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CN121039163A - 抗人m-钙粘蛋白（cdh15）抗体、缀合物及其用于将遗传有效负载递送至肌肉细胞的用途 - Google Patents

抗人m-钙粘蛋白（cdh15）抗体、缀合物及其用于将遗传有效负载递送至肌肉细胞的用途

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CN121039163A
CN121039163A CN202480029314.6A CN202480029314A CN121039163A CN 121039163 A CN121039163 A CN 121039163A CN 202480029314 A CN202480029314 A CN 202480029314A CN 121039163 A CN121039163 A CN 121039163A
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CN
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protein
capsid
antigen binding
muscle
aav
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CN202480029314.6A
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特雷弗·斯蒂特
M·斯特克
M·W·斯利曼
L·萨宾
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Regeneron Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Regeneron Pharmaceuticals Inc
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Publication date
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Abstract

本文提供了针对钙粘蛋白15的抗体、其部分和药物缀合物。还提供了编码其的核酸序列；包含其的病毒颗粒，例如用于将病毒颗粒重靶向至肌肉细胞；包含其的组合物和使用其的方法，例如用于治疗有需要的受试者，例如患有骨骼肌相关病症（例如，X连锁肌管性肌病（XLMTM）、杜氏肌营养不良症（DMD）、强直性肌营养不良症（DM1）、面肩肱型肌营养不良症1型（FSHD）、先天性肌营养不良症1A型（MDC1A）、肢带型肌营养不良症、抗肌萎缩相关糖蛋白病等）或横纹肌肉瘤的受试者。

Description

抗人M-钙粘蛋白（CDH15）抗体、缀合物及其用于将遗传有效负 载递送至肌肉细胞的用途
相关申请的交叉引用
本申请要求均于2023年5月2日提交的美国临时申请第63/499,531号和第63/499,527号的优先权，其公开内容通过引用整体并入本文。
技术领域
本申请总体上涉及结合人钙粘蛋白15（hM-钙粘蛋白，hCDH15）的人抗体和人抗体的抗原结合片段，以及其使用方法，例如在治疗有需要的患者的病症的方法中。本申请还涉及至少包含抗hCDH15抗体的抗原结合片段的抗原结合分子，其中抗原结合分子与CDH15的复合介导抗原结合分子/CDH15复合物的内化，和/或阻断CDH15的活性。本申请还涉及包含抗hCDH15抗体（或包含抗hCDH15抗体的抗原结合片段的抗原结合分子）和治疗剂的缀合物，这些缀合物可用于治疗疾病。本公开还涉及制备和使用重组病毒颗粒（例如，重组AAV颗粒）的方法，这些重组AAV颗粒包含重靶向至钙粘蛋白15（CDH15）的衣壳蛋白，可用于在体外或在体内修饰肌肉细胞，诸如肌肉干细胞。
序列表
标题为“11486WO01 Sequence Listing XML.xml”的XML格式的序列表通过引用整体并入本文，该序列表创建于2024年4月30日，并且为787 Kb。
背景技术
将基因递送至特定靶细胞中已成为用于潜在治疗多种慢性和遗传疾病的现代医学中最重要的技术之一。理想地，基因递送载体能够稳定地将遗传物质引入所需细胞中，并且避免将遗传物质引入非靶细胞中。
病毒颗粒（特别是基于腺相关病毒（AAV）的那些）作为基因递送载体已经成为许多研究的焦点，因为AAV能够在体内转导多种灵长类物种和组织。（Muzyczka等人(1992)Current Topics in Microbiology and Immunology, 158:97-129）。此外，AAV安全地转导有丝分裂后组织。尽管病毒可能偶尔整合到宿主染色体中，但其很少会整合并且整合到人19号染色体中的安全港基因座中，而且只有当反式供应复制（Rep）蛋白时才会如此。AAV基因组在感染的细胞中快速循环和串联，并且在感染的细胞中以稳定的游离型状态存在，以长期稳定地表达其有效负载。
此外，近年来已经实现了将AAV感染操纵和重定向到特定细胞。使用病毒颗粒的靶向基因疗法的许多进展可以总结为病毒颗粒的非重组（非遗传）或重组（遗传）修饰，其导致病毒颗粒的自然趋向性的假型化、扩增和/或重靶向。（综述于Nicklin和Baker (2002)Curr. Gene Ther. 2:273-93；Verheiji和Rottier (2012) Advances Virol 2012:1-15中）。
在直接重组靶向方法中，将靶向配体直接插入或偶联到病毒衣壳中，即蛋白病毒衣壳基因经修饰以表达包含异源靶向配体的衣壳蛋白。靶向配体然后重定向（例如，结合）优先或排他地在靶细胞上表达的受体或标志物。（Stachler等人(2006) Gene Ther. 13:926-931；White等人(2004) Circulation 109:513-519；还参见Park等人, (2007)Frontiers in Bioscience 13:2653-59；Girod等人(1999) Nature Medicine 5:1052–56；Grifman等人(2001) Molecular Therapy 3:964-75；Shi等人(2001) Human Gene Therapy12:1697-1711；Shi和Bartlett (2003) Molecular Therapy 7:515–525）。
在间接重组方法中，将病毒衣壳用异源“支架”修饰，然后连接到包含靶向配体的衔接子。衔接子与支架和靶细胞结合。（Arnold等人(2006) Mol. Ther. 5:125-132；Ponnazhagen等人(2002) J. Virol. 76:12900–907；还参见WO 97/05266）。已经针对多种病毒颗粒描述了支架，诸如(1) Fc结合分子（例如，Fc受体、蛋白A等），其与抗体衔接子的Fc结合，(2)（链霉）亲合素，其与生物素化衔接子结合，(3)生物素，其与（链霉）亲合素融合的衔接子结合，(4)可检测标记，其可用于检测和/或分离病毒颗粒，通过能够非共价结合可检测标记和靶分子的双特异性衔接子结合，以及最近(5)蛋白质:蛋白质结合对，其形成异肽键。（参见例如，Gigout等人(2005) Molecular Therapy 11:856-865；Stachler等人(2008)Molecular Therapy 16:1467-1473；Quetglas等人(2010) Virus Research 153:179-196；Ohno等人(1997) Nature Biotechnology 15:763-767；Klimstra等人(2005) Virology338:9-21）。
骨骼肌是身体中最大的器官，约占总体重的40%，并且是人体中三个重要的肌肉组织之一。当骨骼肌受损时，肌肉干细胞（MuSC）活化、增殖并分化为功能性肌纤维以修复受损肌肉。然而，MuSC介导的肌肉再生在衰老受试者中延迟，这可能部分与肌肉干细胞特异性标志物的变化有关。
因此，能够与肌肉干细胞特异性标志物结合的抗人抗体可有助于治疗，例如刺激肌肉修复，特别是在衰老受试者中，和/或治疗肌肉相关癌症。此外，如本文所描述的抗人抗体可以与重组病毒（例如，AAV颗粒）结合使用，用于将目的核酸靶向引入表达肌肉干细胞特异性标志物的细胞中。此外，一些肌肉相关癌症（包括横纹肌肉瘤）也可以受益于治疗剂，例如抗体-药物缀合物、如本文所描述的从而靶向肌肉干细胞特异性标志物的重靶向病毒颗粒等。
发明内容
本文描述了与人钙粘蛋白15（CDH15）结合的抗原结合蛋白。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含选自下表1的一组三个重链互补决定区（HCDR1、HCDR2和HCDR3）氨基酸序列。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含选自下表1的一组三个轻链互补决定区（LCDR1、LCDR2和LCDR3）氨基酸序列。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含选自下表1的一组HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含一组选自由以下组成的组的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列：SEQID NO: 4-6-8-12-14-16、24-26-28-32-34-36、44-46-48-52-34-54、62-64-66-52-34-54、72-74-76-52-34-54、82-84-86-52-34-54、92-94-96-100-34-102、82-111-113-117-34-119、127-129-131-135-137-139、147-149-151-155-157-159、167-169-171-175-177-179、187-189-191-52-34-196、204-206-208-212-137-214、222-224-226-52-34-54、232-234-236-52-34-54、242-244-246-52-34-54、82-253-255-52-34-54、261-263-265-269-271-273、281-283-285-289-291-293、301-303-305-309-311-313、321-323-325-329-331-333、341-343-345-349-14-352、360-362-364-368-370-372、187-380-382-52-34-54、388-390-392-396-14-398、406-408-410-100-34-414、422-424-426-430-432-434、438-440-442-446-448-450、454-456-458-462-464-466、470-472-474-478-480-482、486-488-490-494-496-498、502-504-506-510-512-514、518-520-522-526-528-530、534-536-538-542-544-546、550-552-554-558-560-562、566-568-570-574-576-578、582-584-586-590-592-594、598-600-602-606-608-610、614-616-618-622-624-626、630-632-634-638-640-642、646-648-650-654-656-658、662-664-666-670-672-674、678-680-682-686-688-690、694-696-698-702-704-706、710-712-714-718-720-722、726-728-730-734-736-738、742-744-746-686-688-690、750-752-754-758-760-762和766-768-770-774-776-778。
表1示出了本公开的示例性抗-hCDH15抗体中的每一者的HCVR和LCVR的氨基酸和核酸序列标识符，以及每个HCVR内的HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及每个LCVR内的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
表1：抗hCDH15序列标识符
在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含重链可变区（HCVR或VH）。在一些实施方案中，HCVR包含选自表1的一组HCDR1-HCDR2-HCDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，HCVR包含选自表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含轻链可变区（LCVR或VL）。在一些实施方案中，LCVR包含选自下表1的一组LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，LCVR包含选自表1中列出的LCVR氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含抗hCDH15抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗hCDH15抗体或其抗原结合片段包含人或人源化抗体或其抗原结合片段、单价Fab'、二价Fab2、F(ab)'3片段、单链可变片段（scFv）、双scFv、(scFv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、二硫键稳定的Fv蛋白（dsFv）、单结构域抗体（sdAb）、Ig NAR、双特异性抗体或其结合片段、双特异性T细胞衔接子（BiTE）、三特异性抗体或其经化学修饰的衍生物。在一些实施方案中，scFv包含从N末端到C末端按以下取向排列的可变区：HCVR-LCVR。在一些实施方案中，scFv包含从N末端到C末端按以下取向排列的可变区：LCVR-HCVR。在一些实施方案中，scFv可变区通过接头连接。在一些实施方案中，接头是肽接头。在一些实施方案中，肽接头是-(GGGGS)n-（SEQ ID NO: 789），其中n是1-10。
在一些实施方案中，抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）以约1×10-7 M的KD或更强的亲和力与hCDH15结合。在一些实施方案中，抗原结合蛋白以约10×10-8至约1×1010的KD与hCDH15结合。在一些实施方案中，抗原结合蛋白以约5×10-9至约1×1010的KD与hCDH15结合。
在一些实施方案中，抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）包含HCVR和LCVR氨基酸序列对（HCVR/LCVR），其包含与表1中列出的LCVR氨基酸序列中的任一者配对的表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任一者。在一些实施方案中，如本文所描述的抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）包含表1中列出的示例性抗hCDH15抗体中的任一者内所含有的HCVR/LCVR氨基酸序列对。在某些实施方案中，HCVR/LCVR氨基酸序列对选自由以下组成的组：SEQ ID NO: 2和10、22和30、42和50、60和50、70和50、80和50、90和98、108和115、125和133、145和153、165和173、185和193、202和210、220和50、230和50、240和50、250和50、259和267、279和287、299和307、319和327、339和347、358和366、378和50、386和394、404和412、420和428、436和444、452和460、468和476、484和492、500和508、516和524、532和540、548和556、564和572、580和588、596和604、612和620、628和636、644和652、660和668、676和684、692和700、708和716、724和732、740和684、748和756以及764和772。
本文还描述了编码本文描述的抗原结合蛋白（例如，抗hCDH15抗体或其抗原结合片段）的核酸分子，即多核苷酸。在一些实施方案中，如本文所描述的核酸分子包含编码表1中列出的一组HCDR1-HCDR2-HCDR3氨基酸序列的核酸序列。在一些实施方案中，如本文所描述的核酸分子包含编码表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任一者的核酸序列。在某些实施方案中，核酸分子包含选自表1中列出的HCVR核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
在一些实施方案中，如本文所描述的核酸分子包含编码表1中列出的一组LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列的核酸序列。在一些实施方案中，如本文所描述的核酸分子包含编码表1中列出的LCVR氨基酸序列中的任一者的核酸序列。在一些实施方案中，核酸分子包含选自表1中列出的LCVR核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
本文还描述了编码HCVR的核酸分子，其中HCVR包含一组三个CDR（即，HCDR1-HCDR2-HCDR3），其中HCDR1-HCDR2-HCDR3氨基酸序列组如表1中列出的示例性抗hCDH15抗体中的任一者所定义。
本文还描述了编码LCVR的核酸分子，其中LCVR包含一组三个CDR（即，LCDR1-LCDR2-LCDR3），其中LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组如表1中列出的示例性抗hCDH15抗体中的任一者所定义。
本文还描述了编码HCVR和LCVR两者的核酸分子，其中HCVR包含表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，并且其中LCVR包含表1中列出的LCVR氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸分子包含选自表1中列出的HCVR核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一性的其基本上相似的序列，以及选自表1中列出的LCVR核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一性的其基本上相似的序列。在一些实施方案中，核酸分子编码HCVR和LCVR，其中HCVR和LCVR均源自表1中列出的相同抗hCDH15抗体。
本文还描述了一种药物组合物，其包含本文描述的抗原结合蛋白（例如，结合人CDH15的重组人抗体或其片段）和药学上可接受的载剂。在一些实施方案中，如本文所描述的药物组合物包含抗hCDH15抗体和第二治疗剂的组合。在一个实施方案中，第二治疗剂是有利地与抗hCDH15抗体组合的任何药剂。本文描述了涉及抗hCDH15抗体的另外的组合疗法和共配制物。
本文还描述了一种抑制细胞中的CDH15的活性的方法（例如，在体内、在体外或离体），其包括使表达CDH15的细胞与结合人CDH15的抗原结合蛋白或如本文所描述的其药物组合物接触。在一些实施方案中，表达CDH15的细胞是肌肉干细胞、成肌细胞或肌细胞。
本文还描述了一种加速肌肉干细胞从静息到活化的转变的方法（例如，在体内、在体外或离体），其包括使肌肉干细胞与结合人CDH15的抗原结合蛋白或如本文所描述的其药物组合物接触。
本文还描述了一种治疗有需要的受试者的疾患的方法，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的包含如本文所描述的结合人CDH15的抗原结合蛋白的药物组合物。在一些实施方案中，疾患是肌肉损伤。在一些实施方案中，疾患是癌症，例如横纹肌肉瘤。在一些实施方案中，抗原结合蛋白与治疗剂缀合，例如抗体-药物缀合物（ADC）。在一些实施方案中，治疗剂包括细胞毒性化疗剂。在一些实施方案中，治疗剂是阿柏西普（Aflibercept）、安吖啶（Amsacrine）、阿扎胞苷（Azacitidine）、硫唑嘌呤（Azathioprine）、玛贝妥单抗（Belantamab mafodotin）、苯达莫司汀（Bendamustine）、博莱霉素（Bleomycin）、硼替佐米（Bortezomib）、维布妥昔单抗（Brentuximab vedotin）、白消安（Busulfan）、卡巴他赛（Cabazitaxel）、卡培他滨（Capecitabine）、卡铂（Carboplatin）、卡非佐米（Carfilzomib）、卡莫司汀（Carmustine）、苯丁酸氮芥（Chlorambucil）、顺铂（Cisplatin）、克拉屈滨（Cladribine）、氯法拉滨（Clofarabine）、环磷酰胺（Cyclophosphamide）、阿糖胞苷（Cytarabine）、阿糖胞苷脂质体、达卡巴嗪（Dacarbazine）、更生霉素（Dactinomycin）（放线菌素D（actinomycin D））、柔红霉素（Daunorubicin）、多西他赛（Docetaxel）、多柔比星（Doxorubicin）、多柔比星脂质体、表柔比星（Epirubicin）、艾日布林（Eribulin）、依托泊苷（Etoposide）、磷酸依托泊苷、氟达拉滨（Fludarabine）、氟尿嘧啶（Fluorouracil）、福莫司汀（Fotemustine）、更昔洛韦（Ganciclovir）、吉西他滨（Gemcitabine）、奥加吉妥珠单抗（Gemtuzumab ozogamicin）、羟基脲（Hydroxyurea）、依达霉素（Idarubicin）、异环磷酰胺（Ifosfamide）、奥加伊妥珠单抗（Inotuzumab ozogamicin）、伊立替康（Irinotecan）、伊沙佐米（Ixazomib）、洛莫司汀（Lomustine）、美法仑（Melphalan）、巯基嘌呤（Mercaptopurine）、甲氨蝶呤（Methotrexate）、丝裂霉素（Mitomycin）、米托坦（Mitotane）、米托蒽醌（Mitozantrone）、白蛋白结合型紫杉醇（Nab-paclitaxel）、奥沙利铂（Oxaliplatin）、紫杉醇（Paclitaxel）、培美曲塞（Pemetrexed）、培门冬酶（Pegaspargase）、维泊妥珠单抗（Polatuzumab vedotin）、普拉曲沙（Pralatrexate）、甲基苄肼（Procarbazine）、雷替曲塞（Raltitrexed）、罗米地辛（Romidepsin）、戈沙妥珠单抗（Sacituzumab govitecan）、替莫唑胺（Temozolomide）、替尼泊苷（Teniposide）、噻替哌（Thiotepa）、硫鸟嘌呤（Tioguanine）、拓扑替康（Topotecan）、曲贝替定（Trabectedin）、德曲妥珠单抗（Trastuzumab deruxtecan）、恩美曲妥珠单抗（Trastuzumab emtansine）、曲氟尿苷（Trifluridine）/替匹嘧啶（tipiracil）、缬更昔洛韦（Valganciclovir）、长春花碱（Vinblastine）、长春新碱（Vincristine）、长春地辛（Vindesine）、长春氟宁（Vinflunine）、长春瑞滨（Vinorelbine）或维莫德吉（Vismodegib）。在一些实施方案中，抗原结合蛋白经由缬氨酸-瓜氨酸（VC）与治疗剂缀合。在一些实施方案中，抗原结合蛋白经由对氨基苄基（PAB）接头与治疗剂缀合。在一些实施方案中，药物组合物静脉内或皮下施用于受试者。
本文还描述了一种恢复受试者的肌肉再生能力的方法，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的包含如本文所描述的结合人CDH15的抗原结合蛋白的药物组合物。在一些实施方案中，受试者是老年受试者。在一些实施方案中，老年受试者的肌肉再生能力恢复到处于或接近对照受试者的功能状态。在一些实施方案中，药物组合物静脉内或皮下施用于受试者。
本文还描述了一种对有需要的受试者中的肌肉细胞进行成像的方法，其中该方法包括向受试者施用包含如本文所描述的结合人CDH15的抗原结合蛋白的药物组合物，其中该抗原结合蛋白与可检测部分缀合。在一些实施方案中，肌肉细胞包含选自由以下组成的组中的一者或多者：肌肉干细胞、成肌细胞和肌细胞。在一些实施方案中，可检测部分包含放射性核素。在一些实施方案中，药物组合物静脉内或皮下施用于受试者。
本文还描述了结合人CDH15的抗原结合蛋白或其药物组合物在制造例如用于治疗如本文所描述的疾患的药物中的用途。本文进一步描述了结合人CDH15的抗原结合蛋白或其药物组合物，其用于疗法中，例如用于治疗如本文所描述的疾患，和/或用于恢复受试者的肌肉再生能力。
本文还描述了与包含如表1中所示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的参考抗体竞争与人CDH15结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，如本文所描述的抗体或抗原结合片段与包含选自由以下组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对的参考抗体竞争与人CDH15结合：SEQ ID NO: 2和10、22和30、42和50、60和50、70和50、80和50、90和98、108和115、125和133、145和153、165和173、185和193、202和210、220和50、230和50、240和50、250和50、259和267、279和287、299和307、319和327、339和347、358和366、378和50、386和394、404和412、420和428、436和444、452和460、468和476、484和492、500和508、516和524、532和540、548和556、564和572、580和588、596和604、612和620、628和636、644和652、660和668、676和684、692和700、708和716、724和732、740和684、748和756以及764和772。
本文还描述了抗体或抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段与人CDH15上与包含如表1中所示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的参考抗体相同的表位结合。在一些实施方案中，如本文所描述的抗体或抗原结合片段与人CDH15上与包含选自由以下组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对的参考抗体相同的表位结合：SEQ ID NO: 2和10、22和30、42和50、60和50、70和50、80和50、90和98、108和115、125和133、145和153、165和173、185和193、202和210、220和50、230和50、240和50、250和50、259和267、279和287、299和307、319和327、339和347、358和366、378和50、386和394、404和412、420和428、436和444、452和460、468和476、484和492、500和508、516和524、532和540、548和556、564和572、580和588、596和604、612和620、628和636、644和652、660和668、676和684、692和700、708和716、724和732、740和684、748和756以及764和772。
本文还描述了结合人CDH15的分离的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含：具有如表1中所示的氨基酸序列的重链可变区（HCVR）的互补决定区（CDR）；和具有如表1中所示的氨基酸序列的轻链可变区（LCVR）的CDR。在一些实施方案中，分离的抗体或抗原结合片段包含选自由以下组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链CDR：SEQ ID NO: 2和10、22和30、42和50、60和50、70和50、80和50、90和98、108和115、125和133、145和153、165和173、185和193、202和210、220和50、230和50、240和50、250和50、259和267、279和287、299和307、319和327、339和347、358和366、378和50、386和394、404和412、420和428、436和444、452和460、468和476、484和492、500和508、516和524、532和540、548和556、564和572、580和588、596和604、612和620、628和636、644和652、660和668、676和684、692和700、708和716、724和732、740和684、748和756以及764和772。在又另一个方面，分离的抗体或抗原结合片段分别包含选自由以下组成的组的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3结构域：SEQ ID NO: 4-6-8-12-14-16、24-26-28-32-34-36、44-46-48-52-34-54、62-64-66-52-34-54、72-74-76-52-34-54、82-84-86-52-34-54、92-94-96-100-34-102、82-111-113-117-34-119、127-129-131-135-137-139、147-149-151-155-157-159、167-169-171-175-177-179、187-189-191-52-34-196、204-206-208-212-137-214、222-224-226-52-34-54、232-234-236-52-34-54、242-244-246-52-34-54、82-253-255-52-34-54、261-263-265-269-271-273、281-283-285-289-291-293、301-303-305-309-311-313、321-323-325-329-331-333、341-343-345-349-14-352、360-362-364-368-370-372、187-380-382-52-34-54、388-390-392-396-14-398、406-408-410-100-34-414、422-424-426-430-432-434、438-440-442-446-448-450、454-456-458-462-464-466、470-472-474-478-480-482、486-488-490-494-496-498、502-504-506-510-512-514、518-520-522-526-528-530、534-536-538-542-544-546、550-552-554-558-560-562、566-568-570-574-576-578、582-584-586-590-592-594、598-600-602-606-608-610、614-616-618-622-624-626、630-632-634-638-640-642、646-648-650-654-656-658、662-664-666-670-672-674、678-680-682-686-688-690、694-696-698-702-704-706、710-712-714-718-720-722、726-728-730-734-736-738、742-744-746-686-688-690、750-752-754-758-760-762和766-768-770-774-776-778。本文还描述了结合人CDH15的分离的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含：(a)具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的重链可变区（HCVR）：SEQ ID NO:2、22、42、60、70、80、90、108、125、145、165、185、202、220、230、240、250、259、279、299、319、339、358、378、386、404、420、436、452、468、484、500、516、532、548、564、580、596、612、628、644、660、676、692、708、724、740、748、764和780；和/或(b)具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的轻链可变区（LCVR）：SEQ ID NO: 10、30、50、50、50、50、98、115、133、153、173、193、210、50、50、50、50、267、287、307、327、347、366、50、394、412、428、444、460、476、492、508、524、540、556、572、588、604、620、636、652、668、684、700、716、732、756和772。在一些实施方案中，分离的抗体或抗原结合片段包含选自由以下组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO: 2和10、22和30、42和50、60和50、70和50、80和50、90和98、108和115、125和133、145和153、165和173、185和193、202和210、220和50、230和50、240和50、250和50、259和267、279和287、299和307、319和327、339和347、358和366、378和50、386和394、404和412、420和428、436和444、452和460、468和476、484和492、500和508、516和524、532和540、548和556、564和572、580和588、596和604、612和620、628和636、644和652、660和668、676和684、692和700、708和716、724和732、740和684、748和756以及764和772。
本文进一步描述了病毒颗粒，其特别适合于将目的核苷酸特异性地靶向引入肌肉细胞（例如，肌肉干细胞），因为本文描述的病毒衣壳或病毒衣壳蛋白包含结合肌肉细胞特异性表面蛋白（例如，如本文所描述的与人CDH15结合的抗原结合蛋白）的靶向配体。在一些实施方案中，本文描述的病毒衣壳或病毒衣壳蛋白包含靶向配体的直接插入（例如，靶向配体任选地经由接头与病毒衣壳或病毒衣壳蛋白直接偶联、融合等），例如，病毒衣壳基因经修饰以表达包含靶向配体的衣壳蛋白。在一些实施方案中，病毒衣壳或病毒衣壳蛋白经由支架或衔接子包含靶向配体，例如蛋白质:蛋白质结合对的第一成员，其可以与其蛋白质:蛋白质结合对的同源第二成员缔合，其中第二成员连接结合肌肉细胞特异性表面蛋白（例如，如本文所描述的与人CDH15结合的抗原结合蛋白）的靶向配体（例如，与其融合）。在一些实施方案中，靶向配体任选地经由接头可操作地连接至第二成员，例如与该第二成员融合。在一些实施方案中，靶向配体可以是结合部分，例如天然配体、抗体、多特异性结合分子等。在一些实施方案中，靶向配体为抗体或其部分。在一些实施方案中，靶向配体是包含结合非终末分化肌肉细胞（例如，肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞、它们的任何组合等）上的表面蛋白（例如，如本文所描述的与人CDH15结合的抗原结合蛋白的可变结构域）和重链恒定结构域的抗体。在一些实施方案中，靶向配体是包含结合靶细胞（例如，肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞、它们的任何组合等）上的非终末分化肌肉细胞表面蛋白（例如，如本文所描述的与人CDH15结合的抗原结合蛋白的可变结构域）和任选地IgG重链恒定结构域的抗体。在一些实施方案中，靶向配体是包含结合靶细胞（例如，肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞、它们的任何组合等）上的非终末分化肌肉细胞表面蛋白（例如，如本文所描述的与人CDH15结合的抗原结合蛋白的可变结构域）和IgG重链恒定结构域的抗体，其中IgG重链恒定结构域例如直接或经由接头可操作地连接至衣壳蛋白。在一些实施方案中，靶向配体是抗体，其包含(i)结合非终末分化肌肉细胞表面蛋白的可变结构域（例如，如本文所描述的与人CDH15结合的抗原结合蛋白的可变结构域）和(ii) IgG重链恒定结构域，其中IgG重链恒定结构域可操作地连接（任选地经由接头）至与蛋白质:蛋白质结合对的同源第一成员形成异肽共价键的蛋白质（例如，蛋白质:蛋白质结合对的第二成员）。在一些实施方案中，本文描述的衣壳蛋白包含蛋白质:蛋白质结合对的第一成员，其包含例如SpyTag（SEQ ID NO: 815）或其生物学等效变体，其可操作地连接至病毒衣壳蛋白，其中SpyTag或其生物学等效变体与SpyTag共价连接（例如，经由异肽键）至其第二同源蛋白质:蛋白质结合成员，例如SpyCatcher（SEQID NO: 816）或其生物学等效变体，其又可连接至包含抗体可变结构域和IgG重链结构域的靶向配体，其中SpyCatcher和IgG重链结构域经由氨基酸接头（例如，GSGESG（SEQ ID NO:828））连接。在一些实施方案中，非终末分化肌肉细胞表面蛋白包含CDH15。在一些实施方案中，靶向配体结合CDH15，例如人CDH15。在一些实施方案中，靶向配体包含与人CDH15结合的如本文所描述的抗原结合蛋白的可变结构域。在一些实施方案中，靶向配体包含抗体可变结构域，该抗体可变结构域包含如表1中所示的HCVR和/或LCVR序列的CDR，例如HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和/或LCDR3。在一些实施方案中，靶向配体包含抗体可变结构域，该抗体可变结构域包含如表1中所示的CDR，例如HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和/或LCDR3。在一些实施方案中，靶向配体包含抗体可变结构域，该抗体可变结构域包含如表1中所示的HCVR和/或LCVR序列的一组三个CDR，例如HCDR1、HCDR2和HCDR3，和/或LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，靶向配体包含抗体可变结构域，该抗体可变结构域包含如表1中所示的一组三个CDR，例如HCDR1、HCDR2和HCDR3，和/或LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，靶向配体包含抗体可变结构域，该抗体可变结构域包含如表1中所示的HCVR和/或LCVR。
附图说明
专利或申请文件含有至少一张彩色附图。在请求并支付必要费用后，由专利局提供带有彩色附图的本专利或专利申请公开的副本。
图1描绘了非终末分化肌肉细胞的肌发生的示意图。肌肉干细胞（MuSC；也称为卫星细胞）在成人肌肉组织中在稳态条件下是有丝分裂静息的和非增殖的。然而，响应于损伤，MuSC开始活跃分裂，产生子细胞。虽然一些子细胞再次变得静息以补充MuSC库，但其他子细胞继续增殖为成肌细胞，其在分化为构成肌肉纤维的成熟肌管/肌纤维期间排列并融合在一起。静息的肌肉干细胞可以通过Pax7表达来表征，增殖的成肌细胞可以通过Pax7和肌源性分化因子1（MyoD）表达来表征，承诺终末分化的成肌细胞（即，肌细胞）可以通过MyoD和成肌素表达来表征，并且肌管可以通过肌球蛋白重链（MyHC）表达来表征。
图2A-2D显示了CDH15表达被消除的小鼠中加速的肌肉再生。图2A描绘了示例性实验的示意图。在第0天向野生型（WT）或纯合CDH15敲除小鼠（CDH15-/-）肌内注射心脏毒素（CTX）以诱导肌肉损伤。然后对损伤后5天、15天和25天（dpi）取回的肌肉样品进行组织学检查。图2B描绘了用DAPI（蓝色；灰度中的浅灰色）、层粘连蛋白（白色）和胚胎肌球蛋白重链（eMyHC；绿色；灰度中的深灰色）染色的WT和CDH15-/-肌肉样品的免疫组织化学横截面的实例，其在未成熟肌纤维中瞬时上调，但随着肌纤维成熟而下调（Rodgers, Growth Hormone& IGF Research, 2005, 15(6): 377-383）。通过荧光显微镜观察横截面。图2C描绘了WT和CDH15-/-小鼠在损伤后所指示时间点的肌纤维横截面积（CSA），如从组织学图像定量的，参见例如图2B。图2D描绘了WT和CDH15-/-小鼠在损伤后15天的中央有核肌纤维的百分比，如从组织学图像定量的，参见例如图2B。数据报告为平均值+/-SEM，*p<0.05，**p<0.01。
图3A-3B显示了CDH15表达被消除的小鼠从损伤中改善的功能恢复。图3A描绘了示例性实验的示意图。在第0天将CTX注射到WT或CDH15-/-小鼠的趾长伸肌（EDL）肌肉中。在15dpi时，离体测量EDL肌肉的收缩力。图3B描绘了与从未损伤的EDL分离的肌肉相比，WT或CDH15-/-肌肉中的最大强直力损失。数据报告为平均值+/-SEM，*p<0.05。
图4A-4B显示了在CDH15表达被消除的MuSC中的离体加速退出静息。图4A描绘了在单根肌纤维上培养48小时后WT和CDH15-/- MuSC的免疫组织化学图像的实例。Pax7和Merge列中的箭头表示多细胞簇中的单独细胞。图4B描绘了WT和CDH15-/- MuSC的Pax7+单细胞和多细胞簇的百分比（顶部）和每个簇的Pax7+细胞的数量（底部），如从组织学图像定量的，参见例如图4A。数据报告为平均值+/-SEM，**p<0.01。
图5A-5B显示了含有血清反应因子（SRF）基序的早期反应基因的上调。图5A描绘了与WT MuSC相比在FACS分离的CDH15-/- MuSC中下调或上调的基因的火山图。图5B描绘了转录因子基序分析，其中几个相关转录因子以红色突出显示。
图6A-6D显示了在老年小鼠中消除CDH15的表达挽救了肌肉再生中的年龄相关的下降。图6A描绘了示例性实验的示意图。在第0天向老年（23月龄）野生型（WT）或纯合CDH15敲除小鼠（CDH15-/-）注射心脏毒素（CTX）以诱导胫骨前肌的肌肉损伤。然后对损伤后15天（dpi）取回的肌肉样品进行组织学检查。图6B描绘了对细胞核（DAPI；蓝色；灰度中的灰色）和层粘连蛋白（白色）染色并通过荧光显微镜观察的老化WT和CDH15-/-肌肉样品的免疫组织化学横截面的实例。图6C描绘了老年WT和CDH15-/-小鼠在15 dpi时的肌纤维横截面积（CSA），如从组织学图像定量的，参见例如图6B。虚线描绘了年轻小鼠在15 dpi时的平均CSA。图6D描绘了老年WT和CDH15-/-小鼠的含有3个或更多个中央核的中央有核肌纤维在15dpi时的百分比，如从组织学图像定量的，参见例如图6B。数据报告为平均值+/-SEM，*p<0.05。
图7A-7C显示了CDH15蛋白定位于大多数野生型（WT）肌肉干细胞（MuSC）的顶端表面，并且在CDH15-/- MuSC中检测不到。图7A描绘了具有相关WT MuSC的WT单根肌纤维的免疫组织化学横截面，其中CDH15蛋白存在于MuSC的顶端表面。抗CDH15染色被描绘为红色并用箭头和虚线表示，并且DAPI染色被描绘为蓝色并用箭头和虚线表示。图7B描绘了WT小鼠肌肉的免疫组织化学横截面，其中在肌纤维的外周上观察到Pax7阳性的MuSC，同样CDH15存在于MuSC的顶端表面。在放大的插图中，抗CDH15被描绘为红色并用箭头和虚线表示，DAPI染色的细胞核被描绘为蓝色，Pax7被描绘为绿色，并且层粘连蛋白被描绘为白色。DAPI和Pax7的重叠在放大的插图中用箭头和虚线表示。图7C描绘了WT和CDH15-/-小鼠肌肉中也是CDH15-阳性的Pax7阳性的MuSC的比例，如从组织学图像定量的，参见例如图7A和图7B。虽然在大多数（约95%）WT Pax7阳性的肌肉细胞中检测到CDH15蛋白，但如所预期，在CDH15-/-Pax7阳性的细胞中检测不到CDH15。
图8显示了抗hCDH15抗体与人横纹肌肉瘤细胞的特异性结合，但不与胶质母细胞瘤细胞特异性结合。将肺泡、胚胎和胶质母细胞瘤细胞用所指示抗hCDH15抗体（REGN8787和REGN9295）活染色30分钟，洗涤，用抗人IgG Alexa FluorTM 647缀合的二抗（红色）染色，再次洗涤，固定，然后对成肌素（绿色）和细胞核（DAPI；蓝色）染色，然后通过荧光显微镜观察。与鼠IgG2a和人IgG4一起温育的细胞也用作对照。最后一行描绘了三种标志物的合并。
图9显示了抗hCDH15抗体与在3D培养物中生长的人横纹肌球的特异性结合。将胚胎横纹肌肉瘤肿瘤球（即，横纹肌球）与作为阴性对照的抗hCDH15或人IgG4一起温育30分钟，洗涤，用抗人IgG Alexa FluorTM 647缀合的二抗（白色）染色，再次洗涤，固定并对成肌素（红色）和细胞核（DAPI；蓝色）染色。最后一列描述了三种标志物的合并。
图10显示了抗CDH15抗原结合结构域介导的AAV9至C2C12小鼠成肌细胞的重靶向。描绘了代表性的免疫荧光图像，其证明了用2.5×105 vg/细胞的编码抗CDH15抗原结合结构域或对照抗原结合结构域（抗ASGR1）的表达eGFP +/-质粒的AAV9转导的C2C12成肌细胞经由GFP荧光的转导效率和不同的镶嵌衣壳比率。DAPI染色的细胞核以蓝色描绘（顶行），并且eGFP以绿色描绘（底行）。所提供的比率指示编码SpyTag缀合的AAV9衣壳的转染质粒与未缀合的N272A去靶向的AAV9衣壳的量的比率。当抗原结合结构域指示为例如mAb或Fab时，AAV9衣壳包含插入在位置453处并经由10个氨基酸的接头附接的SpyTag，并且抗原结合结构域包含与重链构建体的C末端融合的SpyCatcher。
图11显示了抗CDH15抗原结合结构域介导的AAV9对人骨骼肌成肌细胞的重靶向。描绘了代表性的免疫荧光图像，其证明了用2.5×105 vg/细胞的编码抗CDH15抗原结合结构域或对照抗原结合结构域（抗ASGR1）的表达eGFP +/-质粒的AAV9转导的人骨骼肌成肌细胞的GFP荧光转导效率和不同的镶嵌衣壳比率。DAPI染色的细胞核以蓝色描绘（顶行），并且eGFP以绿色描绘（底行）。所提供的比率指示编码SpyTag缀合的AAV9衣壳的转染质粒与未缀合的N272A去靶向的AAV9衣壳的量的比率。当抗原结合结构域指示为例如mAb或Fab时，AAV9衣壳包含插入在位置453处并经由10个氨基酸的接头附接的SpyTag，并且抗原结合结构域包含与重链构建体的C末端融合的SpyCatcher。
具体实施方式
每块单独的骨骼肌都由数千根由结缔组织鞘包裹在一起的肌肉纤维组成。骨骼肌中单独的肌肉纤维束称为纤维束。围绕整个肌肉的最外层结缔组织鞘称为肌外膜。覆盖每个纤维束的结缔组织鞘称为肌束膜，并且围绕单条肌肉纤维的最内层鞘称为肌内膜。每个肌肉纤维包括含有多个肌丝的肌原纤维。
当捆绑在一起时，所有肌原纤维以独特的条纹图案排列，从而形成肌节，肌节是骨骼肌的基本收缩单位。两种最重要的肌丝是肌动蛋白丝和肌球蛋白丝，它们独特排列以在骨骼肌上形成各种条带。
骨骼肌的主要功能是经由其内在的兴奋-收缩耦联过程来实现的。当肌肉附着到骨骼肌腱时，肌肉的收缩导致骨骼的运动，从而允许执行特定运动。骨骼肌还提供结构支撑，并且有助于维持身体的姿势。骨骼肌还充当氨基酸的储存源，这些氨基酸可被身体的不同器官用于合成器官特异性蛋白质。骨骼肌还充当肌糖原形式的葡萄糖处置位点。骨骼肌在维持体温恒定方面也起着重要作用，并且在饥饿期间充当能量来源。因此，骨骼肌在运动、体温调节和控制全身代谢中起着关键作用。
在许多肌肉疾病中以及在正常衰老期间，骨骼肌组织的大小和功能降低，导致功能性活动能力受损；并且在严重肌肉疾病的情况下，导致长期残疾和早期死亡。
肌肉萎缩和遗传性肌肉疾病的治疗通常由广效疗法组成，诸如用于肌肉萎缩的睾酮疗法、用于肌营养不良症的糖皮质激素和用于治疗肌肉疾病（例如，X连锁肌管性肌病（XLMTM）、杜氏肌营养不良症（DMD）、强直性肌营养不良症（DM1）、面肩肱型肌营养不良症1型（FSHD）、先天性肌营养不良症1A型（MDC1A）、肢带型肌营养不良症和抗肌萎缩相关糖蛋白病（dystroglycanopathy）等）的全身AAV递送。这些疗法的非靶向递送降低了特定肌肉摄取的效率，同时还对其他器官造成显著的有害脱靶效应。
肌肉干细胞（MuSC）对于骨骼肌再生很重要。虽然MuSC在成年肌肉中通常是静息的，但在损伤时，它们会活化、增殖并分化成功能性肌纤维。然而，老年受试者中的MuSC在体外显示活化延迟和运动性降低，这转化为体内受损的MuSC介导的修复。
有丝分裂静息的肌肉干细胞（MuSC，也称为卫星细胞）和增殖的成肌细胞是尚未融合在一起以形成后来成为肌肉纤维的肌管或肌纤维的肌细胞（也称为肌肉细胞）的胚胎前体。肌肉干细胞和成肌细胞通过如图1中示意性（未按比例）描绘的称为肌发生的过程分化为肌肉细胞。
一般而言，一旦暴露于来自受损环境的信号，肌肉干细胞将离开其静息状态，重新进入细胞周期，并且开始增殖为成肌细胞。一些子细胞继续分化，而另一些则回到静息，以补充肌肉干细胞的储备群体。在分化阶段期间，表达某些基因（例如，纹状α-肌动蛋白基因），并且成肌细胞彼此排列。然后，成肌细胞融合以形成肌纤维，其中肌动蛋白募集到质膜。
肌肉干细胞可以通过几种遗传标志物（诸如Pax7和肌肉调控蛋白）的组合来表征。Pax7是一种成对的同源盒转录因子，其指定了前体肌肉细胞的成肌性质。因此，肌肉干细胞（无论是静息的还是增殖的）都可以表征为Pax7+。参见例如，图1。此外，肌源性细胞谱系表征是可能的，因为肌发生依赖于多种肌肉调控因子的精确和动态整合，诸如肌源因子5（MYF5）、肌源分化因子1（MYOD）、成肌素（MYOG）和胚胎肌球蛋白重链（MyHC）。例如，MYOD在肌源性细胞中表达，但不在稳态的静息肌肉干细胞中表达，因此可用于鉴定增殖的肌肉干细胞、成肌细胞或其他分化的肌细胞。参见例如，图1。成肌素似乎由致力于分化成肌纤维的成肌细胞表达。参见例如，图1。可用于鉴定细胞正在经历肌发生的哪个阶段的另外的标志物包括但不限于胚胎肌球蛋白重链（eMyHC），其在未成熟肌纤维中瞬时上调，但随着肌纤维成熟而下调。参见例如，图1。
根据成肌细胞将分化成的肌肉细胞的类型，成肌细胞可以分为骨骼肌成肌细胞、平滑肌成肌细胞和心肌成肌细胞。因此，肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞和未分化的肌管或肌纤维都可以被认为是非终末分化肌肉细胞。
许多病理疾患（诸如肌营养不良症（MD）或肌肉萎缩）不能为肌肉干细胞提供足够的信号，或者卫星细胞在这些疾患中可能存在固有缺陷，这将损害它们的再生潜力。因此，特异性靶向非终末分化肌肉细胞（例如，肌肉干细胞、成肌细胞、肌管等）的能力可用于骨骼肌病症的疗法中。
在非终末分化肌肉细胞钙粘蛋白15（CDH15）上发现的示例性细胞表面蛋白。钙粘蛋白是一类参与细胞-细胞粘附的钙依赖性跨膜蛋白。经典钙粘蛋白由胞外结构域、单个跨膜区和胞质结构域组成，该胞外结构域包含免疫球蛋白样钙粘蛋白结构域的五个重复序列。钙粘蛋白15（也称为M-钙粘蛋白）在肌肉干细胞的顶端表面处表达，并且被认为调节肌肉干细胞与肌肉肌纤维的粘附。钙粘蛋白15由位于16号染色体的长臂（16q24.3）上的CDH15基因编码。CDH15包含14个外显子，并且长度约为23,745个碱基。人CDH15基因的示例性序列被指定为NCBI登录号NM_004933.3（SEQ ID NO: 787）。示例性人CDH15蛋白被指定为NCBI登录号NP_004924.1和/或UniProt登录号P55291（SEQ ID NO: 788）。
经遗传修饰的动物模型可能被证明对研究CDH15在肌肉中的功能特别有用。例如，尽管在经遗传修饰的动物中缺失Cdh15不会改变从其分离的MuSC的静息、增殖、肌源性谱系进展或分化能力，但在这些小鼠中缺失Cdh15导致损伤后的加速再生（图2A-2D、3A-3B）。这可能至少部分是由于CDH15表达缺失后的加速退出静息（图4A-4B），这与SRF调节的早期反应基因的诱导相关（图5A-5B），这又与Rho/Rac信号传导的降低相关。有趣的是，Cdh15 -/- MuSC略大于野生型对照MuSC（数据未显示），这指示这些细胞更容易活化。与在年轻小鼠中观察到的效果类似，Cdh15缺失也挽救了肌肉再生中的年龄相关的缺陷（图6A-6D）。因此，拮抗性抗体或CDH15阻断抗体可用于增强年轻受试者和老年人在损伤刺激（例如，关节成形术）后的肌肉再生。
此外，某些肌肉相关癌症（包括横纹肌肉瘤）可能受益于靶向肌肉特异性标志物的治疗剂。横纹肌肉瘤（RMS）的特征是肌源性基因的表达，但存在多种亚型。例如，胚胎RMS是最普遍的亚型，通常具有更有利的预后，并且被认为是由肿瘤抑制基因的丢失或原癌基因的功能获得驱动的。肺泡RMS不太常见，但通常预后较差。肺泡RMS被认为是由Pax3或Pax7基因的染色体易位或替代基因融合引起的。另外的更罕见的亚型包括梭形细胞/硬化性RMS和多形性RMS。横纹肌肉瘤占所有儿童癌症的约3%，在美国每年有约400例至500例新病例（American Cancer Society, 2021）。儿童的预后通常良好（例如，约70%存活率），但取决于风险类别。例如，1/3的患有局限性RMS的患者和2/3的患有转移性RMS的患者经历复发性疾病。如果RMS复发，则大多数患者的估计5年存活率为约10%。此外，成人的预后通常要差得多（总存活率为20%-50%）。
因此，由于在所有横纹肌肉瘤（RMS）中观察到高CDH15表达并且可能与化学抗性和不良预后相关，抗CDH15抗体可用于将治疗剂（例如，细胞毒性剂）递送至RMS肿瘤。
本文描述了与人CDH15结合的抗原结合蛋白，例如抗体及其抗原结合片段。本文描述的抗体尤其可用于特异性指导药剂（例如，药物缀合物等）向肌肉细胞和/或肌肉相关癌细胞的内化，用于阻断CDH15的活性，和/或用于特异性刺激肌肉再生。因此，本文还描述了结合人CDH15的抗体或其抗原结合片段；包括抗体-蛋白质融合构建体，其包含结合人CDH15的抗体或其抗原结合片段；以及抗体药物缀合物，其包含结合人CDH15的抗体或其抗原结合片段。此外，为了增强治疗有效负载的肌肉递送并减轻脱靶效应，本文描述了病毒颗粒，例如AAV病毒颗粒，其可以靶向非终末分化肌肉细胞表面蛋白，诸如哺乳动物CDH15。
本文的描述不限于所描述的特定实施方案、组合物、方法和实验条件，因为此类实施方案、组合物、方法和条件可以变化。本文使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，而不意在是限制性的。
尽管在如本文所描述的实践或测试中可以使用与本文所描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料，但现在描述一些优选的方法和材料。本文所引用的所有出版物均通过引用整体并入本文进行描述。除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本领域普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。
除非上下文明确地另外指明，否则单数形式“一个/种”和“该/所述”包括复数个指代物。因此，例如提及“一种方法”包括本文描述的类型的和/或在阅读本公开后对所属领域的技术人员将变得显而易见的一种或多种方法和/或一个或多个步骤。
术语“约”，当用于提及具体列举的数值时，意指该值可以与列举的值相差不超过1%。例如，表述“约100”包括99和101以及其间的所有值（例如，99.1、99.2、99.3、99.4等）。
对于氨基酸或核苷酸序列，在蛋白质的全长或其一部分上，可以容易地确定“百分比（%）同一性”等。一部分的长度可以分别为至少约5个氨基酸或24个核苷酸，并且可以分别为至多约700个氨基酸或2100个核苷酸。通常，当提及两种不同的腺相关病毒之间的“同一性”、“同源性”或“类似性”时，参考“比对”序列来确定“同一性”、“同源性”或“类似性”。“比对”序列或“比对”是指与参考序列相比，通常含有对丢失的或另外的碱基或氨基酸的校正的多个核酸序列或蛋白质（氨基酸）序列。
可以使用多种公开或可商购获得的多序列比对程序中的任一种进行比对。序列比对程序可用于氨基酸序列，例如“Clustal X”、“MAP”、“PIMA”、“MSA”、“BLOCKMAKER”、“MEME”和“Match-Box”程序。通常，这些程序中的任何程序以默认设置使用，尽管本领域技术人员可以根据需要改变这些设置。可替代地，本领域技术人员可以利用另一种算法或计算机程序，该算法或程序提供至少与通过参考算法和程序所提供的一样水平的同一性或比对。参见例如，J. D. Thomson等人, Nucl. Acids. Res., “A comprehensive comparison ofmultiple sequence alignments”, 27(13):2682-2690 (1999)。
多个序列比对程序也可用于核酸序列。此类程序的实例包含“Clustal W”、“CAP序列组装”、“MAP”和“MEME”，该程序可通过因特网上的Web服务器进行访问。此类程序的其他来源是本领域技术人员已知的。可替代地，也使用了载体NTI实用程序。也存在本领域已知的可以用于测量核苷酸序列同一性的多种算法，包含上述程序中包含的那些。作为另一个实例，可以使用GCG 6.1版本的程序FASTATM比较多核苷酸序列。FASTATM提供查询与搜索序列之间的最佳重叠区域的比对和序列一致性百分比。例如，核酸序列之间的序列同一性百分比可以是使用如GCG 6.1版本中所提供的采用其默认参数（字号6和评分矩阵的NOPAM系数）的FASTATM所测定的，该程序通过引用并入本文中。
“显著同一性”涵盖至少90%，例如至少93%，例如至少95%，例如至少96%，例如至少97%，例如至少98%，例如至少99%或例如至少100%相同的氨基酸或核酸序列比对。
术语“嵌合”涵盖功能性基因或多肽，其分别包含来自至少两种不同AAV血清型（例如，至少第一AAV和第二AAV的基因或多肽的部分）的核酸序列或氨基酸序列，其中至少第一部分和第二部分可操作地连接以形成编码功能性氨基酸的功能性嵌合AAV核酸。除非被指定为嵌合的，否则核苷酸序列、基因、多肽和氨基酸被认为是非嵌合的，因为核苷酸序列、基因、多肽和氨基酸包含分别与单一AAV血清型的核酸序列或氨基酸序列具有显著同一性的核酸序列或氨基酸序列。
如本文所用，短语“可操作地连接”包含组分或元件的物理并列（例如，在三维空间中），这些组分或元件彼此直接或间接相互作用，或以其他方式彼此协调以参与生物事件，该并列实现或允许此类相互作用和/或协调。仅举一个实例，当核酸中的调控元件（例如，表达控制序列）相对于编码序列的定位使得其存在或不存在会影响编码序列的表达和/或活性时，则称其与编码序列“可操作地连接”。在许多实施方案中，“可操作连接”涉及相关组分或元件彼此共价连接。所属领域的技术人员将易于了解，在一些实施方案中，实现有效的可操作连接不需要共价连接。例如，可操作地连接在一起的蛋白质可以例如经由共价键或非共价键彼此缔合。作为非限制性实例，如本文所描述的衣壳蛋白可以可操作地连接至靶向配体，其中衣壳蛋白非共价结合至靶向配体，或共价结合至靶向配体，任选地在衣壳蛋白和靶向配体之间具有或不具有支架和/或衔接子。作为另一个实例，在一些实施方案中，与所控制的编码序列可操作地连接的核酸调控元件与目的核苷酸邻接。可替代地或另外地，在一些实施方案中，一个或多个这样的调控元件反式或远距离起作用以控制目的编码序列。在一些实施方案中，如本文所用，术语“调控元件”是指影响所连接的编码序列的表达和加工所必需的和/或足以影响所连接的编码序列的表达和加工的多核苷酸序列。在一些实施方案中，调控元件可以是或包含适当的转录起始、终止、启动子和/或增强子序列；有效的RNA加工信号，住如剪接和聚腺苷酸化信号；稳定细胞质mRNA的序列；增强翻译效率的序列（例如，Kozak共有序列）；增强蛋白质稳定性的序列；和/或在一些实施方案中，增强蛋白质分泌的序列。在一些实施方案中，一种或多种调控元件在特定宿主细胞或生物体或其类型中优先或排他地具有活性。仅举一个实例，在原核生物中，调控元件通常可以包括启动子、核糖体结合位点和转录终止序列；在真核生物中，在许多实施方案中，调控元件通常可以包括启动子、增强子和/或转录终止序列。本领域普通技术人员将从上下文了解，在许多实施方案中，术语“调控元件”是指其存在对于表达和加工而言是必需的组分，并且在一些实施方案中，包括其存在对于表达而言是有利的组分（包括例如前导序列、靶向序列和/或融合配偶体序列）。
短语“结合CDH15的抗体”、“抗hCDH15抗体”等包括特异性地识别单个CDH15分子的抗体及其抗原结合片段。如本文所描述的抗体及其抗原结合片段可以结合可溶性CDH15和/或细胞表面表达的CDH15。可溶性CDH15包括天然CDH15蛋白以及缺乏跨膜结构域或以其他方式与细胞膜未缔合的重组CDH15蛋白变体。
表述“细胞表面表达的CDH15”是指在体外或体内在细胞的表面上表达，使得CDH15蛋白的至少一部分暴露于细胞膜的细胞外侧并且可接近抗体的抗原结合部分的一种或多种CDH15蛋白。“细胞表面表达的CDH15”可以包括在通常表达CDH15蛋白的细胞表面上表达的CDH15蛋白或由该CDH15蛋白组成。可替代地，“细胞表面表达的CDH15”可以包括在通常在表面上不表达人CDH15、但已经被人为工程化为在表面上表达CDH15的细胞的表面上表达的CDH15蛋白或由该CDH15蛋白组成。
术语“抗原结合分子”包括抗体和抗体的抗原结合片段。
术语“抗体”是指包含与特定抗原（例如，CDH15）特异性结合或相互作用的至少一个互补决定区（CDR）的任何抗原结合分子或分子复合物。如本文所用，术语“抗体”包括包含四条多肽链（通过二硫键相互连接的两条重（H）链和两条轻（L）链）的免疫球蛋白分子及其多聚体（例如，IgM）。每条重链包含重链可变区（在本文中缩写为HCVR或VH）和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域：CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区（在本文中缩写为LCVR或VL）和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域：CL。VH和VL区可以细分为高变区（称为互补决定区（CDR）），这些高变区之间散布有更保守的区域（称为构架区（FR））。每个VH和VL由从氨基末端到羧基末端按照以下次序排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4（重链CDR可缩写为HCDR1、HCDR2和HCDR3；轻链CDR可缩写为LCDR1、LCDR2和LCDR3。术语“高亲和力”抗体是指对于其靶标具有至少10-9 M、至少10-10 M、至少10-11 M、或至少10-12 M的结合亲和力的那些抗体，如通过表面等离子体共振，例如BIACORETM或溶液亲和性ELISA所测量的。术语“抗体”可涵盖任何类型的抗体，诸如例如单克隆或多克隆。此外，抗体可以是任何来源的，诸如例如哺乳动物或非哺乳动物。在一个实施方案中，抗体可以是哺乳动物或禽类。在另外的实施方案中，抗体可以是人来源的，并且可以进一步是人单克隆抗体。
术语“抗体”还包括全抗体分子的抗原结合片段。术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括特异性结合抗原以形成复合物的任何天然存在的、酶促可获得的、合成的或基因工程化的多肽或糖蛋白。可以例如使用任何合适的标准技术（诸如蛋白水解消化或涉及编码抗体可变结构域和任选地抗体恒定结构域的DNA的操作和表达的重组基因工程化技术）从全抗体分子衍生出抗体的抗原结合片段。这样的DNA是已知的，和/或可以容易地从例如商业来源、DNA文库（包括例如噬菌体-抗体文库）获得，或者可以被合成。可对DNA进行测序，并且用化学方法或通过使用分子生物学技术进行操作，例如，以将一个或多个可变结构域和/或恒定结构域排列为合适的构型，或引入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或删除氨基酸等。
抗原结合片段的非限制性实例包括：(i) Fab片段；(ii) F(ab')2片段；(iii) Fd片段；(iv) Fv片段；(v)单链Fv（scFv）分子；(vi) dAb片段；和(vii)由模拟抗体的高变区的氨基酸残基组成的最小识别单位（例如，分离的互补决定区（CDR）诸如CDR3肽）或受限制的FR3-CDR3-FR4肽。其他工程化分子，诸如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失的抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微抗体、纳米抗体（例如，单价纳米抗体、二价纳米抗体等）、小型模块化免疫药物（SMIP）和鲨鱼可变IgNAR结构域，也涵盖在表述“抗原结合片段”内。
抗体的抗原结合片段通常包括至少一个可变结构域。可变结构域可具有任何尺寸或氨基酸组成，并且通常将包括与一个或多个框架序列相邻或阅读框一致的至少一个CDR。在具有VH结构域与VL结构域缔合的抗原结合片段中，VH和VL结构域可相对于彼此以任何合适的布置定位。例如，可变区可为二聚体并且含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。可替换地，抗体的抗原结合片段可含有单体VH或VL结构域。
在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可含有与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可以存在于如本文所描述的抗体的抗原结合片段内的可变结构域和恒定结构域的非限制性、示例性构型包括：(i) VH-CH1；(ii) VH-CH2；(iii) VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v) VH-CH1-CH2-CH3；(vi) VH-CH2-CH3；(vii) VH-CL；(viii) VL-CH1；(ix) VL-CH2；(x) VL-CH3；(xi) VL-CH1-CH2；(xii) VL-CH1-CH2-CH3；(xiii) VL-CH2-CH3；和(xiv) VL-CL。在可变结构域和恒定结构域的任何构型（包括上文列出的示例性构型中的任一者）中，可变结构域和恒定结构域可彼此直接连接或者可通过完整或部分铰链区或连接区相连。铰链区可以由至少2个（例如，5、10、15、20、40、60或更多个）氨基酸组成，其导致在单个多肽分子中的相邻可变结构域和/或恒定结构域之间的柔性的或半柔性的连接。此外，如本文所描述的抗体的抗原结合片段可以包含具有上文所列的可变结构域和恒定结构域构型中的任一者的彼此和/或与一个或多个单体VH或VL结构域（例如，通过二硫键）呈非共价缔合的同二聚体或异二聚体（或其他多聚体）。
正如全抗体分子那样，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的（例如，双特异性的）。抗体的多特异性抗原结合片段通常将包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域都能够特异性结合至单独的抗原或相同抗原上的不同表位。使用本领域可用的常规技术，可以使任何多特异性抗体形式，包括本文公开的示例性双特异性抗体形式，适用于如本文所描述的抗体的抗原结合片段的上下文中。
在某些实施方案中，如本文所描述的抗hCDH15抗体为人抗体。术语“人抗体”是指具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。如本文所描述的人抗体可以包括例如在CDR中以及特别是在CDR3中，不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基（例如，通过体外随机或定点诱变或通过体内体细胞突变引入的突变）。然而，术语“人抗体”并不意在包括已将源自另一哺乳动物物种（诸如小鼠）的种系的CDR序列移植到人框架序列上的抗体。
在一些实施方案中，如本文所描述的抗体可以是重组人抗体。术语“重组人抗体”意在包括通过重组手段所制备、表达、产生或分离的全部人抗体，诸如使用转染至宿主细胞（在下文进一步描述）中的重组表达载体表达的抗体、从重组人抗体组合文库（在下文进一步描述）中分离的抗体、从就人免疫球蛋白基因而言为转基因的动物（例如，小鼠）中分离的抗体（参见例如，Taylor等人 (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295）或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他手段所制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，此类重组人抗体经历体外诱变（或，当使用就人Ig序列而言为转基因的动物时，经历体内体细胞诱变）并且因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是尽管源自人种系VH和VL序列并且与之相关、但可能在体内人抗体种系库内部不天然存在的序列。
人抗体可能以与铰链异质性相关的两种一般形式存在。在一种一般形式中，免疫球蛋白分子包含大约150 kDa-160 kDa的稳定四链构建体，其中二聚体通过链间重链二硫键保持在一起。在第二种一般形式中，二聚体不经由链间二硫键连接，并且约75-80 kDa的分子由共价偶联的轻链和重链（半抗体）构成。即使在亲和纯化之后，这些形式也极难分离。
第二种形式在各种完整IgG同种型中的出现频率是由于但不限于与抗体的铰链区同种型相关的结构差异。人IgG4铰链的铰链区中的单个氨基酸取代可以将第二种形式的出现（Angal等人 (1993) Molecular Immunology 30:105）显著减少至通常使用人IgG1铰链观察到的水平。如本文所描述的抗体可以在铰链、CH2或CH3区中具有一个或多个突变，这在例如生产中可能是期望的，以提高所需的抗体形式的产率。
如本文所描述的抗体可以是分离的抗体。“分离的抗体”是指已经从天然环境的至少一种组分中鉴定和分离和/或回收的抗体。例如，已经从生物体的至少一种组分中、或者从抗体天然存在或天然产生的组织或细胞中分离或去除的抗体可以被认为是“分离的抗体”。分离的抗体还包括重组细胞内的原位抗体。分离的抗体是已经经受至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施方案，分离的抗体可基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
本文还描述了结合CDH15的单臂抗体。术语“单臂抗体”是指包含单个抗体重链和单个抗体轻链的抗原结合分子。如本文所描述的单臂抗体可以包含如表1所示的HCVR/LCVR或CDR氨基酸序列中的任一者。
