20％)。TLC：(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸，8∶1∶1，硅胶)：

                R_f=0.26；¹H-NMR(CD₃OD):δ7.62(d,J=8.0,1H),7.51(d,J=1H),7.32-7.27(m,1H),7.13-7.08(m,2H),4.80-4.7 6(m,2H),4.68-4.52(m,2H),4.37-4.25(m,1H),2.84-2.50(m,3H),1.47(d,J=7.1,3H,2sets).

                      实施例34

                2,6-二氯苄氧基乙醇

将氢化钠(1.76g,0.044mol,60wt％矿物油液)缓慢加入乙二醇(11.2mL)的无水THF(100mL)溶液中。将所得的混合物在氮气氛室温下短暂地搅拌一下。向混合物中加入α-溴-2,6-二氯甲苯(9.894g,0.04mol)，将混合物在氮气氛室温下再搅拌5.5小时。加入另一份氢化钠(0.400g)，之后将混合物在室温下搅拌24小时。将反应混合物浓缩，除去THF，并将残留物在乙醚和水间分配。水层用乙醚(2x)反萃取。合并的有机溶液用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，给出粗制的油状物。将该油状物在硅胶上用乙酸乙酯/己烷(10-50％)作洗脱液快速色谱，给出标题产物，为黄色油状物(4.56g,51％)。(TLC乙酸乙酯/己烷，30/70)；R_f=0.26.¹H-NMR(CDCl₃):δ7.35-7.18(m,3H),4.84(s,2H),3.76-3.66(m,4H).

                      实施例35

      5-(2’,6’二氯苄氧基)-4-羟基-3-硝基-戊酸叔丁基酯

将DMSO滴加入(47.5mL)草酰氯(7.5mL,15.0mmol,2.0M二氯甲烷溶液)溶液中，并将所得的反应混合物在-78℃下搅拌10分钟，向此混合物中滴加入含2,6-二氯苄氧基乙醇(2211mg,10mmol)的无水二氯甲烷(5mL)，之后将此混合物在氮气氛-78℃下搅拌15分钟。向此反应混合物中滴加入三乙胺(8.4mL,60mmol)，所得的混合物在-78℃下搅拌10分钟，之后让之升温至0℃(经大约20分钟)。向此反应混合物中滴加入3-硝基丙酸叔丁基酯的二氯甲烷溶液(1927mg,11.0mmol，于5mL无水二氯甲烷中)，并将混合物搅拌1小时。残留物用乙醚萃取，并将所得的白色固体通过过滤收集。有机滤液用5％KHSO₄溶液(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出粗制的油状物(3.95g)。将油状物在硅胶上用乙酸乙酯/已烷(1∶2)作洗脱液快速色谱，给出标题产物，为黄色油状物(2.917g,74％)。TLC(乙酸乙酯，己烷，60/40):R_f=0.54。

                        实施例36

3-氨基-5-(2’,6’-二氯苄氧基)-4-羟基-戊酸叔丁基酯

将5-(2’,6’-二氯苄氧基)-4-羟基-3-硝基戊酸叔丁基酯(2.213g,0.0056mol)和湿的阮内镍(3.4g)在甲醇(150mL)中的混合物在氢气鼓泡下在室温下搅拌2小时。将反应混合物滤过Celite，并将滤饼用甲醇洗涤。浓缩滤液，并追加二氯甲烷，给出标题产物(2.078g,100％)。TLC(甲醇/二氯甲烷1/9):R_f=0.21。

                        实施例37

           N-(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酸

将DMAP(367mg,3.0mmol)和EDAC(748mg,3.9mmol)以固体形式加入到1,3-二甲基吲哚-2-羧酸(568mg,3.3mmol)的DMF(5mL)溶液中，并将所得的混合物在氮气氛0℃下搅拌10分钟。向此混合物中加入缬氨酸甲酯(553mg,3.3mmol，于5mL二氯甲烷中)的二氯甲烷溶液，并将混合物先在0℃下搅拌1小时，之后在室温下搅拌5小时。反应混合物在乙酸乙酯和5％KHSO₄间分配，水溶液用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯依次用5％KHSO₄溶液、饱和碳酸氢钠溶液(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出标题产物，为黄色浆液(900mg)。

上述黄色浆液的1,4-二噁烷溶液(5mL)用氢氧化锂(1.0M LiOH,3.0mL)的水溶液处理，并将所得的混合物在室温下搅拌1小时(混合物变成均质液)。将反应混合物用1M盐酸酸化，并用乙酸乙酯(3x)萃取。合并的乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出标题产物，为黄色泡沫(839mg)。

      ¹H-NMR(CD₃OD):δ7.58(dt,J=8.0,0.8,1H),7.37(dd,J-8.0,0.8,1H),7.29-7.24(m,1H),7.12-7.06(m,1H),4.57(d,J=5.8,1H),3.80(s,3H),2.48(s,3H),3.34-2.28(m,1H),1.10(d,J=6.9,3H),1.07(d,J=6.9,3H).