与衍生出抗体的对应种系序列相比，本文公开的抗hCDH15抗体可以在重链和轻链可变结构域的框架和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失。通过将本文公开的氨基酸序列与可从例如公共抗体序列数据库获得的种系序列进行比较，可以容易地确定此类突变。本文还描述了源自本文公开的氨基酸序列中的任一者的抗体及其抗原结合片段，其中一个或多个框架和/或CDR区内的一个或多个氨基酸被突变为衍生出抗体的种系序列的对应残基，或突变为另一个人种系序列的对应残基，或突变为对应种系残基的保守氨基酸取代（此类序列变化在本文中统称为“种系突变”）。本领域的普通技术人员从本文公开的重链和轻链可变区序列开始，能够容易地生产包含一个或多个单独种系突变或其组合的多种抗体和抗原结合片段。在某些实施方案中，VH和/或VL结构域内的所有框架和/或CDR残基被突变回存在于衍生出抗体的原始种系序列中的残基。在其他实施方案中，仅某些残基被突变回原始种系序列，例如仅见于FR1的前8个氨基酸内或FR4的后8个氨基酸内的突变残基，或仅见于CDR1、CDR2或CDR3内的突变残基。在其他实施方案中，框架和/或CDR残基中的一者或多者被突变为不同的种系序列（即，与最初衍生出抗体的种系序列不同的种系序列）的对应残基。此外，如本文所描述的抗体可以在框架和/或CDR区内含有两个或更多个种系突变的任何组合，例如，其中某些单独残基被突变为特定种系序列的对应残基，而与原始种系序列不同的某些其他残基得以维持或被突变为不同种系序列的对应残基。一旦获得含有一个或多个种系突变的抗体和抗原结合片段，就可以容易地测试其一种或多种所需性质，诸如改善的结合特异性、增加的结合亲和力、改善或增强的拮抗性或激动性生物学性质（视具体情况而定）、降低的免疫原性等。在一些实施方案中，以这种一般方式获得如本文所描述的抗体或抗原结合片段。
本文还描述了抗hCDH15抗体，其包含本文公开的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者的变体，这些变体具有一个或多个保守取代。例如，一些实施方案包括具有HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的抗hCDH15抗体，这些HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列相对于本文表1中所示的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者具有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等的保守氨基酸取代。
短语“双特异性抗体”包括能够选择性地结合两个或更多个表位的抗体。双特异性抗体通常包含两条不同的重链，其中每条重链特异性地结合两个不同分子（例如，抗原）上或同一分子上（例如，在同一抗原上）的不同表位。如果双特异性抗体能够选择性地结合两个不同的表位（第一表位和第二表位），则第一重链对于第一表位的亲和力通常比第一重链对于第二表位的亲和力低至少一个到两个或三个或四个数量级，并且反之亦然。由双特异性抗体识别的表位可在相同或不同的靶标上（例如，在相同或不同的蛋白质上）。双特异性抗体可例如通过组合识别相同抗原的不同表位的重链来制备。例如，编码识别相同抗原的不同表位的重链可变序列的核酸序列可与编码不同重链恒定区的核酸序列融合，并且此类序列可在表达免疫球蛋白轻链的细胞中表达。典型的双特异性抗体具有两条重链以及免疫球蛋白轻链，该两条重链各自具有三个重链CDR，随后为（N-末端至C-末端）CH1结构域、铰链、CH2结构域和CH3结构域，该免疫球蛋白轻链可能不赋予抗原结合特异性，但可与每条重链结合，或者可与每条重链结合并且可结合由重链抗原结合区结合的一个或多个表位，或者可与每条重链结合并且参与重链之一或两者与一个或两个表位的结合。
短语“重链”或“免疫球蛋白重链”包括来自任何生物体的免疫球蛋白重链恒定区序列，并且除非另有说明，否则包括重链可变结构域。除非另有说明，否则重链可变结构域包括三个重链CDR和四个FR区。重链的片段包括CDR、CDR和FR以及其组合。典型的重链在可变结构域之后具有（从N末端到C末端）CH1结构域、铰链、CH2结构域和CH3结构域。重链的功能片段包括能够特异性识别抗原（例如，以微摩尔、纳摩尔或皮摩尔范围内的KD识别抗原）、能够从细胞中表达和分泌、并且包含至少一个CDR的片段。
术语“仅重链抗体”、“仅重链抗原结合蛋白”、“单结构域抗原结合蛋白”、“单结构域结合蛋白”等是指包含免疫球蛋白样链的单体或同二聚体免疫球蛋白分子，该免疫球蛋白样链包含可操作地连接至重链恒定区的可变结构域，其不能与轻链缔合，因为重链恒定区通常缺乏功能性CH1结构域。因此，术语“仅重链的抗体”、“仅重链的抗原结合蛋白”、“单结构域抗原结合蛋白”、“单结构域结合蛋白”等涵盖(i)包括免疫球蛋白样链中的一条的单体单结构域抗原结合蛋白，该免疫球蛋白样链包括可操作地连接至缺少功能性CH1域的重链恒定区的可变结构域，或(ii)包括两条免疫球蛋白样链的同二聚单结构域抗原结合蛋白，每条免疫球蛋白样链包括可操作地连接至缺少功能性CH1域的重链恒定区的可变结构域。在各种方面中，同二聚单结构域抗原结合蛋白包括两条相同的免疫球蛋白样链，每条免疫球蛋白样链包括可操作地连接至缺少功能性CH1域的相同重链恒定区的相同可变结构域。另外，单结构域抗原结合蛋白的每条免疫球蛋白样链包含可变结构域，该可变结构域可以衍生自重链可变区基因区段（例如，VH、DH、JH）、轻链基因区段（例如，VL、JL）或它们的组合，连接至重链恒定区（CH）基因序列，该重链恒定区基因序列包含重链恒定区基因（例如，IgG、IgA、IgE、IgD或它们的组合）的CH1编码序列中的缺失或失活突变。包括衍生自重链基因区段的可变结构域的单结构域抗原结合蛋白可称为“VH单结构域抗体”或“VH单结构域抗原结合蛋白”，参见例如美国专利第8,754,287号；美国专利公开案第20140289876号；第20150197553号；第20150197554号；第20150197555号；第20150196015号；第20150197556号；和第20150197557号，其中的每一者通过引用整体并入。包括衍生自轻链基因区段的可变结构域的单结构域抗原结合蛋白可称为或“VL单结构域抗原结合蛋白”，参见例如通过引用整体并入的美国公开案第20150289489号。
短语“轻链”包括来自任何生物体的免疫球蛋白轻链恒定区序列，并且除非另有说明，否则包括人κ和λ轻链。除非另有说明，否则轻链可变（VL）结构域通常包括三个轻链CDR和四个框架（FR）区。通常，全长轻链从氨基末端到羧基末端包括包含FR1-CDR1- FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4的VL结构域和轻链恒定结构域。可能有用的轻链包括例如不选择地性结合被抗原结合蛋白选择性地结合的第一抗原或第二抗原的轻链。合适的轻链包括可通过在现有抗体文库（湿文库或在计算机芯片上）中筛选最常用的轻链来鉴定的轻链，其中这些轻链基本上不干扰抗原结合蛋白的抗原结合结构域的亲和力和/或选择性。合适的轻链包括可结合被抗原结合蛋白的抗原结合区结合的一个或两个表位的轻链。
短语“可变结构域”包括免疫球蛋白轻链或重链（根据需要进行修饰）的氨基酸序列，其从N末端到C末端序贯包含下述氨基酸区（除非另有说明）：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。“可变结构域”包括能够折叠成具有双重β片层结构的经典结构域（VH或VL）的氨基酸序列，其中β片层通过第一β片层和第二β片层的残基之间的二硫键连接。
短语“互补决定区”或术语“CDR”包括由生物体的免疫球蛋白基因的核酸序列编码的氨基酸序列，其通常（即，在野生型动物中）出现在免疫球蛋白分子（例如，抗体或T细胞受体）的轻链或重链的可变区中的两个构架区之间。CDR可由例如种系序列或重排或未重排的序列编码，并且例如由原初或成熟B细胞或T细胞编码。在一些情况下（例如，对于CDR3），CDR可由两个或更多个序列（例如，种系序列）编码，这些序列是不邻接的（例如，在未重排的核酸序列中），但在B细胞核酸序列中是邻接的，例如由于剪接或连接序列（例如，V-D-J重组以形成重链CDR3）。
用于鉴定在HCVR和LCVR氨基酸序列内的CDR的方法和技术是本领域众所周知的，并且可用于鉴定在本文公开的指定HCVR和/或LCVR氨基酸序列内的CDR。可用于鉴定CDR的边界的公约的实例包括例如Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。一般来说，Kabat定义是基于序列变异性，Chothia定义是基于结构环区的位置，并且AbM定义是介于Kabat和Chothia方法之间的折衷方案。参见例如，Kabat, “Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,” National Institutes of Health, Bethesda, Md. （1991）；Al-Lazikani等人，J.Mol. Biol. 273:927-948 (1997)；和Martin等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9272 (1989)。公共数据库也可用于鉴定抗体内的CDR序列。
术语“抗体片段”是指保留与抗原特异性结合的能力的抗体的一个或多个片段。术语“抗体片段”内涵盖的结合片段的实例包括(i) Fab片段，一种由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii) F(ab')2片段，一种在铰链区处包含通过二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)由VH结构域组成的dAb片段（Ward等人 (1989) Nature 241:544-546）；(vi)分离的CDR；和(vii) scFv，其由Fv片段的两个结构域VL和VH组成，这两个结构域通过合成接头连接以形成单个蛋白质链，其中VL区和VH区配对以形成单价分子。其他形式的单链抗体（诸如双抗体）也涵盖在术语“抗体”下（参见例如，Holliger等人 (1993) PNAS USA 90:6444-6448；Poljak等人 (1994) Structure 2:1121-1123）。
短语“含Fc的蛋白质”包括抗体、双特异性抗体、免疫粘附素和其他结合蛋白，其包含免疫球蛋白CH2和CH3区的至少一个功能部分。“功能部分”是指可结合Fc受体（例如FcyR；或FcRn，即新生儿Fc受体）和/或可参与补体活化的CH2和CH3区。如果CH2和CH3区含有使其不能结合任何Fc受体并且也不能活化补体的缺失、取代和/或插入或其他修饰，则CH2和CH3区是无功能的。
含Fc的蛋白质可包含免疫球蛋白结构域中的修饰，包括影响结合蛋白的一种或多种效应子功能的修饰（例如，影响FcyR结合、FcRn结合并由此影响半衰期和/或CDC活性的修饰）。参考免疫球蛋白恒定区的EU编号，此类修饰包括但不限于以下修饰及其组合：238、239、248、249、250、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、297、298、301、303、305、307、308、309、311、312、315、318、320、322、324、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、337、338、339、340、342、344、356、358、359、360、361、362、373、375、376、378、380、382、383、384、386、388、389、398、414、416、419、428、430、433、434、435、437、438和439。
例如，但不作为限制，结合蛋白是含Fc的蛋白质，并且表现出增强的血清半衰期（与没有所陈述修饰的相同含Fc的蛋白质相比），并且具有位置250（例如，E或Q）；250和428（例如，L或F）；252（例如，L/Y/F/W或T）、254（例如，S或T）和256（例如，S/R/Q/E/D或T）处的修饰；或位置428和/或433（例如，L/R/SI/P/Q或K）和/或434（例如，H/F或Y）处的修饰；或位置250和/或428处的修饰；或位置307或308（例如，308F、V308F）和434处的修饰。在另一个实例中，修饰可以包括428L（例如，M428L）和434S（例如，N434S）修饰；428L、2591（例如，V259I）和308F（例如，V308F）修饰；433K（例如，H433K）和434（例如，434Y）修饰；252、254和256（例如，252Y、254T和256E）修饰；250Q和428L修饰（例如，T250Q和M428L）；307和/或308修饰（例如，308F或308P）。
如本文所用，术语“抗原结合蛋白”是指特异性地识别抗原（如本文所描述的细胞特异性抗原和/或靶抗原）上的表位的多肽或蛋白质（在功能单元中复合的一种或多种多肽）。抗原结合蛋白可为多特异性的。关于抗原结合蛋白的术语“多特异性”意指蛋白质识别不管是在相同的抗原上还是在不同的抗原上的不同表位。如本文所描述的多特异性抗原结合蛋白可以是单个多功能多肽，或者它可以是彼此共价或非共价缔合的两个或更多个多肽的多聚体复合物。术语“抗原结合蛋白”包括如本文所描述的抗体或其片段，其可以与另一种功能分子（例如，另一种肽或蛋白质）连接或共表达。例如，抗体或其片段可以功能性地连接（例如，通过化学偶联、遗传融合、非共价缔合或其他方式）至一个或多个其他分子实体（诸如蛋白质或其片段），以产生具有第二结合特异性的双特异性或多特异性抗原结合分子。
术语“蛋白质”意指具有通过酰胺键共价连接的多个氨基酸的任何氨基酸聚合物。蛋白质含有一个或多个氨基酸聚合物链，在本领域中通常称为“多肽”。因此，多肽可以是蛋白质，并且蛋白质可含有多种多肽以形成单个功能性生物分子。在一些蛋白质中可存在二硫桥（即，在半胱氨酸残基之间用于形成胱氨酸）。这些共价键可在单个多肽链内，或在两个单独多肽链之间。例如，二硫桥对于胰岛素、免疫球蛋白、鱼精蛋白等的适当结构和功能是必需的。关于二硫键形成的最近综述，参见Oka和Bulleid, “Forming disulfides in theendoplasmic reticulum,” 1833(11) Biochim Biophys Acta 2425-9 (2013)。
如本文所用，“蛋白质”包括生物治疗性蛋白、用于研究或疗法中的重组蛋白、陷阱蛋白和其他Fc-融合蛋白、嵌合蛋白、抗体、单克隆抗体、人抗体、双特异性抗体、抗体片段、纳米抗体、重组抗体嵌合体、scFv融合蛋白、细胞因子、趋化因子、肽激素等。可使用基于重组细胞的生产系统诸如昆虫杆状病毒系统、酵母系统（例如，毕赤酵母属物种（Pichiasp.））、哺乳动物系统（例如，CHO细胞和CHO衍生物，如CHO-K1细胞）来生产蛋白质。关于论述生物治疗性蛋白及其生产的最近综述，参见Ghaderi等人, “Production platforms forbiotherapeutic glycoproteins. Occurrence, impact, and challenges of non-humansialylation,” 28 Biotechnol Genet Eng Rev. 147-75 (2012)。
如本文所使用，术语“表位”是指被多特异性抗原结合多肽识别的抗原的一部分。单个抗原（诸如抗原性多肽）可具有超过一个表位。表位可以定义为结构性或功能性的。功能表位通常是结构表位的子集，并且定义为直接促成抗原结合多肽与抗原之间相互作用的亲和力的那些残基。表位还可以是构形性的，即，由非线性氨基酸构成。在某些实施方案中，表位可以包括作为分子的化学活性表面基团（诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基）的决定簇，并且在某些实施方案中，可具有特定三维结构特性和/或荷质比特性。由邻接氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂时保留，而通过三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丢失。
术语“结构域”是指具有特定功能或结构的蛋白质或多肽的任何部分。优选地，如本文所描述的结构域与细胞特异性或靶抗原结合。如本文所用，细胞特异性抗原结合结构域或靶抗原结合结构域等包括任何天然存在的、酶促可获得的、合成的或基因工程化的特异性结合抗原的多肽或糖蛋白。
可互换使用的术语“半体”或“半抗体”是指抗体的一半，其基本上含有一条重链和一条轻链。抗体重链可形成二聚体，因此一个半体的重链可与跟不同分子（例如，另一个半体）相关联的重链或另一个含Fc多肽的重链缔合。两个略微不同的Fc-结构域可“异二聚化”，如在双特异性抗体或其他异二聚体、异三聚体、异四聚体等的形成中。参见Vincent和Murini, “Current strategies in antibody engineering: Fc engineering and pH-dependent antigen binding, bispecific antibodies and antibody drugconjugates,” 7 Biotechnol. J. 1444-1450 (20912)；和Shimamoto等人,“Peptibodies: A flexible alternative format to antibodies,” 4(5) MAbs 586-91(2012)。
术语“单链可变片段”或“scFv”包括含有免疫球蛋白重链可变区（VH）和免疫球蛋白轻链可变区（VL）的单链融合多肽。在一些实施方案中，VH和VL通过10至25个氨基酸的接头序列连接。ScFv多肽还可包括其他氨基酸序列，诸如CL或CH1区。ScFv分子可通过噬菌体展示来制造，或可通过直接从杂交瘤或B细胞亚克隆重链和轻链来制备。关于通过噬菌体展示和抗体结构域克隆制备scFv片段的方法，Ahmad等人, Clinical and DevelopmentalImmunology, 第2012卷, 文章ID 98025通过引用并入本文。
如本文所用，术语“肌肉相关癌症”是指由肌源性基因的表达（例如CDH15的表达）所定义的任何癌细胞。“肌肉相关癌症”包括但不限于横纹肌肉瘤，例如胚胎性、肺泡性、梭形细胞/硬化性、多形性等。
术语“靶细胞”包括其中需要目的核苷酸的表达的任何细胞。优选地，靶细胞在其表面上表现出允许细胞经靶向配体靶向的受体，如下文所描述。在某些实施方案中，靶细胞是肌肉细胞。如本文所用，“肌肉细胞”是指表达肌源性标志物和/或参与骨骼肌再生的任何细胞，例如肌肉干细胞（“MuSC”，也称为卫星细胞）并且其表达Pax7并因此被认为是Pax7+细胞，例如当静息时为Pax7+/MyoD-，并且当增殖时为Pax7+/MyoD+）、成肌细胞（例如，MyoD+成肌素+细胞）、肌细胞、肌管（也称为肌纤维，例如MyHC+细胞）等。
“重靶向”或“重定向”可以包括这样一种情况，其中野生型颗粒靶向组织内的几个细胞和/或生物体内的几个器官，并且通过插入异源氨基酸来减少或消除对组织或器官的一般靶向，并且利用结合由特定细胞表达的标志物的靶向配体（例如，经由靶向配体）来实现对组织中的更多特定细胞或生物体中的特定器官的重靶向。这种重靶向或重定向还可以包括这样一种情况，其中野生型颗粒靶向组织，并且通过插入异源氨基酸来减少或消除对组织的靶向，并且用靶向配体实现对完全不同的组织的重靶向。
“特异性结合对”、“结合对”、“蛋白质:蛋白质结合对”等包括两个成员（例如，第一成员（例如，第一多肽）和第二同源成员（例如，第二多肽）），它们相互作用以形成键（例如，第一成员表位和识别该表位的抗体的第二成员抗原结合部分之间的非共价键；例如能够形成异肽键的蛋白质之间的共价键；相互识别并通过蛋白质反式剪接的过程介导侧翼蛋白的连接及其自身去除的分裂内含肽）。在一些实施方案中，术语“同源”是指共同起作用的组分。表位及其同源抗体，特别是也可以充当可检测标记（例如，c-myc）的表位，是本领域众所周知的。能够相互作用以形成共价异肽键的特定蛋白质:蛋白质结合对在Veggiani等人(2014) Trends Biotechnol. 32:506中综述，并且包括肽:肽结合对，诸如SpyTag:SpyCatcher、SpyTag002:SpyCatcher002；SpyTag:KTag；isopeptag:pilin C、SnoopTag:SnoopCatcher等，及其生物学等效变体，例如SpyTag003:SpyCatcher003。通常，蛋白质:蛋白质结合对的第一成员是指蛋白质:蛋白质结合对中长度通常小于30个氨基酸并且与第二同源蛋白结合形成自发共价异肽键的成员，其中第二同源蛋白通常较大，但长度也可以小于30个氨基酸，诸如在SpyTag:KTag系统中。
术语“异肽键”是指羧基或甲酰胺基与氨基之间的酰胺键，这些基团中的至少一个基团不源自蛋白质主链，或从另一个角度看，不是蛋白质主链的一部分。异肽键可形成于单个蛋白质内或可出现在两个肽之间或肽与蛋白质之间。因此，异肽键可以在单个蛋白质内分子内形成，或分子间形成，即在两个肽/蛋白质分子之间，例如在两个肽接头之间形成。通常，异肽键可出现在赖氨酸残基与天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺或谷氨酸残基或蛋白质或肽链的末端羧基之间，或者可出现在蛋白质或肽链的α-氨基末端与天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺或谷氨酸之间。异肽键中涉及的对的每个残基在本文中称为反应性残基。在本发明的优选实施方案中，异肽键可形成于赖氨酸残基与天冬酰胺残基之间或赖氨酸残基与天冬氨酸残基之间。特别地，异肽键可出现在赖氨酸的侧链胺与天冬酰胺的甲酰胺基或天冬氨酸的羧基之间。
SpyTag:SpyCatcher系统描述于美国专利第9,547,003号和Zaveri等人 (2012)PNAS 109:E690-E697中（这些文献中的每一篇通过引用整体并入本文），并且源自酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes）纤连蛋白结合蛋白FbaB的CnaB2结构域。通过分裂结构域，Zakeri等人获得了具有序列AHIVMVDAYKPTK（SEQ ID NO:815）的肽“SpyTag”，其与其同源蛋白“SpyCatcher”结合形成酰胺键，该同源蛋白是具有SEQ ID NO:816中所示的氨基酸序列的112个氨基酸的多肽。（Zakeri (2012), 同上）。源自CnaB2结构域的另外的特异性结合对是SpyTag:KTag，其在SpyLigase存在下形成异肽键。（Fierer (2014) PNAS 111:E1176-1181）通过以下方式对SpyLigase进行工程化：从SpyCatcher上切除含有反应性赖氨酸的β链，从而产生具有氨基酸序列ATHIKFSKRD（SEQ ID NO:817）的蛋白质:蛋白质结合对的10个残基的第一成员KTag。SpyTag002:SpyCatcher002系统描述于Keeble等人 (2017) Angew Chem Int Ed Engl 56:16521-25中，该文献通过引用并入本文中。SpyTag002具有如SEQ IDNO:821所示的氨基酸序列VPTIVMVDAYKRYK，并且结合SpyCatcher002。SpyTag003具有如SEQID NO:822所示的氨基酸序列RGVPHIVMVDAYKRYK，并且结合SpyCatcher003。
SnoopTag:SnoopCatcher系统描述于Veggiani (2016) PNAS 113:1202-07中。RrgA（一种来自肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）的粘附物）的D4 Ig样结构域被分裂以形成SnoopTag（残基734-745）和SnoopCatcher（残基749-860）。SnoopTag和SnoopCatcher的温育产生在互补蛋白之间具有特异性的自发异肽键。Veggiani (2016),同上。
isopeptag:pilinC特异性结合对源自来自酿脓链球菌的主要菌毛蛋白Spy0128。（Zakeir和Howarth (2010) J. Am. Chem. Soc. 132:4526-27）。Isopeptag具有如SEQ IDNO:820所示的氨基酸序列TDKDMTITFTNKKDAE，并且结合pilin-C（Spy0128的残基18-299）。isopeptag和pilin-C的温育产生在互补蛋白之间具有特异性的自发异肽键。Zakeir和Howarth (2010), 同上。
术语“转导”或“感染”等是指通过病毒颗粒将核酸引入到靶细胞（例如，肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞、它们的任何组合等）核中。与转导等相关的术语效率，例如“转导效率”，是指在与包含目的核苷酸的一定数量的病毒颗粒一起温育后表达目的核苷酸的细胞的分数（例如，百分比）。众所周知的测定转导效率的方法包括用荧光报告基因转导的细胞的流式细胞术、用于表达目的核苷酸的RT-PCR等。
一般而言，“参考”病毒衣壳蛋白/衣壳/颗粒与测试病毒衣壳蛋白/衣壳/颗粒相同，但其效果的变化有待测试。例如，为了确定将特异性结合对的第一成员插入到测试病毒颗粒中例如对转导效率的影响，可以将测试病毒颗粒的转导效率（在不存在或存在适当的靶向配体的情况下）与参考病毒颗粒的转导效率（如果需要的话，在不存在或存在适当的靶向配体的情况下）进行比较，该参考病毒颗粒在除了存在特异性结合对的第一成员之外的每种情况下（例如，另外的点突变、目的核苷酸、病毒颗粒和靶细胞的数量等）均与测试病毒颗粒相同。在一些实施方案中，参考病毒衣壳蛋白是能够与第二病毒衣壳蛋白形成衣壳的参考病毒衣壳蛋白，该第二病毒衣壳蛋白被修饰以至少包含蛋白质:蛋白质结合对的第一成员，其中该参考病毒衣壳蛋白不包含蛋白质:蛋白质结合对的第一成员，优选地其中由参考病毒衣壳蛋白和经修饰的病毒衣壳蛋白形成的衣壳是镶嵌衣壳。
抗原结合蛋白
本文描述了抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段），其包含如表1中所示的HCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCVR、LCV1、LCVR2和/或LCVR3的氨基酸。
在某些实施方案中，如本文所描述的抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）包含重链CDR1（HCDR1），其包含选自表1中列出的HCDR1氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
在某些实施方案中，如本文所描述的抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）包含重链CDR2（HCDR2），其包含选自表1中列出的HCDR2氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
在某些实施方案中，如本文所描述的抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）包含重链CDR3（HCDR3），其包含选自表1中列出的HCDR3氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
在某些实施方案中，如本文所描述的抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）包含轻链CDR1（LCDR1），其包含选自表1中列出的LCDR1氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
在某些实施方案中，如本文所描述的抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）包含轻链CDR2（LCDR2），其包含选自表1中列出的LCDR2氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
在某些实施方案中，如本文所描述的抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）包含轻链CDR3（LCDR3），其包含选自表1中列出的LCDR3氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
在一些实施方案中，如本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含HCDR3和LCDR3氨基酸序列对（HCDR3/LCDR3），其包含与表1中列出的LCDR3氨基酸序列中的任一者配对的表1中列出HCDR3氨基酸序列中的任一者。在一些实施方案中，如本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含表1中列出的示例性抗hCDH15抗体中的任一者内所含有的HCDR3/LCDR3氨基酸序列对。在一些实施方案中，HCDR3/LCDR3氨基酸序列对选自由以下组成的组：SEQ ID NO:8和16、28和36、48和54、66和54、76和54、86和54、96和102、113和119、131和139、151和159、171和179、191和196、208和214、226和54、236和54、246和54、255和54、265和273、285和293、305和313、325和333、345和352、364和372、382和54、392和398、410和414、426和434、442和450、458和466、474和482、490和498、506和514、522和530、538和546、554和562、570和578、586和594、602和610、618和626、634和642、650和658、666和674、682和690、698和706、714和722、730和738、746和690、754和762以及770和778。
本文描述了抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段），其包含表1中列出的示例性抗hCDH15抗体中的任一者内所含有的一组六个CDR（即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3）。在一些实施方案中，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组选自由以下组成的组：SEQ ID NO: 4-6-8-12-14-16、24-26-28-32-34-36、44-46-48-52-34-54、62-64-66-52-34-54、72-74-76-52-34-54、82-84-86-52-34-54、92-94-96-100-34-102、82-111-113-117-34-119、127-129-131-135-137-139、147-149-151-155-157-159、167-169-171-175-177-179、187-189-191-52-34-196、204-206-208-212-137-214、222-224-226-52-34-54、232-234-236-52-34-54、242-244-246-52-34-54、82-253-255-52-34-54、261-263-265-269-271-273、281-283-285-289-291-293、301-303-305-309-311-313、321-323-325-329-331-333、341-343-345-349-14-352、360-362-364-368-370-372、187-380-382-52-34-54、388-390-392-396-14-398、406-408-410-100-34-414、422-424-426-430-432-434、438-440-442-446-448-450、454-456-458-462-464-466、470-472-474-478-480-482、486-488-490-494-496-498、502-504-506-510-512-514、518-520-522-526-528-530、534-536-538-542-544-546、550-552-554-558-560-562、566-568-570-574-576-578、582-584-586-590-592-594、598-600-602-606-608-610、614-616-618-622-624-626、630-632-634-638-640-642、646-648-650-654-656-658、662-664-666-670-672-674、678-680-682-686-688-690、694-696-698-702-704-706、710-712-714-718-720-722、726-728-730-734-736-738、742-744-746-686-688-690、750-752-754-758-760-762和766-768-770-774-776-778。
本文还描述了抗体或其抗原结合片段，其包含表1中列出的示例性抗hCDH15抗体中的任一者所定义的HCVR/LCVR氨基酸序列对内所含有的一组六个CDR（即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3）。在一些实施方案中，如本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含选自由以下组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对内所含有的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组：SEQ ID NO: 2和10、22和30、42和50、60和50、70和50、80和50、90和98、108和115、125和133、145和153、165和173、185和193、202和210、220和50、230和50、240和50、250和50、259和267、279和287、299和307、319和327、339和347、358和366、378和50、386和394、404和412、420和428、436和444、452和460、468和476、484和492、500和508、516和524、532和540、548和556、564和572、580和588、596和604、612和620、628和636、644和652、660和668、676和684、692和700、708和716、724和732、740和684、748和756以及764和772。
在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含重链可变区（HCVR或VH）。在一些实施方案中，HCVR包含选自表1的一组HCDR1-HCDR2-HCDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，HCVR包含选自表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含轻链可变区（LCVR或VL）。在一些实施方案中，LCVR包含选自下表1的一组LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，LCVR包含选自表1中列出的LCVR氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。
在一些实施方案中，抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）包含HCVR和LCVR氨基酸序列对（HCVR/LCVR），其包含与表1中列出的LCVR氨基酸序列中的任一者配对的表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任一者。在一些实施方案中，如本文所描述的抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）包含表1中列出的示例性抗hCDH15抗体中的任一者内所含有的HCVR/LCVR氨基酸序列对。在某些实施方案中，HCVR/LCVR氨基酸序列对选自由以下组成的组：SEQ ID NO: 2和10、22和30、42和50、60和50、70和50、80和50、90和98、108和115、125和133、145和153、165和173、185和193、202和210、220和50、230和50、240和50、250和50、259和267、279和287、299和307、319和327、339和347、358和366、378和50、386和394、404和412、420和428、436和444、452和460、468和476、484和492、500和508、516和524、532和540、548和556、564和572、580和588、596和604、612和620、628和636、644和652、660和668、676和684、692和700、708和716、724和732、740和684、748和756以及764和772。
核酸分子
本文还描述了如本文所描述的编码抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段）的核酸分子（例如，多核苷酸）。
本文还描述了编码表1中列出的HCDR1氨基酸序列中的任一者的核酸分子；在一些实施方案中，该核酸分子包含选自表1中列出的HCDR1核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一性的其基本上相似的序列。
本文还描述了编码表1中列出的HCDR2氨基酸序列中的任一者的核酸分子；在一些实施方案中，该核酸分子包含选自表1中列出的HCDR2核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一性的其基本上相似的序列。
本文还描述了编码表1中列出的HCDR3氨基酸序列中的任一者的核酸分子；在一些实施方案中，该核酸分子包含选自表1中列出的HCDR3核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一性的其基本上相似的序列。
本文还描述了编码表1中列出的LCDR1氨基酸序列中的任一者的核酸分子；在一些实施方案中，该核酸分子包含选自表1中列出的LCDR1核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一性的其基本上相似的序列。
本文还描述了编码表1中列出的LCDR2氨基酸序列中的任一者的核酸分子；在一些实施方案中，该核酸分子包含选自表1中列出的LCDR2核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一性的其基本上相似的序列。
本文还描述了编码表1中列出的LCDR3氨基酸序列中的任一者的核酸分子；在一些实施方案中，该核酸分子包含选自表1中列出的LCDR3核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一性的其基本上相似的序列。本文还描述了编码HCVR和LCVR两者的核酸分子，其中HCVR包含表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，并且其中LCVR包含表1中列出的LCVR氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸分子包含选自表1中列出的HCVR核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一性的其基本上相似的序列，以及选自表1中列出的LCVR核酸序列中的任一者的多核苷酸序列，或与其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一性的其基本上相似的序列。在一些实施方案中，核酸分子编码HCVR和LCVR，其中HCVR和LCVR均源自表1中列出的相同抗hCDH15抗体。
本文还描述了能够表达包含抗hCDH15抗体的重链和/或轻链可变区的多肽的重组表达载体。在一些实施方案中，重组表达载体包含上述核酸分子中的任一者，即编码如表1中所示的HCVR、LCVR和/或CDR序列中的任一者的核酸分子。还描述了已将此类载体引入其中的宿主细胞，以及通过在允许产生抗体或抗体片段的条件下培养宿主细胞并回收如此产生的抗体或抗体片段来产生抗体或其部分的方法。
多特异性抗原结合分子
如本文所描述的抗hCDH15抗体及其抗原结合片段可以是单特异性、双特异性或多特异性的。多特异性抗体可以对一种靶多肽的不同表位具有特异性，或者可以含有对多于一种靶多肽具有特异性的抗原结合结构域。参见例如，Tutt等人, 1991, J. Immunol.147:60-69；Kufer等人, 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244。如本文所描述的抗hCDH15抗体及其抗原结合片段可以与另一种功能分子（例如，另一种肽或蛋白质）连接或共表达。例如，抗体或其片段可以功能性地连接（例如，通过化学偶联、遗传融合、非共价缔合或其他方式）至一个或多个其他分子实体（诸如另一个抗体或抗体片段），以产生具有第二或另外的结合特异性的双特异性或多特异性抗体。
本文使用的表述“抗hCDH15抗体”意在包括单特异性抗hCDH15抗体以及包含CDH15结合臂和“靶标”结合臂的双特异性抗体。因此，本文描述了双特异性抗体，其中免疫球蛋白的一个臂结合人CDH15，并且免疫球蛋白的另一个臂对另一个靶分子具有特异性。CDH15结合臂可以包含如本文表1所示的HCVR/LCVR或CDR氨基酸序列中的任一者。
在某些实施方案中，CDH15结合臂与人CDH15结合并诱导CDH15和与其结合的抗体的内化。在某些实施方案中，CDH15结合臂与人CDH15弱结合并诱导CDH15和与其结合的抗体的内化。在某些实施方案中，CDH15结合臂与人CDH15结合并阻断CDH15的活性。
在某些实施方案中，双特异性抗原结合分子是双特异性抗体。双特异性抗体的每个抗原结合结构域包含重链可变结构域（HCVR）和轻链可变结构域（LCVR）。在包含第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域的双特异性抗原结合分子（例如，双特异性抗体）的上下文中，第一抗原结合结构域的CDR可以用前缀“A1”指定，并且第二抗原结合结构域的CDR可以用前缀“A2”指定。因此，第一抗原结合结构域的CDR在本文中可称为A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3；并且第二抗原结合结构域的CDR在本文中可称为A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3。
第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域可以彼此直接或间接连接以形成如本文所描述的双特异性抗原结合分子。可替代地，第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域可以各自连接至分开的多聚化结构域。一个多聚化结构域与另一个多聚化结构域的缔合促进两个抗原结合结构域之间的缔合，从而形成双特异性抗原结合分子。“多聚化结构域”是具有与相同或相似结构或构造的第二多聚化结构域缔合的能力的任何大分子、蛋白质、多肽、肽或氨基酸。例如，多聚化结构域可以是包含免疫球蛋白CH3结构域的多肽。多聚化组分的非限制性实例是免疫球蛋白的Fc部分（包含CH2-CH3结构域），例如选自同种型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4以及每个同种型组内的任何同种异型的IgG的Fc结构域。
如本文所描述的双特异性抗原结合分子将通常包含两个多聚化结构域，例如两个Fc结构域，其各自单独地是分开的抗体重链的部分。第一多聚化结构域和第二多聚化结构域可以具有相同的IgG同种型，诸如例如IgG1/IgG1、IgG2/IgG2、IgG4/IgG4。可替代地，第一多聚化结构域和第二多聚化结构域可以具有不同的IgG同种型，诸如例如IgG1/IgG2、IgG1/IgG4、IgG2/IgG4等。
在某些实施方案中，多聚化结构域是Fc片段或长度为1至约200个氨基酸的氨基酸序列，其含有至少一个半胱氨酸残基。在其他实施方案中，多聚化结构域是半胱氨酸残基或含半胱氨酸的短肽。其他多聚化结构域包括包含亮氨酸拉链、螺旋环基序或卷曲螺旋基序或由其组成的肽或多肽。
任何双特异性抗体形式或技术可用于制备如本文所描述的双特异性抗原结合分子。例如，具有第一抗原结合特异性的抗体或其片段可以功能性地连接（例如，通过化学偶联、遗传融合、非共价结合或其他方式）至一个或多个其他分子实体，诸如具有第二抗原结合特异性的另一个抗体或抗体片段，以产生双特异性抗原结合分子。双特异性形式的具体实例包括但不限于例如基于scFv的或双抗体双特异性形式、IgG-scFv融合体、双可变结构域（DVD）-Ig、四源杂交瘤、杵臼结构（knobs-into-holes）、共同轻链（例如，具有杵臼结构的共同轻链等）、CrossMab、CrossFab、（SEED）体、亮氨酸拉链、Duobody、IgG1/IgG2、双重作用Fab（DAF）-IgG和Mab2双特异性形式（关于前述形式的综述，参见例如，Klein等人 2012,mAbs 4:6, 1-11，以及其中引用的参考文献）。
在如本文所描述的双特异性抗原结合分子的上下文中，与野生型、天然存在形式的Fc结构域相比，多聚化结构域（例如，Fc结构域）可包含一个或多个氨基酸改变（例如，插入、缺失或取代）。例如，双特异性抗原结合分子可以在Fc结构域中包含一个或多个修饰，其导致经修饰的Fc结构域在Fc和FcRn之间具有经修饰的结合相互作用（例如，增强或减弱）。在一个实施方案中，双特异性抗原结合分子在CH2或CH3区中包含修饰，其中该修饰在酸性环境中（例如，在pH范围为约5.5至约6.0的胞内体中）增加Fc结构域与FcRn的亲和力。此类Fc修饰的非限制性实例包括例如位置250（例如，E或Q）；250和428（例如，L或F）；252（例如，L/Y/F/W或T）、254（例如，S或T）和256（例如，S/R/Q/E/D或T）处的修饰；或位置428和/或433（例如，L/R/S/P/Q或K）和/或434（例如，H/F或Y）处的修饰；或位置250和/或428处的修饰；或位置307或308（例如，308F、V308F）和434处的修饰。在一个实施方案中，修饰包含428L（例如，M428L）和434S（例如，N434S）修饰；428L、259I（例如，V259I）和308F（例如，V308F）修饰；433K（例如，H433K）和434（例如，434Y）修饰；252、254和256（例如，252Y、254T和256E）修饰；250Q和428L修饰（例如，T250Q和M428L）；以及307和/或308修饰（例如，308F或308P）。
本文还描述了包含第一CH3结构域和第二Ig CH3结构域的双特异性抗原结合分子，其中第一和第二Ig CH3结构域彼此相差至少一个氨基酸，并且其中与缺乏氨基酸差异的双特异性抗体相比，至少一个氨基酸差异减少了双特异性抗体与蛋白A的结合。在一个实施方案中，第一Ig CH3结构域结合蛋白A并且第二Ig CH3结构域含有减少或消除蛋白A结合的突变，诸如H95R修饰（按照IMGT外显子编号；按照EU编号为H435R）。第二CH3可以进一步包含Y96F修饰（按照IMGT；按照EU为Y436F）。参见例如，美国专利第8,586,713号。可以存在于第二CH3内的另外的修饰包括：在IgG1抗体的情况下，D16E、L18M、N44S、K52N、V57M和V82I（按照IMGT；按照EU为D356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I）；在IgG2抗体的情况下，N44S、K52N和V82I（IMGT；按照EU为N384S、K392N和V422I）；以及在IgG4抗体的情况下，Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q和V82I（按照IMGT；按照EU为Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q和V422I）。
在某些实施方案中，Fc结构域可以是嵌合的，其组合源自多于一种免疫球蛋白同种型的Fc序列。例如，嵌合Fc结构域可以包含源自人IgG1、人IgG2或人IgG4 CH2区的CH2序列的部分或全部，以及源自人IgG1、人IgG2或人IgG4的CH3序列的部分或全部。嵌合Fc结构域也可以含有嵌合铰链区。例如，嵌合铰链可以包含源自人IgG1、人IgG2或人IgG4铰链区的“上铰链”序列，其与源自人IgG1、人IgG2或人IgG4铰链区的“下铰链”序列组合。可以包括在本文所示的任何抗原结合分子中的嵌合Fc结构域的特定实例从N末端到C末端包含：[IgG4CH1] - [IgG4上铰链] - [IgG2下铰链] - [IgG4 CH2] - [IgG4 CH3]。可以包括在本文所示的任何抗原结合分子中的嵌合Fc结构域的另一个实例从N末端到C末端包含：[IgG1 CH1]- [IgG1上铰链] - [IgG2下铰链] - [IgG4 CH2] - [IgG1 CH3]。可以包括在如本文所描述的任何抗原结合分子中的嵌合Fc结构域的这些和其他实例描述于2014年8月28日公开的美国公开案2014/0243504中，该公开整体并入本文。具有这些一般结构安排的嵌合Fc结构域及其变体可以具有改变的Fc受体结合，其进而影响Fc效应子功能。
在某些实施方案中，如本文所描述的抗体重链包含重链恒定（CH）区，该重链恒定区包含与SEQ ID NO: 790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、800、801或802中的任一者至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链恒定区（CH）区包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO: 790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、800、801或802。
在一些实施方案中，如本文所描述的抗体重链包含Fc结构域，该Fc结构域包含与SEQ ID NO: 803、804、805、806、807、808、809、810、811、812、813或814中的任一者至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fc结构域包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO: 803、804、805、806、807、808、809、810、811、812、813或814。
种系突变
与衍生出抗体的对应种系序列相比，本文公开的抗hCDH15抗体可以在重链可变结构域的框架和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失。
如本文所公开的抗hCDH15抗体及其抗原结合片段可以源自本文公开的氨基酸序列中的任一者，其中一个或多个框架和/或CDR区内的一个或多个氨基酸被突变为衍生出抗体的种系序列的对应残基，或突变为另一个人种系序列的对应残基，或突变为对应种系残基的保守氨基酸取代（此类序列变化在本文中统称为“种系突变”），并且与CDH15抗原具有弱的或不可检测的结合。识别CDH15的几种此类示例性抗体描述于本文表1中。
此外，如本文所公开的抗hCDH15抗体及其抗原结合片段可以在框架和/或CDR区内含有两个或更多个种系突变的任何组合，例如，其中某些单独残基被突变为特定种系序列的对应残基，而与原始种系序列不同的某些其他残基得以维持或被突变为不同种系序列的对应残基。一旦获得含有一个或多个种系突变的抗体或抗原结合片段，就可以测试其一种或多种所需性质，诸如改善的结合特异性、弱或降低的结合亲和力、改善或增强的药代动力学性质、降低的免疫原性等。在一些实施方案中，以这种一般方式获得如本文所描述的抗体或抗原结合片段。
本文还描述了抗hCDH15抗体及其抗原结合片段，其包含本文公开的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者的变体，这些变体具有一个或多个保守取代。例如，如本文所描述的抗hCDH15抗体或其抗原结合片段可包含相对于本文表1所示的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者具有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等的保守氨基酸取代的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列。与衍生出单独抗原结合结构域的对应种系序列相比，如本文所描述的抗体及其抗原结合片段可以在重链和轻链可变结构域的框架和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失，同时维持或改善与例如CDH15的所需的弱至不可检测的结合。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被含有具有相似的化学性质（例如，电荷或疏水性）的侧链（R基团）的另一个氨基酸残基取代的氨基酸取代。通常，保守氨基酸取代将不会显著改变蛋白质的功能性质，即在抗hCDH15结合分子的情况下，氨基酸取代维持或改善所需的弱至不可检测的结合亲和力。含有具有相似化学性质的侧链的氨基酸组的实例包括：（1）脂族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；（2）脂族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；（3）含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；（4）芳族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；（5）碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；（6）酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，以及（7）含硫侧链，即半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守性氨基酸置换组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸以及天冬酰胺-谷氨酰胺。可替代地，保守性替换是在以下文献中公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何变化：Gonnet等人 (1992) Science 256: 1443-1445。“适度保守”替换是在PAM250对数似然矩阵中具有非负值的任何变化。
本文还描述了抗hCDH15抗体及其抗原结合片段，其包含具有与本文公开的HCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者基本上相同的HCVR和/或CDR氨基酸序列的抗原结合结构域，同时维持或改善对CDH15抗原的所需弱亲和力。当提及氨基酸序列时，术语“基本同一性”或“基本上相同”意指两个氨基酸序列在最佳比对时，诸如通过程序GAP或BESTFIT使用默认空位权重进行最佳比对时，共享至少95%序列同一性，甚至更优选至少98%或99%序列同一性。优选地，不相同的残基位置的差异在于保守氨基酸取代。在两个或更多个氨基酸序列的保守取代彼此不同的情况下，可以向上调整序列同一性百分比或相似性程度以校正取代的保守性质。用于进行该调整的手段是本领域的技术人员众所周知的。参见例如，Pearson(1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331。
通常使用序列分析软件来测量多肽的序列相似性，该序列相似性也称为序列同一性。蛋白质分析软件使用关于指定到各种取代、缺失和其他修饰（包括保守氨基酸取代）的相似性度量来匹配相似序列。例如，GCG软件含有Gap和Bestfit等程序，这些程序可以以默认参数使用，以确定紧密相关的多肽（诸如来自不同物种的生物体的同源多肽）之间，或野生型蛋白及其突变型蛋白之间的序列同源性或序列同一性。参见例如，GCG 6.1版。还可以使用FASTA（GCG 6.1版中的程序）使用默认或推荐参数对多肽序列进行比较。FASTA（例如，FASTA2和FASTA3）提供查询与搜索序列之间的最佳重叠区域的比对和序列一致性百分比（Pearson (2000)同上）。当将如本文所描述的序列与包含来自不同生物体的大量序列的数据库进行比较时，另一种优选算法是使用默认参数的计算机程序BLAST，尤其是BLASTP或TBLASTN。参见例如，Altschul等人 (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410和Altschul等人(1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-402。
一旦获得含有一个或多个种系突变的抗原结合结构域，就利用一种或多种体外测定来测试其结合亲和力降低。通常，通常通过测试对抗原的高（即，强）结合亲和力来根据其目的筛选识别特定抗原的抗体。
通过如本文描述的方法进一步修饰如本文所描述的抗体，可以实现意想不到的益处，例如改善的药代动力学性质和对患者的低毒性。
抗体的结合性质
在抗体、免疫球蛋白、抗体结合片段或含Fc蛋白与例如预定抗原（诸如细胞表面蛋白或其片段）结合的上下文中，术语“结合”通常是指最少两个实体或分子结构之间的相互作用或缔合，诸如抗体-抗原相互作用。
例如，当通过例如表面等离子体共振（SPR）技术在BIAcore 3000仪器中使用抗原作为配体，抗体、Ig、抗体结合片段或含Fc蛋白作为分析物（或抗配体）测定时，结合亲和力通常对应的KD值为约10-7M或更小，诸如约10-8M或更小，诸如约10-9M或更小。也常规使用基于细胞的结合策略，诸如荧光活化细胞分选（FACS）结合测定，并且提供关于细胞表面表达的蛋白质的结合表征数据。FACS数据与其他方法（诸如放射性配体竞争结合和SPR）很好地相关（Benedict, CA, J Immunol Methods. 1997, 201(2):223-31；Geuijen, CA等人, J Immunol Methods. 2005, 302(1-2):68-77）。
因此，如本文所描述的抗hCDH15抗体及其抗原结合片段与预定的抗原或细胞表面分子（受体）结合，其亲和力对应于KD值为其结合至非特异性抗原（例如，BSA、酪蛋白）的亲和力的至多十分之一。对应于KD值等于或小于非特异性抗原十分之一的抗体的亲和力可以被认为是不可检测的结合，然而这样的抗体可以与用于产生如本文所描述的双特异性抗体的第二抗原结合臂配对。
术语“KD”或“KD”（以摩尔（M）为单位）是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数，或抗体或抗体结合片段与抗原结合的解离平衡常数。KD与结合亲和力之间存在反比关系，因此KD值越小，亲和力越高，即越强。因此，术语“较高亲和力”或“较强亲和力”涉及较高的形成相互作用的能力，因此KD值较小，相反，术语“较低亲和力”或“较弱亲和力”涉及较低的形成相互作用的能力，因此KD值更大。在一些情况下，与分子（例如，抗体）与另一个相互作用配偶体分子（例如，抗原Y）的结合亲和力相比，特定分子（例如，抗体）与其相互作用配偶体分子（例如，抗原X）的更高的结合亲和力（或KD）可以表示为通过将较大的KD值（较低或较弱的亲和力）除以较小的KD（较高或较强的亲和力）而确定的结合比率，例如表示为结合亲和力的5倍或10倍，视情况而定。
术语“kd”（s-1或1/s）是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率常数，或抗体或抗体结合片段的解离速率常数。所述值也称为koff值。
术语“ka”（M-1×s-1或1/M）是指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率常数，或抗体或抗体结合片段的缔合速率常数。
术语“KA”（M-1或1/M）是指特定抗体-抗原相互作用的缔合平衡常数，或抗体或抗体结合片段的缔合平衡常数。结合平衡常数通过将ka除以kd来获得。
术语“EC50”或“EC50”是指半数最大有效浓度，其包括在指定暴露时间后诱导在基线和最大值之间的反应一半的抗体浓度。EC50基本上代表了观察到最大作用的50%时的抗体浓度。在某些实施方案中，EC50值等于如通过例如FACS结合测定或雄激素受体活化荧光素酶测定所确定的给出与表达CDH15的细胞的半数最大结合的如本文所描述的抗体的浓度。因此，随着EC50或半数最大效应浓度值的增加，观察到结合减少或减弱。
在一个实施方案中，降低的结合可以定义为增加的EC50抗体浓度，其可导致与半数最大量的靶细胞结合。
本文还描述了抗原结合蛋白（例如，其抗体或抗原结合片段），其结合具有个位数nM或三位数pM KD的表达CDH15的细胞，如通过表面等离子体共振或等效分析所测量的。本文还描述了抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段），其结合具有大于100 nM的EC50的表达CDH15的细胞，如通过FACS分析所测量的。本文还描述了抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段），其在与CDH15结合时结合并内化到表达CDH15的细胞中。本文还描述了抗原结合蛋白（例如，的抗体或抗原结合片段），其与CDH15结合并阻断CDH15的活性。
序列变体
与衍生出单独抗原结合结构域的对应种系序列相比，如本文所描述的抗hCACNG1抗体和抗原结合片段可以在重链和轻链可变结构域的框架和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失。通过将本文公开的氨基酸序列与可从例如公共抗体序列数据库获得的种系序列进行比较，可以容易地确定此类突变。如本文所描述的抗原结合分子可包含源自本文公开的示例性氨基酸序列中的任一者的抗原结合结构域，其中一个或多个框架和/或CDR区内的一个或多个氨基酸被突变为衍生出抗体的种系序列的对应残基，或突变为另一个人种系序列的对应残基，或突变为对应种系残基的保守氨基酸取代（此类序列变化在本文中统称为“种系突变”）。本领域的普通技术人员从本文公开的重链和轻链可变区序列开始，能够容易地生产包含一个或多个单独种系突变或其组合的多种抗体和抗原结合片段。在某些实施方案中，VH和/或VL结构域内的所有框架和/或CDR残基被突变回存在于最初衍生出抗原结合结构域的原始种系序列中的残基。在其他实施方案中，仅某些残基被突变回原始种系序列，例如仅见于FR1的前8个氨基酸内或FR4的后8个氨基酸内的突变残基，或仅见于CDR1、CDR2或CDR3内的突变残基。在其他实施方案中，框架和/或CDR残基中的一者或多者被突变为不同的种系序列（即，与最初衍生出抗原结合结构域的种系序列不同的种系序列）的对应残基。此外，抗原结合结构域可以在框架和/或CDR区内含有两个或更多个种系突变的任何组合，例如其中某些单独残基被突变为特定种系序列的对应残基，而与原始种系序列不同的某些其他残基得以维持或被突变为不同种系序列的对应残基。一旦获得含有一个或多个种系突变的抗原结合结构域，就可以容易地测试其一种或多种所需性质，诸如改善的结合特异性、增加的结合亲和力、改善或增强的拮抗性或激动性生物学性质（视具体情况而定）、降低的免疫原性等。本文描述了抗原结合分子，其包含以这种一般方式获得的一个或多个抗原结合结构域。
本文还描述了抗原结合分子，其中一个或两个抗原结合结构域包含本文公开的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者的变体，这些变体具有一个或多个保守取代。例如，如本文所描述的抗原结合分子可包含具有HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的抗原结合结构域，这些HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列相对于本文公开的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者具有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等的保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被含有具有相似的化学性质（例如，电荷或疏水性）的侧链（R基团）的另一个氨基酸残基取代的氨基酸取代。通常，保守性氨基酸置换将不会显著改变蛋白质的功能性质。含有具有相似化学性质的侧链的氨基酸组的实例包括：（1）脂族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；（2）脂族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；（3）含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；（4）芳族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；（5）碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；（6）酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，以及（7）含硫侧链，即半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守性氨基酸置换组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸以及天冬酰胺-谷氨酰胺。可替代地，保守替换是在以下文献中公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何变化：Gonnet等人 (1992) Science 256: 1443-1445，该文献通过引用并入本文。“适度保守”替换是在PAM250对数似然矩阵中具有非负值的任何变化。
如本文所描述的抗原结合分子可以包含具有与本文公开的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者基本上相同的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的抗原结合结构域。当提及氨基酸序列时，术语“基本同一性”或“基本上相同”意指两个氨基酸序列在最佳比对时，诸如通过程序GAP或BESTFIT使用默认空位权重进行最佳比对时，共享至少95%序列同一性，甚至更优选至少98%或99%序列同一性。优选地，不相同的残基位置的差异在于保守氨基酸取代。在两个或更多个氨基酸序列的保守取代彼此不同的情况下，可以向上调整序列同一性百分比或相似性程度以校正取代的保守性质。用于进行该调整的手段是本领域的技术人员众所周知的。参见例如，Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331，该文献通过引用并入本文。
通常使用序列分析软件来测量多肽的序列相似性，该序列相似性也称为序列同一性。蛋白质分析软件使用关于指定到各种取代、缺失和其他修饰（包括保守氨基酸取代）的相似性度量来匹配相似序列。例如，GCG软件含有Gap和Bestfit等程序，这些程序可以以默认参数使用，以确定紧密相关的多肽（诸如来自不同物种的生物体的同源多肽）之间，或野生型蛋白及其突变型蛋白之间的序列同源性或序列同一性。参见例如，GCG 6.1版。还可以使用FASTA（GCG 6.1版中的程序）使用默认或推荐参数对多肽序列进行比较。FASTA（例如，FASTA2和FASTA3）提供查询与搜索序列之间的最佳重叠区域的比对和序列一致性百分比（Pearson (2000)同上）。当将序列与包含来自不同生物体的大量序列的数据库进行比较时，另一种优选算法是使用默认参数的计算机程序BLAST，尤其是BLASTP或TBLASTN。参见例如，Altschul等人 (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410和Altschul等人 (1997) NucleicAcids Res. 25:3389-402，每一篇通过引用并入本文。
pH依赖性结合
本文还描述了具有pH依赖性结合特性的抗hCDH15抗体及其抗原结合片段。例如，与中性pH相比，如本文所描述的抗hCDH15在酸性pH下可表现出与CDH15的结合减少。可替代地，与中性pH相比，如本文所描述的抗hCDH15抗体在酸性pH下可表现出与CDH15的结合增强。表述“酸性pH”包括小于约6.2，例如约6.0、5.95、5,9、5.85、5.8、5.75、5.7、5.65、5.6、5.55、5.5、5.45、5.4、5.35、5.3、5.25、5.2、5.15、5.1、5.05、5.0或更小的pH值。表述“中性pH”意指约7.0至约7.4的pH。表述“中性pH”包括约7.0、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.3、7.35和7.4的pH值。
在某些情况下，“与中性pH相比，在酸性pH下...结合减少”以在酸性pH下抗体与其抗原结合的KD与在中性pH下抗体与其抗原结合的KD值的比率来表述（反之亦然）。例如，如果抗体或其抗原结合片段表现出约3.0或更大的酸性/中性KD比率，则出于本文描述的目的，抗体或其抗原结合片段可被视为“与中性pH相比，在酸性pH下表现出与CACNG1的结合减少”。在某些实施方案中，如本文所描述的抗体或抗原结合片段的酸性/中性KD比率可以为约3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5、13.0、13.5、14.0、14.5、15.0、20.0、25.0、30.0、40.0、50.0、60.0、70.0、100.0或更大。
可以例如通过就与中性pH相比在酸性pH与特定抗原结合减少（或增强）而筛选抗体群体，来获得具有pH依赖性结合特性的抗体。另外，在氨基酸水平修饰抗原结合结构域可产生具有pH依赖性特性的抗体。例如，通过用组氨酸残基取代抗原结合结构域的一个或多个氨基酸（例如，在CDR内部），可以获得相对于中性pH在酸性pH下抗原结合减少的抗体。
包含Fc变体的抗体
在一些实施方案中，提供了抗hCDH15抗体及其抗原结合片段（包括多特异性抗原结合分子和包含抗hCDH15抗体或其抗原结合片段的多结构域治疗性蛋白），其包含Fc结构域，该Fc结构域包含一个或多个突变，这些突变例如与中性pH相比在酸性pH下增强或减少抗体与FcRn受体的结合。例如，如本文所描述的抗体可以在Fc结构域的CH2或CH3区中包含突变，其中该修饰在酸性环境中（例如，在pH范围为约5.5至约6.0的胞内体中）增加Fc结构域与FcRn的亲和力。当向动物施用时，此类突变可以导致抗体的血清半衰期增加。此类Fc修饰的非限制性实例包括例如位置250（例如，E或Q）；250和428（例如，L或F）；252（例如，L/Y/F/W或T）、254（例如，S或T）和256（例如，S/R/Q/E/D或T）处的修饰；或位置428和/或433（例如，H/L/R/S/P/Q或K）和/或434（例如，H/F或Y）处的修饰；或位置250和/或428处的修饰；或位置307或308（例如，308F、V308F）和434处的修饰。在一个实施方案中，修饰包含428L（例如，M428L）和434S（例如，N434S）修饰；428L、259I（例如，V259I）和308F（例如，V308F）修饰；433K（例如，H433K）和434（例如，434Y）修饰；252、254和256（例如，252Y、254T和256E）修饰；250Q和428L修饰（例如，T250Q和M428L）；以及307和/或308修饰（例如，308F或308P）。
例如，如本文所描述的抗hCDH15抗体和抗原结合片段可以包含Fc结构域，该Fc结构域包含选自由以下组成的组的一个或多个突变对或突变组：250Q和248L（例如，T250Q和M248L）；252Y、254T和256E（例如，M252Y、S254T和T256E）；428L和434S（例如，M428L和N434S）；以及433K和434F（例如，H433K和N434F）。前述Fc结构域突变的所有可能组合以及本文公开的抗体可变结构域内的其他突变都涵盖在本文的描述内。
抗体和双特异性抗原结合分子的生物学特性
本文还描述了一种抗体及其抗原结合片段，其以高、中等或低亲和力结合人CDH15，这取决于治疗背景和所需的特定靶向性质。例如，在双特异性抗原结合分子的上下文中，其中一个臂结合CDH15，另一个臂结合靶抗原（例如，肿瘤相关抗原），可能令人期望的是，靶抗原结合臂以高亲和力结合靶抗原，而抗hCDH15臂仅以中等或低亲和力结合CDH15。以这种方式，可以实现抗原结合分子对表达靶抗原的细胞的优先靶向，同时避免一般/非靶向CDH15结合以及随之而来的与之相关的不良副作用。
本文还描述了以弱（即，低）亲和力或甚至检测不到的亲和力结合人CDH15的抗体、其抗原结合片段和双特异性抗体。在一些实施方案中，如本文所描述的抗体及其抗原结合片段以大于约100 nM的KD结合人CDH15（例如，在37°C下），如通过表面等离子体共振所测量的。在一些实施方案中，如本文所描述的抗体或抗原结合片段以大于约110 nM、至少120nM、大于约130 nM、大于约140 nM、大于约150 nM、至少160 nM、大于约170 nM、大于约180nM、大于约190 nM、大于约200 nM、大于约250 nM、大于约300 nM、大于约400 nM、大于约500nM、大于约600 nM、大于约700 nM、大于约800 nM、大于约900 nM或大于约1 µM的KD，或以检测不到的亲和力结合CDH15，如通过表面等离子体共振（例如，mAb捕获或抗原捕获形式）或基本上类似的测定所测量的。
表位作图和相关技术
如本文所描述的抗hCDH15抗体及其抗原结合片段所结合的CDH15上的表位可以由CDH15蛋白的3个或更多个（例如，3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个）氨基酸的单个邻接序列组成。可替代地，表位可以由CDH15的多个非邻接氨基酸（或氨基酸序列）组成。术语“表位”是指与抗体分子的可变区中的特定抗原结合位点（称为互补位）发生相互作用的抗原决定簇。单个抗原可以具有超过一个表位。因此，不同抗体可以与抗原上的不同区域结合并且可以具有不同的生物效应。表位可以是构象的或线性的。构象表位由来自线性多肽链的不同区段的氨基酸在空间上并列而产生。线性表位由多肽链中的邻近氨基酸残基来产生。在某些情况下，表位可以包括抗原上的糖、磷酰基或磺酰基部分。
本领域普通技术人员已知的各种技术可用于确定抗体的抗原结合结构域是否在多肽或蛋白质内“与一个或多个氨基酸相互作用”。技术的实例包括例如常规交叉阻断测定法（诸如Antibodies, Harlow和Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb.,NY)所描述）、丙氨酸扫描突变分析、肽印迹分析（Reineke, 2004, Methods Mol Biol 248:443-463）和肽切割分析。此外，可以采用抗原的表位切除、表位提取和化学修饰等方法（Tomer, 2000, Protein Science 9:487-496）。可以用于鉴定与抗体的抗原结合结构域相互作用的多肽内的氨基酸的另一种方法是通过质谱法检测的氢/氘交换。一般来说，氢/氘交换法涉及目的蛋白质的氘标记，接着是抗体与氘标记的蛋白质的结合。然后，将蛋白质/抗体复合物转移至水中，以允许氢-氘交换在除抗体保护的残基（仍然是氘标记的）之外的所有残基处发生。在抗体解离后，对靶蛋白进行蛋白酶切割和质谱分析，从而揭示氘标记的残基，这些残基对应于与抗体相互作用的特定氨基酸。参见例如，Ehring (1999)Analytical Biochemistry 267(2):252-259；Engen和Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A。抗原/抗体复合物的X射线晶体学也可用于表位作图目的。
本文还描述了与本文所描述的任何特定示例性抗体（例如，包含如本文表1中所示的氨基酸序列中的任一者的抗体）结合相同表位的抗hCDH15抗体。同样地，本文还描述了与本文所描述的任何特定示例性抗体（例如，包含如本文表1中所示的氨基酸序列中的任一者的抗体）竞争结合CDH15的抗hCDH15抗体。
通过使用本领域已知的常规方法，可以容易地确定特定抗原结合分子（例如，抗体）或其抗原结合结构域是否与如本文所描述的参考抗原结合分子结合相同的表位，或与如本文所描述的参考抗原结合分子竞争结合。例如，为了确定测试抗体是否与如本文所描述的参考双特异性抗原结合分子结合CDH15上的相同表位，首先允许参考双特异性分子与CDH15蛋白结合。接下来，评估测试抗体与CDH15分子结合的能力。如果测试抗体在与参考双特异性抗原结合分子饱和结合后能够与CDH15结合，则可以得出以下结论：测试抗体与参考双特异性抗原结合分子结合CDH15的不同表位。在另一方面，如果测试抗体在与参考双特异性抗原结合分子饱和结合后不能与CDH15分子结合，则测试抗体可以结合CDH15上与如本文所描述的参考双特异性抗原结合分子所结合的表位相同的表位。然后可以进行另外的常规实验（例如，肽突变和结合分析），以确认所观察到的测试抗体结合的缺乏事实上是否是由于与参考双特异性抗原结合分子结合至相同的表位，或者空间阻断（或另一个现象）是否是造成所观察的结合缺乏的原因。可以使用ELISA、RIA、Biacore、流式细胞术或者本领域可用的任何其他定量或定性抗体结合测定法来进行这类实验。根据本文所描述的一些实施方案，如果例如过量1倍、5倍、10倍、20倍或100倍的一种抗原结合蛋白将另一种抗原结合蛋白的结合抑制至少50%，但优选75%、90%或甚至99%（如通过竞争结合测定所测量的），则两种抗原结合蛋白结合至相同的（或重叠的）表位（参见例如，Junghans等人，Junghans等人,Cancer Res. 1990:50:1495-1502）。可替代地，如果抗原中减少或消除一种抗原结合蛋白的结合的基本上所有氨基酸突变减少或消除另一种抗原结合蛋白的结合，则认为两种抗原结合蛋白结合至相同的表位。如果只有减少或消除一种抗原结合蛋白的结合的氨基酸突变的子集减少或消除另一种抗原结合蛋白的结合，则认为两种抗原结合蛋白具有“重叠表位”。
为了确定抗体或其抗原结合结构域是否与参考抗原结合分子竞争结合，在两个方向上进行上述结合方法：在第一方向上，允许参考抗原结合分子在饱和条件下与CDH15蛋白结合，然后评估测试抗体与CDH15分子的结合。在第二方向上，允许测试抗体在饱和条件下与CDH15分子结合，然后评估参考抗原结合分子与CDH15分子的结合。如果在两个方向上只有第一（饱和）抗原结合分子能够与CDH15分子结合，则得出以下结论：测试抗体和参考抗原结合分子竞争结合CDH15。如本领域的普通技术人员所理解，与参考抗原结合分子的竞争结合的抗体可能未必与参考抗体结合至相同的表位，但是可能通过重叠或邻近表位的结合来在空间上阻断参考抗体的结合。
抗原结合结构域的制备和双特异性分子的构建
可以通过本领域已知的任何抗体产生技术制备对特定抗原具有特异性的抗原结合结构域。一旦获得对两种不同抗原（例如，CDH15和靶抗原）具有特异性的两种不同的抗原结合结构域，就可以将它们相对于彼此适当地排列，以使用常规方法产生如本文所描述的双特异性抗原结合分子。（可用于构建如本文所描述的双特异性抗原结合分子的示例性双特异性抗体形式的讨论在本文别处提供）。在某些实施方案中，如本文所描述的抗原结合分子的单独组分（例如，重链和轻链）中的一者或多者源自嵌合、人源化或完全人抗体。用于制备此类抗体的方法是本领域众所周知的。例如，可以使用VELOCIMMUNE™技术来制备如本文所描述的抗原结合分子的重链和/或轻链中的一者或多者。使用VELOCIMMUNE™技术（或任何其他人抗体生成技术），最初分离具有人可变区和小鼠恒定区的针对特定抗原（例如，CDH15）的高亲和力嵌合抗体。针对期望特性，包括亲和力、选择性、表位等表征并且选择抗体。用所需的人恒定区替换小鼠恒定区，以生成可掺入如本文所描述的抗原结合分子中的完全人重链和/或轻链。
基因工程化动物可用于制备人双特异性抗原结合分子。例如，可以使用不能重排和表达内源性小鼠免疫球蛋白轻链可变序列的经遗传修饰的小鼠，其中该小鼠仅表达一个或两个由人免疫球蛋白序列编码的人轻链可变结构域，这些人免疫球蛋白序列可操作地连接至内源性小鼠κ基因座处的小鼠κ恒定基因。此类经遗传修饰的小鼠可用于分离重链和轻链可变区以产生完全人双特异性抗原结合分子。因此，完全人双特异性抗原结合分子包含与相同轻链缔合的两条不同重链。（参见例如，US 2011/0195454）。完全人是指抗体或其抗原结合片段或免疫球蛋白结构域，其包含由源自人序列的DNA编码的氨基酸序列，该人序列在抗体或其抗原结合片段或免疫球蛋白结构域的每个多肽的全长上。在一些情况下，完全人序列源自人的内源性蛋白质。在其他情况下，完全人蛋白质或蛋白质序列包含嵌合序列，其中每个组分序列都源自人序列。虽然不受任何一种理论的束缚，但例如与任何野生型人免疫球蛋白区域或结构域相比，嵌合蛋白或嵌合序列通常被设计成最大限度地减少在组分序列的连接处产生免疫原性表位。
双特异性抗原结合分子可以用一条重链构建，该重链具有经修饰的Fc结构域，该经修饰的Fc结构域消除其与蛋白A的结合，从而实现产生异二聚体蛋白的纯化方法。参见例如，美国专利第8,586,713号。因此，双特异性抗原结合分子包含第一CH3结构域和第二IgCH3结构域，其中第一和第二Ig CH3结构域彼此相差至少一个氨基酸，并且其中与缺乏氨基酸差异的双特异性抗体相比，至少一个氨基酸差异减少了双特异性抗体与蛋白A的结合。在一个实施方案中，第一Ig CH3结构域结合蛋白A并且第二Ig CH3结构域含有减少或消除蛋白A结合的突变/修饰，诸如H95R修饰（按照IMGT外显子编号；按照EU编号为H435R）。第二CH3可以进一步包含Y96F修饰（按照IMGT；按照EU为Y436F）。
生物等效物
本文还描述了具有与本文公开的示例性分子的氨基酸序列不同、但保留结合CDH15的能力的氨基酸序列的抗原结合分子。当与亲本序列相比时，此类变体分子可以包含一个或多个氨基酸添加、缺失或取代，但是表现出与所描述的双特异性抗原结合分子的生物学活性基本上相当的生物学活性。
还描述了与本文所示的示例性抗原结合分子中的任一者生物等效的抗原结合分子。如果例如两种抗原结合蛋白或抗体是当在类似实验条件下以单次剂量或多次剂量施用相同摩尔剂量时，吸收速率和程度不显示出显著差异的药物等效物或药物替代物，则将它们视为生物等效的。如果一些抗原结合蛋白在吸收程度上是等效的，但是在吸收速率上不是等效的，则它们将被视为等效物或药物替代物，但是由于吸收速率的这种差异是有意的并且反映在标记中，所以可以被视为生物等效物，这些抗体对于例如在长期使用中达到有效体内药物浓度不是必需的，并且被认为对于所研究的特定药品不具有临床意义。
在一个实施方案中，如果两种抗原结合蛋白在安全性、纯度和效力方面不存在有临床意义的差异，则它们是生物等效物。
在一个实施方案中，如果与不进行参考产品和生物产品之间的切换的连续疗法相比，患者可以在没有预期的不良反应风险（包括免疫原性的临床上显著的变化、或减少的有效性）增加的情况下进行一次或多次此类切换，则两种抗原结合蛋白是生物等效的。
在一个实施方案中，如果两种抗原结合蛋白都通过针对一个或多个使用条件的一种或多种共同作用机制来发挥作用（其程度达到此类机制是已知），则两种抗原结合蛋白是生物等效的。
生物等效性可以通过体内和体外方法来展示。生物等效性度量包括，例如(a)在人或其他哺乳动物中的体内试验，其中测量了随时间推移的血液、血浆、血清或其他生物流体中的抗体或其代谢物的浓度；(b)与人体内生物利用率数据相关联并且可以合理地预测人体内生物利用率数据的体外试验；(c)在人或其他哺乳动物中的体内试验，其中测量了随时间推移的抗体（或其靶标）的适当急性药理作用；以及(d)建立抗原结合蛋白的安全性、功效、或者生物利用率或生物等效性的良好对照的临床试验。
可以通过例如进行残基或序列的各种取代或使生物学活性不需要的末端或内部残基或序列缺失来构建本文所示的示例性双特异性抗原结合分子的生物等效变体。例如，可以使并非生物学活性所必需的半胱氨酸残基缺失或用其他氨基酸替换，以防止在复性时形成不必要的或不正确的分子内二硫桥。在其他上下文中，生物等效抗原结合蛋白可以包括本文所示的示例性双特异性抗原结合分子的变体，这些变体包含修改该分子的糖基化特性的氨基酸变化（例如，消除或去除糖基化的突变）。
本文还描述了包含经修饰的糖基化模式的抗原结合蛋白（例如，抗体或其抗原结合片段），诸如抗hCDH15抗体。在某些实施方案中，可以使用修饰以除去不希望的糖基化位点，或者缺乏在寡糖链上存在的岩藻糖部分的抗体，例如，以增加抗体依赖性的细胞的细胞毒性（ADCC）功能（参见Shields等人(2002) JBC 277:26733），其中细胞毒性是期望的。在其他应用中，可以进行半乳糖基化的修饰以改变补体依赖性的细胞毒性（CDC）。
物种选择性和物种交叉反应性
在一些实施方案中，如本文所描述的抗原结合分子与人CDH15结合，但不与来自其他物种的CDH15结合。本文还描述了与人CDH15结合并与来自一种或多种非人物种的CDH15结合的抗原结合分子。
在一些实施方案中，与人CDH15结合的如本文所描述的抗原结合分子可以结合或可以不结合（视具体情况而定）小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、沙鼠、猪、猫、狗、兔、山羊、绵羊、牛、马、骆驼、食蟹猴、狨猴、恒河猴或黑猩猩CDH15中的一者或多者。
抗体-药物缀合物（ADC）
本文还描述了抗体-药物缀合物（ADC），其包含与有效负载（例如，药物或分子货物（例如，小分子和/或治疗部分等））缀合的抗hCDH15抗体或其抗原结合片段。还提供了与治疗部分缀合的抗hCDH15抗体、其抗原结合片段和/或其多特异性抗原结合分子。一般来说，ADC包含：A-[L-P]y，其中A是抗原结合分子（例如，抗hCDH15抗体或其片段（例如，包含至少一个选自表1中列出的HCDR3氨基酸序列中的任一者的HCDR3的片段）），L是接头，P是有效负载或分子货物，并且y是1至30的整数。
在各种实施方案中，ADC包含抗hCDH15抗体或其抗原结合片段，其包含具有表1中所示的SEQ ID NO的氨基酸序列（例如，SEQ ID NO: 2、22、42、60、70、80、90、108、125、145、165、185、202、220、230、240、250、259、279、299、319、339、358、378、386、404、420、436、452、468、484、500、516、532、548、564、580、596、612、628、644、660、676、692、708、724、740、748、764和780；或10、30、50、50、50、50、98、115、133、153、173、193、210、50、50、50、50、267、287、307、327、347、366、50、394、412、428、444、460、476、492、508、524、540、556、572、588、604、620、636、652、668、684、700、716、732、756和772）的HCVR或LCVR或特定HCVR/LCVR对（例如，SEQ ID NO: 2+10、22+30、42+50、60+50、70+50、80+50、90+98、108+115、125+133、145+153、165+173、185+193、202+210、220+50、230+50、240+50、250+50、259+267、279+287、299+307、319+327、339+347、358+366、378+50、386+394、404+412、420+428、436+444、452+460、468+476、484+492、500+508、516+524、532+540、548+556、564+572、580+588、596+604、612+620、628+636、644+652、660+668、676+684、692+700、708+716、724+732、740+684、748+756和764+772）的CDR。在一些情况下，抗hCDH15抗体或片段包含具有表1中所示的SEQ ID NO的氨基酸序列（例如，SEQ ID NO: 4-6-8-12-14-16、24-26-28-32-34-36、44-46-48-52-34-54、62-64-66-52-34-54、72-74-76-52-34-54、82-84-86-52-34-54、92-94-96-100-34-102、82-111-113-117-34-119、127-129-131-135-137-139、147-149-151-155-157-159、167-169-171-175-177-179、187-189-191-52-34-196、204-206-208-212-137-214、222-224-226-52-34-54、232-234-236-52-34-54、242-244-246-52-34-54、82-253-255-52-34-54、261-263-265-269-271-273、281-283-285-289-291-293、301-303-305-309-311-313、321-323-325-329-331-333、341-343-345-349-14-352、360-362-364-368-370-372、187-380-382-52-34-54、388-390-392-396-14-398、406-408-410-100-34-414、422-424-426-430-432-434、438-440-442-446-448-450、454-456-458-462-464-466、470-472-474-478-480-482、486-488-490-494-496-498、502-504-506-510-512-514、518-520-522-526-528-530、534-536-538-542-544-546、550-552-554-558-560-562、566-568-570-574-576-578、582-584-586-590-592-594、598-600-602-606-608-610、614-616-618-622-624-626、630-632-634-638-640-642、646-648-650-654-656-658、662-664-666-670-672-674、678-680-682-686-688-690、694-696-698-702-704-706、710-712-714-718-720-722、726-728-730-734-736-738、742-744-746-686-688-690、750-752-754-758-760-762和766-768-770-774-776-778）的CDR。在一些情况下，抗hCDH15抗体或片段包含具有表1中所示的SEQ ID NO的氨基酸序列（例如，SEQ ID NO: : 2、22、42、60、70、80、90、108、125、145、165、185、202、220、230、240、250、259、279、299、319、339、358、378、386、404、420、436、452、468、484、500、516、532、548、564、580、596、612、628、644、660、676、692、708、724、740、748、764和780；以及10、30、50、50、50、50、98、115、133、153、173、193、210、50、50、50、50、267、287、307、327、347、366、50、394、412、428、444、460、476、492、508、524、540、556、572、588、604、620、636、652、668、684、700、716、732、756和772）或特定氨基酸序列对（例如，SEQ ID NO: 2+10、22+30、42+50、60+50、70+50、80+50、90+98、108+115、125+133、145+153、165+173、185+193、202+210、220+50、230+50、240+50、250+50、259+267、279+287、299+307、319+327、339+347、358+366、378+50、386+394、404+412、420+428、436+444、452+460、468+476、484+492、500+508、516+524、532+540、548+556、564+572、580+588、596+604、612+620、628+636、644+652、660+668、676+684、692+700、708+716、724+732、740+684、748+756和764+772）的HCVR和LCVR。
在一些实施方案中，有效负载或分子货物包含小分子作为治疗剂，例如可用于治疗肌肉萎缩或遗传性肌肉疾病和/或肌肉相关癌症的治疗剂。小分子（SM）可以容易地进入细胞，因为它具有低分子量（通常高达约1 kDa）。一旦进入细胞内，小分子可以影响其他分子，诸如蛋白质，并且可以例如导致癌细胞死亡。这与许多大分子量分子（诸如抗体）不同。小分子的实例可以与抗CDH15抗原结合蛋白缀合，以形成抗CDH15:SM缀合物。
可用于治疗肌肉萎缩或遗传性肌肉疾病的治疗剂包括睾酮及其生物活性变体（例如，二氢睾酮（DHT））、β2-肾上腺素能受体激动剂（例如，克伦特罗（clenbuterol））、雷帕霉素（rapamycin）或其类似物、MAPK抑制剂或组蛋白脱乙酰酶抑制剂等。
在一些实施方案中，治疗有效负载是睾酮或其生物活性衍生物和/或部分，例如二氢睾酮。在一些实施方案中，治疗有效负载是雷帕霉素或其类似物、MAPK抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂或Notch配体。在一些实施方案中，有效负载是化疗剂，例如细胞毒性药物。
可用于治疗肌肉相关癌症的治疗剂包括已知延迟、停止和/或破坏癌细胞的任何化疗剂。可用于治疗肌肉相关癌症的治疗剂的实例包括但不限于阿柏西普、安吖啶、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、玛贝妥单抗、苯达莫司汀、博莱霉素、硼替佐米、维布妥昔单抗、白消安、卡巴他赛、卡培他滨、卡铂、卡非佐米、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂质体、达卡巴嗪、更生霉素（放线菌素D）、柔红霉素、多西他赛、多柔比星、多柔比星脂质体、表柔比星、艾日布林、依托泊苷、磷酸依托泊苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、福莫司汀、更昔洛韦、吉西他滨、奥加吉妥珠单抗、羟基脲、依达霉素、异环磷酰胺、奥加伊妥珠单抗、伊立替康、伊沙佐米、洛莫司汀、美法仑、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、白蛋白结合型紫杉醇、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲塞、培门冬酶、维泊妥珠单抗、普拉曲沙、甲基苄肼、雷替曲塞、罗米地辛、戈沙妥珠单抗、替莫唑胺、替尼泊苷、噻替哌、硫鸟嘌呤、拓扑替康、曲贝替定、德曲妥珠单抗、恩美曲妥珠单抗、曲氟尿苷/替匹嘧啶、缬更昔洛韦、长春花碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁、长春瑞滨或维莫德吉。
本文还提供了抗体-放射性核素缀合物（ARC），其包含与一种或多种放射性核素缀合的抗hCDH15抗体。可在本公开的该方面的上下文中使用的放射性核素的实例包括但不限于例如225Ac、212Bi、213Bi、131I、186Re、227Th、222Rn、223Ra、224Ra和90Y。
在本文提供的某些实施方案中，提供了包含例如经由接头分子与治疗剂（例如，上文公开的治疗剂中的任一者）缀合的抗hCDH15抗原结合蛋白的ADC。接头是将本文描述的抗体或抗原结合蛋白与治疗部分（例如，细胞毒性剂）连接（link/connect）或键合的任何基团或部分。例如，合适的接头可以见于Antibody-Drug Conjugates and Immunotoxins;Phillips, G. L.编辑; Springer Verlag: New York, 2013; Antibody-Drug Conjugates; Ducry, L.编辑; Humana Press, 2013; Antibody-Drug Conjugates;Wang, J., Shen, W.-C.和Zaro, J. L.编辑; Springer International Publishing,2015，每篇文献的内容均通过引用整体并入本文。通常，本文描述的抗体缀合物的合适的结合剂接头是这样的接头，其足够稳定以利用抗体的循环半衰期，并且同时能够在抗原介导的缀合物内化后释放其有效负载。接头可以是可切割的或不可切割的。可切割接头包含内化后被细胞内代谢切割的接头，例如通过水解、还原或酶促反应切割。不可切割接头包含通过内化后的抗体的溶酶体降解释放附接的有效负载的接头。合适的接头包含但不限于酸不稳定接头、水解不稳定接头、酶促可切割接头、还原不稳定接头、自我牺牲接头以及不可切割接头。合适的接头还包含但不限于为或包括以下的那些：肽、葡糖苷酸、琥珀酰亚胺-硫醚、聚乙二醇（PEG）单元、腙、马来酰亚胺己酰单元、二肽单元、缬氨酸-瓜氨酸单元和对氨基苄基（PAB）。
本领域已知的任何接头分子或接头技术可以用于产生或构建本公开的ADC。在某些实施方案中，接头是可切割的接头。根据其他实施方案，接头是不可切割的接头。可以在本公开的上下文中使用的接头的实例包括包含例如以下或由以下组成的接头：MC（6-马来酰亚胺基己酰基）、MP（马来酰亚胺基丙酰基）、val-cit（缬氨酸-瓜氨酸）、val-ala（缬氨酸-丙氨酸）、val-gly（缬氨酸-甘氨酸）、蛋白酶可裂解接头中的二肽位点、ala-phe（丙氨酸-苯丙氨酸）、蛋白酶可裂解接头中的二肽位点、PAB（氨基苄氧羰基）、SPP（N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基硫基)戊酸酯）、SMCC（N-琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1羧酸酯）、SIAB（N-琥珀酰亚胺基(4-碘代-乙酰基)氨基苯甲酸酯）或它们的变体和组合。可以在本公开的上下文中使用的接头的另外的实例提供于以下：例如，US 7,754,681和Ducry,Bioconjugate Chem., 2010, 21:5-13以及其中引用的参考文献，其内容通过引用整体并入本文。
在某些实施方案中，接头在生理条件下是稳定的。在某些实施方案中，接头是可切割的，例如，能够在存在酶的情况下或在特定pH范围或值下至少释放有效负载部分。在一些实施方案中，接头包括酶可切割部分。说明性酶可切割部分包含但不限于肽键、酯键、腙和二硫键。在一些实施方案中，接头包括组织蛋白酶可切割接头。
在一些实施方案中，接头包括不可切割部分。
合适的接头还包含但不限于与单个结合剂，例如抗体的两个半胱氨酸残基化学结合的那些。此类接头可用于模仿由于缀合过程而被破坏的抗体的二硫键。
在一些实施方案中，接头包括一个或多个氨基酸。合适的氨基酸包括天然的、非天然的、标准的、非标准的、蛋白原性的、非蛋白原性的和L-或D--氨基酸。在某些实施方案中，接头包括丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸、其衍生物或它们的组合。在某些实施方案中，氨基酸的一个或多个侧链与侧链基团连接，如下文所描述。在一些实施方案中，接头包括缬氨酸和瓜氨酸。在一些实施方案中，接头包括赖氨酸、缬氨酸和瓜氨酸。在一些实施方案中，接头包括赖氨酸、缬氨酸和丙氨酸。在一些实施方案中，接头包括缬氨酸和丙氨酸。
在一些实施方案中，接头包括自杀式基团。自杀式基团可以是技术人员已知的任何此列基团。在特定实施方案中，自杀式基团是对氨基苄基（PAB）或其衍生物。有用的衍生物包含对氨基苄氧基羰基（PABC）。技术人员将认识到，自降解的基团能够进行化学反应，该反应从有效负载释放接头的剩余原子。
在一些实施方案中，接头是：
其中是与抗体或抗原结合蛋白（例如，经由赖氨酸残基）的键，并且是与治疗有效负载（例如，睾酮或其生物学等效变体）的键。在一些实施方案中，接头是：
其中是与抗体或抗原结合蛋白（例如，经由赖氨酸残基）的键，并且是与治疗有效负载（例如，睾酮或其生物学等效变体）的键。在某些实施方案中，接头是：
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在某些实施方案中，接头是：
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在一些实施方案中，接头源自马来酰亚胺基甲基-4-反式-环己烷羧基琥珀酸酯：
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在一些实施方案中，接头是：
其中是与抗体或抗原结合蛋白（例如，经由赖氨酸残基）的键，并且是与治疗有效负载（例如，睾酮或其生物学等效变体）的键。
在一些实施方案中，接头是：
其中是与抗体或抗原结合蛋白（例如，经由赖氨酸残基）的键，并且是与治疗有效负载（例如，睾酮或其生物学等效变体）的键。
本公开包括ADC，其中接头通过在抗体或抗原结合分子内的特定氨基酸处的连接将如本文所描述的抗hCDH15抗原结合蛋白连接至治疗剂。可以在该方面的上下文中使用的氨基酸连接的实例例如赖氨酸（参见例如，US 5,208,020；US 2010/0129314；Hollander等人, Bioconjugate Chem.,2008, 19:358-361；WO 2005/089808；US 5,714,586；和US2013/0101546）、半胱氨酸（参见例如，US 2007/0258987；WO 2013/055993；WO 2013/055990；WO 2013/053873；WO 2013/053872；WO 2011/130598；US 2013/0101546；和US 7,750,116）、硒代半胱氨酸（参见例如，WO 2008/122039；和Hofer等人, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2008, 105:12451-12456）、甲酰甘氨酸（参见例如，Carrico等人, Nat. Chem.Biol., 2007, 3:321-322；Agarwal等人, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2013, 110:46-51和Rabuka等人, Nat. Protocols, 2012, 10:1052-1067）、非天然氨基酸（参见例如，WO 2013/068874和WO 2012/166559）和酸性氨基酸（参见例如，WO 2012/05982）。接头也可以经由与碳水化合物（参见，例如，US 2008/0305497、WO 2014/065661和Ryan等人., Food & Agriculture Immunol., 2001, 13:127-130）和二硫键接头（参见，例如，WO 2013/085925、WO 2010/010324、WO 2011/018611和Shaunak等人, Nat. Chem. Biol., 2006, 2:312-313）的连接而与抗原结合蛋白缀合。还可以使用位点特异性缀合技术来指导缀合至抗体或抗原结合蛋白的特定残基（参见，例如，Schumacher等人 J Clin Immunol (2016) 36(增刊1): 100）。位点特异性的缀合技术包括、但不限于通过转谷氨酰胺酶的谷氨酰胺缀合（参见例如，Schibli, Angew Chemie Inter Ed. 2010, 49 ,9995）。在一些实施方案中，如本文所描述的抗体的残基（例如，抗体的重链恒定区中的残基）可以被谷氨酰胺取代以进一步促进经由转谷氨酰胺酶的谷氨酰胺缀合。作为非限制性实例，人重链恒定区可用在人IgG1重链恒定区的序列中发现的N180Q取代修饰。这种取代提供了总共4个谷氨酰胺用于转谷氨酰胺酶的缀合。
本文所描述的抗体药物缀合物可以使用本领域的普通技术人员已知的缀合条件来制备（参见，例如，Doronina等人 Nature Biotechnology 2003, 21, 7, 778，该文献通过引用整体并入本文）。在一些实施方案中，通过使如本文所描述的抗hCDH15抗原结合蛋白与包含所需接头和治疗剂的化合物接触来制备抗hCDH15抗原结合蛋白药物缀合物，其中所述接头例如在抗体或抗原结合蛋白的所需残基处具有与抗体或抗原结合蛋白反应的部分。
腺相关病毒（AAV）
“AAV”是腺相关病毒的缩写，并且可以用于指病毒本身或其衍生物。AAV为小的、无包膜的单链DNA病毒。通常，野生型AAV基因组为4.7 kb，并且其特征在于两个反向末端重复序列（ITR）和两个开放阅读框（ORF）、rep和cap。野生型rep阅读框对分子量78 kD（“Rep78”）、68 kD（“Rep68”）、52 kD（“Rep52”）和40 kD（“Rep 40”）的四种蛋白质进行编码。Rep78和Rep68由p5启动子转录，并且Rep52和Rep40由p19启动子转录。这些蛋白质主要用于调节AAV基因组的转录和复制。野生型cap阅读框对分子量为83-85 kD（VP1）、72-73 kD（VP2）和61-62 kD（VP3）的三种结构（衣壳）病毒蛋白（VP）进行编码。AAV病毒粒子（衣壳）中80%以上的总蛋白包括VP3；在成熟的病毒粒子中发现VP1、VP2和VP3的相对丰度为约1:1:10，尽管已经报道比率为1:1:8。Padron等人 (2005) J. Virology 79:5047-58。
各种血清型AAV的基因组序列以及天然反向末端重复序列（ITR）、Rep蛋白和衣壳亚基序列是本领域已知的。这种序列可以在文献中或在GenBank等公共数据库中找到。参见例如GenBank登录号NC_002077（AAV1）、AF063497（AAV1）、NC001401（AAV-2）、AF043303（AAV2）、NC_001729（AAV3）、NC_001829（AAV4）、U89790（AAV4）、NC_006152（AAV5）、AF513851（AAV7）、AF513852（AAV8）和NC_006261（AAV8）；这些文献的公开内容通过引用并入本文中以教导AAV核酸和氨基酸序列。还参见例如，Srivistava等人 (1983) J. Virology 45:555；Chiorini等人 (1998) J. Virology 71:6823；Chiorini等人 (1999) J. Virology 73:1309；Bantel-Schaal等人 (1999) J. Virology 73:939；Xiao等人 (1999) J. Virology73:3994；Muramatsu等人 (1996) Virology 221:208；Shade等人,(1986) J. Virol. 58:921；Gao等人 (2002) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 99: 11854；Moris等人 (2004)Virology 33:375-383；美国专利公开案20170130245；国际专利公开案WO 00/28061、WO99/61601、WO 98/11244；和美国专利第6,156,303号，这些文献中的每一篇通过引用整体并入本文。本文表2提供了各种非灵长类AAV的序列。
“AAV”包括所有亚型以及本领域众所周知的天然存在的和经修饰的形式。AAV包括灵长类AAV（例如，AAV 1型（AAV1）、灵长类AAV 2型（AAV2）、灵长类AAV 3型（AAV3B）、灵长类AAV 4型（AAV4）、灵长类AAV 5型（AAV5）、灵长类AAV 6型（AAV6）、灵长类AAV 7型（AAV7）、灵长类AAV 8型（AAV8）、灵长类AAV 9型（AAV9）、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAVDJ、Anc80L65、AAV2G9、AAV-LK03、灵长类AAV rh10型（AAV rh10）、AAV h10型（AAV h10）、AAV hu11型（AAVhu11）、AAV rh32.33型（AAV rh32.33）、AAV retro（AAV retro）、AAV PHP.B、AAV PHP.eB、AAV PHP.S、AAV2/8等，非灵长类动物AAV（例如，禽类AAV（AAAV））和其他非灵长类动物AAV，诸如哺乳动物AAV（例如，蝙蝠AAV、海狮AAV、牛AAV、犬AAV、马AAV、山羊AAV和绵羊AAV等），有鳞类动物AAV（例如，蛇AAV、鬃狮蜥AAV）等。“灵长类AAV”是指通常从灵长类分离的AAV。类似地，“非灵长类动物AAV”是指从非灵长类动物分离的AAV。
如本文所用，与基因（例如，rep、cap等）、衣壳蛋白（例如，VP1衣壳蛋白、VP2衣壳蛋白、VP3衣壳蛋白等）、特定AAV的衣壳蛋白的区域（例如，PLA2区域、VP1-u区域、VP1/VP2共同区域、VP3区域）、核苷酸序列（例如，ITR序列），例如AAV的cap基因或衣壳蛋白等相关的“[特定]AAV”，除了分别包含本文所示的特定AAV的核酸序列或氨基酸序列的基因或多肽外，还涵盖基因或多肽的变体，包括包含保留一种或多种生物功能所需的最少数量的核苷酸或氨基酸的变体。如本文所用，变体基因或变体多肽包括与本文所示的特定AAV的基因或多肽的核酸序列或氨基酸序列不同的核酸序列或氨基酸序列，其中该差异通常不会改变基因或多肽的至少一种生物功能，和/或基因或多肽的系统发育特征，例如其中差异可能是由于遗传密码的简并性、分离变异、序列的长度等。例如，如此处使用的rep基因和cap基因可以涵盖不同于野生型基因的rep和cap基因，因为基因可以分别对一个或多个Rep蛋白和Cap蛋白进行编码。在一些实施方案中，Rep基因对至少Rep78和/或Rep68进行编码。在一些实施方案中，cap基因包含那些可能不同于野生型的基因，其中一个或多个替代性起始密码子或一个或多个替代性起始密码子之间的序列被去除，使得cap基因仅对单个cap蛋白进行编码，例如其中VP2和/或VP3起始密码子被去除或取代，使得cap基因对功能性VP1衣壳蛋白而不是VP2衣壳蛋白或VP3衣壳蛋白进行编码。因此，如本文所用，rep基因涵盖对功能性rep蛋白进行编码的任何序列。cap基因涵盖编码至少一个功能性cap基因的任何序列。
众所周知，野生型cap基因在存在于rep ORF中的p40启动子的控制下表达来自cap基因的单个开放阅读框的所有三种VP1、VP2和VP3衣壳蛋白。术语“衣壳蛋白”、“Cap蛋白”等包括作为病毒衣壳的一部分的蛋白质。对于腺相关病毒，衣壳蛋白通常称为VP1、VP2和/或VP3，并且可以由单个cap基因编码。对于AAV，三种AAV衣壳蛋白本质上以重叠方式从cap ORF替代性翻译起始密码子使用中产生，尽管所有三种蛋白质都使用共同的终止密码子。野生型cap基因的ORF从5’至3’对以下三个替代性起始密码子和一个“共同终止密码子”进行编码：“VP1起始密码子”、“VP2起始密码子”和“VP3起始密码子”。最大的病毒蛋白VP1通常从VP1起始密码子编码到“共同终止密码子”。VP2通常从VP2起始密码子编码到共同终止密码子。VP3通常从VP3起始密码子编码到共同终止密码子。因此，VP1在其N末端包含不与VP2或VP3共享的序列，称为VP1-独特区（VP1-u）。VP1-u区通常由野生型cap基因的序列从VP1起始密码子开始直到“VP2起始密码子”进行编码。VP1-u包括对感染来说可能很重要的磷脂酶A2结构域（PLA2），以及可能帮助病毒靶向细胞核以进行脱壳和基因组释放的核定位信号。VP1、VP2和VP3衣壳蛋白共享构成整个VP3的相同C末端序列，其在本文中也可以称为VP3区。VP3区从VP3起始密码子编码到共同终止密码子。VP2具有与VP1共享的另外的约60个氨基酸。此区域被称为VP1/VP2共同区。
在一些实施方案中，本发明的Cap蛋白中的一种或多种Cap蛋白可以由具有一个或多个ORF的一个或多个cap基因编码。在一些实施方案中，本发明的VP蛋白可以通过使用单独核苷酸序列从包含对VP1、VP2和/或VP3的任何组合进行编码的核苷酸序列的多于一个ORF中表达，这些单独核苷酸序列可操作地连接到至少一个表达控制序列以用于在包装细胞中表达，其各自产生本发明的VP1、VP2和/或VP3衣壳蛋白中的一者或多者。在一些实施方案中，本发明的VP衣壳蛋白可以通过使用单独核苷酸序列从包含对VP1、VP2或VP3中的任一者进行编码的核苷酸序列的ORF中单独地表达，这些单独核苷酸序列可操作地连接至一个表达控制序列以用于在病毒复制细胞中表达，其各自产生VP1、VP2或VP3衣壳蛋白中的仅一者。在另一个实施方案中，VP蛋白可以从包含对VP1、VP2和VP3衣壳蛋白进行编码的核苷酸序列的一个ORF中表达，这些核苷酸序列可操作地连接到至少一个表达控制序列以用于在病毒复制细胞中表达，其各自产生VP1、VP2和VP3衣壳蛋白。因此，尽管本文所提供的氨基酸位置可以相对于参考的AAV的VP1衣壳蛋白提供，但本领域技术人员将能够分别且容易地确定AAV的VP2和/或VP3衣壳蛋白内相同氨基酸的位置，以及不同AAV中的氨基酸的对应位置。
短语“反向末端重复序列”或“ITR”包括有效复制所需的腺相关病毒的基因组中的对称核酸序列。ITR序列位于AAV DNA基因组的每一端处。ITR充当病毒DNA合成的复制起点，并且是用于生成AAV颗粒（例如，包装成AAV颗粒）的必需顺式组分。
AAV ITR包括复制蛋白Rep78或Rep68的识别位点。ITR的“D”区包括DNA复制在其处起始的DNA切口位点，并且为核酸复制步骤提供方向性。在哺乳动物细胞中复制的AAV通常包含两个ITR序列。
单个ITR可以在“A”区的两条链上和ITR回文的每一侧上的两个对称D区上用Rep结合位点进行工程化。此类双链环状DNA模板上的经工程化的构建体允许Rep78或Rep68启动的核酸复制在两个方向上进行。单个ITR足以进行圆形颗粒的AAV复制。在生产本发明的AAV病毒颗粒的方法中，rep编码序列对能够结合转移质粒上包括的ITR的Rep蛋白或Rep蛋白等效物进行编码。
当通过包装细胞用适当的Rep蛋白表达时，本发明的Cap蛋白可以使包含目的核苷酸和偶数个两个或更多个ITR序列的转移质粒衣壳化。在一些实施方案中，转移质粒包含一个ITR序列。在一些实施方案中，转移质粒包含两个ITR序列。
Rep78和/或Rep68中的任一者结合到ITR发夹序列上的独特和已知的位点，并作用于破坏和解开AAV基因组的末端上的发夹结构，由此提供对病毒复制细胞的复制机制的访问。众所周知，Rep蛋白可以通过使用单独核苷酸序列从包含对Rep78、Rep68、Rep 52和/或Rep40的任何组合进行编码的核苷酸序列的多于一个ORF中表达，这些单独核苷酸序列可操作地连接到至少一个表达控制序列以用于在病毒复制细胞中表达，其各自产生Rep78、Rep68、Rep 52和/或Rep40 Rep蛋白中的一者或多者。可替代地，Rep蛋白可以通过使用单独核苷酸序列从包含对Rep78、Rep68、Rep 52或Rep40中的任一者进行编码的核苷酸序列的ORF中单独地表达，这些单独核苷酸序列可操作地连接至一个表达控制序列以用于在包装细胞中表达，其各自产生一个Rep78、Rep68、Rep 52或Rep40 Rep蛋白。在另一个实施方案中，Rep蛋白可以从包含对Rep78和Rep52 Rep蛋白进行编码的核苷酸序列的一个ORF中表达，这些核苷酸序列可操作地连接到至少一个表达控制序列以用于在病毒复制细胞中表达，其各自产生Rep78和Rep52 Rep蛋白。
在生产本发明的AAV病毒粒子（例如，病毒颗粒）的方法中，可以在单个包装质粒中提供本发明的rep编码序列和cap基因。然而，技术人员将认识到此类条件是不必要的。此类病毒颗粒可以包含也可以不包含基因组。
“嵌合AAV衣壳蛋白”包括AAV衣壳蛋白，该AAV衣壳蛋白包含氨基酸序列，例如来自两个或更多个不同AAV并且能够形成和/或形成AAV病毒衣壳/病毒颗粒的部分。嵌合AAV衣壳蛋白由嵌合AAV衣壳基因，例如包含多个（例如，至少两个）核酸序列的嵌合核苷酸进行编码，该多个核酸序列中的每个核酸序列与对不同AAV的衣壳蛋白进行编码的衣壳基因的一部分相同，并且该多个核酸序列一起对功能性嵌合AAV衣壳蛋白进行编码。嵌合衣壳蛋白与特定AAV的缔合表明衣壳蛋白包含来自该AAV的衣壳蛋白的一个或多个部分以及来自不同AAV的衣壳蛋白的一个或多个部分。例如，嵌合AAV2衣壳蛋白包括衣壳蛋白，该衣壳蛋白包含AAV2的VP1、VP2和/或VP3衣壳蛋白的一个或多个部分以及不同AAV的VP1、VP2和/或VP3衣壳蛋白的一个或多个部分。
术语“一部分”是指与衍生出该部分的序列具有100%同一性的至少5个氨基酸或至少15个核苷酸，但少于全长多肽或核酸分子，参见Penzes (2015) J. General Virol.2769。“一部分”涵盖足以确定衍生出该部分的多肽或核酸分子属于“[特定]AAV”或与特定AAV（例如，非灵长类动物AAV或远程AAV）具有“显著同一性”的氨基酸或核苷酸的任何邻接区段。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少5个氨基酸或15个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少10个氨基酸或30个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少15个氨基酸或45个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少20个氨基酸或60个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少25个氨基酸或75个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少30个氨基酸或90个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少35个氨基酸或105个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少40个氨基酸或120个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少45个氨基酸或135个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少50个氨基酸或150个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少60个氨基酸或180个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少70个氨基酸或210个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少80个氨基酸或240个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少90个氨基酸或270个核苷酸。在一些实施方案中，一部分包含与特定AAV相关的序列具有100%同一性的至少100个氨基酸或300个核苷酸。
经修饰的病毒衣壳蛋白、病毒颗粒、核酸
在一些实施方案中，Cap蛋白（例如，如本文所描述的VP1衣壳蛋白、如本文所描述的VP2衣壳蛋白和/或如本文所描述的VP3衣壳蛋白）被修饰以包含例如靶向配体的插入、化学修饰、结合对的第一成员、可检测标记、点突变等中的任一者或组合。
通常，对特定AAV或其变体的基因或多肽的修饰产生与本文针对特定AAV所示的核酸序列或氨基酸序列不同的核酸序列或氨基酸序列，其中该修饰改变、赋予或去除一种或多种生物功能，但不改变基因或多肽作为AAV基因或AAV多肽的系统发育特征。修饰可以包括以下中的任一者或组合：用第二AAV血清型的序列取代第一AAV血清型的序列以产生嵌合体；化学修饰；插入结合对的第一成员和/或点突变等，使得衣壳蛋白的天然趋向性被降低直至消除，衣壳蛋白的趋向性可以更容易地被重定向，和/或使得衣壳蛋白包含可检测标记。如本文所描述的修饰通常不改变并且优选地降低通常群体中发现的预先存在的抗体对经修饰的衣壳的低识别至无识别，这些抗体是在用另一种AAV感染，例如用血清型（诸如AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAVDJ、Anc80L65、AAV2G9、AAV-LK03）、基于此类血清型的病毒粒子、来自当前使用的AAV基因疗法模态的病毒粒子或它们的组合感染的过程中产生的。
靶向配体
本文所描述的修饰可以涉及靶向配体与经修饰的衣壳蛋白和/或包含经修饰的衣壳蛋白的衣壳的缔合（例如，展示、可操作的连接、结合）。通常，如本文所描述的靶向配体结合由哺乳动物肌肉细胞表达的表面蛋白，例如在哺乳动物肌肉细胞的表面上表达的蛋白质，例如哺乳动物非终末分化肌肉细胞特异性表面蛋白。在一些实施方案中，经修饰的衣壳蛋白和/或修饰的衣壳包含结合哺乳动物CDH15（例如，人CDH15）的靶向配体。
表1提供了可用于重定向如本文所描述的AAV衣壳的非限制性和示例性的抗人CDH15单克隆抗体（mAb ID）的每个结合部分（例如，重链可变结构域（HCVR）、轻链可变结构域（LCVR）和CDR1、CDR2和CDR3）的SEQ ID NO的概述。在一些实施方案中，如本文所描述的AAV衣壳包含结合人CDH15的靶向配体，其中该靶向配体包含分别与如SEQ ID NO: 1-786中的任一者中所示的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3组的氨基酸序列至少90%相同的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组。在一些实施方案中，如本文所描述的AAV衣壳包含结合人CDH15的靶向配体，其中该靶向配体包含分别与SEQ ID NO: 1-786中的任一者中所示的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3组的氨基酸序列至少95%相同的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组。在一些实施方案中，如本文所描述的AAV衣壳包含结合人CDH15的靶向配体，其中该靶向配体包含与SEQ ID NO: 1-786中的任一者中所示的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3组的氨基酸序列至少97%相同的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组。在一些实施方案中，如本文所描述的AAV衣壳包含结合人CDH15的靶向配体，其中该靶向配体包含与SEQ ID NO:1-786中的任一者中所示的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3组的氨基酸序列至少98%相同的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组。在一些实施方案中，如本文所描述的AAV衣壳包含结合人CDH15的靶向配体，其中该靶向配体包含与SEQ ID NO: 1-786中的任一者中所示的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3组的氨基酸序列99%相同的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、CDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组。本文还描述了抗体或其抗原结合片段，其包含表1中列出的示例性的抗hCDH15抗体中的任一者所定义的HCVR/LCVR氨基酸序列对内所含有的一组六个CDR（即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3）。在一些实施方案中，如本文所描述的靶向配体包含选自由以下组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对内所含有的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组：SEQ ID NO: 2+10、22+30、42+50、60+50、70+50、80+50、90+98、108+115、125+133、145+153、165+173、185+193、202+210、220+50、230+50、240+50、250+50、259+267、279+287、299+307、319+327、339+347、358+366、378+50、386+394、404+412、420+428、436+444、452+460、468+476、484+492、500+508、516+524、532+540、548+556、564+572、580+588、596+604、612+620、628+636、644+652、660+668、676+684、692+700、708+716、724+732、740+684、748+756和764+772。
结合CDH15的靶向配体的非限制性实例包括：(i) Fab片段；(ii) F(ab')2片段；(iii) Fd片段；(iv) Fv片段；(v)单链Fv（scFv）分子；(vi) dAb片段；和(vii)由模拟抗体的高变区的氨基酸残基组成的最小识别单位（例如，分离的互补决定区（CDR）诸如CDR3肽）或受限制的FR3-CDR3-FR4肽。如本文所用，其他工程化分子，诸如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失的抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微抗体、纳米抗体（例如，单价纳米抗体、二价纳米抗体等）、小型模块化免疫药物（SMIP）和鲨鱼可变IgNAR结构域，也涵盖在表述“靶向配体”内。在非限制性实施方案中，如本文所描述的可用于重新靶向病毒衣壳的结合CDH15的抗CDH15靶向配体包含scFv。作为非限制性实例，如本文所描述的可用于重新靶向病毒衣壳的VL-(Gly4Ser)3-VH形式的scFv序列可包含分别与如SEQ ID NO: 1-786中的任一者所示的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3组的氨基酸序列中的任一者90%、95%、97%、98%、99%或100%相同的重链可变结构域、轻链可变结构域、重链可变结构域/轻链可变结构域对、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3和/或HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3组。
结合哺乳动物非终末分化肌肉细胞表面蛋白的靶向配体可以根据众所周知的方法，例如根据众所周知的方法将靶向配体直接插入（例如，使用重组方法）的直接方法，与经修饰的AAV衣壳蛋白和所得的AAV衣壳缔合（例如，由其展示、与其可操作地连接、与其结合）。参见例如，Stachler等人 (2006), 同上；White等人 (2004), 同上；Girod等人(1999), 同上；Grifman等人 (2001), 同上；Shi等人 (2001), 同上；Shi和Bartlett(2003), 同上。可以使用众所周知的化学接头将结合哺乳动物非终末分化肌肉细胞特异性表面蛋白的靶向配体偶联至经修饰的AAV衣壳蛋白和所得的AAV衣壳，例如，其中AAV衣壳蛋白可以被化学修饰以包含二苯并环炔基团或叠氮化物基团，并且任选地其中如本文所描述的靶向配体连接至二苯并环炔基团或叠氮化物基团，参见例如U.S.2022/028234，其通过引用整体并入本文；其中靶向配体例如经由-CSNH-键等共价连接至AAV衣壳蛋白的一级氨基酸基团。在一些实施方案中，如本文所描述的经修饰的衣壳包含根据众所周知的直接重组方法直接插入其中或与其偶联的靶向配体，例如抗CDH15抗体或其结合部分。
结合对
在一些实施方案中，结合哺乳动物非终末分化肌肉细胞特异性表面蛋白的靶向配体可以根据间接重组方法与经修饰的AAV衣壳蛋白和所得的AAV衣壳缔合（例如，由其展示、与其可操作地连接、与其结合），其中AAV衣壳蛋白被修饰以包含结合对的第一成员（例如，异源支架），并且任选地其中结合对的第一成员与结合对的第二同源成员（例如，衔接子）连接（例如，共价或非共价结合），进一步任选地其中结合对的第二同源成员融合至靶向配体。非限制性和示例性结合对在Buning和Srivastava (2019) Mol. Ther. Methods Clin Dev12:248-265中列出。
因此，在一些实施方案中，如本文所描述的衣壳蛋白的修饰包括通常由基因水平的修饰产生的那些修饰，例如经由cap基因的修饰，诸如插入结合对（例如，蛋白质:蛋白质结合对、蛋白质:核酸结合对）的第一成员、可检测标记等的修饰，以供Cap蛋白展示。
在一些实施方案中，第一成员与免疫球蛋白恒定结构域形成结合对。在一些实施方案中，第一成员与金属离子（例如，Ni2+、Co2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+等）形成结合对。在一些实施方案中，第一成员选自由链霉亲和素、Strep II、HA、L14、4C-RGD、LH和蛋白A组成的组。
在一些实施方案中，结合对包含酶:核酸结合对。在一些实施方案中，第一成员包含HUH核酸内切酶或HUH标签，并且第二成员包含核酸结合结构域。在一些实施方案中，第一成员包含HUH标签。参见例如，U.S. 2021/0180082，其通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，本发明的衣壳蛋白至少包含肽:肽结合对的第一成员。
在一些实施方案中，肽:肽结合对的第一成员和第二成员中的每一者包含内含肽。参见例如，Wagner等人, (2021) Adv. Sci. 8: 2004018 (1/22)；Muik等人 (2017)Biomaterials 144: 84，这些文献中的每一篇通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，第一成员是例如长度介于约1个氨基酸和约35个氨基酸之间的B细胞表位，并且与抗体互补位（例如，免疫球蛋白可变结构域）形成结合对。在一些实施方案中，本发明的衣壳蛋白可以被修饰以包含可检测标记作为结合对的第一成员。许多可检测标记是本领域已知的。（参见例如：Nilsson等人 (1997) “Affinity fusionstrategies for detection, purification, and immobilization of modifiedproteins” Protein Expression and Purification 11: 1-16, Terpe等人 (2003)“Overview of tag protein fusions: From molecular and biochemical fundamentalsto commercial systems” Applied Microbiology and Biotechnology 60:523-533，以及其中的参考文献）。可检测标记包括但不限于以下：结合固定化的二价阳离子（例如，Ni2+）的多组氨酸可检测标记（例如，His-6、His-8或His-10）、结合固定化的亲和素的生物素部分（例如，在体内生物素化的多肽序列上）、结合固定化的谷胱甘肽的GST（谷胱甘肽S-转移酶）序列、结合固定化的S蛋白的S标记、结合固定化的抗体或其结构域或片段的抗原（包括例如结合对应抗体的T7、myc、FLAG和B标记）、FLASH标记（偶联至特定砷基部分的高度可检测标记）、结合固定化的配体的受体或受体结构域（或反之亦然）、结合固定化的IgG的蛋白A或其衍生物（例如，Z）、结合固定化的直链淀粉的麦芽糖结合蛋白（MBP）、结合固定化的白蛋白的白蛋白结合蛋白、结合固定化的几丁质的几丁质结合结构域、结合固定化的钙调蛋白的钙调蛋白结合肽和结合固定化的纤维素的纤维素结合结构域。另一个示例性可检测标记是SNAP-tag，可从Covalys（www.Covalys.com）商购获得。在一些实施方案中，本文公开的可检测标记包括由抗体互补位识别的可检测标记，其中可检测标记和抗体互补位形成蛋白质:蛋白质结合对。
在一些实施方案中，本发明的衣壳蛋白包含蛋白质:蛋白质结合对的第一成员，该结合对包含可检测标记，该可检测标记也可以用于检测和/或分离Cap蛋白和/或作为蛋白质:蛋白质结合对的第一成员。在一些实施方案中，可检测标记充当蛋白质:蛋白质结合对的第一成员，用于结合包含多特异性结合蛋白的靶向配体，该多特异性结合蛋白可以结合可检测标记和由目的细胞表达的靶标两者。在一些实施方案中，本发明的Cap蛋白包含蛋白质:蛋白质结合对的第一成员，该结合对包含c-myc（SEQ ID NO: 818）。可检测标记作为蛋白质:蛋白质结合对的第一成员的用途描述于例如WO2019006043中，该文献通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，第一成员包含B1表位（SEQ ID NO: 819）。在一些实施方案中，衣壳蛋白被修饰以在VP3区中包括B1表位。在一些实施方案中，第一成员选自由以下组成的组：FLAG、HA和c-myc（SEQ ID NO: 818）。
在一些实施方案中，衣壳蛋白包含蛋白质:蛋白质结合对的第一成员，其中该蛋白质:蛋白质结合对形成共价异肽键。在一些实施方案中，肽:肽结合对的第一成员经由异肽键共价结合至肽:肽结合对的同源第二成员，并且任选地其中肽:肽结合对的同源第二成员与靶向配体融合，该靶向配体结合由目的细胞表达的靶标。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对可以选自由以下组成的组：SpyTag:SpyCatcher、SpyTag002:SpyCatcher002、SpyTag003:SpyCatcher003、SpyTag:KTag、Isopeptag:pilinC和SnoopTag:SnoopCatcher。在一些实施方案中，其中第一成员是SpyTag（或其生物学活性部分或变体），并且蛋白质（第二同源成员）是SpyCatcher（或其生物学活性部分或变体）。在一些实施方案中，其中第一成员是SpyTag（或其生物学活性部分或变体），并且蛋白质（第二同源成员）是KTag（或其生物学活性部分或变体）。在一些实施方案中，其中第一成员是KTag（或其生物学活性部分或变体），并且蛋白质（第二同源成员）是SpyTag（或其生物学活性部分或变体）。在一些实施方案中，其中第一成员是SnoopTag（或其生物学活性部分或变体），并且蛋白质（第二同源成员）是SnoopCatcher（或其生物学活性部分或变体）。在一些实施方案中，其中第一成员是Isopeptag（或其生物学活性部分或变体），并且蛋白质（第二同源成员）是Pilin-C（或其生物学活性部分或变体）。在一些实施方案中，其中第一成员是SpyTag002（或其生物学活性部分或变体），并且蛋白质（第二同源成员）是SpyCatcher002（或其生物学活性部分或变体）。在一些实施方案中，其中第一成员是SpyTag003（或其生物学活性部分或变体），并且蛋白质（第二同源成员）是SpyCatcher003（或其生物学活性部分或变体）。在一些实施方案中，本发明的Cap蛋白包含SpyTag或其生物学活性部分或变体。蛋白质:蛋白质结合对的第一成员的用途描述于WO2019006046中，该文献通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对的第一成员和/或可检测标记经由第一接头和/或第二接头，例如长度为至少一个氨基酸的氨基酸间隔子，可操作地连接至本发明的Cap蛋白（与该Cap蛋白在同一框内翻译、化学连接至该Cap蛋白和/或由该Cap蛋白展示）。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对的第一成员的侧翼为第一接头和/或第二接头，例如第一氨基酸间隔子和/或第二氨基酸间隔子，这些间隔子中的每个间隔子的长度为至少一个氨基酸。
在一些实施方案中，第一接头和/或第二接头不相同。在一些实施方案中，第一接头和/或第二接头的长度各自独立地为一个或两个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和/或第二接头的长度各自独立地为一个、两个或三个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和/或第二接头的长度各自独立地为一个、两个、三个或四个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和/或第二接头的长度各自独立地为一个、两个、三个、四个或五个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和/或第二接头的长度各自独立地为一个、两个、三个、四个或五个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和/或第二接头的长度各自独立地为一个、两个、三个、四个、五个或六个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和/或第二接头的长度各自独立地为一个、两个、三个、四个、五个、六个或七个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和/或第二接头的长度各自独立地为一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和/或第二接头的长度各自独立地为一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和或第二接头的长度各自独立地为一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和或第二接头的长度各自独立地为一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个氨基酸。
在一些实施方案中，第一接头和第二接头的序列和/或长度相同，并且长度各自为一个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和第二接头的长度相同，并且长度各自为一个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和第二接头的长度相同，并且长度各自为两个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和第二接头的长度相同，并且长度各自为三个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和第二接头的长度相同，并且长度各自为四个氨基酸，例如接头是GLSG（SEQ ID NO:823）。在一些实施方案中，第一接头和第二接头的长度相同，并且长度各自为五个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和第二接头的长度相同，并且长度各自为六个氨基酸，例如第一接头和第二接头各自包含GLSGSG（SEQ ID NO: 824）或GSGESG（SEQ IDNO: 828）的序列。在一些实施方案中，第一接头和第二接头的长度相同，并且长度各自为七个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和第二接头的长度相同，并且长度各自为八个氨基酸，例如第一接头和第二接头各自包含GLSGLSGS（SEQ ID NO: 825）的序列。在一些实施方案中，第一接头和第二接头的长度相同，并且长度各自为九个氨基酸。在一些实施方案中，第一接头和第二接头的长度相同，并且长度各自为十个氨基酸，例如第一接头和第二接头各自包含GLSGLSGLSG（SEQ ID NO: 826）或GLSGGSGLSG（SEQ ID NO: 827）的序列。在一些实施方案中，第一接头和第二接头的长度相同，并且长度各自为超过十个氨基酸。