                     实施例38

N-[(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-(2’,6’-二氯苄氧基)戊酸叔丁基酯

将1-羟基苯并三唑水合物(153mg,1.0mmol)和EDAC(268mg,1.4mmol)加入到N-(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酸(288mg,1.0mmol，于3mL二氯甲烷中)的二氯甲烷溶液中。所得的混合物在氮气氛室温下搅拌10分钟。向此反应混合物中加入3-氨基-5-(2’,6’-二氯苄氧基)-4-羟基戊酸叔丁基酯(364mg,1.0mmol,于2mL二氯甲烷中)的二氯甲烷溶液中，并将混合物先在氮气氛0℃下搅拌1小时，之后在室温下搅拌16小时。反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄溶液间分配，水溶液用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯溶液用5％KHSO₄溶液饱和碳酸氢钠溶液(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出粗制的产物(583mg)。将上述粗制的产物在硅胶上用乙酸乙酯/己烷(2/3)作洗脱液进行快速色谱，给出标题产物，为白色固体(260mg)。TLC(乙酸乙酯，已烷，1∶1):R_f=0.38。

                    实施例39

N-[(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-(2’,6’-二氯苄氧基)戊酸叔丁基酯

Dess-Martin periodinane(195mg)以固体形式加入N-[(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-(2’,6’-二氯苄氧基)戊酸叔丁基酯(96mg)的DMSO(1.5ml)溶液中。所得的溶液在氮气氛室温下搅拌30分钟，之后在乙酸乙酯和水间分配。有机相用水(2x)和盐水洗涤，干燥(硫酸钠)，并浓缩，给出白色固体(83mg)。用乙酸乙酯/己烷(1∶1)快速色谱纯化，给出标题产物，为白色固体(54mg)。TLC(乙酸乙酯，己烷，1∶1，硅胶)：R_f=0.52。

                     实施例40

N-[(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-(2’,6’-二氯苄氧基)戊酸

将N-[(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-(2’,6’-二氯苄氧基)戊酸叔丁基酯(49mg)的苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)溶液用TFA(1mL)处理，并在氮气氛室温下搅拌30分钟。将所得的溶液浓缩，追加二氯甲烷，给出白色固体，为粗制产物。此粗制产物用乙醚研磨，产生标题产物，为白色粉末(34mg)。MS:C₂₈H₃₁Cl₂N₃O₆；MH⁺=576/578；(MH)^-=574/576。

                     实施例41

N-[(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯

将4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(67mg,0.55mmol)和1-(3’-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDAC)(125mg,0.65mmol)以固体形式加入到1,3-二甲基吲哚-2-羧酸(95mg,0.5mmol于1mLDMF中)的DMF溶液中，并将所得的混合物在氮气氛0℃下搅拌10分钟。向所得反应混合物中加入N-(缬氨酰基)-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(153mg,0.5mmol，于1mL二氯甲烷中)的二氯甲烷溶液，并将混合物先在0℃下搅拌1小时，之后在室温下搅拌4小时。反应混合物在乙酸乙酯和5％KHSO₄溶液间分配，水溶液用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯溶液用5％KHSO₄溶液、饱和碳酸氢钠溶液(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出一固体。此固体用乙醚/己烷研磨，产生标题产物，为白色固体(134mg,56％)。TLC(乙酸乙酯，己烷，2∶1):R_f=0.42.¹H-NMR(CDCl₃):δ7.59(d,J=8.8,1H),7.37(d,J=7.7,1H),7.29-7.24(m,1H),7.12-7.07(m,1H),4.49-4.26(m,5H),3.81-3.79(m,3H),2.66-2.47(m,5H),2.22-2.10(m,1H),1.45-1.41(m,9H),1.09-1.03(m,6H).

                     实施例42

N-[(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯

将二甲基亚砜(0.09mL,1.25mmol)加入到草酰氯(0.19mL,2.0M,0.38mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中，并将所得的反应混合物在氮气氛-78℃下搅拌10分钟。向此混合物中滴加入N-[1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(119mg,0.25mmol于1mL无水二氯甲烷中)的无水二氯甲烷溶液，之后将所得的反应混合物在-78℃下搅拌15分钟。向此反应混合物中滴加入三乙胺(0.21mL,1.5mmol)，所得的混合物在-78℃下搅拌10分钟，之后让之升温至室温。此反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄间分配，并将水层用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯溶液用5％KHSO₄溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出粗制产物。将此产物在硅胶上用乙酸乙酯/己烷(2∶1)作洗脱液色谱，给出标题产物，为白色油状物(48mg,41％)。TLC(乙酸乙酯/己烷，2∶1):R_f=0.58。

                     实施例43

N-[(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸

将N-[(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯(40mg)的苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)溶液用三氟乙酸(1mL)处理，并将所得的反应混合物在氮气氛室温下搅拌30分钟。将所得的反应混合物浓缩，追加二氯甲烷，给出一固体。此固体用乙醚研磨，产生标题产物，为棕色粉末(17mg)。TLC(二氯甲烷/甲醇/乙酸，20∶1∶1):R_f=0.40。MS:C₂₁H₂₆FN₃O₅；MH⁺=420；(MH)^-=418。