通常，如本文所描述的蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员（例如，包含特异性结合对的第一成员本身或与一个或多个接头的组合）的长度介于约5个氨基酸至约50个氨基酸之间。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为至少5个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为6个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为7个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为8个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为9个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为10个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为11个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为12个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为13个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为14个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为15个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为16个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为17个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为18个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为19个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为20个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为21个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为22个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为23个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为24个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为25个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为26个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为27个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为28个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为29个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为30个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为31个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为32个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为33个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为34个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为35个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为36个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为37个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为38个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为39个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为40个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为41个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为42个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为43个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为44个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为45个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为46个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为47个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为48个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为49个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质:蛋白质结合对氨基酸序列的第一成员的长度为50个氨基酸。
在本发明的包含可检测标记的一些实施方案中，靶向配体包含多特异性结合分子，该多特异性结合分子包含(i)特异性地结合可检测标记的抗体互补位和(ii)特异性地结合受体的第二结合结构域，该多特异性结合分子可以缀合至珠粒的表面（例如，用于纯化）或由靶细胞（例如，肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞、它们的任何组合等）表达。因此，包含(i)特异性地结合可检测标记的抗体互补位和(ii)特异性地结合受体的第二结合结构域的多特异性结合分子靶向病毒颗粒。此类“靶向”或“定向”可以包括这样一种情况，其中野生型病毒颗粒靶向组织内的几个细胞和/或生物体内的几个器官，通过插入可检测标记来减少直至消除对组织或器官的广泛靶向，并且利用多特异性结合分子来实现对组织中的更多特定细胞或生物体中的更多特定器官的重靶向。此类重靶向或重定向也可以包括这样一种情况：其中野生型病毒颗粒靶向组织，通过插入可检测标记来减少直至消除对组织的靶向，并且利用多特异性结合分子来实现对完全不同组织的重靶向。如本文所描述的抗体互补位通常至少包含特异性地识别可检测标记的互补决定区（CDR），例如重链和/或轻链可变结构域的CDR3区。在一些实施方案中，多特异性结合分子包含抗体（或其部分），该抗体包含特异性地结合可检测标记的抗体互补位。例如，多特异性结合分子可以包含单结构域重链可变区或单结构域轻链可变区，其中单结构域重链可变区或单结构域轻链可变区包含特异性地结合可检测标记的抗体互补位。在一些实施方案中，多特异性结合分子可以包含Fv区，例如多特异性结合分子可以包含scFv，该scFv包含特异性地结合可检测标记的抗体互补位。在一些实施方案中，如本文所描述的多特异性结合分子包含特异性地结合c-myc（SEQ ID NO:818）的抗体互补位。
包含经修饰的衣壳蛋白的经修饰的衣壳
在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白的病毒衣壳是镶嵌衣壳，例如包含至少两组VP1、VP2和/或VP3蛋白，每组蛋白由不同的cap基因进行编码。本文中的镶嵌衣壳通常是指经修饰以包含结合对的第一成员的第一病毒衣壳蛋白和缺乏结合对的第一成员的第二对应病毒衣壳蛋白的镶嵌体。关于镶嵌衣壳，缺乏结合对的第一成员的第二病毒衣壳蛋白可以称为由参考cap基因编码的参考衣壳蛋白。在一些镶嵌衣壳实施方案中，优选地当用蛋白质:蛋白质对的第一成员修饰的VP1、VP2和/或VP3衣壳蛋白不是嵌合衣壳蛋白时，VP1、VP2和/或VP3参考衣壳蛋白可以包含与用结合对的第一成员修饰的病毒VP1、VP2和/或VP3衣壳蛋白的氨基酸序列相同的氨基酸序列，不同之处在于参考衣壳蛋白缺乏结合对的第一成员。在一些镶嵌衣壳实施方案中，VP1、VP2和/或VP3参考衣壳蛋白对应于用结合对的第一成员修饰的病毒VP1、VP2和/或VP3衣壳蛋白，不同之处在于参考衣壳蛋白缺乏结合对的第一成员。在一些实施方案中，VP1参考衣壳蛋白对应于用结合对的第一成员修饰的病毒VP1衣壳蛋白，不同之处在于参考衣壳蛋白缺乏结合对的第一成员。在一些实施方案中，VP2参考衣壳蛋白对应于用结合对的第一成员修饰的病毒VP2衣壳蛋白，不同之处在于参考衣壳蛋白缺乏结合对的第一成员。在一些实施方案中，VP3参考衣壳蛋白对应于用结合对的第一成员修饰的病毒VP3衣壳蛋白，不同之处在于参考衣壳蛋白缺乏结合对的第一成员。在包含经进一步修饰以包含结合对的第一成员的嵌合VP1、VP2和/或VP3衣壳蛋白的一些镶嵌衣壳实施方案中，参考蛋白可以是其部分形成嵌合衣壳蛋白的一部分的对应衣壳蛋白。作为非限制性实例，一些实施方案中，包含经修饰以包含结合对的第一成员的嵌合AAV2/AAAV VP1衣壳蛋白的镶嵌衣壳可以进一步包含以下各项作为参考衣壳蛋白：缺乏第一成员的AAV2 VP1衣壳蛋白、缺乏第一成员的AAAV VP1衣壳蛋白、缺乏第一成员的嵌合AAV2/AAAV VP1衣壳蛋白。类似地，一些实施方案中，包含经修饰以包含结合对的第一成员的嵌合AAV2/AAAV VP2衣壳蛋白的镶嵌衣壳可以进一步包含以下各项作为参考衣壳蛋白：缺乏第一成员的AAV2 VP2衣壳蛋白、缺乏第一成员的AAAV VP1衣壳蛋白、缺乏第一成员的嵌合AAV2/AAAV VP2衣壳蛋白。一些实施方案中，包含经修饰以包含结合对的第一成员的嵌合AAV2/AAAV VP3衣壳蛋白的镶嵌衣壳可以进一步包含以下各项作为参考衣壳蛋白：缺乏第一成员的AAV2 VP2衣壳蛋白、缺乏第一成员的AAAV VP1衣壳蛋白、缺乏第一成员的嵌合AAV2/AAAV VP3衣壳蛋白。在一些镶嵌衣壳实施方案中，参考衣壳蛋白可以是任何衣壳蛋白，只要它缺乏结合对的第一成员并且能够与用结合对的第一成员修饰的第一衣壳蛋白形成衣壳。
通常，可以通过将经修饰的Cap基因和参考Cap基因的混合物以所指示比率转染到生产细胞中来产生镶嵌颗粒。颗粒中的蛋白质亚基比率（例如，经修饰的VP蛋白:未经修饰的VP蛋白的比率）可以但不一定在化学计量上反映至少两个物种的比率：编码用结合对的第一成员修饰的第一衣壳蛋白的cap基因和一个或多个参考cap基因，例如转染到包装细胞中的经修饰的cap基因:参考cap基因。在一些实施方案中，颗粒中的蛋白质亚基比率不在化学计量上反映转染到包装细胞中的经修饰的cap基因:参考cap基因的比率。
在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基比率的范围为约1:59至约59:1。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基为至少约1:1（例如，镶嵌病毒颗粒包含约30个经修饰的衣壳蛋白和约30个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:2（例如，镶嵌病毒颗粒包含约20个经修饰的衣壳蛋白和约40个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约3:5。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:3（例如，镶嵌病毒颗粒包含约15个经修饰的衣壳蛋白和约45个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:4（例如，镶嵌病毒颗粒包含约12个经修饰的衣壳蛋白和48个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:5（例如，镶嵌病毒颗粒包含约10个经修饰的衣壳蛋白和50个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:6。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:7。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:8。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:9（例如，镶嵌病毒颗粒包含约6个经修饰的衣壳蛋白和约54个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:10。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:11（例如，镶嵌病毒颗粒包含约5个经修饰的衣壳蛋白和约55个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:12。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:13。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:14（例如，镶嵌病毒颗粒包含约4个经修饰的衣壳蛋白和约56个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:15。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:19（例如，镶嵌病毒颗粒包含约3个经修饰的衣壳蛋白和约57个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:29（例如，镶嵌病毒颗粒包含约2个经修饰的衣壳蛋白和约58个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约1:59。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约2:1（例如，镶嵌病毒颗粒包含约40个经修饰的衣壳蛋白和约20个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约5:3。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约3:1（例如，镶嵌病毒颗粒包含约45个经修饰的衣壳蛋白和约15个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约4:1（例如，镶嵌病毒颗粒包含约48个经修饰的衣壳蛋白和12个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约5:1（例如，镶嵌病毒颗粒包含约50个经修饰的衣壳蛋白和10个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约6:1。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约7:1。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约8:1。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约9:1（例如，镶嵌病毒颗粒包含约54个经修饰的衣壳蛋白和约6个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约10:1。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约11:1（例如，镶嵌病毒颗粒包含约55个经修饰的衣壳蛋白和约5个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约12:1。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约13:1。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约14:1（例如，镶嵌病毒颗粒包含约56个经修饰的衣壳蛋白和约4个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约15:1。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约19:1（例如，镶嵌病毒颗粒包含约57个经修饰的衣壳蛋白和约3个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约29:1（例如，镶嵌病毒颗粒包含约58个经修饰的衣壳蛋白和约2个参考衣壳蛋白）。在一些镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基的比率为至少约59:1。
在一些非镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基比率可以为1:0，其中非镶嵌病毒颗粒的每个衣壳蛋白用结合对的第一成员修饰。在一些非镶嵌病毒颗粒实施方案中，蛋白质亚基比率可以为0:1，其中非镶嵌病毒颗粒的每个衣壳蛋白未用结合对的第一成员修饰。
本文还提供了对本发明的VP3衣壳蛋白进行编码的核酸。AAV衣壳蛋白可以但不一定由具有交错起始密码子的相同基因的重叠阅读框编码。在一些实施方案中，对本发明的VP3衣壳蛋白进行编码的核酸不对本发明的VP2衣壳蛋白或VP1衣壳蛋白也进行编码。在一些实施方案中，对本发明的VP3衣壳蛋白进行编码的核酸也可以对本发明的VP2衣壳蛋白进行编码，但不对本发明的VP1衣壳也进行编码。在一些实施方案中，对本发明的VP3衣壳蛋白进行编码的核酸也可以对本发明的VP2衣壳蛋白和本发明的VP1衣壳进行编码。
本发明的一个实施方案是包含本发明的经修饰的病毒衣壳蛋白的多聚体结构。多聚体结构包含至少5个、优选地至少10个、更优选地至少30个、最优选地至少60个如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白，这些经修饰的病毒衣壳蛋白包含特异性结合对的第一成员。其可以形成常规病毒衣壳（空病毒颗粒）或病毒颗粒（使目的核苷酸衣壳化的衣壳）。包含病毒基因组的病毒颗粒的形成是使用本文所描述的经修饰的病毒衣壳的高度优选特征。
本发明的另外的实施方案是至少一种经修饰的病毒衣壳蛋白和/或对其进行编码的核酸的用途，优选地至少一种多聚体结构（例如，病毒颗粒）用于制造目的核苷酸并用于将目的核苷酸转移到靶细胞（例如，肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞、它们的任何组合等）中的用途。
插入位点
由于至少大区段的高保守度和紧密相关的家族成员的大成员，可以通过进行氨基酸比对或通过衣壳结构比较来鉴定除列举的AAV以外的AAV的对应插入位点。参见例如，Rutledge等人. (1998) J. Virol. 72:309-19；Mietzsch等人 (2019) Viruses 11, 362,1-34和美国专利第9,624,274号，用于不同AAV衣壳蛋白的示例性比对，这些文献中的每一篇通过引用整体并入本文。例如，Mietzcsh等人 (2019)在图7处提供了来自不同依赖性细小病毒的条带的覆盖，从而描绘了可变区VR I至VR IX。使用如本文所描述的此类结构分析，以及序列分析，技术人员可以确定可变区内的哪些氨基酸对应于AAV的氨基酸序列，该AAV可以适应例如如本文所描述的靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记的插入。
通常，靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记可以插入到AAV衣壳蛋白的可变区或可变环、AAV衣壳蛋白的GH环等中。在一些实施方案中，靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记可以插入AAV衣壳蛋白的可变区或可变环VRI中。在一些实施方案中，靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记可以插入AAV衣壳蛋白的可变区或可变环VRII中。在一些实施方案中，靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记可以插入AAV衣壳蛋白的可变区或可变环VRIII中。在一些实施方案中，靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记可以插入AAV衣壳蛋白的可变区或可变环VRIV中。在一些实施方案中，靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记可以插入AAV衣壳蛋白的可变区或可变环VRV中。在一些实施方案中，靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记可以插入AAV衣壳蛋白的可变区或可变环VRV中。在一些实施方案中，靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记可以插入AAV衣壳蛋白的可变区或可变环VRVI中。在一些实施方案中，靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记可以插入AAV衣壳蛋白的可变区或可变环VRVII中。在一些实施方案中，靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记可以插入AAV衣壳蛋白的可变区或可变环VRIII中。在一些实施方案中，靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记可以插入AAV衣壳蛋白的可变区或可变环VRIX中。
在一些实施方案中，将结合对的第一成员和/或可检测标记插入到非灵长类动物AAV的VP1衣壳蛋白中，位于与选自由以下组成的组的氨基酸位置相对应的氨基酸位置之后：AAV2衣壳蛋白VP1的G453、AAV2衣壳蛋白VP1的N587、AAV9衣壳蛋白VP1的G453和AAV9衣壳蛋白VP1的A589。在一些实施方案中，将结合对的第一成员和/或可检测标记到插入非灵长类动物AAV的VP1衣壳蛋白中，位于与AAV2 VP1衣壳的N587和R588相对应的氨基酸之间。
本文中的命名法I-###、I#等是指用###命名相对于AAV衣壳蛋白的VP1蛋白的氨基酸编号的插入位点(I)，然而，此类插入可以直接定位于N末端或末C端，优选地位于给定氨基酸的5个氨基酸的N末端或C末端，优选地给定氨基酸的3个、更优选地2个、尤其1个氨基酸的N末端或C末端的序列中的一个氨基酸的C末端。另外，本文中所提及的位置是相对于由AAV衣壳基因编码的VP1蛋白的，并且可以通过进行由适当的AAV衣壳基因编码的VP1、VP2和VP3蛋白的序列比对而容易地鉴定由衣壳基因编码的VP2和VP3衣壳蛋白的对应位置（及其点突变）。
非灵长类动物VP1衣壳蛋白的另外的合适插入位点包括对应于AAV2的VP1衣壳蛋白的I-1、I-34、I-138、I-139、I-161、I261、I-266、I-381、I-447、I-448、I-459、I-471、I-520、I-534、I-570、I-573、I-584、I-587、I-588、I591、I-657、I-664、I-713和I-716的位点（Wu等人 (2000) J. Virol. 74:8635-8647）。如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白可以是非灵长类动物衣壳蛋白，其包含插入到与AAV2衣壳蛋白的选自由以下组成的组的位置相对应的位置中的结合对的第一成员和/或可检测标记：I-1、I-34、I-138、I-139、I-161、I261、I-266、I-381、I-447、I-448、I-459、I-471、I-520、I-534、I-570、I-573、I-584、I-587、I-588、I591、I-657、I-664、I-713、I-716及其组合。非灵长类动物AAV的另外的合适插入位点包括对应于AAV1的I-587或I-590、AAV1的I-589、AAV3的I-585、AAV4的I-584或I-585以及AAV5的I-575或I-585的位点。在一些实施方案中，如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白可以是非灵长类动物衣壳蛋白，其包含插入到与选自由以下组成的组的位置相对应的位置中的靶向配体、结合对的第一成员和/或可检测标记：I-587（AAV1）、I-589（AAV1）、I-585（AAV3）、I-585（AAV4）、I-585（AAV5）及其组合。
在一些实施方案中，将结合对的第一成员和/或可检测标记插入到非灵长类动物AAV的VP1衣壳蛋白中，位于与选自由以下组成的组的氨基酸位置相对应的氨基酸位置之后：禽类AAV衣壳蛋白VP1的I444、禽类AAV衣壳蛋白VP1的I580、鬃狮蜥AAV衣壳蛋白VP1的I573、鬃狮蜥AAV衣壳蛋白VP1的I436、海狮AAV衣壳蛋白VP1的I429、海狮AAV衣壳蛋白VP1的I430、海狮AAV衣壳蛋白VP1的I431、海狮AAV衣壳蛋白VP1的I432、海狮AAV衣壳蛋白VP1的I433、海狮AAV衣壳蛋白VP1的I434、海狮AAV衣壳蛋白VP1的I436、海狮AAV衣壳蛋白VP1的I437和海狮AAV衣壳蛋白VP1的I565。
插入到cap基因的这些位点之一的编码核酸的对应位置中使得插入到VP1、VP2和/或VP3中，因为衣壳蛋白由具有交错起始密码子的相同基因的重叠阅读框编码。因此，对于AAV2，例如，根据此命名法，插入在氨基酸1与138之间为仅插入到VP1中，插入在138与203之间为插入到VP1和VP2中，并且插入在203与C末端之间为插入到VP1、VP2和VP3中，对于插入位点I-587情况当然也是如此。因此，本发明涵盖在VP1、VP2和/或VP3蛋白中具有对应插入的AAV的结构基因。
转导效率
在一些实施方案中，包含具有结合对的第一成员和第二成员（例如，其中第二成员可操作地连接至靶向配体、包含多特异性结合蛋白等）的经修饰的病毒衣壳蛋白的病毒衣壳能够感染特定细胞，例如与对照病毒衣壳相比，具有增强的靶向和结合特定细胞的能力，该对照病毒衣壳除了缺乏结合对的第一成员和第二成员中的一者或两者之外，与经修饰的病毒衣壳蛋白相同，例如包含对照衣壳蛋白。在一些实施方案中，与对照病毒衣壳的不可检测的转导效率相比，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出可检测的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高10%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高20%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高30%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高40%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高50%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高60%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高70%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高75%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高80%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高85%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照衣壳的转导效率高90%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高95%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高99%的转导效率。
在一些实施方案中，包含具有结合对的第一成员和第二成员（例如，其中第二成员可操作地连接至靶向配体、包含多特异性结合蛋白等）的经修饰的病毒衣壳蛋白的病毒衣壳能够感染特定细胞，例如与对照病毒衣壳相比，具有增强的靶向和结合特定细胞的能力，该对照病毒衣壳除了缺乏结合对的第一成员和第二成员中的一者或两者之外，与经修饰的病毒衣壳蛋白相同，例如包含对照衣壳蛋白。在一些实施方案中，与对照病毒衣壳的不可检测的转导效率相比，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出可检测的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高10%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高20%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高30%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高40%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高50%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高60%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高70%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高75%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高80%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高85%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照衣壳的转导效率高90%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高95%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出比对照病毒衣壳的转导效率高99%的转导效率。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少1.5倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少2倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少3倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少4倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少5倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少6倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少7倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少8倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少9倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少10倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照衣壳的转导效率的至少20倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少30倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少40倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少50倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少60倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少70倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少80倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少90倍。在一些实施方案中，包含如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白（其结合至与靶向配体连接的结合对的第一成员和第二成员）的病毒衣壳表现出的转导效率为对照病毒衣壳的转导效率的至少100倍 在一些实施方案中，与适当的对照病毒颗粒（例如，包含AAV血清型的病毒衣壳，来自该血清型的一部分被包含在发明中的病毒衣壳中，例如作为病毒衣壳蛋白的一部分，该病毒衣壳蛋白包含非灵长类动物AAV、远源AAV或其组合的衣壳蛋白的氨基酸序列）相比，包含具有非灵长类动物AAV、远源AAV或其组合的衣壳蛋白的氨基酸序列并且任选地具有结合对的第一成员和第二成员（例如，其中第二成员可操作地连接至靶向配体、包含多特异性结合蛋白等）的病毒衣壳蛋白的本发明的病毒颗粒能够更好地逃避从人类患者分离的血清中预先存在的抗体的中和作用，该对照病毒颗粒还任选地包含结合对的第一成员和第二成员（例如，其中第二成员可操作地连接至靶向配体、包含多特异性结合蛋白等）。在一些实施方案中，与适当的对照病毒颗粒相比，包含具有非灵长类动物AAV、远源AAV或其组合的衣壳蛋白的氨基酸序列的病毒衣壳蛋白的本发明的病毒颗粒需要至少2倍的总IVIG或IgG用于中和作用（例如，50%或更多的感染抑制），例如（例如，本发明的病毒颗粒的IC50值为对照病毒颗粒的IC50值的至少2倍）。
抗原结合分子的治疗配制物和施用
本文还描述了包含如本文所描述的抗原结合分子的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物可以与合适的载剂、赋形剂和提供改善的转移、递送、耐受性等的其他药剂一起配制。众多的适当配制物可见于所有医药化学家已知的配方集中：Remington’sPharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA。这些配制物包括例如粉末剂、糊剂、软膏剂、凝胶剂、蜡、油、脂质、含脂质（阳离子或阴离子）囊泡（诸如LIPOFECTIN™, Life Technologies, Carlsbad, CA）、DNA缀合物、无水吸收糊剂、水包油和油包水乳液、乳剂碳蜡（各种分子量的聚乙二醇）、半固体凝胶剂和含有碳蜡的半固体混合物。还参见Powell等人 “Compendium of excipients for parenteral formulations”PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311。
施用于患者的抗原结合分子的剂量可以根据患者的年龄和体型、目标疾病、疾患、施用途径等而变化。优选的剂量通常根据体重或体表面积来计算。当如本文所描述的抗原结合分子在成年患者中用于治疗目的时，通常以约0.01至约20 mg/kg体重、更优选地约0.02至约7、约0.03至约5、或约0.05至约3 mg/kg体重的单剂量静脉内施用如本文所描述的抗原结合分子可能是有利的。视疾患的严重程度而定，可以调整治疗的频率和持续时间。可以凭经验确定双特异性抗原结合分子施用的有效剂量和排程；例如，可以通过定期评估来监测患者进展，并且相应地调整剂量。此外，可以使用本领域众所周知的方法进行剂量的物种间按比例缩放（例如，Mordenti等人, 1991, Pharmaceut. Res. 8:1351）。
各种递送系统是已知的，并且可用于施用如本文所描述的药物组合物，例如包封在脂质体、微粒、微胶囊、能够表达突变病毒的重组细胞中，受体介导的内吞作用（参见例 如，Wu等人, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432）。引入的方法包括但不限于真皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。组合物可通过任何便利的途径来施用，例如通过输注或推注、通过经上皮或黏膜皮肤衬里（例如，口腔黏膜、直肠黏膜和肠黏膜等）吸收施用，并且可与其他生物活性剂一起施用。施用可以是全身性或局部的。
可以用标准针头和注射器皮下或静脉内递送如本文所描述的药物组合物。此外，就皮下递送而言，笔式递送装置易于应用于递送如本文所描述的药物组合物。这种笔式递送装置可为可重复使用的或一次性的。可重复使用的笔式递送装置通常利用包含药物组合物的可替换药筒。一旦药筒内的所有药物组合物都已施用并且药筒变空时，即可容易地丢弃空药筒并替换为包含药物组合物的新药筒。然后，可再次使用笔式递送装置。在一次性笔式递送装置中，没有可替换药筒。实际上，一次性笔式递送装置在装置内的储药仓中预灌封有药物组合物。一旦储药仓中的药物组合物被排空，即丢弃整个装置。
许多可重复使用的笔式递送装置和自动注射器递送装置应用于皮下递送如本文所描述的药物组合物。实例包括但不限于AUTOPEN™（Owen Mumford, Inc., Woodstock,UK）、DISETRONIC™笔（Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland）、HUMALOGMIX 75/25™笔、HUMALOG™笔、HUMALIN 70/30™笔（Eli Lilly and Co., Indianapolis,IN）、NOVOPEN™ I、II和III（Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark）、NOVOPEN JUNIOR™（Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark）、BD™笔（Becton Dickinson, Franklin Lakes,NJ）、OPTIPEN™、OPTIPEN PRO™、OPTIPEN STARLET™和OPTICLIK™（sanofi-aventis,Frankfurt, Germany）等。应用于皮下递送如本文所描述的药物组合物的一次性笔式递送装置的实例包括但不限于SOLOSTAR™笔（sanofi-aventis）、FLEXPEN™（Novo Nordisk）、和KWIKPEN™（Eli Lilly）、SURECLICKTM自动注射器（Amgen, Thousand Oaks, CA）、PENLETTM（Haselmeier, Stuttgart, Germany）、EPIPEN（Dey, L.P.）、和HUMIRATM笔（Abbott Labs,Abbott Park IL）等。
在某些情形下，可在控释系统中递送药物组合物。在一个实施方案中，可以使用泵（参见Langer, 同上；Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201）。在另一个实施方案中，可以使用聚合物材料；参见Medical Applications of Controlled Release,Langer和Wise (编辑), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida。在又一个实施方案中，可以将控释系统放置于组合物靶标附近，因此只需要全身剂量的一小部分（参见例如，Goodson, 1984, 载于Medical Applications of Controlled Release, 同上, 第2卷,第115-138页）。在Langer, 1990, Science 249:1527-1533的综述中讨论了其他控释系统。
注射制剂可包括用于静脉内、皮下、皮内和肌内注射、静脉滴注等的剂型。这些可注射制剂可以通过众所周知的方法制备。举例来说，可以例如通过将上文所描述的抗体或其盐溶解、悬浮或乳化于常规地用于注射的无菌水性介质或油性介质中来制备可注射制剂。作为用于注射的水性介质，有例如生理盐水、含有葡萄糖和其他辅助剂的等渗溶液等，它们可以与适当的增溶剂（诸如醇（例如，乙醇）、多元醇（例如，丙二醇、聚乙二醇）、非离子表面活性剂[例如，聚山梨醇酯80、HCO-50（氢化蓖麻油的聚氧乙烯（50 mol）加合物）]等）组合使用。作为油性介质，采用例如芝麻油、大豆油等，它们可以与增溶剂（诸如苯甲酸苄酯、苄醇等）组合使用。由此制备的注射剂优选被灌封于适当的安瓿中。
有利地，将上文所描述的用于口服或肠道外使用的药物组合物制备成适用于适配活性成分剂量的单位剂量的剂型。此类呈单位剂量的剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂（安瓿）、栓剂等。所含有的前述抗体的量通常为在单位剂量中每剂型约5 mg至约500mg；尤其是在注射形式中，对于其他剂型，所含有的前述抗体的量为约5 mg至约100 mg和约10 mg至约250 mg是优选的。
病毒颗粒的药物组合物、剂型和施用
另外的实施方案提供一种药物，该药物包括至少一种根据本发明的经修饰的病毒衣壳蛋白和适当的靶向配体和/或根据本发明的核酸。优选地，此类药物可用于基因转移颗粒。
本文还公开包括本文所描述的病毒颗粒和药学上可接受的载剂和/或赋形剂的药物组合物。另外，本文公开包括本文所描述的病毒颗粒的药物剂型。
如本文所讨论的，本文所描述的病毒颗粒可用于各种治疗应用（体内和离体）和作为研究工具。
本文公开的基于病毒颗粒的药物组合物可使用一种或多种生理学上可接受的载剂和/或赋形剂以任何常规方式配制。病毒颗粒可被配制成用于通过例如注射、吸入或隔离（通过口腔或鼻子）施用，或通过经口、经颊、非经肠或经直肠施用，或通过直接施用至肿瘤。
药物组合物可被配制成用于多种施用模式，包含全身、局部或局部化施用。技术和配制物可见于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences, Meade Publishing Co.,Easton, Pa。对于全身施用，优选注射，包括肌内、静脉内、腹膜内和皮下。出于注射目的，药物组合物可在液体溶液中，优选地在生理学上相容的缓冲液，如汉克氏溶液（Hank'ssolution）或林格氏溶液（Ringer's solution）中配制。另外，药物组合物可以固体形式配制且在使用前立即再溶解或悬浮。药物组合物的冻干形式也是合适的。
对于口服施用，药物组合物可以采取例如通过常规手段用药学上可接受的赋形剂制备的片剂或胶囊的形式，诸如结合剂（例如，预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素）；填料（例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙）；润滑剂（例如，硬脂酸镁、滑石或二氧化硅）；崩解剂（例如，马铃薯淀粉或淀粉乙醇酸钠）；或润湿剂（例如，十二烷基硫酸钠）。片剂也可通过所属领域中众所周知的方法包覆。用于经口施用的液体制剂可呈例如溶液、糖浆或悬浮液形式，或其可以干燥产品形式呈现，在使用之前用水或其他合适的媒剂复原。这种液体制剂可以通过常规手段用药学上可接受的添加剂制备，诸如悬浮剂（例如，山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪）；乳化剂（例如，卵磷脂或阿拉伯胶）；非水性媒剂（例如，油、油性酯、乙醇或分馏植物油）；和防腐剂（例如，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸）。这些制剂在适当时还可含有缓冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。
药物组合物可以配制用于通过注射，例如通过推注或连续输注而肠胃外施用。用于注射的配制物可以单位剂型例如存在于安瓿或多剂量容器中，任选地添加防腐剂。药物组合物可进一步配制为油性或水性媒剂中的悬浮液、溶液或乳液，且可含有其他试剂，包含悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
另外，药物组合物还可配制为积存制剂。这些长效配制物可以通过植入（例如，皮下或肌内）或通过肌内注射施用。因此，例如，化合物可以与合适的聚合物或疏水材料（例如，作为在可接受的油中的乳液）或离子交换树脂一起配制，或作为微溶衍生物，例如作为微溶盐。其他合适的递送系统包含微球，其使得有可能在长时段内局部非侵入性递送药物。此技术可包含具有前毛细管尺寸的微球，其可通过冠状动脉导管注射至器官的任何选定部分中而不引起发炎或缺血。施用的治疗剂从微球缓慢释放且由所选组织中存在的周围细胞吸收。
全身施用还可通过经粘膜或经皮方式进行。对于经粘膜或经皮施用，在配制物中使用适于渗透屏障的渗透剂。此类渗透剂为所属领域中一般已知的，且例如对于经粘膜施用包含胆盐和梭链孢酸衍生物。此外，清洁剂可用于促进渗透。经粘膜施用可使用鼻喷雾剂或栓剂进行。对于局部施用，本文所描述的病毒颗粒可配制成所属领域中一般已知的软膏、药膏、凝胶或乳膏。也可局部使用洗涤溶液来治疗损伤或发炎，以加速愈合。
适合于注射使用的药物形式可包含无菌水溶液或分散液；包含芝麻油、花生油或水性丙二醇的配制物；和用于无菌可注射溶液或分散液的即用型制剂的无菌粉末。在所有情况下，该形式必须为无菌的却必须为流体。它必须在制造条件和某些储存参数（例如，冷藏和冷冻）下稳定，并且必须防止微生物（诸如细菌和真菌）的污染作用。
如果本文公开的配制物用作增强受试者的免疫反应的治疗剂，则治疗剂可配制成中性或盐形式的组合物。药学上可接受的盐包含酸加成盐（由蛋白质的游离氨基形成），并且其由诸如例如盐酸或磷酸的无机酸，或诸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等的有机酸形成。由游离羧基形成的盐也可源自无机碱，诸如例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁，和有机碱，如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因（procaine）等。
载剂也可为含有例如水、乙醇、多元醇（例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等）、它们的合适的混合物和植物油的溶剂或分散介质。可例如通过使用诸如卵磷脂的涂层、通过在分散液的情况下维持所需的粒度和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。可通过所属领域中已知的各种抗细菌剂和抗真菌剂实现微生物作用的预防。在许多情况下，将优选地包含等渗剂，例如糖或氯化钠。通过在组合物中使用延迟吸收剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可实现可注射组合物的长期吸收。
可通过将所需量的活性化合物或构筑体与上文列举的各种其他成分一起并入适当溶剂中，视需要接着过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。
在配制后，溶液可以与剂量配制物相容的方式并且以治疗有效的量施用。配制物易于以多种剂型施用，如上文所描述的可注射溶液的类型，但也可采用缓释胶囊或微粒和微球等。
例如，对于在水溶液中的非经肠施用，必要时应适当地缓冲溶液，且首先用足够生理盐水或葡糖使液体稀释剂呈现等渗。这些特定水溶液尤其适合于静脉内、瘤内、肌肉内、皮下和腹膜内施用。在此上下文中，可采用的无菌水性介质将为所属领域的技术人员鉴于本公开所已知的。例如，一个剂量可溶解于1 ml等渗NaCl溶液中，并且添加至1000 ml皮下输液流体或注射于提出的输注部位。
负责施用的人员将在任何情况下确定单独受试者的合适剂量。例如，根据需要或暴露于病原性生物体或受试者的疾患（例如，癌症），可以在一段时间内每天或每周或每月、每两年或每年向受试者施用本文所描述的病毒颗粒。
除了配制用于肠胃外施用（诸如静脉内、肿瘤内、皮内或肌肉内注射）的化合物之外，其他药学上可接受的形式包括例如用于口服施用的片剂或其他固体；脂质体配制物；定时释放胶囊；可生物降解的和目前使用的任何其他形式。
还可使用鼻内或可吸入溶液或喷雾、气溶胶或吸入剂。鼻用溶液可为被设计成以滴剂或喷雾向鼻通道施用的水溶液。可制备鼻用溶液，以使其在许多方面类似于鼻分泌物。因此，水性鼻用溶液通常为等渗的且被略微缓冲以维持5.5至7.5的pH。另外，必要时可在配制物中包含抗微生物防腐剂（与用于眼用制剂的那些类似）和适当的药物稳定剂。各种商业鼻用制剂为已知的，且可包含例如抗生素和抗组织胺且用于预防哮喘。
口服配制物可包含赋形剂，如例如药物级的甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。这些组合物采用溶液、悬浮液、片剂、丸剂、胶囊、持续释放配制物或粉末的形式。在某些限定的实施方案中，口服药物组合物将包含惰性稀释剂或可吸收的可食用载剂，或其可封闭于硬壳或软壳明胶胶囊中，或其可压缩成片剂，或其可直接与饮食合并。对于口服治疗施用，活性化合物可与赋形剂合并且以可摄取的片剂、口含片、糖衣片、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、粉片等形式使用。
片剂、糖衣片、丸剂、胶囊等还可含有以下：粘合剂，例如黄芪胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、褐藻酸等；润滑剂，例如硬脂酸镁；且可添加甜味剂，例如蔗糖、乳糖或糖精；或调味剂，例如胡椒薄荷、冬青油或樱桃调味剂。当单位剂型为胶囊时，除了上述类型的材料之外，其可含有液体载剂。各种其他材料可以涂层形式存在或用来以其他方式调节剂量单位的物理形式。例如，片剂、丸剂或胶囊可用虫胶、糖或两者包覆。酏剂的糖浆可含有活性化合物、作为甜味剂的蔗糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料以及调味剂，如樱桃或橙味调味剂。
本文公开的其他实施方案可涉及与方法和组合物一起使用的试剂盒。试剂盒还可包含合适的容器，例如小瓶、管、微型或微量离心管、试管、烧瓶、瓶、注射器或其他容器。当提供另外的组分或试剂时，试剂盒可含有一个或多个可将此试剂或组分放入其中的另外的容器。本文的试剂盒通常还将包含用于容纳病毒颗粒的装置和任何其他密闭的试剂容器以供商业销售。此类容器可包含注射或吹塑成型塑料容器，其中可存留所需小瓶。任选地，所描述的组合物可能需要一种或多种另外的活性剂，诸如例如抗炎剂、抗病毒剂、抗真菌剂或抗细菌剂或抗肿瘤剂。
本文公开的组合物可通过所属领域中已知的任何方式施用。例如，组合物可包含静脉内、瘤内、皮内、动脉内、腹膜内、病灶内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、局部、瘤内、肌肉内、鞘内、皮下、结膜下、囊泡内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口、局部、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注、通过导管、通过灌洗、在乳膏中或在脂质组合物中向受试者施用。
所属领域的技术人员已知的任何方法可用于大规模产生本文所描述的病毒颗粒、包装细胞和颗粒构筑体。例如，可在GMP条件下在合格的原代CEF中或通过其他方法制备母液和工作种子储备液。包装细胞可涂铺于大表面积的烧瓶上，生长至接近汇合且纯化病毒颗粒。可收获细胞且将病毒颗粒释放至培养基中，分离且纯化，或通过机械破坏释放细胞内病毒颗粒（细胞碎片可通过大孔深度过滤去除且用核酸内切酶消化宿主细胞DNA）。病毒颗粒可随后通过切向流过滤，接着透滤来纯化和浓缩。所得浓缩的块体可通过用含有稳定剂的缓冲液稀释来配制，填充至小瓶中且冻干。组合物和配制物可储存以供后续使用。为了使用，冻干的病毒颗粒可通过添加稀释剂复原。
用于组合疗法的某些额外药剂可通过所属领域中已知的任何方法来配制和施用。
如本文中所公开的组合物还可包含佐剂（诸如铝盐和其他矿物质佐剂）、表面活性剂、细菌衍生物、媒剂和细胞因子。佐剂还可具有拮抗免疫调节特性。例如，佐剂可刺激Th1或Th2免疫性。如本文中所公开的组合物和方法还可包含辅助疗法。
抗原结合分子的治疗和诊断用途
本文公开了例如抑制细胞中的CDH15的活性的方法。该方法可以包括使表达CDH15的细胞（例如，体外、离体或体内）与本公开的抗hCDH15抗体、其抗原结合片段或其药物组合物接触。CDH15的活性包括但不限于例如通过抑制表达CDH15的肌肉干细胞的活化来抑制肌肉再生。
在各种实施方案中，表达CDH15的细胞是肌肉细胞。在一些实施方案中，细胞是哺乳动物肌肉细胞。在一些实施方案中，细胞是哺乳动物骨骼肌细胞。在一些实施方案中，细胞是未终末分化的哺乳动物骨骼肌细胞。在一些实施方案中，细胞是终末分化的哺乳动物骨骼肌细胞。在一些实施方案中，细胞是肌肉干细胞、成肌细胞或肌细胞。在一些实施方案中，细胞是人横纹肌肉瘤细胞。
本文还公开了加速肌肉干细胞从静息到活化的转变的方法，其包括使肌肉干细胞（例如，体外、离体或体内）与本公开的抗hCDH15抗体、其抗原结合片段或其药物组合物接触。如本文所用，“静息”是指细胞的非活性、非增殖状态。例如，静息的肌肉干细胞不增殖或分化成肌纤维。如本文所用的关于肌肉干细胞的“活化”是指肌肉干细胞增殖和分化成肌纤维例如以促进受损肌肉的再生和/或修复的能力。
本文还公开了方法，其包括向有需要的受试者施用包含抗hCDH15抗体、其抗原结合片段的组合物（例如，治疗组合物）或包含抗hCDH15抗体的抗体-药物缀合物（例如，抗hCDH15抗体或包含如本文表1中所示的HCVR/LCVR或CDR序列中的任一者的ADC）。治疗组合物可以包含本文公开的抗hCDH15抗体、其抗原结合片段或ADC中的任一者，以及药学上可接受的载剂或稀释剂。
本文还公开了包含抗hCDH15抗体、其抗原结合片段或包含抗hCDH15抗体的抗体-药物缀合物的组合物（例如，治疗组合物）用于治疗如本文所公开的一种或多种疾患的用途。
本文还公开了包含抗hCDH15抗体、其抗原结合片段或包含抗hCDH15抗体的抗体-药物缀合物的组合物（例如，治疗组合物），其用作疗法，例如用于治疗如本文所公开的一种或多种疾患。
本文还公开了抗hCDH15抗体、其抗原结合片段或包含抗hCDH15抗体的抗体-药物缀合物在制造用于治疗如本文所公开的一种或多种疾患的药物中的用途。
如本文所描述的抗体、其抗原结合片段或包含抗hCDH15抗体的抗体-药物缀合物尤其可用于治疗、预防和/或改善一种或多种疾患，例如与骨骼肌组织相关的任何疾病或病症。例如，如本文所描述的抗体和ADC可用于治疗肌肉消耗性病症（例如，恶病质、糖皮质激素诱导的肌肉损失、心力衰竭诱导的肌肉损失、HIV消耗、废用、衰老等）、肌营养不良症/肌病和/或肌肉相关癌症（例如，横纹肌肉瘤）。
在另一个实施方案中，提供了一种治疗疾病（诸如肌肉萎缩病症）的方法。该方法可以包括向需要所述治疗的受试者提供如上文所描述的抗体或其CDH15抗原结合片段的步骤。
在另一个实施方案中，提供了一种治疗肌肉相关癌症的方法。该方法可以包括向需要所述治疗的受试者提供如上文所描述的抗体或其CDH15抗原结合片段的步骤。肌肉特异性癌症的非限制性实例包括横纹肌肉瘤，例如胚胎性横纹肌肉瘤、肺泡性横纹肌肉瘤、多形性横纹肌肉瘤、葡萄状横纹肌肉瘤和梭形细胞/硬化性横纹肌肉瘤。
在另一个实施方案中，提供了一种治疗肌肉损伤的方法。该方法可以包括向需要所述治疗的受试者（例如，已经经历肌肉损伤和/或预期经历肌肉损伤的受试者）提供如上文所描述的抗体或其CDH15抗原结合片段的步骤。因此，抗体或其CDH15抗原结合片段可以在损伤之前（例如，在肌肉损伤手术之前）或在损伤（例如，意外的肌肉损伤）之后施用。
在另一个实施方案中，提供了一种在损伤后改善受试者的肌肉再生的方法。该方法可以包括向需要所述治疗的受试者提供如上文所描述的抗体或其CDH15抗原结合片段的步骤。如本文所用，关于肌肉再生的“改善”是指肌肉修复的任何可测量的增加。例如，如果与对照受试者（例如，未施用抗CDH15抗体或其抗原结合片段的对照受试者）相比，肌肉再生以加速的速率和/或更大的程度发生，则可以认为受试者中的肌肉再生是“改善的”。“改善的”肌肉再生可以是至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少100%、至少200%、至少300%、至少400%或至少500%的速率或程度的增加。
在另一个实施方案中，提供了一种恢复老年受试者的肌肉再生能力的方法。该方法可以包括向需要所述治疗的受试者提供如上文所描述的抗体或其CDH15抗原结合片段的步骤。如本文所用，“恢复”是指恢复到先前功能状态的能力。例如，如果老年受试者的肌肉再生能力可以恢复到处于或接近对照受试者（例如，年轻年龄的相同受试者和/或代表年轻年龄的老年受试者的单独受试者）的肌肉再生能力，则老年受试者的肌肉再生能力可以被认为是“恢复的”。如果功能状态与先前功能状态或代表先前功能状态的一个或多个受试者的功能状态相当（例如，与先前功能状态没有统计学差异），则可以认为该功能状态是“恢复的”。如果功能状态与先前功能状态或代表先前功能状态的一个或多个受试者的功能状态相差不超过1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、45%、50%、60%、70%、80%或90%，则该功能状态也可被认为是“恢复的”。
如本文所描述的抗hCDH15抗体具有多种用途。例如，在一些实施方案中，如本文所描述的抗hCDH15抗体可用于CDH15的诊断测定，例如检测其在特定细胞、组织、等中的表达，例如作为鉴定/标记骨骼肌肉纤维和/或肌肉干细胞的试剂。可以使用本领域已知的各种诊断和预后测定技术，诸如竞争性结合测定、直接或间接夹心测定和在异相或同相中进行的免疫沉淀测定（Zola (1987) Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRCPress, Inc. 第147-1581页）。测定中使用的抗体可以用可检测部分标记。可检测部分应能够直接或间接地产生可检测信号。可以采用本领域已知的用于将抗体缀合至可检测部分的任何方法。
使用和制备病毒颗粒的方法
本文描述的经修饰的病毒衣壳的另一个实施方案是经修饰的病毒衣壳用于将目的核苷酸（例如，报告基因或治疗基因）递送至靶细胞（例如，肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞、它们的任何组合等）的用途。通常，包装目的核苷酸包括用目的基因替换AAV ITR序列之间的AAV基因组以产生转移质粒，然后根据众所周知的方法将其包封在AAV衣壳中。因此，如本文所描述的经修饰的病毒衣壳可以包封转移质粒和/或目的核苷酸，该转移质粒和/或目的核苷酸通常可以包含位于目的基因（例如，报告基因或治疗基因）或目的基因的一部分的侧翼的5'和3'反向末端重复（ITR）序列（其可以处于病毒或非病毒启动子的控制下）。根据众所周知的包装AAV病毒颗粒的方法，经修饰的病毒衣壳、5’ ITR和3’ ITR不需要具有相同的AAV血清型。在一个实施方案中，转移质粒和/或目的核苷酸从5’至3’包含：5’ ITR、启动子、基因（例如，报告基因和/或治疗基因）和3’ITR。
AAV转移质粒设计的考虑因素是野生型AAV基因组为约4.7kb。因此，本文包括提供包装超过单独AAV包装能力的目的核苷酸的众所周知的策略。此类策略包括但不限于双载体策略，这些双载体策略利用ITR介导的重组来表达比野生型AAV基因组更大的目的基因，该表达是通过跨来自两个互补载体基因组的分子间重组ITR进行转录剪接、通过同源性的载体重组、RNA反式剪接和/或经由分裂内含肽设计实现的蛋白质“反式剪接”来进行的。参见例如，Nakai, H.等人 (2000) Nat. Biotechnol. 18:527–532；Sun, L. (2000) Nat. Med. 6: 599–602 (2000)；Ghosh, A.等人 (2008) Mol. Ther. 16:124–130 (2008)；Lai,Y (2005) Nat. Biotechnol. 23:1435–1439；Chew, W. L.等人 (2016) Nat. Methods 13:868–874；Li, J. (2008) Hum. Gene Ther. 19:958–964，这些参考文献中的每一篇通过引用整体并入本文。
已经描述了将大基因转移到靶细胞中的双AAV载体策略，这些策略依赖于不同的机制，包括但不限于反式剪接、在双载体中包含重叠区域，以及两者的杂交体。Tornabene和Trapani (2020) Human Gene Ther. 31:4756；还参见美国专利第8,236,557号，这些文献中的每一篇通过引用整体并入本文。
反式剪接方法利用AAV ITR序列串联以重组全长基因组的能力，其中两个或更多个病毒衣壳中的每一者分别包封两个或更多个转移质粒中的一者，每个转移质粒都包含目的基因的一部分。例如，在双载体方法中，两个转移质粒可以如下设计：5’-转移质粒包含启动子、目的基因的编码序列的5’部分和剪接供体（SD）信号；3’-转移质粒包含剪接受体（SA）信号、目的基因的3’部分和polyA信号。在两个AAV基因组首尾相连的ITR介导的串联后，SD和SA信号将允许重组基因组的剪接。
当采用重叠区域方法时，大的目的基因也会被分裂。在重叠区域方法中，5’和3’部分（因此5’转移质粒和3’转移质粒）共享重组序列，例如同源区域，例如每个部分包含重叠序列。通过由重组原性序列（例如，同源/重叠区域）介导的同源重组，在靶细胞中使目的基因完整。
在杂交方法中，5’-转移质粒和3’-转移质粒各自包含高度重组序列，其中重组序列位于目的基因的编码序列的5’部分的SD信号的下游和目的基因的编码序列的3’部分的SA信号的上游。在这种杂交系统中，可以通过ITR介导的串联和剪接和/或通过同源重组而使目的基因完整。
也可以利用RNA或蛋白质水平的反式剪接。在RNA反式剪接方法中，两个转移质粒可以分别编码大基因的前体mRNA的5’和3’片段，并且共享有利于反式剪接的内含子杂交结构域，从而导致两个半转录物连接成完整的全长mRNA。
蛋白质反式剪接发生在翻译后，并且由被称为分裂内含肽的中间蛋白催化。分裂内含肽在两个宿主蛋白的末端表达为两个独立的多肽（N-内含肽和C-内含肽）。N-内含肽和C-内含肽多肽在彼此相遇之前保持催化失活。当彼此相遇时，每个内含肽从宿主蛋白中精确地切除自身，同时经由肽键介导N-和C-宿主多肽的连接。分裂内含肽用途已被用于肌肉、肝脏和视网膜疾病中治疗性目的基因的基于AAV的递送。例如，在共递送与N-和C-内含肽编码序列融合的两半迷你肌营养不良蛋白cDNA时，示出了两种多肽的有效产生。Li等人(2008) Hum Gene Ther 19:958-64。类似地，AAV分裂内含肽已被广泛用于成簇的规则间隔短回文重复序列（CRISPR）-Cas9核酸酶的表达和连接。
上述双载体方法在本领域是众所周知的。参见例如，Tornabene和Trapani(2020), 同上；美国专利第8,236,557号。因此，在一些实施方案中，本文描述的经修饰的病毒衣壳包封目的核苷酸，其中目的核苷酸包含目的基因的一部分。在一些实施方案中，包含目的基因的一部分的目的核苷酸进一步包含剪接供体信号或剪接受体信号和/或重组序列。在一些实施方案中，包含目的基因的一部分的目的核苷酸包含内含子杂交结构域编码序列。在一些实施方案中，包含目的基因的一部分的目的核苷酸包含N-内含肽或C-内含肽编码序列。
转移质粒/目的核苷酸的设计包括将控制目的基因的表达的一个或多个调控元件，例如启动子和/或增强子元件。有用启动子的非限制性实例包括例如巨细胞病毒（CMV）启动子、脾病灶形成病毒（SFFV）启动子、延伸因子1 α（EF1a）启动子（1.2 kb EFla启动子或0.2 kb EFla启动子）、嵌合EF 1 a/IF4-启动子和磷酸甘油酸激酶（PGK）启动子。内部增强子也可存在于病毒构建体中，以增加目的基因的表达。例如，可使用CMV增强子（Karasuyama等人 1989. J. Exp. Med. 169:13，该文献通过引用并入本文）。在一些实施方案中，CMV增强子可以与鸡β-肌动蛋白启动子组合使用。在一些实施方案中，组织特异性调控元件（例如，肌肉特异性启动子和/或调控元件）可用于驱动目的基因的表达。例如，基于肌肉肌酸激酶基因的肌特异性调控元件的使用已被用于肌肉基因疗法治疗，诸如杜氏肌营养不良症（DMD）和肢带型肌营养不良症（LGMD）。参见例如，Salva, M. Z.等人 (2007) Mol. Ther.15: 320–329，该文献通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，本文的转移质粒和/或目的核苷酸包含肌肉肌酸激酶（MCK）的增强子和/或启动子，其中MCK的增强子和/或启动子驱动目的基因的表达。在一些实施方案中，本文的转移质粒和/或目的核苷酸包含募集RNA聚合酶II的增强子和/或启动子元件，其中MCK的增强子和/或启动子驱动目的基因的表达。在一些实施方案中，本文的转移质粒和/或目的核苷酸包含募集RNA聚合酶III的增强子和/或启动子元件，其中MCK的增强子和/或启动子驱动目的基因的表达。
在一些实施方案中，双向启动子载体也用于递送双重治疗基因盒。这方面的一个实例是双向鸡β-肌动蛋白普遍存在的启动子，该启动子驱动HexA酶的己糖胺酶α-亚基和β-亚基的同时表达，这两个相应的基因参与泰萨氏病（Tay-Sachs）和桑霍夫病（Sandhoffdisease）。Lahey等人 (2020) Mol. Ther. 28: 2150–2160，其通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，本文的转移质粒和/或目的核苷酸包含双向启动子，其中该双向启动子驱动两个不同的目的基因的表达。
可以使多种报告基因（或可检测部分）衣壳化于包含本文描述的经修饰的病毒衣壳蛋白的多聚体结构中。示例性报告基因包括例如β-半乳糖苷酶（所编码的lacZ基因）、绿色荧光蛋白（GFP）、增强型绿色荧光蛋白（eGFP）、MmGFP、蓝色荧光蛋白（BFP）、增强型蓝色荧光蛋白（eBFP）、mPlum、mCherry、tdTomato、mStrawberry、J-Red、DsRed、mOrange、mKO、mCitrine、Venus、YPet、黄色荧光蛋白（YFP）、增强型黄色荧光蛋白（eYFP）、Emerald、CyPet、青色荧光蛋白（CFP）、Cerulean、T-Sapphire、荧光素酶、碱性磷酸酶或其组合。本文描述的方法展示了利用报告基因对绿色荧光蛋白进行编码的用途来构建靶向颗粒，然而，技术人员在阅读本公开后将理解，本文描述的病毒颗粒可以在不存在报告基因的情况下或在具有本领域中已知的任何报告基因的情况下产生。
也可以使多种治疗性基因衣壳化于包含本文描述的经修饰的病毒衣壳蛋白的多聚体结构中，例如作为转移颗粒的一部分。治疗性基因的非限制性实例包括编码毒素（例如，自杀基因）、治疗性抗体或其片段、CRISPR/Cas系统或其部分、反义RNA、siRNA、shRNA等的基因。
本发明的另外的实施方案是一种用于制备经修饰的衣壳蛋白的方法，该方法包括以下步骤：
a）在合适的条件下表达对经修饰的衣壳蛋白进行编码的核酸，以及
b）分离步骤a)的所表达的衣壳蛋白。
在一些实施方案中，如本文所描述的病毒颗粒包含镶嵌衣壳，例如包含与参考衣壳蛋白呈某一比率的如本文所描述进行基因修饰（在不存在或存在与靶向配体的共价键的情况下）的衣壳蛋白的衣壳。用于制备此类镶嵌病毒颗粒的方法包括：
a）在合适的条件下以至少约60:1至约1:60，例如2:1、1:1、3:5、1:2、1:3、1:8等比率（wt/wt）表达对经修饰的衣壳蛋白进行编码的核酸和对参考衣壳蛋白进行编码的核苷酸，以及
b）分离步骤a)的所表达的衣壳蛋白。
在一些实施方案中，本文描述的组合物包含以下各项，或本文描述的方法将以下各项组合：经修饰的cap基因:参考cap基因（或参考cap基因的组合），其比率的范围为至少约1:60至约60:1，例如2:1、1:1、3:5、1:2、1:3、1:8等。在一些实施方案中，该比率为至少约1:2。在一些实施方案中，该比率为至少约1:3。在一些实施方案中，该比率为至少约1:4。在一些实施方案中，该比率为至少约1:5。在一些实施方案中，该比率为至少约1:6。在一些实施方案中，该比率为至少约1:7。在一些实施方案中，该比率为至少约1:8。在一些实施方案中，该比率为至少约1:9。在一些实施方案中，该比率为至少约1:10。在一些实施方案中，该比率为至少约1:11。在一些实施方案中，该比率为至少约1:12。在一些实施方案中，该比率为至少约1:13。在一些实施方案中，该比率为至少约1:14。在一些实施方案中，该比率为至少约1:15。在一些实施方案中，该比率为至少约1:16。在一些实施方案中，该比率为至少约1:17。在一些实施方案中，该比率为至少约1:18。在一些实施方案中，该比率为至少约1:19。在一些实施方案中，该比率为至少约1:20。在一些实施方案中，该比率为至少约1:25。在一些实施方案中，该比率为至少约1:30。在一些实施方案中，该比率为至少约1:35。在一些实施方案中，该比率为至少约1:40。在一些实施方案中，该比率为至少约1:45。在一些实施方案中，该比率为至少约1:50。在一些实施方案中，该比率为至少约1:55。在一些实施方案中，该比率为至少约1:60。在一些实施方案中，该比率为至少约2:1。在一些实施方案中，该比率为至少约3:1。在一些实施方案中，该比率为至少约4:1。在一些实施方案中，该比率为至少约5:1。在一些实施方案中，该比率为至少约6:1。在一些实施方案中，该比率为至少约7:1。在一些实施方案中，该比率为至少约8:1。在一些实施方案中，该比率为至少约9:1。在一些实施方案中，该比率为至少约10:1。在一些实施方案中，该比率为至少约11:1。在一些实施方案中，该比率为至少约12:1。在一些实施方案中，该比率为至少约13:1。在一些实施方案中，该比率为至少约14:1。在一些实施方案中，该比率为至少约15:1。在一些实施方案中，该比率为至少约16:1。在一些实施方案中，该比率为至少约17:1。在一些实施方案中，该比率为至少约18:1。在一些实施方案中，该比率为至少约19:1。在一些实施方案中，该比率为至少约20:1。在一些实施方案中，该比率为至少约25:1。在一些实施方案中，该比率为至少约30:1。在一些实施方案中，该比率为至少约35:1。在一些实施方案中，该比率为至少约40:1。在一些实施方案中，该比率为至少约45:1。在一些实施方案中，该比率为至少约50:1。在一些实施方案中，该比率为至少约55:1。在一些实施方案中，该比率为至少约60:1。