                     实施例44

N-[(1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯

将DMAP(95mg,0.78mmol)和EDAC(200mg,1.04mmol)以固体形式加入到1-甲基吲哚-2-羧酸(130mg,0.74mmol)和N-(缬氨酰基)-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(227mg,0.74mmol)的二氨甲烷(5mL)溶液中，并将所得的混合物在氮气氛0℃下搅拌1小时和在室温下搅拌4小时。将反应混合物在乙酸乙酯和5％KHSO₄间分配，水溶液用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯溶液用5％KHSO₄溶液、饱和碳酸氢钠溶液(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出一泡沫。此泡沫用乙醚研磨，产生标题产物，为淡棕色固体(224mg,65％)。TLC(甲醇/二氯甲烷，1∶9):R_f=0.46。

                      实施例45

N-[(3-氯-1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯

将DMSO(0.06mL,0.9mmol)加入到草酰氯(0.14mL,2.0M,0.28mmol于二氯甲烷4mL中的)溶液中，并将此溶液在-78℃下氮气氛下搅拌10分钟。向此反应混合物中滴加入N-[1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(85mg,0.18mmol)的无水二氯甲烷(1mL)溶液，之后将所得的反应混合物-78℃下搅拌15分钟。向此反应混合物中滴加入三乙胺(0.15mL,1.08mmol)，所得的混合物在-78℃下搅拌10分钟，之后让之升温至室温。此反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄间分配，并将水层用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯溶液用5％KHSO₄溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出棕色泡沫。将此泡沫用乙醚研磨，给出标题产物，为淡棕色粉末(64mg)。MS:C₂₄H₃₁ClFN₃O₅；(MH)^-=494/496。

                      实施例46

N-[(3-氯-1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸

将N-[(3-氯-1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯(47mg)的苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)溶液用三氟乙酸(1mL)处理，并将所得的反应混合物在氮气氛室温下搅拌30分钟。将所得的溶液浓缩，追加二氯甲烷，之后用乙醚研磨，给出一棕色粉末(28mg)。将此粉末在硅胶上用含有一滴乙酸的甲醇/二氯甲烷的洗脱液进行快速色谱，给出标题产物(25mg)。TLC(二氯甲烷/甲醇，9∶1)：R_f=0.29。MS:C₂₀H₂₃ClFN₃O₅；MH⁺=440.442；(M-H)^-=438/440。

                      实施例47

N-[(5-氟-1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯

将DMAP(257mg,2.08mmol)和EDAC(427mg,2.23mmol)以固体形式加入到5-氟-1-甲基吲哚-2-羧酸(359mg,86mmol于3mLDMF中)的溶液中，并将所得的反应混合物在氮气氛0℃下搅拌10分钟。加入N-(缬氨酰基)-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(579mg,1.86mmol)的DMF(3mL)溶液中，并将所得的混合物在氮气氛0℃下搅拌1小时和在室温下搅拌4小时。将反应混合物在乙酸乙酯和5％KHSO₄间分配，水溶液用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯用5％KHSO₄溶液、饱和碳酸氢钠溶液(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出淡黄色固体(0.827mg)。TLC(甲醇/二氯甲烷，1∶9):R_f=0.52。

                      实施例48

N-[(3-氯-5-氟-1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯

将DMSO(0.60mL,8.5mmol)加入到草酰氯(2.1mL,2.0M,4.2mmol于二氯甲烷15mL中的)溶液中，并将此反应混合物在-78℃下氮气氛下搅拌10分钟。向此反应混合物中滴加入N-[(5-氟-1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(820mg,1.7mmol，于8mL无水二氯甲烷中)的二氯甲烷溶液，并在-78℃下搅拌15分钟。向此反应混合物中滴加入TEA(1.4mL,10.2mmol)，所得的混合物在-78℃下搅拌10分钟，之后让之升温至室温。此反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄间分配，并将水层用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯溶液用5％KHSO₄溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出标题产物，为淡黄色固体。用乙醚研磨，给出标题产物，为白色粉末(705mg,85％)。TLC(甲醇/二氯甲烷，1∶9):R_f=0.63。MS:C₂₄H₃₀ClF₂N₃O₅；MH⁺=514/516；(M-H)^-=512/514。

                       实施例49

N-[(3-氯-5-氟-1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸

将N-[(3-氯-5-氟-1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯(682mg)的苯甲醚(1mL)和二氯甲烷(10mL)溶液用三氟乙酸(5mL)处理，并将所得的反应混合物在氮气氛室温下搅拌45分钟。将所得的溶液浓缩，追加二氯甲烷，之后用乙醚研磨，给出标题产物，为白色粉末(500mg)。MS:C₂₀H₂₂ClF₂N₃O₅；MH⁺=458/460；(M-H)^-=456/458。

                       实施例50

N-[(1-(3’-苯丙基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯

将DMAP(122mg,1.0mmol)和EDAC(249mg,1.3mmol)以固体形式加入到1-(3’-苯丙基)吲哚-2-羧酸(279mg,1.0mmol于2mL DMF中)的溶液中,并将所得的反应混合物在氮气氛0℃下搅拌10分钟。加入N-(缬氨酰基)-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(306mg,1.0mmol于2mL二氯甲烷中)的二氯甲烷溶液中，并将所得的混合物在氮气氛0℃下搅拌1小时和在室温下搅拌4小时。将此黄色反应混合物在乙酸乙酯和5％KHSO₄间分配，水溶液用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯用5％KHSO₄溶液、饱和碳酸氢钠溶液(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出粗制的固体(0.827g)。将此粗制的固体在硅胶上用乙酸乙酯/己烷(1∶2)作洗脱液进行色谱，给出标题产物，为淡黄色固体(171mg)。TLC(乙酸乙酯/己烷，2∶1):R_f=0.57。