在一些实施方案中，镶嵌病毒颗粒中的VP蛋白亚基的比率可以但不一定在化学计量上反映经修饰的cap基因:参考cap基因的比率。作为非限制性示例性实施方案，根据该方法形成的镶嵌衣壳的经修饰的衣壳蛋白:参考衣壳蛋白比率可以被认为但不一定与用于产生镶嵌衣壳的对其进行编码的核酸的比率（wt:wt）类似。在一些实施方案中，镶嵌衣壳包括约1:59至约59:1的蛋白质亚基比率。
本发明的另外的实施方案是一种用于改变病毒的趋向性的方法，该方法包括以下步骤：(a)将对氨基酸序列进行编码的核酸插入到对病毒衣壳蛋白进行编码的核酸序列中，以形成对包含氨基酸序列的经基因修饰的衣壳蛋白进行编码的核苷酸序列，和/或(b)在足以产生病毒颗粒的条件下培养包装细胞，其中包装细胞包含核酸。本发明的另外的实施方案是一种用于在衣壳蛋白的表面上展示靶向配体的方法，该方法包括以下步骤：(a)在合适的条件下表达对如本文所描述的经修饰的病毒衣壳蛋白进行编码的核酸（并且任选地与编码参考衣壳蛋白的核苷酸一起），其中该核酸编码包含特异性结合对的第一成员的衣壳蛋白，(b)分离步骤(a)的包含特异性结合对的第一成员的所表达的衣壳蛋白或包含该衣壳蛋白的衣壳，和(c)在适合于允许在第一成员与第二成员之间形成异肽键的条件下将该衣壳蛋白或衣壳与特异性结合对的第二同源成员一起温育，其中特异性结合对的第二同源成员与靶向配体融合。
在一些实施方案中，包装细胞进一步包含具有目的核苷酸的辅助质粒和/或转移质粒。在一些实施方案中，该方法进一步包括从培养上清液中分离自互补腺相关病毒颗粒。在一些实施方案中，该方法进一步包括裂解包装细胞以及从细胞裂解物中分离单链腺相关病毒颗粒。在一些实施方案中，该方法进一步包括(a)清除细胞碎片；(b)用核酸酶，例如DNase I和MgCl2处理含有病毒颗粒的上清液；(c)使病毒颗粒浓缩；(d)使病毒颗粒纯化；以及(e) (a)-(d)的任何组合。
可用于产生本文所描述的病毒颗粒的包装细胞包含例如允许病毒的动物细胞或被修饰以允许病毒的细胞；或包装细胞构建体，例如使用磷酸钙等转化剂。可用于产生本文所描述的病毒颗粒的包装细胞系的非限制性实例包括例如人胚肾293（HEK-293）细胞（例如，美国典型培养物保藏中心[ATCC]编号CRL-1573）、含有SV40大T-抗原的HEK-293细胞（HEK-293T或293T）、HEK293T/17细胞、人肉瘤细胞系HT-1080（CCL-121）、淋巴母细胞样细胞系Raji（CCL-86）、成胶质细胞瘤-星形细胞瘤上皮样细胞系U87-MG（HTB-14）、T-淋巴瘤细胞系HuT78（TIB-161）、NIH/3T3细胞、中国仓鼠卵巢细胞（CHO）（例如，ATCC编号CRL9618、CCL61、CRL9096）、HeLa细胞（例如，ATCC编号CCL-2）、Vero细胞、NIH 3T3细胞（例如，ATCC编号CRL-1658）、Huh-7细胞、BHK细胞（例如，ATCC编号CCL10）、PC12细胞（ATCC编号CRL1721）、COS细胞、COS-7细胞（ATCC编号CRL1651）、RATI细胞、小鼠L细胞（ATCC编号CCLI.3）、HLHepG2细胞、CAP细胞、CAP-T细胞等。
L929细胞、概述于Cosset等人 (1995) J Virol 69,7430-7436中的FLY病毒包装细胞系统、NS0（鼠类骨髓瘤）细胞、人羊水细胞（例如，CAP、CAP-T）、酵母细胞（包括但不限于酿酒酵母（S. cerevisiae）、甲醇酵母（Pichia pastoris））、植物细胞（包括但不限于烟草NTl、BY-2）、昆虫细胞（包括但不限于SF9、S2、SF21、Tni（例如，High 5））或细菌细胞（包括但不限于大肠杆菌（E. coli））。
对于另外的包装细胞和系统、用于将核酸基因组包装到假型病毒颗粒中的包装技术和颗粒，参见例如，Polo等人, Proc Natl Acad Sci USA, (1999) 96:4598-4603。包装方法包括使用永久性表达病毒组分的包装细胞，或通过用质粒瞬时转染细胞。
另外的实施方案包括方法，该方法包括在足以将经修饰的Cap蛋白与靶向载体可操作地连接的条件下，例如在足以促进靶向载体与经修饰的Cap蛋白缔合的条件下，例如经由特异性结合对的第一成员和第二成员的化学连接和/或缔合，使如本文所描述的经修饰的Cap蛋白与靶向载体接触，其中第一成员插入到经修饰的Cap蛋白第一成员中，并且靶向载体与特异性结合对的第二成员融合。
另外的实施方案包含将病毒重定向到靶细胞和/或将报告基因或治疗性基因递送至靶细胞（例如，肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞、它们的任何组合等）的方法，该方法包括用于在体外（例如，离体）或在体内转导靶细胞的方法，该方法包括以下步骤：使靶细胞与包含本文所描述的衣壳的病毒颗粒接触，其中该衣壳包含特异性地结合由靶细胞表达的受体的靶向配体。在一些实施方案中，靶细胞在体外（例如，离体）。在其他实施方案中，靶细胞在受试者（例如，人）的体内。
靶细胞
可以靶向多种细胞以使用如本文所公开的经修饰的病毒颗粒递送目的核苷酸。靶细胞通常将基于目的核苷酸和所需的效果来选择。
在一些实施方案中，可递送目的核苷酸递送至靶细胞（例如，肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞、它们的任何组合等）以使得靶细胞能够产生蛋白质，该蛋白质补偿生物体中的缺陷，诸如酶缺陷或免疫缺陷，诸如X连锁重症综合性免疫缺陷。因此，在一些实施方案中，通常将在动物中产生蛋白质的细胞被靶向。在其他实施方案中，位于其中蛋白质将最有益的区域中的细胞被靶向。
在其他实施方案中，目的核苷酸（诸如编码siRNA的基因）可抑制靶细胞（例如，肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞、它们的任何组合等）中特定基因的表达。目的核苷酸可例如抑制病原体生命周期中涉及的基因的表达。因此，可以靶向易受病原体感染或被病原体感染的细胞。在其他实施方案中，目的核苷酸可抑制负责在靶细胞中产生毒素的基因的表达。
在其他实施方案中，目的核苷酸可编码杀死细胞的毒性蛋白，目的核苷酸在这些细胞中表达。在此情况下，可靶向肿瘤细胞或其他不想要的细胞。
在其他实施方案中，目的核苷酸编码治疗性蛋白。在一些实施方案中，目的核苷酸编码包含抗原结合蛋白或其抗原结合部分的治疗性蛋白。在一些实施方案中，目的核苷酸编码治疗性蛋白质，其包含人或人源化抗体或其抗原结合片段、单价Fab'、二价Fab2、F(ab)'3片段、单链可变片段（scFv）、双scFv、(scFv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、二硫键稳定的Fv蛋白（dsFv）、单结构域抗体（sdAb）、Ig NAR、双特异性抗体或其结合片段、双特异性T细胞衔接子（BiTE）、三特异性抗体或其经化学修饰的衍生物。在一些实施方案中，scFv包含从N末端到C末端按以下取向排列的可变区：HCVR-LCVR。在一些实施方案中，scFv包含从N末端到C末端按以下取向排列的可变区：LCVR-HCVR。在一些实施方案中，scFv可变区通过接头连接。在一些实施方案中，接头是肽接头。在一些实施方案中，肽接头是-(GGGGS)n-（SEQ ID NO: 789），其中n是1-10。
一旦鉴定出其中期望表达目的核苷酸的特定靶细胞群，则选择在该靶细胞群上特异性表达的靶。靶标可仅表达于该细胞群体上或与其他细胞群体相比在更大的程度上表达于该细胞群体上。表达越有特异性，则可将越有特异性的递送定向至靶细胞。取决于上下文，标志物（以及因此基因递送）的特异性的所需量可变化。例如，为了引入毒性基因，高特异性为最优选的，以避免杀死非靶向细胞。为了表达用于收获的蛋白质，或表达其中需要全域影响的分泌产物，可能需要较少的标志物特异性。
如上文所论述，靶标可以是任何细胞表面部分，例如蛋白质，可针对其鉴定或产生靶向配体。优选地，靶标是肽或多肽，诸如受体。然而，在其他实施方案中，靶标可为碳水化合物或可由结合配偶体识别的其他分子。如果已知用于靶标的结合配偶体（例如，配体），则其可用作亲和分子。然而，如果未知结合分子，则可使用标准程序产生靶标的抗体。抗体可接着用作靶向配体。
因此，可以基于多种因素选择靶细胞，包括例如，(1)应用（例如，疗法、待收集的蛋白质的表达和赋予抗病性）和(2)具有所需量的特异性的标志物的表达。
靶细胞不以任何方式进行限制，并且包含种系细胞和细胞系以及体细胞和细胞系两者。当靶细胞为种系细胞时，靶细胞优选地选自由单细胞胚胎和胚胎干细胞（ES）组成的组。
在各种实施方案中，靶细胞是表达非终末分化肌肉细胞表面蛋白的细胞。在一些实施方案中，靶细胞是表达哺乳动物非终末分化肌肉细胞表面蛋白的细胞。在一些实施方案中，靶细胞是表达人非终末分化肌肉细胞表面蛋白的细胞。在一些实施方案中，靶细胞是表达CDH15（例如哺乳动物CDH15，例如人CDH15）的细胞。
在各种实施方案中，靶细胞是肌肉细胞。在一些实施方案中，靶细胞是哺乳动物肌肉细胞。在一些实施方案中，靶细胞是哺乳动物肌肉细胞。在一些实施方案中，靶细胞是未终末分化的哺乳动物肌肉细胞。在一些实施方案中，靶细胞是终末分化的哺乳动物肌肉细胞。在一些实施方案中，靶细胞是肌肉干细胞（也称为卫星细胞）、成肌细胞、肌细胞或未分化肌纤维。在一些实施方案中，靶细胞是哺乳动物横纹肌肉瘤细胞。
骨骼肌相关病症
本文还提供了治疗骨骼肌相关病症，例如肌肉萎缩疾病和/或遗传性肌肉疾病，例如X连锁肌管性肌病（XLMTM）、杜氏肌营养不良症（DMD）、强直性肌营养不良症（DM1）、面肩肱型肌营养不良症1型（FSHD）、先天性肌营养不良症1A型（MDC1A）、肢带型肌营养不良症、抗肌萎缩相关糖蛋白病、肌肉萎缩疾患、代谢性疾病等的方法。
通常，此类方法包括向患有此类骨骼相关病症或处于此类骨骼相关病症的风险下的患者施用如本文所描述的病毒颗粒或药物组合物，其中该病毒颗粒包含：
(i)经修饰以包含蛋白质:蛋白质结合对的第一成员的病毒衣壳，
(ii)蛋白质:蛋白质结合对的第二成员，其中该蛋白质:蛋白质结合对的第二成员包含靶向配体，该靶向配体结合在肌细胞的表面上表达的非终末分化肌肉细胞表面蛋白（例如，CDH15），
其中蛋白质:蛋白质结合对的第一成员和蛋白质:蛋白质结合对的第二成员缔合以定向病毒衣壳对其患者的肌肉细胞的趋向性，以及
(iii)封装在病毒衣壳内的目的核苷酸。
在一些实施方案中，目的核苷酸编码治疗性蛋白、自杀基因、抗体或其片段、CRISPR/Cas系统或其部分、反义寡核苷酸、核酶、RNAi分子或shRNA分子。例如，在一些实施方案中，目的核苷酸可以编码例如用于肌肉萎缩疾患或代谢疾病的生长因子、神经营养因子、疾病修饰性肌肉蛋白、代谢蛋白。
肌肉相关癌症
本文还提供了治疗肌肉相关癌症，例如表达非终末分化肌肉细胞蛋白（例如，CDH15）的癌症的方法。肌肉特异性癌症的非限制性实例包括横纹肌肉瘤，例如胚胎性横纹肌肉瘤、肺泡性横纹肌肉瘤、多形性横纹肌肉瘤、葡萄状横纹肌肉瘤和梭形细胞/硬化性横纹肌肉瘤。
通常，此类方法包括向患有此类肌肉相关癌症或处于此类肌肉相关癌症的风险下的患者施用如本文所描述的病毒颗粒或药物组合物，其中该病毒颗粒包含：
(i)经修饰以包含靶向配体的病毒衣壳，该病毒衣壳直接插入病毒衣壳中或经由例如蛋白质:蛋白质结合对的第一成员及其蛋白质:蛋白质结合对的同源第二成员插入，其中该蛋白质:蛋白质结合对的第二成员包含结合在非终末分化肌肉细胞（例如，CDH15）的表面上表达的肌肉特异性表面蛋白的靶向配体，其中该蛋白质:蛋白质结合对的第一成员和该蛋白质:蛋白质结合对的第二成员缔合以定向病毒衣壳对其患者的肌肉细胞的趋向性，以及
(ii)封装在病毒衣壳内的目的核苷酸。
在一些实施方案中，目的核苷酸包含或编码能够治疗肌肉相关癌细胞，例如减缓和/或阻止肌肉相关癌细胞的生长和/或破坏肌肉相关癌细胞的治疗性蛋白质、自杀基因、抗体或其片段、CRISPR/Cas系统或其部分、反义寡核苷酸、核酶、RNAi分子或shRNA分子。所述目的核苷酸的示例性非限制性实施方案包括靶向和抑制致癌细胞内信号传导途径的治疗性蛋白质、指导细胞经历凋亡的自杀基因和靶向和抑制致癌转录物的RNAi分子。
表2：非灵长类动物腺相关病毒的示例性序列。
表3：序列表中的序列的简述
实施例
实施例1：钙粘蛋白15调控MuSC的静息到活化的转变
肌肉干细胞（MuSC）在成人肌肉组织中在稳态条件下是有丝分裂静息的和非增殖的。然而，响应于损伤，MuSC开始活跃分裂，产生子细胞。虽然一些子细胞再次变得静息以补充MuSC库，但其他子细胞继续增殖为成肌细胞，其在分化为构成肌肉纤维的成熟肌管/肌纤维期间排列并融合在一起。静息的肌肉干细胞可以通过Pax7表达来表征，增殖的成肌细胞可以通过Pax7和肌源性分化因子1（MyoD）表达来表征，承诺终末分化的成肌细胞（即，肌细胞）可以通过MyoD和成肌素表达来表征，并且肌管可以通过肌球蛋白重链（MyHC）表达来表征。
钙粘蛋白15（CDH15）mRNA在MuSC中高度表达，并且在肌肉损伤后表达增加。为了确定CDH15在骨骼肌生物学中起的作用，产生纯合CDH15敲除小鼠（CDH15-/-）。虽然消除CDH15表达似乎不影响MuSC静息、增殖或分化，但CDH15-/-小鼠在损伤后表现出加速的肌肉再生。如图2C-2D中所示，CDH15-/-小鼠经由向胫骨前肌注射心脏毒素（CTX）在损伤后5天和15天表现出肌纤维尺寸增加，并且在损伤后15天肌纤维中中央肌核的数量增加。此外，CDH15-/-小鼠在CTX损伤后表现出改善的功能恢复，如CTX损伤后15天在离体分离的趾长伸肌中的正常强直力测量所证明的（参见图3B）。值得注意的是，WT小鼠在损伤后15天在离体分离的肌肉中表现出约40%的强直力损失。
为了确定在小鼠中消除CDH15如何导致改善的骨骼肌再生，将衍生自WT或CDH15-/-小鼠的MuSC与其相关的肌纤维离体培养48小时。如图4A-4B中所示，与WT MuSC相比，对于培养的CDH15-/- MuSC，观察到更大百分比的多细胞簇和更大数量的Pax7+细胞/簇。这个结果表明，消除MuSC中的CDH15表达加速了从静息到活化的转变。
为了进一步探索消除MuSC中的CDH15表达如何影响会影响肌肉再生的其他基因的表达，对来自未受伤的健康小鼠的FACS分离的MuSC进行了RNA-seq。如图5A中所示，与WTMuSC相比，CDH15-/- MuSC中132个基因下调，并且270个基因上调。在那些上调的基因中，鉴定了一簇含有血清反应因子（SRF）结合基序的基因（参见图5B），指示在不存在CDH15的情况下MuSC的加速活化可能是由于SRF信号传导的改变。
实施例2：在老年小鼠中消除CDH15表达恢复肌肉再生
老年受试者中的肌肉干细胞（MuSC）在体外显示活化延迟和运动性降低，这转化为体内受损的MuSC介导的修复。因此，假设CDH15可能与老年受试者的肌肉再生能力的降低有关。为了测试这一点，产生纯合CDH15敲除小鼠（CDH15-/-），年龄至23个月，并且在胫骨前肌中肌内注射心脏毒素以诱导肌肉损伤（第0天）。损伤后（dpi）十五天，对来自老年（23个月）CDH15-/-小鼠和老年（23个月）WT对照的胫骨前肌样品进行组织学（参见图6A-6B）。如图6C-6D中所示，与相同年龄的WT小鼠相比，在15 dpi时，老年CDH15-/-小鼠表现出增加的肌纤维尺寸（图6C）和增加的具有3个或更多个中央核的肌纤维数量（图6D）。值得注意的是，老年CDH15-/-小鼠的肌纤维大小与年轻WT小鼠的肌纤维大小相当（参见图6C，虚线），这表明消除CDH15表达可以将老年小鼠的肌肉再生能力恢复到年轻小鼠的肌肉再生能力。
实施例3：CDH15抗体的实例
抗人CDH15抗体的产生
抗人CDH15抗体通过用人CDH15免疫小鼠（例如，包含编码人免疫球蛋白重链和人κ轻链可变区的DNA的工程化小鼠，参见例如美国专利第7,105,348号；美国专利第8,642,835号；和US 9,622,459，其各自通过引用并入本文）获得。
免疫后，从每只小鼠收获脾细胞，并且(1)与小鼠骨髓瘤细胞融合以保持其活力并形成杂交瘤细胞并筛选人CDH15特异性，或(2)使用人CDH15片段作为结合并鉴定反应性抗体（抗原阳性B细胞）的分选试剂进行B细胞分选（如US 2007/0280945A1中所描述）。
最初使用例如VELOCIMMUNE技术分离具有人可变区和小鼠恒定区的针对人CDH15的嵌合抗体，如美国专利第7,105,348号；美国专利第8,642,835号；和US 9,622,459中所描述，这些专利中的每一篇通过引用并入本文。
在一些抗体中，出于测试目的，将小鼠恒定区替换为所需的人恒定区，例如野生型人CH或经修饰的人CH（例如IgG1、IgG2或IgG4同种型）和轻链恒定区（CL），以生成完全人抗hCDH15抗体或其抗原结合部分。虽然所选择的恒定区可以根据具体用途而变化，但高亲和力抗原结合和目标特异性特性存在于可变区中。
根据本实施例的方法生成的示例性抗人CDH15抗体的某些生物学性质在下文所示的实施例中详细描述。
抗hCDH15抗体的重链和轻链可变区氨基酸和核酸序列
表1列出了编码用于生成本文公开的治疗性抗hCDH15蛋白的所选抗hCDH15抗体的重链或轻链可变区（分别为HCVR或LCVR）或重链或轻链CDR（分别为HCDR和LCDR）的核酸（NA）序列的序列标识符，以及括号中的氨基酸（AA）序列的序列标识符。此类序列也包括在下文中。
SEQ ID NO: 1
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTATCTATGTCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGACTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCACATGATGGAAATAATAGATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAAAGGGGTAGCAGTGACCCCCTTTGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 2
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSIYVMHWVRQAPGKGLEWVAVISHDGNNRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGVAVTPFDHWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 3
GGATTCACCTTCAGTATCTATGTC
SEQ ID NO: 4
GFTFSIYV
SEQ ID NO: 5
ATATCACATGATGGAAATAATAGA
SEQ ID NO: 6
ISHDGNNR
SEQ ID NO: 7
GCGAAAGGGGTAGCAGTGACCCCCTTTGACCAC
SEQ ID NO: 8
AKGVAVTPFDH
SEQ ID NO: 9
GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCCTCACCTGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAAAGCCTCCTACACAGTGATGGAAACACCTACTTGAGTTGGCTTCAGCAGCGGCCAGGCCAGCCTCCAAGACTCCTAATTTATAAGACTTCTAACCGGTTCTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGTGGCAGTGGGGCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGTTGGAAGCTGAGGATGTCGGCATTTATTACTGCATGCAAGCTACACAATTTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
SEQ ID NO: 10
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLLHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYKTSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRLEAEDVGIYYCMQATQFPWTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 11
CAAAGCCTCCTACACAGTGATGGAAACACCTAC
SEQ ID NO: 12
QSLLHSDGNTY
SEQ ID NO: 13
AAGACTTCT
SEQ ID NO: 14
KTS
SEQ ID NO: 15
ATGCAAGCTACACAATTTCCGTGGACG
SEQ ID NO: 16
MQATQFPWT
SEQ ID NO: 17
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTATCTATGTCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGACTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCACATGATGGAAATAATAGATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAAAGGGGTAGCAGTGACCCCCTTTGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 18
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSIYVMHWVRQAPGKGLEWVAVISHDGNNRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGVAVTPFDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 19
GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCCTCACCTGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAAAGCCTCCTACACAGTGATGGAAACACCTACTTGAGTTGGCTTCAGCAGCGGCCAGGCCAGCCTCCAAGACTCCTAATTTATAAGACTTCTAACCGGTTCTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGTGGCAGTGGGGCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGTTGGAAGCTGAGGATGTCGGCATTTATTACTGCATGCAAGCTACACAATTTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 20
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLLHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYKTSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRLEAEDVGIYYCMQATQFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 21
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGAAGCCTCTGGATTCATCTTCAGTAGTTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGATTGGGTGGCAGTTATTGCATATGACGGAAACAGTAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTATATCTACAAATGAACGGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTATTACTGTGCGAGAATCTATTATGGGTCGGGACTTATCTATACGGACTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 22
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCEASGFIFSSYGMHWVRQAPGKGLDWVAVIAYDGNSKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNGLRAEDTALYYCARIYYGSGLIYTDFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 23
GGATTCATCTTCAGTAGTTATGGC
SEQ ID NO: 24
GFIFSSYG
SEQ ID NO: 25
ATTGCATATGACGGAAACAGTAAA
SEQ ID NO: 26
IAYDGNSK
SEQ ID NO: 27
GCGAGAATCTATTATGGGTCGGGACTTATCTATACGGACTTC
SEQ ID NO: 28
ARIYYGSGLIYTDF
SEQ ID NO: 29
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGTATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAATCAGGGGTCCCATCTCGGATCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAAGTTTAACAGTGCCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
SEQ ID NO: 30
DIQMTQSPSSLSVSVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKLLIYAASTLQSGVPSRISGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKFNSAPFTFGPGTKVDIK
SEQ ID NO: 31
CAGGACATTAGCAATTAT
SEQ ID NO: 32
QDISNY
SEQ ID NO: 33
GCTGCATCC
SEQ ID NO: 34
AAS
SEQ ID NO: 35
CAAAAGTTTAACAGTGCCCCATTCACT
SEQ ID NO: 36
QKFNSAPFT
SEQ ID NO: 37
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGAAGCCTCTGGATTCATCTTCAGTAGTTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGATTGGGTGGCAGTTATTGCATATGACGGAAACAGTAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTATATCTACAAATGAACGGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTATTACTGTGCGAGAATCTATTATGGGTCGGGACTTATCTATACGGACTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 38
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCEASGFIFSSYGMHWVRQAPGKGLDWVAVIAYDGNSKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNGLRAEDTALYYCARIYYGSGLIYTDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 39
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGTATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAATCAGGGGTCCCATCTCGGATCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAAGTTTAACAGTGCCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 40
DIQMTQSPSSLSVSVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKLLIYAASTLQSGVPSRISGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKFNSAPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 41
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGTTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAGATCAGTCATACTGGAAGGACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATTTCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCGTGTGGCAGCAGCGGGGTTGGACGTCTGGGGCCTAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 42
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSVYYWSWIRQPPGKGLEWIGEISHTGRTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARGRVAAAGLDVWGLGTTVTVSS
SEQ ID NO: 43
GGTGGGTCCTTCAGTGTTTACTAC
SEQ ID NO: 44
GGSFSVYY
SEQ ID NO: 45
ATCAGTCATACTGGAAGGACC
SEQ ID NO: 46
ISHTGRT
SEQ ID NO: 47
GCGAGAGGCCGTGTGGCAGCAGCGGGGTTGGACGTC
SEQ ID NO: 48
ARGRVAAAGLDV
SEQ ID NO: 49
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAA
SEQ ID NO: 50
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 51
CAGAGCATTAGCAGCTAT
SEQ ID NO: 52
QSISSY
SEQ ID NO: 53
CAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGATCACC
SEQ ID NO: 54
QQSYSTPPIT
SEQ ID NO: 55
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGTTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAGATCAGTCATACTGGAAGGACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATTTCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCGTGTGGCAGCAGCGGGGTTGGACGTCTGGGGCCTAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 56
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSVYYWSWIRQPPGKGLEWIGEISHTGRTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARGRVAAAGLDVWGLGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 57
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 58
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 59
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAAAATCTCCTGTGCAACTTCTGGATTCACCTTCGGTGGCTCTGATATGCACTGGGTCCGCCAGGCTTCCGGGAAAGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGCATTTCAAAGAATGCAAATACTCACGCGGCAGAATATGGTGCGTCGGTGAAAGGCAGATTCACCATCTCCAGAGATGATTCAAAGAACACGGCGTTTCTGCAATTGAGCAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCCGTCTATTATTGTACTAGAGAATATAGTGGGAGTTACCCCCTGTACTTCTACGGTATGGACTTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 60
EVQLVESGGGLVQPGGSLKISCATSGFTFGGSDMHWVRQASGKGLEWVGRISKNANTHAAEYGASVKGRFTISRDDSKNTAFLQLSSLKTEDTAVYYCTREYSGSYPLYFYGMDFWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 61
GGATTCACCTTCGGTGGCTCTGAT
SEQ ID NO: 62
GFTFGGSD
SEQ ID NO: 63
ATTTCAAAGAATGCAAATACTCACGCGGCA
SEQ ID NO: 64
ISKNANTHAA
SEQ ID NO: 65
ACTAGAGAATATAGTGGGAGTTACCCCCTGTACTTCTACGGTATGGACTTC
SEQ ID NO: 66
TREYSGSYPLYFYGMDF
SEQ ID NO: 67
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAAAATCTCCTGTGCAACTTCTGGATTCACCTTCGGTGGCTCTGATATGCACTGGGTCCGCCAGGCTTCCGGGAAAGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGCATTTCAAAGAATGCAAATACTCACGCGGCAGAATATGGTGCGTCGGTGAAAGGCAGATTCACCATCTCCAGAGATGATTCAAAGAACACGGCGTTTCTGCAATTGAGCAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCCGTCTATTATTGTACTAGAGAATATAGTGGGAGTTACCCCCTGTACTTCTACGGTATGGACTTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 68
EVQLVESGGGLVQPGGSLKISCATSGFTFGGSDMHWVRQASGKGLEWVGRISKNANTHAAEYGASVKGRFTISRDDSKNTAFLQLSSLKTEDTAVYYCTREYSGSYPLYFYGMDFWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 69
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGTCGTGGTCCAGCCTGGGGGATCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATGCTATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGATTATGTTTCAGCTATTACTACTGATGGGGGAAGTACTTTTTATGCAGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATTTCCAGAGACAATTCCAAGAATATGGTATATCTTCAAATGGGCAGCCTGAAACCTGAAGACATGGCTGTGTATTATTGTGCGAGAGATCGGCACTGGGGCTACTGGTACTTCGATCTCTGGGGCCGTGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 70
EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMHWVRQAPGKGLDYVSAITTDGGSTFYADSVKGRFTISRDNSKNMVYLQMGSLKPEDMAVYYCARDRHWGYWYFDLWGRGTLVTVSS
SEQ ID NO: 71
GGATTCACCTTCAGTAGATATGCT
SEQ ID NO: 72
GFTFSRYA
SEQ ID NO: 73
ATTACTACTGATGGGGGAAGTACT
SEQ ID NO: 74
ITTDGGST
SEQ ID NO: 75
GCGAGAGATCGGCACTGGGGCTACTGGTACTTCGATCTC
SEQ ID NO: 76
ARDRHWGYWYFDL
SEQ ID NO: 77
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGTCGTGGTCCAGCCTGGGGGATCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATGCTATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGATTATGTTTCAGCTATTACTACTGATGGGGGAAGTACTTTTTATGCAGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATTTCCAGAGACAATTCCAAGAATATGGTATATCTTCAAATGGGCAGCCTGAAACCTGAAGACATGGCTGTGTATTATTGTGCGAGAGATCGGCACTGGGGCTACTGGTACTTCGATCTCTGGGGCCGTGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 78
EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMHWVRQAPGKGLDYVSAITTDGGSTFYADSVKGRFTISRDNSKNMVYLQMGSLKPEDMAVYYCARDRHWGYWYFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 79
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATGGCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTAAAATGGGTCTCAATTATTAGTGCTAGTGGTGGTAGAACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGGGGAATATAGTGGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACTGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 80
EVQLVESGGGSVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLKWVSIISASGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGNIVAFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 81
GGATTCACCTTTAGTAGCTATGGC
SEQ ID NO: 82
GFTFSSYG
SEQ ID NO: 83
ATTAGTGCTAGTGGTGGTAGAACA
SEQ ID NO: 84
ISASGGRT
SEQ ID NO: 85
GCGGGGAATATAGTGGCCTTTGACTAC
SEQ ID NO: 86
AGNIVAFDY
SEQ ID NO: 87
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATGGCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTAAAATGGGTCTCAATTATTAGTGCTAGTGGTGGTAGAACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGGGGAATATAGTGGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACTGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 88
EVQLVESGGGSVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLKWVSIISASGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGNIVAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 89
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGAGTCCCTAAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTTCGCCTTCAGTGTCTCTATTATACACTGGGTCCGCCAGAGTTCCGGGAAAGGGCTGGAGTGGATTGGCCGTATCAGAACCAAAACTAATAATTACGCGACAGGATATAGTGAGTCGATGAAGGGCAGGTTCACCATTTCCAGAGATGATTCAGAGAACACGGCGTATCTGCAAATGAACAGCCTCAAAACCGAAGACACGGCCGTATATTATTGTACTAGACATTATTATAGCAGCACCTTTTACTACTACTACGGAATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 90
EVQLVESGGGLVQPGESLKLSCAASGFAFSVSIIHWVRQSSGKGLEWIGRIRTKTNNYATGYSESMKGRFTISRDDSENTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTRHYYSSTFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 91
GGGTTCGCCTTCAGTGTCTCTATT
SEQ ID NO: 92
GFAFSVSI
SEQ ID NO: 93
ATCAGAACCAAAACTAATAATTACGCGACA
SEQ ID NO: 94
IRTKTNNYAT
SEQ ID NO: 95
ACTAGACATTATTATAGCAGCACCTTTTACTACTACTACGGAATGGACGTC
SEQ ID NO: 96
TRHYYSSTFYYYYGMDV
SEQ ID NO: 97
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTTGGAGACAGAGTCATCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCTACAGCATAATAGTTACCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAA
SEQ ID NO: 98
DIQMTQSPSSLSASVGDRVIITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 99
CAGGGCATTAGAAATGAT
SEQ ID NO: 100
QGIRND
SEQ ID NO: 101
CTACAGCATAATAGTTACCCGATCACC
SEQ ID NO: 102
LQHNSYPIT
SEQ ID NO: 103
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGAGTCCCTAAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTTCGCCTTCAGTGTCTCTATTATACACTGGGTCCGCCAGAGTTCCGGGAAAGGGCTGGAGTGGATTGGCCGTATCAGAACCAAAACTAATAATTACGCGACAGGATATAGTGAGTCGATGAAGGGCAGGTTCACCATTTCCAGAGATGATTCAGAGAACACGGCGTATCTGCAAATGAACAGCCTCAAAACCGAAGACACGGCCGTATATTATTGTACTAGACATTATTATAGCAGCACCTTTTACTACTACTACGGAATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 104
EVQLVESGGGLVQPGESLKLSCAASGFAFSVSIIHWVRQSSGKGLEWIGRIRTKTNNYATGYSESMKGRFTISRDDSENTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTRHYYSSTFYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 105
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTTGGAGACAGAGTCATCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCTACAGCATAATAGTTACCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 106
DIQMTQSPSSLSASVGDRVIITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 107
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGACGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGCAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTAGAATGGGTGGCAGTTACATCATATGATGGAGGTTATAAATTCTATGCAGACTCCGTGAAGGACCGATTCATCATTTCCAGAGACAATTCCAAGAATACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGACCTGATGATACGGCTGTGTATTTCTGTGCGAAAGATCTGTGGATAAAGTTATGGTTACTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 108
QVQLVESGGGVVQPGTSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVTSYDGGYKFYADSVKDRFIISRDNSKNTLYLQMNSLRPDDTAVYFCAKDLWIKLWLLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 109
GGATTCACCTTCAGCAGCTATGGC
SEQ ID NO: 110
ACATCATATGATGGAGGTTATAAA
SEQ ID NO: 111
TSYDGGYK
SEQ ID NO: 112
GCGAAAGATCTGTGGATAAAGTTATGGTTACTTGACTAC
SEQ ID NO: 113
AKDLWIKLWLLDY
SEQ ID NO: 114
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGGCATTAACAATTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTACTAAGCTCCTGATCTACGCTGCATCCACTTTGCATTCAGGGGTCCCATCTCGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAGCTTATTACTGTCAAAAGTATAACAGTGCCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
SEQ ID NO: 115
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNYLAWYQQKPGKVTKLLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVAAYYCQKYNSAPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 116
CAGGGCATTAACAATTAT
SEQ ID NO: 117
QGINNY
SEQ ID NO: 118
CAAAAGTATAACAGTGCCCCGCTCACT
SEQ ID NO: 119
QKYNSAPLT
SEQ ID NO: 120
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGACGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGCAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTAGAATGGGTGGCAGTTACATCATATGATGGAGGTTATAAATTCTATGCAGACTCCGTGAAGGACCGATTCATCATTTCCAGAGACAATTCCAAGAATACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGACCTGATGATACGGCTGTGTATTTCTGTGCGAAAGATCTGTGGATAAAGTTATGGTTACTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 121
QVQLVESGGGVVQPGTSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVTSYDGGYKFYADSVKDRFIISRDNSKNTLYLQMNSLRPDDTAVYFCAKDLWIKLWLLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 122
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGGCATTAACAATTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTACTAAGCTCCTGATCTACGCTGCATCCACTTTGCATTCAGGGGTCCCATCTCGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAGCTTATTACTGTCAAAAGTATAACAGTGCCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 123
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNYLAWYQQKPGKVTKLLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVAAYYCQKYNSAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 124
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTAAAGCCTGGGGGGTCCCTTAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGTATTAAAAGCAAAACTGATGGTGGGACAACAGACTACGCTGCACCCGTGAAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATGATTCAAAAAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTACCACGGGTATAGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 125
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTGIGDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 126
GGATTCACTTTCAGTAACGCCTGG
SEQ ID NO: 127
GFTFSNAW
SEQ ID NO: 128
ATTAAAAGCAAAACTGATGGTGGGACAACA
SEQ ID NO: 129
IKSKTDGGTT
SEQ ID NO: 130
ACCACGGGTATAGGGGACTAC
SEQ ID NO: 131
TTGIGDY
SEQ ID NO: 132
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATATAGGTCCAACAATAAGAACAACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGATGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTACTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
SEQ ID NO: 133
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYRSNNKNNLAWYQQKPGQPPKMLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 134
CAGAGTGTTTTATATAGGTCCAACAATAAGAACAAC
SEQ ID NO: 135
QSVLYRSNNKNN
SEQ ID NO: 136
TGGGCATCT
SEQ ID NO: 137
WAS
SEQ ID NO: 138
CAGCAATATTATAGTACTCCGCTCACT
SEQ ID NO: 139
QQYYSTPLT
SEQ ID NO: 140
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTAAAGCCTGGGGGGTCCCTTAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGTATTAAAAGCAAAACTGATGGTGGGACAACAGACTACGCTGCACCCGTGAAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATGATTCAAAAAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTACCACGGGTATAGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 141
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTGIGDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 142
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATATAGGTCCAACAATAAGAACAACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGATGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTACTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 143
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYRSNNKNNLAWYQQKPGQPPKMLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 144
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGAGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGTCCCCAGGGAAGGGACTGGAATGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTCGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCCGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGAAATGGTGGATATAGTGGCTACGATGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 145
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQSPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARNGGYSGYDDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 146
GGAGGCTCCATCAGTAGTTACTAC
SEQ ID NO: 147
GGSISSYY
SEQ ID NO: 148
ATCTATTACAGTGGGAGCACC
SEQ ID NO: 149
IYYSGST
SEQ ID NO: 150
GCGCGAAATGGTGGATATAGTGGCTACGATGACTAC
SEQ ID NO: 151
ARNGGYSGYDDY
SEQ ID NO: 152
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTCGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGACCATTAGTAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAAGCAGGGAAGGCCCCTAAGCTCCTAATCTATTCTGCATCCAGTTTGCAAACTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTCTCAACTTACTACTGTCAACAGACTTACAGTGTCCCTCGGACGTTCGGCCAGGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
SEQ ID NO: 153
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTISSYLNWYQQKAGKAPKLLIYSASSLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFSTYYCQQTYSVPRTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 154
CAGACCATTAGTAGTTAT
SEQ ID NO: 155
QTISSY
SEQ ID NO: 156
TCTGCATCC
SEQ ID NO: 157
SAS
SEQ ID NO: 158
CAACAGACTTACAGTGTCCCTCGGACG
SEQ ID NO: 159
QQTYSVPRT
SEQ ID NO: 160
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGAGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGTCCCCAGGGAAGGGACTGGAATGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTCGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCCGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGAAATGGTGGATATAGTGGCTACGATGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 161
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQSPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARNGGYSGYDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 162
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTCGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGACCATTAGTAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAAGCAGGGAAGGCCCCTAAGCTCCTAATCTATTCTGCATCCAGTTTGCAAACTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTCTCAACTTACTACTGTCAACAGACTTACAGTGTCCCTCGGACGTTCGGCCAGGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 163
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTISSYLNWYQQKAGKAPKLLIYSASSLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFSTYYCQQTYSVPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 164
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTACCTTTGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCACTTATATCATATGATGGAAGTTATAAATACTATGCAGGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACACTTCCAAGAACACACTGTTTCTGCAAATGGACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGATCGGGACAGTAACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACTGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 165
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTFGMHWVRQAPGKGLEWVALISYDGSYKYYAGSVKGRFTISRDTSKNTLFLQMDSLRAEDTAVYYCAKDRDSNYFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 166
GGATTCACCTTCAGTACCTTTGGC
SEQ ID NO: 167
GFTFSTFG
SEQ ID NO: 168
ATATCATATGATGGAAGTTATAAA
SEQ ID NO: 169
ISYDGSYK
SEQ ID NO: 170
GCGAAAGATCGGGACAGTAACTACTTTGACTAC
SEQ ID NO: 171
AKDRDSNYFDY
SEQ ID NO: 172
GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCCTCACCTGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCCGGTCTAGTCAAAGCCTCGTACACAGTAATGGAAACACCTACTTGAGTTGGCTTCAGCAGAGGCCAGGCCAGCCTCCAAGACTCCTGATTTATAAGATCTCTAACCGGTTCTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGTGGCAGTGGGACAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAACCTGAGGATGTCGGGACTTATTACTGCATGCAAGCTACACATTTTCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
SEQ ID NO: 173
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYKISNRFSGVPDRFSGSGTGTDFTLKISRVEPEDVGTYYCMQATHFPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 174
CAAAGCCTCGTACACAGTAATGGAAACACCTAC
SEQ ID NO: 175
QSLVHSNGNTY
SEQ ID NO: 176
AAGATCTCT
SEQ ID NO: 177
KIS
SEQ ID NO: 178
ATGCAAGCTACACATTTTCCTCTCACT
SEQ ID NO: 179
MQATHFPLT
SEQ ID NO: 180
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTACCTTTGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCACTTATATCATATGATGGAAGTTATAAATACTATGCAGGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACACTTCCAAGAACACACTGTTTCTGCAAATGGACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGATCGGGACAGTAACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACTGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 181
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTFGMHWVRQAPGKGLEWVALISYDGSYKYYAGSVKGRFTISRDTSKNTLFLQMDSLRAEDTAVYYCAKDRDSNYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 182
GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCCTCACCTGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCCGGTCTAGTCAAAGCCTCGTACACAGTAATGGAAACACCTACTTGAGTTGGCTTCAGCAGAGGCCAGGCCAGCCTCCAAGACTCCTGATTTATAAGATCTCTAACCGGTTCTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGTGGCAGTGGGACAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAACCTGAGGATGTCGGGACTTATTACTGCATGCAAGCTACACATTTTCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 183
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYKISNRFSGVPDRFSGSGTGTDFTLKISRVEPEDVGTYYCMQATHFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 184
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGGGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTACCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATCTGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGTAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGAAAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGACGGAGTAGCAGCCCAATACTTTGAGTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACTGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 185
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYVDSVKGRFTISRENSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGVAAQYFEYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 186
GGATTCACCTTCAGTACCTATGGC
SEQ ID NO: 187
GFTFSTYG
SEQ ID NO: 188
ATCTGGTATGATGGAAGTAATAAA
SEQ ID NO: 189
IWYDGSNK
SEQ ID NO: 190
GCGAGAGACGGAGTAGCAGCCCAATACTTTGAGTAC
SEQ ID NO: 191
ARDGVAAQYFEY
SEQ ID NO: 192
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACTAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTCTGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
SEQ ID NO: 193
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKLGKAPKLLISAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPRTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 194
CAGAGCATTAGCAGTTAT
SEQ ID NO: 195
CAACAGAGTTACAGTACCCCTCGGACG
SEQ ID NO: 196
QQSYSTPRT
SEQ ID NO: 197
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGGGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTACCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATCTGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGTAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGAAAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGACGGAGTAGCAGCCCAATACTTTGAGTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACTGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 198
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYVDSVKGRFTISRENSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGVAAQYFEYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 199
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACTAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTCTGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 200
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKLGKAPKLLISAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 201
CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATTTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACATGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCAGTATCTGTGAAGAGTCGAATAACCATCAACCCAGATACATCCAAGAACCATTTCTCCCTGCAGTTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGATGGGGGGTGGGAGGTATTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 202
QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYMSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNHFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDGGWEVFFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 203
GGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGTGCTGCT
SEQ ID NO: 204
GDSVSSNSAA
SEQ ID NO: 205
ACATACTACATGTCCAAGTGGTATAAT
SEQ ID NO: 206
TYYMSKWYN
SEQ ID NO: 207
GCAAGAGATGGGGGGTGGGAGGTATTCTTTGACTAC
SEQ ID NO: 208
ARDGGWEVFFDY
SEQ ID NO: 209
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAAGAATCAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAACTACTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCGGCCTGCAGCCTGAAGATGTGGCAGTTTATTCCTGTCAGCAATATTATAGTATTCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
SEQ ID NO: 210
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSKNQNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISGLQPEDVAVYSCQQYYSIPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 211
CAGAGTGTTTTATACAGCTCCAAGAATCAGAACTAC
SEQ ID NO: 212
QSVLYSSKNQNY
SEQ ID NO: 213
CAGCAATATTATAGTATTCCGTACACT
SEQ ID NO: 214
QQYYSIPYT
SEQ ID NO: 215
CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATTTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACATGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCAGTATCTGTGAAGAGTCGAATAACCATCAACCCAGATACATCCAAGAACCATTTCTCCCTGCAGTTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGATGGGGGGTGGGAGGTATTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 216
QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYMSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNHFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDGGWEVFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 217
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAAGAATCAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAACTACTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCGGCCTGCAGCCTGAAGATGTGGCAGTTTATTCCTGTCAGCAATATTATAGTATTCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 218
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSKNQNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISGLQPEDVAVYSCQQYYSIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 219
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCCTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTGGTTATTACTACTGGAGTTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTTCATCTATTTTAGAGGGAGCACTTACTATGACCCGTCCCTCAAGAGTCGACTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAACTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGACGGAGCAGCTCGCCGGGGGCTTTCGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
SEQ ID NO: 220
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGYYYWSWIRQHPGKGLEWIGFIYFRGSTYYDPSLKSRLTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARRSSSPGAFDIWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO: 221
GGTGGCTCCATCAGTAGTGGTTATTACTAC
SEQ ID NO: 222
GGSISSGYYY
SEQ ID NO: 223
ATCTATTTTAGAGGGAGCACT
SEQ ID NO: 224
IYFRGST
SEQ ID NO: 225
GCGAGACGGAGCAGCTCGCCGGGGGCTTTCGATATC
SEQ ID NO: 226
ARRSSSPGAFDI
SEQ ID NO: 227
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCCTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTGGTTATTACTACTGGAGTTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTTCATCTATTTTAGAGGGAGCACTTACTATGACCCGTCCCTCAAGAGTCGACTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAACTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGACGGAGCAGCTCGCCGGGGGCTTTCGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 228
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGYYYWSWIRQHPGKGLEWIGFIYFRGSTYYDPSLKSRLTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARRSSSPGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 229
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTTCAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAATTATGAAATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCATACATTGATAATAGTGGTAGTGCCATATATTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCCTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAGCAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTTTTTCTGTGTGAGAGAAGGAGGATATGACAGCTCGTCCCGGACCTGGAGGGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
SEQ ID NO: 230
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYEMNWVRQAPGKGLEWVSYIDNSGSAIYYADSVKGRFTLSRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAIFFCVREGGYDSSSRTWRDAFDIWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO: 231
GGATTCACCTTCAGTAATTATGAA
SEQ ID NO: 232
GFTFSNYE
SEQ ID NO: 233
ATTGATAATAGTGGTAGTGCCATA
SEQ ID NO: 234
IDNSGSAI
SEQ ID NO: 235
GTGAGAGAAGGAGGATATGACAGCTCGTCCCGGACCTGGAGGGATGCTTTTGATATC
SEQ ID NO: 236
VREGGYDSSSRTWRDAFDI
SEQ ID NO: 237
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTTCAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAATTATGAAATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCATACATTGATAATAGTGGTAGTGCCATATATTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCCTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAGCAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTTTTTCTGTGTGAGAGAAGGAGGATATGACAGCTCGTCCCGGACCTGGAGGGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 238
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYEMNWVRQAPGKGLEWVSYIDNSGSAIYYADSVKGRFTLSRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAIFFCVREGGYDSSSRTWRDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 239
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTCAGTAGGTACGACATGTACTGGGTCCGCCAAACTACAGGAAAAGGTCTGGAGTGGGTCTCAGCTATCAATACTGCTGGTGACACATACTATCCAGGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGAAAATGCCCAGAACTCCTTATATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGGGGACACGGCTGTGTATTACTGTGTAAGAGAGGGGTACATTCGTACAACTGGAACGACGGGATTCTCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACTGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 240
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSRYDMYWVRQTTGKGLEWVSAINTAGDTYYPGSVKGRFTISRENAQNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCVREGYIRTTGTTGFSFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 241
GGATTCACCCTCAGTAGGTACGAC
SEQ ID NO: 242
GFTLSRYD
SEQ ID NO: 243
ATCAATACTGCTGGTGACACA
SEQ ID NO: 244
INTAGDT
SEQ ID NO: 245
GTAAGAGAGGGGTACATTCGTACAACTGGAACGACGGGATTCTCCTTTGACTAC
SEQ ID NO: 246
VREGYIRTTGTTGFSFDY
SEQ ID NO: 247
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTCAGTAGGTACGACATGTACTGGGTCCGCCAAACTACAGGAAAAGGTCTGGAGTGGGTCTCAGCTATCAATACTGCTGGTGACACATACTATCCAGGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGAAAATGCCCAGAACTCCTTATATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGGGGACACGGCTGTGTATTACTGTGTAAGAGAGGGGTACATTCGTACAACTGGAACGACGGGATTCTCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACTGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 248
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSRYDMYWVRQTTGKGLEWVSAINTAGDTYYPGSVKGRFTISRENAQNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCVREGYIRTTGTTGFSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 249
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGATGTCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCTTGAGACCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTTCAATAATGAGACGGAACTCTGGTCTATACAGCTCGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 250
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMSVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCSIMRRNSGLYSSFDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 251
GGATTCACCTTCAGTAGTTATGGC
SEQ ID NO: 252
ATATCATATGATGGAAGTAATAAA
SEQ ID NO: 253
ISYDGSNK
SEQ ID NO: 254
TCAATAATGAGACGGAACTCTGGTCTATACAGCTCGTTCGACCCC
SEQ ID NO: 255
SIMRRNSGLYSSFDP
SEQ ID NO: 256
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGATGTCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCTTGAGACCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTTCAATAATGAGACGGAACTCTGGTCTATACAGCTCGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 257
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMSVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCSIMRRNSGLYSSFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 258
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTAAAGTCGGGGGGGTCCCTTAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCACTAACACCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGTATTAAAACCAAAACTGATGGTGGGACATCGTACTACGGTTCACCCGTGAAAGACAGATTCACCATCTCAAGAGATGATTCAAAAACCACGCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAAGACACAGCCGTCTATTACTGTCTTACAGGACTGGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 259
EVQLVESGGGLVKSGGSLRLSCAASGFTFTNTWMSWVRQSPGKGLEWVGRIKTKTDGGTSYYGSPVKDRFTISRDDSKTTLYLQMNSLRAEDTAVYYCLTGLGDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 260
GGATTCACTTTCACTAACACCTGG
SEQ ID NO: 261
GFTFTNTW
SEQ ID NO: 262
ATTAAAACCAAAACTGATGGTGGGACATCG
SEQ ID NO: 263
IKTKTDGGTS
SEQ ID NO: 264
CTTACAGGACTGGGGGACTAC
SEQ ID NO: 265
LTGLGDY
SEQ ID NO: 266
GAAATAGTTTTGACACAGAGTCCCGGCACACTGTCACTCTCTCCCGGGGAAAGAGCCACCTTGTCATGTAGAGCAAGTCAGTCAGTCTCTAGCTCTTATCTCGCCTGGTACCAGCAGAAGCCGGGACAGGCCCCTAGACTGCTGATCTACGGGGCAAGTTCCAGGGCCACCGGAATCCCCGACCGGTTCAGTGGAAGCGGAAGCGGAACCGATTTTACTTTGACGATTTCTAGACTGGAGCCAGAGGATTTCGCCGTTTACTATTGTCAACAGTACGGAAGCAGCCCGTGGACGTTTGGCCAGGGCACGAAGGTAGAAATCAAG
SEQ ID NO: 267
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 268
CAGTCAGTCTCTAGCTCTTAT
SEQ ID NO: 269
QSVSSSY
SEQ ID NO: 270
GGGGCAAGT
SEQ ID NO: 271
GAS
SEQ ID NO: 272
CAACAGTACGGAAGCAGCCCGTGGACG
SEQ ID NO: 273
QQYGSSPWT
SEQ ID NO: 274
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTAAAGTCGGGGGGGTCCCTTAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCACTAACACCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGTATTAAAACCAAAACTGATGGTGGGACATCGTACTACGGTTCACCCGTGAAAGACAGATTCACCATCTCAAGAGATGATTCAAAAACCACGCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAAGACACAGCCGTCTATTACTGTCTTACAGGACTGGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 275
EVQLVESGGGLVKSGGSLRLSCAASGFTFTNTWMSWVRQSPGKGLEWVGRIKTKTDGGTSYYGSPVKDRFTISRDDSKTTLYLQMNSLRAEDTAVYYCLTGLGDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 276
GAAATAGTTTTGACACAGAGTCCCGGCACACTGTCACTCTCTCCCGGGGAAAGAGCCACCTTGTCATGTAGAGCAAGTCAGTCAGTCTCTAGCTCTTATCTCGCCTGGTACCAGCAGAAGCCGGGACAGGCCCCTAGACTGCTGATCTACGGGGCAAGTTCCAGGGCCACCGGAATCCCCGACCGGTTCAGTGGAAGCGGAAGCGGAACCGATTTTACTTTGACGATTTCTAGACTGGAGCCAGAGGATTTCGCCGTTTACTATTGTCAACAGTACGGAAGCAGCCCGTGGACGTTTGGCCAGGGCACGAAGGTAGAAATCAAGCGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 277
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 278
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGATACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGCTTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGGGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTACTAGTAGTGGTGGTAGCTCATACTTCGCACACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCACATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTTCTGTGCGAAAGATGGCCCTAATTACGATGTTTGGAGTGGTTATTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 279
EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMGWVRQAPGKGLEWVSTITSSGGSSYFAHSVKGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTAVYFCAKDGPNYDVWSGYYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 280
GGCTTCACCTTTAGCAGCTATGCC
SEQ ID NO: 281
GFTFSSYA
SEQ ID NO: 282
ATTACTAGTAGTGGTGGTAGCTCA
SEQ ID NO: 283
ITSSGGSS
SEQ ID NO: 284
GCGAAAGATGGCCCTAATTACGATGTTTGGAGTGGTTATTAC
SEQ ID NO: 285
AKDGPNYDVWSGYY
SEQ ID NO: 286
GATATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACACCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGTATAGTAATGGATACAACTATTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGACAGTCTCCACAACTCCTGATCTATCTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGAGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTCTACAAACTCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
SEQ ID NO: 287
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFRGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPRTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 288
CAGAGCCTCCTGTATAGTAATGGATACAACTAT
SEQ ID NO: 289
QSLLYSNGYNY
SEQ ID NO: 290
CTGGGTTCT
SEQ ID NO: 291
LGS
SEQ ID NO: 292
ATGCAAGCTCTACAAACTCCTCGGACG
SEQ ID NO: 293
MQALQTPRT
SEQ ID NO: 294
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGATACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGCTTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGGGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTACTAGTAGTGGTGGTAGCTCATACTTCGCACACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCACATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTTCTGTGCGAAAGATGGCCCTAATTACGATGTTTGGAGTGGTTATTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 295
EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMGWVRQAPGKGLEWVSTITSSGGSSYFAHSVKGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTAVYFCAKDGPNYDVWSGYYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 296
GATATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACACCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGTATAGTAATGGATACAACTATTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGACAGTCTCCACAACTCCTGATCTATCTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGAGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTCTACAAACTCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 297
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFRGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 298
CAGATCACCTTGAAGGAGTCTGGTCCTACGCTGGTGAAACCCACACAGACCCTCACGCTGACCTGCACCTTCTCTGGGTTCTCACTCAGCACTAGTGGAGTGGGTGTGGGCTGGATCCGTCAGCCCCCAGGAAAGGCCCTTGAGTGGCTTGCACTCATTTATTGGAATGATGTTCAGCGCTTCAGCCCATCTCTGAAGAGCAGGCTCACCATCACCAAGGACACCTCCAAAAACCAGGTTGTCCTTTCAATGACCAATATGGACCCTCTAGACACAGCCACATATTACTGTGCACACACATTAACTAACTTTTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 299
QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGVGVGWIRQPPGKALEWLALIYWNDVQRFSPSLKSRLTITKDTSKNQVVLSMTNMDPLDTATYYCAHTLTNFFDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 300
GGGTTCTCACTCAGCACTAGTGGAGTGGGT
SEQ ID NO: 301
GFSLSTSGVG
SEQ ID NO: 302
ATTTATTGGAATGATGTTCAG
SEQ ID NO: 303
IYWNDVQ
SEQ ID NO: 304
GCACACACATTAACTAACTTTTTCGACCCC
SEQ ID NO: 305
AHTLTNFFDP
SEQ ID NO: 306
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAATTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAACTCCTGATCTATGCTGTTTCCACTTTGCAATCAGGGGTCCCTTCTCGGTTCAGTGGCCGTGGATCTGGGGCAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAAGTATTCCAGTACCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
SEQ ID NO: 307
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKVPKLLIYAVSTLQSGVPSRFSGRGSGADFTLTISSLQPEDVATYYCQKYSSTPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 308
CAGGGCATTAGCAATTAT
SEQ ID NO: 309
QGISNY
SEQ ID NO: 310
GCTGTTTCC
SEQ ID NO: 311
AVS
SEQ ID NO: 312
CAAAAGTATTCCAGTACCCCGCTCACT
SEQ ID NO: 313
QKYSSTPLT
SEQ ID NO: 314
CAGATCACCTTGAAGGAGTCTGGTCCTACGCTGGTGAAACCCACACAGACCCTCACGCTGACCTGCACCTTCTCTGGGTTCTCACTCAGCACTAGTGGAGTGGGTGTGGGCTGGATCCGTCAGCCCCCAGGAAAGGCCCTTGAGTGGCTTGCACTCATTTATTGGAATGATGTTCAGCGCTTCAGCCCATCTCTGAAGAGCAGGCTCACCATCACCAAGGACACCTCCAAAAACCAGGTTGTCCTTTCAATGACCAATATGGACCCTCTAGACACAGCCACATATTACTGTGCACACACATTAACTAACTTTTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 315
QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGVGVGWIRQPPGKALEWLALIYWNDVQRFSPSLKSRLTITKDTSKNQVVLSMTNMDPLDTATYYCAHTLTNFFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 316
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAATTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAACTCCTGATCTATGCTGTTTCCACTTTGCAATCAGGGGTCCCTTCTCGGTTCAGTGGCCGTGGATCTGGGGCAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAAGTATTCCAGTACCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 317
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKVPKLLIYAVSTLQSGVPSRFSGRGSGADFTLTISSLQPEDVATYYCQKYSSTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 318
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCACTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAACTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGTACAGCCTCCATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTTTATTACTGCGCGAGAGACTCGGGTATTGCAGCTCGTCCTAGGTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 319
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISTYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTASMELRSLRSDDTAVYYCARDSGIAARPRWFDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 320
GGTTACACCTTTACCAGCTATGGT
SEQ ID NO: 321
GYTFTSYG
SEQ ID NO: 322
ATCAGCACTTACAATGGTAACACA
SEQ ID NO: 323
ISTYNGNT
SEQ ID NO: 324
GCGAGAGACTCGGGTATTGCAGCTCGTCCTAGGTGGTTCGACCCC
SEQ ID NO: 325
ARDSGIAARPRWFDP
SEQ ID NO: 326
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGACGAGTCAGGACATTAGCAACGATTTAACTTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTCGATGCTTCCAATTTGTTAACAGGGGTCCCATCAAGGGTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTCTCACCATCACCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTTCAACTTATTACTGTCAACACTATCATAGTCTCCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAA
SEQ ID NO: 327
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQTSQDISNDLTWYQQKPGKAPKLLIFDASNLLTGVPSRVSGSGSGTDFTLTITSLQPEDVSTYYCQHYHSLPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 328
CAGGACATTAGCAACGAT
SEQ ID NO: 329
QDISND
SEQ ID NO: 330
GATGCTTCC
SEQ ID NO: 331
DAS
SEQ ID NO: 332
CAACACTATCATAGTCTCCCGATCACC
SEQ ID NO: 333
QHYHSLPIT
SEQ ID NO: 334
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCACTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAACTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGTACAGCCTCCATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTTTATTACTGCGCGAGAGACTCGGGTATTGCAGCTCGTCCTAGGTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 335
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISTYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTASMELRSLRSDDTAVYYCARDSGIAARPRWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 336
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGACGAGTCAGGACATTAGCAACGATTTAACTTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTCGATGCTTCCAATTTGTTAACAGGGGTCCCATCAAGGGTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTCTCACCATCACCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTTCAACTTATTACTGTCAACACTATCATAGTCTCCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 337
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQTSQDISNDLTWYQQKPGKAPKLLIFDASNLLTGVPSRVSGSGSGTDFTLTITSLQPEDVSTYYCQHYHSLPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 338
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAGGGTCTCCTGTAAGGCTTCTGGATACACCTTCATCGCCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGTTGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCACAGACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCTCCATGACCAGGGACACGTCCATCACCACAGCCTACATGGACCTGAGCAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGAGGGGGTAGAGGCTATACTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
SEQ ID NO: 339
QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKASGYTFIAYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTDYAQKFQGRVSMTRDTSITTAYMDLSSLRSDDTAVYYCARGGRGYTFDIWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO: 340
GGATACACCTTCATCGCCTACTAT
SEQ ID NO: 341
GYTFIAYY
SEQ ID NO: 342
ATCAACCCTAACAGTGGTGGCACA
SEQ ID NO: 343
INPNSGGT
SEQ ID NO: 344
GCGAGAGGGGGTAGAGGCTATACTTTTGATATC
SEQ ID NO: 345
ARGGRGYTFDI
SEQ ID NO: 346
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGACGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATCCACTCTCACCGTCAGCGGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATGATAGTTATTCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
SEQ ID NO: 347
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSVSSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKTSSLESGVPSRFSGSGSGTESTLTVSGLQPDDFATYYCQQYDSYSWTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 348
CAGAGTGTTAGTAGCTGG
SEQ ID NO: 349
QSVSSW
SEQ ID NO: 350
AAGACGTCT
SEQ ID NO: 351
CAACAGTATGATAGTTATTCGTGGACG
SEQ ID NO: 352
QQYDSYSWT
SEQ ID NO: 353
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAGGGTCTCCTGTAAGGCTTCTGGATACACCTTCATCGCCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGTTGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCACAGACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCTCCATGACCAGGGACACGTCCATCACCACAGCCTACATGGACCTGAGCAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGAGGGGGTAGAGGCTATACTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 354
QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKASGYTFIAYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTDYAQKFQGRVSMTRDTSITTAYMDLSSLRSDDTAVYYCARGGRGYTFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 355
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGACGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATCCACTCTCACCGTCAGCGGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATGATAGTTATTCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 356
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSVSSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKTSSLESGVPSRFSGSGSGTESTLTVSGLQPDDFATYYCQQYDSYSWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 357
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCGCTGGATTTAGTTTTAGTACCTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTAGTGGGAGAGCTGGTTCCACATTCTACGGTGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCCTCTCCAGAGACACTTCCAGTAACACGGTGCATCTGCAAATGAATAGTCTGAGAGCCGAGGATACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGGAAATGGAGTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 358
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAAGFSFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGRAGSTFYGDSVKGRFTLSRDTSSNTVHLQMNSLRAEDTAVYYCAKGNGVFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 359
GGATTTAGTTTTAGTACCTATGCC
SEQ ID NO: 360
GFSFSTYA
SEQ ID NO: 361
ATTAGTGGGAGAGCTGGTTCCACA
SEQ ID NO: 362
ISGRAGST
SEQ ID NO: 363
GCGAAAGGAAATGGAGTCTTTGACTAC
SEQ ID NO: 364
AKGNGVFDY
SEQ ID NO: 365
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGACTATTACTAACTACTTGGCCTGGTATCAACAGAACCCAGGGAAACCCCCTAAGTTACTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTAACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAATTTTTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
SEQ ID NO: 366
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQTITNYLAWYQQNPGKPPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNNFYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 367
CAGACTATTACTAACTAC
SEQ ID NO: 368
QTITNY
SEQ ID NO: 369
AAGGCGTCT
SEQ ID NO: 370
KAS
SEQ ID NO: 371
CAACAGTATAATAATTTTTACACT
SEQ ID NO: 372
QQYNNFYT
SEQ ID NO: 373
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCGCTGGATTTAGTTTTAGTACCTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTAGTGGGAGAGCTGGTTCCACATTCTACGGTGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCCTCTCCAGAGACACTTCCAGTAACACGGTGCATCTGCAAATGAATAGTCTGAGAGCCGAGGATACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGGAAATGGAGTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 374
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAAGFSFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGRAGSTFYGDSVKGRFTLSRDTSSNTVHLQMNSLRAEDTAVYYCAKGNGVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 375
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGACTATTACTAACTACTTGGCCTGGTATCAACAGAACCCAGGGAAACCCCCTAAGTTACTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTAACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAATTTTTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 376
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQTITNYLAWYQQNPGKPPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNNFYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 377
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGAAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTACCTATGGCATGTTCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTGATAAATATTATACAGACTCTATTAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAAAATACACTGTTTCTCCAAATGAACAGCCTGAGAGTAGAGGACACGGCTGTGTATTGGTGTGCGAGGATGAAGGGGTATAGAAGTTCGTCCGCCCACCACTACTACAGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 378
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCEASGFTFSTYGMFWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSDKYYTDSIKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYWCARMKGYRSSSAHHYYSMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 379
ATATCATATGATGGAAGTGATAAA
SEQ ID NO: 380
ISYDGSDK
SEQ ID NO: 381
GCGAGGATGAAGGGGTATAGAAGTTCGTCCGCCCACCACTACTACAGTATGGACGTC
SEQ ID NO: 382
ARMKGYRSSSAHHYYSMDV
SEQ ID NO: 383
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGAAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTACCTATGGCATGTTCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTGATAAATATTATACAGACTCTATTAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAAAATACACTGTTTCTCCAAATGAACAGCCTGAGAGTAGAGGACACGGCTGTGTATTGGTGTGCGAGGATGAAGGGGTATAGAAGTTCGTCCGCCCACCACTACTACAGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 384
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCEASGFTFSTYGMFWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSDKYYTDSIKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYWCARMKGYRSSSAHHYYSMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 385
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACTCCTTCACCAACTACTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTAGACAAGGACTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGTGACACAAACTATGTACAGAACTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGACTGGAACTTGGCTACTATTACAACGATATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 386
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTNYYIHWVRQAPRQGLEWMGWINPNSGDTNYVQNFQGRVTMTRDTSISTVYMELSRLRSDDTAVYYCARLELGYYYNDMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 387
GGATACTCCTTCACCAACTACTAT
SEQ ID NO: 388
GYSFTNYY
SEQ ID NO: 389
ATCAACCCTAACAGTGGTGACACA
SEQ ID NO: 390
INPNSGDT
SEQ ID NO: 391
GCGAGACTGGAACTTGGCTACTATTACAACGATATGGACGTC
SEQ ID NO: 392
ARLELGYYYNDMDV
SEQ ID NO: 393
GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCCTCACCTGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAAAGCCTCGTACACAGTGATGGAAACACCTACTTGAGTTGGCTTCAGCAGACGCCAGGCCAGCCTCCAAGACTCCTAATTTATAAGACTTCTAACCGATTCTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGTGGCAGTGGGGCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAAGCTGAGGATGTCGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTACACAATTTCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
SEQ ID NO: 394
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQTPGQPPRLLIYKTSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQATQFPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 395
CAAAGCCTCGTACACAGTGATGGAAACACCTAC
SEQ ID NO: 396
QSLVHSDGNTY
SEQ ID NO: 397
ATGCAAGCTACACAATTTCCTCTCACT
SEQ ID NO: 398
MQATQFPLT
SEQ ID NO: 399
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACTCCTTCACCAACTACTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTAGACAAGGACTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGTGACACAAACTATGTACAGAACTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGACTGGAACTTGGCTACTATTACAACGATATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 400
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTNYYIHWVRQAPRQGLEWMGWINPNSGDTNYVQNFQGRVTMTRDTSISTVYMELSRLRSDDTAVYYCARLELGYYYNDMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 401
GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCCTCACCTGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAAAGCCTCGTACACAGTGATGGAAACACCTACTTGAGTTGGCTTCAGCAGACGCCAGGCCAGCCTCCAAGACTCCTAATTTATAAGACTTCTAACCGATTCTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGTGGCAGTGGGGCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAAGCTGAGGATGTCGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTACACAATTTCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 402
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQTPGQPPRLLIYKTSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQATQFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 403
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTTCACCTTCAGTGACTCTGCTATGCACTGGGTCCGCCAGGCTTCCGGGAAAGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGTATTAGAAGCAAAACTAACAGTTACGCGACAGCATATACTGCGTCGGTGAAAGACAGGTTCACCATCTCCAGAGATGATTCAAAGAACACGGCGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTACTAGACTGGCAGTAACTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 404