                       实施例51

N-[(1-(3’-苯丙基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯

将DMSO(0.11mL,1.5mmol)加入到草酰氯(0.22mL,2.0M,0.44mmol于二氯甲烷3.5mL中的)的二氯甲烷溶液中，并将此反应混合物在-78℃下氮气氛下搅拌10分钟。向此反应混合物中滴加入N-[(1-(3’-苯丙基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(169mg,0.3mmol,于1.5mL无水二氯甲烷中)的二氯甲烷溶液，并在-78℃下搅拌15分钟。向此反应混合物中滴加入三乙胺(TEA)(0.25mL,1.8mmol)，所得的混合物在-78℃下搅拌10分钟，之后让之升温至室温。此反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄间分配，并将水层用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯溶液用5％KHSO₄溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出粗制产物，将此粗制产物用己烷研磨，给出标题产物，为淡黄色粉末(129mg,77％)。TLC(乙酸乙酯/己烷，2∶1):R_f=0.69。

                        实施例52

N-[(1-(3’-苯丙基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸

将N-[(1-(3’-苯丙基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯(97mg)的苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)溶液用三氟乙酸(TFA)(1mL)处理，并将所得的反应混合物在氮气氛室温下搅拌1小时。将所得的溶液浓缩，追加二氯甲烷，之后用乙醚研磨，给出标题产物，为淡黄色粉末(14mg)。TLC(二氯甲烷/甲醇/乙酸，20∶1∶1):R_f=0.4。MS:C₃₂H₄₀FN₃O₅；MH⁺=510；(M-H)^-=508。

                      实施例53

N-[(1-苯基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯

将DMAP(122mg,1.0mmol)和EDAC(249mg,1.3mmol)以固体形式加入到1-苯基吲哚-2-羧酸(237mg,1.0mmol于2mLDMF中)的DMF溶液中，并将所得的反应混合物在氮气氛0℃下搅拌10分钟。加入N-(缬氨酰基)-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(306mg,1.0mmol于2mL二氯甲烷中)的二氯甲烷溶液中，并将所得的混合物在氮气氛0℃下搅拌1小时和在室温下搅拌4小时。将此黄色反应混合物在乙酸乙酯和5％KHSO₄间分配，水溶液用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯用5％KHSO₄溶液、饱和碳酸氢钠溶液(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出无色玻璃状物(0.827g)。将此粗制的固体在硅胶上用乙酸乙酯/己烷(1∶2)作洗脱液进行色谱，给出标题产物，为淡黄色固体(400mg,78％)。TLC(乙酸乙酯/己烷，1∶1):R_f=0.27。

                      实施例54

N-[(1-苯基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯

将DMSO(0.13mL,1.9mmol)加入到草酰氯(0.29mL,2.0M,0.58mmol于二氯甲烷4mL中的)的二氯甲烷溶液中，并将此反应混合物在-78℃下氮气氛下搅拌10分钟。向此反应混合物中滴加入N-[(1-苯基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(200mg,0.38mmol，于2mL无水二氯甲烷中)的二氯甲烷溶液，并在-78℃下搅拌15分钟。向此反应混合物中滴加入TEA(0.30mL,2.1mmol)，所得的混合物在-78℃下搅拌10分钟，之后让之升温至室温。此反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄间分配，并将水层用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯溶液用5％KHSO₄溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出粗制产物，将此粗制产物研磨，给出标题产物，为淡黄色粉末(181mg)。TLC(乙酸乙酯/己烷，1∶1):R_f=0.43。

                      实施例55

N-[(1-苯基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸

将N-[(1-苯基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯(154mg)的苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)溶液用三氟乙酸(1mL)处理，并将所得的反应混合物在氮气氛室温下搅拌1小时。将所得的溶液浓缩，追加二氯甲烷，之后用乙醚研磨，给出标题产物，为淡黄色粉末(100mg)。TLC(二氯甲烷/甲醇/乙酸，20∶1∶1):R_f=0.38。MS:C₂₅H₂₆FN₃O₅；MH⁺=468；(M-H)^-=466。

                      实施例56

N-[1-(2’-((1’-叔丁氧基-1’-氧代)乙基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯

将DMAP(122mg,1.0mmol)和EDAC(249mg,1.3mmol)以固体形式加入到(1-(2’-((1’-叔丁氧基-1’-氧代)乙基)吲哚-2-羧酸(275mg,1.0mmol于2mLDMF中)的DMF溶液中,并将所得的反应混合物在氮气氛0℃下搅拌10分钟。加入N-(缬氨酰基)-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(306mg,1.0mmol于2mL二氯甲烷中)的二氯甲烷溶液中，并将所得的混合物在氮气氛0℃下搅拌1小时和在室温下搅拌4小时。将此黄色反应混合物在乙酸乙酯和5％KHSO₄间分配，水溶液用乙酸乙酯反萃取。合并的乙酸乙酯用5％KHSO₄溶液、饱和碳酸氢钠溶液(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出粗制的固体(0.827g)。将此粗制的固体在硅胶上用乙酸乙酯/己烷(1∶1)作洗脱液进行色谱，给出标题产物，为白色泡沫(461mg)。TLC(乙酸乙酯/己烷，30∶70):R_f=0.11。