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSDSAMHWVRQASGKGLEWVGRIRSKTNSYATAYTASVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTRLAVTDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 405
GGGTTCACCTTCAGTGACTCTGCT
SEQ ID NO: 406
GFTFSDSA
SEQ ID NO: 407
ATTAGAAGCAAAACTAACAGTTACGCGACA
SEQ ID NO: 408
IRSKTNSYAT
SEQ ID NO: 409
ACTAGACTGGCAGTAACTGACTAC
SEQ ID NO: 410
TRLAVTDY
SEQ ID NO: 411
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTTTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACTGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCTACAGCATAAAACTTACACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
SEQ ID NO: 412
DIQMTQSPSSLFASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHKTYTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 413
CTACAGCATAAAACTTACACG
SEQ ID NO: 414
LQHKTYT
SEQ ID NO: 415
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTTCACCTTCAGTGACTCTGCTATGCACTGGGTCCGCCAGGCTTCCGGGAAAGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGTATTAGAAGCAAAACTAACAGTTACGCGACAGCATATACTGCGTCGGTGAAAGACAGGTTCACCATCTCCAGAGATGATTCAAAGAACACGGCGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTACTAGACTGGCAGTAACTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCCAAAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
SEQ ID NO: 416
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSDSAMHWVRQASGKGLEWVGRIRSKTNSYATAYTASVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTRLAVTDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
SEQ ID NO: 417
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTTTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACTGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCTACAGCATAAAACTTACACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 418
DIQMTQSPSSLFASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHKTYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
SEQ ID NO: 419
caggcgcacctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccctcagtaattactactggagctggatccggcagcccccagggaagggactggaatggattggctatatccattacagtgggcataccaagtacaattcctccctcaagagtcgagtcaccatatcagtagacacgtccaaaaaccagttctccctgatgctgacctctgtgaccgccgcagacacggccctgtattattgtgcgagacatggtataactggaactacgtggttcgacccctggggccagggagccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 420
QAHLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSLSNYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIHYSGHTKYNSSLKSRVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTALYYCARHGITGTTWFDPWGQGALVTVSS
SEQ ID NO: 421
ggtggctccctcagtaattactac
SEQ ID NO: 422
GGSLSNYY
SEQ ID NO: 423
atccattacagtgggcatacc
SEQ ID NO: 424
IHYSGHT
SEQ ID NO: 425
gcgagacatggtataactggaactacgtggttcgacccc
SEQ ID NO: 426
ARHGITGTTWFDP
SEQ ID NO: 427
gacatccagatgacccagtctccatcttccgtgtctgcatctgtaggggacagagtcaccatcacttgtcgggcgcgtcagggcattaactactggttagcctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttactattgtcaacaggctaacagtttccctccgacgttcggacaagggaccaaggtggaaatcaag
SEQ ID NO: 428
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRARQGINYWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 429
cagggcattaactactgg
SEQ ID NO: 430
QGINYW
SEQ ID NO: 431
gctgcatcc
SEQ ID NO: 432
AAS
SEQ ID NO: 433
caacaggctaacagtttccctccgacg
SEQ ID NO: 434
QQANSFPPT
SEQ ID NO: 435
gaggtgcagctgttggagtctgggggaggcgtggtacagcctggggagtccctgagactctcctgtgcggcctctgaattttcctttagtagttatgccatgggctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcagctattagtggtagtggtggtaggacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtttctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgtgggggttatagtggcctttgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 436
EVQLLESGGGVVQPGESLRLSCAASEFSFSSYAMGWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCVGVIVAFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 437
gaattttcctttagtagttatgcc
SEQ ID NO: 438
EFSFSSYA
SEQ ID NO: 439
attagtggtagtggtggtaggaca
SEQ ID NO: 440
ISGSGGRT
SEQ ID NO: 441
gtgggggttatagtggcctttgactac
SEQ ID NO: 442
VGVIVAFDY
SEQ ID NO: 443
gacatccacatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagtattagcagctatttaaattggtatcagcagaagccagggaaagcccctaaattcctgatctatactgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgtagattttgctacttactactgtcaacagagttacactaccccgtacacttttggccaggggaccaagctggagatcaca
SEQ ID NO: 444
DIHMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKFLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPVDFATYYCQQSYTTPYTFGQGTKLEIT
SEQ ID NO: 445
cagagtattagcagctat
SEQ ID NO: 446
QSISSY
SEQ ID NO: 447
actgcatcc
SEQ ID NO: 448
TAS
SEQ ID NO: 449
caacagagttacactaccccgtacact
SEQ ID NO: 450
QQSYTTPYT
SEQ ID NO: 451
caggtgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaacccctcggagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccatcaatggttactactggaattggatccggcagtccccaggaaaggaacttgagtggattggctatatcttttatagtgggagcaccacctacagcccttccctcaggggtcgagtcaccatgtcggtagactcgtccaagaaccaattctctctgaggttggacgctgtgaccgccgcagactcggccctatattactgtgcgagacgctattacgatactttcactggttggggttactttgactcctggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 452
QVQLQESGPGLVNPSETLSLTCTVSGGSINGYYWNWIRQSPGKELEWIGYIFYSGSTTYSPSLRGRVTMSVDSSKNQFSLRLDAVTAADSALYYCARRYYDTFTGWGYFDSWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 453
ggtggctccatcaatggttactac
SEQ ID NO: 454
GGSINGYY
SEQ ID NO: 455
atcttttatagtgggagcacc
SEQ ID NO: 456
IFYSGST
SEQ ID NO: 457
gcgagacgctattacgatactttcactggttggggttactttgactcc
SEQ ID NO: 458
ARRYYDTFTGWGYFDS
SEQ ID NO: 459
gacatccagatgacccagtctccatcctccgtgtctgcatctgtgggagacagagtcaccgtcacttgtcgggcgagtcaggttattagcagatggttagcctggtatcagcagaagccagggaaagcccctaaactcctgatctatgctgcgtccagtttacaaagtggggtcccatcacggttcagcggcagtggatctgggacagattttactctcaccatcagcggcctgcagcctgaagattttgcaatttacttttgtcaacaggctaacagtttcccattcactttcggccctgggaccaaagtggatagcaag
SEQ ID NO: 460
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTVTCRASQVISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISGLQPEDFAIYFCQQANSFPFTFGPGTKVDSK
SEQ ID NO: 461
caggttattagcagatgg
SEQ ID NO: 462
QVISRW
SEQ ID NO: 463
gctgcgtcc
SEQ ID NO: 464
AAS
SEQ ID NO: 465
caacaggctaacagtttcccattcact
SEQ ID NO: 466
QQANSFPFT
SEQ ID NO: 467
catgtgcagttggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggctacaccttcaccagctactatctgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtcatcaaacctagtggtggtaacacaggttacgcacagcagttccgggacagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctccatggaactgagcagcctgagatatgaagacacggccgtgtattattgtgtgagagataatgtggaactggaactagggtattggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 468
HVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYLHWVRQAPGQGLEWMGVIKPSGGNTGYAQQFRDRVTMTRDTSTSTVSMELSSLRYEDTAVYYCVRDNVELELGYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 469
ggctacaccttcaccagctactat
SEQ ID NO: 470
GYTFTSYY
SEQ ID NO: 471
atcaaacctagtggtggtaacaca
SEQ ID NO: 472
IKPSGGNT
SEQ ID NO: 473
gtgagagataatgtggaactggaactagggtat
SEQ ID NO: 474
VRDNVELELGY
SEQ ID NO: 475
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctgtctatgtctctgggcgagaggaccaccatcaactgcaagtccagccagagtgttttatacagctccaacaataggaactacttagcttggttccaacagaaaccaggacagcctcctaaacttctcatttactgggcatctacccgggagtccggggtccctgaccgattccgtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgatgatgtggcagtttattactgtcagcaatattttgatactccgtacacttttggcctggggaccaagctggagatcaaa
SEQ ID NO: 476
DIVMTQSPDSLSMSLGERTTINCKSSQSVLYSSNNRNYLAWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFRGSGSGTDFTLTISSLQADDVAVYYCQQYFDTPYTFGLGTKLEIK
SEQ ID NO: 477
cagagtgttttatacagctccaacaataggaactac
SEQ ID NO: 478
QSVLYSSNNRNY
SEQ ID NO: 479
tgggcatct
SEQ ID NO: 480
WAS
SEQ ID NO: 481
cagcaatattttgatactccgtacact
SEQ ID NO: 482
QQYFDTPYT
SEQ ID NO: 483
gaggtacatctgttggagtctgggggaggcttagtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggactcacctttagtaactatgccatgagctgggtccgccaggttccagggaaggggctggcgtgggtctcaggtattaatgatcgtggtagtggcacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgaaagaggactacggtaactttgactattggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 484
EVHLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLTFSNYAMSWVRQVPGKGLAWVSGINDRGSGTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKEDYGNFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 485
ggactcacctttagtaactatgcc
SEQ ID NO: 486
GLTFSNYA
SEQ ID NO: 487
attaatgatcgtggtagtggcaca
SEQ ID NO: 488
INDRGSGT
SEQ ID NO: 489
gcgaaagaggactacggtaactttgactat
SEQ ID NO: 490
AKEDYGNFDY
SEQ ID NO: 491
gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggccagtcagaatattagtaactggttggcctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctataaggcgtctagtttagaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttattactgccaacagtataatagttattctatgtacacttttggccaggggaccaagctggagatcaaa
SEQ ID NO: 492
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQNISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSMYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 493
cagaatattagtaactgg
SEQ ID NO: 494
QNISNW
SEQ ID NO: 495
aaggcgtct
SEQ ID NO: 496
KAS
SEQ ID NO: 497
caacagtataatagttattctatgtacact
SEQ ID NO: 498
QQYNSYSMYT
SEQ ID NO: 499
gaggtacagctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggagggtccctgacactttcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagttatgaaatgaattgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtttcatacattagtagtagtggtagtaccatatactacgcagactctgtgaagggccgattcaccatttatagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaatagcctgagagccgaggacacggctgtttattactgtgcgagagatgaggattttggagtggcccactactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 500
EVQLVESGGGLVQPGGSLTLSCAASGFTFSSYEMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTIYRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDEDFGVAHYYGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 501
ggattcaccttcagtagttatgaa
SEQ ID NO: 502
GFTFSSYE
SEQ ID NO: 503
attagtagtagtggtagtaccata
SEQ ID NO: 504
ISSSGSTI
SEQ ID NO: 505
gcgagagatgaggattttggagtggcccactactacggtatggacgtc
SEQ ID NO: 506
ARDEDFGVAHYYGMDV
SEQ ID NO: 507
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagaagctatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcaaacagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtacccatccgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaa
SEQ ID NO: 508
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAANSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTHPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 509
cagagcattagaagctat
SEQ ID NO: 510
QSIRSY
SEQ ID NO: 511
gctgcaaac
SEQ ID NO: 512
AAN
SEQ ID NO: 513
caacagagttacagtacccatccgatcacc
SEQ ID NO: 514
QQSYSTHPIT
SEQ ID NO: 515
gaggtgcaactgttggagtctgggggaggcttggtgcagccgggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctgggttcatctttagtagttatgccatgtcctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaattattagtggaagtggtggtagaatatactacgcagagtccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgttgtatctgcaaatgaaaagtgtgcgagccgaggacacggccggatattactgtgcggggggaatagttacgctctttgactattggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 516
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSIISGSGGRIYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMKSVRAEDTAGYYCAGGIVTLFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 517
gggttcatctttagtagttatgcc
SEQ ID NO: 518
GFIFSSYA
SEQ ID NO: 519
attagtggaagtggtggtagaata
SEQ ID NO: 520
ISGSGGRI
SEQ ID NO: 521
gcggggggaatagttacgctctttgactat
SEQ ID NO: 522
AGGIVTLFDY
SEQ ID NO: 523
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggcgacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcagttatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatccagtttgcatagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgatgattttgcaacttactactgtcatcagagttacagtagtcctccgatcaccttcggccaagggacacgagtggacattaaa
SEQ ID NO: 524
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLHSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCHQSYSSPPITFGQGTRVDIK
SEQ ID NO: 525
cagagcattagcagttat
SEQ ID NO: 526
QSISSY
SEQ ID NO: 527
gctgcatcc
SEQ ID NO: 528
AAS
SEQ ID NO: 529
catcagagttacagtagtcctccgatcacc
SEQ ID NO: 530
HQSYSSPPIT
SEQ ID NO: 531
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagctatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagtagtagtacttacatatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgagagaccggggctggaactttgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcc
SEQ ID NO: 532
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSTYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGWNFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 533
ggattcaccttcagtagctatagc
SEQ ID NO: 534
GFTFSSYS
SEQ ID NO: 535
attagtagtagtagtacttacata
SEQ ID NO: 536
ISSSSTYI
SEQ ID NO: 537
gcgagagaccggggctggaactttgactac
SEQ ID NO: 538
ARDRGWNFDY
SEQ ID NO: 539
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagaccattaacagctatttaaattggtttcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatactgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtacccctccgacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaa
SEQ ID NO: 540
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTINSYLNWFQQKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 541
cagaccattaacagctat
SEQ ID NO: 542
QTINSY
SEQ ID NO: 543
actgcatcc
SEQ ID NO: 544
TAS
SEQ ID NO: 545
caacagagttacagtacccctccgacg
SEQ ID NO: 546
QQSYSTPPT
SEQ ID NO: 547
gaggtgcagttggtggaatttgggggagacctggtcaagccgggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcgccttcagttcctatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaagagcctggagtgggtctcctctatcactaatagtggtagtttcatatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatttccagagacaacgccaagagttcactgtttctgcaaatgaacagcctgagagtcgaggacacggctgtgtatttttgtgcgagtaagacttcacttgactattggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 548
EVQLVEFGGDLVKPGGSLRLSCAASGFAFSSYSMNWVRQAPGKSLEWVSSITNSGSFIYYADSVKGRFTISRDNAKSSLFLQMNSLRVEDTAVYFCASKTSLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 549
ggattcgccttcagttcctatagc
SEQ ID NO: 550
GFAFSSYS
SEQ ID NO: 551
atcactaatagtggtagtttcata
SEQ ID NO: 552
ITNSGSFI
SEQ ID NO: 553
gcgagtaagacttcacttgactat
SEQ ID NO: 554
ASKTSLDY
SEQ ID NO: 555
ggtattgtgatgacccagactccactctcctcacctgtcacccttggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtcaaagcctcgtgcacagtgatggaaacacctacttgagttggcttcagcagaggccaggccagcctcctagactcctaatttctaagatttctgaccggttatctggggtcccagacagattcactggcagtgggacagggacagatttcacactgaagatcagcagggtggaagttgaggatgtcggggtttattactgcatgcaaactacacaatttccgacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaa
SEQ ID NO: 556
GIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLISKISDRLSGVPDRFTGSGTGTDFTLKISRVEVEDVGVYYCMQTTQFPTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 557
caaagcctcgtgcacagtgatggaaacacctac
SEQ ID NO: 558
QSLVHSDGNTY
SEQ ID NO: 559
aagatttct
SEQ ID NO: 560
KIS
SEQ ID NO: 561
atgcaaactacacaatttccgacg
SEQ ID NO: 562
MQTTQFPT
SEQ ID NO: 563
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtaaagcctggggggtcccttagactctcctgtgtagcctctggattcaatttcactaacacctggatgagctgggtccgccaggttccagggagggggctggagtgggttggccgtattaaaagcgaaactgatggtgggacaacagactacgctgcacccgtgaaaggcagattcaccatctcaagagatgattcaaaaaactcgctgtatctgcaaatgaacagcctgaaaaccgaggacacagccgtgtattcctgtaccacagggatcggggactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 564
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCVASGFNFTNTWMSWVRQVPGRGLEWVGRIKSETDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYSCTTGIGDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 565
ggattcaatttcactaacacctgg
SEQ ID NO: 566
GFNFTNTW
SEQ ID NO: 567
attaaaagcgaaactgatggtgggacaaca
SEQ ID NO: 568
IKSETDGGTT
SEQ ID NO: 569
accacagggatcggggactac
SEQ ID NO: 570
TTGIGDY
SEQ ID NO: 571
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcaagtccagccagagtgttttatacagctccaacaataagaactacttagcttggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttactgggcatctacccgggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacaatattatagtactccgctcactttcggcggagggaccaaggtggagatcaaa
SEQ ID NO: 572
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 573
cagagtgttttatacagctccaacaataagaactac
SEQ ID NO: 574
QSVLYSSNNKNY
SEQ ID NO: 575
tgggcatct
SEQ ID NO: 576
WAS
SEQ ID NO: 577
caacaatattatagtactccgctcact
SEQ ID NO: 578
QQYYSTPLT
SEQ ID NO: 579
gaggtgcaactggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctaagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagttcttatagcatgaactgggtccgccagtctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagtagcagtaatttcatatactacgcagactcagtgaagggccgcttcaccatctccagagacaacgccagaaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgtgagaagtatcgcaacaactggctttgactattggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcg
SEQ ID NO: 580
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQSPGKGLEWVSSISSSSNFIYYADSVKGRFTISRDNARNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRSIATTGFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 581
ggattcaccttcagttcttatagc
SEQ ID NO: 582
GFTFSSYS
SEQ ID NO: 583
attagtagtagcagtaatttcata
SEQ ID NO: 584
ISSSSNFI
SEQ ID NO: 585
gtgagaagtatcgcaacaactggctttgactat
SEQ ID NO: 586
VRSIATTGFDY
SEQ ID NO: 587
gatattgtgatgacccagactccactctcctcacctgtcacccttggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtcaaagcctcgtacacagtgatggaaatacgtacttgagttggcttcatcagaggccaggccagcctccaagactcctcatttataagatttctaaccggttttctggggtcccagacagattcagtggcagtggggcaggggcagacttcacactgaaaatcagcagggtggaaactgaggatgtcggggtttattactgcgtgcaagctacacaatttccgacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaa
SEQ ID NO: 588
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLHQRPGQPPRLLIYKISNRFSGVPDRFSGSGAGADFTLKISRVETEDVGVYYCVQATQFPTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 589
caaagcctcgtacacagtgatggaaatacgtac
SEQ ID NO: 590
QSLVHSDGNTY
SEQ ID NO: 591
aagatttct
SEQ ID NO: 592
KIS
SEQ ID NO: 593
gtgcaagctacacaatttccgacg
SEQ ID NO: 594
VQATQFPT
SEQ ID NO: 595
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagctatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatacattagtagtagtagtagtttcatatatcacgcagactcagtgaagggccgattcaccatttccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagtcgaggacacggctgtgtattcctgtgcgagattccgaaccgggagagatgcttttgatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca
SEQ ID NO: 596
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSFIYHADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRVEDTAVYSCARFRTGRDAFDIWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO: 597
ggattcaccttcagtagctatagc
SEQ ID NO: 598
GFTFSSYS
SEQ ID NO: 599
attagtagtagtagtagtttcata
SEQ ID NO: 600
ISSSSSFI
SEQ ID NO: 601
gcgagattccgaaccgggagagatgcttttgatatc
SEQ ID NO: 602
ARFRTGRDAFDI
SEQ ID NO: 603
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattaacagctatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcttccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtacccctccgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaa
SEQ ID NO: 604
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 605
cagagcattaacagctat
SEQ ID NO: 606
QSINSY
SEQ ID NO: 607
gctgcttcc
SEQ ID NO: 608
AAS
SEQ ID NO: 609
caacagagttacagtacccctccgatcacc
SEQ ID NO: 610
QQSYSTPPIT
SEQ ID NO: 611
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagttatagcatgaattgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatacattagtagtagtagtagtttcatatatcacgcagactcagtgaagggccgattcaccatttccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagtctgagagtcgaggacacggctgtgtattcctgtgcgagattccgaaccgggagagatgcttttgatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca
SEQ ID NO: 612
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSFIYHADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRVEDTAVYSCARFRTGRDAFDIWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO: 613
ggattcaccttcagtagttatagc
SEQ ID NO: 614
GFTFSSYS
SEQ ID NO: 615
attagtagtagtagtagtttcata
SEQ ID NO: 616
ISSSSSFI
SEQ ID NO: 617
gcgagattccgaaccgggagagatgcttttgatatc
SEQ ID NO: 618
ARFRTGRDAFDI
SEQ ID NO: 619
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatttgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattaacagctatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcttccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtacccctccgatcaccttcggccaagggacacgactggacattaaa
SEQ ID NO: 620
DIQMTQSPSSLSAFVGDRVTITCRASQSINSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLDIK
SEQ ID NO: 621
cagagcattaacagctat
SEQ ID NO: 622
QSINSY
SEQ ID NO: 623
gctgcttcc
SEQ ID NO: 624
AAS
SEQ ID NO: 625
caacagagttacagtacccctccgatcacc
SEQ ID NO: 626
QQSYSTPPIT
SEQ ID NO: 627
cagctgcaactacaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcggagaccctgtccctcacttgcactgtctctggtggctccatcaccaataataattactactggggctggatccgccagcccccagggaagggactggaatggatagggattatctattatggtgggatcacctactacaatccgtccctcaagagtcgagtcagcatatccgtggacacgtccaagaatcagttctccctgaatctgagttctgtcaccgccgcagacacggctgtctattactgtgcgagactcgatttttggagtggttatctctttgactactggggccagggagccccggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 628
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITNNNYYWGWIRQPPGKGLEWIGIIYYGGITYYNPSLKSRVSISVDTSKNQFSLNLSSVTAADTAVYYCARLDFWSGYLFDYWGQGAPVTVSS
SEQ ID NO: 629
ggtggctccatcaccaataataattactac
SEQ ID NO: 630
GGSITNNNYY
SEQ ID NO: 631
atctattatggtgggatcacc
SEQ ID NO: 632
IYYGGIT
SEQ ID NO: 633
gcgagactcgatttttggagtggttatctctttgactac
SEQ ID NO: 634
ARLDFWSGYLFDY
SEQ ID NO: 635
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagggtcaccatcacttgccgggcgagtcagagcattagcagctatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtagtcctccgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaa
SEQ ID NO: 636
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYYCQQSYSSPPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 637
cagagcattagcagctat
SEQ ID NO: 638
QSISSY
SEQ ID NO: 639
gctgcatcc
SEQ ID NO: 640
AAS
SEQ ID NO: 641
caacagagttacagtagtcctccgatcacc
SEQ ID NO: 642
QQSYSSPPIT
SEQ ID NO: 643
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggaacagcctggagggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcattttcagtagttatgaaatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggaatgggtttcatatattagtagtagtggtgataccataaactccgcagactctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaaatcactgtatcttcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggcagtctattattgtgtgagagggggatattgttctagtagcagttgctttatggcctactattacggcatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 644
EVQLVESGGGLEQPGGSLRLSCAASGFIFSSYEMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSGDTINSADSVKGRFTISRDNAKKSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRGGYCSSSSCFMAYYYGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 645
ggattcattttcagtagttatgaa
SEQ ID NO: 646
GFIFSSYE
SEQ ID NO: 647
attagtagtagtggtgataccata
SEQ ID NO: 648
ISSSGDTI
SEQ ID NO: 649
gtgagagggggatattgttctagtagcagttgctttatggcctactattacggcatggacgtc
SEQ ID NO: 650
VRGGYCSSSSCFMAYYYGMDV
SEQ ID NO: 651
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccggacaagtcagagcattaacagctatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtacccctccgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaa
SEQ ID NO: 652
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSINSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 653
cagagcattaacagctat
SEQ ID NO: 654
QSINSY
SEQ ID NO: 655
gctgcatcc
SEQ ID NO: 656
AAS
SEQ ID NO: 657
caacagagttacagtacccctccgatcacc
SEQ ID NO: 658
QQSYSTPPIT
SEQ ID NO: 659
gaggtgcaactggtggagtctgggggaggcccggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaaccgctggattcaccttcagtagttatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagtcgtagtagtttcatttactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaattcactgtttctgcaaatgaacagcctgagagtcgaggacacggctgtatatttctgtgtgagattccgaatcgggagggatgcttttgacatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca
SEQ ID NO: 660
EVQLVESGGGPVKPGGSLRLSCATAGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSRSSFIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRVEDTAVYFCVRFRIGRDAFDIWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO: 661
ggattcaccttcagtagttatagc
SEQ ID NO: 662
GFTFSSYS
SEQ ID NO: 663
attagtagtcgtagtagtttcatt
SEQ ID NO: 664
ISSRSSFI
SEQ ID NO: 665
gtgagattccgaatcgggagggatgcttttgacatc
SEQ ID NO: 666
VRFRIGRDAFDI
SEQ ID NO: 667
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacgtgccgggcaagtcagagcattaacagctatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctccttatctattctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcatcatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagtgacagtacccctccgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaa
SEQ ID NO: 668
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINSYLNWYQQKPGKAPKLLIYSASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLIISSLQPEDFATYYCQQSDSTPPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 669
cagagcattaacagctat
SEQ ID NO: 670
QSINSY
SEQ ID NO: 671
tctgcatcc
SEQ ID NO: 672
SAS
SEQ ID NO: 673
caacagagtgacagtacccctccgatcacc
SEQ ID NO: 674
QQSDSTPPIT
SEQ ID NO: 675
caggttcagctggtgcagtctgaagctgtggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcttgcaaggcttctggttacacctttaccaactatggtatcggctgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcagcggttacaatggtaacacaaactatgtacagaaactccagggcagagttaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtatattattgtgtgagaaataactgggaatatgacttccactattacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 676
QVQLVQSEAVVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGIGWVRQAPGQGLEWMGWISGYNGNTNYVQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCVRNNWEYDFHYYGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 677
ggttacacctttaccaactatggt
SEQ ID NO: 678
GYTFTNYG
SEQ ID NO: 679
atcagcggttacaatggtaacaca
SEQ ID NO: 680
ISGYNGNT
SEQ ID NO: 681
gtgagaaataactgggaatatgacttccactattacggtatggacgtc
SEQ ID NO: 682
VRNNWEYDFHYYGMDV
SEQ ID NO: 683
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcagttatataaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgttgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttattactgtcaacagagttacagtacccctgcgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaa
SEQ ID NO: 684
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYINWYQQKPGKAPKLLIYVASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPAITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 685
cagagcattagcagttat
SEQ ID NO: 686
QSISSY
SEQ ID NO: 687
gttgcatcc
SEQ ID NO: 688
VAS
SEQ ID NO: 689
caacagagttacagtacccctgcgatcacc
SEQ ID NO: 690
QQSYSTPAIT
SEQ ID NO: 691
caggtccatctggtggagtctgggggaggcttggtcaagcctggagggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtgactactatatgacctggatccgccaggctccagggaagggactggactgggtttcatatattagtggtggtggtagtaccgtaaactacgcagactctgtgaagggccgcttcaccatctccagggacaacgccaagaatttaatgtctctgcaaatgaacagcctgggagtcgaggacacggccgtgtattattgtgcgagagaagggggacacagttatggtcgcttttccttcggtttggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 692
QVHLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKGLDWVSYISGGGSTVNYADSVKGRFTISRDNAKNLMSLQMNSLGVEDTAVYYCAREGGHSYGRFSFGLDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 693
ggattcaccttcagtgactactat
SEQ ID NO: 694
GFTFSDYY
SEQ ID NO: 695
attagtggtggtggtagtaccgta
SEQ ID NO: 696
ISGGGSTV
SEQ ID NO: 697
gcgagagaagggggacacagttatggtcgcttttccttcggtttggacgtc
SEQ ID NO: 698
AREGGHSYGRFSFGLDV
SEQ ID NO: 699
gacatccagatggcccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcagatatttaaattggtatcagcacaaagcagggaaagcccctaaactcctgatctatgctgcatccagtttacaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcagcctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtaaccctccgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaa
SEQ ID NO: 700
DIQMAQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQHKAGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSNPPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 701
cagagcattagcagatat
SEQ ID NO: 702
QSISRY
SEQ ID NO: 703
gctgcatcc
SEQ ID NO: 704
AAS
SEQ ID NO: 705
caacagagttacagtaaccctccgatcacc
SEQ ID NO: 706
QQSYSNPPIT
SEQ ID NO: 707
caggtacagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcacagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccatcagcagtggtaattattactggagctggatccgccagcacccagggaagggcctggagtggattgggtacatcaactacagtggatacacctactacaatccgtccctcaagagtcgaattaacatatcagcagacacgtctaagaatcagttctccctgaaggtgagctctgtgacggccgcggacacggccgtgtattactgtgcgagacataactcgaattatgaaatggactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcttca
SEQ ID NO: 708
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGNYYWSWIRQHPGKGLEWIGYINYSGYTYYNPSLKSRINISADTSKNQFSLKVSSVTAADTAVYYCARHNSNYEMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 709
ggtggctccatcagcagtggtaattattac
SEQ ID NO: 710
GGSISSGNYY
SEQ ID NO: 711
atcaactacagtggatacacc
SEQ ID NO: 712
INYSGYT
SEQ ID NO: 713
gcgagacataactcgaattatgaaatggactac
SEQ ID NO: 714
ARHNSNYEMDY
SEQ ID NO: 715
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcagctatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtacccctccgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaa
SEQ ID NO: 716
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 717
cagagcattagcagctat
SEQ ID NO: 718
QSISSY
SEQ ID NO: 719
gctgcatcc
SEQ ID NO: 720
AAS
SEQ ID NO: 721
caacagagttacagtacccctccgatcacc
SEQ ID NO: 722
QQSYSTPPIT
SEQ ID NO: 723
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggagtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaattataacatgcactgggtccggcaggctccagggaaggggctgaagtgggtctcatccattagtggtagtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacaccaataaatcactatatctccaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtctattactgtgcgagactctatagggggggtatggacgtctggggccaggggaccacggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 724
EVQLVESGGGLVKPGESLKLSCAASGFTFSNYNMHWVRQAPGKGLKWVSSISGSSSYIYYADSVKGRFTISRDNTNKSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLYRGGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 725
ggattcaccttcagtaattataac
SEQ ID NO: 726
GFTFSNYN
SEQ ID NO: 727
attagtggtagtagtagttacata
SEQ ID NO: 728
ISGSSSYI
SEQ ID NO: 729
gcgagactctatagggggggtatggacgtc
SEQ ID NO: 730
ARLYRGGMDV
SEQ ID NO: 731
caggtgcagctacaacagtggggcgcaggactgttgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcgctgtctatggtgggtccttcagtggttactactggagctggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattggggaaatcagtcatcgtggaagcaccaactacaatccgtccctcaagagtcgagtcaccatatcagtagacacgtccaggaaccagttctccctgaagctgagctctgtgaccgccgcggacacggctgtgtatttctgtgcgaattattttgggagatcctactttgacgactggggcccgggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 732
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEISHRGSTNYNPSLKSRVTISVDTSRNQFSLKLSSVTAADTAVYFCANYFGRSYFDDWGPGTLVTVSS
SEQ ID NO: 733
ggtgggtccttcagtggttactac
SEQ ID NO: 734
GGSFSGYY
SEQ ID NO: 735
atcagtcatcgtggaagcacc
SEQ ID NO: 736
ISHRGST
SEQ ID NO: 737
gcgaattattttgggagatcctactttgacgac
SEQ ID NO: 738
ANYFGRSYFDD
SEQ ID NO: 739
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagactcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcagctatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaatctcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagtttcagtagccctccgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaa
SEQ ID NO: 740
DIQMTQSPSSLSASVGDRLTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSFSSPPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 741
cagagcattagcagctat
SEQ ID NO: 742
QSISSY
SEQ ID NO: 743
gctgcatcc
SEQ ID NO: 744
AAS
SEQ ID NO: 745
caacagagtttcagtagccctccgatcacc