                         实施例57

N-[(1-(2’-((1’-叔丁氧基-1’-氧代)乙基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯

将N-[(1-(2’-((1’-叔丁氧基-1’-氧代)乙基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(230mg,0.41mmol)、N-甲基吗啉N-氧化物(71mg,0.61mmol)和粉状分子筛(205mg)在无水二氯甲烷(2ml)中的混合物在氮气氛室温下搅拌1.5小时。加入四(丙基)铵过钌酸盐(7mg)，并将所得的混合物在氮气氛室温下搅拌2小时。用乙酸乙酯作洗脱液，将反应混合物滤过硅胶。将滤液浓缩，并在硅胶上用乙酸乙酯/己烷(大约1∶2至大约1∶1)作洗脱液色谱，产生标题产物，为黄色油状物(100mg)。TLC(乙酸乙酯/己烷，30/70):R_f=0.27。

                        实施例58

N-[(1-(羧甲基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸

将N-[(1-(2’-((1’-叔丁氧基-1’-氧代)乙基)吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯(100mg)的苯甲醚(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)溶液用三氟乙酸(1mL)处理，并将所得的反应混合物在氮气氛室温下搅拌30分钟。将所得的溶液浓缩，追加二氯甲烷，之后用乙醚研磨，给出标题产物，为淡黄色粉末(26mg)。TLC(二氯甲烷/甲醇/乙酸，8∶1∶1):R_f=0.32。MS:C₂₁H₂₄FN₃O₇；MH⁺=450；(M-H)^-=448。

                      实施例59

N-[(1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯

将1-甲基吲哚-2-羧酸(130mg,0.74mmol)和N-(缬氨酰基)-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯的二氯甲烷(5mL)溶液冷却到0℃。在0℃下的溶液中加入固体4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(95mg,0.78mmol)和1-(3’-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDAC)(200mg,1.04mmol)。并将反应混合物在0℃下搅拌1小时，并让之缓慢升温至室温。4小时后，反应在乙酸乙酯(EtoAc)和5％KHSO₄间分配。有机层用5％KHSO₄溶液、饱和碳酸氢钠溶液(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩成泡沫。粗制的残留物用乙醚研磨，将并固体滤出，给出标题化合物，为浅棕色固体(224mg，收率65％)。TLC(甲醇∶二氯甲烷，1∶9):R_f=0.46。

                      实施例60

N-[(1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯

将N-[(1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-羟基-5-氟戊酸叔丁基酯(51mg,0.11mmol)的DMSO(1mL)溶液中加入Dess-Martinperiodinane(110mg)。在室温下30分钟后，将反应混合物在乙酸乙酯与水间分配。有机层用水和盐水洗涤，干燥并浓缩成白色固体。用乙醚研磨，并收集固体，给出标题产物，为白色粉末(25mg，收率49％)。TLC(甲醇∶二氯甲烷，5∶95):R_f=0.48。

                     实施例61

N-[(1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸

室温下将N-[(1-甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸叔丁基酯(19mg,0.041mmol)和苯甲醚(0.1mL)的二氯甲烷(1mL)溶液用三氟乙酸(0.5mL)处理。30分钟后，将反应混合物浓缩，追加二氯甲烷。粗制的残留物用乙醚研磨，给出标题化合物，为浅棕色固体(12mg，收率72％)。TLC(AcOH:MeOH:CH₂Cl₂,1∶1∶20):R_f=0.59。MS:C₂₀H₂₄FN₃O₅:[MH]⁺406；[MH]^-404。

按照实施例59-61中给出的方法，制备下列化合物：

                       实施例62

N-[(1,3-二甲基-5-氟吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸。收率57％；TLC(MeOH:CH₂Cl₂,5∶95):R_f=0.56。MS:C₂₁H₂₅F₂N₃O₅:[MH]⁺438；[MH]^-436。

                       实施例63

N-[(1-高烯丙基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸。收率29％；TLC(MeOH:CH₂Cl₂,1∶9):R_f=0.33。MS:C₂₃H₂₈FN₃O₅:[MH]⁺446；[MNa]^-468；[MH]^-444。

                       实施例64

N-[(1-甲基-5-氟吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸。收率89％；TLC(MeOH:CH₂Cl₂,9∶1):R_f=0.14。MS:C₂₀H₂₃F₂N₃O₅:[MH]⁺424；[MH]^-422。

                       实施例65

N-[(1-甲基-3-异丁基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸。收率50％；TLC(MeOH:CH₂Cl₂,9∶1):R_f=0.20。MS:C₂₄H₃₂FN₃O₅:[MH]⁺462；[MH]^-460。

                       实施例66

N-[(1-甲基-3-苯乙基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸。收率38％；TLC(乙酸乙酯：己烷，1∶1):R_f=0.19。MS:C₂₈H₃₂FN₃O₅:[MH]⁺510；[MH]^-508。