SEQ ID NO: 746
QQSFSSPPIT
SEQ ID NO: 747
caggtgcagctacagcagtggggcgcaggactgttgaagccttcggataccctgtccctcacctgcgctgtctatggtgggtccttcagtgattactactggagttggatccgccagcccccagggaagggactggaatggattggggaaggcagtcatactggaagaacaaactacaacccgtccctcaagagtcgaatcaccatatcagtagacacgtccaagaaccagttctccctgaagctgaactctgtgaccgccgcggacacggctttatattactgtgcgagaggagcaccagctggtaagggcttcgacccctggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 748
QVQLQQWGAGLLKPSDTLSLTCAVYGGSFSDYYWSWIRQPPGKGLEWIGEGSHTGRTNYNPSLKSRITISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTALYYCARGAPAGKGFDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 749
ggtgggtccttcagtgattactac
SEQ ID NO: 750
GGSFSDYY
SEQ ID NO: 751
ggcagtcatactggaagaaca
SEQ ID NO: 752
GSHTGRT
SEQ ID NO: 753
gcgagaggagcaccagctggtaagggcttcgacccc
SEQ ID NO: 754
ARGAPAGKGFDP
SEQ ID NO: 755
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcaggtatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctcatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtacccctccgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaa
SEQ ID NO: 756
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 757
cagagcattagcaggtat
SEQ ID NO: 758
QSISRY
SEQ ID NO: 759
gctgcatcc
SEQ ID NO: 760
AAS
SEQ ID NO: 761
caacagagttacagtacccctccgatcacc
SEQ ID NO: 762
QQSYSTPPIT
SEQ ID NO: 763
caggtacaactggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcactaactatggcatacactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatgaaacttatagattcagtgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaactccaagaacacggtgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtttattactgtgcgcgccatagtgggaattacttacgtgacttttacggtttggacgtctggggccaagggactacggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 764
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFTNYGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDETYRFSADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARHSGNYLRDFYGLDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 765
ggattcaccttcactaactatggc
SEQ ID NO: 766
GFTFTNYG
SEQ ID NO: 767
atatggtatgatgaaacttataga
SEQ ID NO: 768
IWYDETYR
SEQ ID NO: 769
gcgcgccatagtgggaattacttacgtgacttttacggtttggacgtc
SEQ ID NO: 770
ARHSGNYLRDFYGLDV
SEQ ID NO: 771
gacatccagatgacccagtctccttcctccctttctgcatctgttggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcagctatttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgttgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacaatacccctccgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaa
SEQ ID NO: 772
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYVASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYNTPPITFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 773
cagagcattagcagctat
SEQ ID NO: 774
QSISSY
SEQ ID NO: 775
gttgcatcc
SEQ ID NO: 776
VAS
SEQ ID NO: 777
caacagagttacaatacccctccgatcacc
SEQ ID NO: 778
QQSYNTPPIT
SEQ ID NO: 779
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagtttctatggcatgcactgggtccgccagactcctggcaaggggctggagtgggtggcagtcatatggtatgatggaagttctaaatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaactcgctgtatctgcaaatgagcagcctgagagccgaggacacggctctatattactgtgtcgctcacggcaccaacccttttgagtactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO: 780
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSFYGMHWVRQTPGKGLEWVAVIWYDGSSKYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMSSLRAEDTALYYCVAHGTNPFEYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 781
ggattcaccttcagtttctatggc
SEQ ID NO: 782
GFTFSFYG
SEQ ID NO: 783
atatggtatgatggaagttctaaa
SEQ ID NO: 784
IWYDGSSK
SEQ ID NO: 785
gtcgctcacggcaccaacccttttgagtac
SEQ ID NO: 786
VAHGTNPFEY
实施例4：示例性CDH15抗体的结合参数
使用基于实时表面等离子体共振（SPR）的Biacore 4000生物传感器来确定CADH15与纯化的抗CDH15单克隆抗体结合的平衡解离常数（KD）。所有结合研究均在25°C和37°C下在10 mM HEPES、150 mM NaCl、1 mM CaCl2、0.5 mM MgCl2、0.05%和0.05% v/v表面活性剂Tween-20，pH 7.4（HBS-P）运行缓冲液中进行。首先通过与单克隆小鼠抗人Fc抗体（REGN2567）或抗小鼠Fc特异性抗体（GE Healthcare，#BR100838）胺偶联来衍生BiacoreCM5传感器表面，以捕获抗CDH15单克隆抗体。以30 µL/min的流速注射在HBS-P运行缓冲液中制备的一系列4倍稀释液中的不同浓度的CDH15试剂（用C-末端myc-myc-六组氨酸标签表达的人CDH15胞外结构域（hCDH15-MMH；REGN4409）、用C-末端myc-myc-六组氨酸标签表达的人CDH15（K584Q）胞外结构域（hCDH15_K584Q-MMH；REGN5943）、用C-末端myc-myc-六组氨酸标签表达的猴CDH15胞外结构域（mfCDH15-MMH；REGN4586）和用C-末端myc-myc-六组氨酸标签表达的小鼠CDH15胞外结构域（mCDH15-MMH；REGN4410），浓度范围介于6.25 nM至100 nM）持续2.5分钟或4分钟。在HBS-P运行缓冲液中监测与抗CDH15单克隆抗体结合的不同CDH15试剂的解离持续7分钟或10分钟。在每个循环结束时，使用20 mM H3PO4或甘氨酸（pH1.5）的12秒或60秒注射再生抗CDH15单克隆抗体捕获表面。
使用Scrubber 2.0c曲线拟合软件将实时结合传感图拟合为具有质量传递限制的1:1结合模型，从而确定缔合速率（ka）和解离速率（kd）。结合解离平衡常数（KD）和解离半衰期（t½）根据动力学速率计算如下：
，和
在25°C和37°C下，抗CDH15单克隆抗体与hCDH15-MMH、hCDH15(K584Q).MMH、mfCDH15-MMH和mCDH15-MMH结合的平衡和动力学结合参数分别显示于表4至表11中。
结果
在25°C下，抗CDH15单克隆抗体以范围介于27.6 pM至125 nM的KD值与hCDH15-MMH结合，如下表4中所示。
表4：在25°C下hCDH15-MMH与抗CDH15单克隆抗体相互作用的动力学结合参数。
在37°C下，抗CDH15单克隆抗体以范围介于218 pM至234 nM的KD值与hCDH15-MMH结合，如下表5中所示。
表5：在37°C下hCDH15-MMH与抗CDH15单克隆抗体相互作用的动力学结合参数。
在25°C下，抗CDH15单克隆抗体以范围介于65.6 pM至235 nM的KD值与hCDH15(K584Q)-MMH结合，如下表6中所示。
表6：在25°C下hCDH15(K584Q)-MMH与抗CDH15单克隆抗体相互作用的动力学结合参数。
在37°C下，抗CDH15单克隆抗体以范围介于375 pM至334 nM的KD值与hCDH15(K584Q)-MMH结合，如下表7中所示。
表7：在37°C下hCDH15(K584Q)-MMH与抗CDH15单克隆抗体相互作用的动力学结合参数。
在25°C下，抗CDH15单克隆抗体以范围介于86.7 pM至1.33 µM的KD值与mfCDH15-MMH结合，如下表8中所示。
表8：在25°C下mfCDH15-MMH与抗CDH15单克隆抗体相互作用的动力学结合参数。
在37°C下，抗CDH15单克隆抗体以范围介于151 pM至539 nM的KD值与mfCDH15-MMH结合，如下表9中所示。
表9：在37°C下mfCDH15-MMH与抗CDH15单克隆抗体相互作用的动力学结合参数。
在25°C下，抗CDH15单克隆抗体以范围介于129 pM至323 nM的KD值与mCDH15-MMH结合，如下表10中所示。
表10：在25°C下mCDH15-MMH与抗CDH15单克隆抗体相互作用的动力学结合参数。
在37°C下，抗CDH15单克隆抗体以范围介于637 pM至391 nM的KD值与mCDH15-MMH结合，如下表11中所示。
表11：在37°C下mCDH15-MMH与抗CDH15单克隆抗体相互作用的动力学结合参数。
实施例5：示例性CDH15抗体之间的交叉竞争
在Octet HTX生物传感器平台（Sartorius ForteBio Corp.）上，使用实时、无标记生物层干涉测量法（BLI）测定来确定不同的抗CDH15隆抗体（mAb）之间的结合竞争。整个实验在25°C下在含有150 mM NaCl、0.5 mM MgCl2、1 mM CaCl2、1 mg/mL BSA、0.02% NaN3和0.05% v/v表面活性剂Tween-20，pH 7.4（HBS-P）的10 mM HEPES缓冲液中进行，板以1000rpm的速度振荡。为了评估一种抗体与另一种抗体竞争与CDH15结合的能力，首先通过将生物传感器尖端浸没在含有20 µg/mL hCDH15-MMH溶液的孔中180秒，将约0.3 nM用C-末端myc-myc-六组氨酸（hCDH15-MMH）表达的重组人CDH15胞外结构域捕获到抗Penta-His抗体包被的Octet生物传感器尖端（Fortebio Inc，#18-5122）上。然后，通过浸入含有50 µg/mLmAb-1溶液的孔中4分钟，从而用第一抗CDH15单克隆抗体（下文称为mAb-1）来饱和抗原捕获的生物传感器尖端。将生物传感器尖端浸入含有50 µg/mL第二抗CDH15单克隆抗体（下文称为mAb-2）溶液的孔中3分钟。在每个步骤之间，在HBS-P缓冲液中洗涤生物传感器尖端。监测实时结合反应，并且记录每个步骤结束时的结合反应。将mAb-2与跟mAb-1预复合的hCDH15-MMH的结合反应与单独的hCDH15-MMH的结合反应（mAb-1=同种型对照）进行比较，并且如果预结合的mAb-1使mAb-2的结合降低超过60%，则mAb-1被归类为mAb-2的竞争物。测试的每种抗体的竞争物总结于下表12中。
表12：不同抗CDH15单克隆抗体之间与hCDH15-MMH结合的交叉竞争。
实施例6：纯化的CDH15抗体与小鼠肌肉干细胞的结合
如上所描述，CDH15 mRNA在MuSC中高表达。如图7A中所示，示例性抗hCDH15抗体8787能够与跟单独肌纤维缔合的小鼠MuSC结合。因此，这证明本公开的抗hCDH15抗体能够与位于其天然生态位内（即，附着于单根肌纤维）的肌肉干细胞上的mCDH15特异性结合。
此外，如图7B中所示，示例性商业抗mCDH15抗体也能够与来自WT小鼠的肌肉横截面中与肌肉纤维相邻的MuSC结合。此外，图7C显示，在野生型小鼠中，几乎所有的Pax7+MuSC（约95%）都显示出在细胞表面表达的某种程度的CDH15蛋白，而CDH15-/-小鼠的Pax7+MuSC中不存在CDH15蛋白。因此，这证明商业抗小鼠CDH15抗体以与本公开的抗hCDH15抗体相当的模式与mCDH15结合，而在CDH15-/-小鼠中未检测到结合，如所预期的。
实施例7：纯化的CDH15抗体与横纹肌肉瘤细胞的结合。
CDH15在RMS中高表达，并且可以特异性区分RMS和其他肉瘤。此外，高CDH15表达与化疗耐药性和软组织肉瘤的较差预后相关。检查本公开的抗hCDH15抗体与RMS细胞结合的能力。如图8中所示，示例性抗hCDH15抗体8787和9295与肺泡性和胚胎性RMS细胞特异性结合，但不与用作对照的胶质母细胞瘤细胞结合。此外，9295能够与RMS肿瘤球特异性结合（参见图9）。因此，这证明本公开的抗hCDH15抗体能够与RMS细胞和肿瘤球上的hCDH15特异性结合。
方法
体内肌肉损伤和组织学分析
为了评估体内肌肉再生能力（图2A-C，图6A-D），经由异氟烷麻醉WT和CDH15-/-小鼠并刮腿毛，随后向胫骨前肌（TA）肌肉注射50 uL的10 uM心脏毒素（CTX，Sigma#217503，批号#3123340，在0.9%盐水中稀释）。在损伤后（dpi）5天、15天或25天，处死小鼠并解剖TA肌肉并通过在液氮冷却的异戊烷中冷冻而冻保存在O.C.T.化合物（Tissue-Tek目录号4583）中。将组织储存在-80°C下，并随后以12 µm厚度切片到SuperFrost Plus带电玻璃载玻片（ThermoFisher Scientific目录号12-550-15）上。切片用4% PFA固定15分钟。然后将载玻片用PBS洗涤3次，每次5分钟。将组织切片在RT下用阻断缓冲液（20%山羊血清、0.3%Triton，在PBS中）覆盖1小时。添加一抗（在层粘连蛋白阻断缓冲液中1:100稀释：SigmaL9393）并温育过夜。然后用PBS洗涤载玻片并与二抗（在阻断缓冲液中1:250稀释，Invitrogen A32733）一起温育1小时。将载玻片用PBS洗涤，用Hoechst 33342（ThermoFisher，目录号00-4958-02，1:1000）复染5分钟，并在Fluoromount G（ThermoFisher目录号00-4958-02）中封片。将载玻片干燥过夜，并随后使用ZeissAxioscan显微镜进行成像。使用HALO成像软件（Indica Labs）和Python定量每条肌纤维的横截面积和细胞核数。
离体肌肉功能分析
为了评估功能再生（图3A-B），麻醉WT和CDH15-/-小鼠，并且向胫骨前肌和趾长伸肌（EDL）肌肉注射50 uL的10 uM心脏毒素（Sigma#217503，批号#3123340，在0.9%盐水中稀释）。损伤后15天，处死小鼠，仔细解剖EDL肌肉，并且使用来自MyoDynamics（840MD）的肌肉条带系统（Muscle Strip System）评估肌力产生。将缝线系在EDL肌腱周围，并且随后将EDL锁定在840MD系统中的适当位置。840MD系统中使用的培养基是来自Boston BioProductsBSS-375的Tyrode溶液（改良II）。将EDL拉伸至最佳长度，并且随后用一系列强直性刺激（20V，持续2 ms，脉冲频率从25 Hz开始，至150 Hz，每次发作之间2分钟）进行刺激。在从840MD系统中取出EDL之前，记录EDL的长度。然后取出EDL并称重，并且这些数据用于计算比力。然后将损伤后15天由EDL产生的最大强直力相对于相同相应基因型的未损伤小鼠的最大强直力作图。
分离的单根肌纤维上的肌肉干细胞活化
为了评估MuSC在其天然肌纤维相关生态位内的离体静息到活化的转变（图4A-B），取出WT和CDH15-/-小鼠的腓肠肌，胶原酶消化，并且将单根肌纤维分离、洗涤并在DMEM +20% FBS中在37°C、5% CO2下温育48小时。在48小时后，用4%多聚甲醛固定肌纤维，并且对Pax7（发育研究杂交瘤库：PAX7）、Hoechst（Invitrogen：H3570）和肌动蛋白（Invitrogen：A22287）染色。然后将肌纤维转移到显微镜载玻片上，盖玻片，并且使用Zeiss LSM 710共焦显微镜成像。使用Zen软件（Zeiss），手动定量Pax7+ MuSC的总数以及每个克隆簇内的Pax7+MuSC的数量（来自n=3只WT和3只CDH15-/-小鼠），并且绘制含有仅一个Pax7+ MuSC或超过一个MuSC的克隆的百分比以及MuSC/簇的总数。
FACS分离的MuSC的RNAseq
为了确定静息MuSC中的CDH15缺失是否影响其转录谱，经由FACS分离来自健康、未损伤的WT和CDH15-/-小鼠的MuSC（图5A-B）。将小鼠麻醉并处死，并且分离腓肠肌、比目鱼肌、股四头肌、胫骨前肌和趾长伸肌并切碎。将切碎的肌肉在37°C的摇动振荡器中在700 U/mL II型胶原酶（Gibco，16050-122）中在Ham's F10缓冲液（Life Technologies）中温育1.5小时，然后切换到含有100 U/ml Ii型胶原酶和2 U/mL 分散酶II（Roche）的消化培养基。在酶消化后，将肌肉浆液通过带有20G针头的10 mL注射器上下移液十次，然后通过70 um细胞过滤器。使用卫星细胞分离珠（Miltenyi Biotec.）纯化样品，然后用针对α7-整联蛋白（R&DSystems，FAB3518G）和CD34（BD Biosciences，560230）的荧光团缀合的抗体标记样品，以在冰上将MuSC染色20分钟。将样品洗涤并悬浮在FACS缓冲液中，并且在FACSAria融合物上分选α7-整合素+/CD34+ MuSC。在Trizol中裂解分选的MuSC并用miRNeasy Micro试剂盒（Qiagen）分离RNA。
使用KAPA mRNA HyperPrep（Roche Sequencing Solutions）制备链特异性RNA-seq文库。进行十二循环PCR以扩增文库。通过33个循环的多重单读运行在Illumina HiSeq2500（Illumina）上进行测序。经由Illumina Casava v1.8.2将原始BCL序列数据转换为FASTQ格式。基于读数的条形码解码读数，并且用FastQC （http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/）评估读数质量。使用允许两个错配的Array Studio（QIAGEN OmicSoft）将读数映射到小鼠转录组（NCBI GRCm38）。将映射到基因外显子的读数在基因水平上求和。
使用定制R代码进行转录组分析。DESeq2包用于差异基因表达分析，并且显著扰动的基因被定义为在向上或向下方向上具有不小于1.5的倍数变化并且Benjamini和Hochberg多重比较调整的P≤.05的那些。Enrichr应用程序内的基因组浏览器PWM分析用于鉴定具有特异性转录因子结合基序的基因的富集，与CDH15-/- MuSC相比，这些基序在WT中受到差异调控。
CDH15抗体与单根肌纤维相关的MuSC的结合
对于单独肌纤维的分离（图7A），取出腓肠肌，用胶原酶消化，并且将单独肌纤维分离，洗涤，并且在DMEM+10%马血清中于37°C、5% CO2下温育过夜。在过夜温育后，将单根肌纤维与100 nM抗hCDH15抗体（REGN8787）或同种型对照抗体一起温育30分钟。然后将肌纤维在DMEM+10%马血清中洗涤两次，并随后与10 ug/mL荧光缀合的二抗一起温育30分钟，在DMEM+10%马血清中洗涤两次，然后在室温下用4%多聚甲醛（PFA）固定15分钟。然后将单独纤维用PBS洗涤两次，用Hoechst染色5分钟，再用PBS洗涤一次，然后转移到显微镜载玻片上，盖上盖玻片，并且使用Zeiss LSM 710共焦显微镜进行成像。
在细胞表面处表达CDH15蛋白的MuSC的百分比的定量
为了检测组织切片中的CDH15蛋白表达和定位（图7B-C），取出野生型或CDH15-/-小鼠的腓肠肌并通过在液氮冷却的异戊烷中冷冻而冷冻保存在O.C.T.化合物（Tissue-Tek目录号4583）中。将组织储存在-80°C下，并随后以12 µm厚度切片到SuperFrost Plus带电玻璃载玻片（ThermoFisher Scientific目录号12-550-15）上。切片用4% PFA固定15分钟。然后将载玻片用PBS洗涤3次，每次5分钟。将组织切片在RT下用阻断缓冲液（20%山羊血清、0.3% Triton，在PBS中）覆盖1小时。添加一抗（在层粘连蛋白阻断缓冲液中1:100稀释：Sigma L9393，CDH15：BD 611101，和Pax7 DSHB：Pax7）并温育过夜。然后用PBS洗涤载玻片并与二抗（在阻断缓冲液中1:250稀释，Invitrogen）一起温育1小时。将载玻片用PBS洗涤，用Hoechst 33342（ThermoFisher，目录号00-4958-02，1:1000）复染5分钟，并在FluoromountG（ThermoFisher目录号00-4958-02）中封片。将载玻片干燥过夜，并随后使用ZeissAxioscan显微镜进行成像。手动计数和定量Pax7+细胞的总数以及CDH15染色阳性的Pax7+细胞的数量。
CDH15抗体与横纹肌肉瘤细胞的结合
为了确定CDH15抗体是否可以与横纹肌肉瘤细胞特异性结合但不能与其他肿瘤细胞（例如，胶质母细胞瘤）特异性结合，进行体外结合测定(图8、图9)。测试的横纹肌肉瘤细胞系是RH30（ATCC）和RD（ATCC），并且胶质母细胞瘤细胞系U87（ATCC）用作阴性对照。对于贴壁细胞培养基，RH30细胞系使用含有10% FBS的RPMI-1640，并且RD和U87使用含有10% FBS的DMEM（11995-065）。
对于活染色贴壁细胞，将细胞系接种在胶原包被的96孔板中，并且在铺板后72小时染色。将细胞在100 nM CDH15抗体或同种型对照抗体中温育30分钟，用培养基洗涤两次，然后将在10 ug/mL的荧光缀合二级（Invitrogen A-21445用于人抗体，并且Invitrogen A-21235用于小鼠抗体）中温育30分钟。用培养基再洗涤细胞两次，然后用4% PFA固定15分钟。然后用PBS洗涤细胞，用Hoescht（1:1000）染色5分钟，并且用PBS再洗涤两次。然后将细胞在阻断缓冲液（20%山羊血清，0.3% Triton，在PBS中）中在RT下温育1小时。然后添加一抗（在具有成肌素的阻断缓冲液中1:100稀释，Abcam AB124800）并温育过夜。将细胞用PBS洗涤两次，然后添加二级1小时（在阻断缓冲液中1:200稀释，Invitrogen A11035）。将细胞用PBS洗涤两次并在Zeiss Axio observer显微镜上成像。
对于肿瘤球培养，将RD细胞接种在低附着6孔板（Corning 3471）中并在肿瘤球培养基（1:1 DMEM（11995-065）&Ham's F12（11765-054）+2X B27补充剂（17504004）+10 ng/mL人bFGF（Thermo，RP-8628）+10 ng/mL人EGF（Thermo，PHG0311）+1%青霉素链霉素（目录号15140148））中培养直至形成肿瘤球。一旦肿瘤球形成，将细胞转移到15 mL锥形管中，并且使其通过重力沉降10分钟（每个洗涤步骤使细胞通过重力沉降10分钟）。将细胞在100 nMCDH15或同种型抗体中温育30分钟，用培养基洗涤两次，并且在10 ug/mL的荧光缀合二级（Invitrogen A-21445）中温育30分钟。用培养基再洗涤细胞两次，然后用4% PFA固定15分钟。然后用PBS洗涤细胞，用Hoescht（1:1000）染色5分钟，并且用PBS再洗涤两次。然后将细胞在阻断缓冲液（20%山羊血清，0.3% Triton，在PBS中）中在RT下温育1小时。然后添加一抗（在具有成肌素的阻断缓冲液中1:100稀释，Abcam AB124800）并温育过夜。将细胞用PBS洗涤两次，然后添加二级1小时（在阻断缓冲液中1:200稀释，Invitrogen A11035）。将细胞用PBS洗涤两次，安装在fluoromount G（Invitrogen 00-4958-02）中的载玻片上，盖玻片并使用Zeiss LSM 710共焦显微镜成像。
实施例8：用抗钙粘蛋白15抗原结合结构域重靶向AAV
图10显示了在CAG启动子的控制下在用2.5×105 vg/细胞的表达eGFP的AAV9转导3天后C2C12小鼠成肌细胞的基于AAV9的重靶向病毒转导。提供了代表性的免疫荧光图像，其描绘了用以下转导的C2C12成肌细胞经由GFP荧光的转导效率：WT AAV9颗粒、N272A去靶向的AAV9颗粒、以1:8镶嵌装饰与抗ASGR1 mAb缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒、以1:8镶嵌装饰与抗CDH15 mAb（9295 mAb；HC=SEQ ID NO: 832 [DNA]和833 [蛋白质]；LC=SEQ IDNO: 834 [DNA]和835 [蛋白质]）缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒、以1:8镶嵌装饰与ASGR1Fab缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒、以1:8镶嵌装饰与抗CDH15 Fab（9295 Fab；HC = SEQID NO: 836 [DNA]和837 [蛋白质]；LC = SEQ ID NO: 834 [DNA]和835 [蛋白质]）缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒、以1:2镶嵌装饰与抗ASGR1 Fab缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒和以1:2镶嵌装饰与9295 Fab缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒。如图10中所示，与WT AAV9相比，当以1:8镶嵌缀合时，基于REGN9295的抗CDH15 mAb和Fab的缀合改善了C2C12成肌细胞的转导。
图11显示了在CAG启动子的控制下用2.5×105vg/细胞的表达eGFP的AAV9转导3天后人骨骼肌成肌细胞的基于AAV9的重靶向病毒转导。提供了代表性的免疫荧光图像，其描绘了用以下转导的人成肌细胞经由GFP荧光的转导效率：WT AAV9颗粒、N272A去靶向的AAV9颗粒、以1:8镶嵌装饰与抗ASGR1 mAb缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒、以1:8镶嵌装饰与9295 mAb缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒、以1:8镶嵌装饰与ASGR1 Fab缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒、以1:8镶嵌装饰与9295 Fab缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒、以1:2镶嵌装饰与抗ASGR1 Fab缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒和以1:2镶嵌装饰与9295 Fab缀合的N272A去靶向的AAV9颗粒。如图4中所示，与WT AAV9相比，当以1:8镶嵌缀合时，基于9295的抗CDH15mAb和Fab的缀合改善了人成肌细胞的转导。
上文描述的9295 mAb的重链（HC）包含9295的重链可变区（HCVR）、三个重链恒定区（CH1-CH3）和SpyCatcher，例如SEQ ID NO: 833=SEQ ID NO: 202+CH1-CH3+SEQ ID NO:816。上文描述的9295 Fab的HC包含9295的HCVR、CH1和SpyCatcher，例如SEQ ID NO: 837=SEQ ID NO: 202+CH1+SEQ ID NO: 816。上文描述的9295 mAb和Fab的轻链（LC）包含9295的轻链可变区和轻链恒定区（CL），例如SEQ ID NO: 835=SEQ ID NO: 210+CL。
材料和方法
AAV衣壳蛋白构筑体
编码所需SpyTag插入、侧翼接头氨基酸和另外的突变的基因块（GeneBlock）购自IDT，并且根据制造商的方案（NEB）使用Gibson组装将其克隆到BsiWI和XcmI消化的pAAVR2C9（AAV9野生型RepCap质粒）中。
将SpyCatcher克隆到抗体中
编码抗体重链的基因块购自IDT，并且使用Gibson组装将其克隆到适当的含有SpyCatcher的主链质粒中。将重链克隆为完整Fc和Fab。将轻链克隆到标准人轻链表达质粒中。
AAV病毒载体的制备
通过使用PEI Pro用以下质粒转染293T包装细胞来产生病毒：pAd辅助质粒、在CAG的控制下编码eGFP的含AAV2 ITR的基因组质粒以及编码AAV Rep和CAP基因的pAAV-CAP质粒（具有或不具有编码插入在编码衣壳蛋白的位置453处的10个氨基酸接头和SpyTag的序列）。在某些条件下，用编码抗原结合结构域（例如，完整单克隆抗体（mAb）或其Fab片段）的另外的质粒进一步转染293T细胞。如WO2019006046（通过引用整体并入本文）中所描述，抗体重链构建体均在其C末端与SpyCatcher融合，使得在接触包含SpyTag的AAV9衣壳蛋白时，在衣壳蛋白与抗原结合结构域之间形成共价异肽键。在不完全DMEM（无另外的补充物）中制备转染复合物，并且在室温下温育10分钟。
通过用以下质粒和数量转染293T包装细胞的15 cm板来产生每种病毒：
具有eGFP的WT AAV9/AAV9 N272A
具有eGFP的AAV9抗人ASGR1或抗CDH15（REGN9295）mAb和Fab（1:8比率）
具有：
或
具有eGFP的AAV9抗人ASGR1或抗CDH15（REGN9295）Fab（1:2比率）
具有：
温育后，将复合物添加到补充有10% FBS、1XNEAA、1% Pen/Strep和1% L-谷氨酰胺的DMEM中。
将转染的包装细胞在37°C下温育3天，然后使用标准冻融方案从细胞溶解物中收集病毒。通过刮削使包装细胞剥落且对其进行粒化。去除上清液，并将细胞重新悬浮在50mMTris-HCl、150mM NaCl和2 mM MgCl2（pH 8.0）的溶液中。通过经由三个连续冻融循环诱导细胞溶解来释放细胞内病毒颗粒，这些冻融循环由在剧烈涡旋下使细胞悬浮液在干冰/乙醇浴与37°C水浴之间穿梭组成。通过将裂解物在37°C下用EMD Millipore Benzonase（50U/ml细胞裂解物）处理60 min来降低粘度，偶尔混合。然后通过离心沉淀碎片，并通过0.22µm PVDF Millex-GV过滤器过滤所得上清液。对于要在体外测试的粗制病毒，将过滤的裂解物直接添加到带有Ultracel-100膜（100 KDa MWCO）过滤器滤筒的Amicon Ultra-15离心过滤装置中。以5-10分钟的间隔对过滤装置进行离心，直到上室达到所需体积，然后将浓缩的粗制病毒移液到低蛋白结合管中，并储存在4°C下。
使用已知浓度的病毒的标准曲线，通过qPCR确定滴度（每毫升vg/mL的病毒基因组数）。
细胞
将C2C12成肌细胞系维持在补充有10% FBS、1% Pen/Strep和1%L-谷氨酰胺的DMEM中，并且在具有5% CO2的37C培养箱中生长。C2C12细胞系获自ATCC（美国典型培养物保藏中心，Manassas，VA）。
人骨骼肌成肌细胞购自Cook Myosite（Pittsburgh, PA；SkMDC；批号P01059-14M），并且维持在补充有肌强直生长补充剂（MS-3333）的肌强直基础培养基（MB-2222）中，并且在含有5% CO2的37C培养箱中生长。
细胞转导和分析
将C2C12成肌细胞和人成肌细胞以8,000个细胞/孔的密度接种在具有透明基底和黑色壁的胶原包被的96孔板中。为了感染细胞，将病毒颗粒以2.5×105 vg/细胞直接添加到培养细胞的培养基中，并且将混合物在37°C下温育。感染后三天，将细胞用4% PFA固定15分钟，洗涤，并且储存在PBS中直至分析。
在洗涤后，将细胞用Hoescht（1:1,000）染色并在Axio Observer显微镜（Zeiss,Oberkochen, Germany）上成像以用于GFP检测。
单根肌纤维和肌肉横截面免疫染色
对于单根肌纤维免疫染色，处死野生型C57BL/6小鼠并仔细解剖腓肠肌，并且在DMEM（高葡萄糖，+谷氨酰胺，+110 mg/mL丙酮酸钠，Fisher 11995-065）中于700单位/mL胶原酶II（Gibco，17101-015）中在37oC下消化90分钟。将肌肉放置在马血清包被的板上并挑取未受损的单根纤维并转移到具有洗涤培养基（DMEM，10%马血清，1% pen/strep）的板上。将单根纤维在马血清包被的平板中的新鲜洗涤培养基中洗涤3次，然后转移到仅具有DMEM的板中并温育1小时。将单根纤维转移至低粘附性6孔板（Corning，3474）并在含有2%马血清的DMEM中温育过夜。将单根纤维用100 nM抗CDH15 Ab活染色30分钟，洗涤两次，并用1:200APC缀合的人二级（Jackson目录号109-136-170）染色。然后将单根纤维洗涤两次，用4% PFA固定，然后在Pax7（1:100，DSHB）中温育过夜。然后将单根纤维与Hoescht（1:1000）一起温育5分钟，用PBS洗涤，然后安装在盖玻片上并在Zeiss LSM 710共聚焦显微镜上成像。
对于肌肉横截面免疫染色，处死野生型C57BL/6小鼠，并且将腓肠肌包埋在光学相干断层扫描（OCT）化合物中，在液氮冷却的异戊烷中冷冻，随后以10 um冷冻切片在显微镜载玻片上。将组织切片用4% PFA固定，用0.1% Triton-X100在20%山羊血清中阻断和透化，并且用抗CDH15 Ab、抗Pax7 Ab和抗层粘连蛋白Ab染色过夜，然后用Alexa-fluor缀合的二抗（1:250）检测。然后洗涤组织，用Hoescht（1:1000）复染，盖玻片，并且在Axio Observer显微镜上成像。
尽管已参照多个实施方案具体地显示和描述本发明，但本领域的技术人员应理解，可在不脱离本发明的精神和范围的情况下对本文所公开的各种实施方案的形式和细节作出修改，并且本文所公开的各种实施方案不打算用作对权利要求书范围的限制。尽管可使用与本文所描述的方法和材料类似或等效的任何方法和材料实践或测试本发明，但现描述一些优选的方法和材料。本文所引用的所有出版物均通过引用整体并入本文进行描述。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。

Claims (98)

1.一种与人钙粘蛋白15（CDH15）结合的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白包含一组选自由以下组成的组的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列：SEQ IDNO: 4-6-8-12-14-16、24-26-28-32-34-36、44-46-48-52-34-54、62-64-66-52-34-54、72-74-76-52-34-54、82-84-86-52-34-54、92-94-96-100-34-102、82-111-113-117-34-119、127-129-131-135-137-139、147-149-151-155-157-159、167-169-171-175-177-179、187-189-191-52-34-196、204-206-208-212-137-214、222-224-226-52-34-54、232-234-236-52-34-54、242-244-246-52-34-54、82-253-255-52-34-54、261-263-265-269-271-273、281-283-285-289-291-293、301-303-305-309-311-313、321-323-325-329-331-333、341-343-345-349-14-352、360-362-364-368-370-372、187-380-382-52-34-54、388-390-392-396-14-398、406-408-410-100-34-414、422-424-426-430-432-434、438-440-442-446-448-450、454-456-458-462-464-466、470-472-474-478-480-482、486-488-490-494-496-498、502-504-506-510-512-514、518-520-522-526-528-530、534-536-538-542-544-546、550-552-554-558-560-562、566-568-570-574-576-578、582-584-586-590-592-594、598-600-602-606-608-610、614-616-618-622-624-626、630-632-634-638-640-642、646-648-650-654-656-658、662-664-666-670-672-674、678-680-682-686-688-690、694-696-698-702-704-706、710-712-714-718-720-722、726-728-730-734-736-738、742-744-746-686-688-690、750-752-754-758-760-762和766-768-770-774-776-778。
2.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白包含重链可变区（HCVR或VH）。
3.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白包含轻链可变区（LCVR或VL）。
4.如权利要求1至3中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白包含抗hCDH15抗体或其抗原结合片段。
5.如权利要求4所述的抗原结合蛋白，其中所述抗hCDH15抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的组：人或人源化抗体或其抗原结合片段、单价Fab'、二价Fab2、F（ab）'3片段、单链可变片段（scFv）、双scFv、（scFv）2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、二硫键稳定的Fv蛋白（dsFv）、单结构域抗体（sdAb）、Ig NAR、双特异性抗体或其结合片段、双特异性T细胞衔接子（BiTE）、三特异性抗体和其经化学修饰的衍生物。
6.如权利要求5所述的抗原结合蛋白，其中所述抗hCDH15抗体或其抗原结合片段包含片段抗原结合区（Fab）。
7.如权利要求5所述的抗原结合蛋白，其中所述抗hCDH15抗体或其抗原结合片段包含单链可变片段（scFv）。
8.如权利要求7所述的抗原结合蛋白，其中所述scFv包含从N末端至C末端按以下取向排列的可变区：HCVR-LCVR。
9.如权利要求7所述的抗原结合蛋白，其中所述scFv包含从N末端至C末端按以下取向排列的可变区：LCVR-HCVR。
10.如权利要求7至8中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述scFv可变区通过接头连接。
11.如权利要求10所述的抗原结合蛋白，其中所述接头是肽接头。
12.如权利要求11所述的抗原结合蛋白，其中所述肽接头是-（GGGGS）n-（SEQ ID NO:789），其中n是1-10。
13.如权利要求1至12中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白以约1×10-7 M的KD或更强的亲和力与hCDH15结合。
14.如权利要求1至13中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白以约10×10-8至约1×1010的KD与hCDH15结合。
15.如权利要求1至14中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白以约5×10-9至约1×1010的KD与hCDH15结合。
16.如权利要求1至15中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白包含与选自由以下组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对具有至少90%序列同一性的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO: 2和10、22和30、42和50、60和50、70和50、80和50、90和98、108和115、125和133、145和153、165和173、185和193、202和210、220和50、230和50、240和50、250和50、259和267、279和287、299和307、319和327、339和347、358和366、378和50、386和394、404和412、420和428、436和444、452和460、468和476、484和492、500和508、516和524、532和540、548和556、564和572、580和588、596和604、612和620、628和636、644和652、660和668、676和684、692和700、708和716、724和732、740和684、748和756以及764和772。
17.一种多核苷酸，其包含编码如权利要求1至16中任一项所述的抗原结合蛋白的序列。
18.一种药物组合物，其包含如权利要求1至16中任一项所述的抗原结合蛋白和药学上可接受的载剂。
19.一种抑制细胞中的CDH15的活性的方法，其包括使表达CDH15的细胞与如权利要求1至16中任一项所述的抗原结合蛋白或如权利要求18所述的药物组合物接触。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述表达CDH15的细胞是肌肉干细胞、成肌细胞或肌细胞。
21.一种加速肌肉干细胞从静息到活化的转变的方法，其包括使所述肌肉干细胞与如权利要求1至16中任一项所述的抗原结合蛋白或如权利要求18所述的药物组合物接触。
22.一种治疗有需要的受试者的疾患的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的如权利要求18所述的药物组合物。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述疾患是肌肉损伤。
24.一种改善受试者的肌肉损伤后的肌肉再生的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的如权利要求18所述的药物组合物。
25.一种恢复受试者的肌肉再生能力的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的如权利要求18所述的药物组合物。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述受试者的所述肌肉再生能力恢复到处于或接近对照受试者的功能状态。
27.一种治疗有需要的受试者的疾患的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的如权利要求18所述的药物组合物，其中所述抗原结合蛋白与治疗剂缀合。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述疾患是癌症。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述癌症是横纹肌肉瘤。
30.如权利要求27至29中任一项所述的方法，其中所述治疗剂包括细胞毒性化疗剂。
31.如权利要求27至30中任一项所述的方法，其中所述治疗剂包括阿柏西普、安吖啶、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、玛贝妥单抗、苯达莫司汀、博莱霉素、硼替佐米、维布妥昔单抗、白消安、卡巴他赛、卡培他滨、卡铂、卡非佐米、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂质体、达卡巴嗪、更生霉素（放线菌素D）、柔红霉素、多西他赛、多柔比星、多柔比星脂质体、表柔比星、艾日布林、依托泊苷、磷酸依托泊苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、福莫司汀、更昔洛韦、吉西他滨、奥加吉妥珠单抗、羟基脲、依达霉素、异环磷酰胺、奥加伊妥珠单抗、伊立替康、伊沙佐米、洛莫司汀、美法仑、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、白蛋白结合型紫杉醇、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲塞、培门冬酶、维泊妥珠单抗、普拉曲沙、甲基苄肼、雷替曲塞、罗米地辛、戈沙妥珠单抗、替莫唑胺、替尼泊苷、噻替哌、硫鸟嘌呤、拓扑替康、曲贝替定、德曲妥珠单抗、恩美曲妥珠单抗、曲氟尿苷/替匹嘧啶、缬更昔洛韦、长春花碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁、长春瑞滨或维莫德吉。
32.如权利要求27至31中任一项所述的方法，其中所述抗原结合蛋白经由缬氨酸-瓜氨酸（VC）和/或对氨基苄基（PAB）接头与所述治疗剂缀合。
33.一种对有需要的受试者中的肌肉细胞进行成像的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用如权利要求18所述的药物组合物，其中所述抗原结合蛋白与可检测部分缀合。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述肌肉细胞包括一种或多种选自由以下组成的组的细胞：肌肉干细胞、成肌细胞和肌细胞。
35.如权利要求33或34所述的方法，其中所述可检测部分包括放射性核素。
36.如权利要求22至35中任一项所述的方法，其中所述施用包括向所述受试者静脉内或皮下施用所述药物组合物。
37.一种重组腺相关病毒（AAV）颗粒，其包含：
（i）包含经修饰的AAV衣壳蛋白的AAV衣壳，和
（ii）结合非终末分化肌肉细胞的表面蛋白的靶向配体，
其中所述AAV衣壳可操作地与所述靶向配体连接。
38.如权利要求37所述的重组AAV颗粒，其中：
（a）所述经修饰的AAV衣壳蛋白包含蛋白质:蛋白质结合对的第一成员，
其中所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员可操作地连接至所述蛋白质:蛋白质结合对的第二成员；并且
（b）所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第二成员包含结合所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白的所述靶向配体，
其中所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员和所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第二成员缔合以定向所述重组AAV颗粒对所述非终末分化肌肉细胞的趋向性。
39.如权利要求37或权利要求38所述的重组AAV颗粒，其中所述非终末分化肌肉细胞包含一种或多种选自由以下组成的组的细胞：肌肉干细胞、成肌细胞、肌细胞、肌管以及它们的组合。
40.如权利要求37至39中任一项所述的重组AAV颗粒，其包含与在哺乳动物细胞的表面上表达的所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白结合的所述AAV衣壳。
41.如权利要求37至40中任一项所述的重组AAV颗粒，其包含与在哺乳动物肌肉细胞的表面上表达的所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白结合的所述AAV衣壳，
其中所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白是所述非终末分化肌肉细胞的人表面蛋白，并且
其中所述哺乳动物肌肉细胞是经遗传修饰以表达所述非终末分化肌肉细胞的所述人表面蛋白的非人动物肌肉细胞。
42.如权利要求37至41中任一项所述的重组AAV颗粒，其包含与在哺乳动物肌肉细胞的表面上表达的非终末分化肌肉细胞的表面蛋白结合的所述AAV衣壳，
其中所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白是所述非终末分化肌肉细胞的人表面蛋白，并且
其中所述哺乳动物肌肉细胞是经遗传修饰以表达所述非终末分化肌肉细胞的所述人表面蛋白的啮齿类动物肌肉细胞。
43.如权利要求37至42中任一项所述的重组AAV颗粒，其包含与在哺乳动物肌肉细胞的表面上表达的所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白结合的所述AAV衣壳，
其中所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白是所述非终末分化肌肉细胞的人表面蛋白，并且
其中所述哺乳动物肌肉细胞是经遗传修饰以表达所述非终末分化肌肉细胞的所述人表面蛋白的大鼠或小鼠肌肉细胞。
44.如权利要求37至43中任一项所述的重组AAV颗粒，其包含与在哺乳动物肌肉细胞的表面上表达的所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白结合的所述AAV衣壳，
其中所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白是所述非终末分化肌肉细胞的人细胞特异性表面蛋白，并且
其中所述哺乳动物肌肉细胞是经遗传修饰以表达所述非终末分化肌肉细胞的所述人细胞特异性表面蛋白的小鼠肌肉细胞。
45.如权利要求37至41中任一项所述的重组AAV颗粒，其包含与由哺乳动物肌肉细胞表达的所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白结合的所述AAV衣壳，
其中所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白是所述非终末分化肌肉细胞的人表面蛋白，并且
其中所述哺乳动物肌肉细胞是人肌肉细胞。
46.如权利要求37至45中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述重组AAV颗粒是体外的。
47.如权利要求37至45中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述重组AAV颗粒是体内的。
48.如权利要求37至42中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白是哺乳动物钙粘蛋白15（CDH15）。
49.如权利要求37至48中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述非终末分化肌肉细胞的所述表面蛋白是人CDH15。
50.如权利要求38至49中任一项所述的重组AAV颗粒，其中：
（a）所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员包含SpyTag、Isopeptag、SnoopTag或SpyTag002，
（b）所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第二成员包含
（i）SpyCatcher、KTag、pilinC、SnoopCatcher或SpyCatcher002，和
（ii）结合哺乳动物肌肉特异性表面蛋白的靶向配体，并且
（c）所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员和所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第二成员通过异肽键缔合。
51.如权利要求38至50中任一项所述的重组AAV颗粒，其中：
（a）所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员包含SpyTag，并且
（b）所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第二成员包含与结合哺乳动物肌肉特异性表面蛋白的所述靶向配体融合的SpyCatcher。
52.如权利要求38至49中任一项所述的重组AAV颗粒，其中：
（a）所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员包含如SEQ ID NO: 818所示的c-myc氨基酸序列，并且
（b）所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第二成员包含双特异性结合蛋白，所述双特异性结合蛋白包含抗c-myc抗体和结合哺乳动物肌肉特异性表面蛋白的所述靶向配体。
53.如权利要求38至52中任一项所述的重组AAV颗粒，其包含将所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员可操作地连接至所述重组AAV颗粒的衣壳蛋白的第一接头和/或第二接头。
54.如权利要求53所述的重组AAV颗粒，其中所述第一接头和所述第二接头不相同。
55.如权利要求53所述的重组AAV颗粒，其中所述第一接头和所述第二接头是相同的。
56.如权利要求53至55中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述第一接头的长度为10个氨基酸并且/或者所述第二接头的长度为10个氨基酸，任选地其中所述第一接头的氨基酸序列和/或所述第二接头的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 826或SEQ ID NO:827中所示的氨基酸序列。
57.如权利要求38至56中任一项所述的重组AAV颗粒，其中：
（a）所述AAV衣壳包含由突变的cap基因编码的经修饰的VP1衣壳蛋白、经修饰的VP2衣壳蛋白和/或经修饰的VP3衣壳蛋白，并且
（b）所述突变的cap基因或其部分包含与AAV的cap基因或其部分至少90%相同的序列，并且经遗传修饰以包含编码所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员的核苷酸序列的插入，使得所述经修饰的VP1衣壳蛋白、所述经修饰的VP2衣壳蛋白和/或所述经修饰的VP3衣壳蛋白包含所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员。
58.如权利要求57所述的重组AAV颗粒，其中所述突变的cap基因经遗传修饰以包含一个或多个另外的突变，使得所述经修饰的VP1衣壳蛋白、所述经修饰的VP2衣壳蛋白和/或所述经修饰的VP3衣壳蛋白除了所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员之外还包含：
（i）氨基酸的取代、插入或缺失，
（ii）嵌合氨基酸序列，或
（iii）点突变和嵌合氨基酸序列两者。
59.如权利要求58所述的重组AAV颗粒，其中所述氨基酸的取代、插入或缺失降低所述AAV衣壳的天然趋向性和/或产生可检测标记。
60.如权利要求38至59中任一项所述的重组AAV颗粒，其中：
（a）所述AAV衣壳包含由突变的cap基因编码的经修饰的VP1衣壳蛋白、经修饰的VP2衣壳蛋白和/或经修饰的VP3衣壳蛋白，并且
（b）所述突变的cap基因或其部分包含与AAV的cap基因或其部分至少90%相同的序列，并且经遗传修饰以包含编码所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员的核苷酸序列的插入，使得所述经修饰的VP1衣壳蛋白、所述经修饰的VP2衣壳蛋白和/或所述经修饰的VP3衣壳蛋白包含所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员，并且
（c）所述AAV选自由以下组成的组：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、表2中列出的非灵长类动物AAV以及它们的组合。
61.如权利要求57至60中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV是AAV2。
62.如权利要求57至61中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV衣壳包含经修饰的AAV2 VP1衣壳蛋白，所述经修饰的AAV2 VP1衣壳蛋白包含任选地经由接头连接至位置I453和/或I587处的氨基酸的所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员。
63.如权利要求57至62中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV衣壳包含经修饰的AAV2 VP1衣壳蛋白，所述经修饰的AAV2 VP1衣壳蛋白包含经由接头在位置G453处展示的所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员，
任选地，其中所述经修饰的AAV2 VP1衣壳蛋白还包含R585A修饰、R588A修饰或R585A修饰和R588A修饰两者，并且
任选地，其中所述经修饰的AAV2 VP1衣壳蛋白还包含R484A修饰、R487A修饰、R585A修饰、R588A修饰和K532A修饰，或R484A修饰、R487A修饰、R585A修饰、R588A修饰和K532A修饰的任何组合。
64.如权利要求62或权利要求63所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV衣壳是包含缺乏所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员的第二组AAV2 VP1衣壳蛋白的镶嵌AAV衣壳，
任选地，其中所述第二组AAV2 VP1衣壳蛋白包含R585A修饰、R588A修饰或R585A修饰和R588A修饰两者。
65.如权利要求57至60中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV是AAV9。
66.如权利要求57至60和权利要求65中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV衣壳包含经修饰的AAV9 VP1衣壳蛋白，所述经修饰的AAV9 VP1衣壳蛋白包含任选地经由接头连接至位置I453或I589处的氨基酸的所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员。
67.如权利要求57至60和65至66中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV衣壳包含经修饰的AAV9 VP1衣壳蛋白，所述经修饰的AAV9 VP1衣壳蛋白包含经由接头在G453处展示的所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员，
任选地，其中经修饰的AAV9 VP1衣壳蛋白还包含N272A修饰、W503A修饰或N272A修饰和W503A修饰两者。
68.如权利要求66或权利要求67所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV衣壳是包含缺乏所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员的第二组AAV9 VP1衣壳蛋白的镶嵌AAV衣壳，
任选地，其中所述第二组AAV2 VP1衣壳蛋白包含N272A修饰、W503A修饰或N272A修饰和W503A修饰两者。
69.如权利要求60所述的重组AAV颗粒，其中所述非灵长类动物AAV是禽类AAV（AAAV）、非人哺乳动物AAV或有鳞类动物AAV。
70.如权利要求60或权利要求69所述的重组AAV颗粒，其中所述非灵长类动物AAV是AAAV。
71.如权利要求60、69或70所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV衣壳包含经修饰的AAAVVP1衣壳蛋白，所述经修饰的AAAV VP1衣壳蛋白包含任选地经由接头连接至位置I444或I580处的氨基酸的所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员。
72.如权利要求60或权利要求69所述的重组AAV颗粒，其中所述非灵长类动物AAV是有鳞类动物AAV。
73.如权利要求60、69或权利要求72所述的重组AAV颗粒，其中所述非灵长类动物AAV是鬃狮蜥AAV。
74.如权利要求60、69、72或73中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV衣壳包含经修饰的鬃狮蜥VP1衣壳蛋白，所述经修饰的鬃狮蜥VP1衣壳蛋白包含任选地经由接头连接至位置I573或I436处的氨基酸的所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员。
75.如权利要求60或权利要求69所述的重组AAV颗粒，其中所述非灵长类动物AAV是非人哺乳动物AAV。
76.如权利要求60、69或75中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述非灵长类动物AAV是海狮AAV。
77.如权利要求60、69、75或76中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV衣壳包含经修饰的AAAV VP1衣壳蛋白，所述经修饰的AAAV VP1衣壳蛋白包含所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员，所述第一成员任选地经由接头连接至选自由I429、I430、I431、I432、I433、I434、I436、I437和I565组成的组的位置处的氨基酸。
78.如权利要求37至77中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述AAV衣壳是镶嵌AAV衣壳，任选地其中所述镶嵌AAV衣壳包含第一多种参考衣壳蛋白和第二多种衣壳蛋白，所述第一多种参考衣壳蛋白中的每一者均不包含所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员，所述第二多种衣壳蛋白中的每一者包含所述蛋白质:蛋白质结合对的所述第一成员，任选地其中所述镶嵌AAV衣壳包含比率为1:7的所述第一多种参考衣壳蛋白和所述第二多种衣壳蛋白。
79.如权利要求37至78中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述靶向配体是抗体或其部分。
80.如权利要求37至79中任一项所述的重组AAV颗粒，其还包含在所述AAV衣壳内衣壳化的目的核苷酸。
81.如权利要求80所述的重组AAV颗粒，其中所述目的核苷酸是报告基因。
82.如权利要求80或权利要求81所述的重组AAV颗粒，其中所述目的核苷酸编码β-半乳糖苷酶、绿色荧光蛋白（GFP）、增强型绿色荧光蛋白（eGFP）、MmGFP、蓝色荧光蛋白（BFP）、增强型蓝色荧光蛋白（eBFP）、mPlum、mCherry、tdTomato、mStrawberry、J-Red、DsRed、mOrange、mKO、mCitrine、Venus、YPet、黄色荧光蛋白（YFP）、增强型黄色荧光蛋白（eYFP）、Emerald、CyPet、青色荧光蛋白（CFP）、Cerulean、T-Sapphire、荧光素酶、碱性磷酸酶或它们的组合。
83.如权利要求80所述的重组AAV颗粒，其中所述目的核苷酸编码治疗性蛋白、自杀基因、抗体或其片段、CRISPR/Cas系统或其部分、反义寡核苷酸、核酶、RNAi分子或shRNA分子。
84.如权利要求37至83中任一项所述的重组AAV颗粒，其中所述靶向配体包含如权利要求1至16中任一项所述的抗原结合蛋白，任选地其中所述靶向配体包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO: 833、SEQ ID NO: 835、SEQ ID NO: 837以及它们的任何组合。
85.一种药物组合物，其包含（a）如权利要求37至84中任一项所述的重组AAV颗粒和（b）药学上可接受的载剂或赋形剂。
86.一种将目的核苷酸递送至哺乳动物肌肉细胞的方法，其包括使所述哺乳动物肌肉细胞与（a）如权利要求37至84中任一项所述的重组AAV颗粒或（b）如权利要求85所述的药物组合物接触，
其中所述哺乳动物肌肉细胞表达所述哺乳动物肌肉特异性表面蛋白。
87.如权利要求86所述的方法，其中所述接触离体进行。
88.如权利要求86所述的方法，其中所述接触在受试者中进行，任选地其中所述受试者经修饰以例如从安全港基因座表达所述靶向配体。
89.如权利要求88所述的方法，其中所述受试者是灵长类动物，优选人。
90.如权利要求86至89中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物肌肉细胞是哺乳动物骨骼肌细胞，任选地其中所述哺乳动物骨骼肌细胞不是终末分化的，任选地其中所述哺乳动物骨骼肌细胞包含一种或多种选自由以下组成的组的细胞：肌肉干细胞、成肌细胞和肌细胞。
91.如权利要求86至90中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物肌肉特异性表面蛋白是CDH15。
92.如权利要求86至91中任一项所述的方法，其中所述目的核苷酸编码治疗性蛋白、自杀基因、抗体或其片段、CRISPR/Cas系统或其部分、反义寡核苷酸、核酶、RNAi分子或shRNA分子。
93.一种治疗有需要的患者的肌肉萎缩或遗传性肌肉疾病的方法，其包括
向所述患者施用（a）如权利要求37至84中任一项所述的重组AAV颗粒或（b）如权利要求85所述的药物组合物，
其中所述重组AAV颗粒包含在所述AAV衣壳内衣壳化的目的核苷酸，并且
其中所述目的核苷酸编码治疗性蛋白、自杀基因、抗体或其片段、CRISPR/Cas系统或其部分、反义寡核苷酸、核酶、RNAi分子或shRNA分子。
94.如权利要求37至84中任一项所述的重组AAV颗粒或如权利要求85所述的药物组合物用于制造用于治疗肌肉萎缩或遗传性肌肉疾病的药物的用途。
95.如权利要求93所述的方法或如权利要求94所述的用途，其中所述肌肉萎缩或遗传性肌肉疾病选自由以下组成的组：X连锁肌管性肌病（XLMTM）、杜氏肌营养不良症（DMD）、强直性肌营养不良症（DM1）、面肩肱型肌营养不良症1型（FSHD）、先天性肌营养不良症1A型（MDC1A）、肢带型肌营养不良症和抗肌萎缩相关糖蛋白病。
96.一种治疗有需要的患者的横纹肌肉瘤的方法，其包括
向所述患者施用（a）如权利要求37至84中任一项所述的重组AAV颗粒或（b）如权利要求85所述的药物组合物，
其中所述重组AAV颗粒包含在所述AAV衣壳内衣壳化的目的核苷酸，并且
其中所述目的核苷酸编码治疗性蛋白、自杀基因、抗体或其片段、CRISPR/Cas系统或其部分、反义寡核苷酸、核酶、RNAi分子或shRNA分子。
97.如权利要求37至84中任一项所述的重组AAV颗粒或如权利要求85所述的药物组合物用于制造用于治疗横纹肌肉瘤的药物的用途。
98.如权利要求96所述的方法或如权利要求97所述的用途，其中所述横纹肌肉瘤选自由以下组成的组：胚胎性横纹肌肉瘤、肺泡性横纹肌肉瘤、多形性横纹肌肉瘤、葡萄状横纹肌肉瘤和梭形细胞/硬化性横纹肌肉瘤。
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