                       实施例67

N-[(1-甲基-5-O苄基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-4-氧代-5-氟戊酸。收率78％；TLC(乙酸乙酯：己烷，1∶1):R_f=0.17。MS:C₂₇H₃₀FN₃O₆:[MH]⁺512；[MH]^-510。

                       实施例68

N-(1,3-二甲基-吲哚-2-羰基)缬氨酰基-3-氨基-5-溴-4-氧代-戊酸叔丁基酯

在氮气氛0℃下，将1-羟基苯并三唑水合物(3.19g,20.8mmol)和1-(3’-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDAC)(5.60g,29.2mmol)加入到搅拌着的N-苄氧羰基缬氨酸(5.24g,20.8mmol)的二氯甲烷/二甲基甲酰胺(DMF)(60ml/30ml)的溶液中。15分钟后，将天冬氨酸α-甲基、β-叔丁基二酯(5.00g,20.8mmol)以固体形式加入，接着加入无水4-甲基吗啉(2.40ml,21.8mmol)。在0℃下搅拌1小时和在室温下搅拌5小时后，混合物在乙酸乙酯和5％KHSO₄溶液间分配。水溶液用乙酸乙酯反萃取，合并的萃取液用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出一固体。用乙醚研磨，给出N-[苄氧羰基缬氨酰基]天冬氮酸α-甲基、β-叔丁基二酯，为白色固体(8.36g,92％)。TLC(二氯甲烷/甲醇，95/5):R_f=0.48。

将上述产物(4.00g,9.17mmol)的200ml甲醇溶液在氢气氛(1atm)下与活性炭载钯(0.45g)一起搅拌50分钟。将反应混合物滤过Celite垫，滤饼用甲醇和二氯甲烷洗涤，将滤液合并、浓缩，并将残留物用二氯甲烷追加，给出N-[缬氨酰基]天冬酸α-甲基、β-叔丁基二酯，为白色固体(2.75g,99％)。TLC(二氯甲烷/甲醇，95/5):R_f=0.10。

向上述产物(2.75g,9.11mmol)和1,3-二甲基吲哚-2-羧酸(1.95g,10.3mmol)在DMF(30ml)中的混浊混合物加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(1.26g,10.3mmol)和1-(3’-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDAC)(2.37g,12.4mmol)。将反应混合物在氮气氛0℃下搅拌1小时，之后在室温下搅拌3小时。之后将反应混合物在乙酸乙酯与5％KHSO₄溶液间分配，并将水溶液用乙酸乙酯反萃取。合并的萃取液用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，给出固体。将固体用乙醚研磨，给出N-[(1,3-二甲基吲哚-2-羰基)缬氨酰基]天冬氨酸α-甲基、β-叔丁基二酯，为白色粉末(2.87g,67％)。TLC(二氯甲烷/甲醇，95/5):R_f=0.59。

向上述产物(1.41g,2.98mmol)的1,4-二噁烷(10ml)悬浮液中加入氢氧化锂(1.0M,2.98ml)水溶液。在室温搅拌30分钟之后，将所得的清澈液用1N盐酸溶液酸化，并用水稀释。所得的白色沉淀物通过抽吸过滤收集，并依次用水和用少量乙醚洗涤，给出N[(1,3-二甲基-吲哚-2-羰基)-缬氨酰基]天冬氨酸β-叔丁基酯，为白色粉末(1.189,86％)。TLC(二氯甲烷/甲醇，90/10):R_f=0.21。

在-10℃氮气氛下，向上述产物(1.03g,2.24mmol)和4-甲基吗啉(0.35ml,3.14mmol)的THF(20mL)溶液滴加入氯甲酸异丁基酯(0.380ml,2.92mmol)。将反应混合物在氮气氛-10℃下搅拌15分钟，并过滤。滤饼用无水THF洗涤，并将滤液合并，并冷却到0℃。之后将滤液用二偶氮甲烷(过量)的刚制备的醚溶液处理。在将混合物在0℃下处理1小时后，将氢溴酸(48％wt水溶液)与乙酸(6ml,1/1)的混合物滴加入其中，直到不再产生气体。另过5分钟后，将反应混合物浓缩，并在乙酸乙酯与水间分配。水层用乙酸乙酯反萃取。合并有机层，用水、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。残留物用乙醚研磨，给出标题产物，为白色粉末(1.00g,83％)。TLC(二氯甲烷/甲醇，95/5):R_f=0.88。

                      实施例69

N-[(1,3-二甲基-吲哚-2-羰基)-缬氨酰基]-3-氨基-5-(2,6-二氯苯甲酰基)氧基-4-氧代-戊酸叔丁基酯

在室温氮气氛下，向2,6-二氯苯甲酸(0.023g,0.12mmol)和氟化钾(0.015g,0.25mmol)的混合物中一次加入N-[(1,3-二甲基-吲哚-2-羰基)缬氨酰基]-3-氨基-5-溴-4-氧代戊酸叔丁基酯(0.054g,0.10mmol)。在室温下再搅拌16小时后，将混合物在乙酸乙酯与水间分配。有机层用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。用乙醚研磨，给出标题产物，为白色粉末(0.051g,79％)。TLC(二氯甲烷/甲醇，95/5):R_f=0.88。

                     实施例70

N-[N-(1,3-二甲基-吲哚-2-羰基)-缬氨酰基]-3-氨基-5-(2,6-二氯苯甲酰基)氧基-4-氧代-戊酸

将三氟乙酸(2mL)加入到搅拌着的N-(1,3-二甲基-吲哚-2-羰基)-缬氨酰基-3-氨基-5-(2,6-二氯苯甲酰基)氧基-4-氧代-戊酸叔丁基酯(0.0340g,0.0526mmol)的含苯甲醚(0.2mL)的二氯甲烷溶液中。将反应混合物在室温氮气氛下搅拌半小时，并浓缩。残留物与二氯甲烷共沸，并用乙醚研磨，给出标题产物，为白色粉末(0.0270g,87％)。TLC(CH₂Cl₂/MeOH/AcOH,20/1/1):R_f=0.43。MS:C₂₈H₂₉Cl₂N₃O₇:[MH]⁺590/592；[MH]^-588/590。

按照实施例69-70中给出的方法，制备下列化合物：

                       实施例71

N-(1,3-二甲基-吲哚-2-羰基)-缬氨酰基-3-氨基-5-(二苯基氧磷基)氧基-4-氧代-戊酸。收率24％；TLC(CH₂Cl₂/MeOH/AcOH,20/1/1):R_f=0.31。MS:C₃₃H₃₆PN₃O₇:[MH]⁺618；[MH]^-616。

                       实施例72

N-(1,3-二甲基-吲哚-2-羰基)-缬氨酰基-3-氨基-5-(1-苯基-3-(三氟甲基)吡唑-5-基)氧基-4-氧代-戊酸。收率49％；TLC(CH₂Cl₂/MeOH,90/10):R_f=0.29。MS:C₃₁H₃₂F₃N₅O₆:[MH]⁺628；[MH]^-626。

                       实施例73

N-(1,3-二甲基-吲哚-2-羰基)-缬氨酰基-3-氨基-5-(3-(N-苯基)氨基羰基-2-萘基)氧基-4-氧代-戊酸。收率68％；TLC(CH₂Cl₂/MeOH,80/20):R_f=0.46。MS:C₃₈H₃₈N₄O₇:[MH]⁺663；[MH]^-661。

                       实施例74

N-(1,3-二甲基-吲哚-2-羰基)-缬氨酰基-3-氨基-5-(2-氨基羰基-1-苯基)氧基-4-氧代-戊酸。收率61％；TLC(CH₂Cl₂/MeOH/HOAc,8/1/1):R_f=0.32。MS:C₂₈H₃₂N₄O₇:[MH]⁺537；[MH]^-535。

                       实施例75

N-(1,3-二甲基-吲哚-2-羰基)-缬氨酰基-3-氨基-5-(二甲基氧磷基)氧基-4-氧代-戊酸。收率76％；TLC(CH₂Cl₂/MeOH,90/10):R_f=0.12。MS:C₂₃H₃₂PN₃O₇:[MH]⁺494；[MH]^-492。

虽然，本发明参考上述实施例作了描述，但应当知道，在不偏离本发明精神的前提下可以有各种改变。因此，本发明仅受限于权利要求书。

Claims (49)

1．下式化合物或其可药用的盐:

其中

n是1或2；

R¹是烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基、(取代的)苯基、苯基烷基、(取代的)苯基烷基、杂芳基、(杂芳基)烷基或(CH₂)_mCO₂R⁴，其中m=1-4，且R⁴如下文所定义；

R²是氢原子、氯、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基、(取代的)苯基、苯基、烷基(取代的)苯基烷基、杂芳基、(杂芳基)烷基或(CH₂)_pCO₂R⁵，其中p=0-4，而R⁵如下文所定义；

R³是氢原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基烷基或(取代的)苯基烷基；

R⁴是氢原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基烷基或(取代的)苯基烷基；

R⁵是氢原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基烷基或(取代的)苯基烷基；

A是天然或非天然氨基酸；

B是氢原子、氘原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基、(取代的)苯基、苯基烷基、(取代的)苯基烷基、杂芳基、(杂芳基)烷基、卤代甲基、CH₂ZR⁶、CH₂OCO(芳基)、CH₂OCO(杂芳基)或CH₂OPO(R⁷)R⁸，其中Z是氧或硫原子；

R⁶是苯基、取代的苯基、苯基烷基、(取代的苯基)烷基、杂芳基或(杂芳基)烷基；

R⁷和R⁸独立地选自烷基、环烷基、苯基、取代苯基、苯基烷基、(取代的苯基)烷基和(环烷基)烷基；而

X和Y独立地选自氢、卤素、三卤代甲基、氨基、保护的氨基、氨基盐、单取代的氨基、二取代的氨基、羧基、保护的羧基、羧酸盐、羟基、保护的羟基、羧基的盐、低级烷氧基、低级烷硫基、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、(环烷基)烷基、取代的(环烷基)烷基、苯基、取代的苯基、苯基烷基和(取代的苯基)烷基。

2．权利要求1的化合物，其中n是1。

3．权利要求2的化合物，其中B是氢原子。

4．权利要求3的化合物，其中R³是氢原子或叔丁基。

5．权利要求4的化合物，其中A是天然氨基酸。

6．权利要求5的化合物，其中A是缬氨酰基、丙氨酰基、亮氨酰基、苯丙氨酰基、甘氨酰基或脯氨酰基。

7．权利要求2的化合物，其中B是一氟甲基。

8．权利要求7的化合物，其中R³是氢原子或叔丁基。

9．权利要求8的化合物，其中A是天然氨基酸。

10．权利要求9的化合物，其中A是缬氨酸残基。

11．权利要求10的化合物，其中R¹是甲基。

12．权利要求11的化合物，其中R²是甲基，且X和Y各是氢原子。

13．权利要求12的化合物，其中R³是氢原子。

14．权利要求11的化合物，其中R²是异丁基，且X和Y各是氢原子。

15．权利要求14的化合物，其中R³是氢原子。

16．权利要求10的化合物，其中R¹是高烯丙基。

17．权利要求16的化合物，其中R²、X和Y各是氢原子。

18．权利要求17的化合物，其中R³是氢原子。

19．权利要求2的化合物，其中B是(2,6-二氯苄氧基)甲基。

20．权利要求19的化合物，其中R³是氢原子或叔丁基。

21．权利要求20的化合物，其中A是天然氨基酸。

22．权利要求21的化合物，其中A是缬氨酰基。

23．权利要求22的化合物，其中R¹是甲基。

24．权利要求23的化合物，其中R²是甲基，且X和Y各是氢原子。

25．权利要求24的化合物，其中R³是氢原子。

26．权利要求2的化合物，其中B是式CH₂OPO(R⁷)R⁸的基团。

27．权利要求26的化合物，其中R³是氢原子或叔丁基。

28．权利要求27的化合物，其中A是天然氨基酸。

29．权利要求28的化合物，其中A是缬氨酸。

30．权利要求29的化合物，其中R⁷和R⁸各是苯基。

31．权利要求30的化合物，其中R¹是甲基。

32．权利要求31的化合物，其中R²是甲基，且X和Y各是氢原子。

33．权利要求32的化合物，其中R³是氢原子。

34．权利要求2的化合物，其中B是式CH₂ZR⁶的基团。

35．权利要求34的化合物，其中R⁶是杂芳基。

36．权利要求35的化合物，其中Z是氧原子。

37．权利要求36的化合物，其中R³是氢原子或叔丁基。

38．权利要求37的化合物，其中A是天然氨基酸。

39．权利要求38的化合物，其中A是缬氨酸。

40．权利要求39的化合物，其中杂芳基是取代或未取代的吡唑-5-基。

41．权利要求40的化合物，其中杂芳基是(1-苯基-3-(三氟甲基)吡唑-5-基)。

42．权利要求41的化合物，其中R¹是甲基。

43．权利要求42的化合物，其中R²是甲基，且X和Y各是氢。

44．权利要求43的化合物，其中R³是氢原子。

45．一种药物组合物，它包含下式化合物或其可药用的盐

其中

n是1或2；

R¹是烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基、(取代的)苯基、苯基烷基、(取代的)苯基烷基、杂芳基、(杂芳基)烷基或(CH₂)_mCO₂R⁴，其中m=1-4，且R⁴如下文所定义；

R²是氢原子、氯、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基、(取代的)苯基、苯基烷基、(取代的)苯基烷基、杂芳基、(杂芳基)烷基或(CH₂)_pCO₂R⁵，其中p=O-4，而R⁵如下文所定义；

R³是氢原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基烷基或(取代的)苯基烷基；

R⁴是氢原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基烷基或(取代的)苯基烷基；

R⁵是氢原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基烷基或(取代的)苯基烷基；

A是天然或非天然氨基酸；

B是氢原子、氘原子、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苯基、(取代的)苯基、苯基烷基、(取代的)苯基烷基、杂芳基、(杂芳基)烷基、卤代甲基、CH₂ZR⁶、CH₂OCO(芳基)、CH₂OCO(杂芳基)或CH₂OPO(R⁷)R⁸，其中Z是氧或硫原子；

R⁶是苯基、取代的苯基、苯基烷基、(取代的苯基)烷基、杂芳基或(杂芳基)烷基；

R⁷和R⁸独立地选自烷基、环烷基、苯基、取代苯基、苯基烷基、(取代的苯基)烷基和(环烷基)烷基；而

X和Y独立地选自氢、卤素、三卤代甲基、氨基、保护的氨基、氨基盐、单取代的氨基、二取代的氨基、羧基、保护的羧基、羧酸盐、羟基、保护的羟基、羧基的盐、低级烷氧基、低级烷硫基、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、(环烷基)烷基、取代的(环烷基)烷基、苯基、取代的苯基、苯基烷基和(取代的苯基)烷基，和一种可药用载体。

46．一种治疗自身免疫疾病的方法，它包含向需要这种处理的患者施用有效量的权利要求45的药物组合物。

47．一种治疗炎性疾病的方法，它包含向需要这种处理的患者施用有效量的权利要求45的药物组合物。

48．一种治疗神经变性疾病的方法，它包含向需要这种处理的患者施用有效量的权利要求45的药物组合物。

49．一种防止患有与局部缺血损伤有关的疾病的患者局部缺血损伤的方法，它包含向需要这种处理的患者施用有效量的权利要求45的药物组合物。

